生物组织的处理方法和生物组织
阅读：811发布：2020-05-12
专利汇可以提供生物组织的处理方法和生物组织专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 即使针对包括来自 生物 的成分等的组织进行干燥和/或灭菌处理，也抑制与处理前相关的强度降低或组织变性。特定地，将 生物组织 浸渍的在海藻糖溶液中和使其振荡，由此使海藻糖溶液浸渍入生物组织。本文的海藻糖溶液使用通过将海藻糖溶解在 磷酸 缓冲生理盐 水 中得到的溶液，海藻糖的浓度优选地是在20重量％至35重量％的范围中。之后，生物组织被干燥以移除生物组织中的水分，和通过环 氧 乙烷气体灭菌进行灭菌处理。，下面是生物组织的处理方法和生物组织专利的具体信息内容。
1.生物组织的处理方法，包括灭菌生物组织的步骤，
其特征是，在所述灭菌步骤之前使二糖类的低聚糖溶液浸渍入所述生物组织。
2.生物组织的处理方法，包括干燥生物组织后的灭菌步骤，
其特征是，在所述干燥步骤之前使二糖类的低聚糖溶液浸渍入所述生物组织。
3.生物组织的处理方法，包括灭菌无细胞化的生物组织的步骤，
其特征是，在所述灭菌步骤之前使二糖类的低聚糖溶液浸渍入所述生物组织。
4.根据权利要求1，2，或3的生物组织的处理方法，其特征是，所述低聚糖溶液是海藻糖溶液。
5.根据权利要求4的生物组织的处理方法，其特征是，所述海藻糖溶液中海藻糖的浓度是20重量％至35重量％。
6.通过采用二糖类的低聚糖溶液浸渍生物组织接着进行干燥和灭菌而得到的生物组织。
7.通过采用二糖类的低聚糖溶液浸渍无细胞化的生物组织接着进行干燥和灭菌而得到的生物组织。
生物组织的处理方法和生物组织
技术领域
[0001] 本发明涉及生物组织的处理方法和涉及生物组织，和更具体地涉及抑制由灭菌处理导致的组织变性和强度降低的生物组织的处理方法，和通过处理方法得到的生物组织。
背景技术
[0002] 本申请人已经提议了用于无细胞化动物组织的方法，所述方法用于将从动物，例如牛或猪采集的心包膜或腱的动物组织移植入人体(参见专利文献1等)。本文中，从动物采集的和无细胞化的生物组织(下文称为"无细胞化的组织")可以在无细胞化之后不立即使用，但是在实施灭菌处理后，保存一段时间。为了将这类来自动物的无细胞化的组织用于实际，无细胞化的组织的灭菌处理是必需的。
[0003] 现有技术文献
[0004] 专利文献
[0005] 专利文献1:国际公开文本第WO 2011/142407号小册子
[0006] 发明概述
[0007] 技术问题
[0008] 但是，如果对包括生物来源的成分等的组织(下文称为"生物组织")实施灭菌处理，那么将导致生物组织的显著损伤和与处理前相比减少组织的强度。此外，作为大量实验性研究的结果，本发明人已经发现，如果冷冻干燥和灭菌生物组织之后接着进行再水化，那么导致组织变性，所述组织变性使得，与前处理的生物组织相比，所述组织水分含量降低和变得更硬。然而，本发明人发现，在生物组织的灭菌处理之前，使海藻糖溶液浸渍入生物组织，之后可以抑制与灭菌处理前的生物组织对应的强度降低和/或组织变性。
[0009] 基于这些发现，本发明已经被提供，并且本发明目的是，提供生物组织的处理方法和通过处理方法得到的生物组织，针对包括生物来源的成分等的组织，即使进行灭菌处理，所述方法也可以抑制与灭菌前对应的强度降低和组织变性。
[0010] 解决技术问题的技术方案
[0011] 在本发明中，将包括生物来源的成分等的组织(下文称为"生物组织")浸渍在海藻糖溶液中，和使其振荡约24小时，以使海藻糖溶液渗透入生物组织。本文的海藻糖溶液使用通过将海藻糖溶解在磷酸缓冲生理盐水中得到的溶液，海藻糖的浓度优选地是在20重量％至35重量％的范围中。
[0012] 之后，通过生物组织的干燥处理，以移除生物组织中的水分。本文中干燥不被具体地限制，但是，可以在约-45℃的温度进行约24小时。
[0013] 然后，通过环氧乙烷气体灭菌，进行组织的灭菌处理。本文中灭菌处理的条件不被具体地限制，和设置为，约30℃的温度，其抑制胶原变性，作用时间为约12小时，和通气为约20小时。其也是可能采用其它灭菌方法，例如过氧化氢低-温度等离子体灭菌。在本发明中，其他低聚糖的二糖类，例如蔗糖，乳糖，或麦芽糖可以用于替代海藻糖。换言之，多种实施方案可以被采用，只要在如上所述采用二糖类的低聚糖溶液浸渍生物组织之后，进行干燥和灭菌即可。
[0014] 发明的效果
[0015] 即使对生物组织进行灭菌处理，本发明也可以抑制与处理前对应的组织变性和强度降低。
[0016] 此外，当在海藻糖溶液中的海藻糖浓度可以设置为20重量％至35重量％时，可以将处理之前的生物组织的组织结构和强度保持在几乎相同的程度。
[0018] (实施例1)
[0019] 第一，采集的牛心包膜被制备成5cm×7cm的长度和宽度、厚度约300μm、质量为1.5g的大长方形的薄板的形状，和将其用含有抗生素的磷酸缓冲生理盐水(PBS)洗涤。
[0020] 然后，通过如已经通过本发明人提议的方法，使洗涤的牛心包膜经历无细胞化(参见特开第2011-05043号公开文本)。
[0021] 之后，通过添加海藻糖至PBS，提供得到的40ml的海藻糖溶液，将所述海藻糖溶液和无细胞化后的牛心包膜(无细胞化的组织)放置在50ml离心管中，使牛心包膜浸渍于海藻糖溶液，保持前述状态，进行振荡。在本实施例中，在海藻糖溶液中海藻糖的浓度被设置为1重量％。使用在37℃温热的生物振荡器，以180rpm的旋转数，进行振荡处理24小时。
[0022] 之后，使用冷冻干燥机，在约-45℃放置牛心包膜约24小时，以移除牛心包膜的水分。
[0023] 然后，使用环氧乙烷气体灭菌器，进行采用环氧乙烷气体的牛心包膜的灭菌处理，得到牛心包膜的干燥灭菌处理的组织。本文中，作用温度设置为30℃；作用时间设置为12小时；和通气设置为20小时。
[0024] (实施例2至9)
[0025] 如实施例1得到牛心包膜的干燥灭菌处理的组织，除了溶液中的海藻糖的浓度被变化。特定地，如上所述，将无细胞化的牛心包膜放置在各个海藻糖溶液中，进行上述的振荡处理，所述海藻糖浓度被分别设置为5，10，20，25，30，35，40，和50重量％，和然后进行如上所述的干燥灭菌处理，得到实施例2至9涉及的牛心包膜的干燥灭菌处理的组织。
[0026] 此外，因为在37℃的PBS中溶解的海藻糖浓度是约50％，所以最大海藻糖的浓度设置为50％。
[0027] (实施例10至18)
[0028] 在与实施例1至9中相同的条件下，得到牛心包膜的干燥灭菌处理的组织，除了不实施无细胞化。
[0029] (实施例19至36)
[0030] 在与实施例1至18中相同的条件下，得到牛腱的干燥灭菌处理的组织，除了将处理对象组织从牛心包膜变化为牛腱。
[0031] 本文中，使用的是约10cm长和10mm厚的牛腱。
[0032] (比较实施例1)
[0033] 参照实施例1，进行如上所述的干燥处理和灭菌，但是，不将无细胞化的牛心包膜浸渍于海藻糖溶液，从而得到牛心包膜的干燥灭菌处理的组织。
[0034] (比较实施例2)
[0035] 参照比较实施例1，在与不浸渍于海藻糖溶液的比较实施例1相同的条件下，除了不实施无细胞化，从而得到牛心包膜的干燥灭菌处理的组织。
[0036] (比较实施例3和4)
[0037] 参照比较实施例1和2，在与不浸渍于海藻糖溶液的比较实施例1和2相同的条件下，除了如实施例19一样地将处理对象组织从牛心包膜变化为牛腱，从而得到牛腱的干燥灭菌处理的组织。
[0038] 然后，实施为了验证本发明的效果的试验。
[0039] 作为第一试验，针对通过各个上述实施例和各个上述比较实施例得到的干燥灭菌处理的组织，进行验证本发明抑制组织变性的效果的试验。
[0040] 特定地，针对各个干燥灭菌处理的组织，将包含抗生素的40ml PBS加入至50ml离心管，将各干燥灭菌处理的组织加入其中。然后，使用在37℃温热的生物振荡器，通过以180rpm的旋转数振荡24小时，再水化各个干燥灭菌处理的组织，和使用电子天平，测量所述干燥灭菌处理的组织的质量。然后，计算出质量增加率，所述质量增加率为各实施例的干燥灭菌处理的组织相对于不浸渍于海藻糖溶液的相应的比较实施例的干燥灭菌处理的组织的质量增加率。针对实施例1至9，相应的比较实施例是比较实施例1；针对实施例10至
18，相应的比较实施例是比较实施例2；针对实施例19至27，相应的比较实施例是比较实施例3；并且，针对实施例28至36，相应的比较实施例是比较实施例4。
18，相应的比较实施例是比较实施例2；针对实施例19至27，相应的比较实施例是比较实施例3；并且，针对实施例28至36，相应的比较实施例是比较实施例4。
[0042] 针对实施例1至18和比较实施例1和2(其中牛心包膜被用作处理对象组织)，在下列条件下进行试验。
[0043] 针对牛心包膜的干燥灭菌处理的组织，在第一试验相同的条件下，进行再水化之后，制备3mm宽的条状试验片，和通过将初始抛掷(chuck)距离设定为7mm，进行张力试验。本文实施张力试验的条件设定如下：0.5N的初始张力负载，试验片的延伸率20％、将拉伸速度设定为120mm/min，和将重复次数设定为3，000次。然后，针对各试验片，测定随时间的应力缓和率(relaxation)，通过从初始负载减去重复3，000次之后的负载得到一值，将该值除以初始负载，从而计算出所述应力缓和率，从而计算出增加率，所述增加率来自各个相应的比较实施例的干燥灭菌处理的组织的应力缓和率。此外，本文中应力缓和率是粘弹性的特征性(柔性)的指标，较大应力缓和率意味着更高柔性。已经发现，如果灭菌处理生物组织，那么应力缓和率与处理前相比是减少的。
[0044] 对于各个实施例19至36和比较实施例3和4(其中牛腱被用作处理对象组织)，在下列条件下进行试验。
[0045] 针对上述形状的各试验片，在与第一试验相同的条件下进行再水化，接着进行张力试验，设定试验片的宽度为4mm，和将初始抛掷距离设定为45mm。本文的张力试验条件如下：首先，在初始张力负载66.7N作用15分钟，和然后以张力负载的100N，通过拉伸速度的300mm/min，重复作用10，000次。然后，对于各试验片，每100次应变增加小于0.15％的点被测定，和构成组织的胶原等的蜷曲结构的影响被尽可能地消除，通过从直到10，000次应变的值减去应变在每100次应变增加小于0.15％的点的值，计算组织结构自身应变的所述变化率。本文中所述应变变化率同样地是粘弹性的特征性的指标。然后，对于各试验片，计算出，相对于前述相应比较实施例的干燥灭菌处理的组织的应变变化率的增加率。
[0046] 试验的结果是显示在下表中。
[0047] [表1]
[0048]
[0049] [表2]
[0050]
[0051] [表3]
[0052]
[0053] [表4]
[0054]
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