专利汇可以提供一种鉴定转基因抗虫植物抗虫性的生物测定方法专利检索,专利查询,专利分析的服务。并且一种鉴定转基因抗虫 植物 抗虫性的 生物 测定方法。以离体培养的粉纹夜蛾细胞为试材,通过转基因抗虫植物 蛋白质 对昆虫细胞的毒性,测定转基因抗虫植物的抗虫性。由于活细胞线粒体内的 琥珀酸 脱氢酶与MTT反应生成蓝紫色结晶产物甲臜,甲瓒 颜色 深浅与活细胞数成正比,通过在570nm的 波长 下测定其OD值,测算出活细胞的数目,而死细胞中琥珀酸脱氢酶消失,不能将MTT还原。利用昆虫细胞测定转基因抗虫植物的抗虫性,便于从分子 水 平观察分析转基因抗虫植物的杀虫机理。离体培养的昆虫细胞相对于饲养或田间的活体昆虫而言,其均一性好,不易受外界环境和活体昆虫体壁、肠道内蛋白酶活性、体液pH值等因素的影响。此法操作简单、便捷,节省人 力 、物力。,下面是一种鉴定转基因抗虫植物抗虫性的生物测定方法专利的具体信息内容。
1.一种鉴定转基因抗虫植物抗虫性的生物测定方法,其特征是:分别使用待 测转基因抗虫植株和未转化植株的蛋白质对昆虫离体细胞进行处理,采用MTT 分析法,测定两种经处理后的昆虫离体细胞的成活情况,从而得到细胞相对存活 率和细胞相对死亡率,由此确定转基因抗虫植株的抗虫性。
2.根据权利要求1所述的转基因抗虫植物抗虫性的生物测定方法,其特征是: 测定步骤为:
步骤1、配植物蛋白提取液,取未转化植株和经聚合酶链式反应检测为阳性 的转化植株的新鲜叶片,分别提取植物总蛋白;
步骤2、用转化植株的蛋白液和未转化植株的蛋白液分别处理昆虫离体细胞 液两小时,再用由无血清细胞培养基配成的3-(4,5-二甲基-2-噻唑)-2,5-二苯 基溴化四唑混合液分别沉淀结晶经转化植株的蛋白液和未转化植株的蛋白液处理 过的昆虫离体细胞液,用十二烷基硫酸钠-酸化异丙醇溶解结晶产物,在570纳米 波长处测定吸光度OD值;
步骤3、用细胞相对存活率和细胞相对死亡率表示转基因抗虫植物的抗虫性, 计算公式如下:
细胞相对死亡率(%)=1-细胞相对存活率。
本发明涉及一种鉴定转基因抗虫植物抗虫性的生物测定技术。属生物工程、生物遗传 工程技术。
技术背景
虫害是制约农作物高产、稳产的重要因素。如何有效地控制害虫,减少损失受到各国 政府和科学家的普遍重视。传统化学防治的弊端已越来越突出,化学农药的非特异性作用 方式,不但杀死了害虫,也杀死了有益的昆虫和害虫的天敌;大量施用化学杀虫剂的结果, 导致害虫产生了抗药性,使用药量越来越大,形成了恶性循环;过量使用化学农药,不仅 严重破坏了自然生态平衡,而且直接威胁着人畜的安全。而生物防治却能克服上述缺点。 目前,生物防治的途径主要有三条,即生物杀虫剂、生态防治和培育抗虫品种,其中最有 效的方法是培育抗虫品种。但常规抗虫育种周期长,种质资源有限,加上抗虫机制不明了 等原因,其利用受到极大的限制。采用基因工程技术将外源抗虫基因导入植物中,使其在 植物细胞内稳定地遗传和表达,并形成植物抗虫新品系或新品种是植物抗虫育种领域最有 前途的方法。在这个过程中,转基因抗虫植物的检测和鉴定是一个必不可少的环节。通常 采用两种方法鉴定转基因抗虫植物,即分子检测和生物测定。分子检测阳性,并不意味着 在田间即能表现出抗虫性,即基因的整合并不一定有抗虫性,抗性的高低与整合的拷贝数 也并非成正比,抗性的高低可能取决于整合的位置和表达的水平。所以通过抗虫性鉴定作 进一步选择。目前转基因抗虫杨树的生物测定主要是通过室内抗虫性测试完成,室内杀虫 试验易于控制,重复性好,结果比较准确,但这种测定是在转化工作的后期进行,此时鉴 定出转化植株抗虫性较差或没有抗虫性,就意味着整个实验的失败。如果将生物测定的检 测时间提前,就能做到既缩短实验周期,又减少实验支出。
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