交叉参考

本申请要求2003年7月29日提交的美国专利申请No.10/630,590、2003年7月 25日提交的美国临时申请No.60/490,094、2003年2月27日提交的美国临时申请 No.60/450,464以及2002年9月9日提交的美国临时申请No.60/409,298的权利。

                               发明领域

本发明涉及诸如在某些人乳头状瘤病毒(HPV)感染中所观察到的来源于致病生物 的生物学标记的检测以及运用这样的诊断法以鉴别受到感染并可能导致癌变或其他 机能紊乱的样本。所述发明也公开了作为一种肿瘤诊断手段用于在临床样本中检测 致癌的HPV E6蛋白的组合物、方法和试剂盒。

                               发明背景

宫颈癌是妇女中第二位最常见的肿瘤，宫颈癌与目前99.7％的高危险性人乳头 状瘤病毒感染有关。现在，每年在美国妇女中诊断出12,000个侵入性宫颈癌新病例， 这导致每年5,000人死亡。而且，全球范围内每年约有400,000例的宫颈癌并有近 200,000个死亡病例。人乳头状瘤病毒(HPV)是全球性传播疾病的最常见的原因之 一。大体上，50-75％的性活跃的男性和女性在其生命的某一时点会招致生殖器HPV 感染。仅在美国估计每年有5百50万人感染HPV，目前至少有2千万的感染者。100 多个不同的HPV纯病毒株按照其与子宫颈癌或与良性子宫颈损伤或子宫颈发育异 常的关系大致分成了高危险性和低危险性亚类。

大量证据指出HPV是宫颈癌的病原物质。1980年的多项研究报道了在子宫颈发 育异常、肿瘤以及源自宫颈癌的细胞系中存在HPV变种。进一步的研究表明致癌 的HPV 18基因组的E6-E7区域在宫颈癌细胞中被选择性保留，这说明HPV感染可 能是引发癌变的原因，而且维持细胞永生化或癌变状态需要E6-E7区域的持续表达。 第二年，Sedman等人证实了在培养物中，来自HPV 16的E6-E7基因足以引起人角 质化细胞的永生化。Barbosa等人证实，虽然来自高危险性HPV的E6-E7基因能够 转化细胞系，来自诸如HPV 6和HPV 11的低危险性或非致癌变种的E6-E7区域不 能转化人角质化细胞。最近，Pillai等人对623例处于肿瘤发展不同阶段的子宫颈组 织样本通过原位杂交检测了HPV 16和18的感染并通过免疫细胞化学检测了E6蛋 白的表达，发现了组织学异常与HPV感染之间的显著相关性。

现行的治疗策略专注于实际的子宫颈发育异常而不是更深层次的HPV感染。医 生每年对子宫颈发育异常的妇女进行筛查，并采用包括冷冻手术、激光切除和切除 手术在内的表面切除技术进行治疗。随着疾病的发展，治疗手段变得更具侵略性， 这包括了部分或完全子宫切除、放射治疗或化学治疗。对致癌的HPV感染的早期 准确诊断以及针对引发癌变的HPV感染的治疗，通过疾病进程的早期干预以防止 宫颈癌的发展，存在重大的需求。目前已有描述的人乳头状瘤病毒与局限于皮肤上 皮层、或口腔、咽喉、呼吸道以及最重要的与肛门和生殖器黏膜损害相关。包括HPV 6和11在内的特殊的人乳头状瘤病毒类型经常引起良性的黏膜损伤，而其他诸如 HPV 16和18的病毒类型以及许多其他病毒株主要在高度损害和肿瘤中被发现。感 染黏膜表面的个别类型的人乳头状瘤病毒(HPV)被认为可能是引发子宫颈、肛门、 阴茎、咽喉和口腔癌变、偶然引发甲周瘤以及良性的肛门与生殖器疣的因素。采用 对特殊HPV类型进行鉴定的方法来鉴别具有恶化风险的癌变前损伤的患者。虽然 在一些受人乳头状瘤病毒感染的病例中存在可见的肛门和生殖器损伤，大部分受到 HPV生殖道感染的个体不具有临床明显病征，但是可以采用子宫颈涂片中存在的细 胞形态特征分析来检测HPV感染。巴氏试验(Papanicolaou test)是一种有效的筛查手 段，但是由于存在假阳性和假阴性测试结果，这些试验遗漏了高比例的HPV感染 人群。此外，由于对检测结果的解读需要训练有素的病理学家，这样的试验不适于 全球范围的检测。

包括血清学化验、ELISA夹心检测和细胞培养在内的常规病毒检测方法没有商 用现货并/或不适于诊断和跟踪HPV感染。最近，可以采用几种以PCR(聚合酶链式 反应)为基础的HPV感染的检测方法。虽然所述检测方法有助于区分致癌性感染和 非致癌性感染，这些检测的实行是相当昂贵的，而且需要执行PCR操作的训练有素 的技术人员和/或光度计检测。此外，PCR具有天然的假阳性率，可能要借助于进 一步的检测和不必要的操作。由于已经表明，HPV的致癌性是建立在蛋白基础上的， HPV DNA或RNA的早期检测可能导致身体免疫系统可以天然解决的不必要的医学 步骤。

采用传统方法检测人样本(例如肿瘤样本)中致癌HPV存在许多困难。例如，用 抗体检测E6蛋白是困难的，因为人细胞中生成的E6含多种结构改变(如二硫键和 磷酸基团)，使得在细菌系统中生产的野生型E6蛋白或化学合成的E6肽不能识别 人细胞中的E6蛋白。而且，由于致癌E6蛋白没有共有的将其与非致癌E6蛋白相 区别的抗原表位，单一的抗体不能用于所有致癌E6HPV毒株的检测。

疾病的检测和诊断是治疗疾病的先决条件。疾病的许多标记和特征已被鉴定并 可用于疾病的诊断。受侵袭的细胞状态的改变先于许多疾病并且是许多疾病的特 征。改变可以包括受感染细胞中病原体基因或蛋白的表达、受侵袭细胞中基因或蛋 白表达谱的改变、以及细胞形态的改变。通过准确评估这些改变可以帮助检测、诊 断和监测疾病。便宜、快速、早期准确的病原体检测可以为治疗和预防结果介于身 体不适到死亡之间的疾病提供可能。

以下是感兴趣的重要出版物：Munger(2002)Front.Biosci.7：641-9；Glaunsinger (2000)Oncogene 19：5270-80；Gardiol(1999)Oncogene 18：5487-96；Pim(1999)Oncogene 18：7403-8；Meschede(1998)J.Clin.Microbiol.36：475-80；Kiyono(1997)Proc.Natl.Acad. Sci.94：11612-6；以及Lee(1997)Proc.Natl.Acad.Sci.94：6670-5。此外，下列是感兴 趣的专利和专利申请：Bleul，6,322,794；Cole，6,344,314；Schoolnik，5,415,995； Bleul，5753233；Cole，5,876,723；Cole，5,648,459；Orth，6,391,539；Orth，5,665, 535；Schoolnik，4,777,239。

                               发明概述

这里提供了用于检测在多种细胞类型中(例如子宫颈、肛门、阴茎和咽喉细胞中) 可能导致致癌细胞转化或生物学异常的病原体蛋白的方法和组合物。这些方法和组 合物可以用于检测包括但不限于导致诸如宫颈癌、阴茎癌、肛门癌和咽喉癌在内的 病原体。更具体地说，描述了用于检测临床样本中致癌的HPV E6的方法、组合物 和检测试剂盒。

所述发明的一个优点是，与抗体不同，许多PDZ结构域蛋白结合大部分或所有 来自人乳状瘤病毒的HPV E6，由此可用于诊断宫颈癌和其它癌症。

                               附图说明

图1是说明PDZ蛋白能特异性识别来自人乳状瘤病毒的致癌E6蛋白的柱状图。 采用ELISA检测方法证实PDZ蛋白(TIP-1)能特异性识别来自致癌病毒株(HPV 18) 的全长E6蛋白，但与非致癌病毒株(HPV 11)没有表现出任何反应性。系列1和系 列2代表独立实验。E6 ab表示检测采用抗HPV18 E6抗体而不是PDZ蛋白。

图2是说明PDZ与HPV 18 E6 PLs结合的温度依赖性的线形图。本图采用改进 的ELISA检测方法测定TIP-1的PDZ结构域或MAGI-1(结构域2)与对应于来自HPV 18的E6蛋白的C-末端20个氨基酸的肽段的结合。图例中的数字代表独立实验。- RT表示结合实验在室温下进行。没有-RT标志的数据系列是在4℃下进行的结合实 验。

图3是说明抗HPV 18 E6抗体识别GST-HPV 18 E6融合蛋白的线形图。检测了 用HPV 18 E6蛋白免疫的Balb/c小鼠第28天的血清与GST-HPV18E6蛋白或单独 GST的反应性。

图4.(A-D)是说明细胞溶解物对来自HPV 16的重组E6蛋白与不同的PDZ结构 域结合的影响的4个线形图。

图5.(A-B)是表明多种PDZ结构域能与细胞中致癌E6蛋白结合并共沉淀的放射 自显影图像。

图6是证明在SiHa宫颈癌细胞系中检测到内源性HPV16 E6蛋白的免疫印迹结 果的放射自显影图像。

图7是放射自显影图像说明，通过免疫印迹能在CasKi和SiHa宫颈癌细胞系中 检测到HPV16 E6蛋白，在存在蛋白酶体抑制剂的条件下进行细胞溶解处理，检测 结果得到了加强。

图8是显示SiHa和CasKi子宫颈细胞系中HPV16 E6蛋白的ELISA检测的线形 图。

图9是细胞溶解物中HPV16 E6蛋白的点杂交检测的放射自显影图像。

图10是SiHa和CasKi子宫颈细胞系的细胞溶解物中内源性HPV16 E6蛋白的 点杂交检测的放射自显影图像。

图11是说明能够在携带HPV16的宫颈肿瘤中检测到E6蛋白的免疫印迹的放射 自显影图像。

                               发明详述

I. 定义

这里所使用的“标记物”或“生物学标记”是指生物样本中能够被测量或检测的实体 物。标记的例子包括核酸、蛋白或存在于生物样本中的化学物质。存在于人源的生 物样本中的病毒或病原体的蛋白或核酸是标记物的一个例子。

这里所使用的术语“分离的”是指多核苷酸、多肽、抗体或宿主细胞处于与其天 然存在状态不同的环境中。分离的多核苷酸、多肽、抗体或宿主细胞通常是充分纯 化了的。这里所使用的术语“充分纯化”是指将化合物(例如多核苷酸、多肽或抗体) 从其自然环境中移出，至少60％、优选的是75％、最优选的是90％与其在天然条 件下结合的其他成分分离。因而，例如在总的A+B组合物中至少含85％(重量百分 比)的A的情况下，含有A的组合物与B“充分分离”。优选的是，A构成总的组合 物A+B重量比的至少约90％，更优选的是，A构成重量比的至少约95％或甚至99 ％。

术语“生物样本”包括得自生物体的并可以用于诊断或监测的多种类型的样品。 这一术语包括血样和其他生物来源的液体样本以及固体组织样本(如活体组织切片样 本或组织培养物或源自组织培养物的细胞及其后代)。所述术语包括在其获得后经过 任何方式处理过的样本，例如通过试剂处理、溶解或特定组分富集等方式。所述术 语包括临床样本，也包括细胞培养物中的细胞、细胞上清液、细胞溶解物、血清、 血浆、体液和组织样本。术语“生物样本”必须将临床样本与可能的重组样本或源自 重组样本的样本加以区分。

被HPV“感染”的个体是指具有含HPV的细胞的个体。细胞内的HPV可能不表 现出任何其他的表型(即HPV感染的细胞不必定是癌细胞)。换言之，HPV感染的细 胞可以是癌前细胞(也就是除了可能与病毒感染相关的表型以外，没有表现出任何异 常表型的细胞)或癌细胞。

这里所使用的“融合蛋白”或“融合多肽”是指复合的蛋白，也就是由两条(或更多) 独立的、异源的、正常情况下没有融合在一条氨基酸序列中的多肽构成的一条邻接 的氨基酸序列。因此，一个融合蛋白可以包括含有两条完全不同的氨基酸序列或两 条相似或相同的多肽序列的单一的氨基酸序列，前提是假如未发现这些序列在自然 界中在正常情况下以所述相同的结构共存于单一的氨基酸序列中。融合蛋白通常可 以采用核酸重组方法(就是由编码本发明所述多肽的片段和编码异源蛋白的片段组成 的重组基因融合产物的转录和翻译结果)或本领域所熟知的化学合成方法制备。

这里所使用的“融合蛋白构建物”是指编码融合蛋白的多核苷酸。

“致癌HPV病毒株”是由国家癌症研究所(NCI，2001)确定的已知引起宫颈癌的 HPV病毒株。“致癌E6蛋白”是指上述致癌HPV病毒株所编码的E6蛋白。表3列 举了致癌病毒株的例子。这里没有特意列举的本领域所知的致癌HPV病毒株可以 在国家生物技术信息中心(National Center for biotechnology Information)(NCBI)的万 维网网站上获得。

“致癌E6蛋白结合伴侣”可以是与E6蛋白特异结合的任何分子。适宜的致癌E6 蛋白结合伴侣包括PDZ结构域(如下所述)、抗致癌E6蛋白的抗体、其他识别致癌 E6蛋白的蛋白(如p53、E6-AP或E6-BP)、DNA(即十字形DNA)以及其他如适体或 来源于噬菌体展示的单链抗体等的伴侣。在一些实施方案中，希望检测1个以上的 致癌E6蛋白(例如，来自HPV病毒株16、18和33的所有致癌E6蛋白或E6蛋白)， 由此，致癌E6蛋白结合伴侣可以是与这些蛋白结合的抗体或各自与一种不同蛋白 结合的抗体的混合物。如本领域所知的，这样的结合伴侣可以进行标记以便于其检 测。通常，结合伴侣与E6结合的亲和力是10-5M或更高，如10-6M或更高、10-7M 或更高、10-8M或更高(例如10-9M、10-10、10-11等)。

这里所使用的术语“PDZ结构域”是指小于约90个氨基酸(即约80-90、约70-80、 约60-70或约50-60个氨基酸)的蛋白序列(也就是模块式蛋白结构域)，其特征是与 大脑突触蛋白PSD-95、果蝇隔膜接头蛋白Discs-Large(DLG)以及上皮紧密接头蛋白 ZO1(ZO1)同源。PDZ结构域也称为Discs-Large同源重复序列(DHRs)和GLGF重复 序列。PDZ结构域通常可能保持一个核心共同序列(Doyle D.A.，1996，Cell 85：1067- 76)。

在包括鸟苷酸激酶同源体的MAGUK家族成员、多种蛋白磷酸酶和激酶、神经 元一氧化氮合成酶、肿瘤抑制蛋白以及统称为肌养结合蛋白的多种肌养蛋白相关蛋 白在内的多种膜相关蛋白中发现了PDZ结构域。

表2和实施例4中展示了示范性的含PDZ结构域的蛋白以及PDZ结构域序列。 术语“PDZ结构域”也包括所述序列的变体(如天然存在的变体，多态性变体，保守置 换变体等)和来自其他物种(如小鼠、大鼠)的结构域。典型的PDZ结构域与美国专利 申请09/724553中所展示的充分相同，例如，在最大对应度的比较和对齐排列时， 具有至少约70％、至少约80％或至少约90％氨基酸残基相同性。在本领域中需要 认识到，可以对PDZ结构域实行突变以产生能增强或减弱结合并改变特异性的氨基 酸改变，但它们保持为PDZ结构域(Schneider等，1998，Nat.Biotech.17：170-5)。除 了另有说明以外，提及具体的PDZ结构域(例如MAGI-1结构域2)意味着包括所述 具体PDZ结构域及其HPV E6结合变体。换言之，如果涉及具体的PDZ结构域， 则也同样涉及如下所述的这一结合HPV致癌E6蛋白PDZ结构域的变体。在这一 点上需要指出蛋白中PDZ结构域的编号可以发生改变。例如，如这里所涉及的 MAGI-1结构域2，在其他文献中可能作为MAGI-1结构域1被提及。同样的，当 本申请中提及一个特定的蛋白PDZ结构域时，这里所提及的应当理解为如这里所述 的、尤其是序列列表中的该结构域的序列。插入在权利要求书之前的表9显示了适 当情况下多个结构域在序列列表中的序列和名称与Genbank登录号之间的关系。

这里所使用的术语“PDZ蛋白”是指包含PDZ结构域的天然蛋白。示范性的PDZ 蛋白包括CASK、MPP1、DLG1、DLG2、PSD95、NeDLG、TIP-33、SYNla、TIP- 43、LDP、LIM、LIMK1、LIMK2、MPP2、NOS1、AF6、PTN-4、prIL16、41.8kD、 KIAA0559、RGS12、KIAA0316、DVL1、TIP-40、TIAM1、MINT1、MAGI-1、MAGI-2、 MAGI-3、KIAA0303、CBP、MINT3、TIP-2、KIAA0561和TIP-1。

这里所用的术语“PDZ结构域多肽”是指含有PDZ结构域的多肽，如包含PDZ 结构域序列的融合蛋白、天然存在的PDZ蛋白或分离的PDZ结构域肽段。因此，PDZ 结构域多肽的长度可以是约60个氨基酸或更多、约70个氨基酸或更多、约80个 氨基酸或更多、约90个氨基酸或更多、约100个氨基酸或更多、约200个氨基酸 或更多、约300个氨基酸或更多、约500个氨基酸或更多、约800个氨基酸或更多、 约1000个氨基酸或更多、通常达到2000个氨基酸或更多。PDZ结构域肽段通常不 大于约100个氨基酸(如50-60个氨基酸、60-70个氨基酸、80-90个氨基酸或90-100 个氨基酸)并编码一个PDZ结构域。

这里所使用的术语“PL蛋白”或“PDZ配体蛋白”是指与PDZ结构域形成分子复合 物的天然存在的蛋白，或是指当其C末端与全长蛋白分开表达时(例如，象4-25个 残基的肽段(如8、10、12、14或16个残基))形成这样的分子复合物的蛋白。所述 分子复合物可以用“A检测法”或“G检测法”在体外或体内进行观测。表3和4中列 举的示范性的PL蛋白经证实能结合具体PDZ蛋白。所述定义不包括抗PDZ抗体 及其他类似物。

这里所使用的“PL序列”是指PL蛋白C末端的氨基酸序列(例如，C末端2、3、 4、5、6、7、8、9、10、12、14、16、20或25个残基)(“C末端PL序列”)或指已知 结合PDZ结构域的内部序列(“内部PL序列”)。

这里所使用的“PL肽“是指具有来自或基于PL蛋白C末端序列的序列的肽段。 表3中列举了示范性的PL肽(生物素化的)。

这里所使用的“PL探测分子”是能特异性识别并结合PL序列的蛋白。

这里所使用的“PL融合蛋白”是含有将PL序列作为一个结构域的融合蛋白(通常 作为所述融合蛋白C末端结构域)。tat-PL序列融合是PL融合蛋白的一个例子。

这里所使用的“PL抑制肽序列”是指抑制PDZ结构域多肽与PL肽之间相互作用 (例如在A检测或G检测中)的PL肽氨基酸序列(以肽或PL融合蛋白的形式)。

这里所使用的“PDZ结构域编码序列”指编码PDZ结构域的多核苷酸片段。在不 同实施方案中，所述多核苷酸是单链或双链DNA和RNA。

在用于调节相互结合作用(如PDZ结构域序列与PL序列的结合)的上下文中时， 这里所使用的术语“拮抗剂”或“抑制剂”可以交替使用，指降低如PL序列(例如PL 肽)与如PDZ结构域序列(如PDZ蛋白、PDZ结构域肽)的结合的物质。

在用于调节相互结合作用(如PDZ结构域序列与PL序列的结合)的上下文中时， 这里所使用的术语“激动剂”或“增强子”可以交替使用，指增强如PL序列(例如PL 肽)与如PDZ结构域序列(如PDZ蛋白、PDZ结构域肽)的结合的物质。

这里使用的术语“类肽”、“拟肽”和“肽类似物”可以交替使用，是指具有与本发明 中的PL抑制肽或PL结合肽充分相同的结构和/或功能特征的合成的化合物。所述 的类似物可以是完全由合成的、非天然的氨基酸类似物构成，或是部分天然肽氨基 酸和部分非天然的氨基酸类似物组成的嵌合分子。所述类似物也可以包含任何数量 的天然氨基酸保守置换，只要这样的置换不足以改变所述类似物的结构和/或抑制或 结合活性。对于本发明中多肽的保守变体而言，常规实验能够确定一种类似物是否 包括在本发明范围以内，即是否其结构和/或功能发生了充分改变。因而，如果一种 模拟组合物能结合PDZ结构域和/或抑制PL-PDZ相互作用，那么该类似物包括在 本发明范围以内。

多肽模拟组合物可以包含通常选自下列三种结构基团的非天然结构组分的任意 组合：a)与天然酰胺键(“肽键”)连接不同的残基连接基团；b)替代天然氨基酸残基 的非天然残基；或c)促进二级结构模拟(即促进或稳定二级结构(如β转角、γ转角、 β折叠、α螺旋及其他构象))的残基。

一条多肽可以具备类似物的特征，如果其全部或一些残基通过与天然肽键不同 的化学方法结合。单独的拟肽残基可以通过肽键、其他化学键或偶联方法(诸如例如 戊二醛、N-羟基琥珀酰亚胺脂、双功能马来酰亚胺、N，N＝-二环己基碳二亚胺(DCC) 或N，N＝-二异丙基碳二亚胺(DIC))结合。除传统的酰胺键(“肽键”)连接外的连接基团 可以包括例如甲叉酮(如针对-C(＝O)-NH-的-C(＝O)-CH2-)、甲叉胺(CH2-NH)、乙烯、 烯烃(CH＝CH)、醚(CH2-O)、硫醚(CH2-S)、四唑(CN4-)、噻唑、糖苷、硫代酰胺或酯 (参见例如Spatola所著(1983)《氨基酸、肽与蛋白的化学与生物化学》一书第7卷 267-357页的《肽骨架修饰》章节(Chemistry and Biochemistry of Amino Acids，Peptides and Proteins，Vol.7，pp 267-357，A Peptide Backbone Modifications，Marcell Dekker， NY))。

通过包含所有或一些取代天然氨基酸残基的非天然残基，一条多肽也可以具备 类似物的特征。非天然残基在科技文献和专利文献中有详细描述；以下描述了一些 示范性的用作天然氨基酸残基类似物的非天然组合物及其指南。

芳香性氨基酸类似物可以通过用下列残基替代产生，例如D-或L-萘基丙氨酸 (naphylalanine)；D-或L-苯基甘氨酸；D-或L-2噻吩酮丙氨酸(thieneylalanine)；D-或 L-1，-2，3-，或4-芘丙氨酸(pyreneylalanine)；D-或L-3噻吩酮丙氨酸；D-或L-(2-吡 啶)-丙氨酸；D-或L-(3-吡啶)-丙氨酸；D-或L-(2-吡嗪)-丙氨酸；D-或L-(4-异丙基)- 苯基甘氨酸；D-(三氟甲基)-苯基甘氨酸；D-(三氟甲基)-苯基丙氨酸；D-p-氟苯丙氨 酸；D-或L-p-双苯基苯丙氨酸；K-或L-p-甲氧基双苯基苯丙氨酸；D-或L-2-吲哚(烷 基)丙氨酸；和D-或L-烷基丙氨酸，其中烷基可以替代为或不替代为甲基、乙基、 丙基、己基、丁基、戊基、异丙基、异丁基、2-异己基、异戊基或非酸性氨基酸。 非天然氨基酸的芳香环包括例如噻唑基、苯硫基、吡唑基、苯并咪唑基、萘基、呋 喃基、吡咯基和吡啶基芳香环。

酸性氨基酸类似物可以通过用例如在保持一个负电荷情况下非羧酸化氨基酸、 (膦酸基)丙氨酸；硫酸化苏氨酸替代产生。羧基一侧的基团(如天冬氨酰或谷氨酰)也 可以通过与诸如例如1-环己基-3(2-吗啉基-(4-乙基))碳二亚胺或1-乙基-3(4-阳离子氮 -4，4-二甲氨戊基)碳二亚胺等碳二亚胺(R＝-N-C-N-R＝)反应进行选择性修饰。天冬氨 酰基或谷氨酰基也可以通过与铵离子反应转化成天冬酰胺酸和酰胺谷氨酸残基。

碱性氨基酸类似物可以通过用例如(除了赖氨酸和精氨酸以外)氨基酸鸟氨酸、瓜 氨酸或(胍基)-乙酸或(胍基)烷基乙酸(烷基见前文定义)等替代产生。腈类衍生物(例 如含替代COOH的CN部分)可用于替代天冬酰胺酸或酰胺谷氨酸。天冬氨酸和谷 氨酸残基可以脱去氨基形成相应的天冬氨酸和谷氨酸残基。

精氨酸残基类似物可以通过精氨酰与例如一种或多种包括例如苯甲酰甲醛、2，3- 丁二酮、1，2-环己二酮或茚三酮在内的常规试剂优选地在碱性条件下反应产生。

酪氨酸残基类似物可以通过酪氨酰与例如芳香性重盐化合物或四硝基甲烷反应 产生。N-乙酰咪唑(N-acetylimidizol)和四硝基甲烷可以分别用于形成O-乙酰酪氨酰 类化合物和3-硝基衍生物。

半胱氨酸残基类似物可以通过半胱氨酰残基与例如诸如2-氯乙酸或氯乙酰胺的 α-环乙酸(haloacetates)和相应的胺反应产生，生成羧甲基或羧胺甲基衍生物。半胱 氨酸残基类似物也可以通过半胱氨酰残基与例如溴三氟丙酮、α-溴-β-(5-咪唑)丙酸； 磷酸氯乙酸、N-烷基马来酰亚胺、二硫3-硝基-2吡啶；二硫甲基2-吡啶；p-氯汞苯 甲酸(p-chloromercuribenzoate)；2-氯汞-4硝基酚；或氯-7-硝基苯并-氧杂-1、3-二唑 反应产生。

赖氨酸类似物可以通过赖氨酰与例如琥珀酸的或其他羧酸酐反应产生(氨基末端 残基可以改变)。赖氨酸及其他含α氨基的残基类似物也可以通过与诸如甲基吡啶酰 胺酯(methyl picolinimidate)、磷酸吡哆醛、吡哆醛、硼氢化氯、三硝基苯磺酸、O- 甲基异脲、2，4戊二酮等酰亚胺酯反应以及转酰胺基酶催化的与乙醛酸反应产生。

甲硫氨酸类似物可以通过与例如硫氧甲硫氨酸反应产生。脯氨酸类似物包括例 如哌啶酸、噻唑烷二酮羧酸、3-或4-羟脯胺酸、脱氢脯氨酸、3-或4-甲基脯氨酸或 3，3，-二甲基脯氨酸。组氨酸残基类似物可以通过组氨酰与例如二乙基焦碳酸酯或对 溴苯酰甲基溴反应生成。

其他类似物包括，例如通过脯氨酸和赖氨酸羟基化；丝氨酸或苏氨酸残基的羟 基磷酸化；赖氨酸、精氨酸和组氨酸的α氨基基团甲基化；N末端氨基乙酰化；主 链酰胺残基甲基化或由N-甲基氨基酸替代；或C末端羧基基团胺基化产生的类似 物。

天然多肽(例如PL多肽或PDZ多肽)的成分也可以被具有相反手性的氨基酸(或 类肽残基)所替代。因而，任何以L-构象(取决于所述化学个体的结构，也可以称为 R或S构象)存在的天然氨基酸可以用相同化学结构类型但相反手性(通常称为D-型 氨基酸，不过另外也可以称为R-或S-型)的氨基酸或类肽替代。

本发明中的类似物还可以包括含结构类似残基，尤其是促进或模拟诸如β转角、 β折叠、α螺旋结构、γ转角及其他类似结构的二级结构的组合物。例如，用D型氨 基酸、N-α-甲基氨基酸、C-α-甲基氨基酸或脱氢氨基酸替代肽内的天然氨基酸残基， 可以促进或稳定β转角、β折叠、α螺旋结构、γ转角等构形。如在Nagai(1985)Tet.Lett. 26：647-650；Feigl(1986)J.Amer.Chem.Soc.108：181-182；Kahn(1988)J.Amer.Chem. Soc.110：1638-1639；Kemp(1988)Tet.Lett.29：5057-5060；Kahn(1988)J.Molec. Recognition 1：75-79等文献中已对β转角类似结构进行了描述。β折叠类似结构在例 如Smith(1992)J.Amer.Chem.Soc.114：10672-10674中已有描述。例如，Beusen(1995) 在Biopolymers 36：181-200中描述了一种cis氨基化合物替代物1，5-二基取代四氮唑 促进VI型β折叠形成。Banerjee(1996)在Biopolymers 39：769-777中描述了合并非 手性Ω氨基酸残基生成作为酰氨键替代物的聚亚甲基单元。多肽二级结构可以通过 例如高场1H NMR或2D NMR光谱分析进行分析，参见例如Higgins(1997)J.Pept. Res.50：421-435。也可参见Hruby(1997)Biopolymers 43：219-266和Balaji等人的美 国专利No.5,612,895。

这里所使用的术语“肽变体”和“保守氨基酸替代”是指通过相似性质的氨基酸残基 (基于大小、极性、亲水性及其他性质)的替代使肽区别于参照肽(例如，含特定PL 蛋白羧基末端序列的肽)。为此，本发明范围内所包括的化合物根据指定类别的氨基 酸残基进行部分阐述，主要根据氨基酸侧链的性质，所述氨基酸通常可以分成三个 主要类别：疏水性氨基酸、亲水性氨基酸和半胱氨酸类氨基酸。这些主要类别可以进 一步分为亚类。亲水性氨基酸包括具有酸性、碱性或极性侧链的氨基酸，疏水性氨 基酸包括具有芳香性或非极性侧链的氨基酸。非极性氨基酸可以进一步细分为包括 脂肪族氨基酸及其他。这里所使用的氨基酸类别定义如下：

“ 疏水性氨基酸”指具有在生理pH值下不带电荷并排斥水溶液的侧链的氨基酸。 遗传编码的疏水性氨基酸的例子包括Ile、Leu和Val。非遗传编码的疏水性氨基酸 的例子包括t-BuA。

“ 芳香性氨基酸”指具有含至少一个具备共轭s电子体系的环(芳香环)的侧链的疏 水性氨基酸。芳基可以用诸如烷基、烯基、炔基、羟基、磺酰基、硝基和氨基及其 他基团进一步替代。遗传编码的芳香性氨基酸的例子包括Phe、Tyr和Trp。通常遇 到的非遗传编码芳香性氨基酸包括苯基甘氨酸、2-萘基丙氨酸、β-2-噻吩丙氨酸、 1，2，3，4-四氢异喹啉-3-羧酸、4-氯-苯基丙氨酸、2-氟苯基丙氨酸、3-氟苯基丙氨酸和 4-氟苯基丙氨酸。

“ 非极性氨基酸”指具有在生理pH值下通常不带电荷并不是极性的侧链的疏水性 氨基酸。遗传编码的非极性氨基酸的例子包括Gly、Pro和Met。非编码的非极性氨 基酸的例子包括Cha。

“ 脂肪族氨基酸”指具有饱和的或不饱和的直链、分支的或环状碳氢侧链的非极 性氨基酸。遗传编码的脂肪族氨基酸的例子包括Ala、Leu、Val和IIe。非编码的脂 肪族氨基酸的例子包括NIe。

“ 亲水性氨基酸”指具有亲和水溶液的侧链的氨基酸。遗传编码的亲水性氨基酸 的例子包括Ser和Lys。非编码的亲水性氨基酸的例子包括Cit和hCys。

“ 酸性氨基酸”指具有小于7的pK值的侧链的亲水性氨基酸。由于一个氢离子解 离，在生理pH值下酸性氨基酸通常带负电。遗传编码的酸性氨基酸的例子包括Asp 和Glu。

“碱性氨基酸”指具有大于7的pK值的侧链的亲水性氨基酸。由于与水合氢离子 结合，在生理pH值下碱性氨基酸通常带正电。遗传编码的碱性氨基酸的例子包括 Arg、Lys和His。非遗传编码的碱性氨基酸的例子包括非环状氨基酸鸟氨酸、2，3- 二氨基丙酸、2，4-二氨基丁酸和高精氨酸。

“ 极性氨基酸”指具有在生理pH值下不带电的侧链，但其包含的通常由两个原子 共享的电子对更靠近其中一个原子的亲水性氨基酸。遗传编码的极性氨基酸的例子 包括Asx和Glx。非遗传编码的极性氨基酸的例子包括瓜氨酸、N-乙酰赖氨酸和硫 氧甲硫氨酸。

“ 半胱氨酸类氨基酸”指具有能与另一个氨基酸残基形成如二硫键的共价连接的 侧链的氨基酸。一般而言，半胱氨酸类氨基酸通常具有含至少一个硫醇(SH)基团的 侧链。遗传编码的半胱氨酸类氨基酸的例子包括Cys。非遗传编码的半胱氨酸类氨 基酸的例子包括高半胱氨酸和青霉胺。

正如精通本领域的人员所认识到的，上述分类不是绝对的-几种氨基酸表现出多 种特征性质，因而能够包括在几个类别中。例如，酪氨酸既有芳香环又有极性的羟 基。因此，酪氨酸具有双重特性并能同时包含在芳香性和极性类别内。类似的，除 了能够形成二硫键，半胱氨酸也具有非极性特征。因而，虽然没有严格地将其划分 为疏水性或非极性氨基酸，在许多情况下半胱氨酸可以用于使肽具有疏水性。

可以构成本发明中的肽和肽类似物的某些经常使用的非遗传编码的氨基酸包括 但不限于：β-丙氨酸(b-Ala)以及其他如3-氨基丙酸(Dap)、2，3-二氨基丙酸(Dpr)、4-氨 基丁酸等Ω氨基酸；α-氨基异丁酸(Aib)；ε-氨基己酸(Aha)；δ-氨基戊酸(Ava)；N-甲 基甘氨酸或肌氨酸(MeGly)；鸟氨酸(Orn)；瓜氨酸(Cit)；t-丁基甘氨酸(t-BuG)；N- 甲基异亮氨酸(MeIle)；苯基甘氨酸(Phg)；环己胺(Cha)；正亮氨酸(Nle)；2-萘基丙 氨酸(2-Nal)；4-氯苯丙氨酸(Phe(4-Cl))；2-氟苯丙氨酸(Phe(2-F))；3-氟苯丙氨酸 (Phe(3-F))；4-氟苯丙氨酸(Phe(4-F))；青霉胺(Pen)；1，2，3，4-四氢异喹啉-3-羧酸(Tic)； β-2噻吩丙氨酸(Thi)；硫氧甲硫氨酸(MSO)；高精氨酸(hArg)；N-乙酰赖氨酸(AcLys)； 2，3-二氨基丁酸(Dab)；2，3-二氨基丁酸(Dbu)；p-氨基苯基丙氨酸(Phe(pNH2))；N-甲 基缬氨酸(MeVal)；高半胱氨酸(hCys)以及高丝氨酸(hSer)。这些氨基酸也方便地归 入上述的类别中。

下面的表1中总结了上述遗传编码和非编码氨基酸的分类。需要理解的是，表1 只是为了说明的目的，而不意味着包括这里所描述的肽和肽类似物的氨基酸残基的 完全清单。其他可用于制备这里所描述的肽和肽类似物的氨基酸残基可以参考如 Fasman 1989年所著《CRC生物化学与分子生物学实践手册》(CRC Practical Handbook of Biochemistry and Molecular Biology，CRC Press，Inc.，1989)及其引用的参考文献。 这里没有特别提及的氨基酸在已知的表现和/或其与明确鉴别的氨基酸相比特别的化 学和/或物理性质的基础上，可以方便地归入上述类别。

                                表1   分类   遗传编码的   非遗传编码的   疏水性   芳香性     非极性   脂肪族     亲水性   酸性   碱性   极性   半胱氨酸     F、Y、W     M、G、P   A、V、L、I       D、E   H、K、R   Q、N、S、T、Y   C     Phg、Nal、Thi、Tic、Phe(4-Cl)、Phe(2-F)、Phe(3-F)、   Phe(4-F)、吡啶基丙氨酸、苯并噻吩丙氨酸     t-BuA、t-BuG、MeIle、Nle、MeVal、Cha、bAla、   MeGly、Aib       Dpr、Orn、hArg、Phe(p-NH2)、DBU、A2BU   Cit、AcLys、MSO、hSer   Pen、hCys、p-甲基半胱氨酸

在这里所描述的PDZ蛋白的情况中，特定PDZ结构域的“HPV E6结合变体”是 保持HPV E6 PDZ配体结合活性的PDZ结构域变体。下文对测定PDZ结构域变体 是否结合HPV E6的检测方法进行了详细描述，识别特定PDZ结构域中哪个氨基酸 的改变使之成为变体的指导可以参见各种原始资料。在一个实例中，例如，可以将 一个PDZ结构域与这里所描述的其他PDZ结构域进行比较并可以将相应位置上的 氨基酸进行替换。在另一个实例中，一个特定PDZ蛋白的PDZ结构域序列可以与 来自另一个物种的等价PDZ蛋白的等价PDZ结构域序列比较。例如，一个人的PDZ 蛋白的PDZ结构域序列可以与来自其他物种的(如小鼠、大鼠等)其他已知的等价的 PDZ结构域序列比较，任何所述两个序列之间不同的氨基酸可以替换入所述的人 PDZ结构域以生成所述PDZ结构域的变体。例如，人MAGI-1 PDZ结构域2序列 可以与其他物种的(如小鼠，Genbank gi号7513782和28526157或其他同源序列)等 价MAGI-1 PDZ结构域比较以确定可以替换入人MAGI-1-PDZ结构域的氨基酸从而 产生其变体。这样的方法可用于这里所述的任何MAGI-1 PDZ结构域。序列编号 293-301中提供了最小的MAGI-PDZ结构域2序列。与序列列表中的一条序列相比， 具体的变体可以含1个、直到5个、直到约10个、直到约15个、直到约20个或 直到约30个或更多，经常达到约50个氨基酸改变。示范性的MAGI-1 PDZ变体包 括序列编号302-330所表述的序列。在产生变体时，如果PDZ结构域中存在GFG 基序，则通常不要改变该基序。

用默认参数通过BLAST2.0检测延伸至整个PDZ结构域的区域，通常，不同的 PDZ结构域多肽含与这里所述的变异PDZ结构域多肽至少约70或80％、通常至少 约90％、更常见是至少约98％序列相同。

这里所使用的术语“可检测标记”具有本领域内的普通含义，是指能用于检测(例 如，由于其物理或化学性质)、指示存在一种分子或能共价结合或以其他连接方式结 合另一个分子的原子(例如放射性核)、分子(例如荧光素)或复合物。术语“标记”也指 共价结合或以其他方式连接的作用于底物以产生可检测的原子、分子或复合物的分 子(例如，诸如酶等生物分子)。适用于本发明的可检测标记包括任何用光谱的、光 化学的、生物化学的、免疫化学的、电学的、光学的或化学的手段检测的合成物。 本发明中可用的标记包括用于与标记的链霉亲和素偶合物染色的生物素、磁珠(如 DynabeadsTM)、荧光染料(如荧光素、得克萨斯红、罗丹明、绿荧光蛋白、增强绿荧 光蛋白及其他)、放射性标记(如3H、125I、35S、14C、或32P)、酶(如水解酶，尤其是 如碱性磷酸酶的磷酸酶、酯酶和糖苷酶、或氧化还原酶，尤其是如辣根过氧化物酶 的过氧化物酶、以及其他ELISA中常用的酶)、底物、辅助因子、抑制剂、化学发 光基团、显色试剂、以及如胶体金或有色玻璃或塑胶(如聚苯乙烯、聚丙烯、乳胶等) 珠的比色标记。指导使用这些标记的专利包括美国专利Nos.3,817,837；3,850,752； 3,939,350；3,996,345；4,277,437；4,275,149；和4,366,241。检测这些标记的手 段是精通本领域的人员所熟知的。因而，例如，放射性标记和化学发光标记可以用 照相底片或闪烁计数器检测，荧光标记可以用探测放射光的光电探测器检测(如在荧 光激发细胞分类中)，酶标记通常通过提供底物并检测酶与底物反应生成的反应产物 进行检测，比色标记通过简单地观察有色标记物进行检测。因此，标记是可以通过 光谱的、光化学的、生物化学的、免疫化学的、电学的、光学的或化学的方法检测 的任何化合物。按照本领域所熟知的方法，标记物可以直接或间接与分析方案所希 望的成分连接。非放射性标记物经常以间接方法连接。通常，配体分子(如生物素) 与该分子共价结合。随后所述配体与一个抗配体(如链霉亲和素)分子结合，后者或 是直接可检测的，或是与诸如可检测的酶、荧光化合物、或化学发光化合物等信号 生成系统共价相连的。多种配体和抗配体可供使用。在配体具有天然抗配体的情况 下(例如生物素、甲状腺素和皮质醇)，它能与标记的天然抗配体联合使用。此外， 任何的半抗原或抗原化合物可以与抗体组合使用。所述分子也可以直接与信号生成 化合物偶联，例如通过与酶或荧光团偶联。检测标记物的方法是精通本领域的人员 所熟知的。因而，例如，当所述标记物是放射性标记物时，检测方法包括闪烁计数 器、放射自显影中的照相底片、或存储式磷屏成像。当所述标记物是荧光标记物时， 可以通过用适当波长的光激活荧光基团并检测产生的荧光的方式检测。荧光可以通 过照相底片、使用如电荷耦合装置(CCD)的电探测器或光电倍增器及其他手段观察。 类似的，酶标可以通过提供合适的底物并检测产生的反应产物进行检测。简单的比 色标记物也可以通过观测与标记物相连的颜色进行检测。需要认识到，在检测方案 中使用一对荧光团时，经常优选具有不同发射光谱的(波长)，这样就能容易地加以 区分。

在比较氨基酸序列的上下文中，这里所使用的术语“充分相同”意味着当最符合 的对齐排列和比较时，所述序列具有至少约70％、至少约80％、或至少约90％的 氨基酸残基一致性。FASTA算法是测定序列一致性和相似性百分比的适宜的算法， 在Pearson，W.R.和Lipman，D.J.，1988，Proc.Natl.Acad.Sci.US.，4.85：2444中 描述了该算法。也可参考W.R.Pearson，1996，Methods Enzymol.266：227-258。对用 于计算一致性百分比的DNA序列的FASTA对齐排列中所用的优选参数进行了优 化，BL50矩阵15：-5，K-元组＝2；接缝罚分＝40，最优化＝28；缺口罚分-12，缺 口长度罚分＝-2；宽度＝16。

这里所使用的术语“夹心”、“夹心ELISA”、“夹心诊断”和“ELISA捕获法”都是指 用两种不同的检测试剂检测生物学多肽的概念。例如，PDZ蛋白可以直接或间接附 着于固体支持物。待测样品可以通过固体表面，所述PDZ蛋白能够结合其对应的PL 蛋白。随后可以使用标记的抗体或其他检测试剂以测定特定的PL蛋白是否已经与 所述PDZ蛋白结合。

“固相支持物”或“载体”是指任何能够结合多肽、抗原或抗体的支持物。熟知的支 持物或载体包括玻璃、聚苯乙烯、聚丙烯、聚乙烯、葡聚糖、尼龙、淀粉酶、天然 或修饰的纤维素、聚丙烯酰胺、琼脂糖和磁铁。取决于本发明的目的，所述载体的 性质可以是一定程度可溶的或不可溶的。所述支持材料事实上可以具有任何可能的 结构构造，只要与之连接的分子能够结合PDZ结构域多肽或E6抗体。因而，所述 支持物的形状可以是球形的(如在小珠中)、或圆柱形的(如在试管的内表面或杆状物 的外表面)。另外，所述表面可以是平坦的，如薄片、培养皿、测试条等。精通本领 域的人员会知道多种其他结合抗体、肽或抗原的适宜的载体，或通过常规实验可以 确定这样的载体。

这里所使用的术语“待测化合物”或“待测物”可以交替使用，是指可能具有增强子 /激动剂或抑制剂/拮抗剂活性(例如抑制或增强如PDZ-PL结合的相互作用)的候选物 质。所述候选物质或待测化合物可以是多种化合物中的任意选择，这些化合物可以 是天然存在的或合成的、有机的或无机的，包括聚合物(如寡多肽、多肽、寡核苷酸 和多核苷酸)、小分子、抗体(如这里广泛定义的)、糖类、脂肪酸、核苷酸和核苷酸 类似物、天然结构类似物(如类肽、核酸类似物及其他)以及许多其他化合物。在某 些实施方案中，待测物从诸如随机或组合肽库或非肽库的多样性文库中制备。可以 使用许多本领域内所知的文库，如化学合成文库、重组(如噬菌体展示文库)、以及 基于体外翻译的文库。在Fodor等，1991，Science 251：767-773；Houghten等，1991， Nature 354：84-86；Lam等，1991，Nature 354：82-84；Medynski，1994，Bio Technology 12：709-710；Gallop等，1994，J.Medicinal Chemistry 37(9)：1233-1251；Ohlmeyer 等，1993，Proc.Natl.Acad.Sci.USA90：10922-10926；Erb等，1994，Proc.Natl.Acad. Sci.USA 91：11422-11426；Houghten等，1992，Biotechniques 13：412；Jayawickreme 等，1994，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 91：1614-1618；Salmon等，1993，Proc.Natl.Acad. Sci.USA 90：11708-11712；PCT公开No.WO 93/20242；以及Brenner和Lerner， 1992，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 89：5381-5383中描述了化学合成文库的例子。在Scott 和Smith，1990，Science 249：386-390；Devlin等，1990，Science，249：404-406； Christian，R.B.等，1992，J.Mol.Biol.227：711-718；Lenstra，1992，J Immunol.Meth. 152：149-157；Kay等，1993，Gene 128：59-65；以及1994年8月18日的PCT公开 No.WO 94/18318中描述了噬菌体展示文库的例子。基于体外翻译的文库包括但不 限于在1991年4月18日的PCT公开No.WO 91/05058以及Mattheakis等，1994， Proc.Natl.Acad.Sci.USA 91：9022-9026中所描述的文库。作为非肽类库的例子，可 以对苯二氮卓文库(参见例如Bunin等人的1994，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 91： 4708-4712)进行改进以供使用。也可以使用peptoid类肽文库(Simon等，1992，Proc. Natl.Acad.Sci.USA89：9367-9371)。Ostresh等人(1994，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 91：11138-11142)描述了可以使用的另一个文库的例子，该文库中肽的氨基功能基团 已被事先甲基化以生成化学改造的组合文库。

术语“特异性结合”指两个分子之间的结合(例如配体与受体之间)，其特征在于一 个分子(配体)即便在存在多种其他不同分子的情况下能够与另一个具体分子(受体)结 合，也就是在异质分子混合物中一个分子对另一个分子表现出优先的结合能力。通 过在存在过量未标记配体情况下可检测的标记配体与受体结合的减弱也可以说明配 体与受体的特异性结合(亦即竞争结合检测)。

在一些实施方案中，可以使用“蛋白酶体抑制剂”。这些包括苄氧羰基-leu-leu-1 正缬氨酸II(MG 115)或CBZ-LLL的抑制剂可以向化学品供应商购买(如Sigma)。正 如精通本领域的技术人员所理解的，蛋白酶体抑制剂不同于蛋白酶抑制剂。

这里所使用的PDZ蛋白(或相应的PDZ结构域或PDZ融合多肽)的复数形式具 有通常含义。在一些实施方案中，多种蛋白是至少5种、经常至少25种、至少40 种、或至少60种不同的PDZ蛋白。在一些实施方案中，多种蛋白选自表2中列举 的PDZ多肽列表。在一些实施方案中，多种不同的PDZ蛋白来源于(也就是表达在) 特定的组织或特定种类或类型的细胞。在一些实施方案中，多种不同的PDZ蛋白代 表所有已知或认为在组织或细胞中表达的PDZ蛋白(例如已知存在于淋巴细胞或造 血细胞中的所有PDZ蛋白)的实质部分(例如，通常至少50％，更常见的是至少80 ％)。在一些实施方案中，多种PDZ蛋白是指这里所公开的在特定细胞中表达的PDZ 蛋白的至少50％、通常至少80％、至少90％或其全部。

当提及PL肽(或相应的蛋白，例如对应于表3或这里其他地方列举的肽的)时，“多 种”是指至少5种、至少10种、通常至少16种如这里所具体列举的或属于前文对PDZ 结构域所作的分类和百分比的PL肽。

II. 综述

本发明的发明人已经鉴别了大量能在多种生理系统中发挥重要生物学功能的 PDZ蛋白和PL蛋白之间的相互作用。在一个细胞中，这里所使用的术语“生物学功 能”是指通常由细胞实现的可检测的生物学活性，例如诸如细胞增殖(例如肿瘤)、细 胞活化、细胞因子释放、脱颗粒、酪氨酸磷酸化、离子(例如钙离子)通量、代谢活 动、凋亡、基因表达改变、细胞结构的保持、细胞迁移、附着于基质、信号转导、 细胞间相互作用以及其他这里所描述的或本领域已知的细胞活动。

由于参与所述相互作用的蛋白参与多种生理系统(见上述发明背景部分)，这里所 提供的方法可广泛或选择性用于对反常细胞表型或病原体感染的诊断。这里也公开 了用PDZ:PL蛋白相互作用来测定脊椎动物生物样本中是否存在病原生物体的方 法。

正如下面将详细讨论的，为诊断目的而使用PDZ-PL相互作用适用于许多不同 的检测形式并且不仅限于这里所作的讨论。对于ELISA检测，诊断检测方式可以是 如用于怀孕测试的试纸检测，是可与待测样本孵育的薄膜检测，是可以在上放置样 本的基片检测，或其他这样的介质。这样的形式是本领域熟知的，并在美国专利 6,180,417；4,703,017；5,591,645中进行了描述。

III. PDZ蛋白和PL蛋白的相互作用

表4列举了本发明的发明人已经鉴定相互结合的PDZ蛋白和PL蛋白。表4的 每页包括4栏。每部分中的栏由左向右编号，这样每一部分中最左边的栏是第1栏， 每一部分中最右边的是第4栏。每一部分第1栏标为“HPV病毒株”并列举了包含经 验证的PDZ配体序列(PL，在圆括号中表示)的不同E6蛋白。这一栏列举了对应于 用于所述结合研究的20个氨基酸的肽的C末端的3个氨基酸。所有配体经氨基端 生物素化并在表3中展示了部分序列。

与HPV E6-PL肽相互作用的PDZ蛋白列举在标为“PDZ结合伴侣”的第2栏中。 这一栏提供了与左边的PDZ配体相互作用的GST-PDZ融合物PDZ部分的基因名。 具有多个结构域的含PDZ结构域的蛋白的结构域编号列举在所述PDZ的右侧(就是 标为“PDZ结构域”的第4栏)，并从氨基端向羧基端对PDZ结构域进行了编号。所 述表格仅列举了较强的相互作用，例如在“G检测方法”中产生‘4’或‘5’级结果的相互 作用。“级”是结合水平的量度。具体而言，它提供了表示与PDZ蛋白结合的PL肽 数量的450纳米处吸光值。下列数值具有以下含义：‘1’-A450nm 0-l；‘2’-A450nm 1-2； ‘3’-A450nm 2-3；‘4’-A450nm 3-4；‘5’-A450nm重复2处以上达到4；‘0’-A450nm 0，也就是 没有发现相互作用。

表4的第3和第4栏仅是第1、2栏的简单复制，其差别在于检测了不同的E6PL 以及以较高亲和力与其结合的PDZ。

表2和表3以及实施例4和5中提供了这些PL蛋白和PDZ蛋白的进一步的信 息。尤其是表3提供了所述检测方法中所使用的肽的部分氨基酸序列的清单。从左 向右编号时，表示为“HPV病毒株”的第1栏提供了用于检索来自该病毒株的E6蛋 白的HPV病毒株编号。表示为“E6C末端序列”的一栏提供了所述E6蛋白羧基端10 个氨基酸的预测序列。标记为“是/否PL”的第3栏表示所述E6-PL序列是否包含预 测的与PDZ结构域结合的序列元件。标记为“致癌性”的最后一栏表示，这一HPV 病毒株经国家癌症研究所(NCI，2001)确认已知能引起宫颈癌。

实施例5列举了为生成GST-PDZ融合蛋白(Pharmacia)而克隆在载体(PGEX-3X 载体)上的代表性的PDZ结构域序列。美国专利09/724553中列举了为生成GST-PDZ 融合蛋白而克隆在pGEX载体上的PDZ结构域的扩展清单。

正如这里所详细讨论的，表2中列举的PDZ蛋白是天然的包含PDZ结构域的蛋 白。该表中只显示了重要相互作用。因而，本发明尤其针对PDZ蛋白与PL蛋白之 间相互作用的检测与调控。结合其他病原体的PDZ结构域能以类似的方式用于感染 的诊断。表8中包括了适用于诊断的病原体PL蛋白的附加的例子，不过这并不意 味着对本发明范围的限制。

在本发明的另一个实施方案中，细胞异常或疾病可以通过检测细胞PDZ蛋白或 PL蛋白表达水平的失衡进行诊断。在衍生于“A检测方法”或“G检测方法”的检测中， 使用PL蛋白或PDZ蛋白可以测定正常或异常细胞中结合伴侣蛋白表达水平。蛋白 表达水平的差异已与许多疾病关联。

在本发明的某些实施方案中，PDZ蛋白用于诊断病原生物体PL蛋白的存在。 具有PL序列的病原生物体的例子包括但不限于诸如人乳头状瘤病毒、乙肝病毒、 腺病毒、人T细胞白血病毒等病毒、细菌和真菌。

IV. PDZ蛋白或PDZ配体蛋白(PL蛋白)的检测方法

发展了两种互补的、分别称为“A”和“G”的检测PDZ结构域多肽与候选PDZ配 体之间结合的方法。在两种不同检测方法的每一种中，检测了具有对应于参与结合 1个或多个PDZ结构域的蛋白的C末端序列的肽(即候选PL肽)与PDZ结构域多肽(通 常是含PDZ结构域的融合蛋白)之间的结合。在“A检测方法”中，固定化所述候选PL 肽并检测可溶的PDZ结构域多肽与所述固定肽的结合(之所以称为“A”检测是由于在 一个实施方案中，使用了亲和素表面以固定所述肽)。在“G检测方法”中，固定化所 述PDZ结构域多肽并检测可溶性PL肽的结合(之所以称为“G”检测是由于在一个实 施方案中使用了GST结合表面以固定所述PDZ结构域多肽)。下文描述了这些检测 方法的优选实施方案。然而，一般技术人员需要认识到，这些检测方法可以多种方 式进行改良而仍然适用于本发明的目的。

A.含PDZ结构域的融合蛋白的产生

为了用于本发明中的检测方法，制备了GST-PDZ结构域融合蛋白。含编码PDZ 结构域(如前文所述)的PCR产物亚克隆在表达载体中以表达含PDZ结构域和异源 结构域(即谷胱甘肽-S-转移酶序列，GST)的融合蛋白。按照制造商的建议，用 “Sephaglas”割胶系统(Pharmacia)从琼脂糖凝胶上回收代表编码PDZ结构域DNA的 PCR产物(即DNA片段)。

如上所述，为了便于PCR片段与GST编码序列以正确读框连接在GST基因融 合载体(pGEX-3X；Pharmacia，Genbank登录号XXU13852)中，设计了包含限制性 内切酶位点的PCR引物。所述载体含IPTG诱导的lacZ启动子。所述pGEX-3X载 体用Bam HI和Eco RI，或在有些情况下用Eco RI和Sma I线性化并脱磷酸化。对 于大部分克隆手段来说，进行了Bam HI和Eco RI的双酶切，这样用于克隆的PCR 片段的末端是Bam HI和Eco RI。在一些情形下，使用的限制性内切酶组合是Bgl II 和Eco RI、Bam HI和Mfe I、或仅是Eco RI、仅是Sma I、或仅是BamHI。当克隆 多个PDZ结构域时，克隆的DNA部分代表所述PDZ结构域和位于单个结构域之 间的cDNA部分。美国专利申请(60/360061)中说明了所述方法中所采用的克隆片段 的精确定位。取决于采用了上述哪些克隆位点和方法，GST部分与含PDZ结构域 的DNA部分之间的DNA连接序列有轻微变化。由此导致GST-PDZ融合蛋白的氨 基酸序列在GST与PDZ结构域之间的连接区域上有所不同。对应于不同克隆位点/ 方法的蛋白连接序列如下所示。连接序列(载体DNA所编码)用粗体表示，含PDZ 结构域基因衍生序列用斜体表示。

1)GST-BamHI/BamHI-PDZ结构域插入片段

Gly-Ile-PDZ结构域插入片段

2)GST-BamHI/BglII-PDZ结构域插入片段

Gly-Ile-PDZ结构域插入片段

3)GST-EcoRI/EcoRI-PDZ结构域插入片段

Gly-Ile-Pro-Gly-Asn-PDZ结构域插入片段

4)GST-SmaI/SmaI-PDZ结构域插入片段

Gly-Ile-Pro-PDZ结构域插入片段

乙醇沉淀编码PDZ的PCR片段和线性化pGEX-3X载体并在10微升常规连接 缓冲液中重悬。用T4DNA连接酶在7℃下连接4-10小时。需要理解的是，一些获 得的构建物包括很短的连接序列，当克隆多个PDZ结构域时，所述构建物包括位于 单个PDZ结构域之间的一些DNA。

连接产物转化大肠杆菌DH5α或BL21菌株。通过PCR和序列分析筛选并鉴定 克隆的含PDZ结构域DNA以及与编码GST的DNA部分正确融合的菌落。在小规 模的GST/PDZ结构域融合蛋白表达检测中检测阳性克隆，如果有表达，随后为大 规模制备GST/PDZ融合蛋白而培养这些克隆。

在培养基中添加IPTG过量表达GST-PDZ结构域融合蛋白并对其进行纯化。在 《GST基因融合系统》(GST Gene Fusion System)(第二版，第二次修订，Pharmacia) 中描述了小规模和大规模融合蛋白表达和纯化的详细过程。简而言之，在适当的抗 生素选择压力下(100微克/毫升氨苄青霉素；表示为2xYT-amp)，含具有所述融合 蛋白构建物的菌株(DH5α、BL21或JM109)的小体积(50毫升)培养物在37℃下在 2XYT培养基中生长过夜。将过夜培养物注入新鲜制备的2XYT-amp(通常是1升)并 生长至培养物的光密度(OD)达到0.5至0.9(约2.5小时)。添加终浓度为10mM的IPTG 以诱导产生GST融合蛋白，培养物继续生长1小时。以下包括离心在内的所有步骤 在冰上或4℃下进行。离心(4500Xg)收集菌体并在缓冲液A-(50mM Tris，pH 8.0， 50mM葡萄糖，1mM EDTA，200μM PMSF)中重悬。加入等体积的缓冲液A+(缓冲 液A-，4毫克/毫升溶菌酶)并在冰上孵育3分钟以溶解细菌或直到开始溶菌。添加 等体积缓冲液B(10mM Tris，pH 8.0，50mM KCl，1mM EDTA.0.5％Tween-20，0.5％ NP40(表示为IGEPAL CA-630)，200μM PMSF)并在冰上另外孵育20分钟。离心分 离(20,000Xg)细菌溶解物，上清液流经含20毫升Sepharose CL-4B(Pharmacia)“柱分 离前珠”(即事先已用3倍床体积PBS洗涤的没有偶联谷胱甘肽的琼脂糖小珠)的层析 柱。向事先在1XPBS中膨胀(再水合)并转动孵育30分钟至1小时的谷胱甘肽 Sepharose 4B(Pharmacia，目录号17-0765-01)添加穿出液。所述上清液-Sepharose悬 液注入层析柱并用至少20倍床体积的1XPBS清洗。通过使用0.5-1.0毫升试样量的 5mM谷胱甘肽从谷胱甘肽琼脂糖上洗脱GST融合蛋白并以单独组分的形式收集。 通过读取280纳米处的吸光度并用吸光度和消光系数计算浓度来测定组份浓度。合 并那些含有最高浓度融合蛋白的组份并添加等体积的70％的甘油使其终浓度为35 ％。融合蛋白的大小及质量通过SDS凝胶电泳(PAGE)检测(如Sambrook等人所述)。 试样量融合蛋白在-80℃和-20℃保存。

表2：本发明检测方法中所使用的PDZ结构域

  基因名称   GI或Acc#   PDZ#   与GST构建物融合的序列   Seq ID   p27的26s亚基   9184389   1   RDMAEAHKEAMSRKLGQSESQGPPRAFAKVNSISPGSPSIAGLQVDDEIVEFGSVN   TQNFQSLHNIGSVVQHSEGALAPTILLSVSM   1   AF6   430993   1   LRKEPEIITVTLKKQNGMGLSIVAAKGAGQDKLGIYVKSVVKGGAADVDGRLAAGDQ   LLSVDGRSLVGLSQERAAELMTRTSSVVTLEVAKQG   2   AIPC   12751451   1   LIRPSVISIIGLYKEKGKGLGFSIAGGRDCIRGQMGIFVKTIFPNGSAAEDGRLKEGDEI   LDVNGIPIKGLTFQEAIHTFKQIRSGLFVLTVRTKLVSPSLTNSS   3   AIPC   12751451   2   GISSLGRKTPGPKDRIVMEVTLNKEPRVGLGIGACCLALENSPPGIYIHSLAPGSVAK   MESNLSRGDQILEVNSVNVRHAALSKVHAILSKCPPGPVRLVIGRHPNPKVSEQEMD   EVIARSTYQESKEANSS   4   AIPC   12751451   3   QSENEEDVCFIVLNRKEGSGLGFSVAGGTDVEPKSITVHRVFSQGAASQEGTMNRG   DFLLSVNGASLAGLAHGNVLKVLHQAQLHKDALWIKKGMDQPRPSNSS   5   AIPC   12751451   4   LGRSVAVHDALCVEVLKTSAGLGLSLDGGKSSVTGDGPLVIKRVYKGGAAEQAGIIE   AGDEILAINGKPLVGLMHFDAWNIMKSVPEGPVQLLIRKHRNSS   6   a-辅肌动蛋白   相关的   LIM蛋白   2773059   1   QTVILPGPAAWGFRLSGGIDFNQPLVITRITPGSKAAAANLCPGDVILAIDGFGTESMT   HADGQDRIKAAEFIV   7   APXL-1   13651263   1   ILVEVQLSGGAPWGFTLKGGREHGEPLVITKIEEGSKAAAVDKLLAGDEIVGINDIGLS   GFRQEAICLVKGSHKTLKLVVKRNSS   8   萎缩蛋白-1   相互作用蛋白   2947231   1   REKPLFTRDASQLKGTFLSTTLKKSNMGFGFTIIGGDEPDEFLQVKSVIPDGPAAQD   GKMETGDVIVYINEVCVLGHTHADVVKLFQSVPIGQSVNLVLCRGYP   9   萎缩蛋白-1   相互作用蛋白   2947231   2   LSGATQAELMTLTIVKGAQGFGFTIADSPTGQRVKQILDIQGCPGLCEGDLIVEINQQ   NVQNLSHTEVVDILKDCPIGSETSLIIHRGGFF   10   萎缩蛋白-1   相互作用蛋白   2947231   3   HYKELDVHLRRMESGFGFRILGGDEPGQPILIGAVIAMGSADRDGRLHPGDELVYVD   GIPVAGKTHRYVIDLMHHAARNGQVNLTVRRKVLCG   11   基因名称   GI或Acc#   PDZ#   与GST构建物融合的序列   Seq ID   萎缩蛋白-1   相互作用蛋白   2947231   4   EGRGISSHSLQTSDAVIHRKENEGFGFVIISSLNRPESGSTITVPHKIGRIIDGSPADR   CAKLKVGDRILAVNGQSIINMPHADIVKLIKDAGLSVTLRIIPQEEL   12   萎缩蛋白-1   相互作用蛋白   2947231   5   LSDYRQPQDFDYFTVDMEKGAKGFGFSIRGGREYKMDLYVLRLAEDGPAIRNGRM   RVGDQIIEINGESTRDMTHARAIELIKSGGRRVRLLLKRGTGQ   13   萎缩蛋白-1   相互作用蛋白   2947231   6   HESVIGRNPEGQLGFELKGGAENGQFPYLGEVKPGKVAYESGSKLVSEELLLEVNE   TPVAGLTIRDVLAVIKHCKDPLRLKCVKQGGIHR   14   CARD11   12382772   1   NLMFRKFSLERPFRPSVTSVGHVRGPGPSVQHTTLNGDSLTSQLTLLGGNARGSFV   HSVKPGSLAEKAGLREGHQLLLLEGCIRGERQSVPLDTCTKEEAHWTIQRCSGPVTL   HYKVNHEGYRKLV   15   CARD14   13129123   1   ILSQVTMLAFQGDALEQISVIGGNLTGIFIHRVTPGSAADQMALRPGTQIVMVDYEA   SEPLFKAVLEDTTLEEAVGLLRRVDGFCCLSVKVNTDGYKRL   16   CASK   3087815   1   TRVRLVQFQKNTDEPMGITLKMNELNHCIVARIMHGGMIHRQGTLHVGDEIREINGIS   VANQTVEQLQKMLREMRGSITFKIVPSYRTQS   17   连接增强子   3930780   1   LEQKAVLEQVQLDSPLGLEIHTTSNCQHFVSQVDTQVPTDSRLQIQPGDEVVQINEQ   VVVGWPRKNMVRELLREPAGLSLVLKKIPIP   18   胞黏蛋白   结合蛋白   3192908   1   QRKLVTVEKQDNETFGFEIQSYRPQNQNACSSEMFTLICKIQEDSPAHCAGLQAGD   VLANINGVSTEGFTYKQVVDLIRSSGNLLTIETLNG   19   密蛋白180   16755892   1   RCLIQTKGQRSMDGYPEQFCVRIEKNPGLGFSISGGISGQGNPFKPSDKGIFVTRVQ   PDGPASNLLQPGDKILQANGHSFVHMEHEKAVLLLKSFQNTVDLVIQRELTV   20   DLG1   475816   1   IQVNGTDADYEYEEITLERGNSGLGFSIAGGTDNPHIGDDSSIFITKIITGGAAAQDGR   LRVNDCILQVNEVDVRDVTHSKAVEALKEAGSIVRLYVKRRN   21   DLG1   475816   2   IQLIKGPKGLGFSIAGGVGNQHIPGDNSIYVTKIIEGGAAHKDGKLQIGDKLLAVNNVC   LEEVTHEEAVTALKNTSDFVYLKVAKPTSMYMNDGN   22   DLG1   475816   3   ILHRGSTGLGFNIVGGEDGEGIFISFILAGGPADLSGELRKGDRIISVNSVDLRAASHE   QAAAALKNAGQAVTIVAQYRPEEYSR   23   DLG2   12736552   1   ISYVNGTEIEYEFEEITLERGNSGLGFSIAGGTDNPHIGDDPGIFITKIIPGGAAAEDGR   LRVNDCILRVNEVDVSEVSHSKAVEALKEAGSIVRLYVRRR   24   DLG2   12736552   2   ISVVEIKLFKGPKGLGFSIAGGVGNQHIPGDNSIYVTKIIDGGAAQKDGRLQVGDRLL   MVNNYSLEEVTHEEAVAILKNTSEVVYLKVGNPTTI   25   DLG2   12736552   3   IWAVSLEGEPRKVVLHKGSTGLGFNIVGGEDGEGIFVSFILAGGPADLSGELQRGDQ   ILSVNGIDLRGASHEQAAAALKGAGQTVTIIAQYQPED   26   DLG5   3650451   1   GIPYVEEPRHVKVQKGSEPLGISIVSGEKGGIYVSKVTVGSIAHQAGLEYGDQLLEFN   GINLRSATEQQARLIIGQQCDTITILAQYNPHVHQLRNSSZLTD   27   DLG5   3650451   2   GILAGDANKKTLEPRVVFIKKSQLELGVHLCGGNLHGVFVAEVEDDSPAKGPDGLVP   GDLILEYGSLDVRNKTVEEVYVEMLKPRDGVRLKVQYRPEEFIVTD   28   DLG6，   剪切变体1   14647140   1   PTSPEIQELRQMLQAPHFKALLSAHDTIAQKDFEPLLPPLPDNIPESEEAMRIVCLVKN   QQPLGATIKRHEMTGDILVARIIHGGLAERSGLLYAGDKLVEVNGVSVEGLDPEQVIH   ILAMSRGTIMFKVVPVSDPPVNSS   29   DLG6，   剪切变体2   AB053303   1   PTSPEIQELRQMLQAPHFKGATIKRHEMTGDILVARIIHGGLAERSGLLYAGDKLVEV   NGVSVEGLDPEQVIHILAMSRGTIMFKVVPVSDPPVNSS   30   DVL1   2291005   1   LNIVTVTLNMERHHFLGISIVGQSNDRGDGGIYIGSIMKGGAVAADGRIEPGDMLLQV   NDVNFENMSNDDAVRVLREIVSQTGPISLTVAKCW   31   DVL2   2291007   1   LNIITVTLNMEKYNFLGISIVGQSNERGDGGIYIGSIMKGGAVAADGRIEPGDMLLQVN   DMNFENMSNDDAVRVLRDIVHKPGPIVLTVAKCWDPSPQNS   32   DVL3   6806886   1   IITVTLNMEKYNFLGISIVGQSNERGDGGIYIGSIMKGGAVAADGRIEPGDMLLQVNEI   NFENMSNDDAVRVLREIVHKPGPITLTVAKCWDPSP   33   ELFIN1   2957144   1   TTQQIDLQGPGPWGFRLVGRKDFEQPLAISRVTPGSKAALANLCIGDVITAIDGENTS   NMTHLEAQNRIKGCTDNLTLTVARSEHKVWSPLV   34   ENIGMA   561636   1   IFMDSFKVVLEGPAPWGFRLQGGKDFNVPLSISRLTPGGKAAQAGVAVGDWVLSID   GENAGSLTHIEAQNKIRACGERLSLGLSRAQPV   35   ERBIN   8923908   1   QGHELAKQEIRVRVEKDPELGFSISGGVGGRGNPFRPDDDGIFVTRVQPEGPASKL   LQPGDKIIQANGYSFINIEHGQAVSLLKTFQNTVELIIVREVSS   36   基因名称   GI或Acc#   PDZ#   与GST构建物融合的序列 Seq ID   EZRIN   结合蛋白50   3220018   1   ILCCLEKGPNGYGFHLHGEKGKLGQYIRLVEPGSPAEKAGLLAGDRLVEVNGENVE   KETHQQVVSRIRAALNAVRLLVVDPEFIVTD   37   EZRIN   结合蛋白50   3220018   2   IRLCTMKKGPSGYGFNLHSDKSKPGQFIRSVDPDSPAEASGLRAQDRIVEVNGVCM   EGKQHGDVVSAIRAGGDETKLLVVDRETDEFFMNSS   38   FLJ00011   10440352   1   KNPSGELKTVTLSKMKQSLGISISGGIESKVQPMVKIEKIFPGGAAFLSGALQAGFEL   VAVDGENLEQVTHQRAVDTIRRAYRNKAREPMELVVRVPGPSPRPSPSD   39   FLJ11215   11436365   1   EGHSHPRVVELPKTEEGLGFNIMGGKEQNSPIYISRIIPGGIADRHGGLKRGDQLLSV   NGVSVEGEHHEKAVELLKAAQGKVKLVVRYTPKVLEEME   40   FLJ12428   BC012040   1   PGAPYARKTFTIVGDAVGWGFVVRGSKPCHIQAVDPSGPAAAAGMKVCQFVVSVN   GLNVLHVDYRTVSNLILTGPRTIVMEVMEELEC   41   FLJ12615   10434209   1   GQYGGETVKIVRIEKARDIPLGATVRNEMDSVIISRIVKGGAAEKSGLLHEGDEVLEIN   GIEIRGKDVNEVFDLLSDMHGTLTFVLIPSQQIKPPPA   42   FLJ20075   7019938   1   ILAHVKGIEKEVNVYKSEDSLGLTITDNGVGYAFIKRIKDGGVIDSVKTICVGDHIESIN   GENIVGWRHYDVAKKLKELKKEELFTMKLIEPKKAFEI   43   FLJ21687   10437836   1   KPSQASGHFSVELVRGYAGFGLTLGGGRDVAGDTPLAVRGLLKDGPAQRCGRLEV   GDLVLHINGESTQGLTHAQAVERIRAGGPQLHLVIRRPLETHPGKPRGV   44   FLJ31349   AK055911   1   PVMSQCACLEEVHLPNIKPGEGLGMYIKSTYDGLHVITGTTENSPADRSQKIHAGDE   VIQVNQQTVVGWQLKNLVKKLRENPTGVVLLLKKRPTGSFNFTPEFIVTD   45   FLJ32798   AK057360   1   LDDEEDSVKIIRLVKNREPLGATIKKDEQTGAIIVARIMRGGAADRSGLIHVGDELREV   NGIPVEDKRPEEIIQILAQSQGAITFKIIPGSKEETPSNSS   46   GRIP1   4539083   1   VVELMKKEGTILGLTVSGGIDKDGKPRVSNLRQGGIAARSDQLDVGDYIKAVNGINL   AKFRHDEIISLLKNVGERVVLEVEYE   47   GRIP1   4539083   2   RSSVIFRTVEVTLHKEGNTFGFVIRGGAHDDRNKSRPVVITCVRPGGPADREGTIKP   GDRLLSVDGIRLLGTTHAEAMSILKQCGQEAALLIEYDVSVMDSVATASGNSS   48   GRIP1   4539083   3   HVATASGPLLVEVAKTPGASLGVALTTSMCCNKQVIVIDKIKSASIADRCGALHVGDH   ILSIDGTSMEYCTLAEATQFLANTTDQVKLEILPHHQTRLALKGPNSS   49   GRIP1   4539083   4   TETTEVVLTADPVTGFGIQLQGSVFATETLSSPPLISYIEADSPAERCGVLQIGDRVM   AINGIPTEDSTFEEASQLLRDSSITSKVTLEIEFDVAES   50   GRIP1   4539083   5   AESVIPSSGTFHVKLPKKHNVELGITISSPSSRKPGDPLVISDIKKGSVAHRTGTLELG   DKLLAIDNIRLDNCSMEDAVQILQQCEDLVKLKIRKDEDNSD   51   GRIP1   4539083   6   IYTVELKRYGGPLGITISGTEEPFDPIIISSLTKGGLAERTGAIHIGDRILAINSSSLKGKP   LSEAIHLLQMAGETVTLKIKKQTDAQSA   52   GRIP1   4539083   7   IMSPTPVELHKVTLYKDSDMEDFGFSVADGLLEKGVYVKNIRPAGPGDLGGLKPYDR   LLQVNHVRTRDFDCCLVVPLIAESGNKLDLVISRNPLA   53   GTP酶活化酶   2389008   1   SRGCETRELALPRDGQGRLGFEVDAEGFVTHVERFTFAETAGLRPGARLLRVCGQT   LPSLRPEAAAQLLRSAPKVCVTVLPPDESGRP   54   鸟嘌呤   交换因子   6650765   1   AKAKWRQVVLQKASRESPLQFSLNGGSEKGFGIFVEGVEPGSKAADSGLKRGDQI   MEVNGQNFENITFMKAYEILRNNTHLALTVKTNIFVFKEL   55   HEMBA   1000505   10436367   1   LENVIAKSLLIKSNEGSYGFGLEDKNKVPIIKLVEKGSNAEMAGMEVGKKIFAINGDLV   FMRPFNEVDCFLKSCLNSRKPLRVLVSTKP   56   HEMBA   1000505   10436367   2   PRETVKIPDSADGLGFQIRGFGPSVVHAVGRGTVAAAAGLHPGQCIIKVNGINVSKET   HASVIAHVTACRKYRRPTKQDSIQ   57   HEMBA   1003117   7022001   1   EDFCYVFTVELERGPSGLGMGLIDGMHTHLGAPGLYIQTLLPGSPAAADGRLSLGD   RILEVNGSSLLGLGYLRAVDLIRHGGKKMRFLVAKSDVETAKKI   58   HTRA3   AY040094   1   LTEFQDKQIKDWKKRFIGIRMRTITPSLVDELKASNPDFPEVSSGIYVQEVAPNSPSQ   RGGIQDGDIIVKVNGRPLVDSSELQEAVLTESPLLLEVRRGNDDLLFSNSS   59   HTRA4   AL576444   1   HKKYLGLQMLSLTVPLSEELKMHYPDFPDVSSGVYVCKVVEGTAAQSSGLRDHDVI   VNINGKPITTTTDVVKALDSDSLSMAVLRGKDNLLLTVNSS   60   INADL   2370148   1   IWQIEYIDIERPSTGGLGFSVVALRSQNLGKVDIFVKDVQPGSVADRDQRLKENDQIL   AINHTPLDQNISHQQAIALLQQTTGSLRLIVAREPVHTKSSTSSSE   61   INADL   2370148   2   PGHVEEVELINDGSGLGFGIVGGKTSGVVVRTIVPGGLADRDGRLQTGDHILKIGGT   NVQGMTSEQVAQVLRNCGNSS   62   INADL   2370148   3   PGSDSSLFETYNVELVRKDGQSLGIRIVGYVGTSHTGEASGIYVKSIIPGSAAYHNGH   IQVNDKIVAVDGVNIQGFANHDVVEVIRNAGQVVHITIVRRKTSSSTSRIHRD   63   基因名称   GI或Acc#   PDZ#   与GST构建物融合的序列   Seq ID   IQVNDKIVAVDGVNIQGFANHDVVEVLRNAGQVVHLTLVRRKTSSSTSRIHRD   INADL   2370148   4   NSDDAELQKYSKLLPIHTLRLGVEVDSFDGHHYISSIVSGGPVDTLGLLQPEDELLEV   NGMQLYGKSRREAVSFLKEVPPPFTLVCCRRLFDDEAS   64   INADL   2370148   5   LSSPEVKIVELVKDCKGLGFSILDYQDPLDPTRSVIVIRSLVADGVAERSGGLLPGDR   LVSVNEYCLDNTSLAEAVEILKAVPPGLVHLGICKPLVEFIVTD   65   INADL   2370148   6   PNFSHWGPPRIVEIFREPNVSLGISIVVGQTVIKRLKNGEELKGIFIKQVLEDSPAGKT   NALKTGDKILEVSGVDLQNASHSEAVEAIKNAGNPVVFIVQSLSSTPRVIPNVHNKAN   SS   66   INADL   2370148   7   PGELHIIELEKDKNGLGLSLAGNKDRSRMSIFVVGINPEGPAAADGRMRIGDELLEIN   NQILYGRSHQNASAIIKTAPSKVKLVFIRNEDAVNQMANSS   67   INADL   2370148   8   PATCPIVPGQEMIIEISKGRSGLGLSIVGGKDTPLNAIVIHEVYEEGAAARDGRLWAG   DQILEVNGVDLRNSSHEEAITALRQTPQKVRLVVY   68   KIAA0147   1469875   1   ILTLTILRQTGGLGISIAGGKGSTPYKGDDEGIFISRVSEEGPAARAGVRVGDKLLEVN   GVALQGAEHHEAVEALRGAGTAVQMRVWRERMVEPENAEFIVTD   69   KIAA0147   1469875   2   PLRQRHVACLARSERGLGFSIAGGKGSTPYRAGDAGIFVSRIAEGGAAHRAGTLQV   GDRVLSINGVDVTEARHDHAVSLLTAASPTIALLLEREAGG   70   KIAA0147   1469875   3   ILEGPYPVEEIRLPRAGGPLGLSIVGGSDHSSHPFGVQEPGVFISKVLPRGLAARSGL   RVGDRILAVNGQDVRDATHQEAVSALLRPCLELSLLVRRDPAEFIVTD   71   KIAA0147   1469875   4   RELCIQKAPGERLGISIRGGARGHAGNPRDPTDEGIFISKVSPTGAAGRDGRLRVGL   RLLEVNQQSLLGLTHGEAVQLLRSVGDTLTVLVCDGFEASTDAALEVS   72   KIAA0303   2224546   1   PHQPIVIHSSGKNYGFTIRAIRVYVGDSDIYTVHHIVWNVEEGSPACQAGLKAGDLIT   HINGEPVHGLVHTEVIELLLKSGNKVSITTTPF   73   KIAA0313   7657260   1   ILACAAKAKRRLMTLTKPSREAPLPFILLGGSEKGFGIFVDSVDSGSKATEAGLKRGD   QILEVNGQNFENIQLSKAMEILRNNTHLSITVKTNLFVFKELLTNSS   74   KIAA0316   6683123   1   IPPAPRKVEMRRDPVLGFGFVAGSEKPVVVRSVTPGGPSEGKLIPGDQIVMINDEPV   SAAPRERVIDLVRSCKESILLTVIQPYPSPK   75   KIAA0340   2224620   1   LNKRTTMPKDSGALLGLKVVGGKMTDLGRLGAFITKVKKGSLADVVGHLRAGDEVL   EWNGKPLPGATNEEVYNIILESKSEPQVEIIVSRPIGDIPRIHRD   76   KIAA0380   2224700   1   QRCVIIQKDQHGFGFTVSGDRIVLVQSVRPGGAAMKAGVKEGDRIIKVNGTMVTNSS   HLEVVKLIKSGAYVALTLLGSS   77   KIAA0382   7662087   1   ILVQRCVIIQKDDNGFGLTVSGDNPVFVQSVKEDGAAMRAGVQTGDRIIKVNGTLVT   HSNHLEVVKLIKSGSYVALTVQGRPPGNSS   78   KIAA0440   2662160   1   SVEMTLRRNGLGQLGFHVNYEGIVADVEPYGYAWQAGLRQGSRLVEICKVAVATLS   HEQMIDLLRTSVTVKVVIIPPHD   79 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  PSDTSSEDGVRRIVHLYTTSDDFCLGFNIRGGKEFGLGIYVSKVDHGGLAEENGIKV   GDQVLAANGVRFDDISHSQAVEVLKGQTHIMLTIKETGRYPAYKEMNSS   151   新丝氨酸   蛋白酶   1621243   1   KIKKFLTESHDRQAKGKAITKKKYIGIRMMSLTSSKAKELKDRHRDFPDVISGAYIIEVI   PDTPAEAGGLKENDVIISINGQSVVSANDVSDVIKRESTLNMVVRRGNEDIMITV   152   Numb结合蛋白   AK056823   1   PDGEITSIKINRVDPSESLSIRLVGGSETPLVHIIIQHIYRDGVIARDGRLLPGDIILKVNG   MDISNVPHNYAVRLLRQPCQVLWLTVMREQKFRSRNSS   153   Numb结合蛋白   AK056823   2   HRPRDDSFHVILNKSSPEEQLGIKLVRKVDEPGVFIFNVLDGGVAYRHGQLEENDRV   LAINGHDLRYGSPESAAHLIQASERRVHLVVSRQVRQRSPENSS   154   Numb结合蛋白   AK056823   3   PTITCHEKVVNIQKDPGESLGMTVAGGASHREWDLPIYVISVEPGGVISRDGRIKTGD   ILLNVDGVELTEVSRSEAVALLKRTSSSIVLKALEVKEYEPQEFIV   155   Numb结合蛋白   AK056823   4   PRCLYNCKDIVLRRNTAGSLGFCIVGGYEEYNGNKPFFIKSIVEGTPAYNDGRIRCGD   LLAVNGRSTSGMIHACLARLLKELKGRITLTIVSWPGTFL   156   外膜   7023825   1   LLTEEEINLTRGPSGLGFNIVGGTDQQYVSNDSGIYVSRIKENGAAALDGRLQEGDKI   LSVNGQDLKNLLHQDAVDLFRNAGYAVSLRVQHRLQVQNGIHS   157   p55T   12733367   1   PVDAIRILGIHKRAGEPLGVTFRVENNDLVIARILHGGMIDRQGLLHVGDIIKEVNGHE   VGNNPKELQELLKNISGSVTLKILPSYRDTITPQQ   158   PAR3   8037914   1   DDMVKLVEVPNDGGPLGIHVVPFSARGGRTLGLLVKRLEKGGKAEHENLFRENDCI   VRINDGDLRNRRFEQAQHMFRQAMRTPIIWFHVVPAA   159   PAR3   8037914   2   GKRLNIQLKKGTEGLGFSITSRDVTIGGSAPIYVKNILPRGAAIQDGRLKAGDRLIEVN   GVDLVGKSQEEVVSLLRSTKMEGTVSLLVFRQEDA   160   PAR3   8037914   3   TPDGTREFLTFEVPLNDSGSAGLGVSVKGNRSKENHADLGIFVKSIINGGAASKDGR   LRVNDQLIAVNGESLLGKTNQDAMETLRRSMSTEGNKRGMIQLIVA   161   PAR6   2613011   1   LPETHRRVRLHKHGSDRPLGFYIRDGMSVRVAPQGLERVPGIFISRLVRGGLAESTG   LLAVSDEILEVNGIEVAGKTLDQVTDMMVANSHNLIVTVKPANQR   162   PAR6γ   13537118   1   IDVDLVPETHRRVRLHRHGCEKPLGFYIRDGASVRVTPHGLEKVPGIFISRMVPGGL   AESTGLLAVNDEVLEVNGIEVAGKTLDQVTDMMIANSHNLIVTVKPANQRNNVV   163   PDZ-73   5031978   1   RSRKLKEVRLDRLHPEGLGLSVRGGLEFGCGLFISHLIKGGQADSVGLQVGDEIVRI   NGYSISSCTHEEVINLIRTKKTVSIKVRHIGLIPVKSSPDEFH   164   PDZ-73   5031978   2   IPGNRENKEKKVFISLVGSRGLGCSISSGPIQKPGIFISHVKPGSLSAEVGLEIGDQIVE   VNGVDFSNLDHKEAVNVLKSSRSLTISIVAAAGRELFMTDEF   165   PDZ-73   5031978   3   PEQIMGKDVRLLRIKKEGSLDLALEGGVDSPIGKVVVSAVYERGAAERHGGIVKGDEI   MAINGKIVTDYTLAEADAALQKAWVNQGGDWIDLVVAVCPPKEYDD   166   PDZK1   2944188   1   LTSTFNPRECKLSKQEGQNYGFFLRIEKDTEGHLVRVVEKCSPAEKAGLQDGDRVL   RINGVFVDKEEHMQVVDLVRKSGNSVTLLVLDGDSYEKAGSPGIHRD   167   PDZK1   2944188   2   RLCYLVKEGGSYGFSLKTVQGKKGVYMTDITPQGVAMRAGVLADDHLIEVNGENVE   DASHEEVVEKVKKSGSRVMFLLVDKETDKREFIVTD   168   PDZK1   2944188   3   QFKRETASLKLLPHQPRIVEMKKGSNGYGFYLRAGSEQKGQIIKDIDSGSPAEEAGL   KNNDLVVAVNGESVETLDHDSVVEMIRKGGDQTSLLVVDKETDNMYRLAEFIVTD   169 基因名称   GI或Acc#   PDZ#   与GST构建物融合的序列 Seq ID PDZK1   2944188   4   PDTTEEVDHKPKLCRLAKGENGYGFHLNAIRGLPGSFIKEVQKGGPADLAGLEDEDV   IIEVNGVNVLDEPYEKVVDRIQSSGKNVTLLVZGKNSS   170 PICK1   4678411   1   PTVPGKVTLQKDAQNLIGISIGGGAQYCPCLYIVQVFDNTPAALDGTVAAGDEITGVN   GRSIKGKTKVEVAKMIQEVKGEVTIHYNKLQ   171 PIST   98374330   1   SQGVGPIRKVLLLKEDHEGLGISITGGKEHGVPILISEIHPGQPADRCGGLHVGDAILA   VNGVNLRDTKHKEAVTILSQQRGEIEFEVVYVAPEVDSD   172 prIL16   1478492   1   IHVTILHKEEGAGLGFSLAGGADLENKVITVHRVFPNGLASQEGTIQKGNEVLSINGK   SLKGTTHHDALAILRQAREPRQAVIVTRKLTPEEFIVTD   173 prIL16   1478492   2   TAEATVCTVTLEKMSAGLGFSLEGGKGSLHGDKPLTINRIFKGAASEQSETVQPGDE   ILQLGGTAMQGLTRFEAWNIIKALPDGPVTIVIRRKSLQSK   174 PSD95   3318652   1   LEYEeITLERGNSGLGFSIAGGTDNPHIGDDPSIFITKIIPGGAAAQDGRLRVNDSILFV   NEVDVREVTHSAAVEALKEAGSIVRLYVMRRKPPAENSS   175 PSD95   3318652   2   HVMRRKPPAEKVMEIKLIKGPKGLGFSIAGGVGNQHIPGDNSIYVTKIIEGGAAHKDG   RLQIGDKILAVNSVGLEDVMHEDAVAALKNTYDVVYLKVAKPSNAYL   176 PSD95   3318652   3   REDIPREPRRIVIHRGSTGLGFNIVGGEDGEGIFISFILAGGPADLSGELRKGDQILSV   NGVDLRNASHEQAAIALKNAGQTVTIIAQYKPEFIVTD   177 PTN-3   179912   1   LIRITPDEDGKFGFNLKGGVDQKMPLVVSRINPESPADTCIPKLNEGDQIVLINGRDIS   EHTHDQVVMFIKASRESHSRELALVIRRR   178 PTN-4   190747   1   IRMKPDENGRFGFNVKGGYDQKMPVIVSRVAPGTPADLCVPRLNEGDQVVLINGRD   IAEHTHDQVVLFIKASCERHSGELMLLVRPNA   179 PTPL1   515030   1   PEREITLVNLKKDAKYGLGFQIIGGEKMGRLDLGIFISSVAPGGPADFHGCLKPGDRLI   SVNSVSLEGVSHHAAIEILQNAPEDVTLVISQPKEKISKVPSTPVHL   180 PTPL1   515030   2   GDIFEVELAKNDNSLGISVTGGVNTSVRHGGIYVKAVIPQGAAESDGRIHKGDRVLAV   NGVSLEGATHKQAVETLRNTGQVVHLLLEKGQSPTSK   181 PTPL1   515030   3   TEENTFEVKLFKNSSGLGFSFSREDNLIPEQINASIVRVKKLFAGQPAAESGKIDVGD   VILKVNGASLKGLSQQEVISALRGTAPEVFLLLCRPPPGVLPEIDT   182 PTPL1   515030   4   ELEVELLITLIKSEKASLGFTVTKGNQRIGCYVHDVIQDPAKSDGRLKPGDRLIKVNDT   DVTNMTHTDAVNLLRAASKTVRLVIGRVLELPRIPMLPH   183 PTPL1   515030   5   MLPHLLPDITLTCNKEELGFSLCGGHDSLYQVVYISDINPRSVAAIEGNLQLLDVIHYV   NGVSTQGMTLEEVNRALDMSLPSLVLKATRNDLPV   184 RGS12   3290015   1   RPSPPRVRSVEVARGRAGYGFTLSGQAPCVLSCVMRGSPADFVGLRAGDQILAVN   EINVKKASHEDVVKLIGKCSGVLHMVIAEGVGRFESCS   185 RGS3   18644735   1   LCSERRYRQITIPRGKDGFGFTICCDSPVRVQAVDSGGPAERAGLQQLDTVLQLNE   RPVEHWKCVELAHEIRSCPSEIILLVWRMVPQVKPGIHRD   186 类Rho结合蛋白   14279408   1   ISFSANKRWTPPRSIRFTAEEGDLGFTLRGNAPVQVHFLDPYCSASVAGAREGDYIV   SIQLVDCKWLTLSEVMKLLKSFGEDEIEMKVVSLLDSTSSMHNKSAT   187 丝氨酸蛋白酶   2738914   1   RGEKKNSSSGISGSQRRYIGVMMLTLSPSILAELQLREPSFPDVQHGVLIHKVILGSP   AHRAGLRPGDVILAIGEQMVQNAEDVYEAVRTQSQLAVQIRRGRETLTLYV   188 Shank1   6049185   1   EEKTVVLQKKDNEGFGFVLRGAKADTPIEEFTPTPAFPALQYLESVDEGGVAWQAG   LRTGDFLIEVNNENVVKVGHRQVVNMIRQGGNHLVLKVVTVTRNLDPDDTARKKA   189 Shank3   1   SDYVIDDKVAVLQKRDHEGFGFVLRGAKAETPIEEFTPTPAFPALQYLESVDVEGVA   WRAGLRTGDFLIEVNGVNVVKVGHKQVVALIRQGGNRLVMKVVSVTRKPEEDG   190 Shroom   18652858   1   IYLEAFLEGGAPWGFTLKGGLEHGEPLIISKVEEGGKADTLSSKLQAGDEVVHINEVT   LSSSRKEAVSLVKGSYKTLRLVVRRDVCTDPGH   191 SIP1   2047327   1   IRLCRLVRGEQGYGFHLHGEKGRRGQFIRRVEPGSPAEAAALRAGDRLVEVNGVNV   EGETHHQVVQRIKAVEGQTRLLVVDQN   192 SIP1   2047327   2   IRHLRKGPQGYGFNLHSDKSRPGQYIRSVDPGSPAARSGLRAQDRLIEVNGQNVEG   LRHAEVVASIKAREDEARLLVVDPETDE   193 SITAC-18   8886071   1   PGVREIHLCKDERGKTGLRLRKVDQGLFVQLVQANTPASLVGLRFGDQLLQIDGRD   CAGWSSHKAHQVVKKASGDKIVVVVRDRPFQRTVTM   194 SITAC-18   8886071   2   PFQRTVTMHKDSMGHVGFVIKKGKIVSLVKGSSAARNGLLTNHYVCEVDGQNVIGL   KDKKIMEILATAGNVVTLTIIPSVIYEHIVEFIV   195 SSTRIP   7025450   1   LKEKTVLLQKKDSEGFGFVLRGAKAQTPIEEFTPTPAFPALQYLESVDEGGVAWRAG   LRMGDFLIEVNGQNVVKVGHRQVVNMIRQGGNTLMVKVVMVTRHPDMDEAVQ   196   基因名称   GI或Acc#   PDZ#   与GST构建物融合的序列 Seq ID   SYNTENIN   2795862   1   LEIKQGIREVILCKDQDGKIGLRLKSIDNGIFVQLVQANSPASLVGLRFGDQVLQINGE   NCAGWSSDKAHKVLKQAFGEKITMRIHRD   197   SYNTENIN   2795862   2   RDRPFERTITMHKDSTGHVGFIFKNGKITSIVKDSSAARNGLLTEHNICEINGQNVIGL   KDSQIADILSTSGNSS   198   肌养   结合蛋白1α   1145727   1   QRRRVTVRKADAGGLGISIKGGRENKMPILISKIFKGLAADQTEALFVGDAILSVNGE   DLSSATHDEAVQVLKKTGKEVVLEVIKYMKDVSPYFK   199   肌养   结合蛋白β2   476700   1   IRVVKQEAGGLGISIKGGRENRMPILISKIFPGLAADQSRALRLGDAILSVNGTDLRQA   THDQAVQALKRAGKEVLLEVKFIREFIVTD   200   肌养   结合蛋白γ1   9507162   1   EPFYSGERTVTIRRQTVGGFGLSIKGGAEHNIPVVVSKISKEQRAELSGLLFIGDAILQI   NGINVRKCRHEEVVQVLRNAGEEVTLTVSFLKRAPAFLKLP   201   肌养   结合蛋白γ2   9507164   1   SHQGRNRRTVTLRRQPVGGLGLSIKGGSEHNVPVVISKIFEDQAADQTGMLFVGDA   VLQVNGIHVENATHEEVVHLLRNAGDEVTITVEYLREAPAFLK   202   类TAX2蛋白   3253116   1   RGETKEVEVTKTEDALGLTITDNGAGYAFIKRIKEGSIINRIEAVCVGDSIEAINDHSIV   GCRHYEVAKMLRELPKSQPFTLRLVQPKRAF   203   TIAM 1   4507500   1   HSIHIEKSDTAADTYGFSLSSVEEDGIRRLYVNSVKETGLASKKGLKAGDEILEINNRA   ADALNSSMLKDFLSQPSLGLLVRTYPELE   204   TIAM 2   6912703   1   PLNVYDVQLTKTGSVCDFGFAVTAQVDERQHLSRIFISDVLPDGLAYGEGLRKGNEI   MTLNGEAVSDLDLKQMEALFSEKSVGLTLIARPPDTKATL   205   TIP1   2613001   1   QRVEIHKLRQGENLILGFSIGGGIDQDPSQNPFSEDKTDKGIYVTRVSEGGPAEIAGL   QIGDKIMQVNGWDMTMVTHDQARKRLTKRSEEVVRLLVTRQSLQK   206   TIP2   2613003   1   RKEVEVFKSEDALGLTITDNGAGYAFIKRIKEGSVIDHIHLISVGDMIEAINGQSLLGCR   HYEVARLLKELPRGRTFTLKLTEPRK   207   TIP33   2613007   1   HSHPRVVELPKTDEGLGFNVMGGKEQNSPIYISRIIPGGVAERHGGLKRGDQLLSVN   GVSVEGEHHEKAVELLKAAKDSVKLVVRYTPKVL   208   TIP43   2613011   1   ISNQKRGVKVLKQELGGLGISIKGGKENKMPILISIKIFKGLAADQTQALYVGDAILSVN   GADLRDATHDEAVQALKRAGKEVLLEVKYMREATPYV   209   X-11β   3005559   1   IHFSNSENCKELQLEKHKGEILGVVVVESGWGSILPTVILANMMNGGPAARSGKLSIG   DQIMSINGTSLVGLPLATCQGIIKGLKNQTQVKLNIVSCPPVTTVLIKRNSS   210   X-11β   3005559   2   IPPVTTVLIKRPDLKYQLGFSVQNGIICSLMRGGIAERGGVRVGHRIIEINGQSVVATA   HEKIVQALSNSVGEIHMKTMPAAMFRLLTGQENSS   211   ZO-1   292937   1   IWEQHTVTLHRAPGFGFGIAISGGRDNPHFQSGETSIVISDVLKGGPAEGQLQENDR   VAMVNGVSMDNVEHAFAVQQLRKSGKNAKITIRRKKKVQIPNSS   212   ZO-1   292937   2   ISSQPAKPTKVTLVKSRKNEEYGLRLASHIFVKEISQDSLAARDGNIQEGDVVLKINGT   VTENMSLTDAKTLIERSKGKLKMVVQRDRATLLNSS   213   ZO-1   292937   3   IRMKLVKFRKGDSVGLRLAGGNDVGIFVAGVLEDSPAAKEGLEEGDQILRVNNVDFT   NIIREEAVLFLLDLPKGEEVTILAQKKKDVFSN   214   ZO-2   12734763   1   LIWEQYTVTLQKDSKRGFGIAVSGGRDNPHFENGETSIVISDVLPGGPADGLLQEND   RVVMVNGTPMEDVLHSFAVQQLRKSGKVAAIVVKRPRKV   215   ZO-2   12734763   2   RVLLMKSRANEEYGLRLGSQIFVKEMTRTGLATKDGNLHEGDIILKINGTVTENMSLT   DARKLIEKSRGKLQLVVLRDS   216   Z0-2   12734763   3   HAPNTKMVRFKKGDSVGLRLAGGNDVGIFVAGIQEGTSAEQEGLQEGDQILKVNTQ   DFRGLVREDAVLYLLEIPKGEMVTILAQSRADVY   217   ZO-3   10092690   1   IPGNSTIWEQHTATLSKDPRRGFGIAISGGRDRPGGSMVVSDVVPGGPAEGRLQTG   DHIVMVNGVSMENATSAFAIQILKTCTKMANITVKRPRRIHLPAEFIVTD   218   Z0-3   10092690   2   QDVQMKPVKSVLVKRRDSEEFGVKLGSQIFIKHITDSGLAARHRGLQEGDLILQINGV   SSQNLSLNDTRRLIEKSEGKLSLLVLRDRGQFLVNIPNSS   219   ZO-3   10092690   3   RGYSPDTRVVRFLKGKSIGLRLAGGNDVGIFVSGVQAGSPADGQGIQEGDQILQVN   DVPFQNLTREEAVQFLLGLPPGEEMELVTQRKQDIFWKMVQSEFIVTD   220

以上表2中所提供的氨基酸序列可以包括源于融合蛋白的氨基酸，例如，引起 特别注意的GST-PDZ结构域序列可以比表2中提供的序列短最多20个氨基酸(例 如，短5、8、10、12或15个氨基酸)。例如，一个序列可以从羧基端、氨基端或两 端缩短最多3、6、9、或12个氨基酸。

B.候选PL蛋白的鉴别以及肽段合成

某些PDZ结构域通过PDZ结合蛋白的羧基端残基结合。为鉴别PL蛋白，表观 检查了序列的羧基端以寻找人们可能预测能与含PDZ结构域蛋白结合的序列(参见 如Doyle等人所著，1996，Cell 85，1067；Songyang等人所著，1997，Science 275，73)， 这些序列包括Arbor Vita公司所鉴定的附加的PL共同序列(美国专利申请 60/360061)。表3列举了这些蛋白中的一些并提供了相应的C末端序列。

确定序列(例如，对应于所述蛋白羧基端)的合成肽可以通过任何常规的基于树脂 的方法合成(参见，例如美国专利No.4,108,846；也可参考Caruthers等，1980，Nucleic Acids Res.Symp.Ser.，215-223；Horn等，1980，Nucleic Acids Res.Symp.Ser.， 225-232；Roberge等，1995，Science 269：202)。这里所述的检测中使用的肽是通过 FMOC(参见，例如，Guy和Fields，1997，Meth.Enz.289：67-83；Wellings和Atherton， 1997，Meth.Enz.289：44-67)制备的。在一些情况下(例如，用于本发明的A和G检 测中)，肽在其氨基端通过与4倍过量的生物素甲酯在含催化量碱的二甲亚砜中反应 进行了生物素标记。所述肽用含卤化物的酸(如三氟乙酸)在存在适当的抗氧化剂(如 乙二硫醇)的条件下与树脂分离，多余的溶剂进行冻干处理。

冻干后，肽可以重新溶解并通过反向高效液相色谱(HPLC)纯化。适当的HPLC 溶剂体系包括流速为5毫升/分钟的0.1％三氟乙酸水溶液的基础溶液中线性上升的 含0.1％三氟乙酸的乙腈梯度的Vydac C-18半制备型柱。HPLC纯化以后，所述肽的 特征通过MALDI阳离子质谱进行了确认。

C.PDZ-PL相互作用检测

本发明的发明人通过发展下文详细描述的新的高通量筛选方法得以部分鉴定了 表4中所总结的相互作用。本领域已知的各种已知检测方式可用于选择与特定蛋白 特异反应的配体。例如，可以采用固相ELISA免疫检测、免疫沉淀、BIAcore、免 疫印迹等检测方法鉴别特异结合PDZ结构域多肽的肽。如前文所述，发展了两种不 同的、互补的检测方法以检测PDZ-PL相互作用。在每种检测方法中，固定化一对 PDZ-PL中的一个结合伴侣并测定第二个结合伴侣的结合能力。这些下文所述的检 测方法可以方便地用于在几小时内筛选成百上千的潜在的PDZ-配体相互作用。因 而，这些检测方法可以用于鉴定细胞内更多新的PDZ-PL相互作用。此外，它们可 用于鉴定PDZ-PL相互作用的拮抗剂(见下文)。

在多种实施方案中，在本发明的检测方法和装置中使用了融合蛋白。融合蛋白 的构建与表达的方法是众所周知的。在前文所述的Ausubel等人的著作、Kroll等， 1993，DNA Cell.Biol.12：441，以及Imai等，1997，Cell 91：521-30中对融合蛋白 进行了广泛描述。所述融合蛋白通常包括一个便于将所述蛋白固定在固体基质上的 结构域(“固定化结构域”)。所述固定化结构域经常包括一个诸如多组氨酸(Bush等， 1991，J Biol Chem 266：13811-14)、SEAP(Berger等，1988，Gene 66：1-10)、或M1 和M2标记(参见，例如美国专利Nos.5,011,912；4,851,341；4,703,004；4,782,137) 的标签表位(即被抗体，通常是单克隆抗体，识别的一段序列)。在一个实施方案中， 所述固定化结构域是GST编码区域。需要认识到，除了所述PDZ结构域和特定的 与固定化的抗体、蛋白A结合、或以其他方式与表面接触的残基以外，所述蛋白(例 如融合蛋白)还包含另外的残基。在一些实施方案中，这些残基是天然与所述PDZ- 结构域相连的残基(即位于特定的PDZ蛋白中)，但可以包括合成的(例如，多聚丙氨 酸)或异源的(例如，如10到300个残基组成的间隔序列)残基。

本发明的方法中使用的含PDZ结构域多肽(例如PDZ融合蛋白)通常通过以下步 骤制备：1)构建由编码所需多肽的多核苷酸序列构成的载体(例如质粒、噬菌体或噬 菌粒)；2)将所述载体导入适当的表达系统(例如，原核、昆虫、哺乳动物或无细胞 表达系统)；3)表达所述融合蛋白；以及4)非必需地纯化所述融合蛋白。

在一个实施方案中，所述蛋白的表达包括将编码序列插入适当的表达载体(即包 含针对所采用的表达系统的所述插入的编码序列的转录和翻译所需的必要元件，例 如包括增强子、启动子、转录终止子、复制起始位点、适宜的起始密码子(如甲硫氨 酸)、开放阅读框以及翻译调控信号(如核糖体结合位点、终止子和多聚腺苷序列)在 内的调控元件)。取决于所采用的载体系统与宿主，包括组成型和诱导型启动子在内 的任何数量的适当的转录及翻译元件均可使用。

如本说明书其他部分所述，所述融合蛋白的编码序列包括一个PDZ结构域和一 个固定化结构域。编码所述每个结构域氨基酸序列的多核苷酸可以用本领域内所知 的多种方法获得；通常所述多核苷酸通过在实验者测定的、或更常见的是公开的(例 如通过GenBank)序列的基础上设计引物，通过克隆质粒、cDNA文库以及通过RNA 逆转录产生的cDNA的PCR扩增获得。所述引物包含在产生融合构建物中便于克 隆和操作的接头区域(例如包含限制性位点的序列)。所述对应于PDZ和固定化区域 的多核苷酸以正确的读框连接，从而生成编码所述融合蛋白的序列。

本发明中的融合蛋白可以以分泌蛋白(例如，通过将编码信号序列的DNA包含 在融合基因中；参见例如Lui等，1993，PNAS USA，90：8957-61)或非分泌蛋白的 形式表达。

在一些实施方案中，所述含PDZ蛋白或PL多肽固定在固体表面。结合所述多 肽的基质可以是多种形式中的任意一种，例如微量滴定皿、试管、试纸、微离心管、 小珠、可透或半透膜等。合适的材料包括玻璃、塑胶(例如聚乙烯、PVC、聚丙烯、 聚苯乙烯等)、蛋白、纸、糖类、脂质单层或具有支撑的脂质双层、薄膜及其他固体 支持物。其他可以使用的材料包括陶瓷、金属、非金属、半导体材料、粘固粉等。

在一些实施方案中，所述PDZ和/或PL融合蛋白组成阵列的形式。这里所用的 术语“阵列”是指固定化的融合蛋白的有序排列，其中特定的不同的融合蛋白(即含不 同的PDZ结构域)位于基质上事先确定的不同的位置。由于特定的融合蛋白在阵列 上的位置是已知的，在这一位置上的结合可以与和该位置上的PDZ结构域的结合相 关联。将融合蛋白固定在小珠上(个别地或成群地)是另一个特别有用的技术手段。 在一个实施方案中，单独的融合蛋白固定在小珠上。在一个实施方案中，使用了可 区分的小珠的混合。可区分的小珠是能凭借诸如大小、磁性、颜色(例如通过采用FACS) 或亲和标签(例如，通过采用IgG亲和方法可以区分蛋白A包被的小珠和没有蛋白 A包被的小珠)等性质相互区分的小珠。可以测定与特定PDZ结构域的结合。

蛋白固定化的方法是已知的，包括共价和非共价方法。抗体介导的固定化是一 种适当的固定化方法。按照这一方法，将含PDZ结构域蛋白的“固定化结构域”序列 的特异性抗体本身固定在基质上(例如通过吸附)。该方法的优点在于可以将单一的 抗体附着在基质上并用于多种多肽(具有相同的固定化结构域)的固定化。例如，由 多聚组氨酸构成的固定化结构域(Bush等，1991，J Biol Chem 266：13811-14)可以与 抗组氨酸单抗(R&D Systems，Minneapolis，MN)结合；由分泌型碱性磷酸酶(SEAP) 构成的固定化结构域(Berger等，1988，Gene 66：1-10)可以与抗SEAP抗体(Sigma， St.Louis，MO)结合；由FLAG表位构成的固定化结构域能与抗FLAG抗体结合。 也可以适用其他的配体-抗配体固定化方法，例如，由蛋白A序列(见Harlow和Lane 所著，1988，《抗体实验手册》(Antibodies A Laboratory Manual)，Cold Spring Harbor Laboratory；Sigma，St.Louis，MO)构成的固定化结构域可与IgG结合；由链霉亲 和素构成的固定化结构域可与生物素结合(见前文Harlow和Lane所著；Sigma，St. Louis，MO)。在优选的实施方案中，所述固定化结构域是如这里所述的GST部分。

在使用抗体介导的固定化方法的情况下，玻璃和塑胶是特别有用的基质。可以 用疏水性(例如特氟纶)掩模印制基质以形成孔。每14.5cm2基片“工作区域”有3、10、 21孔的预印的玻璃基质可以从例如SPI Supplies，West Chester，PA获得；也可参见 美国专利No.4,011,350。在某些应用中，使用96孔形式的印制的大版式(12.4cm× 8.3cm)玻璃基片；这一形式便于使用自动液体处理装置并使用多种类型的96孔板酶 标仪(荧光、比色、闪烁)。然而可以使用更高的密度(例如，每平方厘米大于10个 或100个多肽)。参见例如MacBeath等，2000，Science 289：1760-63。

通常，抗体通过吸附与基质结合。适宜的吸附条件是本领域内所熟知的，包括 0.5-50微克/毫升(如10微克/毫升)单克隆抗体在缓冲液中(4℃的pH 6.5到8的PBS， 或50到300mM Tris、MOPS、HEPES、PIPES、乙酸缓冲液)孵育至37℃，孵育时 间从1小时至24小时以上。

蛋白可以共价结合或通过非特异结合非共价附着。如果希望融合蛋白与表面之 间的共价结合，所述表面通常应是多功能性的或能够多功能化的。表面上可能存在 的并用于连接的功能基团包括羧基酸、醛、氨基基团、氰基团、乙烯基团、羟基、 巯基等。多种化合物与多种表面的连接方式是熟知的，并在文献中有详细的说明。

以下提供了示范性的检测方法。

采用固定化的PL肽用“A检测方法”检测PDZ-配体的结合

本发明的一个方面提供了一种检测方法，其中生物素化的候选PL肽被固定在亲 和素包被的表面上的。随后检测PDZ结构域融合蛋白与该表面的结合。在优选的实 施方案中，所述PDZ结构域融合蛋白是GST/PDZ融合蛋白，所述检测方法按照以 下步骤进行：

(1)亲和素与表面(例如蛋白结合表面)的结合。在一个实施方案中，通过每孔添 加100微升含20微克/毫升亲和素(Pierce)的不含钙离子和镁离子的pH7.4的PBS (GibcoBRL)，并在4℃下孵育12小时，将亲和素结合在聚苯乙烯96孔板上(例如Nunc Polysorb，目录号475094)。随后通过每孔添加200微升含2克/100毫升去蛋白酶牛 血清白蛋白的PBS(PBS/BSA)并在4℃孵育2小时，处理平板以封闭非特异性的相 互作用。重复向每孔添加200微升PBS，然后将平板的内容物倒入废液缸并在干燥 表面上轻拍平板，所述平板以此方式用PBS清洗3次。

(2)通过每孔添加50微升含0.4μM肽的PBS/BSA并在4℃下孵育30分钟将生物 素化的PL肽(或候选PL肽，例如可参见表3)固定在平板上微孔的表面。通常每种 不同的肽添加于至少8个不同的微孔中，这样可以进行多重测量(例如双重检测以及 使用不同GST/PDZ结构域融合蛋白和单独GST阴性对照检测)，也制备了其中没有 固定化肽的附加阴性对照微孔。所述PL肽固定在表面上以后，平板用PBS洗涤3 次。

(3)通过每孔添加50微升含5微克/毫升GST/PDZ结构域融合蛋白的PBS/BSA 并在4℃孵育2小时使GST/PDZ结构域融合蛋白(如上述方法制备)与表面反应。作 为阴性对照，针对每种固定的肽在特定的微孔中(通常至少2个孔，即双重测量)添 加单独的GST(即不是融合蛋白)。反应2小时后，所述平板用PBS洗涤3次以去除 未结合的融合蛋白。

(4)采用本领域内所知的多种方法及检测器可以检测GST/PDZ结构域融合蛋白与 亲和素-生物素化肽表面的结合。在一个实施方案中，在平板上每孔添加50微升含 抗GST抗体(例如2.5微克/毫升多克隆羊抗GST抗体，Pierce)的PBS/BSA并在4℃ 下反应20分钟。平板用PBS洗涤3次并添加第二种可检测的标记抗体。在一个实 施方案中，在平板上每孔添加50微升2.5微克/毫升辣根过氧化物酶(HRP)偶联的多 克隆兔抗羊免疫球蛋白抗体并在4℃下反应20分钟。平板用含0.2％Tween 20的 50mM Tris pH8.0洗涤5次，并通过每孔添加100微升HRP底物溶液(TMB，Dako) 并在室温下(RT)反应20分钟显色。通过每孔添加100微升1M硫磺酸终止HRP与 其底物的反应并读取450纳米处所述平板每个孔的吸光度(A)。

(5)通过将来自PL肽与PDZ结构域多肽结合的孔中的信号与本底信号比较检测 一种PL肽与一种PDZ结构域多肽的特异结合。本底信号是阴性对照中得到的信号。 通常特异性或选择性反应结果应至少两倍于本底信号，更典型是比本底高5倍以上， 最常见的是比本底信号高10倍以上。此外，具有统计学意义的反应结果应包括所 述反应的多重测量的信号与本底的差异至少达到2个标准误差，更典型的达到4个 标准误差，最典型的达到6个标准误差以上。相应的，比较信号的重复测量结果与 本底的重复测量结果的统计学检验(如T-检验)应得到p值＜0.05，更典型的是p值 ＜0.01，最典型的是p值＜0.001或更小。

正如所指出的，在“A”检测方法的一个实施方案中，GST/PDZ结构域融合蛋白 与没有PL肽遮盖的亲和素表面的结合信号是一种适当的阴性对照(有时称为“B”)。 单独的GST多肽(即非融合蛋白)与有PL肽遮盖的亲和素包被表面的结合信号是第 二种适当的阴性对照(有时称为“B2”)。由于所有的测量结果是多重的(即至少双重 的)，在测定结合时使用了几次测量的算术中项(或等价的平均数)，并在测定结合的 测量结果中可能的误差时使用了所述平均数的标准误差。N次测量结果的平均数的 标准误差等于以下值的平方根：每次测量值与平均数的差值的平方数之和除以(N)与 (N-1)的乘积。因而，在一个实施方案中，PDZ蛋白与和平板结合的PL肽的特异性 结合通过针对特定PL-PDZ组合的平均B1和/或平均B2与信号平均值(“mean S”)及 信号标准误差(“SE”)的比较得以确定。

“G检测方法”-使用固定化的PDZ结构域融合多肽检测PDZ-配体的结合

本发明的一个方面提供了一种检测方法，其中GST/PDZ融合蛋白被固定在表面 上(“G”检测方法)。随后测量标记的PL肽(例如，如表3中所列举的)与该表面的结 合。在一种优选的实施方案中，所述检测方法按以下步骤进行：

(1)PDZ结构域多肽与表面(例如，蛋白结合表面)的结合。在一种优选的实 施方案中，含一个或多个PDZ结构域的GST/PDZ融合蛋白结合在聚苯乙烯96孔 板上。所述GST/PDZ融合蛋白可以通过多种精通本领域的技术人员所知的常规方 法中的任一种结合到所述平板上，然而必须注意，所述融合蛋白与平板的结合过程 不会改变PDZ结构域的配体结合性质。在一个实施方案中，所述GST/PDZ融合蛋 白通过包被在96孔板上的抗GST抗体结合。通过以下步骤可以达到与平板的充分 结合：

a.向聚苯乙烯96孔板(Nunc Polysorb)每孔添加100微升含5微克/毫升羊抗GST 多克隆抗体(Pierce)并在4℃下孵育12小时。

b.通过每孔添加200微升PBS/BSA在4℃下封闭平板2小时。

c.用PBS 3次洗涤平板。

d.向平板每孔添加50微升含5微克/毫升GST/PDZ融合蛋白或作为阴性对照的 单独的GST多肽(即非融合蛋白)的PBS/BSA并在4℃下孵育2小时。

e.再次用PBS洗涤平板3次。

(2)通过每孔添加50微升含20μM生物素化的肽溶液的PBS/BSA并在4℃ 下孵育10分钟，随后在25℃下另外孵育20分钟，使生物素化的PL肽与表面反应。 用预冷的PBS3次洗涤平板。

(3)使用精通本领域的技术人员所知的多种方法和检测器可以检测生物素化 的肽与GST/PDZ融合蛋白表面的结合。在一个实施方案中，每孔添加100微升溶 于BSA/PBS的0.5微克/毫升的链霉亲和素-辣根过氧化物酶(HRP)偶联物并在4℃ 下反应20分钟。随后平板用含0.2％Tween 20的50mM Tris pH 8.0洗涤5次，通过 每孔添加100微升HRP底物溶液(TMD，Dako)并在室温下孵育20分钟显色。每孔 添加100微升1M硫磺酸终止HRP与其底物的反应并在450纳米处读取平板每个孔 的吸光度。

(4)通过将来自PL肽与PDZ结构域多肽结合的孔中的信号与本底信号比较 检测一种PL肽与一种PDZ结构域多肽的特异结合。本底信号是阴性对照中得到的 信号。通常特异性或选择性反应结果应至少两倍于本底信号，更典型是比本底高5 倍以上，最常见的是比本底信号高10倍以上。此外，具有统计学意义的反应结果 应包括所述反应的多重测量的信号于本底的差异至少达到2个标准误差，更典型的 达到4个标准误差，最典型的达到6个标准误差以上。相应的，比较信号的重复测 量结果与本底的重复测量结果的统计学检验(如T-检验)应得到p值＜0.05，更典型的 是p值＜0.01，最典型的是p值＜0.001或更小。正如所指出的，在“G”检测方法的一 个实施方案中，一种特定PL肽与固定化的(表面结合的)单独的GST多肽的结合信 号是一种适当的阴性对照(有时称为“B1”)。由于所有的测量结果是多重的(即至少双 重的)，在测定结合时使用了几次测量的算术中项(或等价的平均数)，并在测定结合 的测量结果中可能的误差时使用了所述平均数的标准误差。N次测量结果的平均数 的标准误差等于以下值的平方根：每次测量值与平均数的差值的平方数之和除以(N) 与(N-1)的乘积。因而，在一个实施方案中，PDZ蛋白与平板结合的肽的特异性结合 通过针对特定PL-PDZ组合的平均B1与信号平均值(“mean S”)及信号标准误差(“SE”) 的比较得以确定。

“G’检测方法”和“G”检测方法”

上述“G检测方法”特定条件下的两种特定的改进尤其有用。改进的检测方法使 用更少量的标记的PL肽，并且与上述具体的检测条件相比，对于检测而言具有稍 有不同的生化要求。

为了方便起见，这一章节所描述的检测条件称为“G’检测方法”和“G”检测方法”， 而在前面章节中描述的G检测方法的具体检测条件称为“G0检测方法”。除了第2步 的肽浓度是10μM而不是20μM以外，“G’检测”与“G0检测”是相同的。这一改变导 致低亲和力和/或快解离速度的相互作用的检测灵敏度稍有降低。相应的，稍微提高 了具有足够亲和力和半衰期的具有生物学重要性和有用的治疗靶点的相互作用检测 的确定性。

除了第2步的肽浓度是1μM而不是20μM以及在25℃下孵育60分钟(而不是 例如4℃10分钟随后25℃20分钟)以外，“G”检测”与“G0检测”是相同的。这导致 对于低亲和力、快解离速度和/或25℃下亲和力小于4℃下亲和力的相互作用的灵 敏度降低。如果(正如我们发现的对于PDZ-配体结合普遍存在的)反应的熵值时负数 (即产物的熵值小于反应物的熵值)，相互作用在25℃下具有比4℃时更低的亲和力。 相反，由于PDZ-PL复合物能在“G”检测的更长的孵育期间内积累，对于结合及解 离速度慢的相互作用来说，“G”检测”和“G0检测”中的PDZ-PL结合信号是相似的。 因而，“G”检测”和“G0检测”结果的比较可以用于不同PDZ-PL相互作用的相对熵、 焓、动力学。(通过等式ΔG＝RT In(Kd)＝ΔH-TΔS(其中ΔG、H和S分别表示反应的 自由能、焓和熵，T是绝对温度，R是气体常数，Kd是平衡解离常数)，熵和焓与 结合亲和力相关)。具体而言，只在“G0检测”中检测到的或在“G0检测”中检测到高 得多的信号的相互作用通常具有在25℃下快解离速度(t1/2＜10分钟)和负值反应熵， 而在“G”检测”中检测到相似强度的相互作用通常具有较慢的解离速度(t1/2＞10分 钟)。PDZ-PL相互作用热力学和动力学的粗略估计(如上述通过比较“G0检测”和“G” 检测”结果实现)可用于所述相互作用的有效抑制剂的设计。例如，基于与特定PDZ 结构域缓慢解离的PL化学结构(如与“G0检测”中相似的“G”检测”的结合所证实的) 的小分子抑制剂本身可能缓慢解离从而具有高亲和力。

照这样，“G”检测”中步骤2的温度与持续时间的变化可用于深入洞察所述PDZ- 配体结合反应的动力学与热力学以及该反应抑制剂的设计。

检测方法变化形式

如上所述，需要认识到，可以对上述检测方法的许多步骤进行改变，例如，多 种基质可以用于结合PL和含PDZ蛋白；可以使用不同类型的含PDZ融合蛋白； 可以使用检测PDZ/PL相互作用的不同标记物；以及可以使用不同的检测方法。

所述PDZ/PL检测方法可以使用多种表面以结合PL和/或含PDZ蛋白。例如， 表面可以是由对PL蛋白或含PDZ蛋白的附着进行最优化的材料(如聚苯乙烯)形成 的“检测平板”。通常，所述检测平板上单独的孔应具有高表面积/体积比，因而合适 的形状是平底的孔(其中附着检测蛋白)。其他的表面包括但不限于聚苯乙烯或玻璃 珠、聚苯乙烯或玻璃基片、纸、纤维素试纸、塑胶、薄膜等。

例如，所述检测平板可以是“微量滴定”平板。这里所使用的术语“微量滴定平板” 是指一种多孔的检测平板，例如具有约30到200个独立的孔，通常是96孔的平板。 另外，可以使用高密度阵列。微量滴定平板的独立的孔经常能容纳约250微升的最 大体积。通常，所述检测平板是96孔聚苯乙烯平板(如Becton Dickinson Labware， Lincoln Park，N.J.有售)，它支持自动化和高通量筛选。其他的表面包括聚苯乙烯微 量滴定ELISA平板(如Nunc Maxisorp，Inter Med，Denmark有售)。通常，检测平 板每孔添加约50微升至300微升、更优选的是100微升至200微升由悬浮缓冲液 构成的含水试样。

本发明中的可检测标记物可以是与一种分子(如前文所述)直接或间接偶联的任何 可检测的化合物或组合物。标记物自身可以被检测(例如放射性同位素标记或荧光标 记)，或者在酶标记的情况下，可以催化底物化合物或组合物的可检测的化学改变。 优选的标记物是催化非放射性颜色试剂的颜色改变的酶标记物。

有时，标记物间接与抗体偶联。精通本领域的人员知道多种直接或间接偶联的 方法。例如，抗体可以与生物素偶联，而前面提到的任何类别的标记物可以与亲和 素偶联，反之亦然(也可参见前文“A”和“G”检测方法)。生物素选择性地与亲和素结 合，从而标记物能以这种间接方式与抗体偶联。对包括生物素-亲和素偶联及其他类 似方法的综述可以参见前文Ausubel的著作。另外，为实现标记物与抗体的间接偶 联，抗体与小的半抗原(如地高辛)偶联而前面提到的不同类型标记物之一与抗半抗 原抗体(如抗地高辛抗体)偶联。从而实现标记物与抗体的间接偶联。

检测方法的变化形式可以包括不同的洗涤步骤。“洗涤”是指以得以从中去除没 有结合的材料(例如，没有附着的细胞、没有粘附的捕获物、没有结合的配体、受体、 受体构建物、细胞溶解物或HRP抗体)的方式将固体相暴露在水溶液(通常是缓冲液 或细胞培养基)中。为了降低本底噪音，通常在洗涤溶液中包括去垢剂(例如Triton X)。通常，在洗涤之后将水洗涤溶液从检测平板的孔中轻轻倒出。洗涤可以便利地 使用自动清洗装置实现。有些时候，可能要求几个洗涤步骤(例如，约1个到10个 洗涤步骤)。

在PDZ-PL检测方法中也可以使用多种缓冲液。例如，为降低检测本底可以使 用多种封闭缓冲液。术语“封闭缓冲液”是指pH缓冲的、含至少一种能与未被PL或 含PDZ蛋白包被的基质暴露表面结合的封闭化合物的水溶液。封闭化合物通常是如 BSA、明胶、酪蛋白或奶粉的蛋白而且不与检测中任何试剂发生交叉反应。所述封 闭缓冲液通常提供的pH值在约7到7.5之间，合适的缓冲物包括磷酸盐和TRIS。

多种酶-底物组合也可以用于检测PDZ-PL相互作用。酶-底物组合的例子包括， 例如：

(i)以过氧化氢为底物的辣根过氧化物酶(HRP或HRPO)，其中的过氧化氢氧 化染料前体(例如原苯二胺[OPD]或氢氯3，3′，5，5′-四甲基对二氨基联苯[TMB])(如 前文所述)。

(ii)碱性磷酸酶(AP)与作为发色底物的对硝基苯磷。

(iii)β-D-半乳糖苷酶(β-D-Gal)与发色底物(例如对硝基苯-β-D-半乳糖苷)或荧 光底物4-甲基伞形酯-β-D-半乳糖苷。

精通本领域的人员可以使用多种其他酶-底物组合。这些问题的全面综述可以参 见通过参考组合在本发明中的美国专利Nos.4,275,149和4,318,980。

进一步需要认识到，虽然为了方便，本说明书的讨论主要涉及PDZ-PL相互作 用的检测，PDZ-PL相互作用的激动剂或拮抗剂可以用于细胞异常的诊断。

V. 诸如宫颈组织的组织样本的采集

对病原体存在的诊断要求适合于生物体的样本的采集。为检测致癌的HPV E6 蛋白，可能需要采用刮取、拭子、活组织切片技术从子宫、阴茎、肛门或咽喉采集 用于检测的组织。为诊断如HIV的血源病原体，最适合的是通过常规手段采集血液。 为诊断可能已引起皮肤损伤的真菌或病毒感染可能要求采集受影响区域的样本。

本发明不包括取样方法。然而需要指出的是，由于本发明是建立在PDZ或PL 蛋白检测基础上的，必须对采集足够量的样本以检测病原体蛋白并保持样本中蛋白 的完整性给予适当的关注。对于每次诊断检测所采集的样本量应以经验为主确定。 决定因素可以包括但不限于希望检测的疾病阶段、每单位样本的病原体数量、每单 位样本诊断用蛋白数量、诊断用抗原表位的可利用性和稳定性。

示范性的采集宫颈组织的方法包括但不限于美国专利6,241,687、6,352,513、 6,336,905、6,115,990和6,346,086中所述的方法。这些采集方法可以便于用于诊断 致癌的人乳头状瘤病毒的宫颈组织的采集。这些方法主要通过刮取采集宫颈细胞或 组织；另外，也可以采用常规活组织切片方法从任何待测组织中采集样本。

虽然本发明申请中公开的诊断方法针对PL蛋白的检测，样本采集不需要限于蛋 白的采集。另外可以从组织样本中采集RNA，使用体外翻译试剂盒从所采集的模板 生成蛋白，然后使用这里公开的方法检测。以相似的方式，可以从待测样本中采集 DNA，可以使用致癌E6蛋白的特异性引物扩增所述DNA(通过使用DNA聚合酶) 或将样本转录并翻译成能用这里所公开的方法检测的蛋白。

VI. 检测致癌E6蛋白的检测方法

致癌E6蛋白能通过其结合PDZ结构域的能力进行检测。这可以发展出单一检 测步骤的方法或更有用的、具有更高灵敏度和特异性的双步骤或“夹心”法。

在单一步骤方法中，可以使用诸如表3和4中公开的特异性识别致癌E6蛋白的 PDZ结构域的标记形式直接探测样本中致癌E6蛋白的存在。如前文所指出的，其 实例可以是将待测样本固定在固体支持物上(例如，宫颈细胞或组织可以包被在基片 上并“固定”(fixed)以使细胞膜具有渗透性)，在适当的条件下将所述样本与标记的“PL 探测分子”蛋白(PDZ结构域融合物)共孵育，洗去未结合的PL探测分子，并检测样 本中“标记”的存在。此外，即便没有标记，可以测量PDZ蛋白和与E6蛋白结合的 PDZ蛋白的物理性质。可以使用诸如表面等离子体谐振、圆二色谱和其他技术等直 接评蛋白结合的技术来检测致癌E6蛋白的存在。然而应当指出的是，PDZ结构域 也可以结合内源的细胞蛋白。因而，结合频率必须与不含E6癌蛋白的对照细胞比 较或应该修饰“PL探测分子”使其对于致癌E6蛋白具有显著更高的特异性(见第X 部分)。

在双步骤或夹心方法中，PL探测分子的使用与第二种捕获或检测捕获蛋白的方 法联结。所述的第二种方法可以使用与E6癌蛋白结合的抗体或第二种能在不降低 E6PL可利用性的E6蛋白的区域上与E6癌蛋白结合的化合物或蛋白。这样的蛋白 可以包括但不限于p53、E6-AP、E6-BP或设计的结合E6癌蛋白的化合物。另外， 由于已知致癌E6蛋白通过使用二价阳离子与某些DNA结构结合，也可以使用DNA 结合或Zn2+结合来检测捕获的E6蛋白的存在。另外，由于已知E6能在网状细胞 溶解物存在的情况下降解DNA和包括p53在内的某些蛋白，可以在活性检测中使 用PDZ捕获的E6蛋白。

抗体

许多生物学检测被设计成象“三明治”，其中一种抗体组成三明治的一侧。这一 方法能够通过降低本底信号并放大正确信号而提高诊断的信号/噪音比。可以产生特 异性识别诊断蛋白的抗体。由于本发明公开了使用PDZ或PL蛋白诊断病原体感染 的方法，应当产生不与PDZ-PL相互作用冲突的抗体。

为了生产抗体，可以通过注射肽的方式免疫多种动物宿主(包括但不限于兔、小 鼠、大鼠等)。所述肽可以依靠功能基团的侧链或附着在功能基团侧链上的连接物附 着在适当的载体上(如BSA或KLH)。取决于宿主物种，多种佐剂可用于增强免疫反 应，这些佐剂包括但不限于弗氏佐剂(完全和不完全的)、如氢氧化铝的矿物胶体、 如溶血卵磷脂的表面活性剂、聚醚多元醇、多聚阴离子、肽、油乳剂、钥孔虫戚血 蓝蛋白、二硝基酚以及如卡介苗(BCG)和短小棒状杆菌(Corynebacterium parvum)的 潜在有用的人佐剂。

肽的单克隆抗体可以用通过细胞系的连续培养提供抗体分子生产的任何技术进 行制备。这些技术包括但不限于最初由Koehler和Milstein，1975，Nature 256：495- 497描述的杂交瘤技术，Kosbor等，1983，Immunology Today 4：72和Cote等，1983， Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.80：2026-2030所描述的人B细胞杂交瘤技术，以及EBV 杂交瘤技术(Cole等，《单克隆抗体与癌症治疗》(Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy)，1985，77-96页，Alan R.Liss，Inc.。另外，可以使用通过将来自小鼠的 适当抗原特异性的抗体分子基因与来自人的适当生物学活性的抗体分子基因拼接生 产“嵌合抗体”(Morrison等，1984，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.81：6851-6855； Neuberger等，1984，Nature 312：604-608；Takeda等，1985，Nature 314：452-454)) 而发展出的技术。此外，可以对描述生产单链抗体的技术(美国专利No.4,946,778) 进行改进以适于生产肽特异性单链抗体。

可以通过已知技术产生含特定结合位点删除的抗体片段。例如，这样的片段包 括但不限于能通过胃蛋白酶消化抗体分子生产的F(ab’)2片段和能通过减少F(ab’)2 片段二硫键产生的Fab片段。另外，可以构建Fab表达文库(Huse等，1989，Science 246：1275-1281)以快速简便地鉴别具有针对感兴趣的肽的需要的特异性的单克隆Fab 片段。

可以将需要的肽的特异性抗体或抗体片段与例如琼脂糖连接，并在免疫层析中 使用所述抗体-琼脂糖复合物纯化本发明中的肽。见1984年Scopes著《蛋白纯化： 原则与实践》(Protein Purification：Principles and Practice)，Springer-Verlag New York， Inc.，NY和Livingstone 1974年著《酶学方法：蛋白免疫亲和层析》(Methods Enzymology： Immunoaffinity Chromatography ofProteins)34：723-731。抗体也可以为诊断应用与其 他固体支持物连接，或另外用诸如能切割比色底物的酶、荧光团、磁性颗粒或其他 可测量的物质组合物的检测手段进行标记。

抗E6蛋白的特异性抗体长期以来难以生产。与前文所述方法结合，可以使用多 种技术来提高生产或选择高亲和力抗体的可能性。一个例子是以制备待测组织或细 胞样本相同方式制备E6抗原(用以引起抗体产生)。另外，可以用以一种方式制备的 E6融合蛋白免疫，并用以不同方式制备的第二种E6蛋白筛选特异性E6抗体。应 当选择识别在不同的样本收集和制备过程中保守的E6抗原表位的抗体。在另一个 例子中，对E6抗原进行快速变复性，这样选出对制备条件不敏感的抗原表位，可 以用这样的E6抗原免疫动物。另一种可以采用的方法是使用对应于通过主要组织 相容性复合物(MHC)与T细胞受体(TCR)共有序列结合预测的E6蛋白抗原区域的 肽。还有另一种方法能使用便于生产的且已确定其抗体结合区域的E6变体(如前文 所述GST-或MBP-HPV18)。这些“抗原”区域可以用另一种类型E6肽的同源片段(例 如，另一个免疫表位)调换。这样，所述表位可能在抗体生产中具有更高的正确展示 的机会。

一般而言，合适的抗E6抗体可以通过用例如在哺乳动物细胞中生产的E6蛋白(从 而具有正确的折叠、二硫键和其他蛋白修饰)、或例如如本领域内已知的用其他氨基 酸替换半胱氨酸残基等修饰并在细菌中表达的E6蛋白免疫合适的哺乳动物进行制 备。通常，在所述方法中可以使用抗体混合物，其中每种抗体与E6蛋白的不同亚 型交叉反应。在某些实施方案中，可以使用一种与多种或全部E6蛋白交叉反应的 抗体。通常在所述方法中使用的抗体与E6蛋白结合而无论该E6蛋白是否是致癌的。

2. 其他针对捕获的E6蛋白的检测方法

已被PDZ结构域捕获的E6蛋白可以通过几种其他方法检测。已知几种与E6蛋 白结合的蛋白。精通本领域的人员可以使用其中任何一种与E6具有适当亲和力的 来检测样本中捕获并浓缩的E6蛋白的存在。此外，可能鉴别出结合E6蛋白的新的 结合蛋白或适体。第三，可以使用E6特异性的活性检测。

所述检测方法本身也可以用多种方法实行。用PDZ来捕获的常规ELISA可以设 置成为一种竞争结合方式，其中所述PDZ结构域用具有比E6蛋白更低亲和力的标 记的PL预载。这样，在存在E6的情况下，标记物被取代并观察到对应于E6存在 的信号的减弱。也包括使用结合竞争与抑制方式的其他变化形式。一种变化形式甚 至可以具有通过连接物与PDZ结构域共价结合的PL，这样该PL不能与其自己的PDZ 结构域结合。使用供体淬灭染料，当一种致癌E6蛋白的PL能置换标记的PL时， 仅能观察到信号的增强。所有这样的竞争方法必须与评估能与用于评估致癌E6蛋 白存在的PDZ结构域结合的内源PL蛋白量的对照相比进行测量。

VII.检测方法灵敏度的测量

本发明的“A”和“G”检测可用于确定PDZ配体肽与PDZ结构域多肽结合的“表观 亲和力”。在与第二种分子饱和结合所需的一种分子(例如，配体与受体的结合)的浓 度的基础上测定表观亲和力。以下提供了对PDZ-配体结合表观亲和力定量尤其有 用的方法。这些方法可用于比较不同PL探测分子构建物的灵敏度和亲和力。了解 PDZ对病原体PL的灵敏度是基本要求，因为这有助于确定为获得确定性结果所必 须检测的组织或细胞数量。

(1)GST/PDZ融合蛋白以及作为阴性对照的单独的GST与表面(例如，96孔 板)结合，并如前文对“G”检测所述的方式对该表面进行封闭和洗涤。

(2)在平板上每孔添加50微升含递增浓度(例如0.1μM，0.33μM，1μM，3.3 μM，10μM，33μM及100μM)生物素化的PL肽(例如如表3中所示的)PBS/BSA。 在一个实施方案中，所述PL肽与结合的GST/PDZ融合蛋白(以及仅GST的阴性对 照)在4℃下反应10分钟，随后在25℃下反应20分钟。所述平板用预冷的PBS洗 涤3次以去除未结合的标记肽。

(3)PL肽与固定化的PDZ结构域多肽的结合如前文对“G”检测所描述的方式 检测。

(4)对于肽的每种浓度，纯粹的结合信号通过从肽与GST/PDZ融合蛋白结合 中减去所述肽与单独的GST结合进行测定。随后将所述纯粹信号作为配体浓度的函 数作图并按照以下等式进行拟合处理(例如，通过使用Kaleidagraph软件包曲线拟合 算法，Synergy Software)，其中“信号[配体]”是PL肽浓度为“[配体]”时纯粹的结合信号， “Kd”是结合作用的表观亲和力，“饱和结合”是通过对实验数据最优化拟合的曲线拟 合算法确定的常数：

信号[配体]＝饱和结合×([配体]/([配体]+Kd))

为了可靠地使用上述等式，实验手段成功检测的最高肽配体浓度必须要大于或 至少约等于计算的Kd值(也就是说，观察到的最大结合应该约等于计算的饱和结 合)。在证明难以满足上述标准的情况下，可以使用另一种方法(见下文)。

方法2：

(1)在溶液中混合固定浓度的PDZ结构域多肽和递增浓度的标记的PL肽(用 例如生物素或荧光素标记的，代表性的肽的氨基酸序列参见表3)并使之反应。在一 个实施方案中，优选的肽浓度是0.1μM，1μM，10μM，100μM和1mM。在多种 实施方案中，合适的反应时间可以位于10分钟到2天的区间内，温度位于4℃到37℃ 的区间内。在一些实施方案中，也可以用不含PDZ结构域的蛋白作为对照进行相同 的反应(例如，如果PDZ结构域多肽是融合蛋白，可以使用该融合伴侣)。

(2)使用多种本领域内已知的方法，可以将PDZ-配体复合物与未结合的标记 肽分离。例如，复合物可以用高效排阻层析(HPSEC或分子筛)(Rabinowitz等，1998， Immunity 9：699)、亲和层析(例如使用谷胱甘肽琼脂糖颗粒)和亲和吸附(例如通过如 前文所述的与抗GST抗体包被平板结合)进行分离。

(3)使用精通本领域的人员所知的多种方法和探测器在肽配体上存在标记物 的基础上检测PDZ-配体复合物。例如，如果标记物是荧光素并且使用HPSEC实现 分离的，可以使用嵌入式的荧光探测器。结合也可以用上述针对“G”检测的方式检 测。

(4)PDZ-配体结合信号作为配体浓度的函数绘图，图形按照以下等式拟合(例 如通过使用Kaleidagraph软件包的曲线拟合算法)，其中“信号[配体]”是PL肽浓度为”[配 体]”时纯粹的结合信号，“Kd”是结合作用的表观亲和力，“饱和结合”是通过对实验 数据最优化拟合的曲线拟合算法确定的常数：

信号[配体]＝饱和结合×([配体]/([配体]+Kd))

由于对相互作用亲和力(或表观亲和力)的知识有助于以已知能力相互作用的抑制 剂的理性设计，测量标记的肽配体与PDZ结构域多肽结合的亲和力是有用的。抑制 剂在抑制中的能力应该与标记肽配体与PDZ结构域结合的表观亲和力相似(即相差 在一个数量级以内)。

这样，本发明的一个方面通过将由PDZ结构域和非PDZ结构域组成的多肽固定 在表面上，固定的多肽与多个不同浓度的配体接触，确定每个配体浓度下配体与固 定化的多肽的结合量，并在此基础上计算这种结合的表观亲和力，提供了确定PDZ 结构域和配体之间结合的表观亲和力的方法。通常，由PDZ结构域和非PDZ结构 域组成的多肽是一种融合蛋白。在一个实施方案中，融合蛋白是例如GST-PDZ融 合蛋白，但也可以使用其他融合蛋白，(例如包括PDZ结构域和多种抗原表位标签 中任意一种、生物素化信号等的融合蛋白)只要所述多肽能以不妨碍PDZ结构域的 配体结合性质的取向被固定化，例如通过经非PDZ结构域经抗该结构域抗体将所述 多肽拴在表面上而保持PDZ结构域作为自由端。已经发现，例如，PDZ-GST融合 多肽直接与塑胶平板反应得到了不是最令人满意的结果。结合亲和力的计算本身可 以使用任何合适的等式(例如，如前文所示，也可参见Cantor和Schimmel(1980)所 著《生物物理化学》(BIOPHYSICAL CHEMISTRY)，WH Freeman & Co.，San Francisco) 或软件得以确定。

这样，在一种优选的实施方案中，多肽通过该多肽与固定化的结合非PDZ结构 域的免疫球蛋白结合进行固定化(例如，在使用GST-PDZ融合多肽的情况下，抗GST 抗体)。在一种优选的实施方案中，配体与PDZ结构域多肽接触这一步骤在前文对“G” 检测的描述中所提供条件下进行。需要认识到，结合检测通常在多孔平板(例如，24 孔、96孔或384孔板)上进行。

本方法相比其他测量PDZ-PL结合亲和力的方法(通常包括不同浓度的GST-PDZ 融合蛋白与配体包被的表面接触)具有显著优点。例如，一些以前描述的测定亲和力 的方法(例如，在溶液中使用固定化的配体和GST-PDZ蛋白)没有考虑所使用的融合 蛋白的多聚化状态，导致大于一个数量级的潜在误差。

虽然不足以定量测量PDZ-PL结合亲和力，在“G检测”中所观察到的信号的绝对 值的基础上可以估算不同PDZ-PL对的相对结合强度。这一估算能反映几个因素， 包括包含亲和力和解离速度在内的相互作用的生物学相关问题。至于不同配体与特 定含PDZ结构域蛋白的结合的比较，绝对结合信号的差异可能主要与感兴趣的相互 作用的亲和力和/或解离速度有关。

IX. 检测方法特异性的测量

如前文所述，本发明提供了包括如前文所述“G”检测和亲和力检测的高通量方法 在内的PDZ-配体相互作用分析的强大方法。在本发明的一个实施方案中，测定了 一种特定配体与多种PDZ蛋白的亲和力。典型的“多种”是至少5种、经常是至少25 种或至少40种不同的PDZ蛋白。在一种优选的实施方案中，多种不同的PDZ蛋白 来自特定的组织(例如中枢神经系统、脾、心肌、肾)或特定种类或类型的细胞(例如， 造血细胞、淋巴细胞、神经细胞)等。在最优选的实施方案中，多种不同的PDZ蛋 白代表了所有已知或可能在所述组织或细胞中表达的PDZ蛋白(例如，已知存在于 淋巴细胞内的所有PDZ蛋白)的实质性组份(例如，通常是指大部分，更经常是指至 少80％)。在一个实施方案中，所述“多种”是指至少50％、通常至少80％、至少90 ％或这里所公开的造血细胞中表达的所有PDZ蛋白。

在本发明的一个实施方案中，测定了一种配体与多种PDZ蛋白的结合。使用这 一方法，能够鉴别以特殊特异性与该配体结合的特定PDZ结构域。结合可以称为“特 异的”，如果该配体与所述特定PDZ结构域的亲和力至少2倍于其与多种PDZ结构 域(例如，这一细胞类型中存在的)中其他PDZ结构域的结合。结合被认为是“非常 特异的”，如果其亲和力比多种PDZ结构域中任何其他PDZ结构域至少高10倍， 或另外，比所述多种PDZ结构域中至少90％、更经常的是95％的其他PDZ高至少 10倍。类似的，结合被认为是“极其特异的”，如果其至少高100倍。例如，配体可 以1μM的亲和力与两种不同的PDZ结合，而不以低于100μM的亲和力与40种PDZ 中的其他PDZ结合。这可以认为与所述这两种PDZ特异结合。类似的对特异性的 测量用于描述一种PDZ与多种PL的结合。

需要认识到，高特异性的PDZ-PL相互作用代表了对于实现所希望的生物学效 果而言潜在更有价值的靶点。经常希望抑制剂或增强子具有以高特异性作用的能 力。最特异的PDZ-配体相互作用尤其也是用于该相互作用的特异性检测或瓦解一 种相互作用的诊断靶点。

这样，在一个实施方案中，通过提供多种不同的固定化多肽，其中每一种所述 多肽由一个PDZ结构域和一个非PDZ结构域构成；测定配体与每种所述多肽的亲 和力并比较配体与每种所述多肽结合的亲和力，其中当配体以比结合不含所述特定 PDZ结构域的固定化多肽高至少两倍的亲和力结合含所述特定PDZ结构域的固定 化多肽时，配体与特定PDZ结构域之间的相互作用被认为具有高特异性，本发明提 供了一种鉴别特定PDZ结构域与已知的或可能结合至少一种PDZ结构域的配体之 间高特异性相互作用的方法。

在相关方面，测定了具体PDZ结构域与多种配体(或可能的配体)结合的亲和力。 例如，在一个实施方案中，通过提供由所述PDZ结构域和非PDZ结构域构成的固 定化多肽；测定多种配体中的每一种对该多肽的亲和力并比较每种配体与多肽结合 的亲和力，其中当配体以比其他待测配体高至少两倍的亲和力结合含所述特定PDZ 结构域的固定化多肽时，特定配体与PDZ结构域之间的相互作用被认为具有高特异 性，本发明提供了一种鉴别PDZ结构域与已知的或可能结合至少一种PDZ结构域 的配体之间的高特异性相互作用的方法。这样，结合可以称为“特异的”，如果PDZ 对特定PL的亲和力至少2倍于该PDZ与多种PL(例如，存在于这一细胞类型中的) 中其他PL结合的亲和力。结合被认为“非常特异的”，如果该亲和力比与多种PL中 任何其他PL的至少高10倍，或另外，比确定的多种PL中至少90％、更常见的是 95％其他PL高至少10倍。相似的，结合被认为是“极其特异的”，如果至少高100 倍。通常“多种PL”是指至少5种不同的配体，更常见的是至少10种不同配体。

A.使用阵列进行全面预测

本发明发明人的一个发现是与PDZ蛋白和PL蛋白之间的相互作用所起到的重 要广泛的作用相关的，尤其是在参与免疫应答的造血细胞和其他细胞的生物学功能 中。进一步发现，通过大量PDZ-PL相互作用的分析(例如同时分析)可以探知有价 值的信息。在优选的实施方案中，该分析包括了在特定组织(如脾脏)或种类或类别 的细胞(例如，造血细胞、神经细胞、淋巴细胞、B细胞、T细胞等)中表达的所有PDZ 蛋白。另外，该分析包括至少约5种、或至少约10种、或至少约12种、或至少约 15种及经常是至少约50种不同的多肽，直到约60种、约80种、约100种、约150 种、约200种、或甚至更多不同的多肽；或已知或可能在所述组织或细胞中表达的 所有PDZ蛋白(例如，已知存在于淋巴细胞中的所有PDZ蛋白)的实质性组分(例如， 通常是大部分，更常见的是至少80％)。

需要认识到，本发明中的阵列和方法是针对PDZ和PL相互作用的分析的，并 包括选择这样的蛋白用于分析。虽然本发明中的技术和方法可以包括或涉及一小部 分对照多肽，它们通常不包括显著数量的不含PDZ或PL结构域的蛋白或融合蛋白(例 如，通常本发明的方法或技术中至少约90％固定化的或排列的多肽是PDZ或PL序 列蛋白，更常见的是至少约95％或至少约99％)。

由本公开显而易见的是，优选的是对相对大量不同的相互作用进行同时分析。 在这里的上下文中，“同时”是指在同一时间对几个不同的PDZ-PL相互作用(或待测 物质对这样的相互作用的影响)的分析进行评估。通常所述分析以高通量的(例如自 动机械)方式进行。这一同时分析的方法的一个优点是允许精确比较多种不同的 PDZ-PL相互作用。例如，如在本说明书其他地方详细解释的，同时分析(并使用下 文所述的阵列)便于例如直接比较一种物质(例如潜在的相互作用抑制剂)对组织或细 胞中PDZ和/或PL的实质性部分之间相互作用的影响。

相应的，本发明的一个方面提供了一种将含PDZ结构域和非PDZ结构域的多肽 固定在表面上的阵列。通常，该阵列包括至少约5种、或至少约10种、或至少约12 种、或至少约15种以及经常至少约50种不同的多肽。在一种优选的实施方案中， 不同的PDZ蛋白来源于一种特定的组织(例如，中枢神经系统、脾脏、心肌、肾脏) 或一种特定种类或类别的细胞(例如，造血细胞、淋巴细胞、神经细胞)等。在一种 最优选的实施方案中，多种不同的PDZ蛋白代表了在所述组织或细胞中已知或可能 表达的所有PDZ蛋白(例如，已知存在于淋巴细胞中的所有PDZ蛋白)的实质性组 分(例如，通常是其大部分，更常见的是至少其60％、70％或80％)。

某些实施方案是包括多种(通常至少5种、10种、25种、50种)存在于特定的感 兴趣的细胞中的PDZ蛋白的阵列。在这一上下文中，“阵列”是指固定化的多肽的有 序的序列，其中每种多肽的身份与其位置相连。在一些实施方案中，所述的多种多 肽排列在“公共”区域，这样它们可以同时与溶液(例如，含配体或待测物质)接触。 例如，多种多肽可以位于基片上、平板上或类似表面上，这些表面可以是塑胶、玻 璃、金属、硅、颗粒或其他能固定化蛋白的表面。在一种不同的实施方案中，不同 的固定化的多肽被置于分割的区域内(如24孔板、96孔板、384孔板等多孔平板的 不同的孔内)。需要认识到，通过使用串联的多个阵列可以获得类似的优势。

B.PDZ-PL抑制特征分析

本发明的一个方面提供了一种在大量PDZ-配体相互作用(例如，美国专利申请 09/724553中描述的多种PDZ-配体相互作用；如前文所述的大部分在特定细胞或组 织(如宫颈组织)中鉴定的PDZ-配体等)中测定一种待测化合物是否抑制任何PDZ-配 体相互作用的方法。在一个实施方案中，感兴趣的PDZ结构域以GST-PDZ融合蛋 白的形式表达并如这里所述的方式固定化。对于每一种PDZ结构域，以已知亲和力 与该结构域结合的标记配体以如这里所述的方式进行鉴定。

对于任何已知的或可能的PDZ-PL相互作用的调控剂(例如抑制剂)来说，知道哪 种相互作用被抑制(或增强)是有益的。这一信息可以用作针对存在病原体的诊断标 志物(例如，致癌HPV病毒株)。被一种特定物质抑制PDZ相互作用的特征被称为 该物质的“抑制特征”并在以下进行了详细描述。被一种特定物质强化PDZ相互作用 的特征被称为该物质“强化特征”。对于精通本领域的人员来说，在对抑制特征的描 述的指导下，如何确定一种物质的强化特征是显而易见的。本发明提供了在单一检 测中确定一种物质的PDZ相互作用(抑制/强化)特征的方法。

本发明的一个方面通过以下步骤，提供了测定一种化合物的PDZ-PL抑制特征 的方法：提供(i)多种不同的固定化多肽，每种所述的多肽由PDZ结构域和非PDZ结 构域构成以及(ii)多种相应的配体，其中每种配体结合至少一种(i)中的PDZ结构域， 然后在存在和不存在待测化合物的情况下将每种(i)中所述的多肽与(ii)中所述的相应 的配体接触，并测定对于每种多肽-配体对，待测化合物是否抑制所述的固定化多肽 和相应配体之间的结合。

通常所述的“多种”是指至少5种、通常是至少25种、或至少40种不同的PDZ 蛋白。在一种优选的实施方案中，多种不同的配体和多种不同的PDZ蛋白来自相同 的组织或特定种类或类型的细胞，例如，宫颈细胞、阴茎细胞、肛门细胞等。在一 种最优选的实施方案中，多种不同的PDZ代表了已知或可能在所述组织或细胞中表 达的所有PDZ的实质性部分(例如至少80％)，例如已知存在于淋巴细胞中的所有 PDZ(例如，这里所公开的在造血细胞中表达的至少80％、至少90％或所有的PDZ)。

在一个实施方案中，抑制特征测定如下：多种(例如，所有已知的)在一种细胞(例 如，宫颈细胞)中表达的PDZ结构域以GST融合蛋白的形式表达并如前文所述以不 改变其配体结合性质的方式固定化。对于每种PDZ结构域而言，确定了以已知亲和 力与该结构域结合的标记配体。如果在淋巴细胞中表达的PDZ结构域的集合用 {P1...Pn}表示，任意给定的PDZ结构域Pi以亲和力Kdi与标记的配体Li结合。 为了测定待测物质“化合物X”的抑制特征，可以在如下的行用A-H标记、列用1-12 标记的96孔板上进行“G”检测(见前文)。列1用P1包被并洗涤。在列1的每个经过 清洗的包被孔中添加含(行B、D、F、H)或不含(行A、C、E、G)浓度约1到1000μM 之间的待测化合物X的浓度为0.5Kd1的相应的配体L1。列2用P2包被，添加含 或不含抑制剂X的L2(浓度0.5Kd2)。另外的PDZ结构域和配体用相似方式检验。

化合物X被认为抑制Li与Pi的结合，如果列i中含X的孔的平均信号低于该 列中同等的不含X的孔的平均信号的一半。这样，在这一单一检测中测定了被化合 物X抑制的淋巴细胞PDZ的全部集合。

在一些实施方案中，待测化合物X是一种化合物的混合物，例如如前文所述的 组合化学合成产物。在一些实施方案中，待测化合物是已知具有所希望的生物学作 用的，所述检测用于确定其作用机制(即该生物学作用是否是由于对PDZ-PL相互作 用的调节)。

显而易见的是，一种仅调节一组中(例如，所有已知的淋巴细胞PDZ的组，至少 10种、至少20种或至少50种PDZ结构域的组)一种或几种相互作用的的物质比调 节多种或大部分相互作用的物质具有更高的特异性。通常，调节一组中小于20％的 PDZ结构域的物质被认为是“特异性”抑制剂，小于6％的是“非常特异性”抑制剂， 调节单个PDZ结构域的是“最高特异性”抑制剂。

也需要认识到，“化合物X”可以是含化合物混合物的组合物(例如，通过组合化 学方法生成的)而不是单一化合物。

预计了这一检测方法的几种变形：

在一些选择性实施方案中，上述检测方法使用变化浓度而不是固定浓度的待测 化合物X。这样可以如上述方式测定对于每种PDZ的X的Ki值。

在一种选择性的实施方案中，代替用一种具体的标记配体Li将每种PDZ-PL配 对的做法，创建了不同标记配体的混合物，对于每种PDZ而言，该混合物中的至少 一种配体与该PDZ充分结合以在“G”检测中检测这一结合。这一混合物随后用于每 种PDZ结构域。

在一个实施方案中，已知化合物X具有所希望的生物学作用，但其具有这一作 用的化学机制是未知的。可以使用本发明的检测方法以确定化合物X是否通过结合 PDZ结构域而具备了其作用。

在一个实施方案中，对含PDZ结构域蛋白按其生物学功能进行分组，例如分成 与转录调控相对的调控趋化作用的PDZ蛋白。一种特定功能的理想抑制剂(例如包 括但不限于抗趋化剂、抗T细胞活化剂、细胞周期调控、膜泡运输、凋亡等)应该 抑制参与该功能(例如趋化作用、激活)的多种PDZ-配体相互作用但不影响其他相互 作用。这样，在一个实施方案中该检测用于筛选和设计特异性阻碍一种特定功能的 药物。例如，由于在给定浓度下，该物质抑制2种或更多参与化学趋化的PDZ但抑 制3种以下其他PDZ，或该物质抑制参与化学趋化的PDZ的Ki值比抑制其他PDZ 的高10倍以上，可以对一种设计用来阻断趋化作用的物质进行鉴定。这样，本发 明提供了一种鉴定抑制第一批选出的PDZ-PL相互作用或多种相互作用但不抑制第 二批选出的PDZ相互作用或多种相互作用的物质的方法。所述两批(或更多)相互作 用可以在PDZ蛋白的已知生物学功能、PDZ蛋白的组织特异性或任何其他标准的 基础上进行进行选择。而且，所述检测方法可以用于确定引起所希望效果而避免不 希望效果的有效剂量(即药物浓度)。

C.PDZ-PL相互作用的激动剂和拮抗剂

如这里所描述的，细胞(如宫颈细胞)中PDZ蛋白和PL蛋白的相互作用可能被病 原体的存在而瓦解或抑制。病原体可以通过使用这里所描述的筛选方法进行鉴定。 PDZ-病原体PL相互作用或PDZ-细胞PL相互作用的激动剂和拮抗剂在辨别或确认 具体的相互作用中是有用的。在一些实施方案中，一种激动剂能提高一种PDZ-病 原体PL相互作用的灵敏度。在其他实施方案中，可以使用一种PDZ-病原体PL相 互作用的拮抗剂，以检验一种相互作用的特异性。在一个实施方案中，使用这里所 公开的基序以设计抑制剂。在一些实施方案中，本发明的拮抗剂具有建立在表3中 所列举的PL结构域蛋白C末端残基上的结构(例如肽序列)。在一些实施方案中， 本发明的拮抗剂具有建立在这里所公开的或美国专利申请09/724553中所公开的PL 基序上的结构(例如肽序列)。

本发明的PDZ/PL拮抗剂和激动剂可以是大量化合物中任意的，可以是天然的 或合成的、有机的或无机的，并包括聚合物(例如，寡聚肽、多肽、寡核苷酸和多核 苷酸)、小分子、抗体、糖类、脂肪酸、核苷酸及核苷酸类似物、天然结构类似物(例 如类肽、核酸类似物等)、以及大量其他化合物。虽然，为了表述方便，本发明的论 述主要涉及PDZ-PL相互作用的拮抗剂，需要认识到，PDZ-PL相互作用激动剂也 可以在这里所公开的方法中使用。

一个方面，本发明的肽和肽类似物或模拟物包含与感兴趣的细胞中的PDZ结构 域结合的氨基酸序列。在一个实施方案中，拮抗剂包括含有对应于表3中所列举的 或美国专利申请09/724553中的PL蛋白羧基端序列的序列的肽，例如，表3所列 举的肽。通常，所述的肽包括至少PL蛋白C末端的2个、3个或4个残基，并经 常所述的抑制肽包括来自PL蛋白C末端的4个以上的残基(例如，至少5、6、7、8、 9、10、12或15个残基)。

在一些实施方案中，所述抑制剂是一种肽，具有例如PL C末端蛋白序列的序列。

在一些实施方案中，拮抗剂是一种包含这样一段序列的融合蛋白。含跨膜转运 氨基酸序列的融合蛋白尤其有用。

在一些实施方案中，抑制剂是具有抑制活性的PL C末端蛋白序列的保守变体。 在一些实施方案中，拮抗剂是PL C末端序列的拟肽。

在一些实施方案中，抑制剂是小分子化合物(即分子量小于1kD的)。

D.肽拮抗剂

在一个实施方案中，拮抗剂由一条具有表3中列举的PL蛋白羧基末端序列的肽 构成。所述肽包括PL蛋白的至少2个C末端残基，通常所述抑制肽包括来自PL 蛋白C末端2个以上残基(例如，至少3、4、5、6、7、8、9、10、12或15个残基)。 所述肽可以是多种长度中的任意一种(例如，至少2个、至少3个、至少4个、至少 5个、至少6个、至少8个、至少10个或至少20个残基)并可以包含不是来自PL 蛋白的附加残基。需要认识到，短的PL肽有时用于具有类似性质的其他小分子的 理性设计。

虽然抑制肽与PL蛋白共有的残基最常见的是位于肽的C末端，然而，在一些 实施方案中，该序列位于内部。类似的，在有些情况下，抑制肽包括来自PL蛋白 C末端附近而不是C末端的PL序列的残基(参见，Gee等，1998，J Biological Chem. 273：21980-87)。

在提及所述短序列与PDZ结构域相互作用的能力时，PL蛋白羧基端序列有时 被称为“核心PDZ基序序列”。例如，在一个实施方案中，“核心PDZ基序序列”包 括最后4个C末端氨基酸。如上所述，PDZ基序序列的这4个氨基酸核心可以在其 氨基端包括附加的氨基酸以进一步提高其结合亲和力和/或稳定性。因而，在一个实 施方案中，所述PDZ基序序列肽可以由4到15个氨基酸组成。该序列优选的长度 是6-10个氨基酸。所述PDZ基序序列更优选地包括8个氨基酸。所述核心序列氨 基末端附加的氨基酸可以是得自每种造血细胞表面受体中的天然序列或是合成的连 接序列。附加的氨基酸也可以被保守替代。当从C末端开始的第三个残基是S、T 或Y时，这一残基可以在使用所述的肽之前被磷酸化。

在一些实施方案中，肽和非肽抑制剂是小分子，例如，如果是肽的话长度小于10 个氨基酸残基。据进一步的报道，有限数量的配体氨基酸直接与PDZ结构域接触(通 常少于8个氨基酸)(Kozlov等，2000，Biochemistry 39，2572；Doyle等，1996，Cell 85： 1067)，象C末端3个氨基酸这样短的肽通常保持了与更多氨基酸(＞15)的肽相似的 结合性质(Yanagisawa等，1997，J.Biol.Chem.272：8539)。

E.肽的变体

在对PDZ结合肽和PDZ-PL相互作用抑制序列进行鉴别之后，可以制造这些序 列的变体并可以检测所获得的肽变体的PDZ结构域结合或PDZ-PL抑制活性。在实 施方案中，所述变体具有与起始肽相同或不同的结合PDZ结构域的活性。通常，这 样的氨基酸替换是保守的，即所述氨基酸残基被具有与所取代的残基相似的物理和/ 或化学性质的其他氨基酸残基所取代。优选的保守氨基酸替代是其中一个氨基酸被 属于指定的相同种类中的另一个氨基酸所取代。

F.肽模拟物

在对PDZ结合肽和PDZ-PL相互作用抑制序列进行鉴别之后，可以用常规方法 制备肽模拟物，并且可以用本发明的检测方法证实所述模仿物的抑制活性。因而， 在一些实施方案中，激动剂或拮抗剂是PL C末端序列的肽模拟物。精通本领域的 技术人员应当承认，合并成模拟物的单个的合成的残基和多肽可以用在科技和专利 文献(例如，Gilman等人编的《有机合成合集》(Organic Syntheses Collective Volumes)， John Wiley & Sons，Inc.，NY中充分描述的多种工艺和方法进行合成。合并成模拟 物的多肽也可以用如例如Di Marchi等人在美国专利No.5,422,426中所描述的固相 合成工艺生成。本发明的模仿物也可以采用组合方法进行合成。多种生成肽库和类 肽库的技术是熟知的，并包括，例如多针(multipin)法、茶叶袋(tea-bag)法和分开-结 合-混合(split-couple-mix)技术；参见，例如，al-Obeidi(1998)Mol.Biotechnol.9： 205-223；Hruby(1997)Curr.Opin.Chem.Biol.1：114-119；Ostergaard(1997)Mol. Divers.3：17-27；Ostresh(1996)Methods Enzymol.267：220-234。

G.小分子化合物

在一些实施方案中，激动剂或拮抗剂是小分子化合物(即具有小于1kD的分子 量)。筛选小分子化合物的方法是本领域内熟知的并包括前文所述的那些方法。

X. 最优化PL探测分子的方法

虽然前文所述主要关于鉴别PDZ结构域多肽与PL蛋白之间的相互作用，前文 所述的检测方法和其他检测方法也可以用于鉴别其他分子(例如，肽模拟物、小分子 化合物等)与PDZ结构域序列的结合。例如，使用这里公开的检测方法，可以针对 例如与PDZ结构域特异结合的分子筛选组合文库和其他文库。文库筛选可以通过多 种广泛所知的方法中的任一种方法得以实现。参见例如以下公开了的肽库筛选的参 考文献：Parmley和Smith，1989，Adv.Exp.Med.Biol.251：215-218；Scott和Smith， 1990，Science 249：386-390；Fowlkes等，1992，BioTechniques 13：422-427；Oldenburg 等，1992，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 89：5393-5397；Yu等，1994，Cell 76：933-945； Staudt等，1988，Science 241：577-580；Bock等，1992，Nature 355：564-566；Tuerk 等，1992，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 89：6988-6992；Ellington等，1992，Nature 355： 850-852；Ladner等人的美国专利No.5,096,815，美国专利No.5,223,409，以及美国 专利No.5,198,346；Rebar和Pabo，1993，Science 263：671-673；以及PCT公开No.WO 94/18318。

在一种具体的实施方案中可以通过将文库成员与固定在固体支持物(例如，如以 上在“G”检测中所述的)上的PDZ结构域多肽接触并收获那些与该蛋白结合的文库成 员进行筛选。这样的筛选方法(术语称为“平底锅”(panning)技术)的实例通过Parmley 和Smith，1988，Gene 73：305-318；Fowlkes等，1992，BioTechniques 13：422-427； PCT公开No.WO 94/18318；以及在上文所引用的参考文献中的例子进行描述。

在另一个实施方案中，可以使用酵母中挑选相互作用蛋白的双杂交系统(Fields 和Song，1989，Nature 340：245-246；Chien等，1991，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 88： 9578-9582)来鉴别与含PDZ结构域蛋白特异结合的分子。此外，对经鉴别的分子进 一步检测其抑制跨膜受体与PDZ结构域相互作用的能力。

在本发明的一个方面，鉴别了PDZ蛋白和PL蛋白之间相互作用的拮抗剂。在 一个实施方案中，使用上文所述“A”检测的一种修正以鉴别拮抗剂。在一个实施方 案中，使用上文所述“G”检测的一种修正以鉴别拮抗剂。

在一个实施方案中，使用筛选方法来检测与PDZ结构域特异结合的分子。这样 的分子作为PDZ蛋白介导的细胞功能(例如，如T细胞活化的细胞活化、膜泡转运、 细胞因子释放、生长因子、转录改变、细胞骨架重构、细胞运动、趋化等)的激动剂 或拮抗剂是有用的。在一个实施方案中，为了药物开发运用这样的检测方法来筛选 白细胞活化抑制剂。本发明从而提供了检测与含PDZ结构域蛋白特异结合的分子的 检测方法。例如，可以使用表达编码PDZ结构域的核酸的重组细胞来生产这些检测 方法中的PDZ结构域并筛选与所述结构域结合的分子。分子与所述PDZ结构域(或 其片段)在经确定的条件下接触。可以用于实行前述内容的方法是本领域内所熟知 的。

普通技术人员需要意识到，在一个实施方案中，通过在存在和不存在已知的或 候选拮抗剂的情况下实施A或G检测，对拮抗剂进行鉴别。当在一种化合物存在 的情况下观察到结合减弱时，该化合物被确定为一种拮抗剂。在存在一种化合物的 情况下结合的提高表示该化合物是一种激动剂。

例如在一种检测中，通过在两者能够形成复合物的条件下(除了存在待测化合物 的情况)，在存在和不存在待测化合物的情况下PDZ结构域多肽与PL肽的接触，并 检测在存在和不存在待测化合物情况下该复合物的形成，可以确定待测化合物是 PDZ蛋白与PL蛋白之间结合的抑制剂(拮抗剂)。需要意识到，在存在该待测化合 物时的复合物形成少于不存在该化合物时的复合物形成表示该待测化合物是PDZ蛋 白-PL蛋白结合的抑制剂。

在一个实施方案中，在一种候选抑制剂存在或不存在的情况下使用“G”检测。在 一个实施方案中，在一种候选抑制剂存在或不存在的情况下使用“A”检测。

在一个实施方案中(其中使用了G检测)，如前文所述将一种或多种含PDZ结构 域的GST融合蛋白(和包括非融合的GST蛋白在内的适当的对照)结合到96孔板的 孔的表面。所有融合蛋白结合在多个孔中，这样可以进行适当的对照和统计学分析。 在孔中添加含待测化合物(通常以多个不同的浓度)的BSA/PBS。随即在每个孔中添 加30微升终浓度为例如约2μM到约40μM之间的(通常为5μM、15μM或25μM)已 知与相应PDZ结构域结合的(参见例如表4)可检测标记(如生物素化的)肽。然后使 该混合物与结合在表面上的PDZ融合蛋白在4℃下反应10分钟，所后在25℃再 反应20分钟。从所述表面用冰冷的PBS3次洗脱未结合的肽并在待测化合物存在和 不存在的情况下测定所述肽的结合量。通常，对于每组重复的孔(例如一式两份)通 过从这些孔中肽结合的原始测量值中减去单独GST本底值对结合水平进行测量。

在另一个实施方案中，在一种待测候选化合物存在和不存在的情况下进行A检 测来鉴别PDZ-PL相互作用的抑制剂。

在一个实施方案中，当一种待测化合物的浓度小于或等于1mM(例如，小于或等 于：500μM、100μM、10μM、1μM、100nM或1nM)，在存在该待测化合物的情况下 PDZ结构域(P)与PL序列(L)的结合低于该待测化合物不存在的情况下两者结合的约 50％(在多种实施方案中，低于约25％、低于约10％或低于约1％)时，这一待测化 合物被确定为所述PDZ结构域和PL序列结合的特异性抑制剂。优选的，在待测化 合物存在的情况下P与L结合的纯粹信号加上存在待测化合物时信号的6倍标准误 差小于不存在该待测化合物时的结合信号。

在一个实施方案中，通过使用单一的PDZ蛋白-PL蛋白对(例如，一种PDZ结 构域融合蛋白和一种PL肽)对抑制剂进行检测。在一种相关的实施方案中，所述检 测通过使用多种蛋白对(诸如表4中列举的多种不同蛋白对)进行。

在一些实施方案中，希望确定在给定浓度下抑制一种PL-PDZ对的结合，但不 抑制(或以更弱程度抑制)特定的第二种PL-PDZ对的结合的化合物。这些拮抗剂可 以通过进行一系列使用候选抑制剂和不同PL-PDZ对的检测并比较所述检测结果进 行鉴别。本发明考虑到了所有这样的配对组合(例如，待测化合物以比抑制PL1与 PDZ2的结合或PL2与PDZ2的结合更大程度抑制PL1与PDZ1的结合)。重要的是 需要意识到，在表4中所提供的以及这里所公开的数据(以及可以通过使用本说明书 所描述的方法生成的其他数据)基础上可以容易地设计具有不同特异性的抑制剂。

例如，按照本发明，可以测定PDZ-PL相互作用的一种抑制剂的Ki值(“能力”)。 Ki值是产生一种生物学效果所要求的抑制剂浓度的度量。例如，足以导致细胞内抑 制剂浓度达到至少约1倍到100倍Ki值之间的PDZ-PL相互作用的抑制剂量作用预 计能够抑制由靶PDZ-PL相互作用介导的生物学反应。在本发明的一个方面，以上 述方法测定的PDZ-PL结合的Kd测量法用于测定Ki。

这样，在本发明的一个方面，通过在表面上固定一种由PDZ结构域和非PDZ结 构域组成的多肽，将该固定的多肽与配体和抑制剂的多种不同混合物接触(其中所述 不同混合物由固定量的配体和不同浓度抑制剂构成)，测定在不同的抑制剂浓度下结 合的配体数量并在不同浓度抑制剂下结合的配体数量基础上计算结合的Ki值，提 供了一种测定PDZ结构域与配体之间相互作用的抑制剂或可能的抑制剂的能力(Ki 值)的方法。在一个实施方案中，所述多肽通过和与非PDZ结构域结合的固定化的 免疫球蛋白结合进行固定化。这一基于上述“G”检测的方法尤其适于PDZ-配体相互 作用的抑制剂的Ki值的高通量分析。进一步，使用这一方法测量了PDZ-配体相互 作用的抑制本身而没有被亲和作用扭曲测量法。

通常，对至少一部分配体进行可检测地标记以便对配体结合的简便定量。

需要认识到，挑选配体浓度和抑制剂浓度以允许对抑制进行有目的的检测。这 样，其结合被阻断的配体浓度接近于或小于其结合亲和力(例如，优选的是小于相互 作用的5XKd值，更优选的是小于2XKd值，最优选的是小于1XKd)。因而，配体 通常以低于2Kd值(例如在约0.01Kd和2Kd之间)的浓度存在，待测抑制剂的浓度 通常介于1nM到100μM之间(例如，最高浓度为10μM或1mM的4倍稀释系列)。 在一种优选的实施方案中，Kd值通过用前文所公开的检测方法测定。

在不同浓度抑制剂存在下结合的配体数量的基础上，结合的Ki值可以通过本领 域内日常使用的多种方法中的任何一种方法进行计算。在一种说明性的实施方案 中，例如，将标记配体的结合相对于抑制剂浓度的图示按照以下等式进行拟合：

S抑制剂＝S0*Ki/([I]+Ki)

其中，S抑制剂是浓度为[I]的抑制剂存在时与固定的PDZ结构域结合的标记配体 的信号，而S0是不存在抑制剂时的信号(即[I]＝0)。通常[I]用摩尔浓度表示。

在本发明的另一个方面，通过在表面上固定由PDZ结构域和非PDZ结构域构成 的多肽，在存在待测物的情况下将固定化多肽与配体结合并测定结合的配体量，以 及比较存在所述待测物时结合的配体量和不存在该待测物时与多肽所结合的配体 量，对PDZ结构域和配体之间结合的增强子(有时称为激动剂或促进素)进行鉴别。 与不存在待测物时相比，存在待测物时的结合至少高两倍(经常至少高5倍)，这表 明该待测物是增强PDZ结构域与配体结合的物质。如上文所指出的，增强PDZ-配 体相互作用的物质对于干扰(调控紊乱)要求正常PDZ-配体功能的生物学事件(例如， 癌细胞分裂和转移以及免疫细胞活化和迁移)来说是有用的。

本发明也提供了测定PDZ-配体相互作用增强子“能力”或“K增强子”的方法。例如， 按照本发明，通过例如使用通过上文所述方法测定的PDZ-PL结合的Kd值，可以 测定PDZ-PL相互作用增强子的K增强子值。K增强子值是预计具有生物学效果的增强 子浓度的度量。例如预计使用足以导致细胞内增强子浓度达到至少约0.1到约100 k增强子值之间(例如介于0.5到50K增强子值之间)量的PDZ-PL相互作用的增强子可以干 扰由目标PDZ-PL相互作用介导的生物学反应。

这样，本发明的一个方面，通过在表面上固定由PDZ结构域和非PDZ结构域构 成的多肽，将固定的多肽与配体和增强子的多种不同的混合物接触(其中所述不同的 混合物由至少其中一部分经可检测标记的固定量的配体和不同浓度的增强子构成)， 测定不同浓度增强子下结合的配体量并在不同浓度增强子浓度下结合的配体量的基 础上从结合计算所述增强子的能力(K增强子值)，提供了一种测定PDZ结构域和配体 之间结合的增强子或可能的增强子的能力(K增强子值)。通常，所述配体的至少一部 分是经可检测标记的以允许对配体结合进行简便定量。这一基于上述“G”检测的方 法尤其适于对PDZ-配体相互作用增强子的K增强子值进行高通量分析。

需要认识到的是，配体浓度和增强子浓度是经挑选的以对增强的结合进行有目 的的检测。因而，配体浓度通常介于约0.01Kd到约0.5Kd之间，待测物/增强子浓 度通常介于1nM到1mM之间(例如，最高浓度为10μM或1mM的四倍稀释系列)。 在优选的实施方案中，Kd值通过使用前文公开的检测方法测定。

结合能力可以通过多种基于不同浓度增强子或促进素下结合的配体量的常规方 法测定。例如，可以按以下等式对标记配体结合相对于增强子浓度的图示进行拟合：

S([E])＝S(0)+S(0)*(D增强子-1)*[E]/([E]+K增强子)

其中“K增强子”是增强化合物的能力，“D增强子”是添加饱和量的增强化合物时获得 的标记配体结合的提高倍数，[E]是增强子的浓度。需要理解的是，饱和量是指进一 步添加不会显著提高结合信号的增强子浓度。由于它描述了能在靶细胞中导致 PDZ-PL相互作用的调控紊乱引起的生物学效果的所述增强化合物的浓度，对“K增强子 ”的认识是有益的。典型的治疗浓度介于约0.1到100K增强子值之间。

对于某些相互结合并已经获得其Kd值的PDZ蛋白和PL蛋白，进行了附加检测 以确定某些药物化合物是否能拮抗或增强所述的相互作用。除了50微升10μM生 物素化PL肽溶液而不是如检测法步骤(2)所述的20μM溶液与带有PDZ结构域多肽 的表面反应以外，存在和不存在待测化合物时的检测均按如上述G’检测进行。

另一种提高PDZ-PL相互作用特异性或灵敏度的方法是通过诱变并选择高亲和 力或高特异性的变体。可以应用诸如UV、化学(例如EMS)或生物诱变(例如分子改 组(Molecular shuffling)或DNA聚合酶诱变)的方法创建编码PDZ结构域或PL结构 域的DNA突变。然后可以由变体生产蛋白并用本说明书所述的多种方法(例如，“A” 检测、“G”检测或酵母双杂交)对其进行检测。通常来说，人们可以检测对于其他细 胞PL(如第IX部分所述)具有降低的亲和力，在突变的PDZ结构域和待测样本(如致 癌的E6 PL)之间高亲和力结合的突变体。这些方法是精通本领域的技术人员所知 的，本说明书中的例子并不意味着限制。

XI. 重组探测分子合成

如在“发明背景”部分所指出的，含PDZ结构域蛋白参与大量生物学功能，这包 括但不限于：膜泡运输、肿瘤抑制、蛋白分选、膜极性的建立、凋亡、免疫应答的调 节和神经突触形成的组织。通常而言，这一蛋白家族经常作为几个蛋白之间的桥梁 或调节其他蛋白的功能，具有促进多蛋白复合物装配的共有功能。此外，也如前文 所指出的，这些蛋白基本上在所有细胞类型中都有发现。因此，检测不适当的PDZ-PL 相互作或异常的相互作用可以用于诊断大量生物学和生理学状态。尤其是通过使用 PDZ结构域可以对来自病原体PL蛋白的检测进行诊断。本发明中的大部分但不是 全部实施方案要求向用于检测的PDZ或PL蛋白添加可检测的标记物。下面是给出 的实例。

A.化学合成

本发明中的肽或其类似物可以实际上使用任何本领域已知的用于制备肽和肽类 似物的技术进行制备。例如，使用常规的溶液或固相肽合成并从树脂上切下随后纯 化的工艺(Creighton著，1983，《蛋白结构与分子原则》(Protein Structures And Molecular Principles)，W.H.Freeman and Co.，N.Y)，可以制备线性的肽。这里所 述的合成肽的适当的方法是本领域内熟知的。合成肽的成分可以通过氨基酸分析或 测序证实(例如，通过Edman降解法和质谱)。

此外，所述肽的类似物和衍生物可以化学合成。本发明中的肽的每个氨基酸之 间的连接可以是酰胺、取代的酰胺或酰胺的电子等排物。非经典氨基酸或化学氨基 酸类似物可以以取代或添加的形式被引入序列中。非经典氨基酸包括但不限于：普通 氨基酸的D-异构体、α-氨基异丁酸、4-氨基异丁酸、Abu、2-氨基丁酸、γ-Abu、ε- Ahx、6-氨基己酸、Aib、2-氨基异丁酸、3-氨基丙酸、鸟氨酸、正亮氨酸、正缬氨 酸、羟基脯氨酸、肌氨酸、瓜氨酸、磺丙氨酸、t-丁基甘氨酸、t-丁基丙氨酸、苯基 甘氨酸、环己基丙氨酸、β-丙氨酸、氟氨基酸、诸如β-甲基氨基酸、Cα-甲基氨基酸、 Nα-甲基氨基酸、以及通常意义上的氨基酸类似物的设计的氨基酸。而且，所述氨 基酸可以是D(右旋性的)型或L(左旋性的)型的。

B.重组合成

如果肽完全或部分由基因编码的氨基酸构成，所述肽或其相应的部分也可以用 常规重组基因工程技术合成。为实现重组生产，将编码线性肽的多核苷酸序列插入 适当的表达传输工具，也就是包含所述插入编码序列所需的转录和翻译元件的载 体，或是在RNA病毒载体中包含所需复制和翻译元件的载体。表达载体随后转染 能表达所述肽的靶细胞。取决于所使用的表达系统，表达的肽随后通过本领域内所 充分确立的工艺进行分离。生产重组蛋白和肽的方法是本领域内所熟知的(参见例如 Maniatis等，1989，《分子克隆：实验室手册》(Molecular Cloning A Laboratory Manual)，Cold Spring Harbor Laboratory，N.Y；以及Ausubel等，1989，《现代分子 生物学实验方案》(Current Protocols in Molecular Biology)，Greene Publishing Associates and Wiley Interscience，N.Y.)。

可以使用多种宿主-表达载体系统来表达本说明书所述的肽。这些系统包括但不 限于用含有适当编码序列的重组噬菌体DNA或质粒DNA表达载体转化的诸如细菌 的微生物；用含有适当编码序列的重组酵母或真菌表达载体转化的酵母或丝状真 菌；用含有适当编码序列的重组病毒表达载体(例如杆状病毒)感染的昆虫细胞系统； 用含有适当编码序列的重组病毒表达载体(例如花椰菜嵌纹病毒(cauliflower mosaic virus)或烟草花叶病毒(tobacco mosaic virus))感染或用含有适当编码序列的重组质粒 表达载体(例如Ti质粒)转化的植物细胞系统；或动物细胞系统。

在一些实施方案中，可以提高PL探测蛋白拷贝数以提高检测的特异性或灵敏 度。实施例4提供了一个这样的实例。TIP-TIP-IgG载体产生具有重复拷贝的来自 TIP-1的PDZ结构域的融合蛋白，该蛋白本身能在IgG恒定区骨架的基础上二聚化。 因此，单一的蛋白包含TIP-1PDZ结构域的2-4个拷贝。以类似的方式可以形成PL 探测蛋白的附加串联重复。在一些实施方案中，可以对来自不同蛋白的不同PDZ结 构域进行改造使之以单一蛋白的形式表达(例如，可以对TIP-1和MAGI-1的PDZ 结构域进行改造以检测致癌的HPV E6蛋白)。以相似的方式，可以使用一种不同的 Ig骨架以提高构建物的亲和力。例如，所述IgG恒定区能与其自身二聚化，而IgM 恒定区能形成由10个单体组成的复合物。

表达系统的表达元件的强度和特异性各不相同。取决于所使用的宿主/载体系统， 在表达载体中可以使用包括组成型和诱导型启动子在内的多种适当的转录和翻译元 件中的任何一种。例如，当在细菌系统中进行克隆时，可以使用诸如λ噬菌体的pL、 plac、ptrp、ptac(ptrp-plac杂合启动子)等诱导型启动子；当在昆虫细胞系统中进行 克隆时，可以使用诸如杆状病毒多面体启动子等启动子；当在植物细胞系统中进行 克隆时，可以使用源自植物细胞基因组的启动子(例如，热休克启动子；核酮糖二磷 酸缩化酶(RUBISCO)小亚基启动子；叶绿素a/b结合蛋白启动子)或来自植物病毒的 启动子(例如，CaMV的35S RNA启动子；TMV衣壳蛋白启动子)；当在哺乳动物 细胞系统中进行克隆时，可以使用源自哺乳动物细胞的启动子(例如，金属硫蛋白启 动子)或来自哺乳动物病毒的启动子(例如，腺病毒晚期启动子；牛痘病毒7.5K启动 子)；当产生包含多拷贝表达产物的细胞系时，可以使用含适当选择标记的SV40-、 BPV-和EBV-基础上的载体。

在使用植物表达载体的情况下，编码本发明的肽的序列的表达可以由多个启动 子中的任何一个驱动。例如，可以使用诸如CaMV的35S RNA和19S RNA启动子 病毒启动子(Brisson等，1984，Nature 310：511-514)，或TMV的衣壳蛋白启动子 (Takamatsu等，1987，EMBO J.6：307-311)；此外，可以使用诸如RUBISCO的小 亚基启动子(Coruzzi等，1984，EMBO J.3：1671-1680；Broglie等，1984，Science 224： 838-843)或例如大豆hsp17.5-E或hsp17.3-B等热休克启动子(Gurley等，1986，Mol.Cell. Biol.6：559-565)的启动子。这些构建物可以通过Ti质粒、Ri质粒、植物病毒载体、 直接DNA转化、微注射、电穿孔等方式导入植物白细胞。关于这些技术的综述参 见例如Weissbach和Weissbach 1988年所著《植物分子生物学方法》(Methods for Plant Molecular Biology)第三部分，421-463页；以及Grierson和Corey 1988年所著《植 物分子生物学》(Plant Molecular Biology)，第2版，7-9章。

在一种可以用于产生本发明的肽的昆虫表达系统中，使用苜蓿银纹夜蛾核型多 角体病毒(Autographa californica nuclear polyhidrosis virus，AcNPV)作为表达外源基 因的载体。该病毒在草地贪夜蛾(Spodoptera frugiperda)中生长。可以将编码序列克 隆到病毒的非必需区域(例如多面体基因)并置于AcNPV启动子的控制之下(例如， 多面体启动子)。编码序列的成功插入会导致多面体基因的失活并生成非闭合的重组 病毒(即缺乏由多面体基因编码的蛋白质衣壳的病毒)。这些重组病毒随后用于感染 在其中表达所述插入基因的草地贪夜蛾(Spodoptera frugiperda)细胞(例如，参见Smith 等，1983，J.Virol.46：584；Smith的美国专利No.4,215,051)。这一表达系统的更多 实例可以参见Ausubel等主编的《分子生物学现代实验方案》(Current Protocols in Molecular Biology)一书第2卷，Greene Publish.Assoc.&Wiley Interscience。

在哺乳动物宿主细胞中，可以使用多种基于病毒的表达系统。在使用腺病毒作 为表达载体的情况下，编码序列可以与一种腺病毒转录/翻译调控复合物(例如，晚 期启动子和三重前导序列)连接。这一嵌合基因随后可以通过体外或体内重组插入腺 病毒基因组。在病毒基因组非比需区域(例如E1或E3区域)的插入能获得可存活并 能在受感染的宿主中表达肽的重组病毒(例如，参见Logan和Shenk，1984，Proc.Natl. Acad.Sci.USA 81：3655-3659)。此外，可以使用牛痘7.5K启动子(参见，例如，Mackett 等，1982，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 79：7415-7419；Mackett等，1984，J.Virol.49： 857-864；Panicali等，1982，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 79：4927-4931)。

产生本发明的线性肽的其他表达系统对于精通本领域的人员来说应是显而易见 的。

C.标签或标记物

标签和标记物经常用于帮助纯化组分或检测生物分子。生物标签的例子包括但 不限于谷胱甘肽-S-转移酶、麦芽糖结合蛋白、免疫球蛋白结构域、内含肽、红血球 凝聚素表位、myc表位等。化学标签的例子包括但不限于生物素、金、顺磁性颗粒 或荧光团。这些例子可以用于鉴别与其连接的蛋白或化合物的存在或可以被精通本 领域的人员用于从复杂混合物中纯化蛋白质或化合物。

D.肽和肽类似物的纯化

本发明的肽和肽类似物可以通过本领域已知的诸如高效液相色谱、离子交换层 析、凝胶电泳、亲和层析等技术进行纯化。实际用于纯化特定肽或类似物的条件应 部分取决于诸如净电荷、疏水性、亲水性等因素，并且对于精通本领域的人员而言 是显而易见的。纯化的肽可以通过基于其物理或功能性质的检测方法进行鉴别，这 些检测方法包括放射性标记后进行凝胶电泳、放射免疫法、ELISA、生物检测等。

XII. 试剂盒

本发明也包括用于实现本发明的方法的试剂盒。所述试剂盒通常包括第一种和 第二种致癌的HPV E6结合伴侣。在大部分实施方案中，第一结合伴侣是PDZ结构 域多肽，而第二结合伴侣是至少一种E6抗体。在一些实施方案中，第二结合伴侣 用可检测的标记物进行标记。在其他实施方案中，包括了诸如可检测标记的二级抗 体的二级标记成分。在一些实施方案中，所述试剂盒进一步包括了用于从样本中分 离致癌的HPV E6的手段(如装置或系统)。试剂盒可以选择性地包含蛋白酶体抑制 剂。

如果需要，一种所述试剂盒可以进一步包括一种或多种不同的常规成分，诸如 例如含一种或多种缓冲液、检测试剂或抗体的容器。试剂盒也可以包括以插页或标 签形式指示所使用的成分数量及其使用指南的印刷的说明书。在本发明公开中需要 理解的是，指定的材料和条件在本发明的实施中是重要的，但并不排除未指定的材 料和条件，只要它们不妨碍本发明利益的实现。以上对本发明诊断方法的示范性实 施方案作了详细描述。

在一种所述试剂盒中，致癌的E6检测反应可以使用水的或固体的基质，其中试 剂盒可以包括适用于几种诸如检测条、夹心法等的分离和检测平台的试剂。在试剂 条的许多实施方案中，试剂条已结合了特异性结合致癌E6蛋白PL结构域的PDZ 结构域多肽并在该固体支持物上捕获致癌E6蛋白。在一些实施方案中，试剂盒进 一步包括一种或多种检测抗体，这些抗体是直接或间接可检测的并与致癌E6蛋白 结合以允许其检测。试剂盒还可以包括：用于进行免疫印迹的成分(例如，预制凝胶、 膜、转移系统等)；用于进行ELISA检测的成分(例如96孔板)；用于进行免疫共沉 淀的成分(例如蛋白质A)；用于从样本中对致癌E6蛋白进行亲和分离或分子大小排 阻分离的层析柱，特别是离心柱(例如凝胶过滤柱、PDZ结构域多肽柱、分子排阻 柱、膜截流离心柱等)。

所述试剂盒也可以包括含致癌的或不致癌的E6的对照样本，和/或致癌E6的稀 释系列，其中所述稀释系列代表了适当的标准品的范围，试剂盒的使用者可以将其 结果与标准品比较并估计其样本中致癌E6的水平。这样的稀释系列可以提供对患 者体内任何癌症进展的评估。荧光、颜色或放射性自显影底片的结果也可以与试剂 盒提供的荧光、颜色或底片密度标准曲线进行比较。

除了上面提到的成分，所述试剂盒通常进一步包括使用试剂盒的所述成分以实 践所述方法的说明书。实践所述方法的说明书通常记录在适当的记录用媒介上。例 如，说明书可以印刷在基质(如纸或塑胶等)上。同样地，说明书可以以套装插件、 试剂盒的容器或其成分的标签的形式(即与包装或分包装相连)存在于试剂盒中。在 其他实施方案中，说明书以存放在适当的计算机可读的存储介质(例如CD-ROM、 磁盘等)上的电子存储数据文件的形式存在。在还有其他实施方案中，试剂盒中并没 有真正的说明书，但提供了例如通过互联网从远距离来源获得说明书的方法。这种 实施方案的实例是包含了一个网址，通过该网址能观看说明书并/或下载说明书。与 说明书一样，这一获得说明书的方法被记录在适当的基质上。

本发明也提供了包括包含了以上所述规划和说明书的至少一种计算机可读媒介 的工具包。说明书可以包括安装指导。说明书可以包括如上所述有选择地或多种选 择组合地使用本发明的指导。在某些实施方案中，说明书包括了全部两类信息。

以工具包的形式提供软件和说明书可以适合多种用途。作为一种生产在非兔宿 主中比亲代抗体具有更低免疫原性的兔抗体或其核苷酸序列的方式，可以包装并购 买所述组合。

说明书通常记录在适当的记录用媒介上。例如，说明书可以印刷在如纸或塑胶 等的基质上。同样地，说明书可以以套装插件、试剂盒的容器或其成分的标签的形 式(即与包装或分包装相连)存在于试剂盒中。在其他实施方案中，说明书以存放在 适当的计算机可读的存储介质(例如CD-ROM、磁盘等，包括其中存放了所述程序 的相同媒介)上的电子存储数据文件的形式存在。

测定受检者是否被致癌HPV病毒株感染的方法

本发明提供了检测样本中致癌的HPV E6蛋白的方法并可应用于诊断受检者的 HPV感染。在多种实施方案中，从受检者获得生物样本并测定样本中致癌的HPV E6 蛋白的存在。样本中可检测量的致癌HPV E6蛋白的存在表示该个体被致癌HPV病 毒株感染。在其他实施方案中，测定了生物样本中致癌的HPV E6蛋白的水平，并 与样本中对照的量进行比较。样本中致癌的HPV E6蛋白的相对量表示HPV感染的 严重程度。

如上所述，所述方法通常包括两种致癌的HPV E6蛋白的结合伴侣，其中之一 是PDZ结构域多肽。一般说来，所述方法包括a)使用所述结合伴侣从样本中分离致 癌的HPV E6蛋白，和b)用另一种结合伴侣检测致癌的HPV E6蛋白。

分离致癌HPV E6蛋白

一般而言，本发明的方法包括至少部分地将天然致癌HPV E6蛋白与样本中的 其他蛋白质分开(即分离)。这一分离通常通过使用致癌HPV E6的第一结合伴侣得 以实现。在多种实施方案中，第一结合伴侣是PDZ结构域多肽，或在其他实施方案 中，是抗HPV E6抗体或抗体混合物。

在某些实施方案中，一种致癌HPV E6结合伴侣直接或通过连接物与不溶的支 持物结合。例如，PDZ结构域多肽可能包含与如这里所述的融合伴侣融合的PDZ 结构域，该融合伴侣通过化学键直接地或通过连接物(例如柔性连接物、抗体或其他 结合部分)间接地与固体支持物结合。在大部分实施方案中，所述PDZ结构域多肽 与固体支持物共价结合。固体支持物是本领域内已知的，包括但不限于颗粒(例如磁 珠、聚苯乙烯小珠等)、膜等。在一个非限制性实例中，PDZ结构域多肽与磁珠结 合。与磁珠结合的PDZ结构域多肽与样本接触，在所述抗体和任何E6蛋白之间形 成复合物之后施加磁场，这样将该复合物从样本中分离。在所述PDZ结构域多肽与 如膜等不溶的支持物结合的情况下，与PDZ结构域多肽结合的E6蛋白通过移除膜 或通过将样本转移到单独的容器中从样本中分离。在所述PDZ结构域多肽与颗粒结 合的情况下，与颗粒结合的E6蛋白通过离心或过滤从样本中分离。预见了使用一 种不同E6结合伴侣(例如抗E6抗体)的这样的实施方案。

一般而言，使用了与进行分离的适当平台相一致的适当的分离手段。例如，在 通过与PDZ结构域多肽结合的方式分离致癌的HPV E6的情况下，分离通过包括但 不限于亲和色谱、毛细管作用或层析试剂条、免疫共沉淀等的多种平台中的任何一 种进行。

在多种实施方案中，通过将样本置于检测试剂条的一端并通过毛细管作用或层 析使蛋白质迁移，将致癌的HPV E6同样本中其他蛋白质分离。层析分离、检测和 定量的方法和装置是本领域内已知的。参见，例如，美国专利Nos.5,569,608；6,297,020 和6,403,383。在这些实施方案中，检测试剂条由近及远由上样区和含致癌E6蛋白 结合伴侣的检测区(例如含PDZ结构域多肽的区域或在其他实施方案中含抗E6抗体 的区域)构成。样本加样于上样区，并将试剂条的近端置于缓冲液中。致癌E6蛋白 被第一个检测区中结合的抗体所捕获。捕获的致癌E6蛋白如以下所述进行检测。 例如，通过使用针对所有致癌E6蛋白共有的E6蛋白表位的特异的可检测标记的抗 体或能够共同与所有致癌E6蛋白结合的抗体混合物对捕获的E6蛋白进行检测。在 此外的实施方案中，检测区中可以存在E6抗体，对与所述E6抗体结合的致癌E6 的检测使用标记的PDZ结构域多肽。

检测并定量致癌E6蛋白

一旦致癌E6蛋白与样本中的其他蛋白质分离，对致癌E6蛋白进行检测并/或测 定(例如测量)致癌E6蛋白的水平或量。如上所述，致癌E6蛋白通常使用结合伴侣(例 如E6特异性的一种或多种抗体，或PDZ结构域多肽)进行检测。

通过使用熟知的方法用特异性抗体进行检测。一般而言，所述结合伴侣是经直 接或间接可检测标记过的。直接标记包括放射性同位素(例如125I；35S等)；其产物 是可检测的酶(例如荧光素酶、β-半乳糖苷酶、辣根过氧化物酶等)；荧光标记(例如 异硫氰酸荧光素、罗丹明、藻红蛋白等)；通过象EDTA的金属螯合基团与抗体连 接的荧光发射金属(如152Eu或其他稀土元素)；化学发光化合物(例如鲁米诺、异鲁 米诺、吖啶酯盐等)；生物发光化合物(例如荧光素、荧光蛋白等)。荧光蛋白包括但 不限于绿荧光蛋白(GFP)以及如例如Matz等人在(1999)Nature Biotechnol.17：969- 973中所述的多种来自珊瑚纲种属(Anthozoan species)的荧光和有色蛋白质中的任何 一种等。其中绿荧光蛋白包括但不限于：“人源化”形式的绿荧光蛋白(例如对其中天 然核苷酸序列密码子进行变更使之更符合人密码子偏爱)；源自维多利亚水母 (Aequoria victoria)的GFP或其衍生物(例如购自Clontech，Inc.的增强型GFP的 GFP“人源化”衍生物)；象例如WO 99/49019和Peelle等人在(2001)J Protein Chem.20： 507-519中所述的来自其他物种(如Renilla reniformis、Renilla mulleri或Ptilosarcus guernyi)的GFP；“人源化”重组GFP(hrGFP)(Stratagene)。

间接标记包括E6特异性抗体的特异性二级抗体，其中所述二级抗体如上所述进 行标记；和特定的结合对(例如生物素-亲和素等)。

在一些实施方案中，对致癌E6的水平进行了定量。定量可以通过使用任何已知 的方法进行，这些方法包括但不限于：酶联免疫吸附(ELISA)、放射免疫检测(RIA)等。 一般而言，定量通过将样本中检测到的表达水平与标准曲线比较得以实现。

在一些实施方案中，致癌的HPV E6蛋白如上所述在检测试剂条上分离。在这 些实施方案中，通过使用结合致癌HPV E6的经可检测标记的结合伴侣进行检测。 可以使用例如反射分光光度计或肉眼对致癌的HPV E6进行定量。

生物样本

使用本发明的方法进行分析的生物样本取自任何哺乳动物(例如，取自人或非人 的HPV动物模型)。在多种实施方案中，生物样本取自活体。

在一些实施方案中，从中获得样本的受检者表面上是健康的，在这种情况下所 述分析作为常规筛查的一部分进行。在其他实施方案中，受检者是HPV易感的(例 如，通过家族史或暴露于某些环境因素等确定的)。在其他实施方案中，受检者具有 HPV症状(例如宫颈瘤等)。在其他实施方案中，受检者已被临时诊断为具有HPV感 染(例如由基于如PCR的其他检测所确定的)。

生物样本可以来自受检者的任何组织、器官或细胞群。在一些实施方案中，从 受检者获得宫颈刮取物、活组织切片或灌洗物。

在一些实施方案中，使用本领域内常规的方法对生物样本进行了处理，以去除 例如某些干扰本发明的检测方法的成分。在一些实施方案中，例如通过盐沉淀等方 法对生物样本进行处理以富集蛋白质。在某些实施方案中，在存在蛋白酶体抑制剂 的情况下处理生物样本，以抑制E6蛋白的降解。

在本发明的检测方法中，在一些实施方案中，样本中E6的水平可以进行定量并 /或与对照比较。适当的对照样本取自已知健康的个体(例如已知未受HPV感染)。 对照样本可以来自与受检者遗传相关的个体，但也可以来自遗传不相关的个体。适 当的对照样本也包括比获取待测样本时间点更早的时间点从该个体获取的样本，例 如在表现出可能的HPV症状之前取自该个体的生物样本。

应用

本发明的方法可用于多种诊断分析。所述方法可用于诊断个体中HPV致癌病毒 株的感染；用于确定产生癌症的可能性；用于确定患者对HPV治疗的反应；用于 确定个体中HPV感染的严重程度；以及用于监测个体中HPV的发展进程。

所述方法通常可以用于来自活体的生物样本。本发明的一个显著有利的特征是 所述方法可以在一个反应中同时检测所有已知的HPV致癌病毒株。

实施例1

HPV E6蛋白的序列分析以确定致癌潜能

已知PDZ蛋白与某些蛋白质的羧基末端序列(PL)结合。与PDZ结构域结合的PL 序列是可预测的，并在美国专利申请09/710059、09/724553和09/688017中以对其 作了详细描述。一组以-X-(S/T)-X-(V/I/L)序列结尾的蛋白是PL基序的重要类别之 一。我们已经检查了来自多个HPV病毒株的E6蛋白的C末端序列。由国家癌症研 究所确定的所有致癌病毒株具有共同的PDZ结合序列。来自乳头状瘤病毒株的那些 非致癌E6蛋白没有被预测为能与PDZ结构域结合的序列，因而意味着与PDZ蛋白 的相互作用是其在人体内引起癌症的先决条件。在检查的序列中(表3A)，PL的存 在与引发癌症之间具有100％的相关性。理论上，用来自前文列举的专利中公开的 PL共同序列，可以评估HPV新变种结合PDZ蛋白的能力并可以在是否存在PL的 基础上预测其致癌性。今年早些时候，对5株新的人乳头状瘤病毒致癌病毒株进行 了鉴别并测定了其E6蛋白序列。正如所预计的，这些蛋白都包含PL共同序列(表 3B)。

表3A：E6PDZ-配体和致癌性的相关性  HPV病毒株 E6C末端序列   是否PL   致癌性   序列编号   HPV 4   HPV 11   HPV 20   HPV 24   HPV 28   HPV 36   HPV 48   HPV 50   HPV 16   HPV 18   HPV 31   HPV 35   HPV 30   HPV 39   HPV 45   HPV 51   HPV 52   HPV 56   HPV 59   HPV 58   GYCRNCIRKQ   WTTCMEDLLP   GICRLCKHFQ   KGLCRQCKQI   WLRCTVRIPQ   RQCKHFYNDW   CRNCISHEGR   CCRNCYEHEG   SSRTRRETQL   RLQRRRETQV   WRRPRTETQV   WKPTRRETEV   RRTLRRETQV   RRLTRRETQV   RLRRRRETQV   RLQRRNETQV   RLQRRRVTQV   TSREPRESTV   QRQARSETLV   RLQRRRQTQV   否   否   否   否   否   否   否   否   是   是   是   是   是   是   是   是   是   是   是   是   否   否   否   否   否   否   否   否   是   是   是   是   是   是   是   是   是   是   是   是   221   222   223   224   225   226   227   228   229   230   231   232   233   234   235   236   237   238   239   240   HPV 33   HPV 66   HPV 68   HPV 69   RLQRRRETAL   TSRQATESTV   RRRTRQETQV   RRREATETQV   是   是   是   是   是   是*   是   是   241   242   243   244

表3A：E6C末端序列和致癌性。左边列举了HPV变体。序列从GenBank序列 记录中确定。“是否PL”通过是否与Songyang等人在Arbor Vita确定的-X-(S/T)-X- (V/I/L)共有序列相符合进行定义。致癌性数据收集自国家癌症研究所。*只在与其他 致癌蛋白共转染的致癌病毒株中发现。

表3B：近期鉴定的致癌E6蛋白的相关性   HPV病毒株  E6C末端序列   是否PL   致癌性 序列编号   HPV 26   HPV 53   HPV 66   HPV 73   HPV 82   RPRRQTETQV   RHTTATESAV   TSRQATESTV   RCWRPSATW   PPRQRSETQV   是   是   是   是   是   是   是   是   是   是   245   246   247   248   249

表3B：E6C末端序列和致癌性。左边列举了HPV变体。序列从GenBank序列记 录中确定。“是否PL”通过是否与Songyang等人在Arbor Vita确定的-X-(S/T)-X-(V/I/L) 共有序列相符合进行定义。新病毒株的致癌性数据收集自N Engl J Med 2003，348： 518-527。

这些表格提供了基于HPV基因组编码的E6蛋白C末端4个氨基酸序列的HPV 病毒株的分类。所述21个HPV致癌病毒株属于10类病毒株之一，没有在以上特 意列举的HPV病毒株可能也属于这些类别。由此，值得对来自所有10类的HPV 病毒株进行检测：所述的方法提供了这样的检测。

实施例2

与致癌E6蛋白C末端相互作用的PDZ结构域的鉴别

为了确定能在诊断检测中用于检测致癌E6蛋白的PDZ结构域，使用了‘G检 测’(前文所述)来鉴别E6PL和PDZ结构域之间的相互作用。按照来自人乳头状瘤病 毒致癌病毒株的E6蛋白C末端氨基酸序列合成肽。使用上文所述的G检测和由美 国专利申请09/710059、09/724553和09/688017中详述的表达构建物合成的PDZ结 构域对这些肽结合PDZ结构域的能力进行了评定。下面的表4中列举了表现出高结 合亲和力的这些检测的结果。

正如我们在下面会看到的，存在大量结合一些致癌E6蛋白的PDZ结构域。然 而，看来只有MAGI-1的第二个PDZ结构域与所有检测的致癌E6PL结合。TIP-1 的PDZ结构域结合除了一个以外的所有检测的致癌致癌E6PL，并可以与MAGI-1 结构域2组合用于检测致癌E6蛋白的存在。

以相似的方式，用G检测对对应于几个非致癌E6蛋白C末端的肽进行了测试。 这些肽都没有表现出任何结合PDZ结构域的亲和力。

表4：HPV E6PL与PDZ结构域之间较高亲和力的相互作用   HPV   病毒株   PDZ结合伴侣   (0-5中的信号4和5)   HPV   病毒株 PDZ结合伴侣 (0-5中的信号4和5)   HPV 35   (TEV)   萎缩蛋白-1相互作用蛋白   (PDZ#1，3，5)   Magi1(PDZ#2，3，4，5)   Lim-Ril   FLJ 11215   MUPP-1(PDZ#10)   KIAA 1095(PDZ#1)   PTN-4   INADL(PDZ#8)   Vartul(PDZ#1，2，3)   肌养结合蛋白-1α   肌养结合蛋白γ-1   TAX IP2   KIAA 0807   KIAA 1634(PDZ#1)   DLG1(PDZ1，2)   NeDLG(1，2，3，)   Sim.大鼠外膜(PDZ#1)   MUPP-1(PDZ#13)   PSD 95(1，2，3)   HPV 33   (TAL) Magi1(PDZ#2) TIP1 DLG1 Vartul(PDZ#1) KIAA 0807 KIAA 1095(Semcap3)(PDZ#1) KIAA 1934(PDZ#1) NeDLG(PDZ#1，2) 大鼠外膜(PDZ#1) PSD95(PDZ#3和1-3) HPV 58 (TQV)   萎缩蛋白-1相互作用蛋白   (PDZ#1)   Magi1(PDZ#2)   DLG1(PDZ1，2)DLG2(PDZ#2)   KIAA 0807   KIAA 1634(PDZ#1)   NeDLG(1，2)   Sim.大鼠外膜(PDZ#1)   PSD 95(1，2，3)   INADL(PDZ#8)   TIP-1   HPV 66   (STV) DLG1(PDZ#1，2) NeDLG(PDZ#2) PSD 95(PDZ#1，2，3) Magi1(PDZ#2) KIAA 0807 KIAA 1634(PDZ#1) DLG2(PDZ#2) 大鼠外膜(PDZ#1) NeDLG(1，2) TIP-1 HPV 16* (TQL)   TIP-1   Magi1(PDZ#2)   HPV 52   (TQV) Magi1(PDZ#2) HPV 18* (TQV)   TIP-1   Magi1(PDZ#2)

表4：几种HPV变体E6C末端与人PDZ结构域之间的相互作用。HPV病毒株表 示从中获得E6C末端肽序列信息的病毒株。检测中使用的肽的长度介于18到20 个氨基酸之间，末端3个残基表示在圆括号中。每种HPV E6变体右侧的名称表示 G检测中与E6肽饱和结合的人PDZ结构域(具有多个PDZ结构域的蛋白在圆括号 中表明结构域数目)。*表示由于材料限制，hDlg1的PDZ结构域没有对这些蛋白进 行测试，虽然文献中两者都被证明与hDlg1结合。

实施例3

携带编码HPV E6基因或HPV E6基因一部分的DNA片段的真核表达载体的产 生

本实施例描述了如何将HPV E6基因或HPV E6基因的一部分克隆到与多种蛋白 标签融合的真核表达载体上，蛋白标签包括但不限于谷胱甘肽-S-转移酶(GST)、增 强型绿荧光蛋白(EGFP)或红血球凝集素(HA)。

A.策略

使用随机(寡核苷酸)引物(Invitrogen，目录号48190011)，cDNA片段通过对HPV 细胞系(宫颈表皮样瘤，对于HPV E616和18，ATCC#分别是CRL-1550和CRL-1595) 来源的RNA进行RT-PCR产生。使用以上纯化的cDNA片段和特异性引物(见表5)， 对应于HPV E6的DNA片段通过常规PCR产生。所用的引物被设计成能在PCR产 物的末端创建限制性核酸酶识别位点，使这些片段能被克隆到适当的表达载体中。 完成PCR以后，对DNA样品进行琼脂糖凝胶电泳。切下对应于预期大小的条带。 使用Sephaglas Band Prep Kit(Amersham Pharmacia目录号27-9285-01)提取DNA并 用适当的限制性核酸内切酶消化。消化的DNA样品通过凝胶电泳再次纯化(依照前 面所使用的相同的实验方案)。沉淀纯化的DNA片段并与适当的线性化载体连接。 转化大肠杆菌(E.coli)以后，通过菌落PCR和限制性消化针对插入片段的存在及其正 确取向对菌落进行筛选。阳性克隆接种在液体培养物中以进行大规模DNA纯化。 对纯化的质粒DNA上的插入片段和侧翼载体位点进行测序以确保片段及载体与融 合蛋白之间连接处序列的正确性。

B.载体：

克隆载体是pGEX-3X(Amersham Pharmacia目录号27-4803-01)、MIE(含IRES 和EGFP的MSCV衍生物，通过重组DNA技术产生)、pmKit、pcDNA3.1(Invitrogen， 改进以在克隆位点上游包含HA标签)和pMAL(New England Biolabs目录号 N8076S，多克隆位点内经改造包含BamHl和EcoRl位点)。

将含有HPV E6的ATG起始密码子和TAG终止密码子的DNA片段克隆到 pGEX3x。使用纯化的HPV E6-pGEX3x融合质粒作为PCR模板并使用上述相同的 纯化方案，将HPV E6基因以及3’端缺失的变体(APL)相继克隆到MIE(MSCV-IRES- EGFP)、pcDNA-HA载体和pmKit载体。HPV E6的缺失变体具有插入在-3位置的 氨基酸之后的终止密码子，这样就从基因编码区中删除了最后三个氨基酸。

C.构建物：

表5中列出了用于通过PCR产生DNA片段的引物。下面列出了PCR引物组合 和插入的限制性位点及载体。

表5.将HPV E6克隆到典型的表达载体所使用的引物。 ID# (引物名称)   引物序列 描述   序列   编号 2548 (1054EF)   AAAAGATCTACAAT   ACTATGGCGC 对应于HPV E6 18的正向(5’到3’)引物，生 成Bgl II位点。用于克隆到pGEX3x上   250 2549 (1058ER)   AGGGAATTCCAGAC   TTAATATTATAC 对应于HPV E6 18的反向(3’到5’)引物，生 成EcoRI位点。用于克隆到pGEX3x上   251   2542   (1050EF)   AAAGGATCCATTTT   ATGCACCAAAAG   对应于HPV E6 16的正向(5’到3’)引物，生   成BamHI位点。用于克隆到pGEX3x上  252   2543   (1051ER)   ATGGAATTCTATCTC   CATGCATGATTAC   对应于HPV E6 16的反向(3’到5’)引物，生   成EcoRI位点。用于克隆到pGEX3x上  253   2563   (1071EF)   GAGGAATTCACCAC   AATACTATGGCG   对应于HPV E6 18的正向(5’到3’)引物，生   成EcoRI位点。用于克隆到MIE上  254   2564   (1072ER)   AGGAGATCTCATAC   TTAATATTATAC   对应于HPV E6 18的反向(3’到5’)引物，生   成BglII位点。用于克隆到MIE上  255   2565   (1073ERPL)   TTGAGATCTTCAGC   GTCGTTGGAGTCG   对应于HPV E6 18ΔPL的反向(3’到5’)引   物，生成BglII位点。用于克隆到MIE上  256   2560   (1074EF)   AAAGAATTCATTTT   ATGCACCAAAAG   对应于HPV E6 16的正向(5’到3’)引物，生   成EcoRI位点。用于克隆到MIE上  257   2561   (1075ER)   ATGGGATCCTATCTC   CATGCATGATTAC   对应于HPV E6 16的反向(3’到5’)引物，生   成BamHI位点。用于克隆到MIE上  258   2562   (1076ERPL)   CTGGGATCCTCATC   AACGTGTTCTTGATG   ATC   对应于HPV E6 16ΔPL的反向(3’到5’)引   物，生成BamHI位点。用于克隆到MIE   上  259   2603   (1080EF)   AAGAAAGCTTTTTA   TGCACCAAAAGAG   对应于HPV E6 16的正向(5’到3’)引物，生   成HindIII位点。用于克隆到pcDNA-HA   上  260   2604   (1081ER)   AATCAAGCTTTATCT   CCATGCATGATTAC   对应于HPV E6 16的反向(3’到5’)引物，生   成HindIII位点。用于克隆到pcDNA-HA   上  261   2605   (1082ERPL)   GCTGAAGCTTTCAA   CGTGTTCTTGATGAT   C   对应于HPV E6 16ΔPL的反向(3’到5’)引   物，生成HindIII位点。用于克隆到   pcDNA-HA上  262   2606   (1083EF)   AAGCGTCGACTTTA   TGCACCAAAAGAG   对应于HPV E6 16的正向(5’到3’)引物，生   成Sal I位点。用于克隆到pmKit上  263   2607   (1084ER)   AATGCTCGAGTATC   TCCATGCATGATTAC   对应于HPV E6 16的反向(3’到5’)引物，生   成Xho I位点。用于克隆到pmKit上  264   2608   (1085ERPL)   GCTGCTCGAGTCAA   CGTGTTCTTGATGAT   C 对应于HPV E6 16ΔPL的反向(3’到5’)引 物，生成Xho I位点。用于克隆到pmKit 上  265   2612   (1086EF)   AGAAGTCGACCACA   ATACTATGGCGC 对应于HPV E6 18的正向(5’到3’)引物，生 成Sal I位点。用于克隆到pmKit上  266   2613   (1087ER)   TAGGCTCGAGCATA   CTTAATATTATAC 对应于HPV E6 18的反向(3’到5’)引物，生 成Xho I位点。用于克隆到pmKit上  267   2614   (1088ERPL)   CTTGCTCGAGTCAG   CGTCGTTGGAGTCG 对应于HPV E6 18ΔPL的反向(3’到5’)引 物，生成Xho I位点。用于克隆到pnKit 上  268   2615   (1089EF)   AGAAAAGCTTCACA   ATACTATGGCGC 对应于HPV E6 18的正向(5’到3’)引物，生 成HindIII位点。用于克隆到pcDNA-HA 上  269   2616   (1090ER)   TAGAAGCTTGCATA   CTTAATATTATAC 对应于HPV E6 18的反向(3’到5’)引物，生 成HindIII位点。用于克隆到pcDNA-HA 上  270   2617   (1091ERPL)   CTTGAAGCTTTCAGC   GTCGTTGAGGTCG 对应于HPV E6 18ΔPL的反向(3’到5’)引 物，生成HindIII位点。用于克隆到 pcDNA-HA上  271

1.人乳头瘤状病毒(HPV)E616

Acc#：-----------

GI#：4927719

·构建物：HPV E6 16WT-pGEX-3X

引物：2542&2543

载体克隆位点(5′/3′)：Bam Hl/EcoRl

插入片段克隆位点(5′/3′)：Bam Hl/EcoRl

pGEX-3X在克隆位点的5’末端之前(上游)含GST

·构建物：HPV E6 16WT-MIE

引物：2560&2561

载体克隆位点(5′/3′)：EcoRl/BamHl

插入片段克隆位点(5′/3′)：EcoRl/BamHl

MIE在克隆位点的3’末端之后(下游)含IRES和EGFP

·构建物：HPV E616ΔPL-MIE

引物：2560&2562

载体克隆位点(5′/3′)：EcoRl/BamHl

插入片段克隆位点(5′/3′)：EcoRl/BamHl

MIE在克隆位点的3’末端之后(下游)含IRES和EGFP

·构建物：HPV E6 16WT-pcDNA3.1-HA

引物：2603&2604

载体克隆位点(5′/3′)：Hind III/Hind III

插入片段克隆位点(5′/3′)：Hind III/Hind III

pcDNA3.1(改进的)在克隆位点的5’末端之前(上游)含HA

·构建物：HPV E6 16ΔPL-pcDNA3.1-HA

引物：2603&2605

载体克隆位点(5′/3′)：Hind III/Hind III

插入片段克隆位点(5′/3′)：Hind III/Hind III

pcDNA3.1(改进的)在克隆位点的5’末端之前(上游)含HA

·构建物：HPV E6 16WT-pmKit

引物：2606&2607

载体克隆位点(5′/3′)：Sal I/Xho I

插入片段克隆位点(5′/3′)：Sal I/Xho I

·构建物：HPV E6 16ΔPL-pmKit

引物：2606&2608

载体克隆位点(5′/3′)：Sal I/Xho I

插入片段克隆位点(5′/3′)：Sal I/Xho I

2.人乳头状瘤病毒(HPV)E6 18

Acc#：-----------------

GI#：------------------

·构建物：HPV E6 18WT-pGEX-3X

引物：2548&2549

载体克隆位点(5′/3′)：BamHI/EcoRI

插入片段克隆位点(5′/3′)：Bgl II/EcoRI

pGEX-3X在克隆位点的5’末端之前(上游)含GST

·构建物：HPV E6 18WT-MIE

引物：2563&2564

载体克隆位点(5′/3′)：EcoRl/BamHl

插入片段克隆位点(5′/3′)：EcoRl/Bgl II

MIE在克隆位点的3’末端之后(下游)含IRES和EGFP

·构建物：HPV E618ΔPL-MIE

引物：2563&2565

载体克隆位点(5′/3′)：EcoRl/BamHl

插入片段克隆位点(5′/3′)：EcoRl/Bgl II

MIE在克隆位点的3’末端之后(下游)含IRES和EGFP

·构建物：HPV E618WT-pcDNA3.1-HA

引物：2615&2616

载体克隆位点(5′/3′)：Hind III/Hind III

插入片段克隆位点(5′/3′)：Hind III/Hind III

pcDNA3.1(改进的)在克隆位点的5’末端之前(上游)含HA

·构建物：HPV E6 18ΔPL-pcDNA3.1-HA

引物：2615&2617

载体克隆位点(5′/3′)：Hind III/Hind III

插入片段克隆位点(5′/3′)：Hind III/Hind III

pcDNA3.1(改进的)在克隆位点的5’末端之前(上游)含HA

·构建物：HPV E6 18WT-pmKit

引物：2612&2613

载体克隆位点(5′/3′)：Sal I/Xho I

插入片段克隆位点(5′/3′)：Sal I/Xho I

·构建物：HPV E6 18ΔPL-pmKit

引物：2612&2614

载体克隆位点(5′/3′)：Sal I/Xho I

插入片段克隆位点(5′/3′)：Sal I/Xho I

D.GST融合蛋白的生产与纯化

按照Pharmacia Biotech公司《GST融合系统》(第2版第2次修订本)(GST Fusion System，Second Edition，Revision 2)中所述的方案，使用pGEX-3X表达载体的构建 物被用于制造融合蛋白。并针对1L规模的生产与纯化，对方法II进行了优化。

纯化的DNA转化大肠杆菌并生长至OD600达到0.4-0.8(600λ)。通过向细胞培养 物添加IPTG诱导蛋白表达1-2小时。收集并溶解细胞。收集细胞溶解物并添加GS4B 树脂(Pharmacia目录号17-0756-01)以结合GST融合蛋白。分离树脂并用GEB II洗 脱GST融合蛋白。纯化的蛋白-80℃保存在GEB II中。

纯化的蛋白用于以ELISA为基础的检测和抗体生产。

实施例4

携带编码含PDZ结构域基因或含PDZ结构域基因一部分的DNA片段的真核表 达构建物的产生

本实施例描述了如何将含PDZ结构域的基因或含PDZ结构域的基因的一部分克 隆到与多种蛋白标签融合的真核表达载体上，蛋白标签包括但不限于谷胱甘肽-S-转 移酶(GST)、增强型绿荧光蛋白(EGFP)或红血球凝集素(HA)。

A.策略：

使用随机引物(Invitrogen目录号48190011)，对应于含PDZ结构域基因的cDNA 片段通过RT-PCR从来自单独细胞系(CLONTECH目录号K4000-1)来源的RNA文 库的RNA生成。使用上述纯化的cDNA片段和特异性引物(见表6)，通过常规PCR 产生对应于含PDZ结构域基因或其部分的DNA片段。所使用的引物设计成能在PCR 片段末端创建限制性核酸酶识别位点，使这些片段能克隆到适当的表达载体上。PCR 之后，对DNA样品进行琼脂糖凝胶电泳。切下对应于预期大小的条带。使用Sephaglas Band Prep Kit(Amersham Pharmacia目录号27-9285-01)提取DNA并用适当的限制性 核酸内切酶消化。消化的DNA样品通过凝胶电泳再次纯化(依照前面所使用的相同 的实验方案)。沉淀纯化的DNA片段并与适当的线性化载体连接。转化大肠杆菌 (E.coli)以后，通过菌落PCR和限制性消化针对插入片段的存在及其正确取向对菌落 进行筛选。阳性克隆接种在液体培养物中以进行大规模DNA纯化。对纯化的质粒 DNA上的插入片段和侧翼载体位点进行测序以确保片段及载体与融合蛋白之间连接 处序列的正确性。

B.载体：

所有含PDZ结构域的基因克隆到含tac启动子、GST、Xa因子、β-内酰胺酶和lac 抑制子的pGEX-3X载体上(Amersham Pharmacia目录号27-4803-01，Genemed Acc #U13852，GI#595717)。

下面列出了包括GST、Xa因子和多克隆位点的pGEX-3X编码区的氨基酸序列。 注意克隆的插入片段和GST-Xa因子之间的连接序列随着克隆所使用的限制性核酸 内切酶而有所不同。下面翻译区中可能随插入片段而改变的氨基酸用小写字母表 示，并以改变后的形式被包括在(C)中所列举的构建物序列中。

aa1-aa 232：

MSPILGYWKIKGLVQPTRLLLEYLEEKYEEHLYERDEGDKWRNKKFELGLEF

PNLPYYIDGDVKLTQSMAIIRYIADKHNMLGGCPKERAEISMLEGAVLDIRY

GVSRIAYSKDFETLKVDFLSKLPEMLKMFEDRLCHKTYLNGDHVTHPDFML

YDALDVVLYMDPMCLDAFPKLVCFKKRIEAIPQIDKYLKSSKYIAWPLQGW

QATFGGGDHPPKSDLIEGRgipgnss(序列编号：272)

除此之外，完整的或部分TAX相互作用蛋白1(TIP1)克隆在许多其他表达载体 上，所述载体包括但不限于CD5γ、PEAK10(两者均由哈佛大学Brian Seed博士的实 验室提供并通过重组DNA技术产生，包含一个IgG区域)和MIN(MSCV衍生物， 包含IRES和NGFR，通过重组DNA技术生成)。

C.构建物：

表6列举了用于通过PCR产生DNA片段的引物。下面列出了PCR引物组合和 插入片段及载体的限制性位点，以及插入片段和限制性位点的氨基酸翻译。非天然 的氨基酸序列用小写字母表示。

表6.将DLG1(3个中的结构域2)、MAGI 1(6个中的结构域2)和TIP1克隆到典型 的表达载体上所使用的引物。   编号   (引物名称) 引物序列 描述   序列   编号   1928   (654DL12F) AATGGGGATCCAGC TCATTAAAGG 对应于DLG1结构域2的正向(5’到3’)引 物。在PDZ边界上游(5’)产生Bam HI位 点。用于克隆到pGEX-3X   273   1929   (655DL12R) ATACATACTTGTGG AATTCGCCAC 对应于DLG1结构域2的反向(3’到5’)引 物。在PDZ边界下游(3’)产生Eco RI位 点。用于克隆到pGEX-3X   274   1453   (435BAF) CACGGATCCCTTCTG AGTTGAAAGGC 对应于MAGI1结构域2的正向(5’到3’) 引物。在PDZ边界上游(5’)产生Bam HI 位点。用于克隆到pGEX-3X   275   1454   (436BAR) TATGAATTCCATCTG GATCAAAGGCAAT G 对应于MAGI 1结构域2的反向(3’到5’) 引物。在PDZ边界下游(3’)产生Eco RI 位点。用于克隆到pGEX-3X   276   399   (86TAF) CAGGGATCCAAAGA GTTGAAATTCACAA GC 对应于TIP1的正向(5’到3’)引物。在PDZ 边界上游(5’)产生Bam HI位点。用于克 隆到pGEX-3X   277   400   (87TAR) ACGGAATTCTGCAG CGACTGCCGCGTC 对应于TIP1的反向(3’到5’)引物。在PDZ 边界下游(3’)产生Eco RI位点。用于克隆 到pGEX-3X   278   1319   (TIP G5-1) AGGATCCAGATGTC CTACATCCC 对应于TIP1的正向(5’到3’)引物。在起 始密码子上游(5’)产生Bam HI位点。用 于克隆到pGEX-3X   279   1320   (TIP G3-1) GGAATTCATGGACT GCTGCACGG 对应于TIP的反向(3’到5’)引物。在终止 密码子下游(3’)产生Eco RI位点。用于克 隆到pGEX-3X   280   2753   (1109TIF) AGAGAATTCTCGAG ATGTCCTACATCCC 对应于TIP1的正向(5’到3’)引物。在起 始密码子上游(5’)产生Eco RI位点。用于   281 克隆到MIN   2762   (1117TIR)   TGGGAATTCCTAGG   ACAGCATGGACTG 对应于TIP1的反向(3’到5’)引物。在终 止密码子下游(3’)产生Eco RI位点。用于 克隆到MIN   282   2584   (1080TIF)   CTAGGATCCGGGCC   AGCCGGTCACC 对应于TIP1的正向(5’到3’)引物。在PDZ 边界上游(5’)产生Bam HI位点。用于克 隆到PEAK10或CD5γ   283   2585   (1081TIR)   GACGGATCCCCCTG   CTGCACGGCCTTCTG 对应于TIP1的反向(3’到5’)引物。在PDZ 边界下游(3’)产生Bam HI位点。用于克 隆到PEAK10或CD5γ   284   2586   (1082TIR)   GACGAATTCCCCTG   CTGCACGGCCTTCTG 对应于TIP1的反向(3’到5’)引物。在PDZ 边界下游(3’)产生Eco RI位点。用于克隆 到PEAK10或CD5γ   285   2587   (1083TIF)   CTAGAATTCGGGCC   AGCCGGTCACC 对应于TIP1的正向(5’到3’)引物。在PDZ 边界上游(5’)产生Eco RI位点。用于克隆 到PEAK10或CD5γ   286

1.DLG1，3个PDZ结构域中的第二个结构域：

Acc#：U13897

GI#：558437

·构建物：DLG1，PDZ结构域2-pGEX-3X

引物：1928&1929

载体克隆位点(5’/3’)：BamHl/EcoRl

插入片段克隆位点(5’/3’)：BamHl/EcoRl

aa1-aa88

giqLIKGPKGLGFSIAGGVGNQHIPGDNSIYVTKIIEGGAAHKDGKLQIG

DKLLAVNNVCLEEVTHEEAVTALKNTSDFVYLKVAnss(序列编号287)

2.MAGI1 ，6个PDZ结构域中的第二个结构域

Acc#：AB010894

GI#：3370997

·构建物：MAGI1，PDZ结构域2-pGEX-3X

引物：1453&1454

载体克隆位点(5’/3’)：BamHl/EcoRl

插入片段克隆位点(5’/3’)：BamHl/EcoRl

aa1-aa108

giPSELKGKFIHTKLRKSSRGFGFTVVGGDEPDEFLQIKSLVLD

GPAALDGKMETGDVIVSVNDTCVLGHTHAQVVKIFQSIPIGA

SVDLELCRGYPLPFDPDgihrd(序列列编号288)

3.TAX相互作用蛋白1(TIP1)：

Acc#：AF028823.2

GI#：11908159

·构建物：TIP1，PDZ结构域1-pGEX-3X

引物：399&400

载体克隆位点(5’/3’)：BamHl/EcoRl

插入片段克隆位点(5’/3’)：BamHl/EcoRl

aa1-aa107

giQRVEIHKLRQGENLILGFSIGGGIDQDPSQNPFSEDKTDKGIY

VTRVSEGGPAEIAGLQIGDKmQVNGWDMTMVTHDQARKRL

TKRSEEWRLLVTRQSLQnss(序列编号289)

·构建物：TIP1-pGEX-3X

引物：1319&1320

载体克隆位点(5’/3’)：BamHl/EcoRl

插入片段克隆位点(5’/3’)：BamHl/EcoRl

aa1-aa128

giqMSYIPGQPVTAVVQRVEIHKLRQGENLILGFSIGGGIDQDPSQNPFS

EDKTDKGIYVTRVSEGGPAEIAGLQIGDKIMQVNGWDMTMVTHDQA

RKRLTKRSEEWRLLVTRQSLQKAVQQSMnss(序列编号290)

·构建物：TIPl-MIN

引物：2753&2762

载体克隆位点(5’/3’)：Eco RI/Eco Rl

插入片段克隆位点(5’/3’)：Eeo RI/Eco Rl

aa1-aa129

agi1EMSYIPGQPVTAVVQRVEIHKLRQGENLILGFSIGGGIDQD

PSQNPFSEDKTDKGIYVTRVSEGGPAEIAGLQIGDKIMQVNG

WDMTMVTHDQARKRLTKRSEEVVRLLVTRQSLQKAVQQSM

LS(序列编号291)

·构建物：TIP1-CD5γ

引物：2584&2585

载体克隆位点(5’/3’)：Bam HI/Bam HI

插入片段克隆位点(5’/3’)：Ban HI/Bam HI

aa 1-aa 122

adPGQPVTAVVQRVEIHKLRQGENLILGFSIGGGIDQDPSQNPF

SEDKTDKGIYVTRVSEGGPAEIAGLQIGDKIMQVNGWDMTM

VTHDQARKRLTKRSEEVVRLLVTRQSLQKAVQQSdpe

(序列编号292)

D.GST融合蛋白的生产与纯化

按照Pharmacia Biotech公司《GST融合系统》(第2版第2次修订本)(GST Fusion System，Second Edition，Revision 2)中所述的方案，使用pGEX-3X表达载体的构建 物被用于制造融合蛋白。并针对1L规模的生产与纯化，对方法II进行了优化。

纯化的DNA转化大肠杆菌并生长至OD600达到0.4-0.8(600λ)。通过向细胞培养 物添加IPTG诱导蛋白表达1-2小时。收集并溶解细胞。收集细胞溶解物并添加GS4B 树脂(Pharmacia目录号17-0756-01)以结合GST融合蛋白。分离树脂并用GEB II洗 脱GST融合蛋白。纯化的蛋白-80℃保存在GEB II中。

纯化的蛋白用于以ELISA为基础的检测和抗体生产。

E.IgG融合蛋白的生产与纯化

采用CD5γ或PEAK10IgG表达载体的构建物被用于生产融合蛋白。在常规生长 条件下(DMEM+10％FCS)，按照每一百万个细胞1微克载体DNA的比例，使用常 规的磷酸钙沉淀法(Sambrook，Fritsch和Maniatis所著，冷泉港出版社(Cold Spring Harbor Press))用纯化的DNA载体转染293 EBNA T细胞。这一载体导致生成分泌到 培养基中的融合蛋白。检测瞬时转染细胞的最高表达情况，并在这一最高值时(通常 1-2天)收集含融合蛋白的培养基。融合蛋白或采用蛋白质A色谱法纯化，或不经附 加步骤直接在培养基中冷冻。

实施例5

TIP-1特异结合致癌E6蛋白

A. 摘要

进行实验以证明或证实所述PDZ结构域只能识别全长致癌HPV E6蛋白而不是 非致癌E6变体的C末端。这证实了通过考察使用全长E6融合蛋白能否重现PDZ 结合来使用代表E6蛋白PL序列的肽的方法。

简而言之，按照HPV 18(致癌的)和HPV 11(不致癌的)的E6全长蛋白序列如实 施例3所述构建了GST-E6融合蛋白。通过使用改进的ELISA检测，对TIP-TIP-IgG 融合蛋白(两个拷贝TIP-1 PDZ结构域与hIgG恒定区融合，实施例4中部分描述了 融合蛋白的纯化)与这两种E6变体的结合进行了评定。

随后的实验也表明使用GST-Tip或GST-Magi融合蛋白对与E6结合的检测并不 明显受4℃或室温孵育的影响。

B. 改进的ELISA检测法

试剂及材料

●Nunc Polysorb 96孔酶标板(Nunc目录号62409-005)(Maxisorp酶标板经证实 具有更高的本底信号)

●pH 7.4的PBS(Gibco BRL目录号16777-148)或AVC磷酸缓冲盐溶液，8毫 克NaCl、0.29毫克KCl、1.44毫克Na2HPO4、0.24毫克KH2PO4，加H2O至1升， pH 7.4；0.2微米滤器过滤

●500毫升PBS中含2％BSA/PBS(10克组分V牛血清白蛋白(ICN Biomedicals 目录号IC15142983))

●5毫克/毫升的羊抗GST单克隆抗体储存液，4℃保存(Amersham Pharmacia， 目录号27-4577-01)，按1∶1000稀释于PBS，终浓度5微克/毫升

●清洗缓冲液，含0.2％Tween 20的50mM Tris，pH 8.0

●备用的TMB(Dako，目录号S1600)

●1M H2SO4

●12通道排枪

●50毫升试剂瓶

●15毫升聚丙烯圆锥形试管

●抗E6HPV18抗体(OEM Sciences)

●抗hIgG抗体-辣根过氧化物酶(Biomeda)

实验方案

1)在4℃下用5微克/毫升GST-E6融合蛋白包板过夜

2)倒出蛋白并轻轻拍干

3)封闭-每孔加200微升2％BSA/PBS，4℃孵育2小时

4)制备PDZ蛋白(TIP-TIP-IgG转染上清液和2％BSA/PBS按50∶50比例混合)

5)用预冷的PBS清洗3次

6)添加第4步制备的PDZ蛋白或含1微克/毫升抗E6抗体的2％BSA/PBS(或 作为对照的抗GST抗体)

7)用预冷的PBS清洗3次

8)在冰上每孔添加100微升适当浓度的酶联检测抗体(抗hIgG抗体-辣根过氧 化物酶、抗山羊抗体-辣根过氧化物酶、或抗小鼠抗体-辣根过氧化物酶)，4℃孵育 20分钟

9)启动酶标仪并准备文档

10)用Tween清洗缓冲液清洗5次，避免产生泡沫

11)使用手套，每孔添加100微升TMB

-室温下暗室孵育

-定期检查平板(5、10、20分钟)

-如果需要，在650纳米处(蓝光)获取早期读数

-30分钟后用100微升1M H2PO4终止反应

-在450纳米处(黄光)读取最终读数

C.结合实验结果

TIP-1(一种典型的结合大多数致癌E6PL(实施例2)的PDZ结构域)能特异识别来 自全长致癌E6变体(HPV18-E6)的PL而不与非致癌变体(HPV11-E6；图1)结合。此 外，纯化的TIP-TIP-IgG甚至能以与产生的抗HPV18-E6抗体同等的水平识别GST- HPV18 E6融合蛋白。使用抗GST抗体以证实GST-HPV18 E6和GST-HPV11 E6包 被平板的均一性(未公开数据)。

此外，所述检测方法是耐用的，并且其偏离率足够稳定，因而可以在4℃下或 室温下进行所述检测方法的孵育步骤。对于GST-Magi或GST-TIP1与E6结合而言， 所述两个温度之间几乎观察不到差异(图2)。

E6活性可以进一步通过其结合DNA的能力、或在细胞溶解物存在的条件下使p53 降解、Zn2+结合等进行检测。

实施例6

PDZ结构域与HPV16 E6相互作用的EC50测定

使用上述的G-检测，检测了几种GST-PDZ结构域融合蛋白以测定其与HPV16 E6 蛋白PL的相对结合强度。用对应于HPV16 E6的PL的肽相对恒定量的GST-PDZ 结构域融合蛋白进行滴定，其结果如下所示。这些结果证明，虽然多种PDZ结构域 能结合HPV16的E6蛋白，MAGI1的第一个功能结构域(本说明书中的结构域2)结 合最紧密，使之最适于用于诊断目的。出乎意料的是，特别是与MAGI1协同是唯 一被证明与所有已确定的致癌E6蛋白种类结合的含PDZ结构域蛋白。这些都证明 对于致癌HPV感染来说，MAGI1是有益的捕获/检测物质。

表7：HPV16 E6蛋白与多种PDZ结构域的EC50值   PDZ基因   EC50a[μM]   RNA表达(子宫颈细胞系)   Magi1C(PDZ2)   0.056   ++   Magi3(PDZ1)   0.31   阴性   SAAT1KIAA   0.58   阴性   TIP1   0.75   +++   VARTUL   0.94   +   DLG1(PDZ2)   未测   ++++   PSD95(PDZ1-3)   1.0   未测   SAST2   1.2   未测   DLG2(PDZ3)   1.6   未测   DLG3(PDZ1-2)   3.8   未测   PSD95(PDZ2)   6.8   未测   SIP1(PDZ1)   7.5   未测

实施例7

抗纯化的HPV18 E6融合蛋白抗体的生产

为了实现对致癌HPV感染的基于夹心ELISA的诊断的附加利益，应当获得E6 蛋白的高亲和力特异性抗体。理想的是，用于诊断的单克隆抗体可以从那些具有不 断更新的来源的动物中产生。

以5天为间隔，用25微克细菌来源纯化的GST-HPV18 E6注射Balb/c小鼠(Josman Labs)。每次注射抗原3天以后采集这些小鼠的血清并检测其与GST-HPV18 E6(免疫 原)或在抗GST抗体去除后与单独GST的反应性(按照Pharmacia实验方案)。使用 第28天采集的血清的结果显示在图3中。来自小鼠的血清与细菌来源纯化的GST- HPV18 E6蛋白反应而不与单独GST反应。所述动物是通过常规方法从中产生单克 隆抗体的良好候选对象。

实施例8

病原体PL蛋白

使用针对PDZ:PL相互作用检测的蛋白质或化合物可以对病原体的许多其他蛋 白质进行检测。表8包含了一些能通过使用这里所公开的技术进行检测的示范性的 蛋白质，但这并不意味着任何形式的限制。

表8：可以按照PDZ:PL诊断法处理的的示例性病原体 病原体 蛋白  GI或ACC号   PL/PDZ 腺病毒 E4   19263371   PL 乙肝病毒 蛋白质X   1175046   PL 人T细胞白血病病毒 TAX   6983836   PL 疱疹病毒 DNA聚合酶   18307584   PL 疱疹病毒 US2   9629443   PL

实施例9

HPV16感染细胞中内源性E6蛋白的定量

A)摘要

设计并进行了实验以测定HPV16感染的宫颈癌细胞系中内源性E6蛋白数量。 结果表明HPV16感染的宫颈癌细胞系含有10,000到100,000数量级的E6蛋白。由 这一发现推断，E6蛋白可以用作针对细胞HPV感染的诊断或预后标志。蛋白质降 解途径抑制剂的使用可以有助于这样的检测。

B)方法：

E6蛋白的免疫共沉淀

HPV16感染的宫颈癌细胞系SiHa和CasKi用预冷的PBS清洗并以2×107细 胞/毫升的浓度在HEPES细胞溶解缓冲液(50mM HEPES pH 7.4，150mM NaCl，10％ 甘油，0.5％triton X-100，1mg/ml BSA，1粒蛋白酶抑制剂混合剂(Roche)和1mM PMSF)中重悬。细胞溶解在冰浴中进行30分钟。溶解物通过4℃下14,000g离心5 分钟进行清洁。E6蛋白与小鼠抗E6抗体(克隆6F4)和蛋白质G小珠(Pharmacia， Piscataway，NJ)免疫共沉淀。4℃下转动孵育2小时以后，小珠用清洗缓冲液(50mM HEPES pH 7.4，150mM NaCl，10％甘油，0.1％Triton X-100，蛋白酶抑制剂混合剂 (CALBIOCHEM)，1mM PMSF)洗涤3次。沉淀在SDS-PAGE上样缓冲液中重悬并 用6F4抗E6抗体以及抗小鼠IgG抗体-辣根过氧化物酶偶联物(Jackson Immuno Research)通过免疫印迹进行分析。

通过免疫印迹检测宫颈癌细胞溶解物中的E6蛋白

SiHa和CasKi宫颈癌细胞系以2×107细胞/毫升的浓度在溶解缓冲液中冰浴 溶解30分钟。随即将对应于约106个细胞的溶解物在12％SDS-PAGE凝胶上进行 分离，然后转移到PVDF膜。E6蛋白用6F4抗HPV16E6抗体以及抗小鼠IgG抗体 -辣根过氧化物酶偶联物(Jackson Immuno Research)进行检测。

C)结果

为了测定遭HPV16感染的宫颈癌细胞中存在的内源性E6蛋白的表观分子量以 及为了确保PAGE上看到的抗E6单克隆抗体特异性条带代表了病毒E6蛋白，用表 达HPV16的无标签E6蛋白的构建物转染293 EBNA T细胞。制备这些细胞以及HPV 感染的SiHa宫颈癌细胞的细胞溶解物。通过抗E6特异性单克隆抗体的使用，对上 述两种细胞(转染的和HPV感染的)溶解物中的E6蛋白进行免疫共沉淀。使用PAGE 技术对两种细胞溶解物并排进行分析(图6)。所得的针对转染的E6的E6特异性条 带以与SiHa宫颈癌细胞系中的抗E6抗体特异性条带相同的水平在PAGE凝胶中迁 移，从而最强有力地提示，与抗E6特异性单克隆抗体发生免疫共沉淀的产物代表 了病毒E6蛋白。使用特异性的E6单克隆抗体，在HPV16感染的宫颈癌细胞系CasKi 中检测到了相同大小的条带(图7)。

在一种不同的实验步骤中，对HPV感染的宫颈癌细胞系SiHa和CasKi的内源 性病毒E6蛋白从其细胞溶解物中直接进行了检测(图7)。依赖于E6特异性单克隆 抗体的条带以与用E6编码载体转染的细胞的条带相同的方式迁移。

为检测体内E6的稳定性能否通过选择性阻碍参与蛋白降解的蛋白酶体得以提 高，一些样品的细胞溶解物用蛋白酶体抑制剂MG132进行了处理。在这些样品中， E6特异性条带强度提高了约2-3倍。这说明，添加适当的蛋白降解途径抑制剂混合 物能够被用于通过临时增加其在细胞内积累而增强E6蛋白的特异性信号。

通过将PAGE凝胶上E6特异性信号与得自加载于相同凝胶上的MBP-E6(HPV16) 融合蛋白的信号进行比较，测量了细胞溶解物中E6蛋白的数量。在有些情况下， MBP-E6融合蛋白用X因子消化以释放单纯的E6部分。信号强度比较研究证明， 注入HPV16的宫颈癌来源的细胞系(SiHa、CasKi)包含浓度为0.3到3纳克每1×106 个细胞的E6。由此推断，E6的数量和稳定性对于通过E6特异性检测方法(ELISA) 检测是切实可行的。

实施例10

致癌E6-PL探测分子选择性结合存在于细胞溶解物中的内源性HPV16-E6蛋白 并可用于将内源性E6蛋白同存在于细胞溶解物中的其他成分分离

A)摘要

进行实验以检测致癌E6-PL探测分子是否能选择性结合用E6编码载体转染的细 胞的内源性E6。此外，检测了结合之后所述致癌E6-PL探测分子能否用于将E6与 细胞溶解物中其他分子分离。研究发现证明致癌E6-PL探测分子具有选择性并能用 于将E6蛋白从细胞溶解物分子的复杂混合物中分离。

B)方法

E6蛋白与重组PDZ蛋白的下拉实验(pull down)

在下拉实验中检测了GST-PDZ融合蛋白(即Magi1 PDZ结构域1、Syn2bp、Magi3 PDZ结构域1、Tip1、PSD-95 PDZ结构域2以及SAST1)。简而言之，在4℃下将10 微克重组GST-PDZ蛋白与30微升谷胱甘肽琼脂糖小珠在1毫升缓冲液中(50mM HEPES pH 7.4，150mM NaCl，10％甘油，0.1％Triton X-100，蛋白酶抑制剂混合 剂，1mM PMSF)转动孵育1小时。随后，在4℃下将107个用pMKit-HA-HPV16-E6 或单独pMKit-HA载体瞬时转染的293细胞的溶解物与所述结合了PDZ蛋白的小珠 转动孵育3小时。清洗小珠并通过12％SDS-PAGE凝胶电泳和随后的免疫印迹进 行分析。用生物素偶联的抗HA抗体(克隆3F10或12CA5，Boehringer Mannheim)和 辣根过氧化物酶-链霉亲和素(Zymed)对膜进行检测。

另外，用pmKit-HA、pmkit-HPV16-HA-E6或pmKit-HA-HPV16 E6-ΔPL瞬时转 染的293细胞的细胞溶解物与重组GST-Magi1-PDZ结构域1孵育并固定在谷胱甘 肽-琼脂糖小珠上，结合的组分用抗HA抗体进行免疫印迹分析。平行地，用抗HA 抗体对细胞溶解物进行免疫共沉淀和检测。

C)结果

PDZ-E6-PL结合的G检测研究以及E6-PDZ相互作用的实验结合亲和力的测定 提示了为设计致癌E6-PL探测分子所要检测的候选PDZ结构域。在“下拉”实验中， 检测了5种不同PDZ结构域(Tip1、Magi1结构域1、Sast2、Psd95结构域2、突触 泡磷酸酶-2结合蛋白)对细胞溶解物中内源性过表达E6的下拉。HA标记的E6HPV16 转染的细胞溶解物与代表上述PDZ结构域的与琼脂糖小珠相连的GST-PDZ融合蛋 白孵育(图5)。对照细胞样品用HA表达构建物转染。用抗HA单克隆抗体检测证明， 通过由作为致癌E6-PL探测分子的所有5种检测的GST-PDZ蛋白(Tip1、Magi1结 构域1、Sast2、Psd95结构域2、突触泡磷酸酶-2结合蛋白)代表的PDZ结构域，E6 选择性地从细胞溶解物中被拉出。图5B中所示的结果表明，Magi1-PDZ结构域1 与HA-E6而不与HA-E6ΔPL(缺失了3个C末端氨基酸)结合。这一方法能用于确定 特定的PDZ结构域是否具有特异性结合E6的能力。得出结论，细胞溶解物的复杂 混合物所代表的潜在PDZ结合蛋白和E6之间对结合PDZ的竞争能够通过对组成致 癌E6-PL探测分子的具体PDZ结构域的适当选择向选择性结合E6倾斜。

实施例11

HPV感染的宫颈癌细胞系的内源性E6蛋白能够通过致癌E6-PL探测分子在夹 心ELISA(SANDWICH ELISA)检测中进行检测

A)摘要

对实验进行了描述，其中致癌E6-PL探测分子用以通过夹心ELISA法选择性检 测HPV感染细胞中E6蛋白的存在。特异性捕获致癌E6而不是非致癌E6说明，基 于PDZ的致癌E6-PL探测分子能被用于以E6检测为基础的HPV感染的诊断测试 和/或宫颈癌测试。

B)方法：

1型夹心ELISA法PBS中浓度为5微克/毫升的抗E6抗体以每孔100微升的量 在4℃下包被96孔ELISA平板(Polysorb或Maxisorp)过夜。平板用PBS清洗并用 200微升含2％BSA的PBS在4℃下封闭2小时。添加稀释在含2％BSA的PBS中 的细胞溶解物并在室温下孵育1小时。用PBS清洗3次以后，添加100微升含5微 克/毫升致癌E6探测分子(例如Magi1-Magi1-IgG或GST-Magi1-PDZ1)的PBS/2％ BSA，平板室温孵育45分钟。随后用PBS清洗平板3次并用含适当浓度抗hIgG-HRP (Jackson Immuno Research)或抗GST-HRP(Pharmacia)的PBS/2％BSA室温孵育45分 钟。用50mM Tris/0.2％Tween-20清洗5次以后，平板与每孔100微升TMB底物(Dako Industries)孵育。在适当时间(通常20分钟以后)通过添加100微升0.1M H2SO4终止 比色反应并用ELISA酶标仪在450纳米处读取平板读数。

在1型ELISA法的一种形式中，在添加到抗E6抗体包被的平板上之前，细胞 溶解物先以2.5-5微克/毫升的终浓度在4℃下与致癌E6探测分子孵育1-2小时。

2型夹心ELISA法在2型夹心法中，基本按照1型夹心法中所使用的试剂和步 骤。与1型夹心法不同的是，100微升致癌E6探测分子包被在ELISA平板上并且 使用抗E6抗体检测与致癌探测分子结合的E6，随后通过抗小鼠IgG-HRP(Jackson Immuno Research)检测。在2型夹心法的一种改进方式中，可使用生物素化的试剂(抗 E6抗体或致癌探测分子)，随后通过链霉亲和素-HRP进一步降低本底并提高灵敏 度。

C)结果：

设计了两种不同形式的ELISA夹心法。在1型ELISA夹心法中，存在于细胞溶 解物中的E6蛋白被E6特异性单克隆抗体捕获，特定致癌变体的检测通过致癌E6- PL探测分子实现。在2型ELISA夹心法中，致癌E6蛋白通过致癌E6-PL探测分 子捕获到固相支持物并通过特异性E6抗体或其他特异性E6结合物质(如基于核酸 的结合化合物、结合E6的化学试剂、E6结合蛋白或这些化合物的组合)实现E6的 检测。细胞直接在组织培养皿上溶解，溶解物先通过离心去除不溶成分。细菌溶解 物与致癌E6-PL探测分子(GST与Magi1 PDZ结构域1组成的融合蛋白)先在4℃下 孵育。随后，细胞溶解物加载于E6特异性抗体包被的ELISA平板上。通过添加HRP 偶联的GST特异性抗体和在不同孵育步骤之间适当的清洗步骤之后添加HRP底物 TMB实现检测。检测信号由使用450纳米处吸光率测量值量化的颜色变化构成。

对得自1型ELISA检测的结果进行说明。检测了过表达E6的转染的293EBNAT 细胞和HPV16感染的宫颈癌来源细胞系的HPV16-E6。对于HPV感染细胞来说， 检测极限是约250,000个细胞(图8)。预计降低本底、增强检测信号和增强E6:PDZ 结合可以将灵敏度提高到25,000个细胞或更低。降低本底可以通过优化系统中所有 成分的选择和浓度，以及通过额外的成分存化或增加尺寸排阻或过滤步骤实现。检 测信号可以通过使用更灵敏的检测系统(例如基于化学发光的技术)得以提高。 E6:PDZ结合可以通过改进致癌E6-PL探测分子的PDZ基础，以及通过用磷酸酶处 理含E6的细菌溶解物(这样去除了所有E6-PL位点上任何磷酸根，后者可能干扰、 降低或阻断E6-PL与致癌E6-PL探测分子的特异性结合)得以增强。

实施例12

HPV感染的宫颈癌细胞系的内源性E6蛋白可以通过与膜结合的致癌E6-PL探 测分子检测。基于膜的检测可用以提高以致癌E6-PL探测分子为基础的检测方法的 灵敏度。

A)摘要：

通过实验证明可以用基于膜的形式进行宫颈癌的1型和2型ELISA检测。在膜 形式的宫颈癌诊断试剂盒中，保持了传统1型和2型ELISA夹心法的原则，特别是 关于致癌形式E6的专有性捕获或检测。发现相对于传统ELISA，在基于膜的检测 法中灵敏度得到了极大提高。

B) 方法：

用2毫升PBS/2％BSA先行封闭12孔的Corning平板(有盖的组织培养平板，聚 苯乙烯材质，孔径22毫米)，随后用2毫升PBS冲洗3次。

使用2微升移液器用2微升GST-Magi1结构域1溶液(88.6，0.17毫克/毫升)在硝 酸纤维素膜上点样(在1×1.5厘米的膜上一式两份点样，转印，转移介质，支持的硝 酸纤维素膜(目录号162-0097(0.2uM)，Lot号8943)。风干约5-10分钟。

在平板上用1毫升PBS将膜水合几分钟。

室温下在每个孔中用1毫升PBS/2％BSA对膜进行封闭30分钟，同时保持振荡。

用PBS清洗3次，每次1毫升约5-10分钟，直接吸出第一次清洗液。可以在室 温下清洗。

室温下膜与细胞溶解物(约300微升共3百万个细胞)孵育30分钟。同样在PBS/2％ BSA中进行1∶10倍稀释(3百万、30万、3万、3千)(33.33微升样品和300微升PBS/2％ BSA)。

在4℃下用PBS清洗3次，每次1毫升约3-5分钟

膜与抗E6抗体(6F4)4℃孵育30分钟(1∶5000稀释，或将1∶100稀释液按1∶50稀 释于PBS/2％BSA)(需要0.4毫升每孔，36孔需要16毫升(320微升1∶1006F4，15.68 毫升PBS/2％BSA))。

用PBS在4℃下清洗3次，每次约5-10分钟。

与HRP-抗小鼠抗体(1∶1000)4℃孵育30分钟，同时保持振荡(HRP-抗小鼠免疫 球蛋白，辣根过氧化物酶与绵羊的完整抗体相连，Amersham，NA931V，lot 213295。 每孔使用400微升，36孔需要16微升HRP-抗小鼠抗体，16毫升PBS/2％BSA)。

在4℃下用PBS清洗5次，每次振荡约5-10分钟，最后一次清洗10分钟。然 后吸出最后的清洗液并每孔添加1毫升新鲜的PBS。

用ECL+系统在皮氏平皿中显影并在柯达胶片上曝光。

C) 结果：

在一种2型夹心法方案中，将GST-Magi1致癌E6-PL探测分子点加在膜上并添 加递减量的HPV11和HPV16 MBP-E6融合蛋白与之结合。用E6特异抗体检测清楚 地表明了对致癌(HPV16)E6而不是对非致癌(HPV11)E6信号的特异性。通过更长曝 光时间(5分钟)，可以容易地检测总量0.1纳克的HPV16 MBP-E6(图9，最上面部分)。

在相同的实验中，将HPV16-E6转染细胞和模仿转染细胞的溶解物用于基于膜 的2型夹心法测试。仅对E6表达细胞而不是模仿转染细胞得到了E6特异信号(图9， 下面部分)。这些结果清楚地表明，所述基于膜的宫颈癌测试可以用以膜为基础的形 式实行。

在随后的实验中，测试了HPV感染细胞的细胞溶解物(图10)。明显地，只有表 达HPV16-E6的细胞产生信号(SiHa和CasKi)，而不是HPV阴性但宫颈癌阳性的细 胞系C33。E6特异信号得自300,000个细胞，这表明所述测试的优化形式可能检测 充分更低细胞数量的HPV-E6蛋白。

实施例13

宫颈癌肿瘤中HPV16 E6致癌蛋白的检测

从石蜡包埋的肿瘤上取下一小块组织并分成两半。一份用于基于RT-PCR的HPV 分型，第二份用于蛋白提取。

使用TRIZOL试剂盒(invitrogen)抽提RNA用于分型。简言之，一小块组织转移 到1毫升TRIZOL溶液中并使用Dounce匀浆器悬浮并溶解细胞。抽提RNA并用2- 丙醇沉淀，并通过260纳米光的消光对其定量。1微克RNA用以生成cDNA。引物 是随机六聚体，Superscript II(Invitrogen)用于逆转录。HPV 16、HPV 18和HPV45 的E6基因的特异性引物用于对cDNA模板的PCR扩增。用HPV16 E6特异引物而 不是HPV18或45的特异引物得到了预期大小的条带。因而，检查的肿瘤由HPV16 感染的细胞构成。

为了蛋白提取，将一块组织直接在1毫升溶解缓冲液(50mM Hepes pH7.5、150 mM NaCl、1mM EDTA、10％甘油、1％Triton、10mM氟化钠、1mM原钒酸钠、1mM PMSF、1∶100稀释的Calbiochem蛋白酶抑制剂)中溶解，用3毫升的Dounce匀浆 器破碎细胞膜。总蛋白浓度通过Bradford蛋白浓度检测法测定，对应约1,000,000 个细胞的蛋白量在12％PAGE凝胶上分离。来自非HPV16感染的肿瘤的细胞溶解 物作为阴性对照加样。

凝胶通过使用抗HPV16-E6的特异性单克隆抗体的免疫印迹技术分析。在HPV16 感染的肿瘤来源的溶解物中而不是在HPV16阴性对照肿瘤来源的溶解物中显示出 了一条对应HPV16-E6蛋白正确大小的条带。条带强度与用1,000,000个HPV16特 异性SiHa细胞测得的E6特异性条带相当。C33-HPV E6阴性的子宫颈细胞系； MBP-E6-麦芽糖结合蛋白-HPV16 E6融合蛋白；HPV E6过表达-来自用表达全长 HPV16 E6蛋白的构建物转化的HEK 293细胞的溶解物。这些结果显示在图11中。

实施例14

使用快速免疫检测技术和荧光检测对人的样本中宫颈癌的检测

A)摘要：

对实验进行了描述，其中出于宫颈癌诊断的目的，通过使用快速免疫检测法 (RIA)，致癌E6-PL探测分子被用于选择性检测人样本中致癌E6蛋白的存在。

B)方法：

宫颈细胞通过使用常规的宫颈刷(如CULTURETTE DIRECT(Becton Dickinson)) 收集并在样品稀释液中重悬。细胞通过离心收集，细胞沉淀在200微升预冷的溶解 缓冲液(50mM Hepes pH7.5、150mM NaCl、1mM EDTA、10％甘油、1％Triton、10mM 氟化钠、1mM原钒酸钠、1mM PMSF、1∶100稀释的Calbiochem蛋白酶抑制剂)中 重悬，冷却到5℃，并轻轻振荡以促进细胞溶解。此时的样品可以运输。75微升细 胞溶解物稀释在PBS/2％BSA中，随后在适用于荧光酶标仪的已用含5微克/毫升重 组Magi1结构域2(这里称为结构域2，但在大部分公开文献中称为结构域1)融合蛋 白的PBS包被并用白蛋白或明胶封闭了非特异位点的平板上添加150微升(或约一 半孔体积)所述稀释的细胞溶解物。稀释的细胞溶解物在室温下孵育30分钟。用PBS 洗涤3次后，添加100微升含0.5微克/毫升FITC标记的抗致癌E6抗体混合物(其 共同识别所有普通HPV类型的E6蛋白)的PBS/2％BSA，平板在室温下孵育25分 钟。然后平板用PBS洗涤3次并测量荧光值。

C)结果：

通过与标准品和对照比较荧光强度值，确定癌症阶段的诊断。

实施例15

在使用比色检测的层流试剂条测试中使用快速免疫检测技术检测来自人样品的 宫颈癌

A)摘要：

对实验进行了描述，其中出于宫颈癌诊断的目的，通过使用试剂条形式的(或层 流形式的)快速免疫检测法(RIA)，致癌E6-PL探测分子被用于选择性检测人样本中 致癌E6蛋白的存在。这一检测法类似于大部分家用一步hCG怀孕检验。

B)方法：

宫颈细胞通过使用常规的宫颈刷(如CULTURETTE DIRECT(Becton Dickinson)) 收集并在样品稀释液中重悬。细胞通过离心收集，细胞沉淀在200微升预冷的溶解 缓冲液(50mM Hepes pH7.5、150mM NaCl、1mM EDTA、10％甘油、1％Triton、10mM 氟化钠、1mM原钒酸钠、1mM PMSF、1∶100稀释的Calbiochem蛋白酶抑制剂)中 重悬，冷却到5℃，并轻轻振荡以促进细胞溶解。此时的样品可以运输。细胞溶解 物用PBS/2％BSA稀释到500微升并在检验装置中应用。所述检验装置包括与有色 基团偶联的抗E6单克隆抗体混合物以及包被在膜上检测区的重组Magi1 PDZ2融合 蛋白。通过毛细管作用，溶解的细胞样品在检测区上移动并与浸透的试剂反应，在 检测窗口形成可见的有色条带。样品中致癌E6蛋白的存在会导致在检测区形成明 显的有色条带，从而表示对致癌E6蛋白的阳性结果。相反地，如果检测区没有条 带出现，测试为阴性。

C)结果：

通过对检测区中检测线颜色与阳性和阴性对照之间的比较来校验正确的检验功 能，确定对癌症的诊断。

本发明的范围不受举例说明的实施例的限制，这些实施例是作为本发明单独方 面的说明，并且任何功能上等同的序列包括在本发明的范围以内。当然，除了这里 所展示和描述的那些改变以外，本发明的多种改变对于精通本领域的人员来说，通 过前面的的描述和附图会是显而易见的。这意味着这样的改变属于附属的权利要求 的范围。

这里引用的所有出版物和在申请者日期页中引用的优先权文件通过参考全面完 整地结合在本申请中。

表9   序列   编号   名称   gi/acc   结构   域   1   26s亚基p27   9184389   1   2   AF6   430993   1   3   AIPC   12751451   1   4   AIPC   12751451   2   5   AIPC   12751451   3   6   AIPC   12751451   4   7   α辅肌动蛋白-2   相连LIM蛋白   2773059   1   8   APXL-1   13651263   1   9   萎缩蛋白-1相   互作用蛋白   2947231   1   10   萎缩蛋白-1相   互作用蛋白   2947231   2   11   萎缩蛋白-1相   互作用蛋白   2947231   3   12   萎缩蛋白-1相   互作用蛋白   2947231   4   13   萎缩蛋白-1相   互作用蛋白   2947231   5   14   萎缩蛋白-1相   互作用蛋白   2947231   6   15   CARD11   12382772   1   16   CARD14   13129123   1   17   CASK   3087815   1   18   连接增强子   3930780   1   19   胞黏蛋白结合   蛋白   3192908   1   20   密蛋白180   16755892   1   21   DLG1   475816   1   22   DLG1   475816   2   23   DLG1   475816   3   24   DLG2   12736552   1   25   DLG2   12736552   2   26   DLG2   12736552   3   27   DLG5   3650451   1   28   DLG5   3650451   2   29   DLG6，剪接变   体1   14647140   1   30   DLG6，剪接变   体2   AB053303   1   31   DVL1   2291005   1   32   DVL2   2291007   1   33   DVL3   6806886   1   34   ELFIN1   2957144   1   35   ENIGMA   561636   1   36   ERBIN   8923908   1   37   EZRIN结合蛋   白50   3220018   1   38   EZRIN结合蛋   白50   3220018   2   39   FLJ00011   10440352   1   40   FLJ11215   11436365   1   41   FLJ12428   BC012040   1   42   FLJ12615   10434209   1   43   FLJ20075   7019938   1   44   FLJ21687   10437836   1   45   FLJ31349   AK055911   1   46   FLJ32798   AK057360   1   47   GRIP1   4539083   1   48   GRIP1   4539083   2   49   GRIP1   4539083   3   50   GRIP1   4539083   4   51   GRIP1   4539083   5   52   GRIP1   4539083   6   53   GRIP1   4539083   7   54   GTP酶激活酶   2389008   1   55   鸟嘌呤交换因   子   6650765   1   56   HEMBA   1000505   10436367   1   57   HEMBA   1000505   10436367   2   58   HEMBA   1003117   7022001   1   59   HTRA3   AY040094   1   60   HTRA4   AL576444   1   61   INADL   2370148   1   62   INADL   2370148   2   63   INADL   2370148   3   64   INADL   2370148   4   65   INADL   2370148   5   66   INADL   2370148   6   67   INADL   2370148   7   68   INADL   2370148   8   69   KIAA0147   1469875   1   70   KIAA0147   1469875   2   71   KIAA0147   1469875   3   72   KIAA0147   1469875   4   73   KIAA0303   2224546   1   74   KIAA0313   7657260   1   75   KIAA0316   6683123   1   76   KIAA0340   2224620   1   77   KIAA0380   2224700   1   78   KIAA0382   7662087   1   79   KIAA0440   2662160   1   80   KIAA0545   14762850   1   81   KIAA0559   3043641   1   82   KIAA0561   3043645   1   83   KIAA0613   3327039   1

  84   KIAA0751   12734165   1   85   KIAA0807   3882334   1   86   KIAA0858   4240204   1   87   KIAA0902   4240292   1   88   KIAA0967   4589577   1   89   KIAA0973   4589589   1   90   KIAA1095   5889526   1   91   KIAA1095   5889526   2   92   KIAA1202   6330421   1   93   KIAA1222   6330610   1   94   KIAA1284   6331369   1   95   KIAA1389   7243158   1   96   KIAA1415   7243210   1   97   KIAA1526   5817166   1   98   KIAA1526   5817166   2   99   KIAA1526   5817166   3   100   KIAA1620   10047316   1   101   KIAA1634   10047344   1   102   KIAA1634   10047344   2   103   KIAA1634   10047344   3   104   K1AA1634   10047344   4   105   KIAA1634   10047344   5   106   KIAA1719   1267982   0   107   KIAA1719   1267982   1   108   KIAA1719   1267982   2   109   KIAA1719   1267982   3   110   KIAA1719   1267982   4   111   KIAA1719   1267982   5   112   KIAA1719   1267982   6   113   LIM Mystique   12734250   1   114   LIM蛋白   3108092   1   115   LIMK1   4587498   1   116   LIMK2   1805593   1   117   LIM-RIL   1085021   1   118   LU-1   U52111   1   119   Magi1   3370997   1   120   Magi1   3370997   2   121   Magi1   3370997   3   122   Magi1   3370997   4   123   MAG11   3370997   5   124   Magi1   3370997   6   125   MGC5395   BC012477   1   126   MINT1   2625024   1   127   MINT1   2625024   2   128   MINT3   3169808   1   129   MINT3   3169808   2   130   MPP1   189785   1   131   MPP2   939884   1   132   MUPP1   2104784   1   133   MUPP1   2104784   2   134   MUPP1   2104784   3   135   MUPP1   2104784   4   136   MUPP1   2104784   5   137   MUPP1   2104784   6   138   MUPP1   2104784   7   139   MUPP1   2104784   8   140   MUPP1   2104784   9   141   MUPP1   2104784   10   142   MUPP1   2104784   11   143   MUPP1   2104784   12   144   MUPP1   2104784   13   145   NeDLG   10863920   1   146   NeDLG   10863920   2   147   NeDLG   10863920   3   148   Neurabin II   AJ401189   1   149   N0S1   642525   1   150   新PDZ基因   7228177   1   151   新PDZ基因   7228177   2   152   新丝氨酸蛋白   酶   1621243   1   153   Numb结合蛋   白   AK056823   1   154   Numb结合蛋   白   AK056823   2   155   Numb结合蛋   白   AK056823   3   156   Numb结合蛋   白   AK056823   4   157   外膜   7023825   1   158   p55T   12733367   1   159   PAR3   8037914   1   160   PAR3   8037914   2   161   PAR3   8037914   3   162   PAR6   2613011   1   163   PAR6γ   13537118   1   164   PDZ-73   5031978   1   165   PDZ-73   5031978   2   166   PDZ-73   5031978   3   167   PDZK1   2944188   1   168   PDZK1   2944188   2   169   PDZK1   2944188   3   170   PDZK1   2944188   4   171   PICK1   4678411   1   172   PIST   98374330   1   173   prlU6   1478492   1   174   prlL16   1478492   2   175   PSD95   3318652   1   176   PSD95   3318652   2   177   PSD95   3318652   3   178   PTN-3   179912   1   179   PTN-4   190747   1   180   PTPL1   515030   1   181   PTPL1   515030   2   182   PTPL1   515030   3   183   PTPL1   515030   4   184   PTPL1   515030   5

  185   RGS12   3290015   1   186   RGS3   18644735   1   187   Rho结合蛋白-   like   14279408   1   188   丝氨酸蛋白酶   2738914   1   189   Shank1   6049185   1   190   Shank3   *   1   191   Shroom   18652858   1   192   SIP1   2047327   1   193   SIP1   2047327   2   194   SITAC-18   8886071   1   195   SITAC-18   8886071   2   196   SSTRIP   7025450   1   197   SYNTENIN   2795862   1   198   SYNTENIN   2795862   2   199   肌养结合蛋白   1α   1145727   1   200   肌养结合蛋白   β2   476700   1   201   肌养结合蛋白   γ1   9507162   1   202   肌养结合蛋白   γ2   9507164   1   203   类TAX2蛋白   3253116   1   204   TIAM1   4507500   1   205   TIAM2   6912703   1   206   TIP1   2613001   1   207   TIP2   2613003   1   208   TIP33   2613007   1   209   T1P43   2613011   1   210   X-11β   3005559   1   211   X-11β   3005559   2   212   ZO-1   292937   1   213   ZO-1   292937   2   214   ZO-1   292937   3   215   ZO-2   12734763   1   216   ZO-2   12734763   2   217   ZO-2   12734763   3   218   ZO-3   10092690   1   219   ZO-3   10092690   2   220   ZO-3   10092690   3   221   HPV4-E6   222   HPV11-E6   223   HPV20-E6   224   HPV24-E6   225   HPV28-E6   226   HPV36-E6   227   HPV48-E6   228   HPV50-E6   229   HPV16-E6   230   HPV18-E6   231   HPV31-E6   232   HPV35-E6   233   HPV30-E6   234   HPV39-E6   235   HPV45-E6   236   HPV51-E6   237   HPV52-E6   238   HPV56-E6   239   HPV59-E6   240   HPV58-E6   241   HPV33-E6   242   HPV66-E6   243   HPV68-E6   244   HPV69-E6   245   HPV26   246   HPV53   247   HPV66   248   HPV73   249   HPV82   250   2548(1054EF)   251   2549(1058ER)   252   2542(1050EF)   253   2543(1051ER)   254   2563(1071EF)   255   2564(1072ER)   256   2565   (1073ERPL)   257   2560(1074EF)   258   2561(1075ER)   259   2562   (1076ERPL)   260   2603(1080EF)   261   2604(1081ER)   262   2605   (1082ERPL)   263   2606(1083EF)   264   2607(1084ER)   265   2608   (1085ERPL)   266   2612(1086EF)   267   2613(1087ER)   268   2614(1088ERP   L)   269   2615(1089EF)   270   2616(1090ER)   271   2617   (1091ERPL)   272   GST   273   1928(654DL1   2F)   274   1929(655DL1   2R)   275   1453(435BAF)   276   1454(436BAR)   277   399(86TAF)   278   400(87TAR)

  279   1319(TIP G5-1)   280   1320(TIP G3-1)   281   2753(1109TIF)   282   2762(1117TIR)   283   2584(1080TIF)   284   2585(1081TIR)   285   2586(1082TIR)   286   2587(1083TIF)   287   DLG1，3个PDZ   的结构域2   288   Magi1，6个PDZ   的结构域2   289   TIP1   290   TIP1-FL-pGEX   291   TIP1-Min   292   TIP1-CD5g   293   Magi1D2v2   294   Magi1D2v3   295   Magi1D2v4   296   Magi1D2v5   297   Magi1D2v6   298   Magi1D2v7   299   Magi1D2v8   300   Magi1D2v9   301   Magi1D2v10   302   Magi1D2v11   303   Magi1D2v12   304   Magi1D2v13   305   Magi1D2v14   306   Magi1D2v15   307   Magi1D2v16   308   Magi1D2v17   309   Magi1D2v18   310   Magi1D2v19   311   Magi1D2v20   312   Magi1D2v21   313   Magi1D2v22   314   Magi1D2v23   315   Magi1D2v24   316   Magi1D2v25   317   Magi1D2v26   318   Magi1D2v27   319   Magi1D2v28   320   Magi1D2v29   321   Magi1D2v30   322   Magi1D2v31   323   Magi1D2v32   324   Magi1D2v33   325   Magi1D2v34   326   Magi1D2v35   327   Magi1D2v36   328   Magi1D2v37   329   Magi1D2v38   330   Magi1D2v39

                                序列表

<110>P.S.鲁(Lu，Peter S.)

     J.施韦策(Schweizer，Johannes)

     C.S.迪亚斯-萨米恩托(Diaz-Sarmiento，Chamorro Somoza)

     M.P.贝尔马斯(Belmares，Michael P.)

<120>诊断宫颈癌的方法

<130>VITA-008WO

<150>60/409,298

<151>2002-09-09

<150>60/450,464

<151>2003-02-27

<150>10/630,590

<151>2003-07-29

<150>60/490,094

<151>2003-07-25

<160>330

<170>FastSEQ，Windows版本4.0

<210>1

<211>87

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>1

Arg Asp Met Ala Glu Ala His Lys Glu Ala Met Ser Arg Lys Leu Gly

 1               5                  10                  15

Gln Ser Glu Ser Gln Gly Pro Pro Arg Ala Phe Ala Lys Val Asn Ser

            20                  25                  30

Ile Ser Pro Gly Ser Pro Ser Ile Ala Gly Leu Gln Val Asp Asp Glu

        35                  40                  45

Ile Val Glu Phe Gly Ser Val Asn Thr Gln Asn Phe Gln Ser Leu His

    50                  55                  60

Asn Ile Gly Ser Val Val Gln His Ser Glu Gly Ala Leu Ala Pro Thr

65                  70                  75                  80

Ile Leu Leu Ser Val Ser Met

                85

<210>2

<211>93

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>2

Leu Arg Lys Glu Pro Glu Ile Ile Thr Val Thr Leu Lys Lys Gln Asn

 1               5                  10                  15

Gly Met Gly Leu Ser Ile Val Ala Ala Lys Gly Ala Gly Gln Asp Lys

            20                  25                  30

Leu Gly Ile Tyr Val Lys Ser Val Val Lys Gly Gly Ala Ala Asp Val

        35                  40                  45

Asp Gly Arg Leu Ala Ala Gly Asp Gln Leu Leu Ser Val Asp Gly Arg

    50                  55                  60

Ser Leu Val Gly Leu Ser Gln Glu Arg Ala Ala Glu Leu Met Thr Arg

65                  70                  75                  80

Thr Ser Ser Val Val Thr Leu Glu Val Ala Lys Gln Gly

                85                  90

<210>3

<211>105

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>3

Leu Ile Arg Pro Ser Val Ile Ser Ile Ile Gly Leu Tyr Lys Glu Lys

 1               5                  10                  15

Gly Lys Gly Leu Gly Phe Ser Ile Ala Gly Gly Arg Asp Cys Ile Arg

            20                  25                  30

Gly Gln Met Gly Ile Phe Val Lys Thr Ile Phe Pro Asn Gly Ser Ala

        35                  40                  45

Ala Glu Asp Gly Arg Leu Lys Glu Gly Asp Glu Ile Leu Asp Val Asn

    50                  55                  60

Gly Ile Pro Ile Lys Gly Leu Thr Phe Gln Glu Ala Ile His Thr Phe

65                  70                  75                  80

Lys Gln Ile Arg Ser Gly Leu Phe Val Leu Thr Val Arg Thr Lys Leu

                85                  90                  95

Val Ser Pro Ser Leu Thr Asn Ser Ser

            100                 105

<210>4

<211>132

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>4

Gly Ile Ser Ser Leu Gly Arg Lys Thr Pro Gly Pro Lys Asp Arg Ile

 1               5                  10                  15

Val Met Glu Val Thr Leu Asn Lys Glu Pro Arg Val Gly Leu Gly Ile

            20                  25                  30

Gly Ala Cys Cys Leu Ala Leu Glu Asn Ser Pro Pro Gly Ile Tyr Ile

        35                  40                  45

His Ser Leu Ala Pro Gly Ser Val Ala Lys Met Glu Ser Asn Leu Ser

    50                  55                  60

Arg Gly Asp Gln Ile Leu Glu Val Asn Ser Val Asn Val Arg His Ala

65                  70                  75                  80

Ala Leu Ser Lys Val His Ala Ile Leu Ser Lys Cys Pro Pro Gly Pro

                85                  90                  95

Val Arg Leu Val Ile Gly Arg His Pro Asn Pro Lys Val Ser Glu Gln

            100                 105                 110

Glu Met Asp Glu Val Ile Ala Arg Ser Thr Tyr Gln Glu Ser Lys Glu

        115                 120                 125

Ala Asn Ser Ser

    130

<210>5

<211>105

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>5

Gln Ser Glu Asn Glu Glu Asp Val Cys Phe Ile Val Leu Asn Arg Lys

 1               5                  10                  15

Glu Gly Ser Gly Leu Gly Phe Ser Val Ala Gly Gly Thr Asp Val Glu

            20                  25                  30

Pro Lys Ser Ile Thr Val His Arg Val Phe Ser Gln Gly Ala Ala Ser

        35                  40                  45

Gln Glu Gly Thr Met Asn Arg Gly Asp Phe Leu Leu Ser Val Asn Gly

    50                  55                  60

Ala Ser Leu Ala Gly Leu Ala His Gly Asn Val Leu Lys Val Leu His

65                  70                  75                  80

Gln Ala Gln Leu His Lys Asp Ala Leu Val Val Ile Lys Lys Gly Met

                85                  90                  95

Asp Gln Pro Arg Pro Ser Asn Ser Ser

            100                 105

<210>6

<211>101

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>6

Leu Gly Arg Ser Val Ala Val His Asp Ala Leu Cys Val Glu Val Leu

 1               5                  10                  15

Lys Thr Ser Ala Gly Leu Gly Leu Ser Leu Asp Gly Gly Lys Ser Ser

            20                  25                  30

Val Thr Gly Asp Gly Pro Leu Val Ile Lys Arg Val Tyr Lys Gly Gly

        35                  40                  45

Ala Ala Glu Gln Ala Gly Ile Ile Glu Ala Gly Asp Glu Ile Leu Ala

    50                  55                  60

Ile Asn Gly Lys Pro Leu Val Gly Leu Met His Phe Asp Ala Trp Asn

65                  70                  75                  80

Ile Met Lys Ser Val Pro Glu Gly Pro Val Gln Leu Leu Ile Arg Lys

                85                  90                  95

His Arg Asn Ser Ser

            100

<210>7

<211>74

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>7

Gln Thr Val Ile Leu Pro Gly Pro Ala Ala Trp Gly Phe Arg Leu Ser

 1               5                  10                  15

Gly Gly Ile Asp Phe Asn Gln Pro Leu Val Ile Thr Arg Ile Thr Pro

            20                  25                  30

Gly Ser Lys Ala Ala Ala Ala Asn Leu Cys Pro Gly Asp Val Ile Leu

        35                  40                  45

Ala Ile Asp Gly Phe Gly Thr Glu Ser Met Thr His Ala Asp Gly Gln

    50                  55                  60

Asp Arg Ile Lys Ala Ala Glu Phe Ile Val

65                  70

<210>8

<211>85

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>8

Ile Leu Val Glu Val Gln Leu Ser Gly Gly Ala Pro Trp Gly Phe Thr

 1               5                  10                  15

Leu Lys Gly Gly Arg Glu His Gly Glu Pro Leu Val Ile Thr Lys Ile

            20                  25                  30

Glu Glu Gly Ser Lys Ala Ala Ala Val Asp Lys Leu Leu Ala Gly Asp

        35                  40                  45

Glu Ile Val Gly Ile Asn Asp Ile Gly Leu Ser Gly Phe Arg Gln Glu

    50                  55                  60

Ala Ile Cys Leu Val Lys Gly Ser His Lys Thr Leu Lys Leu Val Val

65                  70                  75                  80

Lys Arg Asn Ser Ser

                85

<210>9

<211>104

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>9

Arg Glu Lys Pro Leu Phe Thr Arg Asp Ala Ser Gln Leu Lys Gly Thr

 1               5                  10                  15

Phe Leu Ser Thr Thr Leu Lys Lys Ser Asn Met Gly Phe Gly Phe Thr

            20                  25                  30

Ile Ile Gly Gly Asp Glu Pro Asp Glu Phe Leu Gln Val Lys Ser Val

        35                  40                  45

Ile Pro Asp Gly Pro Ala Ala Gln Asp Gly Lys Met Glu Thr Gly Asp

    50                  55                  60

Val Ile Val Tyr Ile Asn Glu Val Cys Val Leu Gly His Thr His Ala

65                  70                  75                  80

Asp Val Val Lys Leu Phe Gln Ser Val Pro Ile Gly Gln Ser Val Asn

                85                  90                  95

Leu Val Leu Cys Arg Gly Tyr Pro

            100

<210>10

<211>91

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>10

Leu Ser Gly Ala Thr Gln Ala Glu Leu Met Thr Leu Thr Ile Val Lys

 1               5                  10                  15

Gly Ala Gln Gly Phe Gly Phe Thr Ile Ala Asp Ser Pro Thr Gly Gln

            20                  25                  30

Arg Val Lys Gln Ile Leu Asp Ile Gln Gly Cys Pro Gly Leu Cys Glu

        35                  40                  45

Gly Asp Leu Ile Val Glu Ile Asn Gln Gln Asn Val Gln Asn Leu Ser

    50                  55                  60

His Thr Glu Val Val Asp Ile Leu Lys Asp Cys Pro Ile Gly Ser Glu

65                  70                  75                  80

Thr Ser Leu Ile Ile His Arg Gly Gly Phe Phe

                85                  90

<210>11

<211>93

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>11

His Tyr Lys Glu Leu Asp Val His Leu Arg Arg Met Glu Ser Gly Phe

 1               5                  10                  15

Gly Phe Arg Ile Leu Gly Gly Asp Glu Pro Gly Gln Pro Ile Leu Ile

            20                  25                  30

Gly Ala Val Ile Ala Met Gly Ser Ala Asp Arg Asp Gly Arg Leu His

        35                  40                  45

Pro Gly Asp Glu Leu Val Tyr Val Asp Gly Ile Pro Val Ala Gly Lys

    50                  55                  60

Thr His Arg Tyr Val Ile Asp Leu Met His His Ala Ala Arg Asn Gly

65                  70                  75                  80

Gln Val Asn Leu Thr Val Arg Arg Lys Val Leu Cys Gly

                85                  90

<210>12

<211>106

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>12

Glu Gly Arg Gly Ile Ser Ser His Ser Leu Gln Thr Ser Asp Ala Val

 1               5                  10                  15

Ile His Arg Lys Glu Asn Glu Gly Phe Gly Phe Val Ile Ile Ser Ser

            20                  25                  30

Leu Asn Arg Pro Glu Ser Gly Ser Thr Ile Thr Val Pro His Lys Ile

        35                  40                  45

Gly Arg Ile Ile Asp Gly Ser Pro Ala Asp Arg Cys Ala Lys Leu Lys

    50                  55                  60

Val Gly Asp Arg Ile Leu Ala Val Asn Gly Gln Ser Ile Ile Asn Met

65                  70                  75                  80

Pro His Ala Asp Ile Val Lys Leu Ile Lys Asp Ala Gly Leu Ser Val

                85                  90                  95

Thr Leu Arg Ile Ile Pro Gln Glu Glu Leu

            100                 105

<210>13

<211>98

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>13

Leu Ser Asp Tyr Arg Gln Pro Gln Asp Phe Asp Tyr Phe Thr Val Asp

 1               5                  10                  15

Met Glu Lys Gly Ala Lys Gly Phe Gly Phe Ser Ile Arg Gly Gly Arg

            20                  25                  30

Glu Tyr Lys Met Asp Leu Tyr Val Leu Arg Leu Ala Glu Asp Gly Pro

        35                  40                  45

Ala Ile Arg Asn Gly Arg Met Arg Val Gly Asp Gln Ile Ile Glu Ile

    50                  55                  60

Asn Gly Glu Ser Thr Arg Asp Met Thr His Ala Arg Ala Ile Glu Leu

65                  70                  75                  80

Ile Lys Ser Gly Gly Arg Arg Val Arg Leu Leu Leu Lys Arg Gly Thr

                85                  90                  95

Gly Gln

<210>14

<211>90

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>14

His Glu Ser Val Ile Gly Arg Asn Pro Glu Gly Gln Leu Gly Phe Glu

 1               5                  10                  15

Leu Lys Gly Gly Ala Glu Asn Gly Gln Phe Pro Tyr Leu Gly Glu Val

            20                  25                  30

Lys Pro Gly Lys Val Ala Tyr Glu Ser Gly Ser Lys Leu Val Ser Glu

        35                  40                  45

Glu Leu Leu Leu Glu Val Asn Glu Thr Pro Val Ala Gly Leu Thr Ile

    50                  55                  60

Arg Asp Val Leu Ala Val Ile Lys His Cys Lys Asp Pro Leu Arg Leu

65                  70                  75                  80

Lys Cys Val Lys Gln Gly Gly Ile His Arg

                85                  90

<210>15

<211>126

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>15

Asn Leu Met Phe Arg Lys Phe Ser Leu Glu Arg Pro Phe Arg Pro Ser

 1               5                  10                  15

Val Thr Ser Val Gly His Val Arg Gly Pro Gly Pro Ser Val Gln His

            20                  25                  30

Thr Thr Leu Asn Gly Asp Ser Leu Thr Ser Gln Leu Thr Leu Leu Gly

        35                  40                  45

Gly Asn Ala Arg Gly Ser Phe Val His Ser Val Lys Pro Gly Ser Leu

    50                  55                  60

Ala Glu Lys Ala Gly Leu Arg Glu Gly His Gln Leu Leu Leu Leu Glu

65                  70                  75                  80

Gly Cys Ile Arg Gly Glu Arg Gln Ser Val Pro Leu Asp Thr Cys Thr

                85                  90                  95

Lys Glu Glu Ala His Trp Thr Ile Gln Arg Cys Ser Gly Pro Val Thr

            100                 105                 110

Leu His Tyr Lys Val Asn His Glu Gly Tyr Arg Lys Leu Val

        115                 120                 125

<210>16

<211>100

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>16

Ile Leu Ser Gln Val Thr Met Leu Ala Phe Gln Gly Asp Ala Leu Leu

 1               5                  10                  15

Glu Gln Ile Ser Val Ile Gly Gly Asn Leu Thr Gly Ile Phe Ile His

            20                  25                  30

Arg Val Thr Pro Gly Ser Ala Ala Asp Gln Met Ala Leu Arg Pro Gly

        35                  40                  45

Thr Gln Ile Val Met Val Asp Tyr Glu Ala Ser Glu Pro Leu Phe Lys

    50                  55                  60

Ala Val Leu Glu Asp Thr Thr Leu Glu Glu Ala Val Gly Leu Leu Arg

65                  70                  75                  80

Arg Val Asp Gly Phe Cys Cys Leu Ser Val Lys Val Asn Thr Asp Gly

                85                  90                  95

Tyr Lys Arg Leu

            100

<210>17

<211>90

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>17

Thr Arg Val Arg Leu Val Gln Phe Gln Lys Asn Thr Asp Glu Pro Met

 1               5                  10                  15

Gly Ile Thr Leu Lys Met Asn Glu Leu Asn His Cys Ile Val Ala Arg

            20                  25                  30

Ile Met His Gly Gly Met Ile His Arg Gln Gly Thr Leu His Val Gly

        35                  40                  45

Asp Glu Ile Arg Glu Ile Asn Gly Ile Ser Val Ala Asn Gln Thr Val

    50                  55                  60

Glu Gln Leu Gln Lys Met Leu Arg Glu Met Arg Gly Ser Ile Thr Phe

65                  70                  75                  80

Lys Ile Val Pro Ser Tyr Arg Thr Gln Ser

                85                  90

<210>18

<211>88

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>18

Leu Glu Gln Lys Ala Val Leu Glu Gln Val Gln Leu Asp Ser Pro Leu

 1               5                  10                  15

Gly Leu Glu Ile His Thr Thr Ser Asn Cys Gln His Phe Val Ser Gln

            20                  25                  30

Val Asp Thr Gln Val Pro Thr Asp Ser Arg Leu Gln Ile Gln Pro Gly

        35                  40                  45

Asp Glu Val Val Gln Ile Asn Glu Gln Val Val Val Gly Trp Pro Arg

    50                  55                  60

Lys Asn Met Val Arg Glu Leu Leu Arg Glu Pro Ala Gly Leu Ser Leu

65                  70                  75                  80

Val Leu Lys Lys Ile Pro Ile Pro

                85

<210>19

<211>92

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>19

Gln Arg Lys Leu Val Thr Val Glu Lys Gln Asp Asn Glu Thr Phe Gly

 1               5                  10                  15

Phe Glu Ile Gln Ser Tyr Arg Pro Gln Asn Gln Asn Ala Cys Ser Ser

            20                  25                  30

Glu Met Phe Thr Leu Ile Cys Lys Ile Gln Glu Asp Ser Pro Ala His

        35                  40                  45

Cys Ala Gly Leu Gln Ala Gly Asp Val Leu Ala Asn Ile Asn Gly Val

    50                  55                  60

Ser Thr Glu Gly Phe Thr Tyr Lys Gln Val Val Asp Leu Ile Arg Ser

65                  70                  75                  80

Ser Gly Asn Leu Leu Thr Ile Glu Thr Leu Asn Gly

                85                  90

<210>20

<211>109

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>20

Arg Cys Leu Ile Gln Thr Lys Gly Gln Arg Ser Met Asp Gly Tyr Pro

 1               5                  10                  15

Glu Gln Phe Cys Val Arg Ile Glu Lys Asn Pro Gly Leu Gly Phe Ser

            20                  25                  30

Ile Ser Gly Gly Ile Ser Gly Gln Gly Asn Pro Phe Lys Pro Ser Asp

        35                  40                  45

Lys Gly Ile Phe Val Thr Arg Val Gln Pro Asp Gly Pro Ala Ser Asn

    50                  55                  60

Leu Leu Gln Pro Gly Asp Lys Ile Leu Gln Ala Asn Gly His Ser Phe

65                  70                  75                  80

Val His Met Glu His Glu Lys Ala Val Leu Leu Leu Lys Ser Phe Gln

                85                  90                  95

Asn Thr Val Asp Leu Val Ile Gln Arg Glu Leu Thr Val

            100                 105

<210>21

<211>101

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>21

Ile Gln Val Asn Gly Thr Asp Ala Asp Tyr Glu Tyr Glu Glu Ile Thr

 1               5                  10                  15

Leu Glu Arg Gly Asn Ser Gly Leu Gly Phe Ser Ile Ala Gly Gly Thr

            20                  25                  30

Asp Asn Pro His Ile Gly Asp Asp Ser Ser Ile Phe Ile Thr Lys Ile

        35                  40                  45

Ile Thr Gly Gly Ala Ala Ala Gln Asp Gly Arg Leu Arg Val Asn Asp

    50                  55                  60

Cys Ile Leu Gln Val Asn Glu Val Asp Val Arg Asp Val Thr His Ser

65                  70                  75                  80

Lys Ala Val Glu Ala Leu Lys Glu Ala Gly Ser Ile Val Arg Leu Tyr

                85                  90                  95

Val Lys Arg Arg Asn

            100

<210>22

<211>95

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>22

Ile Gln Leu Ile Lys Gly Pro Lys Gly Leu Gly Phe Ser Ile Ala Gly

 1               5                  10                  15

Gly Val Gly Asn Gln His Ile Pro Gly Asp Asn Ser Ile Tyr Val Thr

            20                  25                  30

Lys Ile Ile Glu Gly Gly Ala Ala His Lys Asp Gly Lys Leu Gln Ile

        35                  40                  45

Gly Asp Lys Leu Leu Ala Val Asn Asn Val Cys Leu Glu Glu Val Thr

    50                  55                  60

His Glu Glu Ala Val Thr Ala Leu Lys Asn Thr Ser Asp Phe Val Tyr

65                  70                  75                  80

Leu Lys Val Ala Lys Pro Thr Ser Met Tyr Met Asn Asp Gly Asn

                85                  90                  95

<210>23

<211>85

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>23

Ile Leu His Arg Gly Ser Thr Gly Leu Gly Phe Asn Ile Val Gly Gly

 1               5                  10                  15

Glu Asp Gly Glu Gly Ile Phe Ile Ser Phe Ile Leu Ala Gly Gly Pro

            20                  25                  30

Ala Asp Leu Ser Gly Glu Leu Arg Lys Gly Asp Arg Ile Ile Ser Val

        35                  40                  45

Asn Ser Val Asp Leu Arg Ala Ala Ser His Glu Gln Ala Ala Ala Ala

    50                  55                  60

Leu Lys Asn Ala Gly Gln Ala Val Thr Ile Val Ala Gln Tyr Arg Pro

65                  70                  75                  80

Glu Glu Tyr Ser Arg

                85

<210>24

<211>101

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>24

Ile Ser Tyr Val Asn Gly Thr Glu Ile Glu Tyr Glu Phe Glu Glu Ile

 1               5                  10                  15

Thr Leu Glu Arg Gly Asn Ser Gly Leu Gly Phe Ser Ile Ala Gly Gly

            20                  25                  30

Thr Asp Asn Pro His Ile Gly Asp Asp Pro Gly Ile Phe Ile Thr Lys

        35                  40                  45

Ile Ile Pro Gly Gly Ala Ala Ala Glu Asp Gly Arg Leu Arg Val Asn

    50                  55                  60

Asp Cys Ile Leu Arg Val Asn Glu Val Asp Val Ser Glu Val Ser His

65                  70                  75                  80

Ser Lys Ala Val Glu Ala Leu Lys Glu Ala Gly Ser Ile Val Arg Leu

                85                  90                  95

Tyr Val Arg Arg Arg

            100

<210>25

<211>94

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>25

Ile Ser Val Val Glu Ile Lys Leu Phe Lys Gly Pro Lys Gly Leu Gly

 1               5                  10                  15

Phe Ser Ile Ala Gly Gly Val Gly Asn Gln His Ile Pro Gly Asp Asn

            20                  25                  30

Ser Ile Tyr Val Thr Lys Ile Ile Asp Gly Gly Ala Ala Gln Lys Asp

        35                  40                  45

Gly Arg Leu Gln Val Gly Asp Arg Leu Leu Met Val Asn Asn Tyr Ser

    50                  55                  60

Leu Glu Glu Val Thr His Glu Glu Ala Val Ala Ile Leu Lys Asn Thr

65                  70                  75                  80

Ser Glu Val Val Tyr Leu Lys Val Gly Asn Pro Thr Thr Ile

                85                  90

<210>26

<211>95

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>26

Ile Trp Ala Val Ser Leu Glu Gly Glu Pro Arg Lys Val Val Leu His

 1               5                  10                  15

Lys Gly Ser Thr Gly Leu Gly Phe Asn Ile Val Gly Gly Glu Asp Gly

            20                  25                  30

Glu Gly Ile Phe Val Ser Phe Ile Leu Ala Gly Gly Pro Ala Asp Leu

        35                  40                  45

Ser Gly Glu Leu Gln Arg Gly Asp Gln Ile Leu Ser Val Asn Gly Ile

50                  55                  60

Asp Leu Arg Gly Ala Ser His Glu Gln Ala Ala Ala Ala Leu Lys Gly

65                  70                  75                  80

Ala Gly Gln Thr Val Thr Ile Ile Ala Gln Tyr Gln Pro Glu Asp

                85                  90                  95

<210>27

<211>102

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>27

Gly Ile Pro Tyr Val Glu Glu Pro Arg His Val Lys Val Gln Lys Gly

 1               5                  10                  15

Ser Glu Pro Leu Gly Ile Ser Ile Val Ser Gly Glu Lys Gly Gly Ile

            20                  25                  30

Tyr Val Ser Lys Val Thr Val Gly Ser Ile Ala His Gln Ala Gly Leu

        35                  40                  45

Glu Tyr Gly Asp Gln Leu Leu Glu Phe Asn Gly Ile Asn Leu Arg Ser

    50                  55                  60

Ala Thr Glu Gln Gln Ala Arg Leu Ile Ile Gly Gln Gln Cys Asp Thr

65                  70                  75                  80

Ile Thr Ile Leu Ala Gln Tyr Asn Pro His Val His Gln Leu Arg Asn

                85                  90                  95

Ser Ser Glx Leu Thr Asp

            100

<210>28

<211>103

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>28

Gly Ile Leu Ala Gly Asp Ala Asn Lys Lys Thr Leu Glu Pro Arg Val

 1               5                  10                  15

Val Phe Ile Lys Lys Ser Gln Leu Glu Leu Gly Val His Leu Cys Gly

            20                  25                  30

Gly Asn Leu His Gly Val Phe Val Ala Glu Val Glu Asp Asp Ser Pro

        35                  40                  45

Ala Lys Gly Pro Asp Gly Leu Val Pro Gly Asp Leu Ile Leu Glu Tyr

    50                  55                  60

Gly Ser Leu Asp Val Arg Asn Lys Thr Val Glu Glu Val Tyr Val Glu

65                  70                  75                  80

Met Leu Lys Pro Arg Asp Gly Val Arg Leu Lys Val Gln Tyr Arg Pro

                85                  90                  95

Glu Glu Phe Ile Val Thr Asp

            100

<210>29

<211>141

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>29

Pro Thr Ser Pro Glu Ile Gln Glu Leu Arg Gln Met Leu Gln Ala Pro

 1               5                  10                  15

His Phe Lys Ala Leu Leu Ser Ala His Asp Thr Ile Ala Gln Lys Asp

            20                  25                  30

Phe Glu Pro Leu Leu Pro Pro Leu Pro Asp Asn Ile Pro Glu Ser Glu

        35                  40                  45

Glu Ala Met Arg Ile Val Cys Leu Val Lys Asn Gln Gln Pro Leu Gly

    50                  55                  60

Ala Thr Ile Lys Arg His Glu Met Thr Gly Asp Ile Leu Val Ala Arg

65                  70                  75                  80

Ile Ile His Gly Gly Leu Ala Glu Arg Ser Gly Leu Leu Tyr Ala Gly

                85                  90                  95

Asp Lys Leu Val Glu Val Asn Gly Val Ser Val Glu Gly Leu Asp Pro

            100                 105                 110

Glu Gln Val Ile His Ile Leu Ala Met Ser Arg Gly Thr Ile Met Phe

            115                 120                 125

Lys Val Val Pro Val Ser Asp Pro Pro Val Asn Ser Ser

        130                 135                 140

<210>30

<211>97

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>30

Pro Thr Ser Pro Glu Ile Gln Glu Leu Arg Gln Met Leu Gln Ala Pro

 1               5                  10                  15

His Phe Lys Gly Ala Thr Ile Lys Arg His Glu Met Thr Gly Asp Ile

            20                  25                  30

Leu Val Ala Arg Ile Ile His Gly Gly Leu Ala Glu Arg Ser Gly Leu

        35                  40                  45

Leu Tyr Ala Gly Asp Lys Leu Val Glu Val Asn Gly Val Ser Val Glu

    50                  55                  60

Gly Leu Asp Pro Glu Gln Val Ile His Ile Leu Ala Met Ser Arg Gly

65                  70                  75                  80

Thr Ile Met Phe Lys Val Val Pro Val Ser Asp Pro Pro Val Asn Ser

                85                  90                  95

Ser

<210>31

<211>93

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>31

Leu Asn Ile Val Thr Val Thr Leu Asn Met Glu Arg His His Phe Leu

 1               5                  10                  15

Gly Ile Ser Ile Val Gly Gln Ser Asn Asp Arg Gly Asp Gly Gly Ile

            20                  25                  30

Tyr Ile Gly Ser Ile Met Lys Gly Gly Ala Val Ala Ala Asp Gly Arg

        35                  40                  45

Ile Glu Pro Gly Asp Met Leu Leu Gln Val Asn Asp Val Asn Phe Glu

    50                  55                  60

Asn Met Ser Asn Asp Asp Ala Val Arg Val Leu Arg Glu Ile Val Ser

65                  70                  75                  80

Gln Thr Gly Pro Ile Ser Leu Thr Val Ala Lys Cys Trp

                85                  90

<210>32

<211>100

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>32

Leu Asn Ile Ile Thr Val Thr Leu Asn Met Glu Lys Tyr Asn Phe Leu

 1               5                  10                  15

Gly Ile Ser Ile Val Gly Gln Ser Asn Glu Arg Gly Asp Gly Gly Ile

            20                  25                  30

Tyr Ile Gly Ser Ile Met Lys Gly Gly Ala Val Ala Ala Asp Gly Arg

        35                  40                  45

Ile Glu Pro Gly Asp Met Leu Leu Gln Val Asn Asp Met Asn Phe Glu

    50                  55                  60

Asn Met Ser Asn Asp Asp Ala Val Arg Val Leu Arg Asp Ile Val His

65                  70                  75                  80

Lys Pro Gly Pro Ile Val Leu Thr Val Ala Lys Cys Trp Asp Pro Ser

                85                  90                  95

Pro Gln Asn Ser

            100

<210>33

<211>95

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>33

Ile Ile Thr Val Thr Leu Asn Met Glu Lys Tyr Asn Phe Leu Gly Ile

 1               5                  10                  15

Ser Ile Val Gly Gln Ser Asn Glu Arg Gly Asp Gly Gly Ile Tyr Ile

            20                  25                  30

Gly Ser Ile Met Lys Gly Gly Ala Val Ala Ala Asp Gly Arg Ile Glu

        35                  40                  45

Pro Gly Asp Met Leu Leu Gln Val Asn Glu Ile Asn Phe Glu Asn Met

    50                  55                  60

Ser Asn Asp Asp Ala Val Arg Val Leu Arg Glu Ile Val His Lys Pro

65                  70                  75                  80

Gly Pro Ile Thr Leu Thr Val Ala Lys Cys Trp Asp Pro Ser Pro

                85                  90                  95

<210>34

<211>92

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>34

Thr Thr Gln Gln Ile Asp Leu Gln Gly Pro Gly Pro Trp Gly Phe Arg

 1               5                  10                  15

Leu Val Gly Arg Lys Asp Phe Glu Gln Pro Leu Ala Ile Ser Arg Val

            20                  25                  30

Thr Pro Gly Ser Lys Ala Ala Leu Ala Asn Leu Cys Ile Gly Asp Val

        35                  40                  45

Ile Thr Ala Ile Asp Gly Glu Asn Thr Ser Asn Met Thr His Leu Glu

    50                  55                  60

Ala Gln Asn Arg Ile Lys Gly Cys Thr Asp Asn Leu Thr Leu Thr Val

65                  70                  75                  80

Ala Arg Ser Glu His Lys Val Trp Ser Pro Leu Val

                85                  90

<210>35

<211>89

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>35

Ile Phe Met Asp Ser Phe Lys Val Val Leu Glu Gly Pro Ala Pro Trp

 1               5                  10                  15

Gly Phe Arg Leu Gln Gly Gly Lys Asp Phe Asn Val Pro Leu Ser Ile

            20                  25                  30

Ser Arg Leu Thr Pro Gly Gly Lys Ala Ala Gln Ala Gly Val Ala Val

        35                  40                  45

Gly Asp Trp Val Leu Ser Ile Asp Gly Glu Asn Ala Gly Ser Leu Thr

    50                  55                  60

His Ile Glu Ala Gln Asn Lys Ile Arg Ala Cys Gly Glu Arg Leu Ser

65                  70                  75                  80

Leu Gly Leu Ser Arg Ala Gln Pro Val

                85

<210>36

<211>100

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>36

Gln Gly His Glu Leu Ala Lys Gln Glu Ile Arg Val Arg Val Glu Lys

 1               5                  10                  15

Asp Pro Glu Leu Gly Phe Ser Ile Ser Gly Gly Val Gly Gly Arg Gly

            20                  25                  30

Asn Pro Phe Arg Pro Asp Asp Asp Gly Ile Phe Val Thr Arg Val Gln

        35                  40                  45

Pro Glu Gly Pro Ala Ser Lys Leu Leu Gln Pro Gly Asp Lys Ile Ile

    50                  55                  60

Gln Ala Asn Gly Tyr Ser Phe Ile Asn Ile Glu His Gly Gln Ala Val

65                  70                  75                  80

Ser Leu Leu Lys Thr Phe Gln Asn Thr Val Glu Leu Ile Ile Val Arg

                85                  90                  95

Glu Val Ser Ser

            100

<210>37

<211>87

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>37

Ile Leu Cys Cys Leu Glu Lys Gly Pro Asn Gly Tyr Gly Phe His Leu

 1               5                  10                  15

His Gly Glu Lys Gly Lys Leu Gly Gln Tyr Ile Arg Leu Val Glu Pro

            20                  25                  30

Gly Ser Pro Ala Glu Lys Ala Gly Leu Leu Ala Gly Asp Arg Leu Val

        35                  40                  45

Glu Val Asn Gly Glu Asn Val Glu Lys Glu Thr His Gln Gln Val Val

    50                  55                  60

Ser Arg Ile Arg Ala Ala Leu Asn Ala Val Arg Leu Leu Val Val Asp

65                  70                  75                  80

Pro Glu Phe Ile Val Thr Asp

                85

<210>38

<211>92

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>38

Ile Arg Leu Cys Thr Met Lys Lys Gly Pro Ser Gly Tyr Gly Phe Asn

 1               5                  10                  15

Leu His Ser Asp Lys Ser Lys Pro Gly Gln Phe Ile Arg Ser Val Asp

            20                  25                  30

Pro Asp Ser Pro Ala Glu Ala Ser Gly Leu Arg Ala Gln Asp Arg Ile

        35                  40                  45

Val Glu Val Asn Gly Val Cys Met Glu Gly Lys Gln His Gly Asp Val

    50                  55                  60

Val Ser Ala Ile Arg Ala Gly Gly Asp Glu Thr Lys Leu Leu Val Val

65                  70                  75                  80

Asp Arg Glu Thr Asp Glu Phe Phe Met Asn Ser Ser

                85                  90

<210>39

<211>107

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>39

Lys Asn Pro Ser Gly Glu Leu Lys Thr Val Thr Leu Ser Lys Met Lys

 1               5                  10                  15

Gln Ser Leu Gly Ile Ser Ile Ser Gly Gly Ile Glu Ser Lys Val Gln

            20                  25                  30

Pro Met Val Lys Ile Glu Lys Ile Phe Pro Gly Gly Ala Ala Phe Leu

        35                  40                  45

Ser Gly Ala Leu Gln Ala Gly Phe Glu Leu Val Ala Val Asp Gly Glu

    50                  55                  60

Asn Leu Glu Gln Val Thr His Gln Arg Ala Val Asp Thr Ile Arg Arg

65                  70                  75                  80

Ala Tyr Arg Asn Lys Ala Arg Glu Pro Met Glu Leu Val Val Arg Val

                85                  90                  95

Pro Gly Pro Ser Pro Arg Pro Ser Pro Ser Asp

            100                 105

<210>40

<211>97

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>40

Glu Gly His Ser His Pro Arg Val Val Glu Leu Pro Lys Thr Glu Glu

 1               5                  10                  15

Gly Leu Gly Phe Asn Ile Met Gly Gly Lys Glu Gln Asn Ser Pro Ile

            20                  25                  30

Tyr Ile Ser Arg Ile Ile Pro Gly Gly Ile Ala Asp Arg His Gly Gly

        35                  40                  45

Leu Lys Arg Gly Asp Gln Leu Leu Ser Val Asn Gly Val Ser Val Glu

    50                  55                  60

Gly Glu His His Glu Lys Ala Val Glu Leu Leu Lys Ala Ala Gln Gly

65                  70                  75                  80

Lys Val Lys Leu Val Val Arg Tyr Thr Pro Lys Val Leu Glu Glu Met

                85                  90                  95

Glu

<210>41

<211>88

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>41

Pro Gly Ala Pro Tyr Ala Arg Lys Thr Phe Thr Ile Val Gly Asp Ala

 1               5                  10                  15

Val Gly Trp Gly Phe Val Val Arg Gly Ser Lys Pro Cys His Ile Gln

            20                  25                  30

Ala Val Asp Pro Ser Gly Pro Ala Ala Ala Ala Gly Met Lys Val Cys

        35                  40                  45

Gln Phe Val Val Ser Val Asn Gly Leu Asn Val Leu His Val Asp Tyr

    50                  55                  60

Arg Thr Val Ser Asn Leu Ile Leu Thr Gly Pro Arg Thr Ile Val Met

65                  70                  75                  80

Glu Val Met Glu Glu Leu Glu Cys

                85

<210>42

<211>97

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>42

Gly Gln Tyr Gly Gly Glu Thr Val Lys Ile Val Arg Ile Glu Lys Ala

 1               5                  10                  15

Arg Asp Ile Pro Leu Gly Ala Thr Val Arg Asn Glu Met Asp Ser Val

            20                  25                  30

Ile Ile Ser Arg Ile Val Lys Gly Gly Ala Ala Glu Lys Ser Gly Leu

        35                  40                  45

Leu His Glu Gly Asp Glu Val Leu Glu Ile Asn Gly Ile Glu Ile Arg

    50                  55                  60

Gly Lys Asp Val Asn Glu Val Phe Asp Leu Leu Ser Asp Met His Gly

65                  70                  75                  80

Thr Leu Thr Phe Val Leu Ile Pro Ser Gln Gln Ile Lys Pro Pro Pro

                85                  90                  95

Ala

<210>43

<211>98

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>43

Ile Leu Ala His Val Lys Gly Ile Glu Lys Glu Val Asn Val Tyr Lys

 1               5                  10                  15

Ser Glu Asp Ser Leu Gly Leu Thr Ile Thr Asp Asn Gly Val Gly Tyr

            20                  25                  30

Ala Phe Ile Lys Arg Ile Lys Asp Gly Gly Val Ile Asp Ser Val Lys

        35                  40                  45

Thr Ile Cys Val Gly Asp His Ile Glu Ser Ile Asn Gly Glu Asn Ile

    50                  55                  60

Val Gly Trp Arg His Tyr Asp Val Ala Lys Lys Leu Lys Glu Leu Lys

65                  70                  75                  80

Lys Glu Glu Leu Phe Thr Met Lys Leu Ile Glu Pro Lys Lys Ala Phe

                85                  90                  95

Glu Ile

<210>44

<211>104

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>44

Lys Pro Ser Gln Ala Ser Gly His Phe Ser Val Glu Leu Val Arg Gly

 1               5                  10                  15

Tyr Ala Gly Phe Gly Leu Thr Leu Gly Gly Gly Arg Asp Val Ala Gly

            20                  25                  30

Asp Thr Pro Leu Ala Val Arg Gly Leu Leu Lys Asp Gly Pro Ala Gln

        35                  40                  45

Arg Cys Gly Arg Leu Glu Val Gly Asp Leu Val Leu His Ile Asn Gly

    50                  55                  60

Glu Ser Thr Gln Gly Leu Thr His Ala Gln Ala Val Glu Arg Ile Arg

65                  70                  75                  80

Ala Gly Gly Pro Gln Leu His Leu Val Ile Arg Arg Pro Leu Glu Thr

                85                  90                  95

His Pro Gly Lys Pro Arg Gly Val

            100

<210>45

<211>107

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>45

Pro Val Met Ser Gln Cys Ala Cys Leu Glu Glu Val His Leu Pro Asn

 1               5                  10                  15

Ile Lys Pro Gly Glu Gly Leu Gly Met Tyr Ile Lys Ser Thr Tyr Asp

            20                  25                  30

Gly Leu His Val Ile Thr Gly Thr Thr Glu Asn Ser Pro Ala Asp Arg

        35                  40                  45

Ser Gln Lys Ile His Ala Gly Asp Glu Val Ile Gln Val Asn Gln Gln

    50                  55                  60

Thr Val Val Gly Trp Gln Leu Lys Asn Leu Val Lys Lys Leu Arg Glu

65                  70                  75                  80

Asn Pro Thr Gly Val Val Leu Leu Leu Lys Lys Arg Pro Thr Gly Ser

                85                  90                  95

Phe Asn Phe Thr Pro Glu Phe Ile Val Thr Asp

            100                 105

<210>46

<211>100

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>46

Leu Asp Asp Glu Glu Asp Ser Val Lys Ile Ile Arg Leu Val Lys Asn

 1               5                  10                  15

Arg Glu Pro Leu Gly Ala Thr Ile Lys Lys Asp Glu Gln Thr Gly Ala

            20                  25                  30

Ile Ile Val Ala Arg Ile Met Arg Gly Gly Ala Ala Asp Arg Ser Gly

        35                  40                  45

Leu Ile His Val Gly Asp Glu Leu Arg Glu Val Asn Gly Ile Pro Val

    50                  55                  60

Glu Asp Lys Arg Pro Glu Glu Ile Ile Gln Ile Leu Ala Gln Ser Gln

65                  70                  75                  80

Gly Ala Ile Thr Phe Lys Ile Ile Pro Gly Ser Lys Glu Glu Thr Pro

                85                  90                  95

Ser Asn Ser Ser

            100

<210>47

<211>83

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>47

Val Val Glu Leu Met Lys Lys Glu Gly Thr Thr Leu Gly Leu Thr Val

 1               5                  10                  15

Ser Gly Gly Ile Asp Lys Asp Gly Lys Pro Arg Val Ser Asn Leu Arg

            20                  25                  30

Gln Gly Gly Ile Ala Ala Arg Ser Asp Gln Leu Asp Val Gly Asp Tyr

        35                  40                  45

Ile Lys Ala Val Asn Gly Ile Asn Leu Ala Lys Phe Arg His Asp Glu

    50                  55                  60

Ile Ile Ser Leu Leu Lys Asn Val Gly Glu Arg Val Val Leu Glu Val

65                  70                  75                  80

Glu Tyr Glu

<210>48

<211>110

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>48

Arg Ser Ser Val Ile Phe Arg Thr Val Glu Val Thr Leu His Lys Glu

 1               5                  10                  15

Gly Asn Thr Phe Gly Phe Val Ile Arg Gly Gly Ala His Asp Asp Arg

            20                  25                  30

Asn Lys Ser Arg Pro Val Val Ile Thr Cys Val Arg Pro Gly Gly Pro

        35                  40                  45

Ala Asp Arg Glu Gly Thr Ile Lys Pro Gly Asp Arg Leu Leu Ser Val

    50                  55                  60

Asp Gly Ile Arg Leu Leu Gly Thr Thr His Ala Glu Ala Met Ser Ile

65                  70                  75                  80

Leu Lys Gln Cys Gly Gln Glu Ala Ala Leu Leu Ile Glu Tyr Asp Val

                85                  90                  95

Ser Val Met Asp Ser Val Ala Thr Ala Ser Gly Asn Ser Ser

            100                 105                 110

<210>49

<211>106

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>49

His Val Ala Thr Ala Ser Gly Pro Leu Leu Val Glu Val Ala Lys Thr

 1               5                  10                  15

Pro Gly Ala Ser Leu Gly Val Ala Leu Thr Thr Ser Met Cys Cys Asn

            20                  25                  30

Lys Gln Val Ile Val Ile Asp Lys Ile Lys Ser Ala Ser Ile Ala Asp

        35                  40                  45

Arg Cys Gly Ala Leu His Val Gly Asp His Ile Leu Ser Ile Asp Gly

    50                  55                  60

Thr Ser Met Glu Tyr Cys Thr Leu Ala Glu Ala Thr Gln Phe Leu Ala

65                  70                  75                  80

Asn Thr Thr Asp Gln Val Lys Leu Glu Ile Leu Pro His His Gln Thr

                85                  90                  95

Arg Leu Ala Leu Lys Gly Pro Asn Ser Ser

            100                 105

<210>50

<211>97

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>50

Thr Glu Thr Thr Glu Val Val Leu Thr Ala Asp Pro Val Thr Gly Phe

 1               5                  10                  15

Gly Ile Gln Leu Gln Gly Ser Val Phe Ala Thr Glu Thr Leu Ser Ser

            20                  25                  30

Pro Pro Leu Ile Ser Tyr Ile Glu Ala Asp Ser Pro Ala Glu Arg Cys

        35                  40                  45

Gly Val Leu Gln Ile Gly Asp Arg Val Met Ala Ile Asn Gly Ile Pro

    50                  55                  60

Thr Glu Asp Ser Thr Phe Glu Glu Ala Ser Gln Leu Leu Arg Asp Ser

65                  70                  75                  80

Ser Ile Thr Ser Lys Val Thr Leu Glu Ile Glu Phe Asp Val Ala Glu

                85                  90                  95

Ser

<210>51

<211>101

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>51

Ala Glu Ser Val Ile Pro Ser Ser Gly Thr Phe His Val Lys Leu Pro

 1               5                  10                  15

Lys Lys His Asn Val Glu Leu Gly Ile Thr Ile Ser Ser Pro Ser Ser

            20                  25                  30

Arg Lys Pro Gly Asp Pro Leu Val Ile Ser Asp Ile Lys Lys Gly Ser

        35                  40                  45

Val Ala His Arg Thr Gly Thr Leu Glu Leu Gly Asp Lys Leu Leu Ala

    50                  55                  60

Ile Asp Asn Ile Arg Leu Asp Asn Cys Ser Met Glu Asp Ala Val Gln

65                  70                  75                  80

Ile Leu Gln Gln Cys Glu Asp Leu Val Lys Leu Lys Ile Arg Lys Asp

                85                  90                  95

Glu Asp Asn Ser Asp

            100

<210>52

<211>90

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>52

Ile Tyr Thr Val Glu Leu Lys Arg Tyr Gly Gly Pro Leu Gly Ile Thr

 1               5                  10                  15

Ile Ser Gly Thr Glu Glu Pro Phe Asp Pro Ile Ile Ile Ser Ser Leu

            20                  25                  30

Thr Lys Gly Gly Leu Ala Glu Arg Thr Gly Ala Ile His Ile Gly Asp

        35                  40                  45

Arg Ile Leu Ala Ile Asn Ser Ser Ser Leu Lys Gly Lys Pro Leu Ser

    50                  55                  60

Glu Ala Ile His Leu Leu Gln Met Ala Gly Glu Thr Val Thr Leu Lys

65                  70                  75                  80

Ile Lys Lys Gln Thr Asp Ala Gln Ser Ala

                85                  90

<210>53

<211>95

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>53

Ile Met Ser Pro Thr Pro Val Glu Leu His Lys Val Thr Leu Tyr Lys

 1               5                  10                  15

Asp Ser Asp Met Glu Asp Phe Gly Phe Ser Val Ala Asp Gly Leu Leu

            20                  25                  30

Glu Lys Gly Val Tyr Val Lys Asn Ile Arg Pro Ala Gly Pro Gly Asp

        35                  40                  45

Leu Gly Gly Leu Lys Pro Tyr Asp Arg Leu Leu Gln Val Asn His Val

    50                  55                  60

Arg Thr Arg Asp Phe Asp Cys Cys Leu Val Val Pro Leu Ile Ala Glu

65                  70                  75                  80

Ser Gly Asn Lys Leu Asp Leu Val Ile Ser Arg Asn Pro Leu Ala

                85                  90                  95

<210>54

<211>88

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>54

Ser Arg Gly Cys Glu Thr Arg Glu Leu Ala Leu Pro Arg Asp Gly Gln

 1               5                  10                  15

Gly Arg Leu Gly Phe Glu Val Asp Ala Glu Gly Phe Val Thr His Val

            20                  25                  30

Glu Arg Phe Thr Phe Ala Glu Thr Ala Gly Leu Arg Pro Gly Ala Arg

        35                  40                  45

Leu Leu Arg Val Cys Gly Gln Thr Leu Pro Ser Leu Arg Pro Glu Ala

    50                  55                  60

Ala Ala Gln Leu Leu Arg Ser Ala Pro Lys Val Cys Val Thr Val Leu

65                  70                  75                  80

Pro Pro Asp Glu Ser Gly Arg Pro

                85

<210>55

<211>95

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>55

Ala Lys Ala Lys Trp Arg Gln Val Val Leu Gln Lys Ala Ser Arg Glu

 1               5                  10                  15

Ser Pro Leu Gln Phe Ser Leu Asn Gly Gly Ser Glu Lys Gly Phe Gly

            20                  25                  30

Ile Phe Val Glu Gly Val Glu Pro Gly Ser Lys Ala Ala Asp Ser Gly

        35                  40                  45

Leu Lys Arg Gly Asp Gln Ile Met Glu Val Asn Gly Gln Asn Phe Glu

    50                  55                  60

Asn Ile Thr Phe Met Lys Ala Val Glu Ile Leu Arg Asn Asn Thr His

65                  70                  75                  80

Leu Ala Leu Thr Val Lys Thr Asn Ile Phe Val Phe Lys Glu Leu

                85                  90                  95

<210>56

<211>89

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>56

Leu Glu Asn Val Ile Ala Lys Ser Leu Leu Ile Lys Ser Asn Glu Gly

 1               5                  10                  15

Ser Tyr Gly Phe Gly Leu Glu Asp Lys Asn Lys Val Pro Ile Ile Lys

            20                  25                  30

Leu Val Glu Lys Gly Ser Asn Ala Glu Met Ala Gly Met Glu Val Gly

        35                  40                  45

Lys Lys Ile Phe Ala Ile Asn Gly Asp Leu Val Phe Met Arg Pro Phe

    50                  55                  60

Asn Glu Val Asp Cys Phe Leu Lys Ser Cys Leu Asn Ser Arg Lys Pro

65                  70                  75                  80

Leu Arg Val Leu Val Ser Thr Lys Pro

                85

<210>57

<211>82

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>57

Pro Arg Glu Thr Val Lys Ile Pro Asp Ser Ala Asp Gly Leu Gly Phe

 1               5                  10                  15

Gln Ile Arg Gly Phe Gly Pro Ser Val Val His Ala Val Gly Arg Gly

            20                  25                  30

Thr Val Ala Ala Ala Ala Gly Leu His Pro Gly Gln Cys Ile Ile Lys

        35                  40                  45

Val Asn Gly Ile Asn Val Ser Lys Glu Thr His Ala Ser Val Ile Ala

    50                  55                  60

His Val Thr Ala Cys Arg Lys Tyr Arg Arg Pro Thr Lys Gln Asp Ser

65                  70                  75                  80

Ile Gln

<210>58

<211>100

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>58

Glu Asp Phe Cys Tyr Val Phe Thr Val Glu Leu Glu Arg Gly Pro Ser

 1               5                  10                  15

Gly Leu Gly Met Gly Leu Ile Asp Gly Met His Thr His Leu Gly Ala

            20                  25                  30

Pro Gly Leu Tyr Ile Gln Thr Leu Leu Pro Gly Ser Pro Ala Ala Ala

        35                  40                  45

Asp Gly Arg Leu Ser Leu Gly Asp Arg Ile Leu Glu Val Asn Gly Ser

    50                  55                  60

Ser Leu Leu Gly Leu Gly Tyr Leu Arg Ala Val Asp Leu Ile Arg His

65                  70                  75                  80

Gly Gly Lys Lys Met Arg Phe Leu Val Ala Lys Ser Asp Val Glu Thr

                85                  90                  95

Ala Lys Lys Ile

        100

<210>59

<211>109

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>59

Leu Thr Glu Phe Gln Asp Lys Gln Ile Lys Asp Trp Lys Lys Arg Phe

 1               5                  10                  15

Ile Gly Ile Arg Met Arg Thr Ile Thr Pro Ser Leu Val Asp Glu Leu

            20                  25                  30

Lys Ala Ser Asn Pro Asp Phe Pro Glu Val Ser Ser Gly Ile Tyr Val

        35                  40                  45

Gln Glu Val Ala Pro Asn Ser Pro Ser Gln Arg Gly Gly Ile Gln Asp

    50                  55                  60

Gly Asp Ile Ile Val Lys Val Asn Gly Arg Pro Leu Val Asp Ser Ser

65                  70                  75                  80

Glu Leu Gln Glu Ala Val Leu Thr Glu Ser Pro Leu Leu Leu Glu Val

                85                  90                  95

Arg Arg Gly Asn Asp Asp Leu Leu Phe Ser Asn Ser Ser

            100                 105

<210>60

<211>97

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>60

His Lys Lys Tyr Leu Gly Leu Gln Met Leu Ser Leu Thr Val Pro Leu

 1               5                  10                  15

Ser Glu Glu Leu Lys Met His Tyr Pro Asp Phe Pro Asp Val Ser Ser

            20                  25                  30

Gly Val Tyr Val Cys Lys Val Val Glu Gly Thr Ala Ala Gln Ser Ser

        35                  40                  45

Gly Leu Arg Asp His Asp Val Ile Val Asn Ile Asn Gly Lys Pro Ile

    50                  55                  60

Thr Thr Thr Thr Asp Val Val Lys Ala Leu Asp Ser Asp Ser Leu Ser

65                  70                  75                  80

Met Ala Val Leu Arg Gly Lys Asp Asn Leu Leu Leu Thr Val Asn Ser

                85                  90                  95

Ser

<210>61

<211>104

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>61

Ile Trp Gln Ile Glu Tyr Ile Asp Ile Glu Arg Pro Ser Thr Gly Gly

 1               5                  10                  15

Leu Gly Phe Ser Val Val Ala Leu Arg Ser Gln Asn Leu Gly Lys Val

            20                  25                  30

Asp Ile Phe Val Lys Asp Val Gln Pro Gly Ser Val Ala Asp Arg Asp

        35                  40                  45

Gln Arg Leu Lys Glu Asn Asp Gln Ile Leu Ala Ile Asn His Thr Pro

    50                  55                  60

Leu Asp Gln Asn Ile Ser His Gln Gln Ala Ile Ala Leu Leu Gln Gln

65                  70                  75                  80

Thr Thr Gly Ser Leu Arg Leu Ile Val Ala Arg Glu Pro Val His Thr

                85                  90                  95

Lys Ser Ser Thr Ser Ser Ser Glu

            100

<210>62

<211>78

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>62

Pro Gly His Val Glu Glu Val Glu Leu Ile Asn Asp Gly Ser Gly Leu

 1               5                  10                  15

Gly Phe Gly Ile Val Gly Gly Lys Thr Ser Gly Val Val Val Arg Thr

            20                  25                  30

Ile Val Pro Gly Gly Leu Ala Asp Arg Asp Gly Arg Leu Gln Thr Gly

        35                  40                  45

Asp His Ile Leu Lys Ile Gly Gly Thr Asn Val Gln Gly Met Thr Ser

    50                  55                  60

Glu Gln Val Ala Gln Val Leu Arg Asn Cys Gly Asn Ser Ser

65                  70                  75

<210>63

<211>111

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>63

Pro Gly Ser Asp Ser Ser Leu Phe Glu Thr Tyr Asn Val Glu Leu Val

 1               5                  10                  15

Arg Lys Asp Gly Gln Ser Leu Gly Ile Arg Ile Val Gly Tyr Val Gly

            20                  25                  30

Thr Ser His Thr Gly Glu Ala Ser Gly Ile Tyr Val Lys Ser Ile Ile

        35                  40                  45

Pro Gly Ser Ala Ala Tyr His Asn Gly His Ile Gln Val Asn Asp Lys

    50                  55                  60

Ile Val Ala Val Asp Gly Val Asn Ile Gln Gly Phe Ala Asn His Asp

65                  70                  75                  80

Val Val Glu Val Leu Arg Asn Ala Gly Gln Val Val His Leu Thr Leu

                85                  90                  95

Val Arg Arg Lys Thr Ser Ser Ser Thr Ser Arg Ile His Arg Asp

            100                 105                 110

<210>64

<211>96

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>64

Asn Ser Asp Asp Ala Glu Leu Gln Lys Tyr Ser Lys Leu Leu Pro Ile

 1               5                  10                  15

His Thr Leu Arg Leu Gly Val Glu Val Asp Ser Phe Asp Gly His His

            20                  25                  30

Tyr Ile Ser Ser Ile Val Ser Gly Gly Pro Val Asp Thr Leu Gly Leu

        35                  40                  45

Leu Gln Pro Glu Asp Glu Leu Leu Glu Val Asn Gly Met Gln Leu Tyr

    50                  55                  60

Gly Lys Ser Arg Arg Glu Ala Val Ser Phe Leu Lys Glu Val Pro Pro

65                  70                  75                  80

Pro Phe Thr Leu Val Cys Cys Arg Arg Leu Phe Asp Asp Glu Ala Ser

                85                  90                  95

<210>65

<211>102

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>65

Leu Ser Ser Pro Glu Val Lys Ile Val Glu Leu Val Lys Asp Cys Lys

 1               5                  10                  15

Gly Leu Gly Phe Ser Ile Leu Asp Tyr Gln Asp Pro Leu Asp Pro Thr

            20                  25                  30

Arg Ser Val Ile Val Ile Arg Ser Leu Val Ala Asp Gly Val Ala Glu

        35                  40                  45

Arg Ser Gly Gly Leu Leu Pro Gly Asp Arg Leu Val Ser Val Asn Glu

    50                  55                  60

Tyr Cys Leu Asp Asn Thr Ser Leu Ala Glu Ala Val Glu Ile Leu Lys

65                  70                  75                  80

Ala Val Pro Pro Gly Leu Val His Leu Gly Ile Cys Lys Pro Leu Val

                85                  90                  95

Glu Phe Ile Val Thr Asp

            100

<210>66

<211>119

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>66

Pro Asn Phe Ser His Trp Gly Pro Pro Arg Ile Val Glu Ile Phe Arg

 1               5                  10                  15

Glu Pro Asn Val Ser Leu Gly Ile Ser Ile Val Val Gly Gln Thr Val

            20                  25                  30

Ile Lys Arg Leu Lys Asn Gly Glu Glu Leu Lys Gly Ile Phe Ile Lys

        35                  40                  45

Gln Val Leu Glu Asp Ser Pro Ala Gly Lys Thr Asn Ala Leu Lys Thr

    50                  55                  60

Gly Asp Lys Ile Leu Glu Val Ser Gly Val Asp Leu Gln Asn Ala Ser

65                  70                  75                  80

His Ser Glu Ala Val Glu Ala Ile Lys Asn Ala Gly Asn Pro Val Val

                85                  90                  95

Phe Ile Val Gln Ser Leu Ser Ser Thr Pro Arg Val Ile Pro Asn Val

            100                 105                 110

His Asn Lys Ala Asn Ser Ser

        115

<210>67

<211>99

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>67

Pro Gly Glu Leu His Ile Ile Glu Leu Glu Lys Asp Lys Asn Gly Leu

 1               5                  10                  15

Gly Leu Ser Leu Ala Gly Asn Lys Asp Arg Ser Arg Met Ser Ile Phe

            20                  25                  30

Val Val Gly Ile Asn Pro Glu Gly Pro Ala Ala Ala Asp Gly Arg Met

        35                  40                  45

Arg Ile Gly Asp Glu Leu Leu Glu Ile Asn Asn Gln Ile Leu Tyr Gly

    50                  55                  60

Arg Ser His Gln Asn Ala Ser Ala Ile Ile Lys Thr Ala Pro Ser Lys

65                  70                  75                  80

Val Lys Leu Val Phe Ile Arg Asn Glu Asp Ala Val Asn Gln Met Ala

                85                  90                  95

Asn Ser Ser

<210>68

<211>93

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>68

Pro Ala Thr Cys Pro Ile Val Pro Gly Gln Glu Met Ile Ile Glu Ile

 1               5                  10                  15

Ser Lys Gly Arg Ser Gly Leu Gly Leu Ser Ile Val Gly Gly Lys Asp

            20                  25                  30

Thr Pro Leu Asn Ala Ile Val Ile His Glu Val Tyr Glu Glu Gly Ala

        35                  40                  45

Ala Ala Arg Asp Gly Arg Leu Trp Ala Gly Asp Gln Ile Leu Glu Val

    50                  55                  60

Asn Gly Val Asp Leu Arg Asn Ser Ser His Glu Glu Ala Ile Thr Ala

65                  70                  75                  80

Leu Arg Gln Thr Pro Gln Lys Val Arg Leu Val Val Tyr

                85                  90

<210>69

<211>103

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>69

Ile Leu Thr Leu Thr Ile Leu Arg Gln Thr Gly Gly Leu Gly Ile Ser

 1               5                  10                  15

Ile Ala Gly Gly Lys Gly Ser Thr Pro Tyr Lys Gly Asp Asp Glu Gly

            20                  25                  30

Ile Phe Ile Ser Arg Val Ser Glu Glu Gly Pro Ala Ala Arg Ala Gly

        35                  40                  45

Val Arg Val Gly Asp Lys Leu Leu Glu Val Asn Gly Val Ala Leu Gln

    50                  55                  60

Gly Ala Glu His His Glu Ala Val Glu Ala Leu Arg Gly Ala Gly Thr

65                  70                  75                  80

Ala Val Gln Met Arg Val Trp Arg Glu Arg Met Val Glu Pro Glu Asn

                85                  90                  95

Ala Glu Phe Ile Val Thr Asp

            100

<210>70

<211>97

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>70

Pro Leu Arg Gln Arg His Val Ala Cys Leu Ala Arg Ser Glu Arg Gly

 1               5                  10                  15

Leu Gly Phe Ser Ile Ala Gly Gly Lys Gly Ser Thr Pro Tyr Arg Ala

            20                  25                  30

Gly Asp Ala Gly Ile Phe Val Ser Arg Ile Ala Glu Gly Gly Ala Ala

        35                  40                  45

His Arg Ala Gly Thr Leu Gln Val Gly Asp Arg Val Leu Ser Ile Asn

    50                  55                  60

Gly Val Asp Val Thr Glu Ala Arg His Asp His Ala Val Ser Leu Leu

65                  70                  75                  80

Thr Ala Ala Ser Pro Thr Ile Ala Leu Leu Leu Glu Arg Glu Ala Gly

                85                  90                  95

Gly

<210>71

<211>106

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>71

Ile Leu Glu Gly Pro Tyr Pro Val Glu Glu Ile Arg Leu Pro Arg Ala

 1               5                  10                  15

Gly Gly Pro Leu Gly Leu Ser Ile Val Gly Gly Ser Asp His Ser Ser

            20                  25                  30

His Pro Phe Gly Val Gln Glu Pro Gly Val Phe Ile Ser Lys Val Leu

        35                  40                  45

Pro Arg Gly Leu Ala Ala Arg Ser Gly Leu Arg Val Gly Asp Arg Ile

    50                  55                  60

Leu Ala Val Asn Gly Gln Asp Val Arg Asp Ala Thr His Gln Glu Ala

65                  70                  75                  80

Val Ser Ala Leu Leu Arg Pro Cys Leu Glu Leu Ser Leu Leu Val Arg

                85                  90                  95

Arg Asp Pro Ala Glu Phe Ile Val Thr Asp

            100                 105

<210>72

<211>105

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>72

Arg Glu Leu Cys Ile Gln Lys Ala Pro Gly Glu Arg Leu Gly Ile Ser

 1               5                  10                  15

Ile Arg Gly Gly Ala Arg Gly His Ala Gly Asn Pro Arg Asp Pro Thr

            20                  25                  30

Asp Glu Gly Ile Phe Ile Ser Lys Val Ser Pro Thr Gly Ala Ala Gly

        35                  40                  45

Arg Asp Gly Arg Leu Arg Val Gly Leu Arg Leu Leu Glu Val Asn Gln

    50                  55                  60

Gln Ser Leu Leu Gly Leu Thr His Gly Glu Ala Val Gln Leu Leu Arg

65                  70                  75                  80

Ser Val Gly Asp Thr Leu Thr Val Leu Val Cys Asp Gly Phe Glu Ala

                85                  90                  95

Ser Thr Asp Ala Ala Leu Glu Val Ser

            100                 105

<210>73

<211>91

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>73

Pro His Gln Pro Ile Val Ile His Ser Ser Gly Lys Asn Tyr Gly Phe

 1               5                  10                  15

Thr Ile Arg Ala Ile Arg Val Tyr Val Gly Asp Ser Asp Ile Tyr Thr

            20                  25                  30

Val His His Ile Val Trp Asn Val Glu Glu Gly Ser Pro Ala Cys Gln

        35                  40                  45

Ala Gly Leu Lys Ala Gly Asp Leu Ile Thr His Ile Asn Gly Glu Pro

    50                  55                  60

Val His Gly Leu Val His Thr Glu Val Ile Glu Leu Leu Leu Lys Ser

65                  70                  75                  80

Gly Asn Lys Val Ser Ile Thr Thr Thr Pro Phe

                85                  90

<210>74

<211>105

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>74

Ile Leu Ala Cys Ala Ala Lys Ala Lys Arg Arg Leu Met Thr Leu Thr

 1               5                  10                  15

Lys Pro Ser Arg Glu Ala Pro Leu Pro Phe Ile Leu Leu Gly Gly Ser

            20                  25                  30

Glu Lys Gly Phe Gly Ile Phe Val Asp Ser Val Asp Ser Gly Ser Lys

        35                  40                  45

Ala Thr Glu Ala Gly Leu Lys Arg Gly Asp Gln Ile Leu Glu Val Asn

    50                  55                  60

Gly Gln Asn Phe Glu Asn Ile Gln Leu Ser Lys Ala Met Glu Ile Leu

65                  70                  75                  80

Arg Asn Asn Thr His Leu Ser Ile Thr Val Lys Thr Asn Leu Phe Val

                85                  90                  95

Phe Lys Glu Leu Leu Thr Asn Ser Ser

            100                 105

<210>75

<211>88

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>75

Ile Pro Pro Ala Pro Arg Lys Val Glu Met Arg Arg Asp Pro Val Leu

 1               5                  10                  15

Gly Phe Gly Phe Val Ala Gly Ser Glu Lys Pro Val Val Val Arg Ser

            20                  25                  30

Val Thr Pro Gly Gly Pro Ser Glu Gly Lys Leu Ile Pro Gly Asp Gln

        35                  40                  45

Ile Val Met Ile Asn Asp Glu Pro Val Ser Ala Ala Pro Arg Glu Arg

    50                  55                  60

Val Ile Asp Leu Val Arg Ser Cys Lys Glu Ser Ile Leu Leu Thr Val

65                  70                  75                  80

Ile Gln Pro Tyr Pro Ser Pro Lys

                85

<210>76

<211>101

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>76

Leu Asn Lys Arg Thr Thr Met Pro Lys Asp Ser Gly Ala Leu Leu Gly

 1               5                  10                  15

Leu Lys Val Val Gly Gly Lys Met Thr Asp Leu Gly Arg Leu Gly Ala

            20                  25                  30

Phe Ile Thr Lys Val Lys Lys Gly Ser Leu Ala Asp Val Val Gly His

        35                  40                  45

Leu Arg Ala Gly Asp Glu Val Leu Glu Trp Asn Gly Lys Pro Leu Pro

    50                  55                  60

Gly Ala Thr Asn Glu Glu Val Tyr Asn Ile Ile Leu Glu Ser Lys Ser

65                  70                  75                  80

Glu Pro Gln Val Glu Ile Ile Val Ser Arg Pro Ile Gly Asp Ile Pro

                85                  90                  95

Arg Ile His Arg Asp

            100

<210>77

<211>79

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>77

Gln Arg Cys Val Ile Ile Gln Lys Asp Gln His Gly Phe Gly Phe Thr

 1               5                  10                  15

Val Ser Gly Asp Arg Ile Val Leu Val Gln Ser Val Arg Pro Gly Gly

            20                  25                  30

Ala Ala Met Lys Ala Gly Val Lys Glu Gly Asp Arg Ile Ile Lys Val

        35                  40                  45

Asn Gly Thr Met Val Thr Asn Ser Ser His Leu Glu Val Val Lys Leu

    50                  55                  60

Ile Lys Ser Gly Ala Tyr Val Ala Leu Thr Leu Leu Gly Ser Ser

65                  70                  75

<210>78

<211>87

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>78

Ile Leu Val Gln Arg Cys Val Ile Ile Gln Lys Asp Asp Asn Gly Phe

 1               5                  10                  15

Gly Leu Thr Val Ser Gly Asp Asn Pro Val Phe Val Gln Ser Val Lys

            20                  25                  30

Glu Asp Gly Ala Ala Met Arg Ala Gly Val Gln Thr Gly Asp Arg Ile

        35                  40                  45

Ile Lys Val Asn Gly Thr Leu Val Thr His Ser Asn His Leu Glu Val

    50                  55                  60

Val Lys Leu Ile Lys Ser Gly Ser Tyr Val Ala Leu Thr Val Gln Gly

65                  70                  75                  80

Arg Pro Pro Gly Asn Ser Ser

                85

<210>79

<211>79

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>79

Ser Val Glu Met Thr Leu Arg Arg Asn Gly Leu Gly Gln Leu Gly Phe

 1               5                  10                  15

His Val Asn Tyr Glu Gly Ile Val Ala Asp Val Glu Pro Tyr Gly Tyr

            20                  25                  30

Ala Trp Gln Ala Gly Leu Arg Gln Gly Ser Arg Leu Val Glu Ile Cys

        35                  40                  45

Lys Val Ala Val Ala Thr Leu Ser His Glu Gln Met Ile Asp Leu Leu

    50                  55                  60

Arg Thr Ser Val Thr Val Lys Val Val Ile Ile Pro Pro His Asp

65                  70                  75

<210>80

<211>96

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>80

Leu Lys Val Met Thr Ser Gly Trp Glu Thr Val Asp Met Thr Leu Arg

 1               5                  10                  15

Arg Asn Gly Leu Gly Gln Leu Gly Phe His Val Lys Tyr Asp Gly Thr

            20                  25                  30

Val Ala Glu Val Glu Asp Tyr Gly Phe Ala Trp Gln Ala Gly Leu Arg

        35                  40                  45

Gln Gly Ser Arg Leu Val Glu Ile Cys Lys Val Ala Val Val Thr Leu

    50                  55                  60

Thr His Asp Gln Met Ile Asp Leu Leu Arg Thr Ser Val Thr Val Lys

65                  70                  75                  80

Val Val Ile Ile Pro Pro Phe Glu Asp Gly Thr Pro Arg Arg Gly Trp

                85                  90                  95

<210>81

<211>105

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>81

His Tyr Ile Phe Pro His Ala Arg Ile Lys Ile Thr Arg Asp Ser Lys

 1               5                  10                  15

Asp His Thr Val Ser Gly Asn Gly Leu Gly Ile Arg Ile Val Gly Gly

            20                  25                  30

Lys Glu Ile Pro Gly His Ser Gly Glu Ile Gly Ala Tyr Ile Ala Lys

        35                  40                  45

Ile Leu Pro Gly Gly Ser Ala Glu Gln Thr Gly Lys Leu Met Glu Gly

        50                  55                  60

Met Gln Val Leu Glu Trp Asn Gly Ile Pro Leu Thr Ser Lys Thr Tyr

65                  70                  75                  80

Glu Glu Val Gln Ser Ile Ile Ser Gln Gln Ser Gly Glu Ala Glu Ile

                85                  90                  95

Cys Val Arg Leu Asp Leu Asn Met Leu

            100                 105

<210>82

<211>103

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>82

Leu Cys Gly Ser Leu Arg Pro Pro Ile Val Ile His Ser Ser Gly Lys

 1               5                  10                  15

Lys Tyr Gly Phe Ser Leu Arg Ala Ile Arg Val Tyr Met Gly Asp Ser

            20                  25                  30

Asp Val Tyr Thr Val His His Val Val Trp Ser Val Glu Asp Gly Ser

        35                  40                  45

Pro Ala Gln Glu Ala Gly Leu Arg Ala Gly Asp Leu Ile Thr His Ile

    50                  55                  60

Asn Gly Glu Ser Val Leu Gly Leu Val His Met Asp Val Val Glu Leu

65                  70                  75                  80

Leu Leu Lys Ser Gly Asn Lys Ile Ser Leu Arg Thr Thr Ala Leu Glu

                85                  90                  95

Asn Thr Ser Ile Lys Val Gly

            100

<210>83

<211>86

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>83

Ser Tyr Ser Val Thr Leu Thr Gly Pro Gly Pro Trp Gly Phe Arg Leu

 1               5                  10                  15

Gln Gly Gly Lys Asp Phe Asn Met Pro Leu Thr Ile Ser Arg Ile Thr

            20                  25                  30

Pro Gly Ser Lys Ala Ala Gln Ser Gln Leu Ser Gln Gly Asp Leu Val

        35                  40                  45

Val Ala Ile Asp Gly Val Asn Thr Asp Thr Met Thr His Leu Glu Ala

    50                  55                  60

Gln Asn Lys Ile Lys Ser Ala Ser Tyr Asn Leu Ser Leu Thr Leu Gln

65                  70                  75                  80

Lys Ser Lys Asn Ser Ser

                85

<210>84

<211>91

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>84

Ile Ser Arg Asp Ser Gly Ala Met Leu Gly Leu Lys Val Val Gly Gly

 1               5                  10                  15

Lys Met Thr Glu Ser Gly Arg Leu Cys Ala Phe Ile Thr Lys Val Lys

            20                  25                  30

Lys Gly Ser Leu Ala Asp Thr Val Gly His Leu Arg Pro Gly Asp Glu

        35                  40                  45

Val Leu Glu Trp Asn Gly Arg Leu Leu Gln Gly Ala Thr Phe Glu Glu

    50                  55                  60

Val Tyr Asn Ile Ile Leu Glu Ser Lys Pro Glu Pro Gln Val Glu Leu

65                  70                  75                  80

Val Val Ser Arg Pro Ile Ala Ile His Arg Asp

                85                  90

<210>85

<211>101

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>85

Ile Ser Ala Leu Gly Ser Met Arg Pro Pro Ile Ile Ile His Arg Ala

 1               5                  10                  15

Gly Lys Lys Tyr Gly Phe Thr Leu Arg Ala Ile Arg Val Tyr Met Gly

            20                  25                  30

Asp Ser Asp Val Tyr Thr Val His His Met Val Trp His Val Glu Asp

        35                  40                  45

Gly Gly Pro Ala Ser Glu Ala Gly Leu Arg Gln Gly Asp Leu Ile Thr

    50                  55                  60

His Val Asn Gly Glu Pro Val His Gly Leu Val His Thr Glu Val Val

65                  70                  75                  80

Glu Leu Ile Leu Lys Ser Gly Asn Lys Val Ala Ile Ser Thr Thr Pro

                85                  90                  95

Leu Glu Asn Ser Ser

            100

<210>86

<211>94

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>86

Phe Ser Asp Met Arg Ile Ser Ile Asn Gln Thr Pro Gly Lys Ser Leu

 1               5                  10                  15

Asp Phe Gly Phe Thr Ile Lys Trp Asp Ile Pro Gly Ile Phe Val Ala

            20                  25                  30

Ser Val Glu Ala Gly Ser Pro Ala Glu Phe Ser Gln Leu Gln Val Asp

        35                  40                  45

Asp Glu Ile Ile Ala Ile Asn Asn Thr Lys Phe Ser Tyr Asn Asp Ser

    50                  55                  60

Lys Glu Trp Glu Glu Ala Met Ala Lys Ala Gln Glu Thr Gly His Leu

65                  70                  75                  80

Val Met Asp Val Arg Arg Tyr Gly Lys Ala Gly Ser Pro Glu

                85                  90

<210>87

<211>98

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>87

Gln Ser Ala His Leu Glu Val Ile Gln Leu Ala Asn Ile Lys Pro Ser

 1               5                  10                  15

Glu Gly Leu Gly Met Tyr Ile Lys Ser Thr Tyr Asp Gly Leu His Val

            20                  25                  30

Ile Thr Gly Thr Thr Glu Asn Ser Pro Ala Asp Arg Cys Lys Lys Ile

        35                  40                  45

His Ala Gly Asp Glu Val Ile Gln Val Asn His Gln Thr Val Val Gly

    50                  55                  60

Trp Gln Leu Lys Asn Leu Val Asn Ala Leu Arg Glu Asp Pro Ser Gly

65                  70                  75                  80

Val Ile Leu Thr Leu Lys Lys Arg Pro Gln Ser Met Leu Thr Ser Ala

                85                  90                  95

Pro Ala

<210>88

<211>100

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>88

Ile Leu Thr Gln Thr Leu Ile Pro Val Arg His Thr Val Lys Ile Asp

     1               5                  10                  15

Lys Asp Thr Leu Leu Gln Asp Tyr Gly Phe His Ile Ser Glu Ser Leu

            20                  25                  30

Pro Leu Thr Val Val Ala Val Thr Ala Gly Gly Ser Ala His Gly Lys

        35                  40                  45

Leu Phe Pro Gly Asp Gln Ile Leu Gln Met Asn Asn Glu Pro Ala Glu

    50                  55                  60

Asp Leu Ser Trp Glu Arg Ala Val Asp Ile Leu Arg Glu Ala Glu Asp

65                  70                  75                  80

Ser Leu Ser Ile Thr Val Val Arg Cys Thr Ser Gly Val Pro Lys Ser

                85                  90                  95

Ser Asn Ser Ser

            100

<210>89

<211>93

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>89

Gly Leu Arg Ser Pro Ile Thr Ile Gln Arg Ser Gly Lys Lys Tyr Gly

 1               5                  10                  15

Phe Thr Leu Arg Ala Ile Arg Val Tyr Met Gly Asp Thr Asp Val Tyr

            20                  25                  30

Ser Val His His Ile Val Trp His Val Glu Glu Gly Gly Pro Ala Gln

        35                  40                  45

Glu Ala Gly Leu Cys Ala Gly Asp Leu Ile Thr His Val Asn Gly Glu

    50                  55                  60

Pro Val His Gly Met Val His Pro Glu Val Val Glu Leu Ile Leu Lys

65                  70                  75                  80

Ser Gly Asn Lys Val Ala Val Thr Thr Thr Pro Phe Glu

                85                  90

<210>90

<211>107

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>90

Gln Gly Glu Glu Thr Lys Ser Leu Thr Leu Val Leu His Arg Asp Ser

 1               5                  10                  15

Gly Ser Leu Gly Phe Asn Ile Ile Gly Gly Arg Pro Ser Val Asp Asn

            20                  25                  30

His Asp Gly Ser Ser Ser Glu Gly Ile Phe Val Ser Lys Ile Val Asp

        35                  40                  45

Ser Gly Pro Ala Ala Lys Glu Gly Gly Leu Gln Ile His Asp Arg Ile

    50                  55                  60

Ile Glu Val Asn Gly Arg Asp Leu Ser Arg Ala Thr His Asp Gln Ala

65                  70                  75                  80

Val Glu Ala Phe Lys Thr Ala Lys Glu Pro Ile Val Val Gln Val Leu

                85                  90                  95

Arg Arg Thr Pro Arg Thr Lys Met Phe Thr Pro

            100                 105

<210>91

<211>101

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>91

Gln Glu Met Asp Arg Glu Glu Leu Glu Leu Glu Glu Val Asp Leu Tyr

 1               5                  10                  15

Arg Met Asn Ser Gln Asp Lys Leu Gly Leu Thr Val Cys Tyr Arg Thr

            20                  25                  30

Asp Asp Glu Asp Asp Ile Gly Ile Tyr Ile Ser Glu Ile Asp Pro Asn

        35                  40                  45

Ser Ile Ala Ala Lys Asp Gly Arg Ile Arg Glu Gly Asp Arg Ile Ile

    50                  55                  60

Gln Ile Asn Gly Ile Glu Val Gln Asn Arg Glu Glu Ala Val Ala Leu

65                  70                  75                  80

Leu Thr Ser Glu Glu Asn Lys Asn Phe Ser Leu Leu Ile Ala Arg Pro

                85                  90                  95

Glu Leu Gln Leu Asp

            100

<210>92

<211>91

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>92

Arg Ser Phe Gln Tyr Val Pro Val Gln Leu Gln Gly Gly Ala Pro Trp

 1               5                  10                  15

Gly Phe Thr Leu Lys Gly Gly Leu Glu His Cys Glu Pro Leu Thr Val

            20                  25                  30

Ser Lys Ile Glu Asp Gly Gly Lys Ala Ala Leu Ser Gln Lys Met Arg

        35                  40                  45

Thr Gly Asp Glu Leu Val Asn Ile Asn Gly Thr Pro Leu Tyr Gly Ser

    50                  55                  60

Arg Gln Glu Ala Leu Ile Leu Ile Lys Gly Ser Phe Arg Ile Leu Lys

65                  70                  75                  80

Leu Ile Val Arg Arg Arg Asn Ala Pro Val Ser

                85                  90

<210>93

<211>102

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>93

Ile Leu Glu Lys Leu Glu Leu Phe Pro Val Glu Leu Glu Lys Asp Glu

 1               5                  10                  15

Asp Gly Leu Gly Ile Ser Ile Ile Gly Met Gly Val Gly Ala Asp Ala

            20                  25                  30

Gly Leu Glu Lys Leu Gly Ile Phe Val Lys Thr Val Thr Glu Gly Gly

        35                  40                  45

Ala Ala Gln Arg Asp Gly Arg Ile Gln Val Asn Asp Gln Ile Val Glu

    50                  55                  60

Val Asp Gly Ile Ser Leu Val Gly Val Thr Gln Asn Phe Ala Ala Thr

65                  70                  75                  80

Val Leu Arg Asn Thr Lys Gly Asn Val Arg Phe Val Ile Gly Arg Glu

                85                  90                  95

Lys Pro Gly Gln Val Ser

            100

<210>94

<211>113

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>94

Lys Asp Val Asn Val Tyr Val Asn Pro Lys Lys Leu Thr Val Ile Lys

 1               5                  10                  15

Ala Lys Glu Gln Leu Lys Leu Leu Glu Val Leu Val Gly Ile Ile His

            20                  25                  30

Gln Thr Lys Trp Ser Trp Arg Arg Thr Gly Lys Gln Gly Asp Gly Glu

        35                  40                  45

Arg Leu Val Val His Gly Leu Leu Pro Gly Gly Ser Ala Met Lys Ser

    50                  55                  60

Gly Gln Val Leu Ile Gly Asp Val Leu Val Ala Val Asn Asp Val Asp

65                  70                  75                  80

Val Thr Thr Glu Asn Ile Glu Arg Val Leu Ser Cys Ile Pro Gly Pro

                85                  90                  95

Met Gln Val Lys Leu Thr Phe Glu Asn Ala Tyr Asp Val Lys Arg Glu

            100                 105                 110

Thr

<210>95

<211>90

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>95

Thr Arg Gly Cys Glu Thr Val Glu Met Thr Leu Arg Arg Asn Gly Leu

 1               5                  10                  15

Gly Gln Leu Gly Phe His Val Asn Phe Glu Gly Ile Val Ala Asp Val

            20                  25                  30

Glu Pro Phe Gly Phe Ala Trp Lys Ala Gly Leu Arg Gln Gly Ser Arg

        35                  40                  45

Leu Val Glu Ile Cys Lys Val Ala Val Ala Thr Leu Thr His Glu Gln

    50                  55                  60

Met Ile Asp Leu Leu Arg Thr Ser Val Thr Val Lys Val Val Ile Ile

65                  70                  75                  80

Gln Pro His Asp Asp Gly Ser Pro Arg Arg

                85                  90

<210>96

<211>96

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>96

Val Glu Asn Ile Leu Ala Lys Arg Leu Leu Ile Leu Pro Gln Glu Glu

 1               5                  10                  15

Asp Tyr Gly Phe Asp Ile Glu Glu Lys Asn Lys Ala Val Val Val Lys

            20                  25                  30

Ser Val Gln Arg Gly Ser Leu Ala Glu Val Ala Gly Leu Gln Val Gly

        35                  40                  45

Arg Lys Ile Tyr Ser Ile Asn Glu Asp Leu Val Phe Leu Arg Pro Phe

    50                  55                  60

Ser Glu Val Glu Ser Ile Leu Asn Gln Ser Phe Cys Ser Arg Arg Pro

65                  70                  75                  80

Leu Arg Leu Leu Val Ala Thr Lys Ala Lys Glu Ile Ile Lys Ile Pro

                85                  90                  95

<210>97

<211>103

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>97

Pro Asp Ser Ala Gly Pro Gly Glu Val Arg Leu Val Ser Leu Arg Arg

 1               5                  10                  15

Ala Lys Ala His Glu Gly Leu Gly Phe Ser Ile Arg Gly Gly Ser Glu

            20                  25                  30

His Gly Val Gly Ile Tyr Val Ser Leu Val Glu Pro Gly Ser Leu Ala

        35                  40                  45

Glu Lys Glu Gly Leu Arg Val Gly Asp Gln Ile Leu Arg Val Asn Asp

    50                  55                  60

Lys Ser Leu Ala Arg Val Thr His Ala Glu Ala Val Lys Ala Leu Lys

65                  70                  75                  80

Gly Ser Lys Lys Leu Val Leu Ser Val Tyr Ser Ala Gly Arg Ile Pro

                85                  90                  95

Gly Gly Tyr Val Thr Asn His

            100

<210>98

<211>100

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>98

Leu Gln Gly Gly Asp Glu Lys Lys Val Asn Leu Val Leu Gly Asp Gly

 1               5                  10                  15

Arg Ser Leu Gly Leu Thr Ile Arg Gly Gly Ala Glu Tyr Gly Leu Gly

            20                  25                  30

Ile Tyr Ile Thr Gly Val Asp Pro Gly Ser Glu Ala Glu Gly Ser Gly

        35                  40                  45

Leu Lys Val Gly Asp Gln Ile Leu Glu Val Asn Trp Arg Ser Phe Leu

    50                  55                  60

Asn Ile Leu His Asp Glu Ala Val Arg Leu Leu Lys Ser Ser Arg His

65                  70                  75                  80

Leu Ile Leu Thr Val Lys Asp Val Gly Arg Leu Pro His Ala Arg Thr

                85                  90                  95

Thr Val Asp Glu

            100

<210>99

<211>87

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>99

Trp Thr Ser Gly Ala His Val His Ser Gly Pro Cys Glu Glu Lys Cys

 1               5                  10                  15

Gly His Pro Gly His Arg Gln Pro Leu Pro Arg Ile Val Thr Ile Gln

            20                  25                  30

Arg Gly Gly Ser Ala His Asn Cys Gly Gln Leu Lys Val Gly His Val

        35                  40                  45

Ile Leu Glu Val Asn Gly Leu Thr Leu Arg Gly Lys Glu His Arg Glu

    50                  55                  60

Ala Ala Arg Ile Ile Ala Glu Ala Phe Lys Thr Lys Asp Arg Asp Tyr

65                  70                  75                  80

Ile Asp Phe Leu Asp Ser Leu

                85

<210>100

<211>100

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>100

Glu Leu Arg Arg Ala Glu Leu Val Glu Ile Ile Val Glu Thr Glu Ala

 1               5                  10                  15

Gln Thr Gly Val Ser Gly Ile Asn Val Ala Gly Gly Gly Lys Glu Gly

            20                  25                  30

Ile Phe Val Arg Glu Leu Arg Glu Asp Ser Pro Ala Ala Arg Ser Leu

        35                  40                  45

Ser Leu Gln Glu Gly Asp Gln Leu Leu Ser Ala Arg Val Phe Phe Glu

    50                  55                  60

Asn Phe Lys Tyr Glu Asp Ala Leu Arg Leu Leu Gln Cys Ala Glu Pro

65                  70                  75                  80

Tyr Lys Val Ser Phe Cys Leu Lys Arg Thr Val Pro Thr Gly Asp Leu

                85                  90                  95

Ala Leu Arg Pro

            100

<210>101

<211>102

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>101

Pro Ser Gln Leu Lys Gly Val Leu Val Arg Ala Ser Leu Lys Lys Ser

 1               5                  10                  15

Thr Met Gly Phe Gly Phe Thr Ile Ile Gly Gly Asp Arg Pro Asp Glu

            20                  25                  30

Phe Leu Gln Val Lys Asn Val Leu Lys Asp Gly Pro Ala Ala Gln Asp

        35                  40                  45

Gly Lys Ile Ala Pro Gly Asp Val Ile Val Asp Ile Asn Gly Asn Cys

    50                  55                  60

Val Leu Gly His Thr His Ala Asp Val Val Gln Met Phe Gln Leu Val

65                  70                  75                  80

Pro Val Asn Gln Tyr Val Asn Leu Thr Leu Cys Arg Gly Tyr Pro Leu

                85                  90                  95

Pro Asp Asp Ser Glu Asp

            100

<210>102

<211>100

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>102

Ala Ser Ser Gly Ser Ser Gln Pro Glu Leu Val Thr Ile Pro Leu Ile

 1               5                  10                  15

Lys Gly Pro Lys Gly Phe Gly Phe Ala Ile Ala Asp Ser Pro Thr Gly

            20                  25                  30

Gln Lys Val Lys Met Ile Leu Asp Ser Gln Trp Cys Gln Gly Leu Gln

        35                  40                  45

Lys Gly Asp Ile Ile Lys Glu Ile Tyr His Gln Asn Val Gln Asn Leu

    50                  55                  60

Thr His Leu Gln Val Val Glu Val Leu Lys Gln Phe Pro Val Gly Ala

65                  70                  75                  80

Asp Val Pro Leu Leu Ile Leu Arg Gly Gly Pro Pro Ser Pro Thr Lys

                85                  90                  95

Thr Ala Lys Met

        100

<210>103

<211>143

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>103

Leu Tyr Glu Asp Lys Pro Pro Leu Thr Asn Thr Phe Leu Ile Ser Asn

 1               5                  10                  15

Pro Arg Thr Thr Ala Asp Pro Arg Ile Leu Tyr Glu Asp Lys Pro Pro

            20                  25                  30

Asn Thr Lys Asp Leu Asp Val Phe Leu Arg Lys Gln Glu Ser Gly Phe

        35                  40                  45

Gly Phe Arg Val Leu Gly Gly Asp Gly Pro Asp Gln Ser Ile Tyr Ile

    50                  55                  60

Gly Ala Ile Ile Pro Leu Gly Ala Ala Glu Lys Asp Gly Arg Leu Arg

65                  70                  75                  80

Ala Ala Asp Glu Leu Met Cys Ile Asp Gly Ile Pro Val Lys Gly Lys

                85                  90                  95

Ser His Lys Gln Val Leu Asp Leu Met Thr Thr Ala Ala Arg Asn Gly

            100                 105                 110

His Val Leu Leu Thr Val Arg Arg Lys Ile Phe Tyr Gly Glu Lys Gln

        115                 120                 125

Pro Glu Asp Asp Ser Gly Ser Pro Gly Ile His Arg Glu Leu Thr

    130                 135                 140

<210>104

<211>102

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>104

Pro Ala Pro Gln Glu Pro Tyr Asp Val Val Leu Gln Arg Lys Glu Asn

 1               5                  10                  15

Glu Gly Phe Gly Phe Val Ile Leu Thr Ser Lys Asn Lys Pro Pro Pro

            20                  25                  30

Gly Val Ile Pro His Lys Ile Gly Arg Val Ile Glu Gly Ser Pro Ala

        35                  40                  45

Asp Arg Cys Gly Lys Leu Lys Val Gly Asp His Ile Ser Ala Val Asn

    50                  55                  60

Gly Gln Ser Ile Val Glu Leu Ser His Asp Asn Ile Val Gln Leu Ile

65                  70                  75                  80

Lys Asp Ala Gly Val Thr Val Thr Leu Thr Val Ile Ala Glu Glu Glu

                85                  90                  95

His His Gly Pro Pro Ser

            100

<210>105

<211>98

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>105

Gln Asn Leu Gly Cys Tyr Pro Val Glu Leu Glu Arg Gly Pro Arg Gly

 1               5                  10                  15

Phe Gly Phe Ser Leu Arg Gly Gly Lys Glu Tyr Asn Met Gly Leu Phe

            20                  25                  30

Ile Leu Arg Leu Ala Glu Asp Gly Pro Ala Ile Lys Asp Gly Arg Ile

        35                  40                  45

His Val Gly Asp Gln Ile Val Glu Ile Asn Gly Glu Pro Thr Gln Gly

    50                  55                  60

Ile Thr His Thr Arg Ala Ile Glu Leu Ile Gln Ala Gly Gly Asn Lys

65                  70                  75                  80

Val Leu Leu Leu Leu Arg Pro Gly Thr Gly Leu Ile Pro Asp His Gly

                85                  90                  95

Leu Ala

<210>106

<211>84

<212>PRT    

<213>智人(Homo sapiens)

<400>106

Ile Thr Val Val Glu Leu Ile Lys Lys Glu Gly Ser Thr Leu Gly Leu

 1               5                  10                  15

Thr Ile Ser Gly Gly Thr Asp Lys Asp Gly Lys Pro Arg Val Ser Asn

        20                  25                  30

Leu Arg Pro Gly Gly Leu Ala Ala Arg Ser Asp Leu Leu Asn Ile Gly

        35                  40                  45

Asp Tyr Ile Arg Ser Val Asn Gly Ile His Leu Thr Arg Leu Arg His

    50                  55                  60

Asp Glu Ile Ile Thr Leu Leu Lys Asn Val Gly Glu Arg Val Val Leu

65                  70                  75                  80

Glu Val Glu Tyr

<210>107

<211>92

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>107

Ile Leu Asp Val Ser Leu Tyr Lys Glu Gly Asn Ser Phe Gly Phe Val

 1               5                  10                  15

Leu Arg Gly Gly Ala His Glu Asp Gly His Lys Ser Arg Pro Leu Val

            20                  25                  30

Leu Thr Tyr Val Arg Pro Gly Gly Pro Ala Asp Arg Glu Gly Ser Leu

        35                  40                  45

Lys Val Gly Asp Arg Leu Leu Ser Val Asp Gly Ile Pro Leu His Gly

    50                  55                  60

Ala Ser His Ala Thr Ala Leu Ala Thr Leu Arg Gln Cys Ser His Glu

65                  70                  75                  80

Ala Leu Phe Gln Val Glu Tyr Asp Val Ala Thr Pro

                85                  90

<210>108

<211>102

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>108

Ile His Thr Val Ala Asn Ala Ser Gly Pro Leu Met Val Glu Ile Val

 1               5                  10                  15

Lys Thr Pro Gly Ser Ala Leu Gly Ile Ser Leu Thr Thr Thr Ser Leu

            20                  25                  30

Arg Asn Lys Ser Val Ile Thr Ile Asp Arg Ile Lys Pro Ala Ser Val

        35                  40                  45

Val Asp Arg Ser Gly Ala Leu His Pro Gly Asp His Ile Leu Ser Ile

    50                  55                  60

Asp Gly Thr Ser Met Glu His Cys Ser Leu Leu Glu Ala Thr Lys Leu

65                  70                  75                  80

Leu Ala Ser Ile Ser Glu Lys Val Arg Leu Glu Ile Leu Pro Val Pro

                85                  90                  95

Gln Ser Gln Arg Pro Leu

            100

<210>109

<211>103

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>109

Ile Gln Ile Val His Thr Glu Thr Thr Glu Val Val Leu Cys Gly Asp

 1               5                  10                  15

Pro Leu Ser Gly Phe Gly Leu Gln Leu Gln Gly Gly Ile Phe Ala Thr

            20                  25                  30

Glu Thr Leu Ser Ser Pro Pro Leu Val Cys Phe Ile Glu Pro Asp Ser

        35                  40                  45

Pro Ala Glu Arg Cys Gly Leu Leu Gln Val Gly Asp Arg Val Leu Ser

    50                  55                  60

Ile Asn Gly Ile Ala Thr Glu Asp Gly Thr Met Glu Glu Ala Asn Gln

65                  70                  75                  80

Leu Leu Arg Asp Ala Ala Leu Ala His Lys Val Val Leu Glu Val Glu

                85                  90                  95

Phe Asp Val Ala Glu Ser Val

            100

<210>110

<211>103

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>110

Ile Gln Phe Asp Val Ala Glu Ser Val Ile Pro Ser Ser Gly Thr Phe

 1               5                  10                  15

His Val Lys Leu Pro Lys Lys Arg Ser Val Glu Leu Gly Ile Thr Ile

            20                  25                  30

Ser Ser Ala Ser Arg Lys Arg Gly Glu Pro Leu Ile Ile Ser Asp Ile

        35                  40                  45

Lys Lys Gly Ser Val Ala His Arg Thr Gly Thr Leu Glu Pro Gly Asp

    50                  55                  60

Lys Leu Leu Ala Ile Asp Asn Ile Arg Leu Asp Asn Cys Pro Met Glu

65                  70                  75                  80

Asp Ala Val Gln Ile Leu Arg Gln Cys Glu Asp Leu Val Lys Leu Lys

                85                  90                  95

Ile Arg Lys Asp Glu Asp Asn

            100

<210>111

<211>94

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>111

Ile Gln Thr Thr Gly Ala Val Ser Tyr Thr Val Glu Leu Lys Arg Tyr

 1               5                  10                  15

Gly Gly Pro Leu Gly Ile Thr Ile Ser Gly Thr Glu Glu Pro Phe Asp

            20                  25                  30

Pro Ile Val Ile Ser Gly Leu Thr Lys Arg Gly Leu Ala Glu Arg Thr

        35                  40                  45

Gly Ala Ile His Val Gly Asp Arg Ile Leu Ala Ile Asn Asn Val Ser

    50                  55                  60

Leu Lys Gly Arg Pro Leu Ser Glu Ala Ile His Leu Leu Gln Val Ala

65                  70                  75                  80

Gly Glu Thr Val Thr Leu Lys Ile Lys Lys Gln Leu Asp Arg

                85                  90

<210>112

<211>105

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>112

Ile Leu Glu Met Glu Glu Leu Leu Leu Pro Thr Pro Leu Glu Met His

 1               5                  10                  15

Lys Val Thr Leu His Lys Asp Pro Met Arg His Asp Phe Gly Phe Ser

            20                  25                  30

Val Ser Asp Gly Leu Leu Glu Lys Gly Val Tyr Val His Thr Val Arg

        35                  40                  45

Pro Asp Gly Pro Ala His Arg Gly Gly Leu Gln Pro Phe Asp Arg Val

    50                  55                  60

Leu Gln Val Asn His Val Arg Thr Arg Asp Phe Asp Cys Cys Leu Ala

65                  70                  75                  80

Val Pro Leu Leu Ala Glu Ala Gly Asp Val Leu Glu Leu Ile Ile Ser

                85                  90                  95

Arg Lys Pro His Thr Ala His Ser Ser

            100                 105

<210>113

<211>91

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>113

Met Ala Leu Thr Val Asp Val Ala Gly Pro Ala Pro Trp Gly Phe Arg

 1               5                  10                  15

Ile Thr Gly Gly Arg Asp Phe His Thr Pro Ile Met Val Thr Lys Val

            20                  25                  30

Ala Glu Arg Gly Lys Ala Lys Asp Ala Asp Leu Arg Pro Gly Asp Ile

        35                  40                  45

Ile Val Ala Ile Asn Gly Glu Ser Ala Glu Gly Met Leu His Ala Glu

    50                  55                  60

Ala Gln Ser Lys Ile Arg Gln Ser Pro Ser Pro Leu Arg Leu Gln Leu

65                  70                  75                  80

Asp Arg Ser Gln Ala Thr Ser Pro Gly Gln Thr

                85                  90

<210>114

<211>84

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>114

Ser Asn Tyr Ser Val Ser Leu Val Gly Pro Ala Pro Trp Gly Phe Arg

 1               5                  10                  15

Leu Gln Gly Gly Lys Asp Phe Asn Met Pro Leu Thr Ile Ser Ser Leu

            20                  25                  30

Lys Asp Gly Gly Lys Ala Ala Gln Ala Asn Val Arg Ile Gly Asp Val

        35                  40                  45

Val Leu Ser Ile Asp Gly Ile Asn Ala Gln Gly Met Thr His Leu Glu

    50                  55                  60

Ala Gln Asn Lys Ile Lys Gly Cys Thr Gly Ser Leu Asn Met Thr Leu

65                  70                  75                  80

Gln Arg Ala Ser

<210>115

<211>133

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>115

Thr Leu Val Glu His Ser Lys Leu Tyr Cys Gly His Cys Tyr Tyr Gln

 1               5                  10                  15

Thr Val Val Thr Pro Val Ile Glu Gln Ile Leu Pro Asp Ser Pro Gly

            20                  25                  30

Ser His Leu Pro His Thr Val Thr Leu Val Ser Ile Pro Ala Ser Ser

        35                  40                  45

His Gly Lys Arg Gly Leu Ser Val Ser Ile Asp Pro Pro His Gly Pro

    50                  55                  60

Pro Gly Cys Gly Thr Glu His Ser His Thr Val Arg Val Gln Gly Val

65                  70                  75                  80

Asp Pro Gly Cys Met Ser Pro Asp Val Lys Asn Ser Ile His Val Gly

                85                  90                  95

Asp Arg Ile Leu Glu Ile Asn Gly Thr Pro Ile Arg Asn Val Pro Leu

            100                 105                 110

Asp Glu Ile Asp Leu Leu Ile Gln Glu Thr Ser Arg Leu Leu Gln Leu

        115                 120                 125

Thr Leu Glu His Asp

    130

<210>116

<211>92

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>116

Pro Tyr Ser Val Thr Leu Ile Ser Met Pro Ala Thr Thr Glu Gly Arg

 1               5                  10                  15

Arg Gly Phe Ser Val Ser Val Glu Ser Ala Cys Ser Asn Tyr Ala Thr

            20                  25                  30

Thr Val Gln Val Lys Glu Val Asn Arg Met His Ile Ser Pro Asn Asn

        35                  40                  45

Arg Asn Ala Ile His Pro Gly Asp Arg Ile Leu Glu Ile Asn Gly Thr

    50                  55                  60

Pro Val Arg Thr Leu Arg Val Glu Glu Val Glu Asp Ala Ile Ser Gln

65                  70                  75                  80

Thr Ser Gln Thr Leu Gln Leu Leu Ile Glu His Asp

                85                  90

<210>117

<211>82

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>117

Ile His Ser Val Thr Leu Arg Gly Pro Ser Pro Trp Gly Phe Arg Leu

 1               5                  10                  15

Val Gly Arg Asp Phe Ser Ala Pro Leu Thr Ile Ser Arg Val His Ala

            20                  25                  30

Gly Ser Lys Ala Ser Leu Ala Ala Leu Cys Pro Gly Asp Leu Ile Gln

        35                  40                  45

Ala Ile Asn Gly Glu Ser Thr Glu Leu Met Thr His Leu Glu Ala Gln

    50                  55                  60

Asn Arg Ile Lys Gly Cys His Asp His Leu Thr Leu Ser Val Ser Arg

65                  70                  75                  80

Pro Glu

<210>118

<211>74

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>118

Val Cys Tyr Arg Thr Asp Asp Glu Glu Asp Leu Gly Ile Tyr Val Gly

 1               5                  10                  15

Glu Val Asn Pro Asn Ser Ile Ala Ala Lys Asp Gly Arg Ile Arg Glu

            20                  25                  30

Gly Asp Arg Ile Ile Gln Ile Asn Gly Val Asp Val Gln Asn Arg Glu

        35                  40                  45

Glu Ala Val Ala Ile Leu Ser Gln Glu Glu Asn Thr Asn Ile Ser Leu

    50                  55                  60

Leu Val Ala Arg Pro Glu Ser Gln Leu Ala

65                  70

<210>119

<211>103

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>119

Ile Gln Lys Lys Asn His Trp Thr Ser Arg Val His Glu Cys Thr Val

 1               5                  10                  15

Lys Arg Gly Pro Gln Gly Glu Leu Gly Val Thr Val Leu Gly Gly Ala

            20                  25                  30

Glu His Gly Glu Phe Pro Tyr Val Gly Ala Val Ala Ala Val Glu Ala

        35                  40                  45

Ala Gly Leu Pro Gly Gly Gly Glu Gly Pro Arg Leu Gly Glu Gly Glu

    50                  55                  60

Leu Leu Leu Glu Val Gln Gly Val Arg Val Ser Gly Leu Pro Arg Tyr

65                  70                  75                  80

Asp Val Leu Gly Val Ile Asp Ser Cys Lys Glu Ala Val Thr Phe Lys

                85                  90                  95

Ala Val Arg Gln Gly Gly Arg

            100

<210>120

<211>104

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>120

Pro Ser Glu Leu Lys Gly Lys Phe Ile His Thr Lys Leu Arg Lys Ser

 1               5                  10                  15

Ser Arg Gly Phe Gly Phe Thr Val Val Gly Gly Asp Glu Pro Asp Glu

            20                  25                  30

Phe Leu Gln Ile Lys Ser Leu Val Leu Asp Gly Pro Ala Ala Leu Asp

        35                  40                  45

Gly Lys Met Glu Thr Gly Asp Val Ile Val Ser Val Asn Asp Thr Cys

    50                  55                  60

Val Leu Gly His Thr His Ala Gln Val Val Lys Ile Phe Gln Ser Ile

65                  70                  75                  80

Pro Ile Gly Ala Ser Val Asp Leu Glu Leu Cys Arg Gly Tyr Pro Leu

                85                  90                  95

Pro Phe Asp Pro Asp Asp Pro Asn

            100

<210>121

<211>92

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>121

Pro Ala Thr Gln Pro Glu Leu Ile Thr Val His Ile Val Lys Gly Pro

 1               5                  10                  15

Met Gly Phe Gly Phe Thr Ile Ala Asp Ser Pro Gly Gly Gly Gly Gln

            20                  25                  30

Arg Val Lys Gln Ile Val Asp Ser Pro Arg Cys Arg Gly Leu Lys Glu

        35                  40                  45

Gly Asp Leu Ile Val Glu Val Asn Lys Lys Asn Val Gln Ala Leu Thr

    50                  55                  60

His Asn Gln Val Val Asp Met Leu Val Glu Cys Pro Lys Gly Ser Glu

65                  70                  75                  80

Val Thr Leu Leu Val Gln Arg Gly Gly Asn Leu Ser

                85                  90

<210>122

<211>102

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>122

Pro Asp Tyr Gln Glu Gln Asp Ile Phe Leu Trp Arg Lys Glu Thr Gly

 1               5                  10                  15

Phe Gly Phe Arg Ile Leu Gly Gly Asn Glu Pro Gly Glu Pro Ile Tyr

            20                  25                  30

Ile Gly His Ile Val Pro Leu Gly Ala Ala Asp Thr Asp Gly Arg Leu

        35                  40                  45

Arg Ser Gly Asp Glu Leu Ile Cys Val Asp Gly Thr Pro Val Ile Gly

    50                  55                  60

Lys Ser His Gln Leu Val Val Gln Leu Met Gln Gln Ala Ala Lys Gln

65                  70                  75                  80

Gly His Val Asn Leu Thr Val Arg Arg Lys Val Val Phe Ala Val Pro

                85                  90                  95

Lys Thr Glu Asn Ser Ser

            100

<210>123

<211>112

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>123

Gly Val Val Ser Thr Val Val Gln Pro Tyr Asp Val Glu Ile Arg Arg

 1               5                  10                  15

Gly Glu Asn Glu Gly Phe Gly Phe Val Ile Val Ser Ser Val Ser Arg

            20                  25                  30

Pro Glu Ala Gly Thr Thr Phe Ala Gly Asn Ala Cys Val Ala Met Pro

        35                  40                  45

His Lys Ile Gly Arg Ile Ile Glu Gly Ser Pro Ala Asp Arg Cys Gly

    50                  55                  60

Lys Leu Lys Val Gly Asp Arg Ile Leu Ala Val Asn Gly Cys Ser Ile

65                  70                  75                  80

Thr Asn Lys Ser His Ser Asp Ile Val Asn Leu Ile Lys Glu Ala Gly

                85                  90                  95

Asn Thr Val Thr Leu Arg Ile Ile Pro Gly Asp Glu Ser Ser Asn Ala

            100                 105                 110

<210>124

<211>91

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>124

Gln Ala Thr Gln Glu Gln Asp Phe Tyr Thr Val Glu Leu Glu Arg Gly

 1               5                  10                  15

Ala Lys Gly Phe Gly Phe Ser Leu Arg Gly Gly Arg Glu Tyr Asn Met

            20                  25                  30

Asp Leu Tyr Val Leu Arg Leu Ala Glu Asp Gly Pro Ala Glu Arg Cys

        35                  40                  45

Gly Lys Met Arg Ile Gly Asp Glu Ile Leu Glu Ile Asn Gly Glu Thr

    50                  55                  60

Thr Lys Asn Met Lys His Ser Arg Ala Ile Glu Leu Ile Lys Asn Gly

65                  70                  75                  80

Gly Arg Arg Val Arg Leu Phe Leu Lys Arg Gly

                85                  90

<210>125

<21l>100

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>125

Pro Ala Lys Met Glu Lys Glu Glu Thr Thr Arg Glu Leu Leu Leu Pro

 1               5                  10                  15

Asn Trp Gln Gly Ser Gly Ser His Gly Leu Thr Ile Ala Gln Arg Asp

            20                  25                  30

Asp Gly Val Phe Val Gln Glu Val Thr Gln Asn Ser Pro Ala Ala Arg

        35                  40                  45

Thr Gly Val Val Lys Glu Gly Asp Gln Ile Val Gly Ala Thr Ile Tyr

    50                  55                  60

Phe Asp Asn Leu Gln Ser Gly Glu Val Thr Gln Leu Leu Asn Thr Met

65                  70                  75                  80

Gly His His Thr Val Gly Leu Lys Leu His Arg Lys Gly Asp Arg Ser

                85                  90                  95

Pro Asn Ser Ser

            100

<210>126

<211>97

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>126

Ser Glu Asn Cys Lys Val Phe Ile Glu Lys Gln Lys Gly Glu Ile Leu

 1               5                  10                  15

Gly Val Val Ile Val Glu Ser Gly Trp Gly Ser Ile Leu Pro Thr Val

            20                  25                  30

Ile Ile Ala Asn Met Met His Gly Gly Pro Ala Glu Lys Ser Gly Lys

        35                  40                  45

Leu Asn Ile Gly Asp Gln Ile Met Ser Ile Asn Gly Thr Ser Leu Val

    50                  55                  60

Gly Leu Pro Leu Ser Thr Cys Gln Ser Ile Ile Lys Gly Leu Lys Asn

65                  70                  75                  80

Gln Ser Arg Val Lys Leu Asn Ile Val Arg Cys Pro Pro Val Asn Ser

                85                  90                  95

Ser

<210>127

<211>92

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>127

Leu Arg Cys Pro Pro Val Thr Thr Val Leu Ile Arg Arg Pro Asp Leu

 1               5                  10                  15

Arg Tyr Gln Leu Gly Phe Ser Val Gln Asn Gly Ile Ile Cys Ser Leu

            20                  25                  30

Met Arg Gly Gly Ile Ala Glu Arg Gly Gly Val Arg Val Gly His Arg

        35                  40                  45

Ile Ile Glu Ile Asn Gly Gln Ser Val Val Ala Thr Pro His Glu Lys

    50                  55                  60

Ile Val His Ile Leu Ser Asn Ala Val Gly Glu Ile His Met Lys Thr

65                  70                  75                  80

Met Pro Ala Ala Met Tyr Arg Leu Leu Asn Ser Ser

                85                  90

<210>128

<211>103

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>128

Leu Ser Asn Ser Asp Asn Cys Arg Glu Val His Leu Glu Lys Arg Arg

 1               5                  10                  15

Gly Glu Gly Leu Gly Val Ala Leu Val Glu Ser Gly Trp Gly Ser Leu

            20                  25                  30

Leu Pro Thr Ala Val Ile Ala Asn Leu Leu His Gly Gly Pro Ala Glu

        35                  40                  45

Arg Ser Gly Ala Leu Ser Ile Gly Asp Arg Leu Thr Ala Ile Asn Gly

    50                  55                  60

Thr Ser Leu Val Gly Leu Pro Leu Ala Ala Cys Gln Ala Ala Val Arg

65                  70                  75                  80

Glu Thr Lys Ser Gln Thr Ser Val Thr Leu Ser Ile Val His Cys Pro

                85                  90                  95

Pro Val Thr Thr Ala Ile Met

            100

<210>129

<211>92

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>129

Leu Val His Cys Pro Pro Val Thr Thr Ala Ile Ile His Arg Pro His

 1               5                  10                  15

Ala Arg Glu Gln Leu Gly Phe Cys Val Glu Asp Gly Ile Ile Cys Ser

            20                  25                  30

Leu Leu Arg Gly Gly Ile Ala Glu Arg Gly Gly Ile Arg Val Gly His

        35                  40                  45

Arg Ile Ile Glu Ile Asn Gly Gln Ser Val Val Ala Thr Pro His Ala

    50                  55                  60

Arg Ile Ile Glu Leu Leu Thr Glu Ala Tyr Gly Glu Val His Ile Lys

65                  70                  75                  80

Thr Met Pro Ala Ala Thr Tyr Arg Leu Leu Thr Gly

                85                  90

<210>130

<211>86

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>130

Arg Lys Val Arg Leu Ile Gln Phe Glu Lys Val Thr Glu Glu Pro Met

 1               5                  10                  15

Gly Ile Thr Leu Lys Leu Asn Glu Lys Gln Ser Cys Thr Val Ala Arg

            20                  25                  30

Ile Leu His Gly Gly Met Ile His Arg Gln Gly Ser Leu His Val Gly

        35                  40                  45

Asp Glu Ile Leu Glu Ile Asn Gly Thr Asn Val Thr Asn His Ser Val

    50                  55                  60

Asp Gln Leu Gln Lys Ala Met Lys Glu Thr Lys Gly Met Ile Ser Leu

65                  70                  75                  80

Lys Val Ile Pro Asn Gln

                85

<210>131

<211>89

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>131

Pro Val Pro Pro Asp Ala Val Arg Met Val Gly Ile Arg Lys Thr Ala

 1               5                  10                  15

Gly Glu His Leu Gly Val Thr Phe Arg Val Glu Gly Gly Glu Leu Val

            20                  25                  30

Ile Ala Arg Ile Leu His Gly Gly Met Val Ala Gln Gln Gly Leu Leu

        35                  40                  45

His Val Gly Asp Ile Ile Lys Glu Val Asn Gly Gln Pro Val Gly Ser

    50                  55                  60

Asp Pro Arg Ala Leu Gln Glu Leu Leu Arg Asn Ala Ser Gly Ser Val

65                  70                  75                  80

Ile Leu Lys Ile Leu Pro Asn Tyr Gln

                 85

<210>132

<211>99

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>132

Gln Gly Arg His Val Glu Val Phe Glu Leu Leu Lys Pro Pro Ser Gly

 1               5                  10                  15

Gly Leu Gly Phe Ser Val Val Gly Leu Arg Ser Glu Asn Arg Gly Glu

            20                  25                  30

Leu Gly Ile Phe Val Gln Glu Ile Gln Glu Gly Ser Val Ala His Arg

        35                  40                  45

Asp Gly Arg Leu Lys Glu Thr Asp Gln Ile Leu Ala Ile Asn Gly Gln

    50                  55                  60

Ala Leu Asp Gln Thr Ile Thr His Gln Gln Ala Ile Ser Ile Leu Gln

65                  70                  75                  80

Lys Ala Lys Asp Thr Val Gln Leu Val Ile Ala Arg Gly Ser Leu Pro

                85                  90                  95

Gln Leu Val

<210>133

<211>97

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>133

Pro Val His Trp Gln His Met Glu Thr Ile Glu Leu Val Asn Asp Gly

 1               5                  10                  15

Ser Gly Leu Gly Phe Gly Ile Ile Gly Gly Lys Ala Thr Gly Val Ile

            20                  25                  30

Val Lys Thr Ile Leu Pro Gly Gly Val Ala Asp Gln His Gly Arg Leu

        35                  40                  45

Cys Ser Gly Asp His Ile Leu Lys Ile Gly Asp Thr Asp Leu Ala Gly

    50                  55                  60

Met Ser Ser Glu Gln Val Ala Gln Val Leu Arg Gln Cys Gly Asn Arg

65                  70                  75                  80

Val Lys Leu Met Ile Ala Ara Gly Ala Ile Glu Glu Ara Thr Ala Pro

                85                  90                  95

Thr

<210>134

<211>98

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>134

Gln Glu Ser Glu Thr Phe Asp Val Glu Leu Thr Lys Asn Val Gln Gly

 1               5                  10                  15

Leu Gly Ile Thr Ile Ala Gly Tyr Ile Gly Asp Lys Lys Leu Glu Pro

            20                  25                  30

Ser Gly Ile Phe Val Lys Ser Ile Thr Lys Ser Ser Ala Val Glu His

        35                  40                  45

Asp Gly Arg Ile Gln Ile Gly Asp Gln Ile Ile Ala Val Asp Gly Thr

    50                  55                  60

Asn Leu Gln Gly Phe Thr Asn Gln Gln Ala Val Glu Val Leu Arg His

65                  70                  75                  80

Thr Gly Gln Thr Val Leu Leu Thr Leu Met Arg Arg Gly Met Lys Gln

                85                  90                  95

Glu Ala

<210>135

<211>92

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>135

Leu Asn Tyr Glu Ile Val Val Ala His Val Ser Lys Phe Ser Glu Asn

 1               5                  10                  15

Ser Gly Leu Gly Ile Ser Leu Glu Ala Thr Val Gly His His Phe Ile

            20                  25                  30

Arg Ser Val Leu Pro Glu Gly Pro Val Gly His Ser Gly Lys Leu Phe

        35                  40                  45

Ser Gly Asp Glu Leu Leu Glu Val Asn Gly Ile Thr Leu Leu Gly Glu

    50                  55                  60

Asn His Gln Asp Val Val Asn Ile Leu Lys Glu Leu Pro Ile Glu Val

65                  70                  75                  80

Thr Met Val Cys Cys Arg Arg Thr Val Pro Pro Thr

                85                  90

<210>136

<211>100

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>136

Trp Glu Ala Gly Ile Gln His Ile Glu Leu Glu Lys Gly Ser Lys Gly

 1               5                  10                  15

Leu Gly Phe Ser Ile Leu Asp Tyr Gln Asp Pro Ile Asp Pro Ala Ser

            20                  25                  30

Thr Val Ile Ile Ile Arg Ser Leu Val Pro Gly Gly Ile Ala Glu Lys

        35                  40                  45

Asp Gly Arg Leu Leu Pro Gly Asp Arg Leu Met Phe Val Asn Asp Val

    50                  55                  60

Asn Leu Glu Asn Ser Ser Leu Glu Glu Ala Val Glu Ala Leu Lys Gly

65                  70                  75                  80

Ala Pro Ser Gly Thr Val Arg Ile Gly Val Ala Lys Pro Leu Pro Leu

                85                  90                  95

Ser Pro Glu Glu

            100

<210>137

<211>99

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>137

Arg Asn Val Ser Lys Glu Ser Phe Glu Arg Thr Ile Asn Ile Ala Lys

 1               5                  10                  15

Gly Asn Ser Ser Leu Gly Met Thr Val Ser Ala Asn Lys Asp Gly Leu

            20                  25                  30

Gly Met Ile Val Arg Ser Ile Ile His Gly Gly Ala Ile Ser Arg Asp

        35                  40                  45

Gly Arg Ile Ala Ile Gly Asp Cys Ile Leu Ser Ile Asn Glu Glu Ser

    50                  55                  60

Thr Ile Ser Val Thr Asn Ala Gln Ala Arg Ala Met Leu Arg Arg His

65                  70                  75                  80

Ser Leu Ile Gly Pro Asp Ile Lys Ile Thr Tyr Val Pro Ala Glu His

                85                  90                  95

Leu Glu Glu

<210>138

<211>112

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>138

Leu Asn Trp Asn Gln Pro Arg Arg Val Glu Leu Trp Arg Glu Pro Ser

 1               5                  10                  15

Lys Ser Leu Gly Ile Ser Ile Val Gly Gly Arg Gly Met Gly Ser Arg

            20                  25                  30

Leu Ser Asn Gly Glu Val Met Arg Gly Ile Phe Ile Lys His Val Leu

        35                  40                  45

Glu Asp Ser Pro Ala Gly Lys Asn Gly Thr Leu Lys Pro Gly Asp Arg

    50                  55                  60

Ile Val Glu Val Asp Gly Met Asp Leu Arg Asp Ala Ser His Glu Gln

65                  70                  75                  80

Ala Val Glu Ala Ile Arg Lys Ala Gly Asn Pro Val Val Phe Met Val

                85                  90                  95

Gln Ser Ile Ile Asn Arg Pro Arg Lys Ser Pro Leu Pro Ser Leu Leu

            100                 105                 110

<210>139

<211>95

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>139

Leu Thr Gly Glu Leu His Met Ile Glu Leu Glu Lys Gly His Ser Gly

 1               5                  10                  15

Leu Gly Leu Ser Leu Ala Gly Asn Lys Asp Arg Ser Arg Met Ser Val

            20                  25                  30

Phe Ile Val Gly Ile Asp Pro Asn Gly Ala Ala Gly Lys Asp Gly Arg

        35                  40                  45

Leu Gln Ile Ala Asp Glu Leu Leu Glu Ile Asn Gly Gln Ile Leu Tyr

    50                  55                  60

Gly Arg Ser His Gln Asn Ala Ser Ser Ile Ile Lys Cys Ala Pro Ser

65                  70                  75                  80

Lys Val Lys Ile Ile Phe Ile Arg Asn Lys Asp Ala Val Asn Gln

                85                  90                  95

<210>140

<211>94

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>140

Leu Ser Ser Phe Lys Asn Val Gln His Leu Glu Leu Pro Lys Asp Gln

 1               5                  10                  15

Gly Gly Leu Gly Ile Ala Ile Ser Glu Glu Asp Thr Leu Ser Gly Val

            20                  25                  30

Ile Ile Lys Ser Leu Thr Glu His Gly Val Ala Ala Thr Asp Gly Arg

        35                  40                  45

Leu Lys Val Gly Asp Gln Ile Leu Ala Val Asp Asp Glu Ile Val Val

    50                  55                  60

Gly Tyr Pro Ile Glu Lys Phe Ile Ser Leu Leu Lys Thr Ala Lys Met

65                  70                  75                  80

Thr Val Lys Leu Thr Ile His Ala Glu Asn Pro Asp Ser Gln

                85                  90

<210>141

<211>95

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>141

Leu Pro Gly Cys Glu Thr Thr Ile Glu Ile Ser Lys Gly Arg Thr Gly

 1               5                  10                  15

Leu Gly Leu Ser Ile Val Gly Gly Ser Asp Thr Leu Leu Gly Ala Ile

            20                  25                  30

Ile Ile His Glu Val Tyr Glu Glu Gly Ala Ala Cys Lys Asp Gly Arg

        35                  40                  45

Leu Trp Ala Gly Asp Gln Ile Leu Glu Val Asn Gly Ile Asp Leu Arg

    50                  55                  60

Lys Ala Thr His Asp Glu Ala Ile Asn Val Leu Arg Gln Thr Pro Gln

65                  70                  75                  80

Arg Val Arg Leu Thr Leu Tyr Arg Asp Glu Ala Pro Tyr Lys Glu

                85                  90                  95

<210>142

<211>98

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>142

Lys Glu Glu Glu Val Cys Asp Thr Leu Thr Ile Glu Leu Gln Lys Lys

 1               5                  10                  15

Pro Gly Lys Gly Leu Gly Leu Ser Ile Val Gly Lys Arg Asn Asp Thr

            20                  25                  30

Gly Val Phe Val Ser Asp Ile Val Lys Gly Gly Ile Ala Asp Ala Asp

        35                  40                  45

Gly Arg Leu Met Gln Gly Asp Gln Ile Leu Met Val Asn Gly Glu Asp

    50                  55                  60

Val Arg Asn Ala Thr Gln Glu Ala Val Ala Ala Leu Leu Lys Cys Ser

65                  70                  75                  80

Leu Gly Thr Val Thr Leu Glu Val Gly Arg Ile Lys Ala Gly Pro Phe

                85                  90                  95

His Ser

<210>143

<211>96

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>143

Leu Gln Gly Leu Arg Thr Val Glu Met Lys Lys Gly Pro Thr Asp Ser

 1               5                  10                  15

Leu Gly Ile Ser Ile Ala Gly Gly Val Gly Ser Pro Leu Gly Asp Val

            20                  25                  30

Pro Ile Phe Ile Ala Met Met His Pro Thr Gly Val Ala Ala Gln Thr

        35                  40                  45

Gln Lys Leu Arg Val Gly Asp Arg Ile Val Thr Ile Cys Gly Thr Ser

    50                  55                  60

Thr Glu Gly Met Thr His Thr Gln Ala Val Asn Leu Leu Lys Asn Ala

65                  70                  75                  80

Ser Gly Ser Ile Glu Met Gln Val Val Ala Gly Gly Asp Val Ser Val

                85                  90                  95

<210>144

<211>91

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>144

Leu Gly Pro Pro Gln Cys Lys Ser Ile Thr Leu Glu Arg Gly Pro Asp

 1               5                  10                  15

Gly Leu Gly Phe Ser Ile Val Gly Gly Tyr Gly Ser Pro His Gly Asp

            20                  25                  30

Leu Pro Ile Tyr Val Lys Thr Val Phe Ala Lys Gly Ala Ala Ser Glu

        35                  40                  45

Asp Gly Arg Leu Lys Arg ely Asp Gln Ile Ile Ala Val Asn Gly Gln

    50                  55                  60

Ser Leu Glu Gly Val Thr His Glu Glu Ala Val Ala Ile Leu Lys Arg

65                  70                  75                  80

Thr Lys Gly Thr Val Thr Leu Met Val Leu Ser

                85                  90

<210>145

<211>93

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>145

Ile Gln Tyr Glu Glu Ile Val Leu Glu Arg Gly Asn Ser Gly Leu Gly

 1               5                  10                  15

Phe Ser Ile Ala Gly Gly Ile Asp Asn Pro His Val Pro Asp Asp Pro

            20                  25                  30

Gly Ile Phe Ile Thr Lys Ile Ile Pro Gly Gly Ala Ala Ala Met Asp

        35                  40                  45

Gly Arg Leu Gly Val Asn Asp Cys Val Leu Arg Val Asn Glu Val Glu

    50                  55                  60

Val Ser Glu Val Val His Ser Arg Ala Val Glu Ala Leu Lys Glu Ala

65                  70                  75                  80

Gly Pro Val Val Arg Leu Val Val Arg Arg Arg Gln Asn

                85                  90

<210>146

<211>90

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>146

Ile Thr Leu Leu Lys Gly Pro Lys Gly Leu Gly Phe Ser Ile Ala Gly

 1               5                  10                  15

Gly Ile Gly Asn Gln His Ile Pro Gly Asp Asn Ser Ile Tyr Ile Thr

            20                  25                  30

Lys Ile Ile Glu Gly Gly Ala Ala Gln Lys Asp Gly Arg Leu Gln Ile

        35                  40                  45

Gly Asp Arg Leu Leu Ala Val Asn Asn Thr Asn Leu Gln Asp Val Arg

    50                  55                  60

His Glu Glu Ala Val Ala Ser Leu Lys Asn Thr Ser Asp Met Val Tyr

65                  70                  75                  80

Leu Lys Val Ala Lys Pro Gly Ser Leu Glu

                85                  90

<210>147

<211>119

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>147

Ile Leu Leu His Lys Gly Ser Thr Gly Leu Gly Phe Asn Ile Val Gly

 1               5                  10                  15

Gly Glu Asp Gly Glu Gly Ile Phe Val Ser Phe Ile Leu Ala Gly Gly

            20                  25                  30

Pro Ala Asp Leu Ser Gly Glu Leu Arg Arg Gly Asp Arg Ile Leu Ser

        35                  40                  45

Val Asn Gly Val Asn Leu Arg Asn Ala Thr His Glu Gln Ala Ala Ala

    50                  55                  60

Ala Leu Lys Arg Ala Gly Gln Ser Val Thr Ile Val Ala Gln Tyr Arg

65                  70                  75                  80

Pro Glu Glu Tyr Ser Arg Phe Glu Ser Lys Ile His Asp Leu Arg Glu

                85                  90                  95

Gln Met Met Asn Ser Ser Met Ser Ser Gly Ser Gly Ser Leu Arg Thr

            100                 105                 110

Ser Glu Lys Arg Ser Leu Glu

        115

<210>148

<211>111

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>148

Cys Val Glu Arg Leu Glu Leu Phe Pro Val Glu Leu Glu Lys Asp Ser

 1               5                  10                  15

Glu Gly Leu Gly Ile Ser Ile Ile Gly Met Gly Ala Gly Ala Asp Met

            20                  25                  30

Gly Leu Glu Lys Leu Gly Ile Phe Val Lys Thr Val Thr Glu Gly Gly

        35                  40                  45

Ala Ala His Arg Asp Gly Arg Ile Gln Val Asn Asp Leu Leu Val Glu

    50                  55                  60

Val Asp Gly Thr Ser Leu Val Gly Val Thr Gln Ser Phe Ala Ala Ser

65                  70                  75                  80

Val Leu Arg Asn Thr Lys Gly Arg Val Arg Phe Met Ile Gly Arg Glu

                85                  90                  95

Arg Pro Gly Glu Gln Ser Glu Val Ala Gln Arg Ile His Arg Asp

            100                 105                 110

<210>149

<211>90

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>149

Ile Gln Pro Asn Val Ile Ser Val Arg Leu Phe Lys Arg Lys Val Gly

 1               5                  10                  15

Gly Leu Gly Phe Leu Val Lys Glu Arg Val Ser Lys Pro Pro Val Ile

            20                  25                  30

Ile Ser Asp Leu Ile Arg Gly Gly Ala Ala Glu Gln Ser Gly Leu Ile

        35                  40                  45

Gln Ala Gly Asp Ile Ile Leu Ala Val Asn Gly Arg Pro Leu Val Asp

    50                  55                  60

Leu Ser Tyr Asp Ser Ala Leu Glu Val Leu Arg Gly Ile Ala Ser Glu

65                  70                  75                  80

Thr His Val Val Leu Ile Leu Arg Gly Pro

                85                  90

<210>150

<211>107

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>150

Gln Ala Asn Ser Asp Glu Ser Asp Ile Ile His Ser Val Arg Val Glu

 1               5                  10                  15

Lys Ser Pro Ala Gly Arg Leu Gly Phe Ser Val Arg Gly Gly Ser Glu

            20                  25                  30

His Gly Leu Gly Ile Phe Val Ser Lys Val Glu Glu Gly Ser Ser Ala

        35                  40                  45

Glu Arg Ala Gly Leu Cys Val Gly Asp Lys Ile Thr Glu Val Asn Gly

    50                  55                  60

Leu Ser Leu Glu Ser Thr Thr Met Gly Ser Ala Val Lys Val Leu Thr

65                  70                  75                  80

Ser Ser Ser Arg Leu His Met Met Val Arg Arg Met Gly Arg Val Pro

                85                  90                  95

Gly Ile Lys Phe Ser Lys Glu Lys Asn Ser Ser

            100                 105

<210>151

<211>106

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>151

Pro Ser Asp Thr Ser Ser Glu Asp Gly Val Arg Arg Ile Val His Leu

 1               5                  10                  15

Tyr Thr Thr Ser Asp Asp Phe Cys Leu Gly Phe Asn Ile Arg Gly Gly

            20                  25                  30

Lys Glu Phe Gly Leu Gly Ile Tyr Val Ser Lys Val Asp His Gly Gly

        35                  40                  45

Leu Ala Glu Glu Asn Gly Ile Lys Val Gly Asp Gln Val Leu Ala Ala

    50                  55                  60

Asn Gly Val Arg Phe Asp Asp Ile Ser His Ser Gln Ala Val Glu Val

65                  70                  75                  80

Leu Lys Gly Gln Thr His Ile Met Leu Thr Ile Lys Glu Thr Gly Arg

                85                  90                  95

Tyr Pro Ala Tyr Lys Glu Met Asn Ser Ser

            100                 105

<210>152

<211>115

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>152

Lys Ile Lys Lys Phe Leu Thr Glu Ser His Asp Arg Gln Ala Lys Gly

 1               5                  10                  15

Lys Ala Ile Thr Lys Lys Lys Tyr Ile Gly Ile Arg Met Met Ser Leu

            20                  25                  30

Thr Ser Ser Lys Ala Lys Glu Leu Lys Asp Arg His Arg Asp Phe Pro

        35                  40                  45

Asp Val Ile Ser Gly Ala Tyr Ile Ile Glu Val Ile Pro Asp Thr Pro

    50                  55                  60

Ala Glu Ala Gly Gly Leu Lys Glu Asn Asp Val Ile Ile Ser Ile Asn

65                  70                  75                  80

Gly Gln Ser Val Val Ser Ala Asn Asp Val Ser Asp Val Ile Lys Arg

                85                  90                  95

Glu Ser Thr Leu Asn Met Val Val Arg Arg Gly Asn Glu Asp Ile Met

            100                 105                 110

Ile Thr Val

        115

<210>153

<211>100

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>153

Pro Asp Gly Glu Ile Thr Ser Ile Lys Ile Asn Arg Val Asp Pro Ser

 1               5                  10                  15

Glu Ser Leu Ser Ile Arg Leu Val Gly Gly Ser Glu Thr Pro Leu Val

            20                  25                  30

His Ile Ile Ile Gln His Ile Tyr Arg Asp Gly Val Ile Ala Arg Asp

        35                  40                  45

Gly Arg Leu Leu Pro Gly Asp Ile Ile Leu Lys Val Asn Gly Met Asp

    50                  55                  60

Ile Ser Asn Val Pro His Asn Tyr Ala Val Arg Leu Leu Arg Gln Pro

65                  70                  75                  80

Cys Gln Val Leu Trp Leu Thr Val Met Arg Glu Gln Lys Phe Arg Ser

                85                  90                  95

Arg Asn Ser Ser

            100

<210>154

<211>101

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>154

His Arg Pro Arg Asp Asp Ser Phe His Val Ile Leu Asn Lys Ser Ser

 1               5                  10                  15

Pro Glu Glu Gln Leu Gly Ile Lys Leu Val Arg Lys Val Asp Glu Pro

            20                  25                  30

Gly Val Phe Ile Phe Asn Val Leu Asp Gly Gly Val Ala Tyr Arg His

        35                  40                  45

Gly Gln Leu Glu Glu Asn Asp Arg Val Leu Ala Ile Asn Gly His Asp

    50                  55                  60

Leu Arg Tyr Gly Ser Pro Glu Ser Ala Ala His Leu Ile Gln Ala Ser

65                  70                  75                  80

Glu Arg Arg Val His Leu Val Val Ser Arg Gln Val Arg Gln Arg Ser

                85                  90                  95

Pro Glu Asn Ser Ser

            100

<210>155

<211>104

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>155

Pro Thr Ile Thr Cys His Glu Lys Val Val Asn Ile Gln Lys Asp Pro

 1               5                  10                  15

Gly Glu Ser Leu Gly Met Thr Val Ala Gly Gly Ala Ser His Arg Glu

            20                  25                  30

Trp Asp Leu Pro Ile Tyr Val Ile Ser Val Glu Pro Gly Gly Val Ile

        35                  40                  45

Ser Arg Asp Gly Arg Ile Lys Thr Gly Asp Ile Leu Leu Asn Val Asp

    50                  55                  60

Gly Val Glu Leu Thr Glu Val Ser Arg Ser Glu Ala Val Ala Leu Leu

65                  70                  75                  80

Lys Arg Thr Ser Ser Ser Ile Val Leu Lys Ala Leu Glu Val Lys Glu

                85                  90                  95

Tyr Glu Pro Gln Glu Phe Ile Val

            100

<210>156

<211>99

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>156

Pro Arg Cys Leu Tyr Asn Cys Lys Asp Ile Val Leu Arg Arg Asn Thr

 1               5                  10                  15

Ala Gly Ser Leu Gly Phe Cys Ile Val Gly Gly Tyr Glu Glu Tyr Asn

            20                  25                  30

Gly Asn Lys Pro Phe Phe Ile Lys Ser Ile Val Glu Gly Thr Pro Ala

        35                  40                  45

Tyr Asn Asp Gly Arg Ile Arg Cys Gly Asp Ile Leu Leu Ala Val Asn

    50                  55                  60

Gly Arg Ser Thr Ser Gly Met Ile His Ala Cys Leu Ala Arg Leu Leu

65                  70                  75                  80

Lys Glu Leu Lys Gly Arg Ile Thr Leu Thr Ile Val Ser Trp Pro Gly

                85                  90                  95

Thr Phe Leu

<210>157

<211>101

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>157

Leu Leu Thr Glu Glu Glu Ile Asn Leu Thr Arg Gly Pro Ser Gly Leu

 1               5                  10                  15

Gly Phe Asn Ile Val Gly Gly Thr Asp Gln Gln Tyr Val Ser Asn Asp

            20                  25                  30

Ser Gly Ile Tyr Val Ser Arg Ile Lys Glu Asn Gly Ala Ala Ala Leu

        35                  40                  45

Asp Gly Arg Leu Gln Glu Gly Asp Lys Ile Leu Ser Val Asn Gly Gln

    50                  55                  60

Asp Leu Lys Asn Leu Leu His Gln Asp Ala Val Asp Leu Phe Arg Asn

65                  70                  75                  80

Ala Gly Tyr Ala Val Ser Leu Arg Val Gln His Arg Leu Gln Val Gln

                85                  90                  95

Asn Gly Ile His Ser

            100

<210>158

<211>94

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>158

Pro Val Asp Ala Ile Arg Ile Leu Gly Ile His Lys Arg Ala Gly Glu

 1               5                  10                  15

Pro Leu Gly Val Thr Phe Arg Val Glu Asn Asn Asp Leu Val Ile Ala

            20                  25                  30

Arg Ile Leu His Gly Gly Met Ile Asp Arg Gln Gly Leu Leu His Val

        35                  40                  45

Gly Asp Ile Ile Lys Glu Val Asn Gly His Glu Val Gly Asn Asn Pro

    50                  55                  60

Lys Glu Leu Gln Glu Leu Leu Lys Asn Ile Ser Gly Ser Val Thr Leu

65                  70                  75                  80

Lys Ile Leu Pro Ser Tyr Arg Asp Thr Ile Thr Pro Gln Gln

                85                  90

<210>159

<211>93

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>159

Asp Asp Met Val Lys Leu Val Glu Val Pro Asn Asp Gly Gly Pro Leu

 1               5                  10                  15

Gly Ile His Val Val Pro Phe Ser Ala Arg Gly Gly Arg Thr Leu Gly

            20                  25                  30

Leu Leu Val Lys Arg Leu Glu Lys Gly Gly Lys Ala Glu His Glu Asn

        35                  40                  45

Leu Phe Arg Glu Asn Asp Cys Ile Val Arg Ile Asn Asp Gly Asp Leu

    50                  55                  60

Arg Asn Arg Arg Phe Glu Gln Ala Gln His Met Phe Arg Gln Ala Met

65                  70                  75                  80

Arg Thr Pro Ile Ile Trp Phe His Val Val Pro Ala Ala

                85                  90

<210>160

<211>94

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>160

Gly Lys Arg Leu Asn Ile Gln Leu Lys Lys Gly Thr Glu Gly Leu Gly

 1               5                  10                  15

Phe Ser Ile Thr Ser Arg Asp Val Thr Ile Gly Gly Ser Ala Pro Ile

            20                  25                  30

Tyr Val Lys Asn Ile Leu Pro Arg Gly Ala Ala Ile Gln Asp Gly Arg

        35                  40                  45

Leu Lys Ala Gly Asp Arg Leu Ile Glu Val Asn Gly Val Asp Leu Val

    50                  55                  60

Gly Lys Ser Gln Glu Glu Val Val Ser Leu Leu Arg Ser Thr Lys Met

65                  70                  75                  80

Glu Gly Thr Val Ser Leu Leu Val Phe Arg Gln Glu Asp Ala

                    85                  90

<210>161

<211>103

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>161

Thr Pro Asp Gly Thr Arg Glu Phe Leu Thr Phe Glu Val Pro Leu Asn

 1               5                  10                  15

Asp Ser Gly Ser Ala Gly Leu Gly Val Ser Val Lys Gly Asn Arg Ser

            20                  25                  30

Lys Glu Asn His Ala Asp Leu Gly Ile Phe Val Lys Ser Ile Ile Asn

        35                  40                  45

Gly Gly Ala Ala Ser Lys Asp Gly Arg Leu Arg Val Asn Asp Gln Leu

    50                  55                  60

Ile Ala Val Asn Gly Glu Ser Leu Leu Gly Lys Thr Asn Gln Asp Ala

65                  70                  75                  80

Met Glu Thr Leu Arg Arg Ser Met Ser Thr Glu Gly Asn Lys Arg Gly

                85                  90                  95

Met Ile Gln Leu Ile Val Ala

            100

<210>162

<211>102

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>162

Leu Pro Glu Thr His Arg Arg Val Arg Leu His Lys His Gly Ser Asp

 1               5                  10                  15

Arg Pro Leu Gly Phe Tyr Ile Arg Asp Gly Met Ser Val Arg Val Ala

            20                  25                  30

Pro Gln Gly Leu Glu Arg Val Pro Gly Ile Phe Ile Ser Arg Leu Val

        35                  40                  45

Arg Gly Gly Leu Ala Glu Ser Thr Gly Leu Leu Ala Val Ser Asp Glu

    50                  55                  60

Ile Leu Glu Val Asn Gly Ile Glu Val Ala Gly Lys Thr Leu Asp Gln

65                  70                  75                  80

Val Thr Asp Met Met Val Ala Asn Ser His Asn Leu Ile Val Thr Val

                85                  90                  95

Lys Pro Ala Asn Gln Arg

            100

<210>163

<211>111

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>163

Ile Asp Val Asp Leu Val Pro Glu Thr His Arg Arg Val Arg Leu His

 1               5                  10                  15

Arg His Gly Cys Glu Lys Pro Leu Gly Phe Tyr Ile Arg Asp Gly Ala

            20                  25                  30

Ser Val Arg Val Thr Pro His Gly Leu Glu Lys Val Pro Gly Ile Phe

        35                  40                  45

Ile Ser Arg Met Val Pro Gly Gly Leu Ala Glu Ser Thr Gly Leu Leu

    50                  55                  60

Ala Val Asn Asp Glu Val Leu Glu Val Asn Gly Ile Glu Val Ala Gly

65                  70                  75                  80

Lys Thr Leu Asp Gln Val Thr Asp Met Met Ile Ala Asn Ser His Asn

                85                  90                  95

Leu Ile Val Thr Val Lys Pro Ala Asn Gln Arg Asn Asn Val Val

            100                 105                 110

<210>164

<211>100

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>164

Arg Ser Arg Lys Leu Lys Glu Val Arg Leu Asp Arg Leu His Pro Glu

 1               5                  10                  15

Gly Leu Gly Leu Ser Val Arg Gly Gly Leu Glu Phe Gly Cys Gly Leu

            20                  25                  30

Phe Ile Ser His Leu Ile Lys Gly Gly Gln Ala Asp Ser Val Gly Leu

        35                  40                  45

Gln Val Gly Asp Glu Ile Val Arg Ile Asn Gly Tyr Ser Ile Ser Ser

    50                  55                  60

Cys Thr His Glu Glu Val Ile Asn Leu Ile Arg Thr Lys Lys Thr Val

65                  70                  75                  80

Ser Ile Lys Val Arg His Ile Gly Leu Ile Pro Val Lys Ser Ser Pro

                85                  90                  95

Asp Glu Phe His

            100

<210>165

<211>102

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>165

Ile Pro Gly Asn Arg Glu Asn Lys Glu Lys Lys Val Phe Ile Ser Leu

 1               5                  10                  15

Val Gly Ser Arg Gly Leu Gly Cys Ser Ile Ser Ser Gly Pro Ile Gln

            20                  25                  30

Lys Pro Gly Ile Phe Ile Ser His Val Lys Pro Gly Ser Leu Ser Ala

        35                  40                  45

Glu Val Gly Leu Glu Ile Gly Asp Gln Ile Val Glu Val Asn Gly Val

    50                  55                  60

Asp Phe Ser Asn Leu Asp His Lys Glu Ala Val Asn Val Leu Lys Ser

65                  70                  75                  80

Ser Arg Ser Leu Thr Ile Ser Ile Val Ala Ala Ala Gly Arg Glu Leu

                85                  90                  95

Phe Met Thr Asp Glu Phe

            100

<210>166

<211>103

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>166

Pro Glu Gln Ile Met Gly Lys Asp Val Arg Leu Leu Arg Ile Lys Lys

 1               5                  10                  15

Glu Gly Ser Leu Asp Leu Ala Leu Glu Gly Gly Val Asp Ser Pro Ile

            20                  25                  30

Gly Lys Val Val Val Ser Ala Val Tyr Glu Arg Gly Ala Ala Glu Arg

        35                  40                  45

His Gly Gly Ile Val Lys Gly Asp Glu Ile Met Ala Ile Asn Gly Lys

    50                  55                  60

Ile Val Thr Asp Tyr Thr Leu Ala Glu Ala Asp Ala Ala Leu Gln Lys

65                  70                  75                  80

Ala Trp Asn Gln Gly Gly Asp Trp Ile Asp Leu Val Val Ala Val Cys

                85                  90                  95

Pro Pro Lys Glu Tyr Asp Asp

            100

<210>167

<211>103

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>167

Leu Thr Ser Thr Phe Asn Pro Arg Glu Cys Lys Leu Ser Lys Gln Glu

 1               5                  10                  15

Gly Gln Asn Tyr Gly Phe Phe Leu Arg Ile Glu Lys Asp Thr Glu Gly

            20                  25                  30

His Leu Val Arg Val Val Glu Lys Cys Ser Pro Ala Glu Lys Ala Gly

        35                  40                  45

Leu Gln Asp Gly Asp Arg Val Leu Arg Ile Asn Gly Val Phe Val Asp

    50                  55                  60

Lys Glu Glu His Met Gln Val Val Asp Leu Val Arg Lys Ser Gly Asn

65                  70                  75                  80

Ser Val Thr Leu Leu Val Leu Asp Gly Asp Ser Tyr Glu Lys Ala Gly

                85                  90                  95

Ser Pro Gly Ile His Arg Asp

            100

<210>168

<211>92

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>168

Arg Leu Cys Tyr Leu Val Lys Glu Gly Gly Ser Tyr Gly Phe Ser Leu

 1               5                  10                  15

Lys Thr Val Gln Gly Lys Lys Gly Val Tyr Met Thr Asp Ile Thr Pro

            20                  25                  30

Gln Gly Val Ala Met Arg Ala Gly Val Leu Ala Asp Asp His Leu Ile

        35                  40                  45

Glu Val Asn Gly Glu Asn Val Glu Asp Ala Ser His Glu Glu Val Val

    50                  55                  60

Glu Lys Val Lys Lys Ser Gly Ser Arg Val Met Phe Leu Leu Val Asp

65                  70                  75                  80

Lys Glu Thr Asp Lys Arg Glu Phe Ile Val Thr Asp

                85                  90

<210>169

<211>112

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>169

Gln Phe Lys Arg Glu Thr Ala Ser Leu Lys Leu Leu Pro His Gln Pro

 1               5                  10                  15

Arg Ile Val Glu Met Lys Lys Gly Ser Asn Gly Tyr Gly Phe Tyr Leu

            20                  25                  30

Arg Ala Gly Ser Glu Gln Lys Gly Gln Ile Ile Lys Asp Ile Asp Ser

        35                  40                  45

Gly Ser Pro Ala Glu Glu Ala Gly Leu Lys Asn Asn Asp Leu Val Val

    50                  55                  60

Ala Val Asn Gly Glu Ser Val Glu Thr Leu Asp His Asp Ser Val Val

65                  70                  75                  80

Glu Met Ile Arg Lys Gly Gly Asp Gln Thr Ser Leu Leu Val Val Asp

                85                  90                  95

Lys Glu Thr Asp Asn Met Tyr Arg Leu Ala Glu Phe Ile Val Thr Asp

            100                 105                 110

<210>170

<211>95

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>170

Pro Asp Thr Thr Glu Glu Val Asp His Lys Pro Lys Leu Cys Arg Leu

 1               5                  10                  15

Ala Lys Gly Glu Asn Gly Tyr Gly Phe His Leu Asn Ala Ile Arg Gly

            20                  25                  30

Leu Pro Gly Ser Phe Ile Lys Glu Val Gln Lys Gly Gly Pro Ala Asp

        35                  40                  45

Leu Ala Gly Leu Glu Asp Glu Asp Val Ile Ile Glu Val Asn Gly Val

    50                  55                  60

Asn Val Leu Asp Glu Pro Tyr Glu Lys Val Val Asp Arg Ile Gln Ser

65                  70                  75                  80

Ser Gly Lys Asn Val Thr Leu Leu Val Glx Gly Lys Asn Ser Ser

                85                  90                  95

<210>171

<211>89

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>171

Pro Thr Val Pro Gly Lys Val Thr Leu Gln Lys Asp Ala Gln Asn Leu

 1               5                  10                  15

Ile Gly Ile Ser Ile Gly Gly Gly Ala Gln Tyr Cys Pro Cys Leu Tyr

            20                  25                  30

Ile Val Gln Val Phe Asp Asn Thr Pro Ala Ala Leu Asp Gly Thr Val

        35                  40                  45

Ala Ala Gly Asp Glu Ile Thr Gly Val Asn Gly Arg Ser Ile Lys Gly

    50                  55                  60

Lys Thr Lys Val Glu Val Ala Lys Met Ile Gln Glu Val Lys Gly Glu

65                  70                  75                  80

Val Thr Ile His Tyr Asn Lys Leu Gln

                85

<210>172

<211>98

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>172

Ser Gln Gly Val Gly Pro Ile Arg Lys Val Leu Leu Leu Lys Glu Asp

 1               5                  10                  15

His Glu Gly Leu Gly Ile Ser Ile Thr Gly Gly Lys Glu His Gly Val

            20                  25                  30

Pro Ile Leu Ile Ser Glu Ile His Pro Gly Gln Pro Ala Asp Arg Cys

        35                  40                  45

Gly Gly Leu His Val Gly Asp Ala Ile Leu Ala Val Asn Gly Val Asn

    50                  55                  60

Leu Arg Asp Thr Lys His Lys Glu Ala Val Thr Ile Leu Ser Gln Gln

65                  70                  75                  80

Arg Gly Glu Ile Glu Phe Glu Val Val Tyr Val Ala Pro Glu Val Asp

                85                  90                  95

Ser Asp

<210>173

<211>97

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>173

Ile His Val Thr Ile Leu His Lys Glu Glu Gly Ala Gly Leu Gly Phe

 1               5                  10                  15

Ser Leu Ala Gly Gly Ala Asp Leu Glu Asn Lys Val Ile Thr Val His

            20                  25                  30

Arg Val Phe Pro Asn Gly Leu Ala Ser Gln Glu Gly Thr Ile Gln Lys

        35                  40                  45

Gly Asn Glu Val Leu Ser Ile Asn Gly Lys Ser Leu Lys Gly Thr Thr

    50                  55                  60

His His Asp Ala Leu Ala Ile Leu Arg Gln Ala Arg Glu Pro Arg Gln

65                  70                  75                  80

Ala Val Ile Val Thr Arg Lys Leu Thr Pro Glu Glu Phe Ile Val Thr

                85                  90                  95

Asp

<210>174

<211>98

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>174

Thr Ala Glu Ala Thr Val Cys Thr Val Thr Leu Glu Lys Met Ser Ala

 1               5                  10                  15

Gly Leu Gly Phe Ser Leu Glu Gly Gly Lys Gly Ser Leu His Gly Asp

            20                  25                  30

Lys Pro Leu Thr Ile Asn Arg Ile Phe Lys Gly Ala Ala Ser Glu Gln

        35                  40                  45

Ser Glu Thr Val Gln Pro Gly Asp Glu Ile Leu Gln Leu Gly Gly Thr

    50                  55                  60

Ala Met Gln Gly Leu Thr Arg Phe Glu Ala Trp Asn Ile Ile Lys Ala

65                  70                  75                  80

Leu Pro Asp Gly Pro Val Thr Ile Val Ile Arg Arg Lys Ser Leu Gln

                85                  90                  95

Ser Lys

<210>175

<211>98

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>175

Leu Glu Tyr Glu Ile Thr Leu Glu Arg Gly Asn Ser Gly Leu Gly Phe

 1               5                  10                  15

Ser Ile Ala Gly Gly Thr Asp Asn Pro His Ile Gly Asp Asp Pro Ser

            20                  25                  30

Ile Phe Ile Thr Lys Ile Ile Pro Gly Gly Ala Ala Ala Gln Asp Gly

        35                  40                  45

Arg Leu Arg Val Asn Asp Ser Ile Leu Phe Val Asn Glu Val Asp Val

    50                  55                  60

Arg Glu Val Thr His Ser Ala Ala Val Glu Ala Leu Lys Glu Ala Gly

65                  70                  75                  80

Ser Ile Val Arg Leu Tyr Val Met Arg Arg Lys Pro Pro Ala Glu Asn

                85                  90                  95

Ser Ser

<210>176

<211>105

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>176

His Val Met Arg Arg Lys Pro Pro Ala Glu Lys Val Met Glu Ile Lys

 1               5                  10                  15

Leu Ile Lys Gly Pro Lys Gly Leu Gly Phe Ser Ile Ala Gly Gly Val

             20                  25                  30

Gly Asn Gln His Ile Pro Gly Asp Asn Ser Ile Tyr Val Thr Lys Ile

        35                  40                  45

Ile Glu Gly Gly Ala Ala His Lys Asp Gly Arg Leu Gln Ile Gly Asp

    50                  55                  60

Lys Ile Leu Ala Val Asn Ser Val Gly Leu Glu Asp Val Met His Glu

65                  70                  75                  80

Asp Ala Val Ala Ala Leu Lys Asn Thr Tyr Asp Val Val Tyr Leu Lys

                85                  90                  95

Val Ala Lys Pro Ser Asn Ala Tyr Leu

            100                 105

<210>177

<211>97

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>177

Arg Glu Asp Ile Pro Arg Glu Pro Arg Arg Ile Val Ile His Arg Gly

 1               5                  10                  15

Ser Thr Gly Leu Gly Phe Asn Ile Val Gly Gly Glu Asp Gly Glu Gly

            20                  25                  30

Ile Phe Ile Ser Phe Ile Leu Ala Gly Gly Pro Ala Asp Leu Ser Gly

        35                  40                  45

Glu Leu Arg Lys Gly Asp Gln Ile Leu Ser Val Asn Gly Val Asp Leu

    50                  55                  60

Arg Asn Ala Ser His Glu Gln Ala Ala Ile Ala Leu Lys Asn Ala Gly

65                  70                  75                  80

Gln Thr Val Thr Ile Ile Ala Gln Tyr Lys Pro Glu Phe Ile Val Thr

                85                  90                  95

Asp

<210>178

<211>88

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>178

Leu Ile Arg Ile Thr Pro Asp Glu Asp Gly Lys Phe Gly Phe Asn Leu

 1               5                  10                  15

Lys Gly Gly Val Asp Gln Lys Met Pro Leu Val Val Ser Arg Ile Asn

            20                  25                  30

Pro Glu Ser Pro Ala Asp Thr Cys Ile Pro Lys Leu Asn Glu Gly Asp

        35                  40                  45

Gln Ile Val Leu Ile Asn Gly Arg Asp Ile Ser Glu His Thr His Asp

    50                  55                  60

Gln Val Val Met Phe Ile Lys Ala Ser Arg Glu Ser His Ser Arg Glu

65                  70                  75                  80

Leu Ala Leu Val Ile Arg Arg Arg

                85

<210>179

<211>88

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>179

Ile Arg Met Lys Pro Asp Glu Asn Gly Arg Phe Gly Phe Asn Val Lys

 1               5                  10                  15

Gly Gly Tyr Asp Gln Lys Met Pro Val Ile Val Ser Arg Val Ala Pro

            20                  25                  30

Gly Thr Pro Ala Asp Leu Cys Val Pro Arg Leu Asn Glu Gly Asp Gln

        35                  40                  45

Val Val Leu Ile Asn Gly Arg Asp Ile Ala Glu His Thr His Asp Gln

    50                  55                  60

Val Val Leu Phe Ile Lys Ala Ser Cys Glu Arg His Ser Gly Glu Leu

65                  70                  75                  80

Met Leu Leu Val Arg Pro Asn Ala

                85

<210>180

<211>106

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>180

Pro Glu Arg Glu Ile Thr Leu Val Asn Leu Lys Lys Asp Ala Lys Tyr

 1               5                  10                  15

Gly Leu Gly Phe Gln Ile Ile Gly Gly Glu Lys Met Gly Arg Leu Asp

            20                  25                  30

Leu Gly Ile Phe Ile Ser Ser Val Ala Pro Gly Gly Pro Ala Asp Phe

        35                  40                  45

His Gly Cys Leu Lys Pro Gly Asp Arg Leu Ile Ser Val Asn Ser Val

    50                  55                  60

Ser Leu Glu Gly Val Ser His His Ala Ala Ile Glu Ile Leu Gln Asn

65                  70                  75                  80

Ala Pro Glu Asp Val Thr Leu Val Ile Ser Gln Pro Lys Glu Lys Ile

                85                  90                  95

Ser Lys Val Pro Ser Thr Pro Val His Leu

            100                 105

<210>181

<211>95

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>181

Gly Asp Ile Phe Glu Val Glu Leu Ala Lys Asn Asp Asn Ser Leu Gly

 1               5                  10                  15

Ile Ser Val Thr Gly Gly Val Asn Thr Ser Val Arg His Gly Gly Ile

            20                  25                  30

Tyr Val Lys Ala Val Ile Pro Gln Gly Ala Ala Glu Ser Asp Gly Arg

        35                  40                  45

Ile His Lys Gly Asp Arg Val Leu Ala Val Asn Gly Val Ser Leu Glu

    50                  55                  60

Gly Ala Thr His Lys Gln Ala Val Glu Thr Leu Arg Asn Thr Gly Gln

65                  70                  75                  80

Val Val His Leu Leu Leu Glu Lys Gly Gln Ser Pro Thr Ser Lys

                85                  90                  95

<210>182

<211>104

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>182

Thr Glu Glu Asn Thr Phe Glu Val Lys Leu Phe Lys Asn Ser Ser Gly

 1               5                  10                  15

Leu Gly Phe Ser Phe Ser Arg Glu Asp Asn Leu Ile Pro Glu Gln Ile

            20                  25                  30

Asn Ala Ser Ile Val Arg Val Lys Lys Leu Phe Ala Gly Gln Pro Ala

        35                  40                  45

Ala Glu Ser Gly Lys Ile Asp Val Gly Asp Val Ile Leu Lys Val Asn

    50                  55                  60

Gly Ala Ser Leu Lys Gly Leu Ser Gln Gln Glu Val Ile Ser Ala Leu

65                  70                  75                  80

Arg Gly Thr Ala Pro Glu Val Phe Leu Leu Leu Cys Arg Pro Pro Pro

                85                  90                  95

Gly Val Leu Pro Glu Ile Asp Thr

            100

<210>183

<211>98

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>183

Glu Leu Glu Val Glu Leu Leu Ile Thr Leu Ile Lys Ser Glu Lys Ala

 1               5                  10                  15

Ser Leu Gly Phe Thr Val Thr Lys Gly Asn Gln Arg Ile Gly Cys Tyr

            20                  25                  30

Val His Asp Val Ile Gln Asp Pro Ala Lys Ser Asp Gly Arg Leu Lys

        35                  40                  45

Pro Gly Asp Arg Leu Ile Lys Val Asn Asp Thr Asp Val Thr Asn Met

    50                  55                  60

Thr His Thr Asp Ala Val Asn Leu Leu Arg Ala Ala Ser Lys Thr Val

65                  70                  75                  80

Arg Leu Val Ile Gly Arg Val Leu Glu Leu Pro Arg Ile Pro Met Leu

                85                  90                  95

Pro His

<210>184

<211>94

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>184

Met Leu Pro His Leu Leu Pro Asp Ile Thr Leu Thr Cys Asn Lys Glu

 1               5                  10                  15

Glu Leu Gly Phe Ser Leu Cys Gly Gly His Asp Ser Leu Tyr Gln Val

            20                  25                  30

Val Tyr Ile Ser Asp Ile Asn Pro Arg Ser Val Ala Ala Ile Glu Gly

        35                  40                  45

Asn Leu Gln Leu Leu Asp Val Ile His Tyr Val Asn Gly Val Ser Thr

    50                  55                  60

Gln Gly Met Thr Leu Glu Glu Val Asn Arg Ala Leu Asp Met Ser Leu

65                  70                  75                  80

Pro Ser Leu Val Leu Lys Ala Thr Arg Asn Asp Leu Pro Val

                85                  90

<210>185

<211>93

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>185

Arg Pro Ser Pro Pro Arg Val Arg Ser Val Glu Val Ala Arg Gly Arg

 1               5                  10                  15

Ala Gly Tyr Gly Phe Thr Leu Ser Gly Gln Ala Pro Cys Val Leu Ser

            20                  25                  30

Cys Val Met Arg Gly Ser Pro Ala Asp Phe Val Gly Leu Arg Ala Gly

        35                  40                  45

Asp Gln Ile Leu Ala Val Asn Glu Ile Asn Val Lys Lys Ala Ser His

    50                  55                  60

Glu Asp Val Val Lys Leu Ile Gly Lys Cys Ser Gly Val Leu His Met

65                  70                  75                  80

Val Ile Ala Glu Gly Val Gly Arg Phe Glu Ser Cys Ser

                85                  90

<210>186

<211>96

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>186

Leu Cys Ser Glu Arg Arg Tyr Arg Gln Ile Thr Ile Pro Arg Gly Lys

 1               5                  10                  15

Asp Gly Phe Gly Phe Thr Ile Cys Cys Asp Ser Pro Val Arg Val Gln

            20                  25                  30

Ala Val Asp Ser Gly Gly Pro Ala Glu Arg Ala Gly Leu Gln Gln Leu

        35                  40                  45

Asp Thr Val Leu Gln Leu Asn Glu Arg Pro Val Glu His Trp Lys Cys

    50                  55                  60

Val Glu Leu Ala His Glu Ile Arg Ser Cys Pro Ser Glu Ile Ile Leu

65                  70                  75                  80

Leu Val Trp Arg Met Val Pro Gln Val Lys Pro Gly Ile His Arg Asp

                85                  90                  95

<210>187

<211>104

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>187

Ile Ser Phe Ser Ala Asn Lys Arg Trp Thr Pro Pro Arg Ser Ile Arg

 1               5                  10                  15

Phe Thr Ala Glu Glu Gly Asp Leu Gly Phe Thr Leu Arg Gly Asn Ala

            20                  25                  30

Pro Val Gln Val His Phe Leu Asp Pro Tyr Cys Ser Ala Ser Val Ala

        35                  40                  45

Gly Ala Arg Glu Gly Asp Tyr Ile Val Ser Ile Gln Leu Val Asp Cys

    50                  55                  60

Lys Trp Leu Thr Leu Ser Glu Val Met Lys Leu Leu Lys Ser Phe Gly

65                  70                  75                  80

Glu Asp Glu Ile Glu Met Lys Val Val Ser Leu Leu Asp Ser Thr Ser

                85                  90                  95

Ser Met His Asn Lys Ser Ala Thr

            100

<210>188

<211>109

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>188

Arg Gly Glu Lys Lys Asn Ser Ser Ser Gly Ile Ser Gly Ser Gln Arg

 1               5                  10                  15

Arg Tyr Ile Gly Val Met Met Leu Thr Leu Ser Pro Ser Ile Leu Ala

            20                  25                  30

Glu Leu Gln Leu Arg Glu Pro Ser Phe Pro Asp Val Gln His Gly Val

        35                  40                  45

Leu Ile His Lys Val Ile Leu Gly Ser Pro Ala His Arg Ala Gly Leu

    50                  55                  60

Arg Pro Gly Asp Val Ile Leu Ala Ile Gly Glu Gln Met Val Gln Asn

65                  70                  75                  80

Ala Glu Asp Val Tyr Glu Ala Val Arg Thr Gln Ser Gln Leu Ala Val

                85                  90                  95

Gln Ile Arg Arg Gly Arg Glu Thr Leu Thr Leu Tyr Val

            100                 105

<210>189

<211>111

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>189

Glu Glu Lys Thr Val Val Leu Gln Lys Lys Asp Asn Glu Gly Phe Gly

 1               5                  10                  15

Phe Val Leu Arg Gly Ala Lys Ala Asp Thr Pro Ile Glu Glu Phe Thr

            20                  25                  30

Pro Thr Pro Ala Phe Pro Ala Leu Gln Tyr Leu Glu Ser Val Asp Glu

        35                  40                  45

Gly Gly Val Ala Trp Gln Ala Gly Leu Arg Thr Gly Asp Phe Leu Ile

    50                  55                  60

Glu Val Asn Asn Glu Asn Val Val Lys Val Gly His Arg Gln Val Val

65                  70                  75                  80

Asn Met Ile Arg Gln Gly Gly Asn His Leu Val Leu Lys Val Val Thr

                85                  90                  95

Val Thr Arg Asn Leu Asp Pro Asp Asp Thr Ala Arg Lys Lys Ala

            100                 105                 110

<210>190

<211>110

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>190

Ser Asp Tyr Val Ile Asp Asp Lys Val Ala Val Leu Gln Lys Arg Asp

 1               5                  10                  15

His Glu Gly Phe Gly Phe Val Leu Arg Gly Ala Lys Ala Glu Thr Pro

            20                  25                  30

Ile Glu Glu Phe Thr Pro Thr Pro Ala Phe Pro Ala Leu Gln Tyr Leu

        35                  40                  45

Glu Ser Val Asp Val Glu Gly Val Ala Trp Arg Ala Gly Leu Arg Thr

    50                  55                  60

Gly Asp Phe Leu Ile Glu Val Asn Gly Val Asn Val Val Lys Val Gly

65                  70                  75                  80

His Lys Gln Val Val Ala Leu Ile Arg Gln Gly Gly Asn Arg Leu Val

                85                  90                  95

Met Lys Val Val Ser Val Thr Arg Lys Pro Glu Glu Asp Gly

            100                 105                 110

<210>191

<211>91

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>191

Ile Tyr Leu Glu Ala Phe Leu Glu Gly Gly Ala Pro Trp Gly Phe Thr

 1               5                  10                  15

Leu Lys Gly Gly Leu Glu His Gly Glu Pro Leu Ile Ile Ser Lys Val

            20                  25                  30

Glu Glu Gly Gly Lys Ala Asp Thr Leu Ser Ser Lys Leu Gln Ala Gly

        35                  40                  45

Asp Glu Val Val His Ile Asn Glu Val Thr Leu Ser Ser Ser Arg Lys

    50                  55                  60

Glu Ala Val Ser Leu Val Lys Gly Ser Tyr Lys Thr Leu Arg Leu Val

65                  70                  75                  80

Val Arg Arg Asp Val Cys Thr Asp Pro Gly His

                85                  90

<210>192

<211>83

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>192

Ile Arg Leu Cys Arg Leu Val Arg Gly Glu Gln Gly Tyr Gly Phe His

 1               5                  10                  15

Leu His Gly Glu Lys Gly Arg Arg Gly Gln Phe Ile Arg Arg Val Glu

            20                  25                  30

Pro Gly Ser Pro Ala Glu Ala Ala Ala Leu Arg Ala Gly Asp Arg Leu

        35                  40                  45

Val Glu Val Asn Gly Val Asn Val Glu Gly Glu Thr His His Gln Val

    50                  55                  60

Val Gln Arg Ile Lys Ala Val Glu Gly Gln Thr Arg Leu Leu Val Val

65                  70                  75                  80

Asp Gln Asn

<210>193

<211>84

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>193

Ile Arg His Leu Arg Lys Gly Pro Gln Gly Tyr Gly Phe Asn Leu His

 1               5                  10                  15

Ser Asp Lys Ser Arg Pro Gly Gln Tyr Ile Arg Ser Val Asp Pro Gly

            20                  25                  30

Ser Pro Ala Ala Arg Ser Gly Leu Arg Ala Gln Asp Arg Leu Ile Glu

        35                  40                  45

Val Asn Gly Gln Asn Val Glu Gly Leu Arg His Ala Glu Val Val Ala

    50                  55                  60

Ser Ile Lys Ala Arg Glu Asp Glu Ala Arg Leu Leu Val Val Asp Pro

65                  70                  75                  80

Glu Thr Asp Glu

<210>194

<211>92

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>194

Pro Gly Val Arg Glu Ile His Leu Cys Lys Asp Glu Arg Gly Lys Thr

 1               5                  10                  15

Gly Leu Arg Leu Arg Lys Val Asp Gln Gly Leu Phe Val Gln Leu Val

            20                  25                  30

Gln Ala Asn Thr Pro Ala Ser Leu Val Gly Leu Arg Phe Gly Asp Gln

        35                  40                  45

Leu Leu Gln Ile Asp Gly Arg Asp Cys Ala Gly Trp Ser Ser His Lys

    50                  55                  60

Ala His Gln Val Val Lys Lys Ala Ser Gly Asp Lys Ile Val Val Val

65                  70                  75                  80

Val Arg Asp Arg Pro Phe Gln Arg Thr Val Thr Met

                85                  90

<210>195

<211>90

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>195

Pro Phe Gln Arg Thr Val Thr Met His Lys Asp Ser Met Gly His Val

 1               5                  10                  15

Gly Phe Val Ile Lys Lys Gly Lys Ile Val Ser Leu Val Lys Gly Ser

            20                  25                  30

Ser Ala Ala Arg Asn Gly Leu Leu Thr Asn His Tyr Val Cys Glu Val

        35                  40                  45

Asp Gly Gln Asn Val Ile Gly Leu Lys Asp Lys Lys Ile Met Glu Ile

    50                  55                  60

Leu Ala Thr Ala Gly Asn Val Val Thr Leu Thr Ile Ile Pro Ser Val

65                  70                  75                  80

Ile Tyr Glu His Ile Val Glu Phe Ile Val

                85                  90

<210>196

<211>109

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>196

Leu Lys Glu Lys Thr Val Leu Leu Gln Lys Lys Asp Ser Glu Gly Phe

 1               5                  10                  15

Gly Phe Val Leu Arg Gly Ala Lys Ala Gln Thr Pro Ile Glu Glu Phe

            20                  25                  30

Thr Pro Thr Pro Ala Phe Pro Ala Leu Gln Tyr Leu Glu Ser Val Asp

        35                  40                  45

Glu Gly Gly Val Ala Trp Arg Ala Gly Leu Arg Met Gly Asp Phe Leu

    50                  55                  60

Ile Glu Val Asn Gly Gln Asn Val Val Lys Val Gly His Arg Gln Val

65                  70                  75                  80

Val Asn Met Ile Arg Gln Gly Gly Asn Thr Leu Met Val Lys Val Val

                85                  90                  95

Met Val Thr Arg His Pro Asp Met Asp Glu Ala Val Gln

            100                 105

<210>197

<211>88

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>197

Leu Glu Ile Lys Gln Gly Ile Arg Glu Val Ile Leu Cys Lys Asp Gln

 1               5                  10                  15

Asp Gly Lys Ile Gly Leu Arg Leu Lys Ser Ile Asp Asn Gly Ile Phe

            20                  25                  30

Val Gln Leu Val Gln Ala Asn Ser Pro Ala Ser Leu Val Gly Leu Arg

        35                  40                  45

Phe Gly Asp Gln Val Leu Gln Ile Asn Gly Glu Asn Cys Ala Gly Trp

    50                  55                  60

Ser Ser Asp Lys Ala His Lys Val Leu Lys Gln Ala Phe Gly Glu Lys

65                  70                  75                  80

Ile Thr Met Arg Ile His Arg Asp

                85

<210>198

<211>75

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>198

Arg Asp Arg Pro Phe Glu Arg Thr Ile Thr Met His Lys Asp Ser Thr

 1               5                  10                  15

Gly His Val Gly Phe Ile Phe Lys Asn Gly Lys Ile Thr Ser Ile Val

            20                  25                  30

Lys Asp Ser Ser Ala Ala Arg Asn Gly Leu Leu Thr Glu His Asn Ile

        35                  40                  45

Cys Glu Ile Asn Gly Gln Asn Val Ile Gly Leu Lys Asp Ser Gln Ile

    50                  55                  60

Ala Asp Ile Leu Ser Thr Ser Gly Asn Ser Ser

65                  70                  75

<210>199

<211>94

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>199

Gln Arg Arg Arg Val Thr Val Arg Lys Ala Asp Ala Gly Gly Leu Gly

 1               5                  10                  15

Ile Ser Ile Lys Gly Gly Arg Glu Asn Lys Met Pro Ile Leu Ile Ser

            20                  25                  30

Lys Ile Phe Lys Gly Leu Ala Ala Asp Gln Thr Glu Ala Leu Phe Val

        35                  40                  45

Gly Asp Ala Ile Leu Ser Val Asn Gly Glu Asp Leu Ser Ser Ala Thr

    50                  55                  60

His Asp Glu Ala Val Gln Val Leu Lys Lys Thr Gly Lys Glu Val Val

65                  70                  75                  80

Leu Glu Val Lys Tyr Met Lys Asp Val Ser Pro Tyr Phe Lys

                85                  90

<210>200

<211>89

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>200

Ile Arg Val Val Lys Gln Glu Ala Gly Gly Leu Gly Ile Ser Ile Lys

 1               5                  10                  15

Gly Gly Arg Glu Asn Arg Met Pro Ile Leu Ile Ser Lys Ile Phe Pro

            20                  25                  30

Gly Leu Ala Ala Asp Gln Ser Arg Ala Leu Arg Leu Gly Asp Ala Ile

        35                  40                  45

Leu Ser Val Asn Gly Thr Asp Leu Arg Gln Ala Thr His Asp Gln Ala

    50                  55                  60

Val Gln Ala Leu Lys Arg Ala Gly Lys Glu Val Leu Leu Glu Val Lys

65                  70                  75                  80

Phe Ile Arg Glu Phe Ile Val Thr Asp

                85

<210>201

<211>101

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>201

Glu Pro Phe Tyr Ser Gly Glu Arg Thr Val Thr Ile Arg Arg Gln Thr

 1               5                  10                  15

Val Gly Gly Phe Gly Leu Ser Ile Lys Gly Gly Ala Glu His Asn Ile

            20                  25                  30

Pro Val Val Val Ser Lys Ile Ser Lys Glu Gln Arg Ala Glu Leu Ser

         35                  40                  45

Gly Leu Leu Phe Ile Gly Asp Ala Ile Leu Gln Ile Asn Gly Ile Asn

    50                  55                  60

Val Arg Lys Cys Arg His Glu Glu Val Val Gln Val Leu Arg Asn Ala

65                  70                  75                  80

Gly Glu Glu Val Thr Leu Thr Val Ser Phe Leu Lys Arg Ala Pro Ala

                85                  90                  95

Phe Leu Lys Leu Pro

            100

<210>202

<211>99

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>202

Ser His Gln Gly Arg Asn Arg Arg Thr Val Thr Leu Arg Arg Gln Pro

 1               5                  10                  15

Val Gly Gly Leu Gly Leu Ser Ile Lys Gly Gly Ser Glu His Asn Val

            20                  25                  30

Pro Val Val Ile Ser Lys Ile Phe Glu Asp Gln Ala Ala Asp Gln Thr

        35                  40                  45

Gly Met Leu Phe Val Gly Asp Ala Val Leu Gln Val Asn Gly Ile His

    50                  55                  60

Val Glu Asn Ala Thr His Glu Glu Val Val His Leu Leu Arg Asn Ala

65                  70                  75                  80

Gly Asp Glu Val Thr Ile Thr Val Glu Tyr Leu Arg Glu Ala Pro Ala

                85                  90                  95

Phe Leu Lys

<210>203

<211>91

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>203

Arg Gly Glu Thr Lys Glu Val Glu Val Thr Lys Thr Glu Asp Ala Leu

 1               5                  10                  15

Gly Leu Thr Ile Thr Asp Asn Gly Ala Gly Tyr Ala Phe Ile Lys Arg

            20                  25                  30

Ile Lys Glu Gly Ser Ile Ile Asn Arg Ile Glu Ala Val Cys Val Gly

        35                  40                  45

Asp Ser Ile Glu Ala Ile Asn Asp His Ser Ile Val Gly Cys Arg His

    50                  55                  60

Tyr Glu Val Ala Lys Met Leu Arg Glu Leu Pro Lys Ser Gln Pro Phe

65                  70                  75                  80

Thr Leu Arg Leu Val Gln Pro Lys Arg Ala Phe

                85                  90

<210>204

<211>88

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>204

His Ser Ile His Ile Glu Lys Ser Asp Thr Ala Ala Asp Thr Tyr Gly

 1               5                  10                  15

Phe Ser Leu Ser Ser Val Glu Glu Asp Gly Ile Arg Arg Leu Tyr Val

            20                  25                  30

Asn Ser Val Lys Glu Thr Gly Leu Ala Ser Lys Lys Gly Leu Lys Ala

        35                  40                  45

Gly Asp Glu Ile Leu Glu Ile Asn Asn Arg Ala Ala Asp Ala Leu Asn

    50                  55                  60

Ser Ser Met Leu Lys Asp Phe Leu Ser Gln Pro Ser Leu Gly Leu Leu

65                  70                  75                  80

Val Arg Thr Tyr Pro Glu Leu Glu

                85

<210>205

<211>97

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>205

Pro Leu Asn Val Tyr Asp Val Gln Leu Thr Lys Thr Gly Ser Val Cys

 1               5                  10                  15

Asp Phe Gly Phe Ala Val Thr Ala Gln Val Asp Glu Arg Gln His Leu

            20                  25                  30

Ser Arg Ile Phe Ile Ser Asp Val Leu Pro Asp Gly Leu Ala Tyr Gly

        35                  40                  45

Glu Gly Leu Arg Lys Gly Asn Glu Ile Met Thr Leu Asn Gly Glu Ala

    50                  55                  60

Val Ser Asp Leu Asp Leu Lys Gln Met Glu Ala Leu Phe Ser Glu Lys

65                  70                  75                  80

Ser Val Gly Leu Thr Leu Ile Ala Arg Pro Pro Asp Thr Lys Ala Thr

                85                  90                  95

Leu

<210>206

<211>103

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>206

Gln Arg Val Glu Ile His Lys Leu Arg Gln Gly Glu Asn Leu Ile Leu

 1               5                  10                  15

Gly Phe Ser Ile Gly Gly Gly Ile Asp Gln Asp Pro Ser Gln Asn Pro

            20                  25                  30

Phe Ser Glu Asp Lys Thr Asp Lys Gly Ile Tyr Val Thr Arg Val Ser

        35                  40                  45

Glu Gly Gly Pro Ala Glu Ile Ala Gly Leu Gln Ile Gly Asp Lys Ile

    50                  55                  60

Met Gln Val Asn Gly Trp Asp Met Thr Met Val Thr His Asp Gln Ala

65                  70                  75                  80

Arg Lys Arg Leu Thr Lys Arg Ser Glu Glu Val Val Arg Leu Leu Val

                85                  90                  95

Thr Arg Gln Ser Leu Gln Lys

            100

<210>207

<211>86

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>207

Arg Lys Glu Val Glu Val Phe Lys Ser Glu Asp Ala Leu Gly Leu Thr

 1               5                  10                  15

Ile Thr Asp Asn Gly Ala Gly Tyr Ala Phe Ile Lys Arg Ile Lys Glu

            20                  25                  30

Gly Ser Val Ile Asp His Ile His Leu Ile Ser Val Gly Asp Met Ile

        35                  40                  45

Glu Ala Ile Asn Gly Gln Ser Leu Leu Gly Cys Arg His Tyr Glu Val

    50                  55                  60

Ala Arg Leu Leu Lys Glu Leu Pro Arg Gly Arg Thr Phe Thr Leu Lys

65                  70                  75                  80

Leu Thr Glu Pro Arg Lys

                85

<210>208

<211>91

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>208

His Ser His Pro Arg Val Val Glu Leu Pro Lys Thr Asp Glu Gly Leu

 1               5                  10                  15

Gly Phe Asn Val Met Gly Gly Lys Glu Gln Asn Ser Pro Ile Tyr Ile

            20                  25                  30

Ser Arg Ile Ile Pro Gly Gly Val Ala Glu Arg His Gly Gly Leu Lys

        35                  40                  45

Arg Gly Asp Gln Leu Leu Ser Val Asn Gly Val Ser Val Glu Gly Glu

    50                  55                  60

His His Glu Lys Ala Val Glu Leu Leu Lys Ala Ala Lys Asp Ser Val

65                  70                  75                  80

Lys Leu Val Val Arg Tyr Thr Pro Lys Val Leu

                85                  90

<210>209

<211>96

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>209

Ile Ser Asn Gln Lys Arg Gly Val Lys Val Leu Lys Gln Glu Leu Gly

 1               5                  10                  15

Gly Leu Gly Ile Ser Ile Lys Gly Gly Lys Glu Asn Lys Met Pro Ile

            20                  25                  30

Leu Ile Ser Lys Ile Phe Lys Gly Leu Ala Ala Asp Gln Thr Gln Ala

        35                  40                  45

Leu Tyr Val Gly Asp Ala Ile Leu Ser Val Asn Gly Ala Asp Leu Arg

    50                  55                  60

Asp Ala Thr His Asp Glu Ala Val Gln Ala Leu Lys Arg Ala Gly Lys

65                  70                  75                  80

Glu Val Leu Leu Glu Val Lys Tyr Met Arg Glu Ala Thr Pro Tyr Val

                85                  90                  95

<210>210

<211>110

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>210

Ile His Phe Ser Asn Ser Glu Asn Cys Lys Glu Leu Gln Leu Glu Lys

 1               5                  10                  15

His Lys Gly Glu Ile Leu Gly Val Val Val Val Glu Ser Gly Trp Gly

            20                  25                  30

Ser Ile Leu Pro Thr Val Ile Leu Ala Asn Met Met Asn Gly Gly Pro

        35                  40                  45

Ala Ala Arg Ser Gly Lys Leu Ser Ile Gly Asp Gln Ile Met Ser Ile

    50                  55                  60

Asn Gly Thr Ser Leu Val Gly Leu Pro Leu Ala Thr Cys Gln Gly Ile

65                  70                  75                  80

Ile Lys Gly Leu Lys Asn Gln Thr Gln Val Lys Leu Asn Ile Val Ser

                85                  90                  95

Cys Pro Pro Val Thr Thr Val Leu Ile Lys Arg Asn Ser Ser

            100                 105                 110

<210>211

<211>94

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>211

Ile Pro Pro Val Thr Thr Val Leu Ile Lys Arg Pro Asp Leu Lys Tyr

 1               5                  10                  15

Gln Leu Gly Phe Ser Val Gln Asn Gly Ile Ile Cys Ser Leu Met Arg

            20                  25                  30

Gly Gly Ile Ala Glu Arg Gly Gly Val Arg Val Gly His Arg Ile Ile

        35                  40                  45

Glu Ile Asn Gly Gln Ser Val Val Ala Thr Ala His Glu Lys Ile Val

    50                  55                  60

Gln Ala Leu Ser Asn Ser Val Gly Glu Ile His Met Lys Thr Met Pro

65                  70                  75                  80

Ala Ala Met Phe Arg Leu Leu Thr Gly Gln Glu Asn Ser Ser

                85                  90

<210>212

<211>101

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>212

Ile Trp Glu Gln His Thr Val Thr Leu His Arg Ala Pro Gly Phe Gly

 1               5                  10                  15

Phe Gly Ile Ala Ile Ser Gly Gly Arg Asp Asn Pro His Phe Gln Ser

            20                  25                  30

Gly Glu Thr Ser Ile Val Ile Ser Asp Val Leu Lys Gly Gly Pro Ala

        35                  40                  45

Glu Gly Gln Leu Gln Glu Asn Asp Arg Val Ala Met Val Asn Gly Val

    50                  55                  60

Ser Met Asp Asn Val Glu His Ala Phe Ala Val Gln Gln Leu Arg Lys

65                  70                  75                  80

Ser Gly Lys Asn Ala Lys Ile Thr Ile Arg Arg Lys Lys Lys Val Gln

                85                  90                  95

Ile Pro Asn Ser Ser

            100

<210>213

<211>95

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>213

Ile Ser Ser Gln Pro Ala Lys Pro Thr Lys Val Thr Leu Val Lys Ser

 1               5                  10                  15

Arg Lys Asn Glu Glu Tyr Gly Leu Arg Leu Ala Ser His Ile Phe Val

            20                  25                  30

Lys Glu Ile Ser Gln Asp Ser Leu Ala Ala Arg Asp Gly Asn Ile Gln

        35                  40                  45

Glu Gly Asp Val Val Leu Lys Ile Asn Gly Thr Val Thr Glu Asn Met

    50                  55                  60

Ser Leu Thr Asp Ala Lys Thr Leu Ile Glu Arg Ser Lys Gly Lys Leu

65                  70                  75                  80

Lys Met Val Val Gln Arg Asp Arg Ala Thr Leu Leu Asn Ser Ser

                85                  90                  95

<210>214

<211>90

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>214

Ile Arg Met Lys Leu Val Lys Phe Arg Lys Gly Asp Ser Val Gly Leu

 1               5                  10                  15

Arg Leu Ala Gly Gly Asn Asp Val Gly Ile Phe Val Ala Gly Val Leu

            20                  25                  30

Glu Asp Ser Pro Ala Ala Lys Glu Gly Leu Glu Glu Gly Asp Gln Ile

        35                  40                  45

Leu Arg Val Asn Asn Val Asp Phe Thr Asn Ile Ile Arg Glu Glu Ala

    50                  55                  60

Val Leu Phe Leu Leu Asp Leu Pro Lys Gly Glu Glu Val Thr Ile Leu

65                  70                  75                  80

Ala Gln Lys Lys Lys Asp Val Phe Ser Asn

                85                  90

<210>215

<211>96

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>215

Leu Ile Trp Glu Gln Tyr Thr Val Thr Leu Gln Lys Asp Ser Lys Arg

 1               5                  10                  15

Gly Phe Gly Ile Ala Val Ser Gly Gly Arg Asp Asn Pro His Phe Glu

            20                  25                  30

Asn Gly Glu Thr Ser Ile Val Ile Ser Asp Val Leu Pro Gly Gly Pro

        35                  40                  45

Ala Asp Gly Leu Leu Gln Glu Asn Asp Arg Val Val Met Val Asn Gly

    50                  55                  60

Thr Pro Met Glu Asp Val Leu His Ser Phe Ala Val Gln Gln Leu Arg

65                  70                  75                  80

Lys Ser Gly Lys Val Ala Ala Ile Val Val Lys Arg Pro Arg Lys Val

                85                  90                  95

<210>216

<21l>79

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>216

Arg Val Leu Leu Met Lys Ser Arg Ala Asn Glu Glu Tyr Gly Leu Arg

 1               5                  10                  15

Leu Gly Ser Gln Ile Phe Val Lys Glu Met Thr Arg Thr Gly Leu Ala

            20                  25                  30

Thr Lys Asp Gly Asn Leu His Glu Gly Asp Ile Ile Leu Lys Ile Asn

        35                  40                  45

Gly Thr Val Thr Glu Asn Met Ser Leu Thr Asp Ala Arg Lys Leu Ile

    50                  55                  60

Glu Lys Ser Arg Gly Lys Leu Gln Leu Val Val Leu Arg Asp Ser

65                  70                  75

<210>217

<211>90

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>217

His Ala Pro Asn Thr Lys Met Val Arg Phe Lys Lys Gly Asp Ser Val

 1               5                  10                  15

Gly Leu Arg Leu Ala Gly Gly Asn Asp Val Gly Ile Phe Val Ala Gly

            20                  25                  30

Ile Gln Glu Gly Thr Ser Ala Glu Gln Glu Gly Leu Gln Glu Gly Asp

        35                  40                  45

Gln Ile Leu Lys Val Asn Thr Gln Asp Phe Arg Gly Leu Val Arg Glu

    50                  55                  60

Asp Ala Val Leu Tyr Leu Leu Glu Ile Pro Lys Gly Glu Met Val Thr

65                  70                  75                  80

Ile Leu Ala Gln Ser Arg Ala Asp Val Tyr

                85                  90

<210>218

<211>106

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>218

Ile Pro Gly Asn Ser Thr Ile Trp Glu Gln His Thr Ala Thr Leu Ser

 1               5                  10                  15

Lys Asp Pro Arg Arg Gly Phe Gly Ile Ala Ile Ser Gly Gly Arg Asp

            20                  25                  30

Arg Pro Gly Gly Ser Met Val Val Ser Asp Val Val Pro Gly Gly Pro

        35                  40                  45

Ala Glu Gly Arg Leu Gln Thr Gly Asp His Ile Val Met Val Asn Gly

    50                  55                  60

Val Ser Met Glu Asn Ala Thr Ser Ala Phe Ala Ile Gln Ile Leu Lys

65                  70                  75                  80

Thr Cys Thr Lys Met Ala Asn Ile Thr Val Lys Arg Pro Arg Arg Ile

                85                  90                  95

His Leu Pro Ala Glu Phe Ile Val Thr Asp

            100                 105

<210>219

<211>98

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>219

Gln Asp Val Gln Met Lys Pro Val Lys Ser Val Leu Val Lys Arg Arg

 1               5                  10                  15

Asp Ser Glu Glu Phe Gly Val Lys Leu Gly Ser Gln Ile Phe Ile Lys

            20                  25                  30

His Ile Thr Asp Ser Gly Leu Ala Ala Arg His Arg Gly Leu Gln Glu

        35                  40                  45

Gly Asp Leu Ile Leu Gln Ile Asn Gly Val Ser Ser Gln Asn Leu Ser

    50                  55                  60

Leu Asn Asp Thr Arg Arg Leu Ile Glu Lys Ser Glu Gly Lys Leu Ser

65                  70                  75                  80

Leu Leu Val Leu Arg Asp Arg Gly Gln Phe Leu Val Asn Ile Pro Asn

                85                  90                  95

Ser Ser

<210>220

<211>104

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>220

Arg Gly Tyr Ser Pro Asp Thr Arg Val Val Arg Phe Leu Lys Gly Lys

 1               5                  10                  15

Ser Ile Gly Leu Arg Leu Ala Gly Gly Asn Asp Val Gly Ile Phe Val

            20                  25                  30

Ser Gly Val Gln Ala Gly Ser Pro Ala Asp Gly Gln Gly Ile Gln Glu

        35                  40                  45

Gly Asp Gln Ile Leu Gln Val Asn Asp Val Pro Phe Gln Asn Leu Thr

    50                  55                  60

Arg Glu Glu Ala Val Gln Phe Leu Leu Gly Leu Pro Pro Gly Glu Glu

65                  70                  75                  80

Met Glu Leu Val Thr Gln Arg Lys Gln Asp Ile Phe Trp Lys Met Val

                85                  90                  95

Gln Ser Glu Phe Ile Val Thr Asp

            100

<210>221

<211>10

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>221

Gly Tyr Cys Arg Asn Cys Ile Arg Lys Gln

 1               5                  10

<210>222

<211>10

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>222

Trp Thr Thr Cys Met Glu Asp Leu Leu Pro

 1               5                  10

<210>223

<211>10

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>223

Gly Ile Cys Arg Leu Cys Lys His Phe Gln

 1               5                  10

<210>224

<211>10

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>224

Lys Gly Leu Cys Arg Gln Cys Lys Gln Ile

 1               5                  10

<210>225

<211>10

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>225

Trp Leu Arg Cys Thr Val Arg Ile Pro Gln

 1               5                  10

<210>226

<211>10

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>226

Arg Gln Cys Lys His Phe Tyr Asn Asp Trp

 1               5                  10

<210>227

<211>10

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>227

Cys Arg Asn Cys Ile Ser His Glu Gly Arg

 1               5                  10

<210>228

<211>10

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>228

Cys Cys Arg Asn Cys Tyr Glu His Glu Gly

 1               5                  10

<210>229

<211>10

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>229

Ser Ser Arg Thr Arg Arg Glu Thr Gln Leu

 1               5                  10

<210>230

<211>10

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>230

Arg Leu Gln Arg Arg Arg Glu Thr Gln Val

 1               5                  10

<210>231

<211>10

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>231

Trp Arg Arg Pro Arg Thr Glu Thr Gln Val

 1               5                  10

<210>232

<211>10

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>232

Trp Lys Pro Thr Arg Arg Glu Thr Glu Val

 1               5                  10

<210>233

<211>10

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>233

Arg Arg Thr Leu Arg Arg Glu Thr Gln Val

 1               5                  10

<210>234

<211>10

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>234

Arg Arg Leu Thr Arg Arg Glu Thr Gln Val

 1               5                  10

<210>235

<211>10

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>235

Arg Leu Arg Arg Arg Arg Glu Thr Gln Val

 1               5                  10

<210>236

<211>10

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>236

Arg Leu Gln Arg Arg Asn Glu Thr Gln Val

 1               5                  10

<210>237

<211>10

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>237

Arg Leu Gln Arg Arg Arg Val Thr Gln Val

 1               5                  10

<210>238

<211>10

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>238

Thr Ser Arg Glu Pro Arg Glu Ser Thr Val

 1               5                  10

<210>239

<211>10

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>239

Gln Arg Gln Ala Arg Ser Glu Thr Leu Val

 1               5                  10

<210>240

<211>10

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>240

Arg Leu Gln Arg Arg Arg Gln Thr Gln Val

 1               5                  10

<210>241

<211>10

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>241

Arg Leu Gln Arg Arg Arg Glu Thr Ala Leu

 1               5                  10

<210>242

<211>10

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>242

Thr Ser Arg Gln Ala Thr Glu Ser Thr Val

 1               5                  10

<210>243

<211>10

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>243

Arg Arg Arg Thr Arg Gln Glu Thr Gln Val

 1               5                  10

<210>244

<211>10

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>244

Arg Arg Arg Glu Ala Thr Glu Thr Gln Val

 1               5                  10

<210>245

<211>10

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>245

Arg Pro Arg Arg Gln Thr Glu Thr Gln Val

 1               5                  10

<210>246

<211>10

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>246

Arg His Thr Thr Ala Thr Glu Ser Ala Val

 1               5                  10

<210>247

<211>10

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>247

Thr Ser Arg Gln Ala Thr Glu Ser Thr Val

 1               5                  10

<210>248

<211>10

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>248

Arg Cys Trp Arg Pro Ser Ala Thr Val Val

 1               5                  10

<210>249

<211>10

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>249

Pro Pro Arg Gln Arg Ser Glu Thr Gln Val

 1               5                  10

<210>250

<211>24

<212>DNA

<213>智人(Homo sapiens)

<400>250

aaaagatcta caatactatg gcgc                                         24

<210>251

<211>26

<212>DNA

<213>智人(Homo sapiens)

<400>251

agggaattcc agacttaata ttatac                                       26

<210>252

<211>26

<212>DNA

<213>智人(Homo sapiens)

<400>252

aaaggatcca ttttatgcac caaaag                                       26

<210>253

<211>28

<212>DNA

<213>智人(Homo sapiens)

<400>253

atggaattct atctccatgc atgattac                                     28

<210>254

<211>26

<212>DNA

<213>智人(Homo sapiens)

<400>254

gaggaattca ccacaatact atggcg                                       26

<210>255

<211>26

<212>DNA

<213>智人(Homo sapiens)

<400>255

aggagatctc atacttaata ttatac                                       26

<210>256

<211>27

<212>DNA

<213>智人(Homo sapiens)

<400>256

ttgagatctt cagcgtcgtt ggagtcg                                      27

<210>257

<211>26

<212>DNA

<213>智人(Homo sapiens)

<400>257

aaagaattca ttttatgcac caaaag                                       26

<210>258

<211>28

<212>DNA

<213>智人(Homo sapiens)

<400>258

atgggatcct atctccatgc atgattac                                     28

<210>259

<211>32

<212>DNA

<213>智人(Homo sapiens)

<400>259

ctgggatcct catcaacgtg ttcttgatga tc                                32

<210>260

<211>27

<212>DNA

<213>智人(Homo sapiens)

<400>260

aagaaagctt tttatgcacc aaaagag                                      27

<210>261

<211>29

<212>DNA

<213>智人(Homo sapiens)

<400>261

aatcaagctt tatctccatg catgattac                                    29

<210>262

<211>30

<212>DNA

<213>智人(Homo sapiens)

<400>262

gctgaagctt tcaacgtgtt cttgatgatc                                   30

<210>263

<211>27

<212>DNA

<213>智人(Homo sapiens)

<400>263

aagcgtcgac tttatgcacc aaaagag                                      27

<210>264

<211>29

<212>DNA

<213>智人(Homo sapiens)

<400>264

aatgctcgag tatctccatg catgattac                                    29

<210>265

<211>30

<212>DNA

<213>智人(Homo sapiens)

<400>265

gctgctcgag tcaacgtgtt cttgatgatc                                   30

<210>266

<211>26

<212>DNA

<213>智人(Homo sapiens)

<400>266

agaagtcgac cacaatacta tggcgc                                       26

<210>267

<211>27

<212>DNA

<213>智人(Homo sapiens)

<400>267

taggctcgag catacttaat attatac                                      27

<210>268

<211>28

<212>DNA

<213>智人(Homo sapiens)

<400>268

cttgctcgag tcagcgtcgt tggagtcg                                     28

<210>269

<211>26

<212>DNA

<213>智人(Homo sapiens)

<400>269

agaaaagctt cacaatacta tggcgc                                       26

<210>270

<211>27

<212>DNA

<213>智人(Homo sapiens)

<400>270

tagaagcttg catacttaat attatac                                      27

<210>271

<211>28

<212>DNA

<213>智人(Homo sapiens)

<400>271

cttgaagctt tcagcgtcgt tgaggtcg                                     28

<210>272

<211>225

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>272

Met Ser Pro Ile Leu Gly Tyr Trp Lys Ile Lys Gly Leu Val Gln Pro

 1               5                  10                  15

Thr Arg Leu Leu Leu Glu Tyr Leu Glu Glu Lys Tyr Glu Glu His Leu

            20                  25                  30

Tyr Glu Arg Asp Glu Gly Asp Lys Trp Arg Asn Lys Lys Phe Glu Leu

        35                  40                  45

Gly Leu Glu Phe Pro Asn Leu Pro Tyr Tyr Ile Asp Gly Asp Val Lys

    50                  55                  60

Leu Thr Gln Ser Met Ala Ile Ile Arg Tyr Ile Ala Asp Lys His Asn

65                  70                  75                  80

Met Leu Gly Gly Cys Pro Lys Glu Arg Ala Glu Ile Ser Met Leu Glu

                85                  90                  95

Gly Ala Val Leu Asp Ile Arg Tyr Gly Val Ser Arg Ile Ala Tyr Ser

            100                 105                 110

Lys Asp Phe Glu Thr Leu Lys Val Asp Phe Leu Ser Lys Leu Pro Glu

        115                 120                 125

Met Leu Lys Met Phe Glu Asp Arg Leu Cys His Lys Thr Tyr Leu Asn

    130                 135                 140

Gly Asp His Val Thr His Pro Asp Phe Met Leu Tyr Asp Ala Leu Asp

145                 150                 155                 160

Val Val Leu Tyr Met Asp Pro Met Cys Leu Asp Ala Phe Pro Lys Leu

                165                 170                 175

Val Cys Phe Lys Lys Arg Ile Glu Ala Ile Pro Gln Ile Asp Lys Tyr

            180                 185                 190

Leu Lys Ser Ser Lys Tyr Ile Ala Trp Pro Leu Gln Gly Trp Gln Ala

        195                 200                 205

Thr Phe Gly Gly Gly Asp His Pro Pro Lys Ser Asp Leu Ile Glu Gly

    210                 215                 220

Arg

225

<210>273

<211>24

<212>DNA

<213>智人(Homo sapiens)

<400>273

aatggggatc cagctcatta aagg                                         24

<210>274

<211>24

<212>DNA

<213>智人(Homo sapiens)

<400>274

atacatactt gtggaattcg ccac                                         24

<210>275

<211>26

<212>DNA

<213>智人(Homo sapiens)

<400>275

cacggatccc ttctgagttg aaaggc                                       26

<210>276

<211>30

<212>DNA

<213>智人(Homo sapiens)

<400>276

tatgaattcc atctggatca aaaggcaatg                                   30

<210>277

<211>30

<212>DNA

<213>智人(Homo sapiens)

<400>277

cagggatcca aagagttgaa attcacaagc                                    30

<210>278

<211>27

<212>DNA

<213>智人(Homo sapiens)

<400>278

acggaattct gcagcgactg ccgcgtc                                       27

<210>279

<211>23

<212>DNA

<213>智人(Homo sapiens)

<400>279

aggatccaga tgtcctacat ccc                                          23

<210>280

<211>23

<212>DNA

<213>智人(Homo sapiens)

<400>280

ggaattcatg gactgctgca cgg                                          23

<210>281

<211>28

<212>DNA

<213>智人(Homo sapiens)

<400>281

agagaattct cgagatgtcc tacatccc                                     28

<210>282

<211>27

<212>DNA

<213>智人(Homo sapiens)

<400>282

tgggaattcc taggacagca tggactg                                      27

<210>283

<211>25

<212>DNA

<213>智人(Homo sapiens)

<400>283

ctaggatccg ggccagccgg tcacc                                        25

<210>284

<211>29

<212>DNA

<213>智人(Homo sapiens)

<400>284

gacggatccc cctgctgcac ggccttctg                                    29

<210>285

<211>29

<212>DNA

<213>智人(Homo sapiens)

<400>285

gacgaattcc cctgctgcac ggccttctg                                    29

<210>286

<211>25

<212>DNA

<213>智人(Homo sapiens)

<400>286

ctagaattcg ggccagccgg tcacc                                        25

<210>287

<211>82

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>287

Leu Ile Lys Gly Pro Lys Gly Leu Gly Phe Ser Ile Ala Gly Gly Val

 1               5                  10                  15

Gly Asn Gln His Ile Pro Gly Asp Asn Ser Ile Tyr Val Thr Lys Ile

            20                  25                  30

Ile Glu Gly Gly Ala Ala His Lys Asp Gly Lys Leu Gln Ile Gly Asp

        35                  40                  45

Lys Leu Leu Ala Val Asn Asn Val Cys Leu Glu Glu Val Thr His Glu

50                  55                  60

Glu Ala Val Thr Ala Leu Lys Asn Thr Ser Asp Phe Val Tyr Leu Lys

65                  70                  75                  80

Val Ala

<210>288

<211>101

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>288

Pro Ser Glu Leu Lys Gly Lys Phe Ile His Thr Lys Leu Arg Lys Ser

 1               5                  10                  15

Ser Arg Gly Phe Gly Phe Thr Val Val Gly Gly Asp Glu Pro Asp Glu

            20                  25                  30

Phe Leu Gln Ile Lys Ser Leu Val Leu Asp Gly Pro Ala Ala Leu Asp

        35                  40                  45

Gly Lys Met Glu Thr Gly Asp Val Ile Val Ser Val Asn Asp Thr Cys

    50                  55                  60

Val Leu Gly His Thr His Ala Gln Val Val Lys Ile Phe Gln Ser Ile

65                  70                  75                  80

Pro Ile Gly Ala Ser Val Asp Leu Glu Leu Cys Arg Gly Tyr Pro Leu

                85                  90                  95

Pro Phe Asp Pro Asp

            100

<210>289

<211>102

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>289

Gln Arg Val Glu Ile His Lys Leu Arg Gln Gly Glu Asn Leu Ile Leu

 1               5                  10                  15

Gly Phe Ser Ile Gly Gly Gly Ile Asp Gln Asp Pro Ser Gln Asn Pro

            20                  25                  30

Phe Ser Glu Asp Lys Thr Asp Lys Gly Ile Tyr Val Thr Arg Val Ser

        35                  40                  45

Glu Gly Gly Pro Ala Glu Ile Ala Gly Leu Gln Ile Gly Asp Lys Ile

    50                  55                  60

Met Gln Val Asn Gly Trp Asp Met Thr Met Val Thr His Asp Gln Ala

65                  70                  75                  80

Arg Lys Arg Leu Thr Lys Arg Ser Glu Glu Val Val Arg Leu Leu Val

                85                  90                  95

Thr Arg Gln Ser Leu Gln

            100

<210>290

<211>122

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>290

Met Ser Tyr Ile Pro Gly Gln Pro Val Thr Ala Val Val Gln Arg Val

 1               5                  10                  15

Glu Ile His Lys Leu Arg Gln Gly Glu Asn Leu Ile Leu Gly Phe Ser

            20                  25                  30

Ile Gly Gly Gly Ile Asp Gln Asp Pro Ser Gln Asn Pro Phe Ser Glu

        35                  40                  45

Asp Lys Thr Asp Lys Gly Ile Tyr Val Thr Arg Val Ser Glu Gly Gly

    50                  55                  60

Pro Ala Glu Ile Ala Gly Leu Gln Ile Gly Asp Lys Ile Met Gln Val

65                  70                  75                  80

Asn Gly Trp Asp Met Thr Met Val Thr His Asp Gln Ala Arg Lys Arg

                85                  90                  95

Leu Thr Lys Arg Ser Glu Glu Val Val Arg Leu Leu Val Thr Arg Gln

            100                 105                 110

Ser Leu Gln Lys Ala Val Gln Gln Ser Met

        115                 120

<210>291

<211>125

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>291

Glu Met Ser Tyr Ile Pro Gly Gln Pro Val Thr Ala Val Val Gln Arg

 1               5                  10                  15

Val Glu Ile His Lys Leu Arg Gln Gly Glu Asn Leu Ile Leu Gly Phe

            20                  25                  30

Ser Ile Gly Gly Gly Ile Asp Gln Asp Pro Ser Gln Asn Pro Phe Ser

        35                  40                  45

Glu Asp Lys Thr Asp Lys Gly Ile Tyr Val Thr Arg Val Ser Glu Gly

    50                  55                  60

Gly Pro Ala Glu Ile Ala Gly Leu Gln Ile Gly Asp Lys Ile Met Gln

65                  70                  75                  80

Val Asn Gly Trp Asp Met Thr Met Val Thr His Asp Gln Ala Arg Lys

                85                  90                  95

Arg Leu Thr Lys Arg Ser Glu Glu Val Val Arg Leu Leu Val Thr Arg

            100                 105                 110

Gln Ser Leu Gln Lys Ala Val Gln Gln Ser Met Leu Ser

        115                 120                 125

<210>292

<211>117

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>292

Pro Gly Gln Pro Val Thr Ala Val Val Gln Arg Val Glu Ile His Lys

 1               5                  10                  15

Leu Arg Gln Gly Glu Asn Leu Ile Leu Gly Phe Ser Ile Gly Gly Gly

            20                  25                  30

Ile Asp Gln Asp Pro Ser Gln Asn Pro Phe Ser Glu Asp Lys Thr Asp

        35                  40                  45

Lys Gly Ile Tyr Val Thr Arg Val Ser Glu Gly Gly Pro Ala Glu Ile

    50                  55                  60

Ala Gly Leu Gln Ile Gly Asp Lys Ile Met Gln Val Asn Gly Trp Asp

65                  70                  75                  80

Met Thr Met Val Thr His Asp Gln Ala Arg Lys Arg Leu Thr Lys Arg

                85                  90                  95

Ser Glu Glu Val Val Arg Leu Leu Val Thr Arg Gln Ser Leu Gln Lys

            100                 105                 110

Ala Val Gln Gln Ser

        115

<210>293

<211>72

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>293

Arg Lys Ser Ser Arg Gly Phe Gly Phe Thr Val Val Gly Gly Asp Glu

 1               5                  10                  15

Pro Asp Glu Phe Leu Gln Ile Lys Ser Leu Val Leu Asp Gly Pro Ala

            20                  25                  30

Ala Leu Asp Gly Lys Met Glu Thr Gly Asp Val Ile Val Ser Val Asn

        35                  40                  45

Asp Thr Cys Val Leu Gly His Thr His Ala Gln Val Val Lys Ile Phe

   50                  55                  60

Gln Ser Ile Pro Ile Gly Ala Ser

65                  70

<210>294

<211>76

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>294

Phe Ile His Thr Lys Leu Arg Lys Ser Ser Arg Gly Phe Gly Phe Thr

 1               5                  10                  15

Val Val Gly Gly Asp Glu Pro Asp Glu Phe Leu Gln Ile Lys Ser Leu

            20                  25                  30

Val Leu Asp Gly Pro Ala Ala Leu Asp Gly Lys Met Glu Thr Gly Asp

        35                  40                  45

Val Ile Val Ser Val Asn Asp Thr Cys Val Leu Gly His Thr His Ala

    50                  55                  60

Gln Val Val Lys Ile Phe Gln Ser Ile Pro Ile Gly

65                  70                  75

<210>295

<211>85

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>295

Phe Ile His Thr Lys Leu Arg Lys Ser Ser Arg Gly Phe Gly Phe Thr

 1               5                  10                  15

Val Val Gly Gly Asp Glu Pro Asp Glu Phe Leu Gln Ile Lys Ser Leu

            20                  25                  30

Val Leu Asp Gly Pro Ala Ala Leu Asp Gly Lys Met Glu Thr Gly Asp

        35                  40                  45

Val Ile Val Ser Val Asn Asp Thr Cys Val Leu Gly His Thr His Ala

    50                  55                  60

Gln Val Val Lys Ile Phe Gln Ser Ile Pro Ile Gly Ala Ser Val Asp

65                  70                  75                  80

Leu Glu Leu Cys Arg

                85

<210>296

<211>78

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>296

Lys Ser Ser Arg Gly Phe Gly Phe Thr Val Val Gly Gly Asp Glu Pro

 1               5                  10                  15

Asp Glu Phe Leu Gln Ile Lys Ser Leu Val Leu Asp Gly Pro Ala Ala

            20                  25                  30

Leu Asp Gly Lys Met Glu Thr Gly Asp Val Ile Val Ser Val Asn Asp

        35                  40                  45

Thr Cys Val Leu Gly His Thr His Ala Gln Val Val Lys Ile Phe Gln

    50                  55                  60

Ser Ile Pro Ile Gly Ala Ser Val Asp Leu Glu Leu Cys Arg

65                  70                  75

<210>297

<211>88

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>297

Phe Ile His Thr Lys Leu Arg Lys Ser Ser Arg Gly Phe Gly Phe Thr

 1               5                  10                  15

Val Val Gly Gly Asp Glu Pro Asp Glu Phe Leu Gln Ile Lys Ser Leu

            20                  25                  30

Val Leu Asp Gly Pro Ala Ala Leu Asp Gly Lys Met Glu Thr Gly Asp

        35                  40                  45

Val Ile Val Ser Val Asn Asp Thr Cys Val Leu Gly His Thr His Ala

    50                  55                  60

Gln Val Val Lys Ile Phe Gln Ser Ile Pro Ile Gly Ala Ser Val Asp

65                  70                  75                  80

Leu Glu Leu Cys Arg Gly Tyr Pro

                85

<210>298

<211>88

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>298

Lys Gly Lys Phe Ile His Thr Lys Leu Arg Lys Ser Ser Arg Gly Phe

 1               5                  10                  15

Gly Phe Thr Val Val Gly Gly Asp Glu Pro Asp Glu Phe Leu Gln Ile

            20                  25                  30

Lys Ser Leu Val Leu Asp Gly Pro Ala Ala Leu Asp Gly Lys Met Glu

        35                  40                  45

Thr Gly Asp Val Ile Val Ser Val Asn Asp Thr Cys Val Leu Gly His

    50                  55                  60

Thr His Ala Gln Val Val Lys Ile Phe Gln Ser Ile Pro Ile Gly Ala

65                  70                  75                  80

Ser Val Asp Leu Glu Leu Cys Arg

                85

<210>299

<211>81

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>299

Lys Gly Lys Phe Ile His Thr Lys Leu Arg Lys Ser Ser Arg Gly Phe

 1               5                  10                  15

Gly Phe Thr Val Val Gly Gly Asp Glu Pro Asp Glu Phe Leu Gln Ile

            20                  25                  30

Lys Ser Leu Val Leu Asp Gly Pro Ala Ala Leu Asp Gly Lys Met Glu

        35                  40                  45

Thr Gly Asp Val Ile Val Ser Val Asn Asp Thr Cys Val Leu Gly His

    50                  55                  60

Thr His Ala Gln Val Val Lys Ile Phe Gln Ser Ile Pro Ile Gly Ala

65                  70                  75                  80

Ser

<210>300

<211>94

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>300

Glu Leu Lys Gly Lys Phe Ile His Thr Lys Leu Arg Lys Ser Ser Arg

 1               5                  10                  15

Gly Phe Gly Phe Thr Val Val Gly Gly Asp Glu Pro Asp Glu Phe Leu

            20                  25                  30

Gln Ile Lys Ser Leu Val Leu Asp Gly Pro Ala Ala Leu Asp Gly Lys

        35                  40                  45

Met Glu Thr Gly Asp Val Ile Val Ser Val Asn Asp Thr Cys Val Leu

    50                  55                  60

Gly His Thr His Ala Gln Val Val Lys Ile Phe Gln Ser Ile Pro Ile

65                  70                  75                  80

Gly Ala Ser Val Asp Leu Glu Leu Cys Arg Gly Tyr Pro Leu

                85                  90

<210>301

<211>99

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>301

Ser Glu Leu Lys Gly Lys Phe Ile His Thr Lys Leu Arg Lys Ser Ser

 1               5                  10                  15

Arg Gly Phe Gly Phe Thr Val Val Gly Gly Asp Glu Pro Asp Glu Phe

            20                  25                  30

Leu Gln Ile Lys Ser Leu Val Leu Asp Gly Pro Ala Ala Leu Asp Gly

        35                  40                  45

Lys Met Glu Thr Gly Asp Val Ile Val Ser Val Asn Asp Thr Cys Val

    50                  55                  60

Leu Gly His Thr His Ala Gln Val Val Lys Ile Phe Gln Ser Ile Pro

65                  70                  75                  80

Ile Gly Ala Ser Val Asp Leu Glu Leu Cys Arg Gly Tyr Pro Leu Pro

                85                  90                  95

Phe Asp Pro

<210>302

<211>72

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>302

Arg Lys Ser Ala Arg Gly Phe Gly Phe Thr Val Val Gly Gly Asp Glu

 1               5                  10                  15

Pro Asp Glu Phe Leu Gln Ile Lys Ser Leu Val Leu Asp Gly Pro Ala

            20                  25                  30

Ala Leu Asp Gly Lys Met Glu Thr Gly Asp Val Ile Val Ser Val Asn

        35                  40                  45

Asp Thr Cys Val Leu Gly His Thr His Ala Gln Val Val Lys Ile Phe

    50                  55                  60

Gln Ser Ile Pro Ile Gly Ala Ser

65                  70

<210>303

<211>72

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>303

Arg Lys Ser Ser Arg Gly Phe Gly Phe Thr Val Val Gly Gly Glu Glu

 1               5                  10                  15

Pro Asp Glu Phe Leu Gln Ile Lys Ser Leu Val Leu Asp Gly Pro Ala

            20                  25                  30

Ala Leu Asp Gly Lys Met Glu Thr Gly Asp Val Ile Val Ser Val Asn

        35                  40                  45

Asp Thr Cys Val Leu Gly His Thr His Ala Gln Val Val Lys Ile Phe

    50                  55                  60

Gln Ser Ile Pro Ile Gly Ala Ser

65                  70

<210>304

<211>72

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>304

Arg Lys Ser Ser Arg Gly Phe Gly Phe Thr Val Val Gly Gly Asp Glu

 1               5                  10                  15

Pro Asp Glu Phe Leu Gln Leu Lys Ser Leu Val Leu Asp Gly Pro Ala

            20                  25                  30

Ala Leu Asp Gly Lys Met Glu Thr Gly Asp Val Ile Val Ser Val Asn

        35                  40                  45

Asp Thr Cys Val Leu Gly His Thr His Ala Gln Val Val Lys Ile Phe

    50                  55                  60

Gln Ser Ile Pro Ile Gly Ala Ser

65                  70

<210>305

<211>72

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>305

Arg Lys Ser Ser Arg Gly Phe Gly Phe Thr Val Val Gly Gly Asp Glu

 1               5                  10                  15

Pro Asp Glu Phe Leu Gln Ile Lys Ser Leu Val Leu Asp Gly Pro Ala

            20                  25                  30

Ser Leu Asp Gly Lys Met Glu Thr Gly Asp Val Ile Val Ser Val Asn

        35                  40                  45

Asp Thr Cys Val Leu Gly His Thr His Ala Gln Val Val Lys Ile Phe

    50                  55                  60

Gln Ser Ile Pro Ile Gly Ala Ser

65                  70

<210>306

<211>72

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>306

Arg Lys Ser Ser Arg Gly Phe Gly Phe Thr Val Val Gly Gly Asp Glu

 1               5                  10                  15

Pro Asp Glu Phe Leu Gln Ile Lys Ser Leu Val Leu Asp Gly Pro Ala

            20                  25                  30

Ala Leu Asp Gly Arg Met Glu Thr Gly Asp Val Ile Val Ser Val Asn

        35                  40                  45

Asp Thr Cys Val Leu Gly His Thr His Ala Gln Val Val Lys Ile Phe

    50                  55                  60

Gln Ser Ile Pro Ile Gly Ala Ser

65                  70

<210>307

<211>72

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>307

Arg Lys Ser Ser Arg Gly Phe Gly Phe Thr Val Val Gly Gly Asp Glu

 1               5                  10                  15

Pro Asp Glu Phe Leu Gln Ile Lys Ser Leu Val Leu Asp Gly Pro Ala

            20                  25                  30

Ala Leu Asp Gly Lys Met Glu Thr Gly Asp Val Ile Val Ala Val Asn

        35                  40                  45

Asp Thr Cys Val Leu Gly His Thr His Ala Gln Val Val Lys Ile Phe

    50                  55                  60

Gln Ser Ile Pro Ile Gly Ala Ser

65                  70

<210>308

<211>72

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>308

Arg Lys Ser Ser Arg Gly Phe Gly Phe Thr Val Val Gly Gly Asp Glu

 1               5                  10                  15

Pro Asp Glu Phe Leu Gln Ile Lys Ser Leu Val Leu Asp Gly Pro Ala

            20                  25                  30

Ala Leu Asp Gly Lys Met Glu Thr Gly Asp Val Ile Val Ser Val Asn

        35                  40                  45

Glu Thr Cys Val Leu Gly His Thr His Ala Gln Val Val Lys Ile Phe

    50                  55                  60

Gln Ser Ile Pro Ile Gly Ala Ser

65                  70

<210>309

<211>72

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>309

Arg Lys Ser Ser Arg Gly Phe Gly Phe Thr Val Val Gly Gly Asp Glu

 1               5                  10                  15

Pro Asp Glu Phe Leu Gln Ile Lys Ser Leu Val Leu Asp Gly Pro Ala

            20                  25                  30

Ala Leu Asp Gly Lys Met Glu Thr Gly Asp Val Ile Val Ser Val Asn

        35                  40                  45

Asp Thr Cys Leu Leu Gly His Thr His Ala Gln Val Val Lys Ile Phe

    50                  55                  60

Gln Ser Ile Pro Ile Gly Ala Ser

65                  70

<210>310

<211>72

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>310

Arg Lys Ser Ser Arg Gly Phe Gly Phe Thr Val Val Gly Gly Asp Glu

 1               5                  10                  15

Pro Asp Glu Phe Leu Gln Ile Lys Ser Leu Val Leu Asp Gly Pro Ala

            20                  25                  30

Ala Leu Asp Gly Lys Met Glu Thr Gly Asp Val Ile Val Ser Val Asn

        35                  40                  45

Asp Thr Cys Val Leu Gly His Thr His Ser Gln Val Val Lys Ile Phe

    50                  55                  60

Gln Ser Ile Pro Ile Gly Ala Ser

65                  70

<210>311

<211>72

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>311

Arg Lys Ser Ser Arg Gly Phe Gly Phe Thr Val Val Gly Gly Asp Glu

 1               5                  10                  15

Pro Asp Glu Phe Leu Gln Ile Lys Ser Leu Val Leu Asp Gly Pro Ala

            20                  25                  30

Ala Leu Asp Gly Lys Met Glu Thr Gly Asp Val Ile Val Ser Val Asn

        35                  40                  45

Asp Thr Cys Val Leu Gly His Thr His Ala Gln Val Val Lys Leu Phe

    50                  55                  60

Gln Ser Ile Pro Ile Gly Ala Ser

65                  70

<210>312

<211>72

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>312

Arg Lys Ser Ser Arg Gly Phe Gly Phe Thr Val Val Gly Gly Asp Glu

 1               5                  10                  15

Pro Asp Glu Phe Leu Gln Ile Lys Ser Leu Val Leu Asp Gly Pro Ala

            20                  25                  30

Ala Leu Asp Gly Lys Met Glu Thr Gly Asp Val Ile Val Ser Val Asn

        35                  40                  45

Asp Thr Cys Val Leu Gly His Thr His Ala Gln Val Val Lys Ile Phe

    50                  55                  60

Gln Ser Ile Pro Ile Gly Ser Ser

65                  70

<210>313

<211>72

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>313

Arg Lys Ser Thr Arg Gly Phe Gly Phe Thr Val Val Gly Gly Asp Glu

 1               5                  10                  15

Pro Asp Glu Phe Leu Gln Ile Lys Ser Leu Val Leu Asp Gly Pro Ala

            20                  25                  30

Ala Leu Asp Gly Lys Met Glu Thr Gly Asp Val Ile Val Ser Val Asn

        35                  40                  45

Asp Thr Cys Val Leu Gly His Thr His Ala Gln Val Val Lys Ile Phe

    50                  55                  60

Gln Ser Ile Pro Ile Gly Ala Ser

65                  70

<210>314

<211>72

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>314

Arg Lys Ser Ser Arg Gly Phe Gly Phe Thr Val Val Gly Gly Asp Glu

 1               5                  10                  15

Pro Gly Glu Phe Leu Gln Ile Lys Ser Leu Val Leu Asp Gly Pro Ala

            20                  25                  30

Ala Leu Asp Gly Lys Met Glu Thr Gly Asp Val Ile Val Ser Val Asn

        35                  40                  45

Asp Thr Cys Val Leu Gly His Thr His Ala Gln Val Val Lys Ile Phe

    50                  55                  60

Gln Ser Ile Pro Ile Gly Ala Ser

65                  70

<210>315

<211>72

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>315

Arg Lys Ser Ser Arg Gly Phe Gly Phe Thr Val Val Gly Gly Asp Glu

 1               5                  10                  15

Pro Asp Glu Phe Leu Gln Ile Lys Ser Leu Ala Leu Asp Gly Pro Ala

            20                  25                  30

Ala Leu Asp Gly Lys Met Glu Thr Gly Asp Val Ile Val Ser Val Asn

        35                  40                  45

Asp Thr Cys Val Leu Gly His Thr His Ala Gln Val Val Lys Ile Phe

    50                  55                  60

Gln Ser Ile Pro Ile Gly Ala Ser

65                  70

<210>316

<211>72

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>316

Arg Lys Ser Ser Arg Gly Phe Gly Phe Thr Val Val Gly Gly Asp Glu

 1               5                  10                  15

Pro Asp Glu Phe Leu Gln Ile Lys Ser Leu Val Leu Asp Gly Pro Ala

            20                  25                  30

Ala Leu Ala Gly Lys Met Glu Thr Gly Asp Val Ile Val Ser Val Asn

        35                  40                  45

Asp Thr Cys Val Leu Gly His Thr His Ala Gln Val Val Lys Ile Phe

    50                  55                  60

Gln Ser Ile Pro Ile Gly Ala Ser

65                  70

<210>317

<211>72

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>317

Arg Lys Ser Ser Arg Gly Phe Gly Phe Thr Val Val Gly Gly Asp Glu

 1               5                  10                  15

Pro Asp Glu Phe Leu Gln Ile Lys Ser Leu Val Leu Asp Gly Pro Ala

            20                  25                  30

Ala Leu Asp Gly Lys Met Glu Thr Ala Asp Val Ile Val Ser Val Asn

        35                  40                  45

Asp Thr Cys Val Leu Gly His Thr His Ala Gln Val Val Lys Ile Phe

    50                  55                  60

Gln Ser Ile Pro Ile Gly Ala Ser

65                  70

<210>3l8

<211>72

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>318

Arg Lys Ser Ser Arg Gly Phe Gly Phe Thr Val Val Gly Gly Asp Glu

 1               5                  10                  15

Pro Asp Glu Phe Leu Gln Ile Lys Ser Leu Val Leu Asp Gly Pro Ala

            20                  25                  30

Ala Leu Asp Gly Lys Met Glu Thr Gly Asp Val Ile Val Ser Val Asn

        35                  40                  45

Asp Thr Ala Val Leu Gly His Thr His Ala Gln Val Val Lys Ile Phe

    50                  55                  60

Gln Ser Ile Pro Ile Gly Ala Ser

65                  70

<210>319

<211>72

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>319

Arg Lys Ser Ser Arg Gly Phe Gly Phe Thr Val Val Gly Gly Asp Glu

 1               5                  10                  15

Pro Asp Glu Phe Leu Gln Ile Lys Ser Leu Val Leu Asp Gly Pro Ala

            20                  25                  30

Ala Leu Asp Gly Lys Met Glu Thr Gly Asp Val Ile Val Ser Val Asn

        35                  40                  45

Asp Thr Cys Val Leu Gly His Thr His Ala Gln Ala Val Lys Ile Phe

    50                  55                  60

Gln Ser Ile Pro Ile Gly Ala Ser

65                  70

<210>320

<211>72

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>320

Arg Lys Ser Ser Arg Gly Phe Gly Phe Thr Val Val Gly Gly Asp Glu

 1               5                  10                  15

Pro Asp Glu Phe Leu Gln Ile Lys Ser Leu Val Leu Asp Gly Pro Ala

            20                  25                  30

Ala Leu Asp Gly Lys Met Glu Thr Gly Asp Val Ile Val Ser Val Asn

        35                  40                  45

Asp Thr Cys Val Leu Gly His Thr His Ala Gln Val Val Lys Ile Phe

    50                  55                  60

Gln Ser Ile Ala Ile Gly Ala Ser

65                  70

<210>321

<211>72

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>321

Arg Lys Ser Ser Arg Gly Phe Gly Phe Thr Val Val Gly Gly Asp Glu

 1               5                  10                  15

Pro Asp Glu Phe Leu Gln Ile Lys Ser Leu Val Leu Asp Gly Pro Ala

            20                  25                  30

Ala Leu Asp Gly Lys Met Glu Thr Gly Asp Val Ile Val Ser Val Asn

        35                  40                  45

Asp Thr Cys Val Leu Gly His Thr His Ala Gln Val Val Lys Ile Phe

    50                  55                  60

Gln Ser Ile Pro Ile Gly Ala Ala

65                  70

<210>322

<211>72

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>322

Arg Lys Ser Ser Ser Gly Phe Gly Phe Thr Val Val Gly Gly Asp Glu

 1               5                  10                  15

Pro Asp Glu Phe Leu Gln Ile Lys Ser Leu Val Leu Asp Gly Pro Ala

            20                  25                  30

Ala Leu Asp Gly Lys Met Glu Thr Gly Asp Val Ile Val Ser Val Asn

        35                  40                  45

Asp Thr Cys Val Leu Gly His Thr His Ala Gln Val Val Lys Ile Phe

    50                  55                  60

Gln Ser Ile Pro Ile Gly Ala Ser

65                  70

<210>323

<211>72

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>323

Arg Lys Ser Ser Arg Gly Phe Gly Phe Thr Val Val Gly Gly Leu Glu

 1               5                  10                  15

Pro Asp Glu Phe Leu Gln Ile Lys Ser Leu Val Leu Asp Gly Pro Ala

            20                  25                  30

Ala Leu Asp Gly Lys Met Glu Thr Gly Asp Val Ile Val Ser Val Asn

        35                  40                  45

Asp Thr Cys Val Leu Gly His Thr His Ala Gln Val Val Lys Ile Phe

    50                  55                  60

Gln Ser Ile Pro Ile Gly Ala Ser

65                  70

<210>324

<211>72

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>324

Arg Lys Ser Ser Arg Gly Phe Gly Phe Thr Val Val Gly Gly Asp Glu

 1               5                  10                  15

Pro Asp Glu Phe Leu Gln Ile Thr Ser Leu Val Leu Asp Gly Pro Ala

            20                  25                  30

Ala Leu Asp Gly Lys Met Glu Thr Gly Asp Val Ile Val Ser Val Asn

        35                  40                  45

Asp Thr Cys Val Leu Gly His Thr His Ala Gln Val Val Lys Ile Phe

    50                  55                  60

Gln Ser Ile Pro Ile Gly Ala Ser

65                  70

<210>325

<211>72

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>325

Arg Lys Ser Ser Arg Gly Phe Gly Phe Thr Val Val Gly Gly Asp Glu

 1               5                  10                  15

Pro Asp Glu Phe Leu Gln Ile Lys Ser Leu Val Leu Asp Gly Pro Ala

            20                  25                  30

Gly Leu Asp Gly Lys Met Glu Thr Gly Asp Val Ile Val Ser Val Asn

        35                  40                  45

Asp Thr Cys Val Leu Gly His Thr His Ala Gln Val Val Lys Ile Phe

    50                  55                  60

Gln Ser Ile Pro Ile Gly Ala Ser

65                  70

<210>326

<211>72

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>326

Arg Lys Ser Ser Arg Gly Phe Gly Phe Thr Val Val Gly Gly Asp Glu

 1               5                  10                  15

Pro Asp Glu Phe Leu Gln Ile Lys Ser Leu Val Leu Asp Gly Pro Ala

            20                  25                  30

Ala Leu Asp Gly Lys Met Glu Thr Ser Asp Val Ile Val Ser Val Asn

        35                  40                  45

Asp Thr Cys Val Leu Gly His Thr His Ala Gln Val Val Lys Ile Phe

    50                  55                  60

Gln Ser Ile Pro Ile Gly Ala Ser

65                  70

<210>327

<211>72

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>327

Arg Lys Ser Ser Arg Gly Phe Gly Phe Thr Val Val Gly Gly Asp Glu

 1               5                  10                  15

Pro Asp Glu Phe Leu Gln Ile Lys Ser Leu Val Leu Asp Gly Pro Ala

            20                  25                  30

Ala Leu Asp Gly Lys Met Glu Thr Gly Asp Val Ile Val Ser Val Lys

        35                  40                  45

Asp Thr Cys Val Leu Gly His Thr His Ala Gln Val Val Lys Ile Phe

    50                  55                  60

Gln Ser Ile Pro Ile Gly Ala Ser

65                  70

<210>328

<211>72

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>328

Arg Lys Ser Ser Arg Gly Phe Gly Phe Thr Val Val Gly Gly Asp Glu

 1               5                  10                  15

Pro Asp Glu Phe Leu Gln Ile Lys Ser Leu Val Leu Asp Gly Pro Ala

            20                  25                  30

Ala Leu Asp Gly Lys Met Glu Thr Gly Asp Val Ile Val Ser Val Asn

        35                  40                  45

Asp Thr Cys Val Leu Phe His Thr His Ala Gln Val Val Lys Ile Phe

    50                  55                  60

Gln Ser Ile Pro Ile Gly Ala Ser

65                  70

<210>329

<211>72

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>329

Arg Lys Ser Ser Arg Gly Phe Gly Phe Thr Val Val Gly Gly Asp Glu

 1               5                  10                  15

Pro Asp Glu Phe Leu Gln Ile Lys Ser Leu Val Leu Asp Gly Pro Ala

            20                  25                  30

Ala Leu Asp Gly Lys Met Glu Thr Gly Asp Val Ile Val Ser Val Asn

        35                  40                  45

Asp Thr Cys Val Leu Gly His Thr His Ala Gln Asn Val Lys Ile Phe

    50                  55                  60

Gln Ser Ile Pro Ile Gly Ala Ser

65                  70

<210>330

<211>72

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>330

Arg Lys Ser Ser Arg Gly Phe Gly Phe Thr Val Val Gly Gly Asp Glu

 1               5                  10                  15

Pro Asp Glu Phe Leu Gln Ile Lys Ser Leu Val Leu Asp Gly Pro Ala

            20                  25                  30

Ala Leu Asp Gly Lys Met Glu Thr Gly Asp Val Ile Val Ser Val Asn

        35                  40                  45

Asp Thr Cys Val Leu Gly His Thr His Ala Gln Val Val Lys Ile Phe

    50                  55                  60

Gln Ser Ile Pro Ile Ser Ala Ser

65                  70

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