许多妇女希望控制她们的生育并降低被性传播疾病(STD)感染的 危险。AIDS流行病迫使更加需要女性控制方法以便提供有效防止妊 娠和STD的保护作用(Irwin等，1998)。目前尚没有同时防止妊娠和感 染的药物可以利用。因此需要开发出是杀精子剂且兼具抗HIV和STD 病原体活性的安全的预防性药物。
非离子表面活性剂壬苯醇醚-9(N-9)在美国是一种被广泛使用的杀 精子剂。不幸的是，它似乎无法降低HIV感染的发生率(Rowe，1997； Hira等1997；Martin等，1997，Roddy等，1998)。事实上，目前已经证 实N-9提高了生殖感染(Stafford等，1998)、泌尿道感染(Fihn等，1996)、 外阴阴道念珠菌病(Geiger和Foxman，1996)和生殖溃疡(Feldblum，1996) 的危险性。加拿大的一个省不再推荐使用任何形式的N-9(Rekart， 1992)。此外，N-9是低聚物的混合物(Yu和Chien，1995)，其可能不 符合未来保健产业中趋于使用单纯化合物或使用其中各成分符合安全 标准的混合物的条例。鉴于环境毒性(Thiele等，1997)的原因，若干欧 洲国家禁止或限制使用N-9和有关的化合物，这引起对N-9的健康危 害性的争论(Renner，1997)。显然，需要除N-9以外的其他替代品作为 杀微生物杀精子剂。
优选利用同时兼具杀微生物和抗STD特性的药剂，特别是如果 该药剂无刺激性且不增高炎症和感染的危险性。如果该药剂是对抗毁 灭性疾病AIDS的活性物质时尤其有益。
发明概述
本发明的目的在于提供下面通式所示的酰基肉碱类似物：
                         通式1 其中R是具有10-30个碳的烷基链。在优选实施方式中，R选自-C10H21、 -C11H23、-C12H25、-C13H27、-C14H29、-C16H33、-C17H35、-C18H37、-C19H39、 -C20H41、-C21H43和-C22H45。
本发明的另一目的在于提供一种组合物，其含有载体和式1所示 通式的酰基肉碱类似物，其中R是选自-C10H21至-C30H61的烷基链，并 且其中R优选是-C10H21至-C22H45。该组合物还可含有酸。在一个优选 实施方式中，所述酸是粘酸。载体可以是凝胶。
本发明还提供一种雌性哺乳动物避孕的方法。在一个优选实施方 式中，将避孕有效量的杀微生物杀精子剂置于雌性哺乳动物的阴道腔 内，所述杀精子剂中含有式1所示的酰基肉碱类似物，其中R是选自 -C10H21至-C30H61的烷基链。杀微生物杀精子剂可以是凝胶，并且可以 进一步含有酸，如粘酸。
本发明还提供一种使哺乳动物精子失活的方法，包括使精子与杀 精子有效量的含有式1所示通式的酰基肉碱类似物的化合物接触，其 中R是选自-C10H21至-C30H61的烷基链。在一个优选实施方式中，R＝ -C10H21至-C22H45。所述化合物可以是凝胶，并且可以进一步含有酸， 如粘酸。
本发明还提供一种使人类免疫缺陷性病毒失效的方法，该方法包 括使人类免疫缺陷性病毒与有效量的含有式1所示通式的酰基肉碱类 似物的化合物接触，其中R是选自-C10H21至-C30H61的烷基链。在一个 优选实施方式中，R＝-C10H21至-C22H45。所述化合物可以是凝胶，并且 可以进一步含有酸，如粘酸。
本发明还提供一种抑制白色念珠菌(Candida albicans)生长的方 法，该方法包括使白色念珠菌与有效量的含有式1所示通式的酰基肉 碱类似物的化合物接触，其中R是选自-C10H21至-C30H61的烷基链。在 一个优选实施方式中，R＝-C10H21至-C22H45。所述化合物可以是凝胶， 并且可以进一步含有酸，如粘酸。
本发明还提供一种在需要其的雌性哺乳动物中同时使哺乳动物精 子失活、使人类免疫缺陷性病毒失效且抑制白色念珠菌的生长的方 法，该方法包括给所述雌性哺乳动物阴道内施用足够量的使乳动物精 子失活、使人类免疫缺陷性病毒失效且抑制该雌性哺乳动物中白色念 珠菌生长的杀微生物杀精子剂。该杀微生物杀精子剂含有式1所示通 式的酰基肉碱类似物，其中R是选自-C10H21至-C30H61的烷基链。在一 个优选实施方式中，R＝-C10H21至-C22H45。所述化合物可以是凝胶，并 且可以进一步含有酸，如粘酸。
附图说明
图1：存在于羧甲基纤维素(CMC)制剂中的4％Z-15在兔阴道刺 激(RVI)研究后6个月的MALDI-TOF分析。
图2：Z-15剂量-反应试验：精液游动性评估。◆＝(R)-Z-15； ■＝MA-(rac)-Z-15；▲＝MA-(R)-Z-15；X＝N-9。
本发明优选实施方式的详述
本发明提供具有优异杀精子和杀微生物活性的酰基肉碱类似物。 特别是，该类似物是酰基肉碱类似物，而且它们表现出出色的抗HIV 活性，以及优异的抑制白色念珠菌生长的抑制活性，此类真菌通常会 引起阴道酵母菌感染。此外，所述的酰基肉碱类似物无刺激，这在标 准兔阴道刺激(RVI)试验中得到证实。
所述的酰基肉碱类似物基于式1所示的通用化学结构，其中R＝ 含有10-30个碳的烷基链。首选R具有10-22个碳(即-C10H21至-C22H45)。 酰基肉碱类似物的合成在下面的实施例1中说明。通过选择R或S(或 两者)、起始原料的立体异构体(去甲酰基肉碱甲酯)，可以制备R或S 对映异构形式的酰基肉碱类似物，或制备酰基肉碱类似物的消旋混合 物。术语“酰基类似物”是指包括R和S两种立体异构体，以及立体异 构体的消旋混合物。
在一个实施方式中，本发明提供式1所示通式的酰基肉碱类似 物，其中R＝具有10-14个碳的烷基链(即-C10H21至-C14H29)或16-22个 碳(即-C14H29至-C22H45)的烷基链。其中R＝-C15H31的化合物业已被描述 为有效的糖尿病药物。
在另一优选实施方式中，本发明进一步提供一种组合物，其含有 载体和式1所示通式的酰基肉碱类似物，其中R＝具有10-30个碳的烷 基链，并且最优选10-22个碳(即-C10H21至-C22H45)。在另一实施方式 中，该组合物可以是凝胶。
所述的酰基肉碱类似物已经表现出具有良好的抗HIV活性。然 而，所属领域的技术人员应理解，所述酰基肉碱类似物的应用不一定 局限于使HIV失效。通过本发明的实施还可以使其他病毒(如单纯疱 疹病毒)失效。
本发明的组合物可以进一步含有酸。适用的酸将是那些可以：提 高所述类似物的水溶性；与阴道菌丛相容(例如，它们可以具有缓冲能 力，使制剂的pH保持在约4-6)；它们可以协助乳酸杆菌的生长；它 们可以具有防腐性且由此增强上述类似物的效能；酸的盐可以有助于 增强羧甲基纤维素(CMC)的交联，它们将无毒且无刺激。适用酸的实 例可以包括但不限于：柠檬酸、酒石酸、乳酸、苹果酸、抗坏血酸(钠 盐)、泛酸(钠盐)、乳酸(钠盐)、多种氨基酸、粘酸等。在本发明的优 选实施方式中，所述酸是粘酸。
所述的酰基肉碱类似物在本发明组合物中的含量在约1-99％(重 量)的范围内。在本发明的一个优选实施方式中，所述的酰基肉碱类似 物占约2-10％(重量)。当本发明的组合物中存在粘酸时，其含量在约 1-99％(重量)内。在本发明的一个优选实施方式中，粘酸的含量是在 约1-10％(重量)的范围内。
所述的酰基肉碱类似物可以溶于或分散在多种载体中。譬如，对 于“唯一”用途可以配制为以下形式，包括但不限于：凝胶、泡沫、栓 剂、霜剂、洗剂、片剂、阴道栓等的形式。可以存在多种适当的载体， 它们是所属领域技术人员所熟知的且可以用来实施本发明。所有这些 载体的使用均被包括在本发明之内。在一个优选实施方式中，载体是 含3％羧甲基纤维素(CMC)的水。任何能够传递足够灭活精子、使HIV 失效和抑制白色念珠菌生长的量的酰基肉碱类似物的制剂均可以用于 实施本发明。
制剂可以进一步含有其他所属领域技术人员熟知的组分，包括但 不限于稳定剂、着色剂、防腐剂、香料、胶凝剂、抗氧化剂、其他活 性剂等。本发明的组合物可以含有一种或多种酰基肉碱类似物。在单 一制剂中，所述的酰基肉碱类似物可以是相同或不同的烷基链长度， 并且可以是相同或不同的异构体(R和/或S)，或异构体的消旋混合物。
本发明的组合物还可以与其他避孕装置合用。其实例包括但不限 于：加入到避孕套或隔膜中以提高它们的活性，或浸渗到宫颈-阴道海 绵中，其对精子和微生物同时起到机械和化学屏障的作用。
在另一实施方式中，本发明还提供一种雌性哺乳动物避孕的方 法，其包括将避孕有效量的式1所示通式的化合物置于雌性哺乳动物 的阴道腔中。所属领域的技术人员应理解，已知有多种工具可以将所 述的化合物经阴道传递，譬如插棒式涂敷器、阴道栓、喷雾器、压缩 管、宫颈环、海绵等。所有这些经阴道给药的器具均包括在本发明中。
本发明还提供一种使哺乳动物精子失活的方法，该方法包括使精 子与杀精子有效量的式1所示通式的化合物接触。
本发明还提供一种使病毒失效的方法，该方法包括使病毒与足够 使病毒失效量的式1所示通式的化合物接触。在本发明的优选实施方 式中，所述病毒是人类免疫缺陷性病毒。在本发明的另一实施方式中， 该病毒是单纯疱疹病毒。
本发明还提供一种抑制真菌生长的方法，该方法包括使真菌与足 以抑制该真菌生长量的式1所示通式的化合物接触。在本发明的一个 优选实施方式中，所述真菌是白色念珠菌。
本发明也提供一种抑制微生物生长的方法，该方法包括使所述微 生物与足够抑制该微生物生长量的式1所示通式的化合物接触。其生 长可以被本发明的方法抑制的微生物的实例包括但不限于病毒、细 菌、原生动物、真菌和寄生虫。
在本发明的其它实施方式中，肉碱类似物可以用作杀微生物剂商 品而不是杀精子剂。它们尤其适合局部涂敷的产品，因为它们无刺激。 譬如，可以将它们加入到化妆品制剂中和其它卫生产品中，其中包括 但不限于漱口液、除臭剂、霜剂、洗剂、化妆品等，目的在于(例如) 进行产品的消毒、灭菌或防腐。
在本发明的其它实施方式中，酰基肉碱类似物可以单独利用其在 阴道内的杀微生物特性，即在其杀精子作用是多余的情况中。譬如， 酰基肉碱类似物可以用于妇女消毒(例如手术灭菌、绝经后等)或采用 不同形式节育的妇女(如激素、子宫内器具、隔膜等)，而她也可以受 益于所述化合物的阴道内杀微生物特性。出于这些目的，所述的酰基 肉碱类似物可以以任何不同的方式进行配制，这些方式为所属领域技 术人员公知。其实例包括但不限于阴道灌洗液、凝胶、霜剂、栓剂等。
实施例
实施例1.合成
(R)-酰基肉碱通过苯硫酚在2-(二甲基氨基)乙醇中脱甲基化 (Colucci等，1987)，随后用LiOH沉淀得到1，收率89％。(参考下面 合成路线1)。采用改进的酯化反应(Gandour等，1993)以提高2的收率。 溴羟基化一系列的1-烯烃，随后利用琼斯试剂就地氧化所得的仲醇生 成酮，得到收率良好的3。我们的上述合成(Kumaravel等，1993)，略 微改进Zav’yalov等的方法(Zav’yalov等，1989)，用丙酮作为溶剂且使 3的收率在30-55％之间。然而，副产物和催泪剂溴丙酮使处理冗长枯 燥。该方法用四氢呋喃(THF)消除这个困难。在溶剂和烯烃的烯烃化 改变后，反应可靠地在THF/H2O/烯烃[(12∶12∶1)(v/v/w)]中进行如下：
1-溴-2-烷酮3的合成：向1-烯烃(20mmol)在THF∶H2O(1∶1，24mL/g 烯烃)中的溶液内加入N-溴琥珀酰亚胺(NBS)(24mmol，1.2当量)和 FeCl3·6H2O(50mg)。搅拌所得的橙色溶液直至所有的NBS均溶解(约 4-5小时)。向该溶液内加入琼斯试剂[CrO3(6.1g，61mmol)]和浓 H2SO4(6ml)，同时冷却该反应烧瓶。将暗绿色反应混合物搅拌过夜且 随后用水(50ml)稀释。反应混合物用Et2O(3×30ml)提取。该乙醚提取 液用饱和NaHCO3(2×30ml)、盐水(1×20ml)洗涤并干燥。浓缩提取液 得到一种蜡，其在硅胶上层析。用己烷、随后10％Et2O-己烷洗脱得 到无色蜡状固体(收率70-88％)。1H NMR(400MHz)δ0.75(3H，t， Japp＝7.1Hz)，1.44-1.75((n-7)H，brm)，2.65(2H，t，Japp＝7.1 Hz)，3.89(2H，s)； IR(薄膜)Vmax1719。
3与2的缩合(Gandour等，1993)得到4。分离“纯净”4的关 键是用EtOAc研制该油性残余物，随后搅拌直至出现沉淀。4用0.05N NaOH水解生成预期的两性离子Z-10-Z-15。由NaBr利用反相(RP-8) 柱色谱代替HPLC(Gandour等，1993)分离出多克量的Z-10-Z-15，并且 随后重结晶得到分析纯的样品。该方法还用来生成具有超过15个碳， 如16-30个碳的化合物。
虽然在以下实施例中采用的是Z-10-Z-15，但是具有多于15个碳 的化合物的结果应当是类似的。
                                                                          Z-n
                                                                      (n＝R中的碳数)
                       合成路线1 实施例2.在Sander-Cramer试验中的杀精子活性
由健康人志愿者采集精液样本；只使用具有＞60×106游动精子/ml 和＞50％游动性的精液。在0.9％盐水中配制化合物的2倍连续稀释液， 并且与精液样本一起培养20秒。在显微镜下评估精子，并且阳性稀 释液(即所有观察到的精子均不游动)进一步与2体积的缓冲液在37℃ 下培养1小时并再次检查精子的游动性。如果没有观察到游动精子， 维持阳性评分。用最高精子制动稀释液及其起始浓度计算出化合物的 最低有效浓度(MEC)。
表1表示Z-10-Z-15和N-9的体内试验结果，对于Z-10-Z-15而 言，其效价随着烷基链的长度的增加而增高(即MEC降低)直至Z-14， 十四烷基类似物。在试验误差的范围内，Z-14和Z-15具有相似的 MEC；两者略低于N-9的MEC。
表1.Z-10-Z-15和N-9在Sander-Cramer试验中的杀精子活性   化合物  溶剂 起始浓度 (mg/ml) 最高杀精子稀释液     (1/X)     MEC   (mg/ml)a  n   溶解度    Z-10  dH2O     10     4.8±0.5   2.3±0.2  10   良好 (R)-Z-11  dH2O     10     7.6±0.0   1.4±0.1  10   良好 (R)-Z-12  dH2O     10     27.2±2.3   0.407±0.7  10   良好 (R)-Z-13  dH2O     10     48.0±5.1  0.235±0.025  10   良好 (R)-Z-14  dH2O     10     102.4±18.5  0.121±0.014  10   良好 (R)-Z-15  dH2O     10     102.4±9.9  0.109±0.012  10   良好   N-9  dH2O     10     83.2±18.2  0.144±0.011  10   良好 a最低有效浓度
这些结果显示出，所述的酰基肉碱类似物是有效的杀精子剂。所用 的试验是一种判断杀精子剂的有效性的公认方法(Sander和Cramer， 1941；Donel，1994)。用作杀精子剂时，所述的酰基肉碱类似物可以作为 凝胶、软膏或其它剂型局部给药至阴道，以便在随后与精子接触后，使 精子制动。 实施例3.白色念珠菌的抑制
通过测定对白色念珠菌在无机盐加酵母提取物的溶液中的生长的抑 制作用来测量Z-10-Z-15的最低抑制浓度(MIC)(参见：确定合成聚合材 料对真菌抗性的标准操作，针对材料和环境微生物学的美国检测及材料 协会(ASTM)标准(Standard Practice for Determining Resistance of Synthetic Polymeric Material to Fungi.American Society for Testing and Materials (ASTM)Standards on Materials and Environmental Microbiology)，第1版， 1987)，并且补充葡萄糖(10g/L)和酵母提取物(1g/L)。将等份(250μl)无菌 培养基分散到96孔微量培养板的各孔中。通过将试验化合物溶于50％(v/v) 含水二甲基亚砜(DMSO)中制备储备液。随后各孔(加对照)接种5μl的白 色念珠菌混悬液。调整该混悬液使OD686＝0.28。这种密度含有约2.5×107 菌落形成单位(CFU)2/ml。28℃下将该微量培养板在避光下培养4天。 OD≤0.05的试验孔被判定为具有完全的细胞生长抑制作用。
结果显示，对于白色念珠菌的最低抑制浓度(MIC)随着烷基链长 的增加而降低。MIC(单位为mg/ml)是：
  化合物                   MIC
  Z-10                    ＞0.1
  Z-11                    ＞0.1
  Z-12                    0.08-0.1
  Z-13                    0.04
  Z-14                    0.01
  Z-15                    0.002
可以看出，化合物Z-15表现出最高活性，并且Z-14显示出可接 受的活性。
这些结果表明，所述的酰基肉碱类似物是有效的白色念珠菌生长 抑制剂。所用的试验是评判化合物作为白色念珠菌生长的抑制剂的公 认方法。用作杀精子剂时，所述的酰基肉碱类似物可以作为凝胶、软 膏或其它剂型局部给药至阴道，以便在随后与白色念珠菌接触后，从 而抑制白色念珠菌的生长。
实施例4.抗HIV活性
按照上述方法(Resnick等，1990)进行体外抗HIV的试验。HIV-1(RF 毒株，NIH1983)的传染性混悬液与化合物接触2分钟。片刻后，用培 养基将混合物10倍连续稀释以中止化合物作用，将稀释液与MT-2靶 细胞在37℃下一起培养。细胞在生长培养基中37℃下保持6天。在 感染后第6天评估HIV引起的细胞病理学(合胞体形成)，以及细胞生 存力。
表2给出Z-10-Z-15和N-9(对照)在抑制无细胞HIV-1(RF毒株)的 体外试验中的结果。如同其它试验，抗病毒剂的有效浓度随着烷基链 的增加而降低。在试验误差内，Z-13、Z-14和Z-15具有相似的活性； N-9的活性比这些化合物略高。
表2.抑制HIV的体外试验：无细胞灭活试验。浓度对于病毒活 性减小的影响。                                  有效浓度(mg/mL)    化合物     10     3.2     1     0.32     0.1     0.032     Z-10   ≥4.0a     2.8     1.0     0.8     n.a.b     n.a.     Z-11     4.7     2.7     2.0     0.8     n.a.     n.a.     Z-12   ≥4.0   ≥3.5     2.8     2.0     0.3     0.0     Z-13     3.5     3.5     3.3     2.7     1.5     0.5     Z-14   ≥4.0   ≥4.0     3.5     2.8     1.5     0.5     Z-15   ≥4.0     3.8     3.2     2.7     1.5     0.3     N-9     n.a.     n.a.   ≥4.0     3.5     2.2     0.5
a对数单位，数值是指感染性病毒滴定度的减少。
b未检测
这些结果表明，所述的酰基肉碱类似物是有效的HIV失效剂。 所用的试验是用于评判化合物作为HIV失效剂的有效性的公认方法 (Resnick等，1990)。在用作杀微生物剂时，所述的酰基肉碱类似物可 以作为凝胶、软膏或其它剂型局部给药至阴道，以便在随后与HIV接 触后，从而使病毒失效。 实施例5.兔阴道刺激(RVI)研究
美国食品和药品管理局建议，所有阴道用产品在临床试验用于妇 女之前需在10天RVI(Eckstein等，1969)中进行测试。表3表示在含3 ％羧甲基纤维素(CMC)的水中配制的4％Z-15、3％CMC的水溶液(载 体)和两种存在于CMC中的N-9的制剂的市售产品的比较。结果显示， 含在3％CMC中的4％Z-15的刺激性最小。4％Z-15制剂的2.7的 评分值比市售产品突出。
表3.兔阴道刺激研究     样本                                          评分a     盐水     3.0     Conceptrol(4％N-9)     7.6     Gyno(2％N-9)     8.2     4％Z-15存在于3％CMC中     2.7     3％CMC     4.4
a多个阴道组织样本的平均复合分 实施例6.制剂时间对Z-15的活性和化学完整性的作用
3个月后评估CMC制剂中Z-15的杀精子活性；结果显示，Z-15 在3个月之后仍然具有杀精子活性。
用1H核磁共振(NMR)和飞行质谱的矩阵辅助激光解吸离子化时 间(Matrix Assisted Laser Desorption Ionization Time of Flight Mass Spectroscopy)(MALDI-TOF)分析CMC制剂中(R)-Z-15的剩余样品。 为了NMR分析，将样本的水凝胶溶于D2O。为了MALDI-TOF分析， 将样本的水凝胶置于室内且使其接受激光。MALDI-TOF的结果如图 1所示。两种技术明确地显示出，6个月之后制剂中的Z-15在化学上 没有变化。 实施例7.子宫颈粘液的生物扩散
利用双端试验(Double-End test)(Doncel，1994)与N-9比较测试(R)- Z-14和(R)-Z-15类似物的子宫颈粘液生物扩散性。在本试验中，化合 物溶液(存在于0.9％盐水中)与7cm含有牛子宫颈粘液的一端开口的毛 细管(Penetrak，Biochem Immuno System，Norwell，MA)一起培养60分 钟。培养之后，将业已与化合物接触的管子的开口端密封。随后，将 该管子距初始开口20mm处切出开口，倒置并浸渍在精液中，使精液 以与该化合物扩散相反的方向进行渗透。当精液遇到生物活性浓度的 试验化合物时精液停止渗透。所以，精液渗透越低，化合物的生物扩 散作用越高。此外，再次验证了所述的类似物的杀精子活性。结果如 表4所示。可以看出，通过其DET值，酰基肉碱类似物表现出与N-9 相类似的生物扩散作用。
表4.子宫颈粘液的生物扩散   化合物   溶剂     MECa     (mg/ml) 试验浓度b   (mg/ml)     DETc     ％对照     n   (R)-Z-14   dH2O   0.091±0.008     0.91     18.0±1.2     12   (R)-Z-15   dH2O   0.104±0.011     1.04     16.0±0.0     12   N-9   dH2O   0.144±0.011     1.44     17.5±0.7     12   0.9％NaCl   dH2O     100.0±0.0     12
a每个Sander-Cramer试验的最低有效浓度；b10倍MEC.
c双端试验(％对照表示试验精液的渗透与对照[溶剂]精液的渗透 比较) 实施例8.(R)-、(S)-和消旋(rac)-Z-15的杀精子活性
FDA要求对手性药物候选物的所有立体异构体进行药理学评估 (参见：FDA关于新立体异构药物开发的方针陈述(FDAs Policy Statement for the Development of New Stereoisomeric Drugs)(5/1/1992)， http：www.fda.gov/cder/guidance/stereo.htm)。所以，评估了(R)-、(S)-和 (rac)-Z-15的杀精子活性。进行标准Sander-Cramer试验并且结果如表 5所示。可以看出，两种对映异构体和外消旋体的活性没有明显差异。 在该试验中，(rac)-Z-15的活性比两种对映异构体的略高并且明显高 于N-9。
表5.(R)-、(S)-和(rac)-Z-15的标准Sander-Cramer试验   化合物   溶剂   起始浓度   (mg/ml)   最高杀精子稀释液       (1/X)     MEC   (mg/ml)   n   溶解度   (rac)-z-15   dH2O     10     115.2±23.6   0.117±0.016   10   良好   (R)-Z-15   dH2O     10     73.6±9.1   0.156±0.019   10   良好   (S)-Z-15   dH2O     10     80.0±10.4   0.148±0.021   10   良好   N-9   dH2O     10     33.6±3.5   0.329±0.035   10   良好 实施例9.Z-15-粘酸混合物的杀精子活性
目前公开的(Fassi，美国专利号5,952,379)的L-(-)[(R)-]酰基肉碱 的稳定、非吸湿盐和L-(-)-[(R)-]酰基肉碱与粘酸(MA)(2∶1)促进MA与 Z-15混合物的作用的拓展研究。该混合使Z-15样品的pH从约9-10 减低到约3.5-3.8。该混合物只含有是纯净Z-15(100％)的67％的Z-15 作为活性成分。结果如表6所示，其显示33％的MA和67％(rac)-Z-15 的混合物如同任何形式的Z-15般具有活性，这些试验再次表明(rac)- Z-15具有等同于R和S对映异构体的活性。
表6.Z-15-粘酸混合物的杀精子活性     化合物   溶剂 起始浓度 (mg/ml) 最高杀精子稀释液     (1/X)     MEC   (mg/ml)   n 溶解度    (rac)-Z-15a   dH2O     10     108.80±19.20  0.113±0.015  10 良好    AR-Z-15b   dH2O     10     96.00±19.67  0.129±0.014  10 良好    MA-(rac-Z-15c   dH2O     10     96.00±13.49  0.141±0.030  10 良好    N-9   dH2O     10     73.6±8.4  0.156±0.020  10 良好
a批次964；b重量混合物(50％(S)加50％(R)-Z-15)；c33％MA 加67％rac-Z-15 实施例10.Z-15-粘酸混合物的精子游动抑制作用
与(R)-Z-15本身或N-9相比测定Z-15-粘酸混合物[(R)-Z-15-MA 和rac-Z-15-MA]抑制精子游动性的能力。结果如图2所示。可以看出， 两种Z-15-粘酸混合物的ED50(半数有效剂量，即化合物制动50％精子 时的剂量)皆低于(R)-Z-15本身或N-9本身的ED50。此外，这些结果 还证明了Z-15在低于MEC的浓度下具有比N-9更好的抑制精子游动 性的能力。 实施例11.配制的Z-15和Z-15-MA混合物的抗HIV活性
表7包括的数据证实了Z-15-MA混合物和在3％CMC载体中含 有4％Z-15的凝胶制剂的剂量依赖性HIV灭活性。
表7.配制的Z-15和Z-15-MA混合物的抗HIV活性     化合物 溶剂 接触中的％药物     TCTD50     细胞毒性 病毒滴定度的对数降低a MA-(rac-Z-15-b dH2O   0.1，0.032，   0.01，0.0032     1.5，≤0.5，     ≤0.5，≤0.5       3.5，1.9，       0.7，0.5 4％(R)-Z-15在     凝胶中c dH2O   0.1，0.032，   0.01，0.0032     1.5，≤0.5，     ≤0.5，≤0.5       3.5，1.7     ≤0.2，≤0.2 3％CMC凝胶 dH2O   0.1，0.032，   0.01，0.0032     ≤0.5，≤0.5，     ≤0.5，≤0.5       0.9，≤0.4，     ≤0.2，≤0.4
a病毒对照＝6.2-log10TCID50/0.1ml；b33％MA加67％rac-Z-15；c 凝胶，由含3％CMC的水加0.18％对羟基苯甲酸甲酯和0.02％对羟 基苯甲酸丙酯组成。
虽然以优选的实施方式对本发明进行了描述，所属领域技术人员 应理解，本发明可以在所附权利要求书的实质和范围内进行改进。
本发明部分基金来源于：国立卫生研究所，批准号GM42016； 和避孕研究和开发(CONRAD)计划，项目#CSA98-226，在与美国国际 开发办事处(USAID)的合作协议下进行。政府可以拥有本发明的某些 权利。

                           参考文献
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