过敏原剂型
阅读：986发布：2021-08-09
专利汇可以提供过敏原剂型专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 提供含过敏原的药物产品，尤其是快速分散的固体过敏原剂型。特别提供了包含基质和至少一种过敏原的适于 口腔 粘膜 给药 的快速分散、非压制固体剂型。适宜的基质是明胶， 淀粉 和甘露醇。还提供了制备该剂型的方法。，下面是过敏原剂型专利的具体信息内容。
1.适于施用过敏原的药物产品，其包含适于口腔粘膜给药的快速 分散、非压制固体剂型，该剂型包括：
(a)由至少一种基质形成剂形成的基质，和
(b)有效剂量的过敏原，以使个体对所述过敏原脱敏，
其中，
(c)在25℃和60％的相对湿度下保持3个月后，所述剂型中过敏 原含量损失低于最初过敏原含量的50％，和
(d)在经受脆性测试时，所述固体剂型的过敏原含量损失低于大 约0.5μg过敏原提取物或低于约0.05μg主要过敏原。
2.根据权利要求1所述的药物产品，其中以欧洲药典2.9.7所述 的脆性测试测定脆性。
3.根据权利要求1所述的药物产品，其中在包括以下步骤的脆性 测试中测定脆性：
a)将各自包含固体剂型的各个密封泡罩置于适合脆性测定的装 置中；
b)以适当的速度移动包含固体剂型的密封泡罩持续恰当的时间；
c)取出包含固体剂型的密封泡罩；
d)打开泡罩并将固体剂型和任何残余物置于容器中；
e)从容器中取出固体剂型，将任何松散的残余物留在所述容器中；
f)对所述残余物进行过敏原特异性测定，测定所述残余物中的过 敏原含量；和任选地计算在所述残余物中的过敏原含量占所述固体剂 型单位的总过敏原含量的百分比。
4.根据权利要求3所述的药物产品，其中
(a)使用1-100个含固体剂型的泡罩，
(b)使用如欧洲药典2.9.7所述的脆性测定装置，
(c)固体剂型以25±1rpm旋转100转，和
(d)过敏原特异性测定是免疫化学过敏原特异性测定。
5.根据权利要求3或4所述的药物产品，其中过敏原特异性测定 是酶联免疫吸附测定。
6.根据权利要求1-5任一项所述的药物产品，包含约2.5μg到约 3.75mg过敏原提取物。
7.根据权利要求6所述的药物产品，包含约2.5μg到约2.5mg 过敏原提取物。
8.根据权利要求7所述的药物产品，包含约25μg到约2.5mg过 敏原提取物。
9.根据权利要求8所述的药物产品，包含约25μg到约1.25mg 过敏原提取物。
10.根据权利要求9所述的药物产品，包含约25μg到约1mg过敏 原提取物。
11.根据权利要求10所述的药物产品，包含约25μg到约750μg 过敏原提取物。
12.根据权利要求1-5任一项所述的药物产品，包含约0.25μg 到约0.25mg主要过敏原。
13.根据权利要求12所述的药物产品，包含约2.5μg到约0.25mg 主要过敏原。
14.根据权利要求13所述的药物产品，包含约2.5μg到约 0.125mg主要过敏原。
15.根据权利要求14所述的药物产品，包含约2.5μg到约0.1mg 主要过敏原。
16.根据权利要求15所述的药物产品，包含约2.5μg到约75μg 主要过敏原。
17.根据权利要求1-5任一项所述的药物产品，含有约65到约 15,000BAU的剂量。
18.根据权利要求17所述的药物产品，含有约650到约15,000BAU 的剂量。
19.根据权利要求18所述的药物产品，含有约650到约6,000BAU 的剂量。
20.根据权利要求19所述的药物产品，含有约650到约4,700BAU 的剂量。
21.根据权利要求20所述的药物产品，含有约650到约3,500BAU 的剂量。
22.根据权利要求17-21任一项所述的药物产品，其中所述过敏原 是草花粉过敏原。
23.根据权利要求1-22任一项所述的药物产品，其中在25℃和60％ 相对湿度保存3个月后过敏原含量损失少于最初含量的约30％。
24.根据权利要求23所述的药物产品，其中在25℃和60％相对湿 度保存3个月后过敏原含量损失少于最初含量的约20％。
25.根据权利要求24所述的药物产品，其中在25℃和60％相对湿 度保存3个月后过敏原含量损失少于最初含量的约15％。
26.根据权利要求25所述的药物产品，其中在25℃和60％相对湿 度保存3个月后过敏原含量损失少于最初含量的约10％。
27.根据权利要求26所述的药物产品，其中在25℃和60％相对湿 度保存3个月后过敏原含量损失少于最初含量的约5％。
28.根据权利要求27所述的药物产品，其中在25℃和60％相对湿 度保存3个月后过敏原含量损失少于最初含量的约2％。
29.根据权利要求1-28任一项所述的药物产品，其中每个固体剂 型的损失少于约0.25μg过敏原提取物。
30.根据权利要求29所述的药物产品，其中每个固体剂型的损失 少于约0.15μg过敏原提取物。
31.根据权利要求30所述的药物产品，其中每个固体剂型的损失 少于约0.075μg过敏原提取物。
32.根据权利要求31所述的药物产品，其中每个固体剂型的损失 少于约0.025μg过敏原提取物。
33.根据权利要求32所述的药物产品，其中每个固体剂型的损失 少于约0.01μg过敏原提取物。
34.根据权利要求1-28任一项所述的药物产品，其中每个固体剂 型的损失少于约0.025μg主要过敏原。
35.根据权利要求34所述的药物产品，其中每个固体剂型的损失 少于约0.015μg主要过敏原。
36.根据权利要求35所述的药物产品，其中每个固体剂型的损失 少于约0.0075μg主要过敏原。
37.根据权利要求36所述的药物产品，其中每个固体剂型的损失 少于约0.0025μg主要过敏原。
38.根据权利要求37所述的药物产品，其中每个固体剂型的损失 少于约0.001μg主要过敏原。
39.根据权利要求1-38任一项所述的药物产品，其中通过升华包 含所述过敏原和至少一种基质形成剂的溶液而形成基质。
40.根据权利要求1-39任一项所述的药物产品，其中剂型的水含 量在约2重量％和约8重量％之间。
41.根据权利要求40所述的药物产品，其中剂型的水含量在约4 重量％和约7重量％之间。
42.根据权利要求1-41任一项所述的药物产品，其中一种基质形 成剂是明胶。
43.根据权利要求42所述的药物产品，其中所述明胶包括鱼明胶。
44.根据权利要求42或43所述的药物产品，其中另一基质形成剂 是甘露醇。
45.根据权利要求44所述的药物产品，其中鱼明胶与甘露醇的比 例从约2∶20到约20∶1。
46.根据权利要求45所述的药物产品，其中鱼明胶与甘露醇的比 例从约2∶10到约10∶1。
47.根据权利要求46所述的药物产品，其中鱼明胶与甘露醇的比 例从约3∶5.5到约6.5∶3。
48.根据权利要求47所述的药物产品，其中鱼明胶与甘露醇的比 例是4∶3。
49.根据权利要求47所述的药物产品，其中鱼明胶与甘露醇的比 例是6.5∶5.5.。
50.根据权利要求47所述的药物产品，其中鱼明胶与甘露醇的比 例是6.0∶5.08。
51.根据权利要求44-50任一项所述的药物产品，其中基质由包含 约2-约10％ W/W鱼明胶和约1-约10％ W/W甘露醇的溶液形成。
52.根据权利要求51所述的药物产品，其中所述溶液包含约3- 约6.5％ W/W鱼明胶和约3-约5.5％ W/W甘露醇。
53.根据权利要求52所述的药物产品，其中所述溶液包含约6.5％ W/W鱼明胶和约5.5％ W/W甘露醇。
54.根据权利要求52所述的药物产品，其中所述溶液包含6.0％ W/W鱼明胶和5.08％ W/W甘露醇。
55.根据权利要求1-41任一项所述的药物产品，其中一种基质形 成剂是淀粉。
56.根据权利要求55所述的药物产品，其中另一基质形成剂是甘 露醇。
57.根据权利要求56所述的药物产品，其中淀粉与甘露醇的比例 是从约2∶20到约20∶1。
58.根据权利要求56所述的药物产品，其中淀粉与甘露醇的比例 是从约2∶10到约10∶1。
59.根据权利要求56-58所述的药物产品，其中所述基质由包含 3-6.5％ W/W淀粉和3-5.5％ W/W甘露醇的溶液形成。
60.根据权利要求1-59任一项所述的药物产品，其在人唾液中在 约60秒之内崩解。
61.根据权利要求60所述的药物产品，其在人唾液中在约30秒之 内崩解。
62.根据权利要求61所述的药物产品，其在人唾液中在约10秒之 内崩解。
63.根据权利要求62所述的药物产品，其在人唾液中在约5秒之 内崩解。
64.根据权利要求63所述的药物产品，其在人唾液中在约2秒之 内崩解。
65.根据权利要求1-64任一项所述的药物产品，其中过敏原选自 树花粉过敏原，草花粉过敏原，螨过敏原，昆虫过敏原，毒液过敏原， 动物毛发过敏原，皮屑过敏原和食物过敏原。
66.根据权利要求65所述的药物产品，其中过敏原为提取物，纯 化过敏原，修饰过敏原或重组过敏原或重组过敏原的突变体或其任何 组合的形式。
67.根据权利要求65-66所述的药物产品，其中过敏原是草花粉过 敏原。
68.根据权利要求67所述的药物产品，其中过敏原为草提取物的 形式。
69.根据权利要求65-66所述的药物产品，其中过敏原为尘螨过敏 原。
70.根据权利要求69所述的药物产品，其中过敏原为尘螨提取物 的形式。
71.根据权利要求1-70任一项所述的药物产品，包含至少两种不 同的过敏原。
72.根据权利要求1-71任一项所述的药物产品，其中不同固体剂 型之间过敏原的过敏原含量的变化在约10％之内。
73..根据权利要求72所述的药物产品，其中不同固体剂型之间过 敏原含量的变化在约7％之内。
74.根据权利要求73所述的药物产品，其中不同固体剂型之间过 敏原含量的变化在约5％之内。
75.根据权利要求1-74任一项所述的药物产品，其中固体剂型的 抗张强度小于约1.0N/mm2。
76.根据权利要求1-75任一项所述的药物产品，其中所述固体剂 型的破碎最大负荷不小于约0.05Kgf并低于约0.9KgF。
77.根据权利要求1-76任一项所述的药物产品，其中所述固体剂 型的强度足以从泡罩包装中取出而不会释放含多于约0.5μg提取物 的残余物到环境中。
78.根据权利要求1-76所述的药物产品，其中所述固体剂型的强 度足以从泡罩包装中取出而不会释放含多于约0.05μg主要过敏原的 残余物到环境中。
79.根据权利要求1-76任一项所述的药物产品，其中所述固体剂 型的强度足以从泡罩包装中取出而不会释放含多于约13BAU的残余物 到环境中。
80.根据权利要求1-79任一项所述的药物产品，其中剂型包含一 种或多种赋形剂。
81.根据权利要求80所述的药物产品，含有选自以下的赋形剂： 抗酸剂，稀释剂，粘膜粘着剂，增强剂，增香剂，矫味剂，防腐剂， 抗氧化剂，表面活性剂，粘性增强剂，着色剂，pH调节剂和甜味剂。
82.根据权利要求1-81任一项所述的药物产品，还包含佐剂。
83.根据权利要求82所述的药物产品，其中所述佐剂选自铝盐， 无毒细菌碎片，细胞因子，霍乱毒素，霍乱毒素脱毒部分，壳聚糖， 大肠杆菌的热不稳定片段，大肠杆菌的热不稳定片段脱毒部分，皂甙， 脂多糖类、胞壁酰二肽，脂质体，免疫刺激DNA序列和丙交酯/乙交 酯微粒聚合物。
84..根据权利要求1-83任一项所述的药物产品，还包含抗过敏 药。
85.根据权利要求84所述的药物产品，其中抗过敏药是抗组胺药。
86.多剂量容器，包含多个根据权利要求1-85任一项所述的固体 剂型。
87.根据权利要求86所述的多剂量容器，其中所述多剂量容器是 泡罩式包装。
88.根据权利要求86所述的多剂量容器，其中所述多剂量容器是 全铝泡罩式包装。
89.根据权利要求86所述的多剂量容器，其中所述多剂量容器是 多层全铝泡罩式包装。
90.治疗过敏症或缓解过敏症状的方法，包括将权利要求1-85任 一项所述的药物产品口腔粘膜给药。
91.制备具有低脆性的快速分散、非压制固体稳定剂型的方法，该 剂型包含至少一种基质形成剂并适于口腔粘膜给药，其包含使个体对 至少一种过敏原脱敏的有效剂量，该方法包括如下步骤：
a)制备含所述至少一种过敏原和所述至少一种基质形成剂的水溶 液，
b)将溶液引入模具的一个或多个凹陷内，
c)采用贮存温度和室压力的标准条件对装填的模具进行冷冻和冷 冻干燥以在每个凹陷中获得所述固体剂型。
92.根据权利要求91所述的方法，其中步骤(b)包括将溶液引入 多层层压泡罩片的凹陷中。
93.测定权利要求1-85中所定义的固体剂型的脆性的方法，包括 下列步骤：
a)将各自包含固体剂型的各个密封泡罩置于适合脆性测定的装置 中；
b)以适当的速度移动包含固体剂型的密封泡罩持续恰当的时间；
c)取出包含固体剂型的密封泡罩；
d)打开泡罩并将固体剂型和任何残余物置于容器中；
e)从容器中取出固体剂型，将任何松散的残余物留在所述容器中；
f)对所述残余物进行过敏原特异性测定，测定所述残余物中的过 敏原含量；和任选地计算所述残余物中的过敏原含量占固体剂型单位 的总过敏原含量的百分比。
94.根据权利要求93所述的方法，其中
(a)使用1-100个含固体剂型的泡罩，
(b)使用如欧洲药典V.2.9.7所述的脆性测定装置，
(c)固体剂型以25±1rpm旋转100转，和
(d)过敏原特异性测定为免疫化学过敏原特异性测定。
95.根据权利要求94所述的方法，其中免疫化学测定是酶联免疫 吸附测定。
96.权利要求1-85中定义的固体剂型，其中所述固体剂型具有 0.4-0.5的水分活性。
97.一种用于治疗过敏症或缓解过敏症状的试剂盒，包括
a)在密封容器中的多个固体口服剂型，每个所述的固体口服剂型 处于密封包装中并包含有效量的适于口腔粘膜给药的过敏原；和
b)每个所述的固体剂型含相同量的过敏原。
98.根据权利要求97所述的试剂盒，还包括使用多个固体剂型的 用法说明。
99.根据权利要求97-98所述的试剂盒，其中所述剂型是快速分散 剂型。
100.根据权利要求97-99所述的试剂盒，其中每个固体剂型位于 多泡罩式包装的各个单独密封的泡罩中。
101.根据权利要求97-100所述的试剂盒，其中所述固体剂型包含 明胶。
102.根据权利要求101所述的试剂盒，其中所述固体剂型还包含 甘露醇。
103.根据权利要求101-102所述的试剂盒，其中所述明胶是鱼明 胶。
104.根据权利要求97-103所述的试剂盒，其中过敏原的有效量为 约2.5μg-约3.75mg提取物/固体剂型。
105.一种治疗患过敏症的哺乳动物患者的方法，包括：
a)提供根据权利要求97-104所述的试剂盒，和
b)对所述患者重复施用试剂盒中的至少一种所述固体剂型，直 到过敏症状缓解，其中所述重复施用中没有提高剂量的步骤。
106.包含可口服给药的固体剂型的药物产品，所述剂型含由至少 一种药学上可接受的材料形成的基质、使人对所述过敏原脱敏的有效 量的过敏原，所述剂型在25℃和60％相对湿度保存3个月后的过敏原 含量为最初过敏原含量的至少约50％。
107.根据权利要求1-85或106任一项所述的药物产品，其中该产 品选自糖锭，片剂，胶囊和小胶囊。
108.根据权利要求1-85或106-107任一项所述的药物产品，用于 对过敏症的口腔粘膜治疗或过敏症状的缓解。
109.如权利要求1-85任一项中所定义的固体剂型用于过敏症的 口腔粘膜治疗或过敏症状的缓解的用途。
技术领域
本发明涉及一种含过敏原的药物产品，尤其是快速分散的固体过 敏原剂型，以及此类剂型的制备方法。
背景技术
在适于西方生活方式的国家，过敏症是主要的健康问题。而且， 过敏性疾病在这些国家越来越流行。尽管过敏症通常不被认为是威胁 生命的疾病，但哮喘每年导致相当数量的死亡。在约30％的青少年中 异常的流行导致在生活质量，工作日和钱财方面的重大损失，并成为 在西方世界的主要健康问题当中的一类。
过敏症是一种复杂的疾病。许多因素促成致敏事件。其中个体的 易感性被定义为迄今仍了解不足的一些基因之间的相互作用。另一个 重要因素是过敏原接触超过某阈值。包括污染，儿童期感染，寄生虫 感染，肠道微生物等的一些环境因素可能在致敏过程中很重要。一旦 个体被致敏并且建立了过敏性免疫应答，仅微量过敏原的存在就足以 转变为症状。
过敏性疾病的自然病程通常在两个水平伴有恶化。首先，有症状 和疾病严重程度的进展。例如，从花粉热进展到哮喘。其次，引起不 适的过敏原大多数时候会发生播散而造成过敏性多反应性。长期炎症 导致粘膜防御机制总体的弱化，引起非特异性刺激并最终破坏粘膜组 织。婴儿可能最初对食物例如牛奶敏化，产生湿疹或胃肠疾病；然而， 绝大多数时候他们会自发地不再有这些症状。这些婴儿在其随后的生 活中处于发生吸入过敏症的危险中。
在我们呼吸的空气里最普遍的某种粒径微粒当中发现最重要的 过敏原来源。这些来源非常普遍并且包括草花粉(grass pollen)和 屋尘螨粪便微粒，它们合在一起是形成约50％所有过敏症的原因。在 全世界有重要性的还有动物皮屑例如猫和狗的皮屑，其它花粉例如艾 属植物花粉，和微小真菌例如链格孢属。在地域性的基础上其它的花 粉可以占优势，例如在北欧和中欧的桦属花粉，在美国东部和中部的 豚草属，以及在日本的日本雪松花粉。昆虫例如蜜蜂和黄蜂毒液以及 食物各自占所有过敏原的大约2％。
过敏，即I型超敏反应，是由对外来非致病物质的不适当的免疫 反应所引起。过敏症的重要临床表现包括哮喘，花粉热，湿疹和胃肠 道疾病。过敏反应很迅速而且在与引起不适的过敏原接触20分钟内就 可以到达峰值。而且，过敏反应是特异性的，含义即特定个体对特定 过敏原敏感，而该个体不必定对已知可引起过敏疾病的其他物质表现 过敏反应。过敏表型特征在于靶器官粘膜的显著炎症和在循环中以及 肥大细胞和嗜碱性白细胞表面上存在IgE类过敏原特异性抗体。
过敏发作是由外来过敏原与过敏原特异性IgE抗体的反应引发， 此时抗体结合到在肥大细胞和嗜碱性白细胞表面上的高亲和力IgE特 异性受体。肥大细胞和嗜碱性白细胞含有预先形成的介质，即组胺， 类胰蛋白酶和其他物质，它们在两个或多个受体结合的IgE抗体的交 联后释放。IgE抗体通过同时结合一个过敏原分子而交联。在肥大细 胞表面上受体结合的IgE的交联还导致负责吸引嗜酸性细胞、过敏原 特异性T细胞和其他类型细胞到过敏性反应位点的信号分子的释放。 这些细胞与过敏原、IgE和效应细胞相互作用导致在遇到过敏原后 12-24小时发生症状重新出现(晚期反应)。
过敏性疾病的处理包括诊断和含预防性治疗的治疗。过敏症诊断 涉及过敏原特异性IgE的验证和过敏原来源的鉴定。在很多情况中细 致的既往病史可能足以诊断过敏症和鉴定引起不适的过敏原来源材 料。然而绝大多数时候，诊断依赖于客观测定，例如皮肤针刺试验， 血液检测，或诱发试验。
治疗选择有三种主要类别。首先的可能是避免或减少过敏原接 触。尽管避免过敏原是显而易见的，例如对于食物过敏原，但对于屋 尘螨过敏原可能很困难或昂贵，或对于花粉过敏原也许是不可能的。 其次和使用最广泛的治疗选项是开处经典对症药物如抗组胺药和类固 醇。对症的药物是安全有效的；然而，它们不能改变疾病的自然病因， 并且它们不能控制疾病的播散。第三种可供选择的治疗方法是特异性 过敏疫苗接种，其在多数情况下减轻或缓解所讨论的过敏原引起的过 敏症状。
常规的特异性过敏接种是对过敏性疾病的病因治疗。它干扰基本 免疫机制，导致患者免疫状态持久改善。因此，相对于对症药物治疗， 特异性过敏接种的保护效应延伸到治疗期之后。一些接受治疗的患者 被治愈，此外，大多数患者感受到疾病严重程度和所经历症状的减轻， 或者至少阻止病情加重。因此，特异性过敏接种具有预防作用，减少 花粉热发展为哮喘的危险，同时减少发展新的敏感性的危险。
作为成功的过敏接种的基础的免疫学机制未被确切了解。例如针 对特定病原体的抗体产生的特异性免疫应答被认为是适应性免疫应 答。此应答可以与先天免疫应答区别开，后者是一种针对病原体的非 特异性反应。过敏疫苗是要解决适应性免疫应答的问题，其中包括具 有抗原特异性的细胞和分子，例如T细胞和产生抗体的B细胞。没有 相应特异性的T细胞帮助，B细胞就不能成熟为产生抗体的细胞。参 与刺激过敏性免疫应答的T细胞主要是Th2型。在Th1和Th2细胞之 间建立新的平衡已被提出对特异性过敏接种的免疫学机制是有益和重 要的。这是由Th2细胞的减少、从Th2向Th1细胞的偏移还是Th1细 胞的上调引起的，存在争议。最近，调节T细胞已经被认为对过敏免 疫接种机制是重要的。根据这种模型，调节T细胞，即Th3或Tr1细 胞，下调相应抗原特异性的Th1和Th2细胞两者。虽然存在这些不确 定性，但通常认为有效疫苗必须具有刺激过敏原特异性T细胞优选TH1 细胞的能力。
尽管有其效力和优点，特异性过敏接主要出于两个原因没有被广 泛应用。一个原因是与常规接种程序有关的不便，包括反复接种，例 如在数月内多次注射。更重要的另一个原因是过敏性副反应的危险。 针对感染因子的普通接种使用单次或几次高剂量免疫接种有效进行。 然而，由于病理性免疫应答已在进行，这种策略不能用于过敏接种。
因此常规的特异性过敏接种采用在延长时间期限内应用的多次 皮下免疫接种进行。该过程被分为提高剂量和维持阶段的两个阶段。 在提高剂量阶段，应用增加剂量，典型地延续16个星期，以微剂量开 始。当达到所推荐的维持剂量时，该剂量被用于维持阶段，典型地每 6个星期进行注射。由于过敏性副反应(原则上尽管极为罕见但可危 及生命)的危险，每次注射后患者必须处于医学监护30分钟。另外， 临床诊所应当有所预备以应对急诊处理。毫无疑问，基于不同给药途 径的疫苗会消除或减少目前给予皮下地疫苗所固有的过敏性副反应的 危险，并且也将促进更广泛的使用，甚至可能在家自己接种。
改进用于特异性过敏接种的疫苗的尝试已经进行30多年并且包 括多种途径。一些方法通过修饰IgE反应性而着重于过敏原自身。另 一些则关注这种给药途径。
免疫系统通过口腔和口腔粘膜可以到达，例如，过敏原舌下给药 是已知的给药途径。
按照惯例，采用口腔粘膜途径的过敏疫苗包括定期给药过敏原溶 液，间隔至少一天。相比之下，给予的治疗(累积)维持剂量超出维 持相当的皮下剂量5-500倍。这种剂型和给药途径的明显缺点是与患 者精确和均匀自身给药正确剂量相关的问题(可能必须给予数滴，每 滴的均匀性，应用部位准确性等)。此外，需要冷藏药物并且在制剂 中包括防腐剂在内。
Netien等人(″Galenica 16-Medicaments homeopathiques″ed.2， 1986，77-99页)公开了将液体溶液浸到乳糖、蔗糖或此类混合物的固 体微粒(颗粒)或常规压制片上以用于药物如过敏原的舌下给药。
DD-A.0107208公开了一种制备含过敏原的常规压制片的方法。 给药后该片剂被唾液溶解，随后过敏原通过口腔粘膜吸收。制剂中包 含一种水不溶性赋形剂，即滑石，以及石蜡和脂肪酸，其不理想，因 为它会在患者口中留下不适的残余。此外，在制片过程中产生的摩擦 力可能对过敏原的物理稳定性有损害。
EP 278877公开了一种舌下用的药物组合物，其中将过敏原溶液 喷到固体载体小球上，使固体载体包有过敏原溶液。所得的制剂据说 迅速地但非瞬间地崩解。然而，没有公开如何达到该目的。此外，该 制剂包含乳糖形式的还原糖，所述还原糖易与过敏原反应。
为了确保尽可能多的某种过敏原的给药剂量呈现于口腔粘膜，并 且崩解产物与粘膜的接触时间最大，非常重要的是剂型在与口腔唾液 接触后即使崩解。本领域中已知快速分散的固体剂型，其在口腔中迅 速地释放出活性成分。
美国专利No 4,371,516公开了在水中迅速崩解的含活性成分的药 物剂型。该药物剂型包括在10秒内崩解的开放式基质网状结构的载体 材料。
在WO 00/61117中公开的基于冷干鱼明胶的载体被设计为在口腔 中给药时与唾液接触后瞬间释放活性成分。
在WO 00/44351中公开的冷干的改性淀粉载体被设计为在口腔中 给药时与唾液接触后瞬间释放活性成分。
WO 99/21579公开了一种含疫苗和口腔用佐剂的快速分散剂型。
WO 02/13858公开了含口腔用快速溶解“饼”形式的疫苗的快速 溶解药物组合物。WO 02/13858的发明目的似乎是提供在胃肠道中保 持完整的病毒或细菌疫苗。通过在饼中混入诸如碳酸钙的抗酸剂保护 抗原对抗胃的酸性内容物而实现该目的。
WO 00/51568公开了一种快速崩解压制低脆性片剂，它被设计为 与唾液接触在口腔中不超过30秒溶解，形成易于吞咽的悬浮物。
在美国专利No 4,371,516中声称所述制剂对口腔疫苗有用。在 WO 00/61117，WO 00/44351，WO 99/21579和WO 02/13858中，也声 称所述发明针对非感染免疫调节状况例如全身性过敏状况如花粉热。 然而，在所有这些申请中均没有公开怎样制备快速分散的过敏原疫苗 固体剂型的技术信息或实施例。例如，在所有公开的制剂中均没有指 出某种过敏原适当的剂量。给予患者正确的过敏原剂量非常重要，因 为过量可能诱发患者过敏性休克。此外，没有给出有关这类制剂的稳 定性或脆性的适当措施的识别和指示。
发明概述
本发明涉及含至少一种过敏原和基质且适于口腔粘膜施用过敏原 的快速分散非压制固体剂型形式的药物产品，其特征在于含过敏原的 剂型是稳定、足够坚固的，而且患者使用时不会释放危险量的过敏原 残余物。
此外，适于口腔粘膜给药的快速分散非压制固体剂型包含基质形 成剂和过敏原，其中过敏原是稳定的，而且该剂型相对于过敏原释放 而言具有低脆性，该剂型溶解迅速而且不需要佐剂。
尤其是本发明涉及适于过敏原给药的药物产品，它包含
适于口腔粘膜给药的快速分散非压制固体剂型，包括：
(a)由至少一种基质形成剂形成的基质，和
(b)使个体对所述过敏原脱敏的有效剂量的过敏原，
其中
(c)在25℃和60％的相对湿度下保存3个月后，所述剂型中过敏 原含量的损失低于最初过敏原含量的50％，和
(d)在经受脆性测试时，所述固体剂型的过敏原损失低于大约0.5 μg过敏原提取物或低于约0.05μg主要过敏原。
在本发明的一个优选实施方案中，固体剂型包含鱼明胶和甘露醇 作为基质形成剂。
在本发明另一个优选的实施方案中，固体剂型包含淀粉和甘露醇 作为基质形成剂。
本发明还提供制备这些固体剂型的方法以及通过施用这些固体剂 型治疗过敏症的方法。
发明详述
本发明基于多项惊人的发现，它们均不能预先推测而合理预期会 成功。首先，所基于的发现是有可能使用快速分散非压制剂型用于过 敏原给药，而且有可能通过使用这样的制剂获得有效的过敏症治疗。 尤其是，已经表明的确有可能经由口腔粘膜途径使用快速分散非压制 固体剂型递送足量过敏原至患者免疫系统，而不引起不希望水平的副 作用。此外，本发明提供了获得治疗作用而无不可接受的副作用的相 关剂量水平。
其次，本发明所基于的发现是不使用佐剂通过使用快速分散非压 制剂型可获得有效治疗。
第三，本发明所基于的发现是可以把过敏原配制为快速分散非压 制剂型，同时满足过敏原对稳定性和低脆性所需的特殊要求。尤其是， 已经表明有可能平衡对立的需求，即一方面剂型应当快速分散，而另 一方面既要稳定又要有低脆性，以获得足够限度的快速分散、稳定并 具有低脆性的剂型。
过敏原蛋白质易于降解，其受到它们所处的环境中多种因素的影 响。寻求恰当的过敏症治疗尤其是过敏免疫是过敏原以治疗相关剂量 被完整递送到免疫系统。因此，过敏原必须在制备、贮藏和使用过程 中保持稳定。本研究已经表明事实上可将过敏原蛋白质配制成快速分 散非压制剂型，就过敏原剂量和过敏原活性而言其是稳定的。此外， 还很惊奇地发现这些制剂在室温下也确实是稳定的。该发现对于最终 产品的处理过程具有特殊意义的重要性。在生产工厂、运输或药房储 藏过程中的冷冻储藏经常与高成本有关，因为冷藏设备必须严密监控 而且投资可靠的冷藏设备非常昂贵。此外，就患者的依从性而言，也 优选剂型可以贮藏在室温下。
因此，本研究已经表明事实上可能将过敏原蛋白质制成无需佐剂 就治疗有效的快速分散非压制剂型。此外这种含过敏原的固体剂型在 有利条件下下稳定。
当过敏原蛋白质被制成快速分散非压制剂型，还有利的是所得的 剂型在直接接触时不会大量释放过敏原到周围的环境或操作剂型的使 用者。在先的非压制快速分散固体剂型的特征在于由于非压制基质的 固有性质(脆，易碎，几乎象薄脆饼)，与压制片相比，其机械强度 低。在例如包装、贮藏、运输和患者使用剂型的过程中，含过敏原的 残余微粒可以释放到环境和患者。当活性成分是过敏原时这是特别有 害的，因为过敏原可以在易感者中引起过敏反应或诱发过敏反应，这 种致敏或过敏性应答是剂量依赖性的。已提出了例如尘埃过敏原形式 的环境污染的最高允许水平(视所讨论的过敏原而定)应低至2微克 的主要过敏原/克屋尘(Allergy.Principles and practice(1993，4. ed.)，Mosby-Year book，Vol.I 520页)。
从含基质形成剂，活性成分和其它可选择物质的固化系统中除去 液体从而制备非压制快速分散的固体剂型，优选在原位制备。原位制 备过程通常包括在诸如泡罩式包装的最终容器内从活性成分和基质形 成赋形剂的固化系统中除去溶剂。商业上所采用的原位技术不能对剂 型进行常规包衣。在大多数情形中剂型包衣的应用会影响固体剂型的 分散，从而危害剂型的即时释放特性。
因此，尽管这些要求的性质对立，本研究已经表明事实上可能将 有效剂量的过敏原蛋白质制成快速分散非压制剂型，同时获得低脆性 并保持快速分散特性。
上述所有发现都获得实验室研究或适用的采用实验动物的临床前 试验或临床试验的支持。
术语“快速分散剂型”指在口腔接受后少于约90秒内崩解的剂型， 优选少于约60秒，优选少于约30秒，更优选少于约20秒，甚至更优 选在口腔内少于约10秒，甚至更优选少于约5秒，以及最优选少于约 2秒。本发明的固体剂型可以是片剂、胶囊，糖锭或小胶囊的形式。
术语“非压制”指固体剂型通过从含基质形成剂，活性成分和其 它适宜成分的固化系统中除去液体，得到含过敏原的固体基质而制备。
术语“固体剂型”指非液体的单位剂型或口腔给药时的粉剂，因 此“固体剂型”指例如含单位剂量活性成分的片剂。术语片剂，固体 剂型和疫苗形式在此可互换使用。
术语“基质形成剂”指任何药学上可接受的在固体剂型中将充当 活性成分载体的水溶性或水分散性赋形剂。
术语“赋形剂”指除活性成分以外可以添加到制剂中的任何成分。
术语“在所述剂型中过敏原含量的损失”指在例如贮藏，运输和 使用过程中剂型中过敏原的例如降解或失活。可以以生物活性/效价的 损失或过敏原实际含量的损失来测定损失。优选地，将过敏原含量的 损失测定为至少一种主要过敏原的损失。例如可以采用Obispo等人所 述的ELISA法(Allergy，1997，52，806-813页，使用过敏原特异性试 剂)测定损失。
术语“过敏原含量由所述剂型的损失”指在例如贮藏，运输和使 用过程中剂型中过敏原的例如释放。可以以生物活性/效价的损失或过 敏原实际含量的损失来测定损失。优选地，将过敏原含量的损失测定 为至少一种主要过敏原的损失。例如可以采用Obispo等人所述的 ELISA法(Allergy，1997，52，806-813页，使用过敏原特异性试剂) 测定损失。
术语“稳定”指在最终容器中在25℃和60％相对湿度下贮藏3 个月后测定为生物活性/效价的损失或至少一种主要过敏原的含量损 失的过敏原含量损失小于最初含量的50％的剂型。例如可采用上述的 ELISA法测定损失。
术语“低脆性”指在受到外力时从剂型损失的含过敏原材料的量。 如果含过敏原材料损失包含少于0.5μg过敏原提取物或0.05μg主要 过敏原/固体剂型，则该固体剂型具有足够的脆性和坚固性以进行运 输，贮藏和操作。对于本发明的目的，可以采用本发明的方法测定脆 性。
根据下列等式计算“抗张强度σ”
σ＝3Wa×9.8Nmm-2/2d2b
其中w＝破碎最大负荷(kgF)
a＝支持物间的距离
d＝快速分散固体剂型的厚度(mm)
b＝快速分散固体剂型的直径(mm)
“破碎最大负荷”指使用适当的仪器(例如CT5，Engineering Systems，1Loach Court，Radford Bridge Road，Nottingham NG81NA， UK)在三点弯曲测试中破碎一个单位需要的最大力。
术语“口腔粘膜给药”指为了获得活性成分的局部或全身效应， 将剂型置于舌下或口腔中的任何其它位置以使活性成分得以与患者口 腔或咽部粘膜接触的一种给药途径。口腔粘膜给药途径的一个例子是 舌下给药。
术语“舌下给药”指为了得到活性成分的局部或全身效应，将剂 型置于舌下的一种给药途径。
术语“过敏原”指任何天然存在的蛋白质或蛋白质混合物，其已 经被报道在反复暴露于个体时可诱发过敏性反应，即IgE介导的反应。 天然存在的过敏原的例子包括花粉过敏原(树，杂草，药草和草花粉 过敏原)，螨过敏原(来自例如屋尘螨和贮藏螨(storage mite))， 昆虫过敏原(吸入性，唾液和毒液来源的过敏原)，动物过敏原，来 自例如狗，猫，马，大鼠、小鼠等的例如唾液，毛发和皮屑，真菌过 敏原和食物过敏原。可以以过敏原提取物，纯化过敏原，修饰过敏原 或重组过敏原或重组突变过敏原，任何超过30个氨基酸的过敏原片段 或其任意组合的形式使用过敏原。
在这里所用的表述“过敏原提取物”指通过提取生物学过敏原来 源材料而获得的提取物，一般如下所述：“Allergenic extracts”， H.Ipsen等人，第20章，“Allergy，principle and practise”(Ed. S.Manning)1993，Mosby-Year Book，St.Louis。这样的提取物可 以通过对水溶性材料进行水提取，后接纯化步骤如过滤，以获得溶液 即提取物。然后提取物可以进行进一步纯化和/或加工处理如冷冻干 燥，除去基本上所有的水。通常地，过敏原提取物包括蛋白质和其它 分子的混合物。过敏原蛋白质经常被分类为主要过敏原，中间过敏原， 次要过敏原或无分类。过敏原提取物通常既包括主要过敏原也包括次 要过敏原。主要过敏原通常占一般过敏原提取物的约5-15％，更常为 约10％。过敏原的分类是基于对特定过敏原的临床重要性的评估，如 下面所给出。在提取物中发现的重要的主要过敏原的例子包括草组1 和5和6过敏原(例如Phlp1，5和6)，尘埃螨组1和2过敏原(例如 Derp1，Derp2)，树花粉过敏原1(Betv1)，雪松花粉过敏原1 和2(例如Cryj1，Cryj2)，豚草属花粉1和2(Amba1，Amba2)， 猫过敏原(即Feld1)。一般过敏的人将对一种或多种主要过敏原敏感 并反应，进而还可对次要过敏原敏感并反应。
在此所述的过敏原提取物的量指这种过敏原提取物的干物质含 量。
优选地，干物质的水含量不超过10重量％，更优选5重量％。
在此处所用的表述“生物学过敏原来源材料”指含一种或多种过 敏原的任何生物材料。这种材料的实例为螨PMB(纯螨体)或WMC(全 螨培养物)，来自例如草，药草，杂草和树的脱脂或非脱脂花粉，动 物毛发和皮屑，毛皮，真菌菌丝体和孢子，昆虫体、毒液或唾液和食 物。
生物学过敏原来源材料可以包含污染材料，例如对于过敏原花粉 来源材料而言，污染材料为外来花粉以及植物和花的碎屑。
污染程度应被减到最小。优选地，污染物的含量不应超过生物来 源材料的10％(W/W)。
用标准蛋白质测定例如BCA或Lowry法测定，过敏原提取物通常 含过敏原提取物干物质含量的至少10％蛋白质，其余部分由其它“非 蛋白质材料”组成，其可以是诸如源自生物学过敏原来源的脂质，糖 类或结合水的成分。
在800微巴以下的压力冷冻干燥液体过敏原提取物持续高达100 小时的时间以除去水分，可获得冻干材料，过敏原提取物可以以这种 形式配制和贮藏。
在过敏原提取物的技术领域中没有国际公认的标准化方法。存在 多种不同的提取物强度单位，即生物效价。采用的方法和使用的单位 通常测定过敏原含量和生物活性。关于这点的例子是SQ-单位(标准 化质量单位)，BAU(生物学过敏原单位)，BU(生物学单位)，UM (质量单位)，IU(国际单位)和IR(反应指数)。因此，如果使用 除在此所公开以外的来源的提取物，需要将它们针对在此公开的提取 物进行标准化以确定它们SQ单位或任何上述单位的效价。该主题见 “Allergenic extracts”，H.Ipsen等人，第20章，“Allergy， principle and practise”(Ed.S.Manning)1993，Mosby-Year Book， St.Louis and Lowenstein H.(1980)ArbPaul Ehrlich Inst 75：122。
给定提取物的生物效价，即体内过敏原活性，取决于许多因素， 最重要的是提取物中主要过敏原的含量，其随着生物学来源材料的组 成而变化。
被用于得到期望的生物效价的过敏原提取物克数量随所讨论的提 取物类型而变化，对于给定类型的提取物，过敏原提取物的量随提取 物实际的生物效价在每批之间有所不同。
对于给定批次的提取物，用来得到期望的生物效价的过敏原提取 物的克数量可以采用下列步骤测定：
a)采用一种或多种体内免疫学试验测定不同量的参照提取物的生 物效价以建立生物效价与参照提取物量之间的对应关系。所述体内免 疫学试验的实例是皮肤针刺试验(SPT)，结膜诱发试验(CPT)，过 敏原攻击支气管(BCA)和监测一种或多种过敏症状的各种临床试验， 参见例如Haugaard等人，J Allergy Clin Immunol，Vol.91，No. 3，pp 709-722，March 1993。
b)在生物效价和参照提取物之间建立的对应关系的基础上，选择 用于本发明剂型的一个或多个相关剂量的生物效价，适当考虑以下因 素的平衡：i)治疗或缓解过敏症状的作用，ii)体内免疫学试验所记录 的副作用，和iii)i)和ii)在个体间的变异性。实现平衡以得到最大 适当治疗效果而无不可接受水平的副作用。本领域的技术人员熟知平 衡这些因素的方法。
所发现的一个或多个相关剂量的生物效价可以表示为任何可用的 生物效价单位，例如SQ单位，BAU，IR单位，IU，参见上文。
c)由参照提取物制备一种或多种生物效价参照标准提取物，如果 使用的话，基于在分配到一个或多个相关剂量的生物效价单位值，计 算参照标准提取物的生物效价单位值，例如下面所述可从FDA获得对 于BAU的这种标准。
d)对于每种提取物类型的参照标准提取物，选择多个评估提取物 生物效价的参数。这种评估参数例如总过敏原活性、限定的主要过敏 原的量和提取物的总体分子组成。可以采用体外竞争性免疫测定法检 测总过敏原活性，例如ELISA和MagicLite发光免疫测定法(LIA)， 使用针对用标准方法所获得的提取物的标准化抗体混合物，例如在小 鼠和兔中产生的抗体，或过敏患者血清混合物。主要过敏原的含量可 以例如采用火箭免疫电泳法(RIE)定量并与参照标准比较。可以采用 例如交叉免疫电泳法(CIE)和十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS-PAGE)检查总体分子组成。
e)对于给定批次的未知生物效价的提取物(测试提取物)，可 以如下确定用于获得期望的生物效价水平的提取物量(用在本发明的 固体剂型中的有效剂量)：对于每种所选择的评价参数，采用如上所 述的相关检测方法，将测试提取物与参照标准提取物相比较，并且基 于检测结果计算具有期望的生物效价的提取物的量。
SQ-单位：根据ALK-Abello A/S的“SQ生物效价”标准化方法 确定SQ-单位，其中100,000SQ单位等于标准皮下维持剂量。视过 敏原的来源和所用的制备方法而定，通常1mg的提取物含100,000- 1,000,000SQ-单位。利用免疫测定可以检测精确的过敏原量，即主 要过敏原总含量和总过敏原活性。
BAU(生物学过敏原单位)是按照FDA对过敏原产品的要求确定的 生物效价单位，如下所述：“Quantitative determination of relative potency of allergenic extracts”(“Methods of teallergen products testing Laboratory”“ELISA competition assay”.第15 页，#49N-0012，FDA，1993年10月)。按照上述方法，含100,000 SQ-单位的草提取物剂量等于2600-4700BAU的含量。同样，按照上述 方法可以评估其它提取物。
术语“用于脱敏的有效剂量过敏原”将解释为在以单一剂量或增 加剂量服用一次或反复服用时导致例如适应性免疫应答并因此使过敏 症患者脱敏的剂量。优选地，该术语将表示按照治疗方案(持续一段 时间，从几次应用到数月内至少每天一次应用)重复给药所述固体剂 型之后诱导适应性免疫应答所必需的各剂型中过敏原的量。优选脱敏 包括剂量给药后过敏症状缓解。临床过敏症状包括鼻炎，结膜炎，哮 喘，荨麻疹，湿疹，其中包括皮肤、眼睛、鼻，上下呼吸道的反应， 常见症状例如眼和鼻的发红和痒，鼻痒和流涕，咳嗽，哮鸣，呼吸短 促，瘙痒和组织肿胀。
在这里使用“含量均一性”指剂量单位相对于指定剂量的变化。
在这里所用的“水含量”指采用Karl Fischer滴定原理定量测 定的固体剂型单位中残余水的含量。该方法基于以下原理，即给定量 的I2导致等量水的转化(欧洲药典(EP)第3版，2.5.12)。
在这里所用的“水分活性aw”是指样品中的有效水。水分活性测 定采用本领域技术人员公知的方法进行，例如冷镜露点技术，用改变 电阻或电容的感应器或采用氯化锂电极测定相对湿度：
可根据下列等式计算aw：
aw＝p/ps＝ERH(％)/100，
其中
p＝产品表面水蒸气的分压
ps＝饱和压力，或者在产品温度下水蒸气在纯水上的分压
ERH＝平衡相对湿度
术语“大约”或“近似地”表示在由本领域普通技术人员确定的 特定值的可接受范围内，其部分取决于该值是如何测定或确定的，例 如检测系统的限制，例如，“大约”可以表示给定值的至多20％的范 围，优选至多10％，更优选至多5％，并且仍更优选至多1％。
现已惊奇地发现，本发明的固体剂型提供一种口腔粘膜过敏原药 物产品，其提供有效过敏原剂量，以剂量-反应方式给出过敏原特异 性免疫应答，并且具有可接受的副作用。
更进一步地发现制备含过敏原的低脆性的非压制快速分散固体剂 型的实际可能性。该剂型足够坚固，在患者使用时不会释放危险量的 残余物。
此外，惊奇地发现这些制剂在室温下是稳定的。
过敏原在含水环境中会不同程度地特别易于降解，例如在过敏原 水溶液或水含量高和/或水分活性高的产品中。
欧洲药典关于过敏原产品的专题论述和“Note for guidance on allergen products”，CPMP(London 13，March 1996)规定，对于冷 冻干燥的产品(即装在小瓶中的过敏原提取物)，水分含量应当不超 过5％，而且这些产品应当冷冻贮存(-20℃)。冷藏(2-8℃)也是对 保质期有限的液基舌下制剂的要求。已经惊奇地发现，包括不稳定过 敏原在内的过敏原在室温条件下是稳定的。甚至是水含量高于规定的 5％的最大水平的本发明剂型在室温下也是稳定的。不受理论约束，这 可以由以下事实解释：快速分散固体剂型的赋形剂结合剂型中的残余 水并降低过敏原固体剂型的水分活性。因此，通过降低制剂的水分活 性，可能得到过敏原无降解的稳定制剂，即使水含量高于对小瓶装的 过敏原提取物规定的最大水平5％也是可能的。
水分活性是对产品保质期有影响的一个重要因素。众所周知，产 品的水分活性影响细菌的生长以及药品的稳定性、效价和一致性。由 于蛋白质相对脆弱的性质，它的稳定性也受水分活性显著影响。大多 数蛋白质必须维持构象以保持活性。维持低的水分活性水平有助于防 止或诱发构象变化，而这对于确保过敏原形式的蛋白质稳定是重要的。 无论是否由酶引起，蛋白质水解降解也受水分活性影响。
进一步地认为，水含量将影响固体剂型的机械强度。通常，高值 将增加固体剂型变得更容易潮解的危险，而较低值将影响固体剂型的 坚固性，例如，固体剂型变得更加脆而易碎。
采用本领域技术人员已知的方法进行水分活性测定，例如冷镜露 点技术，用改变电阻或电容的感应器测定相对湿度或采用氯化锂电极。
固体剂型的水分活性优选不超过0.70，并且优选在0.1-0.7之间， 更优选0.2-0.6，更优选的是在0.3-0.5之间以及最优选的是在 0.4-0.5之间。
根据如实施例1所述的方法测定的固体剂型的水含量优选不超过 25％，优选0.1-20％，更优选的是在0.5-15％之间，更优选的是在2-8％ 之间，更优选的是在4-7％之间，最优选的是在4.5-6％之间的水。
根据本发明的一个实施方案提供了快速分散固体剂型的过敏原药 物产品，它在口腔中与唾液接触迅速溶解，因此使过敏原紧密接触粘 膜的免疫相关组织并使过敏原解决这些问题。天然存在的过敏原的例 子包括花粉过敏原(树，药草，杂草和草花粉过敏原)，昆虫过敏原 (吸入性，唾液和毒液过敏原，例如螨过敏原，蟑螂和蠓过敏原，膜 翅目昆虫毒液过敏原)，动物毛发和皮屑过敏原(来自如狗，猫，马， 大鼠，小鼠等)以及食物过敏原。来自树，草和药草的重要花粉过敏 原是诸如源自山毛榉目，木樨科，松目和悬铃木科的分类目，包括例 如白桦(桦属)，桤木(桤木属)，鹅耳枥(鹅耳枥属)和橄榄(橄 榄属)，雪松(日本柳杉和桧属)，悬铃树(悬铃属)，禾本科的目， 包括例如以下属的草：黑麦草属，梯牧草属，早熟禾属，狗牙根属， 鸭茅属，绒毛草属，墙草属，黑麦属和高粱属，Astrales和荨麻目的 目包括例如以下属的药草：豚草属，蒿属和墙草属。其他重要的吸入 过敏原是那些来自尘螨属和埋内欧尘螨的屋尘螨，储藏螨例如害嗜鳞 螨，食甜螨属和食酪螨属，那些来自蟑螂，蠓和蚤例如蠊，大蠊属， 摇蚊和猫栉首蚤猫亚种，和那些来自哺乳动物例如猫(猫属)，狗(犬 属)，牛(牛属)和马(马属)的过敏原，毒液过敏原包括例如源自 蜇或叮咬的昆虫例如按膜翅目昆虫分类目的那些，包括蜜蜂(蜜蜂总 科)，黄蜂(胡蜂总科)和蚂蚁(蚂蚁总科)。来自真菌的重要吸入 过敏原是例如那些源自链格孢属和支孢霉属的过敏原。
在本发明更优选的实施方案中，过敏原是Betv1，Alng1，Cor a1and Carb1，Quea1，Cryj1，Cryj2，Cupa1，Cups1， Juna1，Juna2，juna3，Olee1，Ligv1，PlaI1，Plaa2， Amba1，Amba2，Ambt5，Artv1，Artv 2Parj1，Parj2， Parj3，Salk1，Avee1，Cynd1，Cynd7，Dacg1，Fesp1， HolI1，Lolp1和5，Pha a1，Pasn1，Phlp1，Phlp5，Phl p6，Poap1，Poap5，Secc1，Secc5，Sorh1，Derf1，Der f2，Derp1，Derp2，，Derp7，Derm1，Eurm2，Glyd1，Lep d2，Blot1，Tyrp2，Blag1，Blag2，Pera1，Feld1，Can f1，Canf2，Bosd2，Equc1，Equc2，Equc3，Musm1，Rat n1，Apism 1，Apim2，Vesv1，Vesv2，Vesv5，Dolm1，Dol m2，Dolm5，Pola1，Pola2，Pola 5，Soli1，Soli2，Sol i3和Soli4，Alta1，Clah1，Aspf1，Bosd4，Mald1，Gly m1，Glym2，Glym3，Arah1，Arah2，Arah3，Arah4，Ara h5或者这些中任何的源自分子育种的改组(shufflant)杂种(Maxygen 有限公司)
在本发明最优选的实施方案中，过敏原是草花粉过敏原或尘螨过 敏原或豚草属过敏原或雪松花粉或猫过敏原或白桦过敏原。
在本发明的另一个实施方案中，快速分散固体剂型含至少两种不 同类型的过敏原，其源于相同的过敏原来源，或源于不同的过敏原来 源。例如快速分散固体剂型包含草组1，草组2/3，草组5和草组6 过敏原或者螨组1和组2过敏原，分别来自不同的螨和草种类，杂草 过敏原如短小和巨大豚草属过敏原，不同的真菌过敏原如链格孢属和 支孢霉属，树过敏原如白桦，榛，角树，栎属和桤木属过敏原，食物 过敏原如花生，大豆和牛奶过敏原。
掺入快速分散固体剂型的过敏原可以是提取物，纯化过敏原，修 饰过敏原，重组过敏原或重组过敏原突变体的形式。过敏原提取物可 以天然含有相同过敏原的一个或多个同种型，而重组过敏原典型地仅 代表一个过敏原同种型。在一个优选的实施方案中过敏原是提取物的 形式。另一个优选的实施方案中过敏原是重组过敏原。又一个优选的 实施方案中过敏原是天然存在的低IgE结合突变体或重组的低IgE结 合突变体。
过敏原可以以等摩尔量存在或者存在的过敏原的比例可以变化， 优选高至1∶20
本发明又一个优选的实施方案中，低IgE结合过敏原是根据WO 99/47680或WO 02/40676或PCT/DK03/00322(″过敏原突变体″)的过 敏原。
几种实验室测定可用于表征过敏原。使用最广泛的技术是十二烷 基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)，等电聚焦(IEF)，交叉免疫 电泳法(CIE)和火箭免疫电泳法(RIE)。个体过敏原的定量可以采 用多种定量免疫电泳技术(QIE)，放射免疫扩散(RIE)或者采用酶 联免疫吸附测定(ELISA)进行。总过敏原活性的测定最常用放射过敏 原吸附测定(RAST)，Magic Lite测定(LIA)或相关技术进行。也 可以使用基于ELISA的技术。
有关通常应用的测定生物效价的公认测定的指南可见例如 Notefor Guidance on Allergen Product；The European Agency for the Evaluation of Medicinal Product，CPMP_BWP_243_96，London， 1996。
将过敏原分类为主要过敏原可以采用几项测试。如果至少25％的 患者表现强IgE结合(评分3)和50％的患者表现至少中度结合(评分 2)，则该过敏原通常分类为主要过敏原；结合的测定通过CRIE(交叉 放射免疫电泳法)(CRIE强结合，即在1天后在X-光片上可见IgE 结合；CRIE中度结合，即在3天后结合；CRIE微弱结合，即在10天 后结合)。至少10％的患者表现为IgE强结合，则该过敏原分类为中 间过敏原；少于10％患者的表现出明显特异性的结合，就将其分类为 次要过敏原。也可以使用其它的方法测定IgE结合，例如IgE印迹法。
在经典的增加剂量脱敏法中，快速分散固体剂型形式的过敏原剂 量增加到某个最大值。单位剂量剂型的优选效价从150-1,000,000 SQ-U/剂型，更优选的效价是500-500,000SQ-U/剂型，更优选的效 价是500-375,000SQ-U/剂型，更优选的效价是2500-375,000SQ-U/ 剂型，更优选的效价是2500-250,000SQ-U/剂型，更优选25,000-250, 000SQ-U/剂型，更优选25,000-125,000SQ-U/剂型，更优选25, 000-100,000SQ-U/剂型和最优选25,000-75,000SQ-U/剂型。
在本发明的另一个实施方案中固体剂型是重复的单一剂量，优选 在2500-375,000SQ-U/剂型范围之内，更优选2500-250,000SQ-U/ 剂型，更优选25,000-250,000SQ-U/剂型，更优选25,000-125,000 SQ-U/剂型，甚至更优选25,000-100,000SQ-U/剂型，和最优选 25,000-75,000SQ-U/剂型。
在一个特别优选的实施方案中固体剂型包含草过敏原提取物，其 中效价是150-1,000,000SQ-U/剂型，更优选效价是500-500,000 SQ-U/剂型，更优选的效价是500-375,000SQ-U/剂型，更优选的效 价是2500-375,000SQ-U/剂型，更优选的效价是2500-250,000SQ- U/剂型，优选的效价是25,000-250,000SQ-U/剂型，更优选 25,000-125,000SQ-U/剂型，更优选25,000-100,000SQ-U/剂型和 最优选25,000-75,000SQ-U/剂型。
在又一个实施方案中本发明固体剂型的效价是约5-50,000BAU/ 剂型，更优选的效价是15-25,000BAU/剂型，更优选的效价是约 15-17,600BAU/剂型，更优选的效价是约65-17,600BAU/剂型，更 优选的效价是约65-15,000BAU/剂型，更优选的效价是约 650-15,000BAU/剂型，更优选650-6,000BAU/剂型，更优选 650-4,700BAU/剂型，最优选650-3,500BAU/剂型．
在本发明的另一个实施方案中固体剂型是重复的单一剂量，优选 在约65-17,600BAU/剂型的范围之内，更优选约65-15,000BAU/剂 型，更优选约650-15,000BAU/剂型，更优选650-6,000BAU/剂型， 甚至更优选650-4,700BAU/剂型，最优选650-3,500BAU/剂型。
在一个特别优选的实施方案中固体剂型包含草过敏原提取物，其 中效价是约5-50,000BAU/剂型，更优选的效价是15-25,000BAU/ 剂型，更优选的效价约15-17,600BAU/剂型，更优选的效价约 65-17,600BAU/剂型，更优选的效价是约65-15,000BAU/剂型，更 优选的效价约650-15,000BAU/剂型，更优选650-6,000BAU/剂型， 更优选650-4,700BAU/剂型，最优选650-3,500BAU/剂型。
1mg过敏原提取物通常包含100,000-1,000,000SQ-单位。这 意味着1,000,000SQ被包含在1mg提取物到10mg过敏原提取物中， 100,000SQ被包含在0.1mg提取物到1mg过敏原提取物中。以相似 的方式，任何SQ剂量都可以转化为过敏原提取物剂量范围。在这个基 础上，以SQ给出的上述剂量范围可以被重新计算为mg或μg过敏原 提取物的剂量范围，其中对于范围的SQ低限，采用相应过敏原提取物 范围的低限，而其中对于范围的SQ上限，采用相应过敏原提取物范围 的上限。
因此，在又一个实施方案中本发明的固体剂型具有约0.15μ g-10mg/剂型的过敏原提取物含量，更优选约0.5μg-5mg/剂型的过敏 原提取物含量，更优选约0.5μg-3.75mg/剂型的过敏原提取物含量， 更优选约2.5μg-3.75mg/剂型的过敏原提取物含量，更优选约 25μg-2.5mg/剂型的过敏原提取物含量，更优选约25μg-2.5mg/剂型 的过敏原提取物含量，更优选约25μg-1.25mg/剂型，甚至更优选约 25μg-1mg/剂型，最优选约25μg-0.75mg/剂型。
在本发明的另一个实施方案中固体剂型是重复的单一剂量，优选 在约2.5μg-3.75mg/剂型的范围内，更优选2.5μg-2.5mg/剂型，更 优选约25μg-2.5mg/剂型，更优选约1.5μg-1.25mg/剂型，甚至更 优选约25μg-1mg/剂型，最优选约25μg-0.75mg/剂型．
在又一个实施方案中，本发明的固体剂型具有的主要过敏原含量 约0.015μg-1mg/剂型，更优选约0.05μg-500μg/剂型，更优选 约0.05μg-375μg/剂型，更优选约0.25μg-375μg/剂型，更优 选约0.25μg-250μg/剂型，更优选约2.5g-250μg/剂型，更优 选约2.5μg-125μg/剂型，甚至更优选约2.5μg-100μg/剂型， 最优选约2.5μg-75μg/剂型。
在本发明的另一个实施方案中固体剂型是重复的单一剂量，优选 在约0.25μg-375μg/剂型的范围内，更优选约0.25μg-250μg/剂 型，更优选约2.5g-250μg/剂型，更优选约2.5μg-125μg/剂 型，甚至更优选约2.5g-100μg/剂型，最优选约2.5g-75 μg/剂型。
取决于所讨论过敏原来源，几个主要过敏原可以构成主要过敏原 含量。通常主要过敏原的数目是在1-10，大多数为1-5。
主要过敏原可以被包含在过敏原提取物中或被重组制备。重组主 要过敏原的用量可以与包含这种主要过敏原的过敏原提取物中的相同 或以更高剂量。更高剂量被认为更有效，但也被认为伴有潜在更频繁 或更严重的副作用的危险。
在又一个优选的实施方案中主要过敏原包括草组1过敏原例如 phlp1，lolp1，sorh1，dacg1，cynd1，hol11，phaa1， 草组2/3过敏原例如.phlp2/3，lolp 2/3，草组5过敏原例如phl p5，lolp5，dacg5，poap5，草组6过敏原例如phlp6，poa p6，树花粉组1过敏原例如betv1，alng1，cora1，carb1， 螨组1过敏原例如derp1，derf1，eurm1，螨组2过敏原例如 derp2，derf2，eur m2，猫过敏原例如feld1，雪松组1和组 2过敏原例如cryj1，cryj2，短小和巨大豚草属花粉过敏原例如 amba1，amba2，amb1，ambt2。
发现剂量反应效应，参见口腔粘膜给药的固体过敏原剂型的实施 例6。因为过敏个体是不均一的一类，当他们接触到即使同一过敏原 时也表现出不同的症状以及其症状严重程度的不同，因此有效剂量可 能变化。一些患者可以耐受更大剂量而没有出现不能接受的副作用， 而其他的人高度敏感。在一些情况中可以给予逐步升高的剂量以达到 高剂量水平，因为通常相信更大的剂量被认为是更有效的剂量。据信 对于大多数一般过敏人群而言，本发明的过敏原有效剂量将优选在65 BAU/固体剂型-17,600BAU/固体剂型之间，但低至4和高至47,000 BAU的剂量可能适用于其它过敏症患者。关于这个同样地，过敏原提 取物0.5μg-3.75mg/剂型的剂量或者主要过敏原含量0.05μg-375μ g/剂型的剂量可以适合普通的过敏症个体。
对于主要过敏原的低过敏原性变体，即引起速发或迟发过敏反应 的能力降低的过敏原，本发明的剂型优选每剂型含10-100倍更多的主 要过敏原。这种低过敏原性变体可以是重组或天然来源的。
本发明的固体剂型的过敏原含量可以采用常规的免疫测定法测 定，例如CIE(交叉免疫电泳法)，RIE(放射免疫电泳法)和SDS-PAGE (十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳)和针对提取物成分如主要过 敏原的免疫测定法例如ELISA和Magic Like特异性IgE测定(LIA)。
为了确保最终产品足够的保质期，优选在制备以后在物理和化学 特性例如过敏原的效价和含量，机械坚固性和感官特性方面不显著改 变的剂型。
为了本发明的目的，藉由主要过敏原含量评价活性成分即过敏原 的稳定性。进一步地还优选通过过敏原效价检测如总过敏原活性来评 估稳定性。
固体剂型的“最初过敏原活性”或“至少一种主要过敏原的最初 含量”表示在制备工艺结束后最终剂型中“过敏原活性”或“至少一 种主要过敏原的含量”的值。
固体剂型的“理论过敏原活性”或“至少一种主要过敏原的理论 含量”表示在被制成固体剂型之前，一剂加入过敏原(例如以提取物的 形式)的“过敏原活性”或“至少一种主要过敏原的含量”的值。
至少一种主要过敏原的过敏原含量损失优选少于总最初含量的 50％，更优选少于总最初含量的30％，更优选少于总最初含量的20％， 更优选少于最初含量的15％，更优选少于最初含量的10％，更优选少于 最初含量的5％，更优选少于最初含量的2％。
更进一步地根据实施例1中所述方法总过敏原活性损失应当优选 少于总最初活性的50％，更优选少于总最初活性的30％，更优选少于总 最初活性的20％，更优选少于总最初活性的15％。
通常，根据ICH(例如ICH指南ICQ/Q1AR2(被CPMP采用，2003 年三月，出版号CPMP/ICH/2736/99))和FDA的现行指南进行稳定性测 试。稳定性测试的条件经常称为1-4区条件。1和2区代表EC，日本 和美国的气候条件。通常，本发明的固体剂型在其最终容器中应在“长 期”条件25℃/60RH下优选保持稳定至少3个月，更优选至少6个月， 更优选至少12个月，甚至更优选至少18个月，最优选至少2年，更 优选在中间条件30℃/65RH下，甚至更优选在“加速条件”40℃/75RH 下。
为了确保固体剂型在贮藏过程中和患者使用时足够坚固，剂型需 要对外力具有某种抗性，但同时固体剂型必需在口中快速崩解。
因此，除了活性成分即过敏原的稳定性外，还可通过其它参数评 估固体剂型，例如机械坚固性如脆性，抗张强度和破碎最大负荷。另 外，固体剂型的稳定性可以通过物理特性如分散时间和感官特性如剂 型的视觉外观进行评估。
可以通过例如测定本发明固体剂型的破碎最大负荷或抗张强度来 评估这些参数。由可计算抗张强度的公式中明显看出，所获得的抗张 强度值取决于许多可变化的参数。例如，固体剂型的厚度或直径将引 起数值的变化。因此，破碎最大负荷被认为是评价本发明的固体剂量 单位坚固性的更准确参数。
在一个实施方案中固体剂型的破碎最大负荷不小于0.05Kgf并低 于0.9KgF.优选破碎最大负荷在0.05-0.9KgF之间的剂型，更优选 在0.1-0.8KgF之间，最优选在0.1-0.6KgF之间。
在本发明又一个实施方案中固体剂型的抗张强度小于1.0N/mm2， 更优选低于0.9N/mm2。
为了确保在吞咽前过敏原最大限度地暴露于粘膜的免疫有效组 织，优选地，快速分散剂型与唾液接触后在口中瞬间或快速崩解。在 优选的实施方案中固体剂型在少于约90秒内崩解，优选在少于约60 秒内，优选在少于约30秒内，更优选在少于约20秒内，更优选在少 于约15秒内，甚至更优选在口腔中少于约10秒内，甚至更优选少于 约5秒内，最优选在口腔少于约2秒内。
在本发明的优选实施方案中，本发明的组合物是含固体网状结构 的过敏原和任何水溶性或水分散性基质的快速分散固体剂型。通过从 固体状态的组合物升华溶剂而得到网状结构，所述组合物含过敏原溶 液和基质。更优选地，通过冻干而获得网状结构。
构成本发明的快速分散固体剂型中部分基质的药学上可接受赋形 剂是基质形成剂和其它适宜的赋形剂例如抗酸剂，稀释剂，增强剂， 粘膜粘着剂，增香剂，矫味剂，防腐剂，抗氧化剂，表面活性剂，粘 性增强剂，着色剂，pH调节剂，甜味剂等。这些赋形剂都以配制过敏 原治疗剂领域的技术人员所了解的方式按照常规药学实践来选择。
本发明适用的基质形成剂包括源自动物或植物蛋白质的赋形剂， 例如明胶，糊精和大豆，小麦和亚麻籽蛋白质；树胶如阿拉伯胶，瓜 尔胶，琼脂和黄原胶；多糖；淀粉和改性淀粉，alignates；羧甲基纤 维素；角叉菜胶；右旋糖酐；果胶；合成聚合物例如聚乙烯吡咯烷酮； 和多肽/蛋白质或多糖复合物例如明胶-阿拉伯胶复合物。明胶是水溶 性胶体大分子的非均匀混合物。可以通过对诸如骨，皮肤，腱，韧带 等动物来源的富含胶原材料的水解作用得到平均分子量分布的非均匀 混合物。明胶可以源自哺乳动物例如牛，猪或非哺乳动物例如温水或 冷水鱼。明胶可以是水解或非水解的，交联或非交联的。它们可进一 步是胶凝或非胶凝型，非凝胶型典型地源自于冷水鱼。在另一个特别 的实施方案中采用淀粉。淀粉是糖类聚合物的复杂混合物。
适用于本发明的其它基质形成剂包括糖类如甘露醇，右旋糖，半 乳糖和海藻糖；环状糖例如环糊精；无机盐例如磷酸钠，氯化钠和硅 酸铝；以及具有2-12个碳原子的氨基酸例如甘氨酸，L-丙氨酸，L- 天冬氨酸，L-谷氨酸，L-羟脯氨酸，L-异亮氨酸，L-亮氨酸和L-苯丙 氨酸。
固体剂型优选包含至少约50％W/W的配料溶液的至少一种基质形 成剂。在此文中所用的术语“配料溶液”表示在固化步骤前所制备的 基质形成剂、过敏原和其它任选赋形剂的制剂的非固体体积。
在本发明的一个实施方案中，用于形成固体剂型的配料溶液包含 约5-30％W/W，更优选约5-20％W/W，甚至更优选在约5-12％W/W之间的 至少一种基质形成剂。
对配料溶液干物质含量的需求也将取决于片剂的尺寸。优选本发 明的固体剂型直径在约3到约30mm之间，更优选在约5到约20mm之 间。本发明的固体剂型优选重量在约1到约100mg之间，更优选在约 10到约50mg之间，最优选在约25到约35mg之间。本发明的固体剂 型优选厚度在约0.5到约7.5mm之间，更优选在约1到约5mm之间。
已经发现含鱼明胶和甘露醇作基质形成赋形剂的快速分散固体剂 型在稳定性，视觉外观，低脆性，抗张强度，破碎最大负荷和口感方 面特别有利。在优选的实施方案中快速分散固体剂型包含过敏原以及 鱼明胶和甘露醇形式的基质形成剂的固体网状结构。为了获得固体网 状结构，应当控制鱼明胶与甘露醇的比。在一个优选的实施方案中鱼 明胶与甘露醇的比例是约2∶20到约20∶1，更优选从约2∶10到约 10∶1，最优选约3∶5.5到约6.5∶3。
但又一个实施方案中鱼明胶与甘露醇的比例是4∶3。
在另一个实施方案中鱼明胶与甘露醇的比例是6.5∶5.5。
在又一个实施方案中鱼明胶与甘露醇的比例是6.0∶5.08。
本发明的固体剂型可以由配料溶液制备，首先将其冷冻，然后冷 冻干燥。在优选的实施方案中鱼明胶含量为配料溶液的约2-20％W/W 之间，而甘露醇的含量为配料溶液的约1-20％W/W之间。在另一个优选 的实施方案中鱼明胶的含量为配料溶液的约2-10％W/W之间，而甘露醇 的含量为配料溶液的约1-10％W/W之间。在另一个更优选的实施方案中 鱼明胶的含量为配料溶液的约3-6.5％W/W之间，而甘露醇含量为配料 溶液的约3-5.5％W/W之间。
在又一个实施方案中基质包含占配料溶液约4％W/W的鱼明胶和占 配料溶液约3％W/W的甘露醇。
在另一个实施方案中基质含占配料溶液约6.5％W/W的鱼明胶和占 配料溶液约5.5％W/W的甘露醇。
在又一个实施方案中基质含占配料溶液6.0％W/W的鱼明胶和占配 料溶液5.08％W/W的甘露醇。
还已经发现含淀粉和甘露醇作为基质形成赋形剂的快速分散固体 剂型在稳定性，视觉外观，低脆性，抗张强度，破碎最大负荷和口感 方面特别有利。在优选的实施方案中快速分散固体剂型包含过敏原和 基质形成剂的固体网状结构，所述基质形成剂为淀粉和甘露醇形式， 淀粉优选从例如马铃薯，小麦，玉米，谷物或稻米预糊化。为了获得 固体网状结构，应当控制淀粉与甘露醇的比例。在一个优选的实施方 案中淀粉与甘露醇的比例是约2∶20到约20∶1，更优选从约2∶10 到约10∶1，最优选约3∶5.5到约6.5∶3。
但又一个实施方案中淀粉与甘露醇的比例是1∶1。
由配料溶液制备本发明的固体剂型，首先将其冷冻，随后冷冻干 燥。在优选的实施方案中淀粉的含量为配料溶液的约2-20％W/W之间， 而甘露醇的含量为配料溶液的约1-20％W/W之间。在另一个优选的实施 方案中淀粉的含量为配料溶液的约2-10％W/W之间，而甘露醇的含量为 配料溶液的约1-10％W/W之间。在又一个优选的实施方案中淀粉的含量 为配料溶液的约3-6.5％W/W之间，而甘露醇为配料溶液的约3-5.5％W/W 之间。
在另一个实施方案中基质含有占配料溶液约4.4％W/W的淀粉和占 配料溶液约4.4％W/W的甘露醇。
为避免过敏原的变性，沉淀并确保稳定的产品，优选在含过敏原 和基质的溶液固化之前调节pH。对溶液中不同过敏原的最适宜pH几 乎跨越整个pH范围，如同它们的等电点(pI)那样。过敏原混合物像 提取物同样地具有对溶解性和稳定性而言最适宜的pH，其由类似提取 物中各过敏原浓度之类的因素所决定。因此可以想对本发明制剂个别 单独确定可行的pH范围。通过对不同pH的制剂进行加速稳定性研究 来确定对所讨论过敏原的最适宜pH。
优选地，包含过敏原提取物的基质组合物应当调节pH在3.5-10 之间，更优选4-9，最优选6-9。
此外本领域公知，，离子强度可以是影响冷冻干燥的固体剂型的 稳定性的参数，主要通过其对冷冻干燥工艺的影响。也已知高离子强 度影响沉淀。因此，必须采用本领域技术人员公知的测定方法建立最 适宜的离子强度。优选地，10μg/ml的提取物的离子强度在1-1500 μS/cm之间(S＝Simens)，更优选300-800μS/cm，最优选约500μ S/cm，对于含基质和过敏原的系统，优选离子强度在1-2000μS/cm， 更优选约500-1500μS/cm。
本发明的固体剂型可以更进一步含有着色剂，增香剂，pH调节剂 或矫味剂。适宜的着色剂包括红色，黑色和黄色氧化铁以及FD&C 染剂例如FD&C蓝No.2和FD&C红色No.40。适宜的增香剂包括薄 荷，覆盆子，甘草，橙，柠檬，葡萄柚，焦糖，香草，樱桃和葡萄香 料以及其组合。适宜的pH调节剂包括柠檬酸，酒石酸，磷酸，盐酸和 马来酸。适宜的甜味剂包括天冬酰苯丙氨酸甲酯，乙酰舒泛K和竹芋 蛋白。适宜的矫味剂包括碳酸氢钠，离子交换树脂，环糊精包合物， 吸附物或微囊化活性剂。
通常佐剂被用于增强过敏原的吸收以及增强过敏原的免疫刺激 性。
在本发明另一个优选的具体实施方案中，本发明的快速分散固体 剂型不含佐剂。
同样惊奇地发现，不必向快速分散固体剂型中引入佐剂以增强所 讨论过敏原的免疫刺激性。换句话说，如实施例6所例证，在此所述 的固体剂型可以产生特异性免疫应答。
在本发明的一个实施方案中至少一种佐剂被引入本发明的剂型 内。适宜佐剂的例子是铝盐，诸如Alhydrogel的氢氧化铝，无毒细 菌碎片，细胞因子，霍乱毒素(及其脱毒部分)，霍乱毒素亚单位b， 壳聚糖，大肠杆菌的同源热不稳定片段(及其脱毒部分)，皂甙，细 菌产物例如脂多糖(LPS)和胞壁酰二肽(MDP)，脂质体，CpG(免疫 刺激性DNA序列)，微粒聚合物形式的丙交酯/乙交酯同±共聚物等。 所讨论的过敏原不能穿透要穿过的屏障这一事实经常作为理由以在过 敏原药物产品例如疫苗中使用佐剂。因此佐剂可以用作吸收增强剂或 它们可以充当免疫刺激剂。然而佐剂的使用可能会有严重的缺点，例 如免疫应答多种机制的非预期刺激作用，系统性红斑狼疮或影响粘膜 的屏障能力因而让有害物质通过。此外，从工业的角度来看，除有关 药品注册的大量文件要求以外，添加佐剂还构成进一步的制造和材料 成本。
非压制快速分散的固体剂型某种程度上可以是粘膜粘着性的。然 而在本发明优选的实施方案中，为增加剂型与口腔粘膜的接触时间， 向所述剂型中进一步加入粘膜粘着赋形剂可能是必要的。适宜的粘膜 粘着赋形剂是聚丙烯酸聚合物例如卡波姆和卡波姆衍生物；纤维素衍 生物例如羟丙基甲基纤维素，羟乙基纤维素，羟丙基纤维素和羧甲基 纤维素钠；天然聚合物例如明胶，藻酸钠，果胶和甘油。
在本发明又一个实施方案中，为了有足够的接触时间用于例如在 口腔粘膜吸收，溶解在唾液中的过敏原剂型直到给药后3分钟才被吞 咽。
在又一个优选实施方案中，过敏原剂型在口腔中不被稀释，例如 通过摄入类似水的液体，直到5分钟后。
过敏症治疗也存在不良事件或副作用。特别是，旨在调节致敏个 体中正在进行的反应的治疗可能引起在给予过敏原后诱发副作用的危 险。通常观察到的与口腔粘膜治疗有关的副作用据报道发生在眼，鼻， 口，上下气道中而且取决程度可接受。最常见的是痒现象。不良反应 例如过敏性休克、上下气道肿胀、呼吸困难、血压下降、心脏停搏是 不能被接受的。
本发明的快速分散固体剂型可以被制造和包装在含多个固体剂型 的一次性容器例如多剂量容器中。在美国专利Nos.5,729,958和 5,343,762中所述的方法和材料特别受青睐。适宜的多剂量容器的例 子是全铝泡罩式包装，由聚合物例如聚丙烯制成的泡罩式包装，PVC 的泡罩式包装和由PVC/PVdC薄片制成的泡罩，用例如层压至砑光牛皮 纸的铝箔密封，Aclar或Triplex。
在一个实施方案中，快速分散剂型被制造和包装由PVC/PVdC薄片 制成、用层压至砑光牛皮纸的铝箔密封的泡罩式包装中。在另一个关 于此的实施方案中泡罩式包装包在适宜大小的铝袋中，铝袋由层压至 砑光牛皮纸的铝箔制成。
在另一个实施方案中快速分散剂型包装在由铝制成并用层压至砑 光牛皮纸的铝箔密封的泡罩式包装中。
在又一个实施方案中快速分散剂型被包装在由例如五层铝箔制成 并用层压至砑光牛皮纸的铝箔密封的多层泡罩式包装中。
在另一个实施方案中，快速分散剂型被包装在由铝箔制成并用层 压至砑光牛皮纸的铝箔密封的泡罩式包装中，其包装方式使儿童难以 打开泡罩式包装，例如儿童安全包装。
因为这种非压制剂型的固有性质，通常这种类型的固体剂型表现 出与压制片剂相比低机械强度的特点。这可能导致在从泡罩囊中取出 时和在患者使用剂型的过程中释放含过敏原的残余微粒。在多数情况 下这是无关紧要的，或主要是美观的问题。然而，当活性成分是过敏 原时这是特别有害的，因为低量的过敏原可以在有倾向的人身上引发 过敏反应或使先前非致敏的个体敏化。通常接触为对例如花粉过敏原 或尘螨过敏原累积的主要过敏原蛋白质10μg/年的范围，其足以导致 致敏或症状。
在操作固体剂型时，过敏原可能接触到如气道或眼睛的靶器官并 在过敏的人中引起反应。一个剂型可能含的过敏原和人在一年或更长 时间所接触到的一样多，取决于接触的性质。采用结膜过敏原攻击可 以引起过敏症患者的眼睛症状。基于这样的攻击研究，可以估计引起 结膜症状需要多少过敏原提取物。在患有严重的草花粉引起的花粉热 的患者群体中，提出引起结膜症状的草花粉提取物的最低剂量是3000 SQ-U/ml×0.05ml＝150SQ-U(中值)(S.R.Durham，S.M.Walker， E.M.Varga，M.R.Jacobson，F.O′Brien，W.Noble，S.J.Till， Q.A.Hamid，和K.T.Nouri-Aria.Long-term clinical efficacy of grass-pollen immunotherapy.N.Engl.J.Med.341(7)：468- 475，1999)。
为了确保在打开多剂量容器时来自固体剂型的含过敏原的残余物 不释放到环境中，重要的是剂型的脆性尽可能地低，而不影响口服给 药后过敏原从剂型的释放。
因此，在一个实施方案中，在人工处理的过程中可从每一固体剂 型中释放少于约500SQ-U，更优选少于约250SQ-U，更优选少于约 150SQ-U，更优选少于约75SQ-U，更优选少于约25SQ-U，最优选少 于约10SQ-U。
在另一个实施方案中，在人工处理的过程中可从每一固体剂型中 释放少于约13BAU，更优选少于约7BAU，最优选少于约5BAU，更 优选少于约1.95BAU，更优选少于约0.65BAU，最优选少于约0.26 BAU。
在又一个实施方案中，在人工处理的过程中可从每一固体剂型中 释放少于约0.5μg过敏原提取物，更优选少于约0.25μg过敏原提取 物，最优选少于约0.15μg过敏原提取物，更优选少于约0.075μg 过敏原提取物，更优选少于约0.025μg过敏原提取物，最优选少于约 0.01μg过敏原提取物。
在另一个实施方案中，在人工处理的过程中可从每一固体剂型中 释放少于约0.05μg主要过敏原，更优选少于约0.025μg主要过敏原， 最优选少于约0.015μg主要过敏原，更优选少于约0.0075μg主要过 敏原，更优选少于约0.0025μg主要过敏原，最优选少于约0.001μg 主要过敏原。
在本发明的一个优选实施方案中，在取出剂型后多剂量容器中尘 埃的残余含量不超过总过敏原含量的约2％，更优选固体剂型总过敏原 含量的约0.5％，更优选固体剂型总过敏原含量的约0.2％，最优选固体 剂型总过敏原含量的约0.1％，更优选约0.01％，更优选约0.005％，， 更优选固体剂型总过敏原含量的约0.003％，最优选固体剂型总过敏原 含量的约0.001％
在此所用的“脆性测试”应指测定固体剂型粉碎，破碎，成为粉 末的容易程度的任何适宜的测试。用于本发明的适宜的脆性测试描述 如下并包括欧洲药典第三版(EP 3rd ed.)制药技术操作2.9.7。通 常片剂的脆性测试按照EP 3rd ed.2.9.7.和USP<1216>的描述 进行，其中评估片重的损失作为完整剂型的参数。欧洲药典第三版 2.9.7的脆性测试使用直径286mm和厚度约39mm的转鼓。片剂的样品 放在100目筛上并使用风压或软刷去除任何松散的碎渣。称重片剂， 随后放置在转鼓内。在转鼓内片剂被转动100次。依照刚才所述，去 除松散的碎渣并再次称重片剂。然后结果表示为质量损失并计算为最 初质量的百分比。按照USP<1216>，可以使用直径在283-291mm之 间，厚度在36-40mm之间，转速为25±1rpm的转鼓。相应地，采用 这样的方法可以通过肉眼检查和测定片重评估当前剂型的完整性。或 者，由于本发明的剂型重量轻，可以采用对所讨论的过敏原特异性的 免疫测定法代替称重。
已经发现使用改良脆性测试是有用的工具来评价哪种组合物就坚 固性和机械强度而言是最稳定的。
在一个实施方案中，在任何对待测组合物施加足够外力的合适的 脆性测试中，测定为过敏原释放量的所述固体剂型的脆性少于约500 SQ-U每固体剂型，更优选少于约250SQ-U每固体剂型，更优选少于 约150SQ-U每固体剂型，更优选少于约75SQ-U每固体剂型，更优选 少于约50SQ-U每固体剂型，更优选少于约25SQ-U每固体剂型，最 优选少于约10SQ-U每固体剂型。
在更优选的实施方案中，在按照欧洲药典第三版所进行的脆性测 试中，作为过敏原释放量所测定的脆性是少于约500SQ-U每固体剂型， 更优选少于约250SQ-U每固体剂型，更优选少于约150SQ-U每固体 剂型，更优选少于约75SQ-U每固体剂型，更优选少于约50SQ-U每 固体剂型，更优选少于约25SQ-U每固体剂型，最优选少于约10SQ-U 每固体剂型。
在甚至更优选的实施方案中，采用包括下列步骤的方法，作为过 敏原释放量所测定的脆性少于约500SQ-U每固体剂型，更优选少于约 250SQ-U每固体剂型，更优选少于约150SQ-U每固体剂型，更优选 少于约75SQ-U每固体剂型，更优选少于约50SQ-U每固体剂型，更 优选少于约25SQ-U每固体剂型，最优选少于约10SQ-U每固体剂型：
a)将各自包含固体剂型的各个密封泡罩置于适合脆性测定的装置 中；
b)以适当的速度移动包含固体剂型的密封泡罩持续恰当的时间；
c)取出包含固体剂型的密封泡罩；
d)打开泡罩并将固体剂型和任何残余物置于容器中；
e)从容器中取出固体剂型单位，将任何松散的残余物留在所述容 器中；
f)对所述残余物进行过敏原特异性测定，测定所述残余物中的过 敏原含量；和
g)任选地计算所述残余物中的过敏原含量占固体剂型单位的总过 敏原含量的百分比。
在另一个实施方案中，采用包括下列步骤的方法，作为过敏原释 放量所测定的所述固体剂型的脆性是在人工处理过程中少于约0.5μ g过敏原提取物每固体剂型，更优选少于约0.25μg过敏原提取物每 固体剂型，更优选少于约0.15μg过敏原提取物每固体剂型，更优选 少于约0.075μg过敏原提取物每固体剂型，更优选少于约0.025μg 过敏原提取物每固体剂型，最优选少于约0.01μg过敏原提取物每固 体剂型：
a)将各自包含固体剂型的各个密封泡罩置于适合脆性测定的装置 中；
b)以适当的速度移动包含固体剂型的密封泡罩持续恰当的时间；
c)取出包含固体剂型的密封泡罩；
d)打开泡罩并将固体剂型和任何残余物置于容器中；
e)从容器中取出固体剂型单位，将任何松散的残余物留在所述容 器中；
f)对所述残余物进行过敏原特异性测定，测定所述残余物中的过 敏原含量；和
g)任选地计算所述残余物中的过敏原提取物含量占固体剂型单位 的总过敏原提取物含量的百分比。
在另一个实施例中，采用包括下列步骤的方法，作为过敏原释放 量所测定的脆性少于0.05μg主要过敏原，更优选少于0.025μg主要 过敏原，更优选少于约0.015μg主要过敏原每固体剂型，更优选少于 约0.0075μg主要过敏原每固体剂型，更优选少于约0.0025μg主要 过敏原每固体剂型，最优选少于约0.001μg主要过敏原每固体剂型：
a)将各自包含固体剂型的各个密封泡罩置于适合脆性测定的装置 中；
b)以适当的速度移动包含固体剂型的密封泡罩持续恰当的时间；
c)取出包含固体剂型的密封泡罩；
d)打开泡罩并将固体剂型和任何残余物置于容器中；
e)从容器中取出固体剂型单位，将任何松散的残余物留在所述容 器中；
f)对所述残余物进行过敏原特异性测定，测定所述残余物中至少 一种主要过敏原的主要过敏原含量；和
g)任选地计算所述残余物中至少所述主要过敏原占固体剂型单位 的总主要过敏原含量的百分比。
在另一个优选的方法实施方案中
在步骤a)中采用1-100个包含固体剂型的泡罩和如欧洲药典V. 2.9.7所述的脆性测定装置，
在步骤b)中固体剂型以25±1rpm旋转100转，和
在步骤f)中过敏原特异性测定是免疫化学过敏原特异性测定。
在测定脆性方法的又一个优选实施方案中，采用ELISA测定法测 定过敏原含量。
此外，口服剂型必须具有吸引人的外观。因此，作为质量控制的 一部分，本发明的快速分散固体剂型优选地经肉眼检查例如颜色，外 形，不规则度和缺损。
为了确保患者最佳的依从性，还可以测试剂型的口感。例如，当 剂型放入口中并让其崩解的时候，患者对该剂型的感觉是令人愉悦的。
因为过敏原对过敏症患者而言非常具有生物效力，即即使小量也 可引发反应，因此在治疗过程中含量均一性是重要的参数，以确保例 如在服用相同剂量时患者所经历的模式是可重复的。优选地，在多剂 量容器内的单位的过敏原含量变化与设定剂量相比在±10％之内，优选 ±7％之内，最优选在±5％之内。
多剂量容器可以包含任何可想得到的数目的快速分散固体剂型。 优选固体过敏原剂型按组包装和使用。以液体混合物的形式分散到单 个容器中，然后去除水，来包装单个固体剂型。可以在更大片板上排 列多个泡罩并将多个片板包装在一起销售。例如，诸如泡罩式包装的 容器可包含多个固体剂型，优选1-100个固体剂型，更优选1-35个， 最优选每个泡罩式包装1-10个固体剂型。另一个实施方案使得制造、 分配和贮存更为经济，通过使用多个泡罩式包装，其可以例如提供2， 3，4，5，6或更多用于单一目的疗程使用。这种特定包装方案特别用 于单一剂量的治疗，并因如此处所述缺乏提高剂量步骤的给药方案而 成为可能。。
另一个实施方案提供了用于治疗过敏症或缓解过敏症状的治疗包 装。该治疗包装包括多个剂量固体剂型的密封包装，其中每个剂型包 含有效量的过敏原。该治疗包装可以包含例如至少2，4，6，7，10， 14，30，60，90，100，120，200，240或更多固体剂型。该治疗包装 可以包含用于整个治疗的足够的剂型，或足以用于治疗的一部分。有 利的是该治疗包装包含至少一个月的单位剂量供应。
在本发明另一个有利的实施方案中，治疗包装的所有固体剂型都 包含相同的过敏原剂量，因此免除了制备、分配和贮藏多个剂量单位 用于治疗个体单一过敏症的必要。
含治疗包装的试剂盒还可以包含有关固体剂型使用的说明书。说 明书可以包括警告，剂量方案说明，或对于使用者有价值的任何其它 信息。说明书实体上可以包括例如单独的说明书小册子，一张纸，一 份告示，和/或一份或多份印在容器例如装有单位剂量的包装盒上的布 告。提供的说明书也可以是光盘或其它计算机可读介质或录像带。
最理想的是，通过原位工艺过程除去可含有水和/或其它有机溶剂 并且快速分散的悬浮和/或溶剂化液体而由液体混合物形成治疗包装 的多个固体剂型。
在另一个实施方案中，治疗包装中的每个固体剂型都位于多泡罩 式包装中的单独密封的泡罩内。
在又一个实施方案中，治疗包装的固体剂型包含明胶，更优选鱼 明胶。
但另一个实施方案中治疗包装的固体剂型还包含甘露醇。
在另一个治疗包装的实施方案中，固体剂型的有效量是约2.5μ g-3.75mg提取物/固体剂型。
临床过敏症表现和症状有数种并可以根据致敏个体和所患过敏症 而变化。像水肿，瘙痒，发红，流泪和流涕(鼻炎和结膜炎)的症状 和上下气道的症状像哮鸣，咳嗽，呼吸短促，皮肤病况像湿疹，荨麻 疹和瘙痒都是常见的。还可经历其它症状如疲劳。对症治疗旨在减轻 或影响症状严重程度或减少对其它平行给予的药物的需求。对症药物 包括抗组胺药物例如H1和H2受体拮抗剂，鼻内和全身用皮质类固醇， 非甾体抗炎药物，鼻减充血剂例如肾上腺素受体激动剂。治疗和缓解 一种或多种过敏症状或减少对其它药物的需求是本发明又一个目的。
过敏症在包括人和动物例如狗和马在内的哺乳动物中是一种广泛 普遍的疾病。因此，本发明又一个目的在于提供一种在哺乳动物中治 疗过敏症或缓解过敏症状的方法，包括口腔粘膜给药有效量的过敏原 疫苗剂型，其包括(a)基质，和(b)在上述任何实施方案中的至少 一种过敏原。
对特别是季节性过敏症例如花粉热的治疗通常涉及与引起不适的 过敏原的接触存在或增加的一年中的某个特别时间。过敏原季节将随 过敏原来源例如花粉和在特定地域对过敏原来源的气候条件而变化。 因此，过敏原的季节将取决于气候而在世界各个地方不同，但通常对 于同一地域会落在年中相同的时期，随那年的实际条件而变化(参见 例如″Aerobiology and inhalant allergies″，Chapter 19，T.A.E. Platts-Mills&W.R.Solomon(Ed.S.Manning)1993，Mosby-Year Book，St.Louis)。技术人员熟知，在特定地区对特定过敏原通常预 计季节开始的时间。
在本发明的一个实施方案中，提供的治疗方法包括季节前的治疗， 即在过敏原季节前给予本发明的固体剂型。在一个特别优选的实施方 案中，季节前治疗期包括在过敏原季节前施用本发明的固体剂型超过 2周，更优选4-20周，最优选8-12周。
本发明的另一个目的在于提供一种过敏症或过敏症状的治疗方 法，包含口腔粘膜给药有效量的过敏原疫苗剂型，其包括(a)基质， 和(b)至少一种过敏原，还包括至少一种抗过敏药物，例如在任何上述 实施方案中的抗组胺药和组胺合成抑制剂。优选这种抗过敏药物包括 溴基非尼拉敏，西替立嗪，非索那丁，赛庚啶，右氯苯那敏，羟嗪，酮 保泰松，美喹他嗪，苯咪唑嗪，咪唑斯汀，依巴斯汀，阿司咪唑，卡 比沙明，阿利马嗪，布克利嗪，赛克利嗪，氢氯酸盐，多西拉敏，曲 托喹啉。
本发明还包括包含含过敏原和至少一种基质形成剂的非压制快速 分散固体剂型的药物产品用于口腔粘膜治疗过敏症或缓解过敏症状的 用途
在本发明的另一个实施方案中，包含具有低脆性的稳定、快速分 散、非压制的过敏原固体剂型的药物产品用于口腔粘膜治疗过敏症或 过敏症状，所述固体剂型包含(a)基质，和(b)至少一种过敏原， 还包含抗组胺药。
另一个实施方案提供了治疗过敏症或缓解过敏症状的方法，包括 提供一种a)治疗包装和b)重复口腔粘膜给药治疗包装中的一个或多 个剂型直至症状得到缓解。
又一个实施方案还提供了一种利用单一剂量完成整个过敏治疗的 治疗方案，而不必提高剂量，即增加不同水平的过敏原，直至达到特 定的剂量。此实施方案是有利的，对于单一治疗不需要多个剂量用量， 在剂型生产，分配和贮藏上简化又经济。此外，通过简化治疗过程， 提高了患者的依从性，直接导致更大的临床有效性。
本发明的另一个实施方案是含可口服给药的固体剂型的药物产 品，所述固体剂型包含至少一种药学可接受材料形成的基质，使人对 所述过敏原脱敏的有效量过敏原，在25℃和60％相对湿度下保存三个 月后所述剂型的过敏原含量为最初过敏原含量的至少约50％。优选地 所述药物是糖锭，片剂，胶囊或小胶囊的形式。
根据美国专利No.4,371,516所公开的工艺，可以采用升华工 艺制备本发明的快速分散固体剂型。相应地，将过敏原和基质形成赋 形剂的固化溶液进行升华。优选通过冷冻干燥溶液进行升华工艺。为 了制备任何预期形状的固体形式，在冷冻干燥步骤期间，溶液包含在 多剂量容器的凹陷内。多剂量容器可以采用液氮或固态二氧化碳冷却。 冷冻步骤后在多剂量容器中的冷冻溶液经过减压，并且如果期望，控 制应用加热以帮助溶剂升华。
本发明进一步地包括过敏原用于制备具有低脆性的稳定、快速分 散、非压制过敏原疫苗固体剂型的用途，所述固体剂型包括(a)基质， 和(b)至少一种过敏原形式，用于治疗过敏症或缓解过敏症状。
在另一个实施方案中提供了制备适于口腔粘膜给药、具有低脆性 的快速分散非压制固体稳定剂型的方法，该剂型包含至少一种基质形 成剂和使个体对至少一种过敏原脱敏的有效剂量，所述方法包括如下 步骤：
a)制备含所述至少一种过敏原和至少一种基质形成剂的水溶液，
b)将溶液引入模具的一个或多个凹陷内，
c)采用贮存温度和室压力的标准条件对装填的片板进行冷冻和冷 冻干燥以在每个凹陷中获得所述固体剂型。
在另一个实施方案中提供了制备适于口腔粘膜给药、具有低脆性 的快速分散非压制固体稳定剂型的方法，该剂型包含至少一种基质形 成剂和使个体对至少一种过敏原脱敏的有效剂量，所述方法包括如下 步骤：
a)制备含所述至少一种过敏原和至少一种基质形成剂的水溶液，
b)将溶液引入层压泡罩片板的一个或多个凹陷内，
c)采用贮存温度和室压力的标准条件对装填的片板进行冷冻和冷 冻干燥以在每个凹陷中获得所述固体剂型。
在优选的方法实施方案中，泡罩片板是全铝泡罩片板。在特别优 选的方法实施方案中，泡罩片板是多层全铝的泡罩片板。
在另一个实施方案中提供了获得包含适于口腔粘膜给药的快速分 散非压制固体稳定剂型的药物产品的方法，该剂型包含至少一种基质 形成剂和使个体对至少一种过敏原脱敏的有效剂量，所述剂型具有低 脆性，该方法包括
1)制备稳定的快速分散非压制固体剂型，
2)采用包括下列步骤的测定法测定所述剂型的脆性，
a)将各自包含固体剂型的各个密封泡罩置于适合脆性测定的装置 中；
b)以适当的速度移动包含固体剂型的密封泡罩持续恰当的时间；
c)取出包含固体剂型的密封泡罩；
d)打开泡罩并将固体剂型和任何残余物置于容器中；
e)从容器中取出固体剂型单位，将任何松散的残余物留在所述容 器中；
f)对所述残余物进行过敏原特异性测定，测定所述残余物中至少 一种主要过敏原的主要过敏原含量；和
g)计算所述残余物中至少所述主要过敏原占固体剂型单位的总主 要过敏原含量的百分比。
检测剂型是否达到低脆性的要求，和
3)重复1)和2)直到达到对剂型的要求
口腔粘膜免疫治疗可以被视为诱导耐受和诱导粘膜免疫的方法。 口腔粘膜富含树突细胞，其有着很强的抗原呈递潜能。树突细胞被认 为可加工过敏原并随后迁移到局部淋巴结，在其中它们将过敏原衍生 的肽呈递给过敏原特异性T细胞。在舌下免疫治疗过程中，这种树突 细胞-T细胞相互作用被认为可诱导具有调节潜能的T细胞或增加过 敏原特异性Th1细胞对过敏原特异性Th2细胞的比例。在过敏原接种 过程中监测的多种免疫学参数，单独或组合，可以作为治疗作用或疗 效的合适标志。这些包括全身和粘膜抗体应答，例如特异性IgA，IgG 和IgE抗体；在血液或粘膜分泌物中的细胞因子水平例如INFγ， IL-2，IL-4，IL-5，IL-10，IL-12和TNFα；激活，趋化，增殖， 信号转导，生成细胞因子以及调节T细胞，Th1细胞，TH2细胞，CD8 细胞，其它T细胞亚群或B细胞或NK细胞的其它应答，以及细胞表 面标志表达例如CD(分化簇)标志例如CD4，CD8，CD23，CD25，CD62L， CLA，β7，CCR9，CD69，CD45RO，CCR 3，CXCR5，效应细胞功能例如嗜 碱性白细胞的总组胺含量；血液、组织和分泌物中嗜酸性白细胞、嗜 碱性白细胞、淋巴细胞，单核细胞的数目；嗜酸性细胞、嗜碱性白细 胞、淋巴细胞、单核细胞介质释放，细胞因子产生，激活，趋化，增 殖，信号转导及其它应答。
在优选的实施方案中，本发明的疫苗的特征是可以发现一种或多 种以下免疫学改变：增加的过敏原特异性IgG应答，增加的过敏原特 异性IgA应答，减少的过敏原特异性IgE应答，极少的局部副作用； 嗜酸性白细胞，嗜碱性白细胞，淋巴细胞和/或单核细胞的过敏原特异 性效应细胞应答减少；诱导具有调节潜能的T细胞，过敏原特异性Th1 细胞相对于过敏原特异性Th2细胞的比例增大，诱导其它具有调节潜 能的细胞，减少过敏原特异性Th2细胞应答。
过敏症也是在动物特别是驯养动物和陪伴宠物中已知的疾病。本 领域已知它们对于多种过敏原来源包括草，屋尘螨和寄生虫会产生过 敏症。已知食血即吸血昆虫侵染可导致称为蚤变应性皮炎(FAD)的超敏 反应。在本发明优选的实施方案中，动物疫苗的过敏原包括源自或转 移自寄生虫例如体外寄生虫(例如蚤，蜱，蚊，蝇)的过敏原，寄生 蠕虫毒液(象犬恶丝虫例如恶丝虫属或盘尾丝虫病例如盘尾丝虫)和 屋尘螨。更优选的是唾液过敏原，来自蚤，象栉头蚤属例如犬属栉头 蚤和猫属栉头蚤，硬蜱如硬蜱属，花蜱，软蜱如钝缘蜱属，和来自蠓 如库蠓属。
实施例
缩略词
API：活性蛋白质成分
ELISA：酶联免疫吸附测定
DDT：二硫苏糖醇
HRP：辣根过氧化物酶
LIA：Magic Lite特异性IgE测定
LITE-试剂：发光标记的抗IgE
PMP：顺磁颗粒
SDS-PAGE：十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳
TMB：四甲基联苯胺
实施例1.含梯牧草(Phleum pratense)花粉提取物和鱼明胶的 过敏原疫苗
组成：
表1 成分 单位 剂型1 剂型2 剂型3 功能 药物物质： 梯牧草 SQ-U 2500 25000 125000 API mg 提取物 0.0047 0.047 0.235 其它成分 净化水 mg 适量至 250mg 适量至 250mg 适量至 250mg 溶剂 明胶(标准分 子量鱼明胶， Croda UK mg 10 10 10 基质 甘露醇 mg 7.5 7.5 7.5 基质 氢氧化钠 mg 适量 适量 适量 pH调节到 7.5
草提取物
按照Ipsen和Lwensten(1983)Jour.Allergy.Clin.Immunol. 72：2，150-159页所述的方法制备草花粉提取物。简言之，在5℃采 用碳酸氢铵提取草花粉20小时。通过离心除去颗粒物质，用水透析上 清(3次)，冻干并冷藏直至重构。
固体剂量：
制备工艺：
1、将甘露醇加入一等份净化水(不少于总批次要求的50％)并使 之溶解。
2、加入明胶到甘露醇溶液，用磁力搅拌器搅拌溶液直至明胶完全 溶解
3、将第二等份净化水(不超过总批次要求的35％)用于在小瓶中 重构过敏原提取物。把重构的过敏原提取物加入到甘露醇-明胶溶液。
4、采用新鲜制备的氢氧化钠溶液(3％W/W)调节整个制剂的pH 到pH7.5。
5、计算完成制剂所需要的净化水附加量并转移到整个混合物中。
6、将溶液定量配料预成型的泡罩式包装中。在室温条件下定量配 料溶液。
7、定量配料后，使填满的泡罩包装通过液氮冷冻管。在冷冻干燥 前，所有冷冻产物立刻置于冷冻保藏。采用保藏温度和室压力的标准 条件冷冻干燥各个单位。
8、用盖箔密封冻干的单位并最终包装成袋。
固体剂型平均重18mg且平均直径11mm。
分析方法简述：
鉴定(ID)，蛋白质谱：按厂家说明书以Novex Mini Cell Xcell II系统(Invitrogen)通过SDS-PAGE确定蛋白质谱。简言之，用样 品缓冲液稀释样品，加入还原剂(0.5M DDT)，并在70℃保持10分 钟并使之冷却5分钟。将样品、内部参照和标准低范围大小标志 (BIO-RAD)/孔加到NuPAGE 4-12％Bis-Tris梯度凝胶上。以200V 进行电泳约35分钟。随后凝胶用银染色。蛋白质模式应当类似于内部 参照。
肉眼检查
所有单位经肉眼检查，例如颜色，形状，不规则度和缺损，以确 保可接受的外观。
崩解：如欧洲药典(第三版)或现行的USP所述进行测试。
水含量：采用Karl Fischer滴定原理测定残余水。该方法基于给 定量的I2会导致等量H2O转化的原理，定量测定样品中的水含量。
简言之，使用Karl Fisher滴定器，按照产品说明，测定1-3个 固体剂型/小瓶，一式三份，一起的还有盲样品(4/运行)和KF标准 样品，参见实施例10。
总过敏原活性：采用为竞争性免疫测定法的LIA(在Eiken等人， Allergy 1992，47：495-497中所描述的)进行测试。将结合到顺磁颗 粒(PMP)(ADVIA Centaur PMP，ALK-Abello A/S，Denmark)的100 μl抗人IgE单克隆抗体洗三次，加入100μl含有特异性梯牧草IgE 抗体的患者血清混合物并于2-8℃在振荡器上温育2小时，由此特异 性IgE结合PMP。采用明胶缓冲液洗涤PMP三次以除去IgG抗体。将 10个固体剂型溶于明胶缓冲液，制备每片625SQ-Units或1250 SQ-Units的稀释物。应用样品或已知含量的生物素化梯牧草API的参 照，并于2-8℃振荡温育过夜。样品和生物素化API将竞争IgE结合 位点，当样品中的过敏原浓度升高时，结合的生物素化API的量将降 低。温育后，样品在明胶缓冲液中洗三次，应用LITE-试剂，例如链 霉抗生物素偶联的吖啶酯化学发光化合物(ADVIA Centaur Lite Reagents，ALK-Abello A/S)。样品于2-8℃在振荡器上温育2小时， 在明胶缓冲液中洗3次并在发光计上读数。反应与样品中过敏原的浓 度反相关。
主要过敏原含量：根据Obispo等人，Allergy，1997，52，806-813 页，采用ELISA技术进行测试。
ELISA法测定梯牧草主要过敏原5(Phlp5)的浓度。将与Phlp 5分子上不同表位反应的两种单克隆抗体(ALK-Abello A/S，DK)于4 ℃包被微量滴定板过夜。洗涤后(0.1M PBS，0.05％Tween-20的洗 涤缓冲液洗涤4次)并用封闭缓冲液(2％酪蛋白缓冲液)封闭滴定板， 施加样品/参照，其随后结合抗体。再次洗涤后(用洗涤缓冲液洗涤4 次)，将针对梯牧草抗原的生物素化兔多克隆抗体(ALK-Abello A/S， DK)加到孔中并使之反应。
在用洗涤缓冲液洗涤4次后，向孔中施加与HRP(辣根过氧化物 酶)(DAKO，Denmark)偶联的链霉抗生物素并使之在室温反应1小时 (振荡)。采用洗涤缓冲液洗涤4次后，加入HRP酶的底物(TMB，KEM EN TEC)并使之反应20分钟，然后用0.5N硫酸停止反应。在450nm 用分光光度计例如Multilable计数器Victor2测定产生的颜色。
脆性：
使用下列方法测定快速分散剂型的脆性。
含10个泡罩、每个泡罩含一个固体剂型的密封泡罩片板被切分为 10个单独的泡罩，每个泡罩置于如欧洲药典第三版V.2.9.7所述的适 于脆性测定的一件装置中，剂型单位以25±1rpm旋转100转。将各 个泡罩取出，打开，并将固体剂型转移到一个适宜的容器中。然后从 容器中取出固体剂型，在所述容器中留下任何松散的残余物。进行免 疫化学的过敏原特异性测定(ELISA)以检测残余物中过敏原的含量的 量(参见上文)。
稳定性结果：
表2 产品 含梯牧草2500SQ-U的剂型 贮藏条件 25℃/60％相对湿度 试验 脆性 提取物 (API)总 含量损失％ 崩解 (秒) 水含量 (％) 肉眼检 查 主要过 敏原含 量(％) 总过敏 原活性 (％) 取样(月) 开始 0.000 8 5.5 合格 96 101 1 n.m. 5 4.9 合格 79 91 2 n.m. 6 5.4 合格 96 102 3 0.000 5 5.2 合格 94 82 6 n.m. n.m. n.m. n.m. n.m. n.m. 9 0.000 5 5.3 合格 83 105 贮藏条件 40℃/75％相对湿度 试验 脆性 提取物 (API)总 含量损失％ 崩解 (秒) 水含量 (％) 肉眼检 查 主要过 敏原含 量(％) 总过敏 原活性 (％) 取样(月) 1 n.m. 3 4.8 合格 85 86 2 n.m. 8 5.2 合格 85 100 3 0.005 6 5.4 合格 94 83 6 n.m. n.m. n.m. n.m. n.m. n.m. 9 0.005 4 5.1 合格 70 92
表3 产品 含梯牧草25000SQ-U的剂型 贮藏条件 25℃/60％相对湿度 试验 脆性 提取物 (API) 总含量 损失％ 崩解 (秒) 鉴定 水含量 (％) 肉眼检 查 主要过 敏原含 量(％) 总过敏 原活性 (％) 取样(月) 开始 0.000 8 合格 6.3 合格 106 104 1 n.m. n.m. 合格 n.m. n.m. n.m. n.m. 2 n.m. n.m. 合格 n.m. n.m. n.m. n.m. 3 n.m. n.m. 合格 n.m. n.m. n.m. n.m. 6 n.m. 7 合格 n.m. 合格 87 141 9 0.000 4 合格 5.1 合格 79 105 贮藏条件 40℃/75％相对湿度 试验 脆性 提取物 (API) 总含量 损失％ 崩解 (秒) 鉴定 水含量 (％) 肉眼检 查 主要过 敏原含 量(％) 总过敏 原活性 (％) 取样(月) 1 n.m. n.m. 合格 n.m. n.m. n.m. n.m. 2 n.m. n.m. 合格 n.m. n.m. n.m. n.m. 3 0.005 n.m. 合格 n.m. n.m. n.m. n.m. 6 n.m. 6 合格 n.m. 合格 84 135 9 0.005 4 合格 5.0 合格 77 105
表4 产品 含梯牧草125000SQ-U的剂型 贮藏条件 25℃/60％相对湿度 试验 脆性 提取物(API) 总含量损失％ 崩解 (秒) 鉴定 水含量 (％) 肉眼检 查 主要过 敏原含 量(％) 总过敏 原活性 (％) 取样(月) 开始 0.000 5 合格 4.7 合格 100 100 1 n.m. 10 合格 3.9 合格 84 93 2 n.m. 5 合格 4.5 合格 92 104 3 n.m. 8 合格 4.8 合格 80 88 6 n.m. 6 合格 n.m. 合格 n.m. n.m. 9 0.003 5 合格 4.5 合格 77 106 贮藏条件 40℃/75％相对湿度 试验 脆性 提取物(API) 总含量损失％ 崩解 (秒) 鉴定 水含量 (％) 肉眼检 查 主要过 敏原含 量(％) 总过敏 原活性 (％) 取样(月) 1 n.m. 4 合格 4.1 合格 90 92 2 n.m. 6 合格 4.6 合格 91 109 3 0.001 7 合格 4.5 合格 83 89 6 n.m. 5 合格 n.m. 合格 n.m. n.m. 9 n.m. 5* 合格 4.6 合格 78 118
*仅3个剂型的平均值
实施例2.含梯牧草花粉提取物和淀粉的过敏原疫苗
组成
表5 成分 单位 剂型1 剂型2 剂型3 功能 药物物质： 梯牧草 SQ-U 2500 25000 125000 API mg 提取物 0.0047 0.047 0.235 其它成分 净化水 Mg 适量至 250mg 适量至 250mg 适量至 250mg 溶剂 预糊化淀粉 Mg 8mg 9mg 11mg 基质 甘露醇 Mg 8mg 9mg 11mg 基质 氢氧化钠 Mg 适量 适量 适量 pH调节到 7.5
制备工艺：
与实施例1相同，加入预糊化淀粉代替明胶(鱼来源)。固体剂 型平均重19mg和平均直径11mm。
分析方法简述
与实施例1相同
稳定性结果
表6 产品 含梯牧草2500SQ-U的剂型 贮藏条件 25℃/60％相对湿度 试验 脆性 提取物 (API) 总含量 损失％ 崩解 (秒) 水含量 (％) 肉眼检 查 总过敏 原活性 (％) 取样(月) 开始 0.008 8 3.5 合格 101 1 n.m. 5 3.0 合格 80 2 n.m. 6 3.6 合格 99 3 0.021 5 3.9 合格 69 6 n.m. n.m. n.m. n.m. n.m. 9 0.010 5 3.5 残余物 101 贮藏条件 40℃/75％相对湿度 试验 脆性 提取物 (API) 总含量 损失％ 崩解 (秒) 水含量 (％) 肉眼检 查 总过敏 原活性 (％) 取样(月) 1 n.m. 3 2.9 合格 74 2 n.m. 8 3.7 合格 98 3 0.022 6 4.3 合格 73 6 n.m. n.m. n.m. n.m. n.m. 9 0.003 4 n.m. 残余物 75
表7 产品 含梯牧草25000SQ-U的剂型 贮藏条件 25℃/60％相对湿度 试验 脆性 提取物(API)总 含量损失％ 崩解 (秒) 鉴定 水含 量 (％) 肉眼 检查 总过敏原 活性(％) 取样(月) 开始 0.022 10 合格 3.3 合格 106 1 n.m. n.m. 合格 n.m. n.m. n.m. 2 n.m. n.m. 合格 n.m. n.m. n.m. 3 n.m. n.m. 合格 n.m. n.m. n.m. 6 n.m. n.m. n.m. n.m. n.m. n.m. 9 0.010 160 n.m. 3.5 残余物 99 贮藏条件 40℃/75％相对湿度 试验 脆性 提取物(API)总 含量损失％ 崩解 (秒) 鉴定 水含 量 (％) 肉眼 检查 总过敏原 活性(％) 取样(月) 1 n.m. n.m. 合格 n.m. n.m. n.m. 2 n.m. n.m. 合格 n.m. n.m. n.m. 3 n.m. n.m. 合格 n.m. n.m. n.m. 6 n.m. n.m. n.m. n.m. n.m. n.m. 9 0.050 60 n.m. 3.4 残余物 96
表8 产品 含梯牧草125000SQ-U的剂型 贮藏条件 25℃/60％相对湿度 试验 脆性 提取物(API)总含 量损失％ 崩解 (秒) 鉴定 水含量 (％) 肉眼检 查 总过敏原 活性(％) 取样(月) 开始 0.041 11 合格 2.6 合格 121 1 n.m. 18 合格 2.4 残余物 102 2 n.m. 30 合格 3.0 残余物 126 3 0.055 28 合格 3.6 残余物 102 6 n.m. n.m. n.m. n.m. n.m. n.m. 9 0.0030 58 n.m. 2.9 残余物 99 贮藏条件 40℃/75％相对湿度 试验 脆性 提取物(API)总 含量损失％ 崩解 (秒) 鉴定 水含量 (％) 肉眼 检查 总过敏原 活性(％) 取样(月) 1 n.m. 58 合格 2.5 残余物 96 2 n.m. 25 合格 3.1 残余物 121 3 0.033 25 合格 3.5 残余物 97 6 n.m. n.m. n.m. n.m. n.m. n.m. 9 n.m. 70 n.m. 2.7 残余物 110
实施例3.含草提取物和鱼明胶的过敏原疫苗
表9 成分 单位 剂型 1 剂型 2 剂型 3 功能 活性物质： 梯牧草 SQ-U 2500 25000 75000 活性物质 mg 提取物 0.0047 0.047 0.141 其它成分 净化水 mg 适量至 250mg 适量至 250mg 适量至 250mg 溶剂 明胶(鱼来 源)* mg 16 16 16 基质 甘露醇 mg 14 14 14 基质 氢氧化钠 mg 适量 适量 适量 pH调节到 7.5
制备工艺：
与实施例1相同
固体剂型平均重30mg，平均直径12mm。
分析方法简述：
除未测定脆性和稳定性以外，与实施例1相同。
分析结果：
表10 试验方法 主要过敏原含 量(％)ELISA 总过敏原活性 (％)LIA 崩解(秒) 水含量(％) 强度 2500SQ-U/剂型 97 102 1 5.5 25000SQ-U/剂型 100 89 1 5.3 75000SQ-U/剂型 94 95 1 5.2
该结果提供了含过敏原的固体剂型的实施方案，它在由6.5％鱼明 胶和5.5％甘露醇组成的基质形成剂中含三种不同剂量的草过敏原提 取物。在制备后剂型中的过敏原含量和过敏原活性在可接受的限度内 (参见下面)。此外，结果还表明所有剂型的水含量都在4-7％的优选 范围内。
结果
从实施例1，2和3可以看出，有可能制备瞬间崩解的快速分散固 体过敏原疫苗剂型。发现提取物总含量的损失是可以接受的，即使肉 眼检查在一些泡罩式包装中检测到残余物(主要是含淀粉基质)，残 余物的量即过敏原含量损失在可接受的限度之内，即少于0.5μg提取 物。因此，制备含过敏原的低脆性的非压制快速分散固体剂型是有可 能的。
稳定性数据表明制剂在室温下以及在提高的温度和湿度下保存9 个月是稳定的。过敏原含量和总过敏原活性保持不变(在测定变异内 并符合欧洲药典第三版过敏原产品专论；总过敏原活性为理论值的 50-200％，主要过敏原含量为理论值的65-135％)。
所有制备的批次经过肉眼检查并发现其在可接受的限度之内。
实施例4：过敏原疫苗组合物
制备了含多种不同比例基质形成剂的固体过敏原疫苗剂型。
表11：在不同包装中所制备的含75,000SQ-U梯牧草草花粉提取 物的固体剂型
明胶％ 甘露醇％ 包装类型 破碎负荷 (Kgf) 崩解时间 (秒) 4.00 3.00 5层箔 0.158 ＜2 4.00 3.00 PVC/PVdC 0.199 ＜2 5.00 3.75 5层箔 0.296 ＜2 5.00 3.75 PVC/PVdC 0.264 ＜2 6.00 4.50 5层箔 0.342 ＜2 6.00 4.50 PVC/PVdC 0.386 ＜2 7.00 5.25 5层箔 0.491 ＜2 7.00 5.25 PVC/PVdC 0.421 ＜2
在具有如前所述12mm单位直径的泡罩式包装中制备了所有剂型。 所有剂型均快速地崩解，而且正如可见外观，抗张强度和破碎最大负 荷所评估的那样是坚固的。
表12：在鱼明胶和甘露醇中含75000SQ-U的梯牧草草花粉提取 物的固体剂型
明胶％ 甘露醇％ 抗张强度 (N/mm-2) 破碎最大负 荷(Kgf) 崩解时间 (秒) 5 4 0.239 0.168 ＜2 6.5 5 0.361 0.265 ＜2 6.5 5.5 0.425 0.277 ＜2 5 7 0.389 0.239 ＜2 8 4 0.531 0.308 ＜2 8 7 0.708 0.465 ＜2 7 7 0.543 0.355 ＜2 7 5 0.458 0.311 ＜2 6 4 0.263 0.169 ＜2 6 7 0.381 0.265 ＜2
在具有如前所述12mm单位直径的泡罩式包装中制备了所有剂型。
所有剂型均快速地崩解，而且正如可见外观和破碎最大负荷所评 估的那样是坚固的。
实施例5均一性
对按照实施例1所述的组成和制备的剂型测试过敏原含量的均一 性。分别对含25000和125000SQ-Units的剂型，通过如实施例1所 述的ELISA测定法，以草花粉梯牧草p5效价的均一性测定过敏原含 量。如表13和14所示比较泡罩式包装中10个个体单位。
表13.25000SQ-Unit剂型的含量均一性。 身份(剂型编号) 总过敏原含量％ 1 97.0 2 98.6 3 97.7 4 95.6 5 97.2 6 99.3 7 95.7 8 96.9 9 97.4 10 98.3 平均值 97.4
表14.125,000SQ-Unit剂型的含量均一性 身份(剂型编号) 总过敏原含量％ 1 101.4 2 102.4 3 102.3 4 101.9 5 104.4 6 100.5 7 101.1 8 104.0 9 113.4 10 97.1 平均值 102.8
所有变异均在可接受的限度之内，发现过敏原含量良好的均一性。
实施例6.对狗施用梯牧草草花粉疫苗
按性别将狗平均分配到每个研究组中并按照表15定量给药
表15 分组 组别 剂量水平 (SQ-U) 剂型数a 狗的数目 恢复狗的数目 1 0 1 8 4 2 25000 1 8 3 500000 4 8 4 a组1接受安慰剂型，组2和组3分别接受根据实施例1制备的25000和 125000SQ-U剂型
对狗舌下给药如表15所示的剂量。将剂型置于舌下，使狗嘴保持 闭合以使剂型溶解。连续4周的时间对动物每天给药一次。在治疗期 完成后抽取每组中所有狗的血样。安慰剂组和高剂量组的各4条狗继 续4周的恢复期，之后抽取进一步的血样。
方法：
如下测定血清或血浆中的梯牧草(Phlp)特异性IgG：在4C以10 μl/ml Phlp提取物包被ELISA平板(Costar)过夜。将平板洗4次， 每两次之间浸1分钟，并在室温下用2％酪蛋白缓冲液封闭非特异性结 合1小时。在聚丙烯平板中稀释各份血清或血浆样品，转移到ELISA 平板并在室温下温育2小时。洗涤后，加入HRP标记的抗狗IgG(ICN) 到ELISA平板并在室温下温育1小时。再次洗涤后，加入TMB到ELISA 平板，加盖并在室温下温育20分钟。采用0.5M硫酸终止反应。使用 分光光度计于450nm测定吸光度(OD)。
比较三组狗按1∶200稀释的OD值：安慰剂，25000SQ/剂和500000 SQ/剂。采用Mann-Whitney秩和检验来计算三组间的统计学差异，该 检验是比较两个非配对组的非参数检验。接受500000SQ单位的狗具 有比25000和安慰剂都更高的平均值，表明特异性抗体应答。
结果：
Mann-Whitney检验的P值如表16所示。
表16 组别 P值 安慰剂对25000SQ-U/剂 0.059 安慰剂对500000SQ-U/剂 0.004
P-水平≤0.05＝95％确定性的显著。
在安慰剂与500,000SQ-U/剂组之间有清楚的显著性差异，说明 500,000SQ-U/剂舌下治疗4周产生更高的体液特异性IgG水平。在安 慰剂与25,000SQ-U/剂组之间有交界性的显著性差异，也表明以 25,000SQ-U/剂治疗产生体液特异性IgG水平，尽管较以500000SQ-U/ 剂治疗要弱。
实施例7.梯牧草草花粉疫苗对过敏者的给药
过敏症患者，男性及女性，年龄在18-65岁，诊断为草花粉过敏 症，给予舌下剂量为一，二或三个单剂和/或为多剂的含草花粉提取物 的固体剂型(按照实施例1)，采用设计为随机、双盲、安慰剂对照 的试验。
以进展的单剂评估安全性/耐受性。使用安慰剂和活性片剂(直径 12mm，干重约18mg)的组合以提供所需剂量，按剂量递增方式逐步给 药单剂的安慰剂、2,500、25,000、75,000、125,000和375,000SQ-U。 治疗了47位草花粉过敏症患者。将剂型置于舌下并保持1分钟，然后 吞咽。服用固体剂型后5分钟禁止进食和饮水。观察患者症状两小时。 记录所有副作用，并在每次服药后患者在视觉相似量表上记录耐受性。 发现含所述剂量的剂型被很好地耐受，高至并包括125,000SQ-U，不 良事件在严重程度方面主要是轻微的，并限于口腔和咽喉的“痒”现 象。在安慰剂组也报告有不良事件。例如，随增加的剂量，更频繁地 报道“口痒”，不良事件的进展与进展的剂量相关。
更进一步地，对三个所选剂量2,500、25,000和75,000SQ-U 以及安慰剂测定重复给药的安全性/耐受性。47位草花粉过敏症患者 被分为大小相当的四组，接受每日舌下剂量达8周时间。3个含安慰 剂、2,500和/或25,000SQ-U的片剂(直径12mm，干重约18mg)的 组合被用于得到所需剂量。在患者日志中记录不良事件并收集症状。 在所有三个积极治疗组中，发现剂型中所含的剂量被很好地耐受。随 剂量增加，更频繁地报告不良事件和症状。
因此，所测试的固体剂型以递增剂量和单一的重复剂量治疗对于 临床应用均是切实可行的。
实施例8.含梯牧草草花粉提取物和鱼明胶的过敏原疫苗
根据实施例1表1所述并按照实施例1制备的固体剂型在25 ℃/60％相对湿度下贮藏12个月，通过肉眼检查，崩解，水含量，质量 均一性，鉴定(蛋白质谱)，主要过敏原含量和总过敏原活性的测定 而进行评价。如实施例1所述进行所有测试。除非另有说明，显示对 一组10个片剂一式两份测定的平均值。
表17 贮藏条件：25℃/60％相对湿度 产品： 2500SQ-U/片 试验 肉眼 检查 质量 均一性 崩解 (秒) 总过敏原 活性 (LIA) 主要过敏 原含量 (ELI SA) 脆性 水含量 (％) 0 合格 合格 6 122％ 97％ 0.00％ 6.1％ 12 合格 合格 1 105％ 99％ N/A 4.8％ 产品 25000SQ-U/片 试验 肉眼 检查 ID (SDS -page 质量 均一 性 崩解 (秒) 总过敏原 活性 (LIA) 主要过敏 原含量 (ELI SA) 脆性 水含量 (％) 0 合格 合格 合格 5 108％ 100％ 0.00％ 5.7％ 12 N/A 合格 N/A N/A N/A N/A N/A N/A 产品 125000SQ-U/片 试验 肉眼 检查 ID (SDS -page 质量 均一 性 崩解 (秒) 总过敏原 活性 (LIA) 主要过敏 原含量 (ELISA) 脆性 水含量 (％) 0 合格 合格 合格 7 110％ 99％ 0.00％ 5.4％ 12 合格 合格 合格 1 119％ 104％ N/A 4.2％
肉眼检查：
在研究过程中片剂外观无变化。
崩解：
在研究过程中崩解时间无显著变化。所有试验样品均立即崩解。
质量均一性：
在研究过程中质量均一性无明显变化(对20片的评价)。
水含量：
在研究过程中水含量无明显变化。
鉴定，SDS-page：
在研究过程中蛋白质谱无显著变化；在所有测试时间样品均类似 于参照。
总过敏原活性：
经测定，片剂的总过敏原活性无显著损失(12个月时，对于不同 强度，变化为理论含量的105％-119％，数值在所进行测试的偏差之内)。
主要过敏原含量：
经测定，通过主要过敏原含量测定的片剂过敏原含量无明显损失 (贮藏12个月时，对于不同强度，变化为理论含量的99％-104％，数 值在所进行测试的偏差之内)。
实施例9.含梯牧草草花粉提取物和鱼明胶的过敏原疫苗
组成如实施例1表1所述
按照实施例1制备的固体剂型在25℃/60％相对湿度下贮藏18个 月，通过肉眼检查剂型即片剂和通过测定崩解时间，水含量，质量均 一性，鉴定(蛋白质谱)，主要过敏原含量和总过敏原活性而进行评 价。如实施例1所述进行所有测试。除非另有说明，显示对一组10 个片剂一式两份测定的平均值。
表18 贮藏条件：25℃/60％相对湿度 产品： 2500SQ-U/片 试验 肉眼检 查 质量均一性 崩解 (秒) 总过敏 原活性 (LIA) 主要过敏 原含量 (ELISA) 脆性 水含量 (％) 0mth 合格 合格 6 122％ 97％ 0.00％ 6.1％ 18mth 合格 合格 1 105％ 99％ N/A 5.0％ 产品 125000SQ-U/片 试验 肉 眼 检 查 ID (SDS -page 质量均 一性 崩解 (秒) 总过敏 原活性 (LIA) 主要过敏 原含量 (ELISA) 脆性 水含量 (％) 0mth 合 格 合格 合格 7 110％ 99％ 0.00％ 5.4％ 18mth 合 格 合格 合格 1 117％ 94％ N/A 4.4％
Mth＝月，N/A＝未分析
对于含25,000SQ-Unit/固体剂型的固体剂型，仅进行ID分析。 与0月相比，贮藏18个月后发现类似的ID模式(数据未显示)。
在25℃/60％相对湿度下贮藏18个月以后，发现所述固体剂型是 稳定的，即过敏原含量和总过敏原活性保持不变(在测定变异内并符 合欧洲药典第三版过敏原产品专论；总过敏原活性为理论值的 50-200％，主要过敏原含量为理论值的65-135％)。此外，在研究期间 对于所有测试的过敏原剂量，固体剂型的外观没有变化。另外，在研 究期间，测试的剂型的质量均一性没有变化。至于水含量，没有明显 变化并在优选范围4-7％之内。
实施例10.含梯牧草草花粉提取物和鱼明胶的过敏原疫苗
固体剂型的组成如实施例1的表9中所示。
根据实施例1制备固体剂型并使之经受稳定性试验。
根据实施例1进行所有试验。
稳定性结果
表19 产品 2500SQ-U/剂型 贮藏条件 25℃/60％相对湿度 试验 肉眼检查 崩解 总过敏原 活性(LIA) 主要过敏 原含量 (ELISA) 水含量 (％) 取样(月) 0 合格 1秒 129％ 82％ 5.0％ 1 合格 1秒 87％ 98％ 5.3％ 3 合格 1秒 130％ 116％ 5.2％ 6 合格 1秒 97％ 100％ 5.2％ 贮藏条件 40℃/75％相对湿度 1 合格 1秒 97％ 90％ 5.2％ 3 合格 1秒 124％ 114％ 5.5％ 6 合格 1秒 101％ 93％ 5.9％
表20 产品 25000SQ-U/剂型 贮藏条件 25℃/60％相对湿度 试验 肉眼 检查 ID (SDS-page) 崩解 总过敏原 活性(LIA) 主要过敏 原含量 (ELISA) 水含量 (％) 取样(月) 0 合格 与参照相似 1秒 101％ 93％ 4.7％ 1 n.m. 与参照相似 n.m. n.m. n.m n.m. 3 n.m. 与参照相似 n.m. n.m. n.m. n.m. 6 n.m. 与参照相似 n.m. n.m. n.m. n.m. 贮藏条件 40℃/75％相对湿度 1 合格 与参照相似 n.m. n.m. n.m. n.m. 3 合格 与参照相似 n.m. n.m. n.m. n.m. 6 合格 与参照相似 n.m. n.m. n.m. n.m.
表21： 产品 75000SQ-U/剂型 贮藏条件 25℃/60％相对湿度 试验 肉眼 检查 ID (SDS-page) 崩解 总过敏原 活性(LIA) 主要过敏 原含量 (ELISA) 水含 量 (％) 取样(月) 0 合格 与参照相似 1秒 109％ 77％ 5.3％ 1 合格 与参照相似 1秒 75％ 92％ 5.1％ 3 合格 与参照相似 1秒 113％ 108％ 5.0％ 6 合格 与参照相似 1秒 99％ 95％ 5.2％ 贮藏条件 40℃/75％相对湿度 1 合格 与参照相似 1秒 79％ 92％ 5.3％ 3 合格 与参照相似 1秒 105％ 100％ 5.5％ 6 合格 与参照相似 1秒 99％ 95％ 5.9％
n.m.＝未测定
通过对剂型(即片剂)的肉眼检查以及通过测定崩解时限，水含 量，质量均一性，鉴定(蛋白质谱)，主要过敏原含量和总过敏原活 性(没有显示所有数据)判定剂型质量。
在25℃/60％相对湿度和40℃/75％相对湿度下贮藏6个月以后， 发现所有剂量的固体剂型都是稳定的，即过敏原含量和总过敏原活性 保持不变(在测定变异内并根据EMEA第三版过敏原产品专论；总过敏 原活性为理论值的50-200％，主要过敏原含量为理论值的65-135％)。 此外，在研究期间，对于所有测试的过敏原剂量，固体剂型的外观没 有变化。另外，在研究期间所测试的剂型的质量均一性没有变化。至 于水含量，在研究期间没有发现明显变化。尽管所有测试样品都在优 选范围4-7％之内，观察到所有剂量在40℃/75％相对湿度下贮藏过程中 水含量有略微增加的趋势。
实施例11.在含梯牧草草花粉提取物和鱼明胶的过敏原剂型中测 定水含量和水分活性
组成
表22 成分名称 制剂P (5.5％鱼明胶) 制剂F (4％鱼明胶) 功能 净化水 适量至250.00mg 适量至250.00mg 溶剂 梯牧草 2500，25000或 75000SQ-U 2500，25000或 125000SQ-U 活性物质 0.0047mg，0.047 mg，0.141mg 0.0047mg，0.047 mg，0.235mg 明胶(鱼来源) 16mg 10mg 基质 甘露醇 14mg 7.5mg 基质 氢氧化钠 适量至pH7.5 适量至pH7.5 pH调节剂
根据实施例1制备固体剂型
用Rotronic Hygroskop BT-RS1(Rotronic ag，瑞士)测定各种 固体剂型的水分活性。每次测定使用10个片剂。稳定的读出信号表明 达到了平衡，并采用下列关系式把相对湿度随后换算为水分活性。
aw＝Pw/＝RHequ/100
其中
aw是样品的水分活性，
Pw是样品上的水蒸气分压，
Px w是纯水上的水蒸气压力，而
RHequ(ERH：，相对湿度平衡)是样品的相对湿度。
采用带有774Oven样品处理器的756 Karl Fischer库仑计 ((Metrohm，Herisau，瑞士)测定片剂的水含量。将1-3个片剂置 于玻璃小瓶内，并用PTFE包被的帽(Metrohm，Herisau，瑞士)密封。 然后将样品小瓶放置在774Oven样品处理器((Metrohm，Herisau，瑞 士)中，样品中存在的任何水分在130C的温度下蒸发。蒸发的水分通 过氮气被转移到含Hydranal-Coulomat Oven试剂(Riedel-de-Haen) 的反应室，随后根据产品说明通过Karl Fischer滴定进行对释放的 水量的定量。结果见表24。
表23.含梯牧草草花粉提取物和鱼明胶的多种过敏原剂型的水分活性 和水含量 样品 水分活性 水含量(％) N 平均值 SD N 平均值 SD 安慰剂， P制剂2500SQ-U P制剂25000SQ-U P制剂75000SQ-U， F制剂2500SQ-U F制剂25000SQ-U F制剂125000SQ-U 3 2 2 2 1 1 1 0.46 0.45 0.41 0.41 0.44 0.46 0.44 0.022 0.004 0.001 0.005 - - - 3 3 3 3 3 3 3 5.59 4.93 4.67 4.66 5.45 5.19 4.80 0.060 0.071 0.021 0.053 0.070 0.055 0.056
SD＝标准偏差
尽管某些的水含量在5％以上，所有固体剂型的平均水分活性在 0.41-0.46之间。
实施例12：含梯牧草花粉提取物的过敏原疫苗
组成
表24 成分 组成％W/W 剂型1 安慰剂 剂型2 25,000 剂型3 75,00 明胶鱼 (Norland， 加拿大) 6.0 14mg 14mg 14mg 甘露醇 5.08 12.7mg 12.7mg 12.7mg API(草花粉 提取物) 0 25,000SQ-U/ 75,000SQ-U NaOH 适量至pH7.5 适量至pH7.5 适量至pH7.5 适量至pH7.5 净化水 适量至250mg 适量至250mg 适量至250mg 适量至250mg 总％/湿填充 重量 100％ 250mg 250mg 250mg 干重 27.7mg 27.7mg 27.7mg
除采用来自加拿大Norland的鱼明胶以外，如实施例1所述制备 制剂。固体剂型平均直径13mm。
表25 剂型剂量 脆性(提取物(API)总含量 的损失％) 25,000SQ-单位 0.000* 75,000SQ-单位 0.000*
该结果提供了含过敏原的固体剂型的又一个实施方案，它在由 6.0％鱼明胶和5.08％甘露醇组成的基质形成剂中包含两种不同剂量的 草过敏原提取物。按照实施例1所述方法采用脆性试验测试所述剂型。 结果显示，在作为过敏原释放而检测的脆性方面，所述制剂是稳定的。
过敏症是一种复杂的疾病。许多因素促成致敏事件。其中个体的 易感性被定义为迄今仍了解不足的一些基因之间的相互作用。另一个 重要因素是过敏原接触超过某阈值。包括污染，儿童期感染，寄生虫 感染，肠道微生物等的一些环境因素可能在致敏过程中很重要。一旦 个体被致敏并且建立了过敏性免疫应答，仅微量过敏原的存在就足以 转变为症状。
过敏性疾病的自然病程通常在两个水平伴有恶化。首先，有症状 和疾病严重程度的进展。例如，从花粉热进展到哮喘。其次，引起不 适的过敏原大多数时候会发生播散而造成过敏性多反应性。长期炎症 导致粘膜防御机制总体的弱化，引起非特异性刺激并最终破坏粘膜组 织。婴儿可能最初对食物例如牛奶敏化，产生湿疹或胃肠疾病；然而， 绝大多数时候他们会自发地不再有这些症状。这些婴儿在其随后的生 活中处于发生吸入过敏症的危险中。
在我们呼吸的空气里最普遍的某种粒径微粒当中发现最重要的 过敏原来源。这些来源非常普遍并且包括草花粉(grass pollen)和 屋尘螨粪便微粒，它们合在一起是形成约50％所有过敏症的原因。在 全世界有重要性的还有动物皮屑例如猫和狗的皮屑，其它花粉例如艾 属植物花粉，和微小真菌例如链格孢属。在地域性的基础上其它的花 粉可以占优势，例如在北欧和中欧的桦属花粉，在美国东部和中部的 豚草属，以及在日本的日本雪松花粉。昆虫例如蜜蜂和黄蜂毒液以及 食物各自占所有过敏原的大约2％。
过敏，即I型超敏反应，是由对外来非致病物质的不适当的免疫 反应所引起。过敏症的重要临床表现包括哮喘，花粉热，湿疹和胃肠 道疾病。过敏反应很迅速而且在与引起不适的过敏原接触20分钟内就 可以到达峰值。而且，过敏反应是特异性的，含义即特定个体对特定 过敏原敏感，而该个体不必定对已知可引起过敏疾病的其他物质表现 过敏反应。过敏表型特征在于靶器官粘膜的显著炎症和在循环中以及 肥大细胞和嗜碱性白细胞表面上存在IgE类过敏原特异性抗体。
过敏发作是由外来过敏原与过敏原特异性IgE抗体的反应引发， 此时抗体结合到在肥大细胞和嗜碱性白细胞表面上的高亲和力IgE特 异性受体。肥大细胞和嗜碱性白细胞含有预先形成的介质，即组胺， 类胰蛋白酶和其他物质，它们在两个或多个受体结合的IgE抗体的交 联后释放。IgE抗体通过同时结合一个过敏原分子而交联。在肥大细 胞表面上受体结合的IgE的交联还导致负责吸引嗜酸性细胞、过敏原 特异性T细胞和其他类型细胞到过敏性反应位点的信号分子的释放。 这些细胞与过敏原、IgE和效应细胞相互作用导致在遇到过敏原后 12-24小时发生症状重新出现(晚期反应)。
过敏性疾病的处理包括诊断和含预防性治疗的治疗。过敏症诊断 涉及过敏原特异性IgE的验证和过敏原来源的鉴定。在很多情况中细 致的既往病史可能足以诊断过敏症和鉴定引起不适的过敏原来源材 料。然而绝大多数时候，诊断依赖于客观测定，例如皮肤针刺试验， 血液检测，或诱发试验。
治疗选择有三种主要类别。首先的可能是避免或减少过敏原接 触。尽管避免过敏原是显而易见的，例如对于食物过敏原，但对于屋 尘螨过敏原可能很困难或昂贵，或对于花粉过敏原也许是不可能的。 其次和使用最广泛的治疗选项是开处经典对症药物如抗组胺药和类固 醇。对症的药物是安全有效的；然而，它们不能改变疾病的自然病因， 并且它们不能控制疾病的播散。第三种可供选择的治疗方法是特异性 过敏疫苗接种，其在多数情况下减轻或缓解所讨论的过敏原引起的过 敏症状。
常规的特异性过敏接种是对过敏性疾病的病因治疗。它干扰基本 免疫机制，导致患者免疫状态持久改善。因此，相对于对症药物治疗， 特异性过敏接种的保护效应延伸到治疗期之后。一些接受治疗的患者 被治愈，此外，大多数患者感受到疾病严重程度和所经历症状的减轻， 或者至少阻止病情加重。因此，特异性过敏接种具有预防作用，减少 花粉热发展为哮喘的危险，同时减少发展新的敏感性的危险。
作为成功的过敏接种的基础的免疫学机制未被确切了解。例如针 对特定病原体的抗体产生的特异性免疫应答被认为是适应性免疫应 答。此应答可以与先天免疫应答区别开，后者是一种针对病原体的非 特异性反应。过敏疫苗是要解决适应性免疫应答的问题，其中包括具 有抗原特异性的细胞和分子，例如T细胞和产生抗体的B细胞。没有 相应特异性的T细胞帮助，B细胞就不能成熟为产生抗体的细胞。参 与刺激过敏性免疫应答的T细胞主要是Th2型。在Th1和Th2细胞之 间建立新的平衡已被提出对特异性过敏接种的免疫学机制是有益和重 要的。这是由Th2细胞的减少、从Th2向Th1细胞的偏移还是Th1细 胞的上调引起的，存在争议。最近，调节T细胞已经被认为对过敏免 疫接种机制是重要的。根据这种模型，调节T细胞，即Th3或Tr1细 胞，下调相应抗原特异性的Th1和Th2细胞两者。虽然存在这些不确 定性，但通常认为有效疫苗必须具有刺激过敏原特异性T细胞优选TH1 细胞的能力。
尽管有其效力和优点，特异性过敏接主要出于两个原因没有被广 泛应用。一个原因是与常规接种程序有关的不便，包括反复接种，例 如在数月内多次注射。更重要的另一个原因是过敏性副反应的危险。 针对感染因子的普通接种使用单次或几次高剂量免疫接种有效进行。 然而，由于病理性免疫应答已在进行，这种策略不能用于过敏接种。
因此常规的特异性过敏接种采用在延长时间期限内应用的多次 皮下免疫接种进行。该过程被分为提高剂量和维持阶段的两个阶段。 在提高剂量阶段，应用增加剂量，典型地延续16个星期，以微剂量开 始。当达到所推荐的维持剂量时，该剂量被用于维持阶段，典型地每 6个星期进行注射。由于过敏性副反应(原则上尽管极为罕见但可危 及生命)的危险，每次注射后患者必须处于医学监护30分钟。另外， 临床诊所应当有所预备以应对急诊处理。毫无疑问，基于不同给药途 径的疫苗会消除或减少目前给予皮下地疫苗所固有的过敏性副反应的 危险，并且也将促进更广泛的使用，甚至可能在家自己接种。
改进用于特异性过敏接种的疫苗的尝试已经进行30多年并且包 括多种途径。一些方法通过修饰IgE反应性而着重于过敏原自身。另 一些则关注这种给药途径。
免疫系统通过口腔和口腔粘膜可以到达，例如，过敏原舌下给药 是已知的给药途径。
按照惯例，采用口腔粘膜途径的过敏疫苗包括定期给药过敏原溶 液，间隔至少一天。相比之下，给予的治疗(累积)维持剂量超出维 持相当的皮下剂量5-500倍。这种剂型和给药途径的明显缺点是与患 者精确和均匀自身给药正确剂量相关的问题(可能必须给予数滴，每 滴的均匀性，应用部位准确性等)。此外，需要冷藏药物并且在制剂 中包括防腐剂在内。
Netien等人(″Galenica 16-Medicaments homeopathiques″ed.2， 1986，77-99页)公开了将液体溶液浸到乳糖、蔗糖或此类混合物的固 体微粒(颗粒)或常规压制片上以用于药物如过敏原的舌下给药。
DD-A.0107208公开了一种制备含过敏原的常规压制片的方法。 给药后该片剂被唾液溶解，随后过敏原通过口腔粘膜吸收。制剂中包 含一种水不溶性赋形剂，即滑石，以及石蜡和脂肪酸，其不理想，因 为它会在患者口中留下不适的残余。此外，在制片过程中产生的摩擦 力可能对过敏原的物理稳定性有损害。
EP 278877公开了一种舌下用的药物组合物，其中将过敏原溶液 喷到固体载体小球上，使固体载体包有过敏原溶液。所得的制剂据说 迅速地但非瞬间地崩解。然而，没有公开如何达到该目的。此外，该 制剂包含乳糖形式的还原糖，所述还原糖易与过敏原反应。
为了确保尽可能多的某种过敏原的给药剂量呈现于口腔粘膜，并 且崩解产物与粘膜的接触时间最大，非常重要的是剂型在与口腔唾液 接触后即使崩解。本领域中已知快速分散的固体剂型，其在口腔中迅 速地释放出活性成分。
美国专利No 4,371,516公开了在水中迅速崩解的含活性成分的药 物剂型。该药物剂型包括在10秒内崩解的开放式基质网状结构的载体 材料。
在WO 00/61117中公开的基于冷干鱼明胶的载体被设计为在口腔 中给药时与唾液接触后瞬间释放活性成分。
在WO 00/44351中公开的冷干的改性淀粉载体被设计为在口腔中 给药时与唾液接触后瞬间释放活性成分。
WO 99/21579公开了一种含疫苗和口腔用佐剂的快速分散剂型。
WO 02/13858公开了含口腔用快速溶解“饼”形式的疫苗的快速 溶解药物组合物。WO 02/13858的发明目的似乎是提供在胃肠道中保 持完整的病毒或细菌疫苗。通过在饼中混入诸如碳酸钙的抗酸剂保护 抗原对抗胃的酸性内容物而实现该目的。
WO 00/51568公开了一种快速崩解压制低脆性片剂，它被设计为 与唾液接触在口腔中不超过30秒溶解，形成易于吞咽的悬浮物。
在美国专利No 4,371,516中声称所述制剂对口腔疫苗有用。在 WO 00/61117，WO 00/44351，WO 99/21579和WO 02/13858中，也声 称所述发明针对非感染免疫调节状况例如全身性过敏状况如花粉热。 然而，在所有这些申请中均没有公开怎样制备快速分散的过敏原疫苗 固体剂型的技术信息或实施例。例如，在所有公开的制剂中均没有指 出某种过敏原适当的剂量。给予患者正确的过敏原剂量非常重要，因 为过量可能诱发患者过敏性休克。此外，没有给出有关这类制剂的稳 定性或脆性的适当措施的识别和指示。
发明概述
本发明涉及含至少一种过敏原和基质且适于口腔粘膜施用过敏原 的快速分散非压制固体剂型形式的药物产品，其特征在于含过敏原的 剂型是稳定、足够坚固的，而且患者使用时不会释放危险量的过敏原 残余物。
此外，适于口腔粘膜给药的快速分散非压制固体剂型包含基质形 成剂和过敏原，其中过敏原是稳定的，而且该剂型相对于过敏原释放 而言具有低脆性，该剂型溶解迅速而且不需要佐剂。
尤其是本发明涉及适于过敏原给药的药物产品，它包含
适于口腔粘膜给药的快速分散非压制固体剂型，包括：
(a)由至少一种基质形成剂形成的基质，和
(b)使个体对所述过敏原脱敏的有效剂量的过敏原，
其中
(c)在25℃和60％的相对湿度下保存3个月后，所述剂型中过敏 原含量的损失低于最初过敏原含量的50％，和
(d)在经受脆性测试时，所述固体剂型的过敏原损失低于大约0.5 μg过敏原提取物或低于约0.05μg主要过敏原。
在本发明的一个优选实施方案中，固体剂型包含鱼明胶和甘露醇 作为基质形成剂。
在本发明另一个优选的实施方案中，固体剂型包含淀粉和甘露醇 作为基质形成剂。
本发明还提供制备这些固体剂型的方法以及通过施用这些固体剂 型治疗过敏症的方法。
发明详述
本发明基于多项惊人的发现，它们均不能预先推测而合理预期会 成功。首先，所基于的发现是有可能使用快速分散非压制剂型用于过 敏原给药，而且有可能通过使用这样的制剂获得有效的过敏症治疗。 尤其是，已经表明的确有可能经由口腔粘膜途径使用快速分散非压制 固体剂型递送足量过敏原至患者免疫系统，而不引起不希望水平的副 作用。此外，本发明提供了获得治疗作用而无不可接受的副作用的相 关剂量水平。
其次，本发明所基于的发现是不使用佐剂通过使用快速分散非压 制剂型可获得有效治疗。
第三，本发明所基于的发现是可以把过敏原配制为快速分散非压 制剂型，同时满足过敏原对稳定性和低脆性所需的特殊要求。尤其是， 已经表明有可能平衡对立的需求，即一方面剂型应当快速分散，而另 一方面既要稳定又要有低脆性，以获得足够限度的快速分散、稳定并 具有低脆性的剂型。
过敏原蛋白质易于降解，其受到它们所处的环境中多种因素的影 响。寻求恰当的过敏症治疗尤其是过敏免疫是过敏原以治疗相关剂量 被完整递送到免疫系统。因此，过敏原必须在制备、贮藏和使用过程 中保持稳定。本研究已经表明事实上可将过敏原蛋白质配制成快速分 散非压制剂型，就过敏原剂量和过敏原活性而言其是稳定的。此外， 还很惊奇地发现这些制剂在室温下也确实是稳定的。该发现对于最终 产品的处理过程具有特殊意义的重要性。在生产工厂、运输或药房储 藏过程中的冷冻储藏经常与高成本有关，因为冷藏设备必须严密监控 而且投资可靠的冷藏设备非常昂贵。此外，就患者的依从性而言，也 优选剂型可以贮藏在室温下。
因此，本研究已经表明事实上可能将过敏原蛋白质制成无需佐剂 就治疗有效的快速分散非压制剂型。此外这种含过敏原的固体剂型在 有利条件下下稳定。
当过敏原蛋白质被制成快速分散非压制剂型，还有利的是所得的 剂型在直接接触时不会大量释放过敏原到周围的环境或操作剂型的使 用者。在先的非压制快速分散固体剂型的特征在于由于非压制基质的 固有性质(脆，易碎，几乎象薄脆饼)，与压制片相比，其机械强度 低。在例如包装、贮藏、运输和患者使用剂型的过程中，含过敏原的 残余微粒可以释放到环境和患者。当活性成分是过敏原时这是特别有 害的，因为过敏原可以在易感者中引起过敏反应或诱发过敏反应，这 种致敏或过敏性应答是剂量依赖性的。已提出了例如尘埃过敏原形式 的环境污染的最高允许水平(视所讨论的过敏原而定)应低至2微克 的主要过敏原/克屋尘(Allergy.Principles and practice(1993，4. ed.)，Mosby-Year book，Vol.I 520页)。
从含基质形成剂，活性成分和其它可选择物质的固化系统中除去 液体从而制备非压制快速分散的固体剂型，优选在原位制备。原位制 备过程通常包括在诸如泡罩式包装的最终容器内从活性成分和基质形 成赋形剂的固化系统中除去溶剂。商业上所采用的原位技术不能对剂 型进行常规包衣。在大多数情形中剂型包衣的应用会影响固体剂型的 分散，从而危害剂型的即时释放特性。
因此，尽管这些要求的性质对立，本研究已经表明事实上可能将 有效剂量的过敏原蛋白质制成快速分散非压制剂型，同时获得低脆性 并保持快速分散特性。
上述所有发现都获得实验室研究或适用的采用实验动物的临床前 试验或临床试验的支持。
术语“快速分散剂型”指在口腔接受后少于约90秒内崩解的剂型， 优选少于约60秒，优选少于约30秒，更优选少于约20秒，甚至更优 选在口腔内少于约10秒，甚至更优选少于约5秒，以及最优选少于约 2秒。本发明的固体剂型可以是片剂、胶囊，糖锭或小胶囊的形式。
术语“非压制”指固体剂型通过从含基质形成剂，活性成分和其 它适宜成分的固化系统中除去液体，得到含过敏原的固体基质而制备。
术语“固体剂型”指非液体的单位剂型或口腔给药时的粉剂，因 此“固体剂型”指例如含单位剂量活性成分的片剂。术语片剂，固体 剂型和疫苗形式在此可互换使用。
术语“基质形成剂”指任何药学上可接受的在固体剂型中将充当 活性成分载体的水溶性或水分散性赋形剂。
术语“赋形剂”指除活性成分以外可以添加到制剂中的任何成分。
术语“在所述剂型中过敏原含量的损失”指在例如贮藏，运输和 使用过程中剂型中过敏原的例如降解或失活。可以以生物活性/效价的 损失或过敏原实际含量的损失来测定损失。优选地，将过敏原含量的 损失测定为至少一种主要过敏原的损失。例如可以采用Obispo等人所 述的ELISA法(Allergy，1997，52，806-813页，使用过敏原特异性试 剂)测定损失。
术语“过敏原含量由所述剂型的损失”指在例如贮藏，运输和使 用过程中剂型中过敏原的例如释放。可以以生物活性/效价的损失或过 敏原实际含量的损失来测定损失。优选地，将过敏原含量的损失测定 为至少一种主要过敏原的损失。例如可以采用Obispo等人所述的 ELISA法(Allergy，1997，52，806-813页，使用过敏原特异性试剂) 测定损失。
术语“稳定”指在最终容器中在25℃和60％相对湿度下贮藏3 个月后测定为生物活性/效价的损失或至少一种主要过敏原的含量损 失的过敏原含量损失小于最初含量的50％的剂型。例如可采用上述的 ELISA法测定损失。
术语“低脆性”指在受到外力时从剂型损失的含过敏原材料的量。 如果含过敏原材料损失包含少于0.5μg过敏原提取物或0.05μg主要 过敏原/固体剂型，则该固体剂型具有足够的脆性和坚固性以进行运 输，贮藏和操作。对于本发明的目的，可以采用本发明的方法测定脆 性。
根据下列等式计算“抗张强度σ”
σ＝3Wa×9.8Nmm-2/2d2b
其中w＝破碎最大负荷(kgF)
a＝支持物间的距离
d＝快速分散固体剂型的厚度(mm)
b＝快速分散固体剂型的直径(mm)
“破碎最大负荷”指使用适当的仪器(例如CT5，Engineering Systems，1Loach Court，Radford Bridge Road，Nottingham NG81NA， UK)在三点弯曲测试中破碎一个单位需要的最大力。
术语“口腔粘膜给药”指为了获得活性成分的局部或全身效应， 将剂型置于舌下或口腔中的任何其它位置以使活性成分得以与患者口 腔或咽部粘膜接触的一种给药途径。口腔粘膜给药途径的一个例子是 舌下给药。
术语“舌下给药”指为了得到活性成分的局部或全身效应，将剂 型置于舌下的一种给药途径。
术语“过敏原”指任何天然存在的蛋白质或蛋白质混合物，其已 经被报道在反复暴露于个体时可诱发过敏性反应，即IgE介导的反应。 天然存在的过敏原的例子包括花粉过敏原(树，杂草，药草和草花粉 过敏原)，螨过敏原(来自例如屋尘螨和贮藏螨(storage mite))， 昆虫过敏原(吸入性，唾液和毒液来源的过敏原)，动物过敏原，来 自例如狗，猫，马，大鼠、小鼠等的例如唾液，毛发和皮屑，真菌过 敏原和食物过敏原。可以以过敏原提取物，纯化过敏原，修饰过敏原 或重组过敏原或重组突变过敏原，任何超过30个氨基酸的过敏原片段 或其任意组合的形式使用过敏原。
在这里所用的表述“过敏原提取物”指通过提取生物学过敏原来 源材料而获得的提取物，一般如下所述：“Allergenic extracts”， H.Ipsen等人，第20章，“Allergy，principle and practise”(Ed. S.Manning)1993，Mosby-Year Book，St.Louis。这样的提取物可 以通过对水溶性材料进行水提取，后接纯化步骤如过滤，以获得溶液 即提取物。然后提取物可以进行进一步纯化和/或加工处理如冷冻干 燥，除去基本上所有的水。通常地，过敏原提取物包括蛋白质和其它 分子的混合物。过敏原蛋白质经常被分类为主要过敏原，中间过敏原， 次要过敏原或无分类。过敏原提取物通常既包括主要过敏原也包括次 要过敏原。主要过敏原通常占一般过敏原提取物的约5-15％，更常为 约10％。过敏原的分类是基于对特定过敏原的临床重要性的评估，如 下面所给出。在提取物中发现的重要的主要过敏原的例子包括草组1 和5和6过敏原(例如Phlp1，5和6)，尘埃螨组1和2过敏原(例如 Derp1，Derp2)，树花粉过敏原1(Betv1)，雪松花粉过敏原1 和2(例如Cryj1，Cryj2)，豚草属花粉1和2(Amba1，Amba2)， 猫过敏原(即Feld1)。一般过敏的人将对一种或多种主要过敏原敏感 并反应，进而还可对次要过敏原敏感并反应。
在此所述的过敏原提取物的量指这种过敏原提取物的干物质含 量。
优选地，干物质的水含量不超过10重量％，更优选5重量％。
在此处所用的表述“生物学过敏原来源材料”指含一种或多种过 敏原的任何生物材料。这种材料的实例为螨PMB(纯螨体)或WMC(全 螨培养物)，来自例如草，药草，杂草和树的脱脂或非脱脂花粉，动 物毛发和皮屑，毛皮，真菌菌丝体和孢子，昆虫体、毒液或唾液和食 物。
生物学过敏原来源材料可以包含污染材料，例如对于过敏原花粉 来源材料而言，污染材料为外来花粉以及植物和花的碎屑。
污染程度应被减到最小。优选地，污染物的含量不应超过生物来 源材料的10％(W/W)。
用标准蛋白质测定例如BCA或Lowry法测定，过敏原提取物通常 含过敏原提取物干物质含量的至少10％蛋白质，其余部分由其它“非 蛋白质材料”组成，其可以是诸如源自生物学过敏原来源的脂质，糖 类或结合水的成分。
在800微巴以下的压力冷冻干燥液体过敏原提取物持续高达100 小时的时间以除去水分，可获得冻干材料，过敏原提取物可以以这种 形式配制和贮藏。
在过敏原提取物的技术领域中没有国际公认的标准化方法。存在 多种不同的提取物强度单位，即生物效价。采用的方法和使用的单位 通常测定过敏原含量和生物活性。关于这点的例子是SQ-单位(标准 化质量单位)，BAU(生物学过敏原单位)，BU(生物学单位)，UM (质量单位)，IU(国际单位)和IR(反应指数)。因此，如果使用 除在此所公开以外的来源的提取物，需要将它们针对在此公开的提取 物进行标准化以确定它们SQ单位或任何上述单位的效价。该主题见 “Allergenic extracts”，H.Ipsen等人，第20章，“Allergy， principle and practise”(Ed.S.Manning)1993，Mosby-Year Book， St.Louis and Lowenstein H.(1980)ArbPaul Ehrlich Inst 75：122。
给定提取物的生物效价，即体内过敏原活性，取决于许多因素， 最重要的是提取物中主要过敏原的含量，其随着生物学来源材料的组 成而变化。
被用于得到期望的生物效价的过敏原提取物克数量随所讨论的提 取物类型而变化，对于给定类型的提取物，过敏原提取物的量随提取 物实际的生物效价在每批之间有所不同。
对于给定批次的提取物，用来得到期望的生物效价的过敏原提取 物的克数量可以采用下列步骤测定：
a)采用一种或多种体内免疫学试验测定不同量的参照提取物的生 物效价以建立生物效价与参照提取物量之间的对应关系。所述体内免 疫学试验的实例是皮肤针刺试验(SPT)，结膜诱发试验(CPT)，过 敏原攻击支气管(BCA)和监测一种或多种过敏症状的各种临床试验， 参见例如Haugaard等人，J Allergy Clin Immunol，Vol.91，No. 3，pp 709-722，March 1993。
b)在生物效价和参照提取物之间建立的对应关系的基础上，选择 用于本发明剂型的一个或多个相关剂量的生物效价，适当考虑以下因 素的平衡：i)治疗或缓解过敏症状的作用，ii)体内免疫学试验所记录 的副作用，和iii)i)和ii)在个体间的变异性。实现平衡以得到最大 适当治疗效果而无不可接受水平的副作用。本领域的技术人员熟知平 衡这些因素的方法。
所发现的一个或多个相关剂量的生物效价可以表示为任何可用的 生物效价单位，例如SQ单位，BAU，IR单位，IU，参见上文。
c)由参照提取物制备一种或多种生物效价参照标准提取物，如果 使用的话，基于在分配到一个或多个相关剂量的生物效价单位值，计 算参照标准提取物的生物效价单位值，例如下面所述可从FDA获得对 于BAU的这种标准。
d)对于每种提取物类型的参照标准提取物，选择多个评估提取物 生物效价的参数。这种评估参数例如总过敏原活性、限定的主要过敏 原的量和提取物的总体分子组成。可以采用体外竞争性免疫测定法检 测总过敏原活性，例如ELISA和MagicLite发光免疫测定法(LIA)， 使用针对用标准方法所获得的提取物的标准化抗体混合物，例如在小 鼠和兔中产生的抗体，或过敏患者血清混合物。主要过敏原的含量可 以例如采用火箭免疫电泳法(RIE)定量并与参照标准比较。可以采用 例如交叉免疫电泳法(CIE)和十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS-PAGE)检查总体分子组成。
e)对于给定批次的未知生物效价的提取物(测试提取物)，可 以如下确定用于获得期望的生物效价水平的提取物量(用在本发明的 固体剂型中的有效剂量)：对于每种所选择的评价参数，采用如上所 述的相关检测方法，将测试提取物与参照标准提取物相比较，并且基 于检测结果计算具有期望的生物效价的提取物的量。
SQ-单位：根据ALK-Abello A/S的“SQ生物效价”标准化方法 确定SQ-单位，其中100,000SQ单位等于标准皮下维持剂量。视过 敏原的来源和所用的制备方法而定，通常1mg的提取物含100,000- 1,000,000SQ-单位。利用免疫测定可以检测精确的过敏原量，即主 要过敏原总含量和总过敏原活性。
BAU(生物学过敏原单位)是按照FDA对过敏原产品的要求确定的 生物效价单位，如下所述：“Quantitative determination of relative potency of allergenic extracts”(“Methods of teallergen products testing Laboratory”“ELISA competition assay”.第15 页，#49N-0012，FDA，1993年10月)。按照上述方法，含100,000 SQ-单位的草提取物剂量等于2600-4700BAU的含量。同样，按照上述 方法可以评估其它提取物。
术语“用于脱敏的有效剂量过敏原”将解释为在以单一剂量或增 加剂量服用一次或反复服用时导致例如适应性免疫应答并因此使过敏 症患者脱敏的剂量。优选地，该术语将表示按照治疗方案(持续一段 时间，从几次应用到数月内至少每天一次应用)重复给药所述固体剂 型之后诱导适应性免疫应答所必需的各剂型中过敏原的量。优选脱敏 包括剂量给药后过敏症状缓解。临床过敏症状包括鼻炎，结膜炎，哮 喘，荨麻疹，湿疹，其中包括皮肤、眼睛、鼻，上下呼吸道的反应， 常见症状例如眼和鼻的发红和痒，鼻痒和流涕，咳嗽，哮鸣，呼吸短 促，瘙痒和组织肿胀。
在这里使用“含量均一性”指剂量单位相对于指定剂量的变化。
在这里所用的“水含量”指采用Karl Fischer滴定原理定量测 定的固体剂型单位中残余水的含量。该方法基于以下原理，即给定量 的I2导致等量水的转化(欧洲药典(EP)第3版，2.5.12)。
在这里所用的“水分活性aw”是指样品中的有效水。水分活性测 定采用本领域技术人员公知的方法进行，例如冷镜露点技术，用改变 电阻或电容的感应器或采用氯化锂电极测定相对湿度：
可根据下列等式计算aw：
aw＝p/ps＝ERH(％)/100，
其中
p＝产品表面水蒸气的分压
ps＝饱和压力，或者在产品温度下水蒸气在纯水上的分压
ERH＝平衡相对湿度
术语“大约”或“近似地”表示在由本领域普通技术人员确定的 特定值的可接受范围内，其部分取决于该值是如何测定或确定的，例 如检测系统的限制，例如，“大约”可以表示给定值的至多20％的范 围，优选至多10％，更优选至多5％，并且仍更优选至多1％。
现已惊奇地发现，本发明的固体剂型提供一种口腔粘膜过敏原药 物产品，其提供有效过敏原剂量，以剂量-反应方式给出过敏原特异 性免疫应答，并且具有可接受的副作用。
更进一步地发现制备含过敏原的低脆性的非压制快速分散固体剂 型的实际可能性。该剂型足够坚固，在患者使用时不会释放危险量的 残余物。
此外，惊奇地发现这些制剂在室温下是稳定的。
过敏原在含水环境中会不同程度地特别易于降解，例如在过敏原 水溶液或水含量高和/或水分活性高的产品中。
欧洲药典关于过敏原产品的专题论述和“Note for guidance on allergen products”，CPMP(London 13，March 1996)规定，对于冷 冻干燥的产品(即装在小瓶中的过敏原提取物)，水分含量应当不超 过5％，而且这些产品应当冷冻贮存(-20℃)。冷藏(2-8℃)也是对 保质期有限的液基舌下制剂的要求。已经惊奇地发现，包括不稳定过 敏原在内的过敏原在室温条件下是稳定的。甚至是水含量高于规定的 5％的最大水平的本发明剂型在室温下也是稳定的。不受理论约束，这 可以由以下事实解释：快速分散固体剂型的赋形剂结合剂型中的残余 水并降低过敏原固体剂型的水分活性。因此，通过降低制剂的水分活 性，可能得到过敏原无降解的稳定制剂，即使水含量高于对小瓶装的 过敏原提取物规定的最大水平5％也是可能的。
水分活性是对产品保质期有影响的一个重要因素。众所周知，产 品的水分活性影响细菌的生长以及药品的稳定性、效价和一致性。由 于蛋白质相对脆弱的性质，它的稳定性也受水分活性显著影响。大多 数蛋白质必须维持构象以保持活性。维持低的水分活性水平有助于防 止或诱发构象变化，而这对于确保过敏原形式的蛋白质稳定是重要的。 无论是否由酶引起，蛋白质水解降解也受水分活性影响。
进一步地认为，水含量将影响固体剂型的机械强度。通常，高值 将增加固体剂型变得更容易潮解的危险，而较低值将影响固体剂型的 坚固性，例如，固体剂型变得更加脆而易碎。
采用本领域技术人员已知的方法进行水分活性测定，例如冷镜露 点技术，用改变电阻或电容的感应器测定相对湿度或采用氯化锂电极。
固体剂型的水分活性优选不超过0.70，并且优选在0.1-0.7之间， 更优选0.2-0.6，更优选的是在0.3-0.5之间以及最优选的是在 0.4-0.5之间。
根据如实施例1所述的方法测定的固体剂型的水含量优选不超过 25％，优选0.1-20％，更优选的是在0.5-15％之间，更优选的是在2-8％ 之间，更优选的是在4-7％之间，最优选的是在4.5-6％之间的水。
根据本发明的一个实施方案提供了快速分散固体剂型的过敏原药 物产品，它在口腔中与唾液接触迅速溶解，因此使过敏原紧密接触粘 膜的免疫相关组织并使过敏原解决这些问题。天然存在的过敏原的例 子包括花粉过敏原(树，药草，杂草和草花粉过敏原)，昆虫过敏原 (吸入性，唾液和毒液过敏原，例如螨过敏原，蟑螂和蠓过敏原，膜 翅目昆虫毒液过敏原)，动物毛发和皮屑过敏原(来自如狗，猫，马， 大鼠，小鼠等)以及食物过敏原。来自树，草和药草的重要花粉过敏 原是诸如源自山毛榉目，木樨科，松目和悬铃木科的分类目，包括例 如白桦(桦属)，桤木(桤木属)，鹅耳枥(鹅耳枥属)和橄榄(橄 榄属)，雪松(日本柳杉和桧属)，悬铃树(悬铃属)，禾本科的目， 包括例如以下属的草：黑麦草属，梯牧草属，早熟禾属，狗牙根属， 鸭茅属，绒毛草属，墙草属，黑麦属和高粱属，Astrales和荨麻目的 目包括例如以下属的药草：豚草属，蒿属和墙草属。其他重要的吸入 过敏原是那些来自尘螨属和埋内欧尘螨的屋尘螨，储藏螨例如害嗜鳞 螨，食甜螨属和食酪螨属，那些来自蟑螂，蠓和蚤例如蠊，大蠊属， 摇蚊和猫栉首蚤猫亚种，和那些来自哺乳动物例如猫(猫属)，狗(犬 属)，牛(牛属)和马(马属)的过敏原，毒液过敏原包括例如源自 蜇或叮咬的昆虫例如按膜翅目昆虫分类目的那些，包括蜜蜂(蜜蜂总 科)，黄蜂(胡蜂总科)和蚂蚁(蚂蚁总科)。来自真菌的重要吸入 过敏原是例如那些源自链格孢属和支孢霉属的过敏原。
在本发明更优选的实施方案中，过敏原是Betv1，Alng1，Cor a1and Carb1，Quea1，Cryj1，Cryj2，Cupa1，Cups1， Juna1，Juna2，juna3，Olee1，Ligv1，PlaI1，Plaa2， Amba1，Amba2，Ambt5，Artv1，Artv 2Parj1，Parj2， Parj3，Salk1，Avee1，Cynd1，Cynd7，Dacg1，Fesp1， HolI1，Lolp1和5，Pha a1，Pasn1，Phlp1，Phlp5，Phl p6，Poap1，Poap5，Secc1，Secc5，Sorh1，Derf1，Der f2，Derp1，Derp2，，Derp7，Derm1，Eurm2，Glyd1，Lep d2，Blot1，Tyrp2，Blag1，Blag2，Pera1，Feld1，Can f1，Canf2，Bosd2，Equc1，Equc2，Equc3，Musm1，Rat n1，Apism 1，Apim2，Vesv1，Vesv2，Vesv5，Dolm1，Dol m2，Dolm5，Pola1，Pola2，Pola 5，Soli1，Soli2，Sol i3和Soli4，Alta1，Clah1，Aspf1，Bosd4，Mald1，Gly m1，Glym2，Glym3，Arah1，Arah2，Arah3，Arah4，Ara h5或者这些中任何的源自分子育种的改组(shufflant)杂种(Maxygen 有限公司)
在本发明最优选的实施方案中，过敏原是草花粉过敏原或尘螨过 敏原或豚草属过敏原或雪松花粉或猫过敏原或白桦过敏原。
在本发明的另一个实施方案中，快速分散固体剂型含至少两种不 同类型的过敏原，其源于相同的过敏原来源，或源于不同的过敏原来 源。例如快速分散固体剂型包含草组1，草组2/3，草组5和草组6 过敏原或者螨组1和组2过敏原，分别来自不同的螨和草种类，杂草 过敏原如短小和巨大豚草属过敏原，不同的真菌过敏原如链格孢属和 支孢霉属，树过敏原如白桦，榛，角树，栎属和桤木属过敏原，食物 过敏原如花生，大豆和牛奶过敏原。
掺入快速分散固体剂型的过敏原可以是提取物，纯化过敏原，修 饰过敏原，重组过敏原或重组过敏原突变体的形式。过敏原提取物可 以天然含有相同过敏原的一个或多个同种型，而重组过敏原典型地仅 代表一个过敏原同种型。在一个优选的实施方案中过敏原是提取物的 形式。另一个优选的实施方案中过敏原是重组过敏原。又一个优选的 实施方案中过敏原是天然存在的低IgE结合突变体或重组的低IgE结 合突变体。
过敏原可以以等摩尔量存在或者存在的过敏原的比例可以变化， 优选高至1∶20
本发明又一个优选的实施方案中，低IgE结合过敏原是根据WO 99/47680或WO 02/40676或PCT/DK03/00322(″过敏原突变体″)的过 敏原。
几种实验室测定可用于表征过敏原。使用最广泛的技术是十二烷 基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)，等电聚焦(IEF)，交叉免疫 电泳法(CIE)和火箭免疫电泳法(RIE)。个体过敏原的定量可以采 用多种定量免疫电泳技术(QIE)，放射免疫扩散(RIE)或者采用酶 联免疫吸附测定(ELISA)进行。总过敏原活性的测定最常用放射过敏 原吸附测定(RAST)，Magic Lite测定(LIA)或相关技术进行。也 可以使用基于ELISA的技术。
有关通常应用的测定生物效价的公认测定的指南可见例如 Notefor Guidance on Allergen Product；The European Agency for the Evaluation of Medicinal Product，CPMP_BWP_243_96，London， 1996。
将过敏原分类为主要过敏原可以采用几项测试。如果至少25％的 患者表现强IgE结合(评分3)和50％的患者表现至少中度结合(评分 2)，则该过敏原通常分类为主要过敏原；结合的测定通过CRIE(交叉 放射免疫电泳法)(CRIE强结合，即在1天后在X-光片上可见IgE 结合；CRIE中度结合，即在3天后结合；CRIE微弱结合，即在10天 后结合)。至少10％的患者表现为IgE强结合，则该过敏原分类为中 间过敏原；少于10％患者的表现出明显特异性的结合，就将其分类为 次要过敏原。也可以使用其它的方法测定IgE结合，例如IgE印迹法。
在经典的增加剂量脱敏法中，快速分散固体剂型形式的过敏原剂 量增加到某个最大值。单位剂量剂型的优选效价从150-1,000,000 SQ-U/剂型，更优选的效价是500-500,000SQ-U/剂型，更优选的效 价是500-375,000SQ-U/剂型，更优选的效价是2500-375,000SQ-U/ 剂型，更优选的效价是2500-250,000SQ-U/剂型，更优选25,000-250, 000SQ-U/剂型，更优选25,000-125,000SQ-U/剂型，更优选25, 000-100,000SQ-U/剂型和最优选25,000-75,000SQ-U/剂型。
在本发明的另一个实施方案中固体剂型是重复的单一剂量，优选 在2500-375,000SQ-U/剂型范围之内，更优选2500-250,000SQ-U/ 剂型，更优选25,000-250,000SQ-U/剂型，更优选25,000-125,000 SQ-U/剂型，甚至更优选25,000-100,000SQ-U/剂型，和最优选 25,000-75,000SQ-U/剂型。
在一个特别优选的实施方案中固体剂型包含草过敏原提取物，其 中效价是150-1,000,000SQ-U/剂型，更优选效价是500-500,000 SQ-U/剂型，更优选的效价是500-375,000SQ-U/剂型，更优选的效 价是2500-375,000SQ-U/剂型，更优选的效价是2500-250,000SQ- U/剂型，优选的效价是25,000-250,000SQ-U/剂型，更优选 25,000-125,000SQ-U/剂型，更优选25,000-100,000SQ-U/剂型和 最优选25,000-75,000SQ-U/剂型。
在又一个实施方案中本发明固体剂型的效价是约5-50,000BAU/ 剂型，更优选的效价是15-25,000BAU/剂型，更优选的效价是约 15-17,600BAU/剂型，更优选的效价是约65-17,600BAU/剂型，更 优选的效价是约65-15,000BAU/剂型，更优选的效价是约 650-15,000BAU/剂型，更优选650-6,000BAU/剂型，更优选 650-4,700BAU/剂型，最优选650-3,500BAU/剂型．
在本发明的另一个实施方案中固体剂型是重复的单一剂量，优选 在约65-17,600BAU/剂型的范围之内，更优选约65-15,000BAU/剂 型，更优选约650-15,000BAU/剂型，更优选650-6,000BAU/剂型， 甚至更优选650-4,700BAU/剂型，最优选650-3,500BAU/剂型。
在一个特别优选的实施方案中固体剂型包含草过敏原提取物，其 中效价是约5-50,000BAU/剂型，更优选的效价是15-25,000BAU/ 剂型，更优选的效价约15-17,600BAU/剂型，更优选的效价约 65-17,600BAU/剂型，更优选的效价是约65-15,000BAU/剂型，更 优选的效价约650-15,000BAU/剂型，更优选650-6,000BAU/剂型， 更优选650-4,700BAU/剂型，最优选650-3,500BAU/剂型。
1mg过敏原提取物通常包含100,000-1,000,000SQ-单位。这 意味着1,000,000SQ被包含在1mg提取物到10mg过敏原提取物中， 100,000SQ被包含在0.1mg提取物到1mg过敏原提取物中。以相似 的方式，任何SQ剂量都可以转化为过敏原提取物剂量范围。在这个基 础上，以SQ给出的上述剂量范围可以被重新计算为mg或μg过敏原 提取物的剂量范围，其中对于范围的SQ低限，采用相应过敏原提取物 范围的低限，而其中对于范围的SQ上限，采用相应过敏原提取物范围 的上限。
因此，在又一个实施方案中本发明的固体剂型具有约0.15μ g-10mg/剂型的过敏原提取物含量，更优选约0.5μg-5mg/剂型的过敏 原提取物含量，更优选约0.5μg-3.75mg/剂型的过敏原提取物含量， 更优选约2.5μg-3.75mg/剂型的过敏原提取物含量，更优选约 25μg-2.5mg/剂型的过敏原提取物含量，更优选约25μg-2.5mg/剂型 的过敏原提取物含量，更优选约25μg-1.25mg/剂型，甚至更优选约 25μg-1mg/剂型，最优选约25μg-0.75mg/剂型。
在本发明的另一个实施方案中固体剂型是重复的单一剂量，优选 在约2.5μg-3.75mg/剂型的范围内，更优选2.5μg-2.5mg/剂型，更 优选约25μg-2.5mg/剂型，更优选约1.5μg-1.25mg/剂型，甚至更 优选约25μg-1mg/剂型，最优选约25μg-0.75mg/剂型．
在又一个实施方案中，本发明的固体剂型具有的主要过敏原含量 约0.015μg-1mg/剂型，更优选约0.05μg-500μg/剂型，更优选 约0.05μg-375μg/剂型，更优选约0.25μg-375μg/剂型，更优 选约0.25μg-250μg/剂型，更优选约2.5g-250μg/剂型，更优 选约2.5μg-125μg/剂型，甚至更优选约2.5μg-100μg/剂型， 最优选约2.5μg-75μg/剂型。
在本发明的另一个实施方案中固体剂型是重复的单一剂量，优选 在约0.25μg-375μg/剂型的范围内，更优选约0.25μg-250μg/剂 型，更优选约2.5g-250μg/剂型，更优选约2.5μg-125μg/剂 型，甚至更优选约2.5g-100μg/剂型，最优选约2.5g-75 μg/剂型。
取决于所讨论过敏原来源，几个主要过敏原可以构成主要过敏原 含量。通常主要过敏原的数目是在1-10，大多数为1-5。
主要过敏原可以被包含在过敏原提取物中或被重组制备。重组主 要过敏原的用量可以与包含这种主要过敏原的过敏原提取物中的相同 或以更高剂量。更高剂量被认为更有效，但也被认为伴有潜在更频繁 或更严重的副作用的危险。
在又一个优选的实施方案中主要过敏原包括草组1过敏原例如 phlp1，lolp1，sorh1，dacg1，cynd1，hol11，phaa1， 草组2/3过敏原例如.phlp2/3，lolp 2/3，草组5过敏原例如phl p5，lolp5，dacg5，poap5，草组6过敏原例如phlp6，poa p6，树花粉组1过敏原例如betv1，alng1，cora1，carb1， 螨组1过敏原例如derp1，derf1，eurm1，螨组2过敏原例如 derp2，derf2，eur m2，猫过敏原例如feld1，雪松组1和组 2过敏原例如cryj1，cryj2，短小和巨大豚草属花粉过敏原例如 amba1，amba2，amb1，ambt2。
发现剂量反应效应，参见口腔粘膜给药的固体过敏原剂型的实施 例6。因为过敏个体是不均一的一类，当他们接触到即使同一过敏原 时也表现出不同的症状以及其症状严重程度的不同，因此有效剂量可 能变化。一些患者可以耐受更大剂量而没有出现不能接受的副作用， 而其他的人高度敏感。在一些情况中可以给予逐步升高的剂量以达到 高剂量水平，因为通常相信更大的剂量被认为是更有效的剂量。据信 对于大多数一般过敏人群而言，本发明的过敏原有效剂量将优选在65 BAU/固体剂型-17,600BAU/固体剂型之间，但低至4和高至47,000 BAU的剂量可能适用于其它过敏症患者。关于这个同样地，过敏原提 取物0.5μg-3.75mg/剂型的剂量或者主要过敏原含量0.05μg-375μ g/剂型的剂量可以适合普通的过敏症个体。
对于主要过敏原的低过敏原性变体，即引起速发或迟发过敏反应 的能力降低的过敏原，本发明的剂型优选每剂型含10-100倍更多的主 要过敏原。这种低过敏原性变体可以是重组或天然来源的。
本发明的固体剂型的过敏原含量可以采用常规的免疫测定法测 定，例如CIE(交叉免疫电泳法)，RIE(放射免疫电泳法)和SDS-PAGE (十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳)和针对提取物成分如主要过 敏原的免疫测定法例如ELISA和Magic Like特异性IgE测定(LIA)。
为了确保最终产品足够的保质期，优选在制备以后在物理和化学 特性例如过敏原的效价和含量，机械坚固性和感官特性方面不显著改 变的剂型。
为了本发明的目的，藉由主要过敏原含量评价活性成分即过敏原 的稳定性。进一步地还优选通过过敏原效价检测如总过敏原活性来评 估稳定性。
固体剂型的“最初过敏原活性”或“至少一种主要过敏原的最初 含量”表示在制备工艺结束后最终剂型中“过敏原活性”或“至少一 种主要过敏原的含量”的值。
固体剂型的“理论过敏原活性”或“至少一种主要过敏原的理论 含量”表示在被制成固体剂型之前，一剂加入过敏原(例如以提取物的 形式)的“过敏原活性”或“至少一种主要过敏原的含量”的值。
至少一种主要过敏原的过敏原含量损失优选少于总最初含量的 50％，更优选少于总最初含量的30％，更优选少于总最初含量的20％， 更优选少于最初含量的15％，更优选少于最初含量的10％，更优选少于 最初含量的5％，更优选少于最初含量的2％。
更进一步地根据实施例1中所述方法总过敏原活性损失应当优选 少于总最初活性的50％，更优选少于总最初活性的30％，更优选少于总 最初活性的20％，更优选少于总最初活性的15％。
通常，根据ICH(例如ICH指南ICQ/Q1AR2(被CPMP采用，2003 年三月，出版号CPMP/ICH/2736/99))和FDA的现行指南进行稳定性测 试。稳定性测试的条件经常称为1-4区条件。1和2区代表EC，日本 和美国的气候条件。通常，本发明的固体剂型在其最终容器中应在“长 期”条件25℃/60RH下优选保持稳定至少3个月，更优选至少6个月， 更优选至少12个月，甚至更优选至少18个月，最优选至少2年，更 优选在中间条件30℃/65RH下，甚至更优选在“加速条件”40℃/75RH 下。
为了确保固体剂型在贮藏过程中和患者使用时足够坚固，剂型需 要对外力具有某种抗性，但同时固体剂型必需在口中快速崩解。
因此，除了活性成分即过敏原的稳定性外，还可通过其它参数评 估固体剂型，例如机械坚固性如脆性，抗张强度和破碎最大负荷。另 外，固体剂型的稳定性可以通过物理特性如分散时间和感官特性如剂 型的视觉外观进行评估。
可以通过例如测定本发明固体剂型的破碎最大负荷或抗张强度来 评估这些参数。由可计算抗张强度的公式中明显看出，所获得的抗张 强度值取决于许多可变化的参数。例如，固体剂型的厚度或直径将引 起数值的变化。因此，破碎最大负荷被认为是评价本发明的固体剂量 单位坚固性的更准确参数。
在一个实施方案中固体剂型的破碎最大负荷不小于0.05Kgf并低 于0.9KgF.优选破碎最大负荷在0.05-0.9KgF之间的剂型，更优选 在0.1-0.8KgF之间，最优选在0.1-0.6KgF之间。
在本发明又一个实施方案中固体剂型的抗张强度小于1.0N/mm2， 更优选低于0.9N/mm2。
为了确保在吞咽前过敏原最大限度地暴露于粘膜的免疫有效组 织，优选地，快速分散剂型与唾液接触后在口中瞬间或快速崩解。在 优选的实施方案中固体剂型在少于约90秒内崩解，优选在少于约60 秒内，优选在少于约30秒内，更优选在少于约20秒内，更优选在少 于约15秒内，甚至更优选在口腔中少于约10秒内，甚至更优选少于 约5秒内，最优选在口腔少于约2秒内。
在本发明的优选实施方案中，本发明的组合物是含固体网状结构 的过敏原和任何水溶性或水分散性基质的快速分散固体剂型。通过从 固体状态的组合物升华溶剂而得到网状结构，所述组合物含过敏原溶 液和基质。更优选地，通过冻干而获得网状结构。
构成本发明的快速分散固体剂型中部分基质的药学上可接受赋形 剂是基质形成剂和其它适宜的赋形剂例如抗酸剂，稀释剂，增强剂， 粘膜粘着剂，增香剂，矫味剂，防腐剂，抗氧化剂，表面活性剂，粘 性增强剂，着色剂，pH调节剂，甜味剂等。这些赋形剂都以配制过敏 原治疗剂领域的技术人员所了解的方式按照常规药学实践来选择。
本发明适用的基质形成剂包括源自动物或植物蛋白质的赋形剂， 例如明胶，糊精和大豆，小麦和亚麻籽蛋白质；树胶如阿拉伯胶，瓜 尔胶，琼脂和黄原胶；多糖；淀粉和改性淀粉，alignates；羧甲基纤 维素；角叉菜胶；右旋糖酐；果胶；合成聚合物例如聚乙烯吡咯烷酮； 和多肽/蛋白质或多糖复合物例如明胶-阿拉伯胶复合物。明胶是水溶 性胶体大分子的非均匀混合物。可以通过对诸如骨，皮肤，腱，韧带 等动物来源的富含胶原材料的水解作用得到平均分子量分布的非均匀 混合物。明胶可以源自哺乳动物例如牛，猪或非哺乳动物例如温水或 冷水鱼。明胶可以是水解或非水解的，交联或非交联的。它们可进一 步是胶凝或非胶凝型，非凝胶型典型地源自于冷水鱼。在另一个特别 的实施方案中采用淀粉。淀粉是糖类聚合物的复杂混合物。
适用于本发明的其它基质形成剂包括糖类如甘露醇，右旋糖，半 乳糖和海藻糖；环状糖例如环糊精；无机盐例如磷酸钠，氯化钠和硅 酸铝；以及具有2-12个碳原子的氨基酸例如甘氨酸，L-丙氨酸，L- 天冬氨酸，L-谷氨酸，L-羟脯氨酸，L-异亮氨酸，L-亮氨酸和L-苯丙 氨酸。
固体剂型优选包含至少约50％W/W的配料溶液的至少一种基质形 成剂。在此文中所用的术语“配料溶液”表示在固化步骤前所制备的 基质形成剂、过敏原和其它任选赋形剂的制剂的非固体体积。
在本发明的一个实施方案中，用于形成固体剂型的配料溶液包含 约5-30％W/W，更优选约5-20％W/W，甚至更优选在约5-12％W/W之间的 至少一种基质形成剂。
对配料溶液干物质含量的需求也将取决于片剂的尺寸。优选本发 明的固体剂型直径在约3到约30mm之间，更优选在约5到约20mm之 间。本发明的固体剂型优选重量在约1到约100mg之间，更优选在约 10到约50mg之间，最优选在约25到约35mg之间。本发明的固体剂 型优选厚度在约0.5到约7.5mm之间，更优选在约1到约5mm之间。
已经发现含鱼明胶和甘露醇作基质形成赋形剂的快速分散固体剂 型在稳定性，视觉外观，低脆性，抗张强度，破碎最大负荷和口感方 面特别有利。在优选的实施方案中快速分散固体剂型包含过敏原以及 鱼明胶和甘露醇形式的基质形成剂的固体网状结构。为了获得固体网 状结构，应当控制鱼明胶与甘露醇的比。在一个优选的实施方案中鱼 明胶与甘露醇的比例是约2∶20到约20∶1，更优选从约2∶10到约 10∶1，最优选约3∶5.5到约6.5∶3。
但又一个实施方案中鱼明胶与甘露醇的比例是4∶3。
在另一个实施方案中鱼明胶与甘露醇的比例是6.5∶5.5。
在又一个实施方案中鱼明胶与甘露醇的比例是6.0∶5.08。
本发明的固体剂型可以由配料溶液制备，首先将其冷冻，然后冷 冻干燥。在优选的实施方案中鱼明胶含量为配料溶液的约2-20％W/W 之间，而甘露醇的含量为配料溶液的约1-20％W/W之间。在另一个优选 的实施方案中鱼明胶的含量为配料溶液的约2-10％W/W之间，而甘露醇 的含量为配料溶液的约1-10％W/W之间。在另一个更优选的实施方案中 鱼明胶的含量为配料溶液的约3-6.5％W/W之间，而甘露醇含量为配料 溶液的约3-5.5％W/W之间。
在又一个实施方案中基质包含占配料溶液约4％W/W的鱼明胶和占 配料溶液约3％W/W的甘露醇。
在另一个实施方案中基质含占配料溶液约6.5％W/W的鱼明胶和占 配料溶液约5.5％W/W的甘露醇。
在又一个实施方案中基质含占配料溶液6.0％W/W的鱼明胶和占配 料溶液5.08％W/W的甘露醇。
还已经发现含淀粉和甘露醇作为基质形成赋形剂的快速分散固体 剂型在稳定性，视觉外观，低脆性，抗张强度，破碎最大负荷和口感 方面特别有利。在优选的实施方案中快速分散固体剂型包含过敏原和 基质形成剂的固体网状结构，所述基质形成剂为淀粉和甘露醇形式， 淀粉优选从例如马铃薯，小麦，玉米，谷物或稻米预糊化。为了获得 固体网状结构，应当控制淀粉与甘露醇的比例。在一个优选的实施方 案中淀粉与甘露醇的比例是约2∶20到约20∶1，更优选从约2∶10 到约10∶1，最优选约3∶5.5到约6.5∶3。
但又一个实施方案中淀粉与甘露醇的比例是1∶1。
由配料溶液制备本发明的固体剂型，首先将其冷冻，随后冷冻干 燥。在优选的实施方案中淀粉的含量为配料溶液的约2-20％W/W之间， 而甘露醇的含量为配料溶液的约1-20％W/W之间。在另一个优选的实施 方案中淀粉的含量为配料溶液的约2-10％W/W之间，而甘露醇的含量为 配料溶液的约1-10％W/W之间。在又一个优选的实施方案中淀粉的含量 为配料溶液的约3-6.5％W/W之间，而甘露醇为配料溶液的约3-5.5％W/W 之间。
在另一个实施方案中基质含有占配料溶液约4.4％W/W的淀粉和占 配料溶液约4.4％W/W的甘露醇。
为避免过敏原的变性，沉淀并确保稳定的产品，优选在含过敏原 和基质的溶液固化之前调节pH。对溶液中不同过敏原的最适宜pH几 乎跨越整个pH范围，如同它们的等电点(pI)那样。过敏原混合物像 提取物同样地具有对溶解性和稳定性而言最适宜的pH，其由类似提取 物中各过敏原浓度之类的因素所决定。因此可以想对本发明制剂个别 单独确定可行的pH范围。通过对不同pH的制剂进行加速稳定性研究 来确定对所讨论过敏原的最适宜pH。
优选地，包含过敏原提取物的基质组合物应当调节pH在3.5-10 之间，更优选4-9，最优选6-9。
此外本领域公知，，离子强度可以是影响冷冻干燥的固体剂型的 稳定性的参数，主要通过其对冷冻干燥工艺的影响。也已知高离子强 度影响沉淀。因此，必须采用本领域技术人员公知的测定方法建立最 适宜的离子强度。优选地，10μg/ml的提取物的离子强度在1-1500 μS/cm之间(S＝Simens)，更优选300-800μS/cm，最优选约500μ S/cm，对于含基质和过敏原的系统，优选离子强度在1-2000μS/cm， 更优选约500-1500μS/cm。
本发明的固体剂型可以更进一步含有着色剂，增香剂，pH调节剂 或矫味剂。适宜的着色剂包括红色，黑色和黄色氧化铁以及FD&C 染剂例如FD&C蓝No.2和FD&C红色No.40。适宜的增香剂包括薄 荷，覆盆子，甘草，橙，柠檬，葡萄柚，焦糖，香草，樱桃和葡萄香 料以及其组合。适宜的pH调节剂包括柠檬酸，酒石酸，磷酸，盐酸和 马来酸。适宜的甜味剂包括天冬酰苯丙氨酸甲酯，乙酰舒泛K和竹芋 蛋白。适宜的矫味剂包括碳酸氢钠，离子交换树脂，环糊精包合物， 吸附物或微囊化活性剂。
通常佐剂被用于增强过敏原的吸收以及增强过敏原的免疫刺激 性。
在本发明另一个优选的具体实施方案中，本发明的快速分散固体 剂型不含佐剂。
同样惊奇地发现，不必向快速分散固体剂型中引入佐剂以增强所 讨论过敏原的免疫刺激性。换句话说，如实施例6所例证，在此所述 的固体剂型可以产生特异性免疫应答。
在本发明的一个实施方案中至少一种佐剂被引入本发明的剂型 内。适宜佐剂的例子是铝盐，诸如Alhydrogel的氢氧化铝，无毒细 菌碎片，细胞因子，霍乱毒素(及其脱毒部分)，霍乱毒素亚单位b， 壳聚糖，大肠杆菌的同源热不稳定片段(及其脱毒部分)，皂甙，细 菌产物例如脂多糖(LPS)和胞壁酰二肽(MDP)，脂质体，CpG(免疫 刺激性DNA序列)，微粒聚合物形式的丙交酯/乙交酯同±共聚物等。 所讨论的过敏原不能穿透要穿过的屏障这一事实经常作为理由以在过 敏原药物产品例如疫苗中使用佐剂。因此佐剂可以用作吸收增强剂或 它们可以充当免疫刺激剂。然而佐剂的使用可能会有严重的缺点，例 如免疫应答多种机制的非预期刺激作用，系统性红斑狼疮或影响粘膜 的屏障能力因而让有害物质通过。此外，从工业的角度来看，除有关 药品注册的大量文件要求以外，添加佐剂还构成进一步的制造和材料 成本。
非压制快速分散的固体剂型某种程度上可以是粘膜粘着性的。然 而在本发明优选的实施方案中，为增加剂型与口腔粘膜的接触时间， 向所述剂型中进一步加入粘膜粘着赋形剂可能是必要的。适宜的粘膜 粘着赋形剂是聚丙烯酸聚合物例如卡波姆和卡波姆衍生物；纤维素衍 生物例如羟丙基甲基纤维素，羟乙基纤维素，羟丙基纤维素和羧甲基 纤维素钠；天然聚合物例如明胶，藻酸钠，果胶和甘油。
在本发明又一个实施方案中，为了有足够的接触时间用于例如在 口腔粘膜吸收，溶解在唾液中的过敏原剂型直到给药后3分钟才被吞 咽。
在又一个优选实施方案中，过敏原剂型在口腔中不被稀释，例如 通过摄入类似水的液体，直到5分钟后。
过敏症治疗也存在不良事件或副作用。特别是，旨在调节致敏个 体中正在进行的反应的治疗可能引起在给予过敏原后诱发副作用的危 险。通常观察到的与口腔粘膜治疗有关的副作用据报道发生在眼，鼻， 口，上下气道中而且取决程度可接受。最常见的是痒现象。不良反应 例如过敏性休克、上下气道肿胀、呼吸困难、血压下降、心脏停搏是 不能被接受的。
本发明的快速分散固体剂型可以被制造和包装在含多个固体剂型 的一次性容器例如多剂量容器中。在美国专利Nos.5,729,958和 5,343,762中所述的方法和材料特别受青睐。适宜的多剂量容器的例 子是全铝泡罩式包装，由聚合物例如聚丙烯制成的泡罩式包装，PVC 的泡罩式包装和由PVC/PVdC薄片制成的泡罩，用例如层压至砑光牛皮 纸的铝箔密封，Aclar或Triplex。
在一个实施方案中，快速分散剂型被制造和包装由PVC/PVdC薄片 制成、用层压至砑光牛皮纸的铝箔密封的泡罩式包装中。在另一个关 于此的实施方案中泡罩式包装包在适宜大小的铝袋中，铝袋由层压至 砑光牛皮纸的铝箔制成。
在另一个实施方案中快速分散剂型包装在由铝制成并用层压至砑 光牛皮纸的铝箔密封的泡罩式包装中。
在又一个实施方案中快速分散剂型被包装在由例如五层铝箔制成 并用层压至砑光牛皮纸的铝箔密封的多层泡罩式包装中。
在另一个实施方案中，快速分散剂型被包装在由铝箔制成并用层 压至砑光牛皮纸的铝箔密封的泡罩式包装中，其包装方式使儿童难以 打开泡罩式包装，例如儿童安全包装。
因为这种非压制剂型的固有性质，通常这种类型的固体剂型表现 出与压制片剂相比低机械强度的特点。这可能导致在从泡罩囊中取出 时和在患者使用剂型的过程中释放含过敏原的残余微粒。在多数情况 下这是无关紧要的，或主要是美观的问题。然而，当活性成分是过敏 原时这是特别有害的，因为低量的过敏原可以在有倾向的人身上引发 过敏反应或使先前非致敏的个体敏化。通常接触为对例如花粉过敏原 或尘螨过敏原累积的主要过敏原蛋白质10μg/年的范围，其足以导致 致敏或症状。
在操作固体剂型时，过敏原可能接触到如气道或眼睛的靶器官并 在过敏的人中引起反应。一个剂型可能含的过敏原和人在一年或更长 时间所接触到的一样多，取决于接触的性质。采用结膜过敏原攻击可 以引起过敏症患者的眼睛症状。基于这样的攻击研究，可以估计引起 结膜症状需要多少过敏原提取物。在患有严重的草花粉引起的花粉热 的患者群体中，提出引起结膜症状的草花粉提取物的最低剂量是3000 SQ-U/ml×0.05ml＝150SQ-U(中值)(S.R.Durham，S.M.Walker， E.M.Varga，M.R.Jacobson，F.O′Brien，W.Noble，S.J.Till， Q.A.Hamid，和K.T.Nouri-Aria.Long-term clinical efficacy of grass-pollen immunotherapy.N.Engl.J.Med.341(7)：468- 475，1999)。
为了确保在打开多剂量容器时来自固体剂型的含过敏原的残余物 不释放到环境中，重要的是剂型的脆性尽可能地低，而不影响口服给 药后过敏原从剂型的释放。
因此，在一个实施方案中，在人工处理的过程中可从每一固体剂 型中释放少于约500SQ-U，更优选少于约250SQ-U，更优选少于约 150SQ-U，更优选少于约75SQ-U，更优选少于约25SQ-U，最优选少 于约10SQ-U。
在另一个实施方案中，在人工处理的过程中可从每一固体剂型中 释放少于约13BAU，更优选少于约7BAU，最优选少于约5BAU，更 优选少于约1.95BAU，更优选少于约0.65BAU，最优选少于约0.26 BAU。
在又一个实施方案中，在人工处理的过程中可从每一固体剂型中 释放少于约0.5μg过敏原提取物，更优选少于约0.25μg过敏原提取 物，最优选少于约0.15μg过敏原提取物，更优选少于约0.075μg 过敏原提取物，更优选少于约0.025μg过敏原提取物，最优选少于约 0.01μg过敏原提取物。
在另一个实施方案中，在人工处理的过程中可从每一固体剂型中 释放少于约0.05μg主要过敏原，更优选少于约0.025μg主要过敏原， 最优选少于约0.015μg主要过敏原，更优选少于约0.0075μg主要过 敏原，更优选少于约0.0025μg主要过敏原，最优选少于约0.001μg 主要过敏原。
在本发明的一个优选实施方案中，在取出剂型后多剂量容器中尘 埃的残余含量不超过总过敏原含量的约2％，更优选固体剂型总过敏原 含量的约0.5％，更优选固体剂型总过敏原含量的约0.2％，最优选固体 剂型总过敏原含量的约0.1％，更优选约0.01％，更优选约0.005％，， 更优选固体剂型总过敏原含量的约0.003％，最优选固体剂型总过敏原 含量的约0.001％
在此所用的“脆性测试”应指测定固体剂型粉碎，破碎，成为粉 末的容易程度的任何适宜的测试。用于本发明的适宜的脆性测试描述 如下并包括欧洲药典第三版(EP 3rd ed.)制药技术操作2.9.7。通 常片剂的脆性测试按照EP 3rd ed.2.9.7.和USP<1216>的描述 进行，其中评估片重的损失作为完整剂型的参数。欧洲药典第三版 2.9.7的脆性测试使用直径286mm和厚度约39mm的转鼓。片剂的样品 放在100目筛上并使用风压或软刷去除任何松散的碎渣。称重片剂， 随后放置在转鼓内。在转鼓内片剂被转动100次。依照刚才所述，去 除松散的碎渣并再次称重片剂。然后结果表示为质量损失并计算为最 初质量的百分比。按照USP<1216>，可以使用直径在283-291mm之 间，厚度在36-40mm之间，转速为25±1rpm的转鼓。相应地，采用 这样的方法可以通过肉眼检查和测定片重评估当前剂型的完整性。或 者，由于本发明的剂型重量轻，可以采用对所讨论的过敏原特异性的 免疫测定法代替称重。
已经发现使用改良脆性测试是有用的工具来评价哪种组合物就坚 固性和机械强度而言是最稳定的。
在一个实施方案中，在任何对待测组合物施加足够外力的合适的 脆性测试中，测定为过敏原释放量的所述固体剂型的脆性少于约500 SQ-U每固体剂型，更优选少于约250SQ-U每固体剂型，更优选少于 约150SQ-U每固体剂型，更优选少于约75SQ-U每固体剂型，更优选 少于约50SQ-U每固体剂型，更优选少于约25SQ-U每固体剂型，最 优选少于约10SQ-U每固体剂型。
在更优选的实施方案中，在按照欧洲药典第三版所进行的脆性测 试中，作为过敏原释放量所测定的脆性是少于约500SQ-U每固体剂型， 更优选少于约250SQ-U每固体剂型，更优选少于约150SQ-U每固体 剂型，更优选少于约75SQ-U每固体剂型，更优选少于约50SQ-U每 固体剂型，更优选少于约25SQ-U每固体剂型，最优选少于约10SQ-U 每固体剂型。
在甚至更优选的实施方案中，采用包括下列步骤的方法，作为过 敏原释放量所测定的脆性少于约500SQ-U每固体剂型，更优选少于约 250SQ-U每固体剂型，更优选少于约150SQ-U每固体剂型，更优选 少于约75SQ-U每固体剂型，更优选少于约50SQ-U每固体剂型，更 优选少于约25SQ-U每固体剂型，最优选少于约10SQ-U每固体剂型：
a)将各自包含固体剂型的各个密封泡罩置于适合脆性测定的装置 中；
b)以适当的速度移动包含固体剂型的密封泡罩持续恰当的时间；
c)取出包含固体剂型的密封泡罩；
d)打开泡罩并将固体剂型和任何残余物置于容器中；
e)从容器中取出固体剂型单位，将任何松散的残余物留在所述容 器中；
f)对所述残余物进行过敏原特异性测定，测定所述残余物中的过 敏原含量；和
g)任选地计算所述残余物中的过敏原含量占固体剂型单位的总过 敏原含量的百分比。
在另一个实施方案中，采用包括下列步骤的方法，作为过敏原释 放量所测定的所述固体剂型的脆性是在人工处理过程中少于约0.5μ g过敏原提取物每固体剂型，更优选少于约0.25μg过敏原提取物每 固体剂型，更优选少于约0.15μg过敏原提取物每固体剂型，更优选 少于约0.075μg过敏原提取物每固体剂型，更优选少于约0.025μg 过敏原提取物每固体剂型，最优选少于约0.01μg过敏原提取物每固 体剂型：
a)将各自包含固体剂型的各个密封泡罩置于适合脆性测定的装置 中；
b)以适当的速度移动包含固体剂型的密封泡罩持续恰当的时间；
c)取出包含固体剂型的密封泡罩；
d)打开泡罩并将固体剂型和任何残余物置于容器中；
e)从容器中取出固体剂型单位，将任何松散的残余物留在所述容 器中；
f)对所述残余物进行过敏原特异性测定，测定所述残余物中的过 敏原含量；和
g)任选地计算所述残余物中的过敏原提取物含量占固体剂型单位 的总过敏原提取物含量的百分比。
在另一个实施例中，采用包括下列步骤的方法，作为过敏原释放 量所测定的脆性少于0.05μg主要过敏原，更优选少于0.025μg主要 过敏原，更优选少于约0.015μg主要过敏原每固体剂型，更优选少于 约0.0075μg主要过敏原每固体剂型，更优选少于约0.0025μg主要 过敏原每固体剂型，最优选少于约0.001μg主要过敏原每固体剂型：
a)将各自包含固体剂型的各个密封泡罩置于适合脆性测定的装置 中；
b)以适当的速度移动包含固体剂型的密封泡罩持续恰当的时间；
c)取出包含固体剂型的密封泡罩；
d)打开泡罩并将固体剂型和任何残余物置于容器中；
e)从容器中取出固体剂型单位，将任何松散的残余物留在所述容 器中；
f)对所述残余物进行过敏原特异性测定，测定所述残余物中至少 一种主要过敏原的主要过敏原含量；和
g)任选地计算所述残余物中至少所述主要过敏原占固体剂型单位 的总主要过敏原含量的百分比。
在另一个优选的方法实施方案中
在步骤a)中采用1-100个包含固体剂型的泡罩和如欧洲药典V. 2.9.7所述的脆性测定装置，
在步骤b)中固体剂型以25±1rpm旋转100转，和
在步骤f)中过敏原特异性测定是免疫化学过敏原特异性测定。
在测定脆性方法的又一个优选实施方案中，采用ELISA测定法测 定过敏原含量。
此外，口服剂型必须具有吸引人的外观。因此，作为质量控制的 一部分，本发明的快速分散固体剂型优选地经肉眼检查例如颜色，外 形，不规则度和缺损。
为了确保患者最佳的依从性，还可以测试剂型的口感。例如，当 剂型放入口中并让其崩解的时候，患者对该剂型的感觉是令人愉悦的。
因为过敏原对过敏症患者而言非常具有生物效力，即即使小量也 可引发反应，因此在治疗过程中含量均一性是重要的参数，以确保例 如在服用相同剂量时患者所经历的模式是可重复的。优选地，在多剂 量容器内的单位的过敏原含量变化与设定剂量相比在±10％之内，优选 ±7％之内，最优选在±5％之内。
多剂量容器可以包含任何可想得到的数目的快速分散固体剂型。 优选固体过敏原剂型按组包装和使用。以液体混合物的形式分散到单 个容器中，然后去除水，来包装单个固体剂型。可以在更大片板上排 列多个泡罩并将多个片板包装在一起销售。例如，诸如泡罩式包装的 容器可包含多个固体剂型，优选1-100个固体剂型，更优选1-35个， 最优选每个泡罩式包装1-10个固体剂型。另一个实施方案使得制造、 分配和贮存更为经济，通过使用多个泡罩式包装，其可以例如提供2， 3，4，5，6或更多用于单一目的疗程使用。这种特定包装方案特别用 于单一剂量的治疗，并因如此处所述缺乏提高剂量步骤的给药方案而 成为可能。。
另一个实施方案提供了用于治疗过敏症或缓解过敏症状的治疗包 装。该治疗包装包括多个剂量固体剂型的密封包装，其中每个剂型包 含有效量的过敏原。该治疗包装可以包含例如至少2，4，6，7，10， 14，30，60，90，100，120，200，240或更多固体剂型。该治疗包装 可以包含用于整个治疗的足够的剂型，或足以用于治疗的一部分。有 利的是该治疗包装包含至少一个月的单位剂量供应。
在本发明另一个有利的实施方案中，治疗包装的所有固体剂型都 包含相同的过敏原剂量，因此免除了制备、分配和贮藏多个剂量单位 用于治疗个体单一过敏症的必要。
含治疗包装的试剂盒还可以包含有关固体剂型使用的说明书。说 明书可以包括警告，剂量方案说明，或对于使用者有价值的任何其它 信息。说明书实体上可以包括例如单独的说明书小册子，一张纸，一 份告示，和/或一份或多份印在容器例如装有单位剂量的包装盒上的布 告。提供的说明书也可以是光盘或其它计算机可读介质或录像带。
最理想的是，通过原位工艺过程除去可含有水和/或其它有机溶剂 并且快速分散的悬浮和/或溶剂化液体而由液体混合物形成治疗包装 的多个固体剂型。
在另一个实施方案中，治疗包装中的每个固体剂型都位于多泡罩 式包装中的单独密封的泡罩内。
在又一个实施方案中，治疗包装的固体剂型包含明胶，更优选鱼 明胶。
但另一个实施方案中治疗包装的固体剂型还包含甘露醇。
在另一个治疗包装的实施方案中，固体剂型的有效量是约2.5μ g-3.75mg提取物/固体剂型。
临床过敏症表现和症状有数种并可以根据致敏个体和所患过敏症 而变化。像水肿，瘙痒，发红，流泪和流涕(鼻炎和结膜炎)的症状 和上下气道的症状像哮鸣，咳嗽，呼吸短促，皮肤病况像湿疹，荨麻 疹和瘙痒都是常见的。还可经历其它症状如疲劳。对症治疗旨在减轻 或影响症状严重程度或减少对其它平行给予的药物的需求。对症药物 包括抗组胺药物例如H1和H2受体拮抗剂，鼻内和全身用皮质类固醇， 非甾体抗炎药物，鼻减充血剂例如肾上腺素受体激动剂。治疗和缓解 一种或多种过敏症状或减少对其它药物的需求是本发明又一个目的。
过敏症在包括人和动物例如狗和马在内的哺乳动物中是一种广泛 普遍的疾病。因此，本发明又一个目的在于提供一种在哺乳动物中治 疗过敏症或缓解过敏症状的方法，包括口腔粘膜给药有效量的过敏原 疫苗剂型，其包括(a)基质，和(b)在上述任何实施方案中的至少 一种过敏原。
对特别是季节性过敏症例如花粉热的治疗通常涉及与引起不适的 过敏原的接触存在或增加的一年中的某个特别时间。过敏原季节将随 过敏原来源例如花粉和在特定地域对过敏原来源的气候条件而变化。 因此，过敏原的季节将取决于气候而在世界各个地方不同，但通常对 于同一地域会落在年中相同的时期，随那年的实际条件而变化(参见 例如″Aerobiology and inhalant allergies″，Chapter 19，T.A.E. Platts-Mills&W.R.Solomon(Ed.S.Manning)1993，Mosby-Year Book，St.Louis)。技术人员熟知，在特定地区对特定过敏原通常预 计季节开始的时间。
在本发明的一个实施方案中，提供的治疗方法包括季节前的治疗， 即在过敏原季节前给予本发明的固体剂型。在一个特别优选的实施方 案中，季节前治疗期包括在过敏原季节前施用本发明的固体剂型超过 2周，更优选4-20周，最优选8-12周。
本发明的另一个目的在于提供一种过敏症或过敏症状的治疗方 法，包含口腔粘膜给药有效量的过敏原疫苗剂型，其包括(a)基质， 和(b)至少一种过敏原，还包括至少一种抗过敏药物，例如在任何上述 实施方案中的抗组胺药和组胺合成抑制剂。优选这种抗过敏药物包括 溴基非尼拉敏，西替立嗪，非索那丁，赛庚啶，右氯苯那敏，羟嗪，酮 保泰松，美喹他嗪，苯咪唑嗪，咪唑斯汀，依巴斯汀，阿司咪唑，卡 比沙明，阿利马嗪，布克利嗪，赛克利嗪，氢氯酸盐，多西拉敏，曲 托喹啉。
本发明还包括包含含过敏原和至少一种基质形成剂的非压制快速 分散固体剂型的药物产品用于口腔粘膜治疗过敏症或缓解过敏症状的 用途
在本发明的另一个实施方案中，包含具有低脆性的稳定、快速分 散、非压制的过敏原固体剂型的药物产品用于口腔粘膜治疗过敏症或 过敏症状，所述固体剂型包含(a)基质，和(b)至少一种过敏原， 还包含抗组胺药。
另一个实施方案提供了治疗过敏症或缓解过敏症状的方法，包括 提供一种a)治疗包装和b)重复口腔粘膜给药治疗包装中的一个或多 个剂型直至症状得到缓解。
又一个实施方案还提供了一种利用单一剂量完成整个过敏治疗的 治疗方案，而不必提高剂量，即增加不同水平的过敏原，直至达到特 定的剂量。此实施方案是有利的，对于单一治疗不需要多个剂量用量， 在剂型生产，分配和贮藏上简化又经济。此外，通过简化治疗过程， 提高了患者的依从性，直接导致更大的临床有效性。
本发明的另一个实施方案是含可口服给药的固体剂型的药物产 品，所述固体剂型包含至少一种药学可接受材料形成的基质，使人对 所述过敏原脱敏的有效量过敏原，在25℃和60％相对湿度下保存三个 月后所述剂型的过敏原含量为最初过敏原含量的至少约50％。优选地 所述药物是糖锭，片剂，胶囊或小胶囊的形式。
根据美国专利No.4,371,516所公开的工艺，可以采用升华工 艺制备本发明的快速分散固体剂型。相应地，将过敏原和基质形成赋 形剂的固化溶液进行升华。优选通过冷冻干燥溶液进行升华工艺。为 了制备任何预期形状的固体形式，在冷冻干燥步骤期间，溶液包含在 多剂量容器的凹陷内。多剂量容器可以采用液氮或固态二氧化碳冷却。 冷冻步骤后在多剂量容器中的冷冻溶液经过减压，并且如果期望，控 制应用加热以帮助溶剂升华。
本发明进一步地包括过敏原用于制备具有低脆性的稳定、快速分 散、非压制过敏原疫苗固体剂型的用途，所述固体剂型包括(a)基质， 和(b)至少一种过敏原形式，用于治疗过敏症或缓解过敏症状。
在另一个实施方案中提供了制备适于口腔粘膜给药、具有低脆性 的快速分散非压制固体稳定剂型的方法，该剂型包含至少一种基质形 成剂和使个体对至少一种过敏原脱敏的有效剂量，所述方法包括如下 步骤：
a)制备含所述至少一种过敏原和至少一种基质形成剂的水溶液，
b)将溶液引入模具的一个或多个凹陷内，
c)采用贮存温度和室压力的标准条件对装填的片板进行冷冻和冷 冻干燥以在每个凹陷中获得所述固体剂型。
在另一个实施方案中提供了制备适于口腔粘膜给药、具有低脆性 的快速分散非压制固体稳定剂型的方法，该剂型包含至少一种基质形 成剂和使个体对至少一种过敏原脱敏的有效剂量，所述方法包括如下 步骤：
a)制备含所述至少一种过敏原和至少一种基质形成剂的水溶液，
b)将溶液引入层压泡罩片板的一个或多个凹陷内，
c)采用贮存温度和室压力的标准条件对装填的片板进行冷冻和冷 冻干燥以在每个凹陷中获得所述固体剂型。
在优选的方法实施方案中，泡罩片板是全铝泡罩片板。在特别优 选的方法实施方案中，泡罩片板是多层全铝的泡罩片板。
在另一个实施方案中提供了获得包含适于口腔粘膜给药的快速分 散非压制固体稳定剂型的药物产品的方法，该剂型包含至少一种基质 形成剂和使个体对至少一种过敏原脱敏的有效剂量，所述剂型具有低 脆性，该方法包括
1)制备稳定的快速分散非压制固体剂型，
2)采用包括下列步骤的测定法测定所述剂型的脆性，
a)将各自包含固体剂型的各个密封泡罩置于适合脆性测定的装置 中；
b)以适当的速度移动包含固体剂型的密封泡罩持续恰当的时间；
c)取出包含固体剂型的密封泡罩；
d)打开泡罩并将固体剂型和任何残余物置于容器中；
e)从容器中取出固体剂型单位，将任何松散的残余物留在所述容 器中；
f)对所述残余物进行过敏原特异性测定，测定所述残余物中至少 一种主要过敏原的主要过敏原含量；和
g)计算所述残余物中至少所述主要过敏原占固体剂型单位的总主 要过敏原含量的百分比。
检测剂型是否达到低脆性的要求，和
3)重复1)和2)直到达到对剂型的要求
口腔粘膜免疫治疗可以被视为诱导耐受和诱导粘膜免疫的方法。 口腔粘膜富含树突细胞，其有着很强的抗原呈递潜能。树突细胞被认 为可加工过敏原并随后迁移到局部淋巴结，在其中它们将过敏原衍生 的肽呈递给过敏原特异性T细胞。在舌下免疫治疗过程中，这种树突 细胞-T细胞相互作用被认为可诱导具有调节潜能的T细胞或增加过 敏原特异性Th1细胞对过敏原特异性Th2细胞的比例。在过敏原接种 过程中监测的多种免疫学参数，单独或组合，可以作为治疗作用或疗 效的合适标志。这些包括全身和粘膜抗体应答，例如特异性IgA，IgG 和IgE抗体；在血液或粘膜分泌物中的细胞因子水平例如INFγ， IL-2，IL-4，IL-5，IL-10，IL-12和TNFα；激活，趋化，增殖， 信号转导，生成细胞因子以及调节T细胞，Th1细胞，TH2细胞，CD8 细胞，其它T细胞亚群或B细胞或NK细胞的其它应答，以及细胞表 面标志表达例如CD(分化簇)标志例如CD4，CD8，CD23，CD25，CD62L， CLA，β7，CCR9，CD69，CD45RO，CCR 3，CXCR5，效应细胞功能例如嗜 碱性白细胞的总组胺含量；血液、组织和分泌物中嗜酸性白细胞、嗜 碱性白细胞、淋巴细胞，单核细胞的数目；嗜酸性细胞、嗜碱性白细 胞、淋巴细胞、单核细胞介质释放，细胞因子产生，激活，趋化，增 殖，信号转导及其它应答。
在优选的实施方案中，本发明的疫苗的特征是可以发现一种或多 种以下免疫学改变：增加的过敏原特异性IgG应答，增加的过敏原特 异性IgA应答，减少的过敏原特异性IgE应答，极少的局部副作用； 嗜酸性白细胞，嗜碱性白细胞，淋巴细胞和/或单核细胞的过敏原特异 性效应细胞应答减少；诱导具有调节潜能的T细胞，过敏原特异性Th1 细胞相对于过敏原特异性Th2细胞的比例增大，诱导其它具有调节潜 能的细胞，减少过敏原特异性Th2细胞应答。
过敏症也是在动物特别是驯养动物和陪伴宠物中已知的疾病。本 领域已知它们对于多种过敏原来源包括草，屋尘螨和寄生虫会产生过 敏症。已知食血即吸血昆虫侵染可导致称为蚤变应性皮炎(FAD)的超敏 反应。在本发明优选的实施方案中，动物疫苗的过敏原包括源自或转 移自寄生虫例如体外寄生虫(例如蚤，蜱，蚊，蝇)的过敏原，寄生 蠕虫毒液(象犬恶丝虫例如恶丝虫属或盘尾丝虫病例如盘尾丝虫)和 屋尘螨。更优选的是唾液过敏原，来自蚤，象栉头蚤属例如犬属栉头 蚤和猫属栉头蚤，硬蜱如硬蜱属，花蜱，软蜱如钝缘蜱属，和来自蠓 如库蠓属。
实施例
缩略词
API：活性蛋白质成分
ELISA：酶联免疫吸附测定
DDT：二硫苏糖醇
HRP：辣根过氧化物酶
LIA：Magic Lite特异性IgE测定
LITE-试剂：发光标记的抗IgE
PMP：顺磁颗粒
SDS-PAGE：十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳
TMB：四甲基联苯胺
实施例1.含梯牧草(Phleum pratense)花粉提取物和鱼明胶的 过敏原疫苗
组成：
表1 成分 单位 剂型1 剂型2 剂型3 功能 药物物质： 梯牧草 SQ-U 2500 25000 125000 API mg 提取物 0.0047 0.047 0.235 其它成分 净化水 mg 适量至 250mg 适量至 250mg 适量至 250mg 溶剂 明胶(标准分 子量鱼明胶， Croda UK mg 10 10 10 基质 甘露醇 mg 7.5 7.5 7.5 基质 氢氧化钠 mg 适量 适量 适量 pH调节到 7.5
草提取物
按照Ipsen和Lwensten(1983)Jour.Allergy.Clin.Immunol. 72：2，150-159页所述的方法制备草花粉提取物。简言之，在5℃采 用碳酸氢铵提取草花粉20小时。通过离心除去颗粒物质，用水透析上 清(3次)，冻干并冷藏直至重构。
固体剂量：
制备工艺：
1、将甘露醇加入一等份净化水(不少于总批次要求的50％)并使 之溶解。
2、加入明胶到甘露醇溶液，用磁力搅拌器搅拌溶液直至明胶完全 溶解
3、将第二等份净化水(不超过总批次要求的35％)用于在小瓶中 重构过敏原提取物。把重构的过敏原提取物加入到甘露醇-明胶溶液。
4、采用新鲜制备的氢氧化钠溶液(3％W/W)调节整个制剂的pH 到pH7.5。
5、计算完成制剂所需要的净化水附加量并转移到整个混合物中。
6、将溶液定量配料预成型的泡罩式包装中。在室温条件下定量配 料溶液。
7、定量配料后，使填满的泡罩包装通过液氮冷冻管。在冷冻干燥 前，所有冷冻产物立刻置于冷冻保藏。采用保藏温度和室压力的标准 条件冷冻干燥各个单位。
8、用盖箔密封冻干的单位并最终包装成袋。
固体剂型平均重18mg且平均直径11mm。
分析方法简述：
鉴定(ID)，蛋白质谱：按厂家说明书以Novex Mini Cell Xcell II系统(Invitrogen)通过SDS-PAGE确定蛋白质谱。简言之，用样 品缓冲液稀释样品，加入还原剂(0.5M DDT)，并在70℃保持10分 钟并使之冷却5分钟。将样品、内部参照和标准低范围大小标志 (BIO-RAD)/孔加到NuPAGE 4-12％Bis-Tris梯度凝胶上。以200V 进行电泳约35分钟。随后凝胶用银染色。蛋白质模式应当类似于内部 参照。
肉眼检查
所有单位经肉眼检查，例如颜色，形状，不规则度和缺损，以确 保可接受的外观。
崩解：如欧洲药典(第三版)或现行的USP所述进行测试。
水含量：采用Karl Fischer滴定原理测定残余水。该方法基于给 定量的I2会导致等量H2O转化的原理，定量测定样品中的水含量。
简言之，使用Karl Fisher滴定器，按照产品说明，测定1-3个 固体剂型/小瓶，一式三份，一起的还有盲样品(4/运行)和KF标准 样品，参见实施例10。
总过敏原活性：采用为竞争性免疫测定法的LIA(在Eiken等人， Allergy 1992，47：495-497中所描述的)进行测试。将结合到顺磁颗 粒(PMP)(ADVIA Centaur PMP，ALK-Abello A/S，Denmark)的100 μl抗人IgE单克隆抗体洗三次，加入100μl含有特异性梯牧草IgE 抗体的患者血清混合物并于2-8℃在振荡器上温育2小时，由此特异 性IgE结合PMP。采用明胶缓冲液洗涤PMP三次以除去IgG抗体。将 10个固体剂型溶于明胶缓冲液，制备每片625SQ-Units或1250 SQ-Units的稀释物。应用样品或已知含量的生物素化梯牧草API的参 照，并于2-8℃振荡温育过夜。样品和生物素化API将竞争IgE结合 位点，当样品中的过敏原浓度升高时，结合的生物素化API的量将降 低。温育后，样品在明胶缓冲液中洗三次，应用LITE-试剂，例如链 霉抗生物素偶联的吖啶酯化学发光化合物(ADVIA Centaur Lite Reagents，ALK-Abello A/S)。样品于2-8℃在振荡器上温育2小时， 在明胶缓冲液中洗3次并在发光计上读数。反应与样品中过敏原的浓 度反相关。
主要过敏原含量：根据Obispo等人，Allergy，1997，52，806-813 页，采用ELISA技术进行测试。
ELISA法测定梯牧草主要过敏原5(Phlp5)的浓度。将与Phlp 5分子上不同表位反应的两种单克隆抗体(ALK-Abello A/S，DK)于4 ℃包被微量滴定板过夜。洗涤后(0.1M PBS，0.05％Tween-20的洗 涤缓冲液洗涤4次)并用封闭缓冲液(2％酪蛋白缓冲液)封闭滴定板， 施加样品/参照，其随后结合抗体。再次洗涤后(用洗涤缓冲液洗涤4 次)，将针对梯牧草抗原的生物素化兔多克隆抗体(ALK-Abello A/S， DK)加到孔中并使之反应。
在用洗涤缓冲液洗涤4次后，向孔中施加与HRP(辣根过氧化物 酶)(DAKO，Denmark)偶联的链霉抗生物素并使之在室温反应1小时 (振荡)。采用洗涤缓冲液洗涤4次后，加入HRP酶的底物(TMB，KEM EN TEC)并使之反应20分钟，然后用0.5N硫酸停止反应。在450nm 用分光光度计例如Multilable计数器Victor2测定产生的颜色。
脆性：
使用下列方法测定快速分散剂型的脆性。
含10个泡罩、每个泡罩含一个固体剂型的密封泡罩片板被切分为 10个单独的泡罩，每个泡罩置于如欧洲药典第三版V.2.9.7所述的适 于脆性测定的一件装置中，剂型单位以25±1rpm旋转100转。将各 个泡罩取出，打开，并将固体剂型转移到一个适宜的容器中。然后从 容器中取出固体剂型，在所述容器中留下任何松散的残余物。进行免 疫化学的过敏原特异性测定(ELISA)以检测残余物中过敏原的含量的 量(参见上文)。
稳定性结果：
表2 产品 含梯牧草2500SQ-U的剂型 贮藏条件 25℃/60％相对湿度 试验 脆性 提取物 (API)总 含量损失％ 崩解 (秒) 水含量 (％) 肉眼检 查 主要过 敏原含 量(％) 总过敏 原活性 (％) 取样(月) 开始 0.000 8 5.5 合格 96 101 1 n.m. 5 4.9 合格 79 91 2 n.m. 6 5.4 合格 96 102 3 0.000 5 5.2 合格 94 82 6 n.m. n.m. n.m. n.m. n.m. n.m. 9 0.000 5 5.3 合格 83 105 贮藏条件 40℃/75％相对湿度 试验 脆性 提取物 (API)总 含量损失％ 崩解 (秒) 水含量 (％) 肉眼检 查 主要过 敏原含 量(％) 总过敏 原活性 (％) 取样(月) 1 n.m. 3 4.8 合格 85 86 2 n.m. 8 5.2 合格 85 100 3 0.005 6 5.4 合格 94 83 6 n.m. n.m. n.m. n.m. n.m. n.m. 9 0.005 4 5.1 合格 70 92
表3 产品 含梯牧草25000SQ-U的剂型 贮藏条件 25℃/60％相对湿度 试验 脆性 提取物 (API) 总含量 损失％ 崩解 (秒) 鉴定 水含量 (％) 肉眼检 查 主要过 敏原含 量(％) 总过敏 原活性 (％) 取样(月) 开始 0.000 8 合格 6.3 合格 106 104 1 n.m. n.m. 合格 n.m. n.m. n.m. n.m. 2 n.m. n.m. 合格 n.m. n.m. n.m. n.m. 3 n.m. n.m. 合格 n.m. n.m. n.m. n.m. 6 n.m. 7 合格 n.m. 合格 87 141 9 0.000 4 合格 5.1 合格 79 105 贮藏条件 40℃/75％相对湿度 试验 脆性 提取物 (API) 总含量 损失％ 崩解 (秒) 鉴定 水含量 (％) 肉眼检 查 主要过 敏原含 量(％) 总过敏 原活性 (％) 取样(月) 1 n.m. n.m. 合格 n.m. n.m. n.m. n.m. 2 n.m. n.m. 合格 n.m. n.m. n.m. n.m. 3 0.005 n.m. 合格 n.m. n.m. n.m. n.m. 6 n.m. 6 合格 n.m. 合格 84 135 9 0.005 4 合格 5.0 合格 77 105
表4 产品 含梯牧草125000SQ-U的剂型 贮藏条件 25℃/60％相对湿度 试验 脆性 提取物(API) 总含量损失％ 崩解 (秒) 鉴定 水含量 (％) 肉眼检 查 主要过 敏原含 量(％) 总过敏 原活性 (％) 取样(月) 开始 0.000 5 合格 4.7 合格 100 100 1 n.m. 10 合格 3.9 合格 84 93 2 n.m. 5 合格 4.5 合格 92 104 3 n.m. 8 合格 4.8 合格 80 88 6 n.m. 6 合格 n.m. 合格 n.m. n.m. 9 0.003 5 合格 4.5 合格 77 106 贮藏条件 40℃/75％相对湿度 试验 脆性 提取物(API) 总含量损失％ 崩解 (秒) 鉴定 水含量 (％) 肉眼检 查 主要过 敏原含 量(％) 总过敏 原活性 (％) 取样(月) 1 n.m. 4 合格 4.1 合格 90 92 2 n.m. 6 合格 4.6 合格 91 109 3 0.001 7 合格 4.5 合格 83 89 6 n.m. 5 合格 n.m. 合格 n.m. n.m. 9 n.m. 5* 合格 4.6 合格 78 118
*仅3个剂型的平均值
实施例2.含梯牧草花粉提取物和淀粉的过敏原疫苗
组成
表5 成分 单位 剂型1 剂型2 剂型3 功能 药物物质： 梯牧草 SQ-U 2500 25000 125000 API mg 提取物 0.0047 0.047 0.235 其它成分 净化水 Mg 适量至 250mg 适量至 250mg 适量至 250mg 溶剂 预糊化淀粉 Mg 8mg 9mg 11mg 基质 甘露醇 Mg 8mg 9mg 11mg 基质 氢氧化钠 Mg 适量 适量 适量 pH调节到 7.5
制备工艺：
与实施例1相同，加入预糊化淀粉代替明胶(鱼来源)。固体剂 型平均重19mg和平均直径11mm。
分析方法简述
与实施例1相同
稳定性结果
表6 产品 含梯牧草2500SQ-U的剂型 贮藏条件 25℃/60％相对湿度 试验 脆性 提取物 (API) 总含量 损失％ 崩解 (秒) 水含量 (％) 肉眼检 查 总过敏 原活性 (％) 取样(月) 开始 0.008 8 3.5 合格 101 1 n.m. 5 3.0 合格 80 2 n.m. 6 3.6 合格 99 3 0.021 5 3.9 合格 69 6 n.m. n.m. n.m. n.m. n.m. 9 0.010 5 3.5 残余物 101 贮藏条件 40℃/75％相对湿度 试验 脆性 提取物 (API) 总含量 损失％ 崩解 (秒) 水含量 (％) 肉眼检 查 总过敏 原活性 (％) 取样(月) 1 n.m. 3 2.9 合格 74 2 n.m. 8 3.7 合格 98 3 0.022 6 4.3 合格 73 6 n.m. n.m. n.m. n.m. n.m. 9 0.003 4 n.m. 残余物 75
表7 产品 含梯牧草25000SQ-U的剂型 贮藏条件 25℃/60％相对湿度 试验 脆性 提取物(API)总 含量损失％ 崩解 (秒) 鉴定 水含 量 (％) 肉眼 检查 总过敏原 活性(％) 取样(月) 开始 0.022 10 合格 3.3 合格 106 1 n.m. n.m. 合格 n.m. n.m. n.m. 2 n.m. n.m. 合格 n.m. n.m. n.m. 3 n.m. n.m. 合格 n.m. n.m. n.m. 6 n.m. n.m. n.m. n.m. n.m. n.m. 9 0.010 160 n.m. 3.5 残余物 99 贮藏条件 40℃/75％相对湿度 试验 脆性 提取物(API)总 含量损失％ 崩解 (秒) 鉴定 水含 量 (％) 肉眼 检查 总过敏原 活性(％) 取样(月) 1 n.m. n.m. 合格 n.m. n.m. n.m. 2 n.m. n.m. 合格 n.m. n.m. n.m. 3 n.m. n.m. 合格 n.m. n.m. n.m. 6 n.m. n.m. n.m. n.m. n.m. n.m. 9 0.050 60 n.m. 3.4 残余物 96
表8 产品 含梯牧草125000SQ-U的剂型 贮藏条件 25℃/60％相对湿度 试验 脆性 提取物(API)总含 量损失％ 崩解 (秒) 鉴定 水含量 (％) 肉眼检 查 总过敏原 活性(％) 取样(月) 开始 0.041 11 合格 2.6 合格 121 1 n.m. 18 合格 2.4 残余物 102 2 n.m. 30 合格 3.0 残余物 126 3 0.055 28 合格 3.6 残余物 102 6 n.m. n.m. n.m. n.m. n.m. n.m. 9 0.0030 58 n.m. 2.9 残余物 99 贮藏条件 40℃/75％相对湿度 试验 脆性 提取物(API)总 含量损失％ 崩解 (秒) 鉴定 水含量 (％) 肉眼 检查 总过敏原 活性(％) 取样(月) 1 n.m. 58 合格 2.5 残余物 96 2 n.m. 25 合格 3.1 残余物 121 3 0.033 25 合格 3.5 残余物 97 6 n.m. n.m. n.m. n.m. n.m. n.m. 9 n.m. 70 n.m. 2.7 残余物 110
实施例3.含草提取物和鱼明胶的过敏原疫苗
表9 成分 单位 剂型 1 剂型 2 剂型 3 功能 活性物质： 梯牧草 SQ-U 2500 25000 75000 活性物质 mg 提取物 0.0047 0.047 0.141 其它成分 净化水 mg 适量至 250mg 适量至 250mg 适量至 250mg 溶剂 明胶(鱼来 源)* mg 16 16 16 基质 甘露醇 mg 14 14 14 基质 氢氧化钠 mg 适量 适量 适量 pH调节到 7.5
制备工艺：
与实施例1相同
固体剂型平均重30mg，平均直径12mm。
分析方法简述：
除未测定脆性和稳定性以外，与实施例1相同。
分析结果：
表10 试验方法 主要过敏原含 量(％)ELISA 总过敏原活性 (％)LIA 崩解(秒) 水含量(％) 强度 2500SQ-U/剂型 97 102 1 5.5 25000SQ-U/剂型 100 89 1 5.3 75000SQ-U/剂型 94 95 1 5.2
该结果提供了含过敏原的固体剂型的实施方案，它在由6.5％鱼明 胶和5.5％甘露醇组成的基质形成剂中含三种不同剂量的草过敏原提 取物。在制备后剂型中的过敏原含量和过敏原活性在可接受的限度内 (参见下面)。此外，结果还表明所有剂型的水含量都在4-7％的优选 范围内。
结果
从实施例1，2和3可以看出，有可能制备瞬间崩解的快速分散固 体过敏原疫苗剂型。发现提取物总含量的损失是可以接受的，即使肉 眼检查在一些泡罩式包装中检测到残余物(主要是含淀粉基质)，残 余物的量即过敏原含量损失在可接受的限度之内，即少于0.5μg提取 物。因此，制备含过敏原的低脆性的非压制快速分散固体剂型是有可 能的。
稳定性数据表明制剂在室温下以及在提高的温度和湿度下保存9 个月是稳定的。过敏原含量和总过敏原活性保持不变(在测定变异内 并符合欧洲药典第三版过敏原产品专论；总过敏原活性为理论值的 50-200％，主要过敏原含量为理论值的65-135％)。
所有制备的批次经过肉眼检查并发现其在可接受的限度之内。
实施例4：过敏原疫苗组合物
制备了含多种不同比例基质形成剂的固体过敏原疫苗剂型。
表11：在不同包装中所制备的含75,000SQ-U梯牧草草花粉提取 物的固体剂型
明胶％ 甘露醇％ 包装类型 破碎负荷 (Kgf) 崩解时间 (秒) 4.00 3.00 5层箔 0.158 ＜2 4.00 3.00 PVC/PVdC 0.199 ＜2 5.00 3.75 5层箔 0.296 ＜2 5.00 3.75 PVC/PVdC 0.264 ＜2 6.00 4.50 5层箔 0.342 ＜2 6.00 4.50 PVC/PVdC 0.386 ＜2 7.00 5.25 5层箔 0.491 ＜2 7.00 5.25 PVC/PVdC 0.421 ＜2
在具有如前所述12mm单位直径的泡罩式包装中制备了所有剂型。 所有剂型均快速地崩解，而且正如可见外观，抗张强度和破碎最大负 荷所评估的那样是坚固的。
表12：在鱼明胶和甘露醇中含75000SQ-U的梯牧草草花粉提取 物的固体剂型
明胶％ 甘露醇％ 抗张强度 (N/mm-2) 破碎最大负 荷(Kgf) 崩解时间 (秒) 5 4 0.239 0.168 ＜2 6.5 5 0.361 0.265 ＜2 6.5 5.5 0.425 0.277 ＜2 5 7 0.389 0.239 ＜2 8 4 0.531 0.308 ＜2 8 7 0.708 0.465 ＜2 7 7 0.543 0.355 ＜2 7 5 0.458 0.311 ＜2 6 4 0.263 0.169 ＜2 6 7 0.381 0.265 ＜2
在具有如前所述12mm单位直径的泡罩式包装中制备了所有剂型。
所有剂型均快速地崩解，而且正如可见外观和破碎最大负荷所评 估的那样是坚固的。
实施例5均一性
对按照实施例1所述的组成和制备的剂型测试过敏原含量的均一 性。分别对含25000和125000SQ-Units的剂型，通过如实施例1所 述的ELISA测定法，以草花粉梯牧草p5效价的均一性测定过敏原含 量。如表13和14所示比较泡罩式包装中10个个体单位。
表13.25000SQ-Unit剂型的含量均一性。 身份(剂型编号) 总过敏原含量％ 1 97.0 2 98.6 3 97.7 4 95.6 5 97.2 6 99.3 7 95.7 8 96.9 9 97.4 10 98.3 平均值 97.4
表14.125,000SQ-Unit剂型的含量均一性 身份(剂型编号) 总过敏原含量％ 1 101.4 2 102.4 3 102.3 4 101.9 5 104.4 6 100.5 7 101.1 8 104.0 9 113.4 10 97.1 平均值 102.8
所有变异均在可接受的限度之内，发现过敏原含量良好的均一性。
实施例6.对狗施用梯牧草草花粉疫苗
按性别将狗平均分配到每个研究组中并按照表15定量给药
表15 分组 组别 剂量水平 (SQ-U) 剂型数a 狗的数目 恢复狗的数目 1 0 1 8 4 2 25000 1 8 3 500000 4 8 4 a组1接受安慰剂型，组2和组3分别接受根据实施例1制备的25000和 125000SQ-U剂型
对狗舌下给药如表15所示的剂量。将剂型置于舌下，使狗嘴保持 闭合以使剂型溶解。连续4周的时间对动物每天给药一次。在治疗期 完成后抽取每组中所有狗的血样。安慰剂组和高剂量组的各4条狗继 续4周的恢复期，之后抽取进一步的血样。
方法：
如下测定血清或血浆中的梯牧草(Phlp)特异性IgG：在4C以10 μl/ml Phlp提取物包被ELISA平板(Costar)过夜。将平板洗4次， 每两次之间浸1分钟，并在室温下用2％酪蛋白缓冲液封闭非特异性结 合1小时。在聚丙烯平板中稀释各份血清或血浆样品，转移到ELISA 平板并在室温下温育2小时。洗涤后，加入HRP标记的抗狗IgG(ICN) 到ELISA平板并在室温下温育1小时。再次洗涤后，加入TMB到ELISA 平板，加盖并在室温下温育20分钟。采用0.5M硫酸终止反应。使用 分光光度计于450nm测定吸光度(OD)。
比较三组狗按1∶200稀释的OD值：安慰剂，25000SQ/剂和500000 SQ/剂。采用Mann-Whitney秩和检验来计算三组间的统计学差异，该 检验是比较两个非配对组的非参数检验。接受500000SQ单位的狗具 有比25000和安慰剂都更高的平均值，表明特异性抗体应答。
结果：
Mann-Whitney检验的P值如表16所示。
表16 组别 P值 安慰剂对25000SQ-U/剂 0.059 安慰剂对500000SQ-U/剂 0.004
P-水平≤0.05＝95％确定性的显著。
在安慰剂与500,000SQ-U/剂组之间有清楚的显著性差异，说明 500,000SQ-U/剂舌下治疗4周产生更高的体液特异性IgG水平。在安 慰剂与25,000SQ-U/剂组之间有交界性的显著性差异，也表明以 25,000SQ-U/剂治疗产生体液特异性IgG水平，尽管较以500000SQ-U/ 剂治疗要弱。
实施例7.梯牧草草花粉疫苗对过敏者的给药
过敏症患者，男性及女性，年龄在18-65岁，诊断为草花粉过敏 症，给予舌下剂量为一，二或三个单剂和/或为多剂的含草花粉提取物 的固体剂型(按照实施例1)，采用设计为随机、双盲、安慰剂对照 的试验。
以进展的单剂评估安全性/耐受性。使用安慰剂和活性片剂(直径 12mm，干重约18mg)的组合以提供所需剂量，按剂量递增方式逐步给 药单剂的安慰剂、2,500、25,000、75,000、125,000和375,000SQ-U。 治疗了47位草花粉过敏症患者。将剂型置于舌下并保持1分钟，然后 吞咽。服用固体剂型后5分钟禁止进食和饮水。观察患者症状两小时。 记录所有副作用，并在每次服药后患者在视觉相似量表上记录耐受性。 发现含所述剂量的剂型被很好地耐受，高至并包括125,000SQ-U，不 良事件在严重程度方面主要是轻微的，并限于口腔和咽喉的“痒”现 象。在安慰剂组也报告有不良事件。例如，随增加的剂量，更频繁地 报道“口痒”，不良事件的进展与进展的剂量相关。
更进一步地，对三个所选剂量2,500、25,000和75,000SQ-U 以及安慰剂测定重复给药的安全性/耐受性。47位草花粉过敏症患者 被分为大小相当的四组，接受每日舌下剂量达8周时间。3个含安慰 剂、2,500和/或25,000SQ-U的片剂(直径12mm，干重约18mg)的 组合被用于得到所需剂量。在患者日志中记录不良事件并收集症状。 在所有三个积极治疗组中，发现剂型中所含的剂量被很好地耐受。随 剂量增加，更频繁地报告不良事件和症状。
因此，所测试的固体剂型以递增剂量和单一的重复剂量治疗对于 临床应用均是切实可行的。
实施例8.含梯牧草草花粉提取物和鱼明胶的过敏原疫苗
根据实施例1表1所述并按照实施例1制备的固体剂型在25 ℃/60％相对湿度下贮藏12个月，通过肉眼检查，崩解，水含量，质量 均一性，鉴定(蛋白质谱)，主要过敏原含量和总过敏原活性的测定 而进行评价。如实施例1所述进行所有测试。除非另有说明，显示对 一组10个片剂一式两份测定的平均值。
表17 贮藏条件：25℃/60％相对湿度 产品： 2500SQ-U/片 试验 肉眼 检查 质量 均一性 崩解 (秒) 总过敏原 活性 (LIA) 主要过敏 原含量 (ELI SA) 脆性 水含量 (％) 0 合格 合格 6 122％ 97％ 0.00％ 6.1％ 12 合格 合格 1 105％ 99％ N/A 4.8％ 产品 25000SQ-U/片 试验 肉眼 检查 ID (SDS -page 质量 均一 性 崩解 (秒) 总过敏原 活性 (LIA) 主要过敏 原含量 (ELI SA) 脆性 水含量 (％) 0 合格 合格 合格 5 108％ 100％ 0.00％ 5.7％ 12 N/A 合格 N/A N/A N/A N/A N/A N/A 产品 125000SQ-U/片 试验 肉眼 检查 ID (SDS -page 质量 均一 性 崩解 (秒) 总过敏原 活性 (LIA) 主要过敏 原含量 (ELISA) 脆性 水含量 (％) 0 合格 合格 合格 7 110％ 99％ 0.00％ 5.4％ 12 合格 合格 合格 1 119％ 104％ N/A 4.2％
肉眼检查：
在研究过程中片剂外观无变化。
崩解：
在研究过程中崩解时间无显著变化。所有试验样品均立即崩解。
质量均一性：
在研究过程中质量均一性无明显变化(对20片的评价)。
水含量：
在研究过程中水含量无明显变化。
鉴定，SDS-page：
在研究过程中蛋白质谱无显著变化；在所有测试时间样品均类似 于参照。
总过敏原活性：
经测定，片剂的总过敏原活性无显著损失(12个月时，对于不同 强度，变化为理论含量的105％-119％，数值在所进行测试的偏差之内)。
主要过敏原含量：
经测定，通过主要过敏原含量测定的片剂过敏原含量无明显损失 (贮藏12个月时，对于不同强度，变化为理论含量的99％-104％，数 值在所进行测试的偏差之内)。
实施例9.含梯牧草草花粉提取物和鱼明胶的过敏原疫苗
组成如实施例1表1所述
按照实施例1制备的固体剂型在25℃/60％相对湿度下贮藏18个 月，通过肉眼检查剂型即片剂和通过测定崩解时间，水含量，质量均 一性，鉴定(蛋白质谱)，主要过敏原含量和总过敏原活性而进行评 价。如实施例1所述进行所有测试。除非另有说明，显示对一组10 个片剂一式两份测定的平均值。
表18 贮藏条件：25℃/60％相对湿度 产品： 2500SQ-U/片 试验 肉眼检 查 质量均一性 崩解 (秒) 总过敏 原活性 (LIA) 主要过敏 原含量 (ELISA) 脆性 水含量 (％) 0mth 合格 合格 6 122％ 97％ 0.00％ 6.1％ 18mth 合格 合格 1 105％ 99％ N/A 5.0％ 产品 125000SQ-U/片 试验 肉 眼 检 查 ID (SDS -page 质量均 一性 崩解 (秒) 总过敏 原活性 (LIA) 主要过敏 原含量 (ELISA) 脆性 水含量 (％) 0mth 合 格 合格 合格 7 110％ 99％ 0.00％ 5.4％ 18mth 合 格 合格 合格 1 117％ 94％ N/A 4.4％
Mth＝月，N/A＝未分析
对于含25,000SQ-Unit/固体剂型的固体剂型，仅进行ID分析。 与0月相比，贮藏18个月后发现类似的ID模式(数据未显示)。
在25℃/60％相对湿度下贮藏18个月以后，发现所述固体剂型是 稳定的，即过敏原含量和总过敏原活性保持不变(在测定变异内并符 合欧洲药典第三版过敏原产品专论；总过敏原活性为理论值的 50-200％，主要过敏原含量为理论值的65-135％)。此外，在研究期间 对于所有测试的过敏原剂量，固体剂型的外观没有变化。另外，在研 究期间，测试的剂型的质量均一性没有变化。至于水含量，没有明显 变化并在优选范围4-7％之内。
实施例10.含梯牧草草花粉提取物和鱼明胶的过敏原疫苗
固体剂型的组成如实施例1的表9中所示。
根据实施例1制备固体剂型并使之经受稳定性试验。
根据实施例1进行所有试验。
稳定性结果
表19 产品 2500SQ-U/剂型 贮藏条件 25℃/60％相对湿度 试验 肉眼检查 崩解 总过敏原 活性(LIA) 主要过敏 原含量 (ELISA) 水含量 (％) 取样(月) 0 合格 1秒 129％ 82％ 5.0％ 1 合格 1秒 87％ 98％ 5.3％ 3 合格 1秒 130％ 116％ 5.2％ 6 合格 1秒 97％ 100％ 5.2％ 贮藏条件 40℃/75％相对湿度 1 合格 1秒 97％ 90％ 5.2％ 3 合格 1秒 124％ 114％ 5.5％ 6 合格 1秒 101％ 93％ 5.9％
表20 产品 25000SQ-U/剂型 贮藏条件 25℃/60％相对湿度 试验 肉眼 检查 ID (SDS-page) 崩解 总过敏原 活性(LIA) 主要过敏 原含量 (ELISA) 水含量 (％) 取样(月) 0 合格 与参照相似 1秒 101％ 93％ 4.7％ 1 n.m. 与参照相似 n.m. n.m. n.m n.m. 3 n.m. 与参照相似 n.m. n.m. n.m. n.m. 6 n.m. 与参照相似 n.m. n.m. n.m. n.m. 贮藏条件 40℃/75％相对湿度 1 合格 与参照相似 n.m. n.m. n.m. n.m. 3 合格 与参照相似 n.m. n.m. n.m. n.m. 6 合格 与参照相似 n.m. n.m. n.m. n.m.
表21： 产品 75000SQ-U/剂型 贮藏条件 25℃/60％相对湿度 试验 肉眼 检查 ID (SDS-page) 崩解 总过敏原 活性(LIA) 主要过敏 原含量 (ELISA) 水含 量 (％) 取样(月) 0 合格 与参照相似 1秒 109％ 77％ 5.3％ 1 合格 与参照相似 1秒 75％ 92％ 5.1％ 3 合格 与参照相似 1秒 113％ 108％ 5.0％ 6 合格 与参照相似 1秒 99％ 95％ 5.2％ 贮藏条件 40℃/75％相对湿度 1 合格 与参照相似 1秒 79％ 92％ 5.3％ 3 合格 与参照相似 1秒 105％ 100％ 5.5％ 6 合格 与参照相似 1秒 99％ 95％ 5.9％
n.m.＝未测定
通过对剂型(即片剂)的肉眼检查以及通过测定崩解时限，水含 量，质量均一性，鉴定(蛋白质谱)，主要过敏原含量和总过敏原活 性(没有显示所有数据)判定剂型质量。
在25℃/60％相对湿度和40℃/75％相对湿度下贮藏6个月以后， 发现所有剂量的固体剂型都是稳定的，即过敏原含量和总过敏原活性 保持不变(在测定变异内并根据EMEA第三版过敏原产品专论；总过敏 原活性为理论值的50-200％，主要过敏原含量为理论值的65-135％)。 此外，在研究期间，对于所有测试的过敏原剂量，固体剂型的外观没 有变化。另外，在研究期间所测试的剂型的质量均一性没有变化。至 于水含量，在研究期间没有发现明显变化。尽管所有测试样品都在优 选范围4-7％之内，观察到所有剂量在40℃/75％相对湿度下贮藏过程中 水含量有略微增加的趋势。
实施例11.在含梯牧草草花粉提取物和鱼明胶的过敏原剂型中测 定水含量和水分活性
组成
表22 成分名称 制剂P (5.5％鱼明胶) 制剂F (4％鱼明胶) 功能 净化水 适量至250.00mg 适量至250.00mg 溶剂 梯牧草 2500，25000或 75000SQ-U 2500，25000或 125000SQ-U 活性物质 0.0047mg，0.047 mg，0.141mg 0.0047mg，0.047 mg，0.235mg 明胶(鱼来源) 16mg 10mg 基质 甘露醇 14mg 7.5mg 基质 氢氧化钠 适量至pH7.5 适量至pH7.5 pH调节剂
根据实施例1制备固体剂型
用Rotronic Hygroskop BT-RS1(Rotronic ag，瑞士)测定各种 固体剂型的水分活性。每次测定使用10个片剂。稳定的读出信号表明 达到了平衡，并采用下列关系式把相对湿度随后换算为水分活性。
aw＝Pw/＝RHequ/100
其中
aw是样品的水分活性，
Pw是样品上的水蒸气分压，
Px w是纯水上的水蒸气压力，而
RHequ(ERH：，相对湿度平衡)是样品的相对湿度。
采用带有774Oven样品处理器的756 Karl Fischer库仑计 ((Metrohm，Herisau，瑞士)测定片剂的水含量。将1-3个片剂置 于玻璃小瓶内，并用PTFE包被的帽(Metrohm，Herisau，瑞士)密封。 然后将样品小瓶放置在774Oven样品处理器((Metrohm，Herisau，瑞 士)中，样品中存在的任何水分在130C的温度下蒸发。蒸发的水分通 过氮气被转移到含Hydranal-Coulomat Oven试剂(Riedel-de-Haen) 的反应室，随后根据产品说明通过Karl Fischer滴定进行对释放的 水量的定量。结果见表24。
表23.含梯牧草草花粉提取物和鱼明胶的多种过敏原剂型的水分活性 和水含量 样品 水分活性 水含量(％) N 平均值 SD N 平均值 SD 安慰剂， P制剂2500SQ-U P制剂25000SQ-U P制剂75000SQ-U， F制剂2500SQ-U F制剂25000SQ-U F制剂125000SQ-U 3 2 2 2 1 1 1 0.46 0.45 0.41 0.41 0.44 0.46 0.44 0.022 0.004 0.001 0.005 - - - 3 3 3 3 3 3 3 5.59 4.93 4.67 4.66 5.45 5.19 4.80 0.060 0.071 0.021 0.053 0.070 0.055 0.056
SD＝标准偏差
尽管某些的水含量在5％以上，所有固体剂型的平均水分活性在 0.41-0.46之间。
实施例12：含梯牧草花粉提取物的过敏原疫苗
组成
表24 成分 组成％W/W 剂型1 安慰剂 剂型2 25,000 剂型3 75,00 明胶鱼 (Norland， 加拿大) 6.0 14mg 14mg 14mg 甘露醇 5.08 12.7mg 12.7mg 12.7mg API(草花粉 提取物) 0 25,000SQ-U/ 75,000SQ-U NaOH 适量至pH7.5 适量至pH7.5 适量至pH7.5 适量至pH7.5 净化水 适量至250mg 适量至250mg 适量至250mg 适量至250mg 总％/湿填充 重量 100％ 250mg 250mg 250mg 干重 27.7mg 27.7mg 27.7mg
除采用来自加拿大Norland的鱼明胶以外，如实施例1所述制备 制剂。固体剂型平均直径13mm。
表25 剂型剂量 脆性(提取物(API)总含量 的损失％) 25,000SQ-单位 0.000* 75,000SQ-单位 0.000*
该结果提供了含过敏原的固体剂型的又一个实施方案，它在由 6.0％鱼明胶和5.08％甘露醇组成的基质形成剂中包含两种不同剂量的 草过敏原提取物。按照实施例1所述方法采用脆性试验测试所述剂型。 结果显示，在作为过敏原释放而检测的脆性方面，所述制剂是稳定的。
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