发明领域

本发明是关于一种固定剂组合物，该固定剂组合物在细胞学方法中的用途， 和制备颗粒状物体，如细胞学、血液学和微生物学标本，用于细胞学和组织学检 查的方法，包括将颗粒状物体收集在均一的层，优选单层中，并将颗粒固定于本 发明的组合物中。

                         发明背景

在各种各样的技术中，从液体中分离物质(通常是颗粒物)的能力和/或方便 性是测试液体中物质存在能力的关键。与样品制备有关的干扰太常见，甚至达到 分不清细胞的程度，使得该过程不是充分可靠的，或者太昂贵。在涉及检查和/或 诊断的许多其它领域，包括环境测试，放射性研究，癌症筛选，细胞学检查，微 生物学测试，和有害废料污染(在此仅举几例)也遇到这样的问题。

样品的细胞学检查的全部要求，是从病人获得细胞样品，通常可使用任何一 种熟知的技术进行，包括下列技术的任一种：直接刮，刮或拭抹某区域(如子宫 颈样品)，刷，用标准制备级离心收集并浓缩液体样品，细针吸取或任何其它已 知的方法，或收集体液(如从胸腔、膀胱，或脊柱管中获得的体液)。在常规手 工细胞学检查中，然后将液体中的细胞转移到一张载玻片上以观察。在常规的自 动细胞学检查中，将一组滤片置于悬液中，该滤片组可分散细胞，并将细胞捕获 在滤片上，取出滤片。并将其置于一片显微镜载玻片上。在所有这些努力中，样 品制备方法的限制因素是充分将固态物质与其液体载体(如各种液体，例如生理 性、生物性和环境性液体)分开，和简便有效的收集和浓缩固态物，使其成为易 于用显微镜检查的形式。

最佳制备颗粒物，用于显微镜检查中的另一个限制因素，涉及用来将颗粒物 固定在显微镜载玻片等之上的溶液和/或几种溶液。

已开发了存放尿或其它生物性液体标本的许多容器，以便不需除去尿液或生 物液容器的盖子就可测试液体生物学标本。现有技术无一解决了如何将在均匀层 中的细胞转移到载玻片上供检查，而同时在取得细胞后保留液体的问题。

现在，采用特别的容器来收集体液样品，供细胞学检查。这些容器常含有保 存溶液，供从样品采集点运输到细胞学实验室的途中保存细胞学标本。另外，还 用拭子、涂片、冲洗或刷子将从体腔收集的细胞学标本保存在装有固定剂(如乙 醇或丙酮固定剂)的特别容器内，然后将细胞转移到载玻片或膜上染色或检查。

诊断微生物学和/或细胞学(尤其是在临床病理学领域中)，是基于显微镜检 查细胞和其它显微镜分析。通常诊断的准确度和最佳的可判断标本的制作取决于 恰当的样品制备。免疫细胞化学和图象分析的新方法要求制备物可重复制取、快 速、无生物危害、和便宜。本发明的不同细胞制备技术着重于解决不一致的细胞 密度、不均匀的细胞分布和空气干燥的人工制备物等问题。这些制备方法已导致 具有优良形态学的细胞均匀分布，从而改进了光学显微镜的可视性，并可使用图 象细胞计数仪。

本发明的固态物质制备技术致力于解决不一致的物质密度、不均匀的物质分 布和因样品制备步骤过多造成的样品损失等问题。本发明的制备物导致固体均匀 分布，其具有优良的形态，改进的可视性，而且易于定位和采用光吸收分析，而 不需要对样品作进一步操作和制备。

适当固定(即保存)衍生自人或动物组织细胞收集物的细胞材料(如细胞、 细胞积聚物和小组织片断)是准确诊断疾病，尤其是癌症的先决条件。在获得材 料后，必须尽可能快的固定细胞材料，防止细胞变形。

可通过熟知的涂片或液体技术制备构成细胞学材料的可检查形式的细胞标 本。由于这些标本在收集后到进一步染色，加盖玻片等之前有相当的间隔时间， 因此给细胞材料使用一种固定剂，来保存并固定细胞是重要的。

空气干燥和四色染色的细胞标本虽然在外国很流行，但在美国不常使用。当 然，将载玻片浸入醇溶液，或喷洒固定剂来浸透载玻片，或直接将细胞材料置放 入醇溶液的湿固定法，是细胞固定的已知方法。细胞固定是可解释的帕帕尼科拉 氏染剂(Papanicolaou)，苏木精(Hematoxylin)和伊红(Eosin)或其它染色的细胞标本 载玻片的先决条件。

一般含有或不含有其它添加剂(如聚乙二醇)，浓度范围在50％到95％的 醇溶液(v/v：甲醇、乙醇、异丙醇)，是湿法固定所用的已知溶液。然而当使用高 于50％(v/v)的醇溶液来收集和固定富含蛋白质的液体时，会形成蛋白沉淀，其随 后会变硬。蛋白沉淀使固定的细胞材料难于转移到载玻片上供检查，不论转移是 通过直接涂到载玻片上，还是通过小孔滤膜细胞过滤，或将细胞离心到涂有粘合 剂(如铬铝明胶)的载玻片上都有困难。

一个多世纪以来，用来保存和制备组织，供分析评估的组织固定剂组合物， 一直是以甲醛为基础的。用于组织保存和制备精细切碎的组织，供显微镜检查的 标准组合物是福尔马林。福尔马林是3-10％的甲醛水溶液，通常含有约15％的 甲醇。醇能改善溶液的保存性能。尽管具有许多缺点，最突出的是其高毒性和刺 激性，但福尔马林仍是实验室应用中通常所选的固定剂，因为它能迅速与接触的 组织表面反应，并使细胞保存最大化。甲醇可能对组织的质地有副作用，使组织 太脆或更常见的是太软，因而在载玻片制作中不易切成片。它还可产生着色的人 为制品或干扰染色的杂质。但含甲醇的福尔马林提供了能满意的切片和染色，供 显微镜检查的保存良好的组织。

组织学家经长期努力已开发出有效的免疫组织化学固定剂和形态学固定剂。 另外，需要保存形态学细节，保存组织抗原，以便进行免疫组织学检查和对组织 中的抗原定位。

这些固定剂使蛋白质不溶。例如，可用甲醛作为交联剂，在醛基和特定氨基 酸之间形成共价键，来稳定蛋白质结构，并将细胞质转化成凝胶，从而限制了自 溶性酶的运动。另外，可用醇作为固定剂，通过变性来沉淀蛋白质。

优选固定剂必须阻止自溶和腐败，并保存形态学细节和抗原性。不幸的是， 有效的形态学固定剂不一定是有效的免疫组织化学固定剂。

                          发明简述

本发明涉及一种固定剂组合物和保存细胞学和组织学标本的方法。本发明的 组合物和方法特别适用于从生物性、生理性和环境性液体中分离物质，并以改进 的方式提供颗粒状物质用于检查。

本发明针对含有醛交联剂、多元醇和去污剂的细胞学和组织学固定剂。该组 合物的醛通常是C1-C6链烷基或C1-C8亚烷基二醛，如戊二醛、甲醛、多聚甲醛、 乙醛、丙醛或丁醛。通常，组合物的多元醇可是乙二醇、丙二醇、甘油、山梨醇 和甘露醇。优选的去污剂是非离子去污剂，如Triton X-100、Nonidet P40、Igepal Ca-630、Tween85、Tween80或Tween65。

本发明的固定剂组合物还可包含下列任何一种物质：维持溶液pH在约4和 约7之间的缓冲液，如Tris或磷酸缓冲盐；核蛋白沉淀剂，如乙酸；溶血剂，如 乙酸；同渗容摩维持剂，如葡萄糖或氯化钠；溶剂，如乙醇，异丙醇，甲醇和水； 酮，如丙酮或甲基乙基酮；细胞包裹物质，如聚乙二醇(PEG)或Carbowax和溶 粘蛋白剂，如二硫苏糖醇(DTT)或乙酰基半胱氨酸。

本发明的固定剂组合物优选含有浓度约0.2-4.0％的醛，浓度约0.5-2.0％的甘 油，和浓度约0.01-0.05％的去污剂。本发明的组合物还可包含浓度约35-45％的醇， 浓度约2.0-3.0％的丙酮，浓度约1.0-3.0％的聚乙二醇和缓冲液。

本发明还介绍通过用有效量的本发明的组合物固定标本，来保存细胞学或组 织学标本的方法。

本发明还提供一种组织固定剂组合物，用于组织病理学用途，该组合物能迅 速渗入组织表面，而最大程度的保存细胞，留下最少的着色人为制品，并允许准 确染色。本发明还提供一种细胞学和组织学固定剂配方，来固定并保存悬液中的 细胞、细胞积聚物和小组织片段。

本发明还提供一种固定剂配方，其可保存偶然与细胞学材料一起收集的组织 样品，用于进一步组织学加工。

本发明还提供一种固定剂配方，其使细胞、细胞积聚物和组织片段的悬液能 在邮政运输遇到的条件下运输，使得遥远的用户在没有细胞学家、细胞技师、医 师或其它对制备细胞样品有经验的人员存在时，能固定细胞标本用于以后的加工， 并可制备技术上满意的细胞样品玻片。

本发明在另一方面涉及制备组织用于切片、染色和/或显微镜观察的方法，其 中在脱水前，用本发明储藏稳定的组织固定剂溶液保存标本组织。

本发明公开了一种独特的细胞学和组织学固定剂配方和使用该配方的方法。 该配方能固定并保存悬液中的单个细胞、细胞积聚物和小组织片段；使蛋白质在 该悬液中的沉淀最小化；选择性除去或减少细胞材料和细胞学标本玻片中的红血 细胞的污染；保存和细胞材料一起偶然收集的组织样品，用于进一步组织学加工； 并使细胞材料能在通常的邮政运输中碰到的条件下运输，从而使遥远的用户在不 能遇到细胞学家、细胞技师或其它对制备细胞样品有经验的人员时，能制备技术 上满意的细胞样品玻片。

                            发明详述

本发明的组合物包含一种或多种溶剂，优选是烷基醇，在约35％和约45％ 体积之间；酮，约2％和约3％体积之间；稀释剂，优选二醇或三醇，从约1％到 约3％体积；交联剂，优选醛，约0.2％-4％体积；甘油，约0.5％-2％体积；一种 或多种去污剂和/或分散剂，优选非离子型，约0.01％-0.05％体积；和缓冲液，约 45-65％体积。在本发明的优选例中，该组合物的pH是约4-7。

本发明还包括如上所述的固定剂组合物在细胞学和/或组织学方法中的用途。 本发明的组合物特别适合与颗粒物收集装置一起使用，其选自下列公开的：美国 专利5,471,994；美国专利5,301,685；1997年8月4日提交的美国系列号 (USSN)08/905,833；1997年11月4日提交的USSN 08/963,873；1998年3月13 日提交的USSN 09/052,005,1998年4月1日提交的USSN 09/053,010,USSN 08/963,873；PCT/US/16349 USSN 09/050,010；PCT/US98/17524；USSN 09/185,606 和PCT/US98/23222。

本发明还包括制备细胞学和组织学标本的方法，和制备颗粒物，如细胞学、 血液学和微生物学标本的方法，用于通过收集颗粒物，通过将颗粒物收集在均匀 层、优选单层中，并将颗粒固定在本发明的组合物中，供检查。

表1总结了本发明固定剂配方的组分范围和优选浓度 组分 范围(体积％) 优选(体积％) 例子 溶剂 35-45  37-42 酒精 酮 2.0-3.0  2.1-2.4 丙酮 细胞包裹物 1.0-3.0  1.6-1.9 PEG 多元醇 0.5-2.0  0.8-1.2 甘油 交联剂 0.2-4.0  0.6-0.8 甲醛 戊二醛 去污剂 0.01-0.05  0.02  Nonodet P40 缓冲液 45-65  50-55  Tris 溶粘蛋白剂 0.1-1.0(克％) 0.2-0.5(克％) 二硫苏糖醇 乙酰基半胱氨酸

本发明组合物的示范性配方包含；约40％体积的醇(如异丙醇和甲醇)， 约2-3％的丙酮，约1.0-3.0％的聚乙二醇，约2％体积的甲醛(如商业可购得 的福尔马林，3-37％v/v水溶液，有时含甲醇)；和约58％体积的缓冲液(如 Tris)。该配方的优选pH是约5.0±0.5。实施例1显示了另一种有用的配方。

本发明的组合物包含一种或多种能渗入组织或细胞，使细胞脱水，和/或 抑制细菌和病毒活性的溶剂。在本发明的一个优选例中，溶剂是链烷基醇的 混合物，它能缓慢渗透，并当与其它试剂联用时，迅速固定样品。它通过沉 淀使蛋白变性，沉淀糖元，并溶解脂肪和脂类。链烷基醇可以是任何熟知的 具有1到4个碳原子的醇，如甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、正丁醇和各种 分枝的丁醇。最优选的溶剂是甲醇和异丙醇的混合物，通常分别是约30％和 10％体积。

酮是与醇具有相似作用的固定剂，除了糖元保存不太好。酮起固定剂的 作用，另外使全部组合物渗入细胞。优选的酮是丙酮。

标本上的涂层帮助保护细胞或组织免受干燥的影响。优选的涂层是聚乙 二醇(PEG)或Carbowax。涂层对防止细胞皱缩和保持核细节是重要的。

甘油等多元醇在样品加工中防止细胞干燥。在固定剂溶液中已放置了一 段长时间后的细胞通常会由于固定过程而变硬，从而较难于在玻片上分散开。 多元醇帮助细胞在载玻片上变得平坦。优选的多元醇是7二醇、丙二醇、甘 油、山梨醇和甘露醇，最优选的是甘油。

交联剂与蛋白质末端基团反应，来交联分子并产生不溶性产物。蛋白基 团涉及氨基、亚氨基和酰氨基、肽、羟基、羰基和巯基。在相似基团NH2和NH之间也常形成亚甲基桥，但认为它经过水洗是可逆的。一些交联剂，如甲醛， 是抗菌剂。

优选的交联剂是醛，如C1-C6链烷醛或C1-C8亚烷基二醛。优选的醛类 交联剂是戊二醛、甲醛、多聚甲醛、乙醛、丙醛或丁醛。最优选的是甲醛。

去污剂，如非离子型去污剂，被用作分散剂，并使蛋白质和膜组分溶解， 来减少细胞的积聚。优选去污剂是Triton X-100,Nonidet P40,Igepal Ca- 630,Tween85,Tween80，和Tween65。

缓冲液将溶液pH维持在约4-7之间，并提供运输的基质。优选的缓冲液 是Tris，一种熟知的缓冲液。根据本发明，缓冲液还可包含使核蛋白沉淀的 固定剂，和一种或多种同渗容摩维持剂。优选核蛋白沉淀基是乙酸，它也起 溶血剂的作用，可裂解红血细胞。通常乙酸以约0.2％-2.0％体积存在。优选的 同渗容摩维持剂是葡萄糖，通常范围在约0.1％-0.2％重量，和氯化钠，通常范 围是约0.7％-0.8％重量。

在本发明的固定剂组合物中包括一种溶粘蛋白剂，用于从粘液样标本， 如痰、支气管肺泡洗液和灌洗液、胃洗液和灌洗液制备的颗粒单层。用于本 发明的溶粘蛋白剂的例子包括：二硫苏糖醇(DTT)、乙酰基半胱氨酸、溴苄 环己铵、羰基半胱氨酸、磺胺嘧啶、酸性甲酯(letosteine)、溶菌酶、盐酸、 半胱甲酯、巯乙磺酸钠、水合蒎醇、硬脂酰甘氨酸(stepronin)、巯丙酰甘氨 酸和四丁酚醛Tyloxapol。优选溶粘蛋白剂是二硫苏糖醇(DTT)或乙酰基半 胱氨酸，通常以范围0.1-1.0％克使用。优选范围是0.2-0.5％。DTT是水溶 性试剂，完美适用于保护巯基。DTT易于渗透细胞膜并以其低氧化还原电势防 止蛋白质的氧化。DTT还将单硫醇维持在还原态，并减少二硫化物的数量。

在优选例中，所述活性固定剂成分可溶于合适的溶剂，如蒸馏水中，然 后可以许多本领域技术人员明白的方式使用该溶液作为固定剂。例如，可用 固定剂溶液来保存待运输或携带到检查点的组织样品。在该过程中，用本发 明的试剂装满具有液体紧密密封的小试管或罐，并将组织样品置于含该试剂 的小管中，来保存样品，直到它们到达能进行进一步加工的地方。还可用约80 -0％体积的水和其它溶剂。可使用任何不改变配方的重要化学和物理学特征 的任何合适稀释剂。

可用任何已知常规方法，如用石蜡、切片装置、染色、制成玻片标本， 或在显微镜或其它检查前所用的其它一般步骤，制备用于组织学研究的、使 用本发明固定剂的用于研究的组织。因此本发明提供了安全、便利和有效的 固定剂溶液，可用于许多使用这类溶液的已知组织学程序中。

本发明还包括收集液体，如生物性、生理性或环境性液体，不经离心从 液体中取出所要的物质，并诊断和测试该物质的装置和方法。在本发明的一 个优选例中，在一个收集点上收集颗粒物。在本发明的最优选例中，将颗粒 物收集在单层中，通常以预先确定的空间排列。

本发明还包括如上所述的固定剂组合物，优选与使样品容器绕着固定搅 拌器等旋转来分散样品中的颗粒的仪器和方法一起使用。

本发明还如上所述，与改进的收集和加工液体(通常是生物液)的装置 一起使用固定剂组合物；该装置包括具有一个或多个下列部分的颗粒物收集 室：收集点；从液体中分离颗粒物的膜；多孔支持物；具有至少一个完全钻 孔，优选钻孔位置靠近多孔支持物周围的多孔支持物，所述钻孔提供了额外 的表面张力，从而当框架开放时，使滤膜能保持在多孔支持物上，而使膜暴 露，用于进一步加工；在收集室中至少建立了两条液体流动通道的多孔排列； 将收集的颗粒物装置成预先确定的图案的多孔排列底座；具有同心管道的收 集室；具有一种或多种有弹性成员的管道；具有一种或多种有弹性成员的收 集室底座；具有柱的收集室底座或基座；具有一种或多种预先确定的表面修 饰的收集室底座；具有一个或多个促进颗粒物在收集点上按预先确定的空间 排列的元件的底座；和促进液体流过该室的结构。

与本发明的固定剂组合物一起使用的仪器还可包括适合于在收集室中混 合收集的标本，和/或使之成形的结构。示范性结构包括但不限于：具有可转 动的盖，或盖子的一部分可转动的收集室；与收集容器相结合的，可移动的 盖或盖的一部分；和伸入收集室的管道等，所述管道包括一或多个能混合标 本的部件。盖子的一部分与液体密封垫中盖子的一部分紧密接合。盖子还可 包含一部分，它与液体密封但不是流体密封垫中盖子的一部分紧密接合。

本发明的组合物、装置和方法可安装在半自动系统或结构，或全自动系 统或结构中或用于手动的系统或结构。

本发明还包括制备用于显微镜检查的、用本发明的装置加工样品，并在 该装置中的收集点上收集颗粒物，从而制备样品。

本发明还包括分析物质的方法，该方法包含将样品收集在收集容器中， 将物质收集在收集元件上，并将收集在收集元件上的物质转移到显微镜载玻 片上等。优选两个收集步骤都在同一仪器中进行。

在本发明的优选例中，一个标本杯包括收集液体标本的室，和在与该室 流动联系中，用于分离液体中颗粒物，并将分离的颗粒物收集在收集区上的 颗粒物分离室或舱。在本发明的最优选例中，将分离的颗粒物收集在收集区 上的单层中。本发明的优选例还包括与颗粒物分离室流动联系的空心管。更 优选的，该空心管包括混合标本和/或分散标本中的颗粒物的装置。示范性装 置包括但不限于搅拌器、翼片、刷子、抹、帚、刮勺等。本发明的优选例包 括具有刷子的管。示范性的刷子公开于美国专利4,759,376，在此引入以供 参考。

如本文所用，“样品”指任何与固体物质，如与颗粒物质联合的液体， 而且可理想的从样品中收集颗粒成分，来确定样品中物质的身份或存在。通 常，样品的流体成分是液体。然而，流体也可以是空气或气体。比如，测定 生物性液体，如尿中癌症细胞或某些蛋白的存在可能是理想的。在另一个例 子中，对于评估电力工业中使用的超纯水中的污染物，如分子污染物的性质 可能是理想的。其它示范性液体包括但不限于：体液，如血液、脊髓液、或 羊水；支气管灌洗液；痰；细针抽吸液；地下水；工业处理液；和电子或医 药透析液，仅列出一些。本发明应不受要处理的液体类型限制。

如本文所用，颗粒物质指任何液体中的物质，该物质能被收集并优选用 细胞学，血液学或微生物学实验作评估。示范性颗粒物质包括但不限于：细 胞或细胞碎片、细菌、血液成分、蛋白质、分子、聚合物、橡胶、稳定剂、 抗氧化剂、促进剂、聚硅酮、醇酸、硫醇、煤油、热塑塑料、细菌、杀虫剂 和除草剂。特别的示范性聚合物包括但不限于：聚乙烯、聚丙烯、聚异丁烯、 聚丙烯腈、聚乙二醇、聚乙烯氯、聚硬脂酸、多硫化物、聚甲基丙烯酸甲酯、 聚对苯二酸乙烯酯、乙基纤维素、硝基纤维素、聚氨基甲酸乙酯，和尼龙。 一种特别的示范性的环境污染物是双酚A。特别的示范性生物物质包括：癌症 细胞、包括转移性和正常癌症细胞之间的鉴别；蛋白质，核酸，抗体等。本 发明应不限于要处理的物质类型。

当将细胞学收集仪器和/或本发明的固定剂组合物用于生物性液体时，对 于从尿和其相关细胞中制备测试样品，用于帕帕尼科拉乌涂片，是特别有用 的。在细胞学中最广泛使用的目测细胞变化的染色是帕帕尼科拉乌染色程序。 用于妇科和非妇科应用的该染色法基本是由蓝色胞核和橙色、红色和绿色胞 浆复染法构成的。胞核染色显示与正常或异常细胞相关的染色体图案，而胞 浆染色有助于指明细胞起源。该程序的成功可归功于可观察许多因子，包括 核的细节和细胞分化的能力。该染色程序还产生了多种颜色的制备物，看来 很美观，可能降低眼睛的紧张。本发明应不受要处理物质类型限制。在本发 明的最优选例中，液体是尿液，而颗粒物质是细胞。

本发明的组合物和方法还允许从生物液中分离并收集新鲜细胞和/或微生 物，一旦细胞以适当缓冲液溶血后，可进行DNA探测和染色体分析。

如本文所用的，适合于通讯、交通的术语，或相似的术语指用于建立流 过该系统的流体的任何工具、结构、或方法，是本领域技术人员熟知的。本 文所引用专利的附图中显示了示范性的结构。例如，一根管道可具有一个接 头，适于接受或连接在另一条管道上的配对接头。本文所用的接头指任何用 来形成接合点或其自身与另一零件接合的结构。这些接头或接合处建立了通 过该仪器、装置或系统的各种元件的液体流动。典型的接头包括但不限于： 配对接头，如Luer型、螺丝型、摩擦型或互相结合的接头。

本文所用的“适合于接合”，“接合”，“连接”，或相似的术语可指 排成行、相啮合、配对或互相靠近、垂直，或在彼此内的互补结构。示范性 结构包括上述接头。

本发明还包括从流体中取出颗粒物质，并将颗粒物质，如细胞或细菌或 血液样品转移到显微镜载玻片上的方法。与现有方法相反，使用膜过滤提供 了将细胞均匀放置在显微镜载玻片上，只有最少重叠的方法。这能使观察清 楚，和最佳的诊断准确性。    

然后用多孔介质迫压显微镜载玻片，使在收集部位上的收集的颗粒物质 如它们被收集时一样，转移到载玻片上。这使技术人员能对细胞进行细胞学 检查，而不因加工需要，受到膜上孔的干扰或延迟。

由于细胞细节取决于固定方法，优选细胞在被放置在载玻片上后，立刻 固定。在制备和固定之间耽误太久会使细胞暴露干燥，从而损害细胞结构。 另外，人为的空气干燥对随后的染色效果有不良作用。例外的是当细胞用 Wright-Giensa染色时，采用空气干燥作为固定步骤。

在本发明的另一个实施例中，可将细胞单层直接固定在收集点上。这可 先将细胞单层放置在上述细胞学收集仪器的收集点上，然后使含有固定剂， 如酒精或丙酮的溶液通过该细胞学收集仪器。

应要注意可采用能与本发明实施例互换的各种类型的多孔阵列。虽然聚 碳酸酯膜特别适用于本发明的细胞收集仪器，其它多孔膜也是合适的。示范 性多孔膜是本领域熟知的，在美国专利5,471,994和5,301,685中已公 开，两者都在此引入以供参考。

本发明范围内还包括从一病人样品产生一张载玻片，从一个病人样品产生多 张载玻片，或从多个病人样品产生多张载玻片。病人的样品将以单幅、成批、或 连续方式加工。可容易的制备其它染色用途的额外载玻片。可在额外的载玻片上 通过较新的方法，如免疫细胞化学或原位杂交进行人乳头瘤病毒测试。随着癌基 因产物或其它免疫细胞化学测试的发展，需要更多的载玻片。由于这种制备不需 要仅以一种方式固定载玻片，可将这些测试所需要的不同固定方法引入该程序。

在细胞学中目测细胞变化使用最广泛的染色方法是帕帕尼科拉乌染色程序。 用于妇科和非妇科应用的该染色法基本是由蓝色胞核和橙色、红色和绿色胞 浆复染法构成的。胞核染色显示与正常或异常细胞相关的染色体图案，而胞 浆染色有助于指明细胞起源。该程序的成功可归功于可观察许多因子，包括 核的细节和细胞分化的能力。该染色程序还产生了多种颜色的制备物，看来 很美观，可能降低眼睛的紧张。

本发明的组合物和方法特别适合制备颗粒物质，如细胞学、血液学和微 生物学标本，以及用于保存组织学标本。

                           实施例

实施例1.固定剂配制

产生了下列固定剂组合物：40％酒精(甲醇和异丙醇)；2.2％丙酮；1.8％ 聚乙二醇(PEG)；0.7％甲醛；1％甘油；0.02％Nonider P40；和54％Tris缓冲 液(pH7.4-7.8)。所有成分的量是体积的大约百分数。

上述固定剂溶液与各种细胞学标本制备技术或装置联用，包括在美国专 利5,471,994；美国专利5,301,685；1997年8月4日提交的美国系列号 (USSN)08/905,833,1997年11月4日提交的USSN 08/963,873,1998年 3月13日提交的USSN 09/042,005,1998年4月1日提交的USSN 09/053, 010；PCT/US98/16349；USSN 09/050,010；PCT/US98/17524；USSN 09/185,606 和PCT/US98/23222中公开的那些。实施例1的固定剂溶液显示了用最小量的 制品能迅速渗透组织；这样固定的组织染色显示了优异的组织学和细胞学细 节。

实施例2.细胞学制备

1．用本发明的固定剂组合物半充满标本收集容器。将含有细胞的标本放 入具有固定剂组合物的容器。

2．强力混合细胞学标本和固定剂组合物，使标本和固定剂充分混合。

3．如果该细胞学标本的细胞不分散，该标本可能是均匀的。用每分钟约 2,000到4,000转(RPM)，优选约3,000RPM转动的机械叶片进行均化。MonoGenTM Monoprep G底部的叶片执行该功能。或者，可用高速搅拌器搅拌5到10秒， 或更短。如果在标本中可见斑点和细线，将其返还到搅拌器中，再搅拌10到 15秒钟。避免过度搅拌。

4．在进一步加工前，应将细胞固定至少15分钟。进一步加工包括本领 域制备细胞单层和细胞染色的熟知方法。可用各种细胞学制备装置，如实施 例1中的那些。

实施例3细胞学保存和溶粘蛋白溶液

产生了下列固定剂和溶粘蛋白组合物：40％酒精(甲醇和异丙醇)；2.2％ 丙酮；1.8％聚乙二醇(PEG)；0.7％甲醛；1％甘油；0.02％Nonidet P40；和54 ％Tris缓冲液(pH7.4-7.8)。所有成分的量是体积的大约百分数。加入0.2-0.5 克％范围的DTT。该溶液称为MonoLexTM。将该MonoLexTM溶液以1∶1比例加 到标本中。将标本和溶粘蛋白固定剂溶液旋转将近1分钟，然后培育约30分 钟，再次旋转约1分钟。进一步加工包括本领域制备颗粒单层和细胞染色熟 知的方法。可使用各种细胞学制备装置，如实施例1中列出的那些。

实施例4

由于细胞细节取决于固定方法，细胞优选在放置在载玻片上后，立刻固 定。在制备和固定之间耽误太久会使细胞暴露干燥，从而损害细胞结构。另 外，人为的空气干燥会对随后的染色效果有不良作用。例外的是当细胞是用 Wright-Giensa染色时，采用空气干燥作为固定步骤。

在本发明的另一个实施例中，可将细胞单层直接固定在收集点上。这可 先将细胞单层放置在上述细胞学收集仪器的收集点上，然后使含有固定剂， 如酒精或丙酮的溶液通过该细胞学收集仪器。

本发明范围内还包括从病人样品产生多张载玻片。可容易的制备其它染色用 途的额外载玻片。可在额外的载玻片上通过较新的方法，如免疫细胞化学或原位 杂交进行人乳头瘤病毒测试。随着癌基因产物或其它免疫细胞化学测试的发展， 需要更多的载玻片。由于本发明不需要仅以一种方式固定载玻片，可将这些测试 所需要的不同固定方法引入程序。

可将相同的载玻片制备程序用于几乎所有的细胞学形式。另外，全部含有一 次性组分的使用提醒对生物危害应予以关注。最后，细胞提供质量的提高，细胞 学解释的改进，可能通过提供更一致和可靠的病人诊断而扩大了细胞学的作用。

在本发明的描述中，参考了本发明的优选例和优点说明。然而，本领域技术 人员和对本发明的直接公开内容熟悉的人员，可认识到在不脱离本发明权利要求 所限定的范围，可作出许多其它改变、变化和变通。