治疗疼痛的方法
阅读：943发布：2020-05-13
专利汇可以提供治疗疼痛的方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 提供 治疗 疼痛 的方法和组合物，通过颅面粘膜 给药 给予止痛成分(如，非阿片类止痛肽，NOP激动剂或者N/OFQ)。某种止痛肽如N/OFQ的鼻腔给药导会致全身性的止痛效果。，下面是治疗疼痛的方法专利的具体信息内容。
1.一种镇痛化合物在制备用于治疗个体的疼痛的鼻腔给药制剂中的用途，其中，所述镇痛化合物是N/OFQ。
2.根据权利要求1所述的用途，其中所述鼻腔给药制剂用于三叉神经痛的治疗。
3.根据权利要求1所述的用途，其中所述鼻腔给药制剂用于躯体疼痛的治疗。
4.根据权利要求1所述的用途，其中所述鼻腔给药制剂用于神经性疼痛的治疗。
5.根据权利要求1所述的用途，其中所述鼻腔给药制剂用于急性痛的治疗。
6.根据权利要求1所述的用途，其中所述鼻腔给药制剂用于慢性痛的治疗。
7.根据权利要求1所述的用途，其中所述疼痛是颅面疼痛或者头痛。
8.根据权利要求1-7中任一项所述的用途，其中所述N/OFQ以药物组合物的形式给药。
9.根据权利要求8所述的用途，其中所述药物组合物还包括一种或多种药学上可接受的赋形剂。
10.根据权利要求8所述的用途，其中所述药物组合物还包括至少一种吸收促进剂。
11.根据权利要求1-7中任一项所述的用途，其中给药导致VAS疼痛评分降低30％或者更多。
治疗疼痛的方法
[0002] 本发明有部分在NIH基金No.1R43DE020816-01资助下完成。美国政府对本发明具有一定的权力。
背景技术
[0003] 疼痛是由某些大脑结构激发介导的知觉。疼痛通常由当分布于皮肤或者其他周边组织的专门的神经细胞，伤害感受器，被机械的，热的，化学的或者其他有害的刺激物激活而引起。在周边或中央神经组织涉及疼痛的过程时变得异常活跃时，疼痛也会发生，如一个创伤，缺血或炎症的导致的疼痛结果。其他引起疼痛的原因有：特定疾病的过程，代谢紊乱，肌肉痉挛，一个神经性事件或综合征的发病。
[0004] 几乎任何类型的疼痛治疗通常包括一种或多种止痛药物，止痛药物通常分为三类：主要非阿片类，阿片类药物，及复合止痛药，又称为佐剂。非阿片类止痛药物包括对乙酰氨基酚和非甾体类消炎药或NSAIDs。这些药物可用于有效治疗轻度至中度疼痛，但可能有显著的副作用，如对乙酰氨基酚引起肝脏的损伤和NSAIDs引起的胃溃疡。
[0005] 阿片类药物，有时也被称为“毒品”，包括天然物质，如鸦片，鸦片衍生的物质，如吗啡，和半合成和化学合成物质，如芬太尼。复合镇痛剂(Co-analgesic medications)是通常针对其适应症的麻醉药品，而不是用于缓解疼痛，但对某些疼痛情况有止痛性作用。复合止痛药的一个例子是加巴喷丁(gaba transdermal pentin)，其最初是适合对癫痫的治疗，但是对处理某些神经性疼痛也有积极作用。
[0006] 阿片类药物通常用于缓解中度至重度疼痛。然而，在正常治疗慢性乙型肝炎的过程中会产生耐受性和依赖性，所以它们的作用是有限的。阿片类药物如吗啡可以上瘾，并除止痛和精神改变以外，有显著和潜在的致命副作用，如呼吸抑制，便秘，恶心，放大疼痛的敏感性，激素紊乱以及免疫系统的改变。
[0007] 尽管有广泛的可用药物治疗，疼痛继续折磨着仅在美国就数以百万计的人，对患者，医疗保健以及企业仍然是一个沉重的负担。
发明内容
[0008] 本发明公开的治疗疼痛的方法和组合物是通过采用对颅面粘膜给予NOP激动剂的治疗，例如，孤啡肽(nociceptin，又称致痛素)/孤啡肽(N/OFQ)的鼻腔给药。
[0009] 一方面，本发明提供一种治疗疼痛的法，包括对一个有需要的个体通过有效剂量的NOP激动剂的颅面粘膜的给药。在一些实施例中，所述治疗包括三叉神经痛，肉体疼痛，神经性疼痛，术后疼痛以及肌肉疼痛的治疗。在一些实施例中，所述治疗包括急性疼痛和慢性疼痛。在一些实施例中，所述疼痛可以是颅面疼痛或者头部疼痛。在一些实施例中，所述颅面疼痛或者头部疼痛是由颞下颌关节紊乱(TMJ)，偏头痛，或者三叉神经痛引起。
[0010] 在一些实施例中，所述颅面粘膜给药包括鼻腔给药，口腔给药，舌下给药，或者结膜给药。在一个特别的实施例中，所述粘膜给药是鼻内给药。在一些实施例中，所述NOP激动剂低于鼻腔的三分之二之处给药。在一些实施例中，特别的，所述NOP激动剂给药到达低于三分之二和高于三分之一的鼻腔处。在一些实施例中，所述NOP给药通过结膜给药或者通过其他眼周围组织。
[0011] 在特别的实施例中，所述NOP激动剂是N/OFQ。在一些实施例中，所述任何方法还包括通过至少一种附加的活性剂给需要的个体给药，其中附加的活性剂可以在NOP激动剂给药之前，之后或者同时给药。在一些实施例中，进一步的，所述方法可包括通过至少2种附加活性剂给需要的个体给药，其中附加的活性剂可以在NOP激动剂给药之前，之后或者同时给药。
[0012] 另一方面，本发明提供一种治疗疼痛的方法，包括对一个需要的个体通过有效剂量的NOP激动剂的颅面粘膜的给药，其中给药导致全面止痛的效果。在一些实施例中，所述治疗包括疼痛的缓和。在一些实施例中，所述治疗包括疼痛的预防。在一些实施例中，所述颅面粘膜给药包括鼻腔给药，口腔给药，舌下给药，或者结膜给药。在一个特别的实施例中，所述粘膜给药是鼻内给药。
[0013] 一方面，本发明提供一种治疗疼痛的方法，包括对一个需要的个体通过有效剂量的N/OFQ的鼻内给药。在一些实施例中，N/OFQ给药的计量单位大约为0.2mg-5000mg。在一些实施例中，给药导致VAS疼痛评分(pain rating)降低30％或者更多。
[0014] 另一方面，本发明提供用于治疗或预防偏头痛的疼痛或治疗偏头痛的方法，包括对一个有需要的个体通过有效剂量的NOP激动剂的给药，其中NOP激动剂的给药通过颅面粘膜给药，如鼻腔内给药。在一些实施例中，所述治疗包括治疗一种或多种偏头痛的相关症状，如恶心，畏光和恐响症(phonophobia)。在一些实施例中，所述偏头痛是无预兆的偏头痛，有预兆的偏头痛，或者是有预兆但不头疼的偏头痛。在一个特别的实施例中，所述治疗偏头痛的方法包括对一个有需要的个体通过有效剂量的N/OFQ的鼻腔给药。
[0015] 本发明还提供含有止痛成份(如，非阿片类止痛肽，NOP激动剂或者N/OFQ)的药物组合物，以及将这种药物组合物通过颅面粘膜给药的方法(例如鼻内给药、口腔给药、舌下给药，或者结膜给药)。以及包括有所述药物组合物和可选的给药装置的试剂盒。进一步的，所述药物组合物还包括一种或多种药学上可接受的赋形剂，佐剂，稀释剂或者稳定剂。在一些实施例中，所述药物组合物或所述试剂盒还包括一种或多种附加激活剂，例如至少一种附加的止痛成份，血管收缩剂，至少一种蛋白酶抑制剂和/或者至少一种吸收促进剂。
[0016] 另一方面，本发明还提供止痛化合物的应用(如，非阿片类止痛肽，NOP激动剂或者N/OFQ)，或者包括止痛化合物(如，非阿片类止痛肽，NOP激动剂或者N/OFQ)的药物组合物在制备通过颅面粘膜给药(如鼻内给药)来治疗疼痛的药物中的应用。还提供一种止痛化合物(如，非阿片类止痛肽，NOP激动剂或者N/OFQ)通过颅面粘膜给药(如鼻内给药)的来治疗疼痛的用途。附图说明
[0017] 图1显示的是对热刺激反应的脸颊缩回潜伏期的A-delta实验：i.n.致痛素(0.2mg/kg，1.0mg/kg和5.0mg/kg)对比于i.v.致痛素(5.0mg/kg)对比于i.m.吗啡(0.25mg/kg)对比于i.m.生理盐水。数据以平均值±1SEM表示。(n＝6只大鼠/组)
[0018] 图2显示的是对热刺激反应的脸颊缩回潜伏期的C-fiber实验：i.n.致痛素(0.2mg/kg，1.0mg/kg和5.0mg/kg)对比于i.v.致痛素(5.0mg/kg)对比于i.m.吗啡(0.25mg/kg)对比于i.m.生理盐水。数据以平均值±1SEM表示。(n＝6只大鼠/组)
[0019] 图3显示的是对热刺激反应的缩爪潜伏期的A-delta实验：
[0020] i.n.致痛素(0.2mg/kg，5.0mg/kg)对比于i.v.致痛素(5.0mg/kg)对比于i.m.吗啡(0.25mg/kg)对比于i.m.生理盐水。数据以平均值±1SEM表示。(n＝6只大鼠/组)
[0021] 图4显示的是对热刺激反应缩爪潜潜伏期的C-fiber实验：
[0022] i.n.致痛素(0.2mg/kg，5.0mg/kg)对比于i.v.致痛素(5.0mg/kg)对比于i.m.吗啡(0.25mg/kg)对比于i.m.生理盐水。数据以平均值±1SEM表示。(n＝6只大鼠/组)
[0023] 图5显示的是对热刺激反应的脸颊缩回潜伏期的C-fiber实验：皮下注射致痛素拮抗剂(10.0mg/kg)加i.n.致痛素(5.0mg/kg)对比于皮下注射生理盐水加致痛素(5.0mg/kg)。数据以平均值±1SEM表示。(n＝3只大鼠/组)
[0024] 图6显示的是对热刺激反应的脸颊缩回潜伏期的C-fiber实验：皮下注射致痛素拮抗剂(10.0mg/kg)+i.n.致痛素(5.0mg/kg)对比于皮下注射生理盐水+致痛素(5.0mg/kg)。数据以平均值±1SEM表示。(n＝3只大鼠/组)
[0025] 图7显示的对热刺激反应的缩爪潜伏期的A-delta实验：
[0026] 皮下注射致痛素拮抗剂(10.0mg/kg)+i.n.致痛素(5.0mg/kg)对比于，皮下注射生理盐水+致痛素(5.0mg/kg)。数据以平均值±1SEM表示。(n＝3只大鼠/组)
[0027] 图8显示的热刺激反应的缩爪潜伏期的C-fiber实验：
[0028] 皮下注射致痛素拮抗剂(10.0mg/kg)+i.n.致痛素(5.0mg/kg)对比于皮下注射生理盐水+致痛素(5.0mg/kg)。数据以平均值±1SEM表示。(n＝3只大鼠/组)
[0029] 图9显示的是，通过对嘴唇上注射福尔马林的雄性大鼠的反应来比较鼻腔给药N/OFQ和吗啡的止痛活性。饰脸时间(Time spent grooming)超过45分钟，并且每3分钟分一组。鼻腔给药的成分浓度为：吗啡3.0mg/鼠和N/OFQ 0.3mg/鼠。每个成分或媒介物(Vehicle)的曲线面积(AUC)通过类似trapezodial方法。％降低＝[(媒介物AUC治疗AUC)/媒介物AUC)]x 100％.数据以平均值±1SEM表示。(n＝6-8只大鼠/组)。
[0030] 图10表示的是术后鼻腔给药1，3，5和10mg/kg N/OFQ对因小鼠爪子上切口导致的点状异常性疼痛的剂量反应。数据以平均值±1SEM表示。(n＝6-13只大鼠/组)。与媒介物相比，*-p＜0.05&**p＜0.01，与术后值相比，#-p＜0.05&##p＜0.01。
[0031] 图11和12显示的是对雄性大鼠后肢足底表面手术切口后的静态的异常性疼痛的N/OFQ给药的抗-异常性疼痛(anti-allodynic)活性。作切口后24小时N/OFQ以5.0mg/kg浓度鼻腔给药(图11)或者作切口后24小时以5.0mg/kg浓度静脉注射给药(图12)。缩回的50％阀值根据给药后每30分钟用von Frey filaments采用自上而下的方法测定。数据以平均值±1SEM表示。(n＝5-6只大鼠/组)。与媒介物相比，*p＜0.05。
[0032] 图13表示的是对雄性大鼠脸颊手术切口后的静态的异常性疼痛N/OFQ给药的抗-异常性疼痛的活性。作切口后24小时N/OFQ以5.0mg/kg浓度鼻腔给药。缩回的50％阀值根据给药后每30分钟用von Frey filaments采用自上而下的方法测定。数据以平均值±1SEM表示。(n＝4-5只大鼠/组)。与媒介物相比，*-p＜0.05。
[0033] 图14显示的是对小鼠脸颊上切口导致的点状异常性疼痛的术后鼻腔给药1，3，5和10mg/kg N/OFQ的剂量反应。数据以平均值±1SEM表示。(n＝5-13只大鼠/组)。与术后值相比，#-p＜0.05&##p＜0.01。
[0034] 图15表示的是对雄性大鼠保留神经损伤(spared nerve injury，SNI)实验中的的静态点状异常性疼痛N/OFQ给药的抗-异常性疼痛活性。手术后21天N/OFQ以5.0mg/kg浓度鼻腔给药。缩回的50％阀值根据给药后每30分钟用von Frey filaments采用自上而下的方法测定。数据以平均值±1SEM表示。(n＝4-6只大鼠/组)。
[0035] 图16表示在的是N/OFQ(5.0mg/kg)鼻腔给药，吗啡(4.0mg/kg)鼻腔给药，或者腹腔给药吗啡(3.0mg/kg)在肠道的通过(transit)，用媒介物(vehicle)的％表示。成分在给以木炭餐(2mL/大鼠)之前20-30分钟给药。餐后30分钟大鼠被处死。transit％通过计算药物木炭标记的行驶距离除以小肠全长的比例乘以100％。数据以平均值±1SEM表示。(n＝8只大鼠/组)。本发明提供的是通过止痛化合物的给药来治疗疼痛的药物组合物、方法以及其它，例如非阿片类止痛肽，多肽，或者蛋白(如，致痛素/孤啡肽(N/OFQ)或者其他非阿片类分子通过颅面粘膜给药。
[0036] 定义
[0037] 虽然严格意义上来说，止痛(analgesia)是疼痛消失，本文所使用的，
[0038] “止痛”(analgesia)指的是个体疼痛感的减少。
[0039] “镇痛剂”(Analgesia agent)，“止痛剂”(analgesic agent)或“止痛药”(analgesic)是指减轻或预防疼痛的任何生物分子，药物或活性剂。“急性痛”(Acute pain)指的是一个特定原因(伤害，感染，炎症等)引起的、持续有限时间的突然的疼痛(与慢性痛相反)。“慢性痛”(Chronic pain)指的是持续状态的疼痛。慢性痛通常与长期的不能治愈的或者难治的临床状况或者疾病有关。“术后痛”(Procedural pain)指的是从医疗，牙科手术或其他手术，其中手术中可能有计划或涉及到严重创伤而引起的疼痛。“头痛症”包括偏头痛，紧张性疼痛，组合性头痛，三叉神经痛，二级头痛，以及杂型头痛。
[0040] “偏头痛”，包括偏头痛头疼，无先兆的偏头痛，有先兆的偏头痛，有预兆但不头疼的偏头痛。
[0041] “全身副作用”，包括但不限于，心血管疾病，包括外围血管扩张和压力感受器抑制；皮肤病，包括皮肤瘙痒(瘙痒)，脸红和红眼睛；胃肠道疾病包括恶心，呕吐等胃肠道，胃肠蠕动减少，胆汁分泌减少，胰腺和肠道分泌物和消化食物的延误，大肠减少蠕动波导致便秘，上腹不适或胆胆道绞痛在，呼吸上包括呼吸受阻；泌尿上包括尿急，排尿困难；及周边肢体沉重。
[0042] “中央神经系统的副作用”或“中枢神经系统的副作用”(CNS side effects)，包括但不限于，麻醉，兴奋，嗜睡，冷漠，精神病，精神错乱，情绪改变，体温降低，感受放松，烦躁(焦虑，抑郁，或不安的情绪状态特点)，恶心和呕吐(延髓化学感受器的直接刺激引起)。
[0043] “全身止痛效果”是指对身体的任何部分的影响。可通过或不通过活性剂的系统循环(systemic circulation)而达到全身性的镇痛效果。例如，一个全身性的镇痛效果，可以由孤啡肽的鼻腔给药达到，可能不会产生显著的N/OFQ的肽系统循环。
[0044] “颅面粘膜给药”是指通过鼻子的粘膜表面，鼻腔通道，鼻腔，口腔黏膜包括牙龈(牙床)，口腔底部，嘴唇，舌头；以及眼睛粘膜表面或周围，包括结膜，泪腺，泪管，上或下眼睑和眼黏膜以及眼睛等给药。
[0046] “鼻腔劣势地区”是指一般鼻腔中鼻甲骨头突出的部分，是一个明显三叉神经支配的鼻腔地区。“鼻腔优势地区”的定义为第三和筛板区域，其中嗅觉神经支配位于该区域。
[0047] 致痛素(Nociceptin)/孤啡肽(N/OFQ)是一个17个氨基酸的肽，分子量1809，属于阿片肽家族。人的N/OFQ氨基酸序列是：
[0048] 它与G蛋白偶联受体结合，该受体通常称为ORL1，现在正式命名为NOP受体。尽管NOP受体是阿片类药物受体家族的一个蛋白，阿片类药物与NOP受体结合并不高度紧密；N/OFQ与阿片类药物受体的结合也不紧密。
[0049] 因此，N/OFQ被认为非阿片类肽。当N/OFQ被首次发现并由侧脑室(ICV)给药途径在小鼠中实验时，发现小鼠减少甩尾并降低了热板潜伏期。这说明，与阿片类多肽不同，N/OFQ是有疼痛反应的，而不是无疼痛的。一些课题组的进一步研究指出，i.c.v.N/OFQ阻塞了阿片类止痛药通过每个阿片类药物受体介导。
[0050] 然而，鞘内注射(i.t)/OFQ时加强了吗啡的镇痛效果或自身就可镇痛。这说明N/OFQ的给药位置对它的最终效用非常重要。当第一个NOP受体拮抗剂设计出后，i.c.v.给药实验，并发现具有止痛效果。
[0051] 和阿片类受体家族的其他成员一样，NOP受体是Gi/O耦合。为了不受任何特定理论的约束，活化的NOP受体可能导致细胞内cAMP水平下降，它也能抑制G蛋白偶联受体的钾离子通道(GIRK通道)。
[0052] 这可能会导致受体所在的细胞的极化和细胞活性降低。N/OFQ可能通过减少神经元的活性而在大脑中起作用，这可能会导致内源性或外源性阿片类药物活性的衰减，从而解除疼痛的途径的抑制。在脊髓中，细胞定位可能作用象止痛药，与阿片类药物类似，但其作用机制可能会有所不同。
[0053] NOP受体及N/OFQ在整个大脑许多区域被发现，因而有许多中枢神经系统的行为。一个有大量的NOP受体的区域是三叉神经节。这也是介导颅面部和头部疼痛的大脑区域，由于各种状况，包括颞下颌关节紊乱病(TMJ)，偏头痛，三叉神经痛等。
[0054] N/OFQ鼻内给药可能集中在三叉神经节，并减少这些神经元的活动。虽然这些神经元的抑制效果未经测试无法知晓，一种可能性是区域的镇痛作用。
[0055] 另外，是否N/OFQ在大脑的其他部分会达到浓度足够高到可以抑制止痛反应(像N/OFQ的i.c.v给药中看到的一样)还未知。鉴于N/OFQ具有不同的功能，在所述CNS的一些区域和CNS其他区域和神经末梢存在痛觉过敏，鼻内给药后N/OFQ的所有的结果是不可预知的。
[0056] 在热痛觉大鼠模型中，N/OFQ鼻内给药显示，在热诱导疼痛中在面对A-delta和C-fiber痛阈测试时具有剂量依赖型止痛效果，而当静脉注射给药时N/OFQ显示低的或者没有效果。
[0057] 这就说明鼻腔给药的N/OFQ的止痛效果不是全身血液循环的结果。一个观察到的更让人惊奇的结果是，热导致大鼠后爪疼痛，在A-delta和C-fiber疼痛阀值实验中，鼻腔给药N/OFQ对于大鼠后爪热诱导产生的疼痛显示剂量依赖性止痛效果(图3和4)。在爪子静脉注射孤啡肽的实验表明，很少或根本没有效果。
[0058] 因此，鼻内给药时，N/OFQ显示对疼痛不仅是一个区域的止痛效果(例如在脸上)，也是一个全身性的止痛效果，而同样剂量的系统给药(如.i.v.给药)显示很少或根本没有止痛作用。事实上，i.n.孤啡肽产生一个全身性的止痛作用，而系统给药没有效果，可能意味着，i.nN/OFQ可能激活了下调疼痛调节系统。因此，本发明提供的，是一种用于治疗疼痛的方法使用鼻内的N/OFQ，其中鼻内给药的结果在一个全身性的止痛效果。
[0059] 在本发明的方法同样非常有用是NOP受体的激动剂或NOP激动剂，包括肽和非肽类化合物。NOP激动剂肽的例子包括但不仅限于N/OFQ，缩短的N/OFQ类似物(Reinscheid，R.K.et al，J.Biol.Chem.(1996)271：14163-14168)，NOP激动剂肽例如UFP-102，UFP-112(Carra，G.et al，J.Pharmacol.Exp.Ther.(2005)312：1114-1123；Rizzi，A.et al，Peptides(2007)28：1240-1251)，和NOP激动剂元胜肽如Syn 1020(Khroyan，T.V.et al.Eur.J.Pharmacol.(2007)560：29-35)。小分子NOP激动剂例如包括hexahydrospiro[piper idine-4，1′-pyrrolo[3，4-c]pyrroles](Kolczewski，S.et al，J.Med.Chem.(2003)46：255-264)和其他非肽类NOP激动剂。虽然用于治疗头和颜面部疼痛的止痛分子的鼻腔，结膜，口腔递药已被提出(美国20070093420，美国20070054843)，然而迄今，仍然没有NOP激动剂的鼻腔，结膜，口腔递药用于治疗疼痛的效果的确实证据。
[0060] 许多肽被认为是止痛药。他们通过各种途径给药以提供本位的，区域的和/或全身的止痛作用。有一类止痛肽，被称为“阿片肽”，具有阿片受体结合部分，与阿片受体结合具有高亲和力。阿片肽是一种自然发生的内源性肽片段，类似物或衍生物。阿片肽也可以是一个非内源性肽片段，类似物或衍生物。阿片肽的例子有内啡肽，脑啡肽，强啡肽，皮啡肽(dermorphins)，皮脑啡肽(dermenkephalins)，吗啡感受素(morphiceptin)，内吗啡肽，达拉根(dalargin)，和其他合成的mu，delta和kappa激动剂肽。
[0061] 此处使用的“非阿片类止痛肽”是指一种止痛肽，其减轻或预防疼痛是通过一种机制，而不是其与阿片类受体具有高的亲和力，或者是一个肽，对于阿片受体比通常被认为是鸦片或鸦片类药物分子具有更低的亲和力。例如，对μ-，δ和κ阿片受体具有低亲和力(如少于约1微米或小于约10微米)的止痛肽被认为是一种非阿片类止痛肽。
[0062] 除非特别注明，此处“结合亲和力”是具有一个摩尔浓度(m)单位的解离常数(KD)，其特定蛋白的结合位点，一半是被占领时对应的配体的浓度，即配体在受体与配体结合的浓度，等于配体与受体没有结合的浓度。解离常数越小，配体的结合就越紧密，配体与蛋白质之间的亲和力就越高。
[0063] 例如，一个具有nM解离常数的配体比具有μM解离常数的配体与特定蛋白的结合更紧密。当一个配体与一个受体结合的亲和力低于1μM，其受体-配体结合的解离常数比1μM高。
[0064] 本发明方法使用的非阿片类止痛肽类的举例包括但不仅限于如下视丘分泌素(hypocretins)/食欲素(orexins)，降钙素(calcitonin)，奥曲肽(octreotide)，生长抑素(somatostatin)，血管加压素(vasopressin)，甘丙肽，促脂素C片段(C-fragment of lipotropin)和Ac-rfwink-NH2，ω-芋螺毒素GV1A(omega-conotoxin GV1A)，ω-芋螺毒素MVIIA，痛觉肽神经递质受体CGRP1和CGRP2的肽拮抗剂，如CGRP 8-37和CGRP 28-3；痛觉肽神经递质受体NK1，包括N-acetyl tryptophan，D-Pro9-[Spiro-y-lactam]-Leu 10，Trp 11-Physalaemin(1-11)，Tyr-D-Phe-Phe-D-His-Leu-Met-NH2(Sendide)和spantide II。痛觉肽神经递质受体NK2，包括PhCO-Ala-Ala-D-Trp-Phe-D-Pro-Pro-Nle-NH2(GR98400)，[Tyr5，D-Trp6，8，9，Lys 10]-NKA(4-10)(MEN10376)及其衍生物。痛觉肽神经递质受体VPAC2，VPAC1and PAC1，包括VIP(6-28)，Ac His(1)[D-Phe(2)，K(15)，R(16)，L(27)]VIP(3-
7)/GRF(8-27)。
7)/GRF(8-27)。
[0065] 专利号7220725的美国专利公开了焦谷氨酸三肽和四肽做成软膏，霜剂或药膏治疗疼痛的使用。专利号为7220725的美国专利中公开的焦谷氨酸三肽(tripeptides)和四肽(tetrapeptides)在本发明也可以通过鼻内给药用于治疗疼痛。可以提供的止痛效果的蛋白质在本发明所述方法中也可以使用，如脑源性神经营养因子(BDNF)，神经生长因子(NGF)，神经营养因子-3(NT-3)，肉毒杆菌毒素，抗炎症细胞因子(如白细胞介素4，白细胞介素-10和白细胞介素-13。)
[0066] 本发明所述方法中使用的化合物可以通过本领域的适当的实验进行评估，如人体临床研究和治疗疼痛的动物模型试验。在一些实施例中，在本发明所述方法中所用的化合物的颅面粘膜给药显示了一个全身性的止痛效果，如通过鼻内给药。在一些实施例中，在本发明所述方法中使用的化合物显示了通过鼻腔给药比静脉给药具有更强的止痛作用。在一些实施例中，所述化合物显示通过静脉注射给药时，很少或根本没有镇痛作用。在一些实施中，本发明所述方法中化合物的颅面粘膜给药可显著导致化合物在全身的血液循环。在一些实施例，本发明所述方法中化合物的颅面粘膜给药可导致成分的某些血液循环。在一些实施例中，所述化合物的颅面黏膜给药不会造成显著中枢神经系统的副作用。
[0067] 疼痛
[0068] 疼痛是一种与实际的或潜在的组织损伤相关的不愉快的感觉和情绪体验，这种损伤可以是(http://www.iasp-pain.org/)所述，如表1根据国际疼痛研究协会中的建议所作分类。
[0069] 表1
[0070]
[0071]
[0072] 使用本发明所述方法的可治疗的疼痛包括此处所述的任何疼痛，如疼痛的任意组合见表1。
[0073] 在某些方面，本发明提供止痛成分(如非阿片类止痛肽，NOP激动剂或N/OFQ)由颅面粘膜给药(如鼻内给药，口腔给药，舌下给药或结膜给药)治疗疼痛的方法。在一些实施例中，疼痛是躯体疼痛。在一些实施例中，疼痛是一种浅层的躯体疼痛。在一些实施例中，疼痛是一种深处的躯体疼痛。在一些实施例中，疼痛是一种肌肉骨骼疼痛。在一些实施例中，疼痛是一种内脏疼痛。在一些实施例中，疼痛是一种神经性疼痛。在一些实施例中，疼痛是一种头部疼痛或颅面部疼痛。在一些实施例中，疼痛是围术期/围手术期疼痛。在一些实施例中，本发明提供一种安全有效的不会造成严重的镇静作用，呼吸抑制和/或成瘾的痛苦的治疗。
[0074] 在一些实施例中，本发明提供止痛化合物(如非阿片类镇痛药的肽，NOP激动剂或/OFQ)通过治疗颅面粘膜给药(如鼻腔给药，口腔给药，舌下给药或结膜给药)治疗急性疼痛的方法。急性疼痛的例子包括但不限于创伤性疼痛，程序(外科，口腔科，皮肤科等)痛，伤口护理疼痛，头痛(偏头痛，丛集等)，肌肉骨骼/脊椎疼痛(如背痛)，耳痛，牙痛，缺血(如心脏)的疼痛，急性青光眼，胃肠道疾病(胆囊炎，肠扭转，阑尾炎等)，泌尿系统疾病(结石，睾丸扭转等)，痉挛，感染，炎症引起的疼痛(痛风，红斑狼疮等)，毒素(昆虫，动物等)，咽痛，月经周期和分娩疼痛。
[0075] 在一些实施例中，非阿片类镇痛肽，NOP激动剂或N/OFQ抑制运动相关的剧烈刺痛。这种类型的，如果疼痛是阿片类药物不良覆盖，而在围术期的设置中是非常有意义的。在一些实施例中，非阿片类镇痛肽，NOP激动剂或N/OFQ鼻内递药治疗急性程序疼痛例如在手术(例如，患者在经历的重大手术，如髋关节和膝关节置换术)中或手术后经历的疼痛。
[0076] 在一些实施例中，本发明提供止痛化合物(如非阿片类镇痛药的肽，NOP激动剂或/OFQ)由颅面粘膜给药(如鼻内给药，口腔给药，舌下给药或结膜给药)治疗慢性疼痛的方法。慢性疼痛的例子包括但不限于纤维肌痛，关节炎疼痛，癌症疼痛，肌肉骨骼/脊椎疼痛(包括背痛)，颞下颌关节紊乱(TMJD或TMJ)，三叉神经痛，慢性头痛，复杂区域疼痛综合征(I型和II型)，神经系统疾病(MS，糖尿病神经病变等)相关的疼痛，神经瘤，盆腔炎，子宫内膜异位症，带状疱疹和带状疱疹后神经痛，慢性神经病变相关的感染(如HIV)，化疗引起的神经性疼痛，手术引起的神经性疼痛，创伤引起的神经性疼痛，外阴痛，非典型颅面部疼痛，神经根型颈椎病/坐骨神经痛，幻肢(phantom limb)，牙痛，灼口综合征。
[0077] 偏头痛和头痛
[0078] 可引起头部疼痛的各种医学状况，包括但不限于，原发性头痛，如偏头痛，丛集性头痛，紧张或压力性头痛，慢性每日头痛，特殊情况引起的次生头痛，如肿瘤和传染病引起的继发性头痛，毒素摄入或过度饮酒和三叉神经痛。，如本发明所述，原发性血管性头痛的常见类型是偏头痛，丛集性头痛较为少见，但同样会引起衰弱。考虑到受影响的个人的数量最多，紧张或“压力”型头痛被认为是所有类型中最常见的头痛。这些头痛或头痛疾病的特点，在HIS有描述并总结在表2。
[0079] 表2
[0080]
[0081]
[0082] 使用目前的药物头痛和三叉神经痛往往得不到有效的治疗，急需新的方法缓解疼痛。因此，本发明的一些方面，提供治疗头痛或者三叉神经痛的方法，通过有效的量的NOP激动剂的给药，其中给药可导致胪面或者头部区域的止痛。NOP激动剂可给药于有头痛的病人包括，但不限于，偏头痛，丛集性头痛，紧张性头痛，头痛和三叉神经痛的次生类型。
[0083] 在某些方面，本发明提供治疗偏头痛或者其他疼痛的方法，包括对需要的个体给予有效剂量的止痛化合物(如非阿片类止痛肽，NOP激动剂或N/OFQ)通过颅面粘膜给药(如鼻腔给药，口腔给药，舌下给药或结膜给药)。在一些实施例中，本发明提供治疗偏头痛的方法，包括给有需要的个体通过有效剂量的N/OFQ的鼻腔给药。
[0084] 在一些实施例中，所述偏头痛是无预兆的偏头痛，有预兆的偏头痛，或者是有预兆但不头疼的偏头痛，基底动脉型偏头痛，家族性偏瘫性偏头痛，散发性偏瘫性偏头痛，腹型偏头痛，非头痛性偏头痛(acephalgic migraine)或经期偏头痛。在一些实施例中，所述治疗包括减轻或预防偏头痛相关的一个或多个症状。在一些实施例中，症状是前驱症状阶段症状，先兆阶段症状，疼痛阶段症状或后期症状阶段症状。在一些实施例中，所述治疗包括减轻或预防恶心，畏光和高声恐惧症的症状中一个或多个症状。
[0085] 方法
[0086] 一方面，本发明提供的是个体的疼痛治疗方法，包括：通过颅面粘膜给药，给个体一个有效剂量的止痛化合物或包含有止痛化合物的药物组合物。某些方面，本发明所述方法中止痛化合物包括，但不限于，具有止痛作用的肽，氨基酸，多肽或小分子化合物。在一些实施例中，止痛成分是一种非阿片类止痛肽。
[0087] 在一些实施例中，所述止痛成分是止痛肽，通过一种机制而不是高亲和力与跟阿片类受体结合减轻或防止疼痛，在一些实施例中，所述止痛成分是的肽，该肽与阿片受体的亲和力低于通常被认为是鸦片或鸦片类的药物分子。在一些实施例中，所述止痛成分是一种止痛肽，对μ-，δ和κ阿片受体具有低于10mM，低于1mM，低于0.1mM，低于10μM，或者低于1μM的亲和力(如少于约1微米或小于约10微米)。
[0088] 在一些实施例中，所述止痛成分是非阿片类止痛肽，选自如下：hypocretins/食欲素，降钙素，奥曲肽，生长抑素，血管加压素，甘丙肽，促脂素C片段和Ac-rfwink-NH2，ω-芋螺毒素GV1A，ω-芋螺毒素MVIIA，痛觉肽神经递质受体CGRP1和CGRP2的肽拮抗剂，如CGRP 8-37和CGRP 28-3；痛觉肽神经递质受体NK1，包括N-acetyl tryptophan，D-Pro9-[Spiro-y-lactam]-Leu 10，Trp 11-Physalaemin(1-11)，Tyr-D-Phe-Phe-D-His-Leu-Met-NH2(Sendide)和spantide II。痛觉肽神经递质受体NK2，包括PhCO-Ala-Ala-D-Trp-Phe-D-Pro-Pro-Nle-NH2(GR98400)，[Tyr 5，D-Trp6，8，9，Lys 10]-NKA(4-10)(MEN10376)及其衍生物。痛觉肽神经递质受体VPAC2，VPAC1and PAC1，包括VIP(6-28)，Ac His(1)[D-Phe(2)，K(15)，R(16)，L(27)]VIP (3-7)/GRF(8-27)。
[0089] 在一些实施例中，所述止痛成分是专利号7220725的美国专利公开的焦谷氨酸三肽和四肽。在一些实施例中，所述止痛成分是多肽，如脑源性神经营养因子(BDNF)，神经生长因子(NGF)，神经营养因子-3(NT-3)，肉毒杆菌毒素素，抗炎症细胞因子(如白细胞介素4，白细胞介素-10和白细胞介素-13。)
[0090] 在一些实施中，所述止痛成分是一个NOP受体激动剂。在一些实施例中，所述止痛成分是一种NOP激动剂肽，包括N/OFQ，缩短的N/OFQ类似物(Reinscheid，R.K.et al，J.Biol.Chem.(1996)271：14163-14168)，N/OFQ兴奋剂例如UFP-102，UFP-112和NOP激动剂元胜肽如Syn 1020。在一些实施例中，镇痛化合物是一种非肽NOP激动剂如，hexahydrospiro[piperidine-4，1′-pyrrolo[3，4-c]pyrroles]和其他小分子NOP激动剂如本文所述。在一个特定实施例中止痛成分是N/OFQ(孤啡肽)。
[0091] 在一些实施例中，提供一种治疗疼痛的方法，包括对一个有需要的个体通过有效剂量的非阿片类止痛肽(如N/OPQ)的颅面粘膜的给药。颅面粘膜给药，包括但不局限于鼻内给药，口腔给药，舌下给药和结膜给药。在一些实施例中，非阿片类止痛肽的预防黏膜给药，可防止或延缓疼痛发作。在一些实施例中，非阿片类止痛肽黏膜给药减轻或减少剧烈疼痛。
[0092] 在一些实施例中，疼痛是躯体疼痛。在一些实施例中，疼痛是一种浅层的躯体疼痛。在一些实施例中，疼痛是一种深层的躯体疼痛。在一些实施例中，疼痛是一种肌肉骨骼疼痛。在一些实施例中，疼痛是一种内脏疼痛。在一些实施例中，疼痛是一种神经性疼痛。
[0093] 在一些实施例中，所述疼痛是一种本发明所述的慢性疼痛。在一些实施例中，所述疼痛是一种本发明所述的急性疼痛。在一些实施例中，疼痛是与偏头痛，丛集性头痛，紧张性头痛，次生型头痛或三叉神经痛相关的疼痛。
[0094] 在一些实施例中，所述疼痛是由TMJ，偏头痛或三叉神经痛引起的疼痛。在一些实施例中，疼痛是剧烈的锐痛。在一些实施例中，疼痛是神经伤害相关的手术引起的神经性疼痛。
[0095] 在一些实施例中，所述方法包括给个体通过颅面粘膜给药方式给给予一个止痛成分(如非阿片类止痛肽，NOP激动剂或者N/OFQ)或者含有止痛成分的药物组合物(如非阿片类止痛肽，NOP激动剂或者N/OFQ)，以治疗偏头痛相关的疼痛，丛集性头痛或者三叉神经痛。
[0096] 在一些实施例中，所述方法包括通过对止痛成分或者含有止痛成分的药物组合物的颅面粘膜途径给药给一个正经历偏头痛或者其他头痛的个体以顿挫疗法(abortive treatment)治疗偏头痛相关的疼痛。在一些实施例中，所述方法包括预防性治疗(prophylactic treatment)偏头痛相关的疼痛包括通过对止痛成分或者含有止痛成分的药物组合物的颅面粘膜途径给药给一个个体以预防偏头痛头疼的起始。
[0097] 在一些实施例中，所述方法包括预防性治疗偏头痛相关的疼痛包括通过对止痛成分或者含有止痛成分的药物组合物的颅面粘膜途径给药给一个正经历偏头痛相关的偏头痛头疼的先期预兆的个体。在一些实施例中，所述方法包括预防性治疗丛集性头痛疼痛包括通过对止痛成分或者含有止痛成分的药物组合物的颅面粘膜途径给药给一个丛集性连续已开始但是还没有开始连续的头痛的个体。
[0098] 在一些实施例中，所述方法包括预防性治疗三叉神经痛，包括通过对止痛成分或者含有止痛成分的药物组合物的颅面粘膜途径给药给一个三叉神经痛已发作但是还没有连续发作的个体。
[0099] 一方面，本发明提供一种治疗疼痛的方法，包括对一个需要的个体通过有效剂量的止痛成分(如非阿片类镇痛药的肽，NOP激动剂或/OFQ)的颅面粘膜的给药，其中给药的结果是全身止痛效果。
[0100] 在研究鼻腔给药N/OFQ肽在动物身上的止痛效果的实验中，我们发现鼻腔给药N/OFQ后相比于做对照的生理盐水给药后具有更长的脸颊缩回潜伏期(A-delta和C-fiber止痛实验都显示)，但是相同剂量的N/OFQ的注射给药没有发现明显的止痛效果。
[0101] 与生理盐水给药做对照，当N/OFQ鼻腔给药，同样的止痛效果在缩爪反应实验中可观察到，但是在注射给药时没有发现这种情况。
[0102] 在本发明一些实施例中，一种止痛肽如N/OFQ通过鼻腔给药方式给药以达到全身止痛的效果。在一些实施例中，止痛成分(如N/OFQ)颅面粘膜给药(如鼻腔内给药)比注射给药所述成分导致更强的止痛效果。在一些实施例中，颅面粘膜给药止痛成分不会引起明显的全身副作用。在一些实施例中，非阿片类止痛肽如N/OFQ通过鼻内给药时，非阿片类止痛肽(如N/OFQ)的大部分到达大脑并传递给了大脑而没有进入全身血液循环。
[0103] 一方面，本发明提供了治疗个体疼痛的方法，包括给个体将止痛成分(如非ap类止痛肽如N/OFQ或其他NOP激动剂)给药到粘膜组织或者口腔上皮组织，鼻腔，眼睛内或者周边，或者皮肤。口腔粘膜组织包括，但不仅限于包括牙龈(牙床)，口腔底部，嘴唇，舌头，或者它们的组合。
[0104] 所述方法包括止痛成分给药到结膜或者其他眼睛周围的粘膜组织。所述组织或者上皮组织包括，但不仅限于结膜，泪腺，泪管，上或下眼睑和眼黏膜，眼睛以及它们的组合。给药到结膜但是不完全通过结膜粘膜被结膜吸收的一个成分或者药物组合物可以通过鼻管进入到鼻腔，在此它可以被鼻腔周围的粘膜组织吸收。
[0105] 在一些实施例中，所述止痛成分是非阿片类肽。在一些实施例中，所述止痛成分是一个肽或者非阿片类NOP激动剂。在一个特定实施例中，所述止痛成分是N/OFQ肽。所述止痛成分可以给药到鼻腔周围的粘膜组织。适当的区域包括，但不仅限于，低于三分之二鼻腔或高于三分之一，或者整个鼻腔。
[0106] 在一些实施例中，NOP激动剂(如NOP止痛肽，如N/OFQ)给药到高于三分之一鼻腔。在一些实施例中，NOP激动剂(如NOP止痛肽，如N/OFQ)给药到低于三分之二鼻腔。特别地，在一些实施例中，NOP激动剂(如NOP止痛肽，如N/OFQ)给药到到达低于三分之二和高于三分之一的鼻腔。
[0107] 鼻腔内给药一直是多年的研究和发展的主题，虽然此种可以有效的传送物资的载药系统设计出来仅有十年。(Sayani and Chien，Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems 1996，13：85-184.)鼻腔内递药具有许多有利的功能，包括生物利用度比较高，快速吸收的动力学和避免了肝脏首过效应(first-pass effect)。
[0108] 考虑到病人的依从性和易用性方面，鼻腔给药的应用提供了一个简便，快速，非侵入性的模式。在某些方面，鼻腔给药可以让止痛肽如N/OFQ传递到鼻腔内，在其他方面，鼻腔给药可以让目标针对性被传递到鼻子和/或大脑的脑神经。不希望受任何特定理论的约束，止痛肽如N/OFQ的鼻腔给药可以针对嗅觉神经系统或三叉神经系统，或两者兼而有之。
[0109] 与口服和静脉注射一样，如果肽的给药的效果需要进入全身血液循环，肽的鼻内传递具有吸收不良和广泛的水解的不足。酶的抑制剂和吸收促进剂用来增加肽吸收的程度。亮氨酸脑啡肽，一种阿片肽，通过鼻腔给药醋酸蠕动小鼠(内脏痛模型)的试验显示出非常有限的止痛效果，而当亮氨酸脑啡肽混合酶抑制剂和吸收促进剂经鼻腔给药则显示高的止痛效果(Gawk H.S.et al.，Journal of Pharmacy and Pharmacology 2003，55：1207-1212.)，达到增强系统吸收和有针对性的传递到颅神经和/或脑的效果。
[0110] 口服，口腔或舌下传递路线对于药物传递是方便的选择，因为它们好用且非侵入性。其优势包括：(一)在口腔中的与其他途径相比，口腔内蛋白水解活性较低，从而避免多肽和蛋白质药物被酶降解的问题，(ii)避免了过肝脏的首过效应。药物输送到眼部周围的粘膜组织或结膜是另一种非侵入性的给药方便的选择。
[0111] 某些方面，本发明所述方法通过有效剂量的止痛肽如N/OFQ的给药到结膜或眼睛周围其他黏膜组织治疗疼痛，如个体的头痛疼痛或三叉神经痛。透皮给药或皮肤治疗剂给药到皮肤，在过去20年已成为成熟的技术。透皮给药可控制病人药物的释放，透皮贴剂好用，方便，无痛，并可提供多天的剂量，这通常导致提高患者的依从性。这些方法可以包括止痛成分(如非阿片类止痛肽，NOP激动剂或N/OFQ)或含止痛成分(如非阿片类镇痛肽，NOP激动剂或N/OFQ)的药物组合物给药到脸部，头部或身体的皮肤上。
[0112] NOP激动剂，可给药到面部，头皮或颞区皮肤。合适的脸部皮肤包括下巴，上唇，下唇，额头，鼻子，脸颊的皮肤，眼睛周围，上睑，下睑的皮肤或其组合。合适的头皮皮肤包括头皮前，整个颞区头皮，头皮的外侧部分，或其组合。合适颞区的皮肤，包括整个颞区及其组合。
[0113] 皮内注射定义为治疗药物的给药在皮肤层内或之间。相比之下，皮下注射被定义为皮肤的初始层之下。治疗药物经本领域的熟练人员皮内或皮下注射给药是常用手段。
[0114] 在一些实施例中，通过颅面粘膜给药方式给药一个止痛成分(如非阿片类止痛肽，NOP激动剂或者N/OFQ)或者含有止痛成分的药物组合物(如非阿片类止痛肽，NOP激动剂或者N/OFQ)可导致预防或缓解疼痛，与局部麻醉或者麻醉类药物的强镇静作用相比，不会引起麻痹。有目的的传递可降低个体达到镇痛效果止痛成分的给药量，并可以减少潜在的不良中枢神经系统的影响或全身性的副作用。
[0115] 一个方面，本专利提供的是一种治疗个体偏头痛的方法，包括通过颅面粘膜给药给药一个止痛成分(如非阿片类止痛肽，NOP激动剂或者N/OFQ)或者含有止痛成分的药物组合物(如非阿片类止痛肽，NOP激动剂或者N/OFQ)。在一些实施例中，所述颅面粘膜途径是鼻，眼结膜，舌下或口腔途径。在一些实施例中，所述方法包括偏头痛的治疗。
[0116] 在一些实施例中，所述方法包括无先兆偏头痛的治疗。在一些实施例中，所述方法包括有先兆偏头痛的治疗。在一些实施例中，所述方法包括有先兆但无头痛的偏头痛的治疗。在一些实施例中，所述方法包括基底型偏头痛的治疗。在一些实施例中，所述方法包括家族性偏瘫性偏头痛或散发性偏瘫性偏头痛的治疗。在一些实施例中，所述方法包括腹型偏头痛的治疗。在一些实施例中，所述方法包括对非头痛性偏头痛(acephalgic migraine)的治疗。在一些实施例中，所述方法包括经期偏头痛的治疗。在一个特定的实施例中，所述治疗偏头痛的方法，包括给一个有需要的个体以有效剂量的N/OFQ或者含有N/OFQ的药物组合物通过鼻腔给药。
[0117] 另一个方面，本专利提供的是一种治疗个体偏头痛相关症状的方法，包括通过颅面粘膜给药(如鼻内给药，口腔给药，舌下给药或结膜给药)一个止痛成分(如非阿片类止痛肽，NOP激动剂或者N/OFQ)或者含有止痛成分的药物组合物(如非阿片类止痛肽，NOP激动剂或者N/OFQ)。在一些实施例中，症状是前驱阶段症状。在一些实施例中，症状是先兆阶段症状。在一些实施例中，症状是疼痛阶段症状。
[0118] 在一些实施例中，症状是后期症状阶段症状。在一些实施例中，所述方法包括减轻或预防偏头痛相关症状中的一个或多个，如恶心，畏光和高声恐惧症。在一个特定的实施例中，所述方法包括包括给一个有需要的个体以有效剂量的N/OFQ或者含有N/OFQ的药物组合物通过鼻腔给药，其中给药以减轻或预防偏头痛相关症状，如恶心，畏光症状或声音恐惧症。
[0119] 在某些方面，本发明提供，通过止痛成分(如非阿片类止痛肽，NOP激动剂或者N/OFQ)的颅面粘膜给药(如鼻腔给药，口腔给药，舌下给药或结膜给药)治疼痛的方法。在一些实施例中，疼痛是躯体疼痛。在一些实施例中，疼痛是一种浅层的躯体疼痛。在一些实施例中，疼痛是一种深层的躯体疼痛。在一些实施例中，疼痛是一种肌肉骨骼疼痛。在一些实施例中，疼痛是一种内脏疼痛。在一些实施例中，疼痛是一种神经性疼痛。在一些实施例中，疼痛是一种头部疼痛或颅面部疼痛。
[0120] 在一些实施例中，所述疼痛是一种慢性疼痛，如本发明所述的一种慢性疼痛。在一些实施例中，所述疼痛是一种急性疼痛，的急性疼痛。在一些实施例中，疼痛是一种或多种如本发明所述的疼痛的组合。在一些实施例汇总，疼痛是一个激烈的刺痛有关的疼痛。在一些实施例中，疼痛是神经伤害相关的手术引起的神经性疼痛。
[0121] 复合给药
[0122] 在本发明某些方面，使用血管收缩剂(vasoconstrictor)，以减少止痛成分(如非阿片类止痛肽，NOP激动剂或者N/OFQ)的全身吸收。所述血管收缩剂可以包括在药物组合物中，以减少止痛成分的全身吸收。另外，所述血管收缩剂可以不在药物组合物中而单独地被传递到粘膜或皮肤表面。血管收缩剂是收缩血管和毛细血管并减少血流量的化合物。
[0123] 通过抑制药物进入血液，它们可以被用来增加预期位置药物的浓度，从而减少药物的全身吸收和分布。通过限制药物全身分布和集中在目标组织，即颅神经和中枢神经系，血管收缩剂可用于降低药物达到止痛的有效剂量。因此，血管收缩剂，可以止痛肽给药之前或可与止痛肽同时给药。血管收缩剂可包括，但不仅限于，福林盐酸，四氢萘咪唑啉(tetrahydrozoline)，盐酸萘甲唑啉硝酸，盐酸羟甲唑啉，盐酸曲马唑啉，麦角胺，二氢麦角胺，内皮素-1，内皮素，肾上腺素，去甲肾上腺素和血管紧张素。
[0124] 在一些实施例中，提供的方法包括在止痛成分(如非阿片类止痛肽，NOP激动剂或者N/OFQ)给药之前，血管收缩剂给药到个体鼻腔，其中血管收缩剂的给药降低止痛成分的全身分布。在一些实施例中，所述方法可以复合给药血管收缩剂和止痛成分到个体鼻腔，其中血管收缩剂的给药降低止痛成分的全身分布。
[0125] 在其他例子中，所述方法包括在止痛成分给药之前，血管收缩剂给药，或者复合给药到个体鼻腔，其中血管收缩剂的给药降低止痛成分的全身分布，从而降低了达到止痛的止痛成分的有效剂量。
[0126] 在某些方面，提供治疗个体疼痛的方法，包括：通过颅面粘膜给药一个止痛成分(如非阿片类止痛肽，NOP激动剂或者N/OFQ)或者含有止痛成分的药物组合物(如非阿片类止痛肽，NOP激动剂或者N/OFQ)有效的量，其中止痛成分与至少一个附加的活性剂相结合给药。在一些实施例中，止痛成分(如非阿片类止痛肽，NOP激动剂或者N/OFQ)与至少两个附加的活性剂相结合给药。
[0127] 附加活性剂可包括，但不仅限于，非肽类阿片类药物，如吗啡，美沙酮，芬太尼，布托啡诺，可待因，鸦片，羟考酮，loperimide，哌替啶(杜冷 )，地芬诺酯，丙氧芬(达尔)，4甲基芬太尼，二氢可待因，吗啡，二乙酰吗啡，双氢可待因，氢 羟甲左吗喃(左旋 )，右美沙芬，羟 海洛因，芬太尼，苯唑星，喷他佐辛，去痛定，氨苄度冷丁，丁丙诺啡 舒芬太尼，卡芬太尼(carfentanil)，阿芬太尼
和非典型的阿片类药物，反胺苯环醇(tramadol)，他喷他多(tapentadol)；阿片类和阿片样肽及其类似物，如内啡肽，脑啡肽，强啡肽，皮啡肽，皮脑啡肽，吗啡感受素，内吗啡肽和达拉根；
和非典型的阿片类药物，反胺苯环醇(tramadol)，他喷他多(tapentadol)；阿片类和阿片样肽及其类似物，如内啡肽，脑啡肽，强啡肽，皮啡肽，皮脑啡肽，吗啡感受素，内吗啡肽和达拉根；
[0128] NMDA受体拮抗剂，如氯胺酮，金刚烷胺，dextrometorphane，美金刚和MK801，如局部麻醉剂和麦角胺钠通道阻滞剂，钙通道阻滞剂，如维拉米，硝苯地平；肾上腺素受体拮抗剂，如心得安，美托洛尔和yohimine；GABA能激动剂，如氨基丁酸，巴氯芬，cis-4-3-氨基丁烯酸(CACA)，trans-4-氨基丁烯酸(TACA)，CGP 27 492(3-aminopropyl phosphonous acid)和progabide；甘氨酸受体激动剂，如甘氨酸和D-环丝氨酸；胆碱能激动剂，如新斯的明和physiostigmine；肾上腺素受体激动剂，如肾上腺素，新福林(neosynephrine)，可乐定和右旋美托咪啶，抗惊厥药加巴喷丁和巴比妥类药物；Rho激酶抑制剂，如法舒地尔，Y27632，H1152及其衍生物；蛋白激酶C抑制剂，如白屈菜红碱，Go 6983，Go 6976，N-豆蔻-丝氨酸-异亮氨酸-酪氨酸-精氨酸-精氨酸-甘氨酸-丙氨酸-精氨酸-精氨酸-色氨酸-精氨酸-赖氨酸-亮氨酸，Rottlerin，KAI-9803和KAI-1455，P38-MAP激酶抑制剂，如SCIO-469，AMG548及其衍生物；ATP受体阻滞剂，如川芎嗪白屈菜红碱氯化A-317491及其衍生物；内皮素受体拮抗剂，如BQ123，BMS182874及其衍生物；促炎性细胞因子，趋化因子，白细胞介素和肿瘤坏死因子受体阻滞剂，如阿那白滞素，英夫利昔单抗，依那西普和阿达木单抗的抗炎细胞因子，如白细胞介素4，白细胞介素10和白细胞介素13；如三环类抗抑郁药，如desiprimine和amitryptiline；血清素拮抗剂，如氟西汀，多拉司琼和昂丹司琼；羟色胺受体激动剂，如丁螺环酮和麦角新碱；NSAIDs和昔布类药物，如双氯芬酸，布洛芬，酮咯酸，水杨酸，罗非昔布，塞来昔布，帕瑞昔布，伐地考昔和萘普生，对乙酰氨基酚；止痛肽，如降钙素，奥曲肽，生长抑素，垂体后叶素，甘丙肽，促脂素C-片段和AC-rfwink-NH2；毒素，如肉毒杆菌毒素，变种及其衍生物，芋螺毒素，如ω-芋螺毒素GV1A，ω-芋螺毒素MVIIA，贝类毒素和河豚毒素；TPR通道激动剂和拮抗剂，如辣椒素，抗辣椒碱(capsazepine)，resiniferotoxin，SB-705498，A-425619，AMG-517，SC0030及其衍生物；cannabanoids如HTC，CT-3，左南曲朵dexanabinol，WIN-55，212-2，AM 1241，dronabinol，nabilone，大麻药用提取物(CME)及其衍生物；拮抗剂亲痛觉肽神经递质受体CGRP1和CGRP2，包括非肽类拮抗剂，如BIBN4096及其衍生物和肽拮抗剂，如降钙素如CGRP 8-37和CGRP 28-3；拮抗剂亲痛觉肽神经递质受体的NK1，包括非肽拮抗剂如SR140333，CP96346，L 760735RP 67580，WIN
51708；MK869，及其衍生物和肽拮抗剂，如N-乙酰色氨酸，D-Pro9-[Spiro-y-lactam]-Leu
10，Trp 11-Physalaemin(1-11)，Tyr-D-Phe-Phe-D-His-Leu-Met-NH2(Sendide)和spantide第二亲痛觉拮抗剂肽神经递质受体NK2，包括非肽类拮抗剂，如SR 48968及其衍生物和肽拮抗剂，如PhCO-Ala-Ala-D-Trp-Phe-D-Pro-Pro-Nle-NH2(GR98400)[Tyr5，D-Trp6，
8，9，Lys 10]-NKA(4-10)(MEN10376)及其衍生物；亲的痛觉肽神经递质受体Y1-5，其中包括非肽的拮抗剂benextramine和肽拮抗剂拮抗剂(ILE胶水-PRO-DPR-酪氨酸，精氨酸-亮氨酸，精氨酸，酪氨酸-NH2)2，循环(2，4)，(2，4)联胺(1229U91或GW1229)，PYX的2D-酪氨酸(27，36)D-苏氨酸(32)]神经肽Y(27-36)(D-神经肽Y(27-36)，3-(5，6，7，8-四氢-9-异丙基咔唑-3-基)-1-甲基-1-(2-吡啶-4-YL-乙基)脲盐酸盐(FMS586和衍生物)；拮抗剂伤害性肽的神经递质受体VPAC2，VPAC1和PAC1，包括肽拮抗剂VI P(6-28)，AC(1)的D-苯丙氨酸(2)，K(15)，R(16)，L(27)]VIP(3-7)/GRF的(8-27)；的亲痛觉受体拮抗剂神经递质受体GAL1-3和GalR1-3，包括非肽类拮抗剂SNAP37889，398299的SNAP，galnon及其衍生物。其他活性剂可能包括激动剂或拮抗剂，血管加压素，促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)，生长激素释放激素(GHRH的)，促黄体激素释放激素(LHRH)，生长抑素生长激素释放抑制激素，促甲状腺激素释放激素(TRH)，胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)，脑源性神经营养因子(BDNF)，神经生长因子(NGF)，神经营养因子-3(NT-3)，胰多肽，多肽酪氨酸-酪氨酸，糖原样肽1(GLP-1)，组氨酸异亮氨酸肽(菲律宾)，垂体腺苷酸环化酶激活肽(PACAP的)，脑钠肽，胆囊收缩素(CCK)，胰岛淀粉样多肽(IAPP)或淀，黑色素浓集激素(MCH)，黑皮质素(促肾上腺皮质激素，α-MSH和其他)，神经肽FF(F8Fa)，神经降压素，甲状旁腺激素相关蛋白，刺鼠基因相关蛋白(AGRP)，可卡因和安非他明调节转录(订购)/肽，5-羟色胺的MODULINE，下视丘分泌素/食欲素，催产素肽，ocistatin，催乳素释放肽，分泌神经素，尿皮质醇及其衍生物和类似物。
51708；MK869，及其衍生物和肽拮抗剂，如N-乙酰色氨酸，D-Pro9-[Spiro-y-lactam]-Leu
10，Trp 11-Physalaemin(1-11)，Tyr-D-Phe-Phe-D-His-Leu-Met-NH2(Sendide)和spantide第二亲痛觉拮抗剂肽神经递质受体NK2，包括非肽类拮抗剂，如SR 48968及其衍生物和肽拮抗剂，如PhCO-Ala-Ala-D-Trp-Phe-D-Pro-Pro-Nle-NH2(GR98400)[Tyr5，D-Trp6，
8，9，Lys 10]-NKA(4-10)(MEN10376)及其衍生物；亲的痛觉肽神经递质受体Y1-5，其中包括非肽的拮抗剂benextramine和肽拮抗剂拮抗剂(ILE胶水-PRO-DPR-酪氨酸，精氨酸-亮氨酸，精氨酸，酪氨酸-NH2)2，循环(2，4)，(2，4)联胺(1229U91或GW1229)，PYX的2D-酪氨酸(27，36)D-苏氨酸(32)]神经肽Y(27-36)(D-神经肽Y(27-36)，3-(5，6，7，8-四氢-9-异丙基咔唑-3-基)-1-甲基-1-(2-吡啶-4-YL-乙基)脲盐酸盐(FMS586和衍生物)；拮抗剂伤害性肽的神经递质受体VPAC2，VPAC1和PAC1，包括肽拮抗剂VI P(6-28)，AC(1)的D-苯丙氨酸(2)，K(15)，R(16)，L(27)]VIP(3-7)/GRF的(8-27)；的亲痛觉受体拮抗剂神经递质受体GAL1-3和GalR1-3，包括非肽类拮抗剂SNAP37889，398299的SNAP，galnon及其衍生物。其他活性剂可能包括激动剂或拮抗剂，血管加压素，促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)，生长激素释放激素(GHRH的)，促黄体激素释放激素(LHRH)，生长抑素生长激素释放抑制激素，促甲状腺激素释放激素(TRH)，胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)，脑源性神经营养因子(BDNF)，神经生长因子(NGF)，神经营养因子-3(NT-3)，胰多肽，多肽酪氨酸-酪氨酸，糖原样肽1(GLP-1)，组氨酸异亮氨酸肽(菲律宾)，垂体腺苷酸环化酶激活肽(PACAP的)，脑钠肽，胆囊收缩素(CCK)，胰岛淀粉样多肽(IAPP)或淀，黑色素浓集激素(MCH)，黑皮质素(促肾上腺皮质激素，α-MSH和其他)，神经肽FF(F8Fa)，神经降压素，甲状旁腺激素相关蛋白，刺鼠基因相关蛋白(AGRP)，可卡因和安非他明调节转录(订购)/肽，5-羟色胺的MODULINE，下视丘分泌素/食欲素，催产素肽，ocistatin，催乳素释放肽，分泌神经素，尿皮质醇及其衍生物和类似物。
[0129] 药物组合物
[0130] 尽管单独给药止痛成分(如，非阿片类止痛肽，NOP激动剂或者N/OFQ)也是可以的，但是有时候，它作为一个药品成分的一部分也是有利的。因此，本发明的某些方面，止痛成分(如，非阿片类止痛肽，NOP激动剂或者N/OFQ)作为药物组合物的组成来给药。药物组合物含有在治疗上有效剂量的止痛成分(如，非阿片类止痛肽，NOP激动剂或者N/OFQ)与一个或更多药学可接受的载体和可选的其他成分。
[0131] 一个合适的载体，是一个不造成难以忍受的副作用，但保留止痛成分(如，非阿片类止痛肽，NOP激动剂或者N/OFQ)在体内的药理活性。载体也可减少止痛成分任何不良的副作用。一个合适的载体应该是稳定的，即，通常不会与配方中的其他成分反应。一个合适的载体具有最少的不良气味或香味，但可以包括有一个合意的香味或积极的(愉快的)气味。一个合适的载体，不应该刺激粘膜，上皮细胞，表层的神经，引起健康风险。
[0132] 适用的无毒的药学上可接受的载体对于制药学领域的技术人员来说是显而易见的。可参见雷明顿(Remington)：药剂科学与实践，20版，利平科特·威廉斯&威尔金斯(2000年)。典型的药学上可接受的载体包括，但不仅限于，甘露醇，右旋糖酐，尿素，乳糖，玉米和马铃薯淀粉，硬脂酸镁，滑石粉，植物油，聚亚烷基乙二醇，乙基纤维素，聚(乙烯基)，碳酸钙，壳聚糖，乙基油酸，肉豆蔻酸异丙酯，苯甲酸苄酯，碳酸钠，明胶，碳酸钾，硅酸，及其他可接受常用载体。其他载体包括，但不仅限于，卵磷脂，磷脂，和鞘磷脂(sphingomyelins)。
[0133] 选择一个合适的载体，取决于所需的特定剂型的确切性质，例如，药物是否是液体溶液剂型(例如，作为滴剂，作为注射使用，作为喷雾或浸渍在鼻塞使用，或其他浸渍固体)，悬浮液，油膏，薄膜或凝胶。如果需要，可以制备成缓释凝胶，薄膜，头皮贴剂等。所述的特定的剂型也取决于给药途径。药物可以作为粉末，颗粒，溶液，霜剂，喷雾，凝胶，薄膜，药膏，输液，滴剂或缓释成分给药到鼻腔。所述成分的口腔给药，可以做成药片或含片的形式。舌下给药，所述成分可以做成生物黏合剂，喷雾，粉末，涂剂或舌头或舌下用棉签。眼睛周围的结膜或其他黏膜组织给药，所述成分可以作成软膏，溶液或滴剂。皮肤给药，所述成分可应用做成外用药膏，外用凝胶，乳液，面霜，溶液，喷雾，涂剂，薄膜，箔，化妆品，膏药或生物黏合剂。
[0134] 做成溶液的液体载体包括，但不仅限于，水，生理盐水，葡萄糖水，特别是乙二醇(等渗)解决方案。所述载体也可以选择各种油类，包括石油、动物、植物或合成来源的油(如花生油，大豆油，矿物油，香油，及类似物)。合适的药用辅料包括，但不仅限于，淀粉，滑石粉，纤维素，葡萄糖，乳糖，蔗糖，明胶，麦芽，大米，面粉，粉笔，硅胶，硬脂酸镁，钠，硬脂酸，单硬脂酸甘油酯，氯化钠，脱脂牛奶，甘油，丙二醇，水，乙醇，及类似物。所述药物组合物可经受传统制药工艺，如消毒，并且可含常规的药物添加剂，如防腐剂，稳定剂，还原剂，抗氧化剂，螯合剂，润湿剂，乳化剂，分散剂，凝胶剂，调整渗透压的盐，缓冲液及类似物。如载体是液体的，所述载体是低渗或与体液等渗，在pH值4.5-8.5范围内。如载体是粉状，则所述载体最好是在一个可接受的无毒的pH值范围内。在肽和/或蛋白质为基础成分，特别是药用组合物中使用添加剂，在本领域是众所周知的。
[0135] 本发明所列的载体和添加剂并不包括所有的，本领域的技术人员可以选择载体和辅料从GRAS(一般认为是安全的)制药中允许的的化学品清单和那些目前允许的和注射制剂。(也可以参见Wang et al.，(1980)J.Parent.Drug Assn.，34：452-462；Wang et al.，(1988)J.Parent.Sci.and Tech.，42：S4-S26.)
[0136] 其他剂型的组合物包括悬浮微粒，如乳状液，脂质体，或以一个缓释的形式，延长个别药用活性成分的存在。药物组合物的粉状或颗粒状的剂型可结合溶剂、稀释剂，分散剂或表面活性剂。另外，附加的成分包括生物黏合剂以保持药物固定在给药的部位，例如，喷雾剂，涂剂，或应用于黏膜或上皮细胞药签。一个生物黏合剂可以是亲水聚合物，天然或人工合成的，其中，亲水性配方，可以是水溶性的或遇水膨胀，并且与药品成分兼容。
[0137] 这种粘合剂作用是将药物粘合到口腔或鼻腔粘膜组织。这种粘合剂可以包括，但不仅限于，羟基乙基纤维素，羟丙基纤维素，羟丙基甲基纤维素，乙基纤维素，羧甲基纤维素，葡聚糖，野牛胶，聚乙烯吡咯烷酮，果胶，淀粉，明胶，酪蛋白，丙烯酸聚合物，丙烯酸酯聚合物，丙烯酸共聚物，乙烯聚合物，乙烯共聚物，乙烯醇聚合物，烷氧基聚合物，聚氧化乙烯聚合物，聚醚，及其组合。也可以做成冻干粉的形式，在给药前可以转换成溶液，悬浮液，乳液。药物组合物最好是消毒膜过滤和以单位剂量或多剂量容器储存，或密封小瓶或安瓶。
[0138] 药物组合物可以做成缓释的形式以延长活性成分在治疗的个体里的存在。本领域的缓释配方是熟知的，在雷明顿的制药科学有介绍(见上文)。一般来说，药物还可包埋在半渗透性固体疏水性聚合物物基质里。所述基质可以做成薄膜或微胶囊。基质可以包括，但不仅限于，聚酯，L-谷氨酸和γ乙基-L-谷氨酸，聚乳酸，聚乳酸聚甘醇酸(polylactate polyglycolate)，水凝胶，不可降解乙烯-醋酸乙烯，可降解的乳酸-乙醇酸共聚物的聚合物，透明质酸凝胶，褐藻酸悬浮液。
[0139] 适合微囊的包括胺基酸(hydroxymethylcellulose)或明胶和聚甲基丙烯酸甲酯。微乳液或胶体药物输送系统，如脂质体和白蛋白微球也可使用。一些缓释成分，可以使用生物粘合剂保持在给药的位置。
[0140] 为进一步加强含有止痛成分的(如非阿片类止痛肽，NOP激动剂或N/OFQ)药物组合物的传递，酶抑制剂，特别是蛋白酶抑制剂，可以包含剂型中。蛋白酶抑制剂可能包括，但不仅限于，抗蛋白酶，奥代美宁(arphamenine)Aand B A和B，苯甲脒盐酸，AEBSF，CA-074，钙蛋白酶抑制剂I和II，calpeptin，胃蛋白酶抑制剂，放线酰胺素，氨肽酶抑制剂，肽酶抑制剂，硼亮氨酸(boroleucine)，卡托普利，氯HO亮-丙氨酸-甘氨酸-NH2，DAPT，抑二肽素A和B，厄比内酯一个A和B，foroxymithine，亮肽素，胃蛋白酶抑制剂A，阿米酮，抑肽酶，嘌呤霉素，BBI，大豆胰蛋白酶抑制剂，苯甲基磺酰氟，E-64，胰凝乳蛋白酶抑制剂，1，10-菲罗啉，EDTA和EGTA。
[0141] 为了加强含止痛成分(如非阿片类止痛肽，NOP激动剂或N/OFQ)的药物组合物的传递或穿越粘膜表面和/或吸收，促吸收的成分可包含在剂型中。所示促吸收成分可提高药物的释放或溶解(例如，从传递载体上)，扩散率，渗透能力和时序，吸收，停留时间，稳定性，有效半衰期，峰值或持续的浓度水平，清除和其他所需的粘膜传递的特点(例如，传递位置的测量)。
[0142] 因此，加强粘膜传递可以通过各种机制，例如通过增加一个止痛成分(如非阿片类止痛肽，NOP激动剂或N/OFQ)的扩散，传送，持久性或稳定性，增加膜流动性，调节钙和其他离子的利用度或活动性，调节细胞内外渗透压，溶解黏膜的成分(例如，血脂)，改变黏膜组织中蛋白质和非蛋白巯基水平，提高整个粘膜表面的水通量，调节上皮组织交接区的生理，减少覆盖粘膜上皮的黏液的黏度，减少纤毛清除率，和其他机制。
[0143] 加强粘膜吸收的化合物，包括，但不仅限于，表面活性剂 ，胆盐，dihydrofusidates，生物黏合剂，磷脂添加剂，混合微粒，脂质体，或载体，醇类，烯胺，阳离子聚合物，NO供体化合物，长链两性分子，低疏水性透皮吸收促进剂，钠或水杨酸衍生物，甘油乙酰乙酸，环糊精或β-环糊精衍生物，中链脂肪酸，螯合剂，氨基酸或其盐类衍生物。N-乙酰氨基酸或其盐类衍生物，祛痰剂，特定针对膜成分选定的酶，脂肪酸合成和胆固醇的合成的抑制剂。
[0144] 这些附加剂和化合物可以和止痛成分(如非阿片类镇痛药的肽，NOP激动剂或/OFQ)协同给药或组合制剂。因此，本发明的一些方面，包括一个止痛成分(如非阿片类镇痛药的肽，NOP激动剂或/OFQ)作为药物组合物的给药方法，该药物组合物包括蛋白酶抑制剂，吸收促进剂，血管收缩剂或其组合。
[0145] 所述药物组合物可给药到鼻腔，口腔，眼部周围的结膜或其他组织或皮肤黏膜。所述药物组合物可以通过鼻腔途径给药。所述药物组合物可以由口腔或舌下途径给药。所述药物组合物可透皮途径给药。所述药物组合物可通过采用多于一条途径给药。所述药物组合物可以包括至少一种蛋白酶抑制剂，至少有一个吸收促进剂，至少有一个血管收缩剂，或其组合。所述药物组合物可与血管收缩剂同时给药或在血管收缩剂给药后再给药。
[0146] 剂量
[0147] 止痛成分(如非阿片类镇痛药的肽，NOP激动剂或/OFQ)以足够剂量给药以有效治疗遭受疼痛的个体。在某些方面，止痛成分(如非阿片类镇痛药的肽，NOP激动剂或/OFQ)可以通过颅面黏膜途径(如鼻腔途径)，以可以导致全身性的止痛效果且最小的中枢神经系统或全身性的副作用的剂量进行药。止痛成分(如非阿片类镇痛药的肽，NOP激动剂或/OFQ)的有效治疗剂量可以是本领域的技术人员，如药剂师，凭经验和疼痛类型及严重程度，给药途径，并根据患者体型，重量，年龄和整体健康状况来确定。
[0148] 止痛成分(如非阿片类镇痛药的肽，NOP激动剂或/OFQ)作为一个单位剂量给药的量取决于所给药的药物组合物的类型，例如，溶液，悬液，凝胶，薄膜，乳液，粉末，或缓释剂。在一些例子中，有效剂量低于口服，静脉注射，肌肉注射或皮下注射所需剂量，由于肌肉注射或透皮可能导致止痛成分在颅面或头部区域有个更大的集中水平。传递需要的剂量所需的配方的数量也将取决于药物组合物中止痛成分的浓度。这样的决定是本领域技术人员所具备的。
[0149] 本发明的方法中使用的药物组合物中止痛成分(如非阿片类镇痛药的肽，NOP激动剂或/OFQ)的治疗剂量取决于许多因素，如化学成分和/或止痛成分的修饰，给药途径的生物利用率，疗效，制定的配方的单一剂量的组合给药频率及止痛成分是否与其他活性剂相结合。
[0150] 特别的，止痛成分(如非阿片类镇痛药的肽，NOP激动剂或/OFQ)的剂量须最大程度的减轻被治疗的患者的疼痛。药学数据可通过本领域数量操作人员从动物模型和临床试验，及正常的人类志愿者或病人的经历收集。
[0151] 测试药物的止痛效果的实验模型在本领域是众所周知的。动物模型，包括测试，其中包括，但不仅限于，醋酸扭体，苯醌扭体，甩尾，撤爪和乙酸，苯醌诱导，福尔马林等化合物或辣椒素激活，或如热板或激光的热激活脸颊/耳/脸的疼痛受体时的收回。特别地，颅面部或头部疼痛测试的模型，如颜面部涂抹辣椒素，颜面部涂抹福尔马林，或传递热到脸颊，耳朵或脸都是可行的。
[0152] 在某些情况下，其他模型可用来开发止痛效果测试，如本发明中所描述的模型。模型可以用来确定止痛成分以最小的中枢神经系统和/或全身副作用的止痛效果的最佳剂量范围。此外，模型可以被用来止痛成分经，由一个特定的运送途径给药，如滴鼻，也可以用来测试在脸颊，耳朵或面部或者后爪的止痛效果。在某些情况下，一个模型可以用来测试药物组合物给药后止痛成分的止痛活性，管理制药组成，其中在脸颊，耳朵或脸撤退潜伏期后的镇痛剂的镇痛活性，可以确定区域镇痛，而撤回后肢潜伏期可确定全身的镇痛效果。
[0153] 如上所述，止痛成分(如非阿片类止痛肽，NOP兴奋剂或者N/OFQ)的有效量将取决于使用的方法的形式和组成。N/OFQ肽的有效剂量通过颅面粘膜给药比通过其他途径给药(如口服，静脉注射，肌肉注射或皮下注射)所使用的剂量要低，后者可能根本不能达到效果，或者需要一个很高的剂量。例如，用于N/OFQ肽的剂量可以包括，但不仅限于约0.2毫-5000毫克范围内，约0.2毫克-2000毫克左右，约0.2毫克-约1000毫克，约0.2毫克-约200毫克，约0.2毫克-约100毫克，约0.5毫克-约100毫克，或约0.5毫克-约50毫克，约0.2毫克-500毫克，或约0.5毫克-25毫克，或约0.5毫克-约10毫克，或约0.5毫克-约5毫克，或约0.5毫克-
1毫克，或约1毫克-约100毫克，或约1毫克-约50毫克，或约1毫克-约25毫克，或约1毫克-约
10毫克，或约1毫克-约5毫克，或约5毫克-约200毫克，或约5毫克-约100毫克，约5毫克-约50毫克，约5毫克-25毫克，约5毫克至10毫克。用量可采用单一剂量或多次剂量给药，例如，剂量可以根据头痛的类型和严重性，及患者的敏感性，每天二次，三次，四次，高达十次给药。
用量可采用缓释剂型给药，这样N/OFQ肽给药不必那么频繁，如每周6次，每周5次，每周四次，每周三次，每周两次，或每周一次。
1毫克，或约1毫克-约100毫克，或约1毫克-约50毫克，或约1毫克-约25毫克，或约1毫克-约
10毫克，或约1毫克-约5毫克，或约5毫克-约200毫克，或约5毫克-约100毫克，约5毫克-约50毫克，约5毫克-25毫克，约5毫克至10毫克。用量可采用单一剂量或多次剂量给药，例如，剂量可以根据头痛的类型和严重性，及患者的敏感性，每天二次，三次，四次，高达十次给药。
用量可采用缓释剂型给药，这样N/OFQ肽给药不必那么频繁，如每周6次，每周5次，每周四次，每周三次，每周两次，或每周一次。
[0154] 因此，本发明的某些方面，包括通过鼻腔给药给一个个体以有效的量的N/OFQ肽给药以治疗疼痛的方法。所述N/OFQ肽的给药剂量范围可以通过本领域所熟知的动物模型和/或人体临床试验研究的方法确定。
[0155] 例如，单位剂量的范围可以是0.2毫-5000毫克范围内，约0.2毫克-2000毫克左右，约0.2毫克-约1000毫克，约0.2毫克-约200毫克，或约0.2毫克-约100毫克，或约0.5毫克-约100毫克，或约0.5毫克-约50毫克，约0.2毫克-500毫克，或约0.5毫克-25毫克，或约0.5毫克-约10毫克，或约0.5毫克-约5毫克，或约0.5毫克-1毫克，或约1毫克-约100毫克，或约1毫克-约50毫克，或约1毫克-约25毫克，或约1毫克-约10毫克，或约1毫克-约5毫克，或约5毫克-约200毫克，或约5毫克-约100毫克，约5毫克-约50毫克，约5毫克-25毫克，约5毫克至10毫克。
[0156] 本发明的某些方面，一个包括止痛成分(如非阿片类止痛肽，NOP兴奋剂或者N/OFQ)的组合物还包括一个附加的活性剂，其中止痛成分和附加活性剂作为一个混合物给药，分别，同时或单独以任何顺序进行给药。在一些实施例中，所述含有N/OFQ肽的组合物与至少一个附加的的活性剂组合给药。在其他的实施例中，所述含有N/OFQ肽的组合物与至少2个附加的的活性剂组合给药。在其他实施例中，所述含有N/OFQ肽的组合物与与双氯灭痛，催产素或催产素受体拮抗剂组合给药。
[0157] 要确定一个止痛成分(如非阿片类止痛肽，NOP兴奋剂或者N/OFQ)或者含有止痛成分(如非阿片类止痛肽，NOP兴奋剂或者N/OFQ)的药物组合物的治疗效果，“视觉模拟评分”(VAS)，可用于评估止痛成分给药后疼痛的减少或减轻。VAS是一个水平或垂直于末端转折点10厘米，如“无痛苦”和“极痛”。一个受试者或患者需要在该线上作出疼痛程度的标示。
[0158] 此标示将被转换成从“无痛苦”处以厘米(cm)或毫米(mm)的距离，给疼痛评分，可以从0-10厘米或0-100毫米。所述VASX类似于11点数值疼痛评定量表，其中0等于“不痛”和10等于“可想象的最痛，”，或者相反。使用VAS，当有一个约30％或更多的变化，例如，从9到7或5到3.5的变化时，一个止痛成分，如非阿片类止痛肽，NOP兴奋剂或者N/OFQ，被认为是有一个特别相关的临床的止痛效果。
[0159] 给药系统
[0160] 一个止痛成分(如非阿片类止痛肽，NOP兴奋剂或者N/OFQ)或者含有止痛成分的药物组合物(如非阿片类止痛肽，NOP兴奋剂或者N/OFQ)可以以不同的剂型或制剂，包括但不仅限于快速熔片，充液胶囊，液体喷剂或含片，传递到口腔或舌下表面。另外，药品的成分，可以通过直接置入口里传递到口腔的粘膜，通过例如凝胶，薄膜，软膏，滴管，或生物粘合剂或贴剂。
[0161] 在本发明的某些方面，将药物组合物给个体给药到到口腔或舌下粘膜的方法，可以通过给药装置给药。给药装置可以包括，但不仅限于，单位剂量容器，喷雾泵，滴管，挤压瓶，真空和无防腐剂的喷雾器，雾化吸入器和加压吸入器。给药装置可计量准确的有效剂量给药到口腔。在某些方面，一个准确的有效剂量是包含在胶囊，片剂，含片，或直接放在口腔内的生物黏合贴剂内。
[0162] 一个止痛成分(如非阿片类止痛肽，NOP兴奋剂或者N/OFQ)或者含有止痛成分的药物组合物(如非阿片类止痛肽，NOP兴奋剂或者N/OFQ)可以不同的剂型配到结膜或其他眼睛周围的黏膜组织，如一滴液体，凝胶，薄膜，软膏或生物黏合贴剂或绷带。因此，在某些方面，本发明方法包括给个体给药药物组合物，其中给药是直接给到结膜对眼部周围的其他黏膜组织。在某些方面，一个准确的有效剂量包含在滴剂，凝胶，薄膜，软膏或生物黏合贴剂，直接给置到眼睛周围的粘膜组织。
[0163] 一个止痛成分(如非阿片类止痛肽，NOP兴奋剂或者N/OFQ)或者含有止痛成分的药物组合物(如非阿片类止痛肽，NOP兴奋剂或者N/OFQ)可以许多不同的剂型，如液体，喷雾剂，凝胶，薄膜，软膏或生物黏合贴剂或绷带给药到皮肤或头皮。因此，在某些方面，本发明方法包括给个体给药药物组合物，其中给药是直接给到皮肤，例如前头皮。在某些方面，一个准确的有效剂量包含在滴剂，凝胶，薄膜，软膏或生物黏合透皮贴剂，直接给置到皮肤。在某些方面，药物组合物可能皮内注射到皮肤。在其他方面，药物组合物可皮下注射到皮肤。
[0164] 一个止痛成分(如非阿片类止痛肽，NOP兴奋剂或者N/OFQ)或者含有止痛成分(如非阿片类止痛肽，NOP兴奋剂或者N/OFQ)的药物组合物可配药到鼻内，以粉状或液体喷鼻剂，悬浮液，滴鼻剂，凝胶，薄膜或软膏，通过管或导管，注射器，packtail，纱布(一个小单位的吸水垫)，鼻棉球，或输液到粘膜下层。
[0165] 鼻腔给药可通过使用装置进行，包括但不局限于，单位剂量容器，喷雾泵，滴管，挤压瓶，真空和无防腐剂喷雾器，雾化器(用来改变液体药物成气溶胶微粒形式的装置)，计量吸入器和加压计量吸入器。给药装置保护药物免受污染和化学降解是非常重要的。所述装置也应避免溶浸或吸收，以及提供适当的储存环境。每种药物需要进行评估，以确定哪些鼻腔给药装置是最合适的。鼻腔给药系统在本领域是熟知的，市面也有销售。
[0166] 一个止痛成分(如非阿片类止痛肽，NOP兴奋剂或者N/OFQ)或者含有止痛成分的药物组合物(如非阿片类止痛肽，NOP兴奋剂或者N/OFQ)使用加压包或雾化器和一个合适的推进剂以气雾喷雾的形式方便的给药，包括但不仅限于，二氯二氟甲烷，三氯氟甲烷，二氯四氟乙烷，碳氢化合物，氮或二氧化碳，压缩空气。气溶胶的系统需要推进剂对药品成分是惰性的。在加压气溶胶的情况下，剂量单位的可通过设定一个阀来控制准确计量单位。
[0167] 一个止痛成分(如非阿片类止痛肽，NOP兴奋剂或者N/OFQ)或者含有止痛成分的药物组合物(如非阿片类止痛肽，NOP兴奋剂或者N/OFQ)给药到鼻腔形式，如以粉剂，可以以微球经鼻腔吹药器装置(吹腔体内气体，粉末或蒸气设备)或气雾罐加压给药。所述吹入器可产生精细分割的干粉或微球。
[0168] 所述吹入器需确保提供足够的量的药品成分进行给药。干粉或微球应在干燥，空气可有可无的形式下给药。干粉或微球可直接用药瓶或容器上可喷出干粉或微球的吹药器进行给药。另外，干粉或微球，可填充进胶囊，如明胶胶囊，或其他可适合鼻腔给药的单剂量装置。所述吹入器，可通过针打开胶囊或其他提供孔喉设备的方式这样粉状成分通过它可以给药到鼻腔。
[0169] 鼻腔递药装置可以建立或修改，以分送止痛成分(如非阿片类止痛肽，NOP兴奋剂或者N/OFQ)或者含有止痛成分(如非阿片类止痛肽，NOP兴奋剂或者N/OFQ)的药物组合物，其中止痛成分或组合物主要传递到鼻腔三分之二以下区域。例如，从输送装置如喷雾器或吹药器散发的角度可以设置为药物组合物机械地给药到鼻腔三分之二以下，并远离鼻腔上端区域。
[0170] 可选地，止痛成分(如非阿片类止痛肽，NOP兴奋剂或者N/OFQ)或者含有止痛成分(如非阿片类止痛肽，NOP兴奋剂或者N/OFQ)的药物组合物可直接放置到鼻腔而递药到鼻腔三分之二以下，例如以凝胶，软膏，鼻棉球，滴管，或生物黏合带。可选地，止痛成分(如非阿片类止痛肽，NOP兴奋剂或者N/OFQ)或者含有止痛成分(如非阿片类止痛肽，NOP兴奋剂或者N/OFQ)的药物组合物可给药到上鼻腔区域，或上鼻腔和下鼻腔一起给药。
[0171] 因此，本发明的某些方面，所述方法包括给一个个体给药一个止痛成分(如非阿片类止痛肽，NOP兴奋剂或者N/OFQ)或者含有止痛成分的药物组合物(如非阿片类止痛肽，NOP兴奋剂或者N/OFQ)，其中给药到鼻腔是通过一个鼻腔给药装置。
[0172] 鼻腔给药装置可以包括，但不仅限于，单位剂量容器，喷雾泵，滴管，挤压瓶，真空和无防腐剂的喷雾器，雾化吸入器和加压吸入器，吹药器，或双向装置。鼻腔给药装置可计量鼻腔给药准确的有效剂量的量(如下文所述)。鼻腔给药装置可以是单次剂量单位，或者多次剂量单位。鼻腔给药装置，可以为单一单位交付或多个单位交付。在一些实施例中，鼻腔给药装置可以构建为药物组合物的散发的角度机械地导向到鼻腔三分之二以下，从而最低限度的给药到嗅觉部位。在一些实施例中，鼻腔给药装置可以构建为药物组合物的散发的角度机械地导向到上鼻腔。
[0173] 在一些实施例中，鼻腔给药装置可以构建为药物组合物的散发的角度机械地导向下鼻腔和上鼻腔区域。在一些实施例中，鼻腔给药装置可仅在呼气时被激活，从而限制了药物组合物的诱导吸入和潜在的非希望的分布。在一些实施例中，药物组合物是一种凝胶，薄膜，霜剂，药膏，鼻塞或生物黏合带，其中药物组合物放置在鼻腔三分之二以下，上鼻腔，或者两者兼之。
[0174] 在一些实施例中，所述方法包括鼻腔给药一个止痛成分(如非阿片类止痛肽，NOP兴奋剂或者N/OFQ)或者含有止痛成分的药物组合物(如非阿片类止痛肽，NOP兴奋剂或者N/OFQ)，其中给药通过一个鼻腔给药装置，在给药血管收缩剂后，所述装置可将药物发散的角度可以机械地将药物导向鼻腔三分之二以下，上鼻腔，或者两者兼之。
[0175] 在一些实施例中，所述方法包括鼻腔给药止痛成分(如非阿片类止痛肽，NOP兴奋剂或者N/OFQ)或者含有止痛成分的药物组合物(如非阿片类止痛肽，NOP兴奋剂或者N/OFQ)，与血管收缩剂共同给药，其中给药通过一个鼻腔给药装置，所述装置可将药物发散的角度可以机械地将药物导向鼻腔分之二以下，上鼻腔，或者两者兼之。
[0176] 试剂盒
[0177] 本发明供可实现所述方法的试剂盒。所述试剂盒用于治疗和/或预防疼痛。在一些实施例中，所述试剂盒包括适当包装的止痛成分(如非阿片类止痛肽，NOP兴奋剂或N/OFQ)。在一些实施例中，所述试剂盒包括一个合适包装的N/OFQ肽。在一些实施例中，所述试剂盒还包括至少一个附加的止痛成分。所述试剂盒可进一步包括血管收缩剂，至少有一个蛋白酶抑制剂和/或至少有一个吸收促进剂。一些试剂盒可能会进一步包括给药装置，包括但不仅限于，鼻腔给药装置。其他试剂盒可能进一步包括提供给用户和/或卫生保健员实现所述方法的信息的说明。
[0178] 试剂盒包括一个单独的组成，例如，止痛成分，例如非阿片类止痛肽，NOP兴奋剂或N/OFQ，通常这些组成密封在一个容器内(例如，一小瓶，安瓶，或其他合适的储存容器)。同样地，包括多个组成的试剂盒也包含多种成分在一个容器里(分开或者混合)。
[0179] 关于使用执行本发明的试剂盒的说明，一般描述如何使用试剂盒的内容以实现本发明所述方法。本发明试剂盒提供的指示通常写在标签或包装插件上(例如，试剂盒里的纸张)，机器可读的指令(例如，磁性或光学存储盘上的说明)也可以接受。实施例
[0180] 本发明通过以下实施例，结合附图，可进一步理解本发明，但并不意味着本发明受此限制。
[0181] 实施例1
[0182] 测试止痛成分在大鼠模型中的的活性的方法是通过对皮肤的热刺激反应的缩回潜伏期(时间)中诱导处理的变化，通常使用耳朵，脸部或，后肢。因此，对耳朵，脸或后肢应用连续或非连续的(非激光)辐射热会引起迅速的缩回行为。缩回潜伏期已被证明对止痛治疗敏感，如止痛药提高缩回潜伏期。
[0183] 以减少三叉神经相关的疼痛的跨粘膜或透皮止痛药对三叉神经的给药，可用用来测量三叉神经区域和/或全身的止痛作用。老鼠的耳朵延髓外部部分由下颌神经的一个分支支配，本身是三叉神经的一个分支。因此，治疗后，缩回潜伏期时间提高则表明区域止痛。同样，后肢缩回潜伏期时间的变化表明一个全身性的止痛效果。
[0184] 大鼠被安置在12/12小时光/黑暗的环境，并随意提供食物和水。尽量减少动物的数量以减少不适。老鼠经尿烷轻柔麻醉，并放置在最低限制的加热垫上以维持它们自身体温在37□C。激光束直接通过光纤电缆到两个耳朵延髓的外部。对激光照射的反应特点是激光刺激1-3秒后被刺激的耳朵缩回或后撤。被刺激的耳朵反应后迅速终止激光刺激，或者经过一个最大的反应(节点)的30秒的潜伏期即终止，以防止组织损伤。
[0185] 在耳朵反应的缩回潜伏期的基准测试，3个脉冲被应用到每个耳朵三叉神经支配的部分。每个脉冲在同一耳上的刺激至少2分钟后，改变刺激位点。在后肢反应缩回潜伏期的基准测试，3个脉冲被应用到后肢。每个脉冲在同一后肢上的刺激至少2分钟后，改变刺激位点。测试将被记录以用于脱机反应分析。脱机分析由决定激光刺激反应缩回潜伏期和了解处理组情况的研究者进行。
[0186] 测量潜伏期基线后，止痛成分经鼻腔给药。这涉及到5个10微升总体积为50μL药物历时超过20分钟的滴鼻。不同剂量药物的缩回潜伏期(如5毫克/千克氮N/OFQ)的影响进行测试。为评估局部止痛效果，耳朵的潜伏期反应在给药后不同时间点进行测试。为评估全身性的效果，后爪的潜伏期反应在给药后不同时间点进行测试。
[0187] 实施例2：鼻内致痛素热伤害实验的止痛效果
[0188] 使用一个热伤害性的啮齿类动物模型，以确定滴鼻致痛素的剂量与以下反应的关系1)缩回潜伏期，2)持续效应，3)提供证据支持或反对假设中的止痛作用是致痛素是集中介导的。
[0189] 设备和材料
[0190] 每组九只雄性SD大鼠(200-300G)，致痛素溶于盐水(i.n.使用的浓度为0.5毫克/毫升，5.0毫克/毫升，50毫克/毫升)，i.v.四致痛素(50毫克/毫升)，吗啡(1.25毫克/毫升)，生理盐水，聚氨酯，A-delta/C痛觉器，计时器。
[0191] 参考文献
[0192] Yeomans，D.C.Pirec，V.，and Proudfit，H.K“. Nociceptive responses to high or low rates of noxious cutaneous heating are mediated by different nociceptors in the rat：behavioral evidence”Pain(1996)68：133-140.
[0193] Sherman S.E，Loomis C.W“.Morphine Insensitive Allodynia Is Produced By Intrathecal Strychnine in the Lightly Anesthetized Rat”Pain(1994)56：17-29.[0194] Thorne R.G.，Pronk G.I，Padmanabhan V，Frey W.H.2nd.“Delivery of Insulin-Like Growth Factor-I to the Rat Brain and Spinal Cord along Olfactory and Trigeminal Pathways following Intranasal Administration”Neuroscience(2004)127：481-96.
[0195] Yeomans，D.C.Pirec，V.，and Proudfit，H.K“. Nociceptive responses to high or low rates of noxious cutaneous heating are mediated by different nociceptors in the rat：behavioral evidence”Pain(1996)68：133-140.
[0196] Sherman S.E，Loomis C.W“.Morphine Insensitive Allodynia Is Produced By Intrathecal Strychnine in the Lightly Anesthetized Rat”Pain(1994)56：17-29.[0197] Thorne R.G.，Pronk G.I，Padmanabhan V，Frey W.H.2nd.“Delivery of Insulin-Like Growth Factor-I to the Rat Brain and Spinal Cord along Olfactory and Trigeminal Pathways following Intranasal Administration”Neuroscience(2004)127：481-96.
[0198] III.实验内容
[0199] 盐溶致痛素，吗啡和生理盐水。
[0200] IV.测试方案/流程图
[0201] (A)每个测试组6只大鼠，聚氨酯轻度麻醉(1.0g/kg，i.p.，没有刺激的情况下，以最低限度的活动滴定)(Sherman and Loomis et al，1996)。左，右脸颊和右后肢用墨汁染黑，使受热均匀分布。
[0202] (B)200-300G只雄性SD大鼠左，右脸颊和右后肢上进行不同程度的热痛觉强度A-delta对比于C-fiber测试(Yeomans et al.，1996)。
[0203] -C-fiber实验中，通过改变聚焦投射灯的电源电压调整热强度，直到观察到缩回潜伏期在9-13秒之间。每只动物应用强度(以伏为单位)做好记录。为了减少潜在的组织损伤，20秒的潜伏期作为一个节点，停止刺激。对55伏的电源电压没有反应的大鼠不计在本研究中。
[0204] -对于A-delta fiber实验，热强度进行调整，直到观测到缩回潜伏期发生在2至3秒。每只动物应用强度(伏)做好记录。为了减少潜在的组织损伤，6秒的发热时间作为一个节点，停止刺激。对85伏的电源电压没有反应的大鼠不计在本研究中。
[0205] (C)大鼠经过以下一项处理：
[0206] -48μL生理盐水或致痛素(0.2，1.0和5.0毫克/千克)滴鼻(Frey Method，见下文；Thorne et al.，2004)。
[0207] -50微升静脉注射生理盐水或致痛素(5.0毫克/千克)
[0208] -50μL i.m.生理盐水或吗啡(0.25毫克/千克)
[0209] 实验动物在进行处理时，蒙上眼睛。
[0210] (D)测量每个后肢对辐射热刺激的缩回潜伏期后测量左，右面颊辐射热刺激反应的缩回潜伏期。每个动物根据基线实验中建立的其特定的辐射振幅(伏)进行测试。给药后立即检测，且分在15，30，45，60，90，120，150和180分钟时进行检测。
[0211] (E)大鼠吸入CO2安乐死。
[0212] 弗雷方法：
[0213] 大鼠仰卧放置，背颈部直到后脑勺下在支撑面插入垫子，脖子上表面与支撑面整个过程保持水平。6(6)微升含有肽的液体给药，每2分钟用小吸管滴进鼻腔(同一鼻孔每四分钟时间的剂量)，两侧交替滴鼻。每个鼻孔接收4个剂量的6μl含肽液体，
[0214] 如果麻醉大鼠鼻腔给药比上面所描述的更为迅速，有可能是两个问题：第一，老鼠可能有呼吸窘迫，因为滴液没有时间被完全吸收，并最终经鼻咽进入肺部被吸收；第二，由于前面传递的液体已经覆盖鼻黏膜而导致更少的药物传递。
[0215] *在这个实验中，大鼠用尿烷(urethane)麻醉。
[0216] 图1和图3表明的是大鼠致痛素的鼻腔给药剂量依赖性的止痛效果，与静脉注射致痛素，全身麻醉的吗啡剂量或生理盐水滴鼻的A-delta痛阈实验的比较。在图1中Y轴显示对热刺激反应的大鼠脸部(脸颊)缩回潜伏期，选择性激活A--delta纤维感受器承受剧烈疼痛的痛觉系统组件。在图3中的Y轴显示大鼠后肢对热刺激反应的缩爪潜伏期，选择性激活A--delta纤维感受器。X轴表示给药后止痛效果维持的时间。
[0217] 图2和图4表明的是大鼠致痛素的鼻腔给药剂量依赖性的止痛效果，与静脉注射孤啡，全身麻醉的吗啡剂量或生理盐水滴鼻的A-delta痛阈实验的比较。在图2中Y轴显示对热刺激反应的大鼠脸颊缩回潜伏期，选择性激活C纤维感受器-对灼痛的疼痛系统组件。在图4中的Y轴显示对热刺激反应的缩爪潜伏期，爪子在一个速度选择性激活C纤维感受器对灼痛的疼痛系统组件。X轴表示给药后止痛效果维持的时间。
[0218] 滴鼻致痛素(N/OFQ)后大鼠脸和后肢A-delta and the C-fiber纤维感受器实验对热激活的行为反应有名确的剂量依赖关系-。滴鼻生理盐水和静脉注射致痛素(/OFQ)没有表现出脸和后肢A-delta and the C-fiber纤维感受器对热激活行为的反应。
[0219] 实施例3：致痛素受体拮抗剂对致痛素引起鼻腔热痛觉减少的效应
[0220] 本实验是为了验证热痛觉啮齿动物模型中致痛素止痛作用的结合位点。
[0221] I.设备与材料
[0222] 每组九只雄性SD大鼠(200-300G)，致痛素溶于盐水(50毫克/毫升)，孤啡肽受体拮抗剂(SB-612111{(-)-cis-1-methyl-7-[[4-(2，6-dichlorophenyl)piperidin-1-yl]methyl]-6，7，8，9-tetrahydro-5H-benzocyclohepten-5-ol}，100mg/ml)，100毫克/毫升)，生理盐水，聚氨酯，A-delta/C痛觉器，计时器。
[0223] II.参考文献
[0224] 与实施例2中相同的参考文献，以及
[0225] Chiou LC，Liao YY，Fan PC，Kuo PH，Wang CH，Riemer C，Prinssen EP.“Nociceptin/orphanin FQ peptide receptors：pharmacology and clinical implications”Curr.Drug Targets(2007)8(1)：117-35.
[0226] Spagnolo B，Carra G，Fantin M，Fischetti C，Hebbes C，McDonald J，Barnes TA，Rizzi A，Trapella C，Fanton G，Morari M，Lambert DG，Regoli D，Calo G.“Pharmacological Characterization of the Nociceptin/Orphanin FQ Receptor Antagonist SB-612111
[0227] [(-)-cis-1-Methyl-7-[[4-2，6-dichlorophenyl)piperidin-1-yl]methyl]-6，7，8，9-tetrahydro-5H-benzocyclohepten-5-ol]：In Vitro Studies”JPET(2007)321：961
967.
967.
[0228] III.实验内容
[0229] 孤啡肽生理盐水，吗啡，生理盐水，致痛素受体拮抗剂(SB-612111)。
[0230] IV.测试方案/流程图
[0231] (A)每个测试组6只大鼠，聚氨酯轻度麻醉(1.0g/kg，i.p.，没有刺激的情况下，以最低限度的活动滴定)(Sherman and Loomis et al，1996)。左，右脸颊和右后肢用墨汁染黑，使受热均匀分布。
[0232] (B)200-300G只雄性SD大鼠左，右脸颊和右后肢上进行不同程度的热痛觉强度A-delta vs.C-fiber测试(Yeomans et al.，1996)。-C-fiber实验中，通过改变聚焦投射灯的电源电压调整热强度，直到缩回潜伏期在9-13秒之间。每只动物应用强度(伏)做好记录。为了减少潜在的组织损伤，20秒的潜伏期作为一个节点，停止刺激。55伏的电源电压没有反应的大鼠不计在本研究中。
[0233] -对于A-delta fiber实验，热强度进行调整，直到缩回发生在2至3秒的潜伏期。每只动物应用强度(伏)做好记录。为了减少潜在的组织损伤，6秒的发热时间作为一个节点，停止刺激。85伏的电源电压没有反应的大鼠不计在本研究中。
[0234] (C)大鼠经过以下处理：
[0235] -50μL致痛素拮抗剂皮下注射((SB-612111，10.0mg/kg)在左右脸颊及右后肢。
[0236] -静脉50微升注射生理盐水
[0237] 实验动物在进行处理时，蒙上眼睛。
[0238] (D)45分钟后，48μL致痛素(50毫克/毫升)滴鼻大鼠(Frey Method；Thorne et al.，2004)。
[0239] (E)测量每个后肢对辐射热刺激反应的缩回潜伏期后测量左，右面颊辐射热刺激的缩回潜伏期。每个动物根据基线实验中建立的其特定的辐射振幅(伏)进行测试。给药后立即检测，且在15，30，45，60，90，120，150和180分钟时进行检测。
[0240] (F)大鼠吸入CO2安乐死。
[0241] 图5和图7展示的是致痛素受体拮抗剂SB-612111对滴鼻致痛素减少热刺激诱导的A-delta痛阈值测试的影响。与大鼠皮下注射致痛素受体拮抗剂预处理和皮下注册生理盐水预处理相比，大鼠鼻腔给药致痛素的疗效被检测。在图5中Y轴显示大鼠脸部(脸颊)对热刺激反应的缩回潜伏期，后爪在一个速度选择性激活A-delta纤维感受器承受剧烈疼痛的系统组件。在图7中的Y轴显示大鼠后肢对热刺激反应的缩回潜伏期，后爪在一个速度选择性激活A--delta纤维感受器承受剧烈疼痛的系统组件。X轴表示给药后止痛效果维持的时间。
[0242] 图6和图8展示的是致痛素受体拮抗剂SB-612111对鼻内给药致痛素减少热刺激诱导的C-fiber痛阈值测试的影响。与大鼠皮下注射致痛素受体拮抗剂预处理和皮下注册生理盐水预处理相比，大鼠鼻腔给药致痛素的疗效被检测。在图5中Y轴显示对热刺激反应的脸颊缩回潜伏期，大鼠脸颊在一个速度选择性激活C-fiber感受器对灼痛的疼痛系统组件。在图7中的Y轴显示对热刺激反应的缩爪潜伏期，大鼠后肢在一个速度选择性激活C-fiber伤害感受器承受灼热疼痛的系统组件。X轴表示给药后止痛效果维持的时间。致痛素拮抗剂对致痛素的止痛活性明显阻遏表明，致痛素的止痛作用是由于与NOP受体结合。
[0243] 从这些实验的数据可以分析如下：缩回潜伏期是受试动物之间的脸颊和后肢反应的平均结果。重复实验的方差分析用来比较脸颊与后肢对生理盐水组和拮抗剂组的A-delta或者C fiber的潜伏期反应。
[0244] 实施例4：滴鼻N/OFQ在啮齿动物的面部持续性痛模型的止痛活性
[0245] 爪子福尔马林模型被广泛用于评估被公认的和已知的止痛治疗中治疗持续性疼痛的效果。我们运用这种模型于脸颊，以评估和比较滴鼻N/OFQ和鼻内给药催产素的效应及2个基准点：舒马曲坦(sumatriptan)(i.p)和吗啡(i.n.)。这项研究的结果表明，相比于鼻内给药0.1mg/kg催产素(47.8％)或42mg/kg舒马普坦(43.8％)，0.1mg/kg N/OFQ引起显著的的抑制擦脸行为(47.2％)。在一个更高的剂量，3mg/kg吗啡产生更大的最大抑制(80.2％)(图9)。因此，滴鼻N/OFQ对啮齿动物模型面部持续性疼痛产生了显著的止痛作用。
重要的是，没有在给药N/OFQ大鼠中观察到麻醉或其他明显的副作用。
重要的是，没有在给药N/OFQ大鼠中观察到麻醉或其他明显的副作用。
[0246] 实施例5：N/OFQ在切口疼痛模型中的功效
[0247] 为了证明N/OFQ在术后疼痛中的效用，我们评估爪子切口模型大鼠鼻内给药N/OFQ后抗痛觉超敏的行为(Brennan，T.J.，Vandermeulen，E.P.&Gebhart，G.F.Pain 64，493-501(1996))。大鼠后肢足底表面作一小切口后24小时鼻内给药N/OFQ(5.0mg/kg)。鼻内给药N/OFQ与静脉注射N/OFQ的效果进行了对比。
[0248] 右后肢足底表面用provodine-碘手术准备后，大鼠被2.5％异氟醚麻醉。通过皮肤和足底表面的绷带下，接近有毛/无毛的皮肤交界处作一5毫米的切口。之后，使用2个简单的间断缝术用5-0丝线缝合伤口。然后伤口面积，用三倍抗生素药膏处理之后受试动物放回鼠笼(单独喂养)。右后肢手术之前至手术后24小时，使用标准的von Frey filaments(TouchTest；Stoelting Co.，Wood Dale，IL，USA)方法测定对机械刺激的缩回阀值。
[0249] 出于实验目的，大鼠用网格(10×10厘米)隔开，并允许使之习惯于15分钟。测试采用Dixon自上而下的方法(Dixon，W.J.Staircase bioassay：the up-and-down method.Neurosci Biobehav Rev15，47-50(1991))，以确定50％的后撤阀值(Chaplan，S.R.，Bach，F.W.，Pogrel，J.W.，Chung，J.M.& Yaksh，T.L.Quantitative assessment of tactile allodynia in the rat paw.J Neurosci Methods 53，55-63(1994))。
[0250] 测试开始，所有大鼠具有4.31细丝(2.0克)。右后肢足底表面切口用von Frey纤丝刺激，观察是否有后撤(缩回)行为，检测最低(后撤)或最高(无后撤)。继续以这种方式测试，直到第一次后撤后又有4次反应(不论其类型)。50％阈值根据反应的类型和最终测试纤丝来计算。on Frey monofilaments(3.61至5.18)，涵盖了弯曲力(0.4-15克)和直径(178-483微米)范围可以给以范围为3.92-147mN的力度。
[0251] 止痛效果也可用最大可能功效(％MPE)来表示，根据50％的阈值(治疗反应)计算如下：
[0252] ％MPE的＝[(治疗反应-切口后基准值)/
[0253] (上限反应-切口后基准值)]×100％；
[0254] 其中上限反应为15.0。剂量反应表如图10.
[0255] 与热刺激实验的结果相似，鼻腔给药5.0mg/kg N/OFQ产生较强的抗痛觉超敏的效果(图11)，起始稍微延迟(最大功效是在60分钟内到达)。同样剂量静脉注射观察N/OFQ(图12)没有导致手术后的异常性疼痛的逆转。这些结果提供了强有力的证据，鼻腔给药，而不是全身给药N/OFQ对于术后疼痛即有效果。这种二分法再次表明，鼻腔给药N/OFQ的效果通过中枢神经系统介导直接吸收。
[0256] 实施例6：脸颊切口疼痛模型中N/OFQ的疗效
[0257] 图13显示，N/OFQ(5mg/kg，i.n)对脸颊切口造成的术后静态点状的异常性疼痛的效果。在剃光的面颊上经皮作一个5毫米切口(包括底层的肌肉)，24小时后鼻腔给药5.0mg/kg N/OFQ。2.5％异氟醚麻醉下进行手术，并使用1个简单的间断缝术5-0丝线缝合伤口。给药后每30分钟后使用von Frey filaments(TouchTest；Stoelting Co.，Wood Dale，IL，USA)，采用Dixon从上至下的技术检测50％后撤阀值。该模型根据后肢足底切口模型改造(Brennan，T.J.，Vandermeulen，E.P.& Gebhart，G.F.(1996)Pain64；493-501)，这个模型是由布鲁姆限制大鼠，采用更轻的细丝测试。脸颊测试使用的Von Frey单丝涵盖了弯曲力(0.008 1.4g)和直径(64 254um)范围可以给以范围为0.078 13.72mN的力度。止痛效果也可用最大可能功效(％MPE)来表示，根据50％的阈值(治疗反应)计算如下：
[0258] ％MPE的＝[(治疗反应-切口后基准值)/
[0259] (上限反应-切口后基准值)]×100％；
[0260] 其中上限反应为1.5。剂量反应表如图14.
[0261] 实施例7：保留神经损伤模型
[0262] 使用一个标准的大鼠神经损伤模型，保留神经损伤(spared nerve injury，SNI)模型，评估N/OFQ的止痛活性，(Decosterd，I.& Woolf，C.J.Pain 87：149-58(2000))。一条腿的坐骨神经的三个分支中的两个手术横断面在同侧后肢足底表面会产生过敏反应。该模型产生许多神经痛的特点，例如明显疼痛过敏，但伴随脊髓神经损伤，无信号的僵直，持续的痛苦。
[0263] 方法：
[0264] 异氟醚(3.5％)麻醉下进行手术。一旦达到深度麻醉，剃光大腿的外侧表面皮肤，providine-碘液预处理。切开皮肤，作一切口暴露坐骨神经和三端分支：腓，共同腓骨和胫骨神经节。切断胫骨神经节和共同腓骨并用5.0丝线结扎，保持小腿神经完好无损，但除去2-4毫米的末梢神经端。做好护理，避免任何接触，或拉伸小腿神经。肌肉和皮肤经双层包扎封口，用抗生素药膏处理伤口。手术后，分别用0.05mg/kg叔丁啡IM作为手术后镇痛。为了评估神经损伤对痛觉敏感的影响，使用von Frey纤丝测量了机械痛(TouchTest；Stoelting Co.，Wood Dale，IL，USA)，对同侧后肢足底施加损伤并评估损伤前后，滴鼻N/OFQ前后的影响。采用Dixon从上至下的技术检测50％后撤阀值。该模型根据后肢足底切口模型改造(Brennan，T.J.，Vandermeulen，E.P.& Gebhart，G.F.(1996)Pain 64；493-501)。测试使用的Von Frey单丝(monofilaments)涵盖了弯曲力(0.008 1.4g)和直径(64 254um)范围可以给以范围为0.078 13.72mN的力度。
[0265] 结果：
[0266] 手术6天内受伤的爪子同侧的神经损伤产生明显的异常性疼痛。神经损伤后21天鼻腔给药N/OFQ(5.0mg/kg)，在整个3个小时的测试中爪子同侧的神经产生较强的止痛效果(图13)。给药24小时后，即在翌日这些效果不再明显。尽管样本小(Vehicle：n＝4 & N/OFQ：n＝6)，仍有明显的疗效趋势。这些结果提供了强有力的证据，证明除了在原始疼痛位置以外，滴鼻N/OFQ对治疗神经痛有效。
[0267] 实施例8：N/OPQ对肠道的疗效
[0268] 给予阿片类止痛药，如吗啡，控制疼痛相关的主要并发症之一就是便秘。在大鼠肠道通过时间里，便秘有所增加。为了确定是否鼻腔给药N/OPQ，与阿片类药物有类似的强的止痛效果，是否也会引起便秘，鼻腔给药N/OFQ对肠道通过时间的影响进行了评估。N/OFQ(5.0mg/kg)预处理后大鼠肠道通过时间(ITT)进行了检测，并给予木炭粉(12.5％活性碳用12.5％的阿拉伯树胶悬液激活)(Tavani，A.，Petrillo，P.，La Regina，A.& Sbacchi，M.Role of peripheral mu，delta and kappa opioid receptors in opioid-induced inhibition of gastrointestinal transit in rats.J Pharmacol Exp Ther 254，91-97(1990))。
[0269] 腹膜内给药(3.0mg/kg)或鼻腔给药(4.0mg/kg)吗啡的作用效果进行了对比。简而言之，分别给予大鼠无限制的饲料和水过夜，第二天早上给药测试化合物。20至30分钟后，给大鼠灌胃木炭悬浮液(2毫升)，30分钟后，吸入二氧化碳安乐死。立即切除胃和小肠，并记录小肠总长度和木炭经过的距离。通过(transit)％以通过的小肠总长度除以木炭经过距离的比值乘以100％计算。对于穿越研究比较，复合物的效应也可用媒介物处理组的transit％表示(100％-((平均媒介物％经过距离-药物％经过距离)/平均媒介物％经过距离))％。虽然吗啡产生一定的通过减缓(下跌的transit％)，不论给药途径，在经过N/OFQ预处理的大鼠中都没有检测到影响(图14)。这些数据提供了有力的证据，证明尽管产生稳健的与吗啡一样的止痛作用，滴鼻N/OFQ不会产生临床意义上的便秘。
[0270] 实施例9：滴鼻N/OFQ后行为的初步评估
[0271] 众所周知，作为临床上可用的强止痛剂有时有深的行为毒理效应(即，镇静作用)，确定N/OFQ是否同样产生负荷是非常重要的。因此，对滴鼻N/OFQ的初步行为毒理学筛选进行了检测。简单地说，给4只大鼠鼻腔给药25mg/kgN/OFQ，并关回鼠笼(单独饲养)，让其从麻醉中恢复。每隔20分钟观察，一个小时后，每隔1小时观察，并记录任何异常。
[0272] N/OFQ给药24小时后，老鼠再次被观察是否有任何延迟毒性反应。一般地，判断大鼠行为是否异常由主观决定，存在下列行为之一的：强直/阵挛性运动，共济失调，刻板症，发声，流泪，流涎，毛发直立，上睑下垂，以及异常呼吸。此外，处理动物或接近或触摸动物如果引起任何异常反应，都认为是刺激的反应。急性中毒剂量提高到比热刺激和切口模型(5mg/kg)有效剂量5倍时没有观察到异常反应。
[0273] 为了清晰的认识上述发明已通过插图和实施例做了细节描述，本领域的熟练操作人员可进行适当的改动和调整，而不偏离本专利发明。因此，描述和实施例不应该被理解为限制本专利的范围。
[0274] 需要强调的是，此处使用单数形式的“a”，“an”，“the”包括复数，引用除非另有说明。此外，此处所用，术语“包括”和它的同源词指的是包含，即相当于词“包括”及其相应的同源意义。
[0275] 所有引用的专利，专利申请，文件，文章被纳入作为整体参考。
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