苯甲酰胺类似物介导的脑靶向递药系统专利检索-单药治疗疗法专利检索查询-专利查询网

苯甲酰胺类似物介导的脑靶向递药系统

阅读：327发布：2023-02-27

专利汇可以提供苯甲酰胺类似物介导的脑靶向递药系统专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本发明属药物制剂领域，涉及一种脑靶向递药系统，包括介导分子、载体和药物，所述的介导分子为苯甲酰胺类似物，载体为聚阳离子大分子，两者以共价方式结合，通过包载或吸附方式载药。本发明通过示踪技术进行活体、离体脑靶向表征，提示该递药系统能够跨越血脑屏障，将基因药物、诊断药物递送至脑内，可用于脑部疾病诊断和治疗。本发明能避免侵袭性给药方式潜在的风险和复杂的给药过程，具有给药量大、给药方式简单等优点，且脑靶向介导分子的分子量小、价廉易得、便于产业化。，下面是苯甲酰胺类似物介导的脑靶向递药系统专利的具体信息内容。

权利要求

1.一种苯甲酰胺类似物介导的脑靶向递药系统，其特征在于，其包括介导分子、载体和药物，所述的介导分子为苯甲酰胺类似物，所述的载体为聚阳离子大分子，两者共价结合形成载药系统，通过包载或吸附方式载药；所述的苯甲酰胺类似物选自苯甲酰胺、苯甲酸、对羟基苯甲酸或邻羟基苯甲酸。
2.按权利要求1所述的苯甲酰胺类似物介导的脑靶向递药系统，其特征在于，所述的聚阳离子大分子载体选自聚乙烯亚胺类化合物、聚乙烯亚胺-聚乙二醇共聚物、树枝状大分子PAMAM和PAMAM-聚乙二醇共聚物。
3.按权利要求2所述的苯甲酰胺类似物介导的脑靶向递药系统，其特征在于，所述的聚乙烯亚胺类化合物是线性或枝状的。
4.按权利要求2所述的苯甲酰胺类似物介导的脑靶向递药系统，其特征在于，所述的聚乙烯亚胺-聚乙二醇共聚物、PAMAM-聚乙二醇共聚物中的聚乙二醇部分是单甲氧醚聚乙二醇，或是带有其它功能基团的聚乙二醇。
5.按权利要求4所述的苯甲酰胺类似物介导的脑靶向递药系统，其特征在于，所述的功能基团是马来酰亚胺基、巯基、酰胺基、氨基、羧基、生物素或亲和素中的一种。
6.按权利要求2所述的苯甲酰胺类似物介导的脑靶向递药系统，其特征在于，所述的聚乙烯亚胺-聚乙二醇共聚物是二乙三胺五醋酸-聚乙烯亚胺-聚乙二醇共聚物；
PAMAM-聚乙二醇共聚物是二乙三胺五醋酸-PAMAM-聚乙二醇共聚物。
7.按权利要求1所述的苯甲酰胺类似物介导的脑靶向递药系统，其特征在于，所述的递药系统制成纳米粒或胶束其粒径为10-500nm。
8.按权利要求1所述的苯甲酰胺类似物介导的脑靶向递药系统，其特征在于，所述的递药系统所包载或吸附的药物是基因药物或诊断药物。
9.按权利要求8所述的苯甲酰胺类似物介导的脑靶向递药系统，其特征在于，所述的基因药物选自脑源性神经营养因子、胶质细胞源性神经营养因子或肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体基因。
10.按权利要求8所述的苯甲酰胺类似物介导的脑靶向递药系统，其特征在于，所述的诊断药物选自金属离子钆，放射性同位素碘、锝或铟，异硫氰酸荧光素或异硫氰酸罗丹明。
11.按权利要求1所述的苯甲酰胺类似物介导的脑靶向递药系统，其特征在于，所述的递药系统中的共价结合是直接共价结合，或以聚乙二醇桥连共价结合。
12.按权利要求2所述的苯甲酰胺类似物介导的脑靶向递药系统，其特征在于，所述的递药系统中的苯甲酰胺类似物与聚阳离子大分子载体任意两两共价结合。

说明书全文

苯甲酰胺类似物介导的脑靶向递药系统

技术领域

[0001] 本发明属药物制剂领域，涉及一种脑靶向递药系统，具体涉及一种苯甲酰胺类似物介导的脑靶向递药系统。本递药系统能够跨越血脑屏障，将基因药物、诊断药物递送至脑内，可对脑部疾病进行诊断和治疗。

背景技术

[0002] 人脑内存在多种受体，如多巴胺受体、5-羟色胺受体、乙酰胆碱受体、阿片受体等，这些受体在人体的生理活动中起着极其重要的作用。脑部疾病如脑肿瘤、中枢神经系统感染、慢性疼痛、药物成隐性、癫痫、周期性偏头痛、神经变性疾病、精神分裂症等对人的身体健康影响巨大。但大部分活性药物不能透过血-脑屏障(BBB)，致使诸多脑内疾病的预防、诊断和治疗存在困难。

[0003] 血-脑屏障是位于血液与脑、脊髓的神经元细胞之间的一种调节界面，对中枢神经系统(CNS)与外周血液之间物质交换起调节作用。BBB有三层结构：内层为脑毛细血管内皮细胞(BMEC)及其之间的紧密连接，中间为基膜和周细胞，外层为星形胶质细胞和细胞外基质，其中BMEC及其紧密连接是构成BBB屏障的主要因素。由于BBB和脑脊液屏障(BCSFB)的存在，使几乎所有大分子药物和98％的治疗、诊断脑部疾病药物无法进入大脑及中枢神经系统。除了药物本身的脂溶性、相对分子质量和形成氢键的能力等是造成药物难以通过BBB的原因外，BBB还具有外向通量机制，即通过BBB上的P-糖肽将一些药物从大脑内运出；此外，BBB上存在的“酶化血脑屏障”，即高活性的神经肽降解酶，如与毛细血管结合的胺肽酶、内肽酶、血管紧张素转化酶(ACE)等，也使得与肽偶联的药物因代谢不稳定而影响了对脑部疾病的治疗。BBB既有效保护了脑组织，同时也给药物治疗脑部疾病制造了难以逾越的屏障。

[0004] 目前，有关克服BBB增加药物脑内递送的方法有：按给药方式划分为侵袭性和非侵袭性两大类。其中，侵袭性的给药方法包括高渗休克、颈动脉注射血管活性物质和直接脑内注射给药。该方法虽然有效，但可能造成脑部感染、BBB的损伤以及外科性损伤，而且给药方式复杂，病人顺应性差，不适宜作为常规的治疗和诊断方案。相比而言，非侵袭性给药方法具有更广阔的临床应用前景。非侵袭性的给药方法主要包括：药物的结构修饰、化学传递系统、载体介导转运、胞吞转运和鼻腔给药系统。前三种方法都需要对药物进行一定的化学修饰，这对于药物的化学结构、理化性质等要求较高，具有较大的局限性。

[0005] 胞吞转运是利用细胞膜内陷形成有被小窝，胞吞药物或载药系统进入细胞，然后以胞吐的方式将药物或载药系统排出细胞的一种转运机制，是细胞对较大颗粒、液体和溶质或大分子复合物吞入吐出的过程，其又分为受体介导胞吞转运和吸附介导的胞吞转运。受体介导胞吞入脑是利用BBB内皮细胞上有大量的受体，通过克隆得出其对应的特异性抗体，并以之为药物载体，实现药物的脑内转运。如：通过基因工程手段，克隆出BBB内皮细胞膜上胰岛素受体的单克隆抗体，并以此为药物载体，把不能通过BBB的神经诊断药物和神经中枢治疗药物输送到脑部，在动物身上已取得成功；利用BBB上新发现的转铁蛋白受体单克隆抗体(OX26)，把神经生长因子(NGF)连到鼠源性OX26上，实现了神经生长因子的脑内转运，且已证实了OX26-NGF复合物对哈丁氏舞蹈病大鼠有良好的治疗效果。该方法存在的缺陷在于，免疫原性和动物种属选择性强，应用到人体上时需要通过基因工程技术制备人源化抗体，制备技术和设备要求高且过程复杂。吸附介导的胞吞转运是利用阳离子修饰的蛋白(如阳离子白蛋白)通过静电吸附在BBB上(包括腔面侧的唾液酸部分和基膜侧的硫酸肝素)。这种静电引力能够激发吸附介导的胞吞转运而将蛋白导入脑内。另有报道将NGF与一种多胺(如腐胺)共价结合后，能够增加NGF穿过大鼠BBB的能力。

[0006] 苯甲酰胺类化合物是多巴胺D2受体选择性拮抗剂，具有较高的专一性和较强的亲合力，其锥体外系的副反应很小。据报道，此类药物与多巴胺D2受体在分子水平上的构效关系是：吡咯环N原子是该类化合物与多巴胺D2受体相互作用的位点之一，该N原子的电荷-越大，越有利于化合物与受体氨基酸残基上的COO 基团相互作用，与多巴胺D2受体的亲和力则越强；苯环是苯甲酰胺类化合物与多巴胺D2受体相互作用的另一位点，苯环与受体分子的疏水性部分结合，其结合情况受苯环平面所带电荷和苯环的空间结构影响，苯环平面的电荷分配值越小，同时苯环与酰胺基团保持共平面的空间结构，则化合物与多巴胺D2受体的亲和力越强。因此，目前国内外研究者所做的工作主要是针对该类化合物的吡咯环N原子上的基团和苯环侧链进行结构修饰和改造，先后合成和研究了一系列衍生物。

[0007] 聚乙烯亚胺(PEI)为富含N原子的带正电荷的高分子材料，与聚赖氨酸(PLL)、树枝状高分子PAMAM、阳离子脂质体具有类似的性质，可以与DNA、RNA通过静电作用形成纳米粒，广泛用于基因转染和基因治疗。PEI、PAMAM等可以与细胞膜上带负电荷的毛细管上皮细胞非特异的结合，广泛用于靶向递药系统的构建，目前已有转铁蛋白-PEG-PAMAM、乳铁蛋白-PEG-PAMAM脑靶向递药系统的相关报道；叶酸、甲状腺激素、成纤维细胞生长因子也已用于修饰PEI实现肿瘤、肝等部位的靶向治疗系统的构建。目前国内外尚未见有苯甲酰胺类似物修饰的PEI脑靶向载体构建的报道。

发明内容

[0008] 本发明的目的在于提供一种新的脑靶向递药系统，具体涉及一种苯甲酰胺类似物介导的脑靶向递药系统。本发明构建了一种能够穿透血脑屏障，实现脑内递药的苯甲酰胺类似物-聚乙烯亚胺递药系统。本递药系统能通过静脉给药途径将基因药物、诊断药物递送入脑内，发挥治疗和诊断作用。

[0009] 本发明的脑靶向递药系统，包括介导分子、载体和药物，所述的介导分子为苯甲酰胺类似物，载体为聚阳离子大分子，两者共价结合构成载药系统，通过包载或吸附方式载药，能够明显提高药物透过血脑屏障的入脑量。

[0010] 所述的递药系统制成纳米粒或胶束，其粒径为10-500nm。

[0011] 本发明中，聚阳离子大分子载体选用以下高分子材料制备：

[0012] 聚乙烯亚胺(PEI)和聚乙二醇-聚乙烯亚胺共聚物(PEG-PEI)，其中：PEI为线性或枝状，优选为枝状，分子量为600-100000Da，优选10000-30000Da；PEG分子量为1000-20000Da，优选分子量2000-5000Da；上述PFG-PEI的聚乙二醇部分可以是单甲氧基聚乙二醇，也可以是一端为甲氧基，另一端为其它活性基团的聚乙二醇衍生物，PEI和PEG-PEI可以单独使用也可以任意比例混合使用；

[0013] 树枝状高分子PAMAM和聚乙二醇-PAMAM共聚物(PEG-PAMAM)，其中：PAMAM分子分为G3、G4、G5、G6、G7、G8、G9代，优选G5-G7代；PEG分子量为1000-20000Da，优选分子量2000-5000Da；上述PEG-PAMAM的聚乙二醇部分可以是单甲氧基聚乙二醇，也可以是一端为甲氧基，另外一端为其它活性基团的聚乙二醇衍生物，PAMAM和PEG-PAMAM可以单独使用也可以任意比例混合使用；

[0014] 在生理条件下，其它表面具有高密度的正电荷的化合物及其聚乙二醇共聚物。

[0015] 上述的活性基团是马来酰亚胺基、巯基、酰胺基、氨基、羧基、生物素或亲和素中的一种。

[0016] 本发明采用苯甲酰胺类似物为脑靶向分子，优选含苯甲酰胺、苯甲酸、对羟基苯甲酸、邻羟基苯甲酸及其衍生物。

[0017] 在本发明的递药系统中，载药方式是包裹或者静电吸附。

[0018] 本发明所递送的药物可以是诊断药物、基因药物中的一种或几种。

[0019] 其中诊断药物包括：核医学诊断药物如放射性同位素碘、锝或铟，磁共振诊断药物如金属离子钆。基因药物是指含有治疗基因的质粒DNA，包括：脑源性神经营养因子基因，用于治疗神经退行疾病，中风和脑创伤；酪氨酸羟化酶和芳香性氨基酸脱羧酶基因，用于治疗帕金森病；β-葡萄糖醛酸苷酶基因；氨基己糖苷酶A基因；肿瘤凋亡基因；单纯疱疹病毒胸苷激酶基因；或者是编码表皮生长因子受体基因的反义RNA；编码获得性免疫缺陷综合症基因的反义RNA。质粒DNA还包括治疗基因前后的DNA序列，可以是启动子、增强子，促进治疗基因转录的mRNA蛋白翻译和稳定的DNA序列，能够使游离基因在被转染的细胞中复制的DNA序列。

[0020] 本发明的苯甲酰胺类似物-聚乙烯亚胺脑内递药系统通过新吲哚菁绿、罗丹明荧125
光标记示踪技术、放射性 I标记示踪技术进行活体、离体脑靶向表征，并通过苯甲酰胺类似物-聚乙烯亚胺包载绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因进行了小鼠活体转染的药效学评价。

[0021] 1、对羟基苯甲酸-聚乙烯亚胺的荧光标记

[0022] 将对羟基苯甲酸与聚乙烯亚胺置于室温下反应，产物通过凝胶色谱法纯化处理。

[0023] 将6-氨基己酸和新吲哚菁绿(IR820)在碱性条件下85℃反应，产物用快速色谱纯化。

[0024] 将对羟基苯甲酸-聚乙烯亚胺与6-氨基己酸-IR820在碱性条件下室温反应过夜，产物通过凝胶色谱法纯化处理。

[0025] 2、对羟基苯甲酸-聚乙烯亚胺的125I标记

[0026] 将对羟基苯甲酸-聚乙烯亚胺与Na125I溶液在40℃反应5分钟，产物用凝胶色谱法纯化处理。

[0027] 3、对羟基苯甲酸-聚乙烯亚胺/EGFP纳米粒的制备

[0028] 将对羟基苯甲酸-聚乙烯亚胺与EGFP，按不同比例混合，制备得到对羟基苯甲酸-聚乙烯亚胺/EGFP纳米粒。

[0029] 4、动物组织分布试验

[0030] 1)对羟基苯甲酸-聚乙烯亚胺-IR820

[0031] 利用小动物活体成像系统，观察IR820标记的递药系统在正常小鼠体内的分布情况，并处死小鼠后观察各个脏器内荧光分布情况。小鼠全脑冷冻切片观察递药系统脑内分布情况。

[0032] 2)对羟基苯甲酸-聚乙烯亚胺的125I标记物

[0033] 利用γ闪烁计数仪，观察125I标记的对羟基苯甲酸-聚乙烯亚胺在小鼠体内分布情况。

[0034] 5、对羟基苯甲酸-聚乙烯亚胺/EGFP纳米粒药效学评价

[0035] 利用共聚焦显微镜，观察对羟基苯甲酸-聚乙烯亚胺包载EGFP报告基因在小鼠脑内活体转染情况。

[0036] 结果显示上述物质在正常小鼠体内的分布情况，提示对羟基苯甲酸-聚乙烯亚胺递药系统具有良好的穿透血脑屏障和脑部聚集效果，并且可以实现EGFP报告基因在小鼠内的活体转染。

[0037] 本发明以静脉注射给药方式实现将药物递送入脑的功能，能避免侵袭性给药方式潜在的风险和复杂的给药过程；与鼻腔给药途径比较，具有给药量大、给药方式简单、病人顺应性强等优点。

[0038] 与目前具有脑靶向功能的单克隆抗体、转铁蛋白、乳铁蛋白、阳离子白蛋白、RVG等蛋白多肽脑靶向分子相比，本发明所采用的对羟基苯甲酸等具有分子量小、无免疫原性、制备方法简单、价廉易得等优点。附图说明：

[0039] 图1：p-HA-PEI-IR820、PEI-IR820、IR820小鼠活体组织荧光分布图，[0040] 其中显示，小鼠尾静脉分别注射PEI-IR820、p-HA-PEI-IR820、IR820后24小时，10％水合氯醛麻醉后的活体荧光成像图。1A为PEI-IR820，1B为IR820染料、1C为p-HA-PEI-IR820，由荧光分布图可以看出，p-HA-PEI-IR820在小鼠脑内有明显荧光分布，而IR820和PEI-IR820在脑内没有荧光分布，提示p-HA-PEI-IR820可以通过对羟基苯甲酸介导穿透血脑屏障入脑。

[0041] 图2：p-HA-PEI-IR820小鼠离体组织荧光分布图，

[0042] 其中显示，小鼠尾静脉分别注射p-HA-PEI-IR820后不同时间点，10％水合氯醛麻醉，生理盐水心脏灌流后小鼠离体各脏器荧光分布图。2A为0.5小时、2B为2小时、2C为12小时、2D为24小时的荧光分布，由荧光分布图可以看出，p-HA-PEI-IR820在小鼠脑内各个时间点都有明显荧光分布，且在一定时间点内有逐渐聚集的趋势，提示p-HA-PEI-IR820可以通过对羟基苯甲酸介导穿透血脑屏障并在脑内分布。

[0043] 图3：125I-p-HA-PEI小鼠体内组织分布

[0044] 其中显示，小鼠尾静脉注射125I-p-HA-PEI溶液，分别与给药后0.5、1、2和4小时用10％水合氯醛麻醉小鼠，心脏灌流生理盐水，取心、肺、肝、脾、肾和脑等脏器或组织，称重，进行放射性计数，并计算单位重量组织占注射总放射性计数的百分数(ID％/g)。组织分布
125
结果提示，I-p-HA-PEI在脑内有一定的富集。

[0045] 图4：p-HA-PEI包载EGFP报告基因小鼠脑内活体转染共聚焦图

[0046] 其中显示，小鼠连续4天尾静脉注射p-HA-PEI/EGFP纳米粒，10％水合氯醛麻醉，生理盐水、4％多聚甲醛(PA)心脏灌流，脑组织经20％和30％蔗糖PA溶液脱水、固定，冰冻切片后的绿色荧光分布图。结果显示，EGFP在皮层、海马、纹状体等部位都有表达，提示p-HA-PEI可以携带基因药物通过对羟基苯甲酸介导穿透血脑屏障入脑并表达。

具体实施方式

[0047] 通过以下实施例描述将有助于进一步理解本发明，但本发明并不限于如下描述范围。

[0048] 实施例1

[0049] 对羟基苯甲酸-聚乙烯亚胺-IR820(p-HA-PEI-IR820)的制备

[0050] 1、对羟基苯甲酸-聚乙烯亚胺(p-HA-PEI)的制备

[0051] 称取PEI 0.130g溶于3mlDMF中，将对羟基苯甲酸7.5mg，1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐9.5mg溶于1mlDMF中，搅拌状态下逐滴加入到PEI的DMF溶液中，室温下磁力搅拌反应过夜，得到白色混悬液。离心后丢弃沉淀，上清液加入冷乙醚100ml沉淀处理，离心后丢弃上清液，沉淀再用冷乙醚洗涤3次，10ml/次。真空干燥24小时，产物用少量双蒸水(dH2O)溶解，上G-25凝胶柱以dH2O洗脱，收集相应组分，冷冻干燥，得到p-HA-PEI。核磁氢谱结果表明：该化合物在2.5-3.0ppm之间有聚乙烯亚胺的特征峰，而且在6.8-7.8ppm出现了对羟基苯甲酸的特征峰，p-HA-PEI得到确认。

[0052] 2、6-氨基己酸-新吲哚菁绿(IR820)的制备

[0053] 称取IR820 100mg溶于5mlDMF中，加入6-氨基己酸46.4mg，三乙胺10μl，氮气保护下85℃反应3小时，溶液由绿变蓝。反应液用快速色谱纯化处理，乙酸乙酯/甲醇(70/30到0/100)梯度洗脱，收集相应组分。真空干燥24小时，产物用少量dH2O溶解，冷冻干燥得到6-氨基己酸-IR820。

[0054] 3、对羟基苯甲酸-聚乙烯亚胺-IR820(p-HA-PEI-IR820)的制备

[0055] 称取EDC·HCL 13mg，加到含有30mg 6-氨基己酸-IR820的2ml无水DMF溶液中，氮气保护下逐滴加入到170mg的p-HA-PEI无水DMF(5ml)中，室温下避光反应过夜，小心吸掉上清液，沉淀用冰乙醚洗涤3次，10ml/次。真空干燥24小时，产物用少量dH2O溶解，上G-25凝胶柱以dH2O洗脱，收集相应组分，冷冻干燥，得到p-HA-PEI-IR820。核磁氢谱结果表明：该化合物在2.5-3.0ppm之间有聚乙烯亚胺的特征峰，6.8-7.8ppm出现了对羟基苯甲酸的特征峰，在2.1-2.2ppm出现了IR820的特征峰，p-HA-PEI-IR820得到确认。

[0056] 4、聚乙烯亚胺-IR820(PEI-IR820)的制备

[0057] 聚乙烯亚胺-IR820(PEI-IR820)的制备同对羟基苯甲酸-聚乙烯亚胺-IR820(p-HA-PEI-IR820)的制备方法。

[0058] 实施例2

[0059] 对羟基苯甲酸-聚乙烯亚胺-IR820(p-HA-PEI-IR820)脑内递药系统动物试验[0060] 1、对羟基苯甲酸-聚乙烯亚胺-IR820小鼠活体组织分布

[0061] 分别称取p-HA-PEI-IR820、PEI-IR820和IR820适量，用生理盐水溶解配制成1mg/ml的溶液，小鼠尾静脉注射100μl/只，分别于给药后0.5、2、4、12和24小时用10％水合氯醛麻醉小鼠，在活体动物成像系统内观察小鼠体内荧光分布。由分布图可以看出，p-HA-PEI-IR820在小鼠脑内有明显荧光分布，而IR820和PEI-IR820在脑内没有荧光分布，提示p-HA-PEI-IR820可以通过对羟基苯甲酸介导穿透血脑屏障入脑(图1)。

[0062] 2、对羟基苯甲酸-聚乙烯亚胺-IR820小鼠离体组织分布

[0063] 称取p-HA-PEI-IR820适量，用生理盐水溶解配制成1mg/ml的溶液，小鼠尾静脉注射100μl/只，分别于给药后0.5、2、4、12和24小时用10％水合氯醛麻醉小鼠，心脏灌流生理盐水100ml/只，取心、肺、肝、脾、肾和脑等脏器置于活体动物成像系统内观察。各脏器荧光分布结果显示p-HA-PEI-IR820在小鼠脑内有明显荧光分布，提示p-HA-PEI-IR820可以通过对羟基苯甲酸介导穿透血脑屏障并在脑内分布(图2)。

[0064] 3、对羟基苯甲酸-聚乙烯亚胺-IR820小鼠脑内分布

[0065] 称取p-HA-PEI-IR820适量，用生理盐水溶解配制成1mg/ml的溶液，小鼠尾静脉注射100μl/只，分别于给药后0.5、2、4、12和24小时用10％水合氯醛麻醉小鼠，依次用生理盐水(100ml/只)、4％多聚甲醛(4％PA 100ml/只)心脏灌流，取全脑，PBS漂洗，依次置于20％和30％蔗糖PA溶液中脱水、固定，冰冻切片，用磷酸甘油封片，放置在活体动物成像系统内观察脑内各部位的荧光分布情况。结果显示，小脑、中脑、大脑内均有荧光分布，进一步确认了p-HA-PEI-IR820穿透血脑屏障入脑的能力。

[0066] 实施例3

[0067] 对羟基苯甲酸-聚乙烯亚胺125I标记物的小鼠体内分布试验

[0068] 1、对羟基苯甲酸-聚乙烯亚胺的125I标记(125I-p-HA-PEI)

[0069] p-HA-PEI(65μg/μl)50μl，加入Na125I 0.702mCi，40℃水浴反应5分钟，G-25凝胶柱纯化，HPLC梯度洗脱，C-18色谱柱检测，标记率为100％，产品活度为0.636mCi。

[0070] 2、125I标记的对羟基苯甲酸-聚乙烯亚胺小鼠体内分布试验

[0071] 小鼠尾静脉注射125I-p-HA-PEI溶液100μl/只(0.199μCi/μl，1.0μg/μL)，分别于给药后0.5、1、2和4小时用10％水合氯醛麻醉小鼠，心脏灌流生理盐水100ml/只，取心、肺、肝、脾、肾和脑等脏器或组织，称重，测定放射性计数，并计算单位重量组织占注射总125
放射性计数的百分数(ID％/g)。组织分布结果显示，I-p-HA-PEI在脑内有一定的富集(图3)。

[0072] 实施例4

[0073] 对羟基苯甲酸-聚乙烯亚胺包载EGFP报告基因小鼠脑内活体转染药效学评价[0074] 1、对羟基苯甲酸-聚乙烯亚胺/EGFP纳米粒的制备

[0075] 将p-HA-PEI和EGFP分别配成1mg/ml的溶液，按照N/P＝12分别精密吸取p-HA-PEI、EGFP，逐滴混合，吹打均匀，制备得到p-HA-PEI/EGFP纳米粒。

[0076] 2、对羟基苯甲酸-聚乙烯亚胺/EGFP纳米粒小鼠脑内活体转染药效学评价[0077] 小鼠尾静脉注射p-HA-PEI/EGFP纳米粒100μl/只(含EGFP 40μg)，连续给药4天，末次给药后24小时用10％水合氯醛麻醉小鼠，依次用生理盐水(100ml/只)、4％PA(100ml/只)心脏灌流，取全脑，PBS漂洗，依次置于20％和30％蔗糖PA溶液中脱水、固定，冰冻切片，用磷酸甘油封片，放置在共聚焦显微镜观察脑内各部位的绿色荧光蛋白表达情况。结果显示，EGFP在皮层、海马、纹状体等部位都有表达(图4)。

[0078] 实施例5

[0079] 钆标记对羟基苯甲酸-聚乙烯亚胺的制备

[0080] 1、对羟基苯甲酸-聚乙烯亚胺-二乙三胺五醋酸(p-HA-PEI-DTPA)的制备[0081] 称取p-HA-PEI 181mg溶于2ml DMF中，滴加到含有异硫氰基取代的二乙三胺五醋酸(SCN-DTPA)20mg的2ml DMF溶液中，搅拌反应3小时，将乳白色反应液离心，沉淀留用，上清液加乙醚沉淀，合并两次沉淀，真空干燥除尽乙醚，加适量水冷冻干燥。

[0082] 2、钆标记的对羟基苯甲酸-聚乙烯亚胺(p-HA-PEI-DTPA-Gd)的制备[0083] 称取p-HA-PEI-DTPA 100mg溶于适量水中，加入14.5mg三氧化二钆，用稀盐酸调节pH(3-4)，搅拌反应30分钟，反应液上G-25凝胶柱，纯化，得到Gd-HA-PEI。

[0084] 实施例6

[0085] 异硫氰酸荧光素标记对羟基苯甲酸-聚乙烯亚胺(p-HA-PEI-FITC)的制备[0086] 称取p-HA-PEI 250mg溶于3ml 0.01M PBS中，搅拌下滴加入含有4mg异硫氰酸荧光素(FITC)的二甲基亚砜(DMSO)溶液，搅拌反应2小时，反应液上G-25凝胶柱纯化，得到p-HA-PEI-FITC。

[0087] 异硫氰酸罗丹明标记对羟基苯甲酸-聚乙烯亚胺(p-HA-PEI-RITC)的制备[0088] 称取p-HA-PEI 250mg溶于3ml 0.01M PBS中，搅拌下滴加入含有4mg异硫氰酸荧光素(RITC)的DMSO溶液，搅拌反应2小时，反应液上G-25凝胶柱纯化，得到p-HA-PEI-RITC。

[0089] 实施例7

[0090] 对羟基苯甲酸-PAMAM-(p-HA-PAMAM)的制备

[0091] 称取PAMAM(G5)0.5g溶于5mlDMF中，将对羟基苯甲酸7.5mg、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐9.5mg溶于1mlDMF中，搅拌状态下逐滴加入到PAMAM的DMF溶液中，室温下磁力搅拌反应过夜，得到白色混悬液。离心后丢弃沉淀，上清液加入冷乙醚100ml沉淀处理，离心后丢弃上清液，沉淀再用冷乙醚洗涤3次，10ml/次。真空干燥24小时，产物用少量双蒸水(dH2O)溶解，上G-25凝胶柱以dH2O洗脱，收集相应组分，冷冻干燥，得到p-HA-PAMAM。

标题	发布/更新时间	阅读量
一种治疗小儿单纯性多汗的药物	2020-05-12	804
一种治疗单纯疱疹病毒感染症的中药	2020-05-13	158
一种治疗单纯性甲状腺肿的中药	2020-05-13	686
一种治疗单纯糠疹的中药及制备方法	2020-05-13	121
一种治疗单纯性乳腺增生症的中药	2020-05-13	759
一种单纯泡疹病毒感染的治疗药物	2020-05-13	794
一种治疗单纯性甲状腺肿的中药	2020-05-11	401
一种治疗单纯性甲状腺肿的中药制剂	2020-05-11	236
一种治疗单纯性甲状腺肿的中药配方	2020-05-11	295
一种治疗单疱病毒性角膜炎的中成药	2020-05-12	781

苯甲酰胺类似物介导的脑靶向递药系统

苯甲酰胺类似物介导的脑靶向递药系统

技术领域

背景技术

发明内容

具体实施方式

该功能需要专业版企业版VIP权限，您可以：