一种宝华鹅耳枥ISSR-PCR分子标记体系
专利汇可以提供一种宝华鹅耳枥ISSR-PCR分子标记体系专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 属于遗传 生物 学技术领域，具体涉及宝华鹅 耳 枥ISSR-PCR的分子标记体系。本发明提供如下优化的ISSR-PCR反应体系：25µl反应体系中含有1*PCR缓冲液，2.5 mM的Mg2+，0.25 mM dNTPs，引物0.6µM，DNA模板50 ng，Taq酶1.2 U；上述反应体系的扩增程序：95℃预变性5 min，然后95℃变性30 sec，56℃ 退火 45 sec，72℃延伸1 min，40个循环后72℃再延伸7 min，琼脂糖凝胶 电泳 检测。本发明提供的宝华鹅耳枥ISSR-PCR体系 稳定性 好，产物条带清晰度高，多态性丰富。，下面是一种宝华鹅耳枥ISSR-PCR分子标记体系专利的具体信息内容。
1.一种宝华鹅耳枥ISSR-PCR分子标记体系，其特征在于，包括以下步骤：
1）提取宝华鹅耳枥的基因组DNA；
2）以宝华鹅耳枥基因组DNA 为模板进行ISSR-PCR扩增。
2. 一种宝华鹅耳枥ISSR-PCR分子标记体系，其特征在于，ISSR-PCR反应体系25 µl中含有1*PCR缓冲液，2.5 mM的Mg2+，0.25 mM dNTPs，引物0.6 µM，DNA模板50 ng，Taq酶1.2 U。
3.根据权利要求2所述的ISSR-PCR反应体系，其特征在于，所述的引物选自No1-10中的任一条。
4. 根据权利要求2所述的ISSR-PCR反应体系，其特征在于，反应混合液的PCR扩增程序如下：95℃预变性5 min，然后95℃变性30 sec，56℃退火45 sec，72℃延伸1 min，72℃再延伸7 min。
5.根据权利要求4所述的ISSR-PCR反应体系，其特征在于，所述退火温度根据具体选择的引物来确定。
6.根据权利要求4所述的ISSR-PCR反应体系，其特征在于，PCR扩增的循环数为40。
7.根据权利要求1-6所述的ISSR-PCR分子标记体系，其特征在于可应用于宝华鹅耳枥遗传多样性评价和分子标记辅助育种。
一种宝华鹅耳枥ISSR-PCR分子标记体系
技术领域
背景技术
发明内容
2）以宝华鹅耳枥基因组DNA 为模板进行ISSR-PCR扩增。
No2 CACACACACACACACAG
No3 TGTGTGTGTGTGTGTGRC
No4 TGTGTGTGTGTGTGTGRA
No5 CTCCTCCTCCTCCTCCTC
No6 CCCTCCCTCCCTCCCT
No7 GGGTGGGGTGGGGTG
No8 TAGATCTGATATCTGAATTCCC
No9 AGAGTTGGTAGCTCTTGATC
No10 TCTCTCTCTCTCTCTCG
5. 本发明的PCR反应的退火温度由对应的引物确定，具体见表2所示。
具体实施方式
（2）将充分研磨后的粉末按照植物基因组DNA提取试剂盒（天根生化科技（北京）有限公司）的操作说明进行宝华鹅耳枥基因组DNA的提取；
（3）TE洗脱的基因组DNA采用NanoDrop检测DNA的浓度和质量，同时进行1%琼脂糖凝胶电泳检测，提取的宝华鹅耳枥株系基因组DNA结果见图1。
5’ AGAGAGAGAGAGA GAGYC 3’[Y=（C，T）], 2次重复，扩增程序：95℃预变性5 min，然后95℃变性30 sec，56℃退火45 sec，72℃延伸1 min，40个循环，72℃再延伸7 min，4℃保存。
2+
合，即含有1*PCR缓冲液，2.5 mM的Mg ，0.25 mM dNTPs，引物0.6 µM，DNA模板50 ng，Taq酶
1.2 U。
No1 AGAGAGAGAGAGAGAGYC 18 50.5 50.3
No2 CACACACACACACACAG 17 50.9 50.3
No3 TGTGTGTGTGTGTGTGRC 18 52.5-55.5 55.4
No4 TGTGTGTGTGTGTGTGRA 18 51.5-53.5 55.4
No5 CTCCTCCTCCTCCTCCTC 18 53.9 55.4
No6 CCCTCCCTCCCTCCCT 16 55.5 55.4
No7 GGGTGGGGTGGGGTG 15 56.2 55.4
No8 TAGATCTGATATCTGAATTCCC 22 48.7 50.3
No9 AGAGTTGGTAGCTCTTGATC 20 51.2 50.3
No10 TCTCTCTCTCTCTCTCG 17 47.6 50.3
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