用于治疗中枢神经系统障碍的多介质转运体抑制剂
专利汇可以提供用于治疗中枢神经系统障碍的多介质转运体抑制剂专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 提供一类式(II)的 抑制剂 ，包含此类抑制剂的 包装 药物，以及所述抑制剂在 治疗 或者制备用于治疗中枢神经系统障碍的药物中的用途，所述中枢神经系统障碍包括抑郁、焦虑、 睡眠障碍 、 肥胖症 、注意 力 缺陷 障碍(ADD)、注意力缺陷伴多动障碍(ADHD)、性功能障碍、 药物滥用 和 运动障碍 。还提供了相关的商业方法，例如进行药物商业的方法以及进行医药辅助偿还计划的方法。，下面是用于治疗中枢神经系统障碍的多介质转运体抑制剂专利的具体信息内容。
1.式II表示的转运体抑制剂或其药学可接受的盐、溶剂合物、代谢 物或前药：
其中，如果原子价和稳定性允许，
Ar，每次出现时独立地代表取代或未取代的芳基或杂芳基环；
X代表-H或-OR；
Y代表-O-、-S-、-C(R)2-、或-N(R)-；
R，每次出现时独立地代表-H或低级烷基；
R1，每次出现时独立地代表卤素、氨基、酰氨基、脒基、氰基、 硝基、叠氮基、醚、硫醚、亚砜基、-J-R2、-J-OH，-J-低级烷基、-J-低 级链烯基、-J-SH、-J-NH2，或者取代或未取代的低级烷基、低级链烯 基、环烷基、杂环基、环烷基烷基、杂环基烷基、芳基、杂芳基、芳 烷基或杂芳烷基，或者上述的保护形式；
R2，每次出现时独立地代表H或者取代或未取代的低级烷基、环烷 基、杂环基、芳烷基、杂芳烷基、芳基或杂芳基；
J，每次出现时独立地代表含0-8个选自-C(R)2-、-N(R)-、-O-和-S- 的单元的链；
n是0-2的整数；和
p是0或1。
2.权利要求1的抑制剂，其中R1表示一个或多个低级烷基基团。
3.由式IIa、IIb或IIc表示的权利要求1或2的抑制剂或其药学可接 受的盐、溶剂合物、代谢物或前药：
4.权利要求3的抑制剂，其具有以下结构：
5.权利要求3的抑制剂，其具有以下结构：
6.权利要求3的抑制剂，其具有以下结构：
7.权利要求1-6任一项的抑制剂，其中Ar被一个或多个选自以下的 基团取代：卤素、氰基、烷基、链烯基、炔基、芳基、羟基、烷氧基、 甲硅烷基氧基、氨基、硝基、硫醇、氨基、亚氨基、酰氨基、磷酰基、 膦酸基、羧基、羧酰胺、甲硅烷基、硫醚、烷基磺酰基、芳基磺酰基、 亚砜、硒醚、酮、醛、酯或-(CH2)mR2，其中m是0-4的整数。
8.权利要求1-6任一项的抑制剂，其中Ar被以下至少一个基团取代： 卤素、氰基、烷基、羟基、烷氧基、链烯基、炔基、芳基、硝基、硫醇、 亚氨基、酰氨基、羧基、硫醚、烷基磺酰基、芳基磺酰基、酮、醛或酯 基团。
9.权利要求1-6任一项的抑制剂，其中Ar被以下至少一个基团取代： 卤素、氰基、烷基、链烯基、炔基、硝基、酰氨基、羧基、烷基磺酰基、 酮、醛或酯基团。
10.权利要求1-6任一项的抑制剂，其中Ar在对位被取代。
11.权利要求1-6任一项的抑制剂，其中每次出现的Ar是苯基。
12.权利要求1-6任一项的抑制剂，其中每次出现的Ar是被一个 或多个吸电子取代基取代的苯基。
13.权利要求12的抑制剂，其中所述吸电子取代基是卤素、氰基、 硝基、全氟烷基或酰基基团。
14.权利要求4的抑制剂，其具有以下结构：
15.权利要求4的抑制剂，其具有以下结构：
16.权利要求4的抑制剂，其具有以下结构：
17.权利要求4的抑制剂，其具有以下结构：
18.权利要求4的抑制剂，其具有以下结构：
19.权利要求4的抑制剂，其具有以下结构：
20.权利要求4的抑制剂，其具有以下结构：
21.权利要求5的抑制剂，其具有以下结构：
22.权利要求5的抑制剂，其具有以下结构：
23.权利要求5的抑制剂，其具有以下结构：
24.权利要求6的抑制剂，其具有以下结构：
25.一种包装药物，其包含：足以治疗或预防CNS障碍的量并制 剂在药学可接受的载体中的权利要求1-24任一项的抑制剂；和描述治疗 患者的制剂用途的说明书。
26.权利要求25的包装药物，其中所述CNS障碍是抑郁、焦虑、 睡眠障碍、肥胖症、注意力缺陷障碍(ADD)、注意力缺陷伴多动障碍 (ADHD)、性功能障碍或药物滥用。
27.权利要求26的包装药物，其中所述CNS障碍是抑郁、睡眠障 碍、肥胖症、注意力缺陷障碍(ADD)、注意力缺陷伴多动障碍(ADHD)、 性功能障碍或药物滥用。
28.权利要求25的包装药物，其中所述CNS障碍是选自以下的运 动障碍：共济失调、皮质基底节变性(CBGD)、动作困难、肌张力障碍、 震颤、遗传性痉挛性截瘫、亨延顿氏舞蹈病、多系统萎缩、肌阵挛、帕 金森氏病、进行性核上性麻痹、多动腿综合征、Rett综合征、痉挛状态、 小舞蹈病、其它舞蹈病、手足徐动症、颤搐、刻板症、迟发性运动障碍 /肌张力障碍、抽搐、图雷特氏综合征、橄榄体脑桥小脑萎缩(OPCA)、 弥漫性Lewy体疾病、偏侧舞蹈病、半面痉挛、多动腿综合征、肝豆状 核变性、僵人综合征、无动性缄默症、精神运动性迟缓、下肢疼痛足趾 运动综合征、步态障碍、药物诱发的运动障碍或其它运动障碍。
29.权利要求25的包装药物，其中所述CNS障碍是帕金森氏病。
30.权利要求25的包装药物，其中所述抑制剂提供足以治疗或预 防患者的运动障碍的量，该量为用帕金森氏病的Hoehn-Yahr分级、帕 金森氏病统一等级评分表(UPDRS)和Schwab-England日常生活活动量 表的一项或多项评估时具有统计学意义的量。
31.权利要求25的包装药物，其中所述提供足以治疗或预防患者 的运动障碍的量，该量为用选自计算机断层摄影(CT)、磁共振成像(MRI) 和正电子发射断层摄影(PET)的经验测试结合标准测试评估时具有统计 学意义的量。
32.权利要求25的包装药物，进一步包含另一种选自以下的药物： 多巴胺前体、多巴胺能药物、多巴胺能和抗胆碱能药物、抗胆碱能药物、 多巴胺激动剂、MAO-B(单胺氧化酶B)抑制剂、COMT(儿茶酚O-甲基转 移酶)抑制剂、骨骼肌松弛药、镇静剂、抗惊厥剂、多巴胺重摄取抑制剂、 多巴胺阻滞剂、β-阻滞剂、碳酸酐酶抑制剂、麻醉剂、GABA能药物或 α拮抗剂。
33.权利要求25的包装药物，进一步包含一种或多种用于治疗帕 金森氏病的选自以下的治疗剂：多巴胺前体，左旋多巴；多巴胺能药物， 左旋多巴-卡比多巴或左旋多巴-苄丝肼；多巴胺能和抗胆碱能药物，金 刚烷胺；抗胆碱能药物，苯海索、苯扎托品、二乙异丙嗪或丙环定；多 巴胺激动剂，阿扑吗啡、溴隐亭、卡麦角林、麦角乙脲、培高利特、普 拉克索或罗匹尼罗；MAO-B抑制剂，司来吉兰或丙炔苯丙胺；COMT(儿 茶酚O-甲基转移酶)抑制剂，托卡朋或恩他卡朋；或其它治疗剂，巴氯 芬、多潘立酮、氟氢可的松、米多君、奥昔布宁、普萘洛尔、氯硝西泮 或育亨宾。
34.权利要求25的包装药物，进一步包含一种或多种用于治疗肌 张力障碍的选自以下的治疗剂：抗胆碱能药物，苯海索、苯扎托品、二 乙异丙嗪或丙环定；多巴胺能药物，左旋多巴-卡比多巴或左旋多巴-苄 丝肼；骨骼肌松弛药，巴氯芬；镇静剂、氯硝西泮；抗惊厥剂、卡马西 平；多巴胺重摄取抑制剂，丁苯那嗪；或者多巴胺阻滞剂，氟哌啶醇。
35.权利要求25的包装药物，进一步包含一种或多种用于治疗震 颤的选自以下的治疗剂：β-阻滞剂，普萘洛尔；抗惊厥剂，扑米酮；或 者碳酸酐酶抑制剂，乙酰唑胺或醋甲唑胺。
36.权利要求25的包装药物，进一步包含一种或多种用于治疗肌 阵挛的选自以下的治疗剂：镇静剂，氯硝西泮；或者抗惊厥剂，丙戊酸。
37.权利要求25的包装药物，进一步包含一种或多种用于治疗舞 蹈病的选自以下的治疗剂：多巴胺阻滞剂，氟哌啶醇；或者多巴胺重摄 取抑制剂，丁苯那嗪。
38.权利要求25的包装药物，进一步包含一种或多种用于治疗多 动腿综合征的选自以下的治疗剂：多巴胺能药，左旋多巴-卡比多巴或左 旋多巴-苄丝肼；镇静剂，氯硝西泮；多巴胺激动剂，溴隐亭、培高利特、 普拉克索或罗匹尼罗；麻醉剂，可待因；或者GABA能药，加巴喷丁。
39.权利要求25的包装药物，进一步包含一种或多种用于治疗抽 搐的选自以下的治疗剂：镇静剂，氯硝西泮；α拮抗剂，可乐定；多巴 胺重摄取抑制剂，丁苯那嗪；或者多巴胺阻滞剂，氟哌啶醇或奋乃静。
40.权利要求25的包装药物，其中所述抑制剂提供逐步升高的剂 量，其在历经至少4小时期间产生所述抑制剂逐步升高的血清浓度。
41.权利要求1-24任一项的抑制剂在制备用于预防或治疗易感或 罹患CNS障碍的患者的药物组合物中的用途。
42.权利要求41的用途，其中所述CNS障碍是抑郁、焦虑、睡眠 障碍、肥胖症、注意力缺陷障碍(ADD)、注意力缺陷伴多动障碍(ADHD)、 性功能障碍或药物滥用。
43.权利要求42的用途，其中所述CNS障碍是抑郁、睡眠障碍、 肥胖症、注意力缺陷障碍(ADD)、注意力缺陷伴多动障碍(ADHD)、性功 能障碍或药物滥用。
44.权利要求41的用途，其中所述CNS障碍是选自以下的运动障 碍：共济失调、皮质基底节变性(CBGD)、动作困难、肌张力障碍、震 颤、遗传性痉挛性截瘫、亨延顿氏舞蹈病、多系统萎缩、肌阵挛、帕金 森氏病、进行性核上性麻痹、多动腿综合征、Rett综合征、痉挛状态、 小舞蹈病、其它舞蹈病、手足徐动症、颤搐、刻板症、迟发性运动障碍 /肌张力障碍、抽搐、图雷特氏综合征、橄榄体脑桥小脑萎缩(OPCA)、 弥漫性Lewy体疾病、偏侧舞蹈病、半面痉挛、多动腿综合征、肝豆状 核变性、僵人综合征、无动性缄默症、精神运动性迟缓、下肢疼痛足趾 运动综合征、步态障碍、药物诱发的运动障碍或其它运动障碍。
45.权利要求41-44中任一项的用途，用于治疗人类患者。
46.权利要求25的包装药物或权利要求41的用途，用于口服给药。
47.权利要求25的包装药物或权利要求41的用途，其中所述抑制 剂被配制成透皮贴剂。
48.治疗CNS障碍的方法，其包括给予患者权利要求1-24任一项 的抑制剂的组合物，其量为以标准测试评估在所述患者中足以治疗 CNS障碍。
49.权利要求48的方法，其中所述CNS障碍是抑郁、焦虑、睡眠 障碍、肥胖症、注意力缺陷障碍(ADD)、注意力缺陷伴多动障碍 (ADHD)、性功能障碍或药物滥用。
50.权利要求49的方法，其中所述CNS障碍是抑郁、睡眠障碍、 肥胖症、注意力缺陷障碍(ADD)、注意力缺陷伴多动障碍(ADHD)、性 功能障碍或药物滥用。
51.权利要求48的方法，其中CNS障碍是选自以下的运动障碍： 共济失调、皮质基底节变性(CBGD)、动作困难、肌张力障碍、震颤、 遗传性痉挛性截瘫、亨延顿氏舞蹈病、多系统萎缩、肌阵挛、帕金森氏 病、进行性核上性麻痹、多动腿综合征、Rett综合征、痉挛状态、小舞 蹈病、其它舞蹈病、手足徐动症、颤搐、刻板症、迟发性运动障碍/肌张 力障碍、抽搐、图雷特氏综合征、橄榄体脑桥小脑萎缩(OPCA)、弥漫性 Lewy体疾病、偏侧舞蹈病、半面痉挛、多动腿综合征、肝豆状核变性、 僵人综合征、无动性缄默症、精神运动性迟缓、下肢疼痛足趾运动综合 征、步态障碍、药物诱发的运动障碍或其它运动障碍。
52.权利要求48的方法，其中所述CNS障碍是帕金森氏病。
53.权利要求48的方法，其中所述抑制剂提供足以治疗患者的运 动障碍的量，该量为用帕金森氏病的Hoehn-Yahr分级、帕金森氏病统 一等级评分表(UPDRS)和Schwab-England日常生活活动量表的一项或 多项评估时具有统计学意义的量。
54.权利要求48的方法，其中所述抑制剂提供足以治疗或预防患 者的运动障碍的量，该量为用选自计算机断层摄影(CT)、磁共振成像 (MRI)和正电子发射断层摄影(PET)的经验测试结合标准测试评估时具 有统计学意义的量。
55.权利要求48-54任一项的方法，其中所述抑制剂是与以下的 一种或多种共同给药：多巴胺前体、多巴胺能药物；多巴胺能和抗胆碱 能药物、抗胆碱能药物、多巴胺激动剂、MAO-B(单胺氧化酶B)抑制 剂、COMT(儿茶酚O-甲基转移酶)抑制剂、骨骼肌松弛药、镇静剂、 抗惊厥剂、多巴胺重摄取抑制剂、多巴胺阻滞剂、β-阻滞剂、碳酸酐酶 抑制剂、麻醉剂、GABA能药物或α拮抗剂。
56.权利要求48-54任一项的方法，其中所述抑制剂是与一种或 多种用于治疗帕金森氏病的选自以下的治疗剂共同给药：多巴胺前体， 左旋多巴；多巴胺能药物，左旋多巴-卡比多巴或左旋多巴-苄丝肼；多 巴胺能和抗胆碱能药物，金刚烷胺；抗胆碱能药物，苯海索、苯扎托 品、二乙异丙嗪或丙环定；多巴胺激动剂，阿扑吗啡、溴隐亭、卡麦角 林、麦角乙脲、培高利特、普拉克索或罗匹尼罗；MAO-B(单胺氧化酶 B)抑制剂，司来吉兰或丙炔苯丙胺；COMT(儿茶酚O-甲基转移酶)抑制 剂，托卡朋或恩他卡朋；或其它治疗剂，巴氯芬、多潘立酮、氟氢可 的松、米多君、奥昔布宁、普萘洛尔、氯硝西泮或育亨宾。
57.权利要求48-54任一项的方法，其中所述抑制剂是与一种或 多种用于治疗肌张力障碍的选自以下的治疗剂共同给药：抗胆碱能药 物，苯海索、苯扎托品、二乙异丙嗪或丙环定；多巴胺能药物，左旋多 巴-卡比多巴或左旋多巴-苄丝肼；骨骼肌松弛药，巴氯芬；镇静剂，氯 硝西泮；抗惊厥剂，卡马西平；多巴胺重摄取抑制剂，丁苯那嗪；或者 多巴胺阻滞剂，氟哌啶醇。
58.权利要求48-54任一项的方法，其中所述抑制剂是与一种或 多种用于治疗震颤的选自以下的治疗剂共同给药：β-阻滞剂，普萘洛尔； 抗惊厥剂，扑米酮；或者碳酸酐酶抑制剂，乙酰唑胺或醋甲唑胺。
59.权利要求48-54任一项的方法，其中所述抑制剂是与一种或 多种用于治疗肌阵挛的选自以下的治疗剂共同给药：镇静剂，氯硝西泮； 或者抗惊厥剂，丙戊酸。
60.权利要求48-54任一项的方法，其中所述抑制剂是与一种或 多种用于治疗舞蹈病的选自以下的治疗剂共同给药：多巴胺阻滞剂，氟 哌啶醇；或者多巴胺重摄取抑制剂，丁苯那嗪。
61.权利要求48-54任一项的方法，其中所述抑制剂是与一种或 多种用于治疗多动腿综合征的选自以下的治疗剂共同给药：多巴胺能， 左旋多巴-卡比多巴或左旋多巴-苄丝肼；镇静剂，氯硝西泮；多巴胺激 动剂，溴隐亭、培高利特、普拉克索或罗匹尼罗；麻醉剂，可待因；或 者GABA能药，加巴喷丁。
62.权利要求48-54任一项的方法，其中所述抑制剂是与一种或 多种用于治疗抽搐的选自以下的治疗剂共同给药：镇静剂，氯硝西泮； α拮抗剂，可乐定；多巴胺重摄取抑制剂，丁苯那嗪；或者多巴胺阻滞 剂，氟哌啶醇或奋乃静。
63.一种经营药品业务的方法，其包括：
a.制备权利要求25-40任一项所述的包装药物；和
b.向卫生保健提供者推销用包装或制剂治疗罹患CNS障碍的患 者的益处。
64.一种经营药品业务的方法，其包括：
a.提供销售权利要求25-40任一项所述的包装药物的分布网 络；和
b.向患者或医生提供使用包装或制剂治疗罹患CNS障碍的患者 的说明书材料。
65.一种经营药品业务的方法，其包括：
a.确定权利要求1-24任一项的抑制剂的适当剂量，以增强在一 类罹患CNS障碍的患者中的功能表现；
b.制订经步骤(a)鉴定的抑制剂的一种或多种制剂在动物中的有 效性和毒性的疗效分布谱；和
c.提供销售经步骤(b)鉴定具有可接受的疗效分布谱的一种或多 种制剂的分布网络。
66.权利要求65的方法，其包括向卫生保健提供者提供销售制剂 的推销团队的另外的步骤。
67.一种进行医药辅助偿还计划的方法，其包括：
a.对于处方治疗CNS障碍的权利要求1-24任一项的抑制剂，提供 允许至少部分偿还卫生保健提供者或患者或者支付给药品经销商的偿 还计划；
b.处理一项或多项要求保护的用于治疗CNS障碍的抑制剂的处 方；和
c.向卫生保健提供者或患者偿还或者向药品经销商支付至少部 分所述处方的费用。
相关申请
本申请要求于2006年8月21日提交的美国临时专利申请No. 60/839,403的优先权，该申请以其全部内容通过引用并入本文。
发明背景
神经元信号在细胞之间在称为突触的接触的特定位点处传递。这些 信号通常通过可溶性神经递质分子从突触前细胞扩散到突触后细胞而 穿越突触传递。神经递质的释放是通过改变突触前细胞中的电势而触发 的。这些神经递质迅速扩散穿越突触间隙，并通过结合到神经递质-门控 离子通道而激发突触后细胞中的电改变。过量的神经递质迅速从突触间 隙移除，其方式是通过特定的酶或通过重摄取进入突触前细胞或者环绕 神经胶质细胞。重摄取是通过多种神经递质转运体介导的。迅速移除确 保了在突触处发信号的间隙性和短暂性的精确度。例如，迅速重摄取可 以防止过量的神经递质影响邻近细胞，并且可以在神经递质释放的下一 脉冲之前清除该突触间隙，以便重复定时，迅速的发信号事件精确在传 达到突触后细胞。
在制造的神经递质不足以及从突触前细胞释放时，或者当通过突触 前细胞重摄取神经递质太迅速时，可发生脑中神经递质的不平衡。如果 神经递质例如5-羟色胺、去甲肾上腺素、或多巴胺未制备并释放有效量， 或者从突触间隙清除太快，则可影响细胞-至-细胞间通信。此类不平衡 的临床的临床表现包括抑郁和相关的焦虑障碍以及运动障碍。5-羟色胺 -、去甲肾上腺素-和多巴胺-重摄取抑制剂(SNDRIs)代表了一类有效的、 广谱的医药，它们抑制这些神经递质重摄取回到突触前细胞中。抑制神 经递质重摄取可增加突触中存在的神经递质的量，由此促进神经元信号 传递的正常化。此正常化可因此有效治疗中枢神经系统(″CNS″)障碍例如 抑郁和相关的焦虑障碍以及运动障碍。
大多数抑郁的特征为强烈的悲伤和绝望的情感、精神迟缓和注意力 缺失、悲观烦恼、激动和自我反对。来发生身体变化，尤其是严重的或 ″忧郁性″抑郁。这些包括失眠或睡眠过度，食欲缺乏和体重减轻(或有时 为暴食)，精力和性欲降低，以及活动、体温和许多内分泌功能的正常昼 夜节律打破。
治疗方案通常包括使用三环抗抑郁药、单胺氧化酶抑制剂、一些精 神药物、锂、和电惊厥疗法(ECT)(参见R.J.Baldessarini in Goodman& Gilman′s The Pharmacological Basis of Therapeutics，9th Edition，Chapter 19，McGraw-Hill，1996，供参考)。最近，开发的新型抗抑郁药包括选择 性5-羟色胺重摄取抑制剂(SSRIs)、特异性单胺重摄取抑制剂和5-HTIA 受体激动剂、拮抗剂和部分激动剂。
焦虑是一种情感病情，其特征为例如惧怕的感觉以及伴随例如以下 的身体症状的畏惧：心动过速、呼吸增加、发汗和震颤。它是一种正常 的情感，但是当它严重并且病废时，这会变成病态。
焦虑障碍通常使用苯并二氮杂镇静剂-抗焦虑剂治疗。有效的苯并 二氮杂类在惊恐性障碍以及泛发性焦虑障碍中是有效的，然而，与药 物依赖性有关的风险可限制它们长期使用。5-HTIA受体部分激动剂还具 有抗焦虑和其它精神活性的使用，以及更低可能性的镇静和依赖性(参见 R.J.Baldessarini in Goodman&Gilman′s The Pharmacological Basis of Therapeutics，9th Edition，Chapter 18，McGraw-Hill，1996，供参考)。其 它抑制剂，例如5-羟色胺-、去甲肾上腺素-和多巴胺-重摄取抑制剂，也 发现可用于治疗焦虑障碍。
运动障碍是累及一种或多种肌肉或肌群的神经紊乱。运动障碍影响 相当大部分的人群，导致残疾和痛苦。运动障碍包括帕金森氏病、杭廷 顿氏舞蹈病、进行性核上性麻痹、肝豆状核变性(Wilson′s disease)、图雷 特氏综合征、癫痫、迟发性运动障碍以及各种慢性震颤、抽搐和肌张力 障碍。临床上观察到的不同运动障碍都可溯源至相同或类似脑区。例如， 将基底节(在大脑半球深部的一大簇细胞)异常假定为各种运动障碍的病 因。
帕金森氏病是在老年人群中出现越来越多的运动障碍。在美国，帕 金森氏病是常见的老年致残疾病，影响约1％的60岁以上的人群。随年 龄增加的帕金森氏病发病率与个体出现该病的年龄累计风险发病率约 为1∶40。症状包括明显的四肢震颤、运动徐缓、强直和姿势改变。可 理解的帕金森氏病的病理生理学原因是基底节(包括黑质的区室部分 (pars compartum)，位于脑干的基底核)中产生多巴胺的细胞的进行性破 坏。多巴胺能神经元的丧失导致乙酰胆碱相对过量。Jellinger，K.A.，Post Mortem Studies in Parkinson’s disease--Is It Possible to Detect Brain Areas For Specific Symptoms？，J Neural Transm 56(Supp)；1-29：1999。帕金森氏 病是进行性障碍，可从轻微的四肢强直和偶发震颤开始，经过10年或 更长时间进展为频繁震颤和记忆缺陷，直至不可控制的震颤和痴呆。
迟发性运动障碍(TD))是神经系统的慢性障碍，特征在于口、舌和面 部肌肉不自主、不规则的节律性运动。还可累及上肢。这些运动可不同 程度地伴随其它不自主运动和运动障碍。这些包括躯干摇摆、转动或扭 动(迟发性肌张力障碍)、强制闭眼(迟发性睑痉挛)、不可压制的频繁运动 的冲动(迟发性静坐不能)、颈部痉挛样运动(迟发性痉挛性斜颈)和中断的 (disrupted)呼吸运动(呼吸运动障碍)。大多数TD病例由长期使用抗精神 病药(神经安定药)引起。相对少数由使用其它药物如像神经安定药一样 阻断多巴胺受体的甲氧氯普胺引起。TD通常在停止神经安定药物疗法 后出现或加重。重新开始神经安定疗法将暂时抑制不自主运动，但最后 可使其加重。
迟发性运动障碍影响大约15-20％用神经安定药治疗的患者(Khot et al.，neuroleptics and Classic Tardive Dyskinesia，in Lang AE，Weiner WJ (eds.)：Drug Induced Movement Disorders，Futura Publishing Co.，1992，pp 121-166)。因此，该病仅在美国就影响成千上万人。因此，该病仅在美 国就影响成千上万人。TD在女性、老年人以及因精神分裂症以外的疾 病例如双相情感障碍(躁狂抑郁病)用神经安定药治疗的人中累积发病率 较高(参见，例如，Hayashi et al.，Clin.Neuropharmacol，19：390，1996； Jeste et al.，Arch.Gen.Psychiatry，52：756，1995)。与神经安定药的急性运 动副作用不同，TD通常对抗震颤麻痹药无反应(Decker et al.，New Eng.J Med.，Oct.7，p.861，1971)。
局部肌张力障碍是一类相关性运动障碍，涉及一群肌肉的间歇性持 续收缩。在美国的一个县，局部肌张力障碍的发病率估计为每百万分之 287(Monroe County Study)；这提示仅在美国就影响至少70,000人。局部 肌张力障碍的痉挛每次可持续数秒，导致受累区域功能的大部分破坏。 一些局部肌张力障碍表现为重复运动；书写痉挛是最好的已知实例。局 部肌张力障碍可累及面部(如睑痉挛、下颌骨肌张力障碍)、颈部(斜颈)、 四肢(如书写痉挛)或者躯干。肌张力障碍可自主发生，或者可由暴露于 神经安定药及其它多巴胺受体阻滞剂而突然引起(迟发性肌张力障碍)。 全身性药物疗法通常无效，但一些药物可使一些患者部分缓解。这些最 常见的处方药物是抗胆碱能药、巴氯芬、苯并二氮杂类及多巴胺激动 剂和拮抗剂。最连贯的有效治疗是将肉毒杆菌毒素注入受累肌肉内。
各种局部肌张力障碍都倾向于对相同药物的反应(Chen，Clin. Orthop，June，102-6，1998；Esper et al；Tenn.Med，January，90：18-20，1997； De Mattos et al.，Arq.Neuropsychiatry，March 54：30-6，1996)。这提示对一 种局部肌张力障碍有效的新疗法将可能对另一种有效。而且，自发(特发) 性肌张力障碍和神经安定药诱发的肌张力障碍的共同症状、体征和对药 物的反应提示对药物诱发的局部肌张力障碍有效的疗法将对自发出现 的相同肌张力障碍有效。
抽搐是突然重复的运动、姿势或发声(utterance)，通常模拟正常类 型的行为。运动性抽搐包括如眨眼、点头或耸肩的运动，但可变为更复 杂的显得是故意的行为，如激动的面部表情或手臂和头的有意义的姿 势。在极端的病例中，运动可能是猥亵(秽亵行为)或自我伤害的。音或 声的抽搐可从清噪声音至复杂的发音和说话，有时有秽语症(污秽言语) (Leckman et al.，同上)。抽搐虽然在时间上不规律，但与受累肌群一致。 特征是，可通过自主努力短时间抑制它们。
估计抽搐影响1％至13％男孩和1％至11％女孩，男∶女比率小于2∶ 1。大约5％的7-11岁的儿童受抽搐行为影响(Leckman et al.， Neuropsychiatry of the Bas.Gang.，December，20(4)：839-861，1997)。伴发 音的多发性抽搐即图雷特氏综合征的估计发病率在不同报道中不同，范 围从5/10,000-5/1,000。图雷特氏综合征在男孩比在女孩中常见3-4倍， 在儿童和青少年比在成人中常见10倍(Leckman et al.，supra；Esper et al， Tenn.Med.90：18-20，1997)。
日勒德拉(Gilles de la)图雷特氏综合征(TS)是最严重的抽搐障碍。TS 患者具有多发性抽搐，包括至少一种声(音)的抽搐。TS在幼童时期变得 明显，表现简单的运动性抽搐，如眨眼或点头。最初，抽搐可出现和消 失，但随着时间过去抽搐变得持续和严重，开始对儿童和儿童的家庭产 生不良作用。在运动性抽搐发病后平均1-2年出现声音抽动。至10岁， 多数儿童已经觉察频繁出现在抽动之前的前兆性冲动。虽然这样的预兆 可使患者自主抑制抽动，但不幸地是预兆增加患该障碍伴随的不适。至 青春期后期/成人期早期，某些患者的抽搐障碍可显著改善。然而，继续 抽搐的成人具有特别严重和使人虚弱的症状。(Leckman et al.，同上)。
虽然现在药典提供多种药物以抑郁和相关的焦虑障碍以及运动障 碍，但这些药物都不能预防或治愈这些病情。而且，最有效的治疗通常 伴随不可耐受的副作用。显然对CNS障碍仍需要比现有疗法效力更大 和副作用更少的新疗法。
发明概述
本发明涉及发现某些转运体抑制剂(本文统称为本“主题抑制剂”)、 那些抑制剂在治疗方法中的用途以及包装药物和药物制剂的制备。
特别地，本发明涉及具有多巴胺转运(″DAT″)抑制活性、去甲肾上 腺素转运(″NET″)抑制活性和/或5-羟色胺转运(″SERT″)抑制活性的 化合物。在一些实施方案中，所述抑制剂是选择性DAT抑制剂。在其 它实施方案中，所述抑制剂是选择性DAT和NET抑制剂。在再其它实 施方案中，所述抑制剂是选择性DAT、NET和SERT抑制剂。
本主题抑制剂由式I表示，或者是其药学可接受的盐、溶剂合物、 代谢物或前药：
Ar，每次出现时独立地代表取代或未取代的芳基或杂芳基环；
X代表-H或-OR；
Y代表-O-、-S-、-C(R)2-、或-N(R)-；
R，每次出现时独立地代表-H或低级烷基；
R1代表一个或多个与环连接的取代基，例如卤素、氨基、酰氨 基、脒基、氰基、硝基、叠氮基、醚、硫醚、亚砜基、-J-R2、-J-OH， -J-低级烷基、-J-低级链烯基、-J-SH、-J-NH2，或者取代或未取代的低 级烷基、低级链烯基、环烷基、杂环基、环烷基烷基、杂环基烷基、 芳基、杂芳基、芳烷基或杂芳烷基，或者上述的保护形式；
R2，每次出现时独立地代表H或者取代或未取代的低级烷基、环烷 基、杂环基、芳烷基、杂芳烷基、芳基或杂芳基；
J，每次出现时独立地代表含0-8(优选0-4)个选自-C(R)2-、 -N(R)-、-O-和-S-的单元的链；
n是0-2的整数；
p是0或1；和
q是0-2的整数，优选1。
在一些实施方案中，本发明提供一种包装药物，其包含：足以治疗 或预防抑郁、焦虑、睡眠障碍、肥胖症、注意力缺陷障碍(ADD)、注意 力缺陷伴多动障碍(ADHD)、性功能障碍或药物滥用的量并配制在药学 可接受的载体中的本发明抑制剂；和描述治疗患者的制剂用途的说明书 (书面的和/或图示的)。在某些实施方案中，本发明抑制剂是足以治疗或 预防抑郁、睡眠障碍、肥胖症、注意力缺陷障碍(ADD)、注意力缺陷伴 多动障碍(ADHD)、性功能障碍或药物滥用的量。
在其它实施方案中，本发明提供一种包装药物，其包含：足以治疗 或预防运动障碍的量并配制在药学可接受的载体中的本发明抑制剂；和 描述治疗患者的制剂用途的说明书(书面的和/或图示的)。在具体的实施 方案中，所述运动障碍可选自共济失调、皮质基底节变性(corticobasal ganglionic degeneration，CBGD)、动作困难、肌张力障碍、震颤、遗传 性痉挛性截瘫、亨延顿氏舞蹈病、多系统萎缩、肌阵挛、帕金森氏病、 进行性核上性麻痹、多动腿综合征、Rett综合征、痉挛状态、小舞蹈病、 其它舞蹈病、手足徐动症、颤搐、刻板症、迟发性运动障碍/肌张力障碍、 抽搐、图雷特氏综合征、橄榄体脑桥小脑萎缩(OPCA)、弥漫性Lewy体 疾病、偏侧舞蹈病、半面痉挛、多动腿综合征、肝豆状核变性、僵人综 合征、无动性缄默症、精神运动性迟缓、下肢疼痛足趾运动综合征、步 态障碍、药物诱发的运动障碍或其它运动障碍。该抑制剂可以提供足 以治疗或预防患者的运动障碍的量，该量为用帕金森氏病的Hoehn-Yahr 分级、帕金森氏病统一等级评分表(UPDRS)和Schwab-England日常生活 活动量表的一项或多项评估时具有统计学意义的量。该抑制剂可以提供 足以治疗或预防患者的运动障碍的量，该量为用选自计算机断层摄影 (CT)、磁共振成像(MRI)和正电子发射断层摄影(PET)的经验测试结合标 准测试评估时具有统计学意义的量。
在一些实施方案中，所述包装药物还可包含另一种选自下列的药 物：多巴胺前体、多巴胺能药物、多巴胺能和抗胆碱能药物、抗胆碱能 药物、多巴胺激动剂、MAO-B(单胺氧化酶B)抑制剂、COMT(儿茶酚 O-甲基转移酶)抑制剂、骨骼肌松弛药、镇静剂、抗惊厥剂、多巴胺重摄 取抑制剂、多巴胺阻滞剂、β-阻滞剂、碳酸酐酶抑制剂、麻醉剂、GABA 能药物或α拮抗剂。
在另一实施方案中，所述包装药物提供逐步升高的剂量其在历经至 少4小时期间产生所述抑制剂逐步升高的血清浓度。
在一些实施方案中，本发明提供本发明抑制剂在制备用于预防或治 疗易感或罹患以下疾病的患者的药物组合物中的用途：抑郁、焦虑、睡 眠障碍、肥胖症、注意力缺陷障碍(ADD)、注意力缺陷伴多动障碍 (ADHD)、性功能障碍或药物滥用。在某些实施方案中，本发明提供本 发明抑制剂在制备用于预防或治疗易感或罹患以下疾病的患者的药物 组合物中的用途：抑郁、睡眠障碍、肥胖症、注意力缺陷障碍(ADD)、 注意力缺陷伴多动障碍(ADHD)、性功能障碍或药物滥用。
在其它实施方案中，本发明提供本发明抑制剂在制备用于预防或治 疗易感或罹患运动障碍的患者的药物组合物中的用途。所述运动障碍可 选自共济失调、皮质基底节变性(CBGD)、动作困难、肌张力障碍、震 颤、遗传性痉挛性截瘫、亨延顿氏舞蹈病、多系统萎缩、肌阵挛、帕金 森氏病、进行性核上性麻痹、多动腿综合征、Rett综合征、痉挛状态、 小舞蹈病、其它舞蹈病、手足徐动症、颤搐、刻板症、迟发性运动障碍 /肌张力障碍、抽搐、图雷特氏综合征、橄榄体脑桥小脑萎缩(OPCA)、 弥漫性Lewy体疾病、偏侧舞蹈病、半面痉挛、多动腿综合征、肝豆状 核变性、僵人综合征、无动性缄默症、精神运动性迟缓、下肢疼痛足趾 运动综合征、步态障碍、药物诱发的运动障碍或其它运动障碍。该用 途可用于治疗人类患者。
在本发明的一些实施方案中，所述包装药物或用途可用于口服给 药。在所述包装药物或用途的一些实施方案中，所述抑制剂可配制成透 皮贴剂。
在再另一实施方案中，本发明提供一种治疗以下疾病的方法：抑郁、 焦虑、睡眠障碍、肥胖症、注意力缺陷障碍(ADD)、注意力缺陷伴多动 障碍(ADHD)、性功能障碍或药物滥用，其包括给所述患者给予本发明 抑制剂的组合物，其量为以标准测试评估在所述动物中足以治疗抑郁、 焦虑、睡眠障碍、肥胖症、注意力缺陷障碍(ADD)、注意力缺陷伴多动 障碍(ADHD)、性功能障碍或药物滥用。在某些实施方案中，本发明提 供一种治疗以下疾病的方法：抑郁、睡眠障碍、肥胖症、注意力缺 陷障碍(ADD)、注意力缺陷伴多动障碍(ADHD)、性功能障碍或药物滥用， 其包括给所述患者给予本发明抑制剂的组合物，其量为以标准测试评估 在所述动物中足以治疗抑郁、睡眠障碍、肥胖症、注意力缺陷障碍(ADD)、 注意力缺陷伴多动障碍(ADHD)、性功能障碍或药物滥用。
在另一实施方案中，本发明提供一种治疗运动障碍的方法，其包括 给所述患者给予本发明抑制剂的组合物，其量为以标准测试评估在所述 动物中足以治疗运动障碍。在具体的实施方案中，所述运动障碍可选自 共济失调、皮质基底节变性(CBGD)、动作困难、肌张力障碍、震颤、 遗传性痉挛性截瘫、亨延顿氏舞蹈病、多系统萎缩、肌阵挛、帕金森氏 病、进行性核上性麻痹、多动腿综合征、Rett综合征、痉挛状态、小舞 蹈病、其它舞蹈病、手足徐动症、颤搐、刻板症、迟发性运动障碍/肌张 力障碍、抽搐、图雷特氏综合征、橄榄体脑桥小脑萎缩(OPCA)、弥漫性 Lewy体疾病、偏侧舞蹈病、半面痉挛、多动腿综合征、肝豆状核变性、 僵人综合征、无动性缄默症、精神运动性迟缓、下肢疼痛足趾运动综合 征、步态障碍、药物诱发的运动障碍或其它运动障碍。所述抑制剂可以 以足以在患者中治疗运动障碍的量提供，该量为用帕金森氏病的 Hoehn-Yahr分级、帕金森氏病统一等级评分表(UPDRS)和 Schwab-England日常生活活动量表的一项或多项评估时具有统计学意 义的量。该抑制剂可以提供足以治疗或预防患者的运动障碍的量，该量 为用选自计算机断层摄影(CT)、磁共振成像(MRI)和正电子发射断层摄 影(PET)的经验测试结合标准测试评估时具有统计学意义的量。
在一些实施方案中，上述方法可包括与以下抑制剂的一种或多种共 同给药：多巴胺前体、多巴胺能药物；多巴胺能和抗胆碱能药物、抗胆 碱能药物、多巴胺激动剂、MAO-B(单胺氧化酶B)抑制剂、COMT(儿 茶酚O-甲基转移酶)抑制剂、骨骼肌松弛药、镇静剂、抗惊厥剂、多巴 胺重摄取抑制剂、多巴胺阻滞剂、β-阻滞剂、碳酸酐酶抑制剂、麻醉剂、 GABA能药物或α拮抗剂。
在另一实施方案中，本发明提供一种经营药品业务的方法，其包括： (a)制备本发明的包装药物；和(b)向卫生保健提供者推销用包装或制剂 治疗罹患以下疾病的患者的益处：抑郁、焦虑、睡眠障碍、肥胖症、注 意力缺陷障碍(ADD)、注意力缺陷伴多动障碍(ADHD)、性功能障碍、药 物滥用或运动障碍。在某些实施方案中，所述包装或制剂治疗罹患以下 疾病的患者：抑郁、睡眠障碍、肥胖症、注意力缺陷障碍(ADD)、注意 力缺陷伴多动障碍(ADHD)、性功能障碍、药物滥用或运动障碍。在某 些实施方案中，所述包装或制剂治疗罹患以下疾病的患者：抑郁或运动 障碍。
在另一实施方案中，本发明提供一种经营药品业务的方法，其包括： (a)提供销售本发明的包装药物的分布网络；和(b)向患者或医生提供使 用包装或制剂治疗罹患以下疾病的患者的说明书材料：抑郁、焦虑、睡 眠障碍、肥胖症、注意力缺陷障碍(ADD)、注意力缺陷伴多动障碍 (ADHD)、性功能障碍、药物滥用或运动障碍。在某些实施方案中，所 述包装或制剂治疗罹患以下疾病的患者：抑郁、睡眠障碍、肥胖症、注 意力缺陷障碍(ADD)、注意力缺陷伴多动障碍(ADHD)、性功能障碍、药 物滥用或运动障碍。在某些实施方案中，所述包装或制剂治疗罹患以下 疾病的患者：抑郁或运动障碍。
在另一实施方案中，本发明提供一种经营药品业务的方法，其包括： (a)确定本发明抑制剂的适当剂量，以增强在一类罹患以下疾病的患者 中的功能表现：抑郁、焦虑、睡眠障碍、肥胖症、注意力缺陷障碍(ADD)、 注意力缺陷伴多动障碍(ADHD)、性功能障碍、药物滥用或运动障碍；(b) 制订经步骤(a)鉴定的抑制剂的一种或多种制剂在动物中的有效性和毒 性的疗效分布谱；和(c)提供销售经步骤(b)鉴定具有可接受的疗效分布谱 的制剂的分布网络。该方法可包括向卫生保健提供者提供销售制剂的推 销团队的另外的步骤。在某些实施方案中，该类患者罹患抑郁、睡眠障 碍、肥胖症、注意力缺陷障碍(ADD)、注意力缺陷伴多动障碍(ADHD)、 性功能障碍、药物滥用或运动障碍。在某些实施方案中，该类患者罹患 抑郁或运动障碍。
在另一实施方案中，本发明提供一种进行医药辅助偿还计划的方 法，其包括：(a)对于处方治疗以下疾病的本发明抑制剂：抑郁、焦虑、 睡眠障碍、肥胖症、注意力缺陷障碍(ADD)、注意力缺陷伴多动障碍 (ADHD)、性功能障碍、药物滥用或运动障碍，提供允许至少部分偿还 卫生保健提供者或患者或者支付给药品经销商的偿还计划；(b)处理一 项或多项要求保护的本发明抑制剂的处方；和(c)向卫生保健提供者或 患者偿还或者向药品经销商支付至少部分所述处方的费用。在某些实施 方案中，本发明抑制剂用于治疗抑郁、睡眠障碍、肥胖症、注意力缺陷 障碍(ADD)、注意力缺陷伴多动障碍(ADHD)、性功能障碍、药物滥用或 运动障碍。在某些实施方案中，本发明抑制剂用于治疗抑郁或运动障碍。
除非另有说明，否则本发明的实施将应用本领域技术范围之内的合 成化学、有机化学、无机化学、有机金属化学、药物化学和行为科学的 常规技术。此类技术描述于以下文献。参见，例如，Advanced Organic Chemistry：Reactions，Mechanisms，And Structure by J.March(John Wiley and Sons，N.Y.，1992)；The Chemist′s Companion：A Handbook OfPractical Data，Techniques，And References by A.J.Gordon and R.A.Ford(Wiley， NY，1972)；Synthetic Methods Of Organometallic And Inorganic Chemistry by W.A.Herrmann and Brauer(Georg Thieme Verlag，N.Y.，1996)； Experimental Organic Chemistry by D.Todd(Prentice-Hall，N.J.，1979)； Experimental Organic Chemistry：Standard And Microscale by L.M. Harwood(Blackwell Science，M.A.，1999)；Experimental Analysis Of Behavior by I.H.Iversen and K.A.Lattal(Elsevier，N.Y.，1991)；A Practical Guide To Behavioral Research：Tools And Techniques by R. Sommer and B.Sommer(Oxford University Press，N.Y.，2002)；Advances In Drug Discovery Techniques by A.L.Harvey(Chichester，N.Y.，1998)； Quantitative Calculations In Pharmaceutical Practice And Research by T.P. Hadjiioannou(VCH，N.Y.，1993)；Drug Fate And Metabolism：Methods And Techniques by E.R.Garrett and J.L.HirtZ(M.Dekker，N.Y.，1977)； Behavioral Science Techniques：An Annotated Bibliography For Health Professionals by M.K.Tichy(Praeger Publishers，N.Y.，1975)。
附图简述
图1-3显示4种示例性多巴胺转运体抑制剂(1)、(6)、(3)和(4)的 体内功效，用大鼠强迫游泳实验测定。
发明详述
I.概况
本发明涉及发现某些神经递质转运体抑制剂(本文统称为本″主题 抑制剂″)，它们可用于预防或减轻与CNS障碍有关的病情，包括抑郁、 焦虑、睡眠障碍、肥胖症、注意力缺陷障碍(ADD)、注意力缺陷伴多动 障碍(ADHD)、性功能障碍、药物滥用和运动障碍。在某些实施方案中， 该主题抑制剂可以，例如，作为疗法的一部分有效治疗抑郁、睡眠障碍、 肥胖症、注意力缺陷障碍(ADD)、注意力缺陷伴多动障碍(ADHD)、某些 性功能障碍、药物滥用(例如治疗可卡因滥用)和运动障碍。
本发明一方面的特征为药物包装，其包含足以治疗或预防患者CNS 障碍的量的一种或多种主题抑制剂、药学可接受的载体、和描述治疗患 者的制剂用途的说明书(书面的和/或图示的)。所述CNS障碍可以是抑 郁、焦虑、睡眠障碍、肥胖症、注意力缺陷障碍(ADD)、注意力缺陷伴 多动障碍(ADHD)、性功能障碍或药物滥用。在某些实施方案中，所述 CNS障碍可以是抑郁、睡眠障碍、肥胖症、注意力缺陷障碍(ADD)、注 意力缺陷伴多动障碍(ADHD)、性功能障碍或药物滥用。所述CNS障碍 可以是运动障碍例如共济失调、皮质基底节变性(CBGD)、动作困难、 肌张力障碍、震颤、遗传性痉挛性截瘫、亨延顿氏舞蹈病、多系统萎缩、 肌阵挛、帕金森氏病、进行性核上性麻痹、多动腿综合征、Rett综合征、 痉挛状态、小舞蹈病、其它舞蹈病、手足徐动症、颤搐、刻板症、迟发 性运动障碍/肌张力障碍、抽搐、图雷特氏综合征、橄榄体脑桥小脑萎缩 (OPCA)、弥漫性Lewy体疾病、偏侧舞蹈病、半面痉挛、多动腿综合征、 肝豆状核变性、僵人综合征、无动性缄默症、精神运动性迟缓、下肢疼 痛足趾运动综合征、步态障碍、药物诱发的运动障碍或其它运动障碍。
在某些优选的实施方案中，本发明的特征为作为单一口服剂型提供 的含有一种或多种本主题抑制剂的药物制剂，其量为足以治疗或预防患 者CNS障碍。
在其它优选的实施方案中，本发明的特征为以透皮贴剂形式提供的 含有一种或多种抑制剂的药物制剂，该制剂被配制用于持续释放所述抑 制剂，以便给予足以治疗或预防患者CNS障碍的量。
在包装、制剂、组合物和方法的许多优选实施方案中，本发明的特 征为以足以治疗或预防患者CNS障碍的量提供的一种或多种抑制剂， 该量为用标准性能测试评估时具有统计学意义的量。例如，以足以治疗 或预防患者运动障碍的量提供本主题抑制剂，该量为用帕金森氏病的 Hoehn-Yahr分级、帕金森氏病统一等级评分表(UPDRS)和 Schwab-England日常生活活动量表的一项或多项评估时具有统计学意 义的量。
在包装、制剂、组合物和方法的某些实施方案中，本发明的特征为 以足以治疗或预防患者CNS障碍的量提供的一种或多种抑制剂，该量 为用选自计算机断层摄影(CT)、磁共振成像(MRI)和正电子发射断层摄 影(PET)的经验测试结合标准测试评估时具有统计学意义的量。
本发明另一方面的特征为主题抑制剂的药物组合物在制备用于预 防或治疗易感或罹患以下疾病的动物的药物中的用途：CNS障碍例如抑 郁、焦虑、睡眠障碍、肥胖症、注意力缺陷障碍(ADD)、注意力缺陷伴 多动障碍(ADHD)、性功能障碍、药物滥用，或者运动障碍例如上文引 述的障碍，该抑制剂由式I代表，或者其药学可接受的盐、溶剂合物、 代谢物或前药。在某些实施方案中，所述CNS障碍是，例如，抑郁、 睡眠障碍、肥胖症、注意力缺陷障碍(ADD)、注意力缺陷伴多动障碍 (ADHD)、性功能障碍、药物滥用或运动障碍。在某些实施方案中，所 述CNS障碍是，例如，抑郁或运动障碍。
本发明另一方面涉及经营药品业务的方法，其包括：(a)制备本发 明的包装、制剂和组合物；和(b)向卫生保健提供者推销用本发明的包 装、制剂和组合物治疗或预防受治疗患者的CNS障碍的益处。
本发明另一方面涉及经营药品业务的方法，其包括：(a)提供销售 本发明的包装、制剂和组合物的分布网络；和(b)向患者或医生提供使 用本发明的包装、制剂和组合物治疗或预防受治疗患者的CNS障碍的 说明书材料。
本发明再另一方面涉及经营药品业务的方法，其包括：(a)确定抑 制剂在一类患者中治疗或预防CNS障碍的适当剂量；(b)b)制订经步骤 (a)鉴定的抑制剂的一种或多种制剂在动物中的有效性和毒性的疗效分 布谱；和(c)提供销售经步骤(b)鉴定具有可接受的疗效分布谱的制剂的分 布网络，其中所述患者罹患上文所述障碍中的一种或多种。
例如，本业务方法可包括向卫生保健提供者提供销售制剂的推销团 队的另外的步骤。
本发明另一方面涉及进行医药辅助偿还计划的方法，其包括：其包 括：(a)对于处方治疗CNS障碍的抑制剂，提供允许至少部分偿还卫生 保健提供者或患者或者支付给药品经销商的偿还计划；(b)处理一项或 多项要求保护的治疗CNS障碍的抑制剂的处方；和(c)向卫生保健提供 者或患者偿还或者向药品经销商支付至少部分所述处方的费用。
本发明另一方面涉及经营药品业务的方法，其包括：(a)确定抑制剂 在一类患者中治疗或预防CNS功能障碍的适当剂量；和(b)许可第三方 进一步开发和销售用于治疗或预防CNS障碍的抑制剂的权利，其中所 述患者罹患上文所述障碍中的一种或多种。
II.定义
为方便起见，这里汇集说明书、实施例和所附权利要求书中使用的 某些术语。
用于本文时，术语“运动障碍”包括运动不能和运动不能一强直综合 征、动作困难和药物诱发的帕金森综合征(如神经安定药诱发的帕金森综 合征、神经安定药恶性综合征、神经安定药诱发的急性肌张力障碍、神 经安定药诱发的急性静坐不能、神经安定药诱发的迟发性运动障碍和药 物诱发的姿势性震颤)。″运动不能-强直综合征″的实例包括帕金森氏病、 药物诱发的帕金森综合征、脑炎后帕金森综合征、进行性核上性麻痹、 多系统萎缩、皮质基底(corticobasal)变性、帕金森综合征-ALS痴呆复征 和基底节钙化。″动作困难″的实例包括震颤(包括静止性震颤、姿势性震 颤和意向性震颤)、舞蹈病(如小舞蹈病、杭廷顿氏舞蹈病、良性遗传性 舞蹈病、神经棘红细胞增多症、症状性舞蹈病、药物诱发的舞蹈病和偏 侧舞蹈病)、肌阵挛(包括全身肌阵挛和局部肌阵挛)、抽搐(包括简单抽搐、 复杂抽搐和症状性抽搐)、和肌张力障碍(包括全身肌张力障碍(如特发性 肌张力障碍、药物诱发的肌张力障碍、症状性肌张力障碍和阵发性肌张 力障碍)和局部肌张力障碍(如睑痉挛、口下颌肌张力障碍 (oromandibular)、痉挛性发音困难、痉挛性斜颈、轴肌张力障碍、张力 障碍性书写痉挛和偏瘫肌张力障碍))。可用本发明治疗的另一种“运动障 碍”是日勒德拉图雷特氏综合征及其症状。
用于本文时，术语″抑郁″包括抑郁障碍，例如单次发作或反复重度 抑郁障碍和心境恶劣障碍、抑郁性神经症和神经性抑郁症；忧郁性抑郁 包括食欲缺乏，体重减轻，失眠和早醒以及精神运动性迟缓；非典型抑 郁(或反应性抑郁症)包括食欲增加、睡眠过度、精神运动性激动或兴奋、 季节性情感障碍或双相情感障碍或躁狂抑郁，例如，I型双相情感障碍、 II型双相情感障碍和躁郁循环性情感障碍。
术语″抑郁″中包括的其它心境障碍包括早发型和迟发型以及有或没 有非典型型特征的心境恶劣障碍；早发型或迟发型的、情绪低落的阿尔 茨海型的痴呆；情绪低落的血管痴呆，酒精、安非他明、可卡因、致幻 剂、吸入剂、阿片类、苯环利定、镇静剂、安眠药、抗焦虑剂和其它物 质诱发的障碍；抑郁型情感分裂性精神障碍；和情绪低落的适应性障碍。
术语″焦虑障碍″包括但不限于强制性障碍、精神活性物质焦虑障碍、 创伤后精神紧张性障碍、泛发性焦虑障碍、焦虑障碍NOS和器官焦虑 障碍。焦虑障碍包括有或没有广场恐怖症的惊恐性障碍，无惊恐性障碍 病史的广场恐怖症，特异性恐怖症例如特异性动物恐怖症、社交恐怖症， 强制性障碍，包括创伤后精神紧张性障碍和急性应激障碍的应激障碍， 和泛发型焦虑障碍。″泛发型焦虑″通常定义为长时间的(例如，至少6个 月)过度焦虑或者在此期间的大多数日子里有担忧的烦恼。焦虑和担忧是 难以控制的并且可能伴随有坐立不安、容易疲劳、难以集中精力、易怒、 肌张力、扰乱的睡眠。″惊恐性障碍″定义为存在再发型恐慌发作，结果 是至少一个月持续担忧有另外的恐慌发作。″恐慌发作″是不连续的期间， 在此期间存在强烈恐惧、可怕或惊吓的突然发作。在恐慌发作期间，个 别人可能经历多种症状，包括心悸、出汗、震颤、呼吸急促、胸痛、恶 心和眩晕。惊恐性障碍可以有或没有广场恐怖症发生。
″恐怖症″包括广场恐怖症、特异性恐怖症和社交恐怖症。″广场恐怖 症″的特征为对在某处或环境中感到焦虑，要从此处逃可能是困难或者 为难的，或者在此处在恐慌发作事件中帮助可能得不到。广场恐怖症可 能没有恐慌发作病史就发生。″特异性恐怖症″的特征为有临床意义的焦 虑，其由对物体或环境的恐惧而引发。特异性恐怖症包括以下亚型：动 物型，开端于动物或昆虫；自然环境型，开端于自然环境中的物体例如 风暴、高度或水；血液注射损伤型，开端于见血或损伤或者开端于见到 或接受注射或其它侵入性医学处置；处境型，开端于特殊处境例如公共 交通、隧道、桥梁、电梯、飞行、驾驶或围蔽处所；以及开端于其它刺 激的恐惧的其它型。特异性恐怖症也可指单纯型恐怖症。″社交恐怖症″ 的特征为有临床意义的焦虑，其由暴露于某些类型的实例或作业而引 发。社交恐怖症也可指社会焦虑障碍。
包括在术语″焦虑″中的其它焦虑障碍包括由酒精、安非他明、咖啡 因、大麻、可卡因、致幻剂、吸入剂、苯环利定、镇静剂、安眠药、抗 焦虑剂和其它物质诱发的焦虑障碍，和有焦虑或者有混合焦虑和抑郁的 适应性障碍。
焦虑可以与或不与其它障碍例如混合焦虑和抑郁障碍中的抑郁而 存在。因此本发明组合物可用于治疗伴有或未伴有抑郁的焦虑。
对于主题治疗方法而言，例如主题抑制剂的“有效量”是指抑制剂在 药物制剂中的量，当用作所需剂量给药方案的部分时，其可产生符合临 床上可接受的标准的改善状态。
术语“治疗”、“治疗”或“治疗”用于本文时表示对抗医学病情(如CNS 障碍)，以达到医学病情按照临床上可接受的标准改善的程度。例如，“治 疗CNS障碍”指改善患者的CNS障碍或者缓解具体CNS障碍的症状， 其中用临床上可接受的标准测试(如患者自评量表)和/或经验测试(如 PET扫描)评估改善和缓解。
术语“缓解”在运动障碍的病例中指表征这两类动作困难的异常不 自主运动减少，如可用下文将具体说明的异常不自主运动量表 (scale)(AIMS)确定。
术语“预防”、“防止”或“阻止”用于本文明表示减少患者(例如人)出 现疾病的机率/风险，或者延缓患者发病，或者减轻患者可出现的病情(例 如，CNS障碍)的一种或多种症状的严重度，或者其任何组合。
本主题方法将治疗的“患者”或“主体”可指人或人以外的动物。
术语“前药”表示在体内快速转化(例如通过在血液中水解)成本发明 治疗活性剂的化合物。制备前药的常用方法是包含选择的部分，其在生 理条件(酶或非酶的)下转化，暴露需要的分子。全面讨论提供于T. Higuchi and V.Stella，Pro-drugs as Novel Delivery Systems，Vol.14of the A.C.S.Symposium Series，以及Edward B.Roche，ed.，Bioreversible Carriers in Drug Design，American Pharmaceutical Association and Pergamon Press，1987，两者均通过引用并入本文。
“透皮贴剂”指能够通过皮肤或任何合适的外表面(包括粘膜，如口腔 内所见的那些)将药物传递给患者的系统。此类递药系统通常包括可曲式 衬垫、粘性物和含药基质，衬垫保护粘性物和基质，粘性物保持完全贴 在患者皮肤上。接触皮肤后，含药基质将药物传递至皮肤，然后药物穿 透皮肤进入患者系统。
术语“链烯基”和“炔基”指长度类似的不饱和脂族基团，可能取代下 文描述的烷基，但各自包含至少一个双键或三键。
术语″烷氧基(alkoxyl)″或″烷氧基(alkoxy)″用于本文时指其上连接 氧自由基的如下定义的烷基。典型烷氧基包括甲氧基、乙氧基、丙氧基、 叔丁氧基等。“醚”是通过氧共价连接的两个烃。因此，提供烷基的烷基 取代基使醚成为或者像烷氧基，例如可用-O-烷基、-O-链烯基、-O-炔基、 -O-(CH2)m-R8其中之一表示，其中R8代表芳基、环烷基、环烯基、杂 环或多环，m是0或1-8的整数。
术语“烷基”指饱和脂族基团，包括直链烷基、支链烷基、环烷基(脂 环基)、烷基取代的环烷基和环烷基取代的烷基。在优选的实施方案中， 直链或支链烷基在其主链上具有8个或更少碳原子(例如，C1-C8直链、 C3-C8支链)，更优选5个或更少。同样，优选环烷基在它们的环结构上 具有3-10个碳原予，更优选在环结构上具有5、6或7个碳。
而且，术语“烷基”(或“低级烷基”)通用于说明书、实施例和权利要 求时，意欲包括“未取代的烷基”和“取代的烷基”，后者指烃主链的一个 或多个碳上的氢被取代基置换的烷基部分。此类取代基可包括，例如， 卤素、羟基、羰基(如羧基、烷氧基羰基、甲酰基或酰基)、硫代羰基(如 硫代酸酯、硫代乙酸酯或硫代甲酸酯)、烷氧基、磷酰基、磷酸基、膦酸 基、次膦酸基、氨基、酰氨基、脒、亚氨基、氰基、硝基、叠氮基、巯 基、烷硫基、硫酸基、磺酸基、氨磺酰基、亚磺酰氨基(sulfonamido)、 磺酰基、杂环基、芳烷基或者芳族或杂芳族部分。本领域技术人员将理 解，如果适合，烃链上取代的部分本身可被取代。例如，取代的烷基取 代基可包括取代和未取代形式的氨基、叠氮基、亚氨基、酰氨基、磷酰 基(包括膦酸基和次膦酸基)、磺酰基(包括硫酸基、亚磺酰氨基、氨磺酰 基和磺酸基)和甲硅烷基，以及醚、烷硫基、羰基(包括酮、醛、羧酸基 和酯)、-CF3、-CN等。下文描述示例性取代的烷基。环烷基可进一步被 烷基、链烯基、烷氧基、烷硫基、氨基烷基、羰基-取代的烷基、-CF3、 -CN等取代。
除非另外指定碳原子数，“低级烷基”用于本文指如上定义的烷基， 但在其主链结构上具有1-8个碳、更优选1-5个碳原子。同样，“低级链 烯基”和“低级炔基”具有相似链长。在本申请书中，优选烷基是低级烷基。 在优选实施方案中，本文指定为烷基的取代基是低级烷基。
术语“芳烷基”用于本文时，指被芳基(如芳族或杂芳族基团)取代的 烷基。
术语“芳基”用于本文包括5-和6-元单环芳基，可包含0-4个杂原子， 例如苯、吡咯、呋喃、噻吩、咪唑、噁唑、噻唑、三唑、吡唑、吡啶、 吡嗪、哒嗪和嘧啶等。那些在环结构中含杂原子的芳基还可称为“芳基 杂环”、“杂芳基″或“杂芳族”。芳环可在一个或多个环位置上被如上描述 的此类取代基取代，例如，卤素、叠氮基、烷基、芳烷基、链烯基、炔 基、环烷基、羟基、烷氧基、氨基、硝基、巯基、亚氨基、酰氨基、磷 酸基、膦酸基、次膦酸基、羰基、羧基、甲硅烷基、醚、烷硫基、磺酰 基、亚磺酰氨基、酮、醛、酯、杂环基、芳族或杂芳族部分、-CF3、-CN 等。术语“芳基”还包括具有两个或多个环的多环系统，其中两个邻接的 环(这些环是“稠环”)共用两个或多个碳，其中至少一个环是芳族的，例 如另一个环可以是环烷基、环烯基、环炔基、芳基和/或杂环基。
术语“碳环”或“环烷基”用于本文时，指其中每个环原子都是碳的芳 环或非芳环。
术语“杂原子”用于本文时，指任何非碳或氢元素的原子。优选杂原 子是氮、氧和硫。
术语“杂环基”或“杂环基团”指3-10元环结构，更优选3-7元环，其 环结构包含1-4个杂原子。杂环还可以是多环。杂环基包括，例如，噻 吩、噻蒽、呋喃、吡喃、异苯并呋喃、色烯、呫吨、吩噻噁(phenoxathiin)、 吡咯、咪唑、吡唑、异噻唑、异噁唑、吡啶、吡嗪、嘧啶、达嗪、吲嗪、 异吲哚、吲哚、吲唑、嘌呤、喹嗪、异喹啉、喹啉、酞嗪、萘啶、喹喔 啉、喹唑啉、噌啉、蝶啶、咔唑、咔啉、菲啶、吖啶、嘧啶、菲咯啉、 吩嗪、吩吡嗪、吩噻嗪、呋咱、吩噁嗪、吡咯烷、氧杂戊环(oxolane)、 硫杂戊环(thiolane)、噁唑、哌啶、哌嗪、吗啉、内酯、内酰胺例如氮杂 环丁烷酮和吡咯烷酮、磺内酰胺、磺内酯等。杂环可在一个或多个位置 被如上描述的此类取代基取代，如卤素、烷基、芳烷基、链烯基、炔基、 环烷基、羟基、氨基、硝基、巯基、亚氨基、酰氨基、磷酸基、膦酸基、 次膦酸基、羰基、羧基、甲硅烷基、醚、烷硫基、磺酰基、酮、醛、酯、 杂环基、芳族或杂芳族部分、-CF3、-CN等。
术语“代谢物”指将化合物引入生物学环境(如患者)后产生的活性衍 生物。
用于本文时，术语“硝基”指-NO2；术语“卤素”表示-F、-Cl、-Br或 -I；术语“巯基”指-SH；术语“羟基”指-OH；以及术语“磺酰基”指-SO2-。
术语“多环基”或“多环基团”指其中两个邻接的环共用两个或多个碳 的两个或多个环(如环烷基、环烯基、环炔基、芳基和/或杂环基)，例如 这些环是“稠合的环”。通过不相邻的原子连接的环称为“桥”环。多环中 的各环都可被如上描述的此类取代基取代，例如卤素、烷基、芳烷基、 链烯基、炔基、环烷基、羟基、氨基、硝基、巯基、亚氨基、酰氨基、 磷酸基、膦酸基、次膦酸基、羰基、羧基、甲硅烷基、醚、烷硫基、磺 酰基、酮、醛、酯、杂环基、芳族或杂芳族部分、-CF3、-CN等。
短语“保护基团”用于本文指暂时的取代基，其防止潜在的反应官能 团发生不需要的化学转换。此类保护基团的实例包括羧酸的酯、醇的甲 硅烷基醚、以及醛和酮各自的缩醛和缩酮。保护基团化学的领域已有综 述(Greene，T.W.；Wuts，P.G.M.Protective Groups in Organic Synthesis， 2nd ed.；Wiley：New York，1991)。
用于本文时，术语“取代的”意欲包括有机化合物所有允许的取代 基。从广义来讲，允许的取代基包括有机化合物的非环状和环状、支链 和非支链、碳环和杂环、芳族和非芳族取代基。示例性取代基包括，例 如上文描述的那些取代基。对于适当的有机化合物，允许的取代基可以 是一个或多个，并且可以相同或不同。出于本发明的目的，杂原子如氮 可具有氢取代基和/或本文描述的任何允许的有机化合物的取代基，使杂 原子的原子价饱和。无论如何本发明都不受限于有机化合物可允许的取 代基。应理解“取代”或“被取代”包括隐藏的前提，即这样取代与取代原 子和取代基的允许原子价一致并且该取代产生稳定的化合物，例如，不 会例如通过重排、环化、消去等自发产生转换。
用于本文时，除非另有说明，当每种表达例如烷基、m、n等不止 一次地出现在任何结构中，意欲其定义独立于其在相同结构中别处的定 义。
视为上文描述的化合物的等价物包括与其相当的其它化合物，并且 它们具有其相同的一般特性(例如，影响CNS障碍的能力)，其中一种或 多种简单的取代基的变更不对化合物的效力产生不良影响。一般来讲， 本发明的化合物可用下文描述的方法或其修改方法制备，用容易获得的 原料、试剂和常规合成方法。在这些反应中，还可能使用其本身已知但 这里未提及的变型。
出于本发明的目的，根据CAS版本，Handbook of Chemistry and Physics，67th Ed.，1986-87的内封面元素周期表鉴定化学元素。还出于 本发明的目的，术语“烃”意欲包括包含至少一个氢原子和一个碳原子 的所有可能的化合物。从广义来讲，允许的烃包括可被取代或未取代的 非环状和环状、支链和非支链、碳环和杂环、芳族和非芳族有机化合物。
III.本发明的示例化合物
在一方面，本发明提供DAT、NET和/或SERT活性的抑制剂。根 据本发明的一些实施方案，所述主题抑制剂是由式I表示的，或者是其 药学可接受的盐、溶剂合物、代谢物或前药：
其中，如果原子价和稳定性允许，
Ar，每次出现时独立地代表取代或未取代的芳基或杂芳基环；
X代表-H或-OR；
Y代表-O-、-S-、-C(R)2-、或-N(R)-；
R，每次出现时独立地代表-H或低级烷基；
R1代表一个或多个与环连接的取代基，例如卤素、氨基、酰氨 基、脒基、氰基、硝基、叠氮基、醚、硫醚、亚砜基、-J-R2、-J-OH， -J-低级烷基、-J-低级链烯基、-J-SH、-J-NH2，或者取代或未取代的低 级烷基、低级链烯基、环烷基、杂环基、环烷基烷基、杂环基烷基、 芳基、杂芳基、芳烷基或杂芳烷基，或者上述的保护形式；
R2，每次出现时独立地代表H或者取代或未取代的低级烷基、环烷 基、杂环基、芳烷基、杂芳烷基、芳基或杂芳基；
J，每次出现时独立地代表含0-8(优选0-4)个选自-C(R)2-、 -N(R)-、-O-和-S-的单元的链；
n是0-2的整数；
p是0或1；和
q是0-2的整数，优选1。
在某些实施方案中，R1包括一个或多个例如位于哌啶环的2-、4- 和/或6-位的低级烷基。
在某些实施方案中，Ar上的取代基(例如，氢以外)选自卤素、氰基、 烷基(包括全氟烷基)、链烯基、炔基、芳基、羟基、烷氧基、甲硅烷氧 基、氨基、硝基、巯基、氨基、亚氨基、酰氨基、磷酰基、膦酸基、羧 基、羧酰胺(carboxamide)、甲硅烷基、硫醚、烷基磺酰基、芳基磺酰基、 亚砜、硒醚(selenoether)、酮、醛、酯或-(CH2)mR2，其中m是0-4的整 数。
在某些实施方案中，非氢取代基选自卤素、氰基、烷基(包括全氟烷 基)、羟基、烷氧基、链烯基、炔基、芳基、硝基、巯基、亚氨基、酰氨 基、羧基、硫醚、烷基磺酰基、芳基磺酰基、酮、醛和酯。在某些实施 方案中，非氢取代基选自卤素、氰基、烷基(包括全氟烷基)、链烯基、 炔基、硝基、酰氨基、羧基、烷基磺酰基、酮、醛和酯。
在某些实施方案中，Ar上的取代基位于对位。
在某些实施方案中，出现一次或两次的Ar都是苯环。在某些此类 实施方案中，苯环被一个或多个吸电子取代基取代，如卤素、氰基、硝 基、全氟烷基(如CF3、C2F5等)、酰基等。
某些典型示例性转运体抑制剂包括：(1)、(2)、(3)、(4)、(5)、(6) 和(6′)。这些化合物的结构显示如下：
该转运体抑制剂的其它实施方案罗列如下：
根据本发明的一些实施方案，所述主题抑制剂是由式II表示的，或 者是其药学可接受的盐、溶剂合物、代谢物或前药：
其中，如果原子价和稳定性允许，所述取代基定义如上文。
在其它更具体的实施方案中，所述抑制剂是由式IIa、IIb或IIc表示 的，或者其药学可接受的盐、溶剂合物、代谢物或前药：
其中，如果原子价和稳定性允许，所述取代基定义如上文。
在再其它具体实施方案中，所述抑制剂是由以下结构表示的，或其 药学可接受的盐、溶剂合物、代谢物或前药：
其中，如果原子价和稳定性允许，所述取代基定义如上文。
在再其它实施方案中，所述抑制剂是由以下结构表示的：
在某些实施方案中，所述抑制剂是(13)、(14)、(15)、(16)、(17)、(18)、 (19)、(20)或(21)。
除了人以外，本发明适用的其它动物主体扩大至作为宠物或者出于 商业目的饲养的家养动物和家畜。实例是狗、猫、牛、马、绵羊、猪和 山羊。
本发明再另一方面涉及主题抑制剂减轻动物CNS障碍的严重度或 者预防性防止其发病从而改变动物的精神或身体状态的用途。本发明的 化合物还可用于治疗和/或预防CNS障碍引起的记忆缺陷。
A.包含抑制剂的组合
在某些实施方案中，本方法包括与药物制剂、一种或多种物理疗法、 职业疗法或演讲/语言疗法联合给药。
将与主题化合物联合给药的药物可与主题化合物一起配制成单一 药物制剂，如包含两种药物的丸剂或其它药物，或者可以作为单独药物 制剂给药。
在用于治疗CNS障碍的包装、制剂、组合物和方法的某些实施方 案中，本发明还包括一种或多种治疗帕金森氏病的治疗剂，其选自多 巴胺前体，如左旋多巴；多巴胺能药物，如左旋多巴-卡比多巴 (Sinemet)或左旋多巴-苄丝肼( Madopar)；多巴胺能和抗胆碱能药，如金刚烷胺( )；抗胆碱能药，如苯海索苯扎托品 二乙异丙嗪或丙环定多巴胺激 动剂，例如阿扑吗啡、溴隐亭卡麦角林麦角 乙脲培高利特普拉克索或罗匹尼 罗MAO-B(单胺氧化酶B)抑制剂，例如司来吉兰或丙炔苯 丙胺()；COMT(儿茶酚O-甲基转移酶)抑 制剂，例如托卡朋或恩他卡朋或其它治疗剂，例 如巴氯芬多潘立酮氟氢可的松 米多君奥昔布宁普萘洛尔( Inderal-)、氯硝西泮或育亨宾。
在治疗CNS障碍的包装、制剂、组合物和方法的某些实施方案 中，本发明还包括一种或多种治疗肌张力障碍的治疗剂，其选自抗胆 碱能药，例如苯海索苯扎托品二乙异丙嗪 或丙环定多巴胺能药物，例如左旋多巴-卡比 多巴(Sinemet)或左旋多巴-苄丝肼( Madopar)；骨骼肌松弛药，例如巴氯芬镇静剂，例 如氯硝西泮抗惊厥剂，例如卡马西平多巴胺 重摄取抑制剂，例如丁苯那嗪或者多巴胺阻滞剂，例如氟 哌啶醇
在治疗CNS障碍的包装、制剂、组合物和方法的某些实施方案 中，本发明还包括一种或多种治疗震颤的治疗剂，抽搐β-阻滞剂，例 如普萘洛尔(Inderal-)；抗惊厥剂，例如扑米酮 或者碳酸酐酶抑制剂，例如乙酰唑胺或醋甲唑 胺
在治疗CNS障碍的包装、制剂、组合物和方法的某些实施方案中， 本发明还包括一种或多种治疗肌阵挛的治疗剂，其选自镇静剂，例如氯 硝西泮或者抗惊厥剂，例如丙戊酸
在治疗CNS障碍的包装、制剂、组合物和方法的某些实施方案中， 本发明还包括一种或多种治疗舞蹈病的治疗剂，其选自多巴胺阻滞剂， 例如氟哌啶醇或者多巴胺重摄取抑制剂，例如丁苯那嗪
在治疗CNS障碍的包装、制剂、组合物和方法的某些实施方案 中，本发明还包括一种或多种治疗多动腿综合征的治疗剂，其选自多巴 胺能药，例如左旋多巴-卡比多巴(Sinemet)或左旋多巴- 苄丝肼(Madopar)；镇静剂，例如氯硝西 泮多巴胺激动剂，例如溴隐亭培高利特 普拉克索或罗匹尼罗麻醉剂，例如 可待因(Tylenol#)；或者GABA能药，例如加巴喷丁
在治疗CNS障碍的包装、制剂、组合物和方法的某些实施方案中， 本发明还包括一种或多种治疗抽搐的治疗剂，其选自镇静剂，例如氯硝 西泮α拮抗剂，例如可乐定多巴胺重摄取抑 制剂，例如丁苯那嗪或者多巴胺阻滞剂，例如氟哌啶醇 或奋乃静。
在治疗CNS障碍的包装、制剂、组合物和方法的某些实施方案中， 本发明还包括一种或多种环氧合酶-2-选择性抑制剂。
B.抑制剂的药物制剂
另一方面，本发明提供含主题抑制剂的药物制剂。可方便地用生物 学上可接受的无热原和/或无菌的介质(如水、缓冲盐水、多元醇(如甘油、 丙二醇、液体聚乙二醇等)或其合适的混合物)配制用于主题方法给药的 抑制剂。可根据操作者熟知的方法以经验确定活性成分在所选介质中的 最佳浓度。用于本文时，“生物学上可接受的介质”包括可适合药物制剂 需要的给药途径的任何及全部溶剂、分散介质等。此类介质对药学活性 物质的用途已为本领域所知。除非任何常规介质或试剂与抑制剂的活性 不相容，否则都考虑用于本发明的药物制剂。合适溶媒及其包含其它蛋 白质的制剂描述于，如Remington′s Pharmaceutical Sciences(Remington′s Pharmaceutical Sciences.Mack Publishing Company，Easton，Pa.，USA 1985)一书中。这些溶媒包括可注射的“贮库制剂”。
本发明的药物制剂还可包括兽医组合物，如适合兽医用途的抑制剂 的药物制剂，如用于治疗家畜或家养动物，如狗。
介绍的方法还可通过可再装填或可生物降解的装置提供。近几年已 开发各种缓释聚合物装置并在体内测试，以控制药物的传递。多种生物 相容性聚合物(包括水凝胶)，包括生物可降解和不可降解的聚合物，都 可用于形成在特定靶部位持续释放抑制剂的植入物。根据本发明的实 施，已发现可提供按计划给予抑制剂的剂型和方法，基本减少或完全消 除患者的耐药。如Brill在PharInacologv inMedicine，227页 (1965)McGraw-Hill中的定义，耐药的特征在于给予药物后作用下降。当 单次或几次给药后在非常短的时间内出现耐药，称为急性耐药。当给予 药物经过更长的时间段之后出现明显程度的耐药，称为慢性耐药。医学 文献，如在The Pharmacological Bases of Therapeutics，by Goodman and Gilman，8th Ed.，p.72(1990)Pergamon Press中，报道耐药性可能由许多 药物的作用获得，该文献根据获得耐药性的时间将其分成急性或慢性。 也就是说，急性耐药在一次剂量的给药期或一天内出现，而慢性耐药由 于长期(通常为几周、几月和几年)给药获得。
在某些实施方案中，特别是当选择的抑制剂可能在患者中产生耐药 如急性耐药时，可能需要将化合物配制成可变的定量，优选用于剂量增 加的方案。在优选实施方案中，主题抑制剂可配制为在至少4小时、更 优选至少8或甚至16小时内传递持续和增加的剂量。
在某些实施方案中，代表性剂型包括含大量小丸的水凝胶骨架。水 凝胶骨架包括亲水聚合物，如多糖、琼脂、琼脂糖、天然树胶、海藻酸 碱盐包括海藻酸钠、角叉菜胶、墨角藻聚糖(fucoidan)、红藻胶 (furcellaran)、昆布多糖、沙菜(hypnea)、阿拉伯胶、印度胶、卡拉牙胶、 西黄蓍胶、槐树豆胶(locust bean gum)、果胶、支链淀粉、明胶和亲水胶 体。水凝胶骨架包含大量小丸(如4-50个)，每个小丸包含的剂量从100ng 逐渐增加，如如0.5mg、1mg、1.2mg、1.4mg、1.6mg、1.8mg等。小 丸包含的释放率控制壁厚度为0.0mm-10mm，使药物的释放定时增加。 代表性成壁材料包括三甘油酯，其选自三硬脂酸甘油酯、单硬脂酸甘油 酯、二棕榈酸甘油酯、月桂酸甘油酯、二癸烯酸甘油酯和三癸烯酸甘油 酯。其它成壁材料包括聚醋酸乙烯邻苯二甲酯、甲基纤维素邻苯二甲酯 和微孔乙烯烃。制备小丸的方法公开于美国专利号4,434,153、4,721,613、 4,853,229、2,996,431、3,139,383和4,752,470中，其通过引用并入本文。
在某些实施方案中，药物释放珠的特征在于溶出图，其中0-2小时 0-20％的珠发生溶出和释放药物，2-4小时20-40％发生溶出和释放药物， 4-6小时40-60％表现溶出和释放，6-8小时溶出和释放60-80％，8-10小 时溶出和释放80-100％。药物释放珠可包含中心组合物或含药物的核心 以及形成药学可接受的组合物的成分，包括润滑剂、抗氧化剂和缓冲剂。 珠包含剂量增加的药物，如1mg、2mg、5mg等直至高剂量，在某些 优选实施方案中为15-100mg。用释放率控制聚合物包衣这些珠，可用 上文公开的溶出图选择聚合物。珠的制备可采用，例如，Liu et al.(1994) Inter.J.of Pharm.，112：105-116；Liu et al.(1994)Inter.J.of Pharm.， 112：117-124；Pharm.Sci.，by Remington，14th Ed.pp.1626-1628(1970)； Fincher et al.(1968)J.Pharm.Sci.，57：1825-1835；和美国专利号No. 4,083,949中所述。
本发明提供的另一种示例剂型包含浓度梯度从1mg-600mg的药 物，其从前者低剂量至后者高剂量包裹在聚合物底物中。该聚合物可以 是可侵蚀或不可侵蚀的聚合物。将包衣底物从剂型中央的后者高剂量处 卷在其自身周围，在暴露的底物外端到达前者低剂量。将包衣底物从高 剂量卷至低剂量，以便底物展开或被侵蚀时从低至高剂量释放。例如， 将1mg-600mg药物包衣在可侵蚀的聚合物如多肽、胶原、明胶或聚乙 烯醇上，将底物从高剂量向心性卷曲，向内形成中心位置，然后向外朝 低剂量形成外部位置。使用时，剂型侵蚀，分散随时间释放的剂量增加 的药物。
本发明提供的另一种剂型包含多层，其中各层的特征在于药物剂量 的增加。短语“多层”表示呈接触叠层状的2-6层。多层连续放置，也就 是说，第一层暴露层之后一层层按顺序放置，第六层接触第五层，其暴 露表面用不渗透药物的聚合物包衣。用不渗透药物的聚合物包衣第六 层，确保从第一层至第六层释放抑制剂。第一层包含如1-50mg药物， 相继各层包含另外1-50mg药物。生物可降解聚合物进行化学分解，形 成可溶性单体或可溶性聚合物单元。聚合物的生物降解通常包括化学或 酶催化的水解。用于增加药物的可接受的代表性生物可降解聚合物在第 一层和随后各层中每层的药物负荷从5增加至50wt％，其中第一层含 100ng。代表性生物可降解聚合物包括生物可降解的聚(酰胺)、聚(氨基 酸)、聚(酯)、聚(乳酸)、聚(乙醇酸)、聚(原酸酯)、聚(酐)、生物可降解 的聚(脱氢吡喃)和聚(二噁英酮(dioxinones))。本领域已知的聚合物可见 Controlled Release of Drugs，by Rosoff，Ch.2，pp.53-95(1989)；以及美国 专利号3,811,444、3,962,414、4,066,747、4,070,347、4,079,038和 4,093,709。
在再其它的实施方案中，本发明使用含有通过扩散、穿孔流出或通 过聚合物基质破裂释放药物的聚合物的剂型。药物传递聚合物系统包括 浓度梯度，其中浓度梯度从开始或初浓度上升至终或较高浓度。剂型包 含开始剂量的暴露面和终剂量的远端非暴露面。用不渗透通过药物的药 学可接受的材料包衣非暴露面。剂型结构使药物的传递流量增加，从开 始上升至最终的传递剂量。
剂型基质可用聚合物领域已知的方法制备。在一种制备方法中，独 立制备3-5种或更多种铸型(casting)组合物，其中各铸型组合物包含剂量 增加的药物，从低至高剂量覆盖各组合物。这产生一系列的层，一起形 成具有浓度梯度的单位聚合物基质。在另一种制备方法中，首先制备较 高剂量，接着用剂量降低的各层叠层，得到具有药物浓度梯度的聚合物 基质。制备剂型的实例包括使药学可接受的载体如聚乙二醇与已知剂量 的抑制剂混合，用交联剂如辛酸亚锡将其加入硅橡胶医用级弹性体内， 接着在模型中铸造。随后的各层重复该步骤。
让该系统运行例如1小时，得到剂型。制备剂型的代表性聚合物包 括烯烃和乙烯聚合物、缩合聚合物、碳水化合物聚合物，和由聚(乙烯)、 聚(丙烯)、聚(乙酸乙烯酯)、聚(丙烯酸甲酯)、聚(甲基丙烯酸异丁酯)、 聚(藻酸盐)、聚(酰胺)和聚(硅酮)代表的硅聚合物。聚合物和制备方法可 见于Polymers，by Coleman et al.，Vol.31，pp.1187-1230(1990)；Drug Carrier Systems，by Roerdink et al.，Vol.9，pp.57-109(1989)；Adv.Drug Delivery Rev.，by Leong et al.，Vol.1，pp.199-233(1987)；Handbook of Common Polymers，compiled by Roff et al.，(1971)published by CRC Press；和美国专利号3,992,518。
在再其它的实施方案中，主题制剂可以是一种或多种不同抑制剂的 不同前药形式的混合物，每种前药形式具有不同水解速率，因此具有不 同激活速率，以提供活性抑制剂的增加的血清浓度。
在其它实施方案中，主题制剂可以是不同抑制剂的混合物，每种化 合物具有不同的吸附率(如通过消化道或上皮)和/或血清半衰期。
通过提供不断抵消急性耐药性发生的递药方法，本发明的剂量递增 方案可用于抵消抑制剂治疗作用(如果有作用的话)的丧失，根据方程1 将药物在时间(t)的临床效应(E)作为药物浓度(C)的函数：
效应＝f(t，C) (1)
此外，每小时mg药物的传递率(A)与药物清除的浓度倍数成反比。
因为效应随时间改变和表达官能度(functionality)，那么可根据本发 明控制(A)，确保治疗效应维持在临床值。如果临床上发现药物作用随时 间下降，则这种衰减可如方程2所示呈线性：
效应(t)＝效应(ini)-keffect*t (2)
其中，效应(ini)是在开始给予药物时观察的临床效应，效应(t)是在时间 (t)小时观察的效应，keffect是正比常数，通过维持恒定血浆浓度的同时 测定时间(t1)小时的临床效应(E1)和时间(t2)小时的临床效应(E2)，接着 (E1)减(E2)除以(t1)减(t2)确定。为了维持恒定效应，必须用根据方程3 的相同官能度调节(A)：
A(t)＝A(ini)+keffect*t (3)
其中A(ini)是在开始治疗时最初每小时mg药物输入量，A(t)是时间(t) 小时的药物输入量，keffect是上文提出的正比常数。如果发现疗效随时 间呈指数衰减，这种关系用方程4表示：
效应(t)＝效应(ini)*exp(-keffect*t) (4)
其中效应(ini)和效应(t)如前定义，keffect是速率常数(h-1)，单位为小时 的倒数，通过维持恒定血浆浓度的同时测定时间(t1)小时的临床效应(E1) 和时间(t2)小时的临床效应(E2)，接着(E1)的自然对数减(E2)的自然对数 除以(t1)减(t2)确定。为了维持恒定效应，必须根据方程5调节(A)：
A(t)＝A(ini)*exp(keffect*t) (5)
其中A(ini)和A(t)如前定义，keffect是上文提出的速率常数(h-1)。这些 方程式由Holford et al.(1982)Pharmac.Ther.，16：143-166中提出。
本发明的制剂可口服、胃肠外、局部或直肠给药。当然它们以适合 各种给药途径的形式给药。例如，它们以片剂或胶囊形式通过注射、输 注、吸入、直肠栓剂或者控制释放贴剂给药。优选口服和控制释放贴剂 给药。
在某些优选实施方案中，主题治疗剂通过透皮贴剂的方式给药。贴 剂通常是平坦中空的装置，一侧具有可渗透的膜，还有一些形式的粘性 物以维持贴剂置于患者皮肤上，通过使膜接触皮肤，使药物可渗出贴剂 贮存区进入和穿透皮肤。贴剂外侧由不透性材料层组成，膜侧和外侧环 绕贴剂周边相连，在两层之间形成药物和载体的贮存区。
贴剂技术以使活性成分持久接触表皮的能力为基础。经过一段时间 后，保持在这样状态的药物分子将最终进入血流。因此，贴剂技术依靠 人体通过皮肤吸取药物分子的能力。最近已将使用贴剂技术的透皮药物 传递用于传递尼古丁帮助戒烟、将硝酸甘油传递给心绞痛患者、在绝经 后女性中传递替代激素等。这些常规药物传递系统包括含活性成分(如其 中加入药物)的贴剂，贴剂还包含用于附着皮肤的粘附剂，以便活性成分 贴紧皮肤。示例性贴剂技术可来自Ciba-Geigy Corporation and Alza Corporation。此类透皮给药装置很容易适用于主题抑制剂。
可通过改变(a)阻力(扩散常数)或(b)驱动力(药物在角质层的溶解度， 因而是扩散梯度)调节主题抑制剂穿过皮肤的流量。可用各种方法增加主 题抑制剂的皮肤渗透性，包括渗透促进剂、使用前药变型、过量溶媒、 离子电渗疗法、超声透入(phonophoresis)和热泳(thermophoresis)。已研 制多种促进剂组合物以改变这些因素中的一项或两项。参见如美国专利 号4,006,218、3,551,154和3,472,931，其分别描述二甲基亚砜(DMSO)、 二甲基甲酰胺(DMF)和N，N-二甲基乙酰胺(DMA)促进局部应用的药物通 过角质层吸收的用途。由乙二醇单乙醚或单甲醚与丙二醇单月桂酸酯和 月桂酸甲基酯组成的的组合促进剂公开于美国专利号4,973,468。透皮释 放药物的由甘油单月桂酸酯和乙醇组成的双重促进剂可见于美国专利 号4,820,720。美国专利号5,006,342列出大量透皮给药的促进剂，包括 C2-C4烷二醇的脂肪酸酯或脂肪醇醚，其中酯/醚的每个脂肪酸/醇部分 约为8-22个碳原子。美国专利号4,863,970显示局部应用的渗透促进组 合物，包括含在渗透促进溶媒中的活性渗透剂，包含指定量的一种或多 种细胞被膜无序化化合物，如油酸、油醇和油酸的甘油酯；C2或C3烷 醇；和惰性稀释剂如水。其它实例包括在美国专利号4,933,184中教导 的，其中公开薄荷醇作为渗透促进剂用途；美国专利号5,229,130公开 植物油(大豆油和/或椰子油)作为渗透促进剂用途；和美国专利号 4,440,777公开桉油精作为渗透促进剂用途。
短语“胃肠外给药”和“非经肠给药”用于本文指肠内和局部给药之外 的给药方式，常通过注射，包括但不限于静脉内、肌内、动脉内、鞘内、 囊内、眶内、心内、皮内、腹膜内、气管内、皮下、表皮下、关节内、 被膜下、蛛网膜下、椎管内和胸骨内注射和输注。
短语“全身给药”、“系统给药”、“外周给药”和“周围给药”用于本文 指除了直接进入中枢神经系统之外地给予化合物、药物或其它物质，以 便它进入患者的系统，从而进行代谢和其它类似过程，例如皮下给药。
这些化合物可通过任何合适的给药途径给予人及其它动物，给药途 径包括口服、经鼻(如通过喷雾)、直肠、阴道内、胃肠外、脑池内和局 部(如通过粉剂、软膏剂或滴剂)，包括含服和舌下。
无论选择的给药途径如何，可以以合适的水合形式和/或本发明的药 物组合物使用的本发明化合物，都可如下文描述或者通过本领域技术人 员已知的其它常规方法配制成药学可接受的剂型。
活性成分在本发明药物组合物中的实际剂量水平可改变，以便获得 活性成分的量，该量对具体患者、组合物和给药方式有效实现需要的治 疗效应，对患者不产生毒性。
选择的剂量水平将取决于多种因素，包括使用的本发明的具体化合 物或其酯、盐或酰胺的活性；给药途径；给药次数；使用的具体化合物 的排泄速率；治疗持续时间；与所用具体抑制剂联合使用的其它药物、 化合物和/或物质；受治疗患者的年龄、性别、体重、疾病、一般健康和 既往病史；以及医学领域熟知的类似因素。
具有专业技术的医生或兽医很容易确定和开具需要的药物组合物 的有效量的处方。例如，医生或兽医用在药物组合物中的本发明化合物 的开始剂量可低于获得理想疗效需要的水平，然后逐渐增加剂量直至获 得理想疗效。
一般来讲，合适的本发明化合物的日剂量将是有效产生疗效的最低 剂量的化合物量。这样的有效剂量通常将取决于上述因素。一般来讲， 对于患者本发明化合物的静脉内、脑室内和皮下剂量范围将从每天每公 斤体重约0.0001至约100mg。
如果需要，可将活性化合物的有效日剂量任选以单位剂型，在一天 内以适当间隔分成2、3、4、5、6或多次亚剂量单独给药。
术语“治疗”意欲还包括预防、治疗和治愈。
接受这种治疗的患者实际上是任何有需要的动物包括灵长类(特别 是人)及其它哺乳动物如马、牛、猪和羊；一般来讲是家禽和宠物。
本发明的化合物可原样给药或者与药学可接受的载体混合，还可与 其它药物联合给药，例如多巴胺前体、多巴胺能药物、多巴胺能和抗胆 碱能药物、抗胆碱能药物、多巴胺激动剂、MAO-B(单胺氧化酶B)抑制 剂、COMT(儿茶酚O-甲基转移酶)抑制剂、骨骼肌松弛药、镇静剂、抗 惊厥剂、多巴胺重摄取抑制剂、多巴胺阻滞剂、β-阻滞剂、碳酸酐酶抑 制剂、麻醉剂、GABA能药物或α拮抗剂。因此联合疗法包括以这样的 方式连续、同时和单独给予活性化合物，当给予后一种药物时，前一种 的疗效不完全消失。
虽然本发明的化合物可以单独给药，但优选作为药物制剂(组合物) 给予化合物。可配制本发明的抑制剂，以任何方便的给药途径用于人或 兽医学。
因此，本发明另一方面提供药学可接受的组合物，它包含治疗有效 量的一种或多种上述化合物，以及与其一起配制的一种或多种药学可接 受的载体(添加剂)和/或稀释剂。如下文详细描述，本发明的药物组合物 可特别配制成固体或液体形式给药，包括适合以下的形式：(1)口服给药， 例如，灌服剂(水或非水溶液或混悬液)、片剂、大丸剂、散剂、粒剂或 敷在舌上的糊剂；(2)胃肠外如皮下、肌内或静脉内注射给药，如无菌溶 液或混悬液；(3)局部应用，如霜剂、软膏剂或用于皮肤的喷雾剂；或(4) 阴道内或直肠内，如阴道栓剂、霜剂或泡沫剂。然而，在某些实施方案 中，可将主题化合物简单地溶解或悬浮于无菌水中。
短语“药学可接受的载体”用于本文指药学可接受的原料、组合物或 溶媒，如液体或固体过滤剂、稀释剂、赋形剂、溶剂或包囊材料，负责 将主题调节剂从机体的一个器官或部分携带或转运至机体的另一个器 官或部分。每种载体必须是“药学可接受的”指与其它制剂成分相容且对 患者无害。可用作药学可接受的载体的一些实例包括(1)糖，如乳糖、葡 萄糖和蔗糖；(2)淀粉，如玉米淀粉和马铃薯淀粉；(3)纤维素及其衍生物， 如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素和醋酸纤维素；(4)黄蓍胶粉；(5)麦芽； (6)明胶；(7)滑石粉；(8)赋形剂，如可可豆脂和栓蜡；(9)油，如花生油、 棉籽油、红花油、芝麻油、橄榄油、玉米油和大豆油；(10)二醇，如丙 二醇；(11)多元醇，如甘油、山梨醇、甘露醇和聚乙二醇；(12)酯，如油 酸乙酯和月桂酸乙酯；(13)琼脂；(14)缓冲剂，如氢氧化镁和氢氧化铝； (15)海藻酸；(16)无热原水；(17)等渗盐水；(18)林格氏液；(19)乙醇；(20) 磷酸盐缓冲液；和(21)其它用于药物制剂的无毒相容性物质。
如上所示，主题抑制剂的某些实施方案可包含碱性官能团如氨基或 烷基氨基，因此能够与药学可接受的酸形成药学可接受的盐。术语“药 学可接受的盐”在这方面指相对无毒的本发明化合物的无机和有机酸加 成盐。这些盐可在本发明化合物的最终离析和纯化过程中原位制备，或 者单独使游离碱形式的纯化的本发明化合物与合适的有机或无机酸反 应并离析如此形成的盐。代表性盐包括但不限于下列：2-羟基乙磺酸盐、 2-萘磺酸盐、3-羟基-2-萘甲酸盐、3-苯基丙酸盐、乙酸盐、乙二酸盐、 藻酸盐、氨芪磺酸盐、天冬氨酸盐、苯磺酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、 碳酸氢盐、硫酸氢盐、酒石酸氢盐、硼酸盐、丁酸盐、依地酸钙、樟脑 酸盐、樟脑磺酸盐、右旋樟脑磺酸盐(camsylate)、碳酸盐、枸橼酸盐、 克拉维酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡糖酸盐、十二烷基硫酸盐、依地酸盐、 乙二磺酸盐、丙酸酯月桂硫酸盐(estolate)、乙磺酸盐(esylate)、乙烷磺酸 盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐(gluceptate)、葡庚酸盐(glucoheptanoate)、葡 糖酸盐、谷氨酸盐、甘油磷酸盐、对羟乙酰氨基苯砷酸盐 (glycollylarsanilate)、半硫酸盐、庚酸盐、六氟磷酸盐、己酸盐、己基间 苯二酚盐(hexylresorcinate)、海巴明、氢溴酸盐、盐酸盐、氢碘酸盐、羟 萘甲酸盐、碘化物、异硫羰酸盐(isothionate)、乳酸盐、乳糖醛酸盐、月 桂酸盐、月桂磺酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、扁桃酸盐、甲磺酸盐、甲 烷磺酸盐、甲基溴、甲基硝酸盐、甲基硫酸盐、粘酸盐、萘酸盐 (naphthylate)、萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、N-甲基葡萄糖胺铵盐、油 酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、扑酸盐、泛酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、磷 酸盐、磷酸盐/二磷酸盐、苦味酸盐、新戊酸盐、聚半乳糖醛酸盐、丙酸 盐、对甲苯磺酸盐、水杨酸盐、硬脂酸盐、次乙酸盐、琥珀酸盐、硫酸 盐、磺基水杨酸盐、suramate、鞣酸盐、酒石酸盐、teoclate、硫氰酸盐、 甲苯磺酸盐、三乙基碘(triethiodide)、十一酸盐和戊酸盐等。(参见，例 如，Berge et al.(1977)″Pharmaceutical Salts，″J.Pharm.Sci.66：1-19)。
在某些实施方案中，主题化合物的药学可接受的盐包括化合物的常 规无毒性盐，如来自无毒性有机或无机酸的盐。特别合适的是弱酸盐。 例如，此类常规无毒性盐包括衍生自无机酸如盐酸、氢溴酸、氢碘酸、 肉桂酸、葡糖酸、硫酸、氨基磺酸、磷酸、硝酸等的盐；和由有机酸如 乙酸、丙酸、琥珀酸、乙醇酸、硬脂酸、乳酸、马来酸、酒石酸、枸橼 酸、抗坏血酸、棕榈酸、马来酸、羟基马来酸、苯乙酸、谷氨酸、苯甲 酸、水杨酸、对氨基苯磺酸、2-乙酰氧基苯甲酸、富马酸、甲苯磺酸、 甲磺酸、乙二磺酸、草酸、异硫羰酸(isothionic)等制备的盐。
在其它情况下，本发明的化合物可包含一种或多种酸性官能团，因 此能够与药学可接受的碱形成药学可接受的盐。术语“药学可接受的盐” 在这些情况下指相对无毒的本发明化合物的无机和有机碱加成盐。这些 盐同样可在化合物的最终离析和纯化过程中原位制备，或者单独使游离 酸形式的纯化化合物与合适的碱(如药学可接受的金属阳离子的氢氧化 物、碳酸盐或碳酸氢盐)、与氨或者与药学可接受的有机伯、仲或叔胺反 应。代表性碱或碱土盐包括锂、钠、钾、钙、镁和铝盐等。用于形成碱 加成盐的代表性有机胺包括乙胺、二乙胺、乙二胺、乙醇胺、二乙醇胺、 哌嗪等。(参见，例如，Berge et al.，同上)。
湿润剂、乳化剂和润滑剂如月桂基硫酸钠和硬脂酸镁，以及着色剂、 释放剂、包衣剂、甜味剂、矫味剂和芳香剂、防腐剂和抗氧化剂都可出 现在组合物中。
药学可接受的抗氧化剂实例包括：(1)水溶性抗氧化剂，如抗坏血酸、 盐酸半胱氨酸、硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、亚硫酸钠等；(2)油溶性抗氧化 剂，如抗坏血酸棕榈酸酯(ascorbyl palmitate)、丁羟茴醚(BHA)、丁羟甲 苯(BHT)、卵磷脂、没食子酸丙酯、α-生育酚等；和(3)金属螯合剂，如 枸橼酸、乙二胺四乙酸(EDTA)、山梨醇、酒石酸、磷酸等。
本发明的制剂包括适合口服、经鼻、局部(包括含化和舌下)、直肠、 阴道和/或胃肠外给药的制剂。制剂可方便地以单位剂型出现，可用药学 领域熟知的任何方法制备。可与载体原料混合形成单一剂型的活性成分 的量将根据受治疗患者和具体给药方式而改变。可与载体原料混合形成 单一剂型的活性成分的量通常是化合物产生疗效的量。一般来讲，以 100％计，该量将为约1％至约99％活性成分范围，优选约5％至约70％， 最优选约10％至约30％。
制备这些制剂或组合物的方法包括使本发明化合物与载体以及任 选一种或多种配合剂混合。一般来讲，制备制剂是通过将本发明化合物 与液体载体或者精细分开的固体载体(或两者)均匀和紧密地混合，然后 根据需要使产物成形。
适合口服给药的本发明制剂可采用下列形式：胶囊剂、扁囊剂、丸 剂、片剂、锭剂(用香味基质，通常是蔗糖和阿拉伯胶或黄蓍胶)、散剂、 粒剂，或者作为在水或非水液体中的溶液或混悬液，或者作为水包油或 油包水液体乳剂，或者作为酏剂或糖浆剂，或者作为软锭剂(用惰性基质， 如明胶和甘油或蔗糖和阿拉伯胶)和/或作为漱口液等，各自包含预定量 的本发明化合物作为活性成分。本发明化合物还可作为大丸剂、药糖剂 或糊剂给药。
在口服给药的本发明的固体剂型(胶囊剂、片剂、九剂、锭剂、散剂、 粒剂等)中，使活性成分与一种或多种药学可接受的载体混合，如枸橼酸 钠或磷酸二钙，和/或下列中的任何物质：(1)填充剂或膨胀剂，如淀粉、 乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和/或硅酸；(2)粘合剂，如羧甲基纤维素、 藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和/或阿拉伯胶；(3)保湿剂，如 甘油；(4)崩解剂，如琼脂、碳酸钙、马铃薯淀粉或木薯淀粉、海藻酸、 某些硅酸盐和碳酸钠；(5)溶液阻滞剂，如石蜡；(6)吸收促进剂，如季铵 化合物；(7)湿润剂，如鲸蜡醇和单硬脂酸甘油酯；(8)吸收剂，如高岭土 和膨润土；(9)润滑剂，如滑石粉、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、 月桂基硫酸钠及其混合物；和(10)着色剂。在胶囊剂、片剂和丸剂的情 况下，药物组合物还可包含缓冲剂。还可将类似的固体组合物作为填充 剂用于软和硬胶囊中，用这样的赋形剂如乳糖或乳糖以及高分子量聚乙 二醇等。
可任选用一种或多种配合剂通过压制或模制制备片剂。压制片可用 粘合剂(如明胶或羟丙基甲基纤维素)、润滑剂、惰性稀释剂、防腐剂、 崩解剂(如淀粉羟乙酸钠或交联羧甲基纤维素钠)或者表面活性剂或分散 剂制备。模制片可通过在合适的机器中将惰性稀释液弄湿的粉状化合物 的混合物模压制备。
本发明药物组合物的片剂及其它固体剂型，如锭剂、胶囊剂、丸剂 和粒剂，可任选刻痕或用包衣和外壳如肠溶衣或其它药物制剂领域熟知 的涂层制备。还可将它们配制成缓慢或控制释放其中的活性成分，如用 各种比例的羟丙基甲基纤维素与其它聚合物基质、脂质体和/或微球，提 供需要的释放谱。
可将它们消毒，如通过防菌滤器过滤，或者加入无菌固体组合物形 式的灭菌剂，在临用前可将该灭菌剂溶于无菌水或者一些其它无菌注射 介质中。这些组合物还可任选包含遮光剂，且可以是在某段胃肠道内任 选以延迟的方式仅(或优选)释放活性成分的组合物。可使用的包埋组合 物实例包括聚合物质和蜡。如果适合，还可用一种或多种上述赋形剂将 活性成分制备成微囊形式。
本发明化合物口服给药的液体剂型包括药学可接受的乳剂、微乳 剂、溶液剂、混悬液剂、糖浆剂和酏剂。除活性成分之外，液体剂型可 包含本领域常用的惰性稀释剂如水或其它溶剂、增溶剂和乳化剂，如乙 醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苄醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、1，3- 丁二醇、油(特别是棉籽油、落花生油、玉米油、胚芽油、橄榄油、蓖麻 油和芝麻油)、甘油、四氢呋喃醇、聚乙二醇和脱水山梨醇的脂肪酸酯， 及其混合物。
除了惰性稀释剂之外，口服组合物还可包括辅剂如湿润剂、乳化剂 和悬浮剂，以及甜味剂、矫味剂、着色剂、芳香剂和防腐剂。
除了活性化合物之外，混悬液剂可包含悬浮剂，如乙氧基化异硬脂 醇、聚氧乙烯山梨醇和脱水山梨醇酯、微晶纤维素、氢氧化铝(aluminum metahydroxide)、膨润土、琼脂和黄蓍胶，及其混合物。
直肠或阴道给药的本发明的药物组合物制剂可采用栓剂形式，其可 通过将一种或多种本发明化合物与一种或多种合适的无刺激赋形剂或 载体制备，这些赋形剂或载体包括如可可豆脂、聚乙二醇、栓剂蜡或水 杨酸盐，它在室温下为固体但在体温下为液体，因此将融化在直肠或阴 道腔内，释放活性抑制剂。
适合阴道给药的本发明制剂还包括含本领域已知适合的此类载体 的阴道栓剂、棉塞剂、霜剂、凝胶剂、糊剂、泡沫剂或喷雾制剂。
本发明化合物局部或经皮给药的剂型包括粉剂、喷雾剂、软膏剂、 糊剂、霜剂、洗剂、凝胶剂、溶液剂、贴剂和吸入剂。可在无菌条件下 使活性化合物与药学可接受的载体以及可能需要的任何防腐剂、缓冲剂 或抛射剂混合。
除了本发明的活性化合物之外，软膏剂、糊剂、霜剂和凝胶剂可包 含赋形剂，如动物和植物脂肪、油、蜡、石蜡、淀粉、黄蓍胶、纤维素 衍生物、聚乙二醇、硅酮、膨润土、硅酸、滑石粉和氧化锌，或其混合 物。
除了本发明化合物之外，粉剂和喷雾剂可包含赋形剂，如乳糖、滑 石粉、硅酸、氢氧化铝、硅酸钙和聚酰胺粉末，或这些物质的混合物。 喷雾剂可另外包含常规抛射剂，如氯氟代烃和挥发性未取代的烃如丁烷 和丙烷。
在某些实施方案中，将主题化合物制备成透皮贴剂的一部分。透皮 贴剂的附加优点是将本发明化合物有控制地传递到机体。制备此类剂型 可使抑制剂溶解或分散在合适介质中。还可用吸收促进剂增加抑制剂穿 透皮肤的流量。通过提供速率控制膜或者使化合物分散在聚合物基质或 凝胶中可控制这种流量的速率。
主题化合物的“游离碱形式”指该化合物不是用酸络合的形式，如不 是铵盐。可将此类形式加入贴剂中。应理解抑制剂可与如贴剂的药物保 留基质的成分结合，这样当实际用贴剂保留时，抑制剂就不一定要采用 游离碱形式。
贴剂优选包含药物不可渗透的背衬层。可用于透皮或含药贴剂的药 物不可渗透背衬层的合适实例包括聚烯烃、聚酯、聚氨酯、聚乙烯醇、 聚氯乙烯、聚偏二氯乙烯、聚酰胺、乙烯-乙酸乙烯酯共聚物(EVA)、乙 烯-丙烯酸乙酯共聚物(EEA)、乙酸乙烯酯-氯乙烯共聚物、乙酸纤维素、 乙基纤维素的膜或片、金属蒸汽沉积膜或其片、橡胶片或膜、伸展的合 成树脂片或膜、非机织物、织物、编结织物、纸和箔。优选药物不可渗 透的弹性衬垫材料选自聚对苯二甲酸乙二酯(PET)、聚氨酯、乙烯-乙酸 乙烯酯共聚物(EVA)、增塑的聚氯乙烯以及机织物和非机织物。特别优 选非机织的聚对苯二甲酸乙二酯(PET)。本领域技术人员将很清楚其它 衬垫。
术语“嵌段共聚物”在本发明的优选粘附剂中，指由两种或多种化学 上不同的聚合物结构组成、末端连接一起的大分子(Block Copolymers： Overview and Critical Survey，Noshay and McGrath，1977)。这些不同的聚 合物结构、部分或片段代表嵌段共聚物的“嵌段”。嵌段通常可按A-B结 构、A-B-A结构或多嵌段-(A-B)n-系统排列，其中A和B是化学上不同 的嵌段共聚物的聚合物片段。
通常优选嵌段共聚物具有A-B-A结构，特别优选其中一个A和B 是丙烯酸型聚合物单元。应理解本发明还适合用具有3个或更多不同嵌 段的嵌段共聚物，如A-B-C嵌段共聚物。然而，为方便起见，除非另有 说明，否则下文所称的嵌段共聚物将假定只有A和B亚单元，但应理解 这样的称呼还包括具有两个以上不同亚单元的嵌段共聚物。
应理解嵌段共聚物的特性很大程度取决于A和B嵌段的性质。嵌段 共聚物共同拥有“硬”和“软”片段。“硬”片段是玻璃转化温度(Tg)和/或熔 化温度(Tm)高于室温的聚合物，而“软”片段是Tg(可能是Tm)低于室温 的聚合物。认为不同片段为嵌段共聚物带来不同特性。尽管不受理论的 约束，但本申请人认为单独嵌段共聚物单元的硬链节的缔合导致嵌段共 聚物内的物理交联，从而促进嵌段共聚物的粘合特性。特别优选嵌段共 聚物的硬链节形成这样物理上紧密的缔合。
用于本发明的嵌段共聚物优选丙烯酸嵌段共聚物。在丙烯酸嵌段共 聚物中，至少一个嵌段共聚物的嵌段是丙烯酸聚合物或丙烯酸衍生物的 聚合物。聚合物可只由一种重复单体种类组成。然而，应理解可用单体 种类的混合物形成每个嵌段，以致嵌段本身就可以是共聚物。用不同单 体合并可影响所得嵌段共聚物的各种特性。具体来讲，改变所用单体的 比率或性质可调节如粘合(adhesion)、粘着(tack)和粘结(cohesion)的特 性，因此嵌段共聚物的软链节一般最好由一种以上单体种类组成。
优选将丙烯酸烷基酯和甲基丙烯酸烷基酯聚合形成嵌段共聚物的 软部分。认为丙烯酸烷基酯和甲基丙烯酸烷基酯提供粘着和粘合特性。 合适的丙烯酸烷基酯和甲基丙烯酸烷基酯包括丙烯酸正丁酯、甲基丙烯 酸正丁酯、丙烯酸己酯、丙烯酸2-乙基丁酯、丙烯酸异辛酯、丙烯酸2- 乙基己酯、甲基丙烯酸2-乙基己酯、丙烯酸癸酯、甲基丙烯酸癸酯、丙 烯酸十二烷基酯、甲基丙烯酸十二烷基酯、丙烯酸十三烷基酯和甲基丙 烯酸十三烷基酯，但本领域技术人员很清楚其它合适的丙烯酸酯和甲基 丙烯酸酯。优选丙烯酸嵌段共聚物包含至少50％重量的丙烯酸烷基酯或 甲基丙烯酸烷基酯(共)聚合物。
虽然软链节成分的变化影响嵌段共聚物的总体特性，但软链节的交 联保持基本特性。例如，软链节基本由双丙酮丙烯酰胺与丙烯酸丁酯(BA) 和/或丙烯酸2-乙基己酯(EHA)以大致相同的比例组成，以约3∶4∶ 4(DAA∶BA∶EHA)的重量比得到良好效果。例如，优选二丙酮丙烯酰胺或 其它极性单体如甲基丙烯酸羟乙酯或乙酸乙烯酯，占软链节单体混合物 不超过50％w/w，因为这可减弱粘合性。通过观察丙烯酸2-乙基己酯和 丙烯酸丁酯一起或各自的良好效果，通常可更自由地改变丙烯酸酯组 成。
如上所述，各种单体的比率通常优选大致相等。对于粘合剂，优选 极性成分占软链节50％或50％以下，非极性部分形成最多约85％w/w， 但优选约50-70％w/w。在以上实施例中，约72％(4+4)极性至约18％(3) 极性。
一般来讲，特别优选所用的任何非极性单体对粘合剂不产生酸性。 本发明的粘合剂优选基本中性，避免抑制剂任何不需要的变性。
为了允许广泛使用任何指定的粘合制剂，不必考虑它可能如何与其 环境在化学上相互作用，通常优选限制活性官能度，特别是具有活性氢 的那些。因此，在没有相反要求的情况下，通常优选化学上惰性的粘合 剂。
如上讨论，适合用作嵌段共聚物硬部分的聚合物具有高于室温的玻 璃转化温度。用于形成硬链节聚合物的合适单体包括苯乙烯、x-甲基苯 乙烯、甲基丙烯酸甲酯和乙烯基吡咯烷酮，但本领域技术人员很清楚其 它合适的单体。已发现苯乙烯和聚甲基丙烯酸甲酯适用于形成嵌段共聚 物的硬链节。优选嵌段共聚物的硬部分形成3-30％w/w总嵌段共聚物， 特别优选5-15％w/w。
嵌段共聚物的特征还在于软部分具有化学交联度。可用任何合适的 交联剂完成这样的交联。特别优选交联剂采用适合在聚合作用时加入软 链节的单体形式。优选交联剂每单体分子具有两种或多种完全聚合的基 团如乙烯基，至少一种在最初聚合时保持不变，从而允许所得嵌段共聚 物的交联。
用于本发明的合适的交联剂包括二乙烯苯、亚甲基双-丙烯酰胺、二 (甲基)丙烯酸乙二醇酯、四(甲基)丙烯酸乙二醇酯、二(甲基)丙烯酸丙二 醇酯、二(甲基)丙烯酸丁二醇酯或三羟甲基丙烷三(甲基)丙烯酸酯，但本 领域技术人员很清楚其它合适的交联剂。优选交联剂是二甲基丙烯酸四 乙二醇酯。优选交联剂包含约0.01-0.6％重量的嵌段共聚物，特别优选 0.1-0.4％重量。
众所周知由其单体组分制备嵌段共聚物的方法。可用任何合适的方 法如阶梯生长(step growth)、阴离子、阳离子和自由基方法制备本发明 的嵌段共聚物部分(Block Copolymers，同上)。自由基方法通常优于其 它方法，如阴离子聚合作用，因为不必纯化溶剂和单体。
聚合作用的合适引发剂包括每分子含一个以上过氧化物部分的聚 合过氧化物。一旦已经选择合适的引发剂，本领域技术人员很容易选择 适当的反应条件。
引发剂的用量优选占0.005-0.1％重量的嵌段共聚物，特别优选 0.01-0.05％重量，但应理解量的选择是本领域技术人员的技能。具体来 讲，优选该量不应多至使混合物立即胶凝，也不应少至减慢聚合作用和 剩余过量残留单体。残留单体的水平优选低于2000ppm。
还应理解引发剂的量将基本根据诸如引发剂本身和单体性质的考 虑而改变。
嵌段共聚物是粘合剂，优选压力敏感性粘合剂。可用手压将压力敏 感性粘合剂用于表面，不需要通过热、水或溶剂激活。这样，它们特别 适合用于本发明。
使用嵌段共聚物可不需要增粘剂，这样是特别有利的。然而，应理 解当要求或需要时嵌段共聚物也可与增粘剂组合使用，以改善粘性。本 领域技术人员熟知和清楚合适的增粘剂。
尽管不受理论的约束，但认为通常用疏水性相互作用组合的共聚物 软链节之间的化学交联或硬部分之间的物理交联组合形成“基质样”结 构。
只具有有硬部分的物理交联共聚物较不易形成这样的基质。相信嵌 段共聚物两种交联形式的组合提供良好的内部强度(粘结)以及还提供高 的药物贮存能力。
更具体来讲，认为硬链节缔合形成“岛”或结节，软链节从这些结节 发出或者位于结节之间。
岛之间的“海”中具有限定的物理结构，其中软链节是交联的，以便 不需要广泛地掺杂软链节。这导致整个嵌段共聚物的粘结力更大，同时 允许缩短软链节长度，允许岛之间的距离同样大或更大，从而允许更好 的药物贮存容量。
嵌段共聚物优选在除去溶剂后交联，以便交联在包衣后可定时发 生，这是优选方法。
因此，不仅可容易将嵌段共聚物包衣在表面上，还可在包衣前将全 部溶液贮存一段时间。因此，在制备贴剂的过程中，过程优选包括将溶 液中各软链节的单体组分聚合，然后将硬链节组分加入每种所得溶液 中，使所得混合物聚合，接着除去(如通过蒸发)任何溶剂或溶剂系统交 联。如果溶液将贮存任何一段时间，可能需要用已知方法避免聚合物沉 淀，如通过悬浮剂或振荡。还可能需要选择在溶剂蒸发之前基本不交联 的聚合物类型。
一般来讲，优选粘合剂包含最少数目的含活性氢的官能团，以避免 例如与需要加入粘合材料内的任何药物发生不需要的反应/相互作用。应 理解这只是优选的限制，本领域技术人员可特制任何粘合剂满足具体要 求。
用于形成硬链节的合适单体包括苯乙烯、a-甲基苯乙烯、甲基丙烯 酸甲酯和乙烯基吡咯烷酮，优选硬链节比例为5至15％w/w。具体来讲， 最好使用WO 99/02141的化合物，因为它可能将超过30％药物装入这样 的系统中。
因此，在本发明的贴剂中，通常可能根据患者体重计算需要的药物 量和确定含特定药物负荷量的适当的贴剂大小，这可由本领域技术人员 很容易确定。
在某些实施方案中，可加入小量增塑剂如肉豆蔻酸异丙酯(IPM)。 这有助于溶解抑制剂以及使粘合剂在皮肤上变得较少粗糙。通常用 2-25％重量水平，更优选3-20％水平，最优选5-15％水平，特别优选约 10％水平。也可用其它增塑剂，本领域技术人员很清楚合适的增塑剂。
增塑剂通常采用引入粘合聚合物内的油性物质形式。引入此类油性 物质的作用是软化粘合剂的物理结构，同时在粘合剂与皮肤之间的接触 面作用，从而多少促进粘合剂的弱化，减少脱落。
可在亲水溶剂特别是水和有机溶剂的存在下，用合适的碱将本化合 物的盐或任何其它合适的盐碱化，得到游离碱油状物。例如，大致相等 比例的水和乙酸乙酯效果较好，用氨水作为碱化剂。然后可除去水，将 制剂再用水或其它含水制剂洗涤，随后如在除去乙酸乙酯后，用醚适当 提取制剂。优选保持制剂在惰性气氛下，特别是在完成之后。
同时应理解一旦需要终止给药，可随时从患者处移走本发明的贴 剂，这样的缺点是提供了部分排出的贴剂药物滥用的潜在机会。滥用主 题化合物是非常不利的。
在某些实施方案中，可有利地使用特制贴剂，在用药后约8小时， 已经释放它在24小时内能够释放的大部分主题化合物，以便贴剂可留 在原位，仍有相当可观的药物水平减少。优选药物释放曲线具有一级动 力学，以便主要在白天释放大部分药物，即使患者忘记撕下贴剂，在一 天结束时药物量也趋向于耗尽，药物量迅速下降。
应理解本发明的贴剂可用透皮贴剂制备领域已知的任何合适的方 法制成。贴剂可由粘合剂、药物和衬垫简单组成，或者可以更复杂些， 如防止药物渗出贴剂侧面的边缘。贴剂还可以是多层的。
眼科制剂、眼膏、粉剂、溶液等也都包括在本发明的范围之内。
适合胃肠外给药的本发明药物组合物包含一种或多种本发明化合 物，以及与之组合的一种或多种药学可接受的无菌等渗水或非水溶液、 分散液、混悬液或乳液，或者在临用前才重新配制成无菌注射液或分散 液的无菌粉剂，其可包含抗氧化剂、缓冲剂、制菌剂、使制剂与预期接 受者的血液等渗的溶质、或者悬浮剂或增稠剂。
可用于本发明药物组合物的合适的水和非水载体实例包括水、乙 醇、多元醇(如甘油、丙二醇、聚乙二醇等)及其合适的混合物、植物油(如 橄榄油)和可注射的有机酯(如油酸乙酯)。例如通过用包衣材料(如卵磷 脂)，在分散剂的情况下通过维持需要的粒度，以及通过用表面活性剂， 可维持适当流动性。
这些组合物还可包含辅剂如防腐剂、湿润剂、乳化剂和分散剂。可 加入各种抗细菌和抗真菌剂如对羟基苯甲酸酯、三氯叔丁醇、苯酚山梨 酸等确保预防微生物的作用。还可需要将等渗剂，例如将糖、氯化钠等 包括在组合物内。另外，可通过加入延缓吸收剂如单硬脂酸铝和明胶实 现注射用药物形式的延长吸收。
在一些情况下，为了延长药物作用，需要减缓皮下或肌内注射药物 的吸收。这可通过用水溶性低的结晶或非晶体原料的混悬液实现。药物 的吸收速率则取决于其溶出速率，进而可依赖晶粒大小和晶形。或者， 使药物溶解或悬浮于油性溶媒中实现胃肠外给药的药物形式的延缓吸 收。
通过形成本化合物在生物可降解聚合物如聚丙交酯-聚乙交酯中的 微囊基质制备注射用贮库形式。根据药物与聚合物的比率以及所用具体 聚合物的性质，可控制药物的释放速率。其它生物可降解聚合物的实例 包括聚(原酸酯)和聚(酐)。还可通过使药物陷在与身体组织相容的脂质体 或微乳剂内制备贮库注射剂。
当本发明的化合物作为药物给予人和动物时，可以以其本身给予或 者作为包含如0.1-99.5％(更优选0.5-90％)活性成分(与药学可接受的载 体组合)的药物组合物给予。优选通过制备含有效量活性化合物的合适的 预混饲料并将预混料加入完全每日定量饮食(complete ration)内，将本发 明的活性化合物加入动物饲料中。
或者，可将含活性成分的中间浓缩或饲料补充剂混合入饲料内。可 这样制备和给予预混饲料和完全每日定量饮食的方法描述于参考书(例 如″Applied Animal Nutrition，″W.H.Freedman and Co.，San Francisco， U.S.A.，1969or″Livestock Feeds and Feeding″O and B books，Corvallis， Ore.，U.S.A.，1977)。
C.在细胞受体的生物化学活性以及检测该活性的测定法
测定方法已为本领域熟知，其中将试剂加入样品，测定样品和试剂， 确定试剂刺激的样品属性。例如，一种此类测定法包括在显色仪中测定 生物学样品或溶液中存在的酶量。此类测定是根据反应溶液中有色产物 的产生。当酶催化无色的显色底物向有色产物转化时发生反应。
用于本发明的另一种测定法包括用本领域熟知称为放射性配体结 合测定的技术测定配体与生物学受体结合的能力。这种测定法通过描述 总的和非特异性结合成分，准确测定放射性配体与靶受体的特异性结 合。
总结合的定义为快速分离在受体制剂(细胞匀浆和重组受体)中结合 与未结合的放射性配体后剩余的放射性配体量。非特异性结合成分的定 义为分离由受体、放射性配体组成的反应混合物和过量未标记配体之后 剩余的放射性配体量。在这种条件下，剩余的唯一放射性配体代表与受 体以外的成分结合。通过将总放射性结合减去非特异性结合确定特异性 放射性配体结合。关于μ-阿片受体的放射性配体测定的具体实例参见 Wang，J.B.et al.FEBS Letters 1994，338，217。
用于本发明的测定法包括测定受体活性，受体的激活启动后续的细 胞内事件，其中用细胞内贮备的钙离子的释放作为第二信使。一些G- 蛋白偶联受体的激活通过磷脂酶C-介导的磷脂酰肌醇水解，刺激形成三 磷酸肌醇(IP3，G-蛋白偶联受体第二信使)，Berridge and Irvine(1984). Nature 312：315-21。IP3转而刺激细胞内钙离子贮备的释放。
由细胞内贮备释放的钙离子引起的胞质钙离子水平改变被用于确 定G-蛋白偶联受体功能。这是另一类型的间接测定法。G-蛋白偶联受体 包括毒蕈碱乙酰胆碱受体(mAChK)、肾上腺素能受体、γ受体、5-羟色 胺受体、多巴胺受体、血管紧张素受体、腺苷受体、缓激肽受体、亲代 谢性(metabotropic)兴奋性氨基酸受体等。作为细胞内贮备和通过离子通 道激活促成的结果，表达此类G-蛋白偶联受体的细胞都可表现增加的胞 质钙水平，在这种情况下可能需要(但非必须)在无钙缓冲液(任选补充螯 合剂如EGTA)中进行这样的测定，将钙释放与内贮备引起的荧光反应区 分开来。另一类间接测定法涉及测定受体的活性，其中当激活时，引起 细胞内环核苷酸如cAMP、cGMP水平的改变。例如，一些多巴胺、5- 羟色胺、亲代谢性谷氨酸受体和毒蕈碱乙酰胆碱受体的激活导致胞质中 cAMP或cGNIP水平下降。
而且，有环核苷酸门控离子通道，如杆状光感受细胞通道和嗅神经 元通道[参见，Altenhofen，W.et al.(1991)Proc.Natl.Acad.Sci U.S.A. 88：9868-9872以及Dhallan et al.(1990)Nature 347：184-187]，在通过结合 cAMP或cGMP激活后可透过阳离子。光感受器或嗅神经元通道的环核 苷酸激活的量改变引起的胞质离子水平变化，可用于确定受体的功能， 当激活时导致cAMP或cGMP水平的改变。在受体激活导致环核苷酸水 平下降的情况下，优选在测定时将受体激活化合物加入细胞之前，使细 胞暴露于增加细胞内环核苷酸水平的试剂(如福斯高林)。可用编码环核 苷酸门控离子通道的DNA和编码受体(例如某些亲代谢性谷氨酸受体、 毒蕈碱乙酰胆碱受体、多巴胺受体、5-羟色胺受体等)的DNA与宿主细 胞共转染制备用于这类测定的细胞，当激活时，其引起胞质中环核苷酸 水平改变。
任何表达受体蛋白的细胞都可形成测定的基础，该蛋白激活后能够 直接增加细胞内钙浓度，如通过打开门控钙通道，或者间接影响细胞内 钙浓度，如通过启动用Ca2+为第二信使(如G-蛋白偶联受体)的反应。内 源性表达此类受体或离子通道的细胞以及可用编码一种或多种此类细 胞表面蛋白的合适的带菌体介质转染的细胞已为本领域技术人员所知， 或者可由本领域技术人员鉴定。虽然基本上任何表达内源性离子通道和 /或受体活性的细胞都可使用，但优选用编码此类离子通道和/或受体的 异源性DNAs转换或转染的细胞，以便主要表达单一类型的离子通道或 受体。已知多种可遗传上设计表达异源性细胞表面蛋白的细胞。此类细 胞包括但不限于幼仓鼠肾(BHK)细胞(ATCC号CCL10)、小鼠L细胞 (ATCC号CCLI.3)，、DG44细胞[参见，Chasin(1986)Cell.Moles.Genet. 12：555]、人胚肾(HEK)细胞(ATCC号CRL1573)、中国仓鼠卵巢(CHO) 细胞(ATCC号CRL9618、CCL61、CRL9096)、PC12细胞(ATCC号 CRL1721)和COS-7细胞(ATCC号CRL1651)。用于异源性细胞表面蛋白 的表达的优选细胞为很容易被有效转染的细胞。优选细胞包括HEK 293 细胞，如描述于美国专利号5,024,939的细胞。
已知可激活感兴趣的离子通道或受体的任何化合物都可用于启动 测定。根据感兴趣的离子通道或受体选择适当的离子通道-或受体-激活 剂是在本领域技术人员的技能范围内。通过加入钾盐溶液可实现细胞膜 的直接去极化以确定钙通道活性，该溶液的钾离子浓度使钾离子在含有 细胞的孔内的终浓度范围在约50-150mM(例如，50mM KCl)。关于配体 门控的受体和配体门控的离子通道，已知配体对此类受体具有亲和力和 激活作用。例如，已知烟碱乙酰胆碱受体可被烟碱或乙酰胆碱激活；同 样，毒蕈碱和乙酰胆碱受体可通过加入毒蕈碱或氨基甲酰胆碱激活。
如果要确定化合物对感兴趣的离子通道或受体的激活或增效产生 何种作用，可在已知具有离子通道和/或受体的细胞上进行激动剂测定。 还可用已知具有离子通道-或受体-激活能力的试剂进行激动剂测定，以 确定是否细胞表达感兴趣的各种功能性离子通道或受体。
用激动剂接触功能受体或离子通道通常激活暂时反应，长时间暴露 于激动剂可使受体或离子通道对后续激活的敏感性降低。因此，一般来 讲，应通过加入激动剂(即在用于启动反应的试剂溶液中)启动测定离子 通道或受体功能的分析。通过将在细胞中一些可观察到的改变(通常增 加，但某些受体的激活导致下降)与在相同细胞或者基本相同的细胞(处 理基本相同，但加入孔内的试剂中无激动剂(即对照))中观察的水平比 较，确定具有激动剂活性的化合物的效力。当用激动剂分析测试细胞是 否表达关注的功能受体或离子通道时，将已知的激动剂加入含测试细胞 的孔和含对照细胞(无特异性受体或离子通道的基本相同的细胞)的孔 内，比较检测到的水平。根据测定，缺乏关注的离子通道和/或受体的细 胞对已知的激动剂应观察不到增加。基本相同的细胞可衍生自同一细 胞，从中制备重组细胞，但不通过引入异源性DNA修饰。或者，它可 以是消除特异性受体或离子通道的细胞。在可观察到的水平上任何统计 学或者其它显著差异表明测试化合物以某种方式改变特异性受体或离 子通道的活性，或者测试细胞具有特异性功能受体或离子通道。
在鉴定具有调节感兴趣的离子通道或受体能力的化合物的药物筛 选测定实施例中，各孔(或双份重复孔等)包含明确细胞类型，或者表达 感兴趣的同源受体群体或离子通道的明确重组细胞系，以便可筛选具有 未鉴定的活性的化合物，以确定是否它对一种或多种大量的功能性离子 通道或受体具有调节活性。还预期具体各孔可包含相同细胞类型，以便 筛选多重化合物(在仪器中或包含在不同的孔内用不同试剂来源获得)， 并比较它们对一种具体受体或离子通道类型的调节活性。
包括药物筛选测定在内的激动剂测定可如下进行：在存在或不存在 一种或多种化合物的情况下，培养具有功能性离子通道和/或受体的细 胞，将其加入溶液内，使细胞沐浴在微量板各孔中一段足够的时间(至化 合物与感兴趣的离子通道和/或受体亲和的程度)，让化合物与受体和/或 离子通道结合，然后加入已知的激动剂激活离子通道或受体，测定在细 胞中观察到的水平，在无假定拮抗剂的存在下与同一细胞或基本相同的 细胞中观察到的水平比较。
因此测定法可用于快速筛选化合物，以鉴定调节细胞内任何受体或 离子通道的那些化合物。具体来讲，可将测定法用于测试对细胞受体的 功能性配体-受体或配体-离子通道的相互作用，包括配体-门控离子通 道、电压-门控离子通道、G-蛋白偶联受体和生长因子受体。
本领域技术人员将理解测定法可包括测定可检测的溶液改变，因为 细胞事件的结果允许能够区分特征的化合物改变其对细胞事件的反应 特征。通过选择能够对细胞事件的发生区分特征的特殊化合物，可进行 各种测定。例如，测定化合物诱导细胞损伤或细胞死亡的能力的分析可 通过用pH-敏感性荧光指示剂如BCECF(Molecular Probes，Inc.，Eugene， Oreg.97402，Catalog#B 1150)填充细胞，测定细胞损伤或细胞死亡作为 荧光改变对时间的函数来进行。
在有效测定法的又一个实施例中，测定表达此类受体并已经注射荧 光化合物(结合cAMP后荧光改变)的细胞时，可直接测定受体激活导致 胞质环核苷酸水平改变的功能。荧光化合物包含cAMP-依赖性蛋白激 酶，其中催化和调节亚单位各自用不同的荧光染料标记[Adams et al. (1991)Nature 349：694-697]。当cAMP与调节亚单位结合时，荧光发射 谱改变；这种改变可用作cAMP浓度改变的指征。
可通过此类神经元胞质内荧光的发生确定某些神经递质转运体(位 于两个神经元之间接合处的突触间隙)的功能，当氨基酸与荧光指示剂 (其中轭合物的荧光指示剂是乙酰氧基甲酯衍生物如5-(氨基乙酰氨基) 荧光素；Molecular Probes，Catalog#A1363)的轭合物通过神经递质转运 体转运入细胞胞质内时，其中通过酯酶活性分开酯基，轭合物呈现荧光。
在实施这类测定时，将报告基因构件插入真核细胞内，得到重组细 胞，在其表面上具有特殊类型细胞表面蛋白。细胞表面受体可内源性表 达，或者可以从引入细胞内的异源性基因表达。将异源性DNA引入真 核细胞的方法已为本领域熟知，任何这样的方法都可使用。另外，本领 域技术人员已知编码各种细胞表面蛋白的DNA，或者可用本领域技术人 员已知的任何方法克隆。
重组细胞与测试化合物接触，测定报告基因的表达水平。接触可在 任何介质中完成，可用任何方案(如连续稀释)通过任何方法测试，评估 本领域技术人员已知的特异性分子相互作用。在充分接触重组细胞完成 任何相互作用一段时间后，测定基因表达的水平。可按经验判断进行此 类相互作用的时间量，如通过进行一段时间并测定转录水平作为时间的 函数。可用本领域技术人员认为合适的任何方法测定转录量。例如，特 异性mRNA表达可用RNA印迹检测，或者特异性蛋白产物可用特征性 染色鉴定。然后将转录量与无测试化合物的同一细胞的转录量比较，或 者可与无特异性受体的基本相同的细胞中的转录量比较。基本相同的细 胞可来自相同细胞，从中制备重组细胞，但未引入异源性DNA修饰。 或者，它可以是除去特异性受体的细胞。转录量的任何统计学或其它显 著差异表明测试化合物以某种方式改变特异性受体的活性。
如果测试化合物不出现增强、激活或诱导细胞表面蛋白的活性，可 重复测定并引入修饰步骤，其中首先测试重组细胞在引入转录后，已知 的特异性受体激动剂或激活剂激活转录的能力，然后分析测试化合物抑 制、阻断或者影响激动剂活性的能力。
以转录为基础的测定有助于鉴定与任何细胞表面蛋白(其活性最终 改变基因表达)相互作用的化合物。具体来讲，该测定可用于测试大量各 类局限于细胞表面的受体(包括配体-门控离子通道和电压-门控离子通 道以及G蛋白偶联受体)的功能性配体-受体或配体-离子通道的相互作 用。
表达需要的细胞表面蛋白的任何可转移的细胞都可使用，表达的方 式使蛋白向细胞内转导细胞外信号。可选择内源性表达细胞表面蛋白的 细胞，或者可用基因工程进行。许多这样的细胞已为本领域技术人员所 知。这样的细胞包括但不限于Ltk-细胞、PC12细胞和COS-7细胞。
本领域技术人员已知或者本领域技术人员可鉴定的任何细胞表面 蛋白都可用于测定。细胞表面蛋白可内源性表达在选择的细胞上，或者 可用克隆DNA表达。示例性细胞表面蛋白包括但不限于细胞表面受体 和离子通道。细胞表面受体包括但不限于毒蕈碱受体(如人M2(GenBank 检索号M16404)；大鼠M3(GenBank检索号M16407)；人M4(GenBank 检索号M16405)；人M5(Bonner et al.(1988)Neuron 1：403-410)；等)；神 经元烟碱乙酰胆碱受体(如公开于美国序号504,455(1990年4月3日提 交)的α2、α3和β2亚型，其通过引用以其全部内容并入本文)；大鼠α2 亚单位(Wada et al.(1988)Science 240：330-334)；大鼠α3亚单位(Boulter et al.(1986)Nature 319：368-374)；大鼠α4亚单位(Goldman et al.(1987) cell 48：965973)；大鼠α5亚单位(Boulter et al.(1990)J.Biol.Chem. 265：4472-4482)；大鼠β2亚单位(Deneris et al.(1988)Neuron 1：45-54)； 大鼠β3亚单位(Deneris et al.(1989)J.Biol.Chem.264：6268-6272)；大鼠 β4亚单位(Duvoisin et al.(1989)Neuron 3：487-496)；大鼠α亚单位、β亚 单位以及α和β亚单位的组合；GABA受体(如牛α1和β1亚单位 (Schofield et al.(1987)Nature 328：221227)；牛α2和α3亚单位(Levitan et al.(1988)Nature 335：76-79)；γ-亚单位(Pritchett et al.(1989)Nature 338：582-585)；β2和β3亚单位(Ymer et alo(1989)EMBO J.8：1665-1670)； δ亚单位(Shivers，B.D.(1989)Neuron 3：327-337)；等)；谷氨酸受体(如分 离自大鼠脑部的受体(Hollmann et al.(1989)Nature 342：643-648)；等)； 肾上腺素能受体(如人β1(Frielle et al.(1987)Proc.Natl.Acad.Sci. 84.：7920-7924)；人α2(Kobilka et al.(1987)Science 238：650-656)；仓鼠 β2((Dixon et al.(1986)Nature 321：75-79)；等)；多巴胺受体(如人 D2(Stormann et al.(1990)Molec.Pharm.37：1-6)；大鼠(Bunzow et al.(1988) Nature 336：783-787)；等)；NGF受体(如人NGF受体(Johnson et al.(1986) Cell 47：545-554)；等)；5-羟色胺受体(如人5HTla(Kobilka et al.(1987) Nature 329：75-79)；大鼠5HT25HT2(Julius et al.(1990)PNAS 87：928-932)；大鼠5HTlc(Julius et al.(1988)Science 241：558-564)；等)。
通过用至少一种转录调控元件与报告基因活动性连接制备报告基 因构件。如果只包括一种转录调控元件，它必须是可调控的启动子。至 少一种所选转录调控元件必须由所选细胞表面受体的活性间接或直接 调控，从而可通过报告基因的转录监测受体的活性。
构件可包含另外的转录调控元件，如FIRE序列或其它序列，这些 序列不一定由细胞表面蛋白调控，但选择它是由于可减少本底水平转录 或者放大转导信号，从而增加测定的敏感性和可靠性。
许多报告基因和转录调控元件已为本领域技术人员所知，其它的可 通过本领域技术人员已知的方法鉴定或合成。
报告基因包括表达可检测的基因产物(可以是RNA或蛋白质)的任 何基因。优选的报告基因是很容易检测的那些基因。构件中包含的报告 基因还可采用与包含所需转录调控序列或表现其它所需特性的基因的 融合基因形式。
报告基因的实例包括但不限于CAT(氯霉素乙酰转移酶)(Alton and Vapnek(1979)，Nature 282：864-869)荧光素酶及其它酶检测系统，如β- 半乳糖苷酶；萤火虫荧光素酶(deWet et al.(1987)，Mot.Cell.Biol. 7：725-737)；细菌荧光素酶(Engebrecht and Silverman(1984)，PNAS 1： 4154-4158；Baldwin et al.(1984)，Biochemistry 23：3663-3667)；碱性磷酸 酶(Toh et al.(1989)Eur.J.Biochem.182：231-238，Hall et al.(1983)J. Mol.Appl.Gen.2：101)。
转录控制元件包括但不限于启动子、增强子和阻遏子和激活子结合 位点。合适的转录调控元件可来自基因的转录调控区，通常细胞表面蛋 白与调控细胞表面蛋白活性的效应予蛋白接触后几分钟之内快速诱导 该基因的表达。此类基因的实例包括但不限于早期快速反应基因 (immediate early genes)(参见Sheng et al.(1990)Neuron 4：477-485)，如 c-fos。早期快速反应基因是配体与细胞表面蛋白结合后快速诱导的基 因。优选用于基因结构的转录控制元件包括来自早期快速反应基因的转 录控制元件、来自其它表现早期快速反应基因的一些或全部特征的基因 的元件，或者形成与这样的基因活动性相连的结构从而表现此类特征的 合成元件。衍生转录控制元件的优选基因的特征包括但不限于在静止细 胞中表达低或检测不到、细胞外刺激后几分钟内在转录水平快速诱导、 诱导为短暂的且独立于新蛋白合成、接着关闭转录需要、新蛋白合成以 及从这些基因转录的mRNA半衰期短。不一定都出现所有这些特性。
D.本发明化合物的示例性用途
在各种实施方案中，本发明构思利用一种或多种主题抑制剂的治疗 和预防方法。这些药物可用于降低或预防在动物中导致CNS障碍缺陷 的作用，所述CNS障碍例如，抑郁、焦虑、睡眠障碍、肥胖症、注意 力缺陷障碍(ADD)、注意力缺陷伴多动障碍(ADHD)、性功能障碍、药物 滥用或运动障碍。在某些实施方案中，所述CNS障碍是，例如，抑郁、 睡眠障碍、肥胖症、注意力缺陷障碍(ADD)、注意力缺陷伴多动障碍 (ADHD)、性功能障碍、药物滥用或运动障碍。在某些实施方案中，所 述CNS障碍是，例如，抑郁或运动障碍。
在各种其它实施方案中，本发明构思用一种或多种主题抑制剂改变 导致CNS障碍的缺陷的治疗和预防方法。在生物体中精神或身体状态 的改善和/或恢复具有积极的行为、社会和心理学效应。
在某些实施方案中，主题方法可用于治疗已诊断患有以下疾病或者 有患以下疾病危险的患者：抑郁、焦虑、睡眠障碍、肥胖症、注意力缺 陷障碍(ADD)、注意力缺陷伴多动障碍(ADHD)、性功能障碍或药物滥用。 在某些实施方案中，主题方法可用于治疗已诊断患有以下疾病或者有患 以下疾病危险的患者：抑郁、睡眠障碍、肥胖症、注意力缺陷障碍(ADD)、 注意力缺陷伴多动障碍(ADHD)、性功能障碍或药物滥用。在某些实施 方案中，主题方法可用于治疗已诊断患有以下疾病或者有患以下疾病危 险的患者：抑郁。在其它实施方案中，主题方法可用于治疗已诊断患有 以下疾病或者有患以下疾病危险的患者：运动障碍。
帕金森氏病是第二种最常见的神经变性疾病，在北美影响接近1百 万人。该病的特征在于如肌肉强直、震颤和运动徐缓的症状。
帕金森氏病的早期研究显示在神经元胞质中有不常见的包涵物(即 路易体)，主要发生在神经支配前脑纹状体的黑质。虽然在其它神经变性 疾病中也发现路易体，但帕金森氏病中路易体的出现伴随黑质的细胞丧 失。认为这种细胞丧失为帕金森氏病的明确的病理学特征。
流行病学研究已经报道帕金森氏病发病率的地理变异，导致寻找环 境因素(Olanow and Tatton，Ann.Rev.Neurosci.，22：123-144[1998])。最近 发现1-甲基-4-苯基-1，2，3，6-四氢吡啶(MPTP)毒素引起与特发性疾病难以 区分的帕金森样综合征，提示帕金森氏病可由环境因素(如毒素和致病因 子)引起。(参见如Langston，Ann.Neurol.，44：S45-S52[1998])。
最近研究还鉴定了与帕金森氏病有关的基因(Mizuno et al.，Biomed. Pharmacother.，53(3)：109-116[1999]；Dunnett and Bjorklund，Nature 399 (6738Suppl)：A32-A39[1999])；即α-触核蛋白(synuclein)基因 (Polymeropouos et al.，Science 276：2045-2047[1997])、parkin基因(Kitada et al.，Nature 392：605-608[1998])和UCH-L1巯基蛋白酶基因(Leroy et al.， Nature 395：451-452[1998])。虽然已经鉴定与疾病状态有关的附加染色体 位点(loci)，但尚未在分子水平分析这些染色体位点。目前，仍不清楚这 些基因产物在正常细胞和病变神经元中发挥的生物化学作用，也没有开 发涉及它们用途的基因治疗方案。
而且，帕金森氏病与神经支配前脑主要的运动控制中枢纹状体的黑 质腹侧中脑多巴胺神经元的进行性丧失有关(Shoulson，Science 282： 1072-1074[1998])。虽然正常随着年龄增加，基底节的神经元数和多巴 胺含量逐渐下降，但在患帕金森氏病的人中多巴胺进行性丧失很明显， 当丧失约70-80％纹状体多巴胺和50％黑质多巴胺神经元时出现症状 (Dunnett and Bjorklund，同上)。认为引起多巴胺缺乏的这种产多巴胺神 经元的丧失导致帕金森氏病的运动症状。
虽然仍不清楚多巴胺能细胞死亡的原因，但相信多巴胺能细胞死亡 是由坏死和细胞凋亡共同引起。已经提出负责帕金森氏病中黑质多巴胺 神经元进行性神经变性的机制和信号(Olanow et al.，Ann.Neurol.， 44：S1-S196[1998])，包括氧化应激(来自活性氧种类的生成)、线粒体功 能障碍、兴奋毒性、钙失平衡、炎性改变以及凋亡，其作为帕金森氏病 神经元细胞死亡的促进和独立因素。
凋亡(即程序性细胞死亡)在神经系统发展中起重要作用(Oppenheim， Ann.Rev.Neurosci.，14：453-501[1991])，相信加速凋亡是许多神经变性 疾病的基础，包括帕金森氏病(Barinaga，Science 281：1303-1304[1998]； Mochizuki et al.，J.Neurol.Sci.，137：120-123[1996]；以及Oo et al.， Neuroscience 69：893-901[1995])。在活体系统中，可通过多种外界刺激 启动细胞凋亡，至少部分理解细胞内凋亡效应器的生物化学性质。
用于治疗帕金森氏病的药物包括左旋多巴、司来吉兰、阿朴吗啡和 抗胆碱能药。左旋多巴(左旋-二羟基-苯丙氨酸)(Sinemet)是多巴胺前体， 其可穿过血脑屏障，在脑内转化为多巴胺。不幸的是，左旋多巴在体内 的半衰期短，通常在长期使用(即约4-5年后)左旋多巴的作用变得偶尔 出现和不可预知，导致运动功能、动作困难和精神副作用波动。另外， 左旋多巴可导致出现B族维生素缺乏。
司来吉兰(苄甲炔胺，Eldepryl)已被用作左旋多巴的备选，通过减少 脑内多巴胺的破坏发挥作用。不幸的是，司来吉兰在使用约9个月后变 得无效。阿朴吗啡，一种多巴胺受体激动剂，已被用于治疗帕金森氏病， 但单独使用时引起剧吐，以及皮肤反应、感染、困倦和一些精神副作用。
全身给药的抗胆碱能药物(如苯海索和奥芬那君)也已用于治疗帕金 森氏病，通过减少脑内产生乙酰胆碱的量从而纠正帕金森氏病出现的多 巴胺/乙酰胆碱失衡发挥作用。不幸的是，约70％全身给予抗胆碱能药的 患者出现严重神经精神副作用，包括幻觉和运动障碍，以及抗胆碱能药 分布广泛引起的其它效应，包括幻视、吞咽困难、口干和尿潴留。参见 例如Playfer，J.R.，Parkinson’s Disease，Postgrad Med J，73；257-264：1997 以及Nadeau，S.E.，Parkinson’s Disease，J Am Ger Soc，45；233-240：1997。
最近提纯和开发的药物包括直接作用的多巴胺激动剂、缓释左旋多 巴制剂、多巴胺降解酶儿茶酚-O-甲基转移酶(COMT)和单胺氧化酶 B(MAO-B)的抑制剂以及多巴胺转运阻滞剂。这些治疗在帕金森氏病早 期增强中枢多巴胺能神经传递、缓解与帕金森氏病有关的症状以及暂时 改善生活质量。然而，尽管改善了用左旋多巴治疗帕金森氏病的用途， 但与这些多巴胺能疗法一致的疗效是暂时的，随着疾病进展它们的效能 减退。另外，这些治疗伴随严重不良的运动和精神作用，最明显是在峰 剂量下动作困难和药物功效的“开-关”波动现象(Poewe and Granata，in Moverment Disorders.Neurological Principles and Practice(Watts and Koller[eds])McGraw-Hill，New York[1997]；以及Marsden and Parkes， Lancet 1：345-349[1977])。目前没有药物疗法可有效减小黑质纹状体变性 的进展速度、延迟发病或者实质上减慢残疾出现(Shoulson，同上)。
其它治疗帕金森氏病的方法包括神经外科手术干预，如丘脑切开 术、苍白球切开术和深部脑刺激。基底节的丘脑输出是控制震颤的有效 损伤目标(即丘脑切开术)。丘脑切开术破坏涉及运动控制的脑区丘脑的 部分。已经证明单侧立体定向丘脑切开术可有效控制对侧震颤和强直， 但存在轻偏瘫的危险。两侧丘脑切开术使演讲和吞咽障碍的危险增加。
用立体定向苍白球切开术手术切除部分苍白球(基底节)也带来一些 成功。通过将钢丝探针插入苍白球并加热探针以破坏附近组织进行苍白 球切开术。苍白球切开术最常用于治疗峰剂量动作困难和剂量用完时出 现的肌张力障碍。
除了手术切除之外，已经发现在一些病例中将高频刺激电极置于腹 侧intermedialis核的深部脑刺激可抑制异常运动。有多种技术允许探针 精确定位，包括计算机断层摄影和磁共振成像。不幸的是，这些手术操 作对帕金森氏病的运动不能、演讲和步态障碍症状帮助很小，全部都导 致破坏性脑损伤。尽管已开发现代成像和手术方法来改善这些神经外科 手术干预治疗帕金森氏病震颤症状的有效性，但神经外科疗法并非广泛 适用。例如，丘脑切开术不能减轻运动不能症状，这是许多帕金森氏病 病人主要的功能残疾(Marsden et al.，Adv.Neurol.，74：143-147[1997])。
也已开发旨在控制与帕金森氏病有关的可疑诱发因素的治疗方法 (如控制氧化应激和兴奋毒性的疗法)。临床试验显示给予抗氧化剂维生 素E和丙炔苯丙胺只提供很小或者无神经保护功能(Shoulson et al.，Ann. Neurol.，43：318-325[1998])。虽然已经提出用谷氨酸受体阻滞剂和神经 元一氧化氮合酶(NOS)抑制剂治疗帕金森氏病，然而尚未公布来自人体 研究的试验结果(Rodriguez，Ann.Neurol.，44：S175-S188[1998])。
还研究在帕金森氏病中用神经营养因子刺激神经元恢复、存活和生 长的用途，特别是神经胶质细胞系衍生的神经营养因子(GDNF)的用途。 虽然GDNF蛋白防止一些多巴胺神经元死亡，但难以将GDNF蛋白提供 至脑内。而且，用这样的蛋白疗法一般是有问题的，因为蛋白分子在体 内快速降解，不能穿透血脑屏障，必须直接注入患者脑室内(Palfi et al.， Soc.Neurosci.Abstr.，24：41[1998]；Hagg，Exp.Neurol.，149：183-192 [1998]；和Dunnett and Bjorklund，同上)。根据体外和动物模型系统已 经提出其它可具有治疗价值的神经营养因子，包括neurturin、碱性成纤 维细胞生长因子(bFGF)、脑源性神经营养因子(BDNF)、神经营养因子3 和4/5、睫状神经营养因子和转化生长因子β(TGF-β)。然而，这些疗法 在人体的有效性仍不清楚。目前，没有报道单一化学化合物或肽可完全 保护多巴胺神经元免于tropic因子停药或神经毒素暴露引起的死亡。
细胞替代疗法作为治疗帕金森氏病的潜在方法也受到重视(Freed et al.，Arch.Neurol.，47：505-512[1990]；Freed et al.，N.Engl.J.Med.， 327：1549-1555[1992]；Lindvall et al.，Science 247：574-577[1990]；Spencer et al.，N.Engl.J.Med.，327：1541-1548[1992]；Widner et al.，N.Engl.J. Med.，327：1556-1563[1992]；Lindvall，NeuroReport 8：iii-x[1997]；Olanow et al.，Adv.Neurol.，74：249-269[1997]；和Lindvall，Nature Biotechn.， 17：635-636[1999])。这些神经移植疗法用植入纹状体内的细胞提供的多 巴胺作为由于神经变性已经丧失的黑质纹状体多巴胺能神经元的底物。 虽然动物模型和初步的人临床研究已经显示，细胞替代疗法可用于治疗 帕金森氏病，但移植神经元不能在纹状体内存活是发展细胞替代疗法的 主要障碍。
用于移植法的各种多巴胺能神经元来源已经在动物实验中进行尝 试，包括用来自人胚胎尸体的中脑多巴胺神经元、幼稚神经元前体细胞 (即神经元干细胞)、多巴胺分泌型非神经元细胞、末期分化的畸胎瘤衍 生的神经元细胞系(Dunnett and Bjorkland，同上)、基因修饰细胞 (Raymon et al.，Exp.Neurol.，144：82-91[1997]；以及Kang，Mov.Dis.， 13：59-72[1998])、克隆的胚胎细胞(Zawada et al.，Nature Medicine 4：569-573[1998])和异种细胞(Bjorklund et al.，Nature 298：652-654 [1982]；Huffaker et al.，Exp.Brain Res.，77：329-336[1989]；Galpem et al.， Exp.Neurol.，140：1-13[1996]；Deacon et al.，Nature Med.，3：350-353 [1997]；以及Zawada et al.，Nature Med.，4：569-573[1998])。但是，在目 前的移植方案中，不超过5-20％移植的多巴胺神经元存活。
还有另外的疗法，如物理疗法、职业疗法或演讲/语言疗法。运动、 饮食、营养、患者/护理员教育和精神社会干预也已显示对帕金森氏病病 人的精神和/或身体状态具有积极作用。
评估患者帕金森氏病的各种方法包括帕金森氏病的Hoehn-Yahr分 级、帕金森氏病统一等级评分表(UPDRS)和Schwab-England日常生活 活动量表。
罹患帕金森氏病的人应避免禁忌和潜在禁忌的药物如抗精神病药 氟哌啶醇(Haldol)、奋乃静(Trilafon)、氯丙嗪(Thorazine)、三氟拉嗪 (Stelazine)、氟奋乃静(Prolixin，Permitil)、替沃噻吨(Navane)、硫利达嗪 (Mellaril)；抗抑郁药，奋乃静和阿米替林合剂(Triavil)；止吐药，丙氯 拉嗪(Compazine)、甲氧氯普胺(Reglan，Maxeran)、硫乙拉嗪(Torecan)、 利血平(Serpasil)、丁苯那嗪(Nitoman)；血压药，α-甲基多巴(Aldomet)； 抗癫痫药，苯妥英(Dilantin)；情绪稳定药，锂；和抗焦虑药，丁螺环酮 (Buspar)。
范例
现在一般地描述本发明，通过参考以下实施例将更容易理解本发 明，这些实施例只用于说明本发明的某些方面和实施方案，并非意欲限 制本发明。
实施例1：多巴胺受体或转运体的拮抗作用和功能活性
用重组人细胞系在细胞测定中体外确定化合物的功能活性。根据 Gu等的方法(J.Biol.Chem.269：27124，1994)在人HEK-293细胞系中测 定对5-羟色胺吸收抑制的功能活性，用氟西汀(EC50＝57nM)作为参照 化合物。根据Galli等的方法(J.Exp.Biol.198：2197，1995)用MDCK细 胞系测定对去甲肾上腺素吸收抑制的功能活性，用地昔帕明(EC50＝7 nM)作为参照化合物。为了确定多巴胺功能活性，如Giros等(Mol. Pharmacol.42：383，1992)描述用hDAT细胞系，以诺米芬辛(EC50＝11 nM)为参照化合物。
表I、人(h)和大鼠(r)体外功能性吸收分布谱
化合物 DAT(h) NET(h) 5-HT(h) DAT(r) NET(r) 5-HT(r) (3) 1 200 825 50 300 5000 (1) 1 1000 5000 80 1000 5000 (5) 5 5000 5000 300 5000 5000 (6′) 3 3 R-DDMS 100 200 1500 100 180 1500 R-DMS 30 300 1500 70 180 1500 (13) ＜1 100 ＞2000 (14) ＜1 150 ＞2000 (15) ＜1 350 ＞2000 (16) ＜1 100 ＞2000 (17) 1 5 ＞2000 (18) 1 2 ＞2000 (19) 1 9 ＞2000 (20) 1 2 20 (21) 1 5 10
以上表I列出用几种主题化合物获得的典型结果，证明了任选与 NET和5-HT的功能性吸收结合时DAT功能性吸收的极好抑制作用。为 了比较，还列出两种对照化合物R-DDMS和R-DMS的结果。
根据这些结果，显然所选主题化合物是相当有选择性的DAT吸收 抑制剂。例如，(3)作为DAT抑制剂的选择性分别是NET和5-HT的200 倍和825倍。(1)的选择性分别是1000倍(NET)和5000倍(5-HT)。(5)的 选择性分别是1000倍(NET)和1000倍(5-HT)。化合物(13)、(14)、(15) 和(16)各自DAT的选择性分别是NET的至少100倍和5-HT的至少2000 倍。相反，R-DDMS对DAT的选择性只是NET的2倍，对DAT的选 择性为5-HT的15倍。同样，R-DMS对DAT的选择性为NET的10倍， 对DAT的选择性为5-HT的50倍。
一些化合物证实了DAT和NET吸收的抑制作用。例如，化合物(17)、 (18)和(19)各自证实了DAT和NET的抑制作用大于10nM效价。这些 化合物作为DAT和NET的选择性是5-HT的至少200倍。
一些化合物证实了DAT、NET和5-HT吸收的抑制作用。例如，化 合物(20)和(21)各自抑制了全部三种转动体的吸收，具有至少20nM的 效价。
用Galli等的方法(J Exp.Biol.198：2197，1995)测定本发明化合物体 外代替去甲肾上腺素配体的能力，用地昔帕明(IC50＝920nM)作为参照 化合物。用Gu等的方法(J Biol.Chem.269：7124，1994)测定多巴胺和5- 羟色胺配体的体外取代，用GBR-12909(IC50(DA吸收)＝490nM， IC50(5-HT吸收)＝110nM)作为参照化合物。本领域还有其它类似方法。
例如，在测定DAT的IC50的典型吸收分析时，在补充有0.1％D- 葡萄糖、1mM抗坏血酸、1mM环庚三烯酚酮[儿茶酚-O-甲基转移酶 (EC 2.1.1.6)-抑制剂]和10μM帕吉林(单胺氧化酶-B抑制剂)的 Krebs-Ringer′s-HEPES(KRH)缓冲液(125mM NaCl、4.8mM KCl、1.2mM MgSO4、1.2mM KH2PO4、1.3mM CaCl2、和25mM HEPES，pH 7.4)中 在室温下进行测定。测定之前，将表达DAT的细胞用KRH洗涤1次， 平衡5分钟。可将细胞在24孔板中测定，与氚化胺培养2-5分钟。将不 转运的抑制剂预培养5分钟，用氚化底物与底物一起应用。用冰冷的 KRH洗涤2次终止吸收测定，在0.2％SDS和0.1N NaOH中溶解细胞， 回收累积的放射性，在液体闪烁分析器1900TR(Packard，Meriden，CT) 上计数。可在10μM GBR12909(对于hDAT)的存在下测定非特异性吸 收。
测定DAT介导吸收的离子需要量的实验在KRH缓冲液中进行，用 氯化锂或氯胆碱代替NaCl(钠依赖性)或用D-葡糖酸盐代替NaCl和KCl， 用Ca(NO3)2代替CaCl2(氯依赖性)。在测定前将细胞用无钠或无氯的 KRH洗涤2次(每次洗涤至少5分钟)。在所有转运测定中，选择的培养 时间和底物浓度是使吸收遵守一级速率动力学。
在每次实验用至少两种胺的并行分析确定在稳定转染的DAT细胞 中胺吸收的Vmax值，以相对值表示。
表II代表了表格形式的典型结果。具体来讲，(3)对DAT(SLC6A3) 的IC50为1nM，相关NET(去甲肾上腺素转运体或SLC6A2)和5-HT受 体的IC50分别是150nM和550nM，表明(3)对DAT抑制作用不仅非常 有效，而且还很特异性(选择性比相关受体高150-550倍)。
对(1)也获得类似结果，其中对DAT的IC50也是1nM，相关NET 和5-HT受体的IC50分别是175nM和1200nM(选择性是相关受体的 175-1200倍)。对(5)也获得类似结果，其中对DAT的IC50是5nM，相 关NET和5-HT受体的IC50分别是870nM和10000nM(选择性是相关 受体的174-2000倍)。
表II.体外选择性一抑制谱
体外 (3) (1) (5) DAT(nM)IC50 1 1 5 NET(nM)IC50 150 175 870 5-HT(nM)IC50 550 1,200 10,000
在这些实验中，测试的(1)、(5)和(3)都是富集非对映体的外消旋混 合物。
还检测了两种典型的主题化合物(3)和(1)对一组其它受体的体外选 择谱，这些受体包括M1受体、组胺H1受体、σ-1(σ1)受体、β1-肾上腺素 能受体和多巴胺D2受体。典型结果在表III列出：
表III、对其他受体的体外选择谱
体外 (3) (1) M1(nM)h 5000 5000 组胺H1(nM)h 5000 5000 σσ1(nM)h 5000 5000 β1-肾上腺素能(nM)h 5000 5000 D2(nM)h 1000 1000
结果表明，这些主题化合物对这些其它非相关的或者更疏远的相关 受体都没有很高的选择性。
实施例2：几种示例性多巴胺转运体抑制剂的体内效力
用大鼠标准强迫游泳实验模型测定几种本发明的示例性抑制剂(1)、 (3)和(4)的体内效力。本研究的目的是评估测试化合物在大鼠行为绝望分 析中的抗抑郁作用，所用方法是描述于以下的修改方法：Porsolt R.D.et al.in Behavioural despair in rats：a new model sensitive to antidepressant treatment，Eur.J.Pharmacol.，47：379-391，1978；Porsolt et al.，Nature 266： 730-732，1977；以及Porsolt et al.，in Psychopharmacology，Olivier，Mos， and Slangen(eds)Birkhauser Verlag，Basel，pp.137-159，1991。简单来讲， 当小鼠(或大鼠)被迫在不可能逃出的圆筒内游泳时，它们很容易采用特 征性不动姿势，不再试图逃避，除了需要细小活动以保持漂浮外。有人 认为不动性反映“抑郁情绪”(Porsolt et al.，Nature 266：730-732，1977)，其 中动物停止努力逃离厌恶的处境(aversive situation)。过程引起的不动性 受多种抗抑郁药的影响(Porsolt et al.，in Psychopharmacology，Olivier， Mos，and Slangen(eds)Birkhauser Verlag，Basel，pp.137-159，1991)，且具 有良好的预知可靠性，因为它检测具有不同作用机制的抗抑郁药(TCA、 SSRI、MAOI及其它非典型药物)。该测试对骨骼肌松弛药(苯并二氮杂 类)和镇静剂(神经安定药)的作用敏感，导致增强不动性(Porsolt et al.， 同上)。
在典型实验中，将动物单个放于装有约20℃新鲜水的圆筒(如46×30 cm)内6分钟。由观察者每分钟测定动物的活动(或不动性)。更详细地讲， 在预测试期内事先训练动物，其中强迫各大鼠在装有维持在19-20℃的 水的垂直有机玻璃圆筒中游泳。在水中15分钟后，在加热箱内让它们 晾干15分钟。24小时后，将化合物经腹膜内或口服给予动物。给予测 试化合物1小时后，将动物放回装有水的圆筒内。在6分钟测试的后4 分钟测定不动的总持续时间。
结果用溶媒处理组的均值计算的不动总持续时间差异的百分数表 示(％差异＝[(溶媒的不动持续时间-测试化合物的不动持续时间)/(溶媒 的不动持续时间)]×100％)。只有表现统计学显著差异(如＞30％)的化合物 视为在该体内模型中有效。
为了测定本发明的抑制剂抑制大鼠DAT的体内效力，将一种测试 抑制剂((1)、(3)或(4))作为非对映体的外消旋混合物以各种剂量(如7.5 和15mg/kg)注入动物腹腔内。同样给予西布曲明(2.0和2.5mg/kg)、安 非他酮(7.5和10mg/kg)和丙咪嗪(30mg/kg)作为对照。图1表明在测试 剂量下，这些抑制剂的作用即使不优于市售药物西布曲明、安非他酮和 丙咪嗪，也是同样好。星号表示非常显著意义的统计学结果。
将第四种抑制剂(6)作为非对映体的外消旋混合物以35或75mg/kg 口服给药。同样给予西布曲明(5.0和3.75mg/kg)、安非他酮(30和40 mg/kg)和丙咪嗪(100mg/kg)作为对照。图3表示在测试剂量下，(6)的作 用即使不优于市售药物西布曲明、安非他酮和丙咪嗪，也是同样好。
同样，也将(1)作为富集(95∶5)非对映体的外消旋混合物以35或75 mg/kg口服给药。同样给予西布曲明(5.0和3.75mg/kg)、安非他酮(30 和40mg/kg)和丙咪嗪(100mg/kg)作为对照。图2表明在测试剂量下，(1) 的作用即使不优于市售药物西布曲明、安非他酮和丙咪嗪，也是同样好。
星号表示非常显著意义的统计学结果。
代表性化合物(3)和(1)的其它体外分布在以下表IV列出。
表IV.典型化合物的体内分布
体内(大鼠) (3) (1) T1/2(i.v.) 500分钟 200分钟 口服生物利用度 70％ 40％ 分布体积 10L/kg 6L/kg
实施例3：示例性多巴胺转运体抑制剂的毒理学分布谱
体内评估确定各种测试化合物在大鼠中的最大耐受剂量。静脉内给 予化合物，然后观察动物72小时。
表V概述3种本发明抑制剂(1)、(6)和(4)的急性单剂量毒理学分布 谱(profile)。
表V.急性单剂量毒理学分布谱
简单地讲，将不同剂量的各种抑制剂(如30、90、120和200mg/kg) 给予实验大鼠(每组5只动物)，记录观察到的毒理学反应。
如表V显示，(1)的大鼠耐受剂量低于120mg/kg，没有观察到与给 予药物有关的明显症状。在200mg/kg，动物出现握力下降和轻度抑郁。 动物耐受(6)更好，在200mg/kg的最高剂量也没有症状出现。然而，给 予(4)的大鼠在120mg/kg出现握力下降和肢体紧张以及惊厥，在200 mg/kg时出现惊厥。但该剂量约为图1所示有效剂量的10倍。
还进行(1)(给予富含对映体的非对映体)的多剂量毒理学研究，用西 布曲明作为对照。简单地讲，在7天的时间内，以约10mL/kg体重的剂 量体积将各种剂量的典型化合物(1)或者对照化合物西布曲明口服给予6 只Sprague-Dawley大鼠(3只雄性和3只雌性)。测试的口服剂量为50 mg/kg/天、100mg/kg/天、200mg/kg/天、和400mg/kg/天。典型结果在 下表VI中列出。
表VI.多剂量毒理学分布谱
结果表明在相同剂量下，实验动物耐受(1)优于西布曲明。例如，在 100mg/kg/天，用(1)处理的大鼠不出现任何明显症状。相反，用西布曲 明处理的大鼠表现握力下降、抑郁，甚至3只自残。直至剂量升高4倍 至400mg/kg/天才在(1)处理的大鼠中出现这样的症状。然而，在该剂量 用西布曲明治疗导致惊厥，6只实验动物中4只死亡。
实施例4：立体异构抑制剂对DAT、NET和/或SERT活性的拮抗作用
根据以下方法，测试了合成的立体异构体抗DAT、NET和SERT 的抑制活性。参比标准是以每一个分析的整体部分进行的，以确保所得 结果的可靠性。当出现时，IC50值是通过非线性、最小二乘法回归分析 法使用Data Analysis Toolbox(MDL Information Systems，San Leandro， CA，USA)确定的。当出现抑制常数(KD)时，计算(KD)值使用Cheng和 Prusoff方程(Cheng，Y.，Prusoff，W.H.，Biochem.Pharmacol.22：3099-3108， 1973)，使用观察的测试化合物的IC50、分析中所用的放射性配体的浓度、 和该配体K1的历史值(为MDS Pharma Services试验获得)。当出现时， 定义竞争结合曲线的斜率的Hill系数(n1/2)是使用Data Analysis Toolbox 计算的。参考文献：Giros B and Caron MG(1993)Trends Pharmacol Sci. 14：43-49；Galli A，De Felice L，Duke B-J，Moore K and Blakely R(1995) Am J Physiol.275(6Pt 1)：C1621-1629；Shearman LP，McReynolds AM， Zhou FC，Meyer JS.(1998)J Biol Chem.267(29)：20820-20825；以及Wolf WA and Kuhn DM(1992)；J Biol Chem.267(29)：20820-20825。
SERT分析
来源 人重组HEK-293细胞 配体 0.4nM[3H]帕罗西汀 溶媒 1％DMSO 培养时间/温度 60分钟@25℃ 培养缓冲液 50mM Tris-HCl，pH 7.4，120mM NaCl，5mM KCl 非特异性配体 10μM丙米嗪 KD 0.078nM BMAX 4.4p摩尔/mg蛋白 特异性结合 95％ 定量方法 放射性配体结合 显著性标准 ≥最大刺激或抑制的50％
DAT分析
来源 人重组CHO-K1细胞 配体 0.1nM[125I]RTI-55 溶媒 1％DMSO 培养时间/温度 3小时@4℃ 培养缓冲液 50mM Tris-HCl，pH 7.4，100mM NaCl，1μM亮肽酶 素(Leupeptin)，10μM PMSF 非特异性配体 10μM诺米芬辛 KD 0.58nM BMAX 0.047p摩尔/mg蛋白 特异性结合 90％ 定量方法 放射性配体结合 显著性标准 ≥最大刺激或抑制的50％
NET分析
来源 人重组MDCK细胞 配体 0.2nM[125I]RTI-55 溶媒 1％DMSO 培养时间/温度 3小时@4℃ 培养缓冲液 50mM Tris-HCl，pH 7.4，100mM NaCl，1μM亮肽酶 素(Leupeptin)，10μM PMSF 非特异性配体 10μM地昔帕明 KD 0.024μM BMAX 2.5p摩尔/mg蛋白 特异性结合 75％ 定量方法 放射性配体结合 显著性标准 ≥最大刺激或抑制的50％
实施例5：抑制剂的合成
以下部分详细描述几种本发明的示例性抑制剂的合成。然而，这些 描述/实施例只用于说明，不应视为只限于描述的化合物。技术人员通过 (或不需要)稍微修改下文描述的流程即可轻易合成本发明的其它相关化 合物。
除非另外注明，否则使用的试剂和溶剂来自商业供应商。质子和碳 核磁共振谱在Bruker AV 400上以400MHz质子和100MHz碳获得，或 者在Bruker AMX 500光谱仪上以500MHz质子和125MHz碳获得。波 谱以ppm(δ)表示。用四甲基硅烷作为质子谱的内标，用溶剂峰作为碳谱 的参考峰。HPLC分析在Waters 2695HPLC上，用Alltech Platinum C18 柱(53×7mm，)和220nm或254nm的UV检测器：，用标准溶剂 梯度程序(方法A)进行。质谱在Perkin Elmer Sciex API 150EX Turbo Ion Spray检测器：上获得。
HPLC方法A：
柱：Alltech Platinum C18柱，53×7mm，3μm；
柱温：40℃
流动相A：99.9∶0.1 水/TFA
流动相B：99.9∶0.1 乙腈/TFA
检测器：220nm或254nm
样品制备：溶解于乙腈或50∶50 乙腈/水
注射体积：10μL
梯度：
时间(分钟) 流量(mL/min) ％A ％B 0 2.5 5 95 1 2.5 5 95 8 2.5 95 5 10 2.5 5 95 12 2.5 5 95
制备106
收集A：制备2-Me-102
将无水乙醇(225mL)、浓盐酸(13.0g)、10％Pd/C(4.0g)和乙基-2- 甲基烟酸酯(15.0g，90.8mmol)装入400-mL Fisher-Porter反应器内。将 混合物加热至80℃，置于60psi氢气压下。然后在这些条件下将混合物 搅拌16小时。冷却和过滤混合物。减压蒸发滤液，得到胶粘固体。使 固体溶于水(25mL)中，用饱和碳酸氢钠将pH调节至pH 8.2。将溶液冷 冻干燥，得到2-Me-102(12.6g，81％)。1H NMR谱与指定的结构一致。
收集A：制备2-Me-104
在氩气下，将2-Me-102(10.5g，51.0mmol)和二氯甲烷(630mL)装入 配备机械搅拌器的1-L三颈圆底烧瓶内。在环境温度下搅拌的同时，加 入三乙胺(22.7g，224mmol)。然后，加入1-(4-氯苯基)-环丁烷羧酸(17.2 g，82.0mmol)，接着加入溴代三(吡咯烷子基)鏻六氟磷酸盐(″PyBroP，″ 39.2g，84.0mmol)。在氩气和环境温度下将混合物搅拌16小时。将10％ 氢氧化钾溶液(700mL)加入反应混合物内。然后加入乙酸乙酯(350mL)， 将混合物搅拌5分钟。分离各层，用乙酸乙酯(300mL)再提取水层。将 乙酸乙酯提取物合并，用无水硫酸镁干燥。将混合物过滤，减压蒸发滤 液，得到粗产物(57.2g)。将粗产物分成两等分。将每部分置于用60∶ 30∶1氯仿/乙酸乙酯/MeOH填充硅胶(750g)的100mm直径快速柱上。用 60∶30∶1氯仿/乙酸乙酯/MeOH洗脱各柱。将含最纯产物的部分合并， 减压蒸干溶剂。柱色谱法后，将纯化的2-Me-104(17.8g)离析成两份： (9.4g，50.5％)，HPLC(方法A)58.1％(AUC)，tR＝6.11min(参见附件 2)；和(8.7g，46.9％)，HPLC(方法A)76.5％(AUC)，tR＝6.10min。
收集A：制备2-Me-105
在氩气下将四氢呋喃(210mL)装入1-L三颈圆底烧瓶内，然后冷却 至0℃。在0℃下缓慢加入氢化铝锂(27.9g)。在单独的烧瓶内，使 2-Me-104(8.2g，22.5mmol)溶解于四氢呋喃(150mL)。将此2-Me-104的 溶液加入0℃的冷浆内。加入另外的四氢呋喃(50mL)，以冲洗残留物。 在氩气下将混合物搅拌16小时，让混合物温热至环境温度。将混合物 冷却至0℃，谨慎地加入水(200mL)。接着，加入15％硫酸，使pH降至 pH 3.3。加入饱和碳酸氢钠调节pH至pH 8.0。在布氏漏斗中分批(非常 缓慢)通过滤纸过滤固体。用乙酸乙酯(1×500mL，2×800mL)洗涤滤饼。 用这些洗涤物再提取水层。将乙酸乙酯提取物合并，经无水硫酸镁干燥， 然后过滤混合物。减压蒸发滤液得到粗产物(6.1g)。将粗产物与其它得 量(7.1g)合并，置于用60∶30∶1氯仿/乙酸乙酯/MeOH填充硅胶(800g) 的100mm直径快速柱上。用60∶30∶1氯仿/乙酸乙酯/MeOH洗脱柱。 将含最纯产物的部分合并，减压蒸干溶剂，得到纯化的2-Me-105(3.4g， 22.5％)：HPLC(方法A)92.8％(AUC)，tR＝4.79min。
收集A：制备2-Me-105甲磺酸酯中间体
将2-Me-105(3.4g，11.0mmol)和二氯甲烷(47mL)装入100-mL单颈 圆底烧瓶内。然后将二异丙基乙胺(3.6g，27.6mmol)加入烧瓶内，接着 加入甲磺酰氯(1.4g，12.2mmol)。将该反应混合物温热至轻微回流。将混 合物搅拌1小时，同时使其冷却至环境温度。减压蒸干反应混合物，得 到粗产物(7.3g)。将粗产物置于用230∶30∶3氯仿/乙酸乙酯/2M氨水甲 醇溶液填充硅胶(185g)的40mm直径快速柱上。用230∶30∶3氯仿/乙 酸乙酯/2M氨水甲醇溶液洗脱柱。将含最纯产物的部分合并，减压蒸干 溶剂，得到纯化的2-Me-105甲磺酸酯中间体(3.4g，79.8％)：HPLC(方法 A)98.8％(AUC)，tR＝5.15min。
收集A：制备2-Me-106
将2-Me-105甲磺酸酯中间体(3.4g，8.8mmol)和二甲基甲酰胺 (50mL)装入200-mL单颈圆底烧瓶中。向反应混合物内，加入α，α，α，-三 氟-p-甲酚(1.4g，8.8mmol)，接着加入碳酸铯(7.2g，22.1mmol)。将混 合物在预热的油浴(75℃)中搅拌4小时，然后不加热搅拌16小时，同时 冷却至环境温度。加入乙酸乙酯(140mL)，用盐水(3×100mL)洗涤混合 物。将乙酸乙酯层经无水硫酸镁干燥，然后过滤。减压蒸干滤液，得到 粗产物(4.0g)。将粗产物置于用460∶60∶3氯仿/乙酸乙酯/2M氨水甲醇溶 液填充硅胶(220g)的40mm直径快速柱上。用460∶60∶3氯仿/乙酸乙酯 /2M氨水甲醇溶液洗脱该柱。将含最纯产物的部分合并，减压蒸干溶剂， 得到纯化的2-Me-106(2.1g，52.5％)：LC/MS(离子喷射)m/z 452 [C25H29CIF3NO+H]+，HPLC(方法A)＞99％(AUC)，tR＝6.56min。1H NMR和13C NMR谱与指定的结构一致。
收集A：制备4-Me-101
将4-甲基烟酸盐酸盐(7.4g，42.8mmol)和盐酸/甲醇(200mL； 200mg/mL)装入500-mL三颈圆底烧瓶内。在轻微回流下将混合物加热5 小时，然后搅拌16小时，同时冷却至环境温度。在环境温度下搅拌15 小时后进行在线(in-process)HPLC[HPLC(方法A)：95.0％(AUC)，tR＝ 1.84min]。减压蒸干溶液，得到4-Me-101(10.9g，定量)。
收集A：制备4-Me-102
将甲醇(115mL)、浓盐酸(4.8g)、10％Pd/C(1.5g)和4-Me-101(10.9 g，42.8mmol)装入400-mL Fisher-Porter反应器内。将混合物加热至80℃ 并置于60psi氢气压力下。然后在这些条件下将混合物搅拌16小时。 冷却混合物，通过硅藻土床过滤。减压蒸发滤液，得到4-Me-102(9.6g， 定量)。1H NMR谱与指定的结构一致。
收集A：制备4-Me-104
在氩气气氛下，将4-Me-102(9.6g，42.8mmol)和二氯甲烷(535mL) 装入配备机械搅拌器的2-L三颈圆底烧瓶内。在环境温度下搅拌的同时， 加入三乙胺(19.1g，188mmol)。然后，加入1-(4-氯苯基)-环丁烷羧酸 (14.5g，68.8mmol)，接着加入溴代三(吡咯烷子基)鏻六氟磷酸盐 (PyBroP，32.9g，70.5mmol)。在环境温度和氩气下将混合物搅拌16小时。 将10％氢氧化钾溶液(650mL)加入反应混合物内。然后加入乙酸乙酯 (400mL)，将混合物搅拌5分钟。分离各层，用乙酸乙酯(400mL)再提 取水层。将乙酸乙酯提取物合并，经无水硫酸镁干燥。过滤混合物，减 压蒸发滤液，得到粗产物(47.1g)。将粗产物分成两等分。将第一部分置 于用60∶30∶1 CHCl3/EtOAc/MeOH填充硅胶(700g)的100mm直径快速柱 上。将该柱用60∶30∶1 CHCl3/EtOAc/MeOH洗脱。将第二部分置于用 160∶40∶1 CHCl3/EtOAc/MeOH填充硅胶(700g)的100mm直径快速柱上。 将该柱用160∶40∶1 CHCl3/EtOAc/MeOH洗脱。将含最纯产物的部分合 并，减压蒸干溶剂。将纯度较低的部分合并，减压蒸发溶剂，得到用于 第三个较小的柱的材料(3.2g)。柱色谱法后，将纯化的4-Me-104(11.4g) 离析成三份：(9.4g，35.4％)，HPLC(方法A)83.8％(AUC)，tR＝5.90min. (4.5g，30.2％)，HPLC(方法A)93.4％(AUC)，tR＝5.88min；和(1.6g， 10.4％)。
收集A：制备4-Me-105
在氩气下将四氢呋喃(300mL)装入2-L三颈圆底烧瓶内，然后冷却 至0℃。在0℃下缓慢加入氢化铝锂(38.7g)。在单独的烧瓶内，使分 成三份(5.3g，15.1mmol；4.5g，12.9mmol；和1.6g，4.4mmol)的 4-Me-104(11.4g)溶于四氢呋喃(250mL)中。将4-Me-104溶液加入0℃ 的LAH冷浆内。加入另外的四氢呋喃(25mL)冲洗残留物。在氩气下将 混合物搅拌16小时，让混合物温热至环境温度。将混合物冷却至0℃， 谨慎地加入水(300mL)。然后，加入15％硫酸，使pH降至pH 3.5。加 入碳酸氢钠固体调节pH至pH 7.6。在布氏漏斗中用硅藻土/滤纸将固体 分批过滤(非常缓慢)。用乙酸乙酯(1×250mL，2×400mL)洗涤滤饼。 分别用这些洗涤液再提取水层。将乙酸乙酯提取物合并，经无水硫酸镁 干燥，然后过滤混合物。减压蒸发滤液，得到粗产物(8.1g)。将粗产物 置于用160∶40∶1 CHCl3/EtOAc/MeOH填充硅胶(800g)的100mm直径快 速柱上。用60∶30∶1 CHCl3/EtOAc/MeOH洗脱该柱。将含最纯产物的部 分合并，减压蒸干溶剂，得到纯化的4-Me-105(2.8g，28.1％)：HPLC(方 法A)77.6％(AUC)，tR＝5.13min。
收集A：制备4-Me-105甲磺酸酯中间体
将4-Me-105(2.8g，9.1mmol)和二氯甲烷(40mL)装入100-mL单颈 圆底烧瓶内。接着，先后将二异丙基乙胺(2.9g，22.7mmol)和甲磺酰氯 (12g，10.0mmol)加入烧瓶中。使反应混合物温热至轻微回流。将混 合物搅拌1小时，同时冷却至环境温度。将反应混合物减压蒸干，得到 粗产物(5.7g)。将粗产物置于用230∶30∶3氯仿/乙酸乙酯/2M氨水的 MeOH溶液填充硅胶(200g)的40mm直径快速柱上。将该柱用230∶30∶3 氯仿/乙酸乙酯/2M氨水的MeOH溶液洗脱。将含最纯产物的部分合并， 减压蒸干溶剂，得到纯化的4-Me-105甲磺酸酯中间体(2.2g，62.7％)：
HPLC(方法A)91.6％(AUC)，tR＝5.26min。
收集A：制备4-Me-106
将4-Me-105甲磺酸酯中间体(2.2g，5.7mmol)和二甲基甲酰胺 (35mL)装入200-mL单颈圆底烧瓶内。向反应混合物中，先后加入α，α，α，- 三氟-p-甲酚-(0.9g，5.7mmol)和碳酸铯(4.7g，14.3mmol)。将混合物在 预热的油浴(75℃)中搅拌5小时，然后不加热搅拌16小时，同时冷却至 环境温度。加入乙酸乙酯(100mL)，用盐水(3×70mL)洗涤混合物。将乙 酸乙酯层用无水硫酸镁干燥，然后过滤。减压蒸干滤液，得到粗产物(38 g)。将粗产物置于用460∶60∶3氯仿/乙酸乙酯/2M氨水甲醇溶液填充硅胶 (215g)的40mm直径快速柱上。将该柱用460∶60∶3氯仿/乙酸乙酯/2M 氨水甲醇溶液洗脱。将含最纯产物的部分合并，减压蒸干溶剂，得到纯 化的4-Me-106(1.1g，43.1％)：LC/MS(离子喷射)m/z 452[C25H29ClF3NO +H]+；HPLC(方法A)93.8％(AUC)，tR＝6.64min。1H NMR和13C NMR 谱与指定的结构一致。
收集A：制备6-Me-102
将甲醇(300mL)、浓盐酸(13.0g)、10％Pd/C(4.0g)和甲基-6-甲基烟 酸酯(20.0g，132mmol)装入400-mL Fisher-Porter反应器内。将混合物 加热至80℃，置于60psi氢气压下。然后在这些条件下将混合物搅拌 21小时。冷却和过滤混合物。减压蒸发滤液，得到6-Me-102(27.0g， 定量)。1H NMR谱与指定的结构一致。
收集A：制备6-Me-104
在氩气气氛下，将6-Me-102(14.0g，72.3mmol)和二氯甲烷(900mL) 装入配备机械搅拌器的2-L三颈圆底烧瓶内。在环境温度下搅拌的同时， 加入三乙胺(32.2g，318mmol)。接着，先后加入1-(4-氯苯基)-环丁烷羧 酸(24.5g，116.2mmol)和溴代三(吡咯烷子基)鏻六氟磷酸盐(PyBroP， 55.5g，119.1mmol)。在环境温度和氩气下将混合物搅拌16小时。将10％ 氢氧化钾溶液(1.0L)加入反应混合物内。然后加入乙酸乙酯(500mL)， 将混合物搅拌5分钟。分离各层，用乙酸乙酯(500mL)再提取水层。将 乙酸乙酯提取物合并，经无水硫酸镁干燥。过滤混合物，减压蒸发滤液， 得到粗产物(74.3g)。将粗产物分成两等分。将每一部分置于用60∶30∶1 CHCl3/EtOAc/MeOH填充硅胶(800g)的100mm直径快速柱上。将各柱用 60∶30∶1 CHCl3/EtOAc/MeOH洗脱。将含最纯产物的部分合并，减压蒸 干溶剂。将纯度较小的部分合并，减压蒸发溶剂，得到用于第三个较小 的柱的材料(8.0g)。柱色谱法后，将纯化的6-Me-104(17.8g)离析成三份： (7.5g，29.7％)，HPLC(方法A)82.0％(AUC)，tR＝5.83min；(7.4g，29.3％)， HPLC(方法A)78.3％(AUC)，tR＝5.83min；(2.9g，11.5％)，HPLC(方法 A)80.0％(AUC)，tR＝5.82min。
收集A：制备6-Me-105
在氩气下将四氢呋喃(450mL)装入3-L三颈圆底烧瓶内，然后冷却 至0℃。在0℃下缓慢加入氢化铝锂(60.6g)。
在单独的烧瓶内，使三份(7.5g，21.4mmol；7.4g，21.2mmol；2.9g， 8.3mmol)的6-Me-104(17.8g)溶于四氢呋喃(400mL)中。将该6-Me-104 溶液加入0℃的LAH冷浆内。加入另外的四氢呋喃(50mL)冲洗残留物。 在氩气下将混合物搅拌16小时，让混合物温热至环境温度。将混合物 冷却至0℃，谨慎地加入水(350mL)。然后，加入1N硫酸(350mL)，使 pH降至pH7.7。在布氏漏斗中通过滤纸分批过滤固体(非常缓慢)。加入 另外的水(800mL)和乙酸乙酯(400mL)，以促进搅拌。分别用乙酸乙酯 (1×100mL)洗涤滤饼。这些洗涤液各自用于再提取水层。将乙酸乙酯提 取物合并，经无水硫酸镁干燥，然后过滤混合物。减压蒸发滤液，得到 粗产物(13.7g)。将粗产物置于用60∶30∶1 CHCl3/EtOAc/MeOH填充硅胶 (800g)的100mm直径快速柱上。用60∶30∶1 CHCl3/EtOAc/MeOH洗脱该 柱。将含最纯产物的部分合并，减压蒸干溶剂，得到纯化的6-Me-105(4.2 g)，分成三份：(1.7g，10.7％)，HPLC(方法A)86.6％(AUC)，tR＝4.88min； (1.9g，12.2％)，HPLC(方法A)85.4％(AUC)，tR＝4.92min；和(0.6g， 3.8％)，HPLC(方法A)81.3％(AUC)，tR＝4.83min。
收集A：制备6-Me-105甲磺酸酯中间体
将三份(1.7g，5.5mmol；1.9g，6.2mmol；和0.6g，1.9mmol)的 6-Me-105(4.2g)和二氯甲烷(70mL)装入200-mL单颈圆底烧瓶内。然后 将二异丙基乙胺(4.4g，33.8mm0l)和甲磺酰氯(1.7g，14.9mmol)先后加 入烧瓶内。使反应混合物温热至轻微回流。将混合物搅拌1小时，冷却 至环境温度。将反应混合物减压蒸干，得到粗产物(8.5g)。将粗产物置 于用230∶30∶2氯仿/乙酸乙酯/2M氨水的MeOH溶液填充硅胶(230g)的 40mm直径快速柱上。用230∶30∶2氯仿/乙酸乙酯/2M氨水的MeOH溶 液洗脱该柱。将含最纯产物的部分合并，减压蒸干溶剂，得到纯化的 6-Me-105甲磺酸酯中间体(2.4g，45.2％)：HPLC(方法A)87.2％(AUC)， tR＝5.17min。
收集A：制备6-Me-106
将6-Me-105甲磺酸酯中间体(2.4g，6.1mmol)和二甲基甲酰胺(38 mL)装入100-mL单颈圆底烧瓶中。向反应混合物内，先后加入α，α，α，- 三氟-p-甲酚(1.0g，6.1mmol)和碳酸铯(5.0g，15.3mmol)。将混合物在 预热的油浴(75℃)中搅拌4小时，然后不加热搅拌16小时，冷却至环境 温度。加入乙酸乙酯(100mL)，用盐水(3×70mL)洗涤混合物。将乙酸 乙酯液体经无水硫酸镁干燥，然后过滤。减压蒸干滤液，得到粗产物(3.9 g)。将粗产物置于用氯仿(460份)、乙酸乙酯(60份)和2M氨水/甲醇(3 份)填充硅胶(230g)的40mm直径快速柱上。用氯仿(460份)、乙酸乙酯 (60份)和2M氨水/甲醇(3份)的混合溶剂洗脱该柱。将含最纯产物的部 分合并，减压蒸干溶剂，得到纯化的6-Me-106(2.1g，76.2％)。LC/MS(离 子喷射)m/z 452[C25H29ClF3NO+H]+。HPLC(方法A)96.3％(AUC)，tR＝ 6.41min。1H NMR和13C NMR谱与指定的结构一致。
制备204
使201(0.942g，4.48mmol)和亚硫酰氯(2mL)的混合物回流加热3 小时。将反应混合物浓缩，用THF(2mL)稀释，真空浓缩得到油状物。 使油状物溶于THF(15mL)中，然后冷却至0℃。然后加入重氮甲烷(在 0℃下，用在15mL乙醚中的2g的1-甲基-3-硝基-1-亚硝基胍和在15mL 水中的1.36g氢氧化钠产生)。使所得溶液保持在0℃过夜。小心地加入 盐酸(5mL；4M)。使反应混合物保持在0℃达1小时，然后浓缩成油状 物。将油状物用硅胶柱色谱法纯化，用己烷/乙酸乙酯(90∶10)洗脱，得到 202为无色油状物。
向202(96mg，0.393mmol)在丙酮(0.5mL)中的溶液中加入碘化钠 (59mg，0.393mmol)。在室温下5分钟后，将该混合物加入203(127mg， 0.328mmol)和碳酸钾(226mg)在丙酮(0.5mL)中的混合物内。将所得混 合物加热至50℃达18小时。将所得混合物加热至50。C 18小时。将 反应混合物倒入水(20mL)中，用乙酸乙酯(2×20mL)提取。将有机提取 物合并，用盐水(15mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤和浓缩，得到黄 色油状物。将油状物用硅胶柱色谱法纯化，用己烷/乙酸乙酯/2N氨水的 乙醇液(80∶16∶4)洗脱，得到204，为无色油状物。
制备205
在0℃下向204(67.5mg，0.141mmol)在甲醇(1mL)中的溶液内加入 硼氢化钠(11mg，0.282mmol)。使反应混合物保持在室温2小时。将反 应混合物倒入水(10mL)中，用乙酸乙酯(2×15mL)提取。将有机提取物合 并，用盐水(10mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤和浓缩，得到无色油 状物。将油状物用硅胶柱色谱法纯化，用己烷/乙酸乙酯/2N氨水的乙醇 液(80∶16∶4)洗脱，得到205，为无色油状物。
制备立体异构的转运体抑制剂
进行示例性抑制剂立体异构体的立体选择性合成，例如，根据以下 操作。
使用得自商业供应商的试剂和溶剂。反应过程是通过薄层色谱法 (TLC)、高效液相色谱法(HPLC)、气相色谱-质谱法(GC-MS)或质子核磁 共振(1H NMR)分析法来监测的。执行TLC使用了Analtech硅胶板，通 过UV光(254nm)显影或者Hanessian/KMnO4/茚三酮染色。
GC Method
柱：Hewlett-Packard G1800A-GCD HP-5MS，30m×0.25mm×0.25 μm
载气：氦气，1mL/min
起始温度：100℃
终点温度：300℃
速率：20℃/min
注射温度：150℃
检测：EID，280℃
HPLC方法A
柱：Agilent Zorbax Eclipse XDB C18，4.6×150mm，4.6μm
柱温：环境温度
流动相A：0.1％TFA/水
流动相B：0.1％TFA/乙腈
检测器：235nm
样品制备：溶解于1∶1A/B
注射体积：5μL
方法A：中间体甲基哌啶类化合物的手性纯度的测定
时间(min) 流速(mL/min) ％A ％B 0 1.5 90 10 3 1.5 70 30 50 1.5 49 51 55 1.5 49 51 58 1.5 90 10 60 1.5 90 10
HPLC方法B
柱：Varian Intersil C4，4.6×150mm，5μm
柱温：环境温度
流动相A：0.1％TFA/水
流动相B：0.1％TFA in乙腈
检测器：235nm
样品制备：溶解于1∶1A/B
注射体积：5μL
方法B：用于在线分析和化学纯度测定
时间(min) 流速(mL/min) ％A ％B 0 1.5 99 1 30 1.5 1 99 35 1.5 1 99 40 1.5 99 1
HPLC方法C
柱：CHIRALPAK OJ，4.6×250mm
柱温：环境温度
流动相A：己烷
流动相B：EtOH
检测器：225nm
样品制备：溶解于A
注射体积：5μL
方法C：用于A序列的手性纯度
时间(min) 流速(mL/min) ％A ％B 0 0.5 80 20 30 0.5 80 20
HPLC方法D
柱：CHIRALPAK OD，4.6×250mm
柱温：环境温度
流动相A：己烷
流动相B：EtOH
检测器：225nm
样品制备：溶解于A
注射体积：5μL
方法D：用于B序列的手性纯度
时间(min) 流速(mL/min) ％A ％B 0 0.5 99.5 0.5 25 0.5 75 25 27 0.5 99.5 0.5 30 0.5 99.5 0.5
制备4-308α-Me
制备4-甲基哌啶-3-甲酸(4-301-Me)
给3个400-mL高压反应器装入去离子水(64mL)、NH4OH水溶液 (15M，20mL)、5％Rh/Al2O3(3g)和4-甲基烟酸盐酸盐(10g，57.8mmol)。 反应5天之后经1H NMR分析发现形成少于25％的产物。使催化剂和 碱的量加倍后，反应5天以上之后经1H NMR分析发现起始物质完全消 耗。合并上述三个反应混合物，通过硅藻土过滤，减压浓缩，得到粗制 的4-301-Me(35.7g，理论的62％)。
制备1-(叔丁氧基羰基)-4-甲基哌啶-3-甲酸(4-302-Me)
将二碳酸二叔丁酯(Boc2O，100.6g，461mmol)缓缓加至冰冷的 (0-5℃)4-301-Me(33.0g，231mmol)和三乙胺(Et3N，3.6mL，461mmol， 2.0当量)在1100mL二氯甲烷(CH2Cl2)中的溶液中。在室温下搅拌过夜 之后，GC-MS和1H NMR分析显示起始物质完全消耗。将反应混合物用 CH2Cl2(1000mL)和去离子水(400mL)稀释，相分离。用饱和碳酸氢钠 (NaHCO3，2×500mL)提取有机层。用6M HCl将合并的水层酸化至pH 4-5，然后用CH2Cl2(3×600mL)干燥，经硫酸镁(MgSO4)干燥，过滤， 浓缩，得到41.25g(74％，＞99％AUC，经GC-MS测得)的4-302-Me。此 物质未进一步纯化即用于下一反应。
制备4-甲基哌啶-1，3-二甲酸1-叔丁酯3-甲酯(4-302-Me)的混合物
将甲基碘(96.3g，678mmol)加至粗制的4-302-Me(41.3g，170mmol) 和碳酸铯(Cs2CO3，110.5g，339mmol)在73mL的N，N-二甲基甲酰胺 (DMF)中的混合物中，将反应混合物搅拌过夜。经GC-MS在线分析显示 反应完全。将反应混合物用2000m的乙酸乙酯(EtOAc)稀释，再用饱 和NaHCO3水溶液(3×400mL)和盐水(2×150mL)洗涤。使有机相干燥 (MgSO4)。除去溶剂之后，将残余物(58g)通过柱色谱法(硅胶，2至10％ EtOAc/庚烷)纯化，得到纯净的4-303β-Me(10.52g，24％，96.7％AUC， 经GC-MS测得)为无色油状物以及4-303α-Me/4-303β-Me的混合物(25.8 g，59％)，该混合物经差向异构体以制备4-303α-Me。
制备4-甲基哌啶-1，3-二甲酯1-叔丁酯3α-甲酯(4-303α-Me)
在氮气下历经5分钟将叔丁醇甲溶液(125mL，1.8M，在THF中，125 mmol)滴加至4-303α/β-Me(29.3g，114mmol，11∶89，经GC-MS测得)在 THF(308mL)中的溶液中，同时保持内部温度低于-75℃。使反应混合 物在-75℃下搅拌2小时，然后用水(300mL)猝灭。将反应混合物温热 至0℃，用1M HCl酸化至pH 6-7，用EtOAc(3×800mL)提取。将合 并的有机提取物用去离子水(500mL)洗涤，干燥(MgSO4)，过滤，浓缩 成残余物(29.3g)。将该残余物(4-303α-Me/4-303β-Me 8∶92，经GC-MS 测得)通过柱色谱法(硅胶，0至10％EtOAc/庚烷)纯化，得到纯净的 4-303α-Me(11.3g，39％，98.7％，AUC，经GC-MS测得)。
制备4-甲基哌啶-3-甲酸甲酯盐酸盐(4-304α-Me)
将在醚中的2M HCl溶液(34mL，68mmol)滴加至冰冷的4-303α-Me (2.3g，9.1mmol)在20mL甲醇(MeOH)中的溶液中。将反应混合物温热 至室温，再搅拌过夜。使反应混合物浓缩成残余物，用MTBE研磨，过 滤，得到4-304α-Me(1.25g，25％)。
制备4-甲基哌啶-3-甲酸甲酯(4-308α-Me)
将2M碳酸钾水溶液(50mL)加至在50mL二氯甲烷(CH2Cl2)中的 4-304α-Me(2.5g)中。使反应混合物在室温下搅拌20分钟(pH＞11.5)， 然后相分离。水层用CH2Cl2(2×20mL)提取。合并有机层，用盐水(10 mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，然后浓缩成残余物(4.31g，＞100％粗品)。
制备(15)
手性拆分4-甲基哌啶-3-甲酸甲酯(4-308α-Me)
在50-60℃下将N-乙酰基-L-亮氨酸的样品(4.21g，24.3mmol)溶解 于28mL乙醇(EtOH)中，然后小心加至4-308α-Me(4.31g，24.7mmol) 在145mL的EtOAc中的溶液中。在室温下搅拌1小时之后，观察到沉 淀。然后在室温下将反应混合物搅拌另外2液晶显示，过滤。滤饼用最 少量的EtOAc、接着用叔丁基甲基醚(MTBE)洗涤，干燥，得到1.91g(理 论的42％，89.4％ee，经Mosher’s酰基氯衍生化之后HPLC测定，HPLC 方法A)的白色固体。在手性纯度不符合规范的情况下(≥90％ee)，将该 亮氨酸盐转化成游离碱，然后将其重新历经手性拆分条件。
制备(3S，4R)-4-甲基哌啶-3-甲酸甲酯(4-308α1-Me)
将饱和碳酸氢钠水溶液(63mL)加至在63mL的CH2Cl2中的 4-309α1-Me(6.3g，19.0mmol)中。使反应混合物在室温下搅拌1小时， 然后相分离。水相用CH2Cl2(3×60mL)提取。合并有机相，用硫酸钠 (Na2SO4)干燥，浓缩，得到2.9g(97％)的4-308α1-Me(91％ee，经Mosher’s 酰基氯衍生化之后HPLC测定，HPLC方法A)。
制备(3S，4R)-1-[1-(4-氯苯基)环丁烷羰基]-4-甲基哌啶-3-甲酸甲酯 (4-305α1-Me)
向4-308α1-Me(2.8g，18mmol)和Et3N(10.1mL，72mmol)在CH2Cl2 (105mL)中的溶液中加入1-(4-氯苯基)-1-环丁烷甲酸(6.1g，29mmol)和 溴代三吡咯烷子基鏻六氟磷酸盐(PyBrOP，13.9g，30mmol)。使反应混 合物在室温下搅拌过夜，此后其经GC-MS分析被认为完全，用饱和 NaHCO3水溶液(160mL)猝灭。相分离，水相用EtOAc(2×40mL)提取。 合并有机相，干燥(Na2SO4)，过滤，浓缩至干燥。使残余物通过柱色谱 法(硅胶，5to 20％EtOAc/庚烷)纯化，得到4-305α1-Me(4.3g，68％)为 无色油状物。
制备{(3S，4R)-1-[1-(4-氯苯基)环丁基]甲基}-4-甲基哌啶-3-基甲醇 (4-306α1-Me)
将4-305α1-Me(4.3g，12.3mmol)在THF(65mL)中的溶液滴加至冰 冷的氢化铝锂溶液(30.8mL，1.0M，在THF中)中。将反应混合物在室温 下搅拌16小时，然后冷却至0℃，再用去离子水(7.5mL)和1M NaOH 水溶液(13mL)猝灭。使反应混合物温热至室温，再搅拌1小时。将所得 固体过滤，浓缩滤液，再与甲苯(2×60mL)共沸。将所得残余物溶解于 CH2Cl2(60mL)，再使用饱和NaHCO3水溶液(2mL)将pH调节至约7。 将有机层用盐水(60mL)洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤，浓缩，得到粗制的 4-306α1-Me(3.26g，86％)为黄色油状物。此物质未经进一步纯化即引向 前面。
制备{(3S，4R)-1-[1-(4-氯苯基)环丁基]甲基}-4-甲基哌啶-3-基甲基甲 磺酸盐(4-307α1-Me)
将甲磺酰氯(1.2mL，1.5当量)滴加至冰冷的4-306α1-Me(3.2g，10.4 mmol)和二异丙基乙胺(DIEA，4.5mL，2.5当量)在CH2Cl2(48mL)中的溶 液中。使反应混合物在室温下搅拌14小时，经TLC分析(9∶1 CH2Cl2/MeOH)确认完全。加入去离子(DI)水(30mL)，分离各层。水层用 CH2Cl2(2×20mL)提取。将合并的有机层用盐水(2×25mL)洗涤，干燥 (MgSO4)，过滤，浓缩至干燥。将所得残余物通过柱色谱法(0至1％ MeOH/CH2Cl2)纯化，得到4-307α1-Me为黄色油状物(2.8g，70％，92.2％ AUC，经HPLC测得)。
制备(3S，4R)-1-{[1-(4-氯苯基)环丁基]甲基}-4-甲基-3-{[4-(三氟甲基) 苯氧基]甲基}哌啶(15)
将4-三氟甲基苯酚(1.18g，7.3mmol)和碳酸铯(4.05g，21.0mmol) 加至4-307α1-Me(2.7g，7.0mmol)在DMF(95mL)中的溶液中。将所得 混悬液在75℃下加热3小时。经HPLC分析确认反应完全，再冷却至 室温，用去离子水(30mL)稀释，用EtOAc(3×30mL)提取。将合并的 有机层用去离子水(3×30mL)和盐水(30mL)洗涤，干燥(MgSO4)，过滤， 浓缩成残余物。经柱色谱法(5％EtOAc/庚烷)纯化，得到15[2.2g，70％， 92.0％AUC，经HPLC测得(方法A)，97.7％AUC手性纯度，经HPLC 测得(方法C)]为白色半固体。
制备(14)
制备(3R，4S)-4-甲基哌啶-3-甲酸甲酯N-乙酰基-D-亮氨酸盐 (4-309α2-Me)
在50-60℃下将N-乙酰基-D-亮氨酸样品(2.7g，15.5mmol)溶解于 18mL的EtOH中，然后小心加至4-308α-Me(2.7g，17.2mmol)在92mL 的EtOAc中的溶液中。添加约9mL的N-乙酰基-D-亮氨酸溶液之后观察 到沉淀。然后使反应混合物在室温下搅拌2小时，过滤。滤饼用最少量 的EtOAc、接着用MTBE洗涤，干燥，得到2.6g(90.1％ee，经Mosher’s 酰基氯衍生化之后HPLC测定，HPLC方法A)的4-309α2-Me为白色固 体。
制备(3R，4S)-4-甲基哌啶-3-甲酸甲酯(4-308α2-Me)
将饱和NaHCO3水溶液(90mL)加至在CH2Cl2(90mL)中的 4-309α2-Me(8.9g，27mmol)中。使反应混合物在室温下搅拌2小时，然 后相分离。水相用CH2Cl2(3×50mL)提取。合并有机相，干燥 (MgSO4)，浓缩成残余物，得到3.5g(83％)的4-308α2-Me(90％ee，经 Mosher’s酰基氯衍生化之后HPLC测定，HPLC方法A)。
制备(3R，4S)-1-[1-(4-氯苯基)环丁烷羰基]-4-甲基哌啶-3-甲酸甲酯 (4-305α2-Me)
向4-308α2-Me(3.5g，22mmol)和Et3N(12.4mL，89mmol)在CH2Cl2 (105mL)中的溶液中加入1-(4-氯苯基)-1-环丁烷甲酸(7.5g，36mmol)和 溴代三吡咯烷子基鏻六氟磷酸盐(17.1g，37mmol)。将反应混合物在室温 下搅拌18小时，用饱和NaHCO3水溶液(200mL)猝灭。水相用EtOAc(2 ×50mL)提取。合并有机相，干燥(MgSO4)，过滤，浓缩至干燥。使残 余物通过硅胶柱色谱法(5至20％EtOAc/庚烷)纯化，得到5.4g(69％) 的4-305α2-Me(91％AUC，经HPLC测得)。
制备{(3R，4S)-1-[1-(4-氯苯基)环丁基]甲基}-4-甲基哌啶-3-基甲醇 (4-306α2-Me)
将4-305α2-Me(5.4g，15.4mmol)在THF(80mL)中的溶液滴加至冰 冷的氢化铝锂溶液(39mL，1.0M，在THF中)中。使反应混合物在室温 下搅拌18小时。使反应混合物冷却至0℃，用去离子水(10mL)和NaOH 水溶液(15mL)猝灭，再在室温下搅拌另外小时，然后过滤。减压浓缩滤 液，再溶解于CH2Cl2(50mL)。使用饱和NaHCO3水溶液将所得溶液的 pH调节至约7，分离各层。有机相用盐水(30mL)洗涤，干燥(MgSO4)， 过滤，减压浓缩。将所得残余物通过硅胶柱色谱法(0至5％ MeOH/CH2Cl2)纯化，得到2.9g(61％)的4-306α2-Me(74％AUC，经HPLC 测得)。
制备{(3R，4S)-1-[1-(4-氯苯基)环丁基]甲基}-4-甲基哌啶-3-基甲基甲 磺酸盐(4-307α2-Me)
将甲磺酰氯(1.1mL，14mmol)滴加至冰冷的4-306α2-Me(2.9g，9 mmol)和DIPEA(4.1mL，24mmol)在CH2Cl2(45mL)中的溶液中。使反 应混合物在室温下搅拌18小时。加入去离子水(50mL)，分离各层。将 有机层用盐水(2×25mL)洗涤，干燥(MgSO4)，过滤，浓缩至干燥。将 所得残余物通过硅胶柱色谱法(0至2％MeOH/CH2Cl2)纯化，得到1.9g 的4-307α2-Me，HPLC测得纯度为85％(AUC)，以及1.0g的4-307α2-Me， HPLC测得纯度为60％(AUC)。在制备(14)中将这两批料分别带到前面。
制备(3R，4S)-1-{[1-(4-氯苯基)环丁基]甲基}-4-甲基-3-{[4-(三氟甲基) 苯氧基]甲基}哌啶(14)
将4-三氟甲基苯酚(0.71g，4.4mmol)和碳酸铯(2.42g，12.6mmol) 加至4-307α2-Me(1.9g，4.2mmol，85％AUC，经HPLC测得)在DMF(30 mL)中的溶液中。将该混悬液在75℃下加热2小时。经HPLC在线分析 显示反应完全。将反应混合物用去离子水(25mL)稀释，用EtOAc(3×25 mL)提取。将合并的有机层干燥(MgSO4)，通过硅藻土过滤，浓缩成残余 物(4.5g)。根据TLC图谱，将粗产物与另一批(1.4g)合并，用于硅胶柱 色谱法纯化(5％EtOAc/庚烷)，得到2.5g[89％，94.2％AUC，经HPLC测 得(方法A)；96.4％AUC手性纯度，经HPLC测得(方法C)]的(14)。
将4-三氟甲基苯酚(0.26g，1.6mmol)和碳酸铯(0.90g，4.7mmol)加 至4-307α2-Me(1.0g，1.6mmol，60％AUC，经HPLC测得)在DMF(15 mL)中的溶液中。将该混悬液在75℃下加热2小时。经HPLC在线分析 显示反应完全。将反应混合物用水(15mL)稀释，用乙酸乙酯(3×15mL) 提取。将合并的有机层干燥(MgSO4)，通过硅藻土过滤，浓缩成残余物 (1.4g)。
制备(16)
制备4-甲基哌啶-3-甲酸甲酯盐酸盐(4-304β-Me)
将2M HCl在醚中的溶液(60mL，120mmol)滴加至4-303β-Me(4.11 g，16mmol)在MeOH(50mL)中的溶液中。将反应混合物温热至室温， 再搅拌过夜。将反应混合物浓缩成残余物，使其用MTBE研磨，过滤， 得到4-304β-Me(2.57g，83.2％)。
手性拆分4-甲基哌啶-3-甲酸甲酯(4-308β-Me)
将2M碳酸钾水溶液(15mL)加至在20mL的CH2Cl2中的4-304β-Me (2.5g)中。使反应混合物在室温下搅拌20分钟(pH＞11.5)，然后相分 离。水层用CH2Cl2(2×10mL)提取。合并有机层，用盐水(10mL)洗涤， 干燥(Na2SO4)，过滤，浓缩成残余物(2.05g，＞100％，粗品)的4-308β-Me， 其未进一步纯化即用于拆分。
手性拆分：制备(3S，4S)-4-甲基哌啶-3-甲酸甲酯N-乙酰基-L-亮氨 酸盐(4-309β1-Me)
在50-60℃下将N-乙酰基-L-亮氨酸的样品(151mg，0.9mmol)溶解 于1.5mL的EtOH中，然后小心加至4-308β-Me(150mg，1mmol)在5mL 的EtOAc中的溶液中。在室温下搅拌10分钟之后，观察到沉淀。将反 应混合物在室温下搅拌2小时，过滤。滤饼用最少量的EtOAc、接着 用MTBE洗涤，干燥，得到126mg(理论的79％，92％ee，经Mosher’s 酰基氯衍生化之后HPLC测定，HPLC方法A)的白色固体。在进一步放 大规模时，观察到低手性纯度，这有必要在转化成游离碱之后重新使该 物质手性拆分。
制备(3S，4S)-4-甲基哌啶-3-甲酸甲酯(4-308β1-Me)
将饱和碳酸氢钠水溶液(200mL)加至在CH2Cl2(200mL)中的 4-309β1-Me(13g)中。使反应混合物在室温下搅拌2小时，然后相分离。 水层用CH2Cl2(2×100mL)提取。合并有机层，干燥(Na2SO4)，浓缩， 得到4-308β1-Me(4.3g，理论的70％)为混浊的油状物。
制备(3S，4S)-1-[1-(4-氯苯基)环丁烷羰基]-4-甲基哌啶-3-甲酸甲酯 (4-305β1-Me)
向4-308β1-Me(3.93g，25.0mmol)和Et3N(14.0mL，100.0mmol)在 CH2Cl2(200mL)中的溶液中加入1-(4-氯苯基)-1-环丁烷甲酸(6.3g，30.0 mmol)和溴代三吡咯烷子基鏻六氟磷酸盐(14.0g，30.0mmol)。将反应混 合物在室温下搅拌14小时，通过GC-MS分析确认完全。将反应混合物 用CH2Cl2(600mL)稀释，再用去离子水(150mL)、NaHCO3水溶液(2× 150mL)和去离子水(100mL)洗涤。使有机相干燥(Na2SO4)，过滤，浓缩 至干燥。使残余物通过硅胶柱色谱法(30％EtOAc/庚烷)纯化，得到 9.9g(＞100％，粗品)的4-305β1-Me为澄清油状物。
制备{(3S，4S)-1-[1-(4-氯苯基)环丁基]甲基}-4-甲基哌啶-3-基甲醇 (4-306β1-Me)
将4-305β1-Me(8.75g，25.0mmol)在THF(440mL)中的溶液滴加至 冰冷的氢化铝锂溶液(75.0mL，1.0M，在THF中)中。使反应混合物在室 温下搅拌18小时。使反应混合物冷却至0℃，再用去离子水(1.5mL)猝 灭，保持温度低于2℃。所得反应混合物在室温下搅拌1小时，此后滤 出固体。浓缩滤液，得到粗制的4-306β1-Me(7.6g)。使用硅胶柱色谱法 (1至3％MeOH/CH2Cl2)纯化，得到4-306β1-Me为无色油状物(3.7g， 48％)。
制备{(3S，4S)-1-[1-(4-氯苯基)环丁基]甲基}-4-甲基哌啶-3-基甲基甲 磺酸盐(4-307β1-Me)
将甲磺酰氯(1.4mL，1.5当量)滴加至冰冷的4-306β1-Me(3.6g，11.7 mmol)和DIPEA(5.1mL，2.5当量)在CH2Cl2(54mL)中的溶液中。使反 应混合物在室温下搅拌15小时。TLC分析(9∶1CH2Cl2/MeOH)显示未完 全反应。在0℃下加入另外的0.5mL(0.5当量)甲磺酰氯。将反应混合 物在室温下搅拌另外1.5小时，通过TLC分析确认完全。加入去离子水 (10mL)，分离各层。将有机层用盐水(2×25mL)洗涤，干燥(Na2SO4)， 过滤，浓缩至干燥。将所得残余物通过柱色谱法(0至3％MeOH/CH2Cl2) 纯化，得到4-307β1-Me为黄色油状物(3.65g，81％)。
制备(3S，4S)-1-{[1-(4-氯苯基)环丁基]甲基}-4-甲基-3-{[4-(三氟甲基) 苯氧基]甲基}哌啶(16)
将4-三氟甲基苯酚(1.9g，11.9mmol，1.3当量)和碳酸铯(9.1g，27.9 mmol，30当量)加至4-307β1-Me(3.6g，9.3mmol)在DMF(120mL)中的 溶液中。将该混悬液在85℃下加热2.5小时，通过HPLC分析确认完全。 将反应混合物用去离子水(300mL)稀释，接着相分离。将有机层用去离 子水(3×100mL)和盐水(3×100mL)洗涤，干燥(Na2SO4)，通过硅藻土 过滤，浓缩成残余物(4.69g)。用硅胶(3％EtOAc/庚烷)柱色谱法纯化， 得到0.9g的(16)，其经HPLC分析测得为93.8％AUC。获得两个其它低 纯度的批料(1.9g，49％AUC，经HPLC测得；和0.5g，72.9％AUC，经 HPLC测得)。经硅胶柱色谱法进一步纯化，得到0.42g[98.6％AUC，经 HPLC测得(方法A)；96.4％AUC手性纯度，经HPLC测得(方法C)]的 (16)，其余物质丢失在柱中。
制备手性纯顺式-6-甲基哌啶-3-甲酸甲酯类化合物
制备6-甲基哌啶-3-甲酸甲酯盐酸盐(6-302-Me)
在95℃下，在浓HCl(193mL)和10％Pd/C(173g)存在下，使340g 的6-301-Me在6040mL的MeOH中的溶液历经氢化(在180-200psi的 氢气下)达2小时。经1H NMR在线分析显示反应完全。使反应混合物冷 却至室温，再通过硅藻土过滤，浓缩滤液，得到256.9g(60％)的粗制的 6-302-Me为油状残余物。此物质未经进一步纯化即用于后续反应。
制备反式-甲基6-甲基哌啶-1，3-二甲酸1-叔丁酯3-甲酯(6-303α-Me) 和顺式-甲基6-甲基哌啶-1，3-二甲酸1-叔丁酯3-甲酯(6-303β-Me)
在氮气和0℃下，向粗制6-302-Me(256g，1.3mol)和Et3N(739mL) 在CH2Cl2(5500mL)中的溶液中分批加入Boc2O(582g，2.7mol)。使反 应混合物温热至室温，搅拌过夜。经GC-MS在线分析显示反应完全。 将反应混合物用去离子水(2000mL)洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤，再减压 浓缩。将残余物(609g，2.86：16-303β-Me/6-303α-Me，经GC-MS分析)通 过硅胶柱色谱法(5％EtOAc/庚烷)纯化，得到6-303α-Me(59.41g，17.4％， 下部斑点，＞99％AUC，经GC-MS测得)为无色油状物，6-303β-Me(88g， 26％，上部斑点，99.4％AUC，经GC-MS测得)为淡黄色油状物以及 6-303α-Me/6-303β-Me的混合物(218.82g，64％，1∶4.88经GC-MS分析)为 无色油状物。将该混合的级分通过柱色谱法(用庚烷直到产物开始洗脱， 然后用5％EtOAc/庚烷)重新纯化，得到6-303α-Me(41.63g，12％，下部 斑点，97.2％AUC，经GC-MS测得)为无色油状物，6-303β-Me(141.05g， 41％，上部斑点，＞99％AUC，经GC-MS测得)为淡黄色油状物和更小 批的6-303β-Me(6.71g，2.0％，＞99％AUC，经GC-MS测得)为无色油状 物。总分离产率为99％详细如下：6-303α-Me：101.04g(30％产率)， 6-303β-Me：229.05g(67％产率)，6-303β-Me(6.71g，2％，＞99％AUC，经 GC-MS测得)。
制备6-甲基哌啶-3-甲酸甲酯盐酸盐(6-304β-Me)
在0℃下将2M HCl/醚溶液(1371mL，3.08当量)加至在MeOH(2290 mL)中的6-303β-Me(229g)中。在室温下搅拌18小时后，GC-MS分析 显示＜1％的6-303β-Me残余。将反应混合物浓缩至干燥，再与MTBE(3× 500mL)、MeOH(750mL)和MTBE(500mL)共沸，得到6-304β-Me(169.3 g，98％)。
制备6-甲基哌啶-3-甲酸甲酯(6-313β-Me)
将碳酸钾溶液(1255mL，20％水溶液)加至在1690mL的CH2Cl2中的 6-304β-Me(169g)中。使反应混合物在室温下搅拌1小时，然后相分离。 水层用CH2Cl2(800mL)提取。将合并的CH2Cl2提取物经(Na2SO4)干燥， 过滤，浓缩，得到211g(＞100％，粗品)的6-313β-Me。此物质未经进一 步纯化即引向前面。
手性拆分6-甲基哌啶-3-甲酸甲酯(6-314β2-Me)
在50-60℃下将N-乙酰基-L-亮氨酸的样品(154g，0.89mol)溶解于 862mL的EtOH中，然后小心加至6-313β-Me(137g，0.87mol)在2148 mL的EtOAc中的溶液中。在室温下搅拌30分钟之后，未观察到沉淀。 减压除去挥发性物质至约一体积。将所得混合物用EtOAc(3800mL)稀 释，再在室渐下搅拌2小时，这期间发生结晶。过滤反应混合物，滤饼 用EtOAc(1000mL)和MTBE(2000mL)洗涤，然后在真空下干燥，得到 6-314β1-Me(111g，理论的78％，97.4％ee，经Mosher’s酰基氯衍生化 之后HPLC测定，HPLC方法A)。将母液浓缩成残余物，得到粗制富集 的6-314β2-Me(210g)。
回收富集的6-313β2-Me
将碳酸钾溶液(1437mL，20％aqueous)加至在2100mL的CH2Cl2中 的，6-314β2-Me(210g)中。使反应混合物在室温下搅拌1小时，然后相 分离。水层用CH2Cl2(800mL)提取，合并CH2Cl2相，干燥(Na2SO4)。 浓缩富集有机相，得到73.8g的手性富集的6-313β2-Me(73％)。
制备含甲烷的(3R，6S)-6-甲基哌啶-3-甲酸甲酯的复合物(1∶1) (6-314β2-Me)
在50-60℃下将N-乙酰基-D-亮氨酸的样品(72.4g，0.42mol)溶解于 405mL的EtOH中，然后小心加至手性富集的6-313β2-Me(73g，0.46 mol)在EtOAc(1010mL)中的溶液中。在室温下搅拌30分钟后，观察到 黄色沉淀物。减压除去挥发性物质，成约5体积。所得混合物与EtOAc (2×500mL)共沸，用EtOAc(1500mL)稀释，再在室渐下搅拌2小时， 此期间观察到结晶。过滤反应混合物，滤饼用EtOAc(500mL)和MTBE (1000mL)洗涤，然后在真空下干燥，得到6-314β2-Me(115g，75％，98.8％ ee，经Mosher’s酰基氯衍生化之后HPLC测定，HPLC方法A)。
制备(3S，6R)-6-甲基哌啶-3-甲酸甲酯(6-313β1-Me)
将饱和NaHCO3水溶液(100mL)加至在CH2Cl2(100mL)中的 6-14β1-Me(10.0g)中。使反应混合物在室温下搅拌2小时，然后相分离。 水相用CH2Cl2(2×50mL)提取。合并有机相，干燥(Na2SO4)，浓缩成残 余物，得到6-313β1-Me(4.8g，100％，98.6％ee，经Mosher’s酰基氯衍生 化之后HPLC测定，HPLC方法A)。
制备(3R，6S)-6-甲基哌啶-3-甲酸甲酯(6-313β2-Me)
将饱和NaHCO3溶液(300mL)加至在300mL的CH2Cl2中的 6-314β2-Me(30g)中。使反应混合物在室温下搅拌1小时，然后相分 离。水层用CH2Cl2(300mL)提取，再将CH2Cl2相合并，干燥(Na2SO4)。 将富集有机相浓缩，得到17.5g的6-313β2-Me(＞100％，粗品)。
制备(2S，5R)-1-{[1-(4-氯苯基)环丁基]甲基}-2-甲基-5-{[4-(三氟甲基) 苯氧基]甲基}哌啶(13)
制备(3R，6S)-1-[1-(4-氯苯基)环丁烷羰基]-6-甲基哌啶-3-甲酸甲酯 (6-305β2-Me)
向6-313β2-Me(4.4g，28.0mmol)和Et3N(7.8mL，2当量)在CH2Cl2 (130mL)中的溶液中加入1-(4-氯苯基)-1-环丁烷甲酸(9.4g，1.6当量)和 溴代三吡咯烷子基鏻六氟磷酸盐(21.5g，1.65当量)。将反应混合物在室 温下搅拌16小时，通过TLC分析确认完全。将反应混合物用饱和 NaHCO3水溶液(200mL)猝灭，再将水相用EtOAc(2×100mL)提取。合 并有机相，干燥(MgSO4)，浓缩至干燥。使残余物通过硅胶柱色谱法(5 to 20％EtOAc/庚烷)纯化，得到1.8g(18％)的6-305β2-Me。
制备{(3R，6S)-1-[1-(4-氯苯基)环丁基]甲基}-6-甲基哌啶-3-基甲醇 (6-306β2-Me)
将6-305β2-Me(4.0g，11.4mmol)在THF(60mL)中的溶液滴加至冰 冷的氢化铝锂溶液(28.9mL，1.0M，在THF中)中。将反应混合物在室 温下搅拌18小时，然后冷却至0℃，再用去离子水(7mL)猝灭。加入 NaOH水溶液(12mL)，再将反应混合物置于室温，搅拌1小时。滤出固 体，减压浓缩滤液。将所得残余物溶解于CH2Cl2(50mL)，再使用NaOH 水溶液将pH调节至7。分离各层，再将有机物用盐水(2×25mL)洗涤， 干燥(MgSO4)，过滤，浓缩至干燥。将粗产物(2.3g)通过硅胶柱色谱法 纯化。
将6-305β2-Me(1.8g，5.1mmol)在THF(30mL)中的溶液滴加至冰 冷的氢化铝锂溶液(12.9mL，1.0M，在THF中)中。将反应混合物置于室 温，搅拌18小时。冷却至0℃之后，将反应用去离子水(4mL)和NaOH 水溶液(7mL)猝灭。温热至室温之后，将反应搅拌1小时，然后过滤以 除去固体。减压浓缩滤液，然后溶解在CH2Cl2(50mL)中。使用NaOH 水溶液将溶液的pH调节至7，分离各层。将有机层用盐水(2×25mL) 洗涤，干燥(MgSO4)，过滤，浓缩，得到残余物(3.4g)，使其与另一批(参 见上文)合并。将粗产物通过硅胶柱色谱法(0至5％MeOH/CH2Cl2)纯化， 得到4.2g(82％)的6-306β2-Me。
制备{(3R，6S)-1-[1-(4-氯苯基)环丁基]甲基}-6-甲基哌啶-3-基甲基甲 磺酸盐(6-307β2-Me)
将甲磺酰氯(1.6mL，1.5当量)滴加至冰冷的6-306β2-Me(4.2g，13.6 mmol)和DIPEA(5.9mL，2.5当量)在CH2Cl2(65mL)中的溶液中。使反 应混合物在室温下搅拌18小时。将反应用去离子水(20mL)稀释，相分 离。将有机层用盐水(2×25mL)洗涤，干燥(MgSO4)，过滤，浓缩至干 燥。将所得残余物通过柱色谱法(0至2％MeOH/CH2Cl2)纯化，得到3.1 g(59％)的6-307β2-Me。
制备(2S，5R)-1-{[1-(4-氯苯基)环丁基]甲基}-2-甲基-5-{[4-(三氟甲基) 苯氧基]甲基}哌啶(13)
将4-三氟甲基苯酚(0.09g，0.54mmol)和碳酸铯(0.30g，0.92mmol) 加至6-307β2-Me(0.20g，0.52mmol)在DMF(3mL)中的溶液中。将所得 混悬液在75℃下加热3小时。使反应混合物冷却至室温，再用去离子 水(15mL)猝灭。相分离，水层用EtOAc(2×15mL)提取。将合并的有 机层用盐水(2×10mL)洗涤，干燥(MgSO4)，再减压浓缩。将所得残余 物(0.38g)基于类似HPLC模式通过硅胶柱色谱法纯化。
将4-三氟甲基苯酚(1.3g，7.9mmol)和碳酸铯(4.9g，15.0mmol)加 至6-307β2-Me(2.9g，7.5mmol)在DMF(45mL)中的溶液中。将所得混 悬液在75℃下加热1小时。然后使反应混合物冷却至室温，再用去离 子水(20mL)猝灭，水层用EtOAc(3×30mL)提取。将合并的有机物用 盐水(2×30mL)洗涤，干燥(MgSO4)，过滤，减压浓缩。然后将所得残 余物再次历经以上反应条件达另外的3小时，接着同样的处理操作。将 所得残余物通过硅胶柱色谱法(5％EtOAc/庚烷)纯化，得到2.8g[82％， 95.2％AUC，经HPLC测得(方法A)；95.0％AUC手性纯度，经HPLC 测得(方法C)]的13为无色油状物。
2-溴-1-(1-(4-氯苯基)-环丁基)乙酮
制备2-溴-1-[1-(4-氯苯基)-环丁基]乙酮
2-溴-1-(1-(4-氯
苯基)-环丁基)乙酮
制备1-[1-(4-氯苯基)环丁基]乙酮
在10-20℃下向1-(4-氯苯基)环丁烷甲腈(37.8g)在甲苯(227mL) 中的溶液中加入在醚中的3M甲基碘化镁(197mL，3当量)。在75-78℃ 下搅拌19小时之后，GC-MS分析显示完全转化成中间体(＜1％的1-(4- 氯苯基)-环丁烷甲腈残余)。使反应混合物冷却至0℃，历经1小时时间 用6M HCl(150mL)猝灭并维持温度低于25℃。将所得浆液加热至95℃ 达1小时，此后GC-MS分析显示完全转化成酮，再使反应混合物冷却 至室温。将反应混合物用EtOAc(500mL)稀释，相分离。EtOAc相用盐 水(200mL)洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤，浓缩，得到1-[1-(4-氯苯基)环丁 基]乙酮(43g，＞100％粗品)。
制备2-溴-1-[1-(4-氯苯基)环丁基]乙酮
在0-10℃下向1-[1-(4-氯苯基)环丁基]乙酮(5g)在MeOH(23mL) 中的溶液中加入30％HBr/乙酸(0.23mL，0.36当量)和溴(1.2mL，0.95当 量)。在0-5℃下搅拌7小时之后，GC-MS分析显示完全转化成产物(＜2％ 的1-[1-(4-氯苯基)环丁基]乙酮残余)。历经10分钟时间将反应混合物小 心加至去离子水(100mL)中并维持温度低于15℃。将所得混合物用 MTBE(3×100mL)提取。将合并的MTBE提取物用0.5M焦亚硫酸钠 (100mL)和盐水(100mL)洗涤，干燥(MgSO4)，减压浓缩，得到6.5g的 粗产物。将该粗制残余物溶解于MTBE(150mL)中，再用活性碳(3.4g) 和MgSO4处理30分钟。将所得混合物过滤，减压浓缩滤液，得到6.2g (90％)的2-溴-1-[1-(4-氯苯基)环丁基]乙酮。
制备手性纯的反式-6-甲基哌啶-3-甲酸甲酯类化合物
制备反式-6-甲基哌啶-3-甲酸甲酯盐酸盐(6-304α-Me)
将4M HCl在二氧杂环己烷中的溶液(150mL，0.6mol)滴加至冰冷 的6-303α-Me(50.0g，0.19mol)在MeOH(500mL)中的溶液中。使反应 混合物温热至室温，搅拌过夜。将反应混合物浓缩，与MTBE(250mL) 共沸，再浓缩成白色固体，得到粗制的6-304α-Me(46.24g，＞理论的 100％)，其未经进一步纯化即被使用。
制备反式-6-甲基哌啶-3-甲酸甲酯(6-313α-Me)
将饱和NaHCO3水溶液(376mL)加至6-304α-Me(68.9g，0.36mol)在 CH2Cl2(376mL)中的浆液中。在室温下将反应混合物搅拌小时。相分离， 将有机物干燥(Na2SO4)，过滤，浓缩，得到6-313α-Me(30.5g，＞理论的 99％)为棕色油状物。
制备(3R，6R)-6-甲基哌啶-3-甲酸甲酯联苯甲酰基-L-酒石酸盐 (6-314α1-Me)
在50-60℃下将(+)-联苯甲酰基-L-酒石酸样品(L-DBTA，25.81g，0.9 当量)溶解于63mL的EtOH中，然后小心加至6-313α-Me(12.0g， 76.2mmol)在379mL的EtOAc中的溶液中。在室温下搅拌60分钟之后， 过滤该浆液，再将滤饼用EtOAc(3×25mL)和MTBE(3×25mL)洗涤， 然后在真空下干燥，得到6-314α1-Me(12.15g，80％ee，经Mosher’s酰 基氯衍生化之后HPLC测定，HPLC方法A)。将该粗制的盐在80体积的 EtOH中重新浆化，除第二批(1.23g)以外，得到8.7g(86.9％ee，经 Mosher’s酰基氯衍生化之后HPLC测定，HPLC方法A)。在改善手性纯 度的努力中，将以上物质与其它批料合并，再从80体积的EtOH中重结 晶，得到9.78g(98.5％ee，经Mosher’s酰基氯衍生化之后HPLC测定， HPLC方法A)的6-314α1-Me。
制备(3S，6S)-6-甲基哌啶-3-甲酸甲酯联苯甲酰基-D-酒石酸盐 (6-314α2-Me)
在50-60℃下将(+)-联苯甲酰基-D-酒石酸的样品(D-DBTA，4.309g， 0.9当量)溶解于10.5mL的EtOH，然后小心加至6-313α2-Me(2g，0.013 mol)在63mL的EtOAc中的溶液中。在室温下搅拌60分钟之后，过滤 该浆液，滤饼用EtOAc(3×25mL)和MTBE(3×25mL)洗涤，然后在 真空下干燥，得到6-314α2-Me(3.4g，理论的50％，86％ee，经Mosher’s 酰基氯衍生化之后HPLC测定，HPLC方法A)。在改善手性纯度的努力 中，在回流下将滤饼溶解于75体积的EtOH中，冷却至室温，过滤，得 到6-314α2-Me(2.6g，理论的38％，95％ee，经Mosher’s酰基氯衍生化 之后HPLC测定，HPLC方法A)。
制备(3R，6R)-6-甲基哌啶-3-甲酸甲酯(6-313α1-Me)
将2M碳酸钾水溶液(14mL)加至在CH2Cl2(14mL)中的 6-314α1-Me/L-DBTA盐(9.78g)中。使反应混合物在室温下搅拌1小时， 然后相分离。水相用CH2Cl2(2×50mL)提取，再将合并的有机相干燥 (Na2SO4)，过滤，减压浓缩，得到6-313α1-Me(4.47g，理论的100％， 98％ee，经Mosher’s酰基氯衍生化之后HPLC测定，HPLC方法A)。
制备(3S，6S)-6-甲基哌啶-3-甲酸甲酯(6-313α2-Me)
将2M碳酸钾水溶液(18mL)加至在CH2Cl2(18mL)中的手性纯的 6-314α2-Me(9.46g)中。使反应混合物在室温下搅拌1小时，然后相分 离。水相用CH2Cl2(2×50mL)提取，将合并的有机相合并，干燥 (Na2SO4)，过滤，减压浓缩，得到6-313α2-Me(2.79g，理论的50％，95％ ee，经Mosher’s酰基氯衍生化之后HPLC测定，HPLC方法A)。
制备(R)-1-[1-(4-氯苯基)环丁基]-2-{(2R，5R)-2-甲基-5-[4-(三氟甲基) 苯氧基]甲基}哌啶-1-基乙醇(22)和(S)-1-[1-(4-氯苯基)环丁 基]-2-{(2R，5R)-2-甲基-5-[4-(三氟甲基)苯氧基]甲基}-哌啶-1-基乙醇(21)
制备(3R，6R)-6-甲基哌啶-1，3-二甲酸1-叔丁酯3-甲酯(6-303α1-Me)
在0℃下向6-313α1-Me(假定4.45g)在CH2Cl2(91mL)和Et3N(16 mL，4当量)中的溶液中加入7.4g(1.2当量)的Boc2O。在室温下搅拌1 小时之后，GC-MS分析显示反应完全。将反应混合物用去离子水(50mL) 稀释，相分离。将CH2Cl2相干燥(Na2SO4)，浓缩成残余物，使其与己烷 (2×250mL)共沸，再通过硅胶柱色谱法(99∶1正庚烷/乙酸乙酯)纯化， 得到6-303α1-Me(6.8g，93.4％)。
制备(2R，5R)-5-(羟甲基)-2-甲基哌啶-1-甲酸叔丁酯(6-308α1-Me)
在-78℃下向6-303α1-Me(6.8g)在THF(544mL)中的溶液中加入在 己烷中的1M DIBAL-H(79mL，3当量)。在0℃下搅拌60分钟之后， 通过GC-MS分析法测定反应混合物，发现未完全。将该混合物冷却至 -78℃用在己烷中的1M DIBAL-H(60mL，2当量)处理。在0℃下搅拌 60分钟之后，通过GC-MS分析法测定反应混合物，发现完全。将反应 混合物用2.0M HCl(378mL)猝灭，再用EtOAc(68mL)稀释。相分离， 水相用EtOAc (2×68mL)提取。将合并的EtOAc提取物用饱和NaHCO3 (126mL)和盐水(137mL)洗涤，干燥(Na2SO4)，减压浓缩，得到 6-308α1-Me(4.46g，74％)。
制备(2R，5R)-2-甲基-5-[(甲基磺酰基氧基)甲基]哌啶-1-甲酸叔丁酯 (6-309α1-Me)
在0℃下向6-308α1-Me(4.46g)在CH2Cl2(130mL)和Et3N(8.1mL) 中的溶液中加入甲磺酰氯(2.26mL，1.5当量)。在室温下搅拌1.5小时后， GC-MS分析显示反应完全。将反应混合物用去离子水(2×30mL)洗涤， 干燥(Na2SO4)，减压浓缩，得到6-309α1-Me(6.2g，＞100％，粗品)。
制备(2R，5R)-2-甲基-5-{[4-(三氟甲基)-苯氧基]甲基}哌啶-1-甲酸叔 丁酯(6-310α1-Me)
向6-309α1-Me(5.98g)在DMF(168mL)中的溶液中加入碳酸铯 (19.0g，3当量)和4-三氟甲基苯酚(3.155g，1.0当量)。在75℃下搅拌5 小时后，GC-MS分析显示反应完全。使反应混合物冷却至室温，再分 批转移到冰水(200mL)中并维持温度低于30℃。将所得混合物用EtOAc (3×50mL)提取，再将合并的有机提取物用2M NaOH(3×35mL)、去 离子水(30mL)和盐水(30mL)洗涤。将EtOAc相用碳酸钾干燥，浓缩， 得到粗制的6-310α1-Me(10.17g，＞100％，粗品)，经1H NMR分析其含 有的DMF。将该物质溶解于MTBE(500mL)，再用水(3×250mL)、盐 水(150mL)和水(3×250mL)洗涤，然后干燥、浓缩，得到6-310α1-Me (9.88g，＞100％，粗品)。
制备(2R，5R)-2-甲基-5-{[4-(三氟甲基)苯氧基]甲基}哌啶 (6-311α1-Me)
在10℃下向6-310α1-Me(7.3g)在MeOH(58mL)中的溶液中加入在 醚中的2M HCl(56mL，5.8当量)。在室温下搅拌24小时后，GC-MS分 析显示反应完全。将反应混合物浓缩至干燥，与MTBE(250mL)共沸， 再用MTBE(150mL)和庚烷(70mL)稀释。将所得溶液用1M HCl(3×70 mL)洗涤。合并酸性相，再用K2CO3将pH调节至约10，产物用MTBE(2 ×500mL)提取。将合并的MTBE相干燥(MgSO4)，浓缩，得到6-311α1-Me (3.34g，63％)。
制备1-[1-(4-氯苯基)环丁基]-2-{(2R，5R)-2-甲基-5-[4-(三氟甲基)苯 氧基]甲基}哌啶-1-基乙酮(6-312α1-Me)
向6-311α1-Me(3.34g)和碳酸钾(8.4g，5当量)在丙酮(33mL)中的 浆液中加入2-溴-1-[1-(4-氯苯基)环丁基]乙酮(4.2g，1.2当量)和碘化钠 (2.2g，1.2当量)在丙酮(33mL)中的浆液。在52℃下搅拌19小时后， GC-MS分析显示反应完全。将反应混合物用去离子水(100mL)猝灭，用 EtOAc(3×150mL)提取。将合并的EtOAc相干燥(Na2SO4)，浓缩至干 燥，再通过硅胶柱色谱法(95∶5正庚烷/EtOAc)纯化，得到5.55g的 6-312α1-Me(95％)。
制备(R)-1-[1-(4-氯苯基)环丁基]-2-{(2R，5R)-2-甲基-5-[4-(三氟甲基) 苯氧基]甲基}哌啶-1-基乙醇(B5-1)和(S)-1-[1-(4-氯苯基)环丁 基]-2-{(2R，5R)-2-甲基-5-[4-(三氟甲基)苯氧基]-甲基}哌啶-1-基乙醇(21)
向6-312α1-Me(5.35g)在MeOH(118mL)中的溶液中加入硼氢化钠 (0.84g，22.3mmol，2当量)，同时维持维持温度为0-5℃。在室温下搅拌 2小时后，经HPLC分析确认反应完全，再用去离子水(50mL)猝灭。将 所得反应混合物用EtOAc(2×20mL)提取。将合并的EtOAc提取物浓 缩，得到21和22的非对映体混合物(4.27g)。(21)比(22)的混合物为 56∶44，其基于用(R)-甲基-CBS-噁唑硼烷(oxazaborolidine)和纯净硼烷-甲 基硫化物复合物所获得的产物混合物比较的，其假定得到相应的(S)-醇。 通过硅胶柱色谱法(0至10％MeOH/CH2Cl2)纯化，得到1.10g的(22) [95.2％AUC，经HPLC测得(方法A)，＞99％AUC手性纯度，经HPLC 测得(方法D)]和1.15g的(21)[95.5％AUC，经HPLC测得(方法A)，94.0％ AUC手性纯度，经HPLC测得(方法D)]。
制备(R)-1-[1-(4-氯苯基)环丁基]-2-{(2R，5S)-2-甲基-5-[4-(三氟甲基) 苯氧基]甲基}哌啶-1-基乙醇(19)和(S)-1-[1-(4-氯苯基)环丁 基]-2-{(2R，5S)-2-甲基-5-[4-(三氟甲基)苯氧基]甲基}-哌啶-1-基乙醇(20)
制备(3S，6R)-6-甲基哌啶-1，3-二甲酸1-叔丁酯3-甲酯(6-303β1-Me)
在0℃下向6-313β1-Me游离碱(6.2g)和CH2Cl2(127mL)和Et3N(22 mL，4当量)中的溶液中加入17.2g(2当量)的Boc2O。在室温下搅拌20 小时后，GC-MS分析显示＜1％的6-313β1-Me残余。将反应混合物用去 离子水(30mL)稀释，相分离。将CH2Cl2相干燥(Na2SO4)，过滤，浓缩 成残余物。使残余物通过硅胶柱色谱法(99∶1正庚烷/乙酸乙酯)纯化，得 到6-303β1-Me(8.3g，82％)。6-303β1-Me的结构是通过X-射线结晶照相 术确证的。
制备(2R，5S)-5-(羟甲基)-2-甲基哌啶-1-甲酸叔丁酯(6-308β1-Me)
在-78℃下向6-303β1-Me(8.1g)在THF(648mL)中的溶液中加入 1M的二异丁基氢化铝(DIBAL-H)在THF(94.4mL，3当量)中的溶液。在 0℃下搅拌30分钟后，将反应混合物用2M HCl(450mL)猝灭，再用 EtOAc(160mL)稀释。相分离，水相用EtOAc(2×160mL)提取。将合 并的EtOAc相用饱和NaHCO3(150mL)和盐水(150mL)洗涤，干燥 (Na2SO4)，过滤，减压浓缩，得到6-308β1-Me(6.7g，93％)。
制备(2R，5S)-2-甲基-5-[(甲基磺酰基氧基)甲基]哌啶-1-甲酸叔丁酯 (6-309β1-Me)
在0℃下向6-308β1-Me(6.5g)在CH2Cl2(190mL)和Et3N(12mL) 中的溶液中加入甲磺酰氯(3.3mL，1.5当量)。在室温下搅拌20小时后， GC-MS分析显示反应完全(＜1％的6-308β1-Me残余)。将反应混合物用 去离子水(2×35mL)洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤，浓缩，得到6-309β1-Me (8.7g，100％，粗品)。
制备(2R，5S)-2-甲基-5-{[4-(三氟甲基)苯氧基]甲基}哌啶-1-甲酸叔丁 酯(6-310β1-Me)
向6-309β1-Me(8.6g)在DMF(242mL)中的溶液中加入碳酸铯 (27.3g，3当量)和4-三氟甲基苯酚(4.5g，1.0当量)。在75℃下搅拌2小 时后，GC-MS分析显示反应完全(＜1％的6-309β1-Me残余)。使反应 混合物冷却至室温，再分批转移到去离子水(200mL)中并维持温度低于 30℃。将所得混合物用EtOAc(3×80mL)提取，再将合并的EtOAc提 取物用2M NaOH(3×55mL)、去离子水(55mL)和盐水(55mL)洗涤。将 EtOAc相用碳酸钾干燥，过滤，浓缩，得到6-310β1-Me(9.3g，89％)。
制备(2R，5S)-2-甲基-5-{[4-(三氟甲基)苯氧基]甲基}哌啶 (6-311β1-Me)
在10℃下向6-310β1-Me(9.2g)在MeOH(74mL)中的溶液中加入 在醚中的2M HCl(71.4mL，5.8当量)。在室温下搅拌15小时后，GC-MS 分析显示反应完全(＜1％的6-310β1-Me残余)。将反应混合物浓缩至干 燥，再用MTBE(100mL)稀释。将所得溶液用去离子水(2×40mL)洗涤。 将合并的水相用另外30mL的MTBE回提取。将合并的MTBE相用1.0 M K2CO3(2×100mL)洗涤，用1.0M HCl(2×50mL)提取。将1.0M HCl相与起始的去离子水洗涤液合并，再使用2M碳酸钾溶液(110mL) 将pH调节至约10。然后用EtOAc(3×250mL)提取产物。将合并的 EtOAc相干燥(MgSO4)，过滤，浓缩，得到6-311β1-Me(4.6g，68％)。
制备1-[1-(4-氯苯基)环丁基]-2-{(2R，5S)-2-甲基-5-[4-(三氟甲基)苯氧 基]甲基}哌啶-1-基乙酮(6-312β1-Me)
向6-311β1-Me(4.5g)和碳酸钾(11.4g，5当量)在丙酮(45mL)中的 浆液中加入2-溴-1-[1-(4-氯苯基)环丁基]乙酮(5.7g，1.2当量)和碘化钠 (3g，1.2当量)在丙酮(45mL)中的浆液。在52℃下搅拌19小时后，GC-MS 分析显示反应完全(＜1％的6-311β1-Me和2-溴-1-[1-(4-氯苯基)环丁基]- 乙酮残余)。将反应混合物用去离子水(100mL)猝灭，用EtOAc(3×150 mL)提取。将合并的EtOAc相干燥(Na2SO4)，浓缩至干燥，再通过硅胶 色谱法(9∶1正庚烷/EtOAc)纯化，得到7.9g的6-312β1-Me(100％，粗 品)。
制备(R)-1-[1-(4-氯苯基)环丁基]-2-{(2R，5S)-2-甲基-5-[4-(三氟甲基) 苯氧基]甲基}哌啶-1-基乙醇(19)
试图使用(S)-甲基-CBS-噁唑硼烷和纯净硼烷甲基硫化物复合物制 备对映体纯醇(19)。在-20℃下历经8小时将6-312β1-Me(4.3g，9mmol) 在CH2Cl2(22mL)中的溶液滴加至1.0M(S)-甲基-CBS-噁唑硼烷/甲苯 (1.8mL，0.2当量)和硼烷-甲基硫化物复合物(0.9mL，1.01当量)/CH2Cl2 (43mL)的混合物中。添加完成6-312β1-Me后，使反应混合物维持在 -20℃达20分钟，然后用MeOH(50mL)猝灭。所得混合物用CH2Cl2(50 mL)和去离子水(50mL)稀释，相分离。将CH2Cl2层用盐水(50mL)洗涤， 干燥(MgSO4)，浓缩，得到3.9g的粗制(19)。通过硅胶柱色谱法纯化， 再进一步通过从MTBE中重结晶纯化，得到1.4g的(19)[＞99％AUC， 经HPLC测得(方法A)，96.4％AUC手性纯度，经HPLC测得(方法D)]。
制备(S)-1-[1-(4-氯苯基)环丁基]-2-{(2R，5S)-2-甲基-5-[4-(三氟甲基) 苯氧基]甲基}哌啶-1-基乙醇(20)
在-20℃下将6-312β1-Me(3.5g 7.3mmol)在CH2Cl2(18mL)滴加至 1.0M(R)-甲基-CBS-噁唑硼烷/甲苯(1.5mL，0.2当量)和硼烷-甲基硫化物 复合物(0.7mL，1.01当量)/CH2Cl2(35mL)的混合物中。添加完成 6-312β1-Me后，使反应混合物维持在-20℃达20分钟，然后用MeOH(30 mL)猝灭。所得混合物用CH2Cl2(50mL)和去离子水(50mL)稀释，相分 离。将CH2Cl2层用盐水(50mL)洗涤，用MgSO4干燥，浓缩，得到3.3g 的粗制(20)。经柱色谱法纯化，再进一步通过从MTBE中重结晶纯化， 得到1.7g的(20)。
制备(R)-1-[1-(4-氯苯基)环丁基]-2-{(2S，5R)-2-甲基-5-[4-(三氟甲基) 苯氧基]甲基}哌啶-1-基乙醇(18)和(S)-1-[1-(4-氯苯基)环丁 基]-2-{(2S，5R)-2-甲基-5-[4-(三氟甲基)苯氧基]甲基}-哌啶-1-基乙醇(17)
制备(3R，6S)-6-甲基哌啶-1，3-二甲酸1-叔丁酯3-甲酯(6-303β2-Me) 在0℃下向6-313β2-Me(14g)在CH2Cl2(287mL)和Et3N(50mL，4 当量)中的溶液中加入23.3g(1.2当量)的Boc2O。在室温下搅拌19小时 后，GC-MS分析显示＜1％的6-313β1-Me残余。将反应混合物用去离子 水(90mL)稀释，相分离。CH2Cl2相用去离子水(90mL)洗涤，干燥 (Na2SO4)，过滤，浓缩成残余物。将残余物与己烷(2×250mL)共沸，再 通过硅胶色谱法(99∶1正庚烷/乙酸乙酯)纯化，得到6-303β2-Me(16.3g， 71％)。
制备(2S，5R)-5-(羟甲基)-2-甲基哌啶-1-甲酸叔丁酯(6-308β2-Me)
在-78℃下向6-303β2-Me(16g)在THF(1280mL)中的溶液中加入 在THF中的1.0M DIBAL-H(186.5mL，3当量)。在0℃下搅拌60分钟 后，将反应混合物用2M HCl(900mL)猝灭，再用EtOAc(160mL)稀释。 相分离，水相用EtOAc(2×160mL)提取。将合并的EtOAc提取物用饱 和NaHCO3水溶液(300mL)和盐水(300mL)洗涤，干燥(Na2SO4)，减压浓 缩，得到6-308β2-Me(10g，70％)。
制备(2S，5R)-2-甲基-5-[(甲基磺酰基氧基)甲基]哌啶-1-甲酸叔丁酯 (6-309β2-Me)
在0℃下向6-308β2-Me(9.5g)在CH2Cl2(277mL)和Et3N(17mL) 中的溶液中加入甲磺酰氯(4.8mL，1.5当量)。在室温下搅拌17小时后， GC-MS分析显示反应完全(＜1％的6-308β2-Me残余)。将反应混合物用 去离子水(3×50mL)洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤，浓缩，得到6-309β2-Me (12.7g，100％，粗品)。
制备(2S，5R)-2-甲基-5-{[4-(三氟甲基)苯氧基]甲基}-哌啶-1-甲酸叔 丁酯(6-310β2-Me)
向6-309β2-Me(12.5g)在DMF(351mL)中的溶液中加入碳酸铯 (39.7g，3当量)和4-三氟甲基苯酚(6.6g，1.0当量)。在75℃下搅拌2小 时后，GC-MS分析显示反应完全(＜1％的6-309β2-Me残余)。使反应 混合物冷却至室温，再分批转移到去离子水(250mL)中并维持温度低于 30℃。将所得混合物用EtOAc(3×130mL)提取，再将合并的EtOAc提 取物用2M NaOH(3×80mL)、去离子水(80mL)和盐水(80mL)洗涤。将 EtOAc相用碳酸钾干燥，浓缩，得到6-310β2-Me(14.3g，94％)。
制备(2S，5R)-2-甲基-5-{[4-(三氟甲基)苯氧基]甲基}哌啶 (6-311β2-Me)
在10℃下向6-310β2-Me(14g)在MeOH(112mL)中的溶液中加入 在醚中的2M HCl(108.7mL，5.8当量)。在室温下搅拌16小时后，GC-MS 分析显示反应完全(＜1％的6-310β2-Me残余)。将反应混合物浓缩至干 燥，再用MTBE(150mL)稀释。将所得溶液用1M HCl(3×80mL)提取， 再使用2M碳酸钾(170mL)将合并的1M HCl相调节至pH≈10。水相 用EtOAc(3×200mL)提取，再将合并的EtOAc相干燥(MgSO4)，过滤， 浓缩，得到6-311β2-Me(7.9g，77％)。
制备1-[1-(4-氯苯基)环丁基]-2-{(2S，5R)-2-甲基-5-[4-(三氟甲基)苯氧 基]甲基}哌啶-1-基乙酮(6-312β2-Me)
向6-311β2-Me(7.8g)和碳酸钾(19.6g，5当量)在丙酮(78mL)中的 浆液中加入2-溴-1-[1-(4-氯苯基)环丁基]乙酮(9.8g，1.2当量)和碘化钠 (5.1g，1.2当量)在丙酮(78mL)中的浆液。在52℃下搅拌23小时后， GC-MS分析显示反应完全(＜1％的6-311β2-Me和2-溴-1-[1-(4-氯苯基) 环丁基]-乙酮残余)。将反应混合物用去离子水(200mL)猝灭，用EtOAc(3 ×250mL)提取。将合并的EtOAc相用硫酸钠干燥，浓缩至干燥，再使 残余物通过硅胶柱色谱法(9∶1正庚烷/EtOAc)纯化，得到12.4g的 6-312β2-Me(91％)。
制备(R)-1-[1-(4-氯苯基)环丁基]-2-{(2S，5R)-2-甲基-5-[4-(三氟甲基) 苯氧基]甲基}哌啶-1-基乙醇(18)
试图使用(S)-甲基-CBS-噁唑硼烷和纯净硼烷甲基硫化物复合物制 备对映体纯醇(18)。在-20℃下历经8小时将6-312β2-Me(4.5g，9.4mmol) 在CH2Cl2(25mL)中的溶液滴加至1.0M(S)-甲基-CBS-噁唑硼烷/甲苯 (2.1mL，0.2当量)和硼烷-甲基硫化物复合物(1.0mL，1.01当量)/CH2Cl2 (50mL)的混合物中。添加完成6-312β2-Me后，使反应混合物维持在 -20℃达20分钟，然后用MeOH(60mL)猝灭。所得混合物用CH2Cl2(60 mL)和去离子水(60mL)稀释，相分离。将CH2Cl2层用盐水(60mL)洗涤， 干燥(Na2SO4)，过滤，浓缩，得到4.8g的粗制(18)为黄色半固体。通过 硅胶柱色谱法纯化，得到2.1g[95％AUC，经HPLC测得(方法A)，＞99％ AUC手性纯度，经HPLC测得(方法D)]的(18)。
制备(S)-1-[1-(4-氯苯基)环丁基]-2-{(2S，5R)-2-甲基-5-[4-(三氟甲基) 苯氧基]甲基}哌啶-1-基乙醇(17)
试图使用(R)-甲基-CBS-噁唑硼烷和纯净硼烷-甲基硫化物复合物制 备对映体纯醇(17)。在-20℃下历经8小时将6-312β2-Me(6.25g，13 mmol)在CH2Cl2(31mL)中的溶液滴加至1.0M(R)-甲基-CBS-噁唑硼烷/ 甲苯(2.6mL，0.2当量)和硼烷-甲基硫化物复合物(1.2mL，1.01当 量)/CH2Cl2(62mL)的混合物中。添加完成6-312β2-Me后，使反应混合 物维持在-20℃达20分钟，然后用MeOH(100mL)猝灭。所得混合物 用CH2Cl2(100mL)和去离子水(100mL)稀释，相分离。将CH2Cl2层用 盐水(100mL)洗涤，干燥(MgSO4)，过滤，浓缩，得到4.7g的粗制(17)。 在40-45℃下通过在5体积的MTBE中浆化5分钟来实现非对映体的 纯化，冷却至室温，通过玻璃熔料(glass frit)过滤。滤饼用MTBE(2mL) 洗涤，干燥，得到2.7g的(17)。
反式-6-甲基哌啶类化合物的立体化学的确定
顺式-甲基哌啶类化合物的立体化学的反转：制备(3R，6R)-6-甲基哌 啶-1，3-二甲酸1-叔丁酯3-甲酯
在-75℃下6-303β1-Me(2g)在四氢呋喃(50mL)中的溶液中加入2 当量的TMEDA，接着滴加二异丙基酰胺锂溶液(8.6mL，1.8M，在庚烷/ 四氢呋喃/乙苯)。1小时后，通过GC-MS分析，形成42％的相应的反式 产物。使反应混合物温热至0-5℃，再缓缓转移到5％枸橼酸水溶液中。 将反应混合物用MTBE (3×100mL)提取，再将合并的MTBE提取物用 盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤，浓缩，得到2.2g的残余物，将其通过 硅胶柱色谱法(0至10％EtOAc/庚烷)纯化，得到880mg的6-303α1-Me。 根据以下试验结果指定立体化学。
制备用于立体化学指定的(3R，6R)-6-甲基哌啶-3-甲酸甲酯盐酸盐
将在醚中的2M HCl溶液(6mL，12mmol)滴加至冰冷的6-303α1-Me (0.33g，1.3mmol)在MeOH(50mL)中的溶液中。将反应混合物温热至室 温，再搅拌过夜。将反应混合物浓缩成残余物，其用MTBE研磨，过滤， 得到170mg的物质，Mosher’s酰氯衍生化后通过HPLC分析，并与经 用L-DBTA拆分制备的物质对比，发现其为6-304α1-Me。
等价物
本领域技术人员将清楚或者能够只用常规实验就可确定本文描述 的本发明具体实施方案的许多等价物。这样的等价物意欲包括在以下权 利要求中。
上文引用的所有专利、出版物及其它参考文献都通过引用以其全部 内容并入本文。
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