7-羟基-吡唑并[1，5-A]嘧啶化合物及其作为CCR2受体拮抗剂的用途
阅读：760发布：2021-04-05
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1.式(I)的化合物或者其可药用盐、溶剂合物、水合物、几何异构体、互变异构体、光学异构体或N-氧化物，
其中：
R1至R5各自独立地选自氢、卤素、氰基、C1-4-烷基、C1-4-烷氧基、氟-C1-4-烷基和氟-C1-4-烷氧基；
R6选自C1-6-烷基、氟-C1-6-烷基、羟基-C1-6-烷基、C1-4-烷氧基-C1-4-烷基、C3-5-环烷基、C1-6-烷基羰基、C1-6-烷氧基羰基、-CO2H、杂环基、杂环基-C1-4-烷基、杂芳基和杂芳基-C1-4-烷基，其中任意杂芳基任选地被C1-4-烷基所取代；
R7选自氢、卤素、氰基、C1-4-烷基和-C(O)N(R8A)(R8B)；
A选自-CH(R9)-、-N(R10)-、-O-和-S-；
R8A和R8B各自独立地选自氢、C1-4-烷基、C2-4-烯基、氰基-C1-4-烷基、C1-4-烷氧基-C1-4-烷基、C1-4-烷基硫-C1-4-烷基、-C1-4-亚烷基-N(R11A)(R11B)、苯基-C1-4-烷基、苯氧基-C1-4-烷基、杂芳基-C1-4-烷基和杂环基-C1-4-烷基；
或
R8A和R8B与它们所结合的氮原子一起形成4至6元饱和杂环，所述环任选地包含选自氮和氧的另外的杂原子，并且所述环任选地被C1-4-烷基所取代；
R9和R10各自选自氢和C1-4-烷基；
R11A和R11B各自独立地选自氢、C1-4-烷基和苯基；
或
R11A和R11B与它们所结合的氮原子一起形成4至6元饱和杂环，所述环任选地包含选自氮和氧的另外的杂原子，并且所述环任选地被C1-4-烷基所取代；
前提是R1至R5中的至少一个选自卤素、氰基、C1-4-烷基、C1-4-烷氧基、氟-C1-4-烷基或氟-C1-4-烷氧基；并且
前提是所述式(I)的化合物不选自：
●6-[(2-氯-4-氟苯基)甲基]-7-羟基-5-甲基-N-(3-吡啶基甲基)-吡唑并[1，
5-a]嘧啶-3-甲酰胺、
●N-(2-氰乙基)-6-[(4-氟苯基)甲基]-7-羟基-N，5-二甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酰胺、
●6-[(2-氯-4-氟苯基)甲基]-7-羟基-5-甲基-N-(2-苯乙基)-吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酰胺、
●7-羟基-5-甲基-6-(苯甲基)-吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲腈、
●N-[2-(丁基甲基氨基)乙基]-6-[(2-氟苯基)甲基]-7-羟基-5-甲基-吡唑并
[1，5-a]嘧啶-3-甲酰胺、
●6-[(4-氯苯基)甲基]-7-羟基-N，5-二甲基-N-(苯甲基)-吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酰胺、
●6-[(3-氯苯基)甲基]-7-羟基-5-甲基-N-(2-苯乙基)-吡唑并[1，5-a]嘧
啶-3-甲酰胺、
●N-丁基-6-[(4-氟苯基)甲基]-7-羟基-N，5-二甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酰胺、
●N-丁基-6-[(2-氯苯基)甲基]-7-羟基-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酰胺、
●[6-[(4-氯苯基)甲基]-7-羟基-5-甲基吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-基]-1-吡咯烷基-甲酮、
●[6-[(3-甲基苯基)甲基]-7-羟基-5-甲基吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-基][4-乙
基-1-哌嗪基]-甲酮、
●6-[(2-氯-4-氟苯基)甲基]-7-羟基-5-甲基-N-[3-(4-吗啉基)丙基]-吡唑
并[1，5-a]嘧啶-3-甲酰胺、
●6-[(4-氯苯基)甲基]-7-羟基-N-(2-甲氧基乙基)-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酰胺、
●[6-[(2-氟苯基)甲基]-7-羟基-5-甲基吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-基]-1-哌啶
基-甲酮、
●N-[3-(2-乙基-1-哌啶基)丙基]-6-[(2-氟苯基)甲基]-7-羟基-5-甲基-吡
唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酰胺、
●6-[(2-氟苯基)甲基]-7-羟基-5-甲基-N-(2-苯乙基)-吡唑并[1，5-a]嘧
啶-3-甲酰胺、
●[6-[(4-氯苯基)甲基]-7-羟基-5-甲基吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-基]-1-哌啶
基-甲酮、
●6-[(2-氟苯基)甲基]-7-羟基-N，5-二甲基-N-(苯甲基)-吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酰胺、
●N-[2-(二甲氨基)乙基]-6-[(2-氟苯基)甲基]-7-羟基-5-甲基-吡唑并[1，
5-a]嘧啶-3-甲酰胺、
●[6-[(2-氯苯基)甲基]-7-羟基-5-甲基吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-基]-1-吡咯烷基-甲酮、
●[6-[(2-氯-4-氟苯基)甲基]-7-羟基-5-甲基吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-基]-1-吡咯烷基-甲酮、
●[6-[(4-氯苯基)甲基]-7-羟基-5-甲基吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-基]-4-吗啉
基-甲酮、
●[6-[(4-甲基苯基)甲基]-7-羟基-5-甲基吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-基]-1-吡咯烷基-甲酮、
●6-[(4-氟苯基)甲基]-7-羟基-5-甲基-N-[2-(4-吗啉基)乙基]-吡唑并[1，
5-a]嘧啶-3-甲酰胺、
●[6-[(2-氯-4-氟苯基)甲基]-7-羟基-5-甲基吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-基]-4-吗啉基-甲酮、
●6-[(2-氯苯基)甲基]-7-羟基-5-甲基-N-(苯基甲基)-吡唑并[1，5-a]嘧
啶-3-甲酰胺、
●6-[(2-氟苯基)甲基]-N-(2-呋喃基甲基)-7-羟基-N，5-二甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酰胺、
●6-[(4-氯苯基)甲基]-N-[3-(二乙氨基)丙基]-7-羟基-5-甲基-吡唑并[1，
5-a]嘧啶-3-甲酰胺、
●N-[2-(乙基苯基氨基)乙基]-6-[(2-氟苯基)甲基]-7-羟基-5-甲基-吡唑并
[1，5-a]嘧啶-3-甲酰胺、
●6-[(2-氯苯基)甲基]-7-羟基-5-甲基-N-(1-甲基丙基)-吡唑并[1，5-a]嘧
啶-3-甲酰胺、和
●6-[(2-氟苯基)甲基]-7-羟基-N，5-二甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酰胺。
7
2.根据权利要求1所述的化合物，其中R 选自氢、卤素、氰基、C1-4-烷基。
7
3.根据权利要求2所述的化合物，其中R 是H。
6
4.根据权利要求1至3中任一项所述的化合物，其中R 选自C1-4-烷基、氟-C1-4-烷基、羟基-C1-4-烷基、C1-4-烷氧基-C1-4-烷基、C3-5-环烷基和C1-4-烷氧基羰基。
6
5.根据权利要求1至4中任一项所述的化合物，其中R 选自C1-3-烷基、C3-4-环烷基和C1-3-烷氧基羰基。
6
6.根据权利要求1至5中任一项所述的化合物，其中R 是乙基、异丙基、环丙基或环丁基。
9
7.根据权利要求1至6中任一项所述的化合物，其中A是-CH(R)-或-O-。
8.根据权利要求1至7中任一项所述的化合物，其中A是CH2。
1 5
9.根据权利要求1至8中任一项所述的化合物，其中R 至R 各自独立地选自氢、氟、氯、溴和CF3。
1 2 5
10.根据权利要求1至9中任一项所述的化合物，其中R 是氢，并且R 至R 各自独立地选自氟、氯、溴和CF3。
1 5 2 4
11.根据权利要求1至9中任一项所述的化合物，其中R 和R 是氢，并且R 至R 各自独立地选自氟、氯、溴和CF3。
1 4 5 2 3
12.根据权利要求1至9中任一项所述的化合物，其中R、R 和R 是氢，并且R 和R 各自独立地选自氟、氯、溴和CF3。
1 3 5 2 4
13.根据权利要求1至9中任一项所述的化合物，其中R、R 和R 是氢，并且R 和R 各自独立地选自氟、氯、溴和CF3。
1 2 4 5 3
14.根据权利要求1至9中任一项所述的化合物，其中R、R、R 和R 是氢，并且R 选自氟、氯、溴和CF3。
1 3 4 5 2
15.根据权利要求1至9中任一项所述的化合物，其中R、R、R 和R 是氢，并且R 选自氟、氯、溴和CF3。
2 3
16.根据权利要求12所述的化合物，其中R 和R 独立地选自氟和CF3。
2 4
17.根据权利要求13所述的化合物，其中R 和R 独立地选自氟和CF3。
18.式(I)的化合物或者其可药用盐、溶剂合物、水合物、几何异构体、互变异构体、光学异构体或N-氧化物：
所述化合物用于治疗，
其中：
R1至R5各自独立地选自氢、卤素、氰基、C1-4-烷基、C1-4-烷氧基、氟-C1-4-烷基和氟-C1-4-烷氧基；
R6选自C1-6-烷基、氟-C1-6-烷基、羟基-C1-6-烷基、C1-4-烷氧基-C1-4-烷基、C3-5-环烷基、C1-6-烷基羰基、C1-6-烷氧基羰基、-CO2H、杂环基、杂环基-C1-4-烷基、杂芳基和杂芳基-C1-4-烷基，其中任意杂芳基任选地被C1-4-烷基所取代；
R7选自氢、卤素、氰基、C1-4-烷基和-C(O)N(R8A)(R8B)；
A选自-CH(R9)-、-N(R10)-、-O-和-S-；
R8A和R8B各自独立地选自氢、C1-4-烷基、C2-4-烯基、氰基-C1-4-烷基、C1-4-烷氧基-C1-4-烷基、C1-4-烷基硫-C1-4-烷基、-C1-4-亚烷基-N(R11A)(R11B)、苯基-C1-4-烷基、苯氧基-C1-4-烷基、杂芳基-C1-4-烷基和杂环基-C1-4-烷基；
或
R8A和R8B与它们所结合的氮原子一起形成4至6元饱和杂环，所述环任选地包含选自氮和氧的另外的杂原子，并且所述环任选地被C1-4-烷基所取代；
R9和R10各自选自氢和C1-4-烷基；
R11A和R11B各自独立地选自氢、C1-4-烷基和苯基；
或
R11A和R11B与它们所结合的氮原子一起形成4至6元饱和杂环，所述环任选地包含选自氮和氧的另外的杂原子，并且所述环任选地被C1-4-烷基所取代；
前提是R1至R5中的至少一个选自卤素、氰基、C1-4-烷基、C1-4-烷氧基、氟-C1-4-烷基或氟-C1-4-烷氧基；并且
前提是所述化合物不选自：
●N-[2-(乙基苯基氨基)乙基]-6-[(2-氟苯基)甲基]-7-羟基-5-甲基-吡唑并
[1，5-a]嘧啶-3-甲酰胺、
●6-[(2-氯苯基)甲基]-7-羟基-5-甲基-N-(1-甲基丙基)-吡唑并[1，5-a]-嘧啶-3-甲酰胺、和
●6-[(2-氟苯基)甲基]-7-羟基-N，5-二甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酰胺。
19.根据权利要求18所述应用的化合物，其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7和A如权利要求
2至17中任一项所定义。
20.药物制剂，其包含与可药用稀释剂或载体组合的作为活性成分的根据权利要求18或19中所定义的化合物。
21.式(I)的化合物或者其可药用盐、溶剂合物、水合物、几何异构体、互变异构体、光学异构体或N-氧化物，
其用于治疗或预防这样的医学病症，其中对MCP-1/CCR2途径的调节是有益的，或者用于制备用于治疗或预防所述医学病症的药物，在所述式中：
R1至R5各自独立地选自氢、卤素、氰基、C1-4-烷基、C1-4-烷氧基、氟-C1-4-烷基和氟-C1-4-烷氧基；
R6选自C1-6-烷基、氟-C1-6-烷基、羟基-C1-6-烷基、C1-4-烷氧基-C1-4-烷基、C3-5-环烷基、C1-6-烷基羰基、C1-6-烷氧基羰基、-CO2H、杂环基、杂环基-C1-4-烷基、杂芳基和杂芳基-C1-4-烷基，其中任意杂芳基任选地被C1-4-烷基所取代；
R7选自氢、卤素、氰基、C1-4-烷基和-C(O)N(R8A)(R8B)；
A选自-CH(R9)-、-N(R10)-、-O-和-S-；
R8A和R8B各自独立地选自氢、C1-4-烷基、C2-4-烯基、氰基-C1-4-烷基、C1-4-烷氧基-C1-4-烷基、C1-4-烷基硫-C1-4-烷基、-C1-4-亚烷基-N(R11A)(R11B)、苯基-C1-4-烷基、苯氧基-C1-4-烷基、杂芳基-C1-4-烷基和杂环基-C1-4-烷基；
或
R8A和R8B与它们所结合的氮原子一起形成4至6元饱和杂环，所述环任选地包含选自氮和氧的另外的杂原子，并且所述环任选地被C1-4-烷基所取代；
R9和R10各自选自氢和C1-4-烷基；
R11A和R11B各自独立地选自氢、C1-4-烷基和苯基；
或
R11A和R11B与它们所结合的氮原子一起形成4至6元饱和杂环，所述环任选地包含选自氮和氧的另外的杂原子，并且所述环任选地被C1-4-烷基所取代；
前提是R1至R5中的至少一个选自卤素、氰基、C1-4-烷基、C1-4-烷氧基、氟-C1-4-烷基或氟-C1-4-烷氧基。
22.根据权利要求21所述应用的化合物，其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7和A如权利要求
2至17中任一项所定义。
23.根据权利要求21或权利要求22所述应用的化合物，其中所述医学病症是疼痛或炎性疾病。
24.根据权利要求21或权利要求22所述应用的化合物，其中所述医学病症选自：银屑病、葡萄膜炎、动脉粥样硬化、类风湿性关节炎、多发性硬化、炎性肠病、克罗恩病、肾炎、狼疮和狼疮性肾炎、器官同种异体移植排斥、纤维化肺、肾功能不全、IgA肾病、肾纤维化、糖尿病和糖尿病并发症、糖尿病性肾病、糖尿病性视网膜病、糖尿病性视网膜炎、糖尿病性微血管病、肥胖、糖尿病性神经病和其他形式的神经病、神经性疼痛(包括与糖尿病相关的神经性疼痛)、慢性疼痛、巨细胞动脉炎和其他血管炎性疾病、结核病、结节病、侵袭性葡萄球菌感染、白内障手术后炎症、变应性鼻炎、变应性结膜炎、慢性荨麻疹、慢性阻塞性肺病(COPD)、变应性哮喘、HIV相关痴呆症、牙周病、牙周炎、牙龈炎、齿龈病、舒张性心肌病、心肌梗死、心肌炎、慢性心力衰竭、血管狭窄、再狭窄、再灌注障碍、肾小球肾炎(包括但不限于局灶性肾小球硬化和节段性肾小球硬化、IgA肾小球肾炎、IgM肾小球肾炎、膜增生性肾小球肾炎、膜性肾小球肾炎、微小病变性肾病、血管炎(包括显微镜下多动脉炎、韦格纳肉芽肿病、亨-舍紫癜和结节性多动脉炎))、实体瘤和癌症、慢性淋巴细胞性白血病、慢性髓细胞性白血病、多发性骨髓瘤、恶性骨髓瘤、霍奇金病、以及膀胱癌、乳腺癌、子宫颈癌、结肠癌、直肠癌、肺癌、前列腺癌和胃癌。
25.权利要求21或权利要求22中所定义的式(I)的化合物或者其可药用盐、溶剂合物、水合物、几何异构体、互变异构体、光学异构体或N-氧化物，其用于抑制转移性肿瘤细胞从原发性肿瘤部位的扩散，或用于制备用于抑制所述扩散的药物。
7-羟基-吡唑并[1，5-A]嘧啶化合物及其作为CCR2受体
拮抗剂的用途
技术领域
[0001] 本发明涉及通式(I)的新的吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-醇化合物，所述化合物是CCR2受体的拮抗剂。因此，它们降低参与伤害感受、炎性过程、癌症和癌转移之MCP-1/CCR2途径的活化。因此，本发明还涉及包含这些化合物的药物组合物以及这些化合物在治疗或预防医学病症(其中对MCP-1/CCR2途径的调节(mediation)是有益的，例如疼痛和炎性疾病)中的用途。本发明还涉及这些化合物用于抑制转移性肿瘤细胞从原发性肿瘤部位之扩散的用途。
背景技术
[0002] 趋化因子(chemokine)，还称为趋化性细胞因子，是一组低分子量的小蛋白质，它们由各种各样的细胞释放并且具有多种生物活性。趋化因子吸引免疫系统中多种类型的细胞，例如巨噬细胞、T细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞和嗜中性粒细胞，并且使得它们从血液中迁移到多种淋巴组织和非淋巴组织中。在肿瘤中，许多趋化因子与癌干细胞、肿瘤相关巨噬细胞、骨髓细胞以及参与肿瘤生长和扩散之其他细胞的吸引和维持相关。它们还介导炎性细胞浸润至炎症部位，并且是引发并维持(perpetuation)许多炎症疾病的原因(Schall，Cytokine，3：165-183(1991)；Schall等，Curr.Opin.Immunol.，6：865-873(1994)中综述)。除了刺激趋化性之外，趋化因子可引起应答细胞的其他变化，包括细胞形状变化、胞吐颗粒、整合素上调、形成生物活性脂质(如白三烯)、与白细胞活化相关的呼吸爆发、细胞增殖、对诱导凋亡的抗性和血管发生。因此，趋化因子是炎性应答的早期触发物，引起炎性介质释放、趋化和向感染或炎症部位外渗(extravasation)。
[0003] 基于第一个与第二个高度保守的半胱氨酸残基之间氨基酸残基的数目而将趋化因子家族分成四个亚家族。CCR2是十种CC趋化因子受体中的一种并且见于单核细胞、巨噬细胞、B细胞、活化的T细胞、树突细胞、内皮细胞和肿瘤细胞的表面上。它是多种趋化因子配体(包括MCP-1、MCP-2、MCP-3和MCP-4)的受体。其中，MCP-1(单核细胞趋化蛋白-1)似乎仅与CCR2相互作用，而不与迄今为止鉴定的任何其他趋化因子受体相互作用。MCP-1是强大的趋化因子并且由心肌细胞、血管内皮细胞、成纤维细胞、软骨细胞、平滑肌细胞、系膜细胞、肺泡细胞、T淋巴细胞、巨噬细胞等表达。在被其同源配体MCP-1活化后，CCR2受体信号级联放大(signaling cascade)涉及磷脂酶、蛋白激酶和脂质激酶(lipid kinase)的活化。
[0004] CCR2介导的单核细胞募集是导致发生动脉粥样硬化的最早期步骤之一。CCR2由单核细胞表达并且对于这些细胞很好地迁移至CCR2之配体MCP-1高度表达的动脉来说是至关重要的。在动脉粥样硬化的实验模型中，动脉斑块形成依赖于CCR2和MCP-1的完整性，原因是任一基因的缺失导致降低在否则发生严重疾病之小鼠中的粥样硬化病变形成(Gu等，Mol.Cell2：275-281(1998)；Boring等，Nature394：894-897(1998)；Boring等，J.Clin.Invest.100：2552-2561(1997))。单核细胞向炎性组织的浸润以及其向巨噬细胞的分化也提供了数种促炎性调质(modulator)的第二来源，所述促炎调质包括肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1(IL-1)、IL-8(CXC趋化因子亚家族的成员)、IL-12、花生四烯酸代谢物(例如，PGE2和LTB4)、氧衍生自由基(oxygen-derived free radical)、基质金属蛋白酶和补体组分(complement component)。
[0005] 慢性炎性疾病的动物模型研究已证明，通过拮抗剂抑制MCP-1与CCR2之间的结合抑制了炎性应答。已表明抑制发生关节炎、哮喘和葡萄膜炎的MCP-1拮抗剂(MCP-1的抗体或可溶性失活片段)抑制单核细胞迁移。MCP-1和CCR2二者敲除(knockout，KO)小鼠已证明，单核细胞向炎性病变中的浸润显著降低。单核细胞的CCR2介导性迁移被认为是人多发性硬化(multiple sclerosis，MS)的致病原因，因为在MS患者的脑脊液中观察到了CCR2和MCP-1表达。在人MS的小鼠模型(即实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis，EAE))中，CCR2或MCP-1缺陷预防EAE的发生(Izikson等，Clin.Immunol.103：125-131(2002)；Huang 等，J.Exp.Med.193：713-726(2001)；Fife等，J.Exp.Med.192：899-905(2000)；Karpus等，J.Leukoc.Biol.62：681-687(1997))。在类风湿性关节炎和克罗恩病中用TNF-α拮抗剂(例如，单克隆抗体和可溶性受体)治疗期间看到的改善还与MCP-1表达和浸润性巨噬细胞数目的降低相关。另外，最近有人提出了CCR2影响肥胖和相关脂肪组织炎症和全身胰岛素抗性的发生，并且在一旦确立肥胖及其代谢结果后在维持脂肪组织巨噬细胞和胰岛素抗性中发挥作用(Weisberg等，J.Clin.Invest.，116：115-124(2006))。此外，CCR2信号传导可在神经性疼痛中发挥致病作用。还表明缺乏CCR2使小鼠疼痛模型中的炎性和神经性疼痛降低，表明神经组织中巨噬细胞和小胶质细胞(microglia)的募集和活化在疼痛状态中发挥重要作用(Abbadie等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA.100：7947-7952(2003))。
[0006] 已将MCP-1与CCR2之间的相互作用与炎性疾病的病理学联系起来，所述疾病例如银屑病、葡萄膜炎、动脉粥样硬化、类风湿性关节炎、多发性硬化、克罗恩病、炎性肠病、肾炎、器官同种异体移植排斥、纤维化肺、肾功能不全、肾纤维化、糖尿病和糖尿病并发症、糖尿病性肾病、糖尿病性视网膜病、糖尿病性视网膜炎、糖尿病性微血管病、肥胖、糖尿病和其他形式的神经病、神经性疼痛(包括与糖尿病相关的神经性疼痛)、结核病、结节病、侵袭性葡萄球菌感染(invasive staphylococcia)、白内障手术后炎症、变应性鼻炎、变应性结膜炎、慢性荨麻疹、慢性阻塞性肺病(COPD)、变应性哮喘、HIV相关痴呆症、牙周病、牙周炎、牙龈炎、齿龈病、舒张性心肌病、心肌梗死、心肌炎、慢性心力衰竭、血管狭窄、再狭窄、再灌注障碍(reperfusion disorder)、肾小球肾炎、实体瘤和癌症、慢性淋巴细胞性白血病、慢性髓细胞性白血病、多发性骨髓瘤、恶性骨髓瘤、霍奇金病、以及膀胱癌、乳腺癌、子宫颈癌、结肠癌、直肠癌、肺癌、前列腺癌和胃癌(参见，例如Rollins，Mol. Med.Today，2：198-204(1996)；Dawson等，Expert Opin.Ther.Targets，7(1)：35-48，(2003))，Connor等，Gut，153：1287-1294；Ali-Osman Jr 等，J.Surg.Res.，144：350-351(2008)；Cid 等，Rheumatology，45(11)：1356-1363(2006)；Wada 等，Inflammation and regeneration，
23(5)：567-572(2004)。
23(5)：567-572(2004)。
[0007] 仍需要可用于预防或治疗CCR2介导的炎性疾病或障碍的其他CCR2拮抗剂。本文描述的本发明的一方面是基于以下发现：用某些吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-醇分子使炎性病症中MCP-1/CCR2途径的活化降低可有效地降低对象的症状。
[0008] WO98/54093和WO2004052286公开了作为酪氨酸激酶抑制剂的吡唑并[1，5-a]嘧啶衍生物，其用于治疗癌症、糖尿病性视网膜病、动脉粥样硬化和炎性疾病。WO93/17023公开了作为血管紧张素(II)受体拮抗剂的吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-醇衍生物，其用于治疗心血管疾病，尤其是动脉粥样硬化和高血压。另一些吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-醇衍生物作为黄病毒(fiavivirus)复制抑制剂而在WO2007/005541中公开，并且作为雄性激素抑制剂而在WO92/06096中公开。
[0009] CCR2、癌症和转移
[0010] CCR2和MCP-1(以及其他结合CCR2的趋化因子，如CCL7、CCL8和CCL13配体)(Yoshie等，2001)与多种癌症的生长、确立和转移扩散密切相关。一般而言，认为CCR2介导的巨噬细胞和免疫抑制性骨髓细胞对肿瘤和转移细胞的吸引是所涉及的主要机制，但是多种骨髓祖细胞的活动化也可发挥作用。特别有趣的是有很多这样的观察结果：在许多肿瘤类型中，MCP-1水平与侵袭性、侵袭、巨噬细胞含量和血管发生相关联。血浆CCL2水平在癌症患者中倾向于升高并且与乳腺癌(Dwyer等，.2007)、卵巢癌(Hefler等，1999)和肺癌(Cai等，2009)患者的肿瘤阶段相关。
[0011] CCR2受体和MCP-1/CCL2的多态性与人的癌症发生率显著相关，包括前列腺癌、膀胱癌、乳腺癌和子宫颈癌(Zafiropoulos等，2004；Coelho等，2005；Narter等，2010)和子宫颈癌(Chatterjee等，2010；Sun等，2011)。
[0012] 其中与MCP-1和CCR2相关的癌症包括黑素瘤(Graves等，1992；Koga等2008；Zheng等，1999，)、卵巢癌(Negus等，1995)、乳腺癌(Saji等，2001；Soria等，2008；Soria和Ben Baruch2008；Mestdagt等2004；Chavey等，2007；Valkovic等，1998；Ueno等，2000；
Valkovic等，2005；Salcedo等，2000)、食管癌(Ohta等，2002；Koide等，2004)、胃癌(Ohta等，2003；Kuroda等，2005；Futagami等，2008)、肾细胞癌(Lukesova等，2008)、肺癌(Cai等，2009；Wong等，2008；Niiya等，2003)、结肠癌(Bailey等，2007)、甲状腺癌(Tanaka等，
2009)、白血病(Mazur等，2007)、多发性骨髓瘤(Arendt等，2002；Johrer等，2004；Van de Broeke等，2003；Pellegrino等，2005)和前列腺癌(Lu等，2007a)。
Valkovic等，2005；Salcedo等，2000)、食管癌(Ohta等，2002；Koide等，2004)、胃癌(Ohta等，2003；Kuroda等，2005；Futagami等，2008)、肾细胞癌(Lukesova等，2008)、肺癌(Cai等，2009；Wong等，2008；Niiya等，2003)、结肠癌(Bailey等，2007)、甲状腺癌(Tanaka等，
2009)、白血病(Mazur等，2007)、多发性骨髓瘤(Arendt等，2002；Johrer等，2004；Van de Broeke等，2003；Pellegrino等，2005)和前列腺癌(Lu等，2007a)。
[0013] 前前腺癌
[0014] 2009年在美国诊断出约200,000例前列腺癌，其中约30,000例死亡(Jemal等，2009)。前列腺癌是美国癌症引起之死亡的第二主要原因；部分原因是一旦转移到骨后疾病就不可治愈了。
[0015] MCP-1促进前列腺癌细胞生长、存活、侵袭和迁移，并且调节与前列腺癌生长和转移密切相关的单核细胞谱系细胞(即，巨噬细胞和破骨细胞)。与局限性前列腺癌和良性前列腺组织相比，前列腺癌转移组织中的CCR2mRNA和蛋白质表达更高并且对应较高的Gleason评分，表明该受体与前列腺癌进展相关(Lu等，2007a)。
[0016] MCP-1通过以旁分泌和自分泌方式活化PI3K/AKT途径来诱发PC-3和VCaP癌细胞增殖(Loberg等，2006；Lu等，2006)。皮下VCaP细胞的生长可被抗MCP-1抗体所抑制，所述抗体还降低巨噬细胞浸润和血管供应(vascularity)(Loberg等2007a)。在转移性定殖实验中，抑制MCP-1严重地抑制了总体肿瘤细胞存活，并且甚至引起消退(Loberg等，2007b)，并且抑制骨的定殖(Li等，2009，Lu等，2009)。
[0017] 转移
[0018] 骨组织中转移的确立需要破骨细胞介导的骨吸收(Pienta和Loberg，2005；Taichman等，2007)。MCP-1促进前破骨细胞(pre-osteoclast cell)融合，导致形成破骨细胞(Lu等，2007b)，并且还参与促进CD11b+细胞分化为破骨细胞(Mizutani等，2009)。
数种癌主要转移至骨，包括肺癌、乳腺癌、肾癌、甲状腺癌和多发性骨髓瘤(参见Craig和Loberg，2006)。多于90％的晚期前列腺癌患者表现出骨转移的迹象(Shah等，2004)。
数种癌主要转移至骨，包括肺癌、乳腺癌、肾癌、甲状腺癌和多发性骨髓瘤(参见Craig和Loberg，2006)。多于90％的晚期前列腺癌患者表现出骨转移的迹象(Shah等，2004)。
[0019] MCP-1在骨定向转移的发生中发挥核心作用。Lu和Kang(2009)表明，使用提高MCP-1表达的人乳腺肿瘤系(human breast tumour line)促进了肺转移和骨转移以及继发性肿瘤的后续生长。因此，因为以上原因，预计CCR2阻断将有效地抑制骨转移的生长以及其在肺中的接种(seeding)。
[0020] 肝是结直肠癌转移的主要部位，结直肠癌是癌症相关死亡率的主要原因。然而，肝切除术很少有疗效，有60～70％的病例发生复发。MCP-1可在肝转移中高度表达，并且高的水平与不良预后相关，MCP-1表达随癌症分期而明显升高(即，与增加的转移效力相关，Bailey等，2007；Yoshimode等，2009)。
[0021] 与肝肿瘤相关之成纤维细胞和正常成纤维细胞二者在TNFα的影响下均表达MCP-1(Muller等，2007，2010)，表明与肿瘤相关的成纤维细胞来自炎性条件下的正常肝基质。
[0022] 因此，大量证据证明，MCP-1和CCR2参与癌症的生长和发展，特别是癌症相关细胞(如巨噬细胞)的募集。因为以上原因，所以预计CCR2抑制剂将可用于治疗癌症，尤其是用于限制转移扩散(来自多种类型的癌症)，并且降低巨噬细胞和骨髓细胞向原发性肿瘤的募集，从而降低肿瘤生长和血管形成。特别是，预计CCR2抑制剂将可用于抑制转移性肿瘤细胞从原发性肿瘤部位的扩散。
发明内容
[0023] 出乎意料地发现，通式(I)的新的吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-醇化合物是CCR2受体的拮抗剂，并且可降低参与伤害感受和炎性过程之MCP-1/CCR2途径的活化。因此，所述化合物可潜在地用于治疗或预防疼痛和炎性疾病，以及用于抑制转移性肿瘤细胞从原发性肿瘤部位的扩散。因此，本发明涉及式(I)的化合物或者其可药用盐、溶剂合物、水合物、几何异构体、互变异构体、光学异构体或N-氧化物，
[0024]
[0025] 其中：1 5
[0026] R 至R 各自独立地选自氢、卤素、氰基、C1-4-烷基、C1-4-烷氧基、氟-C1-4-烷基和氟-C1-4-烷氧基；6
[0027] R 选自C1-6-烷基、氟-C1-6-烷基、羟基-C1-6-烷基、C1-4-烷氧基-C1-4-烷基、C3-5-环烷基、C1-6-烷基羰基、C1-6-烷氧基羰基、-CO2H、杂环基、杂环基-C1-4-烷基、杂芳基和杂芳基-C1-4-烷基，其中任意杂芳基任选地被C1-4-烷基所取代；
[0028] R7选自氢、卤素、氰基、C1-4-烷基和-C(O)N(R8A)(R8B)；
[0029] A选自-CH(R9)-、-N(R10)-、-O-和-S-；
[0030] R8A和R8B各自独立地选自氢、C1-4-烷基、C2-4-烯基、氰基-C1-4-烷基、C1-4-烷氧11A 11B
基-C1-4-烷基、C1-4-烷基硫-C1-4-烷基、-C1-4-亚烷基-N(R )(R )、苯基-C1-4-烷基、苯氧基-C1-4-烷基、杂芳基-C1-4-烷基和杂环基-C1-4-烷基；
基-C1-4-烷基、C1-4-烷基硫-C1-4-烷基、-C1-4-亚烷基-N(R )(R )、苯基-C1-4-烷基、苯氧基-C1-4-烷基、杂芳基-C1-4-烷基和杂环基-C1-4-烷基；
[0031] 或
[0032] R8A和R8B与它们所结合的氮原子一起形成4至6元饱和杂环，所述环任选地包含选自氮和氧的另外的杂原子，并且所述环任选地被C1-4-烷基所取代；
[0033] R9和R10各自选自氢和C1-4-烷基；
[0034] R11A和R11B各自独立地选自氢、C1-4-烷基和苯基；
[0035] 或
[0036] R11A和R11B与它们所结合的氮原子一起形成4至6元饱和杂环，所述环任选地包含选自氮和氧的另外的杂原子，并且所述环任选地被C1-4-烷基所取代；
[0037] 前提是R1至R5中的至少一个选自卤素、氰基、C1-4-烷基、C1-4-烷氧基、氟-C1-4-烷基或氟-C1-4-烷氧基；并且
[0038] 前提是所述化合物不选自：
[0039] ·6-[(2-氯-4-氟苯基)甲基]-7-羟基-5-甲基-N-(3-吡啶基甲基)-吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酰胺、
[0040] ·N-(2-氰乙基)-6-[(4-氟苯基)甲基]-7-羟基-N，5-二甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酰胺、
[0041] ·6-[(2-氯-4-氟苯基)甲基]-7-羟基-5-甲基-N-(2-苯乙基)-吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酰胺、
[0042] ·7-羟基-5-甲基-6-(苯甲基)-吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲腈、
[0043] ·N-[2-(丁基甲基氨基)乙基]-6-[(2-氟苯基)甲基]-7-羟基-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酰胺、
[0044] ·6-[(4-氯苯基)甲基]-7-羟基-N，5-二甲基-N-(苯甲基)-吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酰胺、
[0045] ·6-[(3-氯苯基)甲基]-7-羟基-5-甲基-N-(2-苯乙基)-吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酰胺、
[0046] ·N-丁基-6-[(4-氟苯基)甲基]-7-羟基-N，5-二甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酰胺、
[0047] ·N-丁基-6-[(2-氯苯基)甲基]-7-羟基-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酰胺、
[0048] ·[6-[(4-氯苯基)甲基]-7-羟基-5-甲基吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-基]-1-吡咯烷基-甲酮、
[0049] ·[6-[(3-甲基苯基)甲基]-7-羟基-5-甲基吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-基][4-乙基-1-哌嗪基]-甲酮、
[0050] ·6-[(2-氯-4-氟苯基)甲基]-7-羟基-5-甲基-N-[3-(4-吗啉基)丙基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酰胺、
[0051] ·6-[(4-氯苯基)甲基]-7-羟基-N-(2-甲氧基乙基)-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酰胺、
[0052] ·[6-[(2-氟苯基)甲基]-7-羟基-5-甲基吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-基]-1-哌啶基-甲酮、
[0053] ·N-[3-(2-乙基-1-哌啶基)丙基]-6-[(2-氟苯基)甲基]-7-羟基-5-甲基吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酰胺、
[0054] ·6-[(2-氟苯基)甲基]-7-羟基-5-甲基-N-(2-苯乙基)-吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酰胺、
[0055] ·[6-[(4-氯苯基)甲基]-7-羟基-5-甲基吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-基]-1-哌啶基-甲酮、
[0056] ·6-[(2-氟苯基)甲基]-7-羟基-N，5-二甲基-N-(苯甲基)-吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酰胺、
[0057] ·N-[2-(二甲氨基)乙基]-6-[(2-氟苯基)甲基]-7-羟基-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酰胺、
[0058] ·[6-[(2-氯苯基)甲基]-7-羟基-5-甲基吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-基]-1-吡咯烷基-甲酮、
[0059] ·[6-[(2-氯-4- 氟 苯 基 )甲 基]-7- 羟 基-5- 甲 基 吡 唑 并[1，5-a] 嘧啶-3-基]-1-吡咯烷基-甲酮、
[0060] ·[6-[(4-氯苯基)甲基]-7-羟基-5-甲基吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-基]-4-吗啉基-甲酮、
[0061] ·[6-[(4-甲基苯基)甲基]-7-羟基-5-甲基吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-基]-1-吡咯烷基-甲酮、
[0062] ·6-[(4-氟苯基)甲基]-7-羟基-5-甲基-N-[2-(4-吗啉基)乙基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酰胺、
[0063] ·[6-[(2-氯-4- 氟 苯 基 )甲 基]-7- 羟 基-5- 甲 基 吡 唑 并[1，5-a] 嘧啶-3-基]-4-吗啉基-甲酮、
[0064] ·6-[(2-氯苯基)甲基]-7-羟基-5-甲基-N-(苯甲基)-吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酰胺、
[0065] ·6-[(2-氟苯基)甲基]-N-(2-呋喃基甲基)-7-羟基-N，5-二甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酰胺、
[0066] ·6-[(4-氯苯基)甲基]-N-[3-(二乙氨基)丙基]-7-羟基-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酰胺、
[0067] ·N-[2-(乙基苯基氨基)乙基]-6-[(2-氟苯基)甲基]-7-羟基-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酰胺、
[0068] ·6-[(2-氯苯基)甲基]-7-羟基-5-甲基-N-(1-甲基丙基)-吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酰胺、和
[0069] ·6-[(2-氟苯基)甲基]-7-羟基-N，5-二甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酰胺。
[0070] 本发明的另一个目的是用于治疗的如上文所定义的式(I)的化合物，前提是所述化合物不选自：
[0071] ·N-[2-(乙基苯基氨基)乙基]-6-[(2-氟苯基)甲基]-7-羟基-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酰胺、
[0072] ·6-[(2-氯苯基)甲基]-7-羟基-5-甲基-N-(1-甲基丙基)-吡唑并[1，5-a]-嘧啶-3-甲酰胺、和
[0073] ·6-[(2-氟苯基)甲基]-7-羟基-N，5-二甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酰胺。
[0074] R1至R5
[0075] 基团R1、R2、R3、R4和R5，R1至R5各自独立地选自氢；卤素，如氟、氯、溴；氰基；C1-4-烷基，例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基；C1-4-烷氧基，例如甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、仲丁氧基和叔丁氧基；
氟-C1-4-烷基，例如氟甲基、三氟甲基、2-氟乙基和2，2，2-三氟乙基；以及氟-C1-4-烷氧基，例如三氟甲氧基和2，2，2-三氟乙氧基。
氟-C1-4-烷基，例如氟甲基、三氟甲基、2-氟乙基和2，2，2-三氟乙基；以及氟-C1-4-烷氧基，例如三氟甲氧基和2，2，2-三氟乙氧基。
[0076] 在一个优选实施方案中，R1至R5独立地选自氢、卤素、甲基、甲氧基、CF3和OCF3。1 5
在另一个更优选实施方案中，R 至R 独立地选自氢、氟、氯、溴和CF3。
在另一个更优选实施方案中，R 至R 独立地选自氢、氟、氯、溴和CF3。
[0077] 在一些替代的优选实施方案中，R1是氢，并且R2至R5独立地选自氟、氯、溴和CF3；1 5 2 4 1 2 5
或者R 和R 是氢，并且R-R 各自独立地选自氟、氯、溴和CF3；或者R、R 和R 是氢，并且
2 3 1 3 5 2 4
R 和R 各自独立地选自氟、氯、溴和CF3；或者R、R 和R 是氢，并且R 和R 各自独立地选
1 2 4 5 3 1 3 4
自氟、氯、溴和CF3；或者R、R、R 和R 是氢，并且R 选自氟、氯、溴和CF3；或者R、R、R 和
5 2 2 3 2
R 是氢，并且R 选自氟、氯、溴和CF3。特别优选的是，R 和R 独立地选自氟和CF3；或者R和R4独立地选自氟和CF3。
或者R 和R 是氢，并且R-R 各自独立地选自氟、氯、溴和CF3；或者R、R 和R 是氢，并且
2 3 1 3 5 2 4
R 和R 各自独立地选自氟、氯、溴和CF3；或者R、R 和R 是氢，并且R 和R 各自独立地选
1 2 4 5 3 1 3 4
自氟、氯、溴和CF3；或者R、R、R 和R 是氢，并且R 选自氟、氯、溴和CF3；或者R、R、R 和
5 2 2 3 2
R 是氢，并且R 选自氟、氯、溴和CF3。特别优选的是，R 和R 独立地选自氟和CF3；或者R和R4独立地选自氟和CF3。
[0078] R6
[0079] 基团R6选自C1-6-烷基，例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基以及直链和支链的戊基和己基；氟-C1-6-烷基，例如氟甲基、三氟甲基、2-氟乙基和2，2，2-三氟乙基；羟基-C1-6-烷基，例如羟甲基、2-羟乙基、2-羟丙基和2-羟基-2-甲基丙基；C1-4-烷氧基-C1-4-烷基，例如甲氧基甲基、甲氧基乙基、乙氧基乙基、异丙氧基乙基、正丁氧基乙基和叔丁氧基乙基；C3-5-环烷基，例如环丙基、环丁基、环戊基；C1-6-烷基羰基，例如甲基羰基(乙酰基)、乙基羰基和正丙基羰基；C1-6-烷氧基羰基，例如甲氧基羰基、乙氧基羰基和异丙氧基羰基；-CO2H；杂环基，例如哌啶基、四氢吡喃基、四氢呋喃基、氧杂环丁基(oxetanyl)、氮杂环丁基(azetidinyl)、吡咯烷基、吗啉基、咪唑烷基、硫代吗啉基、二烷基、哌嗪基和高哌嗪基；杂环基-C1-4-烷基，例如哌啶-1-基甲基、哌啶-4-基甲基和吗啉-4-基甲基；杂芳基，例如呋喃基、吡咯基、噻吩基、 唑基、异 唑基、咪唑基、噻唑基、异噻唑基、吡啶基、嘧啶基、四唑基、喹唑啉基、吲哚基、二氢吲哚基、异吲哚基、异二氢吲哚基、吡唑基、哒嗪基、吡嗪基、喹啉基、喹喔啉基(quinoxalinyl)、 二唑基、噻二唑基、苯并呋喃基、2，3-二氢苯并呋喃基、1，3-苯并间二氧杂环戊烯基(1，3-benzodioxolyl)、1，4-苯并二氧杂环庚烯基(1，4-benzodioxinyl)、苯并噻唑基、苯并咪唑基、苯并三唑基和苯并二氢吡喃基(chromanyl)；以及杂芳基-C1-4-烷基，例如2-(吡啶-2-基)-乙基和1，2，4- 二唑-5-基甲基，其中任意杂芳基任选地被C1-4-烷基所取代。
[0080] 在另一个优选实施方案中，R6选自C1-4-烷基、氟-C1-4-烷基、羟基-C1-4-烷基、6
C1-4-烷氧基-C1-4-烷基、C3-5-环烷基和C1-4-烷氧基羰基。更优选地，R 选自C1-3-烷基，例如甲基、乙基、丙基、异丙基；C3-4-环烷基，例如环丙基或环丁基；和C1-3-烷氧基羰基，例如
6
甲氧基羰基、乙氧基羰基和异丙氧基羰基。而更优选地，R 选自乙基、异丙基、环丙基或环丁
6
基。在一个特别优选的实施方案中，R 选自异丙基或环丙基。
C1-4-烷氧基-C1-4-烷基、C3-5-环烷基和C1-4-烷氧基羰基。更优选地，R 选自C1-3-烷基，例如甲基、乙基、丙基、异丙基；C3-4-环烷基，例如环丙基或环丁基；和C1-3-烷氧基羰基，例如
6
甲氧基羰基、乙氧基羰基和异丙氧基羰基。而更优选地，R 选自乙基、异丙基、环丙基或环丁
6
基。在一个特别优选的实施方案中，R 选自异丙基或环丙基。
[0081] R7
[0082] R7选自氢；卤素，例如氟、氯、溴；氰基；C1-4-烷基，例如甲基、乙基、正丙基、异丙基8A 8B 7
和-C(O)N(R )(R )。在一个优选实施方案中，R 是氢。
和-C(O)N(R )(R )。在一个优选实施方案中，R 是氢。
[0083] A
[0084] 基团A选自-CH(R9)-、-N(R10)-、-O-和-S-，其中R9和R10如上文所定义，例如氢、9 9
或甲基、乙基、正丙基、异丙基。在一个优选实施方案中，A选自-CH(R)-(其中R 如上文所
9 9
定义和讨论)和-O-。当A是-CH(R)-时，一个目前优选的实施方案是R 为氢。
或甲基、乙基、正丙基、异丙基。在一个优选实施方案中，A选自-CH(R)-(其中R 如上文所
9 9
定义和讨论)和-O-。当A是-CH(R)-时，一个目前优选的实施方案是R 为氢。
[0085] R8A和R8B
[0086] 基团R8A和R8B各自独立地选自氢；C1-4-烷基，例如甲基、乙基、正丙基、异丙基；C2-4-烯基，例如烯丙基；氰基-C1-4-烷基，例如氰乙基；C1-4-烷氧基-C1-4-烷基，例如甲氧基甲基、甲氧基乙基、甲氧基丙基、乙氧基乙基、异丙氧基乙基、正丁氧基乙基和叔丁氧基乙基；C1-4-烷基硫-C1-4-烷基，例如2-(甲硫基)乙基(2-(methylsulfanyl)ethyl)和2-(乙
11A 11B
硫基)乙基(2-(ethylsulfanyl)ethyl)；-C1-4-亚烷基-N(R )(R )；苯基-C1-4-烷基，例如苯乙基；苯氧基-C1-4-烷基，例如苯氧基乙基；杂芳基-C1-4-烷基，例如2-吡啶基乙基；和杂环基-C1-4-烷基，例如2-甲基呋喃；
11A 11B
硫基)乙基(2-(ethylsulfanyl)ethyl)；-C1-4-亚烷基-N(R )(R )；苯基-C1-4-烷基，例如苯乙基；苯氧基-C1-4-烷基，例如苯氧基乙基；杂芳基-C1-4-烷基，例如2-吡啶基乙基；和杂环基-C1-4-烷基，例如2-甲基呋喃；
[0087] 或
[0088] 基团R8A和R8B与它们所结合的氮原子一起形成4至6元饱和杂环，所述环任选地包含选自氮和氧的另外的杂原子，并且所述环任选地被C1-4-烷基所取代，此类环系统的实例包括例如吗啉和4-甲基哌嗪。
[0089] 一些特别优选的式(I)化合物是选自以下的化合物：
[0090] ·6-[(4-氯苯基)甲基]-5-甲基吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-醇、
[0091] ·5-甲基-6-{[4-(三氟甲基)苯基]甲基}吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-醇、
[0092] ·3-[(3-氟苯基)甲基]-2-(吡嗪-2-基)咪唑并[1，5-a]嘧啶-4-醇、
[0093] ·5-乙基-6-{[3-氟-5-(三氟甲基)苯基]甲基}吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-醇、[0094] ·6-(3-氟苯氧基)-5-甲基吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-醇、
[0095] ·6-[(4-氯苯基)甲基]-7-羟基吡唑并[1，5-a]嘧啶-5-羧酸甲酯、
[0096] ·6-[(2，3-二氟苯基)甲基]-5-甲基吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-醇、
[0097] ·2-氟-5-({7-羟基-5-甲基吡唑并[1，5-a]嘧啶-6-基}甲基)苄腈、
[0098] ·6-[(3-溴-4-氯苯基)甲基]-5-甲基吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-醇、
[0099] ·6-[(3-甲氧基苯基)甲基]-5-甲基吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-醇、
[0100] ·6-[1-(4-氯苯基)乙基]-5-甲基吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-醇、
[0101] ·6-[(3，5-二氟苯基)甲基]-5-乙基吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-醇、
[0102] ·5-乙基-6-[(3，4，5-三氟苯基)甲基]吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-醇、
[0103] ·6-[(3-氯-4-氟苯基)甲基]-5-乙基吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-醇、
[0104] ·6-{[3-氟-4-(三氟甲基)苯基]甲基}-5-丙基吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-醇、[0105] ·6-[(3，4-二氯苯基)甲基]-5-丙基吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-醇、
[0106] ·6-苄基-5-环丙基吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-醇、
[0107] ·5-环丙基-6-{[4-(三氟甲氧基)苯基]甲基}吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-醇、[0108] ·5-环丙基-6-{[3-(三氟甲氧基)苯基]甲基}吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-醇、[0109] ·6-[(3-氯苯基)甲基]-5-环丙基吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-醇、
[0110] ·5-环丙基-6-{[3-(三氟甲基)苯基]甲基}吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-醇、
[0111] ·5-环丙基-6-{[4-(三氟甲基)苯基]甲基}吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-醇、
[0112] ·5-环丙基-6-[(3，4-二氟苯基)甲基]吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-醇、
[0113] ·5-环丙基-6-[(3，5-二氟苯基)甲基]吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-醇、
[0114] ·5-环丙基-6-[(3，4，5-三氟苯基)甲基]吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-醇、
[0115] ·6-[(4-氯-3-氟苯基)甲基]-5-环丙基吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-醇、
[0116] ·6-[(3-氯-4-氟苯基)甲基]-5-环丙基吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-醇、
[0117] ·6-[(3-氯-5-氟苯基)甲基]-5-环丙基吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-醇、
[0118] ·5-环丙基-6-[(3，4-二氯苯基)甲基]吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-醇、
[0119] ·5-环丙基-6-{[4-氟-3-(三氟甲基)苯基]甲基}吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-醇、[0120] ·5-环丙基-6-{[3-氟-5-(三氟甲基)苯基]甲基}吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-醇、[0121] ·5-环丙基-6-[(3，5-二氯苯基)甲基]吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-醇、
[0122] ·6-[(3，4-二氟苯基)甲基]-5-(丙-2-基)吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-醇、
[0123] ·5-(丙-2-基)-6-[(3，4，5-三氟苯基)甲基]吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-醇、[0124] ·6-[(3-氯-4-氟苯基)甲基]-5-(丙-2-基)吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-醇、
[0125] ·6-[(4-氯-3-氟苯基)甲基]-5-(丙-2-基)吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-醇、
[0126] ·6-[(3-氯-5-氟苯基)甲基]-5-(丙-2-基)吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-醇、
[0127] ·6-{[4-氟-3-(三氟甲基)苯基]甲基}-5-(丙-2-基)吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-醇、
[0128] ·6-[(3，4-二氯苯基)甲基]-5-(丙-2-基)吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-醇、
[0129] ·6-[(3，5-二氯苯基)甲基]-5-(丙-2-基)吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-醇、
[0130] ·6-[(3-氯苯基)甲基]-5-环丁基吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-醇、
[0131] ·6-[(4-氯苯基)甲基]-5-环丁基吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-醇、
[0132] ·5-环丁基-6-[(3，4-二氟苯基)甲基]吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-醇、
[0133] ·6-[(3-氯-4-氟苯基)甲基]-5-环丁基吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-醇、
[0134] ·5-环丁基-6-{[4-氟-3-(三氟甲基)苯基]甲基}吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-醇、[0135] ·5-环丁基-6-{[3-氟-5-(三氟甲基)苯基]甲基}吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-醇、[0136] ·5-环丁基-6-[(3，4，5-三氟苯基)甲基]吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-醇、
[0137] ·5-环丁基-6-[(3，4-二氯苯基)甲基]吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-醇、
[0138] ·6-[(4-氯苯基)甲基]-5-(甲氧基甲基)吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-醇、
[0139] ·6-[(4-氯-3-氟苯基)甲基]-5-(甲氧基甲基)吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-醇；
[0140] ·6-[(3，4-二氯苯基)甲基]-5-(甲氧基甲基)吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-醇、[0141] ·6-[(4-氯苯基)甲基]-5-(2-甲氧基乙基)吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-醇、
[0142] ·6-[(3，4-二氯苯基)甲基]-5-(三氟甲基)吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-醇、
[0143] ·6-[(3，4-二氯苯基)甲基]-5-(氧杂环戊-2-基)吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-醇、[0144] ·6-[(4-氯苯基)甲基]-3，5-二甲基吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-醇、
[0145] ·3-溴-6-[(4-氯苯基)甲基]-5-甲基吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-醇、
[0146] ·6-[(4-氯苯基)甲基]-7-羟基-5-甲基吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲腈、
[0147] ·6-(3，4-二氯苯氧基)-5-甲基吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-醇、
[0148] ·5-乙基-6-[3-(三氟甲基)苯氧基]吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-醇、
[0149] ·6-(3，4-二氟苯氧基)-5-乙基吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-醇
[0150] ·6-(3-氯-4-氟苯氧基)-5-乙基吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-醇、
[0151] ·6-(3，4-二氯苯氧基)-5-乙基吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-醇、
[0152] ·6-(4-溴苯氧基)-5-环丙基吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-醇、
[0153] ·6-(4-溴苯氧基)-5-(丙-2-基)吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-醇、
[0154] ·6-(4-氯-3-氟苯氧基)-5-(丙-2-基)吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-醇、
[0155] ·6-(3，4-二氯苯氧基)-5-(丙-2-基)吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-醇、
[0156] ·6-[(3-氟苯基)甲基]-7-羟基吡唑并[1，5-a]嘧啶-5-羧酸甲酯、
[0157] ·6-[(3-氯苯基)甲基]-7-羟基吡唑并[1，5-a]嘧啶-5-羧酸乙酯、
[0158] ·7-羟基-6-{[3-(三氟甲基)苯基]甲基}吡唑并[1，5-a]嘧啶-5-羧酸乙酯、[0159] ·6-[(3，4-二氯苯基)甲基]-7-羟基吡唑并[1，5-a]嘧啶-5-羧酸乙酯、
[0160] ·6-[(3-氟苯基)甲基]-7-羟基吡唑并[1，5-a]嘧啶-5-羧酸乙酯、
[0161] ·6-[(4-氯-3-氟苯基)甲基]-7-羟基吡唑并[1，5-a]嘧啶-5-羧酸乙酯、
[0162] ·6-(4-氯-3-氟苯氧基)-7-羟基吡唑并[1，5-a]嘧啶-5-羧酸乙酯、
[0163] ·6-(3，4-二氯苯氧基)-7-羟基吡唑并[1，5-a]嘧啶-5-羧酸乙酯、
[0164] ·6-[(3-氟苯基)硫烷基]-5-甲基吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-醇、
[0165] ·6-[(3-氟苯基)氨基]-5-甲基吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-醇、
[0166] ·6-[乙基(3-氟苯基)氨基]-5-甲基吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-醇、
[0167] ·6-[(3-氟苯基)(甲基)氨基]-5-甲基吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-醇、
[0168] ·6-[(3-氯苯基)甲基]-7-羟基吡唑并[1，5-a]嘧啶-5-羧酸甲酯
[0169] ·6-[(3-氯苯基)甲基]-7-羟基吡唑并[1，5-a]嘧啶-5-羧酸-丙-2-基酯、[0170] ·6-[(3，4-二氯苯基)甲基]-7-羟基吡唑并[1，5-a]嘧啶-5-羧酸甲酯、
[0171] ·6-[(3，4-二氯苯基)甲基]-7-羟基吡唑并[1，5-a]嘧啶-5-羧酸-丙-2-基酯、
[0172] ·6-[(3-氯苯基)甲基]-7-羟基吡唑并[1，5-a]嘧啶-5-羧酸、
[0173] ·7-羟基-6-{[3-(三氟甲基)苯基]甲基}吡唑并[1，5-a]嘧啶-5-羧酸-丙-2-基酯、
[0174] ·6-[(3-氯-4-氟-苯基)甲基]-7-羟基吡唑并[1，5-a]嘧啶-5-羧酸-丙-2-基酯、
[0175] ·6-[(4-氯-3-氟苯基)甲基]-7-羟基吡唑并[1，5-a]嘧啶-5-羧酸-丙-2-基酯、
[0176] ·6-(3，4-二氯苯氧基)-7-羟基吡唑并[1，5-a]嘧啶-5-羧酸甲酯、
[0177] ·6-[(4-氯苯基)甲基]-5-(羟甲基)吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-醇、
[0178] ·6-[(4-氯苯基)甲基]-5-(吗啉-4-基甲基)吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-醇；
[0179] ·6-[(3-氟苯基)甲基]-5-(3-甲基-1，2，4- 二唑-5-基)吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-醇、
[0180] ·6-[(3-氟苯基)甲基]-5-(2-羟基丙-2-基)吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-醇、
[0181] ·1-{6-[(3-氟苯基)甲基]-7-羟基吡唑并[1，5-a]嘧啶-5-基}乙-1-酮、
[0182] ·6-[(3-氟苯基)甲基]-5-(1-羟基乙基)吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-醇、
[0183] ·1-{6-[(3，4-二氯苯基)甲基]-7-羟基吡唑并[1，5-a]嘧啶-5-基}乙-1-酮、[0184] ·1-{6-[(3，4-二氯苯基)甲基]-7-羟基吡唑并[1，5-a]嘧啶-5-基}丙-1-酮、[0185] ·6-[(4-氯苯基)甲基]-5-[(3-甲基-1，2，4- 二唑-5-基)甲基]吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-醇、
[0186] ·6-[(4-氯苯基)甲基]-7-羟基-N，5-二甲基吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酰胺、[0187] ·6-[(4-氯苯基)甲基]-7-羟基-N，N，5-三甲基吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酰胺、
[0188] ·6-[(4-氯苯基)甲基]-7-羟基-5-甲基-N-[(2R)-氧杂环戊-2-基甲基]吡唑并-[1，5-a]嘧啶-3-甲酰胺、
[0189] ·7-羟基-N-(2-甲氧基乙基)-5-甲基-6-[(4-甲基苯基)甲基]吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酰胺、
[0190] ·6-苄基-7-羟基-5-甲基-N-(2-苯氧基乙基)吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酰胺、
[0191] ·6-[(4-氯苯基)甲基]-5-甲基-3-[(4-甲基哌嗪-1-基)羰基]吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-醇、
[0192] ·6-[(4-氯苯基)甲基]-7-羟基-5-甲基-N-(2-苯乙基)吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酰胺、
[0193] ·6-[(4-氯苯基)甲基]-7-羟基-5-甲基-N-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[1，5-a]-嘧啶-3-甲酰胺、
[0194] ·6-[(4-氯苯基)甲基]-7-羟基-5-甲基-N-[2-(甲硫基)乙基]吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酰胺、
[0195] ·6-[(4-氯苯基)甲基]-N-(2-氰乙基)-7-羟基-N，5-二甲基吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酰胺、
[0196] ·6-[(4-氯苯基)甲基]-7-羟基-5-甲基-N-(氧杂环戊-2-基甲基)吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酰胺、
[0197] ·7-羟基-5-甲基-6-[(4-甲基苯基)甲基1-N-[2-(吡啶-2-基)乙基]吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酰胺、
[0198] ·6-苄基-7-羟基-N-(3-甲氧基丙基)-5-甲基吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酰胺、[0199] ·7-羟基-N-(2-甲氧基乙基)-5-甲基-6-{[4-(三氟甲基)苯基]甲基}吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酰胺、
[0200] ·5-甲基-3-(吗啉-4-基羰基)-6-{[4-(三氟甲基)苯基]乙基}吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-醇、
[0201] ·6-[(3，4-二氯苯基)甲基]-7-羟基-N-(2-甲氧基乙基)-5-甲基吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酰胺、
[0202] ·6-[(3-氯苯基)甲基]-7-羟基-N-(2-甲氧基乙基)-5-甲基吡唑并[1，5-a]-嘧啶-3-甲酰胺、
[0203] ·6-[(4-氯苯基)甲基]-5-乙基-7-羟基-N-(2-甲氧基乙基)吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酰胺、
[0204] ·6-[(4-氯苯基)甲基]-7-羟基-N-(2-甲氧基乙基)-5-(甲氧基甲基)-吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酰胺、
[0205] ·6-[(3，4-二氯苯基)甲基]-5-乙基吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-醇、和
[0206] ·5-环丙基-6-{[3-氟-4-(三氟甲基)苯基]甲基}吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-醇。
[0207] 式(I)的化合物可用作CCR2受体的拮抗剂。由此，它们可用于治疗或预防这样的医学病症和疾病，其中对MCP-1/CCR2途径的调节是有益的，例如疼痛和炎性疾病。特别地，认为式(I)的化合物可用于治疗或预防银屑病、葡萄膜炎、动脉粥样硬化、类风湿性关节炎、多发性硬化、炎性肠病、克罗恩病、肾炎、狼疮和狼疮性肾炎、器官同种异体移植排斥、纤维化肺、肾功能不全、IgA肾病、肾纤维化、糖尿病和糖尿病并发症、糖尿病性肾病、糖尿病性视网膜病、糖尿病性视网膜炎、糖尿病性微血管病、肥胖、糖尿病性神经病和其他形式的神经病、神经性疼痛(包括与糖尿病相关的神经性疼痛)、慢性疼痛、巨细胞动脉炎和其他血管炎性疾病、结核病、结节病、侵袭性葡萄球菌感染、白内障手术后炎症、变应性鼻炎、变应性结膜炎、慢性荨麻疹、慢性阻塞性肺病(COPD)、变应性哮喘、HIV相关痴呆症、牙周病、牙周炎、牙龈炎、齿龈病、舒张性心肌病、心肌梗死、心肌炎、慢性心力衰竭、血管狭窄、再狭窄、再灌注障碍、肾小球肾炎(包括但不限于局灶性肾小球硬化和节段性肾小球硬化、IgA肾小球肾炎、IgM肾小球肾炎、膜增生性肾小球肾炎、膜性肾小球肾炎、微小病变性肾病、血管炎(包括显微镜下多动脉炎、韦格纳肉芽肿病、亨-舍紫癜(Henoch Schonlein purpura)和结节性多动脉炎))、实体瘤和癌症、慢性淋巴细胞性白血病、慢性髓细胞性白血病、多发性骨髓瘤、恶性骨髓瘤、霍奇金病、以及膀胱癌、乳腺癌、子宫颈癌、结肠癌、直肠癌、肺癌、前列腺癌和胃癌。
[0208] 还认为式(I)的化合物可用于抑制转移性肿瘤细胞从原发性肿瘤部位的扩散。
[0209] 因此，本发明的另一个目的是式(I)的化合物在制备用于治疗或预防上述医学病症和疾病的药物中的用途。本发明的又一个目的是用于治疗或预防这些医学病症和疾病的方法，其包括向有此治疗需要的哺乳动物(包括人)施用有效量的如上文所定义的式(I)化合物。
[0210] 本文所述方法包括其中对象被鉴定为需要所具体描述之治疗的那些。鉴定有此治疗需要的对象可以是对象或健康保健专业人员的判断，并且可以是主观的(例如意见(opinion))或客观的(例如，可通过测试或诊断方法测量)。
[0211] 在另一些方面中，本文的方法包括这样的那些，其还包括监测对象对治疗施用的应答。这样的监测可包括对作为治疗方案之标志物或指示的对象组织、流体、标本、细胞、蛋白质、化学标志物、遗传物质等进行周期性采样。在另一些方法中，通过评估此类治疗之适用性的相关标志物或指示来预筛选或鉴定有此治疗需要的对象。
[0212] 在一个实施方案中，本发明提供了一种监测治疗进展的方法。所述方法包括以下步骤：在患有本文所述疾病或症状或者对其易感的对象中测定诊断标志物(Marker)(例如，受本文化合物调控的本文所述的任何靶标或细胞类型)的水平或诊断性测量(例如，筛选、测定)，其中已向所述对象施用了足以治疗其疾病或症状之治疗量的本文化合物。可比较所述方法中测定的标志物水平与健康正常对照或其他患病患者的标志物水平以确定患者的疾病状况。在一些优选实施方案中，在测定第一水平之后的时间点测定对象中标志物的第二水平，并且比较两个水平以监测病程或治疗效力。在某些优选实施方案中，在开始根据本发明的治疗之前，测定对象中标志物的治疗前水平；然后可比较标志物的该治疗前水平与治疗开始后对象中的标志物水平，以确定治疗的效力。
[0213] 在某些方法实施方案中，对象中标志物或标志物活性的水平至少测定一次。对标志物水平(例如，与在相同患者、其他患者或正常对象中之前或之后获得的另一种测量的标志物水平)的比较可用于确定根据本发明的治疗是否具有期望作用，从而允许酌情调整剂量水平。使用本领域已知的或本文所述的任何合适的取样/表达测定方法可进行对标志物水平的测定。优选地，首先从对象中取出组织或流体样品。合适样品的实例包括血液、尿、组织、口或颊细胞、和包含根部的毛发样品。另一些合适的样品可以是本领域技术人员已知的。可使用本领域已知的任何合适技术(包括但不限于酶免疫测定、ELISA、放射性标记/测定技术、印迹/化学发光法、实时PCR，等)来进行样品中蛋白质水平和/或mRNA水平(例如，标志物水平)的测定。
[0214] 定义
[0216] 术语“C1-6-烷基”表示具有1至6个碳原子的直链或支链烷基。对于范围“C1-6-烷基”的部分，考虑其所有亚组，例如C1-5-烷基、C1-4-烷基、C1-3-烷基、C1-2-烷基、C2-6-烷基、C2-5-烷基、C2-4-烷基、C2-3-烷基、C3-6-烷基、C4-5-烷基等。所述“C1-6-烷基”的实例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基以及直链和支链的戊基和己基。
[0217] 术语“氟-C1-6-烷基”表示被一个或更多个氟原子取代的直链或支链C1-6-烷基。所述氟-C1-6-烷基的实例包括氟甲基、三氟甲基、2-氟乙基和2，2，2-三氟乙基。
[0218] 术语“羟基-C1-6-烷基”表示其一个或更多个氢原子被OH取代的直链或支链C1-6-烷基。所述羟基-C1-6-烷基的实例包括羟甲基、2-羟乙基、2-羟丙基和2-羟基-2-甲基丙基。
[0219] 术语“C1-6-烷氧基”指通过氧原子与分子其余部分相连的直链或支链C1-6-烷基。对于范围C1-6-烷氧基的部分，考虑其所有亚组，例如C1-5-烷氧基、C1-4-烷氧基、C1-3-烷氧基、C1-2-烷氧基、C2-6-烷氧基、C2-5-烷氧基、C2-4-烷氧基、C2-3-烷氧基等。所述C1-6-烷氧基的实例包括甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、仲丁氧基和叔丁氧基。
[0220] 术语“氟-C1-4-烷氧基”表示通过氧原子与分子其余部分相连的氟-C1-4-烷基。示例性氟-C1-4-烷氧基包括三氟甲氧基和2，2，2-三氟乙氧基。
[0221] 术语“C1-4-烷氧基-C1-4-烷基”表示具有1至4个碳原子并且与具有1至4个碳原子的直链或支链烷基相连的直链或支链烷氧基。所述C1-4-烷氧基-C1-4-烷基的实例包括甲氧基甲基、甲氧基乙基、乙氧基乙基、异丙氧基乙基、正丁氧基乙基和叔丁氧基乙基。
[0222] 术语“C1-4-烷基硫-C1-4-烷基”表示通过硫原子与直链或支链C1-4-烷基相连的直链或支链C1-4-烷基。所述C1-4-烷基硫-C1-4-烷基的实例包括2-(甲硫基)乙基和2-(乙硫基)乙基。
[0223] 术语“氰基-C1-4-烷基”表示被一个或更多个氰基取代的直链或支链C1-4-烷基。示例性氰基-C1-4-烷基包括2-氰乙基和3-氰基丙基。
[0224] 术语“C1-6-烷基羰基”表示与羰基相连的直链或支链C1-6-烷基。所述C1-6-烷基羰基的实例包括甲基羰基(乙酰基)、乙基羰基和正丙基羰基。
[0225] 术语“C1-6-烷氧基羰基”表示与羰基相连的直链或支链C1-6-烷氧基。所述C1-6-烷氧基羰基的实例包括甲氧基羰基、乙氧基羰基和异丙基羰基。
[0226] 术语“C3-5-环烷基”表示具有3至5个碳原子的饱和单环烃环。所述C3-5-环烷基的实例包括环丙基、环丁基和环戊基。
[0227] 术语“苯基-C1-4-烷基”表示与直链或支链C1-4-烷基直接相连接的苯基。此类基团的实例包括苯甲基(即，苄基)和2-苯乙基。
[0228] 术语“苯氧基-C1-4-烷基”表示通过氧原子与直链或支链C1-4-烷基相连接的苯基。此类基团的实例包括苯氧基甲基和苯氧基乙基。
[0229] 术语“杂环基”或“杂环”表示具有4至7个环原子和至少一个杂原子(例如O、N和S)(并且其余的环原子是碳)的饱和单环。杂环的实例包括哌啶基、四氢吡喃基、四氢呋喃基、氧杂环丁基、氮杂环丁基、吡咯烷基、吗啉基、咪唑烷基、硫代吗啉基、二 烷基、哌嗪基和高哌嗪基。当存在时，则所述硫原子可以是氧化形式(即，S＝O或O＝S＝O)。包含氧化形式之硫的示例性杂环基是1，1-二氧代-硫代吗啉基和1，1-二氧代-异噻唑烷基。
[0230] 术语“杂环基-C1-4-烷基”表示通过所述环的碳或氮原子与直链或支链C1-4-烷基直接相连的如上所定义的杂环。杂环基-C1-4-烷基的实例包括哌啶-1-基甲基、哌啶-4-基甲基和吗啉-4-基甲基。
[0231] 术语“杂芳基”表示包含5至10个环原子的单环或稠合双环杂芳环系统，其中除了碳之外，环原子中的一个或更多个是例如氮、硫或氧。只有一个环需要具有芳香性并且所述杂芳基部分可通过任何环中的碳或氮原子与分子的其余部分相连接。杂芳基的实例包括呋喃基、吡咯基、噻吩基、 唑基、异 唑基、咪唑基、噻唑基、异噻唑基、吡啶基、嘧啶基、四唑基、喹唑啉基、吲哚基、二氢吲哚基、异吲哚基、异二氢吲哚基、吡唑基、哒嗪基、吡嗪基、喹啉基、喹喔啉基、 二唑基、噻二唑基、苯并呋喃基、2，3-二氢苯并呋喃基、1，3-苯并间二氧杂环戊烯基、1，4-苯并二氧杂环庚烯基、苯并噻唑基、苯并咪唑基、苯并三唑基和苯并二氢吡喃基。
[0232] 术语“杂芳基-C1-4-烷基”表示通过所述环的碳或氮原子与直链或支链C1-4-烷基直接相连接的如上文所定义的杂芳环。此类基团的实例包括2-(吡啶-2-基)-乙基和1，2，4- 二唑-5-基甲基。
[0233] 术语“C2-4-烯基”表示具有2至4个碳原子并且包含一个碳碳双键的直链或支链烃链基团。所述C2-4-烯基的实例包括乙烯基、烯丙基、2-甲基烯丙基和1-丁烯基。
[0234] 术语“C1-4-亚烷基”表示具有1至4个碳原子的直链或支链二价饱和烃链。C1-4-亚烷基双基(diradical)的实例包括亚甲基[-CH2-]、1，2-亚乙基[-CH2-CH2-]、1，1-亚乙基[-CH(CH3)-]、1，2-亚丙基[-CH2-CH(CH3)-]和1，3-亚丙基[-CH2-CH2-CH2-]。当提及例如“C1-4-亚烷基”基团时，考虑其所有亚组，例如C1-3-亚烷基、C1-2-亚烷基、C2-4-亚烷基、C2-3-亚烷基和C3-4-亚烷基。
[0235] “卤素”指氟、氯、溴或碘。
[0236] “羟基”指-OH。
[0237] “氰基”指-CN。
[0238] “任选(的)”或“任选地”意指随后描述的事件或情况可发生但不需要发生，并且意指该描述包括所述事件或情况发生的例子和其不发生的例子。
[0239] “可药用”意指可用于制备这样的药物组合物，其一般是安全、无毒性的并且既不是生物学上或在其他方面不期望的，并且包括可用于兽用和人药用。
[0241] “有效量”指赋予所治疗对象治疗作用的化合物的量。所述治疗作用可以是客观的(即，可通过一些测试或标志物测量)或主观的(即，对象给出作用的指示或感觉)。
[0242] “前药”指在生理条件下或通过溶剂解(solvolysis)可转化为本发明的生物活性化合物的化合物。前药在向有此需要的对象施用时可以是无活性的，但是在体内转化为本发明的活性化合物。前药在体内通常迅速转变以产生本发明的母体化合物，例如通过血液中的水解。前药化合物在哺乳类生物体中通常提供溶解性、组织相容性或延迟释放的优点(参见Silverman，R.B.，The Organic Chemistry of Drug Design and Drug Action，第2版，Elsevier Academic Press(2004)，第498-549页)。本发明化合物的前药可通过修饰本发明化合物中存在的官能团(例如羟基、氨基或巯基)来制备，使得所述修饰以常规操作或在体内被切割成本发明的母体化合物。前药的实例包括但不限于羟基官能团的乙酸酯、甲酸酯和琥珀酸酯衍生物或氨基官能团的氨基甲酸苯酯衍生物。
[0243] 在整个说明书和所附权利要求书中，给定的化学式或名称将还涵盖其所有的盐、水合物、溶剂合物、N-氧化物和前药形式。此外，给定的化学式或名称将涵盖其所有的互变异构体和立体异构体形式。立体异构体包括对映体和非对映体。对映体可以以其纯的形式或者作为两种对映体的外消旋(等量)或不等量混合物而存在。非对映体可以其纯的形式或作为非对映体的混合物而存在。非对映体还包括几何异构体，其可以其纯的顺式(cis)或反式(trans)形式或作为它们的混合物而存在。
[0244] 式(I)的化合物可原样使用或者酌情作为其可药用盐(酸加成盐或碱加成盐)而使用。下面提到的可药用加成盐旨在包括化合物能够形成的治疗活性无毒酸加成盐和碱加成盐形式。可通过用适当的酸处理碱形式将具有碱性的化合物转化为其可药用酸加成盐。示例性的酸包括无机酸，例如盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硫酸、磷酸；以及有机酸，例如甲酸、乙酸、丙酸、羟基乙酸、乳酸、丙酮酸、乙醇酸、马来酸、丙二酸、草酸、苯磺酸、甲苯磺酸、甲磺酸、三氟乙酸、富马酸、琥珀酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、水杨酸、对氨基水杨酸、扑酸(pamoic acid)、苯甲酸、抗坏血酸等。示例性碱加成盐形式为钠盐、钾盐、钙盐和与可药用胺(例如氨、烷基胺、苄星青霉素(benzathine)和氨基酸(如精氨酸和赖氨酸))的盐。本文使用的术语加成盐还包括化合物及其盐能够形成的溶剂合物，例如水合物、醇合物(alcoholate)等。
[0245] 组合物
[0246] 为了临床应用，本发明化合物配制成用于多种施用方式的药物制剂。应理解，本发明化合物可与生理上可接受的载体、赋形剂或稀释剂一起施用。本发明的药物组合物可通过任何合适途径施用，优选通过经口、经直肠、经鼻、局部(包括口腔和舌下)、舌下、经皮、鞘内、经黏膜或肠胃外(皮下、肌内、静脉内和皮内)施用。
[0247] 另一些制剂可便利地以单位剂型(例如片剂和缓释胶囊)或者以脂质体存在，并且可通过药学领域公知的任何方法来制备。药物制剂通常通过将活性物质或其可药用盐与常规的可药用载体、稀释剂或赋形剂混合来制备。赋形剂的实例是水、明胶、阿拉伯胶、乳糖、微晶纤维素、淀粉、淀粉乙醇酸钠(sodium starch glycolate)、磷酸氢钙、硬脂酸镁、滑石、胶体二氧化硅等。这样的制剂还可包含其他药理活性剂和常规添加剂，例如稳定剂、润湿剂、乳化剂、调味剂、缓冲剂等。通常，活性化合物的量为制剂按重量计的0.1-95％，对于肠胃外使用的制剂优选按重量计的0.2-20％，并且对于经口施用的制剂，更优选按重量计的1-50％。
[0248] 还 可 通 过 一 些 已 知 方 法 制 备 制 剂，例 如 造 粒、压 制、微 囊 化(microencapsulation)、喷包衣(spray coating)等。可通过常规方法将制剂制备成片剂、胶囊剂、颗粒剂、散剂、糖浆剂、混悬剂、栓剂或注射剂的剂型。可通过将活性物质溶解于或悬于水或其他合适载剂中来制备液体制剂。片剂和颗粒剂可通过常规方法进行包衣。为了长时间段维持治疗有效的血浆浓度，可将本发明化合物合并到缓慢释放制剂中。
[0249] 具体化合物的剂量水平和给药频率将根据多种因素而改变，包括所采用具体化合物的效力，所述化合物的代谢稳定性和作用长度，患者年龄、体重、一般健康状况、性别、饮食，施用方式和时间，排泄速率，联合用药，待治疗病症的严重程度和患者正进行的治疗。日剂量可以是例如约0.001mg至约100mg/千克体重，单次施用或分剂量多次施用，例如每次约0.01mg至约25mg。通常经口给予这样的剂量，但也可以选择肠胃外施用。
[0250] 本发明化合物的制备
[0251] 可通过常规方法或与其类似的方法制备上述式(I)的化合物。可通过以下方案具体地举例说明根据本发明实施例的中间体和化合物的制备。本文方案中结构中的变量(variable)的定义与本文所述式中对应位置的那些相称。
[0252] 方案1.制备其中A是-CH(R9)-、-O-或-S-的式(I)化合物。
[0253]
[0254] 其中R1至R5、R6、R7和R9如式(I)所定义；并且
[0255] X和Y各自独立是-OMe或-OEt。
[0256] 通过式(II)的3-氨基吡唑衍生物与适当的式(III)的α-取代-β-酮酯缩合9
可容易地制备其中A是-CH(R)-、-O-或-S-的通式(I)化合物，如以上方案1所示。通过式(II)的3-氨基吡唑衍生物与适当的式(IV)的α-取代-β-亚胺酯缩合可类似地制备
10
其中A是-N(R )-的通式(I)化合物，如以下方案2所示。缩合通常任选地在酸或路易斯酸催化剂(包括但不限于乙酸、磷酸、盐酸、硫酸和三氯化钛)存在下通过加热来实现。
可容易地制备其中A是-CH(R)-、-O-或-S-的通式(I)化合物，如以上方案1所示。通过式(II)的3-氨基吡唑衍生物与适当的式(IV)的α-取代-β-亚胺酯缩合可类似地制备
10
其中A是-N(R )-的通式(I)化合物，如以下方案2所示。缩合通常任选地在酸或路易斯酸催化剂(包括但不限于乙酸、磷酸、盐酸、硫酸和三氯化钛)存在下通过加热来实现。
[0257] 方案2.制备其中A是-N(R10)-的式(I)化合物。
[0258]
[0259] 其中R1至R5、R6、R7和R10如式(I)所定义。
[0260] 式(II)的中间体3-氨基吡唑、式(III)的α-取代-β-酮酯和式(IV)的α-取代-β-亚胺酯均是可商购的，或者可通过本领域已知方法制备。这些方法包括但不限于方案中阐明的那些。例如，式(III)的α-苄基-β-酮酯(A＝-CH2-或-CH(R9)-)可通过β-酮酯与苄醇或苄基溴缩合或者通过3-芳基丙酸酯与二烷基草酸酯缩合来制备。式(III)的α-苯氧基-β-酮酯(A＝O)可通过α-氯-β-酮酯与苯酚缩合或者通过芳氧基-乙酸酯与二烷基草酸酯缩合来制备。式(IV)的3-(甲氧基-羰基-亚肼基)-2-芳基氨酯可通过α-氯-β-酮酯与肼基甲酸甲酯(methyl carbazate)缩合，然后用苯胺处理来制备。在以下实验部分中示例了所有的这些替代方案。
[0261] 用于各个反应步骤的适当反应条件是本领域技术人员已知的。在实验部分中还描述了用于本发明实施例的具体反应条件。用于制备式(I)的化合物必需原始材料是可商购的，或者可通过本领域中已知的方法制备。
[0262] 可进行在以下实验部分中描述的过程以得到游离碱形式或作为酸加成盐的本发明化合物。根据用于由碱性化合物制备酸加成盐的常规方法，将游离碱溶解于合适的有机溶剂中并用酸处理溶液可得到可药用酸加成盐。以上提到了形成加成盐之酸的实例。
[0263] 式(I)的化合物可具有一个或更多个手性碳原子，因此它们可以以光学异构体形式获得，例如作为纯对映体、或作为对映体的混合物(外消旋物)或作为包含非对映体的混合物。分离光学异构体的混合物以获得纯对映体是本领域所公知的并且可例如通过盐与光学活性(手性)酸的分级结晶或者通过在手性柱上进行色谱分离来实现。
[0264] 用于本文所述合成路径的化学品可包括例如溶剂、试剂、催化剂以及保护基试剂和去保护基试剂。保护基的实例是叔丁氧羰基(Boc)、苄基和三苯甲基(三苯基甲基)。上述方法在本文所具体描述的步骤之前或之后还可另外地包括添加或移除合适的保护基从而最终允许合成化合物的步骤。此外，多个合成步骤可以以交替的顺序或次序进行以得到期望化合物。可用于合成可用化合物的合成化学转换和保护基方法(保护和去保护)是本领域已知的，并且包括例如R.Larock，Comprehensive Organic Transformations，VCH Publisher(1989)；T.W.Greene and P.G.M.Wuts，Protective Groups in Organic Synthesis，第 3 版，John Wiley and Sons (1999)；L.Fieser and M.Fieser，Fieser and Fieser′s Reagents for Organic Synthesis，John Wiley and Sons(1994)；和L.Paquette编，Encyclopedia of Reagents for Organic Synthesis，John Wiley and Sons(1995)及其后续版本中描述的那些。
[0265] 使用了以下缩写：
[0266] AcOH 乙酸
[0267] Aq 水溶液
[0268] cBu 环丁基
[0269] cPr 环丙基
[0270] DBN 1，5-二氮杂双环并[4.3.0]壬-5-烯
[0271] DBU 1，8-二氮杂双环并(5.4.0)十一-7-烯
[0272] DCM 二氯甲烷
[0273] DIPEA N，N-二异丙基乙胺
[0274] DMF N，N-二甲基甲酰胺
[0275] EDC 1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)碳二亚胺
[0276] ESI+ 电喷雾离子化
[0277] Et2O 乙醚
[0278] EtOAc 乙酸乙酯
[0279] EtOH 乙醇
[0280] HBTU 2-(1H-苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲六氟磷酸酯
[0281] HOBt N-羟基苯并三唑
[0282] HONB 内-N-羟基双环并[2.2.1]庚-5-烯-2，3-二甲酰亚胺
[0283] HPLC 高效液相色谱
[0284] HPLC-MS 高效液相色谱-质谱
[0285] HRMS 高分辨质谱
[0286] M 摩尔每升
[0287] MeCN 乙腈
[0288] MeOH 甲醇
[0289] [MH]+ 质子化的分子离子
[0290] LCMS 液相色谱质谱
[0291] Sat 饱和
[0292] T3P 2-丙基磷酸酐(2-Propane phosphinic acid anhydride)
[0293] TFA 三氟乙酸
[0294] THF 四氢呋喃
[0295] TLC 薄层色谱
[0296] TMEDA 四甲基乙二胺
[0297] 本文变量的任何定义中列举的化学基团列表包括该变量作为任何单个基团或所列基团组合的定义。本文列举的实施方案包括作为任何单个实施方案或与任何其他实施方案或其部分组合的实施方案。
[0298] 现在将通过以下非限制性实施例进一步阐明本发明。以下的具体实施例应理解为仅是说明性的，并且无论如何不以任何方式限制本公开内容的其余部分。虽然没有进一步的细化，但是认为本领域技术人员可基于本文的描述将本发明应用至其最完全的程度。本文所述的所有参考文献和出版物均通过引用整体并入本文。
[0299] 实施例和中间体化合物
[0300] 实验方法
[0301] 除非具体指明，否则所有的试剂都是商业级并且不经进一步纯化原样使用。在所有情况中均使用试剂级溶剂。在配备有ACE C8，30×3.0mm，3μm柱(水(5mM乙酸铵)中的MeCN/MeOH(95/5)，215-295nm，35℃)的Agilent1100系统上进行分析型HPLC-MS。在与Agilent1100HPLC系统相连的Agilent MSD-TOF上获得高分辨质谱(high-resolution mass spectra，HRMS)。在分析期间，通过两种质量检查校准并且在需要时进行自动校正。在正离子电喷雾模式(positive electrospray mode)中获得谱图。得到的质量范围为m/z100-1100。使用质量峰的轮廓检测(profile detection)。除非另有说明，否则在以下条件下进行分析型HPLC：在30℃下在使用Phenomenex Synergi，RP-Hydro，150×4.6mm，4μm柱的Agilent1100系统上以1.5mL/分钟的流速和水(+0.1％TFA)中5-100％乙腈(+0.085％TFA)的梯度经7分钟(200-300nm)；或者在配备有电喷雾接口的Agilent1100/1200系列液相色谱/质量选择性检测器(单四极杆)上使用水(5mM乙酸铵)中5-100％乙腈
的梯度经4分钟，1mL/分钟，215-395nM(下文中标有＊)。引用的图是柱保留时间和％纯度。在配备有RediSep硅胶柱的CombiFlash Companion系统上或者在配备有Strata SI-1二氧化硅千兆管(silica gigatube)的Flash Master Personal系统上或者在重力下的玻璃柱中进行快速色谱。在配备有Phenomenex Synergi Hydro RP150×10mm或YMC ODS-A100/150×20mm柱的Gilson系统(带有Gilson321平衡泵和Gilson215自动进样器的Gilson322泵)上，或者在XTerra Prep MS C185μm19×50mm系统上进行反相HPLC。在配备有Merck RP-18(40-63um)硅胶柱的Gilson系统(Gilson321泵和
Gilson FC204级分收集器)上进行反相柱色谱。使用Biotage微波进行微波辐照。化合物使用ACD6.0进行自动命名。所有的化合物在真空电炉中干燥过夜。当未指明产率时，使用粗制的中间体。反应通过TLC、LCMS或HPLC监测。
的梯度经4分钟，1mL/分钟，215-395nM(下文中标有＊)。引用的图是柱保留时间和％纯度。在配备有RediSep硅胶柱的CombiFlash Companion系统上或者在配备有Strata SI-1二氧化硅千兆管(silica gigatube)的Flash Master Personal系统上或者在重力下的玻璃柱中进行快速色谱。在配备有Phenomenex Synergi Hydro RP150×10mm或YMC ODS-A100/150×20mm柱的Gilson系统(带有Gilson321平衡泵和Gilson215自动进样器的Gilson322泵)上，或者在XTerra Prep MS C185μm19×50mm系统上进行反相HPLC。在配备有Merck RP-18(40-63um)硅胶柱的Gilson系统(Gilson321泵和
Gilson FC204级分收集器)上进行反相柱色谱。使用Biotage微波进行微波辐照。化合物使用ACD6.0进行自动命名。所有的化合物在真空电炉中干燥过夜。当未指明产率时，使用粗制的中间体。反应通过TLC、LCMS或HPLC监测。
[0302] 中间体1
[0303] 一般方法A
[0304] 2-[(4-氯苯基)甲基]-3-氧代丁酸乙酯
[0305]
[0306] 将乙酰乙酸乙酯(10.0g，76.8mmol)溶解于DMF(160mL)中并且添加4-氯苄基溴(15.0g，73.0mmol)和碳酸锂(5.68g，76.8mmol)。将反应在80℃加热48小时。反应混合物用水(100mL)和甲苯(200mL)稀释，有机层用水(3×100mL)、盐水(100mL)洗涤，干燥(MgS04)并在真空下除去溶剂以得到粗制标题化合物(18.2g)，其不经进一步纯化或表征而使用。
[0307] 中间体2
[0308] 一般方法B
[0309] 2-[(3，4-二氯苯基)甲基]-3-氧代丁酸乙酯
[0310]
[0311] 将乙酰乙酸乙酯(500mg，3.84mmol)溶解于甲苯(20mL)中并且添加3，4-二氯-苄基溴(920mg，3.84mmol)和碳酸钾(377mg，2.73mmol)。将反应在回流下加热15小时。反应混合物用水(30mL)和甲苯(50mL)稀释，有机层用水(3×20mL)、盐水(50mL)洗涤，干燥(Na2SO4)并在真空下除去溶剂。残余物经柱色谱纯化以得到作为淡棕色液体的粗制标题化合物(500mg)，其不经进一步纯化或表征而使用。
[0312] 中间体3
[0313] 一般方法C
[0314] 2-[(2，3-二氟苯基)甲基]-3-氧代丁酸甲酯
[0315]
[0316] 在室温下将氢化钠(192mg，矿物油中的60％分散体，4.80mmol)悬于THF(20mL)中并逐滴添加乙酰乙酸甲酯(296μL，2.74mmol)。添加2，3-二氟苄基溴(383μL，3.01mmol)并将反应混合物搅拌16小时。反应混合物用饱和NH4Cl水溶液(5mL)和水(25mL)淬灭并且用EtOAc(3×50mL)萃取。干燥合并的有机层(MgSO4)并在真空下浓缩以得到粗制标题化合物，其不经进一步纯化或表征而使用。
[0317] 中间体4
[0318] 2-乙酰基-3-(4-氯苯基)丁酸甲酯
[0319]
[0320] 将乙酰乙酸甲酯(465μL，4.31mmol)、1-(4-氯-苯基)-乙醇(0.67g，4.31mmol)和FeCl3(69.8mg，0.43mmol)溶解于DCM(15mL)中并在回流下加热16小时。通过硅藻土过滤反应混合物并在真空下除去溶剂以得到作为棕色液体的粗制标题化合物(971mg)，其不经进一步纯化或表征而使用。
[0321] 中间体5-59
[0322] 通过在20至50℃使β-酮酯与合适的苄基溴(0.9-1.2当量)反应5至72小时，与一般方法A-C类似地制备中间体5-59；参见下表1。
[0323] 中间体60
[0324] 一般方法D
[0325] 2-(3-氟苯氧基)-3-氧代丁酸甲酯
[0326]
[0327] 在0℃将氢化钠(221mg，矿物油中的60％分散体，3.32mmol)悬于THF(2mL)中并添加3-氟苯酚(372mg，3.32mmol)的THF(2mL)溶液。将反应混合物经1小时升温至室温。添加TMEDA(500μL，3.32mmol)和2-氯乙酰乙酸甲酯(500mg，3.32mmol)并将反应混合物在回流下加热4小时。真空下除去溶剂并使残余物在DCM(15mL)与1MNaOH水溶液(2mL)之间分配。有机级分用水(5mL)洗涤，干燥(MgS04)并在真空下浓缩。残余物经柱色谱纯化以得到作为黄色油的粗制标题化合物(195mg，26％)，其不经进一步纯化或表征而使用。
[0328] 中间体61-69
[0329] 与一般方法D类似地制备中间体61-69；参加下表2。
[0330] 表1：制备β-酮酯中间体
[0331]
[0332]中间体 R R6 X 方法 中间体名称
5 4-Me Me OEt A 2-[(4-甲基苯基)甲基]-3-氧代丁酸乙酯
6 3-Cl Me OEt B 2-[(3-氯苯基)甲基]-3-氧代丁酸乙酯
7 4-CF3 Me OEt A 3-氧代-2-{[4-(三氟甲基)苯基]甲基}丁酸乙酯
8 3-CN，4-F Me OMe C 2-[(3-氰基-4-氟苯基)甲基]-3-氧代丁酸甲酯
9 3-Br，4-Cl Me OMe C 2-[(3-溴-4-氯苯基)甲基]-3-氧代丁酸甲酯
10 3-OMe Me OMe C 2-[(3-甲氧基苯基)甲基]-3氧代丁酸甲酯
11 4Cl Et OEt C 2-[(4-氯苯基)甲基]-3-氧代戊酸乙酯
12 3，5-F2 Et OEt C 2-[(3，5-二氟苯基)甲基]-3-氧代戊酸乙酯
13 3，4，5-F3 Et OEt C 3-氧代-2-[(3，4，5-三氟苯基)甲基]戊酸乙酯
14 3-Cl，4-F Et OEt C 2-[(3-氯-4-氟苯基)甲基]-3-氧代戊酸乙酯
15 3-F，5-CF3 Et OEt C 2-{[3-氟-5-(三氟甲基)苯基]甲基}-3-氧代戊酸乙酯
16 3，4-Cl2 Et OEt C 2-[(3，4-二氯苯基)甲基]-3-氧代戊酸乙酯
17 3-F，4-CF3 nPr OEt C 2-{[3-氟-4-(三氟甲基)苯基]甲基}-3-氧代己酸乙酯
18 3，4-Cl2 nPr OEt C 2-[(3，4-二氯苯基)甲基]-3-氧代己酸乙酯
19 H cPr OEt C 2-苄基-3-环丙基-3-氧代丙酸乙酯
5 4-Me Me OEt A 2-[(4-甲基苯基)甲基]-3-氧代丁酸乙酯
6 3-Cl Me OEt B 2-[(3-氯苯基)甲基]-3-氧代丁酸乙酯
7 4-CF3 Me OEt A 3-氧代-2-{[4-(三氟甲基)苯基]甲基}丁酸乙酯
8 3-CN，4-F Me OMe C 2-[(3-氰基-4-氟苯基)甲基]-3-氧代丁酸甲酯
9 3-Br，4-Cl Me OMe C 2-[(3-溴-4-氯苯基)甲基]-3-氧代丁酸甲酯
10 3-OMe Me OMe C 2-[(3-甲氧基苯基)甲基]-3氧代丁酸甲酯
11 4Cl Et OEt C 2-[(4-氯苯基)甲基]-3-氧代戊酸乙酯
12 3，5-F2 Et OEt C 2-[(3，5-二氟苯基)甲基]-3-氧代戊酸乙酯
13 3，4，5-F3 Et OEt C 3-氧代-2-[(3，4，5-三氟苯基)甲基]戊酸乙酯
14 3-Cl，4-F Et OEt C 2-[(3-氯-4-氟苯基)甲基]-3-氧代戊酸乙酯
15 3-F，5-CF3 Et OEt C 2-{[3-氟-5-(三氟甲基)苯基]甲基}-3-氧代戊酸乙酯
16 3，4-Cl2 Et OEt C 2-[(3，4-二氯苯基)甲基]-3-氧代戊酸乙酯
17 3-F，4-CF3 nPr OEt C 2-{[3-氟-4-(三氟甲基)苯基]甲基}-3-氧代己酸乙酯
18 3，4-Cl2 nPr OEt C 2-[(3，4-二氯苯基)甲基]-3-氧代己酸乙酯
19 H cPr OEt C 2-苄基-3-环丙基-3-氧代丙酸乙酯
[0333]中间体 R R6 X 方法 中间体名称
20 4-CF3O cPr OEt C 3-环丙基-3-氧代-2-{[4-(三氟甲氧基)苯基]甲基}丙酸乙酯
21 3-CF3O cPr OEt C 3-环丙基-3-氧代-2-{[3-(三氟甲氧基)苯基]甲基}丙酸乙酯
22 3-Cl cPr OEt C 2-[(3-氯苯基)甲基]-3-环丙基-3-氧代丙酸乙酯
23 3-CF3 cPr OEt C 3-环丙基-3-氧代-2-{[3-(三氟甲基)苯基]甲基}丙酸乙酯
24 4-CF3 cPr OEt C 3环丙基3氧代2-{[4(三氟甲基)苯基]甲基}丙酸乙酯
25 3，4-F2 cPr OEt C 3-环丙基-2-[(3，4-二氟苯基)甲基]-3-氧代丙酸乙酯
26 3，5-F2 cPr OEt C 3-环丙基-2-[(3，5-二氟苯基)甲基]-3-氧代丙酸乙酯
27 3，4，5-F3 cPr OEt C 3-环丙基-3-氧代-2-[(3，4，5-三氟苯基)甲基]丙酸乙酯
28 3-F，4-Cl cPr OEt C 2-[(4-氯-3-氟苯基)甲基]-3-环丙基-3-氧代丙酸乙酯
29 3-Cl，4-F cPr OEt C 2-[(3-氯-4-氟苯基)甲基]-3-环丙基-3-氧代丙酸乙酯
30 3-Cl，5-F cPr OEt C 2-[(3-氯-5-氟苯基)甲基]-3-环丙基-3-氧代丙酸乙酯
31 3，4-Cl2 cPr OEt C 3-环丙基-2-[(3，4-二氯苯基)甲基]-3-氧代丙酸乙酯
32 3-CF3，4-F cPr OEt C 3-环丙基-2-{[4-氟-3-(三氟甲基)苯基]甲基}-3-氧代丙酸乙酯
33 3-F，4-CF3 cPr OEt C 3-环丙基-2-{[3-氟-4-(三氟甲基)苯基]甲基}-3-氧代丙酸乙酯
34 3-F，5-CF3 cPr OEt C 3-环丙基-2-{[3-氟-5-(三氟甲基)苯基]甲基}-3-氧代丙酸乙酯
35 3，5-Cl2 cPr OEt C 3-环丙基-2-[(3，5-二氯苯基)甲基]-3-氧代丙酸乙酯
20 4-CF3O cPr OEt C 3-环丙基-3-氧代-2-{[4-(三氟甲氧基)苯基]甲基}丙酸乙酯
21 3-CF3O cPr OEt C 3-环丙基-3-氧代-2-{[3-(三氟甲氧基)苯基]甲基}丙酸乙酯
22 3-Cl cPr OEt C 2-[(3-氯苯基)甲基]-3-环丙基-3-氧代丙酸乙酯
23 3-CF3 cPr OEt C 3-环丙基-3-氧代-2-{[3-(三氟甲基)苯基]甲基}丙酸乙酯
24 4-CF3 cPr OEt C 3环丙基3氧代2-{[4(三氟甲基)苯基]甲基}丙酸乙酯
25 3，4-F2 cPr OEt C 3-环丙基-2-[(3，4-二氟苯基)甲基]-3-氧代丙酸乙酯
26 3，5-F2 cPr OEt C 3-环丙基-2-[(3，5-二氟苯基)甲基]-3-氧代丙酸乙酯
27 3，4，5-F3 cPr OEt C 3-环丙基-3-氧代-2-[(3，4，5-三氟苯基)甲基]丙酸乙酯
28 3-F，4-Cl cPr OEt C 2-[(4-氯-3-氟苯基)甲基]-3-环丙基-3-氧代丙酸乙酯
29 3-Cl，4-F cPr OEt C 2-[(3-氯-4-氟苯基)甲基]-3-环丙基-3-氧代丙酸乙酯
30 3-Cl，5-F cPr OEt C 2-[(3-氯-5-氟苯基)甲基]-3-环丙基-3-氧代丙酸乙酯
31 3，4-Cl2 cPr OEt C 3-环丙基-2-[(3，4-二氯苯基)甲基]-3-氧代丙酸乙酯
32 3-CF3，4-F cPr OEt C 3-环丙基-2-{[4-氟-3-(三氟甲基)苯基]甲基}-3-氧代丙酸乙酯
33 3-F，4-CF3 cPr OEt C 3-环丙基-2-{[3-氟-4-(三氟甲基)苯基]甲基}-3-氧代丙酸乙酯
34 3-F，5-CF3 cPr OEt C 3-环丙基-2-{[3-氟-5-(三氟甲基)苯基]甲基}-3-氧代丙酸乙酯
35 3，5-Cl2 cPr OEt C 3-环丙基-2-[(3，5-二氯苯基)甲基]-3-氧代丙酸乙酯
[0334]中间体 R R6 X 方法 中间体名称
36 3，4-F2 iPr OEt C 2-[(3，4-二氟苯基)甲基]-4-甲基-3-氧代戊酸乙酯
37 3，4，5F3 iPr OEt C 4-甲基-3-氧代-2-[(3，4，5-三氟苯基)甲基]戊酸乙酯
38 3-Cl，4-F iPr OEt C 2-[(3-氯-4-氟苯基)甲基]-4-甲基-3氧代戊酸乙酯
39 3-F，4-Cl iPr OEt C 2-[(4氯-3-氟苯基)甲基]-4-甲基-3-氧代戊酸乙酯
40 3-Cl，5-F iPr OEt C 2-[(3-氯-5-氟苯基)甲基]-4-甲基-3-氧代戊酸乙酯
41 3-CF3，4-F iPr OEt C 2-{[4-氟-3-(三氟甲基)苯基]甲基}-4-甲基-3-氧代戊酸乙酯
42 3，4-Cl2 iPr OEt C 2-[(3，4-二氯苯基)甲基]-4-甲基-3-氧代戊酸乙酯
43 3，5-Cl2 iPr OEt C 2-[(3，5-二氯苯基)甲基]-4-甲基-3-氧代戊酸乙酯
44 3-Cl cBu OEt C 2-[(3氯苯基)甲基]-3-环丁基-3-氧代丙酸乙酯
45 4-Cl cBu OEt C 2-[(4氯苯基)甲基]-3-环丁基-3-氧代丙酸乙酯
46 3，4F2 cBu OEt C 3-环丁基-2-[(3，4-二氟苯基)甲基]-3-氧代丙酸乙酯
47 3-Cl，4-F cBu OEt C 2-[(3-氯-4-氟苯基)甲基]-3-环丁基-3-氧代丙酸乙酯
48 3-CF3，4-F cBu OE t C 3-环丁基-2-{[4-氟-3-(三氟甲基)苯基]甲基}-3-氧代丙酸乙酯
49 3-F，5-CF3 cBu OEt C 3-环丁基-2-{[3-氟-5-(三氟甲基)苯基]甲基}-3-氧代丙酸乙酯
50 3，4，5F3 cBu OEt C 3-环丁基-3-氧代-2-[(3，4，5-三氟苯基)甲基]丙酸乙酯
51 3，4-Cl2 cBu OEt C 3-环丁基-2-[(3，4-二氯苯基)甲基]-3-氧代丙酸乙酯
52 4-Cl CH2OMe OMe C 2-[(4-氯苯基)甲基]-4-甲氧基-3-氧代丁酸甲酯
36 3，4-F2 iPr OEt C 2-[(3，4-二氟苯基)甲基]-4-甲基-3-氧代戊酸乙酯
37 3，4，5F3 iPr OEt C 4-甲基-3-氧代-2-[(3，4，5-三氟苯基)甲基]戊酸乙酯
38 3-Cl，4-F iPr OEt C 2-[(3-氯-4-氟苯基)甲基]-4-甲基-3氧代戊酸乙酯
39 3-F，4-Cl iPr OEt C 2-[(4氯-3-氟苯基)甲基]-4-甲基-3-氧代戊酸乙酯
40 3-Cl，5-F iPr OEt C 2-[(3-氯-5-氟苯基)甲基]-4-甲基-3-氧代戊酸乙酯
41 3-CF3，4-F iPr OEt C 2-{[4-氟-3-(三氟甲基)苯基]甲基}-4-甲基-3-氧代戊酸乙酯
42 3，4-Cl2 iPr OEt C 2-[(3，4-二氯苯基)甲基]-4-甲基-3-氧代戊酸乙酯
43 3，5-Cl2 iPr OEt C 2-[(3，5-二氯苯基)甲基]-4-甲基-3-氧代戊酸乙酯
44 3-Cl cBu OEt C 2-[(3氯苯基)甲基]-3-环丁基-3-氧代丙酸乙酯
45 4-Cl cBu OEt C 2-[(4氯苯基)甲基]-3-环丁基-3-氧代丙酸乙酯
46 3，4F2 cBu OEt C 3-环丁基-2-[(3，4-二氟苯基)甲基]-3-氧代丙酸乙酯
47 3-Cl，4-F cBu OEt C 2-[(3-氯-4-氟苯基)甲基]-3-环丁基-3-氧代丙酸乙酯
48 3-CF3，4-F cBu OE t C 3-环丁基-2-{[4-氟-3-(三氟甲基)苯基]甲基}-3-氧代丙酸乙酯
49 3-F，5-CF3 cBu OEt C 3-环丁基-2-{[3-氟-5-(三氟甲基)苯基]甲基}-3-氧代丙酸乙酯
50 3，4，5F3 cBu OEt C 3-环丁基-3-氧代-2-[(3，4，5-三氟苯基)甲基]丙酸乙酯
51 3，4-Cl2 cBu OEt C 3-环丁基-2-[(3，4-二氯苯基)甲基]-3-氧代丙酸乙酯
52 4-Cl CH2OMe OMe C 2-[(4-氯苯基)甲基]-4-甲氧基-3-氧代丁酸甲酯
[0335]中间体 R6 X 方法 中间体名称
53 3-F，4-Cl CH2OMe OMe C 2-[(4-氯-3-氟苯基)甲基]-4-甲氧基-3-氧代丁酸甲酯
54 3，4-Cl2 CH2OMe OMe C 2-[(3，4-二氯苯基)甲基]-4-甲氧基-3-氧代丁酸甲酯
55 4-Cl (CH2)2OMe OMe C 2-[(4-氯苯基)甲基]-5-甲氧基-3-氧代戊酸甲酯
56 3，4-Cl2 CF3 OEt C 2-[(3，4-二氯苯基)甲基]-4，4，4-三氟-3-氧代丁酸乙酯
57 3，4Cl2 THF-2-基 OEt C 2-[(3，4-二氯苯基)甲基]-3-氧代-3-(氧杂环戊-2-基)丙酸乙酯
58 4-Cl CH2OBn OMe C(中间体99)4-(苄氧基)-2-[(4-氯苯基)甲基]-3-氧代丁酸甲酯
59 3-F Pyrazin-2-基- OEt C 2-[(3氟苯基)甲基]-3-氧代-3-(吡嗪-2-基)丙酸乙酯[0336] 表2：制备β-酮酯中间体
53 3-F，4-Cl CH2OMe OMe C 2-[(4-氯-3-氟苯基)甲基]-4-甲氧基-3-氧代丁酸甲酯
54 3，4-Cl2 CH2OMe OMe C 2-[(3，4-二氯苯基)甲基]-4-甲氧基-3-氧代丁酸甲酯
55 4-Cl (CH2)2OMe OMe C 2-[(4-氯苯基)甲基]-5-甲氧基-3-氧代戊酸甲酯
56 3，4-Cl2 CF3 OEt C 2-[(3，4-二氯苯基)甲基]-4，4，4-三氟-3-氧代丁酸乙酯
57 3，4Cl2 THF-2-基 OEt C 2-[(3，4-二氯苯基)甲基]-3-氧代-3-(氧杂环戊-2-基)丙酸乙酯
58 4-Cl CH2OBn OMe C(中间体99)4-(苄氧基)-2-[(4-氯苯基)甲基]-3-氧代丁酸甲酯
59 3-F Pyrazin-2-基- OEt C 2-[(3氟苯基)甲基]-3-氧代-3-(吡嗪-2-基)丙酸乙酯[0336] 表2：制备β-酮酯中间体
[0337]
[0338]酯 酯
甲 乙
酸 酯 酸
酯 戊 酯 乙 酯 丙
甲 ] 甲 酸 甲 代
酸 基 酸 戊 酸 氧
丁代 氧苯 戊代 代氧 戊代 -3-
氧-3-)基氧 )基甲氟三( 氧-3-)基氧 -3-)基氧苯 氧-3-)基氧 基丙环-3-)
苯氯 -3[- 苯氟 氟-4 苯氯 基氧
称名体间 二-4，3(- 2-代氧- 二-4，3(- -氯-3(- 二-4，3(- 苯溴-4(-
中 2 3 2 2 2 2
e e e t e t
X MO MO MO EO MO EO
6 R eM tE tE tE tE c rP
F
lC-2 F3 F-2 -4，l lC-2 r
R 4，3 C-3 4，3 C-3 4，3 B-4
体
间中 16 26 36 46 56 66
甲 乙
酸 酯 酸
酯 戊 酯 乙 酯 丙
甲 ] 甲 酸 甲 代
酸 基 酸 戊 酸 氧
丁代 氧苯 戊代 代氧 戊代 -3-
氧-3-)基氧 )基甲氟三( 氧-3-)基氧 -3-)基氧苯 氧-3-)基氧 基丙环-3-)
苯氯 -3[- 苯氟 氟-4 苯氯 基氧
称名体间 二-4，3(- 2-代氧- 二-4，3(- -氯-3(- 二-4，3(- 苯溴-4(-
中 2 3 2 2 2 2
e e e t e t
X MO MO MO EO MO EO
6 R eM tE tE tE tE c rP
F
lC-2 F3 F-2 -4，l lC-2 r
R 4，3 C-3 4，3 C-3 4，3 B-4
体
间中 16 26 36 46 56 66
[0339]酯
甲 酯
酸 甲
酯 戊 酸
乙 代 戊
酸 氧 代
戊代氧 -3-基 氧-3-
-3-基甲- 甲-4-)基 基甲-4-)
4-) 氧苯 基氧
基 氟 苯
氧 -3 氯
称 苯 - 二
名 溴 氯 -4
体间 -4(- -4(- ，3(-
中 2 2 2
t e e
X EO MO MO
6 R i rP i rP i rP
l
r C-4， lC-2
R B-4 F-3 4，3
体
间中 76 86 96
甲 酯
酸 甲
酯 戊 酸
乙 代 戊
酸 氧 代
戊代氧 -3-基 氧-3-
-3-基甲- 甲-4-)基 基甲-4-)
4-) 氧苯 基氧
基 氟 苯
氧 -3 氯
称 苯 - 二
名 溴 氯 -4
体间 -4(- -4(- ，3(-
中 2 2 2
t e e
X EO MO MO
6 R i rP i rP i rP
l
r C-4， lC-2
R B-4 F-3 4，3
体
间中 76 86 96
[0340] 中间体70
[0341] 一般方法E
[0342] 3-(3-氟苯基)丙酸甲酯
[0343]
[0344] 将3-(3-氟苯 基)丙 酸(5.00g，29.7mmol)溶解 于MeOH(50mL)中 并添 加H2SO4(1mL)。将反应混合物在回流下加热6小时并在真空下浓缩至约15mL。添加EtOAc(100mL)，有机级分用1M Na2CO3水溶液(2×100mL)洗涤，干燥(MgSO4)并在真空下除去溶剂以得到作为淡黄色油的标题化合物(5.28g，98％)，其不经进一步纯化或表征而使用。
[0345] 中间体71-77
[0346] 与一般方法E类似地制备中间体71-77；参见下表3。
[0347] 表3：3-芳基丙酸的酯化
[0348]
[0349]中间体 R X 产率 中间体名称
71 3-Cl OEt 97％ 3-(3-氯苯基)丙酸乙酯
72 3-CF3 OEt n/a 3-[3-(三氟甲基)苯基]丙酸乙酯
73 3-C]，4-F OEt 97％ 3-(3-氯-4-氟苯基)丙酸乙酯
74 2，4-C]2 OEt 93％ 3-(2，4-二氯苯基)丙酸乙酯
75 3，4-Cl2 OEt 100％ 3-(3，4-二氯苯基)丙酸乙酯
76 3-F OEt 96％ 3-(3-氟苯基)丙酸乙酯
77 3-F，4-Cl OEt 97％ 3-(4-氯-3-氟苯基)丙酸乙酯
71 3-Cl OEt 97％ 3-(3-氯苯基)丙酸乙酯
72 3-CF3 OEt n/a 3-[3-(三氟甲基)苯基]丙酸乙酯
73 3-C]，4-F OEt 97％ 3-(3-氯-4-氟苯基)丙酸乙酯
74 2，4-C]2 OEt 93％ 3-(2，4-二氯苯基)丙酸乙酯
75 3，4-Cl2 OEt 100％ 3-(3，4-二氯苯基)丙酸乙酯
76 3-F OEt 96％ 3-(3-氟苯基)丙酸乙酯
77 3-F，4-Cl OEt 97％ 3-(4-氯-3-氟苯基)丙酸乙酯
[0350] 中间体78
[0351] 一般方法F
[0352] 2-[(4-氯苯基)甲基]-3-氧代丁二酸-1，4-二甲酯
[0353]
[0354] 将草酸二甲酯(1.18g，10.0mmol)溶解于Et2O(20mL)中并添加氢化钠(400mg，矿物油中的60％分散体，10.0mmol)。添加MeOH(2滴)并将反应混合物加热至50℃。逐滴添加3-(4-氯苯基)丙酸甲酯(1.99g，10.0mmol)的Et2O(20mL)溶液并将反应混合物在回流下加热2天。通过过滤收集沉淀物，将其溶解于水(50mL)中并用1M HCl水溶液(50mL)酸化至pH1。反应混合物用Et2O(3×100mL)萃取，合并的有机级分用水(2×100mL)洗涤，干燥(Na2SO4)并在真空下浓缩以得到作为橙色油的标题化合物(700mg，25％)，其不经进一步纯化或表征而使用。
[0355] 中间体79
[0356] 一般方法G
[0357] 2-[(3-氯苯基)甲基]-3-氧代丁二酸-1，4-二乙酯
[0358]
[0359] 将氢化钠(995mg，矿物油中的60％分散体，24.9mmol)悬于THF(100mL)中并添加草酸二乙酯(3.76mL，24.9mmol)、中间体71(4.81g，22.6mmol)和EtOH(400μuL)。将反应混合物在回流下加热2小时，然后用饱和NH4Cl水溶液(10mL)和水(150mL)淬灭并用EtOAc(3×150mL)萃取。干燥合并的有机层(MgSO4)并在真空下浓缩以得到作为黄色油的标题化合物(6.93g，98％)，其不经进一步纯化或表征而使用。
[0360] 中间体80-86
[0361] 与一般方法F-G类似地制备中间体80-86；参见下表4。
[0362] 表4：β-酮酯中间体的制备
[0363]
[0364]
[0365] 中间体87
[0366] 2-(4-氯-3-氟苯氧基)乙酸乙酯
[0367]
[0368] 将氢化钠(600mg，矿物油中的60％分散体，15.0mmol)悬于THF(50mL)中并添加4-氯-3-氟苯酚(2-00g，13.7mmol)和溴乙酸乙酯(1.51mL，13.7mmol)。将反应混合物搅拌18小时，用EtOAc(200mL)稀释，用1M NaOH水溶液(3×100mL)和水(100mL)洗涤，干燥(MgSO4)并在真空下浓缩以得到作为淡黄色油的标题化合物(2.20g，69％)，其不经进一步纯化或表征而使用。
[0369] 中间体88
[0370] 2-(4-氯-3-氟苯氧基)乙酸乙酯
[0371]
[0372] 使用3，4-二氯苯酚代替4-氯-3-氟苯酚，与中间体87类似地制备标题化合物(3.64g，95％)。
[0373] 中间体89
[0374] 2-(4-氯-3-氟苯氧基)-3-氧代丁二酸-1，4-二乙酯
[0375]
[0376] 将氢化钠(416mg，矿物油中的60％分散体，10.4mmol)悬于THF(50mL)中并添加草酸二乙酯(1.41mL，10.4mmol)、中间体87(2.20g，9.46mmol)和EtOH(200μL)。将反应混合物在回流下加热3小时，然后用饱和NH4Cl(10mL)和水(250mL)淬灭并用EtOAc(3×250mL)萃取。干燥合并的有机级分(MgSO4)并在真空下除去溶剂以得到作为橙色油的粗制标题化合物(2.45g，78％)，其不经进一步纯化或表征而使用。中间体90
[0377] 2-(3，4-二氯苯氧基)-3-氧代丁二酸-1，4-二乙酯
[0378]
[0379] 使用中间体88代替中间体87，与中间体89类似地制备标题化合物(5.03g，99％)。
[0380] 中间体91
[0381] 6-[(3-氟苯基)硫烷基]-5-甲基吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-醇
[0382]
[0383] 将2-氯乙酰乙酸甲酯(501mg，3.32mmol)和3-氟苯硫酚(355μL，3.32mmol)溶解于DCM(5mL)中并冷却至0℃。逐滴添加三乙胺(508μL，3.65mmol)的DCM(1.5mL)溶液并将反应混合物升温至室温。反应混合物用己烷(30mL)稀释，用水(2×15mL)和盐水(15mL)洗涤，干燥(MgSO4)并在真空下浓缩。残余物经柱色谱纯化以得到作为黄色液体的粗制标题化合物(611mg，76％)，其不经进一步纯化或表征而使用。
[0384] 中间体92
[0385] 3-[[(甲氧基羰基)亚氨基]氨基]丁-2-烯酸甲酯
[0386]
[0387] 将2-氯乙酰乙酸甲酯(1.01g，6.71mmol)溶解于Et2O(10mL)中并添加肼基甲酸甲酯(605mg，6.72mmol)。将反应混合物搅拌4小时并在真空下除去溶剂以得到作为黄色固体的粗制3-{[(甲氧基羰基)氨基]亚氨基}-2-甲基丁酸甲酯(1-48g)。将该材料悬于Et2O(15mL)中并添加1M NaHCO3水溶液(11mL)。将反应混合物搅拌2.5小时，然后分离有机层并用水(20mL)洗涤。合并的水溶液级分用Et2O(25mL)萃取，然后干燥合并的有机级分(MgSO4)并在真空下浓缩以得到作为红色液体的粗制标题化合物(0.96g)。
[0388] 中间体93
[0389] 一般方法H
[0390] 2-[(3-氟苯基)氨基]-3-甲氧基羰基)氨基]亚氨基}丁酸甲酯
[0391]
[0392] 将中间体92(0.48g，2.58mmol)溶解于THF(25mL)中并添加3-氟苯胺(326mg，2.93mmol)的THF(2.5mL)溶液。将反应混合物在室温下搅拌16小时。在真空下除去溶剂，然后用己烷将残余物磨碎以得到作为黄色固体的粗制标题化合物(638mg)，其不经进一步纯化或表征而使用。
[0393] 中间体94
[0394] 2-[(3-氟苯基)(甲基)氨基]-3-{[(甲氧基羰基)氨基]亚氨基}丁酸甲酯
[0395]
[0396] 根据一般方法H使中间体92(0.48g，2.58mmol)与N-甲基-3-氟苯胺反应以得到作为橙色液体的粗制标题化合物(899mg)，其不经进一步纯化或表征而使用。
[0397] 中间体95
[0398] 2-[乙基(3-氟苯基)氨基-3-{[(甲氧基羰基)氨基]亚氨基}丁酸甲酯
[0399]
[0400] 根据一般方法H使中间体92(0.48g，2.58mmol)与N-乙基-3-氟苯胺反应以得到粗制标题化合物(694mg)，其不经进一步纯化或表征而使用。
[0401] 中间体96
[0402] 7-羟基-6-{[3-(三氟甲基)苯基]甲基}吡唑并[1，5-a]嘧啶-5-羧酸
[0403]
[0404] 将实施例71(0.40g，1.09mmol)悬于1M NaOH水溶液(10mL)中并在回流下加热1小时。将反应混合物冷却并用浓HCl酸化。通过过滤收集沉淀物并干燥以得到作为米黄色固体的标题化合物(325mg，88％)，其不经进一步纯化或表征而使用。
[0405] 中间体97
[0406] 6-[(3-氟苯基)甲基]-7-羟基吡唑并[1，5-a]嘧啶-5-羧酸
[0407]
[0408] 将实施例73(10.4g，33.0mmol)溶解于THF(250mL)中并添加LiOH·H2O(5.54g，132mmol)的水(50mL)溶液。将反应混合物搅拌18小时，用1M HCl水溶液酸化并在真空下浓缩至约50mL。通过过滤收集沉淀物以得到作为膏状固体(cream solid)的标题化合物(9.46g，92％)。
[0409] 中间体98
[0410] 6-[(3，4-二氯苯基)甲基]-7-羟基吡唑并[1，5-a]嘧啶-5-羧酸
[0411]
[0412] 使用实施例72代替实施例73，与中间体97类似地制备作为膏状固体的标题化合物(288mg，100％)。
[0413] 中间体99
[0414] 6-[(3-氯-4-氟苯基)甲基]-7-羟基吡唑并[1，5-a]嘧啶-5-羧酸
[0415]
[0416] 将中间体82(469mg，1.42mmol)和3-氨基吡唑(130mg，1.56mmol)溶解 于AcOH(6mL)中并在90℃加热6小时。通过过滤收集沉淀物，用EtOH洗涤并干燥以得到作为白色固体的标题化合物(73.0mg，17％)，其不经进一步纯化或表征而使用。
[0417] 中间体100
[0418] 6-[(4-氯-3-氟苯基)甲基]-7-羟基吡唑并[1，5-a]嘧啶-5-羧酸
[0419]
[0420] 使用中间体86代替中间体82，与中间体99类似地制备标题化合物(33.0mg，8％)。
[0421] 中间体101
[0422] 4-苄氧基-3-氧代丁酸甲酯
[0423]
[0424] 将氢化钠(960mg，矿物油中的60％分散体，24.0mmol)悬于THF(10mL)中并逐滴添加苄醇(1.24mL，12.0mmol)的THF(10mL)溶液。将反应混合物搅拌30分钟并逐滴添加4-氯乙酰乙酸甲酯(1.41mL，12.0mmol)的THF(10mL)溶液。将反应混合物搅拌16小时，在
0℃用2M HCl水溶液(25mL)淬灭并调节至pH6。用Et2O(3×50mL)萃取水相，合并的有机级分用饱和NaHCO3水溶液(25mL)和水(50mL)洗涤，干燥(MgSO4)并在真空下浓缩。残余物经柱色谱纯化以得到作为淡黄色液体的标题化合物(1.94g，73％)，其不经进一步纯化或表征而使用。
0℃用2M HCl水溶液(25mL)淬灭并调节至pH6。用Et2O(3×50mL)萃取水相，合并的有机级分用饱和NaHCO3水溶液(25mL)和水(50mL)洗涤，干燥(MgSO4)并在真空下浓缩。残余物经柱色谱纯化以得到作为淡黄色液体的标题化合物(1.94g，73％)，其不经进一步纯化或表征而使用。
[0425] 中间体102
[0426] 5-[(苄氧基)甲基]-6-[(4-氯苯基)甲基]吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-醇
[0427]
[0428] 将中间体58(1.23g，3.54mmol)和3-氨基吡唑(309mg，3.72mmol)溶解 于EtOH(25mL)中并逐滴添加磷酸(85％于水中，486μL，7.08mmol)。在密封管中将反应混合物在85℃加热18小时。通过过滤收集沉淀物，用冷EtOH(3mL)洗涤并干燥以得到粗制标题化合物。
[0429] 中间体103
[0430] 6-[(3-氟苯基)甲基]-7-羟基-N-甲氧基-N-甲基吡唑并[1，5-a]嘧啶-5-甲酰胺
[0431]
[0432] 将中间体97(500mg，1.74mmol)溶解于DMF(5mL)中并添加DIPEA(0.91mL，5.22mmol)和HBTU(990mg，2.61mmol)。将反应混合物搅拌30分钟并添加N，O-二甲基羟胺盐酸盐(340mg，3.48mmol)。将反应混合物在室温下搅拌5小时。真空下除去溶剂，然后将残余物溶解于EtOAc(75mL)中并用饱和NH4Cl水溶液(100mL)、盐水(100mL)洗涤，干燥(MgSO4)并在真空下浓缩。残余物经HPLC纯化以得到作为白色固体的标题化合物(116mg，
20％)。
20％)。
[0433] 中间体104
[0434] 6-[(3，4-二氯苯基)甲基]-7-羟基-N-甲氧基-N-甲基吡唑并[1，5-a]嘧啶-5-甲酰胺
[0435]
[0436] 将中间体98(288mg，0.85mmol)、EDC盐酸盐(359mg，1.87mmol)、HONB(382mg，2.13mmol)和N-乙基吗啉(271μL，2.13mmol)溶解于DMF(10mL)中并搅拌30分钟。添加N，O-二甲基羟胺盐酸盐(87.0mg，0.89mmol)并将反应混合物搅拌5.5小时。添加N，O-二甲基羟胺盐酸盐(87.0mg，0.89mmol)并将反应混合物搅拌16小时。在真空下浓缩反应混合物，经柱色谱纯化并从MeOH中重结晶以得到作为白色固体的标题化合物(132mg，41％)。
[0437] 中间体105
[0438] 2-[(4-氯苯基)甲基]-3-氧代戊二酸-1，5-二乙酯
[0439]
[0440] 根据一般方法C使1，3-丙酮二羧酸二乙酯(10.0g，49.5mmol)与4-氯苄基溴反应以得到作为淡黄色液体的标题化合物(13.3g，82％)，其不经进一步纯化或表征而使用。
[0441] 中间体106
[0442] 2-{6-[(4-氯苯基)甲基]-7-羟基吡唑并[1，5-a]嘧啶-5-基}乙酸乙酯
[0443]
[0444] 将 中 间 体105(2.50g，7.65mmol)和3- 氨 基 吡 唑(0.70g，8.42mmol)悬 于EtOH(30mL)中并添加磷酸(85％于水中，0.89mL，15.3mmol)。将反应混合物在回流下加热16小时。添加水(30mL)并将反应混合物搅拌30分钟，然后冷却至-22℃。通过过滤收集沉淀物，用冷EtOH(50mL)洗涤并干燥以得到作为白色固体的粗制标题化合物(404mg，15％)，其不经进一步纯化或表征而使用。
[0445] 中间体107
[0446] 一般方法I
[0447] 6-[(4-氯苯基)甲基]-7-羟基-5-甲基吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-羧酸乙酯
[0448]
[0449] 将中间体1(670mg，2.60mmol)和3-氨基-4-乙氧羰基吡唑(450mg，2.90mmol)悬于EtOH(30mL)中并添加磷酸(85％于水中，300μL，4.37mmol)。将反应混合物在回流下加热2天。添加水(50mL)并将反应混合物搅拌1小时，然后冷却至0℃维持16小时。通过过滤收集沉淀物，用水洗涤并干燥以得到作为白色固体的标题化合物(670mg，73％)。
[0450] 中间体108-114
[0451] 与一般方法I类似地制备中间体108-114，；参见下表5。
[0452] 中间体115
[0453] 一般方法J
[0454] 6-[(4-氯苯基)甲基]-7-羟基-5-甲基吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-羧酸
[0455]
[0456] 将中间体107(670mg，1.94mmol)和KOH(1.00g，17.8mmol)溶解于水(50mL)和EtOH(50mL)中并在回流下加热2天。用磷酸水溶液将反应混合物酸化至pH3并在回流下加热1小时。通过过滤收集沉淀物，用水洗涤并干燥以得到作为白色固体的标题化合物(550mg，89％)。中间体116-122
[0457] 与一般方法J类似地制备中间体116-122，；参见下表6。
[0458] 表5：R7酯中间体
[0459]
[0460]
[0461] ＊可商购的中间体β-酮酯7
[0462] 表6：R 羧酸中间体
[0463]
[0464]
[0465] 实施例1
[0466] 6-[(4-氯苯基)甲基]-5-甲基吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-醇
[0467] 一般方法K
[0468]
[0469] 将 中 间 体1(5.00g，19.6mmol) 和 3-氨 基 吡 唑(1.79g，21.6mmol) 悬 于EtOH(100mL)中并添加磷酸(85％于水中，2.29mL，39.3mmol)。将反应混合物在回流下加热48小时。添加水(30mL)，然后将反应混合物冷却至4℃。通过过滤收集沉淀物，用水+和EtOH洗涤并干燥以得到作为白色固体的标题化合物(4.12g，77％)。HRMS(ESI)算得C14H12ClN3O：273.06689，实测273.06696。HPLC：Rf5.27分钟，100％。
[0470] 实施例2
[0471] 一般方法L
[0472] 5-甲基-6-{[4-(三氟甲基)苯基]甲基}吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-醇
[0473]
[0474] 将中间体7(6.46mmol)和3-氨基吡唑(644mg，7.75mmol)悬于EtOH(15mL)中并添加AcOH(2.5mL)。使用Biotage微波将反应混合物在120℃加热1小时。通过过滤收集+沉淀物，用EtOH洗涤并干燥以得到作为白色固体的标题化合物(387mg，20％)。HRMS(ESI)算得C15H12F3N3O：307.093247，实测307.093377。HPLC：Rf5.40分钟，100％。
[0475] 实施例3
[0476] 一般方法M
[0477] 3-[(3-氟苯基)甲基]-2-(吡嗪-2-基)咪唑并[1，5-a]嘧啶-4-醇
[0478]
[0479] 将中间体59(205mg，0.71mmol)和3-氨基吡唑(71.0mg，0.85mmol)溶解于AcOH(5mL)中并加热至80℃维持3天。将反应混合物在真空下浓缩，然后经柱色谱纯化并+从EtOH中重结晶以得到作为淡黄色固体的标题化合物(54.0mg，25％)。HRMS(ESI)算得C17H12FN5O：321.102588，实测321.103018。HPLC：Rf4.44分钟，100％。
[0480] 实施例4
[0481] 一般方法N
[0482] 5-乙基-6-{[3-氟-5-(三氟甲基)苯基]甲基}吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-醇
[0483]
[0484] 将中间体15和3-氨基吡唑(622mg，7.49mmol)悬于EtOH(10mL)中并添加磷酸(85％于水中，1.00mL，14.6mmol)。使用Biotage微波将反应混合物加热(170℃，吸收高)1小时。通过过滤收集沉淀物，用EtOH(2×10mL)洗涤并干燥以得到作为白色固体的标题化+合物(1.15g，54％)。HRMS(ESI)算得C16H13F4N3O：339.099475，实测339.100165。HPLC：
Rf5.86分钟，98.2％。
Rf5.86分钟，98.2％。
[0485] 实施例5
[0486] 6-(3-氟苯氧基)-5-甲基吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-醇
[0487]
[0488] 将 中 间 60(190mg，0.84mmol)和3- 氨 基 吡 唑 (77.0mg，0.92mmol)溶 解 于EtOH(5mL)中并将反应混合物在回流下加热1小时。通过过滤收集沉淀物并干燥以得到作+为白色固体的标题化合物(80.0mg，38％)。HRMS(ESI)算得C13H10FN3O2：259.075705，实测
259.076515。HPLC：Rf4.55分钟，99.8％。
259.076515。HPLC：Rf4.55分钟，99.8％。
[0489] 实施例6
[0490] 一般方法O
[0491] 6-[(4-氯苯基)甲基]-7-羟基吡唑并[1，5-a]嘧啶-5-羧酸甲酯
[0492]
[0493] 将中间体78(300mg，1.05mmol)和3-氨基吡唑(87.6mg，1.05mmol)溶解于AcOH(2mL)中并将反应混合物在回流下加热15小时。添加Et2O(10mL)，然后通过过滤收集所得沉淀物并用Et2O(5×10mL)洗涤。残余物经柱色谱纯化以得到作为橙色固体的标题化合物(45.2mg，14％)。HRMS(ESI+)算得C15H12ClN3O3：317.056719，实测317.053609。HPLC：Rf5.68分钟，96.9％。
[0494] 实施例7-77
[0495] 通过使中间体β-酮酯(表1)与3-氨基吡唑反应，与一般方法K-O类似地制备实施例7-77；参见下表7。
[0496] 实施例78
[0497] 6-[(3-氟苯基)氨基]-5-甲基吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-醇
[0498]
[0499] 将中间体93(473mg，1.59mmol)悬于EtOH(7.5mL)中，添加TiCl3(1.23mL，30wt％于2M HCl水溶液中，2.39mmol)并将反应混合物搅拌2小时。添加3-氨基吡唑(132mg，1.59mmol)的EtOH(2.5mL)溶液并将反应混合物在回流下加热75分钟，然后在室温下搅拌
16小时。用Et3N将反应混合物碱化至pH8，然后在真空下除去溶剂。残余物经柱色谱纯化并在Et2O中磨碎。将残余物悬于水(5mL)中并搅拌1小时。通过过滤收集沉淀物并干燥以+
得到作为白色固体的标题化合物(56.0mg，14％)。HRMS(ESI)算得C13H11FN4O：258.091689，实测258.092659。HPLC：Rf4.54分钟，99.6％纯度。
16小时。用Et3N将反应混合物碱化至pH8，然后在真空下除去溶剂。残余物经柱色谱纯化并在Et2O中磨碎。将残余物悬于水(5mL)中并搅拌1小时。通过过滤收集沉淀物并干燥以+
得到作为白色固体的标题化合物(56.0mg，14％)。HRMS(ESI)算得C13H11FN4O：258.091689，实测258.092659。HPLC：Rf4.54分钟，99.6％纯度。
[0500] 表7：吡唑并[1，5-a]嘧啶的制备
[0501]
[0502]
[0503]
[0504]
[0505]
[0506]
[0507]
[0508]
[0509]
[0510]
[0511]
[0512]
[0513]
[0514]
[0515] ＊可商购的中间体β-酮酯/3-氨基吡唑。
[0516] 实施例79
[0517] 一般方法P
[0518] 6-[乙基(3-氟苯基)氨基]-5-甲基吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-醇
[0519]
[0520] 将中间体95(610mg，1.88mmol)悬于EtOH(7mL)中，添加TiCl3(2.50mL，30wt％于2M HCl水溶液中，5.00mmol)并将反应混合物搅拌5小时。添加3-氨基吡唑(311mg，3.75mmol)的EtOH(5mL)溶液并将反应混合物在回流下加热7小时。在真空下除去溶剂，然后残余物经柱色谱纯化并在Et2O/MeOH中磨碎并干燥以得到作为白色固体的标题化合物+
(54.0mg，11％)。HRMS(ESI)算得C15H15FN4O：286.122989，实测286.122649。HPLC：Rf4.60分钟，98.3％。
(54.0mg，11％)。HRMS(ESI)算得C15H15FN4O：286.122989，实测286.122649。HPLC：Rf4.60分钟，98.3％。
[0521] 实施例80
[0522] 6-[(3-氟苯基)(甲基)氨基]-5-甲基吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-醇
[0523]
[0524] 根据一般方法P使中间体94(813mg，2.61mmol)反应以得到作为白色固体的标题+化合物(101mg，33％)。HRMS(ESI)算得C14H13FN4O：272.107339，实测272.106659。HPLC：
Rf5.07分钟，98.2％。
Rf5.07分钟，98.2％。
[0525] 实施例81
[0526] 一般方法Q
[0527] 6-[(3-氯苯基)甲基]-7-羟基吡唑并[1，5-a]嘧啶-5-羧酸甲酯
[0528]
[0529] 将实施例70(400mg，1.21mmol)和氢化钠(145mg，矿物油中的60％分散体，3.62mmol)溶解于MeOH(5mL)中并使用Biotage微波加热(130℃，吸收高)30分钟。反应混合物用AcOH(0.5mL)酸化，然后通过过滤除去沉淀物。在真空下浓缩滤液，残余物经柱+
色谱纯化以得到作为白色固体的标题化合物(48mg，13％)。HRMS(ESI)算得C15H12ClN3O3：
317.056719，实测317.055999。HPLC：Rf5.45分钟，99％。
色谱纯化以得到作为白色固体的标题化合物(48mg，13％)。HRMS(ESI)算得C15H12ClN3O3：
317.056719，实测317.055999。HPLC：Rf5.45分钟，99％。
[0530] 实施例82-84
[0531] 与一般方法Q类似地制备实施例82-84，；参见下表8。
[0532] 实施例85
[0533] 6-[(3-氯苯基)甲基]-7-羟基吡唑并[1，5-a]嘧啶-5-羧酸
[0534]
[0535] 将实施例70(400mg，1.21mmol)和氢化钠(145mg，矿物油中的60％分散体，3.62mmol)溶解于MeOH(5mL)中并使用Biotage微波加热(130℃，吸收高)30分钟。反应混合物用AcOH(0.5mL)酸化，然后通过过滤除去沉淀物。在真空下浓缩滤液，残余物经柱+
色谱纯化以得到作为白色固体的标题化合物(78mg，27％)。HRMS(ESI)算得C14H10ClN3O3：
303.041069，实测303.040849。HPLC：Rf5.45分钟，98.4％。
色谱纯化以得到作为白色固体的标题化合物(78mg，27％)。HRMS(ESI)算得C14H10ClN3O3：
303.041069，实测303.040849。HPLC：Rf5.45分钟，98.4％。
[0536] 实施例86
[0537] 7-羟基-6-{[3-(三氟甲基)苯基]甲基}吡唑并[1，5-a]嘧啶-5-羧酸-丙-2-基酯
[0538]
[0539] 将中间体96(50.0mg，0.15mmol)溶解于异丙醇(2.5mL)中并添加浓硫酸(0.25mL)。使用Biotage微波将反应混合物在100℃加热1小时。在真空下除去溶剂，残余+
物经HPLC和柱色谱纯化以得到作为灰白色固体的标题化合物(2.96mg，5％)。HRMS(ESI)算得C18H16F3N3O3：379.114376，实测379.115806。HPLC：Rf6.28分钟，99.4％。
6
物经HPLC和柱色谱纯化以得到作为灰白色固体的标题化合物(2.96mg，5％)。HRMS(ESI)算得C18H16F3N3O3：379.114376，实测379.115806。HPLC：Rf6.28分钟，99.4％。
6
[0540] 表8：R 乙酯的酯转移
[0541]
[0542]
[0543] 实施例87
[0544] 6-[(3-氯-4-氟苯基)甲基]-7-羟基吡唑并[1，5-a]嘧啶-5-羧酸-丙-2-基酯
[0545]
[0546] 使用中间体99代替中间体96，与实施例86类似地制备作为膏状固体的标题化合物(9.53mg，23％)。HRMS(ESI+)算得C17H15ClFN3O3：363.078597，实测363.079187。HPLC：Rf6.27分钟，100％。
[0547] 实施例88
[0548] 6-[(4-氯-3-氟苯基)甲基]-7-羟基吡唑并[1，5-a]嘧啶-5-羧酸-丙-2-基酯
[0549]
[0550] 使用中间体100代替中间体96，与实施例86类似地制备标题化合物(19.3mg，+52％)。HRMS(ESI)算得C17H15ClFN3O3：363.078597，实测363.077937。HPLC：Rf6.29分钟，
100％。
100％。
[0551] 实施例89
[0552] 6-(3，4-二氯苯氧基)-7-羟基吡唑并[1，5-a]嘧啶-5-羧酸甲酯
[0553]
[0554] 将实施例76(250mg，0.68mmol)和氢化钠(82mg，矿物油中的60％分散体，2.05mmol)溶解于MeOH(4mL)中并使用Biotage微波在100℃加热20分钟。反应混合物用AcOH(0.2mL)酸化，在真空下浓缩，然后残余物经柱色谱纯化，在MeOH(50mL)中再回流20分钟后过滤以得到作为白色固体的标题化合物(28.0mg，12％)。HRMS(ESI+)算得C14H9Cl2N3O4：
352.997011，实测352.997041。HPLC：Rf5.46分钟，98.7％。
352.997011，实测352.997041。HPLC：Rf5.46分钟，98.7％。
[0555] 实施例90
[0556] 6-[(4-氯苯基)甲基]-5-(羟甲基)吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-醇
[0557]
[0558] 将中间体102(380mg，1.00mmol)悬于DCM(300mL)中并在氩气下冷却至-75℃。逐滴添加三氯化硼(10.0mL，1.00M于DCM中，10.0mmol)溶液。将反应混合物搅拌2小时后用水(2mL)和MeOH(50mL)中的17％氨淬灭。将反应混合物碱化至pH9并在真空下除去溶剂。使残余物在水(100mL)与10％EtOH/EtOAc(800mL)之间分配，然后用3∶1的水∶盐水(100mL)和盐水(100mL)洗涤有机层，干燥(MgSO4)并在真空下浓缩以得到粗制产物(278mg)。样品(50.0mg，0.17mmol)经HPLC纯化以得到作为白色固体的标题化合物+
(9.43mg，19％)。HRMS(ESI)算得C14H12ClN3O2：289.061804，实测289.062944。HPLC：Rf4.75分钟，100％。
(9.43mg，19％)。HRMS(ESI)算得C14H12ClN3O2：289.061804，实测289.062944。HPLC：Rf4.75分钟，100％。
[0559] 实施例91
[0560] 6-[(4-氯苯基)甲基]-5-(吗啉-4-基甲基)吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-醇
[0561]
[0562] 将实施例90(60mg，0.21mmol)悬于DCM(60mL)中并逐滴添加亚硫酰氯(72.0μL，1.00mmol)。将反应混合物在室温下搅拌5小时，添加亚硫酰氯(720μL，10.0mmol)并将反应混合物搅拌18小时。添加亚硫酰氯(1.00mL，13.7mmol)并将反应混合物搅拌48小时。在真空下浓缩反应混合物，然后使残余物在饱和NaHCO3水溶液(35mL)与EtOAc(25mL)之间分配。用EtOAc(25mL)萃取水相，合并的有机级分用水(10mL)、盐水(25mL)洗涤，干燥(MgSO4)并在真空下除去溶剂。将残余物溶解于DMF(2mL)中，添加K2CO3(500mg)和吗啉(52.0μL，0.60mmol)并将反应混合物在50℃加热16小时。在真空下除去溶剂，然后使残余物在1M HCl水溶液(25mL)与EtOAc(20mL)之间分配。将水层酸化至pH4。有机层用1M HCl水溶液(15mL)洗涤，合并的水层用EtOAc(20mL)洗涤，用NaHCO3碱化至pH8并用EtOAc(2×20mL)萃取。合并的有机级分用盐水(20mL)洗涤，干燥(MgSO4)并在真空下除去溶剂。残余物经HPLC纯化并干燥以得到作为白色固体的标题化合物(25.2mg，23％)。
+
HRMS(ESI)算得C18H19ClN4O2：358.119654，实测358.120454。HPLC：Rf4.72分钟，100％。
+
HRMS(ESI)算得C18H19ClN4O2：358.119654，实测358.120454。HPLC：Rf4.72分钟，100％。
[0563] 实施例92
[0564] 6-[(3-氟苯基)甲基]-5-(3-甲基-1，2，4- 二唑-5-基)吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-醇
[0565]
[0566] 将氢化钠(266mg，矿物油中的60％分散体，6.64mmol)悬于DMF(20mL)中并添加乙胺肟(491mg，6.64mmol)和实施例69(400mg，1.33mmol)。使用Biotage微波反应器将反应混合物在100℃加热20分钟。真空下除去溶剂。将残余物溶解于EtOH(10mL)中并添加1M HCl水溶液(70mL)。通过过滤收集沉淀物并从EtOH中重结晶以得到作为黄色固体的标题+化合物(83.0mg，19％)。HRMS(ESI)算得C16H12FN5O2：325.097503，实测325.098633。HPLC：
Rf5.42分钟，98.2％。
Rf5.42分钟，98.2％。
[0567] 实施例93
[0568] 6-[(3-氟苯基)甲基]-5-(2-羟基丙-2-基)吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-醇
[0569]
[0570] 将实施例69(100mg，0.32mmol)溶解于THF(2mL)中，添加甲基溴化镁(3.17mL，1M于THF中，3.17mmol)并将反应混合物搅拌4小时。添加甲基溴化镁(3.17mL，1M于THF中，3.17mmol)并将反应混合物搅拌16小时。反应混合物用水(1mL)淬灭并在真空下除去溶剂。
残余物用水(50mL)稀释并用EtOAc(2×50mL)萃取。合并的有机级分用盐水(50mL)洗涤，干燥(MgSO4)并在真空下浓缩。残余物经HPLC和柱色谱纯化并干燥以得到作为灰白色固体+
的标题化合物(5.79mg，6％)。HRMS(ESI)算得C16H16FN3O2：301.122655，实测301.122185。
HPLC：Rf4.74分钟，100％。
残余物用水(50mL)稀释并用EtOAc(2×50mL)萃取。合并的有机级分用盐水(50mL)洗涤，干燥(MgSO4)并在真空下浓缩。残余物经HPLC和柱色谱纯化并干燥以得到作为灰白色固体+
的标题化合物(5.79mg，6％)。HRMS(ESI)算得C16H16FN3O2：301.122655，实测301.122185。
HPLC：Rf4.74分钟，100％。
[0571] 实施例94
[0572] 一般方法R
[0573] 1-{6-[(3-氟苯基)甲基]-7-羟基吡唑并[1，5-a]嘧啶-5-基}乙-1-酮
[0574]
[0575] 将实施例103(61.0mg，0.18mmol)溶解于THF(6mL)中，添加甲基溴化镁(1.8mL，1M于THF中，1.80mmol)并将反应混合物搅拌16小时。在真空下除去溶剂，残余物用EtOAc(50mL)稀释，用1M柠檬酸水溶液(2×75mL)洗涤，干燥(MgSO4)并在真空下浓缩。残余物经HPLC纯化并从EtOAc中重结晶以得到作为黄色固体的标题化合物(11.2mg，22％)。
+
HRMS(ESI)算得C15H12FN3O2：285.091355，实测285.091665。HPLC：Rf4.94分钟，97.6％。
+
HRMS(ESI)算得C15H12FN3O2：285.091355，实测285.091665。HPLC：Rf4.94分钟，97.6％。
[0576] 实施例95
[0577] 6-[(3-氟苯基)甲基]-5-(1-羟乙基)吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-醇
[0578]
[0579] 将实施例94(42.0mg，0.15mmol)溶解于MeOH(2mL)中并添加硼氢化钠(16.7mg，0.44mmol)。将反应混合物搅拌2.5小时，用水(1mL)淬灭并在真空下浓缩。残余物经HPLC+
纯化以得到作为灰白色固体的标题化合物(3.26mg，8％)。HRMS(ESI)算得C15H14FN3O2：
287.107005，实测287.106765。HPLC：Rf4.26分钟，99.2％。
纯化以得到作为灰白色固体的标题化合物(3.26mg，8％)。HRMS(ESI)算得C15H14FN3O2：
287.107005，实测287.106765。HPLC：Rf4.26分钟，99.2％。
[0580] 实施例96
[0581] 1-{6-[(3，4-二氯苯基)甲基]-7-羟基吡唑并[1，5-a]嘧啶-5-基}乙-1-酮[0582]
[0583] 根据一般方法R使中间体104反应以得到作为黄色固体的标题化合物(10.8mg，+27％)。HRMS(ESI)算得C15H11Cl2N3O2：335.022832，实测335.023032。HPLC：Rf5.82分钟，
99.1％。
99.1％。
[0584] 实施例97
[0585] 1-{6-[(3，4-二氯苯基)甲基]-7-羟基吡唑并[1，5-a]嘧啶-5-基}丙-1-酮[0586]
[0587] 根据一般方法R使中间体104与乙基溴化镁反应以得到作为灰白色固体的标题化+合物(16.6mg，36％)。HRMS(ESI)算得C16H13Cl2N3O2：349.038482，实测349.038512。HPLC：
Rf6.14分钟，99.7％。
Rf6.14分钟，99.7％。
[0588] 实施例98
[0589] 6-[(4-氯苯基)甲基]-5-[(3-甲基-1，2，4- 二唑-5-基)甲基]吡唑并[1，5-a]-嘧啶-7-醇
[0590]
[0591] 将氢化钠(116mg，矿物油中的60％分散体，2.89mmol)悬于DMF(5mL)中并添加乙胺肟(214mg，2.89mmol)和中间体106(200mg，0.58mmol)。使用Biotage微波将反应混合物在100℃加热30分钟，然后在真空下除去溶剂。将残余物溶解于EtOH(30mL)中并用1M HCl水溶液(100mL)酸化，然后经60小时冷却至-22℃。通过过滤收集沉淀物并经HPLC纯化以+得到作为白色固体的标题化合物(7.50mg，4％)。HRMS(ESI)算得C17H14ClN5O2：355.083602，实测355.083112。HPLC：Rf5.63分钟(梯度20-100％)，99.9％。
[0592] 实施例99
[0593] 一般方法S
[0594] 6-[(4-氯苯基)甲基]-7-羟基-N，5-二甲基吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酰胺[0595]
[0596] 将中间体115(15.9mg，50.0μmol)、咪唑(10.0mg，147μmol)和DBU(8.00mg，52.5μmol)溶解于MeCN(200μL)中。添加T3P(39.0μL，EtOAc中的50％溶液，65.6μmol)并将反应混合物摇动2小时。添加甲胺(2.33mg，75.0μmol)的MeCN(200μL)溶液并将反应混合物摇动7天。反应混合物经柱色谱纯化并干燥以得到标题化合物(3.20mg，19％)。
+ +
分析型HPLC-MS：纯度98％，ES ：331.1[MH]。HPLC＊：Rf2.08分钟，98％。
+ +
分析型HPLC-MS：纯度98％，ES ：331.1[MH]。HPLC＊：Rf2.08分钟，98％。
[0597] 实施例100
[0598] 6-[(4-氯苯基)甲基]-7-羟基-N，N，5-三甲基吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酰胺[0599]
[0600] 将中间体115(300mg，0.94mmol)溶解于亚硫酰氯(5mL)中并在回流下加热2小时。将反应混合物在真空下浓缩并在0℃溶解于THF(5mL)中。逐滴添加二甲胺(5mL)并将反应混合物在室温下搅拌18小时。在真空下除去溶剂，然后将残余物溶解于CHCl3(30mL)中，用饱和NH4Cl水溶液(20mL)、饱和NaHCO3水溶液(10mL)、盐水(2×10mL)洗涤，干燥(Na2SO4)并在真空下浓缩。残余物经HPLC纯化以得到作为灰白色固体的标题化合物+(180mg，55％)。HRMS(ESI)算得C17H17ClN4O2：344.104004，实测344.104784。HPLC：Rf5.50分钟，98.2％。
[0601] 实施例101
[0602] 一般方法T
[0603] 6-[(4-氯苯基)甲基]-7-羟基-5-甲基-N-[(2R)-氧杂环戊-2-基甲基]吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酰胺
[0604]
[0605] 将中间体115(100mg，0.31mmol)溶解于DMF(5mL)中，并添加DIPEA(0.22mL，1.26mmol)、HBTU(179mg，0.47mmol)、HOBt(106mg，0.79mmol) 和(R)-2- 四 氢 糠 基 胺(tetrahydrofurfuryl amine)(95.5mg，0.94mmol)。将反应混合物在室温下搅拌18小时。在真空下除去溶剂，然后将残余物溶解于EtOAc(30mL)中，用饱和NH4Cl水溶液(20mL)、饱和NaHCO3(10mL)、盐水(2×10mL)洗涤，干燥(Na2SO4)并在真空下浓缩。残余物经HPLC纯化以+
得到作为白色固体的标题化合物(42mg，33％)。HRMS(ESI)算得C20H21ClN4O3：400.130218，实测400.131738。HPLC：Rf5.60分钟，100％。
得到作为白色固体的标题化合物(42mg，33％)。HRMS(ESI)算得C20H21ClN4O3：400.130218，实测400.131738。HPLC：Rf5.60分钟，100％。
[0606] 实施例102
[0607] 一般方法U
[0608] 7-羟基-N-(2-甲氧基乙基)-5-甲基-6-[(4-甲基苯基)甲基]吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酰胺
[0609]
[0610] 将中间体116(14.9mg，50.0μmol)、咪唑(10.0mg，147μmol)和DBN(6.00mg，48.3μmol)溶解于MeCN(200μL)中。添加T3P(39.0μL，EtOAc中的50％溶液，65.6μmol)并将反应混合物摇动2小时。添加2-甲氧基-乙胺(5.75mg，75.0μmol)的MeCN(200μL)溶液并将反应混合物摇动4天。反应混合物经柱色谱纯化以得到标题化合物(12.7mg，+
72％)。HRMS(ESI)算得C19H22N4O3：354.169191，实测354.170481。HPLC＊：Rf2.13分钟，
100％。
72％)。HRMS(ESI)算得C19H22N4O3：354.169191，实测354.170481。HPLC＊：Rf2.13分钟，
100％。
[0611] 实施例103
[0612] 一般方法V
[0613] 6-苄基-7-羟基-5-甲基-N-(2-苯氧基乙基)吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-甲酰胺[0614]
[0615] 将中间体117(14.0mg，50.0μmol)和1-甲基咪唑(8.00μL，100μmol)溶解于DMF(200μL)中。添加T3P(39.0μL，EtOAc中的50％溶液，65.6μmol)并将反应混合物摇动1小时。添加2-苯氧基-乙胺(8.25mg，60.0μmol)的MeCN(200μL)溶液并将反应混合物+
摇动7天。反应混合物经柱色谱纯化并干燥以得到标题化合物(4.8mg，24％)。HRMS(ESI)算得C23H22N4O3：402.169191，实测402.170681。HPLC＊：Rf2.35分钟，100％。
摇动7天。反应混合物经柱色谱纯化并干燥以得到标题化合物(4.8mg，24％)。HRMS(ESI)算得C23H22N4O3：402.169191，实测402.170681。HPLC＊：Rf2.35分钟，100％。
[0616] 实施例104-118
[0617] 通过使中间体羧酸与所需胺反应，与一般方法S-V类似地制备实施例104-118；参见下表9。
[0618] 表9：R7羧酸的酯化
[0619]
[0620]
[0621]
[0622]
[0623]
[0624] 生物学测试
[0625] CCR2功能性钙测定
[0626] CCR2受体通过Gi/Gq信号 传导途径偶联 并且导致钙动 员(calciummobilization)的活化。通过以下方法常规地测试受试化合物的功能性活性：使用钙流量荧光成像读板仪(Fluorescent Imaging Plate Reader)FLIPR测定，在用人CCR2受体转染(hMCP-1攻击)的HEK293EBNA细胞中以剂量依赖性方式测量化合物拮抗CCR2活性的能力。
未转染的HEK293EBNA细胞用作非特异性应答的对照。
未转染的HEK293EBNA细胞用作非特异性应答的对照。
[0627] 简言之，将受试化合物溶解于二甲基亚砜(DMSO)中至浓度为10mM并且储存在基质screenmate架(rack)中。在测定当天将需要量的化合物转移到96孔化合物板上并在测定缓冲液中稀释至所需的最终浓度；通过制备1∶3系列稀释液以产生10个点的曲线来测定剂量响应测量。然后将化合物转移到备用的384孔测定板。根据化合物的效力调整最高浓度，使用的典型浓度范围为30μM至0.5nM。使用的测定缓冲液是补加有20mM HEPES和0.1％BSA的HBSS缓冲液，pH7.4。加载/洗涤缓冲液与测定缓冲液相同。
[0628] 将细胞以10000个细胞/50μl的密度悬于培养基中(所述细胞培养基组分为补加有10％透析FBS、250μg/ml遗传霉素和400μg/ml潮霉素B的高葡萄糖DMEM)，转移至384孔黑色/透明Costar板(Costar#3712)(50μl/孔)中，并在37℃下在5％CO2/95％空气的湿润的培养箱中孵育16小时。使用Biotek ELx405在37℃用测定缓冲液清洗细胞，清洗3次，孔中留下20μl缓冲液。将一小瓶(vial)Fluo-4(50μg)溶解于45μl普朗尼克酸(pluronic acid)(240mg/ml于DMSO中)来制备20μlFluo-4(Fluo-4原液，1mM)。然后用加载缓冲液将该Fluo-4原液稀释250倍以得到4μM的Fluo-4浓度。使用重复多通道移液管将染料溶液(在2小时内使用并且避光)添加到每个孔中；然后将细胞在37℃孵育60分钟。孵育之后，使用Biotek ELx405在37℃用测定缓冲液清洗细胞，清洗3次，每个孔中留下40μl并在37℃孵育10分钟后使用。使用组合的激动剂/拮抗剂方案。使用FLIPR将化合物(拮抗剂)添加到细胞板中。在添加化合物(10μl)之前每秒记录基础板荧光，持续10秒；然后每秒记录荧光，持续1分钟；然后每6秒记录荧光，再持续1分钟。然后使用FLIPR添加激动剂(MCP-1)并且如上所述记录荧光。
[0629] 阳性对照(激动剂)是以在蒸馏水中浓度10μM的原液储存并且在-20℃储存的人重组MCP-1(最大响应：30nM；EC50剂量：3～5nM)。参照化合物(拮抗剂)是RS102895，其作为10mM DMSO溶液使用并且在-20℃储存(2μM下完全抑制，fKi＝84nM)。
[0630] 以峰荧光强度减去基础荧光强度来测量FLIPR响应并且表示为EC50MCP-1攻击的百分比。使用GraphPad Prism4.0(GraphPad Software Inc.，San Diego，CA)进行曲线拟合和参数估计。
[0631] 发现本发明的示例性化合物是CCR2的高效抑制剂(参见表10)。CCR2结合测定125
([ I]-MCP-1置换)
([ I]-MCP-1置换)
[0632] 使用[125I]-MCP-1评价受试化合物与CCR2受体的结合。表明受试化合物以竞争性方式置换放射性标记的配体。
[0633] 简言之，将25μl测定缓冲液(25mM HEPES，pH7.4，5mM MgCl2，1mM CaCl2，0.2％(w/v)不含蛋白酶的BSA，100μg/mL杆菌肽素和0.1MNaCl)放入总结合孔中，然后将25μl未标记配体(0.4μM MCP-1，用于确定非特异性结合)放入非特异性结合孔中。向所有孔125
中都添加[ I]-MCP-1(25μl)、人CCR2-HEK293EBNA膜制备物(25μl)和SPA珠(25μl)。
将孔孵育4小时并在Perkin Elmer Topcount NXT中计数，1分钟/孔。
中都添加[ I]-MCP-1(25μl)、人CCR2-HEK293EBNA膜制备物(25μl)和SPA珠(25μl)。
将孔孵育4小时并在Perkin Elmer Topcount NXT中计数，1分钟/孔。
[0634] 通过以下制备SPA珠(麦胚凝集素(wheat germ agglutinin，WGA)PEI A型PVT0.25mg/孔)：将冻干的珠子用去离子水重建至100mg/mL，然后在测定缓冲液中稀125
释以得到10mg/mL。放射配体([ I]-MCP-1)通过在测定缓冲液中稀释来制备，以得到
0.32μCi/mL，～17600dpm/25μL(比活性2000Ci/mMol)。最终测定浓度为0.04nM。如下制备人CCR2-HEK293EBNA细胞膜：在室温下细胞以1000×g离心3分钟，在PBS中清洗并再次离心。然后用设定为6的Ultra Turrax使细胞在5～10mL冰冷缓冲液A(EDTA10mM，HEPES10mM，pH7.4)中均质化10秒。然后再用冰冷缓冲液A稀释并在4℃以20000×g离心
20分钟，将混合物在5～10mL冰冷缓冲液B(EDTA0.1mM，HEPES10mM，pH7.4)中再均质化并在4℃以20000×g离心20分钟。测定蛋白质并以3mg/mL重悬于缓冲液C(缓冲液B+1片/10mL Roche蛋白酶抑制剂混合物(cocktail))中。使用前将膜解冻并用测定缓冲液稀释以得到80μg/mL(2μg/孔)。
释以得到10mg/mL。放射配体([ I]-MCP-1)通过在测定缓冲液中稀释来制备，以得到
0.32μCi/mL，～17600dpm/25μL(比活性2000Ci/mMol)。最终测定浓度为0.04nM。如下制备人CCR2-HEK293EBNA细胞膜：在室温下细胞以1000×g离心3分钟，在PBS中清洗并再次离心。然后用设定为6的Ultra Turrax使细胞在5～10mL冰冷缓冲液A(EDTA10mM，HEPES10mM，pH7.4)中均质化10秒。然后再用冰冷缓冲液A稀释并在4℃以20000×g离心
20分钟，将混合物在5～10mL冰冷缓冲液B(EDTA0.1mM，HEPES10mM，pH7.4)中再均质化并在4℃以20000×g离心20分钟。测定蛋白质并以3mg/mL重悬于缓冲液C(缓冲液B+1片/10mL Roche蛋白酶抑制剂混合物(cocktail))中。使用前将膜解冻并用测定缓冲液稀释以得到80μg/mL(2μg/孔)。
[0635] 特异性结合被确定为拮抗剂不存在下的总结合与过量拮抗剂存在下的结合(非特异性结合)之差。数据表示为特异性结合的百分比并且使用GraphPad Prism4软件(GraphPad，San Diego，CA，USA)通过4参数逻辑斯蒂方程(logistic equation)分析以得到IC50值。使用放射配体浓度的校正由IC50值计算Ki值。
[0636] 发现所测试的本发明示例化合物是CCR2的高效抑制剂(参见表10)。表10：CCR2功能性活性和结合数据
[0637] (A：＜10nM，B：10～100nM，C：100～1000nM)
[0638]
[0639]
[0640]
[0641] 体内效力
[0642] 糖尿病性肾病是肾病的常见表现并且被定义为在高血糖情况下肾功能不全的进行性发展。这种持续的高血糖通过细胞外基质蛋白质升高的合成和降低的降解而引起肾小球系膜扩张，进而逐渐破坏肾小球毛细血管，最终导致蛋白尿和肾衰竭。可采用糖尿病的动物模型用于评估疾病机制，筛选用于治疗该病症的潜在治疗和评价治疗选择。链脲霉素(streptozotocin，STZ)是抗生素，更具体地是选择性抑制β细胞O-GlcNAcase(负责从蛋白质中移除O-GlcNAc的酶)之活性的N-乙酰葡糖胺类似物。向大鼠单次腹膜内注射STZ导致选择性损害胰中产生胰岛素的β细胞，引起胰岛素缺陷，并且在48小时后引起后续的高血糖。经过该过程的时程(可从3周持续至数月)，动物的蛋白尿和血清肌酸肝和与糖尿病性肾病相关的一些组织学病变方面产生了适度的升高。此研究的目的是测定受试化合物CCR2拮抗剂(实施例33)在STZ诱导之糖尿病的大鼠模型中的效力。
[0643] 在施用链脲霉素之前3天向雄性Wistar大鼠给予：每天向第1和第3组经口施用盐水中的载剂(30％w/v羟丙基-β-环糊精(hydroxypropyl-beta-cyclodextrin，HPBC))，或者向第2组经口施用实施例33(8mg/kg/天)。在第0天向第1和第2组(STZ组)的大鼠注射链脲霉素(50mg/kg体重，腹膜内(i.p.)，溶解于20mM柠檬酸钠缓冲液)。向第3组(假手术)小鼠注射等体积的20mM柠檬酸钠缓冲液。在第43天处死所有动物，取出左肾并切成矢状切面。在室温下浸入磷酸盐缓冲盐水(PBS)(0.01mol/L，pH7.4)中的
10％(重量/体积)甲醛中来固定这些组织样品。在使用梯度乙醇脱水后，将组织包埋到Paraplast(Sherwood Medical，Mahwah，NJ，USA)中，切成薄(8μm)切片并安放在载玻片上。然后用二甲苯去除切片的石蜡。去除石蜡之后，切片用苏木精和伊红进行复染色或者用ED1染色，并在光学显微镜(Zeiss AxioSkop)下观察。测量的参数为：1)单核细胞和巨噬细胞浸润、2)小管损伤、和3)肾小球损伤。由对处理不知情的观察者对每个参数给出半定量的评分。
10％(重量/体积)甲醛中来固定这些组织样品。在使用梯度乙醇脱水后，将组织包埋到Paraplast(Sherwood Medical，Mahwah，NJ，USA)中，切成薄(8μm)切片并安放在载玻片上。然后用二甲苯去除切片的石蜡。去除石蜡之后，切片用苏木精和伊红进行复染色或者用ED1染色，并在光学显微镜(Zeiss AxioSkop)下观察。测量的参数为：1)单核细胞和巨噬细胞浸润、2)小管损伤、和3)肾小球损伤。由对处理不知情的观察者对每个参数给出半定量的评分。
[0644] 链脲霉素处理导致了单核细胞和巨噬细胞浸润(图1)、小管损伤(图2)和肾小球损伤(图3)，其均在统计上显著地高于假手术(非糖尿病)组中所见(p＜0.01)。与STZ-载剂处理组相比，向STZ处理的动物施用受试化合物对降低所有的三个参数都具有统计上显著的作用(p＜0.01)。这些结果表明受试化合物和本发明化合物一般在治疗糖尿病性肾病中的功用。
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