发明背景

自身免疫性疾病，例如，多发性硬化症(MS)、系统性红斑狼疮 (SLE)、类风湿性关节炎(RA)、炎性肠病(IBD)和牛皮癣表现了身体 免疫系统的攻击，其在性质上可以是全身性的，也可以是针对身体 的个别器官。在它们所表现的疾病中，免疫系统发生错误，不是介 导保护功能，而是变成攻击者。

多发性硬化症(MS)是一种使人虚弱的炎性、神经性疾病，特征 在于中枢神经系统脱髓鞘。在西欧和北美，MS是年轻成人中最常见 的后天神经疾病，在女性中的发病率较高。在收入损失和医疗护理 方面，它比该年龄组的其它任意神经疾病造成了更多的失能和经济 损失。在美国大约有250,000例MS病例。该疾病的症状包括疲劳、 麻木、震颤、麻刺感、感觉迟钝、视觉障碍、头晕、认知缺损、泌 尿系障碍、活动能力降低和抑郁。该疾病的临床模式分为四种类型： 复发-缓解型、继发进展型、原发进展型和进展-复发型(S.L.Hauser 和D.E.Goodkin，Multiple sclerosis and Other Demyelinating Diseases in Harrison′s Principals of Internal Medicine 14th Edition，vol.2，Mc Graw-Hill，1998，pp.2409-2419)。

MS影响中枢神经系统，包括脱髓鞘过程，即髓鞘丧失，而轴突 保留。在疾病的后期，轴突也受到损害。髓磷脂提供能快速传导神 经冲动的分离物质。显然，在脱髓鞘中该性质丧失。MS确切的病因 还是未知的；尽管还未了解MS的致病机制，但有几条证据表明，脱 髓鞘具有免疫病理学基础，疾病的脱髓鞘特征可能是环境损伤例如 病毒感染引发的自免疫应答的结果。病理性损害，即斑块，其特征 是免疫活化细胞例如巨噬细胞和活化T细胞的浸润。特别地，推测 MS是由T细胞介导的自免疫炎症反应引起的。自身免疫性基础得到 下列事实的强烈支持：已经在MS患者的血清和脑脊液中发现了髓磷 脂碱性蛋白(MBP)的特异性抗体，这些抗体和对MBP和其它髓磷脂蛋 白脂具有活性的T-细胞随着疾病的活动而增加。此外，在细胞水平 上，推测T细胞增殖和其它细胞事件，例如B细胞和巨噬细胞的激 活，以及伴随着血脑屏障破坏的细胞因子分泌，可以导致髓磷脂和 少突胶质细胞的损坏。(R.A.Adams，M.V.Victor和A.H.Ropper eds，Principals of Neurology，Mc Graw-Hill，New York，1997， pp.903-921)。进行性MS(原发和继发)可以是基于发生脱髓鞘的神 经变性过程。

当前，还不能治愈MS。现在的疗法的目标是尽可能地缓解疾病 的症状并阻止其发展。根据其类型，药物治疗通常包括使用疾病改 善剂，例如干扰素(干扰素β1-a、β1-b和α)、醋酸格拉默或皮质 类固醇例如甲泼尼龙和泼尼松。同时，也可以使用化学治疗剂例如 米托蒽醌、甲氨喋呤、硫唑嘌呤、克拉屈滨、环磷酰胺、环孢霉素 和tysabri。上述的所有治疗都容易发生副作用，对疲劳和抑郁没有 或几乎没有作用，对复发率的作用有限，防止疾病恶化的能力有限。 用干扰素治疗也可诱导产生中和抗体，其最终会降低该治疗的效力。 因此，仍然强烈地需要新的药物，其可以单独或与其他药物联合施 用，以治疗MS的发展和症状。尽管免疫疗法已经有很大的进步，特 别是在2005年引入了被称为那他珠单抗(natalizumab)的抗整联 蛋白阻断抗体，但是还没有出现新的小分子治疗可以作为一般可接 受或广泛有效的治疗，特别是长期用于继发性进行性疾病。

残障的进展是多发性硬化症(MS)患者的主要关注点，但是目前 大多数减慢其进展的尝试都令人失望。当前批准的免疫调节剂治疗 对于继发性进行性MS只有较小的益处或者没有益处(Lancet 1998， 54，2352；Neurology 2000，54，2352；Neurology2001，56，1496； Neurology2002，59，679)。近来发现特异性免疫抑制疗法(单克隆 抗体)能够根除恶化，但是对于其进展没有任何显著的益处 (Neurology 1999，53，751)。

全身免疫抑制已经用于进行性MS几十年了，但是其效力仍有争 议。然而，使用治疗失败(TF)作为临床参数(在3个月时证实EDSS 点增加1点)和Goodkin等人定义的“临床显著益处”(治疗组相对 于安慰剂组TF率降低50％)，发现环孢霉素A(Ann Neurol 1990，27， 591)、甲氨喋呤(Ann Neurol 1995，37，30)和硫唑嘌呤(Neurology 1989，39，1018)没有实现临床显著益处。更有效的免疫抑制疗法提 供了不超过1年的短暂益处。这是在短期(2个月)总淋巴辐射 (Lancet 1986，8495，1405)以及每月施用环磷酰胺(CY)持续2年 (Arch Neurol 1987，44，823)后观测到的。

因此，需要这样一种药学可接受的免疫调节疗法，其可以阻止 神经变性过程，包括由炎症细胞攻击而引发的那些过程，具有较高 的临床效力，提供长期的临床益处，而且没有显著的副作用。

发明简述

本发明是一种治疗炎症和脱髓鞘疾病，包括多发性硬化症的方 法。更具体地，本发明是一种通过施用咪唑吖啶的衍生物治疗某些 炎症和脱髓鞘疾病的方法。

在一个实施方案中，本发明是一种治疗患炎症疾病的患者的方 法，包括给所述患者施用治疗有效量的通式(A)的化合物或其药学可 接受的盐。

在另一个实施方案中，本发明是一种治疗患脱髓鞘病症的患者 的方法，包括给所述患者施用治疗有效量的通式(A)的化合物或其药 学可接受的盐。

在另一个实施方案中，本发明是一种在需要的患者中促进神经 细胞髓鞘再生的方法，包括给所述患者施用治疗有效量的通式(A)的 化合物或其药学可接受的盐。

在另一个实施方案中，本发明是一种组合物，其包含治疗有效 量的如下通式(A)的化合物或其药学可接受的盐，和抗炎剂。

在另一个实施方案中，本发明是一种在患者中逆转由脱髓鞘疾 病导致的麻痹的方法，包括给患者施用一种化合物，该化合物的施 用量足以抑制淋巴细胞浸润脊髓中的免疫细胞，以促进脊髓中神经 细胞的髓鞘再生，并由此治疗所述患者的麻痹，其中该化合物是通 式(A)的化合物或其药学可接受的盐。

在本发明中使用的咪唑吖啶由通式(A)来表示：

其中：

R是-H、任选取代的烷基、羟基、烷氧基、卤素、由以下结构式 表示的基团：

或，R和R5与介于它们之间的碳原子一起形成5、6或7元任选 取代的环烷基或非芳香杂环；

或，R和R4与介于它们之间的碳原子一起形成5、6或7元任选 取代的环烷基或非芳香杂环；和

R2是-H、任选取代的C1-C10烷基或任选取代的芳基或杂芳基；

R3是-(CH2)n-NRaRb，其中n＝1-5，Ra和Rb分别独立地是氢或任 选取代的烷基，或-NRaRb是在一或多个可取代的碳原子上被甲基、羟 基或甲氧基任选取代的N-吗啉基或N-吡嗪基，并且其中N-吡嗪基是 由C1-C4烷基或-NRcRd取代的C1-C4烷基任选N′-取代的，其中Rc 和Rd分别是-H、甲基或乙基；和

R4、R5和R6分别独立地是-H、-OH、卤素或C1-C6烷氧基；或

R5和R5与介于它们之间的碳原子一起形成5、6或7元任选取 代的环烷基或非芳香杂环。

附图简述

图1A是条图，表示在用脂多糖(LPS)刺激后SymadexTM对B-细胞 增殖的抑制。

图1B是条图，表示在用伴刀豆球蛋白A(Con A)刺激后SymadexTM 对T-细胞增殖的抑制。

图2A是条图，表示在用伴刀豆球蛋白A(Con A)刺激后SymadexTM 对IL-4释放的抑制。

图2B是条图，表示在用伴刀豆球蛋白A(Con A)刺激后SymadexTM 对IL-10释放的抑制。

图3是与载体对照相比，在用20和40mg/kg的SymadexTM治疗 后的指定日，患慢性期实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)的动物的平 均临床评分的条图。

图4是与载体对照相比，在用SymadexTM治疗后的指定日，患慢 性期实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)的动物的平均临床评分(表现 评分)的时间依赖图。

图5是与载体对照相比，在用20mg/kg剂量的SymadexTM治疗 4周后的指定日，患慢性期实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)的动物 的平均临床评分(表现评分)的时间依赖图。

图6是与载体对照相比，在用20mg/kg剂量的SymadexTM治疗 6周后的指定日，患慢性期实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)的动物 的平均临床评分(表现评分)的时间依赖图。

图7是与载体对照相比，在用20mg/kg剂量的SymadexTM治疗 8周后的指定日，患慢性期实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)的动物 的平均临床评分(表现评分)的时间依赖图。

图8A是与载体对照相比，在用20mg/kg剂量的SymadexTM治疗 4、6和8周后的指定日，患慢性期实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE) 的动物的T细胞计数的时程的条图。

图8B是与载体对照相比，在用20mg/kg剂量的SymadexTM治疗 4、6和8周后的指定日，患慢性期实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE) 的动物的CD-4细胞计数的时程的条图。

图8C是与载体对照相比，在用20mg/kg剂量的SymadexTM治疗 4、6和8周后的指定日，患慢性期实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE) 的动物的CD-8细胞计数的时程的条图。

图8D是与载体对照相比，在用20mg/kg剂量的SymadexTM治疗 4、6和8周后的指定日，患慢性期实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE) 的动物的B细胞计数的时程的条图。

图9是与载体对照相比，在间隔72小时连续两次给予20mg/kg SymadexTM治疗后的指定日，患慢性期实验性自身免疫性脑脊髓炎 (EAE)的动物的平均临床评分(表现评分)的时间依赖图。

图10是在连续15天每天给予6mg/kg的SymadexTM后的指定日， 患急性期实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)的动物的平均临床评分 的时间依赖图。

图11是在连续15天每天给予6mg/kg的SymadexTM后的指定日， 患急性期实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)的动物的平均体重增加 纪录的时间依赖图。

图12是在连续15天每天给予6mg/kg的SymadexTM后的指定日， 患急性期实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)的动物尸检的平均病理 评分的条图。

图13是在连续3天每天口服给予30mg/kg的SymadexTM后的指 定日，患急性期胶原单克隆抗体(mAB)诱导的关节炎的动物的平均表 现的时间依赖图。

图14是可以与本发明公开的化合物联合施用的药物的化学结构 的列表。

发明详述

现在已经发现，施用某些咪唑吖啶的衍生物可以治疗和/或减轻 各种炎性疾病和与脱髓鞘有关的疾病的症状。

特别地，已经发现通过给患病患者施用治疗有效量的通式(A)的 化合物或其药学可接受的盐可以治疗各种炎性疾病和与脱髓鞘有关 的疾病：

在通式(A)中，取代基分别独立地如下所定义。

R代表-H、任选取代的烷基、羟基、烷氧基、卤素，或者R和 R5或R和R4与介于它们之间的碳原子一起形成5、6或7元任选取代 的环烷基或包含一个或多个氧、硫或任选取代的氮的非芳香杂环。

优选地，R是-H；C1-C4烷基，其任选被-OH、-SH、卤素、氰基、 硝基、C1-C3烷基、C1-C3卤代烷基、C1-C3烷氧基、C1-C3卤代烷 氧基或C1-C3烷基巯基(sulfanyl)、胺取代；C1-C2烷基胺；或 C1-C2二烷基胺；或者R和R5或R和R4与介于它们之间的碳原子一 起形成5-6元环烷基或包含一个或两个氧原子并任选被甲基或羟基 取代的5-6元非芳香杂环。

在一个实施方案中，R用下列结构来表示：

更优选地，R是-H、-OH、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、-F、或者 与R4或可替代地与R5一起形成亚甲基二氧基。更优选地，R是-H或 C1-C6烷氧基。可替代地，R是-OH或-OCH3。

R2表示氢、任选取代的C1-C10烷基或任选取代的芳基或杂芳 基。优选地，R2是-H、C1-C8烷基或苯基，任选被一个或多个C1-C4 烷基、C1-C4烷氧基、C1-C4卤代烷氧基或氰基取代。更优选地，R2是 -H或C1-C4烷基。

R3表示-(CH2)n-NRaRb，其中n是1到5的整数，Ra和Rb可以相同 或不同，表示氢或任选取代的烷基。该烷基上取代基的例子包括羟 基、C1-C4羟烷基、氨基、N-烷基-氨基或N，N-二烷基氨基。

此外，-NRaRb是N-吗啉基或N-吡嗪基，其分别在一个或多个可 取代的碳上被甲基、羟基或甲氧基任选取代，并且其中N-吡嗪基是 由C1-C4烷基或-NRcRd取代的C1-C4烷基任选N′-取代的，其中Rc 和Rd分别是-H、甲基或乙基。

优选地，n是2到3的整数，Ra和Rb分别独立地是-H或C1-C4 烷基。

R4和R6分别独立地是-H、-OH、卤素或a C1-C6烷氧基。在一些 实施方案中，R和R4与介于它们之间的碳原子一起形成5、6或7 元任选取代的环烷基或非芳香杂环。当R和R4与介于它们之间的碳 原子连接在一起时，它们优选形成了5-6元环烷基或包含一个或两 个氧原子并任选被甲基或羟基取代的5-6元非芳香杂环；更优选地， R4是-H、-OH、C1-C3烷氧基或与R连接在一起形成亚甲基二氧基； 并且R6是-H、-OH或C1-C3烷氧基。

更优选地，R4和R6分别独立地是-H、-OH或-OCH3。

R5是-H、-OH、卤素、C1-C6烷氧基。在一些实施方案中，R和 R5与介于它们之间的碳原子一起形成5、6或7元任选取代的环烷基 或非芳香杂环。当R5和R，或可替代地R5和R6与介于它们之间的碳 原子连接在一起时，它们优选形成了5-6元环烷基或包含一个或两 个氧原子并任选被甲基或羟基取代的5-6元非芳香杂环；更优选地， R5是-H、-OH、C1-C3烷氧基或与R，或可替代地与R6连接在一起形 成亚甲基二氧基。

在一些实施方案中，通式(A)中的取代基如下所定义：

R是-H；C1-C4烷基，其任选被-OH、-SH、卤素、氰基、硝基、 C1-C3烷基、C1-C3卤代烷基、C1-C3烷氧基、C1-C3卤代烷氧基或 C1-C3烷基巯基取代、胺；C1-C2烷基胺或C1-C2二烷基胺；或者R 和R5与介于它们之间的碳原子一起形成5-6元环烷基或包含一个或 两个氧原子并任选被甲基或羟基取代的5-6元非芳香杂环；

R2是-H、C1-C8烷基或苯基，任选被一个或多个C1-C4烷基、C1-C4 烷氧基、C1-C4卤代烷氧基或氰基取代；

R3是-(CH2)n-NRaRb，其中n是2到3的整数，Ra和Rb分别独立地 是氢或任选取代的烷基，或者-NRaRb是N-吗啉基或N-吡嗪基，其分 别在一个或多个可取代的碳上被甲基、羟基或甲氧基任选取代，并 且其中N-吡嗪基是由C1-C4烷基或-NRcRd取代的C1-C4烷基任选N′- 取代的，其中Rc和Rd分别是-H、甲基或乙基；

R4、R5和R6分别独立地是-H、-OH或C1-C3烷氧基，或者R4或 可替代地R5与R形成亚甲基二氧基。

优选地，通式(A)的化合物由通式(I)表示：

在通式(I)中，变量R、R2、n、Ra和Rb可以取上述对于通式(A) 定义的值或优选值。在通式(I)中这些变量的优选值在下列段落中提 供：

R表示羟基或烷氧基，例如，C1-C6烷氧基。可替代地，R是-OH 或-OCH3；

Ra和Rb可以相同或不同，可以是氢或任选取代的烷基。优选地， Ra和Rb是C1-C3烷基。更优选地，Ra和Rb分别独立地是乙基。可替 代地，Ra和Rb分别是甲基。在另一些实施方案中，Ra和Rb分别独立 地是氢或任选取代的烷基。

当Ra和Rb是取代的烷基时，该烷基上适当的取代基包括羟基、 C1-C4羟烷基、氨基、N-烷基-氨基或N，N-二烷基氨基，优选包含 1-4个碳原子。这些取代基的例子是羟乙基、氨基乙基、N-烷基氨基 乙基和N，N-二烷基氨基乙基。

在通式(I)的其他实施方案中，-NRaRb是N-吗啉基或N-吡嗪基， 其分别在一个或多个可取代的碳上被甲基、羟基或甲氧基任选取代， 并且其中N-吡嗪基是由C1-C4烷基或-NRcRd取代的C1-C4烷基任选 N′-取代的，其中Rc和Rd分别是-H、甲基或乙基。

优选地，在通式(I)中n是2或3。

在通式(I)中，R2是氢或C1-C6烷基。优选地，R2是氢或C1-C4 烷基。更优选地，R2是-H。

在通式(I)的化合物的一些优选的实施方案中，R是-OH或-OCH3， Ra和Rb相同并且表示C1-C6烷基，优选甲基或乙基；n是2或3；R2 表示氢或直链C1-C4烷基。优选地，R2是-H。

通式(I)的化合物的例子包括化合物(IIA)到(IIH)：

在一个最优选的实施方案中，通式(I)的化合物是5-[[(二乙基 氨基)乙基]氨基]-8-羟基咪唑并[4，5，1-de]-吖啶-6-酮，其结构 如通式(III)所示：

在另一个实施方案中，通式(A)的化合物由结构式(IV)表示：

除非另有说明，本文使用的术语“烷基”包括直链或支链饱和 单价烃基团，典型地是C1-C10，优选C1-C6。烷基的例子包括但不 限于甲基、乙基、丙基、异丙基和叔丁基。取代烷基的适当取代基 包括-OH、-SH、卤素、氰基、硝基、C1-C3烷基、C1-C3卤代烷基、 C1-C3烷氧基、C1-C3卤代烷氧基或C1-C3烷基巯基。

本文使用的术语“环烷基”是指非芳香的饱和碳环部分。环烷 基的例子包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环己基和环庚基。 环烷基的适当取代基如上述对于烷基所定义的。

本文使用的术语“卤代烷基”包括被一个或多个F、Cl、Br或I 取代的烷基，其中烷基如上述定义。

本文使用的术语“烷氧基”是指“烷基-O-”基，其中烷基如上 述定义。

本文使用的术语“卤代烷氧基”是指“卤代烷基-O-”，其中卤 代烷基如上述定义。

本文中使用的氨基可以是伯(-NH2)、仲(-NHRx)或叔(-NRxRy)氨 基，其中Rx和Ry是任意上述的任选取代的烷基。

本文使用的术语“芳基”是指碳环芳香基团。芳基的例子包括 但不限于苯基和萘基。

本文使用的术语“杂芳基”是指包含一个或多个杂原子(O、S或 N)的芳香基。杂芳基可以是单环或多环，例如与一个或多个碳环芳 香基或其他单环杂芳基稠合的单环杂芳基环。本发明的杂芳基也可 以包括被一个或多个氧部分取代的环系统。杂芳基的例子包括但不 限于，吡啶基、哒嗪基、咪唑基、嘧啶基、吡唑基、三唑基、吡嗪 基、喹啉基、异喹啉基、四唑基、呋喃基、噻吩基、异噁唑基、噻 唑基、噁唑基、异噻唑基、吡咯基、喹啉子基、异喹啉子基、吲哚 基、苯并咪唑基、苯并呋喃基、噌啉基(cinnolinyl)、吲唑基、 吲嗪基、酞嗪基、哒嗪基、三嗪基、异吲哚基、嘌呤基、噁二唑基、 噻唑基、噻二唑基、呋吖基(furazanyl)、苯并呋吖基、苯并硫苯 基、苯并三唑基、苯并噻唑基、苯并噁唑基、喹唑啉基、喹噁啉基、 萘啶基(naphthyridinyl)、二氢喹啉基、四氢喹啉基、二氢异喹 啉基、四氢异喹啉基、苯并呋喃基、氟代吡啶基、吡咯嘧啶基和氮 杂吲哚基。

本文使用的术语“非芳香杂环”是指通常4-8元，优选5-6元 的非芳香碳环系统，其中一个或多个，优选1到4个环碳分别被杂 原子例如N、O或S取代。非芳香杂环的例子包括3-四氢呋喃基、2- 四氢呋喃基、3-四氢吡喃基、4-四氢吡喃基、[1，3]-二氧戊环基、 [1，3]-二硫戊环基、[1，3]-二噁烷基、2-四氢硫苯基、3-四氢硫 苯基、2-吗啉基、3-吗啉基、4-吗啉基、2-硫吗啉基、3-硫吗啉基、 4-硫吗啉基、1-吡咯烷基、2-吡咯烷基、3-吡咯烷基、1-哌嗪基、 2-哌嗪基、1-哌啶基、2-哌啶基、3-哌啶基、4-哌啶基、4-噻唑烷 基、diazolonyl、N-取代diazolonyl和1-邻苯二甲酰亚胺基 (pthalimidyl)。

杂芳基或非芳香杂环基可以是C-连接或N-连接(如果可能)的。 例如，吡咯衍生的基团可以是吡咯-1-基(N-连接)或吡咯-3-基(C-连 接)。

芳基、杂芳基或非芳香杂环基的适当取代基可以是基本上不影 响所公开的化合物的药理活性的那些基团。可以存在一个或多个相 同或不同的取代基。非芳香杂环基中可取代碳原子上的适当取代基 的例子包括-OH、卤素(-F、-Cl、-Br和-I)、-R′、-OR′、-CH2R′、 -CH2OR′、-CH2CH2OR′、-CH2OC(O)R′、-O-COR′、-COR′、-SR′、-SCH2R′、 -CH2SR′、-SOR′、-SO2R′、-CN、-NO2、-COOH、-SO3H、-NH2、-NHR′、 -N(R′)2、-COOR′、-CH2COOR′、-CH2CH2COOR′、-CHO、-CONH2、-CONHR′、 -CON(R′)2、-NHCOR′、-NR′COR′、-NHCONH2、-NHCONR′H、-NHCON(R′)2、 -NR′CONH2、-NR′CONR′H、-NR′CON(R′)2、-C(＝NH)-NH2、-C(＝NH)-NHR′、 -C(＝NH)-N(R′)2、-C(＝NR′)-NH2、-C(＝NR′)-NHR′、-C(＝NR′)-N(R′)2、 -NH-C(＝NH)-NH2、-NH-C(＝NH)-NHR′、-NH-C(＝NH)-N(R′)2、 -NH-C(＝NR′)-NH2、-NH-C(＝NR′)-NHR′、-NH-C(＝NR′)-N(R′)2、 -NR′H-C(＝NH)-NH2、-NR′-C(＝NH)-NHR′、-NR′-C(＝NH)-N(R′)2、 -NR′-C(＝NR′)-NH2、-NR′-C(＝NR′)-NHR′、-NR′-C(＝NR′)-N(R′)2、 -SO2NH2、-SO2NHR′、-SO2NR′2、-SH、-SOkR′(k是0、1或2)和 -NH-C(＝NH)-NH2。R′分别独立地是烷基。

非芳香杂环基或杂芳基的氮上的适当取代基包括-R″、-N(R″)2、 -C(O)R″、-CO2R″、-C(O)C(O)R″、-C(O)CH2C(O)R″、-SO2R″、-SO2N(R″)2、 -C(＝S)N(R″)2、-C(＝NH)-N(R″)2和-NR″SO2R″。R″是氢、烷基或烷氧 基。

化合物(IIA)到(IIH)和(III)可以根据U.S.5,231,100和6, 229,015披露的不同合成方案来合成，通过参考将它们整体引入本 文。这些方案的一个例子如下所示：

(方案I)

商品名为SymadexTM的化合物(III)是已知的。现在已经发现， SymadexTM抑制LPS刺激后B细胞的增殖和Con A刺激后T细胞的增 殖，并且SymadexTM抑制细胞因子例如IL-4和IL-10的释放(实施例 1)。此外在微阵列试验中发现，SymadexTM治疗导致几个基因的表达 改变，这几个基因涉及影响炎症和增殖状态的关键调节途径，特别 是侵入细胞装配和聚集的能力，对细胞增殖和细胞-细胞信号的下调 (实施例3)。这些分子药理学研究表明，SymadexTM对于涉及细胞聚 集和增殖机制的基因以及与侵入的细胞生长有关的过程发挥下调的 作用，其中所述过程是与自身免疫性疾病有关的炎症病因学的标志。 总之，这些结果表明，SymadexTM可以用于治疗具有炎性成分的病症， 包括自身免疫性疾病。

此外还发现，SymadexTM在雌性Hartley豚鼠实验性自身免疫性 脑脊髓炎(EAE)模型中具有活性，其中所述模型是慢性-进行性MS 的经典动物模型(实施例2)。与实施例3的结果总结在一起，结果表 明SymadexTM可以用于治疗具有脱髓鞘以及炎性成分的病症。

因此，在一个实施方案中，本发明是一种治疗患炎性疾病的患 者的方法。该疾病可以是系统性红斑狼疮、炎性肠病、牛皮癣、克 劳恩病、类风湿性关节炎、类肉瘤、阿尔茨海默病、慢性炎性脱髓 鞘性神经病、胰岛素依赖型糖尿病、动脉粥样硬化、哮喘、脊髓损 伤或中风。

慢性炎性脱髓鞘性神经病的例子包括：慢性免疫性脱髓鞘性多 神经病(CIDP)；多病灶CIDP；多病灶运动神经病(MMN)；抗-MAG综 合征(具有与髓磷脂相关糖蛋白结合的I gM的神经病)；GALOP综合征 (步态障碍、自身抗体晚期发作性多神经病)；抗-硫苷脂抗体综合征； 抗-GM2神经节苷脂抗体综合征；POEMS综合征(多神经病、器官巨大 症、内分泌病或浮肿M-蛋白皮肤改变)；神经束膜炎；和IgM抗-GD1b 神经节苷脂抗体综合征。

该方法包括给患者施用治疗有效量的通式(A)的化合物或其药 学可接受的盐。例如可以使用通式(IIA)到(IIH)的化合物。优选地， 可以使用通式(III)的化合物。可替代地，使用通式(IV)的化合物。

在另一个实施方案中，本发明是一种治疗患脱髓鞘疾病的患者 的方法。本文使用的“脱髓鞘疾病”是指破坏、打破髓鞘的完整性 或破坏髓鞘的疾病。本文使用的术语“髓鞘”是指围绕脊椎外周神 经元的隔离层，其增加传导速度，由外周神经系统的Schwann细胞 或中枢神经系统中的少突胶质细胞形成。这些疾病可以是多发性硬 化症、先天性代谢疾病、具有异常髓鞘形成的神经病、药物诱导的 脱髓鞘、辐射诱导的脱髓鞘、遗传性脱髓鞘疾病、朊病毒诱导的脱 髓鞘、脑炎诱导的脱髓鞘、脊髓损伤、阿尔茨海默病或慢性炎性脱 髓鞘性神经病，其例子如上述所给出。在一个实施方案中，该疾病 是多发性硬化症。该方法包括给患者施用治疗有效量的通式(A)的化 合物或其药学可接受的盐。例如可以使用通式(IIA)到(IIH)的化合 物。优选地，可以使用通式(III)的化合物。可替代地，使用通式(IV) 的化合物。

本文使用的术语“患者”是指温血动物，例如大鼠、小鼠、狗、 猫、豚鼠和灵长类动物，例如人。术语“治疗”包括任何的治疗， 包括但不限于，减轻症状、暂时或永久性地消除症状的病因，或预 防或减慢症状的发生和所述疾病或病症的进展。术语“治疗有效量” 是指可以有效地治疗所述疾病或病症的化合物的量。在一些实施方 案中，治疗有效量是指足以有效地在患者中实现神经细胞髓鞘再生 的量。

在另一个实施方案中，本发明是一种在患者中促进神经细胞髓 鞘再生的方法，包括给需要的患者施用治疗有效量的通式I、通式 (HA)-(IIH)、通式(III)或通式(IV)的化合物或其药学可接受的盐。 患者可以患有上述所列的任意的脱髓鞘疾病。

在另一个实施方案中，本发明是一种在需要的患者中预防脱髓 鞘和促进髓鞘再生的方法，包括施用治疗有效量的通式I、通式 (HA)-(IIH)、通式(III)或通式(IV)的化合物或其药学可接受的盐和 下述的抗炎剂的组合。

在另一个实施方案中，本发明是一种在患脱髓鞘疾病的需要的 患者中逆转麻痹的方法，包括给患者施用一种化合物，该化合物的 施用量足以抑制淋巴细胞浸润脊髓中的免疫细胞，以促进脊髓中神 经细胞的髓鞘再生，并由此治疗所述患者的麻痹，其中该化合物是 通式I、通式(HA)-(IIH)、通式(III)或通式(IV)的化合物或其药学 可接受的盐。

本文所公开的通式(A)的化合物，包括通式(HA)-(IIH)、(III) 和(IV)的化合物，显示治疗性作用能力的剂量范围可以根据疾病的 严重度、患者、制剂、患者患有的其他潜在疾病的状态、同时施用 于患者的其他药物而不同。一般地，本发明的化合物在剂量为约 0.001mg/kg患者体重/日到约100mg/kg患者体重/日时显示治疗 活性。例如，剂量可以是每天、每隔一天或每周0.1-100mg/kg、 1-100mg/kg、10-100mg/kg、1-50mg/kg、10-50mg/k g或10-30 mg/kg。

在其他的实施方案中，可以通过下述任意途径施用该化合物， 优选静脉内施用，优选量为1mg/kg体重到20mg/kg体重。可以每 天一次、每72小时一次或每周一次来施用该化合物。

在该化合物用于治疗类风湿性关节炎的一个实施方案中，可以 每天、每隔一天或每周口服1-50mg/kg、10-40mg/kg、20-30mg/kg 或30mg/kg体重的量的该化合物。

在另一个实施方案中，本发明的化合物可以长期施用于需要的 患者。例如，该化合物的长期施用是每天、每周、每两周或每月施 用至少1年、至少2年、至少3年或更多年。

在一个实施方案中，通式(A)的化合物，包括通式(IIA)-(IIH)、 (III)和(IV)的化合物以1.5-30mg/kg的量静脉内施用，每1-3个 月的间隔1次。在另一个实施方案中，以上述相同方案口服5-100 mg/kg的量的该化合物。可替代地，通式(A)的化合物在高达3个月 的时间里施用数次，累积剂量高达1.5到30mg/kg。在另一个实施 方案中，累积剂量是5到100mg/kg。

在另一个实施方案中，通式(A)的化合物以每周2.5-10mg/kg的 量静脉施用8-24周，在停药6-18周后如果需要则再重复施用。可 替代地，通式(A)的化合物在14到42周的时间里施用数次以达到20 mg/kg到240mg/kg的累积剂量。可以在一个或多个14-42周的时间 段里重复施用。

在另一个实施方案中，通式(A)的化合物以2.5-10mg/kg的量 间隔72小时静脉内施用2次，共1到2周，每月重复一次。可替代 地，通式(A)的化合物在高达2周的时间里施用数次，累积剂量高达 11mg/kg到47mg/kg。可以每月重复施用。

在另一个实施方案中，通式(A)的化合物可以在10-15天里以每 日1-3mg/kg的量口服，每30-45天重复。可替代地，通式(A)的化 合物在高达40-60天的时间里施用数次，累积剂量高达10mg/kg到 45mg/kg。可以在一个或多个高达40-60天的时间段里重复施用。

在另一个实施方案中，本发明的化合物可以在每周的3天里以 每日2-6mg/kg的量口服，每15-30天重复。可替代地，通式(A)的 化合物在高达40-60天的时间里施用数次，累积剂量高达6-18 mg/kg。可以在一个或多个高达30天的时间段里重复施用。

优选地，施用本文所述的化合物或化合物的组合导致患者血液 中该化合物的有效浓度大于或等于10ng/ml。例如，该化合物可以 以20μg/kg到约500μg/kg患者体重的量静脉内施用。

治疗人慢性(缓解-复发型)多发性硬化症(MS)的优选剂量是0.1 mg/kg到10mg/kg、1-10mg/kg、1-5mg/kg、2-7mg/kg、2-5mg/kg。 给药方案可以是每月1次、每月2次、每月3次或每周1或2次， 共3月、6月、12月或更长。

治疗人急性MS的优选剂量是0.1mg/kg到10mg/kg、0.1-5 mg/kg、0.1-2mg/kg、0.5-2mg/kg或0.5-1mg/kg，每日3次、每 日2次或每日1次，基于每周、每两周或每月1次。

治疗人类风湿性关节炎的优选剂量是0.1mg/kg到10mg/kg、 1-10mg/kg、1-5mg/kg、2-7mg/k g、2-5mg/kg，每日3次、每日 2次或每日1次，基于每周、每两周或每月1次。

在治疗患上述疾病的患者时，可以以使化合物生物有效的任何 形式或模式施用治疗有效量的所公开的所有化合物。例如，通式(A) 的化合物可以以药学可接受的盐的形式施用。术语“药学可接受的 盐”是指酸加成盐或碱加成盐，这两种盐都是用本发明的化合物能 够制备的。“药学可接受的酸加成盐”是通式(A)表示的碱性化合物 的任意无毒性有机或无机酸加成盐。形成适当盐的示例性无机酸包 括盐酸、氢溴酸、硫酸和磷酸和酸性金属盐例如磷酸一氢钠和硫酸 氢钾。形成适当盐的示例性有机酸包括单、二和三羧酸。这些酸的 例子是，例如乙酸、羟乙酸、乳酸、丙酮酸、丙二酸、琥珀酸、戊 二酸、延胡索酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、抗坏血酸、马来酸、 羟基马来酸、苯甲酸、羟基苯甲酸、苯乙酸、肉桂酸、水杨酸、2- 苯氧基苯甲酸、对甲苯磺酸和磺酸类例如甲磺酸和2-羟基乙磺酸。 可以形成单酸盐或二酸盐，这些盐可以以水合或基本无水的形式存 在。一般地，这些化合物的酸加成盐在水和各种亲水有机溶剂中更 易溶解，与它们的游离碱形式相比，一般显示更高的熔点。“药学 可接受的碱加成盐”是指通式(A)的化合物，包括通式(IIA)-(IIH)、 (III)和(IV)的化合物的无毒性有机或无机碱加成盐。例子是碱金属 或碱土金属的氢氧化物例如氢氧化钠、钾、钙、镁或钡；氨和脂肪 族、脂环族或芳香族有机胺例如甲胺、三甲胺和甲基吡啶。选择适 当的盐是重要的，以使得该酯不会水解。选择适当的盐的标准是本 领域技术人员已知的。

本发明的化合物可以通过很多途径来施用，包括口服、舌下、 含化、皮下、肌内、静脉内、经皮、鼻内、直肠、局部等等。制剂 制备领域的技术人员可以根据为要治疗的疾病或病症而选择的化合 物的具体特性、疾病的阶段、患者的情况和其他相关情况来确定适 当的施用形式和模式。例如参见Remington′s Pharmaceutical Sciences，18th Edition，Mack Publishing Co.(1990)，将其通过 参考引入本文。

本发明的通式(A)的化合物也可以局部施用，当这样施用时，载 体可以适当地包括溶液、软膏或凝胶基质。例如，基质可以包括一 种或多种的矿脂、羊毛脂、聚乙二醇、蜂蜡、矿物油、稀释剂例如 水和醇，以及乳化剂和稳定剂。

溶液或混悬液也可以包含一种或多种下列佐剂：无菌稀释剂例 如注射用水、盐水溶液、非挥发性油、聚乙二醇、甘油、丙二醇或 其他的合成溶剂；抗菌剂例如苯甲醇或羟苯甲酸甲酯；抗氧化剂例 如抗坏血酸或亚硫酸氢钠；螯合剂例如乙二胺四乙酸；缓冲剂例如 乙酸盐、柠檬酸盐或磷酸盐和调节张性的试剂例如氯化钠或葡萄糖。 胃肠外制剂可以封装在安瓿、一次性注射器或多剂量瓶中。

本发明中使用的化合物可以单独施用，或与一种或多种对要治 疗的炎性疾病和/或脱髓鞘疾病有效的其他药学活性剂联合施用。

涉及药学活性剂的本文使用的术语“组合”和“联合施用”和 “联用”是指在一个治疗周期中给患者施用一种以上的药学活性剂， 但不一定是同时施用或在一种混合物中施用。

在另一个实施方案中，本发明的化合物与抗炎剂联合施用。抗 炎剂可以是促肾上腺皮质激素、皮质类固醇、干扰素、醋酸格拉默 或非甾体抗炎药(NSAID)。

适当的抗炎剂的例子包括皮质类固醇，例如泼尼松、甲泼尼松、 地塞米松、氢化可的松、可的松、氟氢可的松、泼尼松龙、6α-甲 泼尼松龙、曲安西龙或倍他米松。

适当的抗炎剂的其他例子包括NSAID，例如氨基芳基羧酸衍生物 (例如，苯乙氨茴酸、依托芬那酯、氟芬那酸、异尼辛、甲氯酚那酸、 尼氟酸、他尼氟酯、特罗芬那酯和托芬那酸)、芳基乙酸衍生物(例 如，阿西美辛(Acematicin)、阿氯芬酸、氨芬酸、丁苯羟酸、卡 洛芬、桂美辛、氯吡酸、双氯芬酸、双氯芬酸钠、依托度酸、联苯 乙酸、芬氯酸、苯克洛酸、芬克洛酸、非诺洛芬、芬替酸、氟比洛 芬、葡美辛、异丁芬酸、布洛芬、吲哚美辛、三苯唑酸、伊索克酸、 酮洛芬、氯那唑酸、甲嗪酸、萘普生、奥沙美辛、丙谷美辛、舒林 酸、替尼达普、噻拉米特(Tiramide)、托来汀、托美丁、佐美酸 钠和佐美酸)、芳基丁酸衍生物(例如，丁丙二苯肼、布替布芬、芬 布芬和联苯丁酸)、芳基羧酸(例如，环氯茚酸、酮咯酸和替诺立定)， 芳基丙酸衍生物(例如，阿明洛芬、苯噁洛芬、布氯酸、卡洛芬、非 诺洛芬、氟诺洛芬、氟比洛芬、布洛芬、异丁普生、吲哚洛芬、酮 洛芬、氯索洛芬、咪洛芬、萘普生、奥沙普嗪、吡酮洛芬、吡洛芬 (Piroprofen)、普拉洛芬、丙替嗪酸(Protinizinic Acid)、舒 洛芬和噻洛芬酸)、吡唑类(例如，二苯咪唑和依匹唑)、吡唑酮(例 如，阿扎丙宗、苄哌吡酮、非普拉宗、莫非布宗、吗拉宗、羟布宗、 保泰松、哌布宗、异丙安替比林、雷米那酮、琥布宗和噻唑丁炎酮 (thiazolinobutazone))、水杨酸衍生物(例如，醋氨沙洛、5-氨基 水杨酸、阿司匹林、贝诺酯、联苯阿司匹林、溴水杨醇、乙酰水杨 酸钙、二氟尼柳、伊特柳酯、芬度柳、氟苯柳、龙胆酸、水杨酸乙 二醇酯、水杨酸咪唑、赖氨酸乙酰水杨酸、美沙拉秦、水杨吗啉、 1-萘基水杨酸、奥沙拉秦、帕沙米特、乙酰水杨酸苯酯、水杨酸苯 酯、2-磷氧苯甲酸、醋水杨胺、水杨酰胺O-乙酸、水杨酸、水杨酰 水杨酸、水杨酰硫酸酯、双水杨酯和柳氮磺吡啶)、噻嗪氨甲酰类(例 如，卓昔康、伊索昔康、吡罗昔康和替诺昔康)、ε-乙酰氨基己酸、 S-腺苷蛋氨酸、3-氨基-4-羟丁酸、阿米西群、苄达酸、苄达明、布 可隆、联苯吡胺、地他唑、依莫法宗、愈创蓝油烃、酮咯酸、甲氯 芬那酸、甲芬那酸、萘丁美酮、尼美舒利、奥古蛋白、奥沙西罗、 瑞尼托林、哌立索唑、哌福肟、吡罗昔康、普罗喹宗、替尼达普和 COX-2抑制剂(例如，罗非考昔、伐地考昔和塞来考昔)。

抗炎剂的其它例子包括阿司匹林、水杨酸钠、三水杨酸胆碱镁、 双水杨酯、二氟尼柳、柳氮磺吡啶、奥沙拉嗪、对氨基苯酚衍生物、 吲哚、茚乙酸、杂芳基乙酸、邻氨基苯甲酸、烯醇酸、烷酮、二芳 基取代的呋喃酮、二芳基取代的吡唑、吲哚乙酸或磺酰苯胺。

在一些实施方案中，本发明的化合物可以与免疫治疗剂例如干 扰素和抗整联蛋白阻断抗体例如那他珠单抗联合施用。

适合治疗脱髓鞘疾病的试剂的例子包括吡非尼酮、依帕司他、 盐酸萘法唑酮、盐酸美金刚胺、盐酸米托蒽醌、盐酸米托蒽醌、沙 利度胺、罗喹美克、盐酸文拉法辛、Intaxel、紫杉醇、重组人神经 生长因子；神经生长因子、异丁司特、克拉屈滨、贝拉普罗钠、盐 酸Levacecarnine；盐酸乙酰-L-肉毒碱；盐酸乙酰左卡尼汀、屈昔 多巴、干扰素α、天然干扰素α、人淋巴细胞样干扰素、干扰素β -1b、干扰素β-Ser、阿仑单抗、麦考酚酸莫酯、一水合唑来膦酸、 阿达帕林、依利罗地、盐酸多奈培齐、地塞比诺、地塞比酮、盐酸 扎利罗登、干扰素α-n3、硫辛酸、二硫辛酸、特立氟胺、阿伐他汀、 去痛定(Pymadin)、4-氨基吡啶、氨吡啶、非达司他、普立昔单抗、 马来酸Pixantrone、达昔单抗、达珠单抗、醋酸格拉默、利妥昔单 抗、盐酸Fingolimod、干扰素β-1a、那他珠单抗、Abatacept、 Temsirolimu s、来那西普、水合甲磺酸Ruboxistaurin、硫酸右美沙 芬/奎尼定、辣椒辣素、二甲基延胡索酸盐或屈大麻酚/大麻二酚。

在一些实施方案中，本发明的化合物可以与一种或多种有效对 抗多发性硬化症的其他药学活性剂联合施用。这些试剂的例子包括 干扰素(干扰素β1-a、β1-b和α)、醋酸格拉默、或皮质类固醇 例如甲泼尼松龙和泼尼松，以及化学治疗剂例如米托蒽醌、甲氨喋 呤、硫唑嘌呤、克拉屈滨、环磷酰胺、环孢霉素和tysabri。

有效对抗多发性硬化症并且适合与本发明的化合物联合施用的 药学活性剂的其他例子包括具有下列结构式的化合物：

可以与通式(A)的化合物联用的药剂的其他例子包括：

T-细胞受体(TCR)Vβ6CDR2肽疫苗，由TCR Vβ6组成，氨基 酸序列39-58，Leu-Gly-Gln-Gly-Pro-Glu-Phe-Leu-Thr-Tyr-Phe- Gln-Asn-Glu-Ala-Gln-Leu-Glu-Lys-Ser(SEQ ID NO：1)；

髓磷脂碱蛋白免疫原肽，氨基酸序列75-95，Lys-Ser-His-Gly -Arg-Thr-Gln-Asp-Glu-Asn-Pro-Val-Val-His-Phe-Phe-Lys-Asn- Ile-Val-Thr(SEQI D NO：2)；

替利莫肽，髓磷脂碱蛋白免疫原疫苗肽，氨基酸序列83-99，D -Ala-lys-pro-val-val-his-leu-phe-ala-asp-ile-val-thr-pro- arg-thr-pro，(SEQID NO：3)；

髓磷脂碱蛋白免疫原肽，氨基酸序列82-98，Asp-glu-asp-pro -val-val-his-phe-phe-lys-asp-ile-val-thr-pro-arg-thr，(SEQ ID NO：4)；

促肾上腺皮质激素(ACTH)，Ser-Tyr-Ser-met-glu-his-phe-arg -try-gly-lys-pro-val-gly-lys-lys-arg-arg-pro-val-lys-val- tyr-pro-asp-gly-ala-glu-asp-glu-leu-ala-glu-ala-phe-pro- leu-glut-phe，(SEQ ID NO：5)。

有效对抗多发性硬化症并且适合与本发明的化合物联合施用的 药学活性剂的其他例子包括：

3-4二氨基吡啶；ABT-874；Actos(吡咯列酮)；ALCAR(乙酰-L- 肉毒碱)；α硫辛酸；AndroGel(睾酮凝胶)；甲氧苄啶和维生素C 的组合；阿奇霉素和利福平的组合；米诺环素；donezepil HCl； Avandia(马来酸罗格列酮；IFNβ-1a的组合)和扑热息痛、布洛 芬或泼尼松；Avonex(干扰素β-1a)+CellCept(麦考酚酸莫酯) 的组合；Avonex(干扰素β-1a)和Copaxone(醋酸格拉默)的组合； Avonex(干扰素β-1a)和多西环素的组合；Avonex(干扰素β-1a) 和EMLA(利多卡因和丙胺卡因)麻醉乳膏的组合；Avonex(干扰素 β-1a)和雌激素和孕酮；Avonex(干扰素β-1a)+Fludara(磷酸 氟达拉滨)的组合；Avonex(干扰素β-1a)和甲氨喋呤和亚叶酸抢救 剂的组合；Avonex(干扰素β-1a)和甲氨喋呤和甲泼尼松龙的组合； Avonex(干扰素β-1a)和Novantrone(米托蒽醌)的组合； Avonex(干扰素β-1a)和Prozac(氟西汀)的组合；Avonex(干扰 素β-1a)和Topamax(托吡酯)的组合；Avonex(干扰素β-1a)和 Zocor(辛伐他汀)的组合；AVP-923(右美沙芬/奎尼定)； Betaseron(干扰素β-1b)和Imuran(硫唑嘌呤)的组合； Betaseron(干扰素β-1b)和Copaxone(醋酸格拉默)的组合； BHT-3009-01和Lipitor(阿伐他汀)的组合；骨髓/外周干细胞移植 物；CellCept(麦考酚酸莫酯)；CellCept(麦考酚酸莫酯)和 Avonex(干扰素β-1a)的组合；口服克拉屈滨；CNTO1275(单克隆 抗体)；Copaxone(醋酸格拉默)和抗菌治疗剂(米诺环素)的组合； Copaxone(醋酸格拉默)和Novantrone(米托蒽醌)的组合； Copaxone(醋酸格拉默)和泼尼松的组合；Copaxone(醋酸格拉默) 和Proventil(沙丁胺醇)的组合；环磷酰胺；达珠单抗；Deskar(吡 非尼酮)；雌三醇；延胡索酸酯；Gabitril(硫加宾HCL)；银杏； IDEC-131(抗-CD40L或抗-CD154)；免疫球蛋白和甲泼尼松龙的组 合；肌苷；干扰素τ；lamictal(拉莫三嗪)；Lexapro(依他普仑)； Lipitor(阿伐他汀)；Lipitor(阿伐他汀)和Rebif(干扰素β -1a)的组合；淋巴细胞提取物(除去免疫细胞)、Imuran(硫唑嘌呤) 和泼尼松的组合；MBP8298；甲泼尼松龙；甲泼尼松龙和Avonex(干 扰素β-1a)的组合；Modiodal(莫达芬尼)；NBI-5788(改变的肽配 体)；Novantrone(注射用米托蒽醌浓缩液)和Avonex(干扰素β -1a)或Copaxone(醋酸格拉默)的组合；ω-3脂肪酸补剂； Pixantrone(BBR2778)；Provigil(莫达芬尼)和Avonex(干扰素 β-1a)的组合；Rapamune(西罗莫司)；RG2077；Rituxan(利托昔 单抗)；咯利普兰(磷酸二酯酶-4抑制剂)；SAIK-MS(laquinimod， ABR-215062)；T细胞接种物；特立氟胺；四氢大麻酚；四氢大麻醇 (屈大麻酚)；丘脑兴奋剂；Tysabri(那他珠单抗)和Avonex(干扰 素β-1a)的组合；Tysabri(那他珠单抗)和Copaxone(醋酸格拉默) 的组合；和Viagra(柠檬酸西地那非)。

有效对抗多发性硬化症并且适合与本发明的化合物联合施用的 药学活性剂的其他例子包括图14所列出的那些化合物。此外， Copaxone(格拉默)可以与本发明的化合物口服联用。

在其他的实施方案中，有效对抗多发性硬化症并且适合与本发 明的化合物联合施用的药学活性剂包括以下化合物：Mylinax，一种 在白血病治疗中使用的克拉屈滨口服制剂，由Serono/Ivex开发； 特立氟胺，Arava的代谢产物，一种口服免疫抑制剂，由 Sanofl-Aventis开发；FTY720，一种口服免疫调节剂(鞘氨醇-1- 磷酸受体激动剂)，由Novartis开发；MBP8298，一种用于减少产 生抗髓磷脂抗体的合成髓磷脂碱性蛋白，由Bio MS Medical开发； 罕用药4-氨基吡啶(4-AP)，一种钾通道阻滞剂，由Acorda开发； Gamunex，一种静脉免疫球蛋白制剂，由Bayer开发；延胡索酸BG-12， 一种第二代的口服futnarate，由Biogen Idec/Fumapharm开发； Temsirolimus，一种T-淋巴细胞增殖阻滞剂，由Wyeth开发；E-2007， 一种AMPA受体激动剂，由Eisal开发；Campath，一种人源化抗CD52 抗体，由Genzyme开发；NeuroVax，一种疫苗，由Immune Response 开发；舒降之(Zocor)，一种他汀类药物，由Merck开发；NBI 5788， 一种拟髓磷脂肽配体，由Neurocrine开发；Tauferon，干扰素τ， 由Pepgen开发；赛尼哌(Zenapax)，一种人源化抗-CD25免疫抑制 抗体，由Protein Design开发；MS-IET和EMZ701的组合，一种甲 基供体，由Transition Therapeutics开发；laquinlmod，一种利 诺胺的衍生物的口服制剂，由Active Biotech/Teva开发；deskar吡 非尼酮，一种TNF-α抑制剂，由Mama c开发；ATL-1102，一种靶向 VLA4的第二代反义抑制剂，由Antisense Therapeutics开发。

在一些实施方案中，通式(A)的化合物可以与抗血管剂，特别是 抑制生长因子受体、表皮生长因子受体(EGFR)、血管生长因子受体 (VEGFR)和成纤维细胞生长因子受体(FGFR)的试剂联合施用。这些试 剂的例子包括，Iressa、Tarceva、Erbitux、Pelitinib、AEE-788、 CP-547632、CP-547623、Tykerb(GW-2016)、INCB-7839、ARRY-334543、 BMS-599626、BIBW-2992、氟尼达莫、AG1517，E-7080、KRN-951、 GFKI-258、BAY-579352、CP-7055、CEP-5214、Sutent、Macugen、 Nexavar、新伐司他、琥珀酸Vatalanib、GW-78603413、Lucentis、 Teavigo、AG-13958、AMG-706、Axitinib、ABT-869、Evizon、Aplidin、 NM-3、PI-88、Coprexa、AZD-2171、XL-189、XL-880、XL-820、XL-647、 ZK-CDK、VEGFTrap、OSI-930、Avastin、Revlimid、Endostar、利 诺胺、Xinlay、SU-668、BIBF-1120、BMS-5826624、BMS-540215。

在一些实施方案中，通式(A)的化合物，包括通式(I)-(IV)的化 合物，可以与影响T-细胞归巢、外渗和变移的试剂联合施用。这些 试剂的例子包括FTY-720PK I-166、PTK-787、SU-11248。

在一些实施方案中，通式(A)的化合物，包括通式(I)-(IV)的化 合物，可以与抑制VLA-4的试剂联合施用。这些试剂的例子包括 Tysabri、Bio-1211.HMR-1031、SB-683698、RBx-4638、RO-0272441、 RBx-7796、SB-683699、DW-908e、AJM-300、和PS-460644。

在一个实施方案中，本发明的化合物的每日施用剂量可以重复 一周。在另外的实施方案中，每日剂量可以重复1个月到6个月；6 个月到1年；1年到5年；和5年到10年。在其他的实施方案中， 重复施用治疗的长度由医生确定。

通过下面的实施例来解释本发明，而不是意欲以任何方式进行 限制。

实施例

实施例1在体外试验中SymadexTM抑制LPS刺激后B细胞的增殖 和Con A刺激后T-细胞的增殖

在几个体外试验中比较SymadexTM和米托蒽醌的活性，以确定 SymadexTM对于几种参与多发性硬化症神经炎症和抗原呈递的关键调 节系统的作用。

IL-4是B细胞、肥大细胞和巨噬细胞的生长和分化因子，是在 小鼠中合成IgE的开关因子。它也促进克隆的CD4+ T细胞的生长， 增强II类MHC分子的表达和静止B淋巴细胞的增大。在人体中，CD4+ T淋巴细胞也产生IL-4，但在人IL-4并未显示可以作为B细胞或肥 大细胞生长因子。鼠和人IL-4都诱导B淋巴细胞转换为合成IgE。 人IL-4也诱导人B淋巴细胞和巨噬细胞的CD23表达。IL-4对于细 胞介导的免疫可能具有一定的作用。

IL-10抑制TH1细胞的细胞因子合成，阻断抗原呈递，并抑制干 扰素γ的产生。IL-10抑制巨噬细胞呈递抗原和形成IL-1、IL-6和 TNF-α的能力。IL-10也参与IgE调节。尽管IL-10抑制细胞介导的 免疫，但它在体外刺激B淋巴细胞、IL-2和IL-4T淋巴细胞的应 答性，并将鼠肥大细胞暴露于IL-3和IL-4中。通过抑制T淋巴细 胞自身免疫，IL-10可以治疗性地应用于多发性硬化症和I型糖尿病 中，以及用于促进同种异体移植物存活。

在该实验中，在RPMI缓冲液pH7.4中将受试化合物和/或载 体与人外周血单核白血球(PBML，1x106/m l)预温育2小时。然后在 37℃和5％CO2下加入伴刀豆球蛋白A(Con A，20μg/ml)刺激该细 胞过夜。然后用夹心ELISA试剂盒对条件培养基中IL-4和IL-10细 胞因子的水平进行定量。以10、1、0.1、0.01和0.001μM筛选该 化合物。

使用从重量为17±1g的balb/c小鼠的脾脏中分离的B-淋巴 细胞。在37℃下，在AIM-V培养基pH7.4中，在10μg/m l脂多 糖(LPS)存在下，该细胞(1.5x106/ml)与受试化合物和/或载体温育 24小时。然后加入[3H]胸苷(120nM)进入另一个过夜温育期。通过 液体闪烁计数评价胸苷掺入。

使用从重量为17±1g的balb/c小鼠的胸腺中分离的T-淋巴 细胞。在37℃下，在AIM-V培养基pH7.4中，在3μg/mL伴刀豆 球蛋白A(Con A)存在下，该细胞(4x106/ml)与受试化合物和/或载 体温育24小时。然后加入[3H]胸苷(120nM)进入另一个过夜温育期。 通过液体闪烁计数评价胸苷掺入。

以10、1、0.1、0.01和0.001μM筛选该化合物。

米托蒽醌和SymadexTM的结果列在表1中。比载体对照应答高50％ 或更多(≥50％)的受试化合物诱导的对细胞增殖的抑制表明了其显著 的抑制活性。

表1 SymadexTM 米托蒽醌 浓度 ％生长 抑制 IC50 ％生长 抑制 IC50 介质释放，IL-4 10μM 105 3.33μM 108 2.96μM 1μM -9 -4 0.1μM 2 18 10nM 7 13 1nM 8 11 介质释放，IL-10 10μM 99 1.2μM 102 0.759μM 1μM 39 60 0.1μM 16 5 10nM 16 1 1nM 1 2 细胞增殖，B-细胞 +LPS 10μM 103 0.038μM 102 7.31nM 1μM 101 102 0.1μM 80 93 10nM 38 54

1nM 0 18 细胞增殖，T-细胞 +Con A 10μM 104 0.014μM 103 0.032μM 1μM 103 103 0.1μM 82 80 10nM 44 19 1nM 10 -1

表1、图1A和1B以及图2A和2B的结果表明，SymadexTM抑制 了在神经炎性疾病例如多发性硬化症中非常重要的炎性介质IL-4和 IL-10的释放。此外，在涉及B-和T-细胞的体外增殖试验中SymadexTM 显示了高水平的生长抑制。SymadexTM的活性与对照化合物米托蒽醌 相当。

实施例2在每周一次持续4周的治疗周期中，SymadexTM减轻慢 性多发性硬化症动物模型—实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)的症 状

一种显示药物化合物用于治疗与多发性硬化症(MS)有关的各种 疾病的应用的方法是其在实验室动物中抑制实验性自身免疫性脑脊 髓炎效果的能力。

实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)是MS的动物模型，其需要在 某些敏感的哺乳动物种中诱导针对髓磷脂碱蛋白的T-细胞介导的自 身免疫性疾病。EAE模型是一种适合研究与MS有关的脑和脊髓炎症 的方法(参见Bolton，C.Mult，Scler，1995；1(3)；143-9)。

在啮齿类动物中，注射全脊髓或脊髓组分例如髓磷脂碱蛋白会 诱导出基于T-淋巴细胞活化的自身免疫应答。在接种后8-10天左右 临床疾病通常变得明显，观察到多种行为异常，范围包括轻度步态 障碍和尾无力直至完全麻痹和死亡。典型地发生了体重减轻。在幸 存的动物中，发生了自发的恢复，伴随有大多数运动功能的不同程 度的恢复。根据物种、变应原和所使用的方法不同，通过EAE模型 测试的动物可能受到一次(急性EAE)或几次(慢性复发性EAE)侵袭。

EAE的治疗有许多结构形式：治疗可以是预防性的，其中在免疫 前施用治疗组合物；治疗可以在诱导的第一周开始；以及治疗可以 是介入性的，在临床症状发展(急性或慢性)后开始。在文献中预防 性方案是非常常见的，发病后的治疗较少见，而在发病数周后的治 疗最少见。本文所报道的实验属于最后一种分类，其中治疗的是在 慢性-进展(CP)期具有广泛的脱髓鞘斑的动物。在完全弗氏佐剂中通 过全CNS诱导的CP-EAE是一种具有广泛炎性和脱髓鞘变化的旺盛的 疾病。作为一般性的原理，我们相信，在较晚时候成功的介入可以 更好地预测在人疾病中的有效性。这与预防研究的情况是特别相关 的，其中该预防研究关注的是外周免疫系统，而不是针对作为MS性 质的存在的CNS炎症的问题。

方法

在该实验中用匀浆的全CNS(在盐水中)和等量的完全弗氏佐剂 和10mg加入的灭活结核杆菌将雌性幼年Hartley豚鼠(225g)免疫。 在第7到20天之间发生不同严重程度的急性事件，然后发生连续的 临床异常情况，包括后肢麻痹、粪便嵌塞和失禁。表2显示了临床 评分标准。这些临床特征指示炎症诱导的腰脊髓脱髓鞘作用。近来 对先前实验的研究表明，在40天后检查临床评分为“2”持续超过1 周的动物，有97％在脊髓中出现脱髓鞘斑。

在这些实验中，对免疫的动物进行护理，直至第40或第52天， 然后每周1次用8mg/kg和16mg/kgSymadexTM(心内)或20mg/kg 和40mg/kg SymadexTM(腹膜内)治疗4周。对照组给予载体。每日纪 录临床指征，并纪录体重。在治疗期结束后，切开脑和脊髓，用福 尔马林固定并封闭，以用苏木精-曙红和搔洛铬-R-花色素苷染色切 片由双盲观测者进行脑膜炎、血管周围浸润(形成套(cuffing))、实 质脊髓炎和脱髓鞘的常规病理学检查。

在第40天处死未治疗的慢性EAE动物(n＝5)和非EAE对照动物 (n＝5)。按照每10天的治疗间隔，处死每组的5只动物(0.25ml戊 巴比妥钠)，收集血样进行FACS分析(见下文)，切开脑和脊髓并制 成切片。使用三个脊髓切片，对应于脊髓的腰区、胸区和颈区。将 脑切成5个横切片：前3个近侧切片合为一块，后两个远侧切片互 相分离。将组织在10％福尔马林中固定，并包埋于石蜡中。用苏木精 -曙红(H-E)或搔洛铬-R-花色素苷(SCR)将5微米的切片染色，由双 盲观测者评价为如下4类中的一种：脑膜炎、血管周围浸润、脑炎 或脊髓炎和脱髓鞘(表2)。合并的病理学评分表示每只动物所有5 个CNS切片的总评分(可能为20分)。

表2

病理学评分标准

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M：脑膜中的炎症反应

0：没有变化

1：单核细胞的血管周围和/或脑膜浸润，涉及1-3根血管

2：涉及4-6根血管

3：涉及6根血管以上

4：脑膜的密集浸润，涉及所有或几乎所有血管

P：实质血管周围浸润

0：没有变化

1：1-3根实质血管在魏-罗二氏隙中浸润

2：涉及4-6根血管

3：涉及6根血管以上

4：实际上涉及所有血管

E：脑炎或脊髓炎

0：没有侵入神经实质；小神经胶质细胞或炎症细胞侵入神经 实质

1：少数分散的细胞

2：来自数个血管周围套的细胞侵入

3：涉及大面积的神经实质

4：实际上整个切片被浸润

D：脱髓鞘、髓鞘再生和髓磷脂碎片

0：没有脱髓鞘

1：一个软膜下脱髓鞘灶或髓磷脂碎片

2：几个小的脱髓鞘灶

3：一个大的脱髓鞘汇合区

4：数个大的脱髓鞘汇合区

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为了定量在脊髓中观测到的异常情况，将用H-E染色的切片分 成12个代表性的饼形区。在每个区中，用Sigma Scan Pro图像分 析软件(SPSS)计数在0.12-mm2大的视野里细胞的数目，计算所有12 个区中细胞平均数的总和以用于整个的脊髓(每只动物36个视野)。 需要注意的是，在计数所有的细胞核时，除了浸润的以外细胞的数 目可能包括神经元和神经胶质细胞。因此，用非-EAE动物的细胞计 数作为基线。

结果

当以20和40mg/kg(腹膜内)给药时SymadexTM在临床进展和病 理学发现中都产生了很大的和本质上的改变。图3表明了在此之后 指定日时动物的平均临床评分。治疗的动物都显示出某种程度的临 床恢复，其中40mg/kg组在开始治疗2周内实现了恢复。

图4进一步说明了从疾病中恢复的时程。在该实验中，载体对 照显示了稳定的病程。20和40mg/kg组的治疗动物在疾病的严重度 大于对照组时进入该研究，在指定治疗组前随机分组的现象导致了 这种一致的情况。如箭头所指，在第40天开始治疗，总共进行4个 剂量。在治疗结束时，两个治疗组都显示了疾病显著改善至显著低 于对照组的水平，尽管在进入研究时疾病水平在对照组之上。甚至 对于3到4只动物的小组，p值也显示统计学显著性，从而支持了治 疗会产生显著不同于对照组的结果的假设。这通过用Mann-Whitney 或Wilcoxon秩和检验对中位数差异进行非参数比较来确定。对于40 和20mg/kg组，显著性值分别为0.001和0.004。

病理学发现是非常不寻常的。脑膜炎和血管周围浸润的评分在 治疗组中比在载体对照组中更为严重(数据未列出)。但是，我们观 测到两个非常重要的发现：所存在的损伤具有极大的细胞损失(数据 未列出)，而且我们观测到先前的髓磷脂苍白(myelin pallor)是 由于脱髓鞘再生(数据未列出)。后一个发现与CNS由于丧失炎症细 胞而允许髓鞘再生相吻合。

脱髓鞘是MS损害的关键病理学特征。这不仅改变了轴突的电响 应，而且现在的观点认为长时间的脱髓鞘可以导致轴突的永久损伤 和死亡。神经变性也是MS病理学状况的一个关键因素。在这点上， 已经证明了SymadexTM在慢性进展性模型中甚至在达到97％脊髓脱髓 鞘的疾病进展期后，也可以有效地允许内源性的髓鞘再生。它似乎 可以通过减少所存在的损伤中的炎症使CNS恢复。在延长的 SymadexTM治疗中，可能观测到慢性脱髓鞘斑，事实上没有保留的炎 症细胞，一些这样的损伤显示了指示髓鞘再生的髓磷脂苍白(称作MS 中的阴斑)。通过除去这些细胞或下调或抑制细胞运输来预防新的T- 细胞浸润将可以防止其他的巨噬细胞向炎症损伤的聚集。结果，损 伤处的免疫细胞由于凋亡而死亡，损伤相对不会浸润。除去细胞因 子以及ROS-介导的巨噬细胞的组织毒性将允许CNS进行修复机制从 而变得活跃，并观测到髓鞘再生。因此，很可能SymadexTM对于外周 免疫系统也具有作用，尽管不能排除对CNS炎症的直接作用。

大的炎症套(inflammatory cuffs)的持续存在和高于对照组 的脑膜炎症评分与具有免疫能力的白细胞的连续产生相符合，这些 白细胞蓄积于CNS血管中，但不会运输到实质中。

实施例3在每周一次持续4、6、8周的治疗周期中和给药4周- 停止治疗4周的周期中，SymadexTM减轻慢性多发性硬化症动物模 型——实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)的症状

根据希望的数个目标，将实施例2所述的实验扩展到较大的组 和较长的治疗周期。除了确认初期的发现外，一致的努力旨在证明 响应的程度和持久性，包括停药后的效果，和证明药物治疗对于免 疫功能的影响，以揭示可能发生损害或毒性的任何信号。

在如上所述诱导出疾病后，将动物随机分为5组，1个载体对照 组和4个治疗组。治疗组的动物以20mg/kg腹膜内施用所研究的药 物(SymadexTM的二盐酸三水合物)，每周1次，共4、6和8周，另一 组每周治疗1次共4周并用载体溶液(盐水)而不是药物再治疗4周 并观测。

与实施例2的方法相比仅有的方案上的明显不同是该群免疫动 物是排除疾病严重度大于2的动物而挑选的，并且随机分组，以使 得每组的平均疾病严重程度与严重度评分范围1到1.5相匹配。采 用该标准是为了避免在实施例2种观测到的偶然情况，即选择用于 治疗的动物应当以大于相应载体对照组的严重度开始治疗。

所有治疗的动物在疾病方面显示了统计学显著的改善。也就是 说，它们由于炎症细胞侵袭神经索实质的脱髓鞘进展所产生的麻痹 症状降低到接近基线、发病前的水平。仅通过观察病程图即可以证 明这些结果，也可以通过非参数、等级次序的统计分析来证明其高 度的显著性。

如图5所示，4周治疗周期的结果(n＝14)表明临床严重度评分具 有从开始出现疾病的平均1.3向平均水平0.7下降的趋势。这种改 变与对照组(n＝13)有统计学差异，差异的p值的中位数为0.0001。 在图6中证明了类似的剂量应答，该图描述了6周的治疗过程。同 时疾病得到改善，从对照组(n＝4)的平均严重度评分1.3降到治疗组 的0.3(n＝3)，统计学显著性p值为0.009。图7显示的是8周的治 疗组。需要注意的是载体对照组，其疾病显示向更严重的程度进展， 因此由于脱髓鞘而显示更严重的麻痹，在4周后逐渐从1.3上升到 1.7。相反，在两个治疗组中显示了进行性疾病的改善，表明逆转了 脱髓鞘作用。在用8个连续剂量治疗的动物组中，向正常、疾病前 临床评分变化的趋势在开始时是不定的，但是在疗程结束时都达到 了基线。尽管恢复曲线具有个体间差异，但总的等级次序分析表明 治疗组(n＝3)和对照组(n＝5)之间的差异是显著的，p值为0.0006。 治疗组在4周后停止治疗，在停药期间疾病保持稳定，其水平也与 对照组有显著的差异，p值为0.002。

该研究的结果如图7所示。首先，治疗应答表明了是不同于对 照组的逐级时间应答。患病动物随着每周应答持续时间而逐渐更为 健康，而对照组动物不可逆地发展成完全的神经机能障碍，其根本 原因是不可逆的脱髓鞘作用。其次，药物治疗的蓄积药效作用是持 久的，因为所治疗的动物与治疗程度相应地保持在稳定状态，而未 治疗的对照组保持疾病的加速进展。根据现在最有希望的进行性MS 治疗剂即α4整联蛋白拮抗剂如Tysabri及其小分子配体等价物所 得到的效果(如Piraino P.S.等人(J.Neuroimmunology，131： 147-159，2002)所述)，这是特别值得注意的观测结果。当在相同 的MS的豚鼠EAE模型中停止治疗时，治疗组的动物在7天内恢复到 未治疗的对照组的疾病水平，没有证据表明有益的药物效果延长。

Symadex和α4整联蛋白拮抗剂之间，以及Symadex和其他阻止 T-细胞介导的炎症应答的治疗剂之间出现的相反结果，是由于 Symadex不是通过炎症细胞的激活和募集而发挥其作用。如实施例2 所示，在整个疾病恢复时程中以定期间隔处死的动物脊髓的组织病 理学显示了血管和血管周围套中炎症细胞的蓄积，而不是减少。但 是，这些细胞显然阻断了穿越实质基膜的变移，提示通过涉及下列 方面的机制进行阻断：细胞粘附、运动性和细胞外基质重建。

与不改变T细胞群或T-细胞亚型比例的皮质类固醇、干扰素和 整联蛋白拮抗剂治疗相比，可以证明Symadex作用模式有区别性和 意想不到的特征。在该实施例中，如图8中的A图所示，在任意的 治疗组和载体对照组之间没有观测到总T-细胞计数的差异。如图B 和C所示，SymadexTM治疗不会调节CD4或CD8 T-细胞群。甚至B- 细胞也没有显示与对照组有显著差异，尽管随着疾病或治疗的时间 有下降的趋势。与MS的细胞毒性治疗例如米托蒽醌和环磷酰胺类似， 根据实施例1的证据，SymadexTM可以在刺激后的细胞培养物中暂时 降低B-细胞数，但是当较长时间暴露于体内时这种作用并不明显。 该观测进一步支持了下面的观点：SymadexTM通过新的机制发挥作用， 该机制不排除免疫系统，也不会降低宿主对抗原呈递的病原体的防 御。这种性质是人们非常需要的，并且在意欲治疗慢性疾病或急性 疾病例如MS以及健康受者的任意治疗中都是有利的。

实施例4在以72小时间隔施用2个剂量后，SymadexTM减轻慢 性多发性硬化症动物模型——实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)的 症状

对每周一次用SymadexTM治疗时疾病恢复时程的分析表明，疾病 的改善具有2到3天的周期性。这种现象在图7所示的8周治疗组 中特别明显。在该组中可以看到动物个体不同的应答，从而平均药 效应答在连续给药间期之间呈现“锯齿”模式。在追踪该组具体动 物的纪录时，显示其中一些暂时恢复，在给予一个剂量后2-3天显 示疾病改善，然后回复到较高的疾病评分。这种总的趋势导致了疾 病改善了8周，但是“锯齿”型应答现象提出了关于最佳实现疾病 症状的较平稳逆转的治疗时间间隔的问题。

为了试验更频繁的给药方案更快速地解决疾病症状的可能性， 进行试验使给药周期与所观测的应答周期性相匹配。因此，将试验2 的方法应用于一组动物和对照组，使其在免疫后30天达到疾病的慢 性期。选择疾病评分为1的6只动物，一半通过腹膜内施用20mg/kg SymadexTM治疗。以72小时间隔给予这3只动物2个剂量。另3只动 物作为载体对照。

如图9所示，72小时程序的SymadexTM治疗逆转了疾病的进展， 仅用2个剂量就恢复到了基线临床评分，而在对照组中疾病继续进 展。该差异是统计学显著的，通过秩和检验，p值为0.002。

该实验表明，可以调节更频繁的SymadexTM施用，以使得在药物 滞留时间、炎症细胞对髓磷脂的侵袭的时间性质和所允许的髓鞘再 生的固有过程之间达到特定的平衡。因此，合理地预期给药方案的 组合可以首先用于通过更频繁或密集的药物递送程序加速疾病的恢 复，然后用较低频率但定期的加强剂量维持阻断炎症细胞的有益效 果。在图7和实施例3中证明的治疗和疾病逆转的“锯齿”型模式 提示SymadexTM的作用可以在给药之间2-3天的间期内衰减。该实验 证明了SymadexTM的效力可以通过更频繁的给药来增强。

实施例5在疾病诱导初期每日给药，SymadexTM减轻急性多发性 硬化症动物模型——实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)的症状

如实施例2所述，豚鼠中的EAE模型是双相性的。在初次免疫 中髓磷脂碱蛋白受损后，神经损伤的典型临床模式是以免疫后第9 天疾病的急性标志开始的。临床发作导致体重减轻、后肢无力和翻 正反射异常。这些症状的严重度在再过6-7天后达到顶峰，然后是 短暂的持续和部分消退，直至第20日，当病程改变为稳定的进行性 消退时，就不会有临床恢复。

作为Symadex的应用的一个重要扩展，检查其在疾病发生早期 的治疗作用。该实验进一步在实施例4的结果的基础上建立，实施 例4的结果提示较频繁地给药可以更快速和单向地减轻症状。由于 EAE的急性期也模拟活动性的但是不一定是进行性的疾病，如在缓解 -复发型多发性硬化症人类患者中所预期的，该实验进一步设计用于 检验与米托蒽醌相比的效力。如早前所述，米托蒽醌是已批准的治 疗剂，已经用作变成已知是心脏毒性成因剂的SymadexTM分子负型毒 性团的化学进化的起始点。

因此，分别用6mg/kg的SymadexTM(全盐水合物)和0.35mg/kg 的米托蒽醌治疗患有由实施例2的方法诱导的EAE的三个随机组的 豚鼠。每日一次通过腹膜内注射治疗动物，从免疫后第7天开始共 15天。对照组用载体治疗。我们推论，15次连续的剂量为6mg/kg的 SymadexTM所表示的药物暴露水平与实施例4的“每72小时20mg/kg” 方案相同，并且与实施例2中每周给予20mg/kg和40mg/kg方案 的中度暴露水平相一致。米托蒽醌的剂量选择为反映现有技术中每 日给予大鼠或小鼠的典型高剂量，但对豚鼠按比例放大。

从图10所示的结果可以看出，用SymadexTM或米托蒽治疗的组 显示了与载体对照组完全不同的趋势。在对照组中疾病发作后临床 评分稳定地增加，直至第15日，然后是特有的短暂恢复，并开始第 二次攀升到第20日达到更高的疾病严重度。在米托蒽醌和Symadex 的情况中，阻止了神经损伤在开始时的上升，在整个给药期所有动 物继续向基础水平恢复。但是，通过Mann-Whitney秩和检验的统计 学分析表明，SymadexTM的治疗效果相对于对照组和米托蒽醌的效果 都具有统计学显著性，p值小于0.05。米托蒽醌的效果和对照组之 间的中位数评分的差异没有统计学显著性。图11显示了体重增加曲 线，体重增加是豚鼠总体健康状态的敏感指标。急性EAE疾病发作 引起了体重的快速降低，发展到第15天后稳定地恢复。对照组动物 和SymadexTM治疗的动物恢复了每天增加体重的能力，这是在豚鼠健 康时或在严重的慢性疾病发作前的标志。但是，在该实验的环境中， 较低相对剂量的米托蒽醌可以减轻EAE的急性临床症状，但是它也 损害了体重的增加，这是对有效和广谱细胞毒性药物的全身性独立 应答的标志。通过Mann-Whitney秩和检验，载体对照组和SymadexTM 组的体重增加曲线比较没有显示统计学显著性，而SymadexTM和米托 蒽醌之间的差异达到了统计学显著性，p值为0.034。

这些结果表明，在活动性疾病的整个过程中，不管是早期急性 期还是慢性期，SymadexTM都改变了EAE的表现，而且没有带来有害 的细胞毒性负载。图12所示的病理学分析通过实施例2所述的组织 学方法证实了以前的观测，即SymadexTM阻止了炎症细胞侵袭实质。 这是因为米托蒽醌和米托蒽醌类别内的免疫抑制性药物的作用方式 之间有显著的差异。尽管两种药物对于降低血管周围套(P)、脊髓炎 (E)和脱髓鞘(D)的作用具有相同的结果，但是根据与对照组相比的 统计学显著性差异(p值<0.05)判断，SymadexTM和米托蒽醌对脑膜炎 症(M)不显示相同的作用。米托蒽醌是一种免疫抑制剂，阻断炎症细 胞的激活和募集，导致脑膜炎症(M)统计学显著地降低。而SymadexTM 则不是这样，尽管根据其余3项组织病理学评估其治疗结果基本相 似。

这些发现与人的疾病状态有关，因为认为它对于有效治疗MS疾 病而不损害宿主产生对抗偶发性感染的免疫性因而是炎性的应答的 能力是特别有利的。它对于可能损害胃肠功能和营养维持的细胞毒 性剂应答，在这些豚鼠试验中没有对正常生长和体重增加的负面作 用表明了另一个安全性的优点，这可能有助于SymadexTM治疗。 SymadexTM治疗急性活动性疾病的累积15天剂量是90mg/kg。

按照比例放大为人剂量水平得到了相应的人剂量为540mg/m2 体表面积(作为游离的碱)，这已经证明是安全和耐受良好的单剂量， 其低于作为每三周重复给药的640mg/m2的剂量。另一方面，米托蒽 醌剂量的按比例放大得到总的人相当剂量为45mg/m2。由于在治疗 MS时在3个月的给药周期中使用12mg/m2的米托蒽醌，这代表了一 年治疗的总剂量。因此，在对比实施例中关于SymadexTM和米托蒽醌 的相对效力的实验发现表明，在人体中，单剂量SymadexTM显示了类 似于(如果不高于)米托蒽醌一年疗程的治疗益处。

实施例6SymadexTM减轻小鼠中胶原抗体诱导的关节炎(类风湿 性关节炎和自身免疫性疾病的动物模型)的症状

类风湿性关节炎(RA)是一种自身免疫性疾病，特征在于关节中 的慢性侵蚀性炎症，导致软骨和骨的损害。一些疾病改变性抗风湿 剂(DMARDS)可以用于治疗RA。当前，两种最重要的DMARDS是肿瘤 坏死因子α(TNF-α)的抑制剂和甲氨喋呤(MTX)。证明药学化合物在 治疗各种RA相关疾病中的应用的一种方法是在小鼠中抑制胶原单克 隆抗体(mABs)对关节炎的诱导。

胶原诱导的关节炎(CIA)是实验性自身免疫性疾病，可以通过II 型胶原(关节软骨的主要组成蛋白)免疫而在啮齿类动物(大鼠和小 鼠)和非人类灵长类动物的敏感株中诱导出。CIA表现为小鼠四肢肿 胀和红斑。该自身免疫模型与类风湿性关节炎(RA)具有几个相同的 临床和病理学特征，并且已经成为研究最广泛的RA模型。Courtenay 等人在1980年(Courtnay，J.S.，Dallman，M.J.，Dayman，A.D.， Martin A.，和Mosedale，B.(1980)Immunisation against heterologou stype II collagen induces arthritis in mice. Nature283，666-668)首先描述了小鼠模型中的CIA。与RA类似， 主要组织相容性复合体(MHC)的II类分子调节了对CIA的敏感性， 表明了T细胞发挥了决定性的作用。

方法

用每组3只6-7周大的BALB/c株小鼠通过抗II型胶原单克隆 抗体(mABs)和脂多糖(LPS)来诱导关节炎。在第0天将总共4mg/小 鼠的4种不同mABs(D8，F10，DI-2G和A2)的组合静脉内施用于动物， 然后72小时后(第3天)用25mg/小鼠的LPS静脉内刺激。从第3 天开始，分别口服试验物质和载体，连续3天每日1次。对于每只 动物，在第0，5，7，10，14和17天用具有含水单元(12mm直径) 的容积测量器测定两只后爪的体积。通过下式计算mABs+LPS诱导 的体积增加的抑制百分比：

抑制(％)：[1-(Tn-T0)/(Cn-CO)]x100％

其中：

C0(Cn)：载体对照组中第0天(第n天)的体积

T0(Tn)：受试化合物治疗组中第0天(第n天)的体积

后爪的浮肿减小30％或更多被认为是显著的。

结果

为监测CIA的发作，测量mAB治疗的小鼠两只后爪的体积。在 对照组(载体)治疗的动物中，脚爪很快发炎，在第5天体积增加42％， 在第10天观测到最大体积，然后肿胀开始消退。如图13所示，在 SymadexTM治疗组中，第5天的初期肿胀稍微低于对照组(32％比42％)， 而在第10天(29％比75％)，第14天(18％比70％)和第17天(19％比47％) 观测到了炎症的显著降低(通过爪体积测量)。根据配对t检验的平 均数差异和根据非参数Mann-Whitney秩和检验的中位数差异都显示 p值小于0.01。

结论

在小鼠CIA模型中，SymadexTM证明有显著的抗关节炎活性，在 第10天(61％抑制)、第14天(74％抑制)和第17天(59％抑制)显示显 著的抗炎活性。这些发现通常与前面的实施例中关于EAE和自身免 疫性疾病的内容相符，因为它们证明了SymadexTM通过意想不到的机 制发挥效力。类风湿性关节炎的胶原抗体模型是具有意义的，因为 它绕过了抗原呈递的主要炎症损伤。经典的抗炎剂例如皮质类固醇 和抗叶酸剂例如甲氨喋呤可以通过抑制炎症细胞激活和重建的主要 事件来缓解自免疫炎症疾病的后果。抗体诱导的模型产生了疾病的 症状，该症状出现于自身免疫性应答的后期，在激活的细胞侵袭到 软骨中后，具有外渗和变移，就像MS的长期侵袭实质的情况一样。

甲氨喋呤，一种标准治疗剂，已经显示了可以在抗体诱导的模 型中产生消退的益处，相比于运输和迁移性质，其本质上较少依赖 于T-细胞激活。Lange等人的工作可以引用到本文中{Annals of Rheumatoid Disease64：599-605，2005}。相反，SymadexTM则在该 模型中完全有效。该实施例的结果与治疗人类患者特别相关，因为 该治疗效果是通过口服获得的。在可注射生物制剂例如封闭抗体的 时代，通过口服途径加入有效的非免疫抑制性治疗是特别需要的。

实施例7 SymadexTM下调炎症细胞粘附、细胞表面信号传导和细 胞增殖的其他过度表达的靶机制

为了研究SymadexTM治疗对于基因表达的作用，进行微阵列试 验。

选择两种结肠直肠癌细胞株(HT29和HCT116)进行研究，其作为 快速增殖的侵害性细胞的行为可以适用于不同组织来源的许多其他 这样的细胞类型。这两种细胞株是无限增殖的结肠癌细胞。已知它 们的基因表达方式是模拟神经-肠细胞的行为，因此适当地模拟了在 类似的上皮或内皮来源的细胞中发现的该类型的调节模式。具有这 些本体根源(ontological root)的细胞也是适合在神经肠来源的组 织中常见的自身免疫和炎症敏感性的模型，例如其本身存在炎性肠 病的情况。

这里注意使用差别基因表达阵列(Zhang J.等人，″Neural system-enriched expression：relationship to biological pathways and neurological diseases″，Physiol.Genomics 18： 167-183，2004)进行彻底的研究，其已经证明了在中枢神经细胞和 解剖学不相关的组织中基因表达模式的冗余和共同性。例如，Zhang 和他的同事们研究了在神经系统10个区和30个外周器官中8734种 基因的表达产物，将其教导通过参考引入本文。他们的分析表明， 约70％与神经系统疾病有关的基因也在多个组织包括上皮来源的组 织和外周血中表达。这些研究者进一步提示，与神经系统疾病有关 但来源于更容易采样的不同外周组织的基因的序型分析将会有助于 获得对这些疾病的更好的机制方面的理解。因此，在基因表达研究 中使用结肠细胞作为示例性模型来理解药物对这些细胞和神经系统 组织共同的途径的作用在实验学上是无可争议的。

因此，用优选的咪唑吖啶组合物(下文称作SymadexTM)如下所 述进行具体研究，以证明本发明的化合物的作用机制。

细胞在GI50浓度(对于HT29和HCT116细胞株分别为0.68和 0.21μM)的SymadexTM存在下生长，在暴露1、8和48小时后将上 述细胞与未治疗的对照部分一起收集。以一式三份的形式裂解冷冻 的细胞沉淀物，在自旋柱上纯化分离总RNA(所有试剂均来自 Ambion)。在达到纯度得到QC认可后，通过线性扩增将总RNA转变 为cRNA，将10μg样品加于CodeLink Human Whole Genome Bioarrays(GE Healthcare and GenUs Biosystems)上。

该阵列以一式三份的形式处理，并在对重复差异性进行有力统 计分析后进行比较。使用CodeLink Expression Analysis(GE Healthcare)和GeneSpring(Silicon Genetics)软件，如果通过t 检验证明与基线相比的改变是显著的(p<0.05，α＝0.025)，则认为 基因(包括ESTs)差异性表达。然后通过使用公开获得的软件包EASE 和GoMiner并使用Pathways Analysis(Ingenuity Systems)过滤表 达中的“倍数”改变，来确定在标准化的基因本体(gene ontology)/ 途径中的错误发现率和表现。然后在MedMiner文献检索环境中进一 步寻找功能注解。

在24小时试验培养的采样间隔中，271种下调的基因在来自 55000个登录基因片段的阵列内的两种细胞类型中明显地表现。表3 将其列出，其中第一栏的数据表示相对于对照组改变的倍数，第二 栏表示基因符号，第三栏引用了Genbank登录号，第四栏提供了基 因功能的简要描述。

表3：由于SymadexTM作用而显著下调的基因

相对于对照 改变的平均 倍数 基因符号 GENBANK 登录号 描述 -17.00 -9.43 -2.07 -21.74 -12.02 -22.71 -2.71 -1.92 -13.15 -2.29 -2.21 -8.24 -9.43 ACTA2 ACVRL1 ACYP1 ADCYAP1 ADH1C AGT ALG5 ANAPC4 APOA1 ARL6IP ASAH2 ATP1B4 ATP2B3 AL713608 NM_000020 AA664719 NM_001117 NM_000669 NM_000029 NM_013338 NM_013367 NM_000039 NM_015161 AF250847 AI659245 NM_021949 肌动蛋白，α2，平滑肌，大动脉 I I型激活素A受体-样1 酰基磷酸酶1，红细胞(普通)型 腺苷酸环化酶活化多肽1(脑垂体) 醇脱氢酶1C(I类)，γ多肽 血管紧张素原(丝氨酸(或半胱氨酸)蛋白酶抑制剂， 进化A(α-1抗蛋白酶，抗胰蛋白酶)，成员8) 天冬酰胺连接的糖基化5同系物(酵母，dol i chyl- 磷酸β-葡糖基转移酶) 分裂后期促进复合体亚单元4 载脂蛋白A-I ADP-核糖基化-样6相互作用蛋白 N-酰基鞘氨醇门冬酰胺酶(非溶酶体神经酰胺酶)2 ATP酶，(Na+)/K+运输，β4多肽 ATP酶，Ca++运输，质膜3

-2.08 -2.22 -23.65 -2.17 -12.57 -1.91 -2.58 -2.11 -15.52 -1.92 -11.45 -12.99 -2.51 -2.14 -2.40 -13.25 -2.09 -2.99 -8.14 -19.89 -2.14 -2.38 -54.48 -2.54 -23.19 -2.13 -2.53 -26.26 -20.65 -1.88 -1.94 -3.14 -2.09 -2.36 -2.95 -3.39 -2.15 -2.24 -89.97 -9.75 -3.07 -2.18 -2.08 -28.71 -15.24 -2.13 -15.36 -6.35 -3.39 -3.32 -2.11 BAD BAG2 BBS2 BCAP29 BGN BIRC5 BLM C10ORF7 C3AR1 CAMK1 CASR CCL23 CCNB2 CD164 CD58 CD5L CDC2 CDC25C CDKL1 CENTA1 CHRNA5 CKS1B COL1A2 COPS3 COX6A2 CREM CSE1L CSRP3 CYP19A1 D8S2298E DCK DCLRE1A DDX1 DEK DHFR DLEU2 DNAJB11 DNAJD1 DSC3 DSCR1L1 DTYMK DUSP12 DUT EGFL6 EIF2AK4 EIF2S1 EIF4EL3 ENG ERH FAIM FARS1 NMJD04322 NM_004282 T26496 NM_018844 NM001711 NM_001168 NM_000057 NM_006023 NM_004054 NM_003656 BX106711 NMJD05064 NM_004701 NM_006016 NM_001779 NM_005894 NM_001786 NM_001790 NM_004196 NM_006869 NM_000745 NM_001826 NM_000089 NM_003653 NM_005205 NM_001881 NM_001316 NM_003476 NM_000103 NM_005671 NM_000788 NM_014881 NM_004939 NM_003472 AU127142 NM_006021 NM_016306 NM_013238 NM_001941 NM_005822 NM_012145 NM_007240 NM_001948 NM_015507 AI630242 NM_004094 BX111619 BM665467 NM_004450 NM_018147 NM_006567 细胞死亡的BCL2-拮抗剂 BCL2相关的athanogene2 巴-比二氏综合征 B-细胞受体相关蛋白29 二聚糖 包含杆状病毒IAP重复的5(存活素) 布卢姆综合征 染色体10开放读码框7 补体成分3a受体1 依赖于钙/钙调蛋白的蛋白激酶I 钙传导受体(低尿钙高血钙症1、重度新生儿甲状旁 腺机能亢进) 趋化因子(C-C基序)配体23 细胞周期蛋白B2 CD164抗原，唾液粘蛋白 CD58抗原，(淋巴细胞功能相关的抗原3) CD5抗原-样(富含清除受体半胱氨酸的家族) 细胞分裂周期2，G1到S和G2到M 细胞分裂周期25C 细胞周期依赖性激酶样-1(CDC2-相关酶) 蓟苦素，α1 胆碱能受体，烟碱，α多肽5 CDC28蛋白激酶调节亚单元1B 胶原，I型，α2 COP9组成型光形态发生同系物亚单元3(拟南芥) 细胞色素C氧化酶亚单元VI a多肽2 cAMP应答元件调节剂 CSE1染色体分离1-样(酵母) 富含半胱氨酸和甘氨酸的蛋白质3(心脏LIM蛋白) 细胞色素P450，家族19，亚族A，多肽1 复制8 脱氧胞苷激酶 DNA交联修复1A(PSO2同系物，酿酒酵母) DEAD(Asp-Glu-Al a-As p)盒多肽1 DEK癌基因(DNA结合) 二氢叶酸还原酶 在淋巴细胞性白血病中缺失，2 DnaJ(H s p40)同系物，亚族B，成员11 DnaJ(H sp40)同系物，亚族D，成员1 桥粒糖蛋白3 唐氏综合征关键区基因1-样1 脱氧胸苷酸激酶(胸苷酸激酶) 双重特异性磷酸酶12 dUTP焦磷酸酶 EGF-样-域，multi ple6 真核翻译起始因子2α激酶4 真核翻译起始因子2，亚单元1α，35kDa 真核翻译起始因子4E-样3 endoglin(O s ler-Rendu-Weber综合征1) 未发育同系物(果蝇)的增强子 Fa s细胞凋亡抑制分子 苯丙氨酸-tRNA合成酶1(线粒体)

-17.42 -13.00 -11.62 -2.87 -9.02 -9.60 -10.14 -2.44 -1.96 -19.73 -62.09 -2.51 -2.81 -18.16 -11.49 -80.43 -13.80 -2.56 -2.31 -2.35 -2.63 -1.97 -2.94 -7.42 -1.93 -2.08 -13.76 -58.56 -9.79 -11.23 -28.60 -25.20 -10.64 -27.91 -2.12 -2.73 -15.06 -15.93 -6.83 -24.13 -7.23 -2.52 -11.04 -24.24 -3.34 -11.85 -57.61 -87.48 -11.94 FBLN1 FBN1 FCAR FEN1 FNTA FOXN1 GABRA3 GDAP1 GGH GIPR GJB5 GLA GMNN GNAL GPR1 GPR15 GPR24 GPR54 H2AFX H2AFZ HAT1 HMGB1 HMMR HNF4A HNRPA2B1 HSGT1 HSPB2 IBSP IL13RA2 IL1RAP IL1RL1 IL7R ITGA2B ITGA9 ITGAE TGB3BP ITSN1 KCNJ12 KCNJ15 KCNQ2 KIAA0089 KIF2C KIF5A KLRG1 KRT13 LCP2 LIMS2 LNX LPAAT-E NM_001996 NM_000138 NM002000 NM_004111 BI715309 NM_003593 NM_000808 NM_018972 NM_003878 NM_000164 NM_005268 NM_000169 NM_015895 BX116836 CB992712 NM_005290 NMJD05297 NMJ332551 NM_002105 NM_002106 NMJD03642 NM_002128 NM_012484 NM_000457 NM_002137 NM_007265 NM_001541 NM_004967 NM_000640 AK095107 NM_003856 NM_002185 NM_000419 BF959890 NM_002208 NM_014288 NM_003024 NM_021012 NM_002243 NM_004518 NM_015141 NM_006845 AL118561 NM_005810 NM_002274 NMJ305565 NM017980 AL565198 NM_018361 fi bulin1 原纤维蛋白1(Marfan综合征) I gA的Fc片段，受体 瓣结构特异性内切核酸酶1 法尼酰基转移酶，CAAX盒，α 叉头盒N1 γ-氨基丁酸(GABA)A受体，α3 神经节苷脂-诱导的分化相关蛋白1 γ-谷氨酰基水解酶(轭合酶，叶酰聚γ-谷氨酰水解酶) 胃抑制多肽受体 间隙连接蛋白，β5(连接蛋白31.1) 牛乳糖苷酶，α geminin，DNA复制抑制剂 鸟苷酸结合蛋白(G蛋白)，α激活活性多肽，嗅觉型 G蛋白-偶联受体1 G蛋白-偶联受体15 G蛋白-偶联受体24 G蛋白-偶联受体54 H2A组蛋白家族，成员X H2A组蛋白家族，成员Z 组蛋白乙酰转移酶1 高迁移组盒1 透明质烷介导的活动受体(RHAMM) 干细胞核因子4，α 不均一核酸核糖核蛋白A2/B1 酿酒酵母gcr2的抑制剂 热休克27kDa蛋白2 整联蛋白-结合的唾液蛋白(骨唾液蛋白，骨唾液蛋白 III) 白细胞介素13受体，α2 白细胞介素1受体辅助蛋白 白细胞介素1受体-样1 白细胞介素7受体 整联蛋白α2b(Nb11b/111a复合物的血小板糖蛋白， 抗原CD41B) 整联蛋白，α9 整联蛋白αE(抗原CD103，人粘膜淋巴细胞抗原1； α多肽) 整联蛋白β3结合蛋白(β3-内融合蛋白) inter sect in1(SH3域蛋白) 钾内部修正通道，亚族J，成员12 钾内部修正通道，亚族J，成员15 钾电压门控通道，KQT-样亚族成员2 KIAA0089蛋白 驱动蛋白家族成员2C 驱动蛋白家族成员5A 杀伤细胞凝集素-样受体亚族G，成员1 角蛋白13 淋巴细胞溶质蛋白2(包含SH2域的76kDa白细胞蛋白) LIM和衰老细胞抗原-样域2 麻木蛋白X的配体 酸酰基转移酶ε

-2.40 -15.01 -12.57 -3.14 -12.89 -2.14 -26.53 -1.89 -1.97 -2.69 -2.39 -10.83 -2.20 -2.04 -2.02 -2.97 -2.16 -2.29 -2.20 -17.46 -16.21 -2.09 -59.05 -2.66 -21.22 -50.59 -33.67 -21.83 -2.51 -15.58 -10.52 -6.89 -16.69 -2.01 -2.41 -2.12 -15.94 -54.82 -14.89 -17.54 -2.08 -17.10 -2.34 -2.02 -1.89 -2.68 -16.33 LPAAT-E LRP1B LTB MAD2L1 MAP6 MAPK13 MAPT MAZ MCM6 MCM7 MEA MGAT4A MIS12 MPZL1 MRPL1 MRPL11 MRPL13 MRPL23 MRPL39 MSLN MT1A MT2A MTIF2 MXD3 MYBPC2 MYO15A NCF1 NCF2 NDUFA6 NDUFB3 NDUFV3 NEB NFATC1 NFKBIB NMI NMU NR0B1 NR2E1 NR2E3 NRG1 NT5C3 NT5E NTHL1 NUCKS NUDT1 NUP107 OLR1 NM_018361 NM_018557 NM_002341 NM_002358 AB058781 NM_002754 BM714794 NM_002383 NM_005915 NM_005916 NM_014623 AI364966 NM_024039 NM_003953 NM_020236 NM_016050 NM_014078 NM_021134 NM_017446 NM_005823 BM684446 BG505162 AI064964 BQ053282 NM_004533 NM_016239 BI021745 NM_000433 NM_002490 NM_002491 AW139027 AI079911 NM_006162 NM_002503 NM_004688 NM_006681 NM_000475 NM_003269 NM_016346 NM013956 AA188573 BM994339 NM_002528 NM_022731 NM_002452 NM_020401 CD678960 酸酰基转移酶ε 低密度脂蛋白相关蛋白1B(在肿瘤中缺失) 淋巴毒素β(TNF超家族，成员3) MAD2有丝分裂停止缺陷-样1(酵母) 微管相关蛋白6 有丝分裂原激活蛋白激酶13 微管相关蛋白tau MYC-相关的锌指蛋白(嘌呤结合的转录因子) MCM6微染色体维持缺陷6(MI S5同系物，粟米酵 母)(酿酒酵母) MCM7微染色体维持缺乏7(酿酒酵母) 雄性增强抗原 manno syl(α-1，3-)-糖蛋白β-1，4-N-乙酰葡糖氨基 转移酶，同工酶A 酵母Mi s12的同系物 髓磷脂蛋白0-样1 线粒体的核糖体蛋白L1 线粒体的核糖体蛋白L11 线粒体的核糖体蛋白L13 线粒体的核糖体蛋白L23 线粒体的核糖体蛋白L39 me sothel in 金属硫蛋白1A(功能性) 金属硫蛋白2A I因子(组分) MAX二聚蛋白3 肌球蛋白结合蛋白C，快速型 肌球蛋白XVA 中性粒细胞溶质因子1(47kDa，慢性肉芽肿病，常染 色体1) 中性粒细胞溶质因子2(65kDa，慢性肉芽肿病，常染 色体2) NADH脱氢酶(泛醌)1α亚复合物，6，14kDa NADH脱氢酶(泛醌)1β亚复合物，3，12kDa NADH脱氢酶(泛醌)fiavoprotein3，10kDa 伴肌动蛋白 激活的T-细胞的核因子，细胞质，神经钙蛋白依赖性1 在B-细胞抑制剂中的κ轻多肽基因增强子的核因子，β N-myc(和STAT)相互作用剂 神经介素U 核受体亚族0，B组，成员1 核受体亚族2，E组，成员1 核受体亚族2，E组，成员3 神经调节蛋白1 5′-核苷酸酶，细胞溶质III 5′-核苷酸酶，外(CD73) 第n个核酸内切酶I I I-样1(大肠杆菌) 核普遍存在的酪蛋白激酶和细胞周期蛋白依赖性激酶 底物 nudi x(核苷二磷酸连接的部分X)-型基序 核孔蛋白107kDa 赖氨酸氧化酶

-2.68 -12.85 -2.25 -2.03 -19.65 -16.89 -2.21 -16.85 -17.53 -10.55 -2.17 -2.95 -3.73 -2.39 -8.04 -15.36 -1.88 -2.62 -2.04 -2.24 -2.49 -26.54 -36.93 -3.78 -3.47 -25.92 -22.21 -18.91 -2.43 -6.00 -2.31 -2.28 -2.21 -2.04 -84.42 -8.81 -7.09 -2.02 -2.31 -2.29 -11.95 -2.54 -2.22 -39.17 -68.37 -2.38 -2.43 -2.14 -2.00 -14.52 -16.54 OXCT PAFAH1B1 PAFAH1B2 PAICS PCDH7 PCSK2 PDCD5 PDE11A PECAM1 PFKL PHAX PHF5A PIR51 PLK4 PLXNA3 PMPCB POIA POLE2 POLE4 POLR3K PPIH PPP1R9A PPP2R5A PRDM1 PRIM1 PRLR PRSS21 PTPRG PTTG1 PXN RACGAP1 RAD18 RAD51 RAD54B RB1 RBBP9 RCOR1 RFC4 RNASEH2A RNF141 ROBO4 RPA3 RPC62 RPL4 RPS3 RQCD1 RYR3 SARA1 SCAMP3 SCNN1G SEMA7A NM_000436 AI674778 NM_002572 NM_006452 NM_032457 NM_002594 NM_004708 NM_016953 BG739826 AK098228 NM_032177 NM_032758 NM_006479 NM_014264 BF926082 AK090763 NM_016937 NM_002692 NM_019896 NM_016310 NM_006347 AB033048 AA496141 NM_001198 NM_000946 AA708864 NM_006799 C047734 NM_004219 AW969600 NM_013277 NM_020165 NM_002875 NM_012415 BI769614 NM_006606 NM015156 NM_002916 NM_006397 NM_016422 NM_019055 NM_002947 NM_006468 BF308998 BM693455 NMJ305444 BU533957 NM_020150 NM_005698 NM_001039 NM_003612 3-酮酸CoA转移酶1 血小板活化因子乙酰水解酶，异型Ib，α亚单元45kDa 血小板活化因子乙酰水解酶，异型Ib，β亚单元30kDa 磷酸核糖氨基咪唑羧化酶，磷酸核糖氨基咪唑琥珀氨甲 酰合成酶 BH-protocadher in(脑-心) 前蛋白转化酶、枯草杆菌蛋白酶/kexin2型 程序性细胞死亡5 磷酸二酯酶11A 血小板/内皮细胞粘附分子(CD31抗原) 果糖磷酸激酶，肝 RNA输出的小鼠磷酸化衔接体的可能的直向同源物 PHD指蛋白5A RAD51-相互作用蛋白 polo-样激酶4(果蝇) plexin A3 肽酶(线粒体加工)β 聚合酶(DNA引导)，α 聚合酶(DNA引导)，ε2(p59亚单元) 聚合酶(DNA引导)，ε4(p12亚单元) 聚合酶(RNA引导)I I I(DNA引导)多肽K，12.3kD 肽基脯氨酰异构酶H(cyclophilin H) 蛋白磷酸酶1，调节(抑制剂)亚单元9A 蛋白磷酸酶2，调节亚单元B(B56)，α异构体 包含PR域的1，具有ZNF域 引发酶，多肽1，49kDa 促乳素受体 蛋白酶，丝氨酸，21(te sti sin) 蛋白酪氨酸磷酸酶，受体型，G 脑垂体瘤-转化1 柱蛋白 Rac GTP酶激活蛋白1 RAD18同系物(酿酒酵母) RAD51同系物(RecA同系物，大肠杆菌)(酿酒酵母) RAD54同系物B(酿酒酵母) 视网膜母细胞瘤1(包括骨肉瘤) 视网膜母细胞瘤结合蛋白9 REST辅阻遏物1 复制因子C(激活剂1)4，37kDa 核糖核酸酶H2，大的亚单元 环指蛋白141 roundabout同系物4，magi c roundabout(果蝇) 复制蛋白A3，14kDa 聚合酶(RNA)II I(DNA引导)多肽C(62kD) 核糖蛋白L4 核糖蛋白S3 需要细胞分化1同系物(粟米酵母)的RCD1 斯里兰卡肉桂碱受体3 SAR1a基因同系物1(酿酒酵母) 分泌载体膜蛋白3 钠通道，非电压门控1，γ sema域，免疫球蛋白域(Ig)，和GPI膜固着点，(信

-2.84 -7.34 -11.76 -2.93 -2.78 -11.21 -11.51 -18.72 -2.23 -19.44 -27.75 -15.57 -8.20 -17.45 -2.31 -14.75 -6.57 -16.71 -13.79 -2.20 -1.92 -2.41 -10.91 -293.18 -2.33 -2.23 -1481.77 -12.26 -2.04 -9.82 -11.00 -20.30 -3.41 -2.23 -2.02 -2.34 -2.21 -2.64 -36.20 -13.71 -2.55 -8.14 -2.11 -2.24 -2.13 -12.47 SFRS3 SHOX SIAT7A SIN3B SIVA SLC1A2 SLC22A13 SLC27A6 SLC35B1 SLC6A4 SLC7A13 SLC9A3 SLC9A7 SNAI2 SNRPD3 SPO11 SPOCK SPTB SRY SSSCA1 STK6 STMN1 SULT1E1 SULT4A1 SUV39H2 SYNCRIP SYNE1 TAC3 TADA2L TCP11 TFAP2A TFEC THOC4 T1MM10 TIMM23 TK1 TMEM4 TMPO TNP1 TPSD1 TRA2A TRH TSFM TTK TXNDC TYRP1 NMJ303017 NM_000451 NM_018414 AW051366 NM_006427 NM_004171 NM_004256 NM_014031 NM_005827 NM_001045 NMJ38817 NM_004174 AA279477 NM_003068 NM_004175 NM_012444 NM_004598 NM_000347 NM_003140 NM_006396 NM_003600 NM_005563 NM_005420 NM_014351 NM_024670 NM_006372 NM033071 NM_013251 NM_001488 NM_018679 NM_003220 NM_012252 NM_005782 NM_012456 NM_006327 NM_003258 NM_014255 H57815 NM_003284 NM_012217 BF093914 NM_007117 AW603708 NM_003318 NM_030755 NM_000550 号素)7A 剪接因子，富含精氨酸/丝氨酸3 身材矮小症同源框 唾液酸转移酶7((α-N-乙酰神经氨酰基-2，3-β- 半乳糖基-1，3)-N-乙酰氨基半乳糖苷α-2，6-唾液 酸转移酶)A SIN3同系物B，转录调节子(酵母) CD27-结合(Siva)蛋白 溶质载体家族1(神经胶质高亲和力谷氨酸载体)，成 员2 溶质载体家族22(有机阳离子载体)，成员13 溶质载体家族27(脂肪酸载体)，成员6 溶质载体家族35，成员B1 溶质载体家族6(神经递质载体，5-羟色胺)，成员4 溶质载体家族7，(阳离子氨基酸载体，y+系统)，成 员13 溶质载体家族9(钠/氢交换剂)，异构体3 溶质载体家族9(钠/氢交换剂)，异构体7 蜗牛同系物2(果蝇) 核内小分子核糖核蛋白D3多肽18kDa 与DSB-样共价结合的SPO11减数分裂蛋白(酿酒酵母) spa rc/骨结合素，cwcv和kazal-样域蛋白聚糖 (te stican) 血影蛋白，β，红细胞(包括球形红细胞症，临床I型) 性别决定区Y 舍格伦综合征/硬皮症自身抗原1 丝氨酸/苏氨酸激酶6 stathmin1/癌蛋白18 磺基转移酶家族1E，雌激素优选，成员1 磺基转移酶家族4A，成员1 花斑3-9同系物2(果蝇)的抑制剂 突触结合蛋白结合，细胞质RNA相互作用蛋白 包含血影蛋白重复，核被膜1 速激肽3(神经介素K，神经激肽β) 转录衔接子2(ADA2同系物，酵母)-样 t-复合物11(小鼠) 转录因子AP-2α(激活增强子结合蛋白2α) 转录因子EC THO复合物4 线粒体内膜10转位酶同系物(酵母) 线粒体内膜23转位酶同系物(酵母) 胸苷激酶1，可溶 跨膜蛋白4 胸腺生成素 转换蛋白1(在组蛋白向精蛋白转化中) 纤维蛋白溶酶δ1 转变子-2α 促甲状腺激素释放激素 T s翻译延伸因子，线粒体 TTK蛋白激酶 包含硫氧还蛋白域 酪氨酸酶相关蛋白1

-1.99 -10.12 -1.92 -66.26 -12.46 -2.22 -2.79 -2.07 -30.18 -2.66 -2.03 -31.24 -2.17 -2.31 U2AF1 UBL4 UMPK USP16 VAPA VDAC3 VRK1 WWOX ZNF145 ZNF258 ZNF265 ZNF282 ZNRD1 ZW10 NM_006758 A873769 NMJD12474 NM_006447 AI671488 NM_005662 NM_003384 NM_016373 BU607554 NM_007167 NM_005455 NM_003575 NM014596 NM004724 U2(RNU2)小核RNA辅助因子1 泛肽-样4 尿苷单磷酸激酶 泛肽特异性蛋白酶16 VAMP(囊泡相关膜蛋白)-相关蛋白A，33kDa 电压依赖型阴离子通道 牛痘相关激酶1 包含WW域的氧化还原酶 锌指蛋白145(Kruppel-样，在前髓细胞性白血病中 表达) 锌指蛋白258 锌指蛋白265 锌指蛋白282 包含锌带状域，1 ZW10同系物，着丝粒/动粒蛋白(果蝇)

分析

回顾在本文中基因本体的列表，表明了Syma dexTM对于细胞聚集 和增殖机制和对与侵害性细胞生长有关的过程具有极大的多效性作 用，这些过程是与开头所述的自身免疫性疾病有关的炎症病因的标 志。

例如，对表3中证据的更详细分析表明，相当一部分下调的基 因与细胞表面信号传导、活动、迁移和粘附的机制有关，其允许炎 性细胞穿过血管屏障，渗透到实质层中。本领域技术人员将会理解 这些本体关系在公共领域数据库内的文献中有更详细描述，可以从 那里摘录下面的信息。这些数据库包括DAVID(Database for Annotation，Visualization and Integrated Discovery，来自 National Institute of Allergy and Infectious Disease，http: //appsl.niaid.nih.gov/david/；在相同站点的姐妹程序 EASE(Expression Analysis Systematic Explorer)；和GeneCards bioinformatics project(http //genome-www.stanford.edu/genecards/index.shtml)。

例如，在下面讨论的差别基因表达实验中，下调的基因ACTA2、 ACVRL1、BGN、DSC3、ENG、FBAN1、FBLN1、HMMR、IGTA2B、ITGA2B、 ITGA9、ITGAE、LIMS2、LTB、MAPT、MSLN、NMI、PCDH7、PECAM1、 PRDM1、SEMA7A、VAPA都通过直接调节粘附因子例如整联蛋白和钙 粘素，或通过破坏促进表达的生长因子信号和进一步促进粘附过程 的辅助蛋白装配而参与到这些过程的调节中。在本文中特别重要的 是SYNE1血影蛋白重复部分的显著的1500倍下调。由该基因编码的 nesprin家族的辅助蛋白维持核的组织和细胞骨架的结构完整性，预 计SYNE1的下调将会削弱炎症细胞在侵袭活动期间维持它们的形状 和几何学的能力。因此，SymadexTM对于维持细胞构象的机制的差别 基因表达的这种作用将会使这些细胞在运输期间崩溃，该结果也与 Syma dex的治疗作用模式的组织病理学相符合。

钙离子和高能磷酸产生的必要过程相继受到影响，这可以通过 ATP1B4、ATP2B3、CAMK1、EGFL6、GPR24、IBSP、NUDT1、RAD54B、 RYR3和SLC9A7的下调得到证实。细胞增殖又通过B I RC5、CCL23、 CCNB2、CDC2、CDC25C、CKS1B、CREM、EGFL6、FCAR、IL13RA2、IL1RAP、 IL1RL1，MAPK13、NRG1、PTPRG、STK6及其他相关基因介导的细胞周 期阻断过程而被阻止。通过旁分泌和自分泌控制的神经调节在系统 的下调中也是明显的，该系统进一步对神经炎症侵害产生应答，包 括与损害有关的神经递质载体、失控的谷氨酸信号传导。在后一类 中下调的基因的例子包括ADCYAP1、GABRA3、GGH、KCNQ3、SLC1A2(及 其SLC家族溶质载体同系物)和SULT4A1。后一种基因显示了近300 倍的下调。它是与乙酰肝素硫酸化有关的基因。硫酸化的乙酰肝素 构成了“分子链”，允许整联蛋白结合到层粘连蛋白上，因此提供 了允许侵害性炎症细胞通过基膜迁移到CNS实质中的连接。预计该 过程的下调可以将炎症细胞保持在血管套的范围内，如在实施例2-8 中所示的对SymadexTM治疗作用的组织病理学评价中所观察到的那 样。

受SymadexTM影响的这些基因的整合功能与在微阵列试验中观测 到的差异表达谱相符合，例如ArnettHA等人，″Functional genomic analysis of remyelination reveals importance of inflammation in oligodendrocyte regeneration″，J.Neuroscience23(30)： 9824-9832，2003；Lindberg RLP等人，″Multiplesclerosis as a generalized CNS disease-comparative microarray analysis of normal appearing white matter and lesions in secondary progressive MS″，J.Neuroimmunology152：154-167，2004；和 Tajouri L.等人，″Quantitative and qualitative changes in gene expression patterns characterize the activity of plaques in Multiplesclerosis″，Mol.Brain Res.119：170-183，2003的工 作。这些研究以类似于本文所述的基因描述的方式列出了代表性自 身免疫性炎症损伤的特性及随后的恢复，特别是在多发性硬化症作 为主要情况的自身免疫性脱髓鞘模型的内容中。因此，SymadexTM及 其同源物用于治疗具有类似病因的多发性硬化症和自身免疫性疾病 的观点，在化合物的分子药理学方面是可以证明的。

尽管参考优选的实施方案对本发明进行了具体的表示和表述， 但本领域技术人员将会理解，可以在不脱离包含在所附权利要求书 内的本发明的范围的条件下，在形式和细节上作出各种改变。

相关申请

本申请要求2005年1月28日提交的美国临时专利申请 60/647,980和2006年1月9日提交的美国临时专利申请60/757,736 的优先权。通过参考将上述申请的全部教导并入本文。

序列表

<110>艾克散瑟斯药物公司

     A.M.阿贾米

     M.A.博斯

     J.佩特森

<120>用于治疗自身免疫病和脱髓鞘疾病的化合物

<130>3287.1006-004

<140>PCT/US2006/002952

<141>2006-01-27

<150>60/647,980

<151>2005-01-28

<150>60/757,736

<151>2006-01-09

<160>5

<170>FastSEQ for Windows Version4.0

<210>1

<211>20

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>对应于人T细胞受体Vbeta6CDR2的位置39-58的多肽

<400>1

Leu Gly Gln Gly Pro Glu Phe Leu Thr Tyr Phe Gln Asn Glu Ala Gln

 1               5                  10                  15

Leu Glu Lys Ser

            20

<210>2

<211>21

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>对应于人髓鞘碱性蛋白的位置75-95的免疫原性多肽

<400>2

Lys Ser His Gly Arg Thr Gln Asp Glu Asn Pro Val Val His Phe Phe

 1               5                  10                  15

Lys Asn Ile Val Thr

            20

<210>3

<211>17

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>替利莫肽，对应于人髓鞘碱性蛋白的位置83-99的免疫原性多肽

<400>3

Ala Lys Pro Val Val His Leu Phe Ala Asp Ile Val Thr Pro Arg Thr

 1               5                  10                  15

Pro

<210>4

<211>17

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>来源于人髓鞘碱性蛋白的免疫原性肽

<400>4

Asp Glu Asp Pro Val Val His Phe Phe Lys Asp Ile Val Thr Pro Arg

 1               5                  10                  15

Thr

<210>5

<211>39

<212>PRT

<213>人

<220>

<221>肽

<222>(0)...(0)

<223>人ACTH

<400>5

Ser Tyr Ser Met Glu His Phe Arg Trp Gly Lys Pro Val Gly Lys Lys

 1               5                  10                  15

Arg Arg Pro Val Lys Val Tyr Pro Asp Gly Ala Glu Asp Glu Leu Ala

            20                  25                  30

Glu Ala Phe Pro Leu Glu Phe

        35