水牛属产品分子诊断试剂盒
阅读：495发布：2020-05-13
专利汇可以提供水牛属产品分子诊断试剂盒专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 公开了一种 水 牛 属产品 分子诊断 试剂 盒 ，包括盒体，其特征是盒体内设有以水牛属特异性基因位点为 基础 设计的水牛属特异性引物对和PCR体系。原理是通过测序和比对分析，获得属间物种特异性基因位点，采用PCR扩增和 电泳 检测方法解决了牛亚科内水牛属与其它属间物种产(制)品的 鉴别 难题。试剂盒所采用的分子 生物 学试剂均为商品化产品，对水牛属产(制)品鉴别检出率很高， 假阳性 率低，结果稳定，重复性好，可应用于食品检验技术领域和畜牧技术领域。，下面是水牛属产品分子诊断试剂盒专利的具体信息内容。
技术领域
本发明涉及水牛属产(制)品的检验、诊断用的试剂盒，属于分 子生物学技术领域。
背景技术
当前鉴别水牛属产(制)品所采用的主要方法是通过观察(肉眼 或显微镜)和气味辨别。在鉴别与水牛同为牛亚科的其它牛种产(制) 品时，上述几种方法均无法区分，这是由于动物的表型由编码蛋白的 基因所决定，牛亚科内物种间同源蛋白差异极小，它们的产(制)品 外观、气味甚至纹理极其相似。在科分类及以上物种产(制)品间鉴 别，如牛羊源性成分的鉴别检测，已有与本发明类似的PCR鉴别过程， 但所采用的基因位点无法应用于亚科内物种间的鉴别；而且，科分类 及以上物种产(制)品间表型差异较大，其鉴别工作，除了无法观察 或其它感官鉴别的情形，可以通过观察和气味辨别替代。
发明内容
本发明的目的是针对现有鉴别水牛属产(制)品的方法存在的不 足，提供一种检出率高、假阳性率低，使用方便的水牛属产(制)品 分子诊断试剂盒。
本发明的目的是这样实现的：水牛属产品分子诊断试剂盒，包括 盒体，其特征是盒体内设有以水牛属特异性基因位点为基础设计的水 牛属特异性引物对和PCR体系。所述的水牛属特异性引物对，即上游： 5’-GCGCTCCACAGAATCTCGA-3’，下游：5’-GAGTGCAGCAGGGGCCAGC-3’的 部分或全部。所述的PCR体系中Mgcl2浓度为1mM，Taq酶1U/25μl， 退火温度60-64℃。
本发明科学合理，通过大量的测序工作和比对分析，获得属间物 种特异性基因位点，采用PCR扩增和电泳检测方法解决了属间物种产 (制)品的鉴别难题。试剂盒所采用的分子生物学试剂均为商品化产 品，对水牛属产(制)品鉴别检出率很高，假阳性率低，结果稳定， 重复性好。经过对29个水牛基因组模板进行PCR反应试验，均检出特 异性扩增条带，检出率很高，在3次水牛、黄牛和牦牛基因组样本的 混合检测试验中，均检出水牛样本，并且未出现假阳性结果。水牛属 产(制)品分子诊断试剂盒，应用于食品检验领域和畜牧技术领域。
附图说明
图1是以水牛、黄牛和牦牛基因组样本同批混合检测，用特异性 引物进行PCR反应，结果获得指示剂位置(200bp左右)附近的水牛 特征条带(203bp)，而黄牛和牦牛基因组样本未见特征条带的图片(采 用其它条件时，三种基因组样本均出现较多条带)，图中：1，2道为 水牛样本；3，4，5道为黄牛样本；6，7，8道为牦牛样本。
图2是对29个水牛样本进行超过40次PCR检测，均检出特征条带 的图片，图中：1-13道为不同水牛个体样本。
本发明的目的是这样实现的：水牛属产品分子诊断试剂盒，包括 盒体，其特征是盒体内设有以水牛属特异性基因位点为基础设计的水 牛属特异性引物对和PCR体系。所述的水牛属特异性引物对，即上游： 5’-GCGCTCCACAGAATCTCGA-3’，下游：5’-GAGTGCAGCAGGGGCCAGC-3’的 部分或全部。所述的PCR体系中Mgcl2浓度为1mM，Taq酶1U/25μl， 退火温度60-64℃。
本发明科学合理，通过大量的测序工作和比对分析，获得属间物 种特异性基因位点，采用PCR扩增和电泳检测方法解决了属间物种产 (制)品的鉴别难题。试剂盒所采用的分子生物学试剂均为商品化产 品，对水牛属产(制)品鉴别检出率很高，假阳性率低，结果稳定， 重复性好。经过对29个水牛基因组模板进行PCR反应试验，均检出特 异性扩增条带，检出率很高，在3次水牛、黄牛和牦牛基因组样本的 混合检测试验中，均检出水牛样本，并且未出现假阳性结果。水牛属 产(制)品分子诊断试剂盒，应用于食品检验领域和畜牧技术领域。
附图说明
图1是以水牛、黄牛和牦牛基因组样本同批混合检测，用特异性 引物进行PCR反应，结果获得指示剂位置(200bp左右)附近的水牛 特征条带(203bp)，而黄牛和牦牛基因组样本未见特征条带的图片(采 用其它条件时，三种基因组样本均出现较多条带)，图中：1，2道为 水牛样本；3，4，5道为黄牛样本；6，7，8道为牦牛样本。
图2是对29个水牛样本进行超过40次PCR检测，均检出特征条带 的图片，图中：1-13道为不同水牛个体样本。
具体实施方式
1、基因组样本的制备参考商品化成套试剂说明和分子生物学实验 手册；
2、根据所制备的不同样本的DNA模板，用本发明中的特异性引物 和试剂按说明要求进行PCR反应；
3、通过琼脂糖凝胶电泳检测(需PCR仪和相应设施)，在指示剂 位置(200bp左右)检测到PCR条带的样本可判定为水牛来源。
图1所示，以水牛、黄牛和牦牛基因组样本同批混合检测，用特 异性引物进行PCR反应，结果获得指示剂位置(200bp左右)附近的 水牛特征条带(203bp)，而黄牛和牦牛基因组样本未见特征条带(采 用其它条件时，三种基因组样本均出现较多条带)，1，2道为水牛样 本；3，4，5道为黄牛样本；6，7，8道为牦牛样本。
图2所示，对29个水牛样本进行超过40次PCR检测，均检出特征 条带，1-13道为不同水牛个体样本。
2、根据所制备的不同样本的DNA模板，用本发明中的特异性引物 和试剂按说明要求进行PCR反应；
3、通过琼脂糖凝胶电泳检测(需PCR仪和相应设施)，在指示剂 位置(200bp左右)检测到PCR条带的样本可判定为水牛来源。
图1所示，以水牛、黄牛和牦牛基因组样本同批混合检测，用特 异性引物进行PCR反应，结果获得指示剂位置(200bp左右)附近的 水牛特征条带(203bp)，而黄牛和牦牛基因组样本未见特征条带(采 用其它条件时，三种基因组样本均出现较多条带)，1，2道为水牛样 本；3，4，5道为黄牛样本；6，7，8道为牦牛样本。
图2所示，对29个水牛样本进行超过40次PCR检测，均检出特征 条带，1-13道为不同水牛个体样本。
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