2-取代吡唑氨基-4-取代氨基-5-嘧啶甲酰胺类化合物、组合
物及其应用
技术领域
[0001] 本
发明属于化学医药领域，具体涉及一类具有JAK激酶抑制活性的化合物或其药学可接受的盐、异构体、
溶剂合物、结晶或前药，以及含有这些化合物的药物组合物和这些化合物或组合物在药物制备中的应用。
背景技术
[0002] JAK激酶(Janus kinase)和其下游的效应器、
信号转导及转录激活蛋白形成了重要的细胞因子信号传导途径——JAK-STAT通路。研究发现JAK-STAT通路可由多种细胞因子、生长因子以及受体激活,参与
细胞增殖、分化、凋亡、血管生成以及免疫调节等过程。JAK激酶是JAK-STAT信号通路中的关键激酶,该酶被发现二十多年后，第一种JAK激酶
抑制剂(tofacitinib)于2012年才被批准用于类
风湿性关节炎的
治疗[Norman P.，Selective JAK inhibitors in development for rheumatoid arthritis，Expert Opin Investig Drugs,2014,23:1067-1077]。
[0003] 在
哺乳动物体内,JAK激酶家族中的三成员:JAK1、JAK2、JAK3和TYK2由超过1100个氨基酸组成,相对分子
质量可达120000-140000,同源性达40％-70％,这些JAK激酶家族成员从C端到N端依次可分为7个同源结构域(JH):JH1为激酶区,在JAK家族中高度保守；JH2为激酶样区或“假”激酶区,该假激酶结构域是JAK蛋白区别于其他酪氨酸蛋白的独特属性,该激酶区虽不具有催化活性,但对JH1的活性起调节作用,该结构域内的突变常可导致JAK激酶活性的增强或者减弱,并进而导致某些
疾病的发生；JH3-JH4为SH2结构域(Src homology 2domain),该结构域含有约100个氨基酸残基,其可以特异性地识别和结合配基上磷
酸化的酪氨酸残基；JH5-JH7为FERM结构域,该结构域保守,主要调节JAK与受体的结合。JAK3作为JAK激酶家族成员之一,在结构上,同样含有上述的激酶区,其不同结构域内特定氨基酸的突变也会造成其激酶活性的改变。
[0004] JAK-STAT信号通路是多种细胞生长、活化、分化、凋亡及其功能发挥过程中重要的一条细胞内信号转导途径。STAT是一类能与靶基因调控区DNA结合的胞质蛋白,是JAK的下游底物。STAT家族中包括STAT1、STAT2、STAT3、STAT4、STAT5A、STAT5B及STAT6等7个成员。JAKs与STATs之间的相互作用在细胞因子受体信号通路中起着重要作用[O'Sullivan LA et al.，Cytokine receptor signaling through the JAK-Stat-Socs pathway in disease，Mol Immunol,2007,44:2497-2506]。当细胞表面的细胞因子受体与其各自的细胞因子配体结合后引起受体分子的二聚化,使得与受体偶联的JAK激酶相互靠近并通过交互的酪氨酸
磷酸化作用而活化。JAK-STAT信号通路是一条由多种细胞因子受体刺激的信号转导通路,JAK激酶介导细胞内大多数细胞因子的信号传导,如白介素(IL)类、干扰素(IFN)类、促红细胞生成素(EPO)、粒细胞和巨噬细胞集落刺激因子(GMCSF)、促生长素(GH)、催乳素(PRL)、促血小板生成素(TPO)、血小板衍生因子(PDGF)以及表皮细胞生长因子(EGF)等,而且不同受体可激活不同亚型的JAK激酶,从而表现差异化的
生物学功能[Pesu M.et al.,Therapeutic targeting of Janus kinases,Immunol Rev,2008,223:132-142]。
[0005] JAK1和JAK2在人体各组织细胞中均有表达,JAK3主要表达于各造血组织细胞中,主要存在于骨髓细胞、胸腺细胞、NK细胞及活化的B淋巴细胞、T淋巴细胞中。JAK1和JAK2等缺失会造成人体致死性损伤，JAK3缺失则可避免损伤其他组织细胞的毒性不良反应[Yamaoka K.,et al.,JAK3negatively regulates dendritic-cell cytokine production and survival,Blood,2005,106:3227-3233]。基于JAK激酶家族中各亚型的功能特点和特殊的组织分布，JAK3已成为治疗
自身免疫性疾病的热
门靶标,越来越多临床研究也将类风湿性关节炎的治疗聚焦于阻断JAK3信号转导通路上。2012年,选择性JAK3抑制剂Tofacitinib通过了临床试验,被批准用于类风湿性关节炎的治疗。
[0006] Tofacitinib(CP690550)是Pfizer公司研发的一种吡咯并嘧啶类选择性JAK3激酶抑制剂,对JAK3的抑制活性(IC50＝1nmol/L)是JAK2(IC50＝20nmol/L)的20倍及JAK1(IC50＝112nmol/L)的100倍。研究Tofacitinib的立体化学结构发现其
手性结构决定其能够特异性地结合到JAK3分子上,从而抑制JAK3磷酸化,进一步导致STAT磷酸化受阻,造成下游炎性细胞因子合成受到抑制。Tofacitinib在临床研究中表现出良好的临床疗效,在类风湿性关节炎临床试验研究中,5mg或10mg Tofacitinib计量组与等量安慰剂组对比呈现出显著的统计学差异,但临床试验研究中发现使用Tofacitinib与严重感染风险增高相关,其长期安全性有待进一步研究。
[0007] JAK-STAT信号通路在细胞分化及增殖过程中起到了重要的作用,JAK活性的改变也将导致该通路信号传递的改变,进而影响细胞功能。基于JAK激酶在JAK-STAT信号传递中的关键作用,以及JAK3激酶特定的组织细胞分布,使得JAK3成为类风湿性关节炎等疾病良好的治疗靶点。
[0008] 目前JAK3抑制剂主要用于中重度类风湿性关节炎患者的治疗,该类药物在治疗中表现出良好的治疗效果和较好的安全性,但其长期安全性仍有待进一步提高。Tofacitinib临床研究过程中发现,使用该药物后会导致一定的不良反应,包括感染、结核、
肿瘤和肝损伤等,所以提高JAK3抑制剂的药效、减少毒
副作用是该研究领域亟待解决的关键问题。
[0009] JAK激酶几个亚型的ATP结合位点同源性较高,结构差异性较小,这是导致JAK抑制剂选择性不高的重要原因。目前已公开的一系列JAK激酶抑制剂在疗效、选择性和安全性方面还有改进的空间，仍需要开发出药效更佳和安全性更好的JAK抑制剂。尽管高选择性JAK抑制剂是目前本领域的研究重点，但鉴于JAK激酶家族每一个成员都与JAK-STAT信号传递密切相关，泛JAK抑制剂将会显著提高药效，大大降低用药剂量，从而达到控制毒副作用的目的。另外，药效的显著提高将有助于开发经
皮肤给药的抗炎类药物。而此类药物的研发将为
银屑病、白癜风、皮炎、斑秃、类风湿性关节炎、结肠炎、多重硬化、系统性红斑狼疮、克罗恩病等自身免疫疾病以及白血病、淋巴瘤、多发性骨髓瘤等癌症的治疗提供新的途径。本发明的化合物作为JAK激酶抑制剂表现出极佳的生物活性。
发明内容
[0010] 本发明提供了一种2-(1-取代吡唑-4-)氨基-4-取代氨基-5-嘧啶甲酰胺类化合物，以及其用作制备治疗或
预防由酪氨酸激酶(例如JAK1、JAK2、JAK3、TYK2)或其变种引起的疾病的药物的用途。
[0011] 本发明提供了一种化合物或其异构体、
溶剂化物或其药学上可接受的盐，或者以其有效的多晶型的药物组合物的形式提供，该化合物具有结构式(I)：
[0012]
[0013] 其中，
[0014] R1为 n1为0-1，n2为0-1，n3为0-5，
[0015] L1为 R4和/或R5为H、C1-C3直链烷基；
[0016] R2为 n4为0-3，n5为0-1，n6为0-5，
[0017] L2为 R7和/或R8为H、C1-C3直链烷基。
[0018] 化合物式(I)中取代基R3为：
[0019] a)H，羟基，氰基，
[0020] b)C1-C5直链或支链烷基，
[0021] c)C3-C8环烷基，更优选为C3-C7环烷基，
[0023] e)C1-C5直链或支链烷硫基，
[0024] f)5-7元杂环，优选地所述5-7元杂环含有1-2个杂
原子，其杂原子选自O和/或N和/或S,当杂原子为N时，N上连接H或C1-C4烷基、C1-C3酰基，优选乙酰基、三氟乙酰基、丙酰基、N,N-二甲酰基，当杂原子为S时，S上连接0-2个氧原子，
[0025] g)取代或非取代的五元芳基或者杂芳基，优选地，所述取代或非取代的五元芳基或者杂芳基的结构式为 其中：J1和/或J2和/或J3和/或J4为C、N、S、O；R9为C1-C3直链或支链烷基，
[0026] 或者所述取代或非取代的五元芳基或者杂芳基的结构式为 其中：
[0027] J1、J2、J3、J4各自独立地为C、N、S、O，
[0028] R20、R21各自独立地为C1-C3直链或支链烷基，
[0029] h)取代或非取代的六元芳基或者杂芳基，
[0030] 优选地，所述取代或非取代的六元芳基或者杂芳基的结构式为 其中：
[0031] Q1、Q2、Q3、Q4、Q5为N或C；
[0032] R10和/或R11和/或R12为:
[0033] 1)-F、-Cl、-Br、-CF3、-OCF3、氰基；
[0034] 2)-NR'R”，R'、R”为H、C1-C3的烷基；
[0035] 3)C1-C3烷基、C2-C5炔基、C3-C5环烷基；
[0036] 4)SO2R13，其中R13为H、C1-C3烷基；
[0037] 5) 其中q为0-2，M为O、S，R14为H，C1-C5直链
[0038] 或支链烷基；
[0039] 6) 其中R15、R16为直链烷基，
[0040] 或者，所述取代或非取代的六元芳基或者杂芳基的结构式为 其中：
[0041] Q1、Q2、Q3、Q4、Q5为N或C；
[0042] R17、R18各自独立地为：
[0043] a)-H，
[0044] b)-F、-Cl、-Br、-CF3、-OCF3、氰基，
[0045] c)-NR'R”，R'、R”为H、C1-C3的烷基，
[0046] d)C1-C3烷基、C2-C5炔基、C2-C5烯基、C3-C5环烷基，
[0047] e)SO2R13，其中R13为H、C1-C3烷基，
[0048] f) 其中q为0-2，M为O、S，R14为H，C1-C5直链或支链烷基，
[0049] g) 其中R15、R16为C1-C3的直链烷基，
[0050] h)-(CH2)t-R19，t为1-2，R19为C3-C5环烷基；
[0051] i)含0-3个杂原子六元芳环并五元或六元环或含1-3个杂原子五元杂芳环并五元或六元环，优选自：
[0052] 式(I)中取代基R6为：
[0053] a)H、羟基，
[0054] b)-NR'R”，R'、R”为H、C1-C3的烷基，
[0055] c)C1-C5直链或支链烷基，
[0056] d)C3-C8环烷基，
[0057] e)C1-C5直链或支链烷氧基，
[0058] f)C1-C5直链或支链烷硫基，
[0059] g)杂环基，优选地，所述杂环基为五元或六元含氧和/或氮的杂环基，如[0060]
[0061] 本发明提供了一种化合物或其异构体、溶剂化物或其药学上可接受的盐，该化合物具有结构式(I)：
[0062]
[0063] 其中，
[0064] R1为 n1为0-2，n2为0-1，n3为0-5，
[0065] L1为 R4和/或R5为H、C1-C3直链烷基；
[0066] R2为 n4为0-3，n5为0-1，n6为0-5，
[0067] L2为 R7和/或R8为H、C1-C3直链烷基；
[0068] R3为R22取代的C1-C3烷氧基或者R22取代的C1-C3烷硫基，R22为羟基、C1-C3烷氧基、C1-C3烷硫基、-NR'R”、羟基取代的C1-C3烷氧基、氨基取代的C1-C3烷氧基、羟基取代的C1-C3烷硫基、氨基取代的C1-C3烷硫基，其中R'、R”为H、C1-C3的烷基；
[0069] R6为a)H、羟基，
[0070] b)-NR'R”，R'、R”为H、C1-C3的烷基，
[0071] c)C1-C5直链或支链烷基，
[0072] d)C3-C8环烷基，
[0073] e)C1-C5直链或支链烷氧基，
[0074] f)C1-C5直链或支链烷硫基，或者
[0075] g)
[0076] 很清楚，结构式(I)的化合物、异构体、结晶或前药及其可药用盐可以存在溶剂化形式和非溶剂化形式。例如溶剂化形式可以是
水溶形式。本发明包括所有这些溶剂化的和未溶剂化的形式。
[0077] 本发明的一个方面是一种药物组合物，其包含结构式(I)的化合物。这种组合物可施用于银屑病、白癜风、皮炎、斑秃、类风湿性关节炎、结肠炎、多重硬化、系统性红斑狼疮、克罗恩病等自身免疫疾病以及白血病、淋巴瘤、多发性骨髓瘤等癌症，包括那些经过Tofacitinib、Peficitinib、Decernotinib或其他激酶抑制剂治疗有抗药性的类自身免疫疾病、癌症等。
[0078] 本发明的又一目的是在于提供一种用于治疗自身免疫疾病和癌症的方法，其包括给受试者施用含本发明的化合物的组合物的
治疗有效量的一种方法。可被这样治疗的自身免疫疾病、癌症在本文别处会注明，包括具有对Tofacitinib、Peficitinib、Roxolitinib、Decernotinib或其他激酶抑制剂治疗有抗药性的自身免疫疾病、癌症等。
[0079] 在
癌症治疗中也可以组合使用一个或多个其他疗法，包括手术、放疗(如γ-射线、
中子束放射疗法、
电子束
放射治疗、质子治疗、近距离放射治疗和全身
放射性同位素等)、内分泌疗法、生物应答调节剂(例如，干扰素、白介素和肿瘤
坏死因子(TNF))、
热疗、
冷冻疗法、减弱任何不良影响(例如，止吐剂)以及其他的治疗药物。
[0080] 本发明还包括本发明的化合物或其药学上可接受的衍生物的使用，制造用于治疗
眼底疾病、干眼症、银屑病、类风湿性关节炎、皮疹、湿疹、斑秃、动脉粥样化、
肺纤维化、肝纤维化、骨髓纤维化、性肠炎等自身免疫疾病以及肿瘤等疾病的药剂，包括治疗那些如本文在别处所指出的对一种或多种其它治疗剂产生耐药的疾病。本发明的化合物也可用于在药物中通过抑制一种或多种激酶(例如JAK1、JAK2、JAK3、TYK2)来减轻或预防疾病。
[0081] 本发明还提供了制备相应化合物的方法，具体可通过下述的方法制备。系列(I)化合物的合成路线如下所示：
[0082]
[0083]
试剂及反应条件:(a)DIEA,THF；(b)s-BuOH，TFA.
具体实施方式
[0084] 中间体的合成方法如下：
[0085] 中间体1 1-(2-甲氧基乙基)-1H-吡唑-4-胺的制备：
[0086]
[0087] 步骤1)：1-(2-甲氧基乙基)-4-硝基-1H-吡唑的制备：
[0088] 将4-硝基-1H-吡唑(5g，44.21mmol)溶于DMF(20mL)，加入K2CO3(9.1g，65.85mmol)和1-溴-2-甲氧基乙烷(7.4g，53.24mmol)，50℃反应16小时。反应液倒入
冰水中，乙酸乙酯萃取，无水
硫酸钠干燥，过滤蒸干柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝3：1)，得到棕色油状物5g，产率66％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.85(s,1H),8.27(s,1H),4.35(t,J＝5.1Hz,2H),3.73(t,J＝5.2Hz,2H),3.24(s,3H).LCMS:m/z＝172.1(M+H)+.
[0089]
[0090] 步骤2)：1-(2-甲氧基乙基)-1H-吡唑-4-胺的制备：
[0091] 将1-(2-甲氧基乙基)-4-硝基-1H-吡唑(5g，29.21mmol)溶于
乙醇(25mL)和乙酸乙酯(25mL)中，加入雷尼镍(500mg)，氢气环境下反应5小时。
硅藻土过滤，滤液蒸干，得棕色固体3.6g，产率87％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.01(s,1H),6.90(s,1H),4.04(t,J＝5.4Hz,2H),3.89–3.63(m,2H),3.58(t,J＝5.4Hz,2H),3.20(s,3H).LCMS:m/z＝142.1(M+H)+.[0092] 中间体2 1-[2-(甲硫基)乙基]-1H-吡唑-4-胺的制备：
[0093]
[0094] 步骤1)：1-[2-(甲硫基)乙基]-4-硝基-1H-吡唑的制备：
[0095] 将4-硝基-1H-吡唑(400mg，3.54mmol)溶于无水四氢呋喃(10mL)中，加入2-(甲硫基)-1-乙醇(424mg，4.60mmol)、三苯基膦(1.4g，5.32mmol)，0℃氩气保护条件下，滴加DIAD(1.13g，5.60mmol)，25℃反应4小时。反应液饱和
氯化铵水溶液淬灭，乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥，过滤蒸干柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝4：1)，得到黄色油状物180mg，产率54％。LCMS:m/z＝188.0(M+H)+.
[0096] 步骤2)：1-[2-(甲硫基)乙基]-1H-吡唑-4-胺的制备：
[0097] 将1-[2-(甲硫基)乙基]-4-硝基-1H-吡唑(300mg，1.60mmol)溶于乙醇(2mL)和乙酸乙酯(2mL)的混合溶液中，加入雷尼镍(30mg)，氢气环境下反应5小时。
硅藻土过滤，滤液蒸干，得棕色油状物210mg，产率83％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.06(s,1H),6.91(s,1H),4.09(t,J＝6.9Hz,2H),3.81(s,2H),2.79(t,J＝6.9Hz,2H),1.99(s,3H).LCMS:m/z＝158.1(M+H)+.
[0098] 表1中间体3-22的合成(参考中间体1或2的合成方法)
[0099]
[0100]
[0101]
[0102] 中间体23 1-环丙基-1H-吡唑-4-胺的制备：
[0103]
[0104] 步骤1)：1-环丙基-4-硝基-1H-吡唑的制备：
[0105] 将4-硝基-1H-吡唑(200mg，1.77mmol)溶于无水二氯甲烷(15mL)中，加入环丙基
硼酸(320mg，3.72mmol)、
醋酸铜(326mg，1.79mmol)、吡啶(144mg，1.82mmol)、
碳酸钠(432mg，4.08mmol)，70℃氩气保护条件下，反应4小时。反应液浓缩柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝4：
1)，得到黄色油状物110mg，产率41％。LCMS:m/z＝154.1(M+H)+.
[0106]
[0107] 步骤2)：1-环丙基-1H-吡唑-4-胺的制备：将1-环丙基-4-硝基-1H-吡唑(110mg，0.72mmol)溶于乙醇(2mL)和乙酸乙酯(2mL)的混合溶液中，加入雷尼镍(15mg)，氢气环境下反应3小时。硅藻土过滤，滤液蒸干，得棕色油状物90mg，产率90％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.02(s,1H),6.86(s,1H),3.89–3.61(m,2H),3.50–3.45(m,1H),0.91–0.73(m,4H).LCMS:
m/z＝124.1(M+H)+.
[0108] 中间体24 1-(6-甲氧基己基)-1H-吡唑-4-胺的制备：
[0109]
[0110] 步骤1)：1-(6-溴己烷)-4-硝基-1H-吡唑的制备：
[0111] 将4-硝基-1H-吡唑(200mg，1.77mmol)溶于DMF(8mL)，加入K2CO3(732mg，5.30mmol)，1,6-二溴己烷(864mg，3.54mmol)，80℃反应3小时。反应液倒入冰水中，乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥，过滤蒸干柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝5：1)，得到无色油状物
300mg，产率61％。LCMS:m/z＝276.0(M+H)+.
[0112]
[0113] 步骤2)：1-(6-甲氧基己基)-4-硝基-1H-吡唑的制备：
[0114] 将1-(6-溴己烷)-4-硝基-1H-吡唑(300mg，1.09mmol)溶于甲醇钠的甲醇溶液(33％，7mL)中，25℃反应16小时。反应液饱和食盐水淬灭，乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥，过滤蒸干反相柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝5：1)，得无色油230mg，产率93％。LCMS:m/z＝228.1(M+H)+.
[0115]
[0116] 步骤3)：1-(6-甲氧基己基)-1H-吡唑-4-胺的制备：
[0117] 将1-(6-甲氧基己基)-4-硝基-1H-吡唑(230mg，1.01mmol)溶于乙醇(2mL)和乙酸乙酯(2mL)的混合溶液中，加入雷尼镍(25mg)，氢气环境下反应3小时。硅藻土过滤，滤液蒸干，得棕色油状物190mg，产率95％。LCMS:m/z＝198.2(M+H)+.
[0118] 中间体25 4-甲基-1-戊胺的制备：
[0119]
[0120] 将3-甲基戊腈(400mg，4.11mmol)溶于无水四氢呋喃(5mL)中，0℃氩气保护条件下，加入氢化
铝锂(235mg，6.18mmol)，自然升至25℃搅拌16小时。降至0℃，依次加入0.4mL水，0.4mL15％氢氧化钠溶液，1.2mL水。搅拌15分钟后，过滤，滤液低温蒸干，得到黄色油状物300mg，粗产率72％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ2.85(t,J＝7.6Hz,2H),1.60–1.46(m,3H),1.14–1.08(m,2H),0.95(d,6H).LCMS:m/z＝102.1(M+H)+.
[0121] 表2中间体26-28的合成(参考中间体29的合成)
[0122]
[0123] 中间体29[2-(甲氧甲基)苯基]甲胺的制备：
[0124]
[0125] 步骤1)：2-(甲氧甲基)苯甲腈的制备：
[0126] 将2-(氯甲基)苯甲腈(500mg，3.30mmol)溶于甲醇钠的甲醇溶液(33％，5mL)中，25℃反应4小时，饱和氯化铵水溶液淬灭，乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥，过滤蒸干得淡黄色油状物450mg，粗产率93％。LCMS:m/z＝148.1(M+H)+.
[0127]
[0128] 步骤2)：[2-(甲氧甲基)苯基]甲胺的制备：
[0129] 将2-(甲氧甲基)苯甲腈(450mg，3.06mmol)溶于无水四氢呋喃(15mL)中，0℃氩气保护条件下加入氢化铝锂(354mg，9.32mmol)，10分钟后升至25℃反应16小时。0℃下依次加入0.4mL水，0.4mL15％氢氧化钠溶液和1.2mL水，搅拌10分钟后，过滤，滤液蒸干，得到棕色+油状物360mg，粗产率78％。LCMS:m/z＝152.1(M+H) .
[0130] 中间体30(2-甲基吡啶-3-基)甲胺的制备：
[0131]
[0132] 将2-甲基烟酰胺(200mg，1.47mmol)溶于无水四氢呋喃(5mL)中，0℃氩气条件下，滴加硼烷的四氢呋喃溶液(1M，7.4mL，7.4mmol)，反应30分钟后，升至60℃反应8小时。饱和氯化铵水溶液淬灭，乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥，过滤蒸干得无色油状物200mg，粗产物直接用于下一步反应。LCMS:m/z＝123.1(M+H)+.
[0133] 中间体31[3-(二甲氨基甲酰基)苄基]氨基
盐酸盐的制备：
[0134]
[0135] 将3-(((叔丁氧羰基)氨基)甲基)苯
甲酸(400mg，1.59mmol)溶于四氢呋喃(5mL)中，加入羰基二咪唑(337mg，2.39mmol)，搅拌3小时后，滴加二甲胺的四氢呋喃溶液(2M，3.2mL，6.4mmol)，封管60℃反应16小时。反应液浓缩，柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝1：1)。向得到的白色固体中，加入氯化氢的二氧六环溶液(4M，4mL)，25℃搅拌2小时后，蒸干反应液，得到白色固体263mg，产率77％。LCMS:m/z＝179.1(M+H)+.
实施例[0136] 实施例1 4-苄基氨基-2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-5-甲酰胺的制备：
[0137]
[0138] 步骤1)：2-氯-4-(苄基氨基)嘧啶-5-甲酰胺的制备：
[0139] 将2,4-二氯嘧啶-5-甲酰胺(2g，10.42mmol)溶于四氢呋喃(20mL)中，分别加入苄胺(1.12g，10.45mmol)和二异丙基乙基胺(4g，31.01mmol)，25℃反应2小时。加入饱和食盐水(200mL)，搅拌15分钟后，过滤，
滤饼用石油醚洗涤，得白色固体2.1g，产率77％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6+DCl/D2O)δ8.84(s,1H),7.48–7.33(m,5H),4.82(s,2H).LCMS:m/z＝263.1(M+H)+.
[0140]
[0141] 步骤2)：4-苄基氨基-2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-5-甲酰胺的制备：
[0142] 将2-氯-4-(苄基氨基)嘧啶-5-甲酰胺(100mg，0.38mmol)溶于仲丁醇(3mL)中，加入1-甲基-1H-吡唑-4-胺(40mg，0.41mmol)和三氟乙酸(0.1mL)，100℃封管反应2小时。反应液浓缩，过滤，固体用乙腈洗涤，得到白色固体50mg，产率41％。1H NMR(300MHz,DMSO-d6+DCl/D2O)δ8.75(s,1H),7.73(s,1H),7.55(s,1H),7.42–7.36(m,5H),4.79(s,2H),3.79(s,3H).LCMS:m/z＝324.1(M+H)+.
[0143] 实施例2 4-[(2-甲氧基苄基)氨基]-2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-5-甲酰胺的制备：
[0144]
[0145] 步骤1)：2-氯-4-[(2-甲氧基苄基)氨基]嘧啶-5-甲酰胺的制备：
[0146] 将2,4-二氯嘧啶-5-甲酰胺(80mg，0.42mmol)溶于四氢呋喃(3mL)中，分别加入2-甲氧基苄胺(57mg，0.42mmol)和二异丙基乙基胺(161mg，1.25mmol)，25℃反应2小时。加入饱和食盐水(30mL)，搅拌15分钟后过滤，滤饼石油醚洗涤，得白色固体116mg，产率95％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6+DCl/D2O)δ8.84(s,1H),7.42–7.35(m,2H),7.11(d,J＝8.2Hz,1H),7.04–6.96(m,1H),4.79(s,2H),3.86(s,3H).；13C NMR(101MHz,DMSO-d6+DCl/D2O)δ166.77,
157.63,156.84,148.52,147.71,130.55,129.68,122.97,121.08,111.64,96.61,56.12,
42.39.LCMS:m/z＝293.1(M+H)+.
[0147]
[0148] 步骤2)：4-[(2-甲氧基苄基)氨基]-2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-5-甲酰胺的制备：
[0149] 将2-氯-4-[(2-甲氧基苄基)氨基]嘧啶-5-甲酰胺(116mg，0.40mmol)溶于仲丁醇(3mL)中，加入1-甲基-1H-吡唑-4-胺(39mg，0.40mmol)和三氟乙酸(0.1mL)，100℃封管反应2小时。反应液浓缩，柱层析(二氯甲烷：甲醇＝95：5)，粗产物用乙腈洗涤，得到白色固体
15mg，产率11％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6+DCl/D2O)δ8.68(s,1H),7.68(s,1H),7.50(s,1H),
7.32–7.22(m,1H),7.11(d,J＝7.4Hz,1H),7.05(d,J＝8.2Hz,1H),6.95–6.82(m,1H),4.66(s,2H),3.83(s,3H),3.75(s,3H).13C NMR(101MHz,DMSO-d6+DCl/D2O)δ166.86,161.02,
157.36,149.69,144.70,131.25,129.45,128.42,124.82,123.12,120.85,119.52,111.38,
100.76,56.01,40.98,39.31.LCMS:m/z＝354.2(M+H)+.
[0150] 实施例3 4-[(2-氟-6-甲氧基苄基)氨基]-2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-5-甲酰胺的制备：
[0151]
[0152] 步骤1)：2-氯-4-[(2-氟-6-甲氧基苄基)氨基]嘧啶-5-甲酰胺的制备：
[0153] 将2,4-二氯嘧啶-5-甲酰胺(210mg，1.09mmol)溶于四氢呋喃(8mL)中，分别加入(2-氟-6-甲氧基苯基)甲胺(170mg，1.09mmol)和二异丙基乙基胺(423mg，3.27mmol)，25℃反应2小时。加入饱和食盐水(60mL)，搅拌15分钟后过滤，滤饼用石油醚洗涤，得白色固体75mg，产率66％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6+DCl/D2O)δ8.82(s,1H),7.50–7.40(m,1H),7.03–
6.96(m,1H),6.95–6.87(m,1H),4.77(s,2H),3.88(s,3H).LCMS:m/z＝311.1(M+H)+.[0154]
[0155] 步骤2)：4-[(2-氟-6-甲氧基苄基)氨基]-2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-5-甲酰胺的制备：
[0156] 将2-氯-4-[(2-氟-6-甲氧基苄基)氨基]嘧啶-5-甲酰胺(75mg，0.24mmol)溶于仲丁醇(3mL)中，加入1-甲基-1H-吡唑-4-胺(27mg，0.28mmol)和三氟乙酸(0.1mL)，100℃封管反应2小时。反应液浓缩过滤，滤饼用乙腈洗涤，得到白色固体65mg，产率73％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6+DCl/D2O)δ8.72(s,1H),8.03(s,1H),7.75(s,1H),7.45–7.34(m,1H),7.03–6.93(m,1H),6.93–6.83(m,1H),4.83(s,2H),3.89(s,3H),3.88(s,3H).LCMS:m/z＝
372.2(M+H)+.
[0157] 实施例4 4-[(2,6-二甲基苄基)氨基]-2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-5-甲酰胺的制备：
[0158]
[0159] 步骤1)：2-氯-4-[(2,6-二甲基苄基)氨基]嘧啶-5-甲酰胺的制备：
[0160] 将2,4-二氯嘧啶-5-甲酰胺(70mg，0.36mmol)溶于四氢呋喃(4mL)中，分别加入(2,6-二甲基苯基)甲胺(50mg，0.37mmol)和二异丙基乙基胺(141mg，1.09mmol)，25℃反应2小时。加入饱和食盐水(30mL)，搅拌15分钟后过滤，滤饼用石油醚洗涤，得白色固体73mg，产率
69％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6+DCl/D2O)δ8.88(s,1H),7.31–7.18(m,1H),7.18–7.06(m,
13
2H),4.73(s,2H),2.34(s,6H)；C NMR(101MHz,DMSO-d6+DCl/D2O)δ166.98,157.34,
148.46,147.77,137.93,131.33,129.36,129.10,96.61,41.68,19.77.LCMS:m/z＝291.1(M+H)+.
[0161]
[0162] 步骤2)：4-[(2,6-二甲基苄基)氨基]-2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-5-甲酰胺的制备：
[0163] 将2-氯-4-[(2,6-二甲基苄基)氨基]嘧啶-5-甲酰胺(73mg，0.25mmol)溶于仲丁醇(3mL)中，加入1-甲基-1H-吡唑-4-胺(30mg，0.31mmol)和三氟乙酸(0.1mL)，100℃封管反应2小时。反应液浓缩过滤，滤饼用乙腈洗涤，得到白色固体50mg，产率57％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6+DCl/D2O)δ8.76(s,1H),8.08(s,1H),7.75(s,1H),7.18(dd,J＝8.6,6.3Hz,1H),
7.14–7.08(m,2H),4.74(s,2H),3.90(s,3H),2.32(s,6H).LCMS:m/z＝352.2(M+H)+.[0164] 实施例5 4-[(2,6-二氯苄基)氨基]-2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-5-甲酰胺的制备：
[0165]
[0166] 步骤1)：2-氯-4-[(2,6-二氯苄基)氨基]嘧啶-5-甲酰胺：
[0167] 将2,4-二氯嘧啶-5-甲酰胺(70mg，0.36mmol)溶于四氢呋喃(4mL)中，分别加入(2,6-二氯苯基)甲胺(64mg，0.36mmol)和二异丙基乙基胺(141mg，1.09mmol)，25℃反应2小时。
加入饱和食盐水(40mL)，搅拌15分钟后过滤，滤饼用石油醚洗涤，得白色固体110mg，产率
91％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6+DCl/D2O)δ8.93(s,1H),7.67–7.60(m,2H),7.60–7.50(m,
1H),5.03(s,2H).13C NMR(101MHz,DMSO-d6+DCl/D2O)δ167.05,157.86,149.16,147.94,
135.98,132.68,130.34,129.74,96.46,42.77.LCMS:m/z＝331.0(M+H)+.
[0168]
[0169] 步骤2)：4-[(2,6-二氯苄基)氨基]-2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-5-甲酰胺的制备：
[0170] 将2-氯-4-[(2,6-二氯苄基)氨基]嘧啶-5-甲酰胺(112mg，0.34mmol)溶于仲丁醇(3mL)中，加入1-甲基-1H-吡唑-4-胺(40mg，0.41mmol)和三氟乙酸(0.1mL)，100℃封管反应2小时。反应液浓缩后过滤，滤饼用乙腈洗涤，得到白色固体110mg，产率83％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6+DCl/D2O)δ8.80(s,1H),8.07(s,1H),7.74(s,1H),7.66–7.55(m,2H),
7.53–7.41(m,1H),5.03(s,2H),3.89(s,3H).LCMS:m/z＝392.1(M+H)+.
[0171] 实施例6 4-[(2,6-二氟苄基)氨基]-2-[[1-(2-甲氧基乙基)-1H-吡唑-4-基]氨基]嘧啶-5-甲酰胺的制备：
[0172]
[0173] 步骤1)：2-氯-4-[(2,6-二氟苄基)氨基]嘧啶-5-甲酰胺的制备：
[0174] 将2,4-二氯嘧啶-5-甲酰胺(210mg，1.09mmol)溶于四氢呋喃(8mL)中，分别加入(2,6-二氟苯基)甲胺(156mg，1.09mmol)和二异丙基乙基胺(423mg，3.27mmol)，25℃反应2小时。加入饱和食盐水(80mL)，搅拌15分钟后过滤，滤饼用石油醚洗涤，得白色固体285mg，产率87％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6+DCl/D2O)δ8.90(s,1H),7.72–7.38(m,1H),7.38–7.08(m,2H),4.93(s,2H).LCMS:m/z＝299.0(M+H)+.
[0175]
[0176] 步骤2)：4-[(2,6-二氟苄基)氨基]-2-[[1-(2-甲氧基乙基)-1H-吡唑-4-基]氨基]嘧啶-5-甲酰胺的制备：
[0177] 将2-氯-4-[(2,6-二氟苄基)氨基]嘧啶-5-甲酰胺(94mg，0.31mmol)溶于仲丁醇(3mL)中，加入1-(2-甲氧基乙基)-1H-吡唑-4-胺(53mg，0.38mmol)和三氟乙酸(0.1mL)，100℃封管反应2小时。反应液浓缩后过滤，滤饼用乙腈洗涤，得到白色固体80mg，产率63％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6+DCl/D2O)δ8.78(s,1H),8.09(s,1H),7.75(s,1H),7.58–7.39(m,1H),7.19–7.14(m,2H),4.90(s,2H),4.32(t,J＝5.1Hz,2H),3.70(t,J＝5.1Hz,2H),3.21(s,
3H).LCMS:m/z＝404.2(M+H)+.
[0178] 实施例7 4-[(2-氟-6-甲氧基苄基)氨基]-2-[[1-(2-甲氧基乙基)-1H-吡唑-4-基]氨基]嘧啶-5-甲酰胺的制备：
[0179]
[0180] 步骤1)：2-氯-4-[(2-氟-6-甲氧基苄基)氨基]嘧啶-5-甲酰胺的制备：
[0181] 将2,4-二氯嘧啶-5-甲酰胺(210mg，1.09mmol)溶于四氢呋喃(8mL)中，分别加入(2-氟-6-甲氧基苯基)甲胺(170mg，1.09mmol)和二异丙基乙基胺(423mg，3.27mmol)，25℃反应2小时。加入饱和食盐水(60mL)，搅拌15分钟后过滤，滤饼用石油醚洗涤，得白色固体75mg，产率66％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6+DCl/D2O)δ8.82(s,1H),7.50–7.40(m,1H),7.03–
6.96(m,1H),6.95–6.87(m,1H),4.77(s,2H),3.88(s,3H).LCMS:m/z＝311.1(M+H)+.[0182]
[0183] 步骤2)：4-[(2-氟-6-甲氧基苄基)氨基]-2-[[1-(2-甲氧基乙基)-1H-吡唑-4-基]氨基]嘧啶-5-甲酰胺的制备：
[0184] 将2-氯-4-[(2-氟-6-甲氧基苄基)氨基]嘧啶-5-甲酰胺(118mg，0.38mmol)溶于仲丁醇(3mL)中，加入1-(2-甲氧基乙基)-1H-吡唑-4-胺(64mg，0.45mmol)和三氟乙酸(0.1mL)，100℃封管反应2小时。反应液浓缩过滤，用乙腈洗涤，得到白色固体100mg，产率63％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6+DCl/D2O)δ8.75(s,1H),8.12(s,1H),7.82(s,1H),7.53–7.33(m,1H),6.98(d,J＝8.4Hz,1H),6.95–6.73(m,1H),4.83(s,2H),4.32(t,J＝5.1Hz,2H),
3.89(s,3H),3.70(t,J＝5.1Hz,2H),3.21(s,3H).LCMS:m/z＝416.2(M+H)+.
[0185] 实施例8 4-[(5-羟基戊基)氨基]-2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-5-甲酰胺的制备：
[0186]
[0187] 步骤1)：2-氯-4-[(5-羟基戊基)氨基]嘧啶-5-甲酰胺的制备
[0188] 将2,4-二氯嘧啶-5-甲酰胺(100mg，0.52mmol)溶于四氢呋喃(4mL)中，分别加入5-氨基-1-戊醇(54mg，0.52mmol)和二异丙基乙基胺(202mg，1.56mmol)，25℃反应2小时。加入饱和食盐水(40mL)，搅拌15分钟后，过滤固体，滤饼石油醚洗涤，得白色固体80mg，产率59％。LCMS:m/z＝259.1(M+H)+.
[0189] 步骤2)：4-[(5-羟基戊基)氨基]-2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-5-甲酰胺的制备：
[0190] 将2-氯-4-[(5-羟基戊基)氨基]嘧啶-5-甲酰胺(80mg，0.31mmol)溶于仲丁醇(3mL)中，加入1-甲基-1H-吡唑-4-胺(37mg，0.38mmol)和三氟乙酸(0.1mL)，100℃封管反应2小时。反应液浓缩过滤，滤饼用乙腈洗涤，得到白色固体70mg，产率71％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6+DCl/D2O)δ8.68(s,1H),7.96(s,1H),7.68(s,1H),3.87(s,3H),3.60–3.47(m,2H),
3.39(t,J＝6.3Hz,2H),1.69–1.54(m,2H),1.51–1.40(m,2H),1.40–1.29(m,2H).LCMS:m/z＝320.2(M+H)+.
[0191] 实施例9 4-[(5-甲氧基戊基)氨基]-2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-5-甲酰胺的制备：
[0192] 步骤1)、步骤2)同实施例8
[0193]
[0194] 步骤3)：4-[(5-溴戊基)氨基]-2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-5-甲酰胺的制备：
[0195] 将4-[(5-羟基戊基)氨基]-2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-5-甲酰胺(60mg，0.19mmol)溶于无水二氯甲烷(4mL)中，0℃氩气保护条件下，依次加入四溴化碳(187mg，0.56mmol)和三苯基膦(148mg，0.56mmol)，升至25℃反应2小时。甲醇淬灭，蒸干柱层析(二氯甲烷：甲醇＝10：1)，得到浅黄色固体70mg，产率95％。LCMS:m/z＝382.1(M+H)+.[0196]
[0197] 步骤4)：4-[(5-甲氧基戊基)氨基]-2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-5-甲酰胺的制备：
[0198] 将4-[(5-溴戊基)氨基]-2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-5-甲酰胺(70mg，0.18mmol)溶于甲醇钠的甲醇溶液(33％，7mL)中，25℃反应16小时。反应液饱和食盐水淬灭，乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥，过滤蒸干反相柱层析(水：甲醇＝7：3)，粗产物乙腈洗涤，得白色固体35mg，产率57％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6+DCl/D2O)δ8.69(s,1H),8.02(s,
1H),7.76(s,1H),3.90(s,3H),3.53(t,J＝6.7Hz,2H),3.31(t,J＝6.1Hz,2H),3.20(s,3H),
1.69–1.57(m,2H),1.57–1.44(m,2H),1.44–1.30(m,2H).LCMS:m/z＝334.2(M+H)+.[0199] 实施例10 4-[(3-羟基-3-甲基丁基)氨基]-2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-5-甲酰胺的制备：
[0200] 步骤1)：3-[(5-氨甲酰基-2-氯嘧啶-4-基)氨基]丙酸甲酯的制备
[0201] 将2,4-二氯嘧啶-5-甲酰胺(100mg，0.52mmol)溶于四氢呋喃(4mL)中，分别加入氨基丙酸甲酯盐酸盐(73mg，0.52mmol)和二异丙基乙基胺(202mg，1.56mmol)，25℃反应2小时。加入饱和食盐水(40mL)，搅拌15分钟后过滤，滤饼用石油醚洗涤，得白色固体90mg，产率+67％。LCMS:m/z＝259.1(M+H) .
[0202] 步骤2)：3-[(5-氨甲酰基-2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-4-基)氨基]丙酸甲酯的制备：
[0203] 将3-[(5-氨甲酰基-2-氯嘧啶-4-基)氨基]丙酸甲酯(90mg，0.35mmol)溶于仲丁醇(3mL)中，加入1-甲基-1H-吡唑-4-胺(41mg，0.42mmol)和三氟乙酸(0.1mL)，100℃封管反应2小时。反应液浓缩，固体过滤，乙腈洗涤，得到白色固体80mg，产率72％。LCMS:m/z＝320.1(M+H)+.
[0204]
[0205] 步骤3)：4-[(3-羟基-3-甲基丁基)氨基]-2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-5-甲酰胺的制备：
[0206] 将3-[(5-氨甲酰基-2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-4-基)氨基]丙酸甲酯(80mg，0.25mmol)溶于无水四氢呋喃(2mL)中，0℃氩气保护条件下，滴加甲基格氏试剂(1M，0.75mL，0.75mmol)，25℃反应16小时。饱和氯化铵水溶液淬灭，乙酸乙酯萃取，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤蒸干，薄层层析(二氯甲烷：甲醇＝10：1)，粗产物用乙腈洗涤，得到白色固体15mg，产率19％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6+DCl/D2O)δ8.57(s,1H),8.01(s,1H),
7.62(s,1H),3.78(s,3H),3.63–3.47(m,2H),1.71–1.56(m,2H),1.08(s,6H).LCMS:m/z＝
320.2(M+H)+.
[0207] 实施例11 4-[[(1-乙酰基哌啶-4-基)甲基]氨基]-2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-5-甲酰胺的制备：
[0208]
[0209] 步骤1)：4-[[(5-氨基甲酰基-2-氯嘧啶-4-基)氨基]甲基]哌啶-1-甲酸叔丁酯的制备：
[0210] 将2,4-二氯嘧啶-5-甲酰胺(100mg，0.52mmol)溶于四氢呋喃(4mL)中，分别加入4-(氨甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(112mg，0.52mmol)和二异丙基乙基胺(202mg，1.57mmol)，25℃反应2小时。加入饱和食盐水(40mL)，搅拌15分钟后过滤，滤饼用石油醚洗涤，得白色固体+150mg，产率79％。LCMS:m/z＝370.2(M+H) .
[0211] 步骤2)：4-[[(5-氨基甲酰基-2-((1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基]甲基]哌啶-1-甲酸叔丁酯的制备：
[0212] 将4-[[(5-氨基甲酰基-2-氯嘧啶-4-基)氨基]甲基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(150mg，0.41mmol)溶于仲丁醇(3mL)中，加入1-甲基-1H-吡唑-4-胺(48mg，0.49mmol)和三氟乙酸(0.1mL)，100℃封管反应2小时。反应液浓缩过滤，滤饼用石油醚洗涤，得到白色固体115mg，产率66％。LCMS:m/z＝431.2(M+H)+.
[0213]
[0214] 步骤3)：4-[[(1-乙酰基哌啶-4-基)甲基]氨基]-2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-5-甲酰胺的制备：
[0215] 将4-[[(5-氨基甲酰基-2-((1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基]甲基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(115mg，0.27mmol)溶于二氯甲烷(3mL)中，缓慢滴入三氟乙酸(1mL)，25℃搅拌2小时。反应液蒸干。粗产物溶于二氯甲烷中(4mL)，0℃氩气保护条件下，先加入三乙胺(160mg，1.58mmol)，搅拌2分钟后，滴入乙酰氯(63mg，0.80mmol)，25℃反应2小时。反应液浓缩，薄层层析层析(二氯甲烷:甲醇＝10:1)，得到白色固体30mg，两步产率30％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6+DCl/D2O)δ8.72(s,1H),8.02(s,1H),7.75(s,1H),4.47–4.25(m,1H),3.90(s,3H),3.48(d,J＝6.7Hz,2H),3.17–3.02(m,1H),2.54(s,3H),2.13–2.07(m,2H),2.04–1.89(m,1H),1.80–1.63(m,2H),1.32–1.05(m,2H).LCMS:m/z＝373.2(M+H)+.[0216] 实施例12 4-[[2-(1-乙酰基哌啶-4-基)乙基]氨基]-2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-5-甲酰胺的制备：
[0217]
[0218] 步骤1)：4-[2-[(5-氨基甲酰基-2-氯嘧啶-4-基)氨基]乙基]哌啶-1-甲酸叔丁酯的制备：
[0219] 将2,4-二氯嘧啶-5-甲酰胺(200mg，1.04mmol)溶于四氢呋喃(5mL)中，分别加入4-(2-氨乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(238mg，1.04mmol)和二异丙基乙基胺(404mg，3.13mmol)，25℃反应2小时。加入饱和食盐水(50mL)，搅拌15分钟后过滤，滤饼用石油醚洗涤，得白色固体270mg，产率68％。LCMS:m/z＝384.2(M+H)+.
[0220]
[0221] 步骤2)：4-[2-[(5-氨基甲酰基-2-((1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基]乙基]哌啶-1-甲酸叔丁酯的制备：
[0222] 将4-[2-[(5-氨基甲酰基-2-氯嘧啶-4-基)氨基]乙基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(270mg，0.70mmol)溶于仲丁醇(3mL)中，加入1-甲基-1H-吡唑-4-胺(83mg，0.85mmol)和三氟乙酸(0.1mL)，100℃封管反应2小时。反应液浓缩，固体过滤，乙腈洗涤，得到白色固体+170mg，产率54％。LCMS:m/z＝445.3(M+H) .
[0223]
[0224] 步骤3)：4-[[2-(1-乙酰基哌啶-4-基)乙基]氨基]-2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-5-甲酰胺的制备：
[0225] 将4-[2-[(5-氨基甲酰基-2-((1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基]乙基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(170mg，0.38mmol)溶于二氯甲烷(6mL)中，缓慢滴入三氟乙酸(2mL)，25℃搅拌2小时。反应液蒸干。粗产物溶于二氯甲烷中(6mL)，0℃氩气保护条件下，先加入三乙胺(176mg，1.36mmol)，搅拌2分钟后，滴入乙酰氯(69mg，0.88mmol)，25℃反应2小时。反应液浓缩，薄层层析层析(二氯甲烷:甲醇＝10:1)，得到浅黄色固体10mg，两步产率1
7％。H NMR(400MHz,DMSO-d6+DCl/D2O)δ8.58(s,1H),7.90(s,1H),7.63(s,1H),4.34–4.08(m,1H),3.79(s,3H),3.77–3.64(m,1H),3.53–3.37(m,2H),3.04–2.83(m,1H),2.45–2.38(m,1H),1.98(s,3H),1.69–1.55(m,2H),1.52–1.37(m,3H),1.11–0.79(m,2H).LCMS:m/z＝
387.2(M+H)+.
[0226] 实施例13 4-[[4-氨基-2-氟苄基]氨基]-2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-5-甲酰胺的制备：
[0227] 步骤1)：2-氯-4-[(2-氟-4-硝基苄基)氨基]嘧啶-5-甲酰胺的制备：
[0228] 将2,4-二氯嘧啶-5-甲酰胺(100mg，0.52mmol)溶于四氢呋喃(4mL)中，分别加入(2-氟-4-硝基苯基)甲胺盐酸盐(108mg，0.52mmol)和二异丙基乙基胺(202mg，1.57mmol)，25℃反应2小时。加入饱和食盐水(40mL)，搅拌15分钟后，过滤固体，滤饼石油醚洗涤，得黄色固体120mg，产率71％。LCMS:m/z＝326.0(M+H)+.
[0229]
[0230] 步骤2)：4-[[2-氟-4-硝基苄基]氨基]-2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-5-甲酰胺的制备：
[0231] 将2-氯-4-[(2-氟-4-硝基苄基)氨基]嘧啶-5-甲酰胺(120mg，0.37mmol)溶于仲丁醇(3mL)中，加入1-甲基-1H-吡唑-4-胺(43mg，0.44mmol)和三氟乙酸(0.1mL)，100℃封管反应2小时。反应液浓缩，固体过滤，乙腈洗涤，得到棕色固体80mg，产率56％。LCMS:m/z＝+387.1(M+H) .
[0232] 步骤3)：4-[[4-氨基-2-氟苄基]氨基]-2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-5-甲酰胺的制备：
[0233] 将4-[[2-氟-4-硝基苄基]氨基]-2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基]嘧啶-5-甲酰胺(80mg，0.21mmol)溶于乙醇(3mL)和水(1mL)的混合溶液中，后加入氯化铵固体(112mg，2.10mmol)和
铁粉(117mg，2.10mmol)，加热至70℃反应小时。反应液冷却，硅藻土过滤，薄层层析(二氯甲烷：甲醇＝10：1)，得黄色固体52mg，产率70％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6+DCl/D2O)δ8.76(s,1H),7.70(s,1H),7.60–7.47(m,1H),7.47–7.34(m,2H),7.32–7.19(m,1H),
4.83(s,2H),3.81(s,3H).LCMS:m/z＝357.2(M+H)+.
[0234] 其余实施例的合成
[0235] 后续具体实施例的合成按照如下所示合成路线，以与实施例1相似的方法，采用具有不同取代基的原料，合成相应的中间体A和目标化合物B，如下表3和表4所示。
[0236]
[0237] 反应条件：1)R1CH2NH2,DIEA,THF,25℃,2～16h；2) TFA,s-BuOH,60～100℃,2～16h.
[0238] 表3实施例14-180的中间体化合物A和目标化合物B的结构和表征
[0239]
[0240]
[0241]
[0242]
[0243]
[0244]
[0245]
[0246]
[0247]
[0248]
[0249]
[0250]
[0251]
[0252]
[0253]
[0254]
[0255]
[0256]
[0257]
[0258]
[0259]
[0260]
[0261]
[0262]
[0263]
[0264]
[0265]
[0266]
[0267]
[0268]
[0269]
[0270]
[0271]
[0272]
[0273]
[0274] 表4实施例181-227的中间体化合物A和目标化合物B的结构和表征
[0275]
[0276]
[0277]
[0278]
[0279]
[0280]
[0281]
[0282]
[0283]
[0284]
[0285]
[0286] 实验例1.本发明化合物抑制JAK1、JAK2、JAK3、TYK2激酶活性的测试[0287] 在体外组装的酶促反应中，加入不同浓度的化合物检测化合物对特异性酶促反应的抑制作用，具体测试方法如下：
[0288] 表5.测试用仪器、材料和试剂
[0289]
[0290]
[0291] 二.测试方法
[0292] 下述将以JAK3为例，JAK1、JAK2、JAK3、TYK2具体的实验条件见附录。
[0293] 1.试剂配制：
[0294] EDTA(0.5M pH8.0)溶液配制:准确称量14.612g EDTA粉末，加入超纯水后定容到100mL(若有不溶则加热到37℃，用1N NaOH溶液调pH至8.0)
[0295] 1×Kinase Assay Buffer：于试剂瓶中分别加入25mL HEPES溶液(1M)、190.175mg EGTA、5mL MgCl2溶液(1M)、1mL DTT、50μL Tween-20，加超纯水定容到500mL(调pH至7.5)。
[0296] 1×Detection Buffer:取1mL 10×Detection Buffer加入9mL水混匀。
[0297] 4×终止液：将0.8mL上述EDTA(0.5M，pH8.0)溶液、1mL 10×Detection Buffer及8.2mL超纯水混匀。
[0298] 4×JAK3激酶溶液:用1×Kinase Assay Buffer稀释激酶原液到浓度为0.36nM，混匀，冰上保存。
[0299] 4×底物溶液：用1×Kinase Assay Buffer稀释底物ULightTM-labeled JAK-1(Tyr1023)Peptide原液到200nM，混匀。
[0300] 4×ATP溶液：用1×Kinase Assay Buffer稀释ATP原液到浓度为40μM，混匀。
[0301] 4×检测液：用1×Detection Buffer稀释检测
抗体Europium-anti-phospho-tyrosine antibody(PT66)到浓度为8nM，混匀。
[0302] 2×底物/ATP
混合液：4×底物溶液和600μl 4×ATP溶液等量混匀(使用前配制)。
[0303] 2、实验步骤
[0304] 1)化合物的稀释，
[0305] 在96孔板中，将化合物用DMSO溶液按3倍比例稀释，形成11个梯度，另一纯DMSO溶液作为阳性对照；取一
块新的96孔板，将上述溶液用超纯水稀释25倍(DMSO浓度为4％)[0306] 2)将化合物转盘到384孔板
[0307] 将上述96孔板中用超纯水稀释过的化合物溶液按照2复孔的标准转盘到384孔板相应的孔中。
[0308] 3)加4×激酶溶液：用排枪取2.5μl上述4×激酶溶液加入到384孔板相应的反应孔中，混匀室温预反应5分钟。
[0309] 4)加2×底物/ATP混合液:用排枪取5μl上述2×底物/ATP混合液到384孔板相应的反应孔中。
[0310] 5)阴性对照：在384孔板中设置阴性对照孔，该孔加入2.5μl/孔4×底物、2.5μl 4×酶溶液、2.5μl 1×Kinase Assay Buffer和2.5μl含4％DMSO的超纯水。
[0311] 6)离心混匀，避光室温反应60min。
[0312] 7)终止酶促反应：
[0313] 吸取5μl上述4×终止液到384孔板相应孔中，离心混匀，室温反应5分钟。
[0314] 8)显色反应：
[0315] 吸取5μl上述4×检测液加入到384孔板中孔中，离心混匀，室温反应60min。
[0316] 9)将384孔板放入读板仪，调取相应的程序检测信号。
[0317] 10)抑制率和IC50计算：
[0318] 孔读值＝10000*EU665值/EU615值
[0319] 抑制率＝[1-(实验孔读值-阴性对照孔读值)/(阳性对照孔读值-阴性对照孔读值)]*100％
[0320] 将药物浓度和相应抑制率输入GraphPad Prism5处理计算出相应的IC50值。
[0321] 三.测试条件：
[0322] JAK1激酶活性测试：
[0323] JAK1(终浓度10nM)；ATP(终浓度10μM)；ULightTM-labeled JAK-1(Tyr1023)Peptide(终浓度100nM)；酶促反应时间为2小时。化合物最大终浓度为2.5μM，经3倍梯度稀释后共11个浓度，最低终浓度为0.042nM。DMSO终浓度为1％。
[0324] JAK2激酶活性测试：
[0325] JAK2(终浓度0.25nM)；ATP(终浓度5μM)；ULightTM-labeled JAK-1(Tyr1023)Peptide(终浓度50nM)；酶促反应时间为1小时。化合物最大终浓度为2.5μM，经3倍梯度稀释后共11个浓度，最低终浓度为0.042nM。DMSO终浓度为1％。
[0326] JAK3激酶活性测试：
[0327] JAK3(终浓度0.36nM)；ATP(终浓度10μM)；ULightTM-labeled JAK-1(Tyr1023)Peptide(终浓度50nM)；酶促反应时间为1小时。化合物最大终浓度为2.5μM，经3倍梯度稀释后共11个浓度，最低终浓度为0.042nM。DMSO终浓度为1％。
[0328] TYK2激酶活性测试：
[0329] TYK2(终浓度8nM)；ATP(终浓度20μM)；ULightTM-labeled JAK-1(Tyr1023)Peptide(终浓度100nM)；酶促反应时间为2小时。化合物最大终浓度为2.5μM，经3倍梯度稀释后共11个浓度，最低终浓度为0.042nM。DMSO终浓度为1％。
[0330] 表6列出了本发明中部分化合物对酪氨酸激酶JAK1、JAK2、JAK3和TYK2抑制活性的测定结果。下表中IC50值表示酶最高抑制率50％时的化合物浓度，NT表示没有测试相对应的酶。
[0331] 表6、本发明部分化合物对JAK1、JAK2、JAK3和TYK2酪氨酸激酶抑制活性测定结果[0332]
[0333]
[0334]
[0335]
[0336]
[0337]
[0338] 实验例2.本发明化合物对HEL细胞中STAT5的磷酸化定量AlphaLISA检测[0339] 用不同浓度的Tofacitinib和S1部分化合物处理HEL细胞，再用100ng/mL IL-4进行刺激后采用AlphaLISA定量检测pSTAT5信号，具体测试方法如下：
[0340] 表7.测试试剂：
[0341]
[0342] 一、相关溶液的稀释及配置
[0343] 1、Acceptor Mix：现用现配，将Reaction Buffer1、Reaction Buffer2、Activation Buffer、Acceptor Beads按照47：47：4：2的比例混合，放置于冰盒上(30min内使用)
[0344] Donor Mix:现用现配，将Dilution Buffer和Donor Beads按照49：1的比例混合，放置冰盒上(弱光操作，30min内使用)。
[0345] 2、Positive control lysate:冻干粉+250μL水，将其进行分装(每管10.5μL)，放于-20℃保存。(一个月之内使用完)
[0346] 二、实验过程
[0347] 1、收集HEL细胞，用PBS离心洗三遍(1000rpm,4min)，在96孔板中按照10万cell/well/45μL DMEM(无酚红)进行细胞接种，每个浓度做两个复孔，培养1h；
[0348] 2、每孔加入15μL不同浓度的Tofacitinib，用排枪混匀后培养1h；
[0349] 3、每孔加入20μL 400ng/mL的IL-4，混匀，培养15min；
[0350] 4、随后于每孔加入20μL 5×Lysis buffer，在混匀小精灵上混匀，350rpm，10min；裂解后，低速离心，800rpm，1min；
[0351] 5、吸取上述裂解产物10μL分别加至384板中；
[0352] 6、每孔加入5μL Acceptor Mix，密封，用
锡箔纸包裹避光，混匀1-2min，室温孵育2h；(孵育时在混匀小精灵上低速摇动)
[0353] 7、每孔加入5μL Donor Mix，密封，用锡箔纸包裹，混匀1-2min，室温孵育2h；(弱光操作，孵育时在混匀小精灵上低速摇动)
[0354] 8、在多功能读板机Envision中打开相应程序读取孔板读值。
[0355] 9、抑制率和IC50计算：
[0356] 抑制率＝[1-(实验孔读值-阴性对照孔读值)/(阳性对照孔读值-阴性对照孔读值)]*100％
[0357] 将药物浓度和相应抑制率输入GraphPad Prism5处理计算出相应的IC50值。
[0358] 表8.列出了本发明部分化合物对HEL细胞中STAT5的磷酸化定量AlphaLISA检测结果。
[0359] 表8、本发明部分化合物对HEL细胞中STAT5的磷酸化定量检测结果
[0360]
[0361] 实验例3.本发明化合物对小鼠脾细胞增殖抑制活性的测试
[0362] 具体实验步骤如下：
[0363] 1)化合物稀释：从最高浓度5000nM开始进行3倍梯度稀释后共9个浓度(本实验使用的药物的最大终浓度为5000nM，最低终浓度为0.76nM)。
[0364] 2)取一直径6厘米的培养皿，在其中放置一孔径为70μm的细胞过滤筛，然后在筛中加入2mL HBSS溶液，使其浸润培养皿底部；
[0365] 3)将成年Balb/c小鼠用二氧化碳安乐死，在75％酒精中浸泡1分钟，放入安全柜，在小鼠左腹侧中部剪开小口，暴露腹壁，找到脾脏；
[0366] 4)取脾脏，去除周围的脂肪组织后将脾脏放入培养皿中的细胞过滤筛上，适当剪切；
[0367] 5)用
注射器活塞的顶端扁平部轻轻
研磨脾脏，得到细胞悬浮液；
[0368] 6)从培养皿中收集细胞悬液，将细胞悬液缓慢加入盛有5ml Ficoll-Paque PLUS的15ml离心管中；
[0369] 7)以400g的速度，在室温下离心30分钟；
[0370] 8)离心结束后，用吸管缓慢移除上层，再缓慢吸出
中间层，即脾细胞；
[0371] 9)将搜集的脾细胞悬液置于另一15ml离心管中并加入10ml RPMI1640完全培养基，300g,4℃,离心4分钟；
[0372] 10)弃去上清液，加入完全培养基重悬细胞，然后进行细胞计数。细胞悬液按第九步重复洗一次；
[0373] 11)将细胞以200万/mL至500万/mL的细胞
密度转移至培养皿中(含2.5μg/mL刀豆蛋白A)培养过夜；
[0374] 12)第二天，将细胞转移至15mL离心管中，以300g的速度离心5min；
[0375] 13)弃去上清液，加入5mL RPMI 1640完全培养液，吹打均匀，取10μL细胞悬浮液和10μL胎盼蓝混匀，用细胞计数仪进行计数，记录细胞数及存活率。
[0376] 14)细胞悬液接种到96孔板中，每孔接种80μl细胞悬液，其密度为100000细胞/孔；
[0377] 15)在每孔中加入20μL对应的上述用培养液稀释过的5×化合物溶液，混匀；
[0378] 16)培养72小时后每孔加入10μL CCK-8试剂，孵育2小时(可以根据
颜色深浅来调节反应时间)；
[0379] 17)在多功能读板机于450nm处读其OD值。
[0381] 细胞存活率(％)＝[(As-Ab)/(Ac-Ab)]*100％
[0382] As：实验孔(含有细胞的培养基、CCK-8、化合物)的OD值，
[0383] Ac：对照孔(含有细胞的培养基、CCK-8)的OD值，
[0384] Ab：空白孔(不含细胞和化合物的培养基、CCK-8)的OD值，
[0385] 然后将数值导入Graphpad Prism5
软件进行曲线拟合，计算IC50。
[0386] 表9.列出了本发明化合物对小鼠脾细胞增殖抑制活性的测试结果，其中A表示IC50小于或等于100nM，B表示IC50大于100nM但小于或等于500nM，C表示IC50大于500nM但小于或等于1000nM，D表示IC50大于1000nM。
[0387] 表9、本发明化合物对小鼠脾细胞增殖抑制活性的测试结果
[0388]
[0389]
[0390]
[0391] 用途，制剂，给药
[0392] 医药用途、适应症
[0393] 本发明所提供的生物学数据表明，本发明的化合物有利于治疗或预防由于酪氨酸激酶(JAK1、JAK2、JAK3、TYK2)异常而引起的疾病。超过五分之一的本发明的化合物已被证实能够强
力抑制JAK酪氨酸激酶活性，而JAK激酶家族与自身免疫疾病及癌症的发生及转移有密切关系。因此，本发明的化合物有利于治疗自身免疫疾病，包括但不限于：银屑病、白癜风、皮炎、斑秃、类风湿性关节炎、结肠炎、多重硬化、系统性红斑狼疮、克罗恩病。本发明的化合物还有利于治疗癌症，包括原发性和转移性癌症，包括实体瘤。此类癌症包括但不限于:非小细胞肺癌、小细胞肺癌、
乳腺癌、胰腺癌、神经胶质瘤、胶质母细胞瘤、卵巢癌、子
宫颈癌、结肠直肠癌、黑色素瘤、子宫内膜癌、
前列腺癌、膀胱癌、白血病、胃癌、肝癌、胃肠间质瘤、甲状腺癌、慢性粒细胞白血病、急性髓细胞性白血病、非霍奇金淋巴瘤、鼻咽癌、食道癌、脑瘤、B细胞和T细胞淋巴瘤、淋巴瘤、多发性骨髓瘤、胆道癌肉瘤、胆管癌。本发明的化合物也包括治疗耐一种或多种其它治疗方法的癌症。本发明的化合物还可用于与JAK1激酶和/或JAK2和/或JAK3激酶有关的除了自身免疫疾病和癌症以外的其他疾病，包括但不限于眼底疾病，肺纤维化、肝纤维化等。本发明的化合物可以作为单一疗法或联合疗法，可以与多个本发明的化合物联合用药或与本发明以外的其他药物联合用药。
[0394] 制药方法
[0395] 本发明的制药方法包括对需要本发明化合物的受试者确定治疗有效量。“治疗有效剂量”依疾病的阶段、进展或严重程度而不同。本发明的化合物和组合物的每日剂量将取决于患者的多种因素，包括所治疗的病症、该病症的严重程度、所采用的具体化合物的药效、特定组合物、年龄、体重、一般健康状况、性别和饮食、给药的途径和时间表、代谢和/或所述化合物的排泄速率、治疗的持续时间等。此外，本发明的化合物所需剂量与药学上可接受的载体制成药剂后，可施用于人和其他动物。给药模式包括口服、直肠、肠胃外、脑池内、
阴道内、腹膜内、局部(如通过
透皮贴剂、粉剂、
软膏、或滴剂)、舌下、经颊、或鼻喷雾等。本发明的化合物的有效剂量通常以每公斤患者体重所施药量来计量，优选于0.1～125毫克/千克体重，一般为0.01～500毫克/千克体重。给药可以是一次或多次、每天、每周、每隔一日或每隔多日、或一个间歇时间表。例如，所述化合物可以每天给药、每周给药(例如，每周一)、无限期给药或延续数周给药(例如4-10周)。本发明的化合物的有效剂量将根据所使用的化合物，给药模式、疾病的严重性、所治疗条件以及相关的患者的各种物理因素而变化。在多数情况下，当本发明的优选化合物的每日剂量约为0.01～500毫克/公斤时，可以达到令人满意的治疗效果。优选剂量为0.1～125毫克/千克，更优选的剂量为1～25毫克/千克。
肠胃外给药剂量通常是在大约10％-20％的口服剂量水平。当本发明的化合物被用作组合
治疗方案的一部分时，每一个组合物的组分将在一个所需的治疗期间被施用。无论是作为单独的剂量单元或者作为单一剂型包含两种组分，组合物中的组分可以在治疗期中同时施用，也可以在治疗期中的不同时间施用，或者某个可以作为另一个的预处理施用。
[0396] 关于化合物
[0397] 本发明的化合物可以以游离的形式用于治疗，或者在适当情况下以药学上可接受的盐或其它衍生物的形式用于治疗。如本文所用，术语“药学上可接受的盐”是指本发明的化合物的有机盐及无机盐，此盐适用于人类和低等动物，无过度毒性、刺激性、过敏反应等，具有合理的利益/风险比。胺，
羧酸，膦酸盐，和其它类型的化合物的药学上可接受的盐在所属领域中是众所周知的。该盐可以由本发明中分离纯化的化合物与合适的游离
碱或酸反应而成。
[0398] 药学上无毒的酸形成的盐，包括但不限于，与
无机酸如盐酸、
氢溴酸、磷酸、硫酸、高氯酸或与
有机酸如乙酸、
草酸、
马来酸、
酒石酸、
柠檬酸、
琥珀酸、
丙二酸形成的氨基盐，或通过使用本领域熟知的方法，例如离子交换法，来得到这些盐。其他药学上可接受的盐包括
己二酸盐、藻酸盐、
抗坏血酸盐、天冬氨酸盐、苯磺酸盐、苯
甲酸盐、硫酸氢盐、硼酸盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、柠檬酸盐、环戊烷、二葡糖酸盐、十二烷基
硫酸盐、乙磺酸盐、甲酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、甘油
磷酸盐、
葡萄糖酸盐、半硫酸盐、庚、己酸盐、
氢碘酸盐、2-羟基乙磺酸盐、乳糖酸盐、乳酸盐、月桂酸盐、月桂基硫酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、甲烷磺酸盐、2-
萘磺酸盐、烟酸盐、
硝酸盐、油酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、双羟萘酸盐、果胶酸盐、
过硫酸盐、过3-苯基丙酸盐、磷酸盐、苦味酸盐、新戊酸盐、丙酸盐、
硬脂酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、
对甲苯磺酸盐、十一烷酸盐、戊酸盐等。代表性的碱或碱土金属盐包括钠、锂、
钾、
钙、镁、等。其他药学上可接受的盐包括适当的无毒的铵、季铵，和使用诸如卤离子、氢氧根、羧酸根、硫酸根、磷酸根、硝酸根，低级
烷基磺酸盐和芳基磺酸盐形成的胺基阳离子。
[0399] 另外，本文所用术语“前药”是指一个化合物在体内可以转化为本发明式(I)所示的化合物。此转化是通过前体药物在血液中
水解或在血液或组织中经酶作用而转化为母体化合物的。
[0400] 组合物
[0401] 本
专利所述组合物是由本文所述任何一个化合物(或前药、或其药学上可接受的盐、或其他药学上可接受的衍生物)，以及一种或多种药学上可接受的载体或赋形剂所组成。这些组合物可任选进一步包含一种或多种另外的治疗剂。本发明的化合物可以与一种或多种其它治疗方案(例如，Tofacitinib或其他激酶抑制剂、干扰素、骨髓移植、法尼基转移酶抑制剂、二膦酸盐、沙利度胺的施用组合、癌症
疫苗、
激素疗法、抗体、
辐射等)共同施用于所需患者。化合物的药物组合物可以是另一种或多种抗炎剂或抗癌剂。
[0402] 如本文所述，本发明的组合物包含本发明的化合物与药学上可接受的载体，包括任何和所有溶剂、稀释剂或其它载体、分散或悬浮助剂、
表面活性剂、等渗剂、
增稠剂或乳化剂、
防腐剂、固体
粘合剂、
润滑剂等，以适合于所需的特定剂型。一些药学上可接受的载体材料的实例包括，但不限于，糖，如乳糖、葡萄糖和
蔗糖；
淀粉如玉米淀粉和马铃薯淀粉；
纤维素及其衍生物如
羧甲基纤维素钠、乙基纤维素和醋酸纤维素；西黄蓍胶粉；麦芽；明胶；滑石粉；赋形剂，例如可可脂和栓剂蜡；油如
花生油、
棉籽油、红花油、芝麻油、
橄榄油、玉米油和
大豆油；乙二醇，例如丙二醇；酯类如油酸乙酯和月桂酸乙酯、琼脂；缓冲剂例如氢氧化镁和氢氧化铝；藻酸；无热
原水；等渗盐水；林格氏溶液；乙醇，和磷酸盐缓冲溶液，以及其它无毒的相容性润滑剂如月桂基硫酸钠和硬脂酸镁、以及
着色剂、释放剂、包衣剂、
甜味剂、
调味剂和芳香剂、防腐剂和抗
氧化剂也可以可存在于组合物中。配方
[0403] 本发明还涵盖本发明中的活性化合物与一种或多种药学上可接受的载体和/或稀释剂和/或佐剂联合使用的一类组合物(在本文中统称为“载体”材料)，并且如果需要的话，也包括其它活性成分。本发明的活性化合物可以通过任何合适的途径给药，优选以适合这种给药途径的药物组合物的形式用于预期治疗所需的有效剂量。本发明的化合物和组合物的给药形式可以是，口服，粘膜，局部，直肠，经肺，如通过吸入喷雾，或胃肠外，包括血管内，静脉内，腹膜内，皮下，肌内，胸骨内和输注技术。其给药是以剂量单位为准的制剂形式并含有药学上可接受的载体，佐剂，和赋形剂。对于口服给药，药物组合物可以是下列形式，例如，片剂、胶囊剂、混悬剂或液体。所述剂量单位的实例是片剂或胶囊。例如，它们可以包含活性成分的量为1至2000毫克，优选为1至500毫克，更常见的为5至200毫克。一个人或其它哺乳动物合适的每日剂量可根据患者和其他因素有所不同，但可以使用常规方法来再次确定。如前所述，本发明所涉及的化合物和/或组合物的给药和剂量方案中化合物的量取决于多种因素，包括受试者的年龄，体重，性别和医疗条件，疾病类型，该疾病严重程度，给药途径和
频率，以及所使用的特定化合物。因此，剂量方案可以变化很大，但可使用标准方法来确定。典型的日剂量为0.01～500毫克/公斤体重，优选为0.1～125毫克/公斤体重，更优选为1～25毫克/公斤体重。
[0404] 本发明的活性化合物通常与一种或多种佐剂、赋形剂或载体来组成给药途径。如果口服给药，所述化合物可以与乳糖、蔗糖、淀粉粉末、链烷酸纤维素酯、纤维素烷基酯、滑石、硬脂酸、硬脂酸镁、氧化镁、磷酸和硫酸的钠和钙盐、明胶、金合欢胶、藻酸钠、聚乙烯吡咯烷
酮和/或聚乙烯醇相混合，然后压片或制成胶囊以方便给药。这样的胶囊剂或片剂可以包含一种
控释制剂，可将活性化合物分散于羟丙基甲基纤维素来提供。适合于局部给药的制剂包括适于渗透穿过皮肤的液体或半液体制剂(如搽剂、洗剂、软膏剂、乳膏剂或糊剂)和适合施用于眼、
耳或鼻的滴液。本发明的化合物适宜的局部给药剂量为0.1～150毫克，每日一至四次，优选每日1至2次。对于局部给药，使用软膏剂时，活性成分可与任何
石蜡或水混溶性软膏为基质。或者，活性成分可以配制成油包水乳剂基质霜剂。如果需要，乳膏基质的水相可包括例如至少30％重量比的多元醇，如丙二醇、
丁烷-1,3-二醇、甘露醇、山梨醇、甘油、聚乙二醇和它们的混合物。局部制剂可以包括能使通过皮肤或其它受影响区域增强活性成分吸收或渗透的化合物。此类真皮渗透增强剂的实例包括二甲基亚砜和相关类似物。化合物还可以通过透皮装置给药。优选
透皮给药将使用含有储液器和多孔质膜或者固体基质的贴剂来实现。本发明的乳剂的油相可以由已知成分以已知方式构成，包含至少一种乳化剂与脂肪或油的混合物或与两者的脂肪和油的混合物。优选地，亲水性乳化剂可同时与作为稳定剂的亲脂性乳化剂合用，另外优选的是它也可以与油和脂肪合用。适合于在本发明的制剂中使用的乳化剂和乳液稳定剂包括吐温60、司盘80、鲸蜡硬脂醇、肉豆蔻醇、单硬脂酸甘油酯、月桂基硫酸钠、单一的二硬脂酸甘油酯或与其与乳化蜡的混合物，或本领域中公知的其他材料。乳膏应当优选不油腻、不着色和可洗的产品，并具有合适的稠度以避免从管或其他容器中渗漏。直链或支链、一元或二元烷基酯如二异己二酸酯、异十六烷基硬脂酸酯、椰子
脂肪酸的丙二醇二酯、肉豆蔻酸异丙酯、油酸癸酯、棕榈酸异丙酯、硬脂酸丁酯、2-乙基己基棕榈酸酯或混合的支链的酯也可使用。作为选择，高熔点脂质如白色软石蜡和/或液体石蜡或其它矿物油都可以使用。适于局部给药至眼部的制剂还包括滴眼剂，其中活性成分溶解或悬浮于合适的载体，特别是对于活性成分的水性溶剂。活性成分在这些制剂中重量比优选为0.5％至20％，更有利的比例是0.5～10％，最佳为约1.5％的浓度。制剂用于肠胃外给药可以是以水性或非水性的等渗无菌注射溶液或悬浮液的形式。这些溶液和悬浮液可以从一个或多个无菌粉末或颗粒，通过使用本文提到的用于口服给药的制剂或使用其他合适的分散剂或润湿剂和助悬剂的载体或稀释剂而制备。化合物可以溶解在水、聚乙二醇、丙二醇、乙醇、玉米油、棉籽油、花生油、芝麻油、苄醇、
氯化钠、黄蓍胶、和/或各种缓冲液。其它辅助剂和给药方式是在制药领域中众所周知的。
[0405] 所述活性成分还可以通过注射给药、与合适的载体包括盐水、葡萄糖或水的组合物、或者与环糊精(Captisol)、共溶剂增溶(即丙二醇)或胶束增溶(即吐温80)。制剂还可以是无菌注射溶液或在无毒的肠胃外可接受的稀释剂或溶剂中的悬浮液，例如1,3-丁二醇。可使用的溶剂有水、林格氏溶液和等渗氯化钠溶液。此外，无菌、不挥发性油通常用作溶剂或悬浮介质。用于此目的的任何温和的固定油都可以使用，包括合成的单或二甘油酯。
[0406] 对于肺部给药，所述药物组合物可以施用以气雾剂的形式或用吸入器，包括干粉气雾剂。用于直肠给药的栓剂可通过将药物与适宜的无刺激性赋形剂来制备，如可可脂和聚乙二醇在常温下是固体，但在直肠
温度为液体，因此将在直肠中融化并释放出药物。该药物组合物可以加入常规的药物操作如灭菌和/或可以含有常规的佐剂，如防腐剂、稳定剂、润湿剂、乳化剂、缓冲剂等的片剂和丸剂还可用
肠溶衣制备。这样的组合物还可以包含佐剂，如润湿剂、甜味剂、矫味剂和芳香剂。
[0407] 本发明的药物组合物包含本文所述结构式(I)化合物或其药学上可接受的盐、激酶抑制剂(小分子，多肽，抗体等)、免疫抑制剂、抗癌药、抗病毒剂、抗炎剂、抗
真菌剂、抗生素或抗血管过度增生化合物的另外的活性剂；以及任何药学上可接受的载体、佐剂或赋形剂。本发明的可替代的组合物包括具有本文所述式(I)的化合物或其药学上可接受的盐和药学上可接受的载体，佐剂或赋形剂。这样的组合物可任选地包含一种或多种额外治疗剂，包括，例如，激酶抑制剂(小分子，多肽，抗体等)，免疫抑制剂，抗癌剂，抗病毒剂，抗炎剂，抗真菌剂，抗生素或抗血管过度增生化合物。
[0408] 术语“药学上可接受的载体或佐剂”是指一种可与本发明的化合物一起被施用给患者的载体或佐剂，并且其不破坏药物活性，并且在剂量足以递送给药治疗量时是无毒的。药学上可接受的载体、佐剂和赋形剂可用于本发明的药物组合物，包括但不限于、离子交换剂、氧化铝、硬脂酸铝、卵磷脂、自乳化药物传递系统(SEDDS)、如d-atocopHerol聚乙二醇
1000琥珀酸盐，药物剂型中使用的表面活性剂，如吐温或其他类似的
聚合物递送基质，血清蛋白如人血清
白蛋白，缓冲物质如磷酸盐，甘氨酸，山梨酸，山梨酸钾，饱和
植物脂肪酸的偏甘油酯混合物中使用表面活性剂，水，盐或
电解质，如硫酸鱼精蛋白，磷酸氢二钠，磷酸氢钾，氯化钠，锌盐，胶体
二氧化硅，三
硅酸镁，聚乙烯吡咯烷酮，基于纤维素的物质，聚乙二醇，羧甲基纤维素钠，聚
丙烯酸酯，蜡，聚乙烯-聚氧丙烯嵌段聚合物，聚乙二醇和羊毛脂。环糊精如α-，β-，和γ-环糊精，或化学改性衍生物如羟基烷基，包括2和3-羟丙基-环糊精，或者其它溶解的衍生物也可有利地用于提高递送本文所述结构式的化合物。所述药物组合物可以任意使用可接受的剂型口服给药，包括但不限于胶囊，片剂，乳剂和水性悬浮液，分散体和溶液。在用于口服使用的片剂的情况下，通常使用的载体包括乳糖和玉米淀粉。润滑剂，诸如如硬脂酸镁，也通常被加入。对于以胶囊形式的口服给药，有用的稀释剂包括乳糖和干燥的玉米淀粉。当使用水性悬浮液和/或乳状液口服给药时，活性成分可与乳化和/或悬浮剂悬浮或溶解于油相中。如果需要，某些甜味剂，矫味剂和/或着色剂可以被加入。该药物组合物可以包括使用脂质体或微胶囊化技术，其不同的实施例在文献中可以查到。所述药物组合物可通过鼻气雾剂或吸入给药。这样的组合物是根据药物制剂领域中的已知技术制备的，并且可以在盐水中制备成溶液，采用苯甲醇或其它合适的防腐剂，吸收促进剂以提高生物利用度，碳氟化合物，和/或其它增溶剂或分散剂，其例子也是众所周知的
现有技术。
[0409] 联合用药
[0410] 本发明的化合物可以作为单独使用，也可以与一种或多种其它本发明的化合物或与一种或多种其它药剂联合使用。当联合给药时，治疗剂可以配制成同时给药或顺序地在不同的时间给药，或者所述治疗剂可以作为单一组合物给药。所谓“组合疗法”，指的是使用本发明的化合物与另一种药剂一起使用，给药方式为每种药剂同时共同给药或每种药剂顺序给药，无论哪种情况，目的都是要达到药物的最佳效果。共同给药包括同时递送剂型，以及每种化合物分别的单独剂型。因此，本发明的化合物的给药可以与已知的本领域的其他疗法同时使用，例如，在癌症治疗中使用放射治疗或细胞生长抑制剂、细胞毒性剂、其它抗癌剂等附加疗法来改善癌症状。本发明并不限于给药的顺序；本发明的化合物可以先前施用，同时施用，或在其他抗癌剂或细胞毒性剂之后施用。
[0411] 以上所述是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明所述原则的前提下，本发明的实施方式还可以作出若干改进和修饰，这些改进和修饰也应视为本发明的保护范围。
