技术领域
[0001] 本
发明涉及一类药品，即一类治疗癌症的药，也是一类对癌细胞具有抑制及灭杀作用的化合物，也是一种具有抗癌作用的蒙药提取物。
背景技术
[0002] 癌症是目前死亡率较高的
疾病，治疗方法主要是药物治疗和手术治疗，药物治疗主要是化疗和放疗药物。由于化疗和放疗
副作用较大，患者比较痛苦，因而人们希望采用一些具有抑制乃至消杀癌细胞，但对人体的副作用较小，患者的痛苦较轻的非放
化疗药物。通过多年的发展，已有多种非
放化疗的抗癌药物投放市场。可是，上述药物多采用稀有原料及高科技手段制成，成本高昂，难以普及。
[0003] 萜类化合物(terpenes)是具有(C5H8)n通式以及其含
氧和不同饱和程度的衍
生物，一般可分为单萜类、倍半萜类、二萜类等，广泛用于香精、护肤品及药品的生产。用于药品多具有祛痰、止咳、驱
风、发汗、驱虫、
镇痛等作用。由于萜类化合物多从
植物的花、果、叶、茎、根中得到，原料广泛，服用安全，如果能够制取抗
肿瘤药物，可望达到原料易得、副作用小、成本低廉的目的。可是，现有研究结果表明，虽然萜类化合物涵盖面广，种类繁多，但具有抗肿瘤作用的萜类化合物却很少。到目前为止，仅有倍半萜类的倍半萜内酯以及二萜类的芫花酯甲、酯乙以及红豆杉的紫杉醇被证明具有抗肿瘤活性，尚未发现其他萜类化合物具有抗肿瘤作用的报道。
发明内容
[0004] 本发明的目的是提供一种对癌症具有
预防和治疗作用，且对人体的副作用极小或无副作用，患者痛苦轻微或无痛苦，而且原料易得，生产成本低，可显著降低治疗
费用的药物。
[0005] 上述目的是由以下技术方案实现的：提供一种治疗癌症的药品，其特点是：这种药品是单环半倍萜类化合物。
[0006] 所述单环半倍萜类化合物是单环倍半萜烯
酮类化合物C15H22O2，其结构式或其异构体
[0007] 所述单环半倍萜类化合物是单环倍半萜烯酮类化合物C15H22O，其结构式为[0008] 所述单环半倍萜类化合物是单环倍半萜烯类化合物C15H24，其结构式为[0009] 所述单环半倍萜类化合物C15H22O2或C15H22O或C15H24是蒙药山沉香的提取物。
[0010] 所述蒙药山沉香的提取物的提取方法是：山沉香加95％
乙醇回流提取5h，滤过。药渣再用95％乙醇分两次提取，滤过，合并滤液。滤液减压回收乙醇，得富集单环半倍萜类化合物的总提取物。
[0011] 所述总提取物用乙醚提取后再用氯仿萃取，即得到单环半倍萜类化合物C15H24、C15H22O、C15H22O2以及C15H22O2异构体的复合提取物。
[0012] 所述氯仿萃取的复合提取物加160～200目
硅胶拌样，充分干燥，上硅胶柱色谱分离，氯仿-丙酮梯度洗脱，经薄层检查合并为8个流份：流份2拌样上硅胶柱色谱，以60:1的氯仿-丙酮洗脱，得C15H24；流份3以50:1的氯仿-丙酮洗脱，得C15H22O；流份6为以40:1的氯仿-丙酮洗脱，得C15H22O2；流份5以30:1的氯仿-丙酮洗脱，得C15H22O2异构体。
[0013] 所述蒙药山沉香的提取物的提取方法是：山沉香5.0kg，加95％乙醇50L，回流提取5h，滤过。药渣再用95％乙醇30L分两次提取，滤过，合并滤液。滤液减压回收乙醇，得富集单环半倍萜类化合物的总提取物约800g。
[0014] 所述总提取物溶液依次用石油醚、氯仿萃取，氯仿萃取得到单环半倍萜类化合物C15H24、C15H22O、C15H22O2以及C15H22O2异构体的复合提取物30g。
[0015] 所述复合提取物30g加8g硅胶(160～200目)拌样，充分干燥，上硅胶柱色谱分离，氯仿-丙酮梯度洗脱，经薄层检查合并为8个流份。流份2为500mg，再拌样上硅胶柱色谱，以60:1的氯仿-丙酮洗脱，得C15H2460mg；流份3为200mg，以50:1的氯仿-丙酮洗脱，得C15H22O30mg；流份4为150mg，以40:1的氯仿-丙酮洗脱，得C15H22O226mg；流份6为100mg，以30:1的氯仿-丙酮洗脱，得C15H22O2异构体22mg。
[0016] 所述蒙药山沉香的提取物的提取方法是：山沉香5.0kg，加95％乙醇50L，回流提取5h，滤过。药渣再用95％乙醇30L分两次提取，滤过，合并滤液。滤液减压回收乙醇，得总提取物约800g。总提取物溶液依次用石油醚、氯仿萃取，氯仿萃取得提取物30g，加8g硅胶(160～200目)拌样，充分干燥，上硅胶柱色谱分离，氯仿-丙酮梯度洗脱，经薄层检查合并为8个流份。流份2为500mg，再拌样上硅胶柱色谱，以60:1的氯仿-丙酮洗脱，得C15H2460mg；流份3为200mg，以50:1的氯仿-丙酮洗脱，得C15H22O30mg；流份4为150mg，以40:1的氯仿-丙酮洗脱，得C15H22O226mg；流份6为100mg，以30:1的氯仿-丙酮洗脱，得C15H22O2异构体22mg。
[0017] 本发明的有益效果是：大量实验证明，上述药品对多种癌细胞具有明显的抑制和消杀作用，因而对癌症具有确切的治疗效果，且对人体副作用极小，用药过程无痛苦。特别是该化合物可从蒙药山沉香中提取，原料易得，方法简便，成本低廉，可望显著降低治疗成本，对于解除癌症患者的病痛，提高人民的健康
水平和
生活质量，具有重大意义。
附图说明
[0018] 图1是化合物C15H22O2的氢谱；
[0019] 图2是化合物C15H22O2的炭谱；
[0020] 图3是化合物C15H22O2的DEPT谱；
[0021] 图4是化合物C15H22O2的HSQC谱；
[0022] 图5是化合物C15H22O2的HMBC谱；
[0023] 图6是化合物C15H22O2的COSY谱；
[0024] 图7是化合物C15H22O的氢谱；
[0025] 图8是化合物C15H22O的炭谱；
[0026] 图9是化合物C15H22O的DEPT谱；
[0027] 图10是化合物C15H22O的HSQC谱；
[0028] 图11是化合物C15H22O的HMBC谱；
[0029] 图12是化合物C15H22O的COSY谱；
[0030] 图13是化合物C15H24的氢谱；
[0031] 图14是化合物C15H24的炭谱；
[0032] 图15是化合物C15H24的DEPT谱；
[0033] 图16是化合物C15H24的HSQC谱；
[0034] 图17是化合物C15H24的HMBC谱；
[0035] 图18是化合物C15H24的COSY谱；
[0036] 图19是化合物C15H22O2异构体的氢谱；
[0037] 图20是化合物C15H22O2异构体的炭谱；
[0038] 图21是化合物C15H22O2异构体的DEPT谱；
[0039] 图22是化合物C15H22O2异构体的HSQC谱；
[0040] 图23是化合物C15H22O2异构体的HMBC谱；
[0041] 图24是化合物C15H22O2异构体的COSY谱；
[0043] 图26是C15H24对HEC-1B细胞自噬蛋白LC3-II和p62的影响图像；
[0044] 图27是C15H24对HEC-1B细胞自噬蛋白LC3-II和p62的影响统计图；
[0045] 图28是C15H24对HEC-1B细胞的活性影响对比图。
[0046] 实施方式
[0047] 本发明的核心内容是从蒙药山沉香当中提取单环倍半萜类化合物，用于癌症的预防和治疗。山沉香蒙名阿拉善阿嘎如，系木犀科植物山沉香Hems1.var.alashanensis Ma.et S.Q.Zhou去皮的干燥根和枝干，主要分布于我国的内蒙古阿拉善盟贺兰山水源涵养林保护区。其红外图谱见图25。早在几百年前阿拉善地区民间蒙医药人员就发现了山沉香并用于防病治病，多年临床应用表明：山沉香具有镇赫依、清热、止痛、平喘等功效，主治心赫依病、气喘、
失眠、心绞痛等症。2007年以来，在研究山沉香药理作用的过程中，发现了四种单环萜类成分：C15H2460mg；C15H22O30mg；C15H22O226mg；C15H22O2异构体22mg。经大量实验证明：上述成分对子宫癌、
肺癌、胃癌、肝癌、
乳腺癌、
前列腺癌、结肠癌等多种癌细胞均具有抑制和灭杀作用。下面围绕上述内容介绍几种
实施例：
[0048] 第一种实施例：取蒙药山沉香5.0kg，
粉碎成粉末，加95％乙醇50L，回流提取5h，滤过。药渣再用95％乙醇30L分两次提取，滤过，合并滤液。滤液减压回收乙醇，得总提取物约800g。经检测发现：上述总提取物富集多种单环半倍萜类化合物。
[0049] 毒理实验：以山沉香粉剂，按成人常规服用量10g/50kg体重日，即0.2g/kg体重日，计算出总提取物的用量为＝0.2g/kg体重日X800/5000＝0.032g/kg体重日，取其50倍＝1.6g/kg体重日，灌喂小鼠，未找到半数致死量。另按0.032g/kg体重日的剂量饲喂小鼠，连续一周，未发现死亡，再进行解剖仍然未发现脏器异常。加之考虑到山沉香为传统蒙医习用药材，尚未发现明显的毒副作用，其提取物主要为萜类挥发油，是香料及护肤品的常用成分，亦未曾发现毒副作用，由此认为本品无毒副作用。
[0050] 药效实验：2007年以来，
发明人采用组织培养、裸鼠造型、患者自愿试用等方式对子宫癌、肺癌、胃癌、肝癌、乳腺癌、前列腺癌、结肠癌等多种癌症进行了多次试验，证明了山沉香的上述提取物具有抗肿瘤作用。后由内蒙古民族大学蒙药学院对子宫癌、肺癌、胃癌、肝癌进行了药效实验。实验采用市售癌细胞传代株，如人肝癌细胞HB611、人肺癌细胞株H820、人
宫颈癌细胞株HeLa、人胃癌细胞株MGC-803，按照要求制作培养基，每一种试验取培养基30个，随机分三组，每组10个，其中两组为实验组，按照事先探索的药效低限值，向上选用两个
给药量，A组给药0.002g/个，B组给药0.005g/个，C组为不用药的对照组。经过两周观察，按癌细胞的增多、未增、减少三种情况记数。结果如下表。
[0051]
[0052]
[0053]
[0054] 由上述四表计算得平均值如下表：
[0055]
[0056] 由上述结果可见，用药后癌细胞生长状况比不用药明显降低，且随着药量的增加，癌细胞生长状况呈下降趋势，由此可以认为蒙药山沉香上述提取物具有抗肿瘤作用。
[0057] 第二种实施例：把第一种实施例的总提取物800g，依次用石油醚、氯仿萃取，氯仿萃取层得到提取物30g。经检测得知：上述提取物含有大量的单环半倍萜类化合物C15H24、C15H22O、C15H22O2以及C15H22O2异构体。
[0058] 毒理实验：以山沉香粉剂成人常规服用量10g/50kg体重日推得0.2g/kg体重日，则提取物的用量为0.2g/kg体重日X30/5000＝0.0012g/kg体重日，取其50倍＝0.06g/kg体重日，灌喂小鼠，未找到半数致死量。另按0.0012g/kg体重日的剂量饲喂小鼠，连续一周，未发现死亡，再进行解剖仍然未发现脏器异常。加之考虑到山沉香为传统蒙医习用药材，尚未发现明显的毒副作用，其提取物主要为萜类挥发油，是香料及护肤品的常用成分，未曾发现毒副作用，由此认为本品无毒副作用。
[0059] 试验由内蒙古民族大学蒙药学院采用市售癌细胞株，如人肝癌细胞HepG2、人肺癌细胞株A549、人
宫颈癌细胞株HeLa、人胃癌细胞株BGC-823，按照规定方法制作培养基，每一种试验取培养基30个，随机分三组，每组10个，其中两组为实验组，按照事先探索的药效低限值，向上选用两个给药量，A组给药0.001g/个，B组给药0.003g/个，C组为不用药的对照组，且沿用第一种实施例的试验数据。经过两周观察，按癌细胞的增多、未增、减少三种情况记数。结果如下表。
[0060]
[0061]
[0062] 由上述四表计算得平均值如下表：
[0063]
[0064] 上述结果可见，用药后癌细胞生长状况比不用药明显降低，且随着药量的增加，癌细胞生长状况呈下降趋势，由此可以认为蒙药山沉香上述提取物具有抗肿瘤作用。
[0065] 2011年以来，多名癌症患者慕名要求试用上述山沉香提取物，从中选择年龄在40—60岁之间，病程为中期及中期偏重患者32例，其中乳腺癌患者12人，宫颈癌患者5人，肺癌患者3人，肝癌患者5人，胃癌患者6人，均通过口服方式用药。试用1—2个月后，经医院诊断明显好转患者有：乳腺癌患者10人，宫颈癌患者3人，肺癌患者2人，肝癌患者2人，胃癌患者5人，其余患者自述感觉减轻，尚无无效和恶化的病例。
[0066] 第三种实施例：山沉香5.0kg，加95％乙醇50L，回流提取5h，滤过。药渣再用95％乙醇30L分两次提取，滤过，合并滤液。滤液减压回收乙醇，得总提取物约800g。总提取物溶液依次用石油醚、氯仿萃取，氯仿萃取得复合提取物30g，把30g复合提取物加
8g硅胶(160～200目)拌样，充分干燥，上硅胶柱色谱分离，氯仿-丙酮梯度洗脱，经薄层检查合并为8个流份。其中流份2为500mg，再拌样上硅胶柱色谱，以60:1的氯仿-丙酮洗脱，得C15H24(其图谱见附图13—18)60mg；流份3为200mg，以50:1的氯仿-丙酮洗脱，得C15H22O(其图谱见附图7—12)30mg；流份4为150mg，以40:1的氯仿-丙酮洗脱，得C15H22O2(其图谱见附图1—6)26mg；流份6为100mg，以30:1的氯仿-丙酮洗脱，得C15H22O2异构体(其图谱见附图19—24)22mg。
[0067] 毒理实验：分别把上述四种化合物以0.5g/kg体重日，灌喂小鼠，未找到半数致死量。又以500ug/kg体重日的剂量饲喂及注射小鼠，连续一周，未发现死亡，再进行解剖仍然未发现脏器异常。加之考虑到山沉香为传统蒙医习用药材，未见毒副作用。所提取的物质为单环倍半萜类物质，是香料及护肤品的常用成分，未发现毒副作用，由此认为本品无毒副作用，且可以用于针剂等剂型。
[0068] 药效实验：委托内蒙古民族大学蒙药学院、海军总医院、中国农业大学等单位，对上述化合物的抗肿瘤作用进行了药效学实验。其中，内蒙古民族大学蒙药学院对子宫癌、肺癌、胃癌、肝癌进行实验情况如下：
[0069] 试验采用市售癌细胞株，如人肝癌细胞HepG2、人肺癌细胞株A549、人宫颈癌细胞株HeLa、人胃癌细胞株SGC-790，按照样品的要求制作培养基，每一种试验取培养基30个，随机分三组，每组10个，其中两组为实验组，按照事先探索的药效低限值，向上选用两个给药量，A组给药0.001g/个，B组给药0.003g/个，C组为不用药的对照组(沿用前实施例的数据)。经过两周观察，按癌细胞的增多、未增、减少三种情况记数。结果如下表：
[0070] (1)C15H24实验结果
[0071]
[0072]
[0073]
[0074] 由上述四表计算得平均值如下表：
[0075]
[0076] (2)C15H22O实验结果
[0077]
[0078]
[0079] 由上述四表计算得平均值如下表：
[0080]
[0081] (3)C15H22O2实验结果
[0082]
[0083]
[0084] 由上述四表计算得平均值如下表：
[0085]
[0086] (4)C15H22O2异构体实验结果
[0087]
[0088]
[0089] 由上述四表计算得平均值如下表：
[0090]
[0091] 上述结果可见，用药后癌细胞生长状况比不用药明显降低，且随着药量的增加，癌细胞生长状况呈下降趋势，由此可以认为蒙药山沉香上述提取物具有抗肿瘤作用。
[0092] 第四种实施例：山沉香5.0kg，加95％乙醇50L，回流提取5h，滤过。药渣再用95％乙醇30L分两次提取，滤过，合并滤液。滤液减压回收乙醇，得总提取物约800g。总提取物溶液依次用石油醚、氯仿萃取，氯仿萃取得提取物30g，加8g硅胶(160～200目)拌样，充分干燥，上硅胶柱色谱分离，氯仿-丙酮梯度洗脱，经薄层检查合并为8个流份。流份2为500mg，再拌样上硅胶柱色谱，以60:1的氯仿-丙酮洗脱，得C15H2460mg；流份3为200mg，以50:1的氯仿-丙酮洗脱，得C15H22O30mg；流份4为150mg，以40:1的氯仿-丙酮洗脱，得C15H22O226mg；流份6为100mg，以30:1的氯仿-丙酮洗脱，得C15H22O2异构体22mg。
[0093] 本例是对前述实施例的综合，提供了一种可以从蒙药山沉香依次提取四种化合物的方法。其试验即为前述实施例各个实验的综合。当然，上述化合物的提取方法很多，不限于本例一种。
[0094] 2013年以来，把上述化合物的样品送国家有关部
门进行检测，检测结果进一步证明了上述化合物具有突出的抗肿瘤作用。下面仅例举中国人民解放军海军总医院与中国农业大学合作，以送检化合物C15H24对人子宫内膜癌细胞(HEC-1B)进行实验的结论：
[0095] 1.
细胞增殖实验：通过形态学观察，低浓度蒙药(浓度＜1μg/ml)对HEC-1B细胞的增殖未见显著影响，当浓度≥1μg/ml时，HEC-1B细胞的生长受到抑制，且随着浓度增加其抑制效果不断增强。
[0096] 2.细胞自噬实验：以不同浓度的药品对样本细胞进行处理，观察自噬蛋白的表达。由图26图27可见：低浓度(<2μg/ml)蒙药处理对自噬标记蛋白LC3-ii的表达未见影响。随着浓度增加(浓度从2至20μg/ml)，细胞中自噬marker蛋白LC3-ii的上调可以显著引起，之后(浓度>20μg/ml)LC3-ii蛋白表达下降。根据细胞形态学观测的结果，认为浓度>20μg/ml可能引起自噬性细胞死亡，因此LC3-ii蛋白表达降低。
[0097] 3.细胞凋亡实验：用不同浓度(con,0.1,1,2,5,10,20,40,60and 80ug/ml)的药品处理HEC-1B细胞24小时。图28中A为对照组；B为0.1ug/ml处理组；C为1.0ug/ml处理组；D为2.0ug/ml处理组；E为5.0ug/ml处理组；F为10.0ug/ml处理组；G为20.0ug/ml处理组，H为80.0ug/ml处理组。由图可见：随着蒙药浓度的增加，HEC-1B细胞会发生凋亡，其形态从正常贴壁的铺路石状改变圆形，并逐渐脱离培养皿底部。在浓度为5μg/ml时，细胞明显变圆，但仍然粘附在培养皿底部；随着浓度增加，细胞变圆的比例逐步增加。在高浓度蒙药处理(浓度≥20μg/ml)下，培养皿中所有细胞均变为圆，且脱离底壁。结果表明，在体外培养过程中，5μg/ml以上浓度蒙药处理可以显著诱导HEC-1B细胞凋亡。
