用于改善阿片类药物疼痛治疗的FLT3抑制剂
阅读：607发布：2020-05-11
专利汇可以提供用于改善阿片类药物疼痛治疗的FLT3抑制剂专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且发明 人 已经评估了FLT3 抑制剂 对吗啡 镇痛 效 力 ，对吗啡镇痛的耐受性以及对吗啡诱导的机械性 疼痛 超敏反应的作用。当所述FLT3抑制剂与吗啡一起施用时，镇痛作用的量要比单独使用吗啡产生的更高。如在对照动物中MPE降低的百分比所显示的，吗啡的重复施用诱导了吗啡诱导的镇痛的逐步降低。用FLT3抑制剂进行的鞘内预处理降低了吗啡镇痛的减少。FLT3抑制剂的施用完全阻止了吗啡诱导的疼痛超敏反应和吗啡展现的潜在疼痛致敏作用两者的发展。因此，本发明涉及FLT3抑制剂，其用于增加阿片类药物的镇痛作用的功效，从而减少阿片类药物的剂量，同时在需要其的患有疼痛的受试者中维持阿片类药物的功效。，下面是用于改善阿片类药物疼痛治疗的FLT3抑制剂专利的具体信息内容。
1.一种FLT3抑制剂和阿片类药物的组合，其用于治疗患者的疼痛，其中所述患者先前未接受过阿片类药物的治疗。
2.一种FLT3抑制剂和阿片类药物的组合，其用于治疗先前接受过阿片类药物治疗的患者的疼痛，所述患者已经出现了阿片类药物诱导的副作用。
3.一种FLT3抑制剂和阿片类药物的组合，其用于治疗患者的疼痛，所述患者先前的阿片类药物治疗功效无效或下降，或所述患者已经出现对阿片类药物的耐受性。
4.根据权利要求2所述的FLT3抑制剂和阿片类药物的组合，其中所述副作用选自阿片类药物诱导的痛觉过敏或阿片类药物诱导的潜在疼痛致敏作用。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的FLT3抑制剂和阿片类药物的组合，其中所述FLT3抑制剂是受体酪氨酸激酶抑制剂(RTKI)。
6.根据权利要求5所述的FLT3抑制剂和阿片类药物的组合，其中所述RTKI选自由来他替尼(CEP-701)、舒尼替尼(SU-11248)、米哚妥林(PKC412)、塞马西尼(Su-5416)、奎扎替尼(AC220)、坦杜替尼(MLN518)、索拉非尼(BAY43-9006)、吉列替尼和克雷诺尼(CP-868)组成的组。
7.根据权利要求1-4中任一项所述的FLT3抑制剂和阿片类药物的组合，其中所述抑制剂是FL/FLT3相互作用的抑制剂。
8.根据权利要求7所述的FLT3抑制剂和阿片类药物的组合，其中所述FL/FLT3相互作用的抑制剂是式(I)的化合物。
其中：
-X是CO-NH或三唑基，
-Y代表SO2，
-Q选自下式的组：
-Q1和Q2是CH，
-Q3选自O、S、N和NH，
-Q4选自C和N以及CO，
-Q5选自C和N，
-R6选自H、OH、烷基、羟烷基和烷氧基，
-R1代表OH，
-R2代表H，
-R3选自H、OR11、卤素和O-(CH2)p–O-烷基；
-R4选自H、烷基、卤素、CN、三氟甲基、CO-烷基、苯基和苄基；条件是R3和R4中的一个是H；
-R5为H，或
-R2和R3或R3和R4或R4和R5中的两个与它们所连接的碳原子一起形成包含5至6个成员的芳环，而其他的R2至R5代表H，
-R7和R8代表烷基，或
-R7和R8与它们所连接的N原子一起形成下式的基团：
其中R10选自H、烷基、卤素、三氟甲基、芳基和羟烷基，或两个相邻的R10基团与它们所连接的环原子一起形成芳基；或
-R7和R8与它们所连接的N原子一起形成下式的基团：
其中Z是NR14基团，其中R14选自苯基、苄基和嘧啶基，或
-R7为H且R8为环烷基，其优选为环己基和金刚烷基，
-R11为H，或烷基，
-R15代表选自H、卤素、OH和烷氧基的基团，
-s为0、1、2或3，并且
-n为1。
9.根据权利要求8所述的FLT3抑制剂和阿片类药物的组合，其中所述抑制剂是N-(5-氯-2-羟基苯基)-3-(哌啶-1-基磺酰基)苯甲酰胺(BDT001)。
10.根据权利要求1-4中任一项所述的FLT3抑制剂和阿片类药物的组合，其中所述FLT3抑制剂是FLT3基因表达的抑制剂。
11.根据权利要求1-4中任一项所述的FLT3抑制剂和阿片类药物的组合，其中所述FLT3抑制剂是抗FL抗体或抗FLT3抗体。
12.根据权利要求1-11中任一项所述的FLT3抑制剂和阿片类药物的组合，其中所述阿片类药物选自由以下组成的组：芬太尼、阿芬太尼、可待因、哌替啶、瑞芬太尼、吗啡、曲马多、丁丙诺啡、纳布啡、硫酸吗啡、盐酸氢吗啡酮和包衣吗啡硫酸盐。
13.一种包含FLT3抑制剂和阿片类药物的药物组合。
14.根据权利要求13所述的药物组合，其中所述FLT3抑制剂选自如权利要求5-11所述的FLT3抑制剂中的任意一种，并且所述阿片类药物是如权利要求12所述的阿片类药物中的任意一种。
15.根据权利要求13或14所述的药物组合，其中所述阿片类药物选自由以下组成的组：
芬太尼、阿芬太尼、可待因、哌替啶、瑞芬太尼、吗啡、曲马多、丁丙诺啡、纳布啡、硫酸吗啡、盐酸氢吗啡酮和包衣吗啡硫酸盐。
16.一种药物组合，其包含FLT3抑制剂，并且特别地是如权利要求8所述的式(I)的化合物，并且甚至更特别地是N-(5-氯-2-羟基苯基)-3-(哌啶-1-基磺酰基)苯甲酰胺以及用于对患有疼痛的患者分别施用、随时间展开施用或同时施用的阿片类药物。
17.一种特别旨在用于治疗疼痛的药物套装，其包含：
(iii)第一盖仑制剂，其包含FLT3抑制剂，并且特别地是如权利要求8所述的式(I)的化合物，并且甚至更特别地是N-(5-氯-2-羟基苯基)-3-(哌啶-1-基磺酰基)苯甲酰胺，和(iv)包含阿片类药物的第二盖仑制剂。
用于改善阿片类药物疼痛治疗的FLT3抑制剂
技术领域
背景技术
[0002] 尽管在治疗慢性疼痛方面取得了新的进展，但阿片类药物仍然是治疗急性和慢性疼痛的最佳方法。在过去的十年中，这些药物的处方也变得常见，在美国，超过3％的成年人接受长期的阿片类药物疗法用于慢性非癌性疼痛(Boudreau等人,2009)。阿片类药物是用于治疗中度至重度疼痛的最有效的镇痛药。吗啡、丁丙诺啡、芬太尼、羟考酮和美沙酮是用于患有急性或慢性疼痛患者的参考药剂。在某些情况下，例如，在患有绝症的患者中，需要强效和重复剂量的阿片类镇痛药。然而，它们的使用受到便秘，恶心，呕吐，镇静和呼吸抑制等不良副作用的严重限制，并且存在滥用，成瘾以及与阿片类药物相关的死亡人数的风险(Kuehn,2009)。最重要的是，阿片类药物的急性或慢性施用也可以产生对其镇痛作用的耐受性，这需要增加阿片类药物的剂量并加剧上述副作用，并且被称为阿片类药物诱导的痛觉过敏(OIH)的疼痛超敏反应和潜在的疼痛致敏作用(Rivat等人,2002,2007)是无法通过增加阿片类药物的剂量来克服的，并且使患者得不到适当的疼痛治疗以及使其生活质量显著下降。
[0003] 因此，需要寻找新的策略来避免或限制如上所述的阿片类药物的副作用，并在长期的慢性疼痛治疗中保持阿片类药物的功效。
[0004] 文献WO 2011/083124描述了FLT3受体拮抗剂在治疗或预防神经性疼痛中的用途，所述FLT3受体拮抗剂是有机小分子、针对FLT3或FL的抗体和/或适体、FL和FLT3之间的相互作用的抑制剂或FLT3表达的抑制剂，其选自由反义RNA或DNA分子、小抑制性RNA(siRNA)、短发夹RNA和核酶组成的组。
[0005] 最近在WO 2016/016370中描述了一些FLT3受体拮抗剂，其抑制FLT3和FL之间的相互作用。
发明内容
[0006] 本发明涉及用于减少阿片类药物的剂量的化合物，从而限制其副作用，同时保持所述阿片类药物治疗疼痛的功效。本发明还涉及用于预防或治疗用阿片类药物治疗后产生的耐受性或紧急疼痛超敏反应的化合物。这些化合物是治疗相关剂量的受体酪氨酸激酶FLT3(即Fms样酪氨酸激酶3)的抑制剂。
具体实施方式
[0007] 定义
[0008] ·有效量：对疼痛产生影响的药物化合物的量；
[0009] ·如本文所用，术语“同时施用”是指通过相同途径并在相同的时间或在基本相同的时间施用2种活性成分。术语“分别施用”是指在相同的时间或在基本相同的时间通过不同途径施用两种活性成分。术语“顺序施用”是指在不同时间施用两种活性成分，其施用途径可以相同或不同。所述2种活性成分仅在同时施用的情况下才可被配制为混合物。它们被分别配制以用于其他施用计划或方案。对于所有所述施用类型，可以特别地在周期内或根据特定的方案重复进行。
[0010] ·如本文所用，术语“患者先前未接受过阿片类药物的治疗”是指，对于当前需要治疗的疼痛，没有向患者施用阿片类药物。这并不意味着患者过去从未接受过阿片类药物治疗。
[0011] 发明人已经评估了用于高度特异性FLT3失活的两种方法(即通过靶向Flt3的小干扰RNA(siRNA)和Flt3基因缺失抑制Flt3基因表达)对阿片类药物镇痛作用的耐受性以及对阿片类药物诱导的机械性疼痛超敏反应的影响。反复施用阿片类药物(例如吗啡或丁丙诺啡)会导致阿片类药物诱导的镇痛作用逐渐降低。使用靶向Flt3的siRNA的鞘内预处理可以防止对丁丙诺啡的耐受性的发展，而加扰的siRNA则没有效果(实施例1)。耐受性的发展与长期疼痛超敏反应和潜在的疼痛致敏作用的发生有关。发明人已经观察到在用阿片类药物丁丙诺啡治疗的大鼠中痛感阈值显著降低，即机械疼痛超敏反应，并且在停止使用丁丙诺啡治疗后返回到所述痛感阈值的基线值。单剂量丁丙诺啡的施用使疼痛超敏反应持续2天，即潜在的致敏作用。施用靶向Flt3的siRNA完全阻止了丁丙诺啡诱导的疼痛超敏反应和丁丙诺啡展现的潜在疼痛致敏作用的发展(实施例2)。同样，Flt3基因缺失阻止了吗啡诱导的机械疼痛超敏反应的发展(实施例3)。总而言之，这些数据证明了通过FLT3失活增强了阿片类药物的镇痛。本发明涉及失活或抑制FLT3以改善阿片类药物镇痛作用以治疗急性和/或慢性疼痛的化合物。
[0012] 因此，在第一方面，本发明涉及一种FLT3抑制剂，其用于增加阿片类药物的镇痛作用的功效，从而减少阿片类药物的剂量，同时在需要其的患有疼痛的受试者中维持阿片类药物的功效。
[0013] 所述阿片类药物的功效的增加以及因此阿片类药物的剂量的减少更特别地适合于先前未接受过阿片类药物治疗的患者。
[0014] 因此，根据第一实施方案，本发明涉及FLT3抑制剂和阿片类药物的组合以用于治疗患者的疼痛，其中所述患者先前未接受过阿片类药物的治疗，并且特别地，其中所述患者在治疗的第一阶段中首先用FLT3抑制剂治疗，然后在治疗的第二阶段中用阿片类药物治疗，并且其中所述两个阶段可以重叠。
[0015] 根据第二实施方案，本发明涉及FLT3抑制剂和阿片类药物的组合以用于治疗先前已经用阿片类药物治疗的患者的疼痛，该患者已经具有了阿片类药物诱导的副作用。
[0016] 根据第三实施方案，本发明涉及FLT3抑制剂和阿片类药物的组合以用于治疗患者的疼痛，所述患者先前的阿片类药物治疗功效无效或下降，或已经具有对阿片类药物的耐受性。
[0017] 根据第四实施方案，本发明涉及包含FLT3抑制剂和阿片类药物的药物组合。
[0018] 根据第五实施方案，本发明涉及药物组合，其包含FLT3抑制剂，特别是下文所述的式(I)或(II)的化合物，更特别地是下文具体列出的FLT3抑制剂化合物，甚至更特别地是N-(5-氯-2-羟基苯基)-3-(哌啶-1-基磺酰基)苯甲酰胺以及用于对患有疼痛的患者分别施用、随时间展开施用或同时施用的阿片类药物。
[0019] 根据第六实施方案，本发明涉及一种特别旨在用于治疗疼痛的药物套装，其包含：
[0020] (i)第一盖仑制剂，其包含FLT3抑制剂，特别是下文所述的式(I)或(II)的化合物，更特别地是下文具体列出的FLT3抑制剂化合物，甚至更特别地是N-(5-氯-2-羟基苯基)-3-(哌啶-1-基磺酰基)苯甲酰胺，以及
[0021] (ii)包含阿片类药物的第二盖仑制剂。
[0022] 改善阿片类药物功效和安全性的化合物
[0023] 如本文所用，术语“FLT3”或“FLT3受体”(Fms相关的酪氨酸激酶3)，也称为CD135、Ly72、Flk-2、Flt-3或B230315G04，可互换使用并在其中具有其在本领域中的一般的含义。所述FLT3受体可以来自任何动物物种，但通常是哺乳动物(例如人和非人灵长类动物)FLT3受体，特别是人FLT3受体。天然存在的人Flt3基因具有如Genbank登录号NM_004119.2所示的核苷酸序列，并且天然存在的人FLT3蛋白具有如Genbank登录号NP_004110.2所示的氨基酸序列。还描述了鼠的核苷酸和氨基酸序列(Genbank登录号NM_010229.2和NP_034359.2)。
术语“FL”或“FLT3-配体”可互换使用并且具有其在本领域中的一般的含义。他们指的是细胞因子，它是FLT3受体的天然配体。FL可以来自任何来源，但通常是哺乳动物(例如人和非人灵长类动物)FL，特别是人FL。术语“FLT3抑制剂”是指在受试者中抑制或下调与FL激活FLT3受体有关的生物学活性的任何化合物，所述生物学活性包括FL与FLT3受体结合所导致的任何下游生物学效应。这种FLT3抑制剂(例如，有机小分子、针对FLT3的抗体)可以通过占据FLT3受体的配体结合位点或其一部分来发挥作用，从而使FLT3受体无法与其天然配体FL接触，从而阻止或降低其正常生物学活性。术语FLT3受体抑制剂还包括能够与FLT3的天然配体FL相互作用的任何试剂。
术语“FL”或“FLT3-配体”可互换使用并且具有其在本领域中的一般的含义。他们指的是细胞因子，它是FLT3受体的天然配体。FL可以来自任何来源，但通常是哺乳动物(例如人和非人灵长类动物)FL，特别是人FL。术语“FLT3抑制剂”是指在受试者中抑制或下调与FL激活FLT3受体有关的生物学活性的任何化合物，所述生物学活性包括FL与FLT3受体结合所导致的任何下游生物学效应。这种FLT3抑制剂(例如，有机小分子、针对FLT3的抗体)可以通过占据FLT3受体的配体结合位点或其一部分来发挥作用，从而使FLT3受体无法与其天然配体FL接触，从而阻止或降低其正常生物学活性。术语FLT3受体抑制剂还包括能够与FLT3的天然配体FL相互作用的任何试剂。
[0024] 在一个特定的实施方案中，所述FLT3抑制剂是有机小分子。如本文所用，术语“有机小分子”是指尺寸与药物中通常使用的有机分子相当的分子。该术语不包括生物大分子(例如蛋白质、核酸等)。通常，有机小分子质量高达约5000Da，更优选高达2000Da，并且最优选高达约500Da。通常，FLT3抑制剂描述于Sternberg等人，2004以及国际专利申请号WO 2002032861、WO 2002092599、WO 2003035009、WO 2003024931、WO 2003037347、WO
2003057690、WO 2003099771、WO 2004005281、WO 2004016597、WO 2004018419、WO
2004039782、WO 2004043389、WO 2004046120、WO 2004058749、WO 2004058749、WO
2003024969、WO 2006/138155、WO 2007/048088和WO 2009/095399。
2003057690、WO 2003099771、WO 2004005281、WO 2004016597、WO 2004018419、WO
2004039782、WO 2004043389、WO 2004046120、WO 2004058749、WO 2004058749、WO
2003024969、WO 2006/138155、WO 2007/048088和WO 2009/095399。
[0025] 在一个特定的实施方案中，所述FLT3抑制剂是受体酪氨酸激酶(RTKI)的抑制剂。在本发明中考虑的RTKI的实例包括AG1295和AG1296；来他替尼(Lestaurtinib)(也称为CEP-701，原名KT-5555，Kyowa Hakko，许可给Cephalon)；CEP-5214和CEP-7055(Cephalon)；
CHIR-258(Chiron Corp.)；GTP 14564(Merk Biosciences英国)。米哚妥林(Midostaurin)(也称为PKC 412 Novartis AG)；MLN-608(Millennium美国)；MLN-518(原为CT53518，COR Therapeutics Inc.，许可给Millennium Pharmaceuticals Inc.)；MLN-608(Millennium Pharmaceuticals Inc.)；舒尼替尼(sunitinib)SU-11248(Pfizer美国)；SU-11657(Pfizer美国)；SU-5416和SU-5614；THRX-165724(Theravance Inc.)；AMI-10706(Theravance Inc.)；VX-528和VX-680(Vertex Pharmaceuticals，美国，授权给Novartis(瑞士)，Merck&Co美国)；和XL 999(Exelixis美国)。在一个特定的实施方案中，所述RTKI选自由来他替尼(lestaurtinib)(CEP-701)、舒尼替尼(sunitinib)(SU-11248)、米哚妥林(midostaurin)(PKC412)、塞马西尼(semaxinib)(Su-5416)、奎扎替尼(quizartinib)(AC220)、坦杜替尼(tandutinib)(MLN518)、索拉非尼(sorafenib)(BAY 43-9006)、吉列替尼(gilteritinib)(ASP2215)和克雷诺尼(crenolanib)(CP-868)组成的组。
CHIR-258(Chiron Corp.)；GTP 14564(Merk Biosciences英国)。米哚妥林(Midostaurin)(也称为PKC 412 Novartis AG)；MLN-608(Millennium美国)；MLN-518(原为CT53518，COR Therapeutics Inc.，许可给Millennium Pharmaceuticals Inc.)；MLN-608(Millennium Pharmaceuticals Inc.)；舒尼替尼(sunitinib)SU-11248(Pfizer美国)；SU-11657(Pfizer美国)；SU-5416和SU-5614；THRX-165724(Theravance Inc.)；AMI-10706(Theravance Inc.)；VX-528和VX-680(Vertex Pharmaceuticals，美国，授权给Novartis(瑞士)，Merck&Co美国)；和XL 999(Exelixis美国)。在一个特定的实施方案中，所述RTKI选自由来他替尼(lestaurtinib)(CEP-701)、舒尼替尼(sunitinib)(SU-11248)、米哚妥林(midostaurin)(PKC412)、塞马西尼(semaxinib)(Su-5416)、奎扎替尼(quizartinib)(AC220)、坦杜替尼(tandutinib)(MLN518)、索拉非尼(sorafenib)(BAY 43-9006)、吉列替尼(gilteritinib)(ASP2215)和克雷诺尼(crenolanib)(CP-868)组成的组。
[0026] 在一个特定的实施方案中，所述FLT3抑制剂是选择性FLT3受体抑制剂。本发明考虑的选择性FLT3受体抑制剂的实例包括但不限于在(Hassanein等人,2016)和国际专利申请号WO 2007/109120和WO 2009/061446中描述的那些。在一个特定的实施方案中，所述FLT3抑制剂是FLT3受体小分子拮抗剂。因此，在一个特定的实施方案中，所述选择性FLT3受体拮抗剂是称为AC220的化合物或是称为奎扎替尼的N-(5-叔丁基-异噁唑-3-基)-N'-{4-[7-(2-吗啉-4-基-乙氧基)咪唑并[2,1-b][1,3]苯并噻唑-2-基]苯基}脲二盐酸盐。所述AC220化合物可以通过，例如，如国际专利申请WO 2007/109120中所述的本领域已知的方法制备。本发明中考虑的选择性FLT3抑制剂的另一个实例是如WO 2010128659中所述的吉列替尼，其也被称为ASP2215(6-乙基-3-((3-甲氧基-4-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基)-苯基)氨基)-5-((四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)吡嗪-2-羧酰胺)。
[0027] 在另一个实施方案中，所述FLT3抑制剂是FLT3和FL之间相互作用的抑制剂。抑制FLT3和FL之间相互作用的化合物包括那些与FLT3受体和FL两者之一结合或与两者都结合的化合物，条件是所述目标化合物的结合阻止了FLT3受体和FL之间的相互作用。因此，所述化合物可以选自由肽、拟肽、有机小分子、抗体、适体或核酸组成的组。在一个特定的实施方案中，如专利申请WO2016/016370中所述，FLT3和FL之间的相互作用的抑制剂选自有机小分子之一。在一个更特定的实施方案中，FL和FLT3之间相互作用的抑制剂是如在Rivat等人(2018)中所述的N-(5-氯-2-羟基苯基)-3-(哌啶-1-基磺酰基)苯甲酰胺，其也被称为BDT001。
[0029] 通式(I)的化合物
[0030]
[0031] 其中：
[0032] -X是CO-NH或三唑基，
[0033] -Y代表SO2，
[0034] -Q选自下式的组：
[0035] -
[0036] -Q1和Q2是CH，
[0037] -Q3选自O、S、N和NH，
[0038] -Q4选自C和N以及CO，
[0039] -Q5选自C和N，
[0040] -R6选自H、OH、烷基、羟烷基和烷氧基，
[0041] -R1代表OH，
[0042] -R2代表H，
[0043] -R3选自H、OR11、卤素和O-(CH2)p–O-烷基；
[0044] -R4选自H、烷基、卤素、CN、三氟甲基、CO-烷基、苯基和苄基；条件是R3和R4中的一个是H；
[0045] -R5为H，或
[0047] -R7和R8代表烷基，或
[0048] -R7和R8与它们所连接的N原子一起形成下式的基团：
[0049] -
[0050] -其中R10选自H、烷基、卤素、三氟甲基、芳基和羟烷基，或两个相邻的R10基团与它们所连接的环原子一起形成芳基；或
[0051] -R7和R8与它们所连接的N原子一起形成下式的基团：
[0052]
[0053] -其中Z是NR14基团，其中R14选自苯基、苄基和嘧啶基，或
[0054] -R7为H且R8为环烷基，其优选为环己基和金刚烷基，
[0055] -R11为H或烷基，R15代表选自H、卤素、OH和烷氧基的基团，
[0056] -s为0、1、2或3，并且
[0057] -n为1。
[0058] 作为在WO2016/016370中更特别公开的FLT3和FL之间的相互作用的抑制剂，可以列举以下式(II)的化合物(所述文献中的式(2a))，其可以在本发明的框架内实施：
[0059] 通式(II)的化合物
[0060]
[0061] 其中：
[0062] -X选自键、CO、NH、CONH、NHCO和包含2或3个N原子的5或6元杂芳族基团；
[0063] -Z为键或选自CHR14、CH2CHR14、NR14、CH2NR14和O；
[0064] -R14选自H、烷基、环烷基、芳基和芳基烷基，其中环烷基或芳基环可在环状结构中包含选自N和O的一个或两个的杂原子，并可被一个或多个选自以下的取代基取代：烷基、卤素、氰基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、硝基、三氟甲基、芳基、烷基-芳基、酰基、烷氧基或芳氧基，
[0065] -R4选自烷基、卤素、CN、三氟甲基、CO-烷基、苯基和苄基，
[0066] -R6选自H、OH、卤素、烷基、羟烷基和烷氧基，
[0067] -R10选自H、烷基、卤素、三氟甲基、芳基和羟烷基，或两个相邻的R10基团与它们所连接的环原子一起形成芳基；和
[0068] -n为0、1或2
[0069] 如WO2016/016370中所公开的仍适用于本发明框架的具体化合物是
[0070] N-(5-氯-2-羟基-苯基)-3-(l-哌啶基磺酰基)苯甲酰胺(BDT001)；
[0071] N-(5-氟-2-羟基-苯基)-3-(l-哌啶基磺酰基)苯甲酰胺；
[0072] N-(5-溴-2-羟基-苯基)-3-(l-哌啶基磺酰基)苯甲酰胺；
[0073] N-(2-羟基-5-苯基-苯基)-3-(l-哌啶基磺酰基)苯甲酰胺；
[0074] N-(5-苄基-2-羟基-苯基)-3-(l-哌啶基磺酰基)苯甲酰胺；
[0075] N-[2-羟基-5-(三氟甲基)苯基]-3-(1-哌啶基磺酰基)苯甲酰胺；
[0076] N-(5-氰基-2-羟基-苯基)-3-(l-哌啶基磺酰基)苯甲酰胺；
[0077] N-(5-乙酰基-2-羟基-苯基)-3-(l-哌啶基磺酰基)苯甲酰胺；
[0078] N-[5-(1,1-二甲基丙基)-2-羟基-苯基]-3-(1-哌啶基磺酰基)苯甲酰胺；
[0079] N-(2-羟基-4-甲氧基-苯基)-3-(l-哌啶基磺酰基)苯甲酰胺；
[0080] N-(3-羟基-2-萘基)-3-(l-哌啶基磺酰基)苯甲酰胺；
[0081] N-(2-羟基-1-萘基)-3-(l-哌啶基磺酰基)苯甲酰胺；
[0082] 5-氯-2-羟基-N-[3-(l-哌啶基磺酰基)苯基]苯甲酰胺；
[0083] N-(5-氯-2-羟基-苯基)-4-甲基-3-(l-哌啶基磺酰基)苯甲酰胺；
[0084] N-(5-氯-2-羟基-苯基)-3-(二甲基氨磺酰基)苯甲酰胺；
[0085] N-(5-氯-2-羟基-苯基)-3-(环己基氨磺酰基)苯甲酰胺；
[0086] 3-(氮杂卓-1-基磺酰基)-N-(5-氯-2-羟基-苯基)苯甲酰胺；
[0087] N-(5-氯-2-羟基-苯基)-3-[(2-甲基-1-哌啶基)磺酰基]苯甲酰胺；
[0088] N-(5-氯-2-羟基-苯基)-3-[(3-甲基-1-哌啶基)磺酰基]苯甲酰胺；
[0089] N-(5-氯-2-羟基-苯基)-3-[(4-甲基-1-哌啶基)磺酰基]苯甲酰胺；
[0090] 3-[(4-苄基-1-哌啶基)磺酰基]-N-(5-氯-2-羟基-苯基)苯甲酰胺；
[0091] N-(5-氯-2-羟基-苯基)-3-[[4-(l-哌啶基)-l-哌啶基]磺酰基]苯甲酰胺；
[0092] N-(5-氯-2-羟基-苯基)-3-(4-甲基哌嗪-1-基)磺酰基-苯甲酰胺；
[0093] N-(5-氯-2-羟基-苯基)-3-(4-苯基哌嗪-1-基)磺酰基-苯甲酰胺；
[0094] 3-(4-苄基哌嗪-l-基)磺酰基-N-(5-氯-2-羟基-苯基)苯甲酰胺；
[0095] N-(5-氯-1H-吲哚-7-基)-3-(l-哌啶基磺酰基)苯甲酰胺；
[0096] 5-氯-3-[3-(l-哌啶基磺酰基)苯甲酰基]-1H-苯并咪唑-2-酮；
[0097] 3-(l-金刚烷基氨磺酰基)-N-(5-氯-2-羟基-苯基)苯甲酰胺；
[0098] N-(5-氯-2-羟基-苯基)-3-[环己基(甲基)氨磺酰基]苯甲酰胺；
[0099] N-(5-氯-2-羟基-苯基)-3-[[2-(羟甲基)-1-哌啶基]磺酰基]苯甲酰胺；
[0100] N-(5-氯-2-羟基-苯基)-3-(4-嘧啶-2-基哌嗪-1-基)磺酰基-苯甲酰胺；
[0101] N-(5-氯-2-羟基-苯基)-3-[(3-苯基-l-哌啶基)磺酰基]苯甲酰胺；
[0102] N-(5-氯-2-羟基-苯基)-3-[[3-(羟甲基)-1-哌啶基]磺酰基]苯甲酰胺；
[0103] N-(5-氯-2-羟基-苯基)-3-吡咯烷-1-基磺酰基-苯甲酰胺；
[0104] N-(5-氯-2-羟基-苯基)-3-吗啉磺酰基-苯甲酰胺；
[0105] N-(5-氯-2-羟基-苯基)-3-吲哚-1-基磺酰基-苯甲酰胺；
[0106] N-(2-氯苯基)-3-(l-哌啶基磺酰基)苯甲酰胺；
[0107] N-(2,5-二氯苯基)-3-(l-哌啶基磺酰基)苯甲酰胺；
[0108] N-(5-氯-2-氟-苯基)-3-(l-哌啶基磺酰基)苯甲酰胺；
[0109] N-(4-氯-2-羟基-苯基)-3-(l-哌啶基磺酰基)苯甲酰胺；
[0110] 2-氯-N-(5-氯-2-羟基-苯基)-5-(l-哌啶基磺酰基)苯甲酰胺；
[0111] N-(5-氯-2-羟基-苯基)-2-氟-5-(l-哌啶基磺酰基)苯甲酰胺；
[0112] N-(5-氯-2-羟基-苯基)-3-(环己基氨磺酰基)-4-甲基-苯甲酰胺；
[0113] N-(5-氯-2-羟基-苯基)-3-(2-吡啶氨磺酰基)苯甲酰胺；
[0114] N-(5-氯-2-羟基-苯基)-2-甲基-5-(l-哌啶基磺酰基)苯甲酰胺；
[0115] N-(4-羟基-3-吡啶基)-3-(l-哌啶基磺酰基)苯甲酰胺；
[0116] 2-羟基-N-(2-羟基苯基)-5-(l-哌啶基磺酰基)苯甲酰胺；
[0117] N-(5-氯-2-羟基-苯基)-3-(2-苯基乙基氨磺酰基)苯甲酰胺；
[0118] N-(5-氯-2-羟基-苯基)-3-(4-苯基丁基氨磺酰基)苯甲酰胺；
[0119] N-(5-氯-2-羟基-苯基)-3-(2-羟基乙基氨磺酰基)苯甲酰胺；
[0120] N-[3-(1-哌啶基磺酰基)苯基]-1H-吲唑-3-胺；
[0121] 4-氯-2-[2-[2-[3-(1-哌啶基磺酰基)苯基]-1H-咪唑-5-基]苯酚；
[0122] 3-[苄基(环己基)氨磺酰基]-N-(5-氯-2-羟基-苯基)苯甲酰胺；
[0123] 2-[[3-[(5-氯-2-羟基-苯基)氨基甲酰基]苯基]磺酰基-环己基-氨基]乙酸叔丁酯；
[0124] N-(5-氯-2-羟基-苯基)-3-[环己基(3-苯基丙基)氨磺酰基]苯甲酰胺；
[0125] N-(5-氯-2-羟基-苯基)-3-(4-羟基丁基氨磺酰基)苯甲酰胺；
[0126] 2-[[3-[(5-氯-2-羟基-苯基)氨基甲酰基]苯基]磺酰基-环己基-氨基]乙酸；
[0127] 2-[3-(1-哌啶基磺酰基)苯基]-3H-苯并咪唑-4-醇；
[0128] 3-[3-氨基丙基(环己基)氨磺酰基]-N-(5-氯-2-羟基-苯基)苯甲酰胺；
[0129] N-(3-氨基丙基)-3-(5-氯-1,3-苯并噁唑-2-基)-N-环己基-苯磺酰胺；
[0130] N-(5-氯-2-羟基-苯基)-3-[环己基(3-胍基丙基)氨磺酰基]苯甲酰胺；
[0131] N-(4,5-二氯-2-羟基-苯基)-3-(1-哌啶基磺酰基)苯甲酰胺；
[0132] 5-氯-N-[3-(1-哌啶基磺酰基)苯基]-1H-吲唑-3-胺；
[0133] N-(3-氯-2-羟基-苯基)-3-(l-哌啶基磺酰基)苯甲酰胺；
[0134] 3-氯-8-(1-哌啶基磺酰基)-5H-苯并[b][1,4]苯并氧氮杂卓-6-酮；
[0135] 3-氯-8-(1-哌啶基磺酰基)-5,11-二氢苯并[b][1,4]苯并二氮杂卓-6-酮；
[0136] 5-氯-2-[3-(1-哌啶基磺酰基)苯基]-1,3-苯并噁唑；
[0137] 4-氯-2-[3-[3-(1-哌啶基磺酰基)苯基]-1H-1,2,4-三唑-5-基]苯酚；
[0138] 7-氯-2-[3-(1-哌啶基磺酰基)苯基]-3H-苯并咪唑-4-醇；
[0139] 5,7-二氯-2-[3-(1-哌啶基磺酰基)苯基]-3H-苯并咪唑-4-醇；
[0140] 4-[[3-[(5-氯-2-羟基-苯基)氨基甲酰基]苯基]磺酰基-环己基-氨基]丁酸；
[0141] N-(5-氯-2-羟基-苯基)-3-[环己基(5-苯基戊基)氨磺酰基]苯甲酰胺；
[0142] N-(5-氯-2-羟基-苯基)-3-[环己基(3-羟丙基)氨磺酰基]苯甲酰胺；
[0143] N-(5-氯-2-羟基-苯基)-3-甲基-5-(1-哌啶基磺酰基)苯甲酰胺；
[0144] N-(5-氯-2-羟基-苯基)-3-[环戊基(甲基)氨磺酰基]苯甲酰胺；
[0145] 3-[2-氨基乙基(环己基)氨磺酰基]-N-(5-氯-2-羟基-苯基)苯甲酰胺；
[0146] N-(2-氨基乙基)-3-(5-氯-1,3-苯并噁唑-2-基)-N-环己基-苯磺酰胺；
[0147] 3-[4-氨基丁基(环己基)氨磺酰基]-N-(5-氯-2-羟基-苯基)苯甲酰胺；
[0148] N-(4-氨基丙基)-3-(5-氯-1,3-苯并噁唑-2-基)-N-环己基-苯磺酰胺；
[0149] N-(5-氯-2-羟基-苯基)-3-[环庚基(甲基)氨磺酰基]苯甲酰胺；
[0150] N-(3-氨基丙基)-3-[5-(5-氯-2-羟基-苯基)-1H-1,2,4-三唑-3-基]-N-环己基-苯磺酰胺；
[0151] N-(5-氯-2-羟基-苯基)-3-[环己基-[3-(二甲基氨基)丙基]氨磺酰基]苯甲酰胺；
[0152] 3-(5-氯-1,3-苯并噁唑-2-基)-N-环己基-N-[3-(二甲基氨基)丙基]苯磺酰胺；
[0153] 4-氯-2-[4-[3-(1-哌啶基磺酰基)苯基]三唑-1-基]苯酚；
[0154] 4-氯-2-[4-[3-(1-哌啶基磺酰基)苯基]嘧啶-2-基]苯酚；
[0155] N-(3-氨基丙基)-3-(1,3-苯并噻唑-2-基)-N-环己基-苯磺酰胺；
[0156] 3-[3-氨基丙基(环己基)氨磺酰基]-N-(2-甲氧基苯基)苯甲酰胺；
[0157] 3-(1,3-苯并噁唑-2-基)-N-环己基-N-甲基-苯磺酰胺；
[0158] 3-[3-氨基丙基(环己基)氨磺酰基]-N-(2-羟基苯基)苯甲酰胺；
[0159] N-(3-氨基丙基)-3-(1,3-苯并噁唑-2-基)-N-环己基-苯磺酰胺；
[0160] 3-[3-氨基丙基(环己基)氨磺酰基]-N-(2-羟基-3-甲氧基-苯基)苯甲酰胺；
[0161] N-(3-氨基丙基)-N-环己基-3-(7-甲氧基-1,3-苯并噁唑-2-基)苯磺酰胺；
[0162] N-(3-氨基丙基)-N-环己基-3-噻唑并[5,4-b]吡啶-2-基-苯磺酰胺；
[0163] 2-[3-(1-哌啶基磺酰基)苯基]苯并三唑；
[0164] N-(3-氨基丙基)-N-环己基-3-噻唑并[4,5-c]吡啶-2-基-苯磺酰胺；
[0165] N-(3-氨基丙基)-N-环己基-3-(7-羟基-1,3-苯并噁唑-2-基)-苯磺酰胺；
[0166] 3-[3-氨基丙基(环己基)氨磺酰基]-N-(4,5-二氯-2-羟基-苯基)苯甲酰胺；
[0167] N-(3-氨基丙基)-N-环己基-3-(5,6-二氯-1,3-苯并噁唑-2-基)苯磺酰胺；
[0168] N-(3-氨基丙基)-3-(1H-苯并咪唑-2-基)-N-环己基-苯磺酰胺；
[0169] N-(5-氯-2-羟基-苯基)-3-[环己基(3-吗啉代丙基)氨磺酰基]苯甲酰胺；
[0170] 3-(5-氯-1,3-苯并噁唑-2-基)-N-环己基-N-(3-(吗啉代丙基)苯磺酰胺；
[0171] 3-(5-氯-1,3-苯并噁唑-2-基)-N-环己基-N-(3-(羟基丙基)苯磺酰胺；
[0172] 3-[5-(5-氯-2-羟基-苯基)-1H-1,2,4-三唑-3-基]-N-环己基-N-甲基-苯磺酰胺；
[0173] N-[5-氯-2-羟基-4-(2-甲氧基乙氧基)苯基]-3-(1-哌啶基磺酰基)苯甲酰胺；
[0174] N-(5-氯-2-羟基-苯基)-3-[环庚基(甲基)氨磺酰基]苯甲酰胺；
[0175] 4-氯-2-[[3-(1-哌啶基磺酰基)苯甲酰基]氨基]苯甲酸乙酯；
[0176] N-(5-氯-2-羟基-苯基)-3-[(4-羟基-1-哌啶基)磺酰基]苯甲酰胺；
[0177] 4-氯-2-[[3-(1-哌啶基磺酰基)苯甲酰基]氨基]苯甲酸；
[0178] N-(3,5-二氯-2-羟基-苯基)-3-(1-哌啶基磺酰基)苯甲酰胺；
[0179] N-(5-氯-1H-苯并咪唑-2-基)-3-(1-哌啶基磺酰基)苯甲酰胺；
[0180] N-(5-氯-2-羟基-苯基)-3-[(4,4-二氟-1-哌啶基)磺酰基]苯甲酰胺；
[0181] N-(3-乙酰基-5-氯-2-羟基-苯基)-3-(1-哌啶基磺酰基)苯甲酰胺；
[0182] N-(5-氯-2-羟基-3-甲基-苯基)-3-(1-哌啶基磺酰基)苯甲酰胺；
[0183] N-[5-氯-2-(1H-四唑-5-基)苯基]-3-(1-哌啶基磺酰基)苯甲酰胺；
[0184] N-[5-氯-2-(N-羟基甲脒基(carbamimidoyl))苯基]-3-(1-哌啶基磺酰基)苯甲酰胺；
[0185] N-(5-氯-3-氟-2-羟基-苯基)-3-(1-哌啶基磺酰基)苯甲酰胺；和
[0186] [4-氯-2-[[3-(1-哌啶基磺酰基)苯甲酰基]氨基]苯基]磷酸二氢。
[0187] 在另一个特定的实施方案中，所述FLT3抑制剂是抗FLT3抗体。因此，术语“抗体”用于指具有抗原结合区的任意抗体样分子，并且该术语包括包含抗原结合结构域的抗体片段，例如Fab'、Fab、F(ab')2、单结构域抗体(DAB或VHH)、TandAbs二聚体、Fv、scFv(单链Fv)、dsFv、ds-scFv、Fd、线性抗体、微抗体、双功能抗体(diabody)、双特异性抗体片段、双抗体、三抗体(scFv-Fab融合蛋白，分别是双特异性或三特异性的)；sc-双抗体；κ(λ)抗体(scFv-CL融合蛋白)；DVD-Ig(双可变结构域抗体，双特异性格式)；SIP(小免疫蛋白，一种微抗体)；SMIP(“小型模块化免疫药物”)scFv-Fc二聚体；DART(ds稳定的双功能抗体“双亲和重定向(Dual Affinity ReTargeting)”)；包含一个或多个CDR的小抗体模拟物等。制备和使用各种基于抗体的构建体和片段的技术是本领域众所周知的。在一些实施方案中，所述抗体是单克隆抗体。在一些实施方案中，抗体是非内化的。如本文所用，术语“非内化抗体”分别是指具有与细胞表面上存在的靶抗原结合的特性的抗体，以及当结合其靶抗原时不进入细胞并在溶酶体中降解的抗体。特别地，在本发明的上下文中，所述抗体是单结构域抗体。术语“单结构域抗体”具有其在本领域中的一般含义，并且是指天然缺乏轻链的抗体的单重链可变结构域；这样的抗体可以在骆驼属哺乳动物中发现。这种单结构域抗体也被称为VHH或对于(单)结构域抗体的一般性描述，还参考了上文引用的现有技术以及
EP 0 368 684(Holt等人,2003；Ward等人,1989)；和WO 06/030220、WO 06/003388。在本发明的上下文中，单结构域抗体的氨基酸残基是根据国际ImMunoGeneTics信息系统氨基酸编号(http://imgt.cines.fr/)给出的VH域的通用编号进行编号的。特别地，在本发明的上下文中，所述抗体是单链可变片段。术语“单链可变片段”或“scFv片段”是指包含通过接头分子连接的抗体的VH和VL结构域的单折叠多肽。在这种scFv片段中，所述VH和VL结构域可以是VH-接头-VL或VL-接头-VH的顺序。除了促进其产生外，scFv片段还可以含有通过间隔子与scFv连接的标签分子。因此，scFv片段包含与抗原识别有关的VH和VL结构域，但不包含相应抗体的免疫原性恒定结构域。在一个特定的实施方案中，所述抗FLT3抗体是抗FLT3中和抗体，例如在(Li等人,2004)和美国专利申请号US 2009/0297529中描述的IMC-EB10(也称为LY3012218)和IMC-NC7。在一个特定的实施方案中，所述FLT3抑制剂是抗FLT3抗体。在另一个实施方案中，所述FLT3抑制剂是针对FLT3或FL的适体。适体是在分子识别方面代表抗体的替代物的一类分子。适体是寡核苷酸或寡肽序列，其具有以高亲和力和特异性识别几乎任何种类的靶分子的能力。此类配体可以通过随机序列文库的指数富集的配体系统进化(SELEX)分离。
EP 0 368 684(Holt等人,2003；Ward等人,1989)；和WO 06/030220、WO 06/003388。在本发明的上下文中，单结构域抗体的氨基酸残基是根据国际ImMunoGeneTics信息系统氨基酸编号(http://imgt.cines.fr/)给出的VH域的通用编号进行编号的。特别地，在本发明的上下文中，所述抗体是单链可变片段。术语“单链可变片段”或“scFv片段”是指包含通过接头分子连接的抗体的VH和VL结构域的单折叠多肽。在这种scFv片段中，所述VH和VL结构域可以是VH-接头-VL或VL-接头-VH的顺序。除了促进其产生外，scFv片段还可以含有通过间隔子与scFv连接的标签分子。因此，scFv片段包含与抗原识别有关的VH和VL结构域，但不包含相应抗体的免疫原性恒定结构域。在一个特定的实施方案中，所述抗FLT3抗体是抗FLT3中和抗体，例如在(Li等人,2004)和美国专利申请号US 2009/0297529中描述的IMC-EB10(也称为LY3012218)和IMC-NC7。在一个特定的实施方案中，所述FLT3抑制剂是抗FLT3抗体。在另一个实施方案中，所述FLT3抑制剂是针对FLT3或FL的适体。适体是在分子识别方面代表抗体的替代物的一类分子。适体是寡核苷酸或寡肽序列，其具有以高亲和力和特异性识别几乎任何种类的靶分子的能力。此类配体可以通过随机序列文库的指数富集的配体系统进化(SELEX)分离。
[0188] 在另一个特定的实施方案中，FLT3抑制剂是Flt3基因表达的抑制剂。在一些实施方案中，所述Flt3表达的抑制剂是反义寡核苷酸。反义寡核苷酸，其包括反义RNA分子和反义DNA分子，将通过与Flt3 mRNA结合直接阻止其翻译，从而防止蛋白质翻译或增加mRNA的降解，从而降低FLT3蛋白质的水平，以及在细胞中的活性。例如，可以例如通过常规的磷酸二酯技术合成具有至少约15个碱基并与编码Flt3的mRNA转录序列的独特区域互补的反义寡核苷酸，并将其通过例如静脉内注射或输注施用。使用反义技术用于特异性减轻其序列已知的基因的基因表达的方法是本领域众所周知的(例如参见美国专利号6,566,135、6,566,131、6,365,354、6,410,323、6,107,091、6,046,321和5,981,732)。
[0189] 在一些实施方案中，所述Flt3表达的抑制剂是小干扰RNA(siRNAs)。Flt3基因表达可通过使受试者或细胞与小双链RNA(dsRNA)或引起小双链RNA产生的载体或构建体接触来降低，从而特异性抑制FLT3表达(即RNA干扰或RNAi)。对于序列已知的基因，选择合适的dsRNA或编码dsRNA的载体的方法是本领域众所周知的(例如，参见((McManus和Sharp,2002；Tuschl等人,1999)；美国专利号6,573,099和6,506,559；以及国际专利公开号WO 01/
36646，WO 99/32619和WO 01/68836)。
36646，WO 99/32619和WO 01/68836)。
[0190] 在一些实施方案中，所述Flt3表达的抑制剂是核酶。核酶是能够催化RNA特异性切割的酶促RNA分子。核酶作用的机制涉及核酶分子与互补靶RNA的序列特异性杂交，然后进行内切核苷酸的切割。因此，特异且有效地催化FLT3mRNA序列的内切核苷酸切割的工程发夹或锤头基序核酶分子在本发明的范围内是有用的。通过扫描靶分子的核酶切割位点来初步鉴定任何潜在的RNA靶标中的特异性核酶切割位点，这些位点通常包括以下序列：GUA、GUU和GUC。一旦被鉴定，就可以评估对应于含有切割位点的靶基因区域的约15至20个核糖核苷酸的短RNA序列以预测可能导致不合适的寡核苷酸序列的结构特征，例如二级结构。候选靶标的适用性还可以通过使用例如核糖核酸酶保护测定法测试其与互补寡核苷酸杂交的可及性来评估。
[0191] 在一些实施方案中，所述FLT3表达的抑制剂是核酸内切酶。核酸内切酶是在多核苷酸链内切割磷酸二酯键的酶。一些酶，例如脱氧核糖核酸酶I，相对非特异性地切割DNA(不考虑序列)，而许多酶通常被称为限制性核酸内切酶或限制性酶，仅在非常特定的核苷酸序列处切割。基于核酸内切酶的基因组失活背后的机制通常需要DNA单链或双链断裂的第一步，然后才能触发DNA修复的两种不同细胞机制，这些机制可以用于DNA失活：容易出错的非同源末端连接(NHEJ)和高保真同源指导修复(HDR)。在一个特定的实施方案中，所述核酸内切酶是CRISPR-cas。如本文所用，术语“CRISPR-cas”具有其在本领域中的一般含义，并且是指成簇的有规律的间隔的短回文重复，与其关联的是含有碱基序列的短重复的原核DNA的片段。在一些实施方案中，所述核酸内切酶是来自化脓性链球菌的CRISPR-cas9。CRISPR/Cas9系统已经在US 8697359 B1和US 2014/0068797中进行了描述。在一些实施方案中，所述核酸内切酶是CRISPR-Cpf1，其是最近表征的来自(Zetsche等人,2015)中的普雷沃氏菌(Provotella)和法兰西斯氏菌(Francisella)1(Cpf1)的CRISPR。
[0192] 在一个特定的实施方案中，如上所述的Flt3基因表达的抑制剂可以在体内单独或与载体结合递送。就其最广泛的含义而言，“载体(vector)”是能够促进本发明的反义寡核苷酸向细胞转移的任何媒介物。优选地，相对于导致无载体的降解程度，载体以降低的降解将核酸运输至细胞。通常，可用于本发明的载体包括但不限于裸质粒、非病毒递送系统(电穿孔、声穿孔、阳离子转染剂、脂质体等)、噬菌粒、病毒、衍生自病毒或细菌来源的其他媒介物，其通过插入或掺入反义寡核苷酸核酸序列操作。病毒载体是优选的载体类型，其包括但不限于以下病毒的核酸序列：RNA病毒，例如逆转录病毒(例如莫洛尼鼠白血病病毒和慢病毒衍生载体)，哈维鼠肉瘤病毒，鼠乳腺肿瘤病毒和劳斯肉瘤病毒；腺病毒，腺相关病毒；SV40型病毒；多瘤病毒；爱泼斯坦-巴尔病毒；乳头瘤病毒；疱疹病毒；牛痘病毒；脊髓灰质炎病毒。人们可以容易地使用未命名但本领域已知的其他载体。通常，根据本发明的病毒载体包括腺病毒和腺相关病毒(AAV)，它们是已经被批准用于人类的基因治疗的DNA病毒。当前，已知12种不同的AAV血清型(AAV1至12)，其每种具有不同的组织嗜性(Wu等人,2006)。重组AAV来源于依赖的细小病毒AAV(Choi等人,2005)。可以将腺相关病毒1至12型改造为复制缺陷型，并能够感染多种细胞类型和物种(Wu等人,2006)。它还具有诸如热和脂质溶剂稳定性的优点；包括造血细胞在内的不同谱系细胞的高转导频率；并且没有过度感染抑制作用，因此可以进行多个系列的转导。另外，在没有选择压力的情况下，在组织培养中对野生型腺相关病毒感染进行了100次以上传代，这表明腺相关病毒基因组整合是一个相对稳定的事件。
腺相关病毒也可以染色体外的方式起作用。其他载体包括质粒载体。质粒载体已在本领域中被广泛描述，并且是本领域技术人员众所周知的。在最近几年中，质粒载体已被用作DNA疫苗，用于在体内将抗原编码基因递送至细胞。它们对此特别有利，因为它们没有如许多病毒载体具有的相同的安全问题。然而，这些具有与宿主细胞相容的启动子的质粒可以表达来自质粒内可操作编码的基因的肽。一些常用的质粒包括pBR322、pUC18、pUC19、pRC/CMV、SV40和pBlueScript。其他质粒是本领域普通技术人员众所周知的。另外，可以使用限制酶和连接反应来定制设计质粒，以去除和添加特定的DNA片段。质粒可以通过各种肠胃外、粘膜和局部途径递送。例如，可以通过肌内、皮内、皮下或其他途径注射DNA质粒。也可以通过鼻内喷雾剂或滴剂，直肠栓剂和口服施用。也可以使用基因枪将其施用于表皮或粘膜表面。
可以在水溶液中给予质粒，将其干燥至金颗粒上，或者与另一种DNA递送系统结合，所述另一种DNA递送系统包括但不限于脂质体、树状聚合物、螺状体(cochleate)和微胶囊。
腺相关病毒也可以染色体外的方式起作用。其他载体包括质粒载体。质粒载体已在本领域中被广泛描述，并且是本领域技术人员众所周知的。在最近几年中，质粒载体已被用作DNA疫苗，用于在体内将抗原编码基因递送至细胞。它们对此特别有利，因为它们没有如许多病毒载体具有的相同的安全问题。然而，这些具有与宿主细胞相容的启动子的质粒可以表达来自质粒内可操作编码的基因的肽。一些常用的质粒包括pBR322、pUC18、pUC19、pRC/CMV、SV40和pBlueScript。其他质粒是本领域普通技术人员众所周知的。另外，可以使用限制酶和连接反应来定制设计质粒，以去除和添加特定的DNA片段。质粒可以通过各种肠胃外、粘膜和局部途径递送。例如，可以通过肌内、皮内、皮下或其他途径注射DNA质粒。也可以通过鼻内喷雾剂或滴剂，直肠栓剂和口服施用。也可以使用基因枪将其施用于表皮或粘膜表面。
可以在水溶液中给予质粒，将其干燥至金颗粒上，或者与另一种DNA递送系统结合，所述另一种DNA递送系统包括但不限于脂质体、树状聚合物、螺状体(cochleate)和微胶囊。
[0193] 如本文所用，术语“阿片”和“阿片类药物”可互换使用，并且是指具有通过阿片类药物受体的激活介导的吗啡样药理活性的任何天然或化学化合物。阿片类药物受体是G蛋白偶联受体(GPCR)超家族的成员，其特征是存在七个跨膜区域。已经确定了三种不同类型的受体，即μ(MOP)、δ(DOP)和κ(KOP)。阿片类药物受体属于众所周知的GPCR的Gi/o类别。普遍认为，阿片类药物对疼痛传播的主要抑制作用是由于刺激了μ-阿片类药物受体(MOP)，从而抑制了腺苷酸环化酶和离子通道。在一些实施方案中，所述阿片类药物是指已知的或将来将要开发的天然的和合成的阿片。在一些实施方案中，所述阿片类药物选自由以下组成的组：阿芬太尼、烯丙罗定、阿法罗定、阿尼利定、苄吗啡、苯晴米特、丁丙诺啡(buprenorphine)、布托啡诺、氯尼他秦、可待因、环佐辛、地索吗啡、右吗拉胺、右丙氧芬、地佐辛、地恩丙胺、二氢吗啡酮(diamorphone)、二氢可待因、二氢吗啡、地美沙朵、地美庚醇、二甲噻丁、吗苯丁酯(dioxaphetylbuturate)、地匹哌酮、依他佐辛(eptazocine)、依索庚嗪(ethoheptazine)、乙甲噻丁、乙基吗啡、依托尼秦芬太尼、海洛因、氢可酮、氢吗啡酮，羟哌替啶(hydroxypethideine)、异美沙酮、凯托米酮、烯丙左吗喃(levallorphan)、左啡诺、左芬啡烷、洛芬太尼(lofentanil)、甲利定(meperidine)、美他齐诺(meptazinol)、美他佐辛、美沙酮、美托酮、吗啡、麦罗啡、纳布啡、罂粟碱、尼可吗啡、去甲左啡诺、去甲美沙酮、纳洛芬、去甲吗啡、诺匹哌酮、阿片、羟考酮、羟吗啡酮、阿片全碱、戊唑辛、苯吗庚酮、非诺啡烷、非那佐辛、苯哌利定、匹米诺定、哌腈米特、普罗庚嗪(propheptazine)、三甲利定(promedol)、丙哌利定、丙吡兰、丙氧芬、舒芬太尼(sufentonil)、替利定和曲马朵(tramadol)在一个特定的实施方案中，所述阿片是吗啡。在一个特定的实施方案中，所述阿片类药物是丁丙诺啡。
[0194] 如本文所用，术语“功效”是指受体信号传导功效，或药物相对于受体占有率所产生的受体介导作用的大小。阿片类药物的功效可以通过本领域已知的方法来测量。例如，此类方法描述于Michael等人2011,British Journal of Pharmacology(2011)。
[0195] 如本文所用，术语“镇痛作用”是指由于使用产生镇痛的物质而引起的临床作用。术语“镇痛”是指丧失对疼痛的敏感性而不丧失意识。通常，阿片类药物用于降低对疼痛的敏感性，这种阿片类药物被称为镇痛药。在一个特定的实施方案中，所述镇痛药是吗啡。在另一个特定的实施方案中，所述镇痛药是丁丙诺啡。
[0196] 在一个特定的实施方案中，如上所述的FLT3抑制剂适合于减轻阿片类药物诱导的副作用，例如滥用或成瘾、恶心、便秘或呼吸抑制。发明人发现，与单独使用吗啡相比，将FLT3受体抑制剂与吗啡并用会产生更大的镇痛作用，并且舒尼替尼和吗啡的组合可减少50％的吗啡剂量，即降低吗啡的剂量，同时保持阿片类药物的功效(实施例4)。
[0197] 在另一个实施方案中，FLT3和FL之间的相互作用的抑制剂可以与阿片类药物组合使用，以产生比单独使用吗啡产生的镇痛作用更大的镇痛作用(实施例4)。值得注意的是，BDT001是FLT3和FL之间相互作用的抑制剂，其本身没有镇痛作用，但可增强吗啡的镇痛作用，从而可减少30％的吗啡剂量以获得相同的镇痛作用(实施例4)。
[0198] 由于吗啡的副作用(如便秘、恶心、呕吐、镇静和呼吸抑制)是剂量依赖性的，因此减少阿片类药物的剂量将降低这些副作用的强度。
[0199] 因此，本发明还涉及用于治疗患者疼痛的FLT3抑制剂和阿片类药物的组合，其中所述患者先前未接受过阿片类药物的治疗，与在不存在FLT3抑制剂的情况下适合于对同一患者治疗相同疼痛的剂量相比，所施用的所述阿片类药物的每日剂量降低了至少20％、至少30％或甚至至少40％。
[0200] 此外，与吗啡相关的其他风险也将减少，例如滥用和成瘾，或出现疼痛超敏反应(IOH)和潜在疼痛致敏作用。
[0201] 发明人已经评估了FLT3受体抑制剂舒尼替尼对吗啡镇痛耐受性的作用。如对照动物中MPE的百分比降低所显示，他们表明，连续4天每天两次重复施用吗啡会引起吗啡诱导的镇痛的逐步降低(实施例5)。用另一种阿片类药物丁丙诺啡和另一种FLT3受体抑制剂来他替尼(也称为CEP-701)获得了类似的结果(实施例5)。同样，使用BDT001(FLT3和FL之间的相互作用的抑制剂)也获得了类似的结果。(实施例5)。结果表明，FLT3抑制剂或FLT3表达抑制剂能够防止对阿片类药物镇痛的部分耐受性。因此，在特定的实施方案中，所述FLT3受体抑制剂或FLT3表达抑制剂用于防止阿片类药物耐受性，即在用所述阿片类药物重复治疗后阿片类药物对疼痛的功效丧失。
[0202] 发明人已经表明，当施用FLT3抑制剂(舒尼替尼)或BDT001时，完全防止了吗啡诱导的疼痛超敏反应(实施例6)。
[0203] 因此，在特定的实施方案中，所述FLT3受体抑制剂或FLT3表达抑制剂用于防止阿片类药物耐受性或阿片类药物诱导的疼痛致敏作用和潜在疼痛致敏作用。因此，将根据本发明的FLT3抑制剂或FLT3表达的抑制剂与如上所述的阿片类药物组合，用于防止或治疗受试者患有由阿片类药物诱导的疼痛的至少一种副作用的方法。如本文所用，术语“治疗(treating)”或“治疗(treatment)”是指预防性或防止性治疗以及治愈性或疾病改变性治疗，其包括治疗具有感染疾病的风险或可能感染疾病的受试者以及治疗生病的或被诊断患有某种疾病或医学病况的受试者，并且包括抑制临床复发。可以向患有医学病症或最终可能患有该病症的受试者施用该治疗，以防止、治愈病症或复发性病症，延迟其发作，降低其严重性或减轻其一种或多种症状，或用于延长受试者的存活率，使其超过在没有这种治疗的情况下所预期的存活率。“治疗方案”是指疾病的治疗模式，例如治疗期间使用的剂量模式。治疗方案可以包括诱导方案和维持方案。短语“诱导方案”或“诱导期”是指用于疾病的初始治疗的治疗方案(或治疗方案的一部分)。诱导方案的总体目标是在治疗方案的初始阶段向受试者提供高水平的药物。诱导方案可以(部分或全部)采用“加载方案”，其可以包括施用比医生在维持方案期间所使用的更大剂量的药物，比医生在维持方案期间施用药物更频繁地施用药物，或两者兼而有之。短语“维持方案”或“维持期”是指在疾病的治疗期间用于维持受试者的治疗方案(或治疗方案的一部分)，例如，以使受试者长期(数月或数年)处于缓解状态。维持方案可以采用连续疗法(例如，定期(例如，每周、每月、每年等)施用药物)或间歇疗法(例如，间断治疗、间歇治疗、复发治疗或达到特定的预定标准[例如，疼痛、疾病现象等]后的治疗)。
[0204] 如本文所用，术语“副作用”具有其在本领域中的一般含义，并且是指在与药理学性质有关的正常剂量下发生的意外作用。在本发明的上下文中，术语“对疼痛的副作用”是通过在患有疼痛的受试者中施用阿片类药物(如吗啡)而诱导的副作用。在一些实施方案中，对诱发的疼痛的副作用选自由以下组成的组：阿片类药物耐受性(OT)；阿片类药物诱导的痛觉过敏(OIH)；阿片类药物的致敏作用。在一个特定的实施方案中，所述副作用是阿片类药物耐受性(OT)。如本文所用，术语“阿片类药物耐受性”(OT)是指可以通过增加剂量来克服的对阿片类药物的反应的逐渐丧失。这主要是由于受体数量、信号蛋白的变化以及阿片类药物受体磷酸化水平的改变是反映细胞对阿片类药物暴露的适应性变化的一部分。在一个特定的实施方案中，所述副作用是阿片类药物诱导的痛觉过敏(OIH)。如本文所用，术语“阿片类药物诱导的痛觉过敏”(OIH)是指敏化作用过程，通过该过程阿片类药物矛盾地诱导疼痛超敏反应(炎症或组织或神经损伤)。在一个特定的实施方案中，所述副作用是阿片类药物诱导的潜在疼痛致敏作用。如本文所用，术语“阿片类药物诱导的潜在疼痛致敏作用”是指在没有超敏反应的行为迹象的情况下持续的中枢致敏作用。潜在疼痛致敏作用是外伤性应激或阿片类药物施用后形成的长期疼痛易感性的一种形式，通过这种形式，生物体在随后的损伤或应激源或阿片类药物暴露后可能表现出对增强的疼痛反应的更大敏感性。
[0205] 如本文所用，术语“受试者”表示哺乳动物，例如啮齿动物、猫、犬和灵长类动物。特别地，根据本发明的受试者是人。更特别地，根据本发明的受试者患有或容易患有急性或慢性疼痛。
[0206] 在一个特定的实施方案中，所述副作用是阿片类药物耐受性(OT)。在另一个实施方案中，所述副作用是阿片类药物诱导的痛觉过敏(OIH)。在另一个实施方案中，所述副作用是阿片类药物诱导的潜在疼痛致敏作用。
[0207] 更特别地，将根据本发明的FLT3抑制剂同时，分别或依次对患有上述阿片类药物的副作用中的至少一种的受试者施用。
[0208] 剂量和方案
[0209] 治疗对FLT3抑制剂和阿片类药物两者之一或两者均连续，或对FLT3抑制剂和阿片类药物两者之一或两者均不连续。
[0210] “连续治疗”是指可以实施的长期治疗，其包括以各种施用频率进行，优选每天两次，并且更优选每天一次。
[0211] 所述FLT3抑制剂和阿片类药物的施用可以同时、分别或随时间扩展。
[0212] 所述组合可以根据方案在几个顺序或周期的过程中重复施用，所述方案取决于疼痛的性质和待治疗的疼痛的强度，还取决于待治疗的患者(年龄、体重、以前的治疗等)。所述方案可以由任何专门研究疼痛的医生来确定。
[0213] 所述FLT3抑制剂和阿片类药物的多种施用顺序或周期可以分别在本发明的框架内实施。
[0214] 根据一个优选的实施方案，将FLT3抑制剂在阿片类药物之前施用。然后当然可以在长期治疗中重复其施用，优选地，前提是仅当患者血液中存在最小剂量的FLT3抑制剂时才施用阿片类药物。所述FLT3抑制剂的剂量应根据待治疗的个体受试者的特征(年龄、体重)进行调整，以使FLT3抑制剂的最大血液水平为10至1000ng/mL，优选20至200ng/mL。
[0215] 根据一个优选的实施方案，并且对于可能的施用顺序之一，将所述FLT3抑制剂在治疗的第一阶段期间施用于患者，然后在治疗的第二阶段中用阿片类药物治疗患者。所述两个阶段可以重叠或不重叠。
[0216] 根据一些实施方案，本发明进一步涉及一种用于在有需要的患者中治疗疼痛的方法，其包括：
[0217] (i)将有效量的FLT3抑制剂在治疗的第一阶段中向有此需要的患者施用；和[0218] (ii)然后将有效量的阿片类药物在治疗的第二阶段中向所述有此需要的患者施用，其中所述治疗的第一和第二阶段可以重叠或不重叠，并且其中顺序(i)和(ii)可以被重复，尤其是为了在患者血液中维持最低水平的FLT3抑制剂，其范围为1至100ng/mL，特别是2至50ng/mL，并且优选5至20ng/mL。
[0219] 根据一个特定的实施方案，根据如上所述的三个第一实施方案中的任何一个，本发明涉及用于治疗患者疼痛的FLT3抑制剂和阿片类药物的组合，其中在患者血液中的FLT3抑制剂的最小水平维持为1至100ng/mL，特别是2至50ng/mL，优选5至20ng/mL。
[0220] 在本文上述实施方案中，治疗的第一阶段可以例如持续10分钟至30天，例如持续1小时至10天，并且更特别地是持续30分钟至1天。治疗的第二阶段可以例如持续1天至6个月，例如持续10天至2个月，并且更特别地持续4天至10天。
[0221] 所述两个阶段之间的重叠可以持续1天至6个月，例如持续10天至2个月，并且更特别地持续1天至4天。
[0222] 根据一个特定的实施方案，所述两个阶段不重叠，并且这两个阶段被一段时间或间隔分开，所述一段时间或间隔持续30分钟至10天，特别是持续1小时至4天。
[0223] 在任何情况下，负责施用的人员均应确定用于个体受试者的合适剂量。
[0224] 通常，在施用的第一阶段期间FLT3抑制剂的日剂量可以是0.1至1000mg，特别是1至100mg，更特别地是5至20mg。
[0225] 与用于治疗没有预先施用FLT3抑制剂的相同患者的相同疼痛的剂量相比，所述阿片类药物的剂量可以减少至少20％、30％或甚至50％。通常，然后可以以0.01至1000mg，特别是0.1至100mg，更特别是1至20mg的日剂量施用阿片类药物。
[0226] 作为上述方案的替代，FLT3抑制剂的施用可以不连续，而阿片类药物的施用可以连续或不连续。
[0227] 作为如上所述的顺序施用的另一替代，所述FLT3抑制剂和阿片类药物可以独特的剂型或单位药物制剂施用。
[0228] 在一个特定的实施方案中，根据本发明的药物组合，其包含0.5至500mg，特别是2至100mg，更特别是5至20mg的量的FLT3抑制剂和0.01至1000mg，更特别是0.1至100mg，甚至更特别是1至20mg的量的阿片类药物。
[0229] 剂量、频率和治疗时间的所有组合都包括在本发明的范围内。
[0230] 在一个更特定的实施方案中，所述FLT3抑制剂在发生可预期的疼痛之前施用。例如，众所周知，中度或高度侵入性的外科手术，例如心脏手术、关节置换、肿瘤摘除、消化道部分消融、移植或截肢，在手术后的数小时或数天甚至更长的时间内，多种强度的疼痛，其需要使用阿片类药物。在这些情况下，并且根据特定的实施方案，所述FLT3抑制剂可以在外科手术期间当受试者被麻醉时并且在阿片类药物治疗开始之前施用，阿片类药物治疗通常在术后护理期间进行。
[0231] 药物组合物
[0232] 本发明还涉及药物组合，其包含FLT3抑制剂，特别是如上所述的式(I)或(II)的化合物，更特别地是上文特别列出的FLT3抑制剂化合物，甚至更特别地是N-(5-氯-2-羟基苯基)-3-(哌啶-1-基磺酰基)苯甲酰胺(也被称为BDT001)以及用于对患有疼痛的患者分别施用、随时间展开施用或同时施用的阿片类药物。
[0233] 本发明还涉及一种特别旨在用于治疗疼痛的药物套装，其包含：
[0234] (i)包含FLT3抑制剂的第一盖仑制剂，和
[0235] (ii)包含阿片类药物的第二盖仑制剂。
[0236] 如上所述的FLT3抑制剂可以与药学上可接受的赋形剂和任选的持续释放基质(例如可生物降解的聚合物)组合以形成药物组合物。在一个特定的实施方案中，本发明涉及包含FLT3抑制剂和阿片类药物的作为药物组合物的药物组合。
[0237] 在一个特定的实施方案中，根据本发明的药物组合包含FLT3抑制剂，其选自由来他替尼(lestaurtinib)(CEP-701)、舒尼替尼(sunitinib)(SU-11248)、米哚妥林(midostaurin)(PKC412)、塞马西尼(semaxinib)(Su-5416)、奎扎替尼(quizartinib)(AC220)、坦杜替尼(tandutinib)(MLN518)、索拉非尼(sorafenib)(BAY 43-9006)、吉列替尼(gilteritinib)和克雷诺尼(crenolanib)(CP-868)组成的组。
[0238] 在另一个特定的实施方案中，根据本发明的药物组合包含FL和FLT3之间的相互作用的抑制剂；在一个更特定的实施方案中，FLT3和FL之间的相互作用的抑制剂选自WO2016/016370中描述的那些或如上所述的式(I)或(II)的化合物之一，更特别地，FLT3抑制剂化合物为上文具体列出的。在一个甚至更特别的实施方案中，根据本发明的药物组合包含BDT001。
[0239] 在一个特定的实施方案中，根据本发明的药物组合包含阿片类药物，其选自由以下组成的组：芬太尼、阿芬太尼、可待因、哌替啶、瑞芬太尼、吗啡、曲马多、丁丙诺啡、纳布啡、硫酸吗啡、盐酸氢吗啡酮、包衣吗啡硫酸盐。在一个特定的实施方案中，根据本发明的药物组合物，其中与单独施用阿片类药物时相比，阿片类药物的剂量减少。
[0240] 如本文所用，术语“药学上的”或“药学上可接受的”是指当适当地施用于哺乳动物，特别是人时，不产生不利的、过敏的或其他不良反应的分子实体和组合物。药学上可接受的载体或赋形剂是指任何类型的无毒固体、半固体或液体填充剂、稀释剂、包囊材料或配方助剂。在用于口服、舌下、皮下、肌内、静脉内、透皮、局部或直肠施用的本发明药物组合物中，该活性成分(activeprinciple)可以单独或与另一种活性成分组合以单位施用形式作为具有常规药物支撑物(support)的混合物对动物和人施用。合适的单位施用形式包括口服途径形式(例如片剂、凝胶胶囊、粉剂、颗粒剂和口服悬浮剂或溶液)，舌下和颊施用形式，气雾剂、植入物、皮下，透皮、局部、腹腔内、肌内、静脉内、皮下、透皮、鞘内和鼻内施用形式以及直肠施用形式。优选地，所述药物组合物包含可用于能够被注射的配方的药学上可接受的媒介物。这些可以特别是等渗的无菌盐溶液(磷酸二氢钠或磷酸一氢钠，钠、钾、钙或镁的氯化物等，或此类盐的混合物)，或干燥的，尤其是冻干的组合物，其根据情况添加无菌水或生理盐水以配制注射液。适用于注射用途的药物形式包括无菌水溶液或分散液；配方包括麻油、花生油或丙二醇水溶液；以及用于临时制备无菌注射液或分散液的无菌粉剂。在所有情况下，所述形式必须是无菌的，并且必须具有一定的流动性，以达到易于注射的目的。它必须在生产和储存条件下是稳定的，并且必须是防腐的以防微生物(如细菌和真菌)的污染作用。包含作为游离碱或药理学上可接受的盐的本发明的化合物的溶液可以在水中适当地与表面活性剂(例如羟丙基纤维素)混合来制备。分散液也可以在甘油、液态聚乙二醇及其混合物和油中制备。在常规的储存和使用条件下，这些制剂含有防腐剂以防止微生物的生长。可以将肽或药物缀合物(或包含肽或药物缀合物的载体)配制成中性或盐形式的组合物。药学上可接受的盐包括酸加成盐(与蛋白质的游离氨基形成)，其与无机酸(例如盐酸或磷酸)或有机酸(例如乙酸、草酸、酒石酸、扁桃酸等)形成。与游离羧基形成的盐也可以衍生自无机碱(例如钠、钾、铵、钙或铁的氢氧化物)，以及有机碱(例如异丙胺、三甲胺、组氨酸、普鲁卡因等)。
[0241] 所述载体也可以是溶剂或分散介质，其包含例如水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇和液态聚乙二醇等)，其合适的混合物和植物油。所述适当的流动性可以例如通过使用如卵磷脂的包衣，在分散液的情况下通过维持所需的颗粒尺寸以及通过使用表面活性剂来维持。微生物的作用的预防可以通过各种抗菌剂和抗真菌剂赋予，例如对羟基苯甲酸酯、三氯叔丁醇、苯酚、山梨酸、硫柳汞等。在许多情况下，优选包括等渗剂，例如糖或氯化钠。通过在组合物中使用延迟吸收的试剂，例如单硬脂酸铝和明胶，可以使可注射组合物的吸收延长。通过将所需量的活性多肽掺入适当的溶剂中，所述溶剂具有以上列举的所需的几种其他成分，然后过滤灭菌来制备无菌的可注射溶液。通常，通过将各种无菌的活性成分掺入无菌媒介物中来制备分散剂，所述无菌媒介物包含基本分散介质和来自以上列举的那些的所需的其他成分。对于用于制备无菌注射溶液的无菌粉剂，优选的制备方法是真空干燥和冷冻干燥技术，其从其先前的无菌过滤溶液中得到活性成分和任何其他所需成分的粉末。根据配方，溶液将以与剂量配方相容的方式和治疗有效量施用。所述配方易于以多种剂量形式施用，例如上述可注射溶液的类型，但是也可以使用药物释放胶囊等。对于在水溶液中的肠胃外施用，例如，如果需要，溶液应该适当地缓冲，并且首先用足够的生理盐水或葡萄糖使液体稀释剂等渗。这些特定的水溶液特别适合于静脉内、肌内、皮下和腹腔内施用。就此而言，根据本公开，可以使用的无菌水性介质对本领域技术人员是已知的。例如，可以将一剂溶解在1ml等渗NaCl溶液中，然后添加至1000ml皮下注射液中或在建议的输注部位注射。取决于待治疗受试者的状况，必然会发生剂量的一些变化。
附图说明
[0243] 图1:由靶向Flt3的siRNA抑制FLT3基因表达消除了大鼠对丁丙诺啡的耐受性。丁丙诺啡(100μg/kg s.c.)每天两次(早上和晚上)连续4天施用。每天一次(早晨)进行生理盐水或针对FLT3的siRNA(2μg/大鼠)或加扰的siRNA的鞘内注射，在每次阿片类药物注射前1小时进行。在早晨和每天一次的阿片类药物施用之前2小时和之后30分钟测量痛感阈值。结果以最大潜在镇痛作用(MPE)±S.E.M.的百分比表示。与单独用阿片类药物治疗的动物相比，*P<0.05。
[0244] 图2:Flt3基因表达抑制剂(B)对丁丙诺啡诱导的痛觉过敏和潜在疼痛致敏作用的影响。丁丙诺啡(100μg/kg s.c.)或生理盐水每天两次(早上和晚上)连续4天施用。每天一次(早晨)进行生理盐水、针对FLT3的siRNA(2μg/大鼠)或加扰的siRNA(2μg/大鼠)的鞘内注射，在每次阿片类药物注射前1小时进行。在早晨和每天一次的阿片类药物施用之前2小时和之后30分钟测量痛感阈值。在D12，每组进行一次丁丙诺啡注射(B，100μg/kg，皮下注射)，并在30分钟后评估痛感阈值。与单独用阿片类药物治疗的动物相比，*P<0.05。
[0245] 图3:小鼠中Flt3基因的缺失消除了吗啡重复施用后出现的机械性超敏反应。吗啡(10mg/kg i.p.)或生理盐水每天两次(早上和晚上)连续4天施用。在D2阿片类药物施用前和D5最后一次吗啡注射后12h，通过von Fey试验测量痛感阈值。在野生型(Flt3+/+)动物中，重复施用吗啡会降低痛感阈值，即机械性超敏反应，这完全可以防止Flt3缺乏(Flt3-/-)动物。结果为平均值±S.E.M.。与生理盐水WT相比，***P<0.001。
[0246] 图4:FLT3抑制剂舒尼替尼对吗啡诱导的镇痛的减量作用。
[0247] 将吗啡以0.5、1、1.5或2mg/kg的剂量单独施用或在施用吗啡前90分钟与3mg/kg的剂量的舒尼替尼组合施用，并在吗啡施用后30min、60min、90min、120min和150min测量爪压发声阈值(paw pressure vocalization threshold)。然后，将镇痛量计算为作为时间的函数的镇痛作用曲线下的面积。结果为平均值±S.E.M.。与单独的吗啡相比，*P<0.05。
[0248] 图5:BDT001(FLT3和FL之间的相互作用的抑制剂)对吗啡诱导的镇痛的减量作用。
[0249] 将吗啡以0.5、1、1.5或2mg/kg的剂量单独施用或在施用吗啡前90分钟与3mg/kg的剂量的舒尼替尼组合施用，并在吗啡施用后30min、60min、90min、120min和150min测量爪压发声阈值(paw pressure vocalization threshold)。然后，将镇痛量计算为作为时间的函数的镇痛作用曲线下的面积。结果为平均值±S.E.M.。与单独的吗啡相比，*P<0.05。
[0250] 图6:FLT3抑制剂舒尼替尼对吗啡诱导的镇痛的耐受性的作用。吗啡(2mg/kg s.c.)，或丁丙诺啡(100μg/kg s.c.)每天两次(早上和晚上)连续4天施用。每次吗啡注射前1h鞘内注射生理盐水、舒尼替尼(53ng/大鼠)。在早晨和每天一次的阿片类药物施用之前2小时和之后30分钟测量痛感阈值。结果以最大潜在作用(MPE)±S.E.M.的百分比表示。与单独用吗啡治疗的动物相比，*P<0.05。
[0251] 图7:FLT3抑制剂舒尼替尼对吗啡诱导的痛觉过敏和潜在疼痛致敏作用的作用。吗啡(2mg/kg s.c.)或生理盐水每天两次(早上和晚上)连续4天施用。每次吗啡注射前1h，鞘内注射生理盐水、舒尼替尼(53ng/大鼠)，每天一次(早晨)。在早晨和每天一次的吗啡施用之前2小时和之后30分钟测量痛感阈值。在D12，每组进行单独的吗啡注射(2mg/kg；s.c.)，并在30min后评估痛感阈值。与单独用吗啡治疗的动物相比，*P<0.05。
[0252] 实施例
[0253] 实施例1：慢性丁丙诺啡治疗后通过FLT3表达抑制剂降低耐受性
[0254] 材料和方法
[0255] 动物
[0256] 体重为175-199g的雄性Sprague-Dawley大鼠(Janvier,Le Genest St Isle,法国)用于本文所述的不同实验。将大鼠保持在受控的环境条件下(22℃，60％相对湿度，12小时光照/黑暗周期，在上午7:00开始光照，自由进食食物和水)。为了限制实验过程引起的压力，实验阶段的总体计划如下：
[0257] -动物的到达和居住：4天；
[0258] -使动物适应实验条件10天，以避免由于压力引起任何测量偏差的可能性；
[0259] -评估痛感阈值基线
[0260] -重复施用阿片类药物并评估治疗效果
[0261] 痛感测试
[0262] 爪压力测试：机械痛觉过敏被测量为有害机械刺激的阈值。通过改良Randall-Selitto方法(Kayser等人，1990)确定使用的大鼠的痛感阈值(NT)。简要地讲，将不断增加的压力施加于大鼠后爪直到发声。使用了Basile痛觉测量器(Bioseb，法国；针尖直径为1mm)。确定600g的临界值以防止组织损伤。
[0263] 鞘内注射
[0264] 在麻醉(异氟醚)下1分钟内通过手动腰椎穿刺进行鞘内注射。
[0265] 药物
[0266] 购自Centravet的丁丙诺啡。从Dharmacon获得了基于Flt3基因序列的加扰对照小干扰(siRNA)和针对Flt3的4种特异性siRNA(Flt3-siRNA；ref#L-040111-00-0020)的库。丁丙诺啡(100μg/kg)每天两次皮下施用，连续4天。在每次早晨进行的阿片类药物施用之前一小时，鞘内施用生理盐水、针对FLT3的siRNA(2μg/大鼠)或加扰的siRNA(2μg/大鼠)，每天一次，连续4天。
[0267] 统计分析
[0268] 数据表示为平均值±S.E.M.。为了评估治疗的时间进程的效果和各个组的比较，进行了单向和双向ANOVA重复测量，然后进行了Dunnett事后测试(Dunnett’s post hoc test)。Bonferroni的测试用于各组之间的多次比较。如果仅偶然发生的可能性小于5％(p<0.05)，则认为差异显著。
[0269] 结果
[0270] 如在对照、加扰的siRNA处理的动物中，MPE从D0到D4降低的百分比所显示的(图1)，丁丙诺啡的重复施用诱导了阿片类药物诱导的镇痛的逐步降低。用针对FLT3的siRNA进行的鞘内预处理显著降低了丁丙诺啡镇痛的减少。
[0271] 实施例2：慢性丁丙诺啡治疗后，通过FLT3表达抑制剂减少了机械性疼痛超敏反应和潜在疼痛致敏作用
[0272] 材料和方法
[0273] 动物
[0274] 体重为175-199g的雄性Sprague-Dawley大鼠(Janvier,Le Genest St Isle,法国)用于本文所述的不同实验。将大鼠保持在受控的环境条件下(22℃，60％相对湿度，12小时光照/黑暗周期，在上午7:00开始光照，自由进食食物和水)。为了限制实验过程引起的压力，实验阶段的总体计划如下：
[0275] -动物的到达和居住：4天；
[0276] -使动物适应实验条件10天，以避免由于压力引起任何测量偏差的可能性；
[0277] -评估痛感阈值基线
[0278] -重复施用阿片类药物并评估治疗效果
[0279] 爪压力测试：
[0280] 机械痛觉过敏被测量为有害机械刺激的阈值。通过改良Randall-Selitto方法(Kayser等人，1990)确定使用的大鼠的痛感阈值(NT)。简要地讲，将不断增加的压力施加于大鼠后爪直到发声。使用了Basile痛觉测量器(Bioseb，法国；针尖直径为1mm)。确定600g的临界值以防止组织损伤。
[0281] 鞘内注射
[0282] 在麻醉(异氟醚)下1分钟内通过手动腰椎穿刺进行鞘内注射。
[0283] 药物
[0284] 购自Centravet的丁丙诺啡。从Dharmacon获得了基于Flt3序列的加扰对照小干扰(siRNA)和针对Flt3的4种特异性siRNA(Flt3-siRNA；ref#L-040111-00-0020)的库。丁丙诺啡(100μg/kg)每天两次皮下施用，连续4天。在每次早晨进行的丁丙诺啡施用之前一小时，鞘内施用针对FLT3的siRNA(2μg/大鼠)或加扰的siRNA(2μg/大鼠)，每天一次，连续4天。当痛感阈值恢复到D12的基线值时，进行单次皮下注射丁丙诺啡(100μg/kg)。
[0285] 统计分析
[0286] 数据表示为平均值±S.E.M.。为了评估治疗的时间进程的效果和各个组的比较，进行了单向和双向ANOVA重复测量，然后进行了Dunnett事后测试。Bonferroni的测试用于各组之间的多次比较。如果仅偶然发生的可能性小于5％(P<0.05)，则认为差异显著。
[0287] 结果
[0288] 在丁丙诺啡处理的动物中，在D2观察到痛感阈值(即疼痛超敏反应)的显著降低，而在对照的，加扰的RNA处理的动物中，痛感阈值在D9恢复到基线值(图2)。由于潜在疼痛致敏作用，单剂量丁丙诺啡的施用使得感觉超敏反应的再现持续了2天。施用FLT3表达抑制剂(靶向Flt3的siRNA)完全可以防止丁丙诺啡诱导的疼痛超敏反应和丁丙诺啡展示的潜在疼痛致敏作用。
[0289] 实施例3：小鼠中Flt3基因的缺失消除了吗啡慢性施用后出现的机械性疼痛超敏反应。
[0290] 材料和方法
[0291] 动物
[0292] 在携带Flt3纯合缺失的雄性小鼠(Flt3KO小鼠)24和其重25-30g的同窝仔(WT)中进行实验。所有程序均获得法国研究部的批准(授权号#1006)。将动物以12小时的明/暗周期饲养在气候可控(climate-controlled)的房间中，并允许其随意获得食物和水。为了限制实验过程引起的压力，实验阶段的总体计划如下：
[0293] -动物的到达和居住：4天；
[0294] -评估痛感阈值基线；
[0295] -重复施用阿片类药物并评估治疗效果
[0296] 痛感测试
[0297] 以0.41至15g(4–150mN)的对数间隔增量，响应于用八根校准的von Frey细丝(Stoeling，Wood Dale，IL，美国)探测后掌来确定触觉退缩阈值(Tactile withdrawal threshold)。将细丝垂直地施加在爪的足底表面。通过Dixon非参数测试确定50％爪缩回阈值(以克为单位)。重复该方案，直到行为发生三处变化。
[0298] 药物
[0299] 吗啡购自Francopia。吗啡(10mg/kg)经皮下施用。
[0300] 统计分析
[0301] 数据表示为平均值±S.E.M.。为了评估治疗的时间进程的效果和各个组的比较，进行了单向和双向ANOVA重复测量，然后进行了Dunnett事后测试Bonferroni的测试用于各组之间的多次比较。如果仅偶然发生的可能性小于5％(P<0.05)，则认为差异显著。
[0302] 结果
[0303] 如图3中所示，与用生理盐水处理的动物相比，在野生型动物(Flt3+/+)小鼠中，重复施用吗啡诱导了痛感阈值(即机械性疼痛超敏反应)的降低。在缺乏Flt3的动物(Flt3-/-)中，痛感阈值保持不变，这表明在这些动物中尚未出现机械性超敏反应。
[0304] 实施例4：舒尼替尼、RTKi或BDT001，FLT3和FL之间相互作用的抑制剂，可增强吗啡诱导的镇痛，并允许吗啡剂量减少
[0305] 材料和方法
[0306] 动物
[0307] 体重为175-199g的雄性Sprague-Dawley大鼠(Janvier,Le Genest St Isle,法国)用于本文所述的不同实验。将大鼠保持在受控的环境条件下(221℃，60％相对湿度，12小时光照/黑暗周期，在上午7:00开始光照，自由进食食物和水)。为了限制实验过程引起的压力，实验阶段的总体计划如下：
[0308] -动物的到达和居住：4天；
[0309] -使动物适应实验条件10天，以避免由于压力引起任何测量偏差的可能性；
[0310] -评估痛感阈值基线
[0311] -施用吗啡并评估治疗效果
[0312] 痛感测试
[0313] 爪压力测试：机械痛觉过敏被测量为有害机械刺激的阈值。通过改良Randall-Selitto方法(Kayser等人，1990)确定使用的大鼠的痛感阈值(NT)。简要地讲，将不断增加的压力施加于大鼠后爪直到发声。使用了Basile痛觉测量器(Bioseb，法国；针尖直径为1mm)。确定600g的临界值以防止组织损伤。
[0314] 药物
[0315] 吗啡购自Francopia。皮下施用吗啡(0.5、1、1.5或2mg/kg)。FLT3抑制剂舒尼替尼购自Sigma-Aldrich。BDT001获得自Dr.Didier Rognan,Laboratoire d’Innovation Thérapeutique,CNRS/Faculté de Pharmacie,67400 Illkirch,法国。在吗啡施用前2小时腹腔内施用舒尼替尼(3mg/kg i.p.)或BDT001(1mg/kg)。
[0316] 统计分析
[0317] 吗啡的镇痛作用通过计算由梯形法确定的曲线下面积(AUC)来表示。为了评估治疗的组效果进行了双向ANOVA重复测量，然后进行了Dunnett事后测试。-Newman-Keul测试用于各组之间的多次比较。如果仅偶然发生的可能性小于5％(P<0.05)，则认为差异显著。
[0318] 结果
[0319] 如通过计算图4曲线下面积所示，吗啡施用以剂量依赖的方式诱导镇痛。如通过移向吗啡剂量反应曲线的左边所示，3mg/kg的剂量的舒尼替尼增强了1mg/kg的剂量的吗啡的镇痛作用。例如，当与舒尼替尼组合时，1mg/kg的剂量的吗啡产生的镇痛作用的量增加了一倍。此外，与舒尼替尼组合的1mg/kg的吗啡的镇痛效果的量与单独的2mg/kg剂量的吗啡产生的镇痛的量相同。因此，舒尼替尼能够增强吗啡的镇痛作用，因此可以将吗啡的剂量减少50％，而不会丧失任何镇痛作用。
[0320] BDT001(1mg/kg)本身未产生镇痛：施用后30分钟，在用盐水和BDT001处理的动物中，施加在后爪上以获得撤回的压力分别为250±7.4g和252.5±9.0g(在6只动物中获得的值为平均值±S.E.M.)。相比之下，吗啡(1.5mg/kg)施用后30分钟的压力为502.5±20.0g。
[0321] 图5显示了以AUC表示的对吗啡的剂量反应：无BDT001和有BDT001时，吗啡的ED50值(产生50％的最大反应的有效剂量)分别为1.11mg/kg和1.56mg/kg。BDT001的吗啡剂量减少效应为30％。
[0322] 实施例5：舒尼替尼、来他替尼、两种RTKi或BDT001(FLT3和FL之间的相互作用的抑制剂)降低慢性吗啡治疗后的耐受性
[0323] 材料和方法与实施例1中的相同，不同之处在于吗啡(2mg/kg)与鞘内注射的舒尼替尼(53ng/大鼠)或来他替尼(175ng/大鼠)一起皮下施用，连续4天每天两次。在另一个实验中，将BDT001(1mg/kg)与吗啡(2mg/kg)一起腹腔内注射。
[0324] 结果
[0325] 如在对照动物中MPE从D0到D4降低的百分比所显示的，吗啡的重复施用(图6)诱导了吗啡诱导的镇痛的逐步降低。用FLT3抑制剂舒尼替尼进行的鞘内预处理显著降低了吗啡镇痛的减少。用鞘内注射的另一种FLT3 RTK抑制剂来他替尼，和腹腔内注射的BDT001获得了相似的效果。
[0326] 实施例6：慢性吗啡治疗后，通过舒尼替尼或BDT001减少了机械性疼痛超敏反应和潜在疼痛致敏作用
[0327] 材料和方法与实施例2相同，不同之处在于吗啡(2mg/kg)代替丁丙诺啡施用并且腹腔内施用舒尼替尼(3mg/kg)。在另一个实验中，腹腔内注射BDT001(1mg/kg)。
[0328] 结果
[0329] 在吗啡处理的动物中，在D2观察到痛感阈值(即疼痛超敏反应)的显著降低，而在对照的、加扰的RNA处理的动物中，痛感阈值在D9恢复到基线值(图7)。由于潜在的疼痛致敏作用，单剂量吗啡的施用使得感觉超敏反应的再现持续了2天。施用舒尼替尼完全阻止了吗啡诱导的疼痛超敏反应和吗啡展现的潜在疼痛致敏作用的发展。用BDT001获得了类似的结果。
[0330] 参考文献
[0331] 在整个本申请中，各种参考文献描述了本发明所属的技术现状。这些参考文献的公开内容通过引用并入本公开。
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