技术领域
[0001] 本
发明一般的涉及聚乙二醇化干扰素稳定的水溶液，特别的涉及巯基聚乙二醇修饰剂修饰干扰素后所得的聚乙二醇化干扰素的稳定的水溶液。
背景技术
[0002] 水溶液型剂型是
蛋白质类药物最常见的剂型，例如注射液、滴眼剂、喷雾剂等。但由于蛋白质在水溶液中很不稳定，容易被化学或
生物降解或改变构型构象，从而造成生物活性降低或丧失，因此，蛋白质的水溶液剂型为了贮存与运输的方便经常需要进行冻干处理，在使用时再用生理盐水溶解成水溶液状态。但冻干后的蛋白质水溶液在使用时再溶解一方面会延长患者用药时间，另一方面会带来因溶解不完全、
溶剂生理盐水用量不准、吸取注射溶解液不准等带来的
给药剂量准确性与安全性问题。因此，在临床上更愿意直接使用水溶液状态的蛋白质类药物的水溶液型剂型，而不愿意使用冻干粉末状态的蛋白质类药物的水溶液型剂型。
[0003] 聚乙二醇长效技术的出现使聚乙二醇化蛋白质的
稳定性较未化学修饰蛋白质有了很大的提高，在一定程度上使将蛋白质类药物制备成水溶液状态的水溶液型剂型更加容易。但聚乙二醇长效技术并不能从根本上解决蛋白质在水溶液中不稳定的问题，因此还需要优化配方以制备真正稳定的可以水溶液状态贮存与运输的蛋白质类药物的水溶液型剂型。
[0004] 为了使蛋白质在水溶液中稳定，一方面水溶液需要有适宜的pH，另一方面水溶液中还需要添加蛋白质活性保护剂、促溶剂、
防腐剂等物质，其中蛋白质活性保护剂与促溶剂一般是必需的。常用的蛋白质活性保护剂包括但不局限于各种
氨基酸、
白蛋白和多元醇类物质，例如精氨酸、赖氨酸、白蛋白、甘露醇、海藻糖、右旋糖酐，但最常使用的是白蛋白，因为它对蛋白质的活性保护作用一般最好，且往往还对蛋白质有其他多种保护作用。常用的促溶剂是吐温等
表面活性剂类物质，其中最常使用的是吐温-80。
[0005] 但鉴于白蛋白在近年来价格越来越高，临床供需矛盾突出，而提取自人体血液的白蛋白潜在的污染病毒类物质的可能又会增加注射添加有白蛋白的药物的安全性
风险，且白蛋白还会影响蛋白质药物成品的多种检测，因此在蛋白质药物制剂中不用或少用白蛋白已经成为了近年来蛋白质药物剂型领域研究与应用的重点与难点问题。此外，吐温类表面活性剂物质的潜在安全性风险还没有得到完全评估，进口的吐温类物质按生产厂家说明往往不能用于临床医用配制品中，而国产的吐温类物质的
质量标准又往往达不到医用级别，因此，在蛋白质药物剂型中还应该慎用吐温等表面活性剂类物质作为促溶剂。
发明内容
[0006] 本发明的目的是提供一种聚乙二醇化干扰素稳定的水溶液，该水溶液中含有比常规用量少的白蛋白，不含有吐温类表面活性剂作为蛋白质的促溶剂，以解决以水溶液状态存在的蛋白质类药物水溶液型剂型不易制备、贮存与运输，制备时需要添加吐温等表面活性剂类物质与大量白蛋白的技术问题。
[0007] 为实现此目的，在
基础的实施方案中，本发明提供一种聚乙二醇化干扰素稳定的水溶液，其不含有吐温等表面活性剂类物质但含有：1)
治疗有效量的聚乙二醇化干扰素；2)2-200mmol/L的
磷酸氢二钠-磷酸二氢钠，pH7.0-7.5缓冲溶液；3)1/2000-1/500(m/v)的白蛋白；4)0.4-0.8％(m/v)的NaCl。
[0008] 在一种优选的实施方案中，本发明提供一种聚乙二醇化干扰素稳定的水溶液，其不含有吐温等表面活性剂类物质但含有：1)10-1000μg/ml的聚乙二醇化干扰素；2)2-200mmol/L的磷酸氢二钠-磷酸二氢钠，pH7.0-7.5缓冲溶液；3)1/2000-1/500(m/v)的白蛋白；4)0.4-0.8％(m/v)的NaCl。
[0009] 在一种优选的实施方案中，本发明提供一种聚乙二醇化干扰素稳定的水溶液，其不含有吐温等表面活性剂类物质但含有：1)10-1000μg/ml的聚乙二醇化干扰素；2)2-200mmol/L的磷酸氢二钠-磷酸二氢钠，pH7.0-7.5缓冲溶液；3)1/1000-1/500(m/v)的白蛋白；4)0.4-0.6％(m/v)的NaCl。
[0010] 在一种优选的实施方案中，本发明的聚乙二醇化干扰素稳定的水溶液中所述的聚乙二醇化干扰素为巯基聚乙二醇修饰剂与有游离巯基的干扰素连接得到。
[0011] 在一种更加优选的实施方案中，本发明的聚乙二醇化干扰素稳定的水溶液中所述的聚乙二醇化干扰素由分子量20KDa的单链巯基聚乙二醇修饰剂与SEQ IDNo.1所示氨基酸序列的干扰素连接得到。
[0012] 在一种更加优选的实施方案中，本发明的聚乙二醇化干扰素稳定的水溶液中所述的聚乙二醇化干扰素由分子量40KDa的双链巯基聚乙二醇修饰剂与SEQ IDNo.1所示氨基酸序列的干扰素连接得到。
[0013] 在一种更加优选的实施方案中，本发明的聚乙二醇化干扰素稳定的水溶液中所述的聚乙二醇化干扰素由分子量20KDa的单链巯基聚乙二醇修饰剂与SEQ IDNo.2所示氨基酸序列的干扰素连接得到。
[0014] 在一种更加优选的实施方案中，本发明的聚乙二醇化干扰素稳定的水溶液中所述的聚乙二醇化干扰素由分子量20KDa的单链巯基聚乙二醇修饰剂与SEQ IDNo.3所示氨基酸序列的干扰素连接得到。
[0015] 在一种更加优选的实施方案，本发明的聚乙二醇化干扰素稳定的水溶液中所述的聚乙二醇化干扰素由分子量20KDa的单链巯基聚乙二醇修饰剂与干扰素α1b连接得到。
[0016] 本发明中使用的术语“聚乙二醇修饰剂”，也即“PEG修饰剂”是指单甲
氧基聚乙二醇修饰剂，也即用甲氧基封闭聚乙二醇分子一端的一个羟基，而用适宜的活化方法活化另一端的一个羟基后所得的具有活化端的聚乙二醇。由于羟基自身的反应活性很低，所以经过活化后的聚乙二醇分子的反应活性有了很大的提高，才可被称为“聚乙二醇修饰剂”。本发明所述的“巯基聚乙二醇修饰剂”是专一性的修饰蛋白质分子中未参与形成二硫键的游离巯基的聚乙二醇修饰剂，可通过商业渠道得到或通过已知的活化机理活化制备。本发明所述的“单链巯基聚乙二醇修饰剂”是一个活化端连接一个聚乙二醇分子的聚乙二醇修饰剂，“双链巯基聚乙二醇修饰剂”是一个活化端通过一个连接分子(例如赖氨酸)连接两个聚乙二醇分子的聚乙二醇修饰剂。
具体实施方式
[0017] 通过如下的
实施例对本发明的实施作进一步说明，但本发明的实施方式并不局限于如下的实施例。
[0018] 实施例1：不同配方聚乙二醇化干扰素水溶液的制备
[0019] 按照如下表1的配制方法配制不同配方聚乙二醇化干扰素的水溶液，其中“聚乙二醇化干扰素1”由分子量20KDa的单链巯基聚乙二醇修饰剂mPEG-MAL与SEQ ID No.1所示氨基酸序列的干扰素连接得到，在中国
专利申请200780034504.3(对应PCT申请PCT/CN2007/003711)中公开了其制备方法等信息(对应于该专利申请中的mPEG(20KD)-MIFNCys86)；“聚乙二醇化干扰素2”由分子量40KDa的双链巯基聚乙二醇修饰剂mPEG2-MAL与SEQ ID No.1所示氨基酸序列的干扰素连接得到，同样在中国专利申请200780034504.3中公开了其制备方法等信息(对应于该专利申请中的mPEG(40KD)-MIFNCys86)；“聚乙二醇化干扰素3”由分子量20KDa的单链巯基聚乙二醇修饰剂mPEG-MAL与SEQ IDNo.2所示氨基酸序列的干扰素连接得到，同样在中国专利申请200780034504.3中公开了其制备方法等信息(对应于该专利申请中的mPEG(20KD)-IFNα-2aCys85)；“聚乙二醇化干扰素4”由分子量20KDa的单链巯基聚乙二醇修饰剂mPEG-MAL与SEQ ID No.3所示氨基酸序列的干扰素连接得到，在中国专利申请201010149849.7中公开了其制备方法等信息(对应于该专利申请中的mPEG(20KD)-MIFNCys72)；“聚乙二醇化干扰素5”由分子量20KDa的单链巯基聚乙二醇修饰剂mPEG-MAL与干扰素α1b连接得到，在中国专利申请2005100766676.X中公开了其制备方法等信息(对应于该专利申请中的mPEG(20KD)-IFNα-1b)。
[0020] 表1不同配方聚乙二醇化干扰素水溶液的配制方法
[0021]
[0022]
[0023]
[0024] 实施例2：不同配方聚乙二醇化干扰素水溶液的
加速稳定性试验
[0025] 将按实施例1的方法配制的不同配方的聚乙二醇化干扰素水溶液置37℃水溶中放置3个月，定期取样按《中华人民共和国药典2010版(三部)》附录部分规定的“干扰素活性测定法”测定其中的聚乙二醇化干扰素活性，结果如下表2所示。
[0026] 表2不同配方聚乙二醇化干扰素水溶液的加速稳定性试验活性检测结果[0027]
[0028]
