一种心磷脂的合成与应用
阅读：246发布：2023-01-24
专利汇可以提供一种心磷脂的合成与应用专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 提供了一种新型PEG修饰的心磷脂及其合成。可以将用该新型心磷脂制备脂质体，其还可以包含活性剂，例如疏 水 的或亲水的药物。这样的脂质体可以用于 治疗 疾病 或诊断和/或分析试验中。脂质体还可以包含用于靶向特定细胞类型或特定组织的配体。，下面是一种心磷脂的合成与应用专利的具体信息内容。
1.一种式(I)所述的心磷脂分子，其具有下列结构：
其中，Z是-O-C(O)p-，-O-，且p＝1-10；
R1和R2为相同的饱和或不饱和烷基，其碳链长度范围为约1-50个碳原子；
R3为-(CH2CH2O)n-CH2CH2-OCH3，且n＝0～100；
X为阳离子。
2.根据权利要求1所述的心磷脂分子，其中所述化合物为
其中，Z是-O-C(O)p-，-O-，且p＝1-5；
R1和R2相同的饱和或不饱和烷基，优选的碳链长度范围为约4-34个碳原子；
R3为-(CH2CH2O)n-CH2CH2-OCH3，且n＝20～50；
X优选为非毒性阳离子如氢，铵，钠，钾，钙离子等。
3.根据权利要求1所述的心磷脂分子，其中所述化合物为
其中，Z是-O-C(O)p-，-O-，且p＝1-2；
R1和R2为相同的饱和或不饱和烷基，优选约14-24个碳原子；
R3为-(CH2CH2O)n-CH2CH2-OCH3，且n＝20～40；
X为阳离子铵。
4.根据权利要求1-3任一项所述的心磷脂分子，其特征在于所述心磷脂分子制备方法包括以下步骤：
a)、将磷酸化剂，O-氯苯基二氯磷酸酯，与1，2-O-二酰甘油和2-O-PEG的甘油在惰性溶剂中在有机碱的存在下进行反应，以提供心磷脂前体；
b)、使用上述心磷脂前体、硝基苯醛肟和四甲基胍进行反应，然后进一步使用凝胶柱进行纯化，得到目标化合物。
5.根据权利要求4所述的心磷脂分子制备方法，其中所述步骤a)中惰性溶剂甲苯、二甲苯、乙腈、二氯甲烷等，优选二氯甲烷。
6.根据权利要求4所述的心磷脂分子制备方法，其中所述步骤a)中有机碱选自DMAP、LDA、三乙胺、三丙基胺、吡啶等，优选吡啶。
7.根据权利要求4所述的心磷脂分子制备方法，其中所述步骤b)中凝胶柱纯化的流动相为二氯甲烷/甲醇/氨水，其流动相比为1-2∶2-3∶1-1.5。
8.权利要求1-3所述的心磷脂分子在制备用于治疗疾病或诊断和/或分析试验中试剂的用途。
9.权利要求1-3所述的心磷脂分子，其可以制备含有活性物质的脂质体制剂或复合物或乳剂。
10.权利要求9所述的脂质体类制剂，其中还包括稳定剂，吸收促进剂，抗氧化剂，磷脂，生物可降解聚合物，或其它药物活性剂成分。
一种心磷脂的合成与应用
发明领域
[0002] 发明背景
[0004] 通常用天然存在的磷脂制备脂质体，例如磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰甘油、磷脂酸和磷脂酰肌醇。可以加入阴离子的磷脂，例如磷脂酰甘油和心磷脂，以产生净负表面电荷，其提供胶体稳定化。脂质体的表面电荷的性质和密度会影响稳定性、动力学、生物分布和与靶细胞的相互作用。脂质体表面电荷还影响脂质体聚集的趋势，这与脂质体难以发挥作用并影响靶细胞的摄入有关。带有中性表面电荷的脂质体具有最高的聚集趋势，但是在全身使用后似乎难以被网状内皮系统(RES)清除。另一方面，带负电荷的脂质体表现出聚集性降低和稳定性提供，但是表现出非特异性的体内细胞摄入。因而，已经有人认为小量的带负电荷的脂质可以使中性脂质体更加稳定，对抗聚集依赖性的摄入机制(参见，例如Drummond等，Pharm.Rev.，51，691-743(1999))。
[0005] 心磷脂(Cardiolipin，也称作二磷脂酰甘油)构成了一类复合的阴离子的磷脂，结构为： 从与高代谢活性有关的组织的细胞膜中纯化而得，包括心脏和骨髓肌的线粒体。如上所述，心磷脂的负表面电荷使脂质体稳定化，对抗聚集依赖性的摄入。在动物组织和线粒体中，心磷脂含有高达90％的亚油酸(18:2)。酵母心磷脂则含有更多的油酸(18:1)和棕榈油酸(16:1)，而细菌心磷脂则含有饱和的和单烯的14至18碳脂肪酸。
[0006] 脂质体(不同大小、电荷及组成的人工磷脂囊泡)已被广泛接受为有前途的药物载体。表面用抗体、螯合剂、多糖及天然或合成聚合物修饰可改进脂质体的各种理化性质，尤其是在生理介质中更稳定，且避免了从机体迅速清除，从而在血液循环中驻留时间延长。这些保护性聚合物中，PEG是最先被应用的合成聚合物并被证明具有最好的长效作用。其他如聚甲基唑啉、聚乙基唑啉结构与PEG不同，但具有相似的效果。表明这种长效作用是通过物理机制而不是化学或生物学机制发生的。长效脂质体在血液中驻留时间显著延长，是由于PEG或类似聚合物的包衣作用产生立体位阻导致脂质体微粒之间、脂质体与血浆蛋白之间的相互作用减少，因此脂质体表面对各种调理素如补体化合物的摄取减少，使生物稳定性增加。药物及脂质体的生物行为很大程度上取决于聚合物的性质。
[0007] 一方面，PEG在水溶液中溶解性及与水分子结合能力极强，聚合物柔性很大，毒性、免疫原性及抗原性较低，在网状内皮系统(RES)中无积累，对修饰剂的特异性生物学性质影响极小，且PEG体内难以降解，不生成任何毒性代谢物。
[0008] 另一方面，分子量小于50000的PEG分子可经肾从体内排泄。目前已有不同分子量的PEG上市，通常用于修饰药物及药物载体的PEG的分子量为1000～12000，基本结构为HO-(CH2CH2O)-CH2CH2-OH的均聚物。近来，有许多化学方法合成PEG的活性衍生物并将其与各种药物及药物载体连接。PEG的单甲基衍生物(mPEG)也用于药理活性物质的修饰，使用这种单端基反应聚合物的优点是产品中不存在交联聚集物及其与生物大分子或药物载体结合具有高度均匀性。
[0009] CN1714094A公开了一种新的心磷脂合成途径，该心磷脂具有不同链长、不饱和或饱和的不同脂肪酸和/或烷基链。这些制剂可以用于治疗疾病或诊断和/或分析测定。脂质体还可以包括例如用于将它们靶向某一细胞类型或特定组织的配体。但该心磷脂作为脂质体仍存在递送能力偏低的缺陷。
[0010] CN1714095A公开了一种心磷脂、特别是短链心磷脂的新的合成途径，所述心磷脂具有不同链长的不同脂肪酸和/或烷基链、还具有或不具有不饱和度。该方法包含：使1，2-O-sn-二酰基/1，2-O-sn-二烷基甘油或2-O-保护的甘油与亚磷酰胺试剂或磷酸三酯反应，生成保护的心磷脂，对其去保护制备出短链心磷脂。可以将由本方法制备的心磷脂包含在脂质体中，其还可以包含活性成分，例如疏水的或亲水的药物。这样的脂质体可以用于治疗疾病或诊断和/或分析试验中。但该心磷脂作为脂质体也存在递送能力偏低的缺陷。
[0011] 为了克服上述现有技术存在的缺陷，本发明对上述现有技术作了进一步改进，得到一种mPEG化的新型心磷脂，较传统心磷脂，具有体内代谢稳定、与药物结合具有高度均匀性等优点，并且本发明所述新型心磷脂作为脂质体递送载体有助于使心磷脂和活性成分进入细胞中，其递送能力大大增强。
[0012] 发明详述
[0013] 本发明提供一种新型的心磷脂分子(包括其类似物或衍生物)，本发明所述的心磷脂分子化合物具有按照下列通式(I)的结构：
[0014]
[0015] 其中，Z是-O-C(O)p-，-O-，且p＝1-10；
[0016] R1和R2为相同的饱和或不饱和烷基，其碳链长度范围为约1-50个碳原子；
[0017] R3为-(CH2CH2O)n-CH2CH2-OCH3，且n＝0～100；
[0018] X为阳离子。
[0019] 在一种优选实施方案中，本发明所述的心磷脂分子化合物具有按照下列通式(I)的结构中：
[0020] 其中，Z是-O-C(O)p-，-O-，且p＝1-5；
[0021] R1和R2相同的饱和或不饱和烷基，优选的碳链长度范围为约4-34个碳原子；
[0022] R3为-(CH2CH2O)n-CH2CH2-OCH3，且n＝20～50；
[0024] 进一步，本发明所述的通式(I)结构的心磷脂分子化合物，其中：
[0025] Z是-O-C(O)p-，-O-，其中p＝1-2；
[0026] R1和R2为相同的饱和或不饱和烷基，优选约14-24个碳原子；
[0027] R3为-(CH2CH2O)n-CH2CH2-OCH3，且n＝20～40；
[0028] X为阳离子铵。
[0029] 作为举例，R1和R2所述的饱和或不饱和烷基，进一步优选为饱和烷基，其与羧酸基连接成烷酸，优选的例子包括但不限于丁酸(C4:0)，戊酸(C5:0)，己酸(C6:0)，庚酸(C7:0)，辛酸(C8:0)，壬酸(C9:0)，癸酸(C10:0)，十一烷酸(C11:0)，十二烷酸(C12:0)，十三烷酸(13:0)，十四烷酸(C14:0)，十五烷酸(C15:0)，棕榈酸(C14:0)，十七烷酸(C17:0)，硬脂酸(C18:0)，棕榈油酸(C16:1)，油酸(C18:1)，亚油酸(C18:2)，亚麻酸(C18:3)，二十碳二烯酸(C20:2)，二十碳三烯酸(C20:3)，花生四烯酸等。
[0030] 本发明所述的一种心磷脂分子化合物及其类似物，其制备方法如下所示：
[0031] 上述制备方法包括在偶联剂的存在下将1，2-O-二酰甘油和2-O-PEG的甘油反应，所述偶联剂为二氯磷酸酯或N，N-二异丙基甲基磷酰胺氯。
[0032] 本发明还描述一种合成心磷脂前体的方法。在该方法中，首先将磷酸化剂，O-氯苯基二氯磷酸酯，与1，2-O-二酰甘油和2-O-PEG的甘油在惰性溶剂中在有机碱(例如吡啶等)的存在下进行反应，以提供心磷脂前体。
[0033] 本发明所述的制备方法进一步提供了一种心磷脂前体转化为心磷脂分子化合物的方法，包括使用心磷脂前体、硝基苯醛肟和四甲基胍进行反应，然后进一步使用凝胶柱进行纯化，得到目标化合物，所述凝胶柱纯化的流动相为二氯甲烷/甲醇/氨水，其流动相比为1-2∶2-3∶1-1.5。
[0034] 上述惰性溶剂选自甲苯、二甲苯、乙腈、二氯甲烷等，优选二氯甲烷。
[0035] 上述有机碱选自DMAP、LDA、三乙胺、三丙基胺、吡啶等，优选吡啶。
[0036] 本发明所述的一种新的心磷脂分子及其组合物，其可以用于制备脂质体组合物。
[0037] 本发明所述的一种新的心磷脂分子，其可以制备含有活性物质的脂质体制剂或复合物或乳剂，和它们在诊断测定和治疗人和动物疾病中的应用。
[0038] 上述活性物质可以包括美法仑、氮芥、乌拉莫司汀、异环磷酰胺、甘露莫司汀、链唑霉素、二溴甘露醇、米托蒽醌、甲氨蝶呤、氟尿嘧啶、阿糖胞苷、替加氟、泰素、紫杉醇、道诺霉素、柔红霉素、博来霉素、两性霉素、卡铂、顺铂、紫杉醇、长春新碱、喜树碱、伊立替康、小红霉素、抗体、多柔比星、依托泊甙、细胞因子、核酶、干扰素。
[0039] 其它实例包括乙二磺酸盐丙氯拉嗪、硫酸亚铁、氨基己酸、盐酸美卡拉明、盐酸普鲁卡因胺、硫酸苯丙胺、盐酸去氧麻黄碱、硫酸异丙肾上腺素、盐酸芬美曲秦、氯贝胆碱、氯醋甲胆碱、盐酸毛果芸香碱、硫酸阿托品、东莨菪碱溴化物、异丙碘铵、曲地氯铵、盐酸苯乙双胍、盐酸哌甲酯、胆茶碱、盐酸头孢氨苄、地芬尼多、盐酸美克洛嗪、马来酸丙氯拉嗪、酚苄明、马来酸硫乙拉嗪、二苯茚酮丁四硝酯、地高辛、异氟磷、乙酰唑胺、醋甲唑胺、苄氟噻嗪、妥拉磺脲、醋酸氯地孕酮、非那二醇、别嘌醇、阿司匹林铝、甲氨蝶呤、醋磺胺异噁唑、红霉素、氢化可的松、醋酸可的松、地塞米松和其衍生物例如倍他米松、曲安西龙、甲睾酮、17-(S)-雌二醇、炔雌醇、炔雌醇3-甲基醚、泼尼松龙、17-α-醋酸羟孕酮、19-去甲孕酮、炔诺酮孕、去甲脱氢羟孕酮、炔诺酮、孕酮、诺孕酮、异炔诺酮、阿斯匹林、吲哚美辛、萘普生、非诺洛芬、舒林酸、吲哚洛芬、硝基甘油、硝酸异山梨酯、普萘洛尔、噻吗洛尔、阿替洛尔、阿普洛尔、西咪替丁、可乐定、丙咪嗪、左旋多巴、氯丙嗪、甲基多巴、二羟基苯丙氨酸、茶碱、葡萄糖酸钙、酮洛芬、布洛芬、头孢氨苄、红霉素、氟哌啶醇、佐美酸、乳酸亚铁、长春胺、长春瑞滨、地西泮、酚苄明、地尔硫、米力农、头孢孟多、氢氯噻嗪、雷尼替丁、氟比洛芬、氟洛芬、托美丁、阿氯芬酸、甲芬那酸、氟芬那酸、尼莫地平、尼群地平、尼索地平、尼卡地平、非洛地平、利多氟嗪、噻帕米、戈洛帕米、氨氯地平、米氟嗪、赖诺普利、依那普利、依那普利拉、卡托普利、雷米普利、法莫替丁、尼扎替丁、硫糖铝、依汀替丁、米诺地尔、利眠宁、地西泮、阿米替林、和丙米嗪。
[0040] 治疗剂可以是一种或多种活性剂(例如，两种或多种活性剂)的混合物，它们可以在脂质体制剂中有益地共同施用。
[0041] 本文所述通式(I)心磷脂分子和通过本发明方法生产的心磷脂分子可以用于脂类制剂。优选制剂或组合物是包括本发明心磷脂类似物的脂类组合物，包括本发明心磷脂的复合物，乳剂和其它制剂也在本发明的范围内。
[0042] 本发明所述的心磷脂分子药物制剂，除了本发明合成的心磷脂以外，还包括：稳定剂，吸收促进剂，抗氧化剂，磷脂，生物可降解聚合物，和其它药物活性剂成分。
[0043] 在一些实施方案中，优选本发明组合物，特别是脂类组合物，还包括靶向剂(targetingagent)，如糖类或蛋白质或其它与特异性底物结合的配体，如抗体(或其片段)或识别细胞受体的配体。这些试剂(如糖或一种或多种选自下组的蛋白质：抗体，抗体片段，肤，肤激素，受体配体，如对细胞受体的抗体，及其混合物)的包括可以促进将脂质体导向预定组织或细胞类型。
[0044] 本发明的脂质体和其它类型的组合物，包括本发明的心磷脂(包括按照本发明方法制备的那些)，可以配制而包括活性剂。活性剂可以是例如包埋在组合物中的脂质体内。与组合物中的一种成分复合(例如与组合物中的心磷脂复合)，或否则存在组合物中。包括在本发明组合物中通常被认为是对于在表面活性剂存在下稳定的活性剂。
[0045] 当组合物包括脂质体时，亲水性活性剂是稳定的，并可以包括在脂质体内部以致脂质体双层产生扩散屏障，防止它任意扩散在身体中。疏水性活性成分特别适合用于本发明制剂，特别是脂质体制剂，不仅可以显著降低毒性，而且它们在脂质体的双分子层中稳定性更高。
[0046] 本发明所述的mPEG化的新型心磷脂，较传统心磷脂，具有体内代谢稳定、与药物结合具有高度均匀性等优点，并且本发明所述新型心磷脂作为脂质体递送载体有助于使心磷脂和活性成分进入细胞中，其递送能力大大优于传统心磷脂。
[0047] 对于医疗或化妆品应用，制剂可以包括已知的其它试剂(例如缓冲液，抗生素，防腐剂或其它赋形剂，如一种或多种药用赋形剂)以配制药物组合物。当按照本发明的组合物包含活性剂时，本发明还提供使用该制剂向人或动物细胞施用活性剂的方法。细胞可以是体外的，在该情形中制剂可以用于诊断或研究目的，或将活性剂传递到患者细胞中。
[0048] 细胞可以是体内的，在该情形中本发明提供将活性剂传递至人或动物，例如需要使用活性剂治疗或为化妆品目的的患者中的方法。该方法可以用于将实际上任何活性剂施用于例如患者患病的细胞或器官。
[0049] 适当的活性剂包括用于治疗病症的诊断剂和药剂，所述病症如炎症(例如慢性炎症)，依赖于血管生成的疾病，关节炎，再狭窄，癌症(例如肺癌，脑癌或中枢神经系统的其它癌，黑色素瘤，膜腺癌，肝癌，辜丸或卵巢癌，和其它肿瘤疾病)，多发性硬化，阿尔茨海默氏病，帕金森氏症，和各种血管病。
[0050] 脂质体制剂，乳剂，或复合物也可以用于抗真菌应用，并可以包含适当的抗真菌药物。
[0051] 典型地，活性成分可以是一种或多种基因和基因载体，反义分子(例如寡核苷酸)，蛋白质和肤，蛋白质或化学药物(例如疏水性或亲水性药物)或诊断剂。
[0052] 本发明所述的方法提供药物制剂的给药，该药物制剂除了活性成分的脂质体制剂(和含有本发明心磷脂和活性剂的其它制剂)以外包括无毒，惰性的适当的赋形剂。
[0053] 适当的赋形剂包括所有类型的固体，半固体或液体稀释剂，填充剂和助剂。
[0055] 剂量单位可以包含，例如1，2，3或4个单个剂量，或1/2，1/3，或1/4的单个剂量。单个剂量优选含有一次给药提供活性剂的量，通常对应于整个，半个，三分之一，四分之一个日剂量。
[0056] 本发明所述剂型还包括片剂，链剂，胶囊，丸剂，颗粒剂，栓剂，溶液，混悬剂和乳剂，糊剂，软膏(例如干性皮肤软膏)，凝胶，乳膏，洗剂(如干性皮肤软化剂，湿润剂等)，散剂和喷雾剂可以是适当的药物制剂。
[0057] 除了脂质体活性剂以外，栓剂可以包含适当的水溶性或水不溶性赋形剂。适当的赋形剂是其中本发明月旨质体活性剂足够稳定而允许治疗应用的那些，如聚乙二醇，某些脂类，和这些物质的酶或混合物。油膏，糊剂，乳膏和凝胶也可以包含适当的其中对脂质体活性剂稳定的赋形剂。
[0058] 如已知或开发了的给药形式，活性剂或其药物制剂可以静脉内，皮下，局部，口服，肠胃外，腹膜内，和/或直肠，或者通过直接注射到肿瘤或器官或需要通过该方法治疗的其它部位给药。
[0059] 也可以例如作为乳膏，皮肤油膏，干性皮肤软化剂，湿润剂等局部施用。实施例
[0060] 下列实施例进一步不限制性地举例说明本发明。
[0061] 实施例12-O-mPEG2000甘油的制备
[0062]
[0063] 按照Dodd等，J Chem.Soc.Perkin1，2273-2277(1976)所述方法从顺-2-苯基-1，3-二恶烷-5-醇制备标题化合物。
[0064] 实施例2保护的心磷脂的合成
[0065] R＝肉豆蔻酰基，
[0066] 在-5℃下在10分钟内向O-氯苯基二氯磷酸酯(3g)和无水吡啶(6mL)的CH2Cl2(15mL)溶液中滴加1，2-二肉豆蔻酰基-sn-甘油(6.2g)的CH2Cl2(60mL)溶液。在0℃下搅拌反应混合物1小时和在室温下搅拌2小时以后，滴加2-O-mPEG2000甘油(9.7g)的CH2Cl2(20mL)溶液。在室温下搅拌反应混合物3小时。旋去溶剂，加入200ml乙醚沉淀。样品使用凝胶柱纯化。得到15g白色的完全保护的心磷脂。
[0067] 实施例31，3-二(1，2-O-二肉豆蔻基-sn-甘油-3-磷酰基)-2-O-(mPEG酰基)甘油二铵盐的合成
[0068] R＝肉豆蔻酰基，
[0069] 向搅拌过的完全保护的心磷脂(0.38g)的THF(10mL)溶液中加入2-硝基苯醛肟(0.7g)和四甲基胍(0.44g)。在加入5滴水后，将混合物在室温下搅拌5小时。旋去溶剂，加入20ml乙醚沉淀。样品使用凝胶柱纯化，流动相：二氯甲烷/甲醇/氨水(0.5∶1∶0.5)。得到0.3g白色的心磷脂分子化合物。使用GPC/SEC法测定分子量分布，平均分子量：
3200-3300。
3200-3300。
[0070] 实施例4
[0071] 本实施例显示本发明含有mPEG2000心磷脂的脂质体组合物的制备。通过使用20μmol如上制备的肉豆蔻酰心磷脂，100μmol磷脂酰胆碱和67.2μmol胆固醇混合形成小的单层囊。在充分搅拌后，在100ml圆底烧瓶中使用旋转蒸发器将混合物蒸发干。将随后干燥的脂膜重悬浮在15ml无菌非热原性的水中。在30分钟溶胀时间后，在恒温槽中在
25℃下将获得的悬浮液超声30分钟。然后用海藻糖冻干脂质体制剂。
25℃下将获得的悬浮液超声30分钟。然后用海藻糖冻干脂质体制剂。
[0072] 实施例5
[0073] 本实施例显示如上制备包含四肉豆蔻酰mPEG2000心磷脂的(阿霉素)盐酸多柔比星的脂质体的制备。可以制备脂质体多柔比星用于临床给药，其通过简单涡旋混合含有40mg mPEG2000心磷脂-脂质体冻干产物和预先在0.85％NaCl中以2mg/mL制备的2.5mL多柔比星溶液的小瓶。5分钟完成涡旋混合，将混合物保持在37℃，温育30分钟。所得药物的包封率可在80％以上，粒径可控，并具有缓释效果。
[0074] 实施例6免疫印迹试验
[0075] 用带有山羊抗人IgG碱性磷酸酶偶联物的Immun-Blot分析试剂盒(BioRad)，按照说明书，进行斑点印迹分析。心磷脂-BSA制品与梅毒血清(Lot00)在宽范围的抗原(7.5-120μg)和抗体(1∶10-1∶640稀释)浓度内反应。相比之下，心磷脂-BSA制品在同样的抗原和抗体浓度范围内完全不与正常人血清(即，非梅毒血清)反应。
[0076] 实施例7ATP水平的测定
[0077] CHO-K1细胞在不透明96孔板中以1×104个细胞/孔接种细胞培养物。贴壁后，将细胞转移到低葡萄糖培养基中，孵育过夜。在低葡萄糖培养基中培养的细胞具有降低的ATP含量。
[0078] 过夜培养后，使细胞接触叔丁基过氧化物(1mM)2小时以诱导细胞应激。过氧化物比单独的葡萄糖使ATP水平降得更低，模拟了受损伤的细胞状态。接触过氧化物后，将新鲜的低葡萄糖培养基加回到细胞中。用过氧化物攻击后立即将细胞暴露于测试样本，终浓度通常是1、10、和100mg/ml。细胞和测试样本一起于37℃孵育4小时。如下表IV所示，本试验所用测试样本包括L-肌肽、DC龙胆酸甲酯、空白脂质体(仅含PEG心磷脂)、空白脂质体(仅含传统心磷脂)、龙胆酸甲酯、L-肌肽的心磷脂脂质体及加载有L-肌肽、龙胆酸甲酯的PEG心磷脂脂质体。传统心磷脂是指二磷脂酰甘油及其类似物。
[0079] 本试验筛选在模拟受损细胞状态的应激条件(stressed conditions)下能够恢复ATP水平的化合物。因此，受攻击的细胞与测试样本孵育之后，用购自Promega(Madison，Wl)的Cell-Titer Gio试剂按照生产商提供的说明书测定相对细胞ATP水平。简而言之，将细胞平衡到室温，此时去除孔中的培养基。将稀释的试剂加入到孔中，室温孵育板15分钟。在Wallach板读数仪上读取荧光(luminescence)。计算各处理组的平均荧光，通过用每一个测试组的平均值除以未处理对照组的平均值来确定％未处理对照。未处理对照认为是100％，因此任何大于100％的结果都认为是细胞ATP水平净增加的阳性结果。
[0080] 表：各种脂质体ATP水平的测定结果
| 标题 | 发布/更新时间 | 阅读量 |
|---|---|---|
| 诊断治疗试剂 | 2020-05-12 | 148 |
| 肺癌诊断试剂盒 | 2020-05-12 | 271 |
| 体外诊断剂 | 2020-05-11 | 322 |
| 肿瘤诊断试剂 | 2020-05-12 | 266 |
| HCMV感染诊断试剂 | 2020-05-11 | 969 |
| SCR催化剂诊断 | 2020-05-12 | 773 |
| 体外诊断试剂 | 2020-05-11 | 965 |
| 一种体外诊断试剂盒 | 2020-05-12 | 736 |
| 一种体外诊断试剂盒 | 2020-05-13 | 860 |
| 一种诊断试剂分装装置 | 2020-05-13 | 325 |
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