本发明的技术领域

本发明涉及一些对Vanilloid受体，尤其是I型Vanilloid受体具有高选择性 和高亲和力的化合物，其中所说的受体也被称为辣椒素受体或VR1受体。本发 明重要的一面是提供了不是辣椒素类似物(例如，它们不包含带有结合于两个 毗连环碳上的两个氧原子的苯环)的辣椒素受体拮抗剂，优选人VR1受体拮抗 剂，它们没有激动剂活性，并且对VR1受体表现出空前程度的亲和力。在另一 方面，本发明提供了一些作为VR1受体配体的芳基哌嗪和相关的化合物。此外， 本发明涉及该类VR1受体配体、高亲和力的拮抗剂和包含该类化合物的药物组 合物，以及该类化合物在治疗疾病和其它与健康有关的状况中的应用。此外， 本发还明涉及芳基哌嗪和相关化合物用作VR1受体分析的工具的应用以及用 作细胞和组织样品中VR1受体定量测量和定位的探针的应用。

背景

疼痛的感觉可以通过任何数目的物理和化学刺激而引发。对于哺乳动物 而言，被定义为“伤害感受器(nociceptors)”的一组特别的小直径感觉神经 元的周围末梢将该响应介导为可能有害的刺激。

为了找出用于治疗急性和慢性疼痛的更好的镇痛剂以及为了研究治疗各 种神经病疼痛的方法，对伤害感受的分子机理进行了大量的研究。对于热、低 细胞外pH(酸度)、或辣椒素(造成红辣椒具有辣味的化合物)的反应的特征在于 对伤害感受器的持续作用。已经表明热和辣椒素都能通过阳离子的流入来激活 背侧根神经节和三叉神经的神经节神经元。此外，适度的酸性条件能产生该反 应并且还能增强伤害感受器对于热和辣椒素的反应。

孤立的感觉神经元中的辣椒素响应表现出剂量依赖性，并且还可被具有共 同的vanilloid部分的辣椒素结构类似物所激发。术语vanilloid受体(VR)用于描 述识别辣椒素和该类相关刺激化合物的神经元膜识别部位。假定VR是一种优 先用于钙的非选择性的阳离子通道。在1989年，Resiniferatoxin(RTX)，某些 大戟属(Euphorbia)植物所产生的一种天然产物，被认为可作为一种极有效的 VR激动剂。3H RTX的特异性结合为vanilloid受体的存在提供了第一个明确 的证据。辣椒素反应可以被另外一个辣椒素类似物—capsazepine所完全抑制(并 且因此被拮抗)，并且还可以被非选择性的阳离子通道阻滞剂钌红(ruthenium red)所抑制。这些拮抗剂与VR以不超过中度亲和力的亲和力进行结合(即， Ki值不低于140uM)。

给VRs定性的兴趣导致了由大鼠背侧根神经节cDNA库中而得的大鼠功能 性辣椒素受体(VR1)的克隆。人类的VR1也已被进行了描述，这里所用的术 语VR1指的是大鼠的VR1或/和人的VR1。

辣椒素受体通道在温度升高时开放(高于约45℃)。辣椒素和相关化合物 以及质子是降低通道开放阈值的刺激物，因此在存在这些刺激物中的任何一种 时，该辣椒素受体甚至可以在室温下开放。

该辣椒素受体通道的开放后，炎症性的肽从表达该受体的神经元及其附近 的神经元中释放出来，从而增加了该疼痛反应。在最初被辣椒素激活后，该辣 椒素受体迅速脱敏，该脱敏作用可能是由于该受体细胞内部位的磷酸化作用而 完成的。辣椒素及相关的VR1激动剂vanilloid化合物作为典型的麻醉剂长期以 来一直被药用。虽然该类化合物在开始时会引起强烈的烧灼感，但受体脱敏提 供了缓解疼痛的作用。

辣椒素受体在背侧根神经节中的定位确定了这种受体可作为止痛剂发现 中的靶目标。目前市售的多数止痛剂化合物作用于中枢，常常具有副作用。希 望使用具有较少副作用的作用于外周的止痛剂化合物来更有效的治疗急性和慢 性疼痛。因此，希望采用一种与辣椒素受体相互作用，特别是可用作辣椒素受 体拮抗剂的化合物用来治疗慢性和急性疼痛、痒、以及小便失禁，该化合物不 引起目前市售的包含辣椒素的化合物所引起的最初的痛觉。 相关现有技术的说明

该vanilloid化合物辣椒素和Resiniferatoxin(RTX)是和辣椒素受体的有效 的和特异性激动剂。Capsazepine(其包含带有结合于两个毗连环碳上的两个氧原 子的苯环，因此是一种辣椒素类似物)是一种具有中等亲和力的竞争性辣椒素受 体拮抗剂。碘-RTX是一种最近被报道可作为高亲和力拮抗剂的辣椒素类似物。 虽然是一种非选择性的阳离子疼痛阻滞剂，但是无机染料，钌红，也可以拮抗 受体的辣椒素反应。有关vanilloid受体配体的广泛评论参见Szallasi和 Blumberg，(Pharmacological Reviews(1999)51(3)：159-211)。

本发明概述

本发明涉及一些VR1受体配体，特别是VR1受体拮抗剂，和用VR1受 体拮抗剂治疗神经性疼痛、外周神经介导的疼痛、以及疼痛、炎症和由于受到 激活辣椒素(capsacin)受体的刺激如辣椒素和催泪气而导致的支气管收缩症 (broncho-constriction symptom)。

一方面，本发明提供了一些能作为辣椒素受体调节剂的新型化合物，这 些化合物中的一些表现出比以前所述的任何一种VR1受体拮抗剂都强的拮抗 能力。在辣椒素受体结合试验，如实施例10所给出的试验中能作为辣椒素受 体拮抗剂并能与辣椒素受体(优选人的VR1)以低于100uM的Ki值进行结合的 化合物，或者在测定辣椒素受体拮抗作用的试验(实施例11)中EC50值小于 或等于100uM的化合物在这里被称为有效的辣椒素受体拮抗剂，结合或拮抗 的Ki或EC50值小于或等于10uM的该类化合物在这里被称为十分有效的辣 椒素受体拮抗剂。

另一方面，本发明涉及一些用本发明有效的辣椒素受体拮抗剂化合物治 疗由受到能激活辣椒素受体活化的刺激而产生的疼痛所导致的病症的方法。本 发明特别是提供了治疗由于接触辣椒素或接触热、光、催泪气、或酸而被灼伤 的个体的方法，该方法包括给予该类个体服用有效量的有效的辣椒素受体拮抗 剂，优选非常有效的(高效的)辣椒素受体拮抗剂，以减少该个体的疼痛症状 或敏感性。本发明优选的化合物能缓解该个体的疼痛而并不会使其丧失意识， 并且优选地不具有镇静作用，本发明优选化合物所提供的疼痛缓解度等于或高 于在不丧失意识的条件下使用吗啡时该个体所获得的疼痛缓解度。十分优选的 化合物在缓解疼痛时只引起短暂的(即，持续时间不多于疼痛缓解持续时间的 一倍半)或不引起镇静作用(参见用于进行镇静试验的实施例16)。这里所指的 个体或患者可以是人或非人类的哺乳动物，包括家养的用于作伴的动物(宠物) 和家畜类动物，将在下面进行更详细的讨论。

本发明的另一方面还提供了一些基于辣椒素受体拮抗剂能缓解该类疼痛 的出乎意料的发现的基础上的治疗神经性疼痛的方法。

本发明还提供了一些对辣椒素受体具有高亲和力和高选择性的芳基哌嗪 及相关化合物，其中所说的辣椒素受体包括人的辣椒素受体，也被称为VR1 受体。

因此，本发明提供了如下式I、式II、式III、式IV、式V、式VI、或式 VII、式VIII、式IX和式A-F所示的新化合物(在下文中“本发明的化合物” 指的是式I-IX和式A-F的化合物)、以及包含式I-IX和式A-F的化合物的药 物组合物。

本发明还包含治疗遭受某些疾病或情况的患者的方法，其中所说的患者 尤其是遭受疼痛或患有小便失禁的患者，该方法包括给予患者能有效改善被治 疗的疾病或状况的症状(例如，减少疼痛或减少小便失禁的频率)的式I-IX 和式A-F的化合物的量。

此外，本发明还涉及本发明的化合物用作辣椒素受体，特别是VR1受体 (例如在细胞或组织中)的测定、特性描述和定位测量中的试剂、标准物、及 探针的应用。

因此，本发明的许多方面都直接涉及式I的化合物： 式1 或其可药用的盐，其中：A选自O、S、NRA、CRBRB′、NRACRBRB′、CRBRB′NRA、

-CRA＝CRB-、和C3H4，其中RA、RB、以及RB′各自独立地选自氢或烷基中

的一种； Z是氧或硫； R1和R2各自独立地代表氢或低级烷基；或 R1和R2结合起来形成一个如下式所示的包含氮的5至8元环： 其中n是1、2、或3； R3和R4各自独立地选自氢；卤素；羟基；氨基；氰基；硝基；-COOH；-CHO；

任意取代的烷基；任意取代的烯基；任意取代的炔基；任意取代的烷氧基；

任意取代的单-或二烷基氨基；任意取代的烷硫基；任意取代的烷基酮；任

意取代的烷基酯；任意取代的烷基亚磺酰基；任意取代的烷基磺酰基；任

意取代的单-或二-烷基甲酰胺(carboxamide)；任意取代的-S(O)nNH烷基；

任意取代的-S(O)nN(烷基)(烷基)；任意取代的-NHC(＝O)烷基；任意取代的

-NC(＝O)(烷基)(烷基)；任意取代的-NHS(O)n烷基；任意取代的-NS(O)n(烷

基)(烷基)；任意取代的饱和或部分不饱和的有5至8个原子的杂环烷基，

该饱和或部分不饱和的杂环烷基包含1、2或3个选自N、O、和S的杂原

子；任意取代的具有1至3个环的芳基；或任意取代的杂芳基，所说的杂

芳基具有1至3个环，各环中有5至8个环原子，并且，在所说的环中至

少有一个环具有1至约3个选自N、O、和S的杂原子； 或任何两个 没有连接到同一个碳原子上的R3和R4可以结合起来形成一个任意取代的芳基

环；一个饱和或部分不饱和的包含5至8个原子的碳环，该碳环可被任意

取代；或形成一个包含5至8个原子的饱和、部分不饱和、或芳香族的杂

环，该杂环可被任意取代并包含1、2、或3个选自N、O、和S的杂原子；

和 Ar1和Ar2是相同或不同的基团并各自独立地代表任意取代的环烷基；任意取代

的包含5至8个原子的杂环烷基，该杂环烷基环包含1、2、或3个选自N、

O、和S的杂原子；任意取代的具有1至3个环的芳基；或任意取代的杂

芳基，所说的杂芳基具有1至3个环，各环有5至8个原子，并且在所说

的环中有至少一个环具有1至3个选自N、O、和S的杂原子，和 n在各种情况中分别选自0、1、和2。 在本发明的特定实施方案中，R1和R2被连接起来形成一个5至7元杂环烷基

环，例如R1和R2可以连接起来形成一个哌嗪环。这种5至7元杂环烷基

环优选地是未被取代的环或是在一个或两个位置被C1-6烷基如甲基或乙

基所取代的环。可变的“Z”优选地是氧并且可变的“A”一般是NH、CH＝CH

或CH2NH。Ar1和Ar2优选地是任意取代的苯基或任意取代的吡啶基；

Ar2优选地是任意取代的2-吡啶基。可出现于Ar1和Ar2的取代基包括、

但不限于丁基、异丙基、三氟甲基、硝基、甲基、和卤素。在本发明特定

的实施方案中，在Ar1的4位(当Ar1是苯基或吡啶基时)及Ar2的3位上

进行取代(当Ar2是苯基或吡啶基时)。 本发明详细描述 本发明尤其涉及式I的化合物，其中R1和R2各自独立地代表氢或低级烷基，例

如，C1-6烷基。该类化合物可被称为式IA的化合物。 优选的式IA的化合物及其可药用的盐含义如下： R3和R4在各种情况中各自独立地选自氢、卤素、氰基、硝基、卤代烷基、卤

代烷氧基、羟基、氨基、被0-2个R6所取代的烷基、被0-2个R6所取

代的烯基；被0-2个R6所取代的炔基；被0-2个R6所取代的烷氧基、

被0-2个R6所取代的-NH(烷基)、各烷基各自独立地被0-2个R6所取代

的-N(烷基)(烷基)、-XR7、和Y； 或任何两个 没有连接到同一个碳原子上的R3和R6连接起来形成一个被0-3个R6所取代的

芳基环、一个饱和或部分不饱和的包含5至8个环原子的碳环，该碳环可

以被0-2个R6所取代、或一个饱和、部分不饱和、或芳香族的包含5至

8个原子的杂环，该杂环可被0-2个R6所取代并包含1、2、或3个选自

N、O、和S的杂原子；和 Ar1和Ar2可以相同或不同，并且选自下述基团：环己基、环戊基、哌啶基、哌

嗪基、苯基、吡咯基、呋喃基、噻吩基、吡唑基、咪唑基、噻唑基、异噻

唑基、噁唑基、异噁唑基、噁二唑基、三唑基、四唑基、吡啶基、嘧啶基、

吡嗪基、苯并咪唑基、萘基、吲哚基、异吲哚基、苯并呋喃基、异苯并呋

喃基、苯并[b]苯硫基、苯并[d]异噁唑基，喹啉基、异喹啉基、噌啉基、喹

唑啉基、和喹噁啉基，各基团可任意被R5所单-、二-、或三取代；或 Ar1和Ar2可以相同或不同并代表如下式所示的含氧的双环基团：

其可任意被R5所单-、双-、或三取代，其中的L代表结合点并且可为苯

环上的任何一点，并且在该含氧双环中，包含氧的环由5至8个环原子所

组成，其包含1或2个氧原子并且其余的环原子是碳原子； R5在各种情况中分别选自卤素、氰基、硝基、卤代烷基、卤代烷氧基、羟基、

氨基、被0-2个R6所取代的烷基、被0-2个R6所取代的烯基、被0-2个

R6所取代的炔基、被0-2个R6所取代的烷氧基、被0-2个R6所取代的

-NH(烷基)、每一烷基各自独立地被0-2个R6所取代的-N(烷基)(烷基)、

-XR7、以及Y； R6在各种情况中分别选自卤素、羟基、氰基，烷基，烷氧基、-NH(烷基)、-N(烷

基)(烷基)、-S(O)n(烷基)、卤代烷基、卤代烷氧基、CO(烷基)、CONH(烷

基)、CON(烷基1)(烷基2)，其中的烷基1和烷基2可连结起来形成一个包

含5至8个环原子且包含1、2、或3个选自N、O、和S的杂原子的杂环

烷基环、-XR7、和Y； X在各种情况中分别选自下列基团：-CH2-、-CHR8-、-O-、-S(O)n-、-NH-、-NR8-、

-C(＝O)-、-C(＝O)O-、-C(＝O)NH-、-C(＝O)NR8-、-S(O)nNH-、-S(O)nNR8-、

NHC(＝O)-、-NR8C(＝O)-、-NHS(O)n-、和-NR8(O)n-； R7和R8在各种情况中各自独立地选自氢，和

直链、支链、和环烷基，以及(环烷基)烷基，其中所说的直链、支链、和

环烷基，以及(环烷基)烷基由1至8个碳原子所组成，并且包含零或一个

或多个双键或三键，1至8碳原子中的每一个都可以被一个或多个取代基

所进一步取代，其中所说的取代基可任意选自氧、羟基、卤素、氨、氰基、

硝基、卤代烷基、卤代烷氧基、-O(烷基)、-NH(烷基)、-N(烷基)(烷基)、

-NHC(O)(烷基)、-N(烷基)C(O)(烷基)、-NHS(O)n(烷基)、-S(O)n(烷基)、

-S(O)nNH(烷基)、-S(O)nN(烷基3)(烷基4)，其中烷基3和烷基4可以结合起

来形成一个由5至8个环原子所组成并包含1、2、或3个选自N、O、S

的杂原子的杂环烷基环、以及Y′； Y和Y′在各种情况中各自独立地选自3至8元碳环基或杂环基，这些基团可以

是饱和、不饱和、或芳香族的基团，其还可各自独立地被一个或多个选自

下列基团的取代基所取代：卤素、氧、羟基、氨基、硝基、氰基、烷基、

烷氧基、卤代烷基、卤代烷氧基、单-或二烷基氨基、以及烷硫基；

其中所说的3-至8-元杂环基包含一个或多个分别选自N、O、和S的杂原

子；和 n在各种情况中分别选自0、1、和2。 该类化合物及其可药用的盐被称为式IB的化合物。

本发明还进一步涉及式II的化合物 式II 及其可药用的盐，其中： A、Z、R3、R4的定义同式I或式IB中的定义相同；Ar1和Ar2的定义同式I或

式IB中的相同；

和 x是1或3。

优选的式II的化合物及盐式是如下的化合物，其中 RA、RB、和RB′(它们被包含在A的定义中)在各种情况中各自独立地选自氢或 C1-6烷基。

其它优选的式II的化合物盐是其中Z为氧的化合物，以及其中Z为氧并且 A是NH的化合物。

本发明还进一步涉及式III的化合物 式III 及其可药用的盐，其中： G、Q、T、和W相同或不同并代表N、CH、或CR5，其中R5的定义同式IB

中的定义相同； RA、RB、和RB′在各种情况中分别选自氢或C1-6烷基； Z是氧或硫； R3和R4的定义同式I或式IB中的定义相同；和 x是1或3。

本发明还包括式IV的化合物 式IV 及其可药用的盐，其中： Z是S或O(优选O)； A、R3、和R4的定义同式I或式IB中的定义相同； Ar1和Ar2可以相同或不同并选自下列基团：环己基、环戊基、哌啶基，哌嗪基，

吡咯基、呋喃基、噻吩基、吡唑基、咪唑基、噻唑基、异噻唑基、噁唑基、

异噁唑基、噁二唑基、三唑基、四唑基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、苯并

咪唑基、萘基、吲哚基、异吲哚基、苯并呋喃基、异苯并呋喃基、苯并[b]

苯硫基、苯并[d]异噁唑基、喹啉基、异喹啉基、噌啉基、喹唑啉基、和

喹噁啉基；其中Ar1可任意地被R5所单-、二-、或三-取代，Ar2可任意地

被R9所单-、二-、或三-取代；或

Ar1和Ar2可以相同或不同，并代表如式IB中所定义的含氧的双环， R5在各种情况中分别选自下列基团：氰基、硝基、卤代烷基、卤代烷氧基、羟

基、氨基、被0-2个R6所取代的烷基、被0-2个R6所取代的烯基、被0-2

个R6所取代的炔基、被0-2个R6所取代的烷氧基、被0-2个R6所取代的

-NH(烷基)、每一烷基各自独立地被0-2个R6所取代的-N(烷基)(烷基)、

-XR7、以及Y； R9在各种情况中分别选自氰基、硝基、卤代烷氧基、羟基、氨基、被0-2个R6

所取代的烷基、被0-2个R6所取代的烯基、被0-2个R6所取代的炔基、

被0-2个R6所取代的烷氧基、被0-2个R6所取代的-NH(烷基)、每一烷基

各自独立地被0-2个R6所取代的-N(烷基)(烷基)、-XR7、和Y；和 R6、R7、R8、X、Y和Y′的定义同式IB中的定义相同。

本发明的另一个实施方案是涉及式V的化合物 式V 及其可药用的盐，其中： G、Q、T、和W是相同或不同的基团并选自N、CH、和CR5，其中T或/和W

是N； A、R3和R4的定义同式I或式IB中的相同(优选地A是-CH＝CH-、-CH2NH、

NH，R3和R4是氢或C1-6烷基)； Z是氧或硫(优选氧)； R5代表1至3个取代基，且所说的取代基在各种情况中分别选自下列基团：氰

基、羟基、氨基、被0-2个R6所取代的C3-6烷基、被0-2个R6所取代的

C2-6烯基、被0-2个R6所取代的C2-6炔基、被0-2个R6所取代的C3-6烷氧

基、被0-2个R6所取代的-NH(C1-6烷基)、每一烷基各自独立地被0-2个

R6所取代的-N(C1-6烷基)(C1-6烷基)、-XR7、和Y； R9代表0至3个取代基，且所说的取代基在各种情况中分别选自下列基团：卤

素、氰基、硝基、卤代(C1-6)烷基、卤代(C1-6)烷氧基、羟基、氨基、被0-2

个R6所取代的C1-6烷基、被0-2个R6所取代的C2-6烯基、被0-2个R6所

取代的C2-6炔基、被0-2个R6所取代的C1-6烷氧基、被0-2个R6所取代

的-NH(C1-6烷基)、每一C1-6烷基各自独立地被0-2个R6所取代的-N(C1-6

烷基)(C1-6烷基)、-XR7、和Y； R6、R7、R8、X、Y、和Y′的定义与式IB中的定义相同。

本发明还特别涉及式V的化合物及其盐，其中G和Q分别选自包含C和 CR5基团的组。

本发明还涉及式V的化合物及其盐，其中G、Q、和W在各种情况中各自 独立地选自CH和CR5；并且T为N。

对于式V的化合物而言，尤其优选R6取代基是卤素、羟基、C1-4烷基、 C1-4烷氧基、-NH(C1-4烷基)、和-N(C1-4烷基)(C1-4烷基)。

本发明的另一个实施方案涉及式VI的化合物 式VI 及其可药用的盐，其中： A选自NH、-CH＝CH-，和CH2NH； R4分别选自氢和C1-4烷基； R5代表0至2个取代基，并且所说的取代基在各种情况中分别选自下列基团：

卤素、氰基、硝基、卤代(C1-6)烷基、卤代(C1-6)烷氧基、羟基、氨基、被

0-2个R6所取代的C1-6烷基、被0-2个R6所取代的C2-6烯基、被0-2个R6

所取代的C2-6炔基、被0-2个R6所取代的C1-6烷氧基、被0-2个R6所取代

的-NH(C1-6烷基)、每一C1-6烷基各自独立地被0-2个R6所取代的-N(C1-6

烷基)(C1-6烷基)； R9代表0至2个取代基并且所说的取代基在各种情况中分别选自下列基团：卤

素、氰基、硝基、卤代(C1-6)烷基、卤代(C1-6)烷氧基、羟基、氨基、被0-2

个R6所取代的C1-6烷基、被0-2个R6所取代的C2-6烯基、被0-2个R6所

取代的C2-6炔基、被0-2个R6所取代的C1-6烷氧基、被0-2个R6所取代

的-NH(C1-6烷基)、每一C1-6烷基分别被0-2个R6所取代的-N(C1-6烷基)(C1-6

烷基)； R5A分别选自下列基团：卤素、氰基、硝基、卤代(C1-6)烷基、卤代(C1-6)烷氧基、

羟基、氨基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、-NH(C1-6烷基)、和

-N(C1-6烷基)(C1-6烷基)； R9B分别选自下列基团：卤素、硝基、卤代(C1-6)烷氧基、羟基、氨基、C1-6烷基、

C1-6烷氧基、-NH(C1-6烷基)、和-N(C1-6烷基)(C1-6烷基)；和 R6在各种情况中分别选自下列基团：卤素、羟基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、-NH(C1-4

烷基)、和-N(C1-4烷基)(C1-4烷基)。 本发明还涉及式VII的化合物 式VII 及其可药用的盐，其中： A、R3、和R4的定义与式I或式IB中的定义相同； R5在各种情况中分别选自下列基团：氰基、硝基、卤代烷基、卤代烷氧基、被

0-2个R6所取代的C1-6烷基、被0-2个R6所取代的C2-6烯基、被0-2个

R6所取代的C2-6炔基、被0-2个R6所取代的C1-6烷氧基、被0-2个R6所

取代的-NH(C1-6烷基)、每一烷基各自独立地被0-2个R6所取代的-N(C1-6

烷基)(C1-6烷基)、-XR7、和Y； R9代表0-3个取代基并且所说的取代基在各种情况中分别选自下列基团：溴、

卤代烷基、卤代烷氧基、羟基、被0-2个R6所取代的C2-6烷基、被0-2

个R6所取代的C2-6烯基、被0-2个R6所取代的C2-6炔基、被0-2个R6所

取代的C2-6烷氧基、被0-2个R6所取代的-NH(C2-6烷基)、每一C2-6烷基

各自独立地被0-2个R6所取代的-N(C2-6烷基)(C2-6烷基)、-XR7、和Y； R6、R7、R8、X、Y、和Y’的定义与式IB中的定义相同。

式VII的优选化合物及其盐包括下述化合物：其中A选自NH、-CH＝CH-、 和CH2NH；以及R6在各种情况中分别选自卤素、羟基、C1-4烷基、C1-4烷氧 基、-NH(C1-4烷基)、和-N(C1-4烷基)(C1-4烷基)。

本发明包括式VIII的化合物 式VIII 及其可药用的盐，其中： A选自下列基团：NH、-CH＝CH-、和CH2NH(优选NH)； R4在各种情况中分别选自氢和C1-4烷基； R5代表0至2个取代基，且所说的取代基在各种情况中分别选自下列基团：卤

素、氰基、硝基、卤代(C1-6)烷基、卤代(C1-6)烷氧基、羟基、氨基、被0-2

个R6所取代的C1-6烷基、被0-2个R6所取代的C2-6烯基、被0-2个R6所

取代的C2-6炔基、被0-2个R6所取代的C1-6烷氧基、被0-2个R6所取代

的-NH(C1-6烷基)、以及每一C1-6烷基各自独立地被0-2个R6所取代的

-N(C1-6烷基)(C1-6烷基)； R9代表0至2个取代基，且所说的取代基在各种情况中分别选自下列基团：卤

素、氰基、硝基、卤代(C1-6)烷基、卤代(C1-6)烷氧基、羟基、氨基、被0-2

个R6所取代的C1-6烷基、被0-2个R6所取代的C2-6烯基、被0-2个R6所

取代的C2-6炔基、被0-2个R6所取代的C1-6烷氧基、被0-2个R6所取代

的-NH(C1-6烷基)、以及每一C1-6烷基各自独立地被0-2个R6所取代的

-N(C1-6烷基)(C1-6烷基)； R5A分别选自下列基团：卤素、氰基、硝基、三氟甲基、三氟甲氧基、羟基、

氨基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、-NH(C1-6烷基)、和-N(C1-6烷基)(C1-C6烷基)； R9B分别选自下列基团：三氟甲氧基、羟基、C2-6烷基、C2-6烷氧基、-NH(C2-6

烷基)，以及-N(C2-6烷基)(Ca-g烷基)；和 R6在各种情况中分别选自下列基团：卤素、羟基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、-NH(C1-4

烷基)、和-N(C1-4烷基)(C1-4烷基)。

式VIII的优选化合物包括下述化合物：R4中的一个是氢，且另一个是甲基。

本发明尤其优选的实施方案包括式IX的化合物 式IX 及其可药用的盐，其中： A、R3、和R4的定义与式I或式IB中的定义相同； R5选自下述基团：溴、氟、碘、卤代(C1-6)烷基、卤代(C3-6)烷氧基、被0-3个

R6所取代的C3-6烷基、被0-3个R6所取代的C2-6烯基、被0-3个R6所取

代的C2-6炔基、被0-2个R6所取代的C3-6烷氧基、(C3-8环烷基)C1-4烷基、

被0-2个R6所取代的-NH(C1-6烷基)、每一C1-6烷基被0-2个R6所取代的

-N(C1-6烷基)(C1-6烷基)、Y、-(C＝O)Y、-(CH2)Y、和-(CH(CN))Y； R9选自下述基团：卤素、氰基、-N(SO2C1-6烷基)(SO2C1-6烷基)、-SO2NH2、卤

代(C1-6)烷基、卤代(C1-6)烷氧基、被0-2个R6所取代的C1-6烷基、被0-2

个R6所取代的C2-6烯基、被0-2个R6所取代的C2-6炔基、被0-2个R6所

取代的C1-6烷氧基、被0-2个R6所取代的-NH(C1-6烷基)，每一C1-6烷基被

0-2个R6所取代的-N(C1-6烷基)(C1-6烷基)； R5B和R9B分别代表0至2个取代基，且所说的取代基在各种情况中分别选自下

述基团：卤素、氰基、硝基、卤代(C1-6)烷基、卤代(C1-6)烷氧基、羟基、

氨基、被0-2个R6所取代的C1-6烷基、被0-2个R6所取代的(C3-8环烷基)C1-4

烷基、被0-2个R6所取代的C2-6烯基、被0-2个R6所取代的C2-6炔基、

被0-2个R6所取代的C1-6烷氧基、被0-2个R6所取代的-NH(C1-6烷基)、

以及每一C1-6烷基各自独立地被0-2个R6所取代的-N(C1-6烷基)(C1-6烷

基)、和Y；以及任意两个 结合于毗邻原子上的R5和R5B可以连接起来形成一个C3-8环烷基或杂环烷基，

各基团都可以被1至5个取代基所任意取代，这些取代基可分别选自下列

基团：氰基、卤素、羟基、C3-4烷基、C1-4烷氧基、-NH(C1-4烷基)、-N(C1-4

烷基)(C1-4烷基)、卤代(C1-4)烷基、和卤代(C1-4)烷氧基，其中所说的杂环烷

基由4至8个原子所组成并包含1、2、或3个选自N、O、和S的杂原子；

和 R6、R7、R8、X、Y、和Y′的定义与式IB中的定义相同。

式IX的优选的化合物及其盐包括下述化合物：其中的A为O或NRA，其 中RA是氢或甲基。

更优选的式IX的化合物及其盐包括下述化合物，其中 A是O或NRA，其中RA是氢或甲基；和 R3和R4在各种情况下各自独立地选自下列基团：氢、卤素、氰基、硝基、卤

代(C1-6)烷基、卤代(C1-6)烷氧基、羟基、氨基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6

炔基、C1-6烷氧基、-NH(C1-6烷基)、以及-N(C1-6烷基)(C1-6烷基)。

式IX的其它的优选化合物及其盐包括下述化合物，其中： A是O或NRA，其中RA是氢或甲基； R3是氢；和 R4在各种情况中分别选自下述基团：氢、卤素、氰基、硝基、卤代(C1-6)烷基、

卤代(C1-6)烷氧基、羟基、氨基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6烷氧

基、-NH(C1-6烷基)、以及-N(C1-6烷基)(C1-6烷基)。

式IX的进一步优选的化合物及其盐包括下述化合物，其中 A是O、NRA，其中RA是氢或甲基； R3是氢；和 R4在各种情况中分别选自氢和C1-6烷基。

式IX的另一组优选的化合物及其盐包括下述化合物，其中 A是NRA，其中RA是氢或甲基； R3是氢；和 R4在各种情况中分别选自氢、卤代(C1-3)烷基、和C1-6烷基，但进一步优选R4

选自氢和C1-4烷基。

具有式IX-A的一类特殊的化合物 及其可药用的盐，其中： R5、R5B、R9、和R9B的定义与式IX中的定义相同；和 R4在各种情况中分别选自氢和C1-4烷基。 另一类式IX的化合物是如式IX-B所表示的化合物： 式IX-B 及其可药用的盐，其中： R5B和R9B分别选自下述基团：氢、卤素、氰基、硝基、卤代(C1-2)烷基、卤代

(C1-2)烷氧基、氨基、C1-4烷基、和C1-2烷氧基；和 R10在各种情况中分别选自氢、卤素、和C1-4烷基。

优选的式IX-B的化合物及其盐包括下述化合物，其中R9选自卤素、氰基、 -N(SO2CH3)2、-SO2NH2、卤代(C1-3)烷基、C1-3烷氧基、-NH(C1-3烷基)、和-N(C1-3 烷基)(C1-3烷基)。

其它优选的式IX-A和式IX-B的化合物及其盐包括下述化合物，其中R5B 和R9B各自独立地选自下述基团：氢、卤素、氰基、硝基、卤代(C1-2)烷基、 卤代(C1-2)烷氧基、氨基、C1-4烷基、和C1-2烷氧基。

其它优选的式IX-A和式IX-B的化合物及其盐包括下述化合物，其中： R5B代表0或1个取代基，所说的取代基选自卤素、氰基、硝基、卤代(C1-2)烷

基、卤代(C1-2)烷氧基、氨基、C1-4烷基、和C1-2烷氧基；和 R9B代表0或1个取代基，所说的取代基选自卤素、氰基、硝基、卤代(C1-2)烷

基、和C1-2烷基、以及C1-2烷氧基。

本发明还进一步涉及式IX-A和IX-B的化合物及其盐，其中： R9选自下述基团：卤素、氰基、-N(SO2CH3)2、-SO2NH2、卤代(C1-3)烷基、C1-3

烷氧基、-NH(C1-3烷基)、和-N(C1-3烷基)(C1-3烷基)； R5B代表0或1个取代基，所说的取代基选自下述基团：卤素、氰基、硝基、

卤代(C1-2)烷基、卤代(C1-2)烷氧基、氨基、C1-4烷基、和C1-2烷氧基；和 R9B代表0或1个取代基，所说的取代基选自卤素、氰基、硝基、卤代(C1-2)烷

基、和C1-2烷基、以及C1-2烷氧基。

对于式IX-A而言，优选的取代基是 R5选自下述基团：溴、氟、碘、卤代(C1-6)烷基、卤代(C3-6)烷氧基、被0-3个

R6所取代的C3-6烷基、被0-3个R6所取代的C2-6烯基、Y、-(C＝O)Y、

-(CH2)Y、和-(CH(CN))Y； R9选自下述基团：卤素、氰基、-N(SO2CH3)2、-SO2NH2、卤代(C1-2)烷基、C1-3

烷氧基、-NH(C1-6烷基)、和-N(C1-6烷基)(C1-6烷基)； R5B代表0或1个取代基，所说的取代基选自下述基团：卤素、氰基、硝基、

卤代(C1-2)烷基、卤代(C1-2)烷氧基、氨基、C1-4烷基、和C1-2烷氧基；和 R9B代表0或1个取代基，所说的取代基选自下述基团：卤素、氰基、硝基、

卤代(C1-2)烷基、和C1-2烷基、以及C1-2烷氧基。

对于该类化物及其盐而言，尤其优选R6选自下列基团：氰基、卤素、羟基、 C1-4烷基、C1-4烷氧基、-NH(C1-4烷基)、-N(C1-4烷基)(C1-4烷基)和Y；其中 Y在各种情况中分别选自下列基团：C3-8环烷基、哌啶基、哌嗪基、四氢吡喃

基、二氢吡喃基、吗啉基、硫代吗啉基、苯基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、

噻唑基、噻吩基、和咪唑基，各基团可进一步被一个或多个选自下述的取

代基所取代：卤素、氧代、羟基、氨基、硝基、氰基、C1-4烷基、C1-4烷

氧基、卤代(C1-4)烷基、卤代(C1-4)烷氧基、单-或二(C1-4)烷基氨基、和C1-4

烷硫基。

对于式IX-A的化合物而言，特别优选R9和R9B是： R9是氰基、三氟甲基、氯、或碘；和 R9B是氢。 对于式IX-A的化合物而言，特别优选R5是选自下述的基团：异丙基、叔-丁基、

2-丁基、三氟甲基、环戊基、环己基、和七氟丙基。

本发明尤其涉及式IB、式II、式III、式IV、式V、式VII和式IX的化合 物及可药用的盐，其中： RA、RB、和RB′在各种情况中分别选自下述基团：氢和C1-6烷基；对于可变的

R3、R4、和R5而言，卤代烷基为卤代(C1-6)烷基，即具有1至6个碳原子

的卤代烷基，并且在这些碳原子上有1至可允许的最大数目的卤素取代

基，卤代烷氧基是卤代(C1-6)烷氧基；烷基是C1-6烷基、烯基是C2-6烯基；

炔基是C2-6炔基；烷氧基是C1-6烷氧基、-NH(烷基)是-NH(C1-6烷基)、和

-N(烷基)(烷基)是-N(C1-6烷基)(C1-6烷基)， 对于可变的R6、R7、R8、Y和Y′而言，烷基是C1-4烷基、烷氧基(或-O(烷基))

是C1-4烷氧基(或-O(C1-4烷基))、-NH烷基(或单烷基氨基)是-NH(C1-4烷

基)(或单(C1-4烷基)氨基)、-N(烷基)(烷基)(还可是二烷基氨基)是-N(C1-4烷

基)(C1-4烷基)(还可是二(C1-4烷基)氨基)、S(O)n烷基是-S(O)n(C1-4烷基)、卤

代烷基是卤代(C1-4)烷基、卤代烷氧基是卤代(C1-4)烷氧基、-CO(烷基)是

CO(C1-4烷基)、-CONH(烷基)是-CONH(C1-4烷基)、-CON(烷基)(烷基)是

-CON(C1-4烷基1)(C1-4烷基2)；-NHC(O)(烷基)是-NHC(O)(C1-4烷基)、-N(烷

基)C(O)(烷基)是-N(C1-4烷基)C(O)(烷基)、-NHS(O)n(烷基)是-NHS(O)n(C1-4

烷基)、-S(O)nNH(C1-4烷基)、-S(O)nN(烷基)(烷基)是-S(O)nN(C1-4烷基)(C1-4

烷基)； 以及烷硫基是C1-4烷硫基。

优选的式V、式VI、式VII和式IX的化合物及其盐包括下述化合物：其 中R3和R4在各种情况中各自独立地选自氢和C1-6烷基。更优选的式V的化合 物及其盐包括下述化合物：其中R3是氢、存在于哌嗪环的3和5位上的R4取 代基是氢、存在于哌嗪环的2和6位上的R4取代基各自独立地为氢或C1-4烷基。 这里所讨论的哌嗪环如下：

更优选的式V的化合物及其盐包括下述化合物：其中在哌嗪环的2位上 的R4是甲基，所有其它位置上的R3和R3都是氢。 本发明特别包括式A-1、式B-1、式C-1、式D-1、式E-1、和式F-1的化合物 式A-1 式B-1 式C-1 式D-1 式E-1 式F-1 以及式A-1、式B-1、式C-1、式D-1、式E-1、和式F-1的可药用的盐，其中： R5和R9各自独立地选自卤素、氰基、硝基、卤代(C1-6)烷基、卤代(C1-6)烷氧基、

羟基、氨基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6烷氧基、-NH(C1-6)烷基、

-N(C1-6烷基)(C1-6烷基)、和C3-8环烷基；以及 R5B和R9B各自独立地代表至多2个取代基，所述取代基选自氢、卤素、氰基、

硝基、卤代(C1-2)烷基、卤代(C1-2)烷氧基、羟基、氨基、C1-3烷基、C1-3烷

氧基、-NH(C1-3烷基)、和-N(C1-6烷基)(C1-6烷基)。

特别优选式A-1、式B-1、式C-1、式D-1、式E-1、和式F-1的如下化合 物及其盐，其中： R5是C3-6烷基；C3-6烷氧基；卤代(C1-3)烷基、卤代(C1-3)烷氧基、或C3-8环烷基； R9是氯或三氟甲基；以及 R5B和R9B是氢。

本发明的代表化合物是如下表1所示的化合物：

本发明一方面涉及与辣椒素受体以高亲和力进行结合的二芳基哌嗪及相 关化合物，其中所说的辣椒素受体包括人的辣椒素受体。与辣椒素受体以高亲 和力进行结合的化合物包括与辣椒素受体相作用的Ki值小于10uM，优选小 于1uM，更优选小于100nM，最优选小于10nM的化合物。本发明还包括与 辣椒素受体高选择性地进行结合的二芳基哌嗪类。对于辣椒素受体表现出高选 择性的化合物与辣椒素受体的亲和力比其与其它细胞表面受体(例如NPY Y5 受体、NPY Y1受体、GABAA受体、MCH受体、缓激肽受体、C5a受体、雄 激素受体等等)的亲和力至少高20倍，优选地至少高100倍。

不希望受到任何特定的理论操作的束缚，相信是由于式I-IX和式A-F 的化合物与辣椒素受体的相互作用而导致了这些化合物的药用性。

本发明进一步包含了采用足以改变受辣椒素受体所控制的疾病症状的足 够量的本发明的化合物来治疗需要进行该类治疗的患者的方法。因此，这里所 用的治疗的定义既包括减轻疾病的治疗，又包括症状的治疗。

可用本发明的化合物进行治疗的疾病和/或病症(其是辣椒素受体控制的 病症反应的实例)包括： 慢性和急性疼痛情况，包括牙痛、疱疹感染后神经痛、糖尿病性神经病、乳房 切除术后的疼痛综合征、残肢疼痛(和幻肢疼痛)、反射交感性营养不良、三叉 神经的神经痛、口部神经病性疼痛、骨关节炎、类风湿性关节炎、纤维性肌痛 (fibromyalgia)、格-巴二氏综合征、感觉异常性股痛、“燃烧-嘴”综合征、 和由于两侧外周神经病而造成的疼痛。 本发明优选治疗的疼痛状况是神经性疼痛状态，包括灼痛(反射交感性营养不 良-RSD，从属于外周神经的损伤；一般认为阿片类止痛剂不能治疗这种类型 的疼痛或仅能部分的治疗这种类型的疼痛)、神经炎—包括诸如坐骨神经炎、 外周神经炎、多神经炎、视神经炎、发热后神经炎、游走性神经炎、节性神经 炎、南博氏神经炎、以及神经元炎，和神经痛—包括上诉所提及的神经痛和， 例如，颈臂神经痛、脑神经痛、膝关节神经痛、舌咽神经痛、游走性神经痛、 特发性神经痛、肋间神经痛、乳房神经痛、下颌关节神经痛、摩顿氏神经痛、 鼻睫部神经痛、枕骨神经痛、红斑性肢痛病、斯路德氏神经痛、脾腭 (splenopalatine)神经痛、眶上神经痛和翼管神经痛。还可用本发明治疗的其它 的疼痛状况包括头痛—特别是这些牵涉外周神经活性的疼痛，包括例如静脉 窦、簇(即，前述的游走性神经痛)和一些紧张及和偏头性头痛状况-、劳动疼痛、 夏科氏疼痛、胀痛、痛经、神经根痛、同位痛和异位痛—包括与癌症有关的疼 痛、与接触毒物有关的疼痛(和炎症)，例如，由于蛇咬伤、蜘蛛咬伤、或昆 虫叮咬而造成的疼痛、和与创伤有关的疼痛，例如手术后疼痛和烧伤疼痛。可 用本发明进行治疗的优选情况是由于粘膜与辣椒素及相关刺激物如催泪气、辣 椒或胡椒雾相接触(例如，通过食入、吸入、或眼接触)而造成的疼痛(以及 支气管狭窄和炎症)。 瘙氧情况，包括牛皮癣瘙氧、由于hemodyalisis而造成的瘙氧、aguagenic瘙 氧、和与阴门前庭炎有关的瘙氧、接触性皮炎、昆虫叮咬和皮肤过敏。 小便失禁，包括脊柱起端的逼肌屈曲过度(hyperfiexia)和膀胱灵敏度过高。

本发明还提供了一些包含本发明化合物的药物组合物，包括用于治疗与 辣椒素受体响应相关的症状的成套(packaged)药物组合物。该成套药物组合 物包括盛放治疗有效量的至少一种如上所述的辣椒素受体调节剂的容器和表 明所盛放的辣椒素受体配体是用于治疗患者与辣椒素受体响应相关的症状的 说明(例如标签)。

本发明还涉及一些抑制vanilloid(辣椒素类似物)化合物如辣椒素、olvanil 以及RTX与辣椒素受体结合的方法，该方法包括将本发明的化合物与表达辣 椒素受体的细胞相接触，其中该化合物是以在体外能足够抑制vanilloid与辣椒 素受体的结合的浓度存在的。本发明的方法包括在体内，例如在患者体内抑制 vanilloid化合物与辣椒素受体的结合，例如，给患者使用一定量的式I-IX和式 A-F的化合物，该化合物的量能在机体体液中产生能足够的体内浓度以抑制辣 椒素化合物和辣椒素受体在体外的结合。在一个实施方案中，该类方法可用于 治疗催泪气、辣椒或胡椒雾接触所产生的影响。能足够抑制vanilloid化合物 与辣椒素受体的结合的化合物的量可以很容易的通过辣椒素受体结合试验来 进行测定，如实施例10所描述的试验，或可以通过例如实施例11中所描述的 辣椒素受体拮抗作用的试验来进行测定。在体外结合试验中测定所用的辣椒素 受体可以由各种来源来获得，例如可以从哺乳动物的背侧根神经节(DRG)来制 备或由表达克隆的大鼠或人的辣椒素受体的细胞来获得。

本发明还涉及改变由辣椒素受体所介导的信号转换活性，尤其是钙离子 电导率的方法，所说的方法包括将表达所述受体的细胞与包含本发明化合物 的溶液相接触，其中该化合物是以在体外在表达辣椒素受体的细胞中能特定地 随着辣椒素受体或RTX的改变而改变钙电导率活性的足够量存在于溶液中 的，优选的用于此目的的细胞是表达高水平(即等于或高于在每一大鼠DRG细 胞中的辣椒素受体数目)辣椒素受体的细胞。该方法包括改变体内辣椒素受体 的信号转换活性。优选这种改变能减少钙流出。可以通过一种体外辣椒素受体 信号转换试验来测定能足够改变辣椒素受体的信号转换活性的化合物的量，其 中所说的试验如实施例11所述的钙流通(电导率、流出)试验。还可以通过 一种辣椒素受体所介导的钙电导率试验来测定能足够改变对作为辣椒素受体 的辣椒素或RTX的反应的钙电导率活性的化合物的量，例如在所说试验中， 辣椒素与细胞表面的辣椒素受体的结合作用在钙敏感性染料的荧光或在钙敏 感的报告基因的表达中发生变化的试验。

本发明进一步提供了：

一种减少辣椒素受体的钙电导率的方法，该方法包括：

将包含固定浓度的辣椒素受体激动剂和本发明化合物或其盐的第一溶液 与表达辣椒素受体的细胞进行接触，其中该化合物或盐是以能足够产生辣椒素 受体激动剂的钙流动作用的可检测出的减少的浓度存在于该溶液中的，当进行 体外试验时，将表达辣椒素受体的细胞与包含固定浓度的辣椒素受体激动剂和 该化合物或盐的第二溶液采用相同的方法进行接触，其中：表达辣椒素受体的 细胞是一种在动物体内进行接触的神经元细胞，其中的第一溶液是所说动物的 体液；或该动物是人类患者。

一种包含可药用载体和本发明化合物或盐的药物组合物；和包含置于容 器中的药物组合物，并进一步包含用于说明该组合物是用来缓解疼痛、或用来 治疗患有小便失禁的患者、或缓解接触辣椒素或催泪气等症状的标记的包装。

一种本发明的化合物或盐，其中该化合物或盐在体外辣椒素受体拮抗作 用的试验中表现出辣椒素受体拮抗剂的活性，但是在辣椒素受体激动作用的体 外试验中该化合物未表现出可检测的激动剂活性。

一种本发明的化合物或盐，在用于测定疼痛缓解的动物模型中，该化合 物或盐的足以提供痛觉缺失的的剂量在镇静作用试验的动物模型中却不产生 镇静作用。

一种对哺乳动物进行治疗的方法，该哺乳动物患有至少一种如下的症状， 即暴露于辣椒素而产生的症状、由于暴露于热而产生的烧灼或刺激的症状、由 于暴露于光而产生的烧灼或刺激的症状、由于暴露于催泪气而产生的烧灼或刺 激的症状、以及由于暴露于酸而产生的烧灼或刺激的症状，该方法包括给哺乳 动物服用治疗剂量的化合物，该化合物：

a)在辣椒素受体拮抗作用的体外试验中是一种高效的辣椒素受体拮抗剂，

b)在辣椒素受体激动作用的体外试验中未表现出可检测的激动剂活性，

c)不是辣椒素类似物，和

d)当在镇静作用的试验中被药用于动物模型中的动物时，以在用于测定疼痛

缓解的动物模型中产生痛觉缺失所需最小剂量的5倍量进行给药时也不

引起镇静作用，

其中该治疗剂量所包含的该化合物的量能有效减少至少一种症状中的至 少一种的严重程度，并且优选该化合物是本发明的化合物。

一种治疗患有神经性疼痛的哺乳动物的方法，该方法包括给予哺乳动物治 疗剂量的化合物，该化合物是一种辣椒素受体拮抗剂，并且在确定的实施方案 中，该化合物是本发明中的化合物。

一种治疗患有周围神经所介导的疼痛例如神经性疼痛的哺乳动物的方法， 该方法包括给予哺乳动物治疗剂量的化合物，该化合物是一种辣椒素受体拮抗 剂，其中该化合物：

a)在辣椒素受体拮抗作用的体外试验中是一种高效的辣椒素受体拮抗剂，

b)在辣椒素受体激动作用的体外试验中未表现出可检测的激动剂活性，

c)不是一种辣椒素类似物，和

d)当在镇静作用的试验中被药用于动物模型中的动物时，以在用于测定疼痛缓 解的动物模型中产生痛觉缺失所需最小剂量的5倍量进行给药时也不引起镇 静作用，

其中该治疗剂量所包含的该化合物的量能有效减少该周围神经所介导的疼 痛，优选其中的疼痛是神经性疼痛且该化合物是本发明的化合物，优选其中的 疼痛是与选自下述情况有关的疼痛：乳房切除术后的疼痛综合征、残肢疼痛、 幻肢疼痛、口部神经性疼痛、夏科氏疼痛、牙痛、疱疹感染后神经痛、糖尿病 性神经病、反射交感性营养不良、三叉神经的神经痛、骨关节炎、类风湿性关 节炎、纤维性肌痛、格-巴二氏综合征、感觉异常性股痛、燃烧-嘴综合征、两 侧外周神经病、灼痛、坐骨神经炎、外周神经炎、多神经炎、视神经炎、发热 后神经炎、游走性神经炎、节性神经炎、南博氏神经炎、神经元炎、颈臂神经 痛、脑神经痛、膝关节神经痛、舌咽神经痛、游走性神经痛、特发性神经痛、 肋间神经痛、乳房神经痛、下颌关节神经痛、摩顿氏神经痛、鼻睫部神经痛、 枕骨神经痛、红斑性肢痛病、斯路德氏神经痛、脾腭神经痛、眶上神经痛、翼 管神经痛、静脉窦头痛、紧张性头痛、劳动、分娩、肠内胀气、月经、癌症、 和外伤。

一种本发明的化合物，其中该化合物是非成瘾性的化合物。

由本发明所提供的辣椒素受体配体和其标志性衍生物还可用作测定化合物 与辣椒素受体结合能力的标准物和试剂，并且还可用作激动剂、拮抗剂、反向 激动剂、混合的激动剂/拮抗剂或其它类似的用途。

更特别地，本发明的化合物可用于证明细胞或组织样品内VR1受体或其它 辣椒素受体的存在。这一点可以通过制备多种匹配的细胞或组织样品来进行， 这些样品中至少有一种被制成实验用样品，并且至少一种被制备成对照样品。 该实验样品是通过将至少一种在前未与任何本发明的化合物或盐接触过的匹配 的细胞或组织样品与包含所选的化合物或盐的标记的可检测制剂在所测量的第 一种摩尔浓度下(在使辣椒素或RTX与细胞和组织样品内的辣椒素受体进行结 合的条件下)进行接触来进行制备的。该对照样品是通过用与制备试验样品相同 的方法进行制备的，并且用包含未标记的本发明的相同化合物和盐的制剂的溶 液在高于所测量的第一种摩尔浓度的条件下对其进行培养。

然后，对实验和对照样品进行洗涤以除去未结合的进行了标记的可检测化 合物(用相同的洗涤条件来对两种样品进行洗涤)。检测每一样品中仍结合的 标记的可检测化合物的量，并将在实验和对照样品中标记了的可检测化合物进 行比较。比较表明在至少一种进行了洗涤的实验样品中的可检测的进行了标记 的检测量高于至少一种进行了洗涤的对照样品中所检测到的任何标记量，该比 较证明在这种实验样品中存在辣椒素受体。

在这种方法中所用的可检测的进行了标记的化合物可以用任何可检测的标 记来进行标记，如放射性标记、生物学标记如生物素(可以通过与可检测的标记 性抗生素蛋白进行结合来对其进行检测)、酶例如碱性磷酸酯酶、β半乳糖甙酶、 或可用比色法、荧光法或类似测定方法来检测其活性的其它类似酶)或直接或 间接的荧光标记。当在这种方法中使用组织切片并可检测的标记化合物是放射 性标记时，该结合、标记的化合物可以通过产生一种放射自显影谱来进行放射 自显影的测定。当使用放射自显影法时，在实验或对照样品中的可检测的标记 量可以通过观测该放射自显影谱并将该放射自显影谱的匹配区域的曝光密度进 行比较来进行测量。

由本发明所提供的标记衍生的辣椒素受体配体还可用作用于正电子发射层 析X射线摄影法(PET)成像或单光子放射计算机化断层显像(SPECT)的放射性 示踪剂，用以对体内的辣椒素受体进行定性和定位。 定义

这里所述的化合物可以具有一个或多个不对称中心或平面。本发明的包含 被取代的不对称原子的化合物可以以光学活性体或消旋式的形式被分离出来， 这种分离在本领域是被普遍了解的，诸如通过对消旋式(消旋体)的拆分、不 对称的合成、或通过用有光学活性的起始材料进行合成等来进行分离。例如， 可以通过常规方法来完成该消旋体的拆分，其中所说的常规方法包括诸如在存 在拆解试剂的情况下进行结晶，或色谱法，例如使用手性HPLC柱的色谱法。 在这里所描述的化合物中可以存在许多烯烃、C＝N双键等等的几何异构体，并 且所有该类稳定的异构体都可用于本发明。对本发明化合物的顺式和反式几何 异构体进行了描述，并且可以将其以异构体混合物的形式或单个的异构体的形 式分离出来。除对特定的立体化学形式或异构形式进行特别说明，一般指的是 该化合物所有的手性(对映异构体和非对映异构体)、和消旋式、以及所有的几 何异构体形式。

只要不超过所指定原子的正常化合价，这里所用的“取代”的定义指的是 在指定原子上的任意一个或多个氢被选自指定基团的基团进行取代，并且该取 代可以得到稳定的化合物。本发明希望包括存在于本发明化合物中的原子的所 有同位素。同位素包括具有相同原子数目但是具有不同质量数的物质。作为非 限制性的一般实例，氢的同位素包括氚和氘。碳的同位素包括11C、13C、和14C。

当化合物的任何组分或结构式中的任何变量出现一次以上时，其在各种情 况中的定义与其在每一种其它情况中的定义无关。因此，例如，如果该基团被 0-2个R*所取代，则所说的基团可以任意的被多至两个R*基团所取代，并且在 各种情况中的R*各自独立地选自R*的定义中的基团。同时，只要该类组合可以 产生稳定的化合物，就可以进行取代基和/或变量的组合。

如上面所述，各式中的各种取代基是“任意取代的”，包括式I-IX和式 A-F中的Ar1，Ar2、R3和R4，以及在如式Ia的子式中所述的这类取代基等等。 当被取代时，这些取代基(例如，C1-6烷基、n、Ar1、Ar2、R1、R2、R3和R4)可 以在一个或多个有效位置上被除氢外的取代基所取代，一般在1至3或4个位 置上被一个或多个基团所取代，其中所说的一个或多个基团包括诸如卤素，如 氟、氯、溴和碘；氰基；羟基；硝基；叠氮基；烷酰基如C1-6烷酰基，如酰基 等等；甲酰胺(carboxamido)；烷基，包括这些具有1至约12个碳原子、或1、 2、3、4、5、或6个碳原子的基团；烯基和炔基，包括具有一个或多个不饱和 键和2至约12个碳、或2、3、4、5或6个碳原子的基团；烷氧基，包括这些 具有一个或多个氧键和1至约12个碳原子、或1、2、3、4、5、或6个碳原子 的基团；芳氧基如苯氧基；烷硫基，包括具有一个或多个硫醚键和1至约12 个碳原子、或1、2、3、4、5、或6个碳原子的部分(moieties)；烷基亚磺酰 基，包括具有一个或多个亚磺酰基键和1至约12个碳原子、或1、2、3、4、5、 或6个碳原子的部分；烷基磺酰基，包括这些具有一个或多个磺酰基键和1至 约12个碳原子、或1、2、3、4、5、或6个碳原子的部分；氨基烷基，如具有 一个或多个N原子和1至约12个碳原子、或1、2、3、4、5、或6个碳原子的 基团；具有6个或多个碳的碳环芳基，特别是苯基(例如被二苯基部分所取代的 Ar基团或未被取代的Ar基团)；具有1至3个分开的或稠合的环和6至18个 碳环原子的芳基烷基，优选苄基；具有1至3个分开的或稠合的环和6至18 个碳环原子的芳基烷氧基，优选O-苄基；具有1至3个分开的或稠合的环和一 个或多个N、O或S原子的杂芳族或杂脂环族基团，其中各环具有3至约8个 环原子，例如香豆素基(coumarinyl)、喹啉基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、呋喃 基、吡咯基、噻吩基、噻唑基、噁唑基、咪唑基、吲哚基、苯并呋喃基、苯并 噻唑基、四氢呋喃基、四氢吡喃基、哌啶基、吗啉代和吡咯烷基。

这里所用的“烷基”的定义包括具有特定碳原子数目的支链、直链、以及 环烷基，其可以包含一个或多个双或三键。“低级烷基”指的是具有1至约6 个碳原子的烷基。烷基的实例包括，但不限于甲基、乙基、正-丙基、异-丙基、 正-丁基、s-丁基、叔-丁基、正-戊基，和s-戊基。优选的烷基基团是C1-C6烷基。 尤其优选的烷基是甲基、乙基、丙基、丁基、3-戊基。

如这里所用，本发明中“烷氧基”、“C1-C6烷氧基”、或“低级烷氧基” 的定义指的是通过氧桥连接的烷基，例如甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、 正-丁氧基、仲-丁氧基、叔-丁氧基、戊氧基、2-戊基、异戊氧基、新戊氧基、 己氧基(hexoxy)、2-己氧基、3-己氧基、和3-甲基戊氧基。“低级烷氧基” 指的是具有1至约6个碳原子的烷基。

“卤代烷基”包括具有特定碳原子数目的支链和直链饱和脂肪烃基，其可以 被一个或多个卤素所取代(例如-CvFw，其中v＝1至3，w＝1至(2v+1))。卤 代烷基的实例包括，但不限于：三氟甲基、三氯甲基、五氟乙基、七氟丙基、 和五氯乙基。

这里所说的“碳环(carboncycle)”或“碳形环(carbocyclic ring)”指的是任何稳 定的3～7-元单环或双环或7～13-元双环或三环部分，其任何一种都可以是饱和、 部分不饱和、或芳香族的环。该类碳环的例子包括，但不限于：环丙基、环丁 基、环戊基、环己基、环庚基、金刚烷基(adamantyl)、环辛基、[3.3.0]二环 辛烷、[4.3.0]二环壬烷、[4.4.0]二环癸烷、[2.2.2]二环辛烷、芴基、苯基、萘 基、2，3-二氢化茚基(indanyl)、金刚烷基、和四氢萘基。

这里所用的“碳环芳基”的定义指的是仅仅包含碳的芳香基团。该芳香基团 可进一步被取代。

这里所用的“杂环”的定义指的是稳定的5～7-元单环或双环或7～10-元双环 杂环，其可以是饱和、部分不饱和、或不饱和(芳香族的)环，并且可以由碳原 子和1至4个分别选自N、O、和S的杂原子所组成，并且包括其中如上所定 义的与苯环稠合的杂环的任意一个双环基团。该氮和硫杂原子可任意被氧化。 该杂环可以与任何杂原子或碳原子的侧链连接，产生一种稳定的结构。只要所 得的化合物稳定，这里所描述的杂环可以在碳或氮原子上被取代。在该杂环中 的氮原子可以任意的被季铵化。优选地当在该杂环中的S和O原子的总数超过 1时，则这些杂原子可以不相互毗邻。优选地在该杂环中的S和O原子的总数 不多于1。这里所用的“杂芳基”的定义指的是由碳原子和1至4个分别选自N、 O、和S的杂原子所组成的稳定的5～7-元单环或双环或7～10-元双环的杂环芳环。 优选地在该芳杂环中的S和O的总数不多于1。“杂环烷基”的定义指的是由 碳原子和1至4个分别选自N、O、和S的杂原子所组成的稳定的5～7-元单环 或双环或7～10-元双环饱和杂环。该杂环的实例包括，但不限于：吖啶基、吖 辛基、苯并咪唑基、苯并呋喃基、苯并硫代呋喃基、苯并硫代苯基、苯并噁唑 基、苯并噻唑基、苯并三唑基、苯并四唑基、苯并异噁唑基、苯并异噻唑基、 苯并咪唑啉基、咔唑基、NH-咔唑基、咔啉基、苯并二氢吡喃基、色烯基、噌 啉基、十氢喹啉基、2H，6H-1，5，2-二噻嗪基、二氢呋喃[2，3-b]四氢呋喃、呋喃 基、呋咱基、咪唑烷基、咪唑啉基，咪唑基、IH-吲哚基、indolenyl、二氢吲哚 基、吲嗪基、吲哚基、3H-吲哚基、异苯并呋喃基、异苯并二氢吡喃基、异吲 唑基、异二氢吲哚基、异吲哚基、异喹啉基、异噻唑基、异噁唑基、吗啉基、 萘啶基、八氢异喹啉基、噁二唑基、1，2，3-噁二唑基、1，2，4-噁二唑基；1，2，5- 噁二唑基、1，3，4-噁二唑基、噁唑烷基、噁唑基、噁唑烷基、嘧啶基、菲啶基、 菲咯啉基、吩嗪基、吩噻嗪基、phenoxathiinyl、吩噁嗪基、2，3-二氮杂萘基、 哌嗪基、哌啶基、蝶啶基、嘌呤基、吡喃基、吡嗪基、吡唑烷基、吡唑啉基、 吡唑基、哒嗪基、吡啶并噁唑、吡啶并咪唑、吡啶并噻唑、吡啶基(pyridinyl)、 吡啶基(pyridyl)、嘧啶基、吡咯烷基，吡咯啉基、2H-吡咯基、吡咯基、喹唑啉 基、喹啉基、4H-喹嗪基、喹噁啉基、奎宁环基、四氢呋喃基、四氢异喹啉基、 四氢喹啉基、6H-1，2，5-噻二嗪基、1，2，3-噻二吡咯基(thiadiazolyl)、1，2，4-噻二 吡咯基、1，2，5-噻二吡咯基、1，3，4-噻二吡咯基、噻蒽基、噻唑基、噻吩基、噻 吩并噻唑基、噻吩并噁唑基、噻吩并咪唑基、硫代苯基、三嗪基、1，2，3-三唑基、 1，2，4-三唑基、1，2，5-三唑基、1，3，4-三唑基、和呫吨基。

优选的杂环包括，但不限于：吡咯基、呋喃基、噻吩基、吡唑基、咪唑基、 噻唑基、异噻唑基、噁唑基、异噁唑基、噁二唑基、三唑基、四唑基、吡啶基、 嘧啶基、吡嗪基、苯并咪唑基、吲哚基、异吲哚基、苯并呋喃基、异苯并呋喃 基、苯并[b]苯硫基、苯并[d]异噁唑基、喹啉基、异喹啉基、噌啉基、喹唑啉 基、或喹噁啉基。还包括稠和的环和包含例如上述杂环的螺环化合物。

“含氧的二环基团”的定义指的是如下式所示的特定类型的杂芳基：

其中的L表示该基团与式I-IX和式A-F的结构的结合点。该包含氧的杂 环具有总数为5至7的环原子数，并且可以是饱和或不饱和的环。该包含氧的 双环基团的任意环还可以进一步被取代。

包含氧的双环基的实例包括如下所示的结构中的任何一种或所有的结构： 药物制剂

本领域的普通技术人员在制备式I-IX和式A-F所包括的化合物的无毒的可 药用的前体药物时可使用各种合成方法，本发明也包括该前体药物。“前体药 物”包括下述任何化合物：当其药用于哺乳动物个体时，例如通过前体药物的代 谢，该前体药物能变成式I-IX和式A-F的化合物。前体药物的实例包括，但 不限于：式I-IX和式A-F的化合物中的功能基(如醇或氨基基团)的醋酸酯、 甲酸酯和苯甲酸酯及类似衍生物。本领域的普通技术人员可用许多无毒的可药 用溶剂来制备本发明化合物的溶剂化物，其中所说的溶剂如水、乙醇、矿物油、 植物油、以及二甲基亚砜。

通式I-IX和通式A-F的化合物可通过包含常用的无毒的可药用载体、佐剂、 及赋形剂的剂量单元形式口服给药，典型地是非胃肠道给药，例如通过吸入或 喷雾或直肠给药。口服给药特别优选丸剂、胶囊剂、酏剂、糖浆剂、锭剂(lozenge)、 糖锭剂(troche)、或其它类似的形式。 这里所用的非胃肠道的定义包括皮下注射、皮内给药、血管内给药(例如，静脉 给药)、肌肉注射、脊柱内注射、鞘内注射或类似的注射或输注技术。此外，还 提供了包含通式I-IX和通式A-F的化合物和可药用载体的药物制剂。该药物制 剂中可存在一个或多个通式I-IX和通式A-F的化合物以及一个或多个无毒的可 药用载体和/或稀释剂和/或佐剂，如果需要的话，还可以存在其它的活性成分。 包含通式I-IX和通式A-F的化合物的药物组合物可以以适于口服的形式存在， 例如片剂、糖锭剂(troche)、锭剂(lozenge)、水性或油性混悬液、可分散的粉末 或颗粒、乳剂、硬或软胶囊、糖浆或酏剂。

用于口服的组合物可以根据现有技术中已知的制造药物组合物的任何方 法来进行制备，并且该类组合物可以包含一种或多种选自甜味剂、矫味剂、着 色剂和防腐剂的物质，以提供美观、适口的药物制剂。片剂包含活性成分和适 用于制造片剂的无毒及可药用赋形剂的混合。这些赋形剂可以是，例如惰性稀 释剂，如碳酸钙、碳酸钠、乳糖、磷酸钙或磷酸钠；制粒剂和崩解剂，如玉米 淀粉、或海藻酸；粘合剂，例如淀粉、明胶或阿拉伯胶；以及润滑剂，例如硬 脂酸镁、硬脂酸或滑石粉。该片剂可以是未进行包衣的片剂，或可以通过用于 延迟片剂在胃肠道中的崩解和吸收的公知技术来对其进行包衣，从而可以提供 一种长期的持续作用。例如，可以使用一种时间延迟材料，如甘油单硬脂酸酯 或甘油二硬脂酸酯。

口服制剂也可以以硬明胶胶囊的形式存在，其中的活性成分与惰性的固体 稀释剂例如碳酸钙、磷酸钙或高岭土相混合，或可以以软明胶胶囊的形式存在， 其中该活性成分与水或油介质例如花生油、液体石蜡或橄榄油相混合。

水性混悬液包含活性成分与适用于制造水性混悬液的赋形剂混合物。该类 赋形剂是混悬剂，例如羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、海 藻酸钠，聚乙烯吡咯烷酮、黄原胶和阿拉伯胶；分散剂或润湿剂可以是天然存 在的磷脂，例如卵磷脂，或烯化氧与脂肪酸的浓缩产物，例如聚氧乙烯硬脂酸 酯，或烯化氧与长链脂肪醇的浓缩产物，例如十七乙烯氧基鲸蜡醇，或乙烯氧 与脂肪酸偏酯的浓缩产物以及己糖醇，例如聚氧乙烯脱水山梨醇单油酸酯，或 乙烯氧与脂肪酸偏酯的浓缩产物以及己糖醇酸酐，例如聚乙烯脱水山梨醇单油 酸酯。该水性混悬液还可以包含一种或多种防腐剂，例如乙基、或正-丙基对- 羟基苯甲酸酯，一种或多种着色剂、一种或多种矫味剂、以及一种或多种甜味 剂，如蔗糖或糖精。

油性混悬液可以通过将活性成分混悬于植物油或矿物油中来进行制备，其 中所说的植物油例如花生油、橄榄油、芝麻油或椰子油，其中所说的矿物油如 液体石蜡。该油性混悬液可以包含增稠剂，例如蜂蜡、硬石蜡或鲸蜡醇。可加 入如上所说的甜味剂以及矫味剂，用以提供适口的口服制剂。可以通过向其中 加入抗氧化剂如抗坏血酸来对这些化合物进行保护。

通过加水而制备适用于水性混悬制剂的分散粉末和颗粒可提供包含活性 成分和分散剂或润湿剂、混悬剂以及一种或多种防腐剂的混合物。合适的分散 剂或润湿剂以及混悬剂的例子如上面已经提及的这些例子。还可以进一步添加 赋形剂，例如甜味剂、矫味剂和着色剂。

本发明的药物组合物也可以是水包油的形式。该油相可以是植物油例如橄 榄油或花生油，或矿物油例如液体石蜡或其混合物。适宜的乳化剂可以是天然 存在的胶，例如阿拉伯胶或黄原胶，天然存在的磷脂，例如大豆磷脂、卵磷脂、 以及来源于脂肪酸和己糖醇的酯或偏酯，酸酐，例如脱水山梨醇单油酸盐，和 所说偏酯与乙烯氧的浓缩产物，例如聚氧乙烯脱水山梨醇单油酸酯。该乳剂也 可以包含甜味剂和矫味剂。

糖浆剂和酏剂可以通过用甜味剂例如甘油、丙二醇、山梨醇或蔗糖来进行 制备。该类制剂还可以包含缓和剂、防腐剂和矫味剂以及着色剂。该药物组合 物可以是无菌可注射的水性或油性混悬液的形式。该混悬液可用现有技术中已 知的方法用上述所提及的适合的分散剂或润湿剂来进行制备。该无菌可注射的 制剂还可以是在无毒及非胃肠道给药所应用的稀释剂或溶剂中的无菌的可注射 的溶液或混悬液，例如在1，3-丁二醇中的溶液。可用的赋形剂和溶剂可以是水、 林格氏溶液和等渗氯化钠溶液。此外，无菌的，不挥发性油类一般被用作溶剂 或混悬介质。对于此目的而言，可以使用任何温和的不挥发性油，包括合成的 单-或二脂酸甘油酯。此外，在可注射制剂中可以使用脂肪酸如油酸。

通式I-IX和通式A-F的化合物还可以栓剂的形式给药，例如药物通过直肠 给药或阴道给药。这些组合物可以通过将药物与在常温下是固体但在直肠温度 下是液体的适宜的非刺激性的赋形剂进行混合来制备，因此该组合物可以在直 肠中融化以释放药物。该类材料可以是椰子油和聚乙二醇。

在无菌介质中的通式I-IX和通式A-F的化合物可以通过非胃肠道的方式给 药。取决于所用赋形剂和浓度，该药物可以被混悬或溶解于赋形剂中。有利地， 佐剂如局部麻醉剂、防腐剂和缓冲剂可以被溶解于所需要的赋形剂中。

本发明的化合物一般可药用于哺乳动物，特别是灵长目，尤其是人类。对 于兽医的应用而言，其可以适用于许多个体，例如牲畜如牛、绵羊、山羊、奶 牛、猪等等；家畜如鸡、鸭、鹅、火鸡等等；以及其它的驯养动物，特别是宠 物(做伴的动物)如狗和猫。对于诊断或研究而言，大量的哺乳动物可以是适宜 的个体，包括啮齿动物(例如小鼠、大鼠、仓鼠)、兔、灵长目动物、以及猪， 例如同系繁殖的猪等等。

对于非人类动物的给药而言，该组合物可以被添加到动物饲料或饮用水 中。可以很方便的制备这些动物饲料和饮用水组合物，从而可以使该动物在接 受饮食的同时接受适当量的组合物。该组合物还可以方便的以预混合物的形式 被添加到饲料或饮用水中。

对于全身给药而言(与定位或局部给药相对)，在治疗疼痛、小便失禁、或 上面所述的其它情况时所用的剂量水平为每天每公斤体重约0.01mg至约140 mg(每个病人每天约0.05mg至约7g)。优选的式I-IX和式A-F的高效化合物 的优选全身剂量为每天每公斤体重约0.01mg至约50mg，口服给药剂量一般 比静脉剂量高5-20倍。最优选的本发明的化合物是以每个体每天每公斤体重约 0.05至40mg的剂量口服起效的(例如，产生疼痛减少或小便失禁频率降低的作 用)。

可以与载体材料结合得到单剂型的活性成分的量可以随着所治疗的主体 和给药的特定方式而变化。单位剂型一般包含约1mg至约500mg的活性成分。

给药频率也可以根据所用化合物和所治疗的特定疾病而进行变化。但是， 对于大多数病症的治疗而言，优选每天4次或更少的剂量方案(给药频率)。 对于慢性疼痛或小便失禁的治疗而言，更优选每天2次的剂量方案并更特别优 选每天一次的给药频率。对于急性疼痛的治疗而言，需要能快速获得有效浓度 的单剂量。

但是，应当明白，对任意特定患者的特定剂量水平取决于各种因素，包括 所用特定化合物的活性、病人的年龄、体重、一般健康、性别、饮食、给药时 间、给药途径、排泄频率、药物合用和特定疾病或所治疗情况的性质和严重程 度。

本发明优选的化合物具有某些所需的药理学性质。对于全身给药而言，这 些性质包括，但不限于：高口服生物利用度，以便于上述优选的口服剂量和剂 型可提供该化合物在体内的有效治疗水平、低血清蛋白结合率和低的肝脏代谢 首过效应。对于所有的给药类型而言，需要其具有低毒性和理想的体外和体内 半衰期。虽然用于治疗CNS病症的化合物必须能穿透血脑屏障，但是对用于治 疗外周病症(如小便失禁、或非CNS起源的慢性或急性疼痛)的化合物而言， 优选其在脑内的水平低。

可用实验室试验来对这些所需的药理学性质进行预测。在下面实施例16 的详细方案中将对其进行补充性的讨论。用于预测生物利用度的试验包括通过 人小肠单细胞分子层，包括Caco-2细胞单分子层的转运试验。可以用其对培养 肝细胞的毒性来预测化合物的毒性，优选毒性低的化合物。化合物对人血脑屏 障穿透性可以用在接受了化合物，例如通过静脉给药的方式接受了该化合物的 实验室动物中该化合物的脑水平来进行预测。

血清蛋白结合百分比可以用白蛋白结合试验来进行预测。该类试验的实例 在Oravcova等人的综述中进行了描述(Joumal of Chromatography B(1996)第 667卷，1-27页)。优选与血清蛋白可逆结合的化合物。优选该结合率低于99 ％，更优选低于95％，更进一步优选低于90％，最优选低于80％。

给药频率一般与化合物的体内半衰期成反比。可以用试验结果对化合物的 体内半衰期进行预测，例如用Kuhnz和Gieschen所描述的微粒体半衰期的体外 试验来进行预测(Drug Metabolism and Disposition，1998，26卷，1120-1127页)。优 选使之能以优选给药频率进行给药的半衰期。 化合物的制备

本发明的化合物可以用本领域技术人员所公知的有机合成技术中的大量 方法来进行制备。例如，本发明的化合物可以用如下所描述的方法，与合成有 机化学技术中公知的合成方法，或与本领域普通技术人员可领会的改变一起来 进行制备。优选的方法包括，但不限于如下所述的方法。本发明的化合物，即 脲或硫脲衍生物(VI)，可以用反应路线1中所概述的方法来进行合成。

                          反应路线1

中间体III可以通过在-78℃至200℃的温度范围内，在惰性溶剂中将I用 II在存在碱(例如K2CO3、Cs2CO3、NR1R2R3、NaOR、KOR)的条件下进行处理， 其中所说的惰性溶剂如N，N-二烷基甲酰胺、N，N-二烷基乙酰胺、二烷基醚、 环醚、DMSO、N-甲基-2-吡咯烷酮。异氰酸酯或异硫代氰酸酯V可以通过将IV 的化合物在惰性溶剂中，在-78℃至200℃的温度范围内用碳酰氯(光气)、硫 代碳酰氯(硫光气)、碳酰二咪唑进行处理来获得，其中所说的惰性溶剂如苯、 甲苯。本发明的化合物VI可以通过在-78℃至200℃的温度范围内，在有机溶 剂中通过用V对中间体III进行处理而获得。另一种可供替代的选择是VI的化 合物可以通过将中间体WII在碱如三乙胺存在的情况下在惰性溶剂如氯仿中在 -78℃至200℃的温度范围内用III进行处理而获得的。

本发明的氨基甲酸酯或硫代氨基甲酸酯(X)可以根据反应路线2中的步骤 进行合成。

                       反应路线2

中间体III可以通过用碳酰氯、硫代碳酰氯或碳酰二咪唑进行处理而被转 换成VIII(A＝O、S，L＝卤素、咪唑)。产物X的化合物可以通过在存在碱的条 件下，在惰性溶剂中，在-78C至200C的条件下，将苯酚(IX)用化合物III 进行处理而获得。

正如下面实施例所表明的一样，本领域中的普通技术人员可意识到在生产 本发明所包含的化合物时，该起始材料可发生变化并可以增加步骤。除非特别 说明，本发明中所有的试剂和溶剂都是标准的商业等级，在使用时不需要进行 进一步的纯化。

在本申请文件中所用的所有文章和参考资料，包括专利中公开的内容，在 此都被引作参考。

用下面的实施例对本发明进一步的阐述，但不能认为这些实施例是要将本 发明的范围或主旨限制于其所描述的特定方法中。正如下面实施例所表明的这 样，现有技术中的技术人员可意识到生产本发明所包含的化合物时该起始材料 可发生变化并可以增加步骤。在一些情况中，需要对某些反应基团进行保护， 以便获得一些上述的变形。一般而言，该类需要保护基团的情况以及需要连上 和除去该类保护基团的情况对有机合成现有技术中的技术人员而言是显而易见 的。 实施例 实施例1 ((R)-4-(3-氮-吡啶-2-基)-2-甲基-哌嗪-1-羧酸(4-仲-丁基-苯基)-酰胺 部分A：(R)-1-(3-氯-吡啶-2-基)-3-甲基-哌嗪的合成：

在氮气氛围下，将2，3-二氯吡啶(8.5g，0.057摩尔)和(R)-(-)-2-甲基哌嗪 (5.75g，0.057摩尔)溶解于N，N-二甲基乙酰胺(125.0mL)中。向该混合物中加入 K2CO3无水粉末(23.75g，0.172摩尔)并在135～140℃下搅拌48小时。在TLC (5％MeOH/CHCI3/1％NEt3)上可发现在起始材料消失的同时出现新的斑点。将 该反应混合物冷却至室温，用水进行稀释(400mL)，用EtOAc(3×200mL)进行 萃取并将该合并的有机萃取液用盐水(2×150mL)进行洗涤。用MgSO4进行干 燥，在真空下进行干燥以得到橙黄色液态的粗品(20.0g)。在高度真空的条件下 对该粗品进行蒸馏以得到黄色的粘稠油状的吡啶基哌嗪衍生物(10g，沸点 112-115℃/0.1torr)。NMR(CDCl3)：δ..1.1-1.12(d，3H，J＝1.6Hz)，2.50-2.53(t，1H)， 2.83-2.87(m，1H)，3.06-3.08(m，3H)，3.67-3.75(m，2H)，6.80-6.82(dd，1H)， 7.56-7.58(dd，1H)，8.17-8.18(dd，1H)。 部分B：(4-仲-丁基-苯基)-氧基甲酸苯基酯的合成：

在氮气气氛下，在室温下，将4-异丁基苯胺(4.5g，0.03摩尔)溶解于吡啶中 (30mL)。在室温下，向该反应混合物中小心滴加苯基氯甲酸酯(3.75mL，0.03摩 尔)。将该混合物搅拌3天，在TLC(30％EtOAc/己烷)上可观察到新的斑点。在 真空下将该反应混合物进行蒸发，将其在EtOAc和水(200mL)之间进行分配， 用盐水洗涤几次，在真空中进行干燥(MgSO4)和浓缩。用(10％EtOAc/己烷)在 硅胶柱上通过闪柱色谱法对粗品进行纯化得到白色固体。 部分C：标题化合物：

在氮气气氛下，在室温下，将实施例1中部分A的物质(212mg，1.0毫摩 尔)与实施例1中部分B的物质(269mg，1.0毫摩尔)溶解于CHCl3中(10mL)。 向该混合物中加入三乙胺(202mg，2.0mmol)并回流4小时。将该反应混合物冷 却至室温，用2N的NaOH水溶液、以及水进行洗涤并进行干燥(MgSO4)。将干 燥的萃取物在真空中进行蒸发并在硅胶柱上采用闪柱色谱法用CHCl3进行纯 化，得到白色固体。 NMR(CDCl3)：δ.0.78-0.83(t，3H)，1.19-1.22(d，3H，J＝2.2Hz)，1.43-1.45(d，3H， J＝2.3Hz)，1.51-1.61(m，2H)，2.51-2.58(m，1H)，2.92-3.05(m，2H)，3.41-3.50(m，1H)， 3.73-3.94(m，3H)，4.35(m，1H)，6.33(bs，1H)，6.86-6.90(dd，1H)，7.09-7.13(m，2H)， 7.26-7.30(m，2H)，7.60-7.63(dd，1H)，8.18-8.20(dd，1H)。 实施例2 (R)-(-)-4-(3-氯-吡啶-2-基)-2-甲基-哌嗪-1-羧酸(4-三氟甲基-苯基)-酰胺

在氮气气氛下，在室温下，将实施例1中部分A的物质(0.2756g，1.3毫摩 尔)溶解于甲苯中(1.5mL)。在30分钟内向该混合物中小心滴加溶解于甲苯(50 mL)中的4-三氟甲基苯基异氰酸酯(0.2431g，1.3毫摩尔)并在室温下搅拌3小 时。在真空下将溶剂从该反应混合物中蒸发除去，得到无色油状物。用1∶1 的Et2O/己烷(2.0mL)对该油进行结晶，得到白色固体。 NMR(CDCl3)：δ.1.45-1.47(d，3H，J＝1.7Hz)，2.97-3.01(t，1H)，3.06-3.10(m，1H)， 3.47-3.50(m，1H)，3.75-3.85(m，2H)，3.92-3.95(m，1H)，4.37-4.38(m，1H)，6.59(bs， 1H)，6.88-6.91(dd，1H)，7.52-7.56(m，4H)，7.61-7.63(dd，1H)，8.19-8.21(dd，1H)。 质谱(ESI)：399.3(M+H)。 对于C18H18ClF3N4O的分析计算：C，54.21；H，4.55；Cl，8.89；F，14.29；N，14.05。 实测：C，54.47；H，4.36；Cl，8.50；F，14.99；N，13.94。 实施例3 部分A：(R)-4-(3-氯-吡啶-2-基)-2-甲基-哌嗪-1-碳酰氯化物的合成：

在氮气气氛下，在室温下，将实施例1中部分A的物质(1.06g，5.0毫摩 尔)溶解于CH2Cl2(50mL)和饱和NaHCO3(50mL)中。在室温下滴加溶于甲苯 (5.0mL)中的20％的COCl2并搅拌过夜。分开有机层，用CH2Cl2(2×15mL)萃 取水层并进行干燥(MgSO4)。在真空下蒸发有机层，得到黄色油。 部分B：标题化合物：

在氮气气氛下，在室温下，将实施例3中部分A的物质(136g，0.5毫摩尔)) 溶解于吡啶中(2.0mL)。在室温下向该反应混合物中加入4-叔丁基苯酚并搅拌 过夜。在真空下将该反应混合物进行蒸发，在水/CH2Cl2(20mL)间进行分配， 并进行干燥(MgSO4)。在真空下蒸发有机层并在硅胶柱上采用闪柱色谱法用 15％EtOAc/己烷进行纯化，得到无色的油状物。 NMR(CDCl3)：δ.1.28-1.31(3S，9H)，1.35-1.48(m，3H)，2.96-3.11(m，2H)，3.49(m， 1H)，3.72-3.80(m，2H)，4.13-4.24(m，′1H)，4.55-4.60(m，1H)，6.74-6.92(m，2H)， 7.04-7.07(m，1H)，7.23-7.26(m，1H)，7.36-7.38(m，1H)，7.61-7.64(m，1H)， 8.19-8.22(m，1H)。 质谱(ESI)：388.2(M+H)。 实施例4 2-甲基-4-(3-三氟甲基-吡啶-2-基)-哌嗪-1-羧酸[4-(2，2，2-三氟-1-甲基-乙基)-苯基] 酰胺 部分A：3-甲基-1-(3-三氟甲基-吡啶-2-基)-哌嗪的合成

在氮气气氛下，将2-氯-3-三氟甲基吡啶(5.4g，0.03摩尔)和(R)-(-)-2-甲基哌 嗪(3.0g，0.03摩尔)溶解于N，N-二甲基乙酰胺(100.0mL)中。向该混合物中加入 K2CO3无水粉末(12.4g，0.09摩尔)并在135-140℃下搅拌24小时。在起始原料 消失的同时在TLC(5％MeOH/CHCl3/l％NEt3)上可观察到新的斑点。将该反应 混合物冷却至室温，用水(300mL)进行稀释，用EtOAc(3×200mL)进行萃取， 将有机萃取液合并，用盐水进行洗涤(2×150mL)。用MgSO4进行干燥，在真空 下进行浓缩得到橙黄色液态的粗品。用闪柱色谱法用1％MeOH/CHCl3进行纯 化，得到黄色的粘稠油状物。 部分B：4-(1-三氟甲基-乙烯基)-苯基胺的合成

在氮气气氛下将4-(4，4，5，5-四甲基-1，2，3-二氧杂硼杂环杂环-2-基)苯胺 (2.19g，0.01摩尔)和2-溴-3，3，3-三氟-丙烯(2.61g，0.015摩尔)溶解于1∶1的 THF/1，2-二甲氧基乙烷(30mL)中并在冰浴中进行冷却。向该反应混合物中加入 PdCl2[(PPh3)2](210mg，3mol％)和AsPh3(459mg，15mol％)，然后滴加2.0N的 NaOH(20mL)水溶液。将生成的混合物在室温下搅拌1小时，然后在70℃下搅 拌15小时。向该反应混合物中再加入1.5eq.的2-溴3，3，3-三氟-丙烯(2.61g)并 继续在70℃搅拌6小时。在真空下将该反应混合物进行蒸发，将该残余物溶解 于水/EtOAc中(各物质分别为100mL)，分出有机层，用EtOAc(2×100mL)对 水层进行萃取，将有机层进行合并用MgSO4进行干燥。然后对干燥的萃取物进 行过滤，在真空下进行蒸发，并在硅胶柱上用闪柱色谱法利用CHCl3对粗品进 行纯化，得到黄色油。 部分C：1-异氰酰-4-(1-三氟甲基-乙烯基)-苯的合成

在N2气氛下，将在甲苯中20％的碳酰氯(5.0mL)冷却至-40℃。将实施例 4中部分B的物质(0.47g，2.5毫摩尔)溶解于甲苯中并在搅拌下将其滴加至上述 的冷却溶液中。在-40℃下将其搅拌30分钟，然后在室温下搅拌1小时，然后 再回流1小时。在真空条件下进行浓缩，得到橙黄色的液体。 部分D：2-甲基-4-(3-三氟甲基-吡啶-2-基)-哌嗪-1-羧酸[4-(1-三氟甲基-乙烯基)- 苯基]-酰胺的合成

在氮气气氛下，在室温下，将实施例4中部分A的物质(0.123g，0.5毫摩 尔)溶解于甲苯(1.0mL)中。在5分钟内向该混合物中小心滴加溶解在甲苯(1.0 mL)中的实施例4中部分C的物质(0.106g，0.5毫摩尔)并在室温下搅拌20小时。 在真空下将溶剂从该反应混合物中蒸发出去，并用闪柱色谱法用CHCl3进行纯 化，得到黄色的油。 部分E：标题化合物：

在氮气气氛下，将实施例4中部分D的物质(0.120g，0.262毫摩尔)溶解于 EtOH(25.0mL)中。加入5％Pd/C(30mg)，并在室温下在5atm的H2下氢化5 小时。滤去催化剂，在真空下将溶剂从该反应混合物中蒸发出去并用PTLC用 5％MeOH/CHCl3进行纯化，得到黄色油。 NMR(CDCl3)：δ.1.38-1.41(d，3H)，1.45-1.47(d，3H)，3.05-3.11(m，1H)， 3.22-3.62(m，4H)，3.85-3.90(m，1H)，4.35-4.42(m，1H)，6.40(s，1H)，7.05-7.10(m， 1H)，7.21-7.40(m，5H)，7.95-7.97(d，1H)，8.42-8.46(d，1H)。 质谱(ESI)：461.3(M+H)。 实施例5 4-(3-氯-吡啶-2-基)-2-甲基-哌嗪-1-羧酸[4-(2，2，2-三氟-1-甲基-乙基)-苯基]-酰胺 部分A：4-(2，2，2-三氟-1-甲基-乙基)苯胺的合成

在室温下，将实施例4中部分B的物质(0.375g，0.262毫摩尔)溶解于 MeOH(25.0mL)中。向其中加入阮内(raney)Ni(500mg)并在室温下，在40atm 的H2下氢化20小时。滤去催化剂，在真空下将溶剂从该反应混合物中蒸发出 去并用闪柱色谱法用CHCl3进行纯化，得到黄色油。 部分B：合成1-异氰酰基-4-(2，2，2-三氟-1-甲基乙基)-苯

在N2气氛下，将在甲苯中20％的碳酰氯(2.0mL)冷却至-40℃。将实施例5 中部分A的物质(0.189g，1.0毫摩尔)溶解于甲苯中并在搅拌下将其小心滴加到 该冷却溶液中。在-40℃下搅拌30分钟，之后在室温下搅拌3小时，然后再回 流18小时。在真空中进行浓缩，得到黄色液体。 部分C：标题化合物：

在氮气气氛下，在室温下，将实施例1中部分A的物质(0.169g，0.795毫 摩尔)溶解于甲苯(1.0mL)中。在5分钟内，向该混合物中小心滴加溶解于甲苯 (1.0mL)中的实施例5中部分B的物质(0.171g，0.795毫摩尔)并在室温下搅拌 20小时。在真空下将溶剂从该反应混合物中蒸发去除并用PTLC用5％ MeOH/CHCl3进行纯化，得到白色的无定型粉末。 NMR(CDCl3)：δ.1.44-1.49(2d，6H)，2.94-3.11(m，2H)，3.36-3.51(m，2H)， 3.74-3.94(m，3H)，4.35-4.37(m，1H)，6.41(s，1H)，6.87-6.90(dd，1H)，7.23-7.26(m， 2H)，7.36-7.38(m，2H)，7.60-7.63(dd，1H)，8.19-8.20(dd，1H)。 质谱(ESI)：427.3(M+H)。 实施例6 (R)-4-(3-氯-吡啶-2-基)-2-甲基-哌嗪-1-羧酸[4-(1，2，2，2-四氟-1-三氟甲基-乙基)-苯 基]-酰胺 部分A：1-异氰酰基-4-(1，2，2，2-四氟-1三氰甲基-乙基)-苯的合成

在N2气氛下，将将在甲苯中20％的碳酰氯(20mL)冷却至-40℃。将4-七 氟异丙基苯胺(2.0g，7.7毫摩尔；参见：用于苯胺的制备的EP 1006102)溶解于 甲苯(5.0mL)中并在搅拌下将其小心滴加至冷却溶液中。在-40℃下搅拌30分 钟，然后在室温下搅拌2小时，接着回流4小时。在真空中浓缩，得到黄色液 体。 部分B：标题化合物：

在氮气气氛下，在室温下，将实施例1中部分A的物质(0.106g，0.795毫 摩尔)溶解于甲苯(1.0mL)中。在5分钟内，将溶解于甲苯(1.0mL)中的实施例6 中部分A的物质小心滴加至该混合物中并在室温下搅拌20小时。在真空下将 溶剂从该反应混合物中蒸发出去并用PTLC用5％MeOH/CHCl3进行纯化，得 到白色的无定型粉末。 NMR(CDCl3)：δ.1.44-1.46(d，3H，J＝1.6Hz)，2.93-3.10(m，2H)，3.45-3.52(m，1H)， 3.74-3.78(m，2H)，3.91-3.94(m，1H)，4.37-4.38(m，1H)，6.60(s，1H)，6.87-6.90(dd， 1H)，7.52-7.60(m，4H)，7.61-7.63(m，1H)，8.18-8.20(dd，1H)。 质谱(ESI)：499.2(M+H)。 实施例7 4-(3-氯-吡啶-2-基)-2-甲基-哌嗪-1-硫代羧酸(4-异丙基-苯基)-酰胺

在氮气气氛下，在室温下，将实施例1中部分A的物质(0.212g，1.0毫摩 尔)溶解于甲苯(1.0mL)中。在5分钟内将溶解于甲苯(1.0mL)中的4-异丙基异 硫代氰酸酯(0.177g，0.5毫摩尔)小心滴加到该混合物中，并在室温下搅拌20小 时。在真空下将溶剂从该反应混合物中蒸发出去，并用闪柱色谱法用CHCl3进 行纯化，得到白色固体(mp 49-51℃)。 NMR(CDCl3)：δ.1.22-1.25(d，3H)，1.41-1.43(d，3H)，2.80-3.20(m，3H)， 3.45-3.60(m，1H)，3.65-3.80(m，2H)，4.35-4.39(m，1H)，5.05-5.20(m，1H)， 6.85-6.90(s，1H)，7.15-7.35(m，5H)，7.42-7.44(d，1H)，8.18-8.20(d，1H)。 质谱(ESI)：387.2(M+H)。 实施例8 4-(3-三氟甲基-2-吡啶基)-N-(3-甲氢基-4-羟基苯基甲基)-1-哌嗪甲酰胺的合成

将0.2mL的0.2M异氰酸盐(isocyante)的二氯乙烷溶液用0.26mL在95∶5 甲苯∶N-甲基吗啡中的0.2mL哌嗪溶液中于60℃下处理16小时。将所得反应 溶液冷却至室温。向所得溶液中加入1滴氨基丙基吗啉并将其加热至60℃，然 后在60℃再维持1小时。将所得混合物冷却至室温，并用乙基醋酸酯，利用 SiO2进行色谱分析，得到10mg 63％的标题化合物(化合物1)。MS m/z 410.16 实测值：411，433Na加合物。辣椒素受体Ki：366nM。 实施例9 附加化合物

采用反应路线1和2和实施例1-8中所给出方法的变化过程，有机合成领 域的普通技术人员可以十分容易的制备出表II、III和IV中所列的化合物。在 这些化合物的制备中，商品等级的试剂在使用时不需要进行进一步的纯化。 甲酰胺 7 4-异丙基 H H NH 3-Cl， 5-CF3 427 427，449 Na加合物 * 4-(3-氯-5-三氟甲基-2-吡啶 基)-N-[4-(异丙基)苯基]-1-哌嗪 甲酰胺 8 4-异丙基 H H NH 3-Cl 359 359，381 Na加合物 * 4-(3-氯-2-吡啶基)-N-[4-(异丙 基)苯基]-1-哌嗪甲酰胺 9 4-异丙基 H H NH 3，5-二 Cl 393 393，415 Na加合物 * 4-(3，5-二氯-2-吡啶基)-N-[4(异 丙基)苯基]-1-哌嗪甲酰胺 10 4-异丙基 H H CH＝CH 3-CF3 * 1-(3-甲基-2-吡啶基)-3-(4-三氟 甲基苯基)-丙-2-烯-1-酮 11 4-CF3 H H CH＝CH 3-Me * 1-三氟甲基-2-吡啶基)-3-(4-异 丙基苯基)-丙-2-烯-1-酮 12 4-异丙基 H H NH 3-CN 349 * * 4-(3-氰基-2-吡啶基)-N-[4(异丙 基)苯基]-1-哌嗪甲酰胺 13 4-异丙基 Me H NH 3-Cl 373 373，395 Na加合物 NA 4-(3-氯-2-吡啶基)-N-[4-(异丙 基)苯基]-2-甲基-1-哌嗪甲酰胺 14 4-异丙基 R-Me H NH 3-Cl 373 373，395 * 4-(3-氯-2-吡啶基)-N-[4-(异丙 Na加合物 基)苯基]-1-哌嗪甲酰胺 15 4-异丙基 S-Me H NH 3-Cl 373 373，395 Na加合物 NA 4-(3-氯-2-吡啶基)-N-[4-(异丙 基)苯基]-2-甲基硫代-1-哌嗪甲 酰胺 16 4-CF3 H H NH 3，5-二 Cl 373 NA 4-(3，5-二氯-2-吡啶基)-N-[4-(异 丙基)苯基]-1-哌嗪甲酰胺 *表示在辣椒素受体结合实验中Ki值小于4uM 辣椒素受体结合实验在实施例10中进行了描述 NA＝不能获得 用MicroMass 60系列(Beverly MA)LC-MS TOF光谱仪以电雾化方式收集质谱数据 LC条件：YMC-pack预C18柱，33×4.6ID，粒度：S-5μm 120A，由WATERS提供，Milford，MA， 95％-5％梯度，2分钟梯度时间，流速3.5ml/min，流动相：A：0.05％TFA在H2O/MeOH(95∶5v/v) 中B：0.05％TFA在MeOH/H2O(95∶5v/v)中，1μl注射容量

实施例10

辣椒素受体结合实验

下面的试验是测定辣椒素受体结合率的标准试验，可用该试验来测定化 合物预辣椒素受体(VR1)的结合亲和力。

材料.[3H]ResinifeRaoxin(RTX，37Ci/mmol)是通过Chemical Synthesis and Analysis LaboRatory，National Cancer Institute-Frederick Cancer Research and Development Center，Frederick，MD合成并获得的。[3H]RTX可 以从商业销售者那里获得，例如从Amersham Pharmacia Biotech，Inc.800 Centennial Avenue，P.O.Box 1327，Piscataway，NJ 08855(代码TRK 1069)获得。 非放射性RTX可以从Alexis Corp.(San Diego，CA)买到，capsazepine可以从 RBI(Natick，MA)买到。

分子生物学

将用于编码全部长度人辣椒素受体(SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2)的 cDNA以表达的合适取向亚克隆到表达载体如pcDNA3.1(Invitrogen，CAr1sbad， CA)或pUHG102-3(Clontech，Palo Alto，CA)上以重组哺乳动物细胞中的表 达。

细胞培养.  用标准的方法将人的胚肾(HEK293)细胞用编码全部长度的 人辣椒素受体的pcDNA3.1表达结构(即，包含SEQ ID NO：1和SEQ ID NO： 2的核苷酸序列)进行转染。将这些进行了转染的细胞在两星期的时间内，在 包含G418(400μg/ml)的基质中进行精选，然后将其维持作为稳定的转染 细胞库。

pUHG102 VR1表达质粒被转染成包含pTet Off Regulator质粒(Clontech) 的Chinese Hamster Ovary(CHO)细胞。在这些细胞中，在存在四环素的条件 下，pUHG质粒的表达受到抑制，但是除去该抗生素则可诱导其表达。将在 包含嘌呤霉素(10μg/ml)的培养基质中的稳定的纯系分离出来并将其维持在 补加了四环素(1μg/ml)的基质中。在使用前，使试验所用的细胞在不含抗生 素的培养基质中生长48-72小时。对于放射性配体结合试验而言，将细胞 接种于其中的介质不含抗生素的T175细胞培养瓶中，并使其生长至90％的 汇合率。然后将该瓶用PBS进行洗涤，并在包含5mM EDTA的PBS中进行 采集。通过温和离心法使该细胞成团并将其储存于-80℃下直至进行试验。

膜制剂

在冰冷的HEPES匀化缓冲剂中(5mM KCl 5，5.8mM NaCl，0.75mM CaCl2，2mM MgCl2，320mM蔗糖，和10mM HEPES，pH7.4)，将以前冷冻的 细胞用组织均浆机进行破碎。在1000xg(4℃)下将组织匀浆离心10分钟， 以除去原子核片断和碎片，然后将第一次离心所得的上清液再在35,000xg (4℃)下离心30分钟以获得部分纯化的膜碎片。在进行试验前，将该膜重 新混悬于HEPES匀化缓冲剂中。根据Bradford法，用这种膜匀浆的等分试 样来测定蛋白浓度(BIO-RAD蛋白测定试剂盒，#500-0001，BIO-RAD， Hercules，CA)。

放射配体结合率

用[3H]RTX进行的结合率试验基本可以根据已发表的方案(Szallasi和 Blumberg，1992，J.Pharmacol.Exp.Ter.262：883-888)来进行，其中可以通过在 结合反应结束后向其中加入牛α1酸性糖蛋白(每根试管100μg)来减少RTX 的非特异性结合。和前面一样，将该匀浆进行离心，并将其重新混悬于匀化 缓冲剂中使之获得333μg/ml的蛋白浓度。将结合试验混合物放于冰上并使 之包含[3H]RTX(特定的活性为2200mCi/ml)、2μ1非放射性的配体试验化 合物、0.25mg/ml牛血清白蛋白(Cohn fraction V)、和5×104-1×105VR1-转染 的细胞。用上述冰冷的HEPES匀化缓冲剂溶液(pH7.4)将其最后的容积调整 至500μl(竞争性结合实验)或1,000μl(饱和性结合实验)。非特异性的结合被 定义为在存在1μM非放射性的RTX的情况下发生的结合。对于饱和性结合 而言，用1至2的稀释度，使[3H]RTX以7-1,00pM的浓度加入其中。在每 一饱和性结合曲线中一般收集11个浓度点。

竞争性结合实验是在存在60pM的[3H]RTX和各种浓度的竞争配体的情 况下进行的。通过将试验混合物转移到37℃的水浴中来引发该结合反应，在 培养60分钟后通过将试管放在冰上进行冷却来中止该反应。通过预浸渍(使 用前在聚乙烯亚胺中2小时)的WHATMAN过滤器对样品进行过滤，将与 膜进行了结合的RTX与游离的，以及与任何α1酸性糖蛋白结合的RTX分离 开。将滤液干燥一夜，然后在加入WALLAC BETA SCINT闪烁液后用 WALLAC 1205 BETA PLATE计数器对其进行计数。

入前所述，在计算机程序FIT P(Biosoft，Ferguson，Mo)的帮助下， 通过用变构的Hill方程对测定的值进行拟合来测定平衡结合参数。(Szallasi 等人，(1993)J.Pharmacol.Exp.Ther.266：678-683)。

虽然对辣椒素受体的Ki值高于1uM的化合物一般较少作为药物，但在 本发明中，有用化合物对辣椒素受体的Ki值小于4uM，更优选的化合物的 Ki值小于100nM，进一步优选的化合物的ki值小于50nM，甚至更优选的 化合物的Ki值小于25nM并且本发明最优选的化合物的Ki值小于或等于 10nM。

实施例11

钙活化试验

下面的试验可用于监测细胞辣椒素受体对于辣椒素及其它辣椒素受体 的激活香草酸(vanilloid)配体的响应。该试验还可用于测定试验化合物是 否可作为辣椒素受体的激动剂或拮抗剂。

将细胞用表达质粒进行转染(如实施例10所述)，从而接种上人的辣 椒素受体的表达，并使之在FALCON黑色壁、透明底的96孔板中(#3904， BECTON-DICKINSON，Franklin Lakes，NJ)生长至70-90％融合率。将该培养 基质从该96孔板中清空，然后向各孔中加入FLUO-3 AM钙敏感的染料(分 子探针，Eugene，OR)(染料溶液：1mg FLUO-3 AM，440μL DMSO和440μl 20％，溶解于DMSO中的普流罗尼酸(pluronic acid)，将其以1∶4的比例 进行稀释，每个孔中加入50μl的稀释液)。用铝箔覆盖板，并在包含5％CO2的环境下，在37℃下培养1-2小时。在进行培养后，将染料从板中清空，用 Krebs-Ringer HEPES(KRH)缓冲液(25mM HEPES，5mM KCl，0.96mM NaH2PO4，1mM MgS04，2mM CaCl2，5mM葡萄糖，1mM丙磺舒，pH7.4)洗 涤细胞，然后将其重新混悬于KRH缓冲液中。

激动剂(例如，olvanil、辣椒素、或RTX)诱导的钙活性可以用 FLUOROSKAN ASCENT(Labsystems，Franklin，MA)或FLIPR(荧光成像板阅 读系统，Molecular Devices，Sunnyvale，CA)仪器来进行监测。类似地，可以 与激动剂(例如，25-50nM辣椒素)一起向细胞中加入各种浓度的拮抗剂—钌 红或capsazepine。对于激动剂-诱导的钙响应而言，使用激动剂后30至60 秒的时间内获得的数据可用于归纳EC50值。用KALEIDAGRAPH软件 (Synergy Software，Reading，PA)对数据进行拟合，得到如下的方程：

y＝a*(1/(1+(b/x)c))

用其测定反应的EC50。在该方程中，y是最大荧光信号，x是激动剂或 拮抗剂的浓度，a是Emax，b相当于EC50或IC50值，以及最后，c是Hill系数。

测定辣椒素受体拮抗作用的试验

为了测定试验化合物激动(抑制)细胞表达的辣椒素受体对于辣椒素或 其它激活香草酸(vanilloid)激动剂的响应能力，首先测定辣椒素的EC50。

再添加20μl KRH缓冲液和1μl DMSO到各孔中的细胞中，其制备 同上。在KRH缓冲液中的100μl辣椒素受体通过FLIPR仪器被自动转移 到各孔中。用最终辣椒素浓度为1nM至3nM的8点浓度响应曲线来测定 EC50。

将试验化合物溶解于DMSO中，稀释于20μl的KRH缓冲液中，以使得 在试验孔中试验化合物的最终浓度在1uM和5uM之间，并将其加入到用如 上的方法所制备的细胞中。将包含所制备的细胞和试验化合物的96孔板在室 温下，黑暗中培养0.5-6小时。很重要的一点是该培养不能超过6小时。就 在测定荧光响应之前，将100μl于KHR缓冲液中的辣椒素以浓度响应曲线 所测定E50浓度的两倍浓度用FLIPR仪器自动加入到96孔板的各个孔中以获 得最终的200μl容积，最后的辣椒素浓度等于EC50。在该试验孔中的试验 化合物的最终浓度在1uM和5uM之间。与辣椒素的一种EC50接触的典型细 胞一般会出现约10,000相对荧光单位的响应。与匹配的对照物相比，辣椒素 受体拮抗剂可将该响应降低约20％，优选降低约50％，并且最优选降低至少 80％。提供50％降低所需的拮抗剂的浓度是拮抗剂的EC50(也被称为IC50)。

可以用如实施例10所描述的方法来测定平衡结合参数。

测定辣椒素受体激动作用的试验

可以用上述方法，在不存在辣椒素、RTX、或其它已知的辣椒素受体激 动剂的条件下，通过测量细胞表达的辣椒素受体的荧光响应来测定作为辣椒 素受体激动剂的化合物活性。造成细胞在背景上出现荧光的化合物是辣椒素 受体激动剂。非常优选的本发明化合物是基本没有激动剂活性的拮抗剂，这 一点可以通过在该类试验中，化合物的浓度在低于4nM时，更优选在低于 10uM的浓度下并且最优选的在低于或等于100uM的浓度下没有可察觉的 激动剂活性来证明。

实施例12

NPY Y5受体结合实验

下面的试验是用于NPY Y5(神经肽Y受体5)受体结合的标准试验，可 用该试验来测定化合物与该NPY Y5受体的亲和力。在进行培养的细胞中重 组人Y5受体的表达和使用由该类细胞所制得的膜进行的受体结合实验在以 前已经被进行了描述，例如在美国专利5,602,024中第17-20栏。美国专利 5,602,024在这里被引入作为参考，其公开了关于重组人Y5受体、在所培养 细胞中该受体的表达、和用由该类细胞所制得的膜进行受体结合试验。所以

细胞培养

在48小时采集用Baculovirus-感染的Sf9细胞表达的人NPY Y5受体。

膜制剂

将Sf9细胞团重新混悬于溶菌缓冲液中(20mM Tris-HCL，5mM EDTA， 0.5ug/ml亮肽素，2ug/ml抑肽酶，200uM PMSF，pH7.4)并用POLYTRON匀 浆器进行匀化(标度3为325-30秒)。将该匀浆进行离心(536xg/10分钟/4 ℃)以使该核成团。将包含分离出来的膜的上清液倒入一根干净的离心管中， 离心(48,000xg/30g/分钟，4℃)，并将其重新混悬于30ml的匀化缓冲液中。 将这种离心和重混悬步骤重复进行两次。将最后小球重新混悬于冰冷的包含 5mM EDTA的Dulbecco′s PBS中并将其以等分试样的形式储存于-20℃直至 使用。用实施例3所描述的Bradford蛋白试验对所得膜制剂中的蛋白浓度进 行测定。通过这种测定得知，1升的细胞培养物一般产生100-125mg的总 膜蛋白。

将解冻的Sf9膜用PBS进行洗涤，并通过Dounce匀化作用(仔细研碎) 将其重新混悬于结合缓冲液中(50mM Tris-HCl，5mM KCl，120mM NaCl，2 mM CaCl2，0.1％BSA，pH7.4)。

对于竞争性结合分析而言，将在150ul结合缓冲液中的膜(10-25ug)加入 到包含[125I]PYY(猪的，NEN，Boston，MA)/GTP的聚丙烯管或96孔深孔板中。 [125I]PYY的最终浓度是30-35pM/试验孔；GTP的最终浓度为100uM/孔。 在存在1uM NPY(人的，American PeptideCo.，Sunnyvale，CA)的条件下对非特 异性结合进行测定，该非特异性结合小于总结合量的10％。将试验化合物以 20ulDMSO中1-4uM的浓度加入到该试验混合物中。最后的试验容积为250 ul。对于竞争性分析而言，试验化合物以10-12至10-6M的浓度范围加入。一 般而言，每条饱和性结合曲线采集11个浓度点。在室温下培养2小时后，通 过快速真空过滤来终止该试验反应。用预浸渍(使用前在聚乙烯亚胺中2小 时)的GF/C WHATMAN过滤器对样品进行过滤并将其用5ml不含BSA的 冷结合缓冲液洗涤两次。用γ计数对剩余的结合放射活性进行测定。Ki值可 以用实施例10中所述的方法进行测定。

优选的本发明化合物所表现出来的与辣椒素受体的亲和力比与嵌合的 NPY Y5受体的亲和力高10倍，更优选的本发明化合物所表现出来的与辣椒 素受体的亲和力比与化学的NPY Y5受体的亲和力高100倍，进一步优选的 本发明化合物所表现出来的与辣椒素受体的亲和力比与化学的NPY Y5受体 的亲和力高1000倍。最优选的本发明的化合物与NPY 5受体不表现出可察 觉的亲和力。

实施例13

本发明放射性标记的探针化合物的制备

通过使用包含至少一种原子是放射性同位素的前体来完成其合成，本发 明的化合物可以被制备成放射性标记的探针。该放射性同位素优选地选自碳 (优选14C)、氢(优选3H)、硫(优选35S)、或碘(优选125I)中的至少一种。在放 射性标记探针化合物的自定义合成中该类放射性标记的探针一般由特定的放 射性同位素供应者来合成。该类供应者包括Amersham CorpoRation，Arlington Heights，IL；Cambridge Isotop LaboRatories，Inc.Andover，MA；SRI International， Menlo Park，CA；Wizard LaboRatories，West Sacramento，CA；ChemSyn LaboRatories，LexenA，KS；American RadiolabeledChemicals，Inc.，St.Louis，MO； 和Moravek Biochemicals Inc.，BreA、CA。

氚标记的探针化合物一般还可以通过在含氚的醋酸中通过钯催化交换 来合成，或可以通过在含氚的三氟醋酸中经由酸催化交换而合成，或用氚气 通过多相催化的交换来合成。由在上一段中所列出的任何一个供应者用本发 明的化合物作为底物，该类制剂一般还可以用于进行自定义的放射性标记。 此外，某些前体还可以通过用氚气来进行氚-卤素交换，视情况而定，可用氚 气减少不饱和键，或用硼氚化钠进行还原。

实施例14a和14b

放射性标记的芳基哌嗪辣椒素受体配体的制备

实施例14a

实施例14b

                       图解4

实施例15

受体放射自显影法

受体放射自显影法(受体映象)是采用Kuhar在John Wiley&Sons，New York，Current Protocols in Pharmacology(1998)的8.1.1至8.1.9节中所描述的 体外方法，用前一实施例所述方法进行制备的放射性标记的本发明化合物来 进行的。

实施例16

本发明优选化合物的另一些方面

本发明最优选的化合物适用于治疗人类患者的药学应用。因此，该类优 选的化合物是无毒的。在单剂量或多剂量时它们都不表现出急性或长期毒性、 诱变性(例如，在细菌的逆转突变试验如艾姆斯氏试验中所测定出的诱变性)、 致畸性、致癌性(tumorogenicity)等副作用，并且当以有效治疗剂量给药时 很少诱发有害作用(副作用)。

优选地，在某些剂量下本发明的这种优选化合物的给药(即，非胃肠道给 药或优选地口服给药时，在体内产生有效治疗浓度的剂量或优选的0.01、 0.05、0.1、0.5、1、5、10、40、或50mg/kg的剂量)不会延长心QT间隔(即， 如用心电图测定的那样，例如在豚鼠、小种猪或狗的心电图中测定的那样)。 当连续5天每日给药或优选连续10天每日给药时，该类优选化合物的这种给 药剂量不会引起肝肥大，所导致的肝与体重的比例增加不超过用实验室啮齿 动物(例如小鼠或大鼠)的匹配的对照所得结果的100％，优选的不超过其 75％，并且更优选的不超过其50％。另一方面，该类优选化合物的这种给药 剂量还优选的不引起肝肥大，所导致的肝与体重的比例增加不超过未进行处 理的狗或其它的非啮齿类哺乳动物匹配的对照所得结果的50％，优选的不超 过其25％，并且更优选的不超过其10％

另一方面，该类优选化合物的该类优选给药剂量不会刺激体内肝酶(例如 ALT、LDH、或AST)从肝细胞的释放。与实验室啮齿动物匹配对照的体内结 构相比，优选地该类给药剂量所产生的血清中的该类酶的水平的增加不高于 用对照所得结果的100％，优选的不高于其75％，并更优选的不高于其50％。 类似地，高于或等于体内最小有效浓度两倍，优选五倍，并最优选十倍的浓 度(在培养物基质或其它体外接触和培养细胞的该类溶液)不会使该类肝酶从 体外肝细胞释放到培养基质中的水平超过在未处理的基质中所观察到的基准 水平。

因为副作用常常是由于发生了不希望发生的受体活化或拮抗作用，所 以，本发明的优选化合物以高选择性来发挥其受体调控作用。这意味着它们 不会以高亲和力与某些其它受体(除辣椒素受体外的其它受体)进行结合，而 以高于100纳摩尔，优选高于1微摩尔(uM)，更优选高于10uM并且最 优选高于100uM的亲和力常数与该类其它受体进行结合，以活化或抑制该类 受体的活性。该类受体优选地选自离子通道受体，包括钠离子通道受体、中性 介质受体如α-和β-肾上腺素受体、毒蕈碱受体(尤其是m1、m2、和m3受 体)、多巴胺受体，和metabotropic谷氨酸酯受体；和还包括组胺受体和细胞素 受体，例如白介素受体，尤其是IL-8受体。优选的化合物不以高亲和力与之结 合的其它受体还包括GABAA受体、生物活性的缩氨酸受体(包括NPY和VIP 受体)、神经激肽受体、缓激肽受体(例如，BK1受体和BK2受体)、和激素受 体(包括雄激素受体、促甲状腺激素释放激素受体和黑素细胞浓缩激素受体)。

实施例16a

钠离子通道和抗雄激素活性标准

本发明优选的化合物不会表现出显著的钠离子通道阻滞剂活性，当以4 uM或更低的浓度存在时，对钠离子通道特定配体(例如，箭毒蛙碱，河豚毒素， 或非蛋白质强毒素)结合的抑制低于15％的抑制作用，并更优选的低于10％ 的抑制作用。

本发明优选的的化合物不表现出显著的雄激素生物活性，更优选地，它们 不会表现出显著的雄激素拮抗剂活性，例如，在体内的Hershberger试验中，或 在体外，如Nellemann等人在Toxicology 2001，163(1)：2938中所描述的试验 中。当以4uM或更低的浓度存在时，在这种体外试验中，本发明优选的化 合物对雄激素受体活性表现出低于15％的，更优选低于10％，并最优选5％ 的抑制作用。

显著的活性指的是在用标准的统计学显著性试验如学生T检验进行测定 时，在p＜0.1的水平或更优选的在p＜0.05的水平下与对照间的差异显著。

实施例16b

在体外的微粒体的半衰期

化合物的半衰期值(t1/2值)可以用下面的标准肝微粒体半衰期试验来行测 量。人肝微粒体库可以由XenoTech LLC，3800 Cambridge St.，KansasCity， Kansas 66103(catalog#H0610)获得。该类肝微粒体还可以从In Vitro Technologies，Baltimore，MD 21227，或Tissue Transformation Technologies， Edison，NJ 08837获得。该反应进行如下：

试剂：

磷酸盐缓冲液：19mL 0.1M NaH2PO4，81mL 0.1Na2HPO4，用H3PO4将 pH值调节至7.4。

辅助因子混合物：16.2mg NADP，45.4mg葡萄糖-6-磷酸盐在4mL 100 mM的MgCl2中。

葡萄糖-6-磷酸盐脱氢酶：214.3ul葡萄糖-6-磷酸盐脱氢酶混悬液 (Boehringer-ManheimCatalog 0737224号，用Roche Molecular Biochemicals， Indianapolis，IN 46250进行分散)用蒸馏水稀释至1285.7ul。

起始反应混合物：3mL辅助因子混合物，1.2mL葡萄糖-6-磷酸盐脱氢 酶。

反应：

制备6种试验反应物，各种反应物都包含25ul微粒体、100uM的试验 化合物溶液5ul，和399ul 0.1M的磷酸盐缓冲液。制备第七种反应物作为阳 性对照，其包含25ul微粒体、399ul 0.1M的磷酸盐缓冲液、以及5ul 100uM 代谢性质已知的化合物溶液(例如安定或CLOZEPINE)。将这些反应物在39 ℃下预培养10分钟。向6种试验反应物中的5种和阳性对照中加入71ul的 起始反应混合物，向第6种试验反应物中加入71ul 100mM的MgCl2，并将 其用作阴性对照。在各时间点(0，1，3，5，和10分钟)，将75ul的各反应混合物 吸入到96孔深孔板的包含75ul冰冷的乙腈的孔中。将该样品以3500rpm的 速度涡旋离心10分钟(Sorval T 6000D离心机，H1000B转子)。从各反应物中 取出75ul的上清液，将其转移到96孔深孔板的包含150ul 0.5uM具有已知 的LCMS曲线的化合物溶液(内标)的各孔中。对各样品进行LCMS分析并通 过AUC对未代谢的试验化合物的量进行测定，AUC是通过用化合物浓度对 时间作图而获得的，可以外推出试验化合物的t1/2值。

本发明优选的化合物在体外所表现出的t1/2值高于10分钟并少于4小时。 本发明最优选的化合物所表现出的在人肝微粒体中的体外t1/2值在30分钟至 1小时之间。

实施例16c

MDCK毒性试验

能引起急性细胞毒性的化合物会大大降低下面试验中Madin Darby Canine Kidney(MDCK)细胞的ATP产量。而本方面优选的化合物则不会产生 这种现象。

按照ATCC产品资料图表上的说明，将MDCK细胞，ATCC no.CCL-34(American Type Culture Collection，Manassas，VA)维持在无菌的条 件下。可使用PACKARD，(Meriden，CT)ATP-LITE-M Luminescent ATP检测 试剂盒，产品号为6016941，来测定在MDCK细胞中所产生的ATP。

在试验前，将1ul的试验化合物或对照样品吸入到 PACKARD(Meriden，CT)透明底96孔板中。用DMSO对试验化合物和对照样 品进行稀释以获得10微摩尔、100微摩尔或200微摩尔的最终试验浓度。对 照样品是具有已知毒性的药物或其它化合物。

将融合的MDCK细胞胰蛋白酶化，收集，并用温热(37℃)的VITACELL Minimum Essential Medium Eagle(ATCCCatalog&num；30-2003)将其稀释至 0.1×106细胞/ml的浓度。将介质中100ul的细胞吸入到各96孔板除5孔外 的所有孔中。将不含细胞的温热基质吸入到各板剩余的5个孔中。用这些没 有加入细胞的孔来测定标准曲线。然后，将这些板在37℃下，在95％O2、 5％CO2的条件下，恒速振荡培养2小时。在进行培养后，将50ul的哺乳动 物细胞溶菌溶液加入到各孔中，将板用PACKARD TOPSEAL张贴物进行覆 盖，用适宜的振荡器，以约700rpm的速度将这些板振荡2分钟。

在培养期间，将PACKARD ATP LITE-M试剂平衡至室温。一旦达到平 衡，就将该冷冻干燥的反应物重新混悬于5.5ml的反应物缓冲溶液中(得自 试剂盒)。将冷冻干燥的ATP标准溶液重新混悬于去离子水中以获得10mM 的储备液。对于5个对照孔而言，向五个标准曲线对照孔中分别加入10ul 连续稀释的PACKARD标准物使各孔浓度依次为200nM、100nM、50nM、 25nM、和12.5nM。

将PACKARD反应物溶液(50ul)添加到所有各孔中。将孔用PACKARD TOPSEAL粘贴物进行覆盖，将后将这些板用适宜的振荡器以约700rpm的速 度振荡2分钟。将白色的PACKARD粘贴物附在各板的底部，并通过将样品 包于箔中而使样品位处于黑暗中，使样品在黑暗中放置10分钟。在22℃用 荧光计数器来测定荧光，该荧光计数器可以是例如PACKARD TOPCOUNT Microplate Scintillation和Luminescense Counter或TECAN SPECTRAFLUOR PLUS。

将在各药物浓度下的荧光值与由标准曲线计算而得的该浓度下的值进 行比较。当所用试验化合物的浓度为10微摩尔(uM)时，优选的试验化合物 所表现出的荧光值为标准曲线值的80％或以上，或优选地为标准曲线值的90 ％或以上。当所用试验化合物的浓度为100微摩尔时，优选试验化合物所表 现出的荧光值为标准曲线值的50％或以上，或优选地为标准曲线值的80％或 以上。荧光值低于标准曲线值的50％则表明ATP产量的大量下降。

实施例18

用于测定疼痛缓解和镇静的动物模型

下面的试验方案可用于测定由本发明化合物所提供的疼痛缓解度和镇 静作用，例如，与吗啡所提供的疼痛缓解和镇静作用进行比较，或与布洛芬 所提供的疼痛缓解进行比较。

实施例18a

CFA关节炎模型

在雄性SD大鼠的后爪上注射200ml的CFA(0.1mg用热杀死并干燥的 M.tuberculosis/ml)(爪的背面注射100ml和爪的脚底注射100ml)，基本上与 Bertorelli R，CorRAdini L.Rafiq K，Tupper J，Calo G，Ongini E.，Br J Pharmacol. 1999 128(6)：1252-8和SteinC，Millan MJ，Herz A.Pharmacol Biochem Behav.1988 31(2)：455-51所描述的相同。

在第5、6和7天对大鼠进行热(见Hargreaves K，Dubner R，Brown F， FloresC，Joris J.在Pain.1988 32(1)：77-88中所描述的)和机械(见Tal M，Eliav E. 在Pain.1996年3月；64(3)：511-8)敏感度试验。在注射CFA前应当测定各 动物的基准值。

在第7天，在试验前1小时使动物口服本发明的化合物、吗啡或赋形剂 (2％维生素E-TPGS)。注意：吗啡5mg/kg的口服剂量具有镇静作用。

结果一般表示为最大潜在功效(MPE)的％。0％MPE被定义为赋形剂 的止痛作用，100％MPE被定义为动物复原到热或敏感性的基准水平。

实施例18b

机械的异常性疼痛

本试验测定了式I-IX和式A-F的化合物在缓解由脊柱神经结所产生的疼 痛，即缓解机械的异常性疼痛模型的体内的至少一种症状的作用。

触觉异常性疼痛是用Bennet和Xie，Pain 1988，33：87-107所描述的方法 而在大鼠体内诱导产生的。对大鼠进行麻醉，例如通过戊巴比妥钠以能给出 所需麻醉作用的附加剂量(65mg/kg)静脉给药来进行麻醉。将大鼠后肢外侧的 毛刮掉并进行消毒。用无菌技术，在该后肢的外侧、大腿正中的位置上作出 一个切口。直接分开该股二头肌以暴露坐骨神经。在各大鼠的一个后肢上， 在坐骨神经周围以约1-2微米的距离系四个松散的结。在各大鼠的另一侧作 一个同样的切口，只是该坐骨神经不进行结扎。用连续缝合的方式将肌肉合 拢，并用伤口夹或缝合线将皮肤合拢。

机械敏感度是用Chaplan等人在J.Neurosci.Methods 1994，53：5563中所 描述的方法进行评估的。将各种刚性强度的一系列Von Frey长丝(在该系列 中一般有8根长丝)放置到后爪同侧的脚底表面上，并用刚刚够的强度使该长 丝弯曲。将该长丝固定在该位置上不超过3秒钟或直至大鼠出现阳性的异常 性疼痛响应。阳性的异常性疼痛响应表现为举起该受侵害的爪后立即舔或摇 动该爪。用Dixon上下法来测定使用各长丝时的次序和频率。试验是从该系 列中的中等毛状金属丝开始的，将长丝以连续的方式进行应用，根据出现阴 性或阳性响应而分别将开始所用的长丝级别升高或降低。

当用这种方法进行试验时，某些优选的式I-IX和式A-F的化合物能有效 的逆转机械类的异常性疼痛症状(即，与未进行处理或用赋形剂进行处理的对 照大鼠相比，用该类化合物的有效量进行治疗的大鼠需要更高强度的Von Frey长丝才能出现阳性的异常性疼痛的响应)。

实施例18c

冷的异常性疼痛

本试验测定了化合物在缓解由单侧单神经病所诱导的神经性疼痛，即缓 解冷的异常性疼痛的一种症状的效果。

单侧单神经病基本是用Bennet和Xie在Pain 1988，33：87-107中所描述 的方法在大鼠体内诱导出现的。将大鼠进行麻醉。将各大鼠后肢侧面的毛刮 去并进行消毒。用无菌技术，在该后肢的外侧大腿正中的位置上作出一个切 口。直接分开该股二头肌以暴露坐骨神经。在各大鼠的一个后肢上，在坐骨 神经周围以约1-2微米的距离系四个松散的结。在各大鼠的另一侧作一个同 样的切口，只是该坐骨神经不进行结扎。用连续缝合的方式将肌肉合拢，并 用伤口夹或缝合线将皮肤合拢。

用表示出单侧单神经病的大鼠来评估急性和慢性冷的异常性疼痛敏感 度。将各大鼠分别放置在离底部约6cm的位置上带有金属圆盘的小室中。向 该小室中加入冰水，使之深度达到该金属圆盘上约2.5cm的位置，并且在试 验期间将该水浴的温度维持在0-4℃。启动计时器，将大鼠的响应潜伏期测 定至最接近的十分之一秒。“响应”被定义为当该大鼠被固定并不旋转时， 将结扎的后爪迅速收缩完全离开该水浴。最大浸渍时间为20秒，并且在试验 期间有20分钟的间隔。该筛选标准为：1)两试验的平均数小于或等于13秒， 和2)两试验的得分连续交叉。将在手术后4至10天内对于冷有超敏性的动 物筛选出来，并选择其用来进行以上述标准为基础的药物响应研究。用给药 前的筛选值作为动物的基本的冷异常性疼痛得分。对于急性研究而言，在给 药后第1、3、和有时在第5小时对动物的冷的异常性疼痛进行试验。

虽然一般不优选用这种急性冷的异常性疼痛试验来证明本发明化合物 的功效，但是当用这种试验进行试验时，某些优选的式I-IX和式A-F的化合 物在低于50mg/kg的剂量时表现出抗异常性疼痛的作用(增加响应潜伏期)。

实施例18d

机械的痛觉过敏

本试验测定了化合物在缓解由单侧单神经病所诱导的神经性疼痛，即缓 解机械痛觉过敏的一种症状的效果。

慢性压缩性损伤是通过将右侧共同的坐骨神经上的结松开而产生的，该 方法同Bennet和Xie在Pain，1988，33：87-107中所描述的方法一样。左侧 普通坐骨神经暴露可见，但是不对其进行会产生虚假状况的操作。

用患有慢性压缩性损伤的大鼠来评估对于针刺痛刺激而产生的机械痛 觉过敏，该方法采用Koch等人在Analgesia 1996，2(3)，157-164中所描述的。 将大鼠放置在带有温热的有开口的金属地板的笼子的各隔间中。在对结扎和 假后肢的脚底表面进行针刺后，测定后爪收缩的持续时间。

当用本方法进行试验时，在50mg/kg或更低的剂量下，本发明优选的化 合物可降低大鼠由针刺刺激所引起的机械痛觉过敏(即，减少后爪收缩的持续 时间)。

实施例18e

热痛觉过敏

本试验测定了化合物在缓解由单侧单神经病所诱导的神经性疼痛，即缓 解热痛觉过敏中的一种症状中的效果。

在手术后至少10天时，用如实施例18d中所述的进行了手术的大鼠来 评估热痛觉过敏的敏感度。将大鼠放置在升高的玻璃平台上的逆转的笼子下， 并将玻璃下的一个放射性热源瞄准后爪的脚底。

将后爪从地板上收回前的持续时间，测定到最接近的十分之一秒。热刺 激的切断时间为20秒，然后用光来测定，以便于这种刺激持续时间不会烧伤 皮肤或使皮肤起水泡。优选地在各试验期间对各后爪进行四次潜伏期测定， 用左后爪和右后爪交替进行，在各试验间有5分钟的间隔。将各侧的后爪收 缩时间进行平均，获得不同得分。

在这种模型中以50mg/kg或更少的的剂量口服给药后，本发明优选的化 合物能增加爪收缩的平均时间。

实施例18f

镇静

可以用Fitzgerald等人在Toxicology 1988，49(2-3)433-9中所描述的方法 来测定镇静作用。以低于25mg/kg(优选低于10mg/kg)的剂量静脉给药或 以低于140mg/kg(优选低于50mg/kg)的剂量口服给药时，本发明优选的 化合物不会产生可重复或显著的镇静作用。