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用于胃肠系统使用和递送至胃肠系统的生物

阅读:622发布:2020-08-03

专利汇可以提供用于胃肠系统使用和递送至胃肠系统的生物专利检索,专利查询,专利分析的服务。并且本 发明 提供了用于递送至胃肠系统的 氨 氧 化 微 生物 制剂、包含用于递送至胃肠系统的氨氧化制剂的 试剂 盒 、以及用于将氨氧化制剂施用至胃肠系统的设备。提供了将氨氧化微生物引入胃肠系统的方法。提供了用氨氧化微生物制剂 治疗 病症的方法,包括胃肠病症和炎性病症。,下面是用于胃肠系统使用和递送至胃肠系统的生物专利的具体信息内容。

1.向受试者引入生物(AOM)的方法,包括:
向受试者肠内施用包含AOM的制剂。
2.前述权利要求任一项所述的方法,其中肠内施用包括口服、颊、唇下或舌下施用。
3.向受试者引入AOM的方法,包括:
向受试者直肠施用包含AOM的制剂。
4.前述权利要求任一项所述的方法,其中直肠施用包括通过栓剂或灌肠剂施用。
5.前述权利要求任一项所述的方法,其中直肠施用与粪便微生物群移植程序结合。
6.在受试者的胃肠系统中定殖AOM的方法,包括:
向受试者的胃肠系统施用有效量的包含AOM的制剂,
其中所述AOM定殖于胃肠系统的靶组织。
7.改善受试者消化的方法,包括:
向受试者施用有效量的包含AOM的制剂,从而改善受试者的消化。
8.治疗受试者胃肠疾病的方法,包括:
向受试者施用有效量的包含AOM的制剂,从而治疗胃肠疾病。
9.前述权利要求任一项所述的方法,其中施用的量和/或频率足以在受试者的胃肠系
统的至少一部分中增加粘液稠度。
10.前述权利要求任一项的方法,其中所述包含AOM的制剂通过摄入而施用于受试者的
胃肠系统。
11.前述权利要求任一项的方法,其中当施用制剂时,受试者基本上空腹。
12.前述权利要求任一项的方法,其中所述制剂在施用抗生素或清洁肠道制剂后施用。
13.前述权利要求任一项的方法,其中将目标百分比的被施用的AOM转移至受试者的胃
肠系统。
14.前述权利要求任一项的方法,其进一步包括在施用所述制剂后向所述受试者施用

15.前述权利要求任一项的方法,其中施用所述制剂导致与所述受试者摄取的食物或
饮料相关的营养物质的耐受性增加、敏感性降低和/或营养物质的摄取得到改善。
16.前述权利要求任一项所述的方法,其中所述胃肠疾病为炎性病症。
17.前述权利要求任一项所述的方法,其中所述炎性病症为结肠炎、坏死性小肠结肠
炎、炎性肠病、溃疡、克罗恩病、溃疡性结肠炎、乳糜泻、谷蛋白敏感、胃灼热、胰腺炎、阑尾炎、胃炎、胃肠炎、肠易激综合征、或牙齿牙周病症。
18.前述权利要求任一项的方法,其中所述胃肠疾病涉及乳糖、食物或饮料不耐受、
SIBO、吸收不良症、胆道疾病、反流或缺氧。
19.前述权利要求任一项的方法,其中所述炎性病症与基于导管的物质递送相关,该物
质例如为肠内营养。
20.前述权利要求任一项的方法,其中施用在医疗程序之前或之后进行,该医疗程序
如为导管插入术、内窥镜检查或结肠镜检查程序、或牙科程序。
21.前述权利要求任一项所述的方法,其中所述炎性病症为一种或多种以下微生物引
起的感染:幽螺杆菌、艰难梭状芽胞杆菌、霍乱、阿米巴痢疾、小肠结肠炎耶尔森氏菌、肠炎沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌、宋内志贺菌和大肠杆菌。
22.前述权利要求任一项所述的方法,其中所述胃肠疾病的特征为便秘或腹泻。
23.前述权利要求任一项所述的方法,其中所述胃肠疾病的特征为高氨血症。
24.前述权利要求任一项所述的方法,其中所述胃肠疾病包括肝衰竭,例如急性或慢性
肝衰竭。
25.前述权利要求任一项所述的方法,其中沉积组织、靶组织或这两者为受试者的粘
膜。
26.前述权利要求任一项所述的方法,其中沉积组织、靶组织或这两者与受试者的胃相
关。
27.前述权利要求任一项所述的方法,其中沉积组织、靶组织或这两者为受试者的唾液
腺、口腔、咽部、舌、食管、肝、胆囊、总胆管、结肠(横向、上行和/或下行)、盲肠、阑尾、直肠、肛门、胰腺、胰管、大肠、或小肠(十二指肠、空肠、和/或回肠)。
28.前述权利要求任一项所述的方法,其中所述靶组织与所需的局部效果相关。
29.前述权利要求任一项所述的方法,其中所述靶组织与所需的全身效果相关。
30.前述权利要求任一项所述的方法,其中所需全身效果涉及治疗以下一种或多种疾
病:头痛、心血管疾病炎症、免疫应答、自身免疫性疾病、肝疾病、感染、神经病、精神性疾病、一氧化氮疾病、尿素循环障碍、充血、血管舒张疾病、皮肤病、创伤愈合、昆虫叮咬反应、眼科疾病、结缔组织疾病和一些病毒、细菌或真菌感染。
31.前述权利要求任一项所述的方法,其中施用有效量的制剂促进内皮功能。
32.前述权利要求任一项所述的方法,其中施用有效量的制剂在靶组织或循环中改变
修改硝酸盐或NO的水平。
33.前述权利要求任一项所述的方法,其中施用有效量的制剂调节与受试者的胃肠系
统相关的微生物组。
34.前述权利要求任一项所述的方法,其中施用是设备辅助的。
35.前述权利要求任一项所述的方法,其中所述制剂在胃肠病症发作之前施用。
36.前述权利要求任一项所述的方法,其中所述制剂在胃肠病症发生期间施用。
37.前述权利要求任一项所述的方法,其中所述制剂在胃肠病症消退后施用。
38.前述权利要求任一项所述的方法,其中所述制剂是响应于胃肠症状、触发或警告标
志例如不适或排便习惯改变而给予的。
39.前述权利要求任一项所述的方法,进一步包括确定受试者是否需要治疗胃肠疾病。
40.前述权利要求任一项所述的方法,其中所述制剂作为溶液、悬浮液、乳剂、软膏、凝胶、水凝胶或液体例如滴剂、喷雾剂、气雾剂、或雾剂施用。
41.前述权利要求任一项所述的方法,其中所述制剂配制为片剂或胶囊。
42.前述权利要求任一项所述的方法,其中所述制剂包含微球体或微囊。
43.前述权利要求任一项所述的方法,其中所述制剂配制为与受试者的胃肠系统相容。
44.前述权利要求任一项所述的方法,其中施用减少了受试者的腹胀、腹泻、胃胀气、胃疼、胃痉挛或腹鸣。
45.前述权利要求任一项所述的方法,其中所述制剂配制为用于立即释放或延长的释
放。
46.前述权利要求任一项所述的方法,其中所述制剂配制为局部或全身递送亚硝酸盐
或NO至靶组织。
47.前述权利要求任一项所述的方法,其中所述制剂配制为用于跨粘膜递送和/或循
环,例如局部或全身。
48.前述权利要求任一项所述的方法,进一步包括向受试者施用第二量的制剂。
49.前述权利要求任一项所述的方法,其中所述制剂作为组合治疗的一部分给予。
50.前述权利要求任一项所述的方法,进一步包括与该制剂组合施用第二治疗。
51.前述权利要求任一项所述的方法,其中所述制剂在开始第二治疗之前施用一段时
间。
52.前述权利要求任一项所述的方法,其中所述制剂与第二治疗同时施用。
53.前述权利要求任一项所述的方法,其中所述制剂在停止第二治疗后施用一段时间。
54.前述权利要求任一项所述的方法,其中所述第二治疗通过不同的施用方式施用,例
如通过吸入或鼻内技术。
55.前述权利要求任一项所述的方法,其中所述受试者具有治疗水平的第二治疗。
56.前述权利要求任一项所述的方法,其中所述制剂与抗炎剂联合施用。
57.前述权利要求任一项所述的方法,其中所述制剂与治疗相关的疾病或障碍或相关
的疾病或障碍的症状的医疗方法联合施用,所述医疗方法例如为被批准治疗或通常用于治疗的。
58.前述权利要求任一项所述的方法,其中所述制剂在手术或诊断程序之前或之后施
用。
59.前述权利要求任一项所述的方法,其中所述制剂与运动、纤维、通便剂、抗利尿剂、益生菌、治疗剂或压管理一起施用。
60.前述权利要求任一项所述的方法,其中所述制剂与治疗以下疾病的治疗组合施用:
结肠炎、坏死性小肠结肠炎、炎性肠病、溃疡、克罗恩病、溃疡性结肠炎、乳糜泻、谷蛋白敏感、胃灼热、胰腺炎、阑尾炎、胃炎、胃肠炎或肠易激综合征。
61.前述权利要求任一项所述的方法,其中所述制剂与亚硝酸盐、硝酸盐和/或NO联合
施用。
62.前述权利要求任一项所述的方法,其中所述有效量为AOM的治疗有效剂量。
63.前述权利要求任一项所述的方法,其中所述AOM的治疗有效剂量为约1 x 103、104、
105、106、107、108、109、1010、1011、1012、1013或1014CFU或大于约1 x 103、104、105、106、107、108、
109、1010、1011、1012、1013、或1014CFU。
64.前述权利要求任一项所述的方法,其中所述制剂作为镇痛剂施用。
65.前述权利要求任一项所述的方法,其中所述制剂作为预防剂施用。
66.前述权利要求任一项所述的方法,其中所述的制剂是自我施用的。
67.前述权利要求任一项所述的方法,其中所述制剂每天施用约1、2、3、4、5、6、7、8、9、
10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23或24次。
68.前述权利要求任一项所述的方法,其中所述制剂施用约1-3、3-5、5-7、7-9、5-10、
10-14、12-18、12-21、21-28、28-35、35-42、42-49、49-56、46-63、63-70、70-77、77-84或84-
91天。
69.前述权利要求任一项所述的方法,其中所述制剂在受试者从睡眠中醒来后的30、
60、90、120、150或180分钟内施用。
70.前述权利要求任一项所述的方法,其中所述制剂在受试者睡觉前的30、60、90、120、
150或180分钟内施用。
71.前述权利要求任一项所述的方法,其中所述制剂在受试者进食的30、60、90、120、
150或180分钟内食用。
72.前述权利要求任一项所述的方法,其中所述制剂在受试者清洁或淋浴前的30、60、
90、120、150或180分钟施用。
73.前述权利要求任一项所述的方法,其中所述受试者为女性。
74.前述权利要求任一项所述的方法,其中所述受试者为男性。
75.前述权利要求任一项所述的方法,其中所述受试者的特征是以下种族/民族之一:
亚洲人、黑人或非裔美国人、西班牙裔或拉丁裔、白人或多种族。
76.前述权利要求任一项所述的方法,其中所述受试者具有被破坏的微生物组。
77.前述权利要求任一项所述的方法,其中所述受试者的年龄小于1岁,或为1-5、5-10、
10-20、20-30、30-40、40-50、50-60岁,或超过60岁。
78.前述权利要求任一项所述的方法,其中所述制剂在缓冲溶液,例如,水性缓冲溶液
中包含AOM。
79.前述权利要求任一项所述的方法,其中所述缓冲溶液,例如,水性缓冲溶液,在水中包含磷酸二钠和氯化镁,例如,50mM Na2HPO4和2mM MgCl2。
80.前述权利要求任一项所述的方法,其中所述缓冲溶液,例如,水性缓冲溶液,基本上由在水中的磷酸二钠和氯化镁组成,例如,50mM Na2HPO4和2mM MgCl2。
81.前述权利要求任一项所述的方法,其中所述缓冲溶液,例如,水性缓冲溶液,由在水中的磷酸二钠和氯化镁组成,例如,50mM Na2HPO4和2mM MgCl2。
82.前述权利要求任一项所述的方法,其中所述制剂的特征为生理pH水平。
83.前述权利要求任一项所述的方法,其中所述制剂还包含促进AOM的生长或代谢、NO
产生和/或脲酶活性的化合物或与该化合物同时施用。
84.前述权利要求任一项所述的方法,其中所述制剂包含氨、铵盐和尿素中至少一种。
85.前述权利要求任一项所述的方法,其中所述制剂包含控释材料,例如,缓慢释放材
料。
86.前述权利要求任一项所述的方法,其中所述制剂进一步包含赋形剂,例如,药学上
可接受的赋形剂。
87.前述权利要求任一项所述的方法,其中所述赋形剂包括吸收或渗透增强剂、防腐
剂、抗氧化剂、缓冲液、螯合剂、离子交换剂、增溶剂、悬浮剂、增稠剂表面活性剂、湿润剂、张力调节剂、酶抑制剂或用于适当药物递送的载体。
88.前述权利要求任一项所述的方法,其中所述制剂包含粘膜粘附剂。
89.前述权利要求任一项所述的方法,其中所述制剂包含崩解剂、螯合剂、包衣剂、改良释放产品、或填充剂。
90.前述权利要求任一项所述的方法,其中所述制剂基本上不含其它生物体。
91.前述权利要求任一项所述的方法,其中所述制剂包含约1 x 103CFU/mL至约1 x 
1014CFU/mL AOM。
92.前述权利要求任一项所述的方法,其中所述制剂包含约1 x 109CFU/mL至约10 x 
109CFU/mL AOM。
93.前述权利要求任一项所述的方法,其中所述AOM包含氨氧化细菌(AOB)。
94.前述权利要求任一项所述的方法,其中所述AOM基本上由AOB组成。
95.前述权利要求任一项所述的方法,其中所述AOM由AOB组成。
96.前述权利要求任一项所述的方法,其中所述AOM包括亚硝化单胞菌属、亚硝化球菌
属、亚硝化螺菌属、亚硝化囊菌属、亚硝化叶菌属、亚硝化弧菌属及其组合。
97.前述权利要求任一项所述的方法,其中所述AOM为真养亚硝化单胞菌
(N.eutropha)。
98.前述权利要求任一项所述的方法,其中所述AOM为真养亚硝化单胞菌D23,其具有的
ATCC登记号为PTA-121157。
99.前述权利要求任一项所述的方法,其中所述AOM包括氨氧化古生菌(AOA)。
100.前述权利要求任一项所述的方法,其中所述AOM能够以至少约1pmol/min/mg蛋白
质的速率,例如,至少约0.1nmol/min/mg蛋白质的速率将氨或铵转化为亚硝酸盐。
101.前述权利要求任一项所述的方法,其中所述制剂施用至第一组织,例如沉积组织,
例如,通过摄取而施用。
102.前述权利要求任一项所述的方法,其中所述第一组织为靶组织。
103.前述权利要求任一项所述的方法,其中所述第一组织不为靶组织,例如,该制剂施
用于第一组织,且该制剂或制剂的产物,例如,NO,被运输到第二组织,所述运输例如为通过扩散,所述第二组织例如为靶组织。
104.前述权利要求任一项所述的方法,其中所述第二治疗包括手术程序。
105.前述权利要求任一项所述的方法、其中所述赋形剂包括抗粘着剂、结合剂、包衣
剂、崩解剂、填充剂、调味剂着色剂润滑剂、助流剂、吸附剂、防腐剂、或增甜剂。
106.前述权利要求任一项所述的方法,其中生物群友好的产品与施用的包含AOM的制
剂联合使用。
107.前述权利要求任一项中所述的包含AOM的制剂,其用于肠内施用至受试者。
108.前述权利要求任一项所述的制剂,其中所述制剂为食品。
109.前述权利要求任一项所述的制剂,其中所述食品包括食物、饮料、补充剂、营养品、添加剂或医疗营养品。
110.前述权利要求任一项中所述的包含AOM的制剂,其用于治疗受试者的胃肠疾病。
111.前述权利要求任一项中所述的制剂,其中所述制剂被包装以用于一次性使用。
112.前述权利要求任一项中所述的制剂,其中所述制剂被包装以用于多次使用。
113.前述权利要求任一项中所述的制剂,其包含AOM和其它生物体,例如,生物体的群
落。
114.一种设备,其配置为向受试者的胃肠系统的靶组织施用前述权利要求任一项中所
述的包含AOM的制剂。
115.一种试剂盒,其包含前述权利要求任一项中所述的包含AOM的制剂。

说明书全文

用于胃肠系统使用和递送至胃肠系统的生物

[0001] 相关申请的交叉引用
[0002] 本申请根据35 U.S.C.§119(e)要求2016年7月19日提交的美国临时专利申请序列号62/364,079,以及2016年9月21日提交的美国临时专利申请序列号62/397,710的优先权,其全部公开内容在此通过引用整体并入本发明以用于所有目的。

技术领域

[0003] 本发明的方面主要涉及微生物组(microbiome),更具体地,涉及与微生物组相关的氨氧化微生物的恢复。

背景技术

[0004] 细菌和其它微生物在环境中无处不在。致病性细菌的发现和疾病的细菌学说理论对于健康和疾病症况具有极大的影响。微生物是所有生物的环境内的一个正常部分且可以是有益的。在肠道内,例如,细菌在正常条件下是不会致病的,并且实际上它们通过使正常的肠内容物不适于致病生物体的存活来促进健康。

发明内容

[0005] 根据一个或多个方面,公开了向受试者引入氨氧化微生物(AOM)的方法。该方法可包括向受试者肠内施用包含AOM的制剂。
[0006] 在一些方面,肠内施用可包括口腔、颊、唇下或舌下施用。
[0007] 根据一个或多个方面,公开了向受试者引入氨氧化微生物(AOM)的方法。该方法可包括向受试者直肠施用包含AOM的制剂。
[0008] 在一些方面,直肠施用可包括通过栓剂或灌肠剂施用。在其它方面,直肠施用可与粪便微生物群移植过程相关。
[0009] 根据一个或多个方面,公开了在受试者的胃肠系统中定殖(colonize)的方法。该方法可包括向受试者的胃肠系统施用有效量的包含AOM的制剂,其中所述AOM定殖于胃肠系统的靶组织。
[0010] 根据一个或多个方面,公开了改善受试者消化的方法。该方法可包括向受试者施用有效量的包含AOM的制剂,从而改善受试者中的消化。
[0011] 根据一个或多个方面,公开了治疗受试者胃肠疾病的方法。该方法可包括向受试者施用有效量的包含AOM的制剂,从而治疗胃肠疾病。
[0012] 在一些方面,将施用的AOM的目标百分比转移至受试者的胃肠系统。施用的量和/或频率足以增加受试者的胃肠系统的至少一部分中的粘液稠度。施用制剂可导致与受试者摄取的食物或饮料相关的增加的耐受性、降低的敏感性和/或改善的营养摄取。
[0013] 在至少一些方面,包含AOM的制剂通过摄入向受试者的胃肠系统施用。当施用制剂时,受试者可基本上空腹。制剂可以在施用抗生素或清洁肠道制剂之后施用。该方法可以进一步包括在施用制剂后向受试者施用
[0014] 在一些方面,胃肠病症可以是炎性病症。例如,炎性病症可为结肠炎、坏死性小肠结肠炎、炎性肠病、溃疡、克罗恩病、溃疡性结肠炎、乳糜泻、谷蛋白敏感、胃灼热、胰腺炎、阑尾炎、胃炎、胃肠炎、肠易激综合征、或牙齿牙周病症。炎性病症可与基于于导管的物质(例如肠内营养)的递送相关。炎性病症可为一种或多种以下微生物引起的感染:幽螺杆菌、艰难梭状芽胞杆菌、霍乱、阿米巴痢疾、小肠结肠炎耶尔森氏菌、肠炎沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌、宋内志贺菌和大肠杆菌。在其它方面,胃肠疾病可涉及乳糖、食物或饮料的不耐受、SIBO、吸收不良症、胆道疾病、反流、或缺氧(dispoxia)。胃肠疾病的特征可为便秘或腹泻。胃肠疾病的特征为高氨血症。胃肠疾病可包括肝衰竭,例如急性或慢性肝衰竭。
[0015] 在一些方面,施用可以减少受试者的腹胀、腹泻、胃胀气、胃痛、胃痉挛或腹鸣。
[0016] 在一些方面,施用可以在医疗程序之前或之后进行,该医疗程序例如导管插入术、内窥镜检查或结肠镜检查程序、或牙科程序。施用可以是设备辅助的。制剂可以在胃肠疾病发病之前、发病期间或胃肠疾病消退之后施用。可以根据胃肠道症状、触发或警告信号,例如排便不适或改变,来给予制剂。方法可以包括确定受试者是否需要治疗胃肠病症。
[0017] 在一些方面,施用可以是达到沉积组织(deposit tissue)或直接施用于靶组织。沉积组织、靶组织或两者可以是受试者的粘膜。沉积组织、靶组织或两者可以与受试者的胃相关联。沉积组织、靶组织或这两者可为受试者的唾液腺、口腔、咽部、舌、食管、肝、胆囊、总胆管、结肠(横向、上行和/或下行)、盲肠、阑尾、直肠、肛门、胰腺、胰管、大肠、或小肠(十二指肠、空肠、和/或回肠)。
[0018] 在一些方面,靶组织可以与期望的局部效果相关联。靶组织可以与期望的全身效果相关联。例如,期望的全身效果可涉及以下一种或多种的治疗:头痛、心血管疾病炎症、免疫应答、自身免疫性疾病、肝疾病、感染、神经病、精神性疾病、一氧化氮疾病、尿素循环障碍、充血、血管舒张疾病、皮肤病、创伤愈合、昆虫叮咬反应、眼科疾病、结缔组织疾病、和一些病毒、细菌或真菌的感染。
[0019] 在一些方面,施用有效量的制剂可以促进内皮功能。施用有效量的制剂可以改变或修改靶组织或循环中亚硝酸盐或NO的水平。施用有效量的制剂可以调节与受试者的胃肠系统相关的微生物组。
[0020] 在一些方面,制剂可以以溶液、悬浮液、乳液、软膏、凝胶、水凝胶或液体形式施用,例如滴、喷雾、气雾剂或雾剂。制剂可以配制成片剂或胶囊。制剂可包括微球或微胶囊。可以将制剂配制成与受试者的胃肠系统相容。制剂可以配制成立即释放或延长释放。可以配制制剂以局部或全身地将亚硝酸盐或NO递送至靶组织。制剂可以配制为用于跨粘膜递送和/或循环,例如,局部或全身。
[0021] 在一些方面,治疗方法可以进一步包括向受试者施用第二量的制剂。在至少一些方面,制剂可以作为组合疗法的一部分施用。该方法可以进一步包括与制剂组合施用第二治疗。制剂可以在开始第二治疗之前、与第二治疗同时或在停止第二治疗之后的一段时间内施用一段时间。第二治疗可以通过另一种施用方式施用,例如,通过吸入或鼻内技术施用。受试者可具有治疗水平的第二治疗。制剂可以与抗炎剂联合施用。所述制剂可以与治疗(例如,被批准治疗或通常用于治疗)相关疾病或病症或相关疾病或病症的症状的医学方法一起施用。可以在外科手术或诊断程序之前或之后施用制剂。第二治疗可包括外科手术。该制剂可以与运动、纤维、通便剂、抗利尿、益生菌、治疗或压管理一起施用。在至少一些方面,制剂可以与结肠炎、坏死性小肠结肠炎、炎性肠病、溃疡、克罗恩病、溃疡性结肠炎、乳糜泻、谷蛋白敏感、胃灼热、胰腺炎、阑尾炎、胃炎、胃肠炎、或肠易激综合征的治疗性治疗组合施用。制剂可以与亚硝酸盐、硝酸盐和/或NO一起施用。
[0022] 在一些方面,有效量为AOM的治疗有效剂量。AOM的治疗有效剂量为约1x 103、104、105、106、107、108、109、1010、1011、1012、1013、或1014CFU或大于以上的值。制剂可以作为镇痛剂和/或预防剂施用。制剂可以是自我施用的。制剂可以约每天1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、
12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、或24次施用。制剂可以施用约1-3、3-5、5-7、7-9、
5-10、10-14、12-18、12-21、21-28、28-35、35-42、42-49、49-56、46-63、63-70、70-77、77-84、或84-91天。制剂可以在受试者从睡眠中醒来的30、60、90、120、150或180分钟内施用。制剂可以在受试者睡觉前30、60、90、120、150或180分钟内施用。制剂可以在受试者进食的30、
60、90、120、150或180分钟内施用。制剂可以在受试者清洁或淋浴之前30、60、90、120、150或
180分钟施用。
[0023] 在一些方面,受试者可以是女性。在其他方面,受试者可以是男性。该受试者可以被表征为以下种族/民族之一:亚洲人、黑人或非裔美国人、西班牙裔或拉丁裔、白人或多种族。受试者可具有被破坏的微生物组。受试者可以是年龄小于1岁、或1-5岁、5-10岁、10-20岁、20-30岁、30-40岁、40-50岁、50-60岁或60岁以上。
[0024] 在一些方面,该制剂可包含在缓冲溶液,例如,水性缓冲溶液中的AOM。该缓冲溶液,例如,水性缓冲溶液,包含在水中的磷酸二钠和氯化镁,例如,50mM Na2HPO4和2mM MgCl2。该缓冲溶液,例如水性缓冲溶液,基本上由在水中的磷酸二钠和氯化镁,例如,50mM Na2HPO4和2mM MgCl2组成。该缓冲溶液,例如,水性缓冲溶液,由在水中的磷酸二钠和氯化镁,例如,50mM Na2HPO4和2mM MgCl2组成。该制剂的特征可为生理pH水平。该制剂可以进一步包含促进AOM的生长或代谢、NO产生和/或脲酶活性的化合物或其与同时施用。在至少一些方面,制剂可包含氨、铵盐和尿素中的至少一种。制剂可包含控释材料,例如缓释材料。制剂可进一步包含赋形剂,例如药学上可接受的赋形剂。赋形剂可包含吸收或渗透增强剂、防腐剂、抗氧化剂、缓冲剂、螯合剂、离子交换剂、增溶剂、悬浮剂、增稠剂表面活性剂、湿润剂、张力调节剂、酶抑制剂、或用于适当药物递送的载体。赋形剂可包含抗粘附剂、粘合剂、包衣剂、崩解剂、填充剂、调味剂着色剂润滑剂、助流剂、吸附剂防腐剂或甜味剂。在至少一些方面,制剂可包含粘膜粘附剂、崩解剂、螯合剂、包衣剂、改良释放产品、或填充剂。制剂可以基本上不含其他生物体。制剂可以进一步包含其他生物体,例如,生物体的群落。
[0025] 在一些方面,该制剂可包含约1x 103CFU/mL至约1x 1014CFU/mL AOM。该制剂可包含约1x 109CFU/mL至约10x 109CFU/mL AOM。AOM可包含氨氧化细菌(AOB)。在一些方面,AOM可基本上由AOB组成。在至少一些方面,AOM可由AOB组成。AOM可包括亚硝化单胞菌属(Nitrosomonas)、亚硝化球菌属(Nitrosococcus)、亚硝化螺菌属(Nitrosospira)、亚硝化囊菌属(Nitrosocystis)、亚硝化叶菌属(Nitrosolobus)、亚硝化弧菌属(Nitrosovibrio)及其组合。AOM可为真养亚硝化单胞菌(Nitrosomonas eutropha,N.eutropha)。AOM可为真养亚硝化单胞菌D23,其ATCC登记号为PTA-121157。在至少一些方面,AOM可包括氨氧化古生菌(AOA)。AOM能够将氨或铵以至少约1pmol/min/mg蛋白质的速率转化为亚硝酸盐。AOM能够将氨或铵以至少约0.1nmol/min/mg蛋白质的速率转化为亚硝酸盐。
[0026] 在一些方面,制剂可以例如通过摄入到第一组织,例如沉积组织中来施用。第一组织可以是靶组织。在至少一些方面,第一组织不是靶组织,例如,制剂可以施加于第一组织并且制剂或制剂的产物,例如NO,可以例如通过扩散被运输至第二组织例如靶组织。
[0027] 在一些方面,生物群友好的产品可以与包含AOM的施用制剂一起使用。
[0028] 根据一个或多个方面,如前述权利要求中任一项所述的包含AOM的制剂可以是对受试者的肠内施用。
[0029] 在一些方面,制剂可以是食品。食品可包含食物、饮料、补充剂、营养品、添加剂或医疗营养产品。
[0030] 根据一个或多个方面,制剂可包含AOM。该制剂可以用于治疗受试者的胃肠病症。
[0031] 在一些方面,制剂可以包装用于单次使用。在一些方面,制剂可以包装用于多次使用。
[0032] 根据一个或多个方面,设备可以配置成将包含AOM的制剂施用于受试者的胃肠系统的靶组织。
[0033] 根据一个或多个方面,试剂盒可包含含有AOM的制剂,例如用于递送至受试者的胃肠系统或用于治疗受试者的胃肠病症。
[0034] 本发明涵盖任何一种或多种前述方面和/或实施方案的所有组合,以及与详细描述和任何实施例中阐述的任何一个或多个实施方案的组合。
[0035] 发明详述
[0036] 根据一个或多个实施方案,本发明提供了将氨氧化微生物引入受试者的多种方法或模式。这些方法或模式包括向受试者施用氨氧化微生物,例如,包含氨氧化微生物的制剂、组合物、配制物或产品。因此,在至少一些实施方案中,氨氧化微生物因此通常可恢复至受试者的微生物组。在至少一些实施方案中,氨氧化微生物可包含活氨氧化微生物或基本上由活氨氧化微生物组成。
[0037] 本发明公开了制剂、组合物和/或配制物,例如包括美容产品、治疗产品、消费品、非天然产品、天然产品和强化的天然产品,其包含氨氧化微生物,基本上由氨氧化微生物组成或由氨氧化微生物组成。这些制剂、组合物和/或配制物在此公开用于各种应用,例如美容和/或治疗应用。该制剂、组合物和/或配制物可以以有效量施用用于预期用途,例如美容或治疗应用。提供了包含氨氧化微生物的制剂、组合物和/或配制物,用于向受试者以各种施用方式施用。提供了包含氨氧化微生物的制剂、组合物和/或配制物,其用于治疗受试者的各种疾病和/或病症。公开了通过施用氨氧化微生物治疗受试者各种疾病和/或病症的方法。还提供了用于向受试者施用氨氧化微生物的设备。
[0038] 微生物学
[0039] 根据一个或多个实施方案,基本上可以使用或实施任何氨氧化微生物(AOM)。氨氧化微生物通常可以是自养的。氨氧化微生物可以由氨产生亚硝酸盐和/或一氧化氮。
[0040] 例如,Whitlock在美国专利No.7,820,420中充分描述了自养氨氧化细菌(AOB)的性质。自该申请以来,用于氧化氨以生产ATP的自养微生物类别已经扩展到包括氨氧化古生菌(AOA),并且古生菌已经从这类细菌中移出并进入它们自己独特的类别。出于本发明的目的,可以使用具有氨氧化特性以产生ATP的任何和所有自养氨氧化微生物。AOM,包括AOB和AOA,具有将氨氧化成NO和亚硝酸盐的必要性质,并且所有已知的AOM都缺乏毒力,因为它们不能使用有机底物来产生ATP。细菌可以利用较高浓度的氨,而古生菌可以利用较低浓度的氨。氨的生理水平在细菌(AOB)和古生菌(AOA)都可以利用的范围内。在整个发明中任何具体提及氨氧化细菌的参考应被认为同样适用于任何氨氧化微生物,例如任何氨氧化古生
菌,并且这些术语在本发明中可全部互换使用。
[0041] 氨氧化细菌(AOB)是普遍存在的革兰氏阴性专性细菌,具有独特的能力可以仅通过氨转化为亚硝酸盐来产生能量。在一些实施方案中,亚硝化单胞菌属的氨氧化细菌(AOB)是革兰氏阴性专性自养(化能自养)细菌,其具有仅由氨作为能源产生亚硝酸盐和一氧化氮的独特能力。它们广泛存在于土壤和水环境中,是环境硝化过程的重要组成部分。根据本发明描述的一个或多个实施方案,这些细菌具有有益的性质,例如,与各种美容和治疗用途有关。不希望受任何特定理论束缚,由于亚硝酸盐和一氧化氮作为若干生理功能(例如血管舒张、炎症和伤口愈合)的重要组分的作用,这些细菌可对健康和免疫病理学状况具有多种有益特性。这些细菌可安全地用于人类,因为它们生长缓慢,不能在有机源上生长,可对肥皂和抗生素敏感,并且从未与动物或人类的任何疾病或感染相关。
[0042] 氨氧化微生物产生辅酶Q8(CoQ8)作为其产生亚硝酸盐和一氧化氮的过程的副产物。CoQ8是在其类异戊二烯侧链中具有8个碳的辅酶Q。不希望受任何特定理论束缚,由于辅酶Q作为若干细胞功能的重要组成部分的作用,例如介导细胞信号传导和防止细胞死亡(抗衰老),这些微生物的有益特性可进一步通过它们生成CoQ8的特定能力而增强。
[0043] 在一些实施方案中,氨氧化细菌可催化以下反应。
[0044] 在中性pH水平,从中性pH条件附近由铵产生的氨是初始反应的底物。如下在分别由氨单加氧酶(AMO)和羟胺氧化还原酶(HAO)催化的两步中发生氨至亚硝酸盐的转化:
[0045] NH3+2H++2e-+O2→NH2OH+H2O(A)
[0046] NH2OH+H2O→NO2-+4e-+5H+(B)
[0047] 在一些情况中,如下报告反应B,以指示在低pH形成亚硝酸(HNO2):
[0048] NH2OH+H2O→HNO2+4e-+4H+
[0049] 在一些实施方案中,在本发明的全文中,NH4+和NH3可以可互换使用。
[0050] 氨氧化细菌的实例包括真养亚硝化单胞菌菌株,例如本发明所讨论的D23和C91,以及亚硝化单胞菌属、亚硝化球菌属、亚硝化螺菌属、亚硝化囊菌属、亚硝化叶菌属和亚硝化弧菌属中的其它细菌。D23真养亚硝化单胞菌菌株是指被命名为AOB D23-100的菌株,其在2014年4月8日保藏于美国组织培养物保藏中心(ATCC)(10801 University Blvd.,Manassas,VA,USA),登记号为PTA-121157。登记号PTA-121157的核酸序列(例如基因组序列)在此通过引用整体并入用于所有目的。贯穿本发明,“AOB D23-100”也可以称为D23或B244。
[0051] 氨氧化古生菌的实例包括甲烷短杆菌属(Methanobrevibacter)、甲烷球形菌属(Methanosphaera)、甲烷八叠球菌属(Methanosarcina)、Nitroscaldus、氨氧化古菌
(Nitrosopumilus)和亚硝化球菌(例如维也纳亚硝化球菌(Nitrososphaera viennensis)、加尔加亚硝化球菌(Nitrososphaera gargensis))中的古生菌。不同种系型的古生菌,例如,产甲烷菌和halphilic archaeon,可包括在本发明的制剂中。古生菌的实例还包括以下谱系的古生菌:广古菌门(Euryarchaeota)(例如甲烷八叠球菌属)、泉古菌门
(Crenarchaeota)、曙古菌门(Aigarchaeota)和奇古菌门(Thaumarchaeota)(例如
Giganthauma karukerense、Giganthauma insulaporcus、Caldiarchaeum subterraneum、Cenarchaeum symbiosum)。
[0052] 国际(PCT)专利申请公开号WO2015/160911(2015年4月15日提交的国际(PCT)专利申请序列号PCT/US2015/025909)公开的每个和各个核酸序列以及氨基酸序列,出于所有目的以其整体在此引入作为参考。同样,国际(PCT)专利申请公开号WO2015/160911(2015年4月15日提交的国际(PCT)专利申请序列号PCT/US2015/025909)公开的任何氨氧化细菌,也出于所有目的以其整体在此引入作为参考。在一些实施方案中,所述氨氧化微生物为其中所述的菌株。
[0053] 根据一个或多个实施方案,氨氧化微生物可以以几种代谢状态存在,例如,生长状态、储存状态和/或多磷酸盐负载状态。
[0054] 根据一个或多个实施方案,氨氧化微生物可具有所需的性质,例如优化的性质,例如抑制病原菌生长的能力,以及增强的产生一氧化氮和一氧化氮前体的能力。
[0055] 当术语优化的真养亚硝化单胞菌在本发明中使用时是指具有:优化的生长速率;优化的NH4+氧化速率;或优化的NH4+抗性的真养亚硝化单胞菌。在一个实施方案中,它与天然存在的真养亚硝化单胞菌的差异在于至少一个核苷酸,例如选自氨单加氧酶、羟胺氧化还原酶、细胞色素c554或细胞色素cM552的基因中的核苷酸。差异可以例如通过选择真养亚硝化单胞菌的自发产生的突变、诱发型突变或定向基因工程而产生。在一个实施方案中,它与天然存在的真养亚硝化单胞菌的差异在于其具有在自然中不是一起存在的一群等位基
因。这些差异可以提供一种或多种疾病或病症的治疗或预防,例如但不限于与低亚硝酸盐水平相关的疾病或病症。
[0056] 任何氨氧化细菌,例如,真养亚硝化单胞菌,例如称为“D23”,也称为“B244”或“AOB D23-100”的真养亚硝化单胞菌可具有上述性质的几种。任何氨氧化古生菌(AOA)也可具有上述性质的几种。
[0057] 本发明中涵盖的AOB可以包含相对于野生型AOB的突变。例如,这些突变可以自发发生,通过随机诱变引入,或者通过靶向诱变引入。例如,AOB可以缺乏野生型AOB通常包含的一种或多种基因或调节DNA序列。相对于测序菌株或野生型菌株,AOB也可以包含点突变、取代、插入、缺失、和/或重排。AOB可以是优化的AOB的纯化的制剂。
[0058] 在一些实施方案中,AOB是转基因的。例如,它可以包含野生型氨氧化细菌缺乏的一种或多种基因或调节DNA序列。更具体地,氨氧化细菌可以包含例如报告基因、选择性标志物、编码酶的基因或启动子(包括诱导型启动子或阻抑型启动子)。在一些实施方案中,将另外的基因或调节DNA序列整合到细菌染色体中;在一些实施方案中,另外的基因或调节DNA序列位于质粒上。
[0059] 在一些实施方案中,AOB与天然存在的细菌的不同之处在于至少一个核苷酸。例如,AOB可以与天然存在的细菌在基因或蛋白质上不同,所述基因或蛋白质是相关途径,例如氨代谢途径、尿素代谢途径或用于产生一氧化氮或一氧化氮前体的途径的一部分。更具体地,AOB可以包含提高途径活性的突变,例如通过提高所述途径的元件的水平或活性而实现。
[0060] 可以使用任何合适的技术引入上文提及的突变。用于将突变引入给定位置中的多种方法是已知的。例如,可以使用定点诱变、寡核苷酸指导的诱变、或位点特异性诱变。特异性诱变方案的非限制性实例记载于例如Mutagenesis,第13.1-13.105页(Sambrook和Russell编,Molecular Cloning A Laboratory Manual,第3卷,第3增补版2001)。另外,可购自商业售主的充分表征的诱变方案的非限制性实例包括但不限于:Altered 
Sites.RTM.II体外诱变系统(Promega Corp.,Madison,Wis.);Erase-a-Base.RTM.系统
(Promega,Madison,Wis.);GeneTailor.TM.定点诱变系统(Invitrogen,Inc.,Carlsbad,
Calif.);QuikChange.RTM.II定点诱变试剂盒(Stratagene,La Jolla,Calif.);和
Transformer.TM.定点诱变试剂盒(BD-Clontech,Mountain View,Calif.)。
[0061] 在本发明的一些实施方案中,所述氨氧化微生物可以是纯性的(axenic)。氨氧化微生物的制剂(配制物或组合物)可以包含纯性氨氧化微生物、基本上由纯性氨氧化微生物组成或由纯性氨氧化微生物组成。
[0062] 本发明的氨氧化细菌可以来自选自由亚硝化单胞菌属、亚硝化球菌属、亚硝化螺菌属、亚硝化囊菌属、亚硝化叶菌属、亚硝化弧菌属和其组合所组成的组的属。
[0063] 本发明尤其提供了真养亚硝化单胞菌菌株D23,一种独特的(例如,优化的)氨氧化细菌菌株,其可以增加一氧化氮和一氧化氮前体在受试者(例如,人类受试者)的表面上的产生。本发明还提供了给予、使用所述细菌和包含所述细菌的制剂、组合物、配制物和产品的方法。
[0064] 在实施方案中,氨氧化细菌,例如真养亚硝化单胞菌是非天然存在的。例如,它可以已经在选择期间积累了所需的突变。在其它实施方案中,所需的突变可以由实验者引入。在一些实施方案中,真养亚硝化单胞菌可以是纯化的制剂,并且可以是优化的真养亚硝化单胞菌。
[0065] 在优选的实施方案中,真养亚硝化单胞菌菌株是自养的且因此不会引起感染。优选的菌株利用尿素以及氨,所以汗水中的尿素在被所述细菌吸收和利用之前不需要水解。另外,为了在低pH下生长,所述细菌可以吸收NH4+离子或尿素。选定的菌株还应该能够在受试者(例如,人类)的外皮肤上生存并且耐受该处的条件。
[0066] 尽管本发明详细地涉及真养亚硝化单胞菌菌株D23,但所述制剂、方法、组合物、治疗方法、配制物和产品可以与下列中的一个或多个一起使用:一种或多种其它真养亚硝化单胞菌菌株、亚硝化单胞菌属的一种或多种其它物种以及一种或多种其它氨氧化微生物,例如氨氧化细菌或其它氨氧化古生菌.
[0067] 在一些实施方案中,具有上述序列特征的细菌具有下列中的一个或多个:(1)由倍增时间测得的优化的生长速率;(2)由OD600测得的优化的生长速率;(3)优化的NH4+氧化速率;(4)优化的NH4+抗性;和(4)优化的NO2-抗性。在以下段落中详细说明了这些特性的特定非限制性子组合。
[0068] 在一些实施方案中,氨氧化细菌,例如本发明所描述的真养亚硝化单胞菌或其纯性组合物具有下列中的一个或多个:(1)由倍增时间测得的优化的生长速率;(2)由OD600测得的优化的生长速率;(3)优化的NH4+氧化速率;(4)优化的NH4+抗性;和(4)优化的NO2-抗性。例如,该细菌可以具有在本段的开头所列出的特性(1)和(2);(2)和(3);(3)和(4);或(4)和(5)。作为另一个实例,该细菌可以具有在本段的开头所列出的特性(1)、(2)和(3);(1)、(2)和(4);(1)、(2)和(5);(1)、(3)和(4);(1)、(3)和(5);(1)、(4)和(5);(2)、(3)和(4);(2)、(3)和(5);或(3)、(4)和(5)。作为进一步的实例,该细菌可以具有在本段的开头所列出的特性(1)、(2)、(3)和(4);(1)、(2)、(3)和(5);(1)、(2)、(4)和(5);(1)、(3)、(4)和(5);或(2)、(3)、(4)和(5)。在一些实施方案中,该细菌具有在本段的开头所列出的特性(1)、(2)、(3)、(4)和(5)。
[0069] 在一些实施方案中,真养亚硝化单胞菌菌株包含与国际(PCT)专利申请公开号WO2015160911(2015年4月15日提交的国际(PCT)专利申请序列号PCT/US2015/025909)的
SEQ ID NO:1或与D23菌株(在2014年4月8日以25个小瓶的形式保藏于ATCC专利保藏所,命名为AOB D23-100,登记号为PTA-121157)的基因组或其补体在低严格度、中等严格度、高严格度或极高严格度或其它杂交条件下杂交的核酸序列,例如基因组。
[0070] D23菌株不被认为是自然的产物,而是在实验室的长时间的培养和选择期间已经获得一些突变和特征。例如,D23具有在大于约200或250mM NH4+的条件下生长超过24小时的能力。
[0071] 在一些实施方案中,本发明所公开的真养亚硝化单胞菌与天然存在的细菌的不同之处在于载体的丰度。例如,真养亚硝化单胞菌相比于真养亚硝化单胞菌C91可以具有升高或降低的铁载体水平。通常,铁载体是分泌的铁螯合化合物,其帮助细菌从其环境中清除铁。一些铁载体是肽,而其它是有机小分子。
[0072] 除非另有指示,否则本发明的实施可采用本领域的技术范围内的常规免疫学方法、分子生物学和重组DNA技术。文献中全面阐释此类技术。参见例如Sambrook等人
Molecular Cloning:A Laboratory Manual(最新版本);和Current Protocols in 
Molecular Biology(F.M.Ausubel等人编,现行版)。
[0073] 选择定义
[0074] 氨氧化微生物,例如氨氧化细菌,是指能够以例如实质速率(例如预定速率)的速率将氨或铵氧化成亚硝酸盐的微生物。速率,例如预定速率,可以是针对铵离子(NH4+)(例如,在约200mM)至亚硝酸盐(NO2-)的转化,例如,如在体外测试中或当施用于受试者例如人时测定或测量的。该速率可以是每mg蛋白质至少约1皮摩尔/分钟的转化速率,0.01、0.1、1、10、25、50、75、125或150纳摩尔NO2-/分钟/mg蛋白质,例如,约0.01-1、0.1-50、50-100、100-
150、75-175、75-125、100-125、125-150或125-175纳摩尔/分钟/mg蛋白质,例如约125纳摩尔NO2-/分钟/mg蛋白质,用于连续培养,例如具有约0.5的OD。转化速率可以是约1皮摩尔/分钟/mg蛋白质至约1毫摩尔/分钟/mg蛋白质。转化速率可以是至多约1摩尔NO2-/分钟/mg蛋白质,例如至少约、约、或至多约1分摩尔、1厘摩尔、1毫摩尔、或1微摩尔NO2-/分钟/mg蛋白质。
[0075] 如本发明中所用,“纯性的”是指包含生物体的组合物基本上不含其它生物体。例如,氨氧化细菌的纯性培养物是基本上不含除氨氧化细菌以外的生物体的培养物。例如,真养亚硝化单胞菌的纯性培养物是基本上不含除真养亚硝化单胞菌以外的生物体的培养物。在一些实施方案中,“基本上不含”表示不能被用于检测其它生物体的方法(例如,平板接种培养物并检查菌落形态,或针对保守基因如16S RNA的PCR)检测到。纯性组合物可以包含不是生物体的元素,例如,它可以包含营养物或赋形剂。本发明所讨论的氨氧化细菌的任何实施方案、制剂、组合物或配制物可以任选包含纯性的氨氧化细菌、任选基本上由纯性的氨氧化细菌组成或任选由纯性的氨氧化细菌组成。
[0076] 在本发明的全文中,配制物可以指组合物或制剂或产品。
[0077] 如本发明中所使用,“自养生物”例如自养细菌是能够通过使用无机材料作为营养源以及使用光合作用或化学合成作为能量来源进行自营养的任何生物体。自养细菌可以从二氧化碳和衍生自其它来源的ATP、通过使氨氧化成亚硝酸盐、通过使硫化氢氧化和通过使Fe2+氧化成Fe3+而合成有机化合物。本发明的自养细菌无法引起感染。
[0078] 如本发明中所使用,“组合”施用意指在受试者罹患病症的过程中将两种(或更多种)不同的治疗递送给受试者,例如,在受试者已被诊断为患有所述病症之后以及在所述病症已经被治愈或消除之前递送两种或更多种治疗。在一些实施方案中,一种治疗的递送在第二治疗的递送开始时仍然在发生,从而存在重叠。这有时在本发明中被称为“同时”或“伴随”或“共同递送”。在其它实施方案中,一种治疗的递送在开始另一种治疗的递送之前结束。这有时在本发明中被称为“连续”或“顺序递送”。在任一种情况的实施方案中,治疗都因为组合施用而更有效。例如,相比于如果在缺少第一治疗的情况下施用第二治疗将观察到的情况,第二治疗是更有效的,例如,利用更少的第二治疗观察到同等的效果,或第二治疗在更大程度上减少症状,或者对于第一治疗将观察到类似的情况。在一些实施方案中,递送使得症状或与病症相关的其它参数的减少比在递送一种治疗而缺少另一种治疗的情况下将会观察到的减少更大。两种治疗的作用可以部分相加、全部相加或比相加更大(即,协同)。所述递送可以使得递送的第一治疗的作用在递送第二治疗时仍然是可检测的。在一些实施方案中,可以在诊断具有病症的患者前递送一种或多种治疗。
[0079] 如本发明中所使用,术语“分离的”是指从其原始或天然环境(例如,如果它是天然存在的,则为天然环境)中移出的物质。例如,存在于活动物中的天然存在的多核苷酸或多肽是未分离的,但通过人类干预与天然系统中的一些或全部共存物质隔绝的相同的多核苷酸或多肽是分离的。此类多核苷酸可以是载体的一部分和/或此类多核苷酸或多肽可以是组合物的一部分,且它们仍然是分离的,因为这种载体或组合物不是其所处的自然环境中的一部分。
[0080] 如本发明中所用,术语“优化的生长速率”是指下列中的一个或多个:当如本发明的实施例2中所述在分批条件下培养时,倍增时间小于约4、5、6、7、8、9或10小时;当如本发明的实施例2中所述在恒化器条件下生长时,倍增时间小于约16、18、20、22、24或26小时;或在约1天或2天内从约0.15的OD 600生长到至少约0.3、0.4、0.5、0.6、0.7或0.8的OD 600。在一个实施方案中,优化的生长速率是其倍增时间比天然存在的真养亚硝化单胞菌的倍增时间短至少10%、20%、30%、40%或50%的生长速率。
[0081] 如本发明中所用,“优化的NH4+氧化速率”是指NH3或NH4+转化为NO2-的速率为至少约50、75、125或150微摩尔/分钟。例如,所述速率可以为每分钟至少约50、75、125或150微摩尔的NH4+(例如,约200mM)转化为NO2-。在一个实施方案中,优化的NH4+氧化速率是其中NH3或NH4+转化为NO2-的速率比在天然存在的真养亚硝化单胞菌中所见的速率快至少10%、20%、30%、40%或50%。
[0082] 如本发明中所使用,“优化的NH4+抗性”是指能够在大于50、75、100、125、150、175、200、225、250、275或300mM NH3或NH4+的条件下生长至少约24或48小时。在一个实施方案中,优化的NH4+抗性是指能够在选定浓度的NH3或NH4+下比天然存在的真养亚硝化单胞菌生长快至少10%、20%、30%、40%或50%,或存在时间长至少10%、20%、30%、40%或50%。
[0083] 如本发明中所用,“转基因”意指包含DNA的一个或多个外源性部分。外源性DNA衍生自另一种生物体,例如,另一种细菌、噬菌体、动物或植物
[0084] 如本发明中所用,疾病或病症的治疗是指与类似的但未经治疗的患者相比,降低所述疾病或病症的至少一种症状的严重程度或频率。治疗还可以指与类似的但未经治疗的患者相比,阻止、减缓或逆转疾病或病症的进展。治疗可以包括解决疾病和/或一种或多种症状的根本原因。
[0085] 如本发明中所用,治疗有效量是指足以防止疾病或病症的推进或引起疾病或病症的消退,或能够缓解疾病或病症的症状,或能够实现所需结果的剂量。治疗有效剂量可以被测量为例如细菌的数量或活菌的数量(例如,以CFU计)或细菌的质量(例如,以毫克、克或千克计),或细菌的体积(例如,以mm3计)。
[0086] 如本发明中所用,术语“活力”是指自养细菌(例如,氨氧化细菌)以预定速率将氨、铵或尿素氧化为亚硝酸盐的能力。在一些实施方案中,速率是指铵离子(NH4+)(例如,约200mM)转化为亚硝酸盐(NO2-)的速率,为每分钟至少约1皮摩尔、0.01、0.1、1、10、25、50、75、
125或150纳摩尔NO2-,例如约0.01-1、0.1-50、50-100、100-150、75-175、75-125、100-125、-
125-150或125-175纳摩尔/分钟,例如,约125纳摩尔NO2 /分钟。转化速率可为至多约1摩尔NO2-/分钟,例如至少约、约、或至多约1分摩尔、1厘摩尔、1毫摩尔或1微摩尔NO2-/分钟。活的氨氧化微生物通常可包含可培养的AOM或以其它方式能够产生NO、硝酸盐或亚硝酸盐的
AOM。
[0087] 如本发明中所用,“受试者”可以包括动物、哺乳动物、人、非人动物、家畜动物或伴侣动物。术语“受试者”旨在包括人和非人动物,例如脊椎动物、大型动物和灵长类。在一些实施方案中,受试者是哺乳动物受试者,并且在具体的实施方式中,受试者是人受试者。尽管已经清楚预见人的应用,但是在此也设想了例如非人动物的兽医应用。本发明的术语“非人动物”包括所有脊椎动物,例如非哺乳动物(例如,例如鸡;两栖类;爬行类)和哺乳动物,如非人类灵长类动物,驯化的和农业上有用的动物,例如绵羊、狗、猫、、猪、大鼠等。
[0088] “微生物组”指存活在受试者表面(如肠道,口腔,皮肤)上和/或受试者的其它地方的群体,如一种或多种微生物。该群体可以具有与支持受试者寿命有关的一种或多种有利功能和/或益处。
[0089] “生物群友好的”指可允许受试者的微生物组最小程度破坏的某物,例如产品,例如美容产品,例如美容产品成品。例如,生物群友好的是指可向受试者应用的产品,其可允许在应用时的微生物组得到维持、最小程度破坏和/或能够在应用所述产品后的一段时间后恢复到微生物组。在实施方案中,生物群友好的可以指氨氧化微生物友好的,例如氨氧化细菌友好的,因为所述产品可允许对受试者的氨氧化细菌的最小程度破坏。在实施方案中,“生物群友好的”可以指“生物群落相容的”。
[0090] “天然产品”是或者可包含可至少部分源自自然界的产品。它可以是任何事物,或包括由活生物体产生的任何事物,并且可包括生物体本身。天然产品可包括或包含整个生物体和生物体的一部分(例如,植物的一部分)、来自于生物体的提取物、来自于生物体的有机化合物、来自于生物体的纯化有机化合物。天然产品可以是或包含发现的有机物和细胞,包括初级代谢物(氨基酸、碳水化合物和核酸)和次级代谢产物(在有限范围的物种中找到的有机化合物,例如,聚脂肪酸、萜类、类固醇、苯丙烷类、生物、专用氨基酸和肽、专用碳水化合物)。天然产品可以是或包含聚合有机材料,例如纤维素、木质素和蛋白质。
[0091] 如本发明中所用,“存在”或“水平”可指组分,例如氨氧化微生物、氨、铵离子、尿素、亚硝酸盐或一氧化氮中的任何一种或多种的定性或定量的量。存在或水平可包括零值或缺乏组分的存在。
[0092] 如本发明中所用,术语“表面活性剂”包括可降低两种液体之间或液体和固体之间的表面张力或界面张力的化合物。表面活性剂可作为洗涤剂、润湿剂、乳化剂、发泡剂和分散剂。表面活性剂可以包括下列中的一种或多种,单独或与所列那些或其它表面活性剂或表面活性剂样化合物组合:椰油酰胺丙基甜菜碱(ColaTeric COAB)、聚乙烯山梨醇酯(例如,Tween 80)、乙氧基化月桂醇(RhodaSurf 6NAT)、月桂基醚硫酸钠(sodium laureth sulfate)/月桂基葡糖苷/椰油酰胺丙基甜菜碱(Plantapon 611 L UP)、月桂基醚硫酸钠(例如,RhodaPex ESB 70 NAT)、烷基聚葡糖苷(例如,Plantaren 2000 N UP)、月桂基醚硫酸钠(Plantaren 200)、布朗纳博士的卡斯蒂利亚(Castile)肥皂、布朗纳博士的婴儿肥皂、月桂胺氧化物(ColaLux  Lo)、十二烷基硫酸钠(SDS)、聚磺酸酯烷基聚葡糖苷
(PolySufanate 160 P)、月桂基硫酸钠(Stepanol-WA Extra K)及其组合。布朗纳博士的卡斯蒂利亚肥皂和婴儿肥皂包含水、有机椰子油、氢氧化、有机橄榄油、有机公平交易(fair deal)麻油、有机荷荷巴油、柠檬酸和生育酚。表面活性剂可以包括月桂基葡糖苷羟基丙基磺酸钠( nate 160NC)、月桂酰胺丙基甜菜碱( Teric LMB);椰油酰胺丙基羟
基磺基甜菜碱(Cocamidopropyl hydroxysultaine)( Teric CBS);椰油酰两性基二
乙酸二钠(disodium cocoamphodiacetate)( Teric CDCX-LV);月桂基葡糖苷羟基
丙基磷酸钠( Fax D12)。表面活性剂可以包括月桂酰甲基羟乙基磺酸钠(sodium 
lauroyl methyl isethionate)( LQ-CLR-SB);甲基椰油酰牛磺酸钠(sodium 
methyl cocoyl taurate)(Pureact WS Conc.);水(和)月桂酰甲基羟乙基磺酸钠(和)椰油酰胺丙基甜菜碱(和)椰油酰羟乙基磺酸钠(和)甲基油酰牛磺酸钠 。其
它表面活性剂被包括在本发明中。
[0093] 包含氨氧化微生物的制剂、组合物、配制物和产品
[0094] 本发明尤其提供包含氨氧化微生物的组合物,包含AOM的制剂,例如纯化和/或优化的制剂,包含AOM的配制物,和包含AOM的各种产品,例如天然产品、非天然产品、强化天然产品、消费品、治疗产品或美容产品。术语制剂、组合物、配制物和产品在本发明中可互换使用。
[0095] 本发明讨论的氨氧化微生物的任何实施方案、制剂、组合物、配制物或产品可包含(任选纯性的)氨氧化微生物(例如活氨氧化微生物),基本上由其组成或由其组成。
[0096] 制剂可包含或补充有氨氧化微生物的产物或副产物,例如亚硝酸盐、硝酸盐、一氧化氮、CoQ8。在至少一些实施方案中,制剂可包含或补充有促进氨氧化微生物的生长或代谢、促进氨氧化微生物的产物或副产物的产生、促进脲酶活性或与氨氧化微生物具有协同效果的组合物,例如,氨、铵盐、尿素和脲酶。例如,该制剂可以补充有NO、亚硝酸盐、硝酸盐、CoQ8、氨、铵盐、尿素和脲酶中的一种或多种。补充剂可以与氨氧化微生物包含在相同的制剂中,或者包含在单独的制剂中用于同时或组合施用。补充配制物可以制备为通过任何递送方式递送,例如吸入形式的NO、亚硝酸盐或硝酸盐。该制剂尤其可以包含氨、铵盐和尿素中的至少一种。该制剂可包含或补充有抗炎剂或提供抗炎作用的组合物。
[0097] 本发明提供用于美容用途的包含氨氧化微生物的制剂。
[0098] 本发明提供用于治疗用途的包含氨氧化微生物的制剂。
[0099] 在一些实施方案中,氨氧化微生物的制剂可包含足以具有所需美容效果的浓度或量(例如,有效量)的氨氧化微生物。可以配制和/或递送制剂以局部和/或全身地赋予所需的美容效果。
[0100] 在一些实施方案中,氨氧化微生物的制剂可包含足以具有所需治疗效果的浓度或量(例如,有效量)的氨氧化微生物,例如,以至少部分地治疗病症或疾病。可以配制和/或递送制剂以局部和/或全身地赋予所需治疗效果。
[0101] 在一些实施方案中,氨氧化微生物的制剂可包含足以改变,例如,减少或增加受试者中细菌或细菌属的量、浓度或比例的浓度或量(例如,有效量)的氨氧化微生物。细菌可以是非致病性的或致病性的,或是潜在致病性的。
[0102] 在一些实施方案中,氨氧化微生物的制剂可包含足以调节与受试者相关的微生物组的浓度或量(例如,有效量)的氨氧化微生物。
[0103] 在一些实施方案中,氨氧化微生物的制剂可包含足以向受试者递送NO的浓度或量(例如,有效量)的氨氧化微生物。氨氧化微生物的制剂可包含一定浓度或量(例如,有效量)的氨氧化微生物,使得当施用时,该制剂在靶组织或循环中调节、改变或修改亚硝酸盐或NO的水平。例如,氨氧化微生物的制剂可包含一定浓度或量(例如,有效量)的氨氧化微生物,使得当施用时,该制剂导致在靶组织或循环中增加水平的亚硝酸盐或NO。
[0104] 本发明尤其提供了包含氨氧化微生物,例如,真养亚硝化单胞菌的非限制性组合物,例如优化的真养亚硝化单胞菌的纯化制剂。在一些实施方案中,所述组合物中的真养亚硝化单胞菌具有选自以下的至少一种特性:优化的生长速率、优化的NH4+氧化速率和优化的NH4+抗性。
[0105] 在一些方面,本发明提供了具有限定数量的物种的组合物。组合物可仅包含一种物种,例如,一种氨氧化微生物。本发明还提供具有例如真养亚硝化单胞菌和另一种类型的生物体且没有其它类型的生物体的组合物。在其它实例中,所述组合物具有例如真养亚硝化单胞菌和2、3、4、5、6、7、8、9或10种其它类型的生物体,并且不含其它类型的生物体。该组合物中的其它类型的生物体可以是例如细菌,如氨氧化细菌。适用于此目的的氨氧化微生物包括亚硝化单胞菌属、亚硝化球菌属、亚硝化螺菌属、亚硝化囊菌属、亚硝化叶菌属或亚硝化弧菌属中的氨氧化细菌。同样,该组合物还可包含AOA。
[0106] 在一些实施方案中,包含例如真养亚硝化单胞菌的组合物提供支持真养亚硝化单胞菌活力的条件。例如,所述组合物可以促进真养亚硝化单胞菌生长和代谢,或者可以促进休眠状态(例如,冷冻),使得活的真养亚硝化单胞菌可以从所述休眠状态恢复。当所述组合物促进生长或代谢时,其可以包含水和/或真养亚硝化单胞菌消耗的营养物,例如铵、氨、尿素、氧、二氧化碳或微量矿物质。在一些实施方案中,包含氨氧化微生物的组合物提供支持氨氧化微生物活力的条件。例如,该组合物可以促进氨氧化微生物的生长和代谢,或者可以促进如本发明所述的休眠状态(例如,冷冻)或储存状态,从中可以回收有活力的氨氧化微生物。当组合物促进生长或代谢时,它可含有水和/或氨氧化微生物消耗的营养物,例如铵离子、氨、尿素、氧、二氧化碳或微量矿物质。
[0107] 在一些实施方案中,在氨氧化微生物的制剂中可以包含一种或多种其它生物体,例如除了氨氧化微生物以外的生物体。例如,可以在氨氧化微生物的制剂中提供选自由乳酸杆菌属、链球菌属、双歧杆菌属及其组合所组成的组的属的生物体的群落或生物体。在一些实施方案中,所述制剂可以基本上不含其它生物体。
[0108] 氨氧化微生物的制剂可包含约103至约1014CFU/ml。在一些实施方案中,氨氧化微生物的制剂可包含至少约或大于约103、104、105、106、107、108、109、1010、1011、2x 1011、5x 1011、1012、2x 1012、5x 1012、1013、2x 1013、5x 1013、或1014;或约103-104、104-105、106-107、
107-108、108-109、109-1010、1010-1011、1011-1012、1012-1013、或1013-1014CFU/ml。
[0109] 在一些实施方案中,氨氧化微生物的制剂可包含约1x 109至约10x 109CFU/ml。在一些实施方案中,该制剂的施用剂量可包括约3x 1010CFU,例如,每天3x 1010CFU。在一些实9 9 9
施方案中,该制剂的施用剂量可包括每天约1x 10至约10x 10 CFU,例如,每天约1x 10 至约10x 109CFU。在一些实施方案中,该制剂的施用剂量可包括每次施用或每天约103、104、
105、106、107、108、109、1010、1011、2x 1011、5x 1011、1012、2x 1012、5x 1012、1013、2x 1013、5x 
1013、或1014;或约103-104、104-105、106-107、107-108、108-109、109-1010、1010-1011、1011-1012、
12 13 13 14
10 -10 或10 -10 CFU。
[0110] 在一些实施方案中,该制剂的施用剂量可包括每周至少约7x 1010CFU,例如,21x 1010CFU。在一些实施方案中,该制剂的施用剂量可包括每周约1x 109至约10x 109CFU,例如,每周约1x 109至约10x 109CFU。在一些实施方案中、该制剂的施用剂量可包括每周约为
3 4 5 6 7 8 9 10 11 11 11 12 12 12
或大于约10 、10、10 、10、10 、10、10、10 、10 、2x 10 、5x 10 、10 、2x 10 、5x 10 、
1013、2x 1013、5x 1013、或1014CFU;或约103-104、104-105、106-107、107-108、108-109、109-1010、
1010-1011、1011-1012、1012-1013或1013-1014CFU。
[0111] 在一些实施方案中,该制剂的施用剂量可包括每个月至少约30x 1010CFU,例如,90x 1010CFU。在一些实施方案中,该制剂的施用剂量可包括每个月约1x 109至约10x 
109CFU,例如,每个月约1x 109至约10x 109CFU。在一些实施方案中,该制剂的施用剂量可包括每个月约为或大于约103、104、105、106、107、108、109、1010、1011、2x 1011、5x 1011、1012、2x 
1012、5x 1012、1013、2x 1013、5x 1013、或1014CFU;或约103-104、104-105、106-107、107-108、108-
109、109-1010、1010-1011、1011-1012、1012-1013、或1013-1014CFU。
[0112] 在一些实施方案中,氨氧化微生物的制剂可包含约0.1毫克(mg)至约1000mg氨氧化微生物。在一些方面,制剂可包含约50mg至约1000mg氨氧化微生物。制剂可包含约0.1-
0.5mg、0.2-0.7mg、0.5-1.0mg、0.5-2mg、0.5-5mg、2.5-5mg、2.5-7.0mg、5.0-10mg、7.5-
15mg、10-15mg、15-20mg、15-25mg、20-30mg、25-50mg、25-75mg、50-75mg、50-100mg、75-
100mg、100-200mg、200-300mg、300-400mg、400-500mg、500-600mg、600-700mg、700-800mg、
800-900mg、900-1000mg、100-250mg、250-500mg、100-500mg、500-750mg、750-1000mg或500-
1000mg。
[0113] 有利地,制剂可以具有促进AOM(例如,真养亚硝化单胞菌)活力(例如,代谢活性)的pH水平。尿素将水解为氨并且将使pH提高到7至8。AOB在该pH范围下极具活性并且将使pH降低至约6,在此pH下NH3转化为铵并且不可利用。较低的pH水平(例如,约pH4)也是可接受的。
[0114] 氨氧化微生物(例如,真养亚硝化单胞菌)可以与一种或多种药学上或美容上可接受的赋形剂组合。在一些实施方案中,“药学上可接受的赋形剂”是指药学上可接受的物质、组合物或媒介物,诸如液体或固体填充剂、稀释剂、溶剂或封装材料。在一些实施方案中,每种赋形剂从与药物制剂的其它成分相容的意义上说是“药学上可接受的”,并且适用于接触人类和动物的组织或器官,而没有过度的毒性、刺激、过敏反应、免疫原性或其它问题或并发症,与合理的效益/险比相称。参见Remington:The Science and Practice of Pharmacy,第21版;Lippincott Williams&Wilkins:Philadelphia,Pa.,2005;Handbook of Pharmaceutical Excipients,第6版;Rowe等人编辑;The Pharmaceutical Press and the American Pharmaceutical Association:2009;Handbook of Pharmaceutical 
Additives,第3版;Ash和Ash编辑;Gower Publishing Company:2007;Pharmaceutical Preformulation and Formulation,第2版;Gibson编辑;CRC Press LLC:Boca Raton,
Fla.,2009。
[0115] 在一些实施方案中,美容上可接受的赋形剂是指美容上可接受的物质、组合物或媒介物,诸如液体或固体填充剂、稀释剂、溶剂或封装材料。在一些实施方案中,每种赋形剂从与美容制剂的其它成分相容的意义上说是美容上可接受的,并且适用于接触人类和动物的组织或器官,而没有过度的毒性、刺激、过敏反应、免疫原性或其它问题或并发症,与合理的效益/风险比相称。
[0116] 虽然活性成分(例如,氨氧化微生物,例如真养亚硝化单胞菌)可以单独施用,但在许多实施方案中,其存在于药物制剂或组合物中。因此,本发明提供一种药物制剂,其包含氨氧化微生物例如真养亚硝化单胞菌,以及药学上可接受的赋形剂。药物组合物可以采用如下所述的药物制剂的形式。
[0117] 根据一个或多个实施方案,可以配制氨氧化微生物的制剂,以促进所需的递送机制或其施用方式。本发明所述的制剂,例如药物或美容制剂包括适合于例如,口服、肠内(包括颊、舌下、唇下和直肠)、肠胃外(包括皮下、皮内、肌内、静脉内和关节内)、吸入(包括可通过各种计量剂量、加压气雾剂、雾化器或吹入器产生的细颗粒粉尘或雾,且包括鼻内或通过部)、鼻内、眼、、直肠、注射、泌尿生殖器和局部的(包括皮肤、经皮、跨粘膜、颊、舌下和眼内)施用的那些,然而最合适的途径可取决于例如接受者的病症或疾病。
[0118] 根据一个或多个非限制性实施方案,包含氨氧化微生物的制剂可以施用于受试者,例如用于美容或治疗目的,其作为溶液、悬浮液、粉末、液体、滴剂、喷雾剂、气雾剂、雾剂、乳液、泡沫、霜、软膏、凝胶、水凝胶、树脂、片剂、胶囊、薄膜、栓剂、灌肠剂、冲洗剂、子宫托、插入剂、贴片例如透皮贴剂、或可植入设备,例如,支架、导管、阴道环、或子宫内设备。
[0119] 还公开了配置成通过所需的施用方式或通过靶向递送来递送包含活氨氧化微生物的制剂的设备。
[0120] 根据一个或多个实施方案,制剂可以配制用于靶向递送至受试者,例如,递送至受试者的靶组织、区域、系统或器官。例如,制剂可以配制用于递送至受试者的眼,耳,鼻,泌尿生殖系统、呼吸系统或胃肠系统。在一些实施方案中,靶向递送可以基于受试者的病症或疾病。例如,用于靶向递送的制剂可以基于要实现的期望的局部或全身效果,例如局部或全身治疗或美容效果。在一些实施方案中,可以选择受试者的靶组织、区域、系统或器官,以使其与期望的局部或全身效果相关联。
[0121] 制剂可以方便地以单位剂型呈现,并且可以通过药学领域中已知的任何方法来制备。通常,方法包括使活性成分(例如,氨氧化微生物,例如真养亚硝化单胞菌)与组成一种或多种辅助成分的药物载体缔合的步骤。通常,通过使活性成分与液体载体或微细固体载体或两者均匀和紧密地缔合且然后在必要时使产品成型为所需制剂来制备配制物。
[0122] 配制物可以呈现为离散单位如:胶囊剂、扁囊剂或片剂,每个单位包含预定量的例如真养亚硝化单胞菌;散剂或颗粒剂;在水性液体或非水性液体中的溶液或悬浮液;或呈现为水包油液体乳剂或油包水液体乳剂。配制物,例如溶液、气雾剂、喷雾剂和雾剂,可以多剂量形式存在,例如包括预定数量剂量的包装单位,或单剂量形式,例如包括单剂量的包装单位。活性成分还可以呈现为大丸剂、药糖剂或糊剂。各种药学上可接受的载体和它们的制剂描述于标准配制论文例如E.W.Martin所著的Remington's Pharmaceutical Sciences中。还参见Wang,Y.J.和Hanson,M.A.,Journal of Parenteral Science and Technology,
Technical Report No.10,Supp.42:2 S,1988。
[0123] 氨氧化微生物(例如,真养亚硝化单胞菌)组合物可以例如以适于立即释放或长期释放的形式来施用。合适的缓释系统的实例包括合适的聚合物材料,例如呈成形制品的形式(例如,薄膜或微胶囊)的半渗透性聚合物基质;合适的疏水性材料,例如作为在可接受的油中的乳剂;或离子交换树脂。缓释系统的施用方式可以为:口服;经直肠;肠胃外;脑池内;阴道内;腹膜内;局部,例如作为粉末、软膏、凝胶、滴剂或透皮贴剂;口腔;或作为喷雾剂。
[0124] 可以适当地配制用于施用的制剂以提供氨氧化微生物(例如,真养亚硝化单胞菌)的控制释放。例如,药物组合物可以为包含生物可降解聚合物、多糖胶凝和/或生物粘附聚合物或两亲性聚合物中的一种或多种的颗粒的形式。这些组合物表现出允许活性物质的控制释放的一些生物相容性特征。参见美国专利第5,700,486号。
[0125] 示例性组合物包括混悬液,其可以含有例如用于赋予体积的微晶纤维素、作为悬浮剂的藻酸或藻酸钠、作为粘度增强剂的甲基纤维素、磷酸二淀粉硬脂酸镁和/或乳糖和/或其它赋形剂、粘合剂、增量剂、崩解剂、稀释剂和润滑剂、甘露醇、乳糖、蔗糖和/或环糊精。该制剂中还可以包含高分子量赋形剂如纤维素(avicel)或聚乙二醇(PEG)。此类制剂还可以包含用于辅助粘膜粘附的赋形剂,如羟丙基纤维素(HPC)、羟丙基甲基纤维素(HPMC)、羧甲基纤维素钠(SCMC)、来酸酐共聚物(例如,Gantrez),以及用于控制释放的试剂如聚丙烯酸类共聚物(例如,Carbopol 934)。还可以添加润滑剂、助流剂、香料、着色剂和稳定剂以便于制造和使用。表面活性剂可以是两性离子型表面活性剂、非离子型表面活性剂或阴离子型表面活性剂。
[0126] 可以用于本发明的实施方案的赋形剂如表面活性剂可以包括下列中的一种或多种:椰油酰胺丙基甜菜碱(ColaTeric COAB)、聚山梨醇酯(例如,Tween 80)、乙氧基化月桂醇(RhodaSurf 6 NAT)、月桂基醚硫酸钠/月桂基葡糖苷/椰油酰胺丙基甜菜碱(Plantapon 
611 L UP)、月桂基醚硫酸钠(例如,RhodaPex ESB 70 NAT)、烷基聚葡糖苷(例如,
Plantaren 2000 N UP)、月桂基醚硫酸钠(Plantaren 200)、布朗纳博士的卡斯蒂利亚肥皂、布朗纳博士的婴儿肥皂、月桂胺氧化物(ColaLux Lo)、十二烷基硫酸钠(SDS)、聚磺酸酯烷基聚葡糖苷(PolySufanate 160 P)、月桂基硫酸钠(Stepanol-WA Extra K)及其组合。布朗纳博士的卡斯蒂利亚肥皂和布朗纳博士的婴儿肥皂包含水、有机椰子油、氢氧化钾、有机橄榄油、有机公平交易麻油(organic fair deal hemp oil)、有机荷荷巴油、柠檬酸和生育酚。
[0127] 在一些实施方案中,表面活性剂可以以允许亚硝酸盐产生发生的量与氨氧化微生物一起使用。在一些实施方案中,所述制剂可以具有少于约0.0001%至约10%的表面活性剂。在一些实施方案中,所述制剂可以具有约0.1%至约10%的表面活性剂。在一些实施方案中,所用的表面活性剂的浓度可以在约0.0001%至约10%之间。在一些实施方案中,所述制剂可以基本上不含表面活性剂。
[0128] 在一些实施方案中,配制物例如制剂可以包括可增强氨氧化微生物的有效性、增强其递送,或增强治疗或指示的其它组分。
[0129] 在一些实施方案中,制剂中可以包含螯合剂。螯合剂可以是可以与另一种化合物(例如,金属)结合的化合物。螯合剂可以帮助从环境中去除不想要的化合物,或可以以保护方式起到减少或消除特定化合物与环境(例如,氨氧化微生物,例如氨氧化微生物的制剂,例如赋形剂)的接触的作用。在一些实施方案中,所述制剂可以基本上不含螯合剂。
[0130] 配制物还可以包含抗氧化剂、缓冲剂、防止非所需微生物的生长的制菌剂、溶质以及可以包含悬浮剂和增稠剂的水性和非水性无菌混悬液。配制物可以呈现在单位剂量或多剂量容器(例如,密封的安瓿和小瓶)中,并且可以储存在仅需要在使用前立即加入无菌液体载体(例如,盐水或注射用水)的冷冻干燥(冻干)条件下。临时性溶液和悬浮液可以由先前所描述的种类的粉末、颗粒和片剂制备。示例性组合物包括溶液或悬浮液,其可以含有例如合适的无毒的药学上可接受的稀释剂或溶剂,如甘露醇、1,3-丁二醇、水、林格氏溶液、等渗氯化钠溶液或其它合适的分散剂或湿润剂和悬浮剂,包括合成的单甘油酯或二甘油酯,以及脂肪酸,包括油酸或Cremaphor。水性载体可以是例如在约3.0至约8.0的pH、约3.5至约7.4(例如3.5至6.0,例如3.5至约5.0)的pH下的等渗缓冲溶液。有用的缓冲剂包括柠檬酸钠-柠檬酸和磷酸钠-磷酸,以及乙酸钠/乙酸缓冲剂。在一些实施方案中,组合物不包含氧化剂。
[0131] 可以被包含的赋形剂是例如蛋白质,如人血清白蛋白血浆制剂。必要时,药物组合物还可以含有少量的无毒辅助物质,诸如润湿剂或乳化剂、防腐剂和pH缓冲剂等,例如乙酸钠或山梨糖醇酐单月桂酸酯。在一些实施方案中,赋形剂(例如,药学上可接受的赋形剂或美容上可接受的赋形剂)可以包括抗粘附剂、粘合剂、涂层剂、崩解剂、填充剂、调味剂、着色剂、润滑剂、助流剂、吸附剂、防腐剂或甜味剂。在一些实施方案中,所述制剂可以基本上不含赋形剂。
[0132] 在一些实施方案中,制剂可以基本上不含本发明中所列的化合物或物质中的一种或多种。
[0133] 用于喷雾剂、气雾剂或雾剂施用的示例性组合物包括盐水溶液,其可以含有例如苄醇或其它合适的防腐剂、用于提高生物利用度的吸收促进剂和/或其它增溶剂或分散剂。方便的是,在用于气雾剂施用的组合物中,氨氧化微生物例如真养亚硝化单胞菌是以来自加压包装或喷雾器的气雾剂喷雾表现的形式、使用合适的推进剂(例如,二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其它合适的气体)来递送。在加压气雾剂的情况下,剂量单位可以通过提供以递送计量的量来确定。可以将由例如明胶制成的胶囊和药盒配制成包含真养亚硝化单胞菌和合适的粉末基质(例如,乳糖或淀粉)的粉末混合物。在一些实施方案中,真养亚硝化单胞菌是作为气雾剂,通过气雾剂适配器(又称促动器)从定量阀施用。任选地,还包括稳定剂,且/或包括用于深肺递送的多孔颗粒(例如,参见美国专利第6,
447,743号)。
[0134] 配制物可以与载体如可可脂、合成甘油酯或聚乙二醇一起呈现。此类载体在常温下通常为固体,但在体温下液化和/或溶解以释放氨氧化细菌,例如真养亚硝化单胞菌。
[0135] 用于局部施用的示例性组合物包括局部载体如Plastibase(与聚乙烯一起胶化的矿物油)。在一些方面,所述组合物和/或赋形剂可以是液体、固体或凝胶中的一种或多种的形式。例如,液体混悬剂可以包括但不限于水、盐水、磷酸盐缓冲盐水或氨氧化储存缓冲液。
凝胶配制物可以包括但不限于琼脂、二氧化、聚丙烯酸(例如 )、羧甲基纤维
素、淀粉、瓜耳胶、藻酸盐或壳聚糖。在一些实施方案中,配制物可以补充有氨源,包括但不限于氯化铵或硫酸铵。
[0136] 在一些实施方案中,氨氧化微生物(例如,真养亚硝化单胞菌)组合物被配制来提高NO渗透,例如向皮肤或其它靶组织中的渗透。凝胶形成材料如KY胶或各种发胶将对损失到环境空气中的NO形成扩散障碍,从而提高NO的皮肤吸收。皮肤中的NO水平一般不会大大超过20nM/L,因为该水平激活GC并且将会引起局部血管舒张和过量NO的氧化破坏。
[0137] 应当理解的是,除了上文特别提到的成分,如本发明所述的制剂可以包括在涉及所讨论的制剂类型的领域中常用的其它试剂。
[0138] 配制物(例如,制剂,例如组合物)可以提供在容器、递送系统或递送设备中,所述容器、递送系统或递送设备的重量(包括或不包括容器的内容物)可以小于约50、100、200、300、400、500、600、700、800、900、1000、1500或2000克。
[0139] 合适的单位剂量制剂是含有如前文所述的有效剂量或其适当分数的氨氧化微生物(例如,真养亚硝化单胞菌)的那些单位剂量制剂。
[0140] 治疗有效量的氨氧化微生物(例如,真养亚硝化单胞菌)可以作为单脉冲剂量、作为团注剂量(bolus dose)或作为随时间施用的脉冲剂量来施用。因此,在脉冲剂量中,提供氨氧化微生物(例如,真养亚硝化单胞菌)的推注施用,在随后的时间段中将氨氧化微生物(例如,真养亚硝化单胞菌)施用给受试者,接着进行第二次推注施用。在具体的非限制性实例中,在一天期间、在一周期间或在一个月期间施用脉冲剂量。
[0141] 在一些实施方案中,可以施用氨氧化微生物的制剂(例如,配制物,例如组合物)达预定的天数。这可以至少部分基于例如病症或疾病的严重程度、对治疗的反应、施用剂量和给药频率。例如,可以施用所述制剂约1-3天、3-5天、5-7天、7-9天、5-10天、10-14天、12-18天、12-21天、21-28天、28-35天、35-42天、42-49天、49-56天、46-63天、63-70天、70-77天、77-84天、84-91天,例如达约1个月、约2个月、约3个月。在一些实施方案中,施用氨氧化细菌无限期的时间,例如,大于一年、大于5年、大于10年、大于15年、大于30年、大于50年、大于75年。在一些方面,可以施用制剂约16天。
[0142] 在一些实施方案中,可以每天施用氨氧化微生物的制剂(例如,配制物,例如组合物)达预定的次数。这可以至少部分基于例如病症或疾病的严重程度、对治疗的反应、施用剂量和给药频率。例如,可以每天施用所述制剂达1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24次。
[0143] 在一些实施方案中,所述制剂可以每天施用一次。在其它实施方案中,所述制剂可以每天施用两次。在一些实施方案中,可以在某几天施用第一预定量的所述制剂,且在随后的某几天施用第二预定量的所述制剂。在一些实施方案中,可以施用所述制剂约16天。
[0144] 根据一个或多个实施方案,制剂通常可与受试者相关的生理环境相容。在至少一些实施方案中,将组合物配制成具有基本上中性的pH或生理pH,例如通常在靶位中存在的pH,以用于预期的递送、施用或期望的效果。组合物可以配制成具有约5.5至约8.5的pH。组合物可以配制成包含与受试者相关的生理环境的靶位点的相容条件,例如pH、张力。
[0145] 该制剂可配制用于跨粘膜递送和/或循环,例如局部或全身性地。在一些实施方案中,可配制所述制剂使得氨氧化微生物、其产物或其副产物(例如,硝酸盐、亚硝酸盐、NO或CoQ8)渗透沉积组织或靶组织达至少10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%或100%。可配制所述制剂使得10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%或100%的氨氧化微生物、其产物、或其副产物渗透沉积组织或靶组织或进入循环。
[0146] 根据一个或多个实施方案,该制剂可为溶液、悬浮液、乳剂、乳膏、软膏、凝胶、水凝胶或液体(例如滴剂、喷雾剂、气雾剂或雾剂)、片剂、胶囊、或用于施用于受试者的设备的形式。
[0147] 根据一个或多个实施方案,包含氨氧化微生物的制剂、组合物、配制物或产品可在制备和/或完成时对其进行质量控制和/或测试。国际(PCT)专利申请公开No.WO2015/179669(2015年5月21日提交的国际(PCT)专利申请序列号PCT/US2015/032017),其全部内容通过引用结合于此用于所有目的,描述了各种用氨氧化微生物制备材料和测试这些材料的方法。例如,可以将诸如OD水平、pH水平、废物水平、营养物水平、污染物水平、氧化速率、亚硝酸盐水平、蛋白质浓度的一个或多个参数与预定值进行比较,以评估或评价包含氨氧化微生物的制剂。
[0148] 本发明尤其提供了包含如本发明所公开的氨氧化微生物制剂的试剂盒。制剂可包含离散单元,例如氨氧化微生物的固体、液体或气体制剂。制剂,例如溶液、气雾剂、喷雾剂和雾剂,可以多剂量形式(多次使用)呈现,例如包括预定数量剂量的包装单位,或以单剂量形式呈现(单次使用),例如包括单剂量的包装单位。氨氧化微生物的制剂可以包装在设备或容器中,所述设备或容器配置成至少容纳约少于1ml、1ml、5ml、10ml、20ml、25ml、40ml、50ml、60ml、70ml、80ml、90ml、100ml或多于约100ml的体积。
[0149] 试剂盒可以进一步包含一种或多种用于施用制剂的装置,例如注射器、针头、导管、灌肠剂、球管、移液管(眼或耳滴管),以及本领域已知的用于药物施用的其他装置。试剂盒可包括使用说明书,例如本发明公开的用于施用氨氧化微生物的说明书或用于组合疗法的说明书,该组合疗法包括施用氨氧化微生物。试剂盒可以包含第二种或后续的组合物,用于与氨氧化制剂一起施用,如本发明所公开的。例如,试剂盒可包含含有氨氧化微生物的产物或副产物的补充剂或组合物、促进氨氧化微生物的生长或代谢的组合物、促进氨氧化微生物的产物或副产物的产生的组合物、促进脲酶活性的组合物或与氨氧化微生物具有协同作用的组合物,或治疗(例如被批准用于治疗或常用于治疗)相关疾病、病症或相关疾病或病症的症状的组合物或药剂,例如抗炎组合物。试剂盒可包含如本发明所公开的“生物群友好的”或“生物群相容的”产品,例如一种或多种微生物组相容的美容产品。如本发明所述,试剂盒中包含的任何产品都可以被特别配制以治疗目标适应症和/或配制成所需的递送模式。
[0150] 天然产品;消费产品
[0151] 在一些具体实施方案中,如本发明所讨论的包含氨氧化微生物的制剂可以是天然产物或消费产品。或者,在其他实施方案中,氨氧化微生物的制剂可以与天然产物或消费产品结合使用。
[0152] 氨氧化微生物,例如真养亚硝化单胞菌,可以与各种天然产品结合,这些产品的实例如下所述。这些天然产品可以包括贯穿本发明公开的配制物、组合物或制剂。
[0153] 天然产品可以是或包含商用产品,并且可以指由天然来源产生的美容产品、膳食补充剂和食品,例如,食物、食品补充剂、医疗食品、食品添加剂、营养品或饮料。天然产品可具有可例如在治疗疾病或病症中具有治疗益处的药理学或生物学活性。天然产品可包括在传统医药、用于美容目的的治疗和水疗法中。本发明提到的天然产品可包含被描述为天然产品的任何一种或多种组分以掺入包含一种或多种其它组分例如赋形剂的制剂或配制物中。称为天然产品的制剂或配制物可包含本发明定义的天然产品和一种或多种另外的组分或成分。本发明全篇所讨论的任何组合物、制剂或配制物可以是或包含一种或多种天然产品。
[0154] 在一些实施方案中,天然产品或强化的天然产品可以包含下列至少一种:泥、水、食物衍生的产品、植物衍生的产品、提取物和油。可以在水疗中使用天然产品或强化的天然产品。在一些实施方案中,天然产品或强化的天然产品可以掺入到以下至少一种中:粉末、乳霜、洗剂、围巾、擦洗物、眼膜、面膜、体膜、气雾剂(例如雾剂)、喷雾剂、药膏、擦拭物、棒状物、绷带或浸泡物。
[0155] 在一些实施方案中,天然产品或强化的天然产品可以以下列至少一项提供或者可以布置在下列至少一项中:婴儿产品,例如,婴儿洗发剂、婴儿润肤露、婴儿油、婴儿粉、婴儿霜;浴用制剂,例如,沐浴油、片剂、浴盐、泡泡浴、浴胶囊;眼妆制剂,例如,眉笔、眼线、眼影、眼霜、眼部卸妆液、睫毛膏;香料制剂,例如,古龙香水、花露水、香水、粉末(粉尘和滑石)、香囊;发用制剂,例如,护发素、发胶、直发膏、烫发水、冲洗液、洗发剂、生发液、敷料、毛发梳理助剂、卷发液;毛发着色制剂,例如,染发剂颜色、毛发着色剂、染发漂洗剂、染发洗发剂、有色的头发提亮剂、头发漂白剂;化妆制剂,例如,粉饼、粉底、腿部和身体涂料、唇膏、妆前底霜、胭脂、化妆固定剂;美甲制剂,例如,底漆和内涂层、质层软化剂、指甲霜和指甲乳液、指甲延长、指甲油、指甲油去除剂;口腔卫生产品,例如,牙粉、漱口水和口气清新剂;浴用香皂和清洁剂、除臭剂、冲洗液、女性卫生除臭剂;剃须制剂,例如,剃须后润肤液、胡须软化剂、滑石粉、剃须前洗剂、剃须膏、剃须皂;护肤制剂,例如,清洗、脱毛、面部及颈部、身体和手部、足部的粉末和喷雾、保湿、夜用制剂、粘贴面罩、皮肤清新剂;以及晒黑制剂,例如,凝胶、乳膏和液体和室内晒黑制剂。
[0156] 氨氧化微生物,例如真养亚硝化单胞菌,可以与各种消费产品相关联,这些产品的实例如下所述,并且包括贯穿本发明内容公开的配制物、组合物或制剂。在一些实施方案中,将氨氧化细菌(例如与产品相关的真养亚硝化单胞菌)与产品混合,例如,均匀地涂布在整个产品上,并且在一些实施方案中,氨氧化细菌,例如与产品相关的真养亚硝化单胞菌,在产品上分层。
[0157] 在一些实施方案中,所述制剂可以布置在粉末、美容产品、乳霜、棒状物、气雾剂例如雾剂、药膏、擦拭物或绷带中,或作为这些来提供。
[0158] 在一些实施方案中,氨氧化细菌(例如,真养亚硝化单胞菌)与粉末相关。粉末通常是小颗粒固体,它们彼此不粘附并且在倾斜时可以自由流动。消费用途的示例性粉末包括滑石粉和一些美容产品(例如,粉底霜)。
[0159] 在一些实施方案中,氨氧化细菌与美容产品相关。美容产品可以是旨在改变个人的外观的供局部施用的物质,例如,粉底液、粉底霜、腮红或唇膏,并且可以成为制剂。美容产品可以是在食品和药物管理法规中例如根据21C.F.R.§720.4所列举的任何物质。
[0160] 在一些实施方案中,氨氧化细菌(例如,真养亚硝化单胞菌)与美容产品相关。美容产品可以是旨在改变个人的外观的供局部施用的物质,例如,粉底液、粉底霜、腮红或唇膏。可以向这些美容产品制剂中添加由美容产品制剂领域的技术人员选择的其它组分,诸如
(例如)水、矿物油、着色剂、香料、芦荟、甘油、氯化钠、碳酸氢钠、pH缓冲剂、防紫外线剂、硅油、天然油、维生素E、草药浓缩物、乳酸、柠檬酸、滑石、粘土、碳酸钙、碳酸镁、氧化锌、淀粉、尿素和异抗坏血酸,或本领域技术人员已知的任何其它赋形剂(包括本发明中所公开的那些)。
[0161] 该制剂,例如,美容产品,可以为下列至少一项:婴儿产品,例如,婴儿洗发剂、婴儿润肤露、婴儿油、婴儿粉、婴儿霜;浴用制剂,例如,沐浴油、片剂、浴盐、泡泡浴、浴胶囊;眼妆制剂,例如,眉笔、眼线、眼影、眼霜、眼部卸妆液、睫毛膏;香料制剂,例如,古龙香水、花露水、香水、粉末(粉尘和滑石)、香囊;发用制剂,例如,护发素、发胶、直发膏、烫发水、冲洗液、洗发剂、生发液、敷料、毛发梳理助剂、卷发液;毛发着色制剂,例如,染发剂和颜色、毛发着色剂、染发漂洗剂、染发洗发剂、有色头发提亮剂、头发漂白剂;化妆制剂,例如,粉饼、粉底、腿部和身体涂料、唇膏、妆前底霜、胭脂、化妆固定剂;美甲制剂,例如,底漆和内涂层、角质层软化剂、指甲霜和指甲乳液、指甲延长、指甲油、指甲油去除剂;口腔卫生产品,例如,牙粉、漱口水和口气清新剂;浴用香皂和清洁剂、除臭剂、冲洗液、女性卫生除臭剂;剃须制剂,例如,剃须后润肤液、胡须软化剂、滑石粉、剃须前洗剂、剃须膏、剃须皂;护肤制剂,例如,清洗、脱毛、面部及颈部、身体和手部、足部的粉末和喷雾剂、保湿、夜用制剂、粘贴面罩、皮肤清新剂;以及晒黑制剂,例如,凝胶、乳膏和液体和室内晒黑制剂。
[0162] 在一些实施方案中,本发明所述的配制物、组合或制剂,可包含下列至少一项、以以下列至少一项提供或者可以布置在下列至少一项中:婴儿产品,例如,婴儿洗发剂、婴儿润肤露、婴儿油、婴儿粉、婴儿霜;浴用制剂,例如,沐浴油、片剂、浴盐、泡泡浴、浴胶囊;粉末(粉尘和滑石)、香囊;发用制剂,例如,护发素、冲洗液、洗发剂、生发液、粉饼、角质层软化剂、指甲霜和指甲乳液、口腔卫生产品、漱口水、浴用香皂、冲洗液、女性卫生除臭剂;剃须制剂,例如,剃须后润肤液、护肤制剂,例如,清洗、面部及颈部、身体和手部、足部的粉末和喷雾、保湿、夜用制剂、粘贴面罩、皮肤清新剂;以及晒黑制剂,例如,凝胶、乳膏和液体。
[0163] 在一些实施方案中,氨氧化微生物,例如,真养亚硝化单胞菌与气雾剂、喷雾剂或雾剂相关,且这些术语可互换使用。气雾剂通常是微细固体颗粒或微细液滴在气体如空气中的胶体。气雾剂可以通过将真养亚硝化单胞菌(和任选的载体)放置在处于压力下的容器中且然后打开阀门以释放内容物来产生。所述容器可以被设计为仅施加与真养亚硝化单胞菌活力相容的压力水平。例如,仅可以短时间施加高压力,且/或压力可以足够低而不损害活力。气雾剂的消费用途的实例包括用于防晒霜、脱臭剂、香料、发胶和驱虫剂。气雾剂可以称为喷雾剂或雾剂。
[0164] 包含氨氧化微生物(例如,真养亚硝化单胞菌)的组合物还可以包含保湿剂、脱臭剂、香味剂、着色剂、驱虫剂、清洁剂或防紫外线剂中的一种或多种。
[0165] 在一些实施方案中,氨氧化微生物,例如,真养亚硝化单胞菌与布料、纱线或线相关。还可以用氨氧化细菌(例如,真养亚硝化单胞菌)处理服装制品,如(例如)类、鞋垫、睡衣、运动鞋、皮带、帽子、衬衫、内衣、运动服装、头盔、毛巾、手套、袜子、绷带等。还可以用氨氧化细菌(例如,真养亚硝化单胞菌)处理床上用品,包括床单、枕头、枕套和毛毯。在一些实施方案中,氨氧化细菌(例如,真养亚硝化单胞菌)还可以接触在一段时间内不能清洗的皮肤区域。例如,封闭在矫形铸件(其在愈合过程中固定受伤肢体)中的皮肤,以及为了适当愈合而必须保持干燥的接近受伤处的区域(如缝合伤口)可以受益于与氨氧化细菌(例如,真养亚硝化单胞菌)的接触。
[0166] 在一些方面,本发明提供了一种可穿戴制品,其包含如本发明所述的氨氧化微生物。可穿戴制品可以是能够与使用者的身体密切相连而不妨碍行走的轻质制品。可穿戴制品的实例包括手表、腕带、头带、头筋、发网、浴帽、帽子、假发和珠宝。包含氨氧化细菌(例如,本发明所述的真养亚硝化单胞菌菌株)的可穿戴制品可以例如在提供下列中的一个或多个的浓度下提供:治疗或预防皮肤病症、治疗或预防与低亚硝酸盐水平有关的疾病或病症、治疗或预防体臭、用于向受试者供应一氧化氮的治疗或用于抑制微生物生长的治疗。
[0167] 在一些实施方案中,氨氧化微生物(例如,真养亚硝化单胞菌)与旨在接触毛发的产品(例如,刷子、梳子、洗发剂、护发素、头带、头筋、发网、浴帽、帽子和假发)相关。在头发上形成的远离皮肤表面的一氧化氮可以被捕获在帽子、头巾或面罩内并引导至吸入的空气中。
[0168] 接触人类受试者的表面的制品如尿布可以与氨氧化微生物(例如,真养亚硝化单胞菌)相关。因为尿布被设计成保持和容纳由失禁个体产生的尿液和粪便,尿液和粪便中的尿素可以被皮肤和粪便细菌水解而形成游离氨,所述游离氨具有刺激性且可导致尿布疹。
掺入将尿素代谢成亚硝酸盐或硝酸盐的细菌(如氨氧化细菌,例如,真养亚硝化单胞菌)可以避免游离氨的释放,并且可以释放亚硝酸盐和最终NO,它们可以有助于维持儿童和失禁成年人的健康皮肤。一氧化氮在尿布中的释放还可以对存在于人类粪便中的致病生物体具有抗微生物作用。这种作用即使在一次性尿布被作为废物处置后仍可以持续,并且可以通过接触弄脏的一次性尿布而减少疾病传播的发生。
[0169] 在一些实施方案中,将包含氨氧化微生物(例如,真养亚硝化单胞菌)的产品包装。包装可以用于压缩产品或保护其免受损坏、污垢或降解。包装可以包括例如塑料、纸、纸板或木材。在一些实施方案中,包装是不透细菌的。在一些实施方案中,包装可渗透氧气和/或二氧化碳。
[0170] 氨氧化微生物的处理方法
[0171] 根据一个或多个实施方案,可以通过施用氨氧化微生物例如,包含氨氧化微生物的制剂来治疗受试者。如本发明所用,受试者的治疗可包括施用氨氧化微生物组合物以用于美容或治疗结果。例如,治疗可包括治疗或缓解病症、与病症相关的症状或副作用或实现所需的美容效果。
[0172] 受试者可包括动物、哺乳动物、人、非人动物、家畜或伴侣动物。受试者可以是女性或男性。受试者可具有各种皮肤类型。受试者可具有各种与健康相关的概况,包括健康史和/或遗传倾向。受试者通常可具有正常的微生物组,例如生理微生物组,或破坏的微生物组。该受试者可以被表征为以下种族/民族之一:亚洲人、黑人或非裔美国人、西班牙裔或拉丁裔,白人或多种族。受试者的年龄可以是小于1岁、或1-5岁、5-10岁、10-20岁、20-30岁、30-40岁、40-50岁、50-60岁或60岁以上。
[0173] 可用于治疗受试者的氨氧化微生物包括所有氨氧化微生物,例如本申请中描述的真养亚硝化单胞菌组合物,例如,优化的氨氧化微生物例如菌株D23的纯化制剂。
[0174] 可以提供所述方法以施用或递送治疗产品或美容产品。所述方法可以包括向受试者施用或引入包含活氨氧化微生物的制剂。可以配制制剂以治疗目标适应症和/或配制用于所需的递送模式。
[0175] 根据一个或多个实施方案,可以将包含活氨氧化微生物的制剂施用于受试者的第一组织。第一组织可以是沉积组织。第一组织可以是靶组织或除靶组织之外的组织。然后,活氨氧化微生物或其产物,例如亚硝酸盐和/或一氧化氮,可以例如通过扩散移动或被输送到第二组织。第二组织可以是靶组织。靶组织可以与期望的局部或全身效果相关联。靶组织可以与待治疗的适应症、疾病或病症相关。
[0176] 氨氧化微生物制剂可以施用于例如皮肤,用于美容或治疗效果。例如,施用可以提供美容治疗、益处或效果。在一些实施方案中,施用可以提供油性外观、毛孔外观、光泽、斑点、肤色均匀度、视觉平滑度和触觉光滑度中的一种或多种的治疗或改善。在一些实施方案中,受试者的美容外观可以改变,例如可由改善皮肤健康所致。衰老的迹象会减少、延迟或逆转。施用可以导致皮肤和/或头皮状况和/或质量的定性改善。可以改善受试者的皮肤光滑度、水合作用、紧致度和/或柔软度。本发明还提供了减少体臭的方法。
[0177] 施用可以提供治疗性的治疗、益处或效果。本发明提供了向受试者供应亚硝酸盐和一氧化氮的方法。本发明提供了使用氨氧化微生物抑制、治疗或预防疾病、病症、感染和状况的各种方法。氨氧化微生物可用于例如治疗与低亚硝酸盐水平相关的各种疾病、皮肤病和由病原菌引起的疾病。在一些实施方案中,施用可以提供炎症的减轻。事实上,可证明局部或全身抗炎作用。在一些非限制性实施方案中,炎症可以被下调。在至少一些实施方案中,可以抑制微生物生长。可改善皮肤和整体健康。可增加循环不足。可促进内皮功能。可证明靶组织或循环中亚硝酸盐或NO水平的变化。在一些实施方案中,施用(例如施用有效量)可以调节、改变或修改靶组织或循环中亚硝酸盐或NO的水平。在一些实施方案中,施用(例如施用有效量)可导致靶组织或循环中亚硝酸盐或NO水平增加。
[0178] 施用本发明的组合物可提供跨粘膜递送和/或循环,例如局部或全身性地。在一些实施方案中,施用可使得氨氧化微生物、其产物或其副产物(例如,硝酸盐、亚硝酸盐、NO或CoQ8)渗透沉积组织或靶组织达至少10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%或100%。在至少一些实施方案中,在施用本发明的组合物后,10%、20%、30%、40%、50%、
60%、70%、80%、90%或100%的氨氧化微生物、其产物或其副产物渗透沉积组织或靶组织或进入循环。
[0179] 本发明的制剂和方法可以提供从与受试者相关的环境中减少不期望的微生物的量。本发明所述的氨氧化微生物可以通过例如消耗稀缺的营养物或产生对其他生物有害的副产物而胜过其他生物体,例如,改变pH水平使其不利于不期望生物体生长。
[0180] 本发明内容还提供促进创伤(包括慢性创伤)愈合的方法,例如愈合能力受损的患者,例如糖尿病患者。可任选地将包含氨氧化微生物的绷带施用于创伤。
[0181] 应当理解,许多现代退行性疾病可由缺乏NO物质引起,并且可以施用AOM以将这些物种直接供应至靶组织或通过扩散供应至靶组织。AOM的应用可以解决长期的医疗状况。在一些实施方案中,将AOM应用于受试者以抵消现代沐浴实践,尤其是使用从外皮肤除去AOM的阴离子洗涤剂。
[0182] 根据一个或多个实施方案,AOM将氨转化为亚硝酸盐(一种抗微生物化合物)和一氧化氮(一种经充分证明的炎症过程中的信号传递分子)。
[0183] 本发明尤其提供了调节微生物组组成的方法,例如,调节或改变环境例如表面(例如受试者的表面)中微生物组的比例。反过来,这可表现出与健康相关的益处。该方法可包括向受试者施用包含氨氧化微生物的制剂。在一些实施方案中,施用(例如应用)的量和频率可足以减少病原微生物的比例。
[0184] 将氨氧化微生物应用于受试者(例如人受试者)可导致微生物组的意外变化。它可导致正常共生非病原性物种的比例增加,并导致潜在病原性、致病性或引起疾病的生物体的比例减少。
[0185] 非病原菌比例的增加可在预定时间段发生,例如,在少于1天、2天、3天、4天、5天、1周、2周、3周或4周内,或在少于1-3天、3-5天、5-7天、7-9天、5-10天、10-14天、12-18天、12-21天、21-28天、28-35天、35-42天、42-49天、49-56天、46-63天、63-70天、70-77天、77-84天、
84-91天内。
[0186] 病原菌比例的减少可在预定时间段发生,例如,在少于1天、2天、3天、4天、5天、1周、2周、3周、或4周内,或在少于1-3天、3-5天、5-7天、7-9天、5-10天、10-14天、12-18天、12-21天、21-28天、28-35天、35-42天、42-49天、49-56天、46-63天、63-70天、70-77天、77-84天、
84-91天内。
[0187] 根据一个或多个实施方案,可评估受试者的治疗需要。在一些实施方案中,可以基于需要治疗的受试者来选择受试者。本发明可以进一步提供从受试者获得样品并分析样品。在一些实施方案中,可以在治疗之前、期间和/或之后,例如以预定的时间间隔评估受试者。
[0188] 根据一个或多个实施方案,可以在健康相关病症发生之前、期间或之后,或响应于其警告标志、触发或症状,进行施用。根据一个或多个实施方案,可以向受试者施用第二量的制剂,例如第二剂量。
[0189] 在一些方面,本发明提供了组合疗法,其包含氨氧化微生物例如真养亚硝化单胞菌和第二治疗,例如,治疗剂。例如,本发明提供了物理混合两种(或更多种)疗法的物理混合物。在其他实施方案中,两种(或更多种)疗法作为单独的制剂组合施用。第二疗法可以是例如药剂、外科手术、诊断剂或任何其他医学方法,其治疗(例如被批准治疗或常用于治疗)相关疾病、障碍或相关疾病或障碍的症状。第二治疗可以在施用之前或之后施用。有效量可以与第二治疗同时施用。第二治疗可以通过相同或不同的递送方式施用。在施用制剂后,受试者可具有治疗水平的第二治疗。在一些实施方案中,第二治疗可以提供抗炎作用或者被施用以减少靶部位的炎症。在至少一些实施方案中,制剂可以与氨氧化微生物的产物或副产物例如亚硝酸盐、硝酸盐、一氧化氮、CoQ8同时或与其一起施用。在至少一些实施方案中,制剂可以与以下组合物同时施用或一起施用:促进氨氧化微生物的生长或代谢,促进氨氧化微生物的产物或副产物的产生,促进脲酶活性,或与氨氧化微生物具有协同作用的组合物,例如氨、铵盐、尿素和脲酶。
[0190] 制剂可以与微生物组清洁制剂例如局部或全身抗生素一起施用。可以在施用清洁制剂或肠清洁后施用制剂。制剂可以在手术程序、诊断程序或自然事件(例如分娩)之前或之后施用。可以在可植入或侵入性设备的沉积之前、期间或之后施用制剂。
[0191] 根据一个或多个实施方案,制剂可以作为镇痛剂或预防剂施用。制剂可以是自我施用的。制剂的施用可以是设备辅助的。
[0192] 在一些实施方案中,所述氨氧化微生物,例如,氨氧化微生物的制剂,以每次施加、每天、每周或每个月约为或大于约103–104CFU、104–105CFU、105–106CFU、106–107CFU、107–108CFU、108–109CFU、109–1010CFU、1010–1011CFU、1011-1012CFU、1012-1013CFU、或1013-1014CFU的剂量施加。在一些实施方案中,所述氨氧化微生物以每次施加或每天约109-1010CFU,例如,约1x 109–5x 109、1x 109–3x 109、或1x 109–10x 109CFU的剂量施加。
[0193] 在一些实施方案中,所述氨氧化微生物以每剂约1-2、2-5、5-10、10-15、12-18、15-20、20-25、或25-50ml的体积施加。在一些实施方案中,溶液的浓度为约108-109,109-1010,或
1010-1011CFU/ml。在一些实施方案中,氨氧化微生物以每天两个15ml剂量施用,其中每剂的浓度为109CFU/ml。
[0194] 在一些实施方案中,氨氧化微生物每天施用一次、两次、三次或四次。在一些实施方案中,氨氧化微生物每周施用一次、两次、三次、四次、五次或六次。在一些实施方案中,氨氧化微生物在沐浴后不久施用。在一些实施方案中,氨氧化微生物在睡眠前不久施用。
[0195] 在一些实施方案中,氨氧化微生物施用约1-3天、3-5天、5-7天、7-9天、5-10天、10-14天、12-18天、12-21天、21-28天、28-35天、35-42天、42-49天、49-56天、46-63天、63-70天、
70-77天、77-84天、84-91天,例如施用约1个月、约2个月、约3个月。在一些实施方案中,氨氧化微生物施用无限期,例如,大于1年、大于5年、大于10年、大于15年、大于30年、大于50年、大于75年。
[0196] 氨氧化微生物向胃肠系统中的施用
[0197] 本发明所述的制剂(例如配制物或组合物)可包括适于肠内递送例如口服施用、舌下施用和直肠施用的那些。氨氧化微生物制剂可以施用于胃肠系统用于美容或治疗目的。例如,组合物包括配制用于美容或治疗用途的那些。
[0198] 肠内制剂(例如配制物或组合物)可以方便地以单位剂型存在,并且可以通过药学或美容学领域中已知的任何方法制备。通常,方法包括使活性成分(例如氨氧化微生物)与构成一种或多种辅助成分的药物载体结合的步骤。通常,药物或美容产品制剂通过将活性成分与液体载体或细碎的固体载体或两者均匀且紧密地结合在一起,然后在需要时将产品成型为所需的制剂而制备。
[0199] 肠内制剂可以作为离散单位存在,每个单位含有预定量的活性成分,作为水性或非水性液体中的溶液或悬浮液,作为粉末或颗粒,或作为水包油或油包水液体乳液。各种药学上可接受的载体及其制剂描述于标准制剂论文中,例如Remington’s Pharmaceutical Sciences by E.W.Martin。还参见Wang,Y.J.和Hanson,M.A.,Journal of Parenteral Science and Technology,Technical Report No.10,Supp.42:2 S,1988;Aulton,M.和
Taylor,K.,Aulton’s Pharmaceutics:The Design and Manufacture of Medicines,第5版,2017;Antoine,A.,Gupta M.R.和Stagner,W.C.,Integrated Pharmaceutics:Applied Preformulation,Product Design,and Regulatory Science,2013;Dodou K.Exploring the Unconventional Routes–Rectal and Vaginal Dosage Formulations,The 
Pharmaceutical Journal,29 Aug.2012。
[0200] 本发明公开的组合物可以制备为肠内给药制剂中。氨氧化微生物可以被肠内施用用于美容或治疗目的。肠内制剂通常用于通过胃肠系统的各种上皮和粘膜吸收。例如,组合物可以制成片剂、胶囊、溶液、悬浮液、乳液或栓剂。每种剂型可以配制成包含一种或多种载体或赋形剂,如下面更详细描述的。固体分散体形式可包含片剂和胶囊。片剂可以配制成在胃肠道中分解成颗粒和粉末。胶囊可以配制成软壳或硬壳胶囊。液体分散体形式,例如口服分散体形式,可包含活性剂在载体中的溶液、悬浮液或乳液。
[0201] 制备用于直肠施用的组合物可以与口服片剂、胶囊、溶液、悬浮液和乳液相同或不同地配制。然而,直肠组合物可进一步配制成直肠溶液、栓剂、软膏、凝胶、乳液或薄膜施用。通常,直肠溶液可以是水溶液,例如活性剂的水分散体。直肠软膏可包含活性剂的无水分散体,例如在矿物油-白色石油基质中。直肠凝胶可包含聚合物,例如泊洛沙姆、黄原胶、结冷胶、刺槐豆胶和角叉菜胶。直肠软膏和凝胶可提供比例如水溶液更长的停留时间。较长的停留时间可以进一步允许减少给药间隔。直肠乳液可包含微球体、微囊、纳米颗粒、纳米胶囊、胶束、脂质体、囊泡(niosome)、树枝状大分子或环糊精复合物。直肠膜,例如,可包括水溶性聚合物膜或聚乙烯醇聚合物膜,其在与体液接触时溶解,释放活性剂。
[0202] 本发明公开的氨氧化组合物可包含有效量的AOM,例如,以增加胃肠系统的至少一部分中的粘液稠度,以定殖胃肠系统的组织,治疗胃肠病症或胃肠疾病的症状,改善受试者的消化,或促进内皮功能,例如在胃肠系统内。组合物可以在基本空腹的情况下或在肠清洁或抗生素治疗后施用。在一些实施方案中,在施用氨氧化微生物组合物后向受试者施用水。在一些实施方案中,在施用后等待几个小时再进食。此类组合物可以配制用于局部、口服、舌下、唇下、颊、直肠或设备辅助应用。局部施用制剂可包括例如灌肠剂,冲洗剂,洗涤剂,喷雾剂,气雾剂和雾剂。口服施用制剂通常专门制备以用于通过口服摄入。舌下和唇下制剂,例如片剂、条、滴剂、喷雾剂、气雾剂、雾剂、锭剂和泡腾片剂,可以口服施用,以通过舌头或唇下的结缔组织扩散。具体地,可以将用于舌下施用的制剂置于舌下,并且可以将用于唇下施用的制剂置于唇和牙龈(龈)之间。当剂型包含可对舌下敏感组织具有腐蚀性的材料时,唇下施用是有益的。颊制剂通常可以局部保持或施用于颊区域以通过排列在脸颊处的口腔粘膜组织扩散。与口服施用相比,舌下、唇下和颊施用可以提供更快速的起效,因为活性剂直接进入血流,避免了首过代谢。直肠施用可以通过将制剂插入直肠腔中来实现,可以有或没有设备的帮助。设备辅助的施用可以包括,例如,通过涂药器或可插入的涂药器、导管、饲管递送或与内窥镜或声波一起递送。合适的涂药器包括液体制剂球和发射器以及固体制剂可插入的涂药器。
[0203] 本发明公开的制剂的起效时间可取决于制剂,并且可以为数秒至数分钟至数小时。例如,片剂和直肠固体剂型可在几分钟内提供作用。颊片剂可在几分钟内提供作用。栓剂、溶液和悬浮液可在数分钟或数小时内提供作用。粉末、颗粒、片剂和胶囊可在数分钟至数小时内起作用。改良释放片剂可在数分钟至数小时内提供作用。胃耐受包衣制剂可在数小时内提供作用。本发明公开的制剂的释放时间可取决于制剂,并且可以为数分钟至数小时至数天。例如,可配制剂型以在数分钟内提供快速释放或在数小时内提供延长释放。一些剂型可在数天或数月内提供延长释放。
[0204] 本发明公开的氨氧化微生物组合物可以是片剂或胶囊的形式。片剂通常可包含崩解剂以促使片剂破碎成较小的颗粒,例如颗粒和粉末颗粒,促进溶解和吸收。片剂可以被包衣以提供对环境因素的保护屏障,用于药物稳定性,掩盖令人不快的药物味道,或保护药物免受胃中的酸性条件的影响。片剂可进一步包含填充剂、粘合剂、增量剂和稀释剂以增加片剂的体积,包含粘合剂以促进内聚力,包含抗粘附剂和抗粘剂以减少成膜、粘附和粘着,包含助流剂和流动助剂以降低界面粘合和摩擦,包含润湿剂、增溶剂、稳定剂、着色剂、甜味剂和调味剂。胶囊通常可包含填充剂,例如液体、凝胶、半液体、半固体或微乳液制剂,和包衣,例如硬壳或软壳包衣,其包含凝胶化、羟甲基纤维素或聚合物材料。硬壳胶囊可以填充有固体(例如,粉末、颗粒、丸粒、片剂和胶囊),半固体(例如,凝胶、糊剂和热固性聚合物)和液体(例如溶液、悬浮液、乳液和微乳液)。软壳胶囊可以填充液体和半液体。胶囊可包含增塑剂(例如,甘油、山梨糖醇、丙二醇、聚(乙二醇)、氢化糖、多糖和脱水山梨糖醇)以降低脆性、包含加工助剂以改善胶凝和沉降(例如、角叉菜胶和阳离子)、包含缓冲剂、表面活性剂、润湿剂、润滑剂、着色剂、遮光剂和香料。包衣在施用后可容易破裂或溶解。片剂和胶囊可进一步包含改良释放产品,例如快速溶解用于立即递送或控制、延迟或持续释放,例如基于聚合物的组分或包衣膜。
[0205] 本发明公开的组合物可以特别配制成对胃耐受的,例如,以抵抗胃的苛刻和酸性环境。在一些实施方案中,氨氧化微生物组合物包含在凝胶或琼脂基质中,其配制成耐受酸性环境(例如胃的酸性环境)并在肠的生理pH下分解。制剂可以用组合物包衣,该组合物配制成能够承受一些胃肠环境,并且例如通过在与特定胃肠组织相关的生理环境中分解来递送活性剂。
[0206] 氨氧化微生物组合物可以是液体或半液体分散体形式,例如糖浆或药糖剂。液体和半液体分散体可包含用于递送的载体,用于增加分散介质密度的密度调节剂,例如,以匹配分散颗粒的密度,和增加粘度和减少沉降的粘度调节剂。分散体可包含润湿剂和表面活性剂以降低载体和分散颗粒之间的界面能,用于控制松散聚集体或絮凝物制剂水平的絮凝剂,用于降低产品水分损失速率的保湿剂,以及缓冲剂、甜味剂、调味剂和着色剂,如本发明所公开的。
[0207] 示例性组合物包括悬浮液,其可包含,例如,用于赋予体积的微晶纤维素、作为悬浮剂的海藻酸或藻酸钠、作为粘度增强剂的甲基纤维素、磷酸二钙、淀粉、硬脂酸镁和/或乳糖和/或其它赋形剂、结合剂、增容剂、崩解剂、稀释剂和润滑剂、甘露醇、乳糖、蔗糖和/或环糊精。该制剂还可包含高分子量赋形剂如纤维素(avicel)或聚乙二醇(PEG)。该制剂还可包含辅助粘膜粘附的赋形剂如羟丙基纤维素(HPC)、羟丙基甲基纤维素(HPMC)、羧甲基纤维素钠(SCMC)、马来酸酐共聚物(例如,Gantrez)和控制释放的试剂如聚丙烯酸类共聚物(例如Carbopol 934)。也可添加润滑剂、助流剂、香料、着色剂和稳定剂以方便制造和使用。表面活性剂可为两性离子型表面活性剂、非离子型表面活性剂或阴离子型表面活性剂。
[0208] 栓剂包括用于引入直肠腔的固体剂型。一旦引入直肠腔,栓剂可以融化,释放活性剂。通过选择药学上可接受的载体或栓剂基质可以影响活性剂的递送速率。合适的栓剂基质包括脂肪基和水基。合适的脂肪基制剂可包含可可豆油(可可脂)、鲸蜡(蜂蜡)、合成甘油三酯或来自氢化植物油的甘油三酯、棕榈、棕榈仁或椰子油。合适的水基制剂可包含甘油化明胶或聚乙二醇聚合物。栓剂制剂可进一步包含吸收促进剂。
[0209] 包含本发明公开的组合物的固体直肠剂型可以配制成模制片剂,压制片剂或胶囊。模制片剂可以制成各种形状,例如锥形,并以与栓剂类似的方式制备。压缩片剂可以制成各种形状并通过压缩制备。压缩的直肠片剂通常可包含与口服片剂类似的制剂和赋形
剂。因此,本发明公开的压制直肠片剂可以配制成包含填充剂、粘合剂、增量剂、稀释剂、崩解剂、润滑剂、抗粘附剂和抗粘剂、助流剂和流动剂、润湿剂、增溶剂、药物释放改性剂、稳定剂和着色剂中的一种或多种。直肠胶囊可以以与明胶口服胶囊类似的方式制备。例如,本发明公开的直肠胶囊可以配制成包含固体、半固体和液体填充剂、增塑剂、加工助剂、表面活性剂、着色剂、遮光剂和防腐剂中的一种或多种。直肠胶囊体可包含明胶、hypermellose、羟丙基甲基纤维素、羟丙基淀粉、淀粉改性物和支链淀粉。
[0210] 软膏、泡沫和凝胶通常可配制成比水溶液更粘稠,并在体腔(例如直肠腔)内提供更长的停留时间。这种粘性液体制剂可包含凝胶或胶凝剂。例如,胶凝剂可以是热可逆性凝胶。热可逆性凝胶在较低温度或室温下可以是液体,并且一旦插入体腔(例如直肠或结肠)就变成凝胶。凝胶或胶凝剂可以使剂型更容易施用和定位。例如,凝胶或胶凝剂可以防止剂型从体腔泄漏。热可逆聚合物包括泊洛沙姆。粘膜粘附聚合物包括海藻酸钠。凝胶或胶凝剂可进一步包含溶解度增强剂,例如羟丙基-β-环糊精。凝胶制剂可包括但不限于琼脂、二氧化硅、聚丙烯酸(例如 )、羧甲基纤维素、淀粉、瓜尔胶、藻酸盐或壳聚糖。
[0211] 含有本发明公开的组合物的溶液可以配制成例如用于直肠递送的灌肠剂或冲洗剂。通常,灌肠剂或冲洗剂可以是包含活性剂的水溶液。可以施用灌肠剂以到达深直肠腔,例如结肠,或浅表直肠腔,例如直肠。在一些实施方案中,灌肠剂以2L或更少的体积施用。美国Department of Health and Human Services不鼓励使用冲洗剂,其带来一些风险,包括刺激、细菌感染和泌尿生殖器炎性疾病。但是,在一些情况下,医生仍可出于医疗原因订购冲洗剂。因为在冲洗期间使用的防腐剂可干扰体腔中微生物的自然平衡,引起感染,所以这种医生订购的冲洗剂可以与本发明公开的氨氧化微生物组合物一起施用。此外,本发明公开的氨氧化微生物组合物可以作为主要或次要疗法以冲洗剂施用,例如,与一种或多种另外的治疗组合。另外,溶液可以配制成喷雾剂、气雾剂或雾剂,用于局部递送至直肠区域。
[0212] 示例性组合物可包括一种或多种赋形剂,例如,吸收和渗透促进剂、镇痛剂、局部镇痛剂、抗真菌剂、抗炎剂、类固醇和皮质类固醇、热可逆性凝胶、防腐剂、抗氧化剂、缓冲剂、螯合剂、离子交换剂、增溶剂、悬浮剂、增稠剂、表面活性剂、润湿剂、张力调节剂和用于适当药物递送的载体。吸收和渗透增强剂可以改善活性剂被许多不同机制吸收的能力。镇痛药和局部镇痛药可用于缓解疼痛和/或减轻受试者的不适。类固醇和皮质类固醇可有助于减轻炎症。热可逆凝胶可以改善活性剂的定位和保留时间。抗氧化剂可以减少活性剂的氧化降解。缓冲剂可维持组合物的所需pH和/或增强组合物的溶解度或稳定性。螯合剂可包括催化组合物氧化反应的复合痕量金属。离子交换剂可通过离子交换机制控制活性剂的释放。增溶剂可以增加活性剂或另一种赋形剂的溶解度。悬浮剂和增稠剂可以增加组合物的粘度或密度,以增加活性剂在胃肠系统(例如口腔或直肠腔)中的保留时间和停留时间。表面活性剂,包括阳离子、阴离子和非离子表面活性剂,和润湿剂,可用于润湿不溶性疏水活性剂或其它赋形剂。张力调节剂可以提供与泌尿生殖液等渗的溶液。载体,例如水或脂肪基质,可以提供用于适当活性剂递送的体积。
[0213] 可包含的赋形剂为,例如,蛋白质,如人血清白蛋白或血浆制剂。如果需要的话,药物组合物还可包含少量无毒的辅助物质,如润湿或乳化剂、防腐剂和pH缓冲剂等,例如乙酸钠或脱水山梨醇单月桂酸酯。在一些实施方案中,赋形剂,例如,药学上可接受的赋形剂或美容学可接受的赋形剂,可包括抗粘着剂、结合剂、包衣剂、崩解剂、填充剂、调味剂、着色剂、润滑剂、助流剂、吸着剂、防腐剂、或增甜剂。在一些实施方案中,所述制剂可基本上无赋形剂。在一些实施方案中,所述制剂可基本上无本发明中所列的一种或多种化合物或物质。
[0214] 氨氧化微生物组合物可以例如以适于立即释放或延长释放的形式施用。立即释放制剂的合适实例包括局部制剂、口服制剂、颊制剂、舌下制剂、唇下制剂和直肠递送制剂。用于立即释放的局部制剂可包括例如溶液、悬浮液、乳液、泡沫、凝胶和软膏。局部制剂可以配制成立即释放,以避免体液清除引起的并发症,例如在直肠腔中。用于立即释放的直肠递送制剂包括例如栓剂、直肠固体形式和薄膜。每种直肠递送制剂可以配制成在与体腔内的体液接触时经历相变并释放活性剂。例如,可以配制栓剂和片剂以立即释放,以避免由剂型排出和对直肠腔膜的低粘附性引起的挑战。一些靶膜(例如,直肠粘膜)允许快速吸收活性剂,而丰富的局部脉管系统使得能够容易地向体循环更新。用于立即释放的口服递送制剂包括液体分散形式、片剂和胶囊。具体地,颊、唇下和舌下制剂可通过促进通过口腔粘膜、舌下和唇下组织的摄取而提供活性剂的立即释放,例如进入体循环,其可绕过首过代谢。
[0215] 控释口服制剂可以制备成液体分散体或固体分散体形式。持续释放系统的合适实例包括合适的凝胶化或聚合物材料(基于聚合物的芯或涂膜),例如成形制品形式的半透性聚合物基质,例如薄膜或微囊;合适的疏水材料,例如在可接受的油中作为乳液;或离子交换树脂。药物组合物可以是包含一种或多种可生物降解的聚合物、多糖凝胶化和/或生物粘附聚合物或两亲聚合物的颗粒的形式。这些组合物具有一些生物相容性特征,可以控制活性物质的释放。
[0216] 在一些实施方案中,控释直肠制剂可以配制成软膏、凝胶、泡沫或乳液。药物延长释放组合物,例如直肠递送组合物,可以与一种或多种粘膜粘附剂配制,例如粘膜粘附凝胶或干粘膜粘附片剂。粘膜粘附剂可以帮助附着到直肠体腔,例如直肠粘膜。类似地,固体剂型例如栓剂、片剂、胶囊或薄膜可以与一种或多种粘膜粘附剂一起配制,这可以增强直肠腔内的剂型定位,或者当部分固体剂型融化或崩解时可以保持存在。例如,可以配制固体剂型以在与体液接触时迅速溶解并转变成附着于口腔粘膜或直肠腔粘膜的粘膜粘附性粘稠溶液,并且逐渐洗脱而不需要去除。唇下剂型可以提供活性剂的控制或延长释放。例如,上唇和牙龈之间的唇下施用可以防止制剂被流涎吞咽,允许药物在很长一段时间内直接缓慢释放到结缔组织和相关的脉管。
[0217] 在一些非限制性实施方案中,制剂可以是以下一种或多种:基本上无气味、无色、与实质性副作用无关、无毒、耐受性良好、如果释放到环境中则没有副作用、没有培养抗生素抗性的风险、并具有使其在正常和疾病状态下可与各种人肠道微生物组积极相互作用的生理学。
[0218] 氨氧化微生物组合物可以例如以适于提供局部治疗或全身治疗的形式施用。例如,通过胃肠系统组织的快速吸收可以实现局部效果,并且可以实现全身效果,例如,通过胃肠组织的各种上皮和粘膜的药物吸收。可以施用本发明公开的组合物以治疗局部炎性疾病,局部或全身性炎性疾病的症状,或由局部或全身性炎性疾病引起的副作用。可用本发明公开的组合物治疗的局部胃肠系统病症或胃肠病症的合适实例包括,肠易激/炎性综合征、克罗恩病、结肠炎、坏死性结肠炎、溃疡、溃疡性结肠炎、乳糜泻、谷蛋白敏感、乳糖不耐受、食物和/或或饮料不耐受、胃灼热、胃酸反流、运动障碍、小肠细菌过度生长(SIBO)、胰腺炎、阑尾炎、胃炎、吸收不良症和胃肠炎。可以解决漏肠综合症。可以使用施用来促进GI健康。可以影响受试者的胃肠状态,例如,可以改变、修改或调节GI微生物组的组成,例如通过改变其中微生物的比例,例如在肠道或胃肠道中。可以在旅行之前使用该施用以减少暴露于不熟悉的食物、饮料和/或微生物时GI不良的可能性。在一些实施方案中,氨氧化微生物组合物可以以适于治疗一些感染和炎性病症的形式施用,例如细菌感染、真菌感染、病毒感染瘙痒、局部炎症和伤口愈合。例如,可施用氨氧化微生物组合物以治疗与外科手术或诊断程序、牙科治疗、基于导管的转移(例如,在体内的两个位置之内、之外或之间的物质转移)、肠内营养(例如,喂食管)、支架相关的炎症,或通常与引入胃肠道或胆道系统的任何异物有关的炎症。可施用氨氧化微生物以治疗胃肠病症、疾病或全身性病症的局部症状,例如胃痛、胃痉挛、胃胀气、便秘、不适、肠习惯改变和腹泻、或与这些病症、疾病或全身性疾病相关的副作用,例如高氨血症和胆系统疾病,例如肝衰竭和急性肝衰竭。在至少一些实施方案中,氨氧化微生物组合物的施用可以减少与胃肠病症或疾病相关的症状或副作用,例如腹胀,腹泻、胃胀气(gas)、胃痛、胃痉挛或腹鸣。
[0219] 可用本发明公开的组合物治疗的全身性病症的实例包括头痛、心血管疾病、结缔组织疾病、炎症、免疫应答和自身免疫性疾病、肝疾病、感染、神经病、精神性疾病、一氧化氮疾病、尿素循环障碍、充血、血管舒张疾病、皮肤病、创伤愈合、肠病、昆虫叮咬反应、眼科疾病、和一些病毒、细菌和真菌感染。例如,可以用本发明公开的组合物治疗的全身性病症包括心血管疾病,例如心脏保护、心力衰竭、高血压、肺动脉高血压;免疫反应和自身免疫性疾病、如脱发和白癜风;肝脏疾病、如非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)、非酒精性脂肪性肝炎(NASH);神经系统疾病和心理障碍、如抑郁症失眠症和糖尿病神经病变;一氧化氮紊乱如勃起功能障碍;伤口愈合,例如,来自褥疮和护理院护理、烧伤、糖尿病溃疡例如足溃疡、静脉性腿部溃疡、生物膜和口疮的伤口;皮肤病和紊乱如多汗症、瘙痒、鸡眼和鸡眼的亚型;眼科疾病、如睑缘炎、干眼症、黄斑变性和青光眼;肠道疾病、如谷蛋白敏感、肠易激/炎性肠病、克罗恩病、结肠炎和坏死性小肠结肠炎;和血管舒张疾病、如雷诺氏病、体温调节和偏头痛。一些病毒、细菌和真菌感染可用本发明公开的制剂治疗,包括由人乳头瘤病毒(HPV)引起的感染、酵母感染、花斑癣、甲癣、脚癣/真菌、股癣、股癣(jock itch)、甲癣、头皮屑、足癣、鼻窦炎、中耳炎、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)、葡萄球菌和细菌性阴道病。可用本发明公开的组合物治疗的其他全身性病症包括全身性炎症,例如湿疹,例如成人和小儿湿疹、荨麻疹、特发性荨麻疹、扁平苔藓、昆虫叮咬(包括对昆虫叮咬的过敏反应,例如蚊子和毛囊蠕形螨)、对毒葛的反应、瘙痒、毛发角化病、喉炎、天疱疮、牛皮癣、酒渣鼻、毛囊炎和毛囊炎亚型、化脓性汗腺炎、口周皮炎、狼疮皮疹、脂溢性皮炎如成人和婴儿脂溢性皮炎、痤疮如青少年痤疮、成人痤疮和囊性痤疮、尿布疹、职业性手部皮炎、晒伤和皮肌炎。另外,本发明公开的组合物可以被递送或应用于治疗一些美容适应症,包括但不限于接触性皮炎、尿布气味(例如成人和儿科)、体臭、女性气味、剥落、指甲硬度、体味、油性皮肤、剃刀烧伤、皮肤外观、短暂的斑点、皮肤水合作用和太阳斑。本发明公开的组合物可以作为驱虫剂或抗微生物剂施用。
[0220] 本发明公开的组合物可进一步配制为组合疗法。例如,片剂或胶囊可包含配制用于组合疗法的不同部分。初始和后续治疗处理可以单一剂型提供,以单独剂型制备,同时施用或分开施用。各个剂型可以通过相同的施用方式施用,例如通过胃肠系统,或通过不同的施用方式施用,例如口服、鼻内、局部、眼部、经由听觉系统、通过泌尿生殖系统、经由呼吸系统、或通过注射。例如,组合疗法可包含氨氧化微生物以用于治疗炎性疾病或病症。单独的剂型可以通过手术或诊断程序施用。各个剂型可以与手术或诊断程序组合施用。在一些实施方案中,将氨氧化微生物组合物(例如制备用于肠内施用)配制用于与抗炎剂组合治疗。通常,本发明公开的组合物可以配制用于与被批准或通常用于治疗疾病、障碍、病症、其症状或其副作用(例如胃肠疾病、障碍、病症、其症状或其副作用)的药物或化合物的组合疗法。在至少一些实施方案中,配制用于与粪便移植物(FMT)组合施用的制剂。制剂可以配制用于与肠清洁剂或抗生素组合施用以“耕田”并允许氨氧化微生物定殖。
[0221] 可以配制用于胃肠系统施用的制剂,用于靶向递送至特定沉积组织或靶组织。在一些实施方案中,可将制剂施用于第一组织,使得制剂或制剂的产物(例如氨氧化微生物或一氧化氮)转运至第二组织。第一组织可以是沉积组织。第二组织可以是靶组织。沉积组织和靶组织可以是相同或不同的组织。在一些实施方案中,沉积组织、靶组织或两者可以是胃肠系统的组织。制剂或制剂的产物可以局部或全身递送,例如在沉积组织或靶组织中或循环中递送。
[0222] 可以配制用于胃肠道施用的制剂,用于靶向递送至特定的胃肠组织。胃肠道沉积组织或靶组织包括口、胃、唾液腺、口腔、咽部、舌、食管、肝、胆囊、总胆管、结肠(横向、上行和/或下行)、盲肠、阑尾、直肠、肛门、胰腺、胰管、大肠、小肠(十二指肠、空肠、和/或回肠)、腮腺、颌下组织和舌下组织。在一些实施方案中,由于胃的酸性环境,胃内的全身摄取会有问题。由于进入肝脏的化合物的代谢,肝脏内的全身摄取会有问题。组合物可以特别配制成绕过胃和/或肝脏并将活性剂递送到另一个靶组织。例如,可以配制组合物以在口腔或下直肠内递送靶试剂,绕过肝脏代谢,或者可以特别配制以抵抗受试者的酸性环境并将活性剂递送至小肠或大肠。通常,胃肠道途径可通过大的可用表面积和胃肠组织的血液供应提供全身作用。
[0223] 直肠途径可用于儿科和老年组以及由于恶心、呕吐和意识不清而无法服用口服药物的患者。直肠施用可用于递送药物以预防术前和术后感染以及治疗炎症。可以配制用于直肠施用的制剂,用于靶向递送至特定的直肠组织。直肠沉积组织或靶组织可包括表面组织,例如臀部、肛门和肛门周围的区域,以及内部组织,例如直肠、结肠、大肠、小肠和肛门括约肌。可以进一步配制用于直肠施用的制剂,用于靶向递送至附近的组织,例如骨盆底肌肉和前列腺。靶向递送至期望的直肠组织对于提供充分治疗是至关重要的。例如,用于靶向递送至直肠上部和结肠的直肠剂型可以被浅表直肠静脉吸收并递送至肝脏。因此,用于靶向递送至上直肠和结肠的直肠剂型可以配制用于肝脏代谢。用于靶向递送至直肠下部的直肠剂型可通过下部局部静脉吸收并绕过肝脏。可以制备不适合肝脏代谢的制剂用于靶向递送至直肠下部。
[0224] 根据一个或多个实施方案,AOM能够在受试者的胃肠系统的环境中生长和增殖是令人惊讶的。例如,胃通常可以表征为厌氧性质。在一些实施方案中,在胃壁处的粘液中可存在向较高pH水平的转变。在一些实施方案中,AOM可令人惊讶地充当调节胃肠系统中粘液稠度的关键物质。不希望受任何特定理论束缚,亚硝酸盐水平可在调节GI系统中的粘液稠度中起作用。粘液可在预防例如GI系统内的感染中起重要的屏障作用。在一些非限制性实施方案中,粘液层可包含两个区域,即:紧密粘附的无细菌内层,例如可与肠壁间接接触;以及具有较低密度的凝胶形成肽的稍微不那么紧密的层。在一些非限制性实施方案中,可以增加粘液释放,这可以例如促进含二硫化物的底物(包括谷蛋白)的消化。蛋白质二硫键异构酶也可以被释放。在一些实施方案中,较稠的粘液可以更好地密封GI系统壁,例如肠壁,并且可以减少由于兼性厌氧菌引起的炎症。在一些非限制性实施方案中,可通过AOM定植减少幽门螺杆菌。
[0225] 在至少一些实施方案中,可以抵消超氧化物的影响。在一些实施方案中,AOM可以抑制其中不期望的需氧菌和兼性厌氧菌。在一些实施方案中,可以增加粘液稠度,同时通过剥夺兼性厌氧菌的氧和硝酸盐来抑制兼性厌氧菌。在至少一些实施方案中,AOM可以存在于附着于GI系统壁的粘液中。根据一个或多个实施方案,尽管在GI系统的瞬时环境中具有长的倍增时间,但AOM可令人惊讶地增殖。在一些实施方案中,AOM可令人惊讶地不促进腹泻和GI系统的快速或不可控制的排空,尽管其产生NO和亚硝酸盐(其可使GI系统的平滑肌松弛并具有这种效果)。在一些实施方案中,AOM可减少便秘,例如,通过改善蠕动与营养吸收的匹配。在一些实施方案中,组合疗法可涉及异养益生菌,例如乳酸杆菌。根据一个或多个实施方案,AOM可以在GI系统中从氨和氧产生生理上有益的和/或显著水平的NO、亚硝酸盐和/或NO前体。不希望受任何特定理论的束缚,受试者的GI系统可以通过各种氧和/或NO梯度来表征。在至少一些实施方案中,用AOM定殖GI系统可以在它们甚至表现出优化良好健康状况之前就减缓或停止各种GI病症(局部和全身)的进展。在一些实施方案中,在饮酒后AOM的恢复可以减少和/或预防一些不利影响,例如在内脏系统和肝脏中。
[0226] 根据一个或多个实施方案,来自胃的血流通过肝脏。不希望受特定理论束缚,一氧化氮可为血流、线粒体生物发生、ATP状态以及立即消耗或修复的资源分配的正常调节剂。胃肠系统中的炎症状况可与肝功能不良有关,如门静脉高压症、原发性硬化性胆管炎、非酒精性脂肪性肝炎、非传染性肝炎以及多种全身性炎症,如哮喘、多发性硬化症、慢性肾病、牛皮癣、心包炎和关节炎。类似地,糖尿病、中风和心脏病可与肠道的慢性炎症性疾病有关。可导致膨胀的血液量和/或高动力循环状态,例如在内脏系统中。可导致肾血流减少,这可导致肾衰竭。通过根据各种实施方案的AOM定植来预防GI系统炎症还可以降低与GI炎症以及其他全身性炎性病症相关的肝病症的发生率。在至少一些实施方案中,可以向早产儿和/或新生儿的GI系统施用AOM制剂。例如,可以在这些受试者中治疗或预防坏死性小肠结肠炎。
[0227] 根据一个或多个实施方案,AOM可以掺入通常与其相容(例如,在温度、盐、醇或防腐剂水平方面)的各种食品和/或饮料产品中。在一些实施方案中,AOM培养物可在食用前施用(例如喷洒)到食物或饮料上。这些食品的一些非限制性实例包括酸奶、牛奶、奶酪、沙拉、水果和面包。就含有AOM的液体而言,在消耗时,水可以通过胃壁吸收,并且AOM可以被过滤掉并且可以被捕获在粘液层中。氨释放的热点可以通过AOM转化为亚硝酸盐的热点。酸化的亚硝酸盐可以用作抗微生物剂,例如,预防胃感染。当胃内容物向下传递通过GI系统时,粘液层也可以向下传递,因此含有AOM的粘液层可以沿GI系统向下行进,以获得与本发明一致的各种有益结果。
[0228] 微生物组相容产品的使用与施用氨氧化微生物
[0229] 微生物组相容产物可以与本发明公开的制剂和方法联合使用。多种产品可被认为是“生物群友好的”或“生物群落相容的”。生物群友好产品的实例公开在国际(PCT)专利申请公开号WO2017/004534(国际(PCT)专利申请序列号PCT/US/2016/040723中,在2016年7月1日提交),其全部内容通过引用并入本发明用于所有目的。一些生物群友好的产品本质上可以是美容或治疗性的。根据一个或多个实施方案,生物群友好产品可以与微生物例如非病原微生物,例如氨氧化微生物组合使用,其可以以待施用于受试者的制剂或组合物的形式使用。本发明公开的氨氧化组合物可以与生物群友好或生物群相容的产品一起用于美容或治疗适应症。
[0230] 根据一个或多个实施方案,包含氨氧化微生物的制剂、组合物、配制物或产品,例如,用于美容或治疗用途,本身可被认为是生物群友好的。在其它实施方案中,包含氨氧化微生物的制剂可与生物群友好的产品联合使用。在一些实施方案中,包含氨氧化微生物的制剂可与生物群友好的产品混合或同时施用。在其它实施方案中,包含氨氧化微生物的制剂可以与生物群友好的产品不同或独立,但可与其一起使用。在一些实施方案中,生物群友好的产品单独使用。用于与生物群友好的产品联合使用的氨氧化微生物组合物制剂可以用于美容或治疗用途。
[0231] 生物群友好或生物群相容的产品可以与为任何递送模式配制的氨氧化微生物制剂联合使用,例如,配制用于靶向递送至受试者,例如,递送至受试者的靶组织、区域、系统或器官。例如,可以配制与生物群友好产品联合使用的氨氧化微生物制剂,用于递送至受试者的眼、耳、鼻、泌尿生殖系统、呼吸系统或胃肠系统。在一些实施方案中,可以基于受试者的病症或疾病配制用于与生物群友好产品一起使用的氨氧化微生物组合物用于靶向递送。
例如,用于靶向递送的制剂可以基于要实现的期望的局部或全身效果,例如局部或全身的治疗或美容效果。
[0232] 可以与本发明一起使用的生物群友好的美容产品可以是或包括下列一项或多项或者布置在下列一项或多项中:婴儿产品,例如,婴儿洗发剂、婴儿润肤露、婴儿油、婴儿粉、婴儿霜;浴用制剂,例如,沐浴油、片剂、浴盐、泡泡浴、浴胶囊;眼妆制剂,例如,眉笔、眼线、眼影、眼霜、眼部卸妆液、睫毛膏;香料制剂,例如,古龙香水、花露水、香水、粉末(粉尘和滑石)、香囊;发用制剂,例如,护发素、发胶、直发膏、烫发水、冲洗液、洗发剂、生发液、敷料、毛发梳理助剂、卷发液;毛发着色制剂,例如,染发剂和颜色、毛发着色剂、染发漂洗剂、染发洗发剂、有色头发提亮剂、头发漂白剂;化妆制剂,例如,粉饼、粉底、腿部和身体涂料、唇膏、妆前底霜、胭脂、化妆固定剂;美甲制剂,例如,底漆和内涂层、角质层软化剂、指甲霜和指甲乳液、指甲延伸、指甲油、指甲油去除剂;口腔卫生产品,例如,牙粉、漱口水和口气清新剂;浴用香皂,例如泡沫沐浴露和清洁剂、除臭剂、冲洗液、女性卫生除臭剂;剃须制剂,例如,剃须后润肤液、胡须软化剂、滑石粉、剃须前洗剂、剃须膏、剃须皂;护肤制剂,例如,清洗、脱毛、面部及颈部、身体和手部、足部的粉末和喷雾、保湿、夜用制剂、粘贴面罩、皮肤清新剂;以及晒黑制剂,例如,凝胶、乳膏和液体和室内晒黑制剂。
[0233] 如本发明所述的产品,例如与微生物组相容的美容产品,例如洗发剂、护发素和清洁剂,可以与病症、疾病或障碍的治疗联合使用。这些美容产品可以与氨氧化微生物的施用一起使用,用于治疗或美容目的。例如,在将氨氧化细菌施用于受试者的整个治疗期或美容期内,可以使用与微生物组相容的美容产品。在通过向受试者施用氨氧化细菌开始治疗性或美容性的病症的处理之前,微生物组相容的美容产品可以使用一段时间。通过向受试者施用氨氧化细菌,可以在开始治疗或美容性病症的处理之后的一段时间内使用与微生物组相容的美容产品。微生物组相容的美容产品可以在中断通过向受试者施用氨氧化细菌进行治疗或美容处理之后的一段时间内使用。
[0234] 在一些实施方案中,受试者可施用一种或多种美容产品,并在施用氨氧化微生物之前等待一段时间。在其他实施方案中,受试者可施用氨氧化微生物,并在施用一种或多种美容产品之前等待一段时间。
[0235] 受试者可等待的时间段可为在施用一种或多种美容产品之后约1分钟、5分钟、10、15、20、25、30、45、60、90、120分钟、或3小时、4、5、6、7、8、12、18、24小时且在施用氨氧化微生物之前。
[0236] 受试者可等待的时间段可为在施用氨氧化微生物后约1分钟、5分钟、10、15、20、25、30、45、60、90、120分钟、或3小时、4、5、6、7、8、12、18、24小时,且在施用一种或多种美容产品之前。
[0237] 虽然已经讨论了本发明的具体实施方案,但是上述说明书是说明性的而非限制性的。通过阅读本说明书和下面的权利要求,本发明的许多变化对于本领域技术人员而言将变得显而易见。本发明的全部范围应该通过参考权利要求及其等同物的全部范围和说明书以及这些变化来确定。
[0238] 一些实施方案在以下权利要求的范围内。
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