改善口腔健康的组合物
阅读：469发布：2020-05-25
专利汇可以提供改善口腔健康的组合物专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 涉及作为感觉上中性的 口腔 护理剂，特别是用于 预防 牙结石 、用作抗龋剂和/或抗口腔恶臭剂的 微 生物 或其 片段 。本发明还涉及包含微生物或其片段，用于减少 变形 链球菌的组合物。此类组合物可用于口腔护理组合物，例如用于龋预防，或用于牙结石或口腔恶臭的预防。它们也可用于预防或 治疗 口臭。由于根据本发明的微生物及其片段具有非常轻微、不引人注意的气味和口味，它们特别适于用作预防牙结石、龋、口腔 生物膜 形成和/或预防或治疗口腔恶臭的感觉中性的活性剂。微生物及其片段，以及包含此类微生物和片段的组合物因而可有利地用于食品和 饲料 组合物，特别是 宠物食品 。此外，本发明也涉及制备此类微生物、片段、组合物、食品和饲料的方法。，下面是改善口腔健康的组合物专利的具体信息内容。
1.结合子微生物或其片段作为优选地感觉中性的口腔护理剂的用途，其中结合子微生物是乳酸菌，并且其中结合子微生物或其片段分别能够结合变形链球菌群（mutans Streptococci）的组的微生物，其中结合
(i)对热处理具有抗性和/或
(ii)对蛋白酶处理具有抗性和/或
(iii)依赖于钙和/或
(iv)在4.5和8.5之间的pH范围内形成，和/或
(v)在唾液存在下形成和/或
(vi)不依赖镁。
2.结合子微生物或其片段用于制备化妆品、药物或兽医组合物的用途，其中组合物是口腔护理组合物，其中以感觉中性的量使用结合子微生物，其中结合子微生物是乳酸菌，并且其中结合子微生物或其片段分别能结合变形链球菌群的组的微生物，其中结合(i)对热处理具有抗性和/或
(ii)对蛋白酶处理具有抗性和/或
(iii)依赖于钙和/或
(iv)在4.5和8.5之间的pH范围内形成，和/或
(v)在唾液存在下形成和/或
(vi)不依赖镁。
3.根据权利要求1或2的用途，其中结合子微生物或其片段能结合至少1种菌
株，优选地至少2种菌株，更优选地至少3种菌株，其中菌株选自由变形链球菌血清型c（Streptococcus mutans serotype c）（DSMZ20523）、变形链球菌血清型e（NCTC10923）和变形链球菌血清型f（NCTC11060）、远缘链球菌DSMZ20742、鼠链球菌（Streptococcus ratti）DSMZ20564、仓鼠链球菌（Streptococcus cricetus）DSMZ20562、野鼠链球菌（Streptococcus ferus）DSMZ20646和猕猴链球菌（Streptococcus macacae）DSMZ20714组成的组。
4.根据权利要求1、2或3中任一项的用途，其中结合子微生物或其片段不能结合选自由唾液链球菌嗜热亚种（Streptococcus salivarius spp.Thermophilus）、口腔链球菌（Streptococcus oralis）DSMZ20066、口腔链球菌DSMZ20395、口腔链球菌DSMZ20627、轻链球菌（Streptococcus mitis）DSMZ12643和血链球菌（Streptococcus sanguinis）DSMZ20567组成的组中的至少1种，优选地至少2种，更优选地至少3种，并且最优选地任何微生物。
5.根据任何上述权利要求的用途，其中结合子微生物处于经热灭活或冻干的形式，和/或
其中结合子微生物属于乳杆菌科（Lactobacillaceae），优选地属于乳杆菌属（Lactobacillus）、副乳杆菌属（Paralactobacillus）、小球菌属（Pediococcus）或沙皮氏属（Sharpea），更优选地属于类干酪乳杆菌（Lactobacillus paracasei）物种、鼠李糖乳杆菌（Lactobacillus rhamnosus）物种、干酪乳杆菌（Lactobacillus casei）物种或玉米乳杆菌（Lactobacillus zeae）物种，并且最优选地是菌株DSMZ16667、DSMZ16668、DSMZ16669、DSMZ16670、DSMZ16671、DSMZ16672或DSMZ16673中的任一种，或其突变体或衍生物。
6.根据上述权利要求中任一项的结合子微生物或其片段
-作为优选地感觉中性的抗牙结石剂，或用于制备预防或治疗牙结石的组合物的用途，和/或
-作为感觉中性的抗龋剂，或用于制备预防或治疗龋的感觉中性的组合物的用途，和/或
-作为优选地感觉中性的抗口臭剂，或用于制备预防或治疗口臭的组合物的用途。
7.根据上述权利要求中任一项的结合子微生物或其片段的用途，其中微生物选自由以下微生物所组成的组，所述微生物：
(i)代谢D-乳糖，但不代谢L-山梨糖和/或D-蔗糖和/或D-安茴酰牛扁碱，
(ii)代谢安茴酰牛扁碱，
(iii)代谢L-山梨糖，但不代谢D-乳糖和/或D-蔗糖和/或安茴酰牛扁碱，和
(iv)代谢L-山梨糖、D-乳糖和安茴酰牛扁碱，
并且优选地，其中微生物选自由以下微生物组成的组，所述微生物：
(i)代谢D-乳糖，但不代谢L-山梨糖、D-蔗糖和安茴酰牛扁碱，
(ii)代谢L-山梨糖、D-乳糖和安茴酰牛扁碱，但不代谢D-蔗糖，
(iii)代谢L-山梨糖，但不代谢D-乳糖、D-蔗糖和安茴酰牛扁碱，和
(iv)代谢L-山梨糖、D-乳糖、D-蔗糖，但不代谢安茴酰牛扁碱。
8.根据上述权利要求中任一项的结合子微生物或其片段的用途，其中可按如下测定与链球菌菌株的结合：
(a)将所述微生物培养至稳定期；
(b)混合所述微生物与已经培养至稳定期的所述链球菌；
(c)在允许形成所述微生物和所述链球菌的聚集物的条件下孵育在步骤(b)中获得的混合物，和
(d)通过沉淀的出现检测聚集物。
9.制备用于预防或治疗牙结石的组合物和/或制备用于预防或治疗龋的感觉中性的组合物和/或制备用于预防或治疗口臭的组合物的方法，
所述方法包括向基础组合物中添加结合子微生物或其片段的步骤，其中以感觉中性的量添加结合子微生物，其中结合子微生物是乳酸菌，并且其中结合子微生物能结合变形链球菌群的组的微生物，其中结合
(i)对热处理具有抗性和/或
(ii)对蛋白酶处理具有抗性和/或
(iii)依赖于钙和/或
(iv)在4.5和8.5之间的pH范围内形成，和/或
(v)在唾液存在下形成和/或
(vi)不依赖镁，
并且其中基础组合物包含化妆、制药或兽医上相容的载体。
10.根据权利要求9的方法，其中结合子微生物处于经热灭活或冻干的形式，和/或其中结合子微生物或其片段能结合至少1种菌株，优选地至少2种菌株，更优选地至少3种菌株，其中菌株选自由变形链球菌血清型c（DSMZ20523）、变形链球菌血清型e（NCTC10923）和变形链球菌血清型f（NCTC11060）、远缘链球菌DSMZ20742、鼠链球菌DSMZ20564、仓鼠链球菌DSMZ20562、野鼠链球菌DSMZ20646和猕猴链球菌DSMZ20714所组成的组，并且结合子微生物或其片段优选地不能够结合选自由唾液链球菌嗜热亚种、口腔链球菌DSMZ20066、口腔链球菌DSMZ20395、口腔链球菌DSMZ20627、轻链球菌DSMZ12643和血链球菌DSMZ20567组成的组中的至少1种，优选地至少2种，更优选地至少3种，并且最优选地任何微生物，和/或
其中结合子微生物属于乳杆菌科，优选地属于乳杆菌属、副乳杆菌属、小球菌属或沙皮氏属，更优选地属于类干酪乳杆菌物种、鼠李糖乳杆菌物种、干酪乳杆菌物种或玉米乳杆菌物种，并且最优选地是菌株DSMZ16667、DSMZ16668、DSMZ16669、DSMZ16670、DSMZ16671、DSMZ16672或DSMZ16673中的任一种，或其突变体或衍生物。
11.包含优选地分离的或纯化的结合子微生物或分离的或纯化的其片段的组合物，所述结合子微生物或其片段的量
-足以防止牙结石形成或减慢牙结石形成，和/或
-足以防止或降低口臭强度，和/或
-足以防止龋或减慢龋生成，
并且优选地是感觉中性的量，
其中结合子微生物是乳酸菌，优选地其中结合子微生物属于乳杆菌科，更优选地属于乳杆菌属、副乳杆菌属、小球菌属或沙皮氏属，甚至更优选地属于类干酪乳杆菌物种、鼠李糖乳杆菌物种、干酪乳杆菌物种或玉米乳杆菌物种，并且最优选地是菌株DSMZ16667、DSMZ16668、DSMZ16669、DSMZ16670、DSMZ16671、DSMZ16672或DSMZ16673中的任一种，或其突变体或衍生物，
并且其中结合子微生物能结合变形链球菌群的组的微生物，其中结合
(i)对热处理具有抗性和/或
(ii)对蛋白酶处理具有抗性和/或
(iii)依赖于钙和/或
(iv)在4.5和8.5之间的pH范围内形成，和/或
(v)在唾液存在下形成和/或
(vi)不依赖镁，
并且其中优选地甘油单酯和甘油二酯的总含量最多是整个组合物的20wt.-%，甚至更优选地最多是5wt.-%，并且最优选地最多是2wt.-%。
12.根据权利要求11的组合物，其中组合物用于人或动物，并且
-其中组合物是牙膏、洁牙剂、牙粉、局部口腔凝胶、口腔清洗剂、假牙产品、口腔喷雾剂、锭剂、口服片剂、口香糖、漱口水、牙线、咀嚼产品或食品、饲料或饮料的添加剂，或-其中组合物处于粉末、片剂、膜制剂、溶液、气溶胶、颗粒、丸剂、悬液、乳液、胶囊、糖浆、液体、酏剂、提取物、酊剂或流体提取物、片样食品、瓶装食品、罐装食品、甑煮食品或流体食品的形式，或者
-其中组合物是选自由口香糖、喷雾剂、饮料、甜食、婴儿配方、冰激凌、冷冻甜食、甜沙拉调味料、乳制品、奶酪、夸克、酸奶、酸化乳、咖啡奶油、生奶油、黄油、奶酪、经加工的乳和脱脂乳、肉产品—优选地火腿、香肠和汉堡、鱼肉、蛋糕产品、蛋产品—优选地经调味的蛋卷和蛋凝块、糖果—优选地饼干、果冻、点心和口香糖、面包、面条、泡菜、熏制产品、鱼干、调味品组成的组的食品或饮料。
13.根据权利要求11或12的组合物，其中微生物或其片段分别
-不是除了通过2001/18/EC号令附录1B所列的遗传修饰技术获得的遗传修饰的微生物之外的如所述2001/18/EC号令第2条第（2）款中限定的遗传修饰的微生物，并且优选地甚至排除通过所述2001/18/EC号令附录1B所列的遗传修饰技术获得的微生物，-不包含来自与结合子微生物的目，优选地科，更优选地属，最优选地种异源的遗传材料的表达的产品。
14.结合子微生物或其片段
-作为优选地感觉中性的抗牙结石剂，或用于在人或动物，优选地宠物动物中预防或治疗牙结石，和/或
-作为优选地感觉中性的抗龋剂，或用于在人或动物，优选地宠物动物中预防或治疗龋，和/或
-作为优选地感觉中性的抗口臭剂，或用于在人或动物，优选地宠物动物中预防或治疗口臭，
其中结合子微生物是乳酸菌，优选地其中结合子微生物属于乳杆菌科，更优选地乳杆菌属、副乳杆菌属、小球菌属或沙皮氏属，更优选地属于类干酪乳杆菌物种、鼠李糖乳杆菌物种、干酪乳杆菌物种或玉米乳杆菌物种，并且最优选地是菌株DSMZ16667、DSMZ16668、DSMZ16669、DSMZ16670、DSMZ16671、DSMZ16672或DSMZ16673中的任一种，
其中结合子微生物或其片段分别能结合变形链球菌群的组的微生物，其中结合(i)对热处理具有抗性，和/或
(ii)对蛋白酶处理具有抗性，和/或
(iii)依赖于钙，和/或
(iv)在4.5和8.5之间的pH范围内形成，和/或
(v)在唾液存在下形成，和/或
(vi)不依赖镁。
15.根据权利要求14的处于活的、经热灭活或冻干形式的结合子微生物，其中通过以下可获得或获得经热灭活的形式：
-在压力为1-5巴，优选地1-3巴，更优选地2巴的饱和蒸汽中处理，并且最优选地通过在压力为2巴的饱和蒸汽中，在121℃的温度热灭活20min，或
-在-20℃冷冻所述细胞至少1h。
改善口腔健康的组合物
[0001] 本发明涉及微生物或其片段，所述微生物或其片段作为感觉上中性的口腔护理剂，特别用于预防牙结石，用作抗龋剂和/或抗口臭剂。本发明还涉及包含微生物或其片段的组合物，所述组合物用于减少变形链球菌群(mutans streptococci)。此类组合物可用于口腔护理组合物，例如用于龋预防，或用于牙结石或口臭的预防。它们也可转而用于预防或治疗口臭。由于根据本发明的微生物及其片段具有非常轻微、不引人注意的气味和口味，它们特别适于用作预防牙结石、龋、口腔生物膜形成和/或预防或治疗口臭的感觉中性的活性剂。微生物及其片段，以及包含此类微生物和片段的组合物因而可有利地用于食品和饲料组合物，特别是宠物食品。此外，本发明也涉及制备此类微生物、片段、组合物、食品和饲料的方法。
[0002] 具有牙的动物最臭名昭著的问题之一是此类牙齿的蛀蚀。此问题对不能像鲨鱼一样通过用新的一套替换来持续地脱落牙齿的动物特别重要。牙齿蛀蚀的最重要原因之一是龋。通过在口腔内集群的微生物的作用，牙釉质持续削弱并最终溶解，导致龋蚀性损伤的形成。此类损伤转而适于微生物进一步集群，恶化龋问题。
[0003] 与龋形成无关的问题是口臭的发生。口臭被认为是口腔中集群的不希望的微生物导致的。然而，目前还没有单种微生物被指出是口臭的主要原因。然而，似乎清楚的是，龋和口臭的形成是独立的过程，因为口臭也在没有牙存在下发生，而龋可在没有口臭的情况下发生。
[0004] 特别地，动物中的口腔健康的另一个问题是牙结石的形成。牙上钙化的沉积物是由在牙齿表面集群的微生物形成的。通常，在7-10天内牙上钙化的沉积物生长到肉眼可见的程度。牙结石形成允许其他微生物在牙上集群的中心。这转而导致口臭、龋和牙龈组织炎症的发生。因此，存在对预防牙结石发展的需求，例如通过减慢牙结石形成。
[0005] 因此，经常尝试独立地改善这些问题。到目前为止最值得注意的本领域常用解决方案是牙膏和漱口水。此类牙膏和漱口水通常包含有效的抗微生物剂以降低在牙上集群的微生物，特别是致龋微生物和/或产生口臭的微生物的数量或抑制其活性。然而，由于龋和口臭形成的无关性，许多有效的抗龋剂对预防或治疗口臭无效，反之亦然。抗牙结石形成的效力也需要改善。
[0006] 另一个问题是有效的抗微生物物质通常表现强的内在气味或口味，令消费者特别是宠物动物感到反感。因此，口腔护理组合物通常包含其他嗅觉活性剂以掩盖或改变抗菌有效物质固有的口味或气味。然而，由于其更强的内在口味或气味，此类其他活性剂也不被消费者乐意接受。这导致消费者对此类口腔护理组合物制造商的应用推荐的不期望的低顺从。
[0007] 顺从的问题对儿童和动物特别重要。二者都倾向于设计巧妙的方法避免或误用口腔护理组合物，例如通过吞咽，使得有效的抗微生物剂不能完全发挥其预期作用。特别是宠物动物例如猫和狗对任何形式的用药的抗拒常令人遗憾。同样，已知此类动物避开用药，包括有效的抗微生物口腔护理组合物，即使藏在它们原本接受的饲料中。此外，某些口腔护理组合物的应用模式不可用于动物，因为它们例如不能漱口。此外，某些对口腔的治疗对动物特别有压力并将需要麻醉。例如，动物例如猫和狗会狂暴地拒绝移除牙结石。
[0008] 总之，对于人类包括儿童，以及动物包括宠物动物，口腔卫生被认为是厌烦的。因此，本发明意欲改善现有技术的上述问题。特别地，本发明旨在增加人和动物，特别地宠物动物对口腔护理指示的顺从。
[0009] 根据本发明，用于预防牙结石、龋和/或预防或治疗口臭的一种或多种活性剂具有低的内在口味或气味对增进顺从是重要的。因此，本发明涉及不同的方法，而不是通过加入其他强口味或气味剂掩盖或改变此类活性剂剂的口味或气味。口腔护理剂的固有口味或气味到目前为止被忽视，或没有被认为具有主要重要性。此外，现在出乎意料地发现，可获得对预防牙结石、龋和/或预防或治疗口臭都有效，而没有强烈的固有口味或气味的活性剂。也出乎意料地发现，此类活性剂对于增加对口腔护理指示的顺从，并且特别地降低人类，包括儿童，以及动物，包括宠物动物中口腔护理逃避行为是有用的。本发明也允许制备口腔护理组合物，所述口腔护理组合物具有不同于先前要求的用于掩盖或改变抗结石剂、抗龋剂和/或抗口臭剂的口味或气味的其他风味或香味。
[0010] 本发明涉及微生物或其片段作为感觉上中性的口腔护理剂。本发明还涉及包含微生物或其片段的组合物，所述组合物用于减少变形链球菌群。此类微生物及其片段，以及此类组合物可用于治疗或预防牙结石。此类微生物、片段或组合物也可用于龋治疗或预防。它们也可转而用于预防或治疗口臭。由于根据本发明的微生物及其片段具有非常轻微、不引人注意的气味和口味，它们特别适于用作用于预防龋、口腔生物膜形成包括牙结石的形成，和/或预防或治疗口臭的感觉中性的活性剂。微生物及其片段，以及包含它们的组合物因而可有利地用于食品和饲料组合物，特别是用于宠物食品。此外，本发明也涉及制备此类微生物、片段、组合物、食品和饲料的方法。
[0011] 根据本发明，用作感觉中性的口腔护理剂的微生物或其片段优选地是乳酸菌。
[0012] 如上所述，现在出乎意料地发现乳酸菌可用作感觉中性的口腔护理剂，特别是用于预防和治疗牙结石，用作抗龋和/或抗口臭剂。这不能被预期，因为乳酸菌通常已知表现强酸味或酸性味道和/或气味，例如在酸奶和其他乳制品中。
[0013] 根据本发明，乳酸菌是分类上属于乳杆菌目(Lactobacillales)，并优选地属于乳杆菌科(Lactobacillaceae)的任何微生物。如果与属于非所述分类组或其更低层级的其他分类组的任何模式株相比，根据本发明的微生物与此分类组内或在更低分类层级内的模式菌株更相似，则本发明的微生物被认为属于指明的分类组，其中所述分析基于比较它们排除了质粒和非整合的病毒的各自的遗传材料。因此，如上文所限定，如果与属于乳杆菌目内属于另一科的种或属的模式菌株相比，微生物在遗传上与乳杆菌科内的种或属的模式菌株更相似，所述微生物被认为属于乳杆菌科。
[0014] 根据本发明的相似性是用Needleman-Wunsch全局序列比对算法评估的。此算法是寻找两个核酸序列沿其全长的包括空位的最优比对的标准算法。Needleman和Wunsch的算法已在1970J.Mol.Biol.48，443-453中公开，其中根据以下公式计算n个位置的空位罚分：
[0015] 空位开放罚分+(n-1)x空位延伸罚分
[0016] 对突出末端没有罚分。
[0017] 在本发明背景下的空位开放罚分是10.0。在本发明背景下的空位延伸罚分是0.5。用于在本发明背景下比较核苷酸序列的打分矩阵是单一的DNA同一性矩阵，它对每个相同碱基“替换”打分1分，对所有其他碱基替换打分-10000分。可用这些参数进行序列比对，例如通过由EBI提供的可公开获得的工具进行。
[0018] 乳杆菌科的微生物固有的特别优势是它们可被普遍认为对人和动物食用是安全的。例如，在食品制造例如加工牛奶中使用了乳酸菌很长时间。由于其对人或动物健康的低危险，以及它们易于大量培养，例如在500l的培养基中分批培养，它们也易于操作。特别优选的培养方法在下文说明。
[0019] 在乳杆菌科的成员中，根据本发明，特别优选属于乳杆菌属(Lactobacillus)、副乳杆菌属(Paralactobacillus)、片球菌属(pediococcus)或沙皮氏(Sharpea)属的乳酸菌，其中最优选乳杆菌属的微生物。此类微生物在制备食品和饲料中广泛使用；它们易于处理，可大量生产。此外，在乳杆菌科内，特别在乳杆菌属内，可获得既感觉中性又有效作为口腔护理剂，特别是作为抗牙结石剂、抗龋剂和/或抗口臭剂的微生物。
[0020] 本发明的乳酸菌优选地是杆状或球状，从狭长到短弯曲的杆菌，此外优选地不能移动和/或不产孢子，并生产乳酸作为发酵代谢的主要或唯一产物。在优选的实施方式中，本发明的微生物所属的乳杆菌属根据以下特征分为3个主要亚组，其中设想本发明的乳杆菌属物种可属于3个主要亚组中的每个
[0021] (a)同型发酵乳杆菌
[0022] 通过Embden-Meyerhof途径从葡萄糖生产至少85％的量的乳酸的L-、D-或DL异构体；
[0023] (ii)在45℃的温度生长，在15℃的温度不生长；
[0024] (iii)为长杆状；和
[0025] (iv)细胞壁中有甘油磷壁酸；
[0026] 同型发酵乳杆菌
[0027] 通过Embden-Meyerhof途径生产乳酸，优选地乳酸的L-或DL-异构体；
[0028] 在15℃的温度生长，在45℃的温度表现可变的生长；
[0029] (iii)是短杆状或棒状；和
[0030] (iv)细胞壁中有核糖醇和/或甘油磷壁酸；
[0031] 异型发酵乳杆菌
[0032] 通过戊糖磷酸途径从葡萄糖生产至少50％的量的乳酸，优选地乳酸的DL异构体；
[0034] (iii)在15℃或45℃表现可变的生长；
[0035] (iv)是长或短杆状；和
[0036] (v)细胞壁中有甘油磷壁酸甘油。
[0037] 基于上述特征，根据本发明优选的微生物可分类为属于乳酸菌组，特别是乳杆菌属。
[0038] 在优选的实施方式中，本发明的微生物具有选自以下组的代谢指纹：
[0039] (i)它代谢D-乳糖，但不代谢L-山梨糖和/或D-蔗糖和/或D-安茴酰牛扁碱，[0040] (ii)它代谢安茴酰牛扁碱，
[0041] (iii)它代谢L-山梨糖，但不代谢D-乳糖和/或D-蔗糖和/或安茴酰牛扁碱，和[0042] (iv)它代谢L-山梨糖、D-乳糖和安茴酰牛扁碱。
[0043] 优选地，本发明的微生物具有选自以下组的代谢指纹：
[0044] (i)它代谢D-乳糖，但不代谢L-山梨糖、D-蔗糖和安茴酰牛扁碱，
[0045] (ii)它代L-山梨糖、D-乳糖和安茴酰牛扁碱，但不代谢D-蔗糖，
[0046] (iii)它代谢L-山梨糖，但不代谢D-乳糖、D-蔗糖和安茴酰牛扁碱，和
[0047] (iv)它代L-山梨糖、D-乳糖、D-蔗糖，但不代谢安茴酰牛扁碱。
[0048] 当然，本发明的微生物不限于代谢上述代谢指纹图式的糖，但可能够代谢其他糖。
[0049] 在本发明中，术语“微生物”不仅指此类微生物，当所述微生物被置于适当的培养条件下时，可增殖(活的微生物)。本发明特别有利的是，也可使用相应的经热灭活或冻干的微生物代替此类活的微生物。这特别有用，因为即使对他们保证此类活的微生物对其健康有利，一些消费者可能反对食用活的微生物，或将此类活的微生物提供给儿童或宠物动物的想法。由于本发明涉及增加对口腔护理指示的顺从，即使此类无理由的反对也可被照顾是特别的优势。因此，除非明确说明，此说明书以及所附的实施例、附图和权利要求书不区分活的、经热灭活的或冻干的微生物。
[0050] 根据本发明，经热灭活的细胞优选地通过在121℃的温度，在2巴的大气压的饱和蒸汽存在下，将活的微生物细胞高压灭菌至少20分钟获得。由于高压灭菌的方法是微生物和相应的生物技术工程领域已知的标准技术，可用标准实验室设备完成此类经热灭活的微生物的制备。它是非常快速的技术并且被证明灭活乳杆菌科，特别是乳杆菌属的微生物。
[0051] 备选地，根据本发明的微生物的热灭活可通过将此细胞在-20℃的温度冷冻完成。也易于用标准实验室设备进行此类冷冻。
[0052] 不论热灭活的模式，即通过高压灭菌或通过冷冻，根据本发明，优选地，活的微生物的浓度被处理降低至少85％、90％或95％，并且特别优选地至少97％、98％、99％，并且更特别优选地99.1％、99.2％、99.3％、99.4％、99.5％、99.6％、99.7％、99.8％或99.9％。特别优选的是，此类高压灭菌或冷冻将活的微生物的浓度降低至少3个数量级(即1000倍)，并且更优选地至少4个数量级，甚至更优选地至少5个数量级。
[0053] 本发明的微生物的特别的优势是即使在此类通过高压灭菌或冷冻灭活后，它们仍保留其作物感觉中性的口腔护理剂，优选地抗牙结石剂，抗龋和/或抗口臭剂的有效性。以此类热灭活的形式，本发明的微生物特别易于储存，即使在20℃，在此温度具有80％相对湿度的标准大气中。可储存性特别重要，因为根据本发明的经灭活的微生物允许生产包含此类经灭活的形式的食品或饲料，而不破坏“最佳食用”日期。
[0054] 根据本发明，通过使用本发明的冻干的微生物，即冻干的乳杆菌科微生物，特别是冻干的乳杆菌属的乳酸微生物可获得同样的优势。根据本发明，优选地在室温，即在16℃和25℃之间的温度冻干至少2小时。
[0055] 除了例如处于活的、经热灭活的或冻干形式的本发明的微生物，或备选地，可使用其片段。可用本领域知悉的标准方法，特别是细胞裂解和/或巴氏杀菌法方便地进行微生物的片段化。用于裂解或破碎根据本发明的微生物，包括其经热灭活和/或冻干的形式的方法不是特别受关注。适当的方法可从例如化学方法包括酶促处理中选择，所述酶促处理优选地通过一种或多种蛋白酶，例如蛋白酶K、脂肪酶或糖苷酶；其他化学物的非限制性实例是离子载体、去污剂，例如十二烷基磺酸钠、酸或碱；物理方法的非限制性实例是高压(例如弗氏细胞压碎器压碎)、渗透性和磨蚀(例如用玻璃或铁珠)。生产根据本发明的经热灭活和/或冻干的微生物及其片段的特别优选的方法在WO2006/027265A1，第25-28页和WO2009/149816A1，第28-34页中说明。“本发明的微生物的片段”涵盖本发明的微生物的细胞的任何部分。优选地，所述片段是通过膜制剂获得的膜级分。属于乳杆菌科，优选地乳杆菌属的结合子微生物的膜制剂可用本领域知悉的方法获得，例如通过使用在Rollan等人Int.J.Food Microbiol.70(2001)，303-307、Matsuquchi等人，Clin.Diagn.Lab.Immunol.10(2003)，259-266 或 Stentz 等 人 Appl.Environ.Microbiol.66(2000)，4272-4278或Varmanen等人J.Bacteriology182(2000)，146-154中说明的方法。备选地，也设想全细胞制剂。优选地，本文说明的本发明的结合子微生物的片段保留特异性结合变形链球菌群，和更优选地变形链球菌(Streptococcus mutans)的能力，这在本文中详细说明。
[0056] 本发明中使用的微生物(即优选地为乳杆菌科或乳杆菌属的乳酸菌，包括其相应的经热灭活或冻干的形式和其片段)优选地用作抗龋剂。根据本发明，术语“抗龋剂”被限定为这样的任何活性剂，所述活性剂通过其仅仅在人或包括宠物动物例如狗、猫、大鼠、小鼠、仓鼠、豚鼠或猴子的动物的口腔中的存在降低发生新龋性损伤的风险。本发明的特别优势是用作抗龋剂的微生物就其本身不必是抗微生物有效的。因此，根据本发明，用作抗龋剂的微生物或其片段不必减少在共培养中的生龋微生物，特别是属于变形链球菌群的微生物的数量。
[0057] 因此，根据本发明的另一优势是用作抗龋剂的微生物对人或动物，特别是宠物动物的口腔正常微生物群落具有非常有限的影响。适当的微生物将在下文说明。
[0058] 本发明中使用的微生物(即优选地为乳杆菌科或乳杆菌属的乳酸菌，包括其相应的经热灭活或冻干的形式和其片段)优选地用作抗牙结石剂。根据本发明，术语“抗牙结石剂”被限定这样的为任何活性剂，所述活性剂通过其仅仅在人或包括宠物动物的动物的口腔中的存在降低发生牙结石的风险，或减慢牙结石的进一步发展。本发明的抗牙结石剂不需要实际移除已经在牙上形成的牙结石。
[0059] 同样，本发明中使用的微生物(即优选地为乳杆菌科或乳杆菌属的乳酸菌，包括其相应的经热灭活或冻干的形式和其片段)优选地用作抗口臭剂。根据本发明，术语“口臭”指来自口腔的任何令人厌恶的气味。因此，根据本发明，此术语用于弱形式的口臭，也称为“口腔异味”，其不被认为是疾病；也用于此类形式的口臭，例如由于其强度或气味，其被认为是疾病的症状；后一类形式的口臭也称为口臭(halitosis)。临床上相关形式的口臭，即口臭，可具有多种原因。对所有形式的口臭，最值得注意的是在口腔中集群的微生物的感染，其中此类微生物消化有机物质，例如死上皮细胞、其他微生物或残留食品或饲料。优选地，本发明被设置为延缓口臭的发作，和/或降低口臭的强度或改变气味，无论是临床上无关的口腔异味或临床上相关的口臭。然而，除非在本文中明确说明，术语“口臭”不涵盖源自口腔以外，例如食道或胃中的恶臭。此类恶臭可例如在打嗝时变得明显。
[0060] 在本发明中，术语“口腔”指从嘴唇和牙齿延伸，直至但不包括腭垂的腔。
[0062] 同样，根据本发明，术语“感觉中性”被限定为此类活性剂，其能代替多达2wt-％的全麦面粉，使得基于从无差异、轻微改变、明显改变到无疑改变的尺度判断时，10位受训的专家组中最多5位会认为此类全麦面粉与本发明的微生物和/或片段的混合物的口味和气味被明显改变。优选地，至多5wt-％的全麦面粉可被微生物和/或其片段代替，使得10位专家中最多5位会认为此类混合物的口味和/或气味被明显改变。
[0063] 根据本发明，因而提供了组合物，所述组合物包含：
[0064] -(a)感觉中性和(b)对减少人或动物口腔中变形链球菌群有效和/或对减少口臭有效的量的结合子微生物或其片段，其中微生物是乳酸菌。
[0065] 现在出乎意料地发现，使用用于减少口腔中变形链球菌群的结合子乳酸菌足以产生感觉中性的活性剂的抗龋效果。如上所述，此类结合子乳酸菌，其经热灭活或冻干的形式，以及此类结合子乳酸菌的片段可用做抗龋剂，而没有抗微生物效果，即不会杀死生龋微生物本身或抑制其生长。相反，结合子微生物或其片段结合变形链球菌群的一个或多个种是足够的。此类结合可以导致被结合的变形链球菌群的凝集，所述变形链球菌群转而被正常的唾液吞咽和在进食和饮水过程中从口腔移除。如WO2008/074473A2中所述，从口腔移除变形链球菌群显著地降低口腔中和牙齿上生物膜形成的风险，从而间接降低发生龋的风险。这也对结合变形链球菌的此类结合子微生物特别适用，如WO2006/027265A1中所述。然而，到目前为止尚未知悉此类结合子微生物可用作感觉中性的活性剂，即如上文所述和下文详述的感觉中性浓度。同样，到目前为止尚未知悉此类对变形链球菌群，特别是变形链球菌的结合可降低发生口臭的风险。
[0066] 根据本发明，因而优选包含微生物或其片段的组合物，所述微生物或其片段能特异性结合属于变形链球菌群的组的细菌，其中所述特异性结合是
[0068] (ii)对蛋白酶处理具有抗性；和/或
[0069] (iii)钙依赖的；和/或
[0070] (iv)在4.5和8.5之间的pH范围内形成；和/或
[0071] (v)在唾液存在下形成
[0072] 术语“特异性结合”在本发明的语境下表示结合子微生物或其片段，优选地属于乳杆菌科并且更优选地乳杆菌属的微生物(或相应的片段)，结合属于变形链球菌群的一种或多种菌株，优选地结合变形链球菌，但不结合大部分其他，优选地不结合属于链球菌属的其他物种。即，结合子微生物或其片段优选地不结合属于口腔链球菌(Streptococcus oralis)和/或轻链球菌(Streptococcus mitis)和/或血链球菌(Streptococcussanguinis)的细菌。甚至更优选地，结合子微生物也不结合属于唾液链球菌
(Streptococcus salivarius)物种，更优选地属于嗜热亚种的细菌。更优选地，结合子微生物或其片段不结合口腔链球菌DSMZ20066、口腔链球菌DSMZ20395、口腔链球菌DSMZ20627、轻链球菌DSMZ12643和/或血链球菌DSMZ20567。甚至更优选地，结合子微生物或其片段也不结合唾液链球菌嗜热亚种(Streptococcus salivarius spp.thermophilus)。
(Streptococcus salivarius)物种，更优选地属于嗜热亚种的细菌。更优选地，结合子微生物或其片段不结合口腔链球菌DSMZ20066、口腔链球菌DSMZ20395、口腔链球菌DSMZ20627、轻链球菌DSMZ12643和/或血链球菌DSMZ20567。甚至更优选地，结合子微生物或其片段也不结合唾液链球菌嗜热亚种(Streptococcus salivarius spp.thermophilus)。
[0073] 特异性结合反应包含本发明的结合子微生物(包括其片段)在口中结合和，优选地，聚集变形链球菌或本文所述的其他变形链球菌群细胞。因此，特异性结合导致结合的细胞被例如，如本文所述的唾液流或口腔清洗或漱口等冲走。优选地，本发明的结合子微生物及其片段与变形链球菌和/或其他变形链球菌群的特异性结合反应阻止此类链球菌细胞附着到一颗或多颗牙齿的表面，或者，在不受此类理论束缚，所述特异性结合反应可导致链球菌细胞从一颗或多颗牙齿的表面脱落。因此，特异性结合反应导致链球菌细胞被从口腔中冲出，从而减少生物膜形成的诱因，因而预防和/或治疗龋。
[0074] 结合子微生物或其片段被认为可特异性结合链球菌抗原I/II，其也被称为抗原B、IF、P1、SR、MSL-1或Pac。然而，结合子微生物或其片段可结合变形链球菌的任何其他蛋白质或表面结构，从而如本文所述聚集变形链球菌病将其冲出口腔。已知链球菌属突变体通过所述链球菌抗原I/II结合表膜。因此，当本发明的结合子微生物可结合，例如所述链球菌抗原I/II时，变形链球菌或另一种各自的变形链球菌群被阻止结合牙的表面，这从而帮助预防和/或治疗龋。
[0075] 表膜是存在于唾液中，含有蛋白质和脂类的透明的薄覆盖物。它在牙齿表面被清洁后数秒内形成。表膜形成是牙斑形成的第一步。牙斑是在牙齿上聚积的软沉积物。斑可10
被定义为复杂微生物群落，每毫克具有超过10 细菌。据估计，斑中存在多达400种不同的细菌种。除了细菌细胞，斑含有少量上皮细胞、白细胞和巨噬细胞。细胞被包含于细胞外基质内，所述基质由细菌产物和唾液形成。细胞外基质含有蛋白质、多糖和脂类。存在于唾液中的蛋白质之一是凝集素，它一方面被认为导致从口腔部分移除变形链球菌群，然而，另一方面它被怀疑促进变形链球菌群附着于牙表面，从而促进链球菌细菌向牙齿的最初附着，因此龋发生。
被定义为复杂微生物群落，每毫克具有超过10 细菌。据估计，斑中存在多达400种不同的细菌种。除了细菌细胞，斑含有少量上皮细胞、白细胞和巨噬细胞。细胞被包含于细胞外基质内，所述基质由细菌产物和唾液形成。细胞外基质含有蛋白质、多糖和脂类。存在于唾液中的蛋白质之一是凝集素，它一方面被认为导致从口腔部分移除变形链球菌群，然而，另一方面它被怀疑促进变形链球菌群附着于牙表面，从而促进链球菌细菌向牙齿的最初附着，因此龋发生。
[0076] 优选地，上述的属于乳酸菌组的结合子微生物或其片段能特异性结合变形链球菌血清型c(DSMZ20523)和/或血清型e(NCTC10923)和/或血清型f(NCTC11060)和/或远缘链球菌(Streptococcus sobrinus)DSMZ20742和/或鼠链球菌(Streptococcus ratti)DSMZ20564和/或仓鼠链球菌(Streptococcus cricetus)DSMZ20562和/或野鼠
链球菌(Streptococcus ferus)DSMZ20646和/或猕猴链球菌(Streptococcus macacae)DSMZ20714。
链球菌(Streptococcus ferus)DSMZ20646和/或猕猴链球菌(Streptococcus macacae)DSMZ20714。
[0077] 这表示属于乳酸菌的组的上述结合子微生物或其片段优选地结合选自变形链球菌血清型c(DSMZ20523)、血清型e(NCTC10923)、血清型f(NCTC11060)、远缘链球菌DSMZ20742、鼠链球菌DSMZ20564、仓鼠链球菌DSMZ20562、野鼠链球菌DSMZ20646和猕猴链球菌DSMZ20714中的至少一种微生物。更优选地，属于乳酸菌的组的上述结合子微生物或其片段结合上述细菌的任何组合、分组或亚亚组。甚至更优选地，属于乳酸菌的组的结合子微生物或其片段结合全部上述细菌。根据本发明，“血清型”是细菌细胞，优选地变形链球菌或远缘链球菌细胞的抗原性质，通过本领域知悉的血清学方法鉴定。
[0078] 如上所述，结合子微生物或其片段与变形链球菌群，优选地变形链球菌的特异性结合优选地对热处理具有抗性。因此，当用热处理本发明的结合子微生物，例如在高于55℃，更优选地在高于65℃，特别优选地在高于95℃，最优选地在121℃的温度时，结合不被消除。在冷却后，如本文所述测定本发明的结合子微生物或其片段特异性结合变形链球菌群的能力。
[0079] 相应的温度可取决于具体的结合子微生物物种，但可由本领域技术人员用常规实验方便地确定，例如通过将相应的细胞在不同温度孵育，并用如本文所说明的方法确定仍能特异性结合变形链球菌群和/或变形链球菌的结合子细胞或其片段的量。通常，热处理应持续至少1分钟的时间段。优选地，热处理持续至少n分钟的时间段，其中n是2至60范围内的整数，特别优选地，n＝20。然而，理论上孵育时间没有上限。然而，其优选地不长于4、3、2或1小时。最优选的热处理是在121℃的温度，在具有2巴的大气压的饱和蒸汽中至少20分钟。因此，特别优选可用高压灭菌获得的本发明的结合子微生物的经热灭活的形式。最优选的热处理被认为消除蛋白质的任何功能或细胞的任何活力，因而区分本发明的微生物和其他微生物，因为本发明的微生物仍能特异性结合变形链球菌。因此，这对本发明的任何食品、饮料或组合物非常有用如果希望微生物不应是活的。
[0080] 结合子微生物或其片段的特异性结合还优选地由其对蛋白酶处理的抗性表征。优选地，结合对用选自链霉蛋白酶E、蛋白酶K、胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶的一种或多种蛋白酶的处理具有抗性。这些蛋白酶没有显示特异性，因此被认为降解位于微生物细胞表面的任何蛋白质。已知对氨基酸残基的某些模式具有偏好的其他蛋白酶是弹性蛋白酶、凝血酶、氨基肽酶I、羧基肽酶、dostripain、内蛋白酶、木瓜蛋白酶、组织蛋白酶B、胃蛋白酶、凝乳酶、组织蛋白酶D。后者蛋白酶也可用于检测结合子微生物或其片段与变形链球菌或另一种变形链球菌群的特异性结合是否对后者更特异性的蛋白酶具有抗性。因此，在如WO2008/074473A2或WO2006/027265A1的实施例(合并入本文)所述的酶处理后，结合子微生物或其片段仍能特异性结合变形链球菌/变形链球菌群。
[0081] 此外，结合子微生物或片段的特异性结合还优选地由其对钙的依赖性表征。优选地，特异性结合在存在0.05mM和500mM之间，优选地1mM和100mM之间的钙离子浓度下发生。特别优选的钙浓度是在2mM和30mM之间。例如，可由如在WO2008/074473A2或WO2006/027265A1的实施例中说明的来测试特异性结合对钙的依赖性，所述文献合并入本文。此外，与结合子微生物或其片段的特异性结合优选地维持在4.0和9.0之间，优选地在4.0和7.0之间的pH范围。特别地，特异性结合仍然发生的pH值优选地是4.5。在上述实施例中说明了在上述pH范围维持特异性结合的测定。
[0082] 特异性结合优选地不依赖于镁。因此，镁离子或镁盐不必要存在。
[0083] 特异性结合的另一个优选的特征是它在唾液存在下发生。唾液是由唾液腺合成的外分泌物。它是复杂的液体，除了约99％的水，含有多种有机和无机化合物。唾液的生理成分是，特别地，酶，例如淀粉酶、carboanhydrase、溶菌酶、过氧化物酶或蛋白质例如粘蛋白、乳铁蛋白、富含脯氨酸蛋白质、cystatine、histatine或statherine或可溶性IgA。因此，尽管唾液中存在多种可能的干扰性物质，本发明的微生物的特异性结合未被干扰或阻碍。为测试在唾液存在下的特异性结合，优选使用优选地含有上述链球菌属物种的唾液。然而，如果测试鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)在唾液存在下对变形链球菌的特异性结合，优选省略唾液链球菌嗜热亚种。如本文所述测定特异性结合。属于乳酸菌的组的结合子微生物或其片段的上述特征使得它成为预防和/或治疗龋的稳健和有效的活性剂，因为它主要以多种形式对口，包括口腔和牙施用，其中尤其存在包括某些蛋白酶以及在摄入含有碳水化合物的食品后的低pH值的唾液。此外，在制备食品或饲料的过程中，对热的抗性在将本发明的微生物作为添加剂添加到所述食品或饲料中具有有益效果。即，食品或饲料经常被热灭菌、预烹调、巴氏灭菌等，这对微生物的活性有害。
[0084] 本发明的结合子微生物和/或其相应的片段能特异性结合一种或多种变形链球菌群，和优选地变形链球菌，其中所述特异性结合
[0085] 对热处理具有抗性；和
[0086] 对蛋白酶处理具有抗性，和
[0087] 在唾液存在下形成。
[0088] 此类结合子微生物及其片段组合上述的优势。特别地，由于其特异性结合对热处理具有抗性，它们可被掺合到热处理灭菌的产品中，从而延长产品的保存期而不破坏由微生物或其片段赋予产品的口腔健康性质，优选地不破坏产品的抗牙结石有效性、抗龋有效性或抗口臭有效性。同样，由于蛋白酶抗性，结合子微生物和片段可被掺合到不同组合物的多种产品中，甚至在此类产品被热处理用于蛋白质变性之前。重要的是，在唾液存在下，特异性结合的形成也允许在不从口腔排出唾液的此类产品中使用结合子微生物及其片段。此能力转而增加了消费者顺从，特别是在儿童和动物包括宠物动物中，因为此类消费者倾向于不愿使用导致口腔干燥的产品。
[0089] 出于这些原因，本发明的结合子微生物和/或其相应的片段更优选地能特异性结合一种或多种变形链球菌群，和优选地变形链球菌，其中所述特异性结合
[0090] 对在121℃温度在具有2巴大气压的饱和蒸汽中的20分钟的热处理具有抗性，和[0091] 对选自链霉蛋白酶、蛋白酶K、胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶的一种或多种酶的处理具有抗性，和
[0092] 在唾液存在下形成。
[0093] 优选地，本发明的结合子微生物和/或其相应片段的特异性结合也依赖于钙；和[0094] 在4.5和8.5之间的pH范围内形成。
[0095] 确定结合子微生物及其片段与变形链球菌群的结合的方法在Lang等人(2010)Journal of Dental Research89(2)175-179中说明，所述文献合并入本文。
[0096] 优选地，结合子微生物或其片段的特异性结合可按如下测定：
[0097] (a)将所述结合子微生物培养到稳定期，在待测试的是片段的情况下，获得此类片段，
[0098] (b)将所述结合子微生物或片段与已经培养到稳定期的变形链球菌群混合，[0099] (c)在允许形成所述微生物和所述链球菌的聚集物的条件下孵育步骤(b)中获得的混合物，和
[0100] 通过沉淀的形成检测聚集物。
[0101] 在优选的实施方式中用于此测定的属于变形链球菌群的组的细菌是变形链球菌。对于与变形链球菌群的特异性结合，优选地不能检测到与选自唾液链球菌嗜热亚种、口腔链球菌DSMZ20066、口腔链球菌DSMZ20395、口腔链球菌DSMZ20627、轻链球菌DSMZ12643和血链球菌DSMZ20567中的至少1种，优选地至少2种，和更优选地至少3种，和甚至更优选地全部微生物的结合。
[0102] 特别地，属于乳酸菌的组，优选地乳杆菌科，更优选地乳杆菌属的结合子微生物或相应的片段优选地与变形链球菌群以3∶1至60∶1(变形链球菌群∶结合子微生物)的细胞间比率混合。乳酸结合子细菌和变形链球菌群都在液体培养基中培养到稳定期。优选地，用光度计在600nm的波长处测量光密度。上述比率对应于从1∶50至1∶2.5的菌落8
形成单位的比率。优选地，1ml中OD600＝1对应于变形链球菌群的3x10 个菌落形成单位。
9
优选地，1ml中OD600＝1对应于乳酸菌的7x10 个菌落形成单位。优选地，对于通过沉淀测定聚集，细菌体积为2ml，盛于15ml Falcon试管中。如果必要，用PBS缓冲液稀释培养悬液，以获得上述的体积比率，同时保持终体积为2ml。
形成单位的比率。优选地，1ml中OD600＝1对应于变形链球菌群的3x10 个菌落形成单位。
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优选地，1ml中OD600＝1对应于乳酸菌的7x10 个菌落形成单位。优选地，对于通过沉淀测定聚集，细菌体积为2ml，盛于15ml Falcon试管中。如果必要，用PBS缓冲液稀释培养悬液，以获得上述的体积比率，同时保持终体积为2ml。
[0103] 优选地，链球菌和结合子乳酸菌或其片段的混合物被漩涡混合约15秒然后在室温，即在16℃和25℃之间的任何温度静置至少5、10、15分钟，更优选地20分钟。聚集以悬液立即的浑浊的形式可见，在至少20分后，聚集以沉降为可见沉淀的形式可见，而非变形链球菌群聚集混合物留在悬液中。作为对照，可通过省去变形链球菌群或结合子微生物/片段，测定结合子微生物或片段以及变形链球菌群菌株的各自的自聚集。
[0104] 可通过如Lang等人(2010)Journal of Dental Research89(2)175-179说明的分离形成的聚集物，或通过离心，例如在500x g离心30s，对根据上述测定的结合子微生物和变形链球菌群的聚集进行定量。然后，可通过测量留在上清中的未聚集的细胞的量确定聚集的量。可用本领域技术人员知悉的任何适当方法进行确定。优选地，通过移出一定体积的上清(例如1ml)进行确定。然后，可在本领域技术人员知悉的任何适当的波长处测量(例如在600nm)移出的上清的光密度。测量值在减去相应的没有乳杆菌的对照测试的值后代表未聚集的细胞的量。
[0105] 确定根据本发明的特异性结合的方法在WO2008/74473A2的实施例4中说明，培养各个微生物的相应说明在该公开的实施例1中说明。出于公开确定根据本发明的特异性结合的方法的目的，将两个实施例都合并入本文。
[0106] 备选地，为解决可能的自聚集的问题，可使用染料，优选地荧光染料。因此，在更优选的实施方式中，特异性结合可按如下测定：
[0107] 将所述微生物培养到稳定期；
[0109] 在允许形成所述微生物和变形链球菌群的组的细菌的聚集物的条件下孵育步骤(b)中获得的混合物，和
[0110] 通过检测染料，优选地荧光染料检测聚集物。
[0111] 同样，在优选的实施方式中用于此类测定的属于变形链球菌群的组的细菌是变形链球菌。
[0112] 优选地，聚集测定可如此进行，首先如上所述将结合子微生物和变形链球菌群培养到稳定期。优选地，用光度计在600nm的波长处测量光密度。优选地，1ml中OD600＝18
对应于各变形链球菌群的3x10 个菌落形成单位。优选地，1ml中OD600＝1对应于如本文
9
所述的结合子微生物，特别是乳杆菌科，更优选地乳杆菌属的7x10 个菌落形成单位。
对应于各变形链球菌群的3x10 个菌落形成单位。优选地，1ml中OD600＝1对应于如本文
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所述的结合子微生物，特别是乳杆菌科，更优选地乳杆菌属的7x10 个菌落形成单位。
[0113] 然后，将变形链球菌群染色。在其他优选的实施方式中，结合子微生物被染色，而链球菌未被染色。至于染料，可使用任何适当的染料，优选地可使用本领域技术人员知悉的荧光染料。优选地，可使用特异性或非特异性荧光染料，例如CFDA-SE用于染色完整细胞，其他有用的染料包括羧基荧光素二乙酸乙酰氧基甲酯、BCECF AM和Calcein AM。具体地，收获细胞，例如通过离心，优选地在3200x g离心5分钟。然后，获得的沉淀可在本领域技术人员知悉的任何适当的缓冲液，优选地在PBS缓冲液中重悬。可计算缓冲液的量，使得获得的悬液具有例如4.2/ml的OD600。然后，悬液可与适当的染料，例如荧光染料混合，优选地与5，6-羟基荧光素二乙酸，琥珀酰亚胺脂(CFDA-SE)，更优选地与2μl CFDA-SE溶液(Invitrogen)混合。然后，可在本领域技术人员知悉的适当的温度，例如37℃，孵育细胞本领域技术人员所知悉的适当的时间，例如2小时。在进一步步骤中，可收获染色的细胞，例如通过离心。优选地，离心在3200x g进行5分。然后细胞可重悬在本领域技术人员知悉的适当的缓冲液，例如2ml PBS缓冲液中。
[0114] 对于聚集，结合子微生物优选地与变形链球菌群以3∶1至1∶3的体积比(变形链球菌群∶结合子微生物)混合。更优选地，混合物的体积比是1∶1。上述比率对应于从1∶50至1∶150的菌落形成单位比率。为了通过测量染色，优选地测量荧光测定聚集反应，以本领域技术人员知悉的任何适当的体积，优选地50μl的体积使用结合子微生物和变形链球菌群。优选地，混合在微量滴定板，例如96孔微量滴定板中进行。然后，混合物可被漩涡混合，优选地全速混合12分。然后，混合物可被离心，例如在500xg离心10秒。然后可移除上清，沉淀可重悬于任何适当体积，例如100μl的本领域技术人员知悉的任何适当的缓冲液，优选地PBS缓冲液中。可用本领域技术人员知悉的任何适当的方法在混合物中测量悬液的染色。优选地，在荧光的情况下，荧光可用荧光阅读仪检测，例如在495nm的激发和525nm的发射波长处。作为对照，可检测单独的结合子微生物和单独的变形链球菌群。任何背景染色，例如荧光，可用经单独的测试的变形链球菌群测量，并可优选地从与相应的结合子微生物的聚集的值中减去。如果从在含有如上文说明的结合子微生物和经测试的变形链球菌群的样品中测量的染色(例如荧光)减去如上文说明的测量的背景染色(例如荧光)，并且得到的值至少大于0，则存在聚集作用。更优选地，如果在如上文所述进行的系列测试中得到的值可重复地大于0，存在聚集作用。“系列实验”表示至少2次，优选地3次，更优选地4次，最优选地5次测试。
[0115] 可按如WO2008/074473A2的实施例5中说明的进行测试结合的备选方法，所述文献以引文合并入本文。
[0116] 对于结合子微生物的片段，结合基本上以如上所述的对于活的或经灭活的结合子微生物的结合确定来确定。代替结合子微生物细胞，用于确定结合或用于制备食品或饲料组合物的根据本发明的片段的量优选地与活的或经热灭活的结合子微生物的细胞壁材料的量相同。例如，可通过使用适当的染料测量结合子微生物内含物的肽聚糖含量，并且可使用基于此类染料测量的同样量的片段。
[0117] 上述结合子微生物优选地是如上所述的属于乳杆菌属，更优选地乳杆菌种的乳酸菌。甚至更优选地，所述乳杆菌属于类干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)或鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)。然而，乳杆菌种不限于此。上述结合子微生物可优选地是“分离的”或“纯化的”。术语“分离的”表示材料被从其原始环境，例如天然环境(如果其是天然存在的)移出。例如从天然系统中的一些或全部共存材料中移出的天然存在的微生物，优选地乳杆菌种，是分离的。此类微生物可以是组合物的部分，并仍将被认为是分离的，因为组合物不是天然环境的部分。因此，在纯培养物中培养的微生物仍被认为是分离的微生物。类似地，根据本发明，如果微生物的片段是从各微生物的至少一些材料分离的，则它被认为是“分离的”。
[0118] 术语“纯化的”不要求绝对纯净；相反，它旨在作为相对限定。从文库获得的单种微生物习惯上被纯化到微生物同质，即当通过本领域知悉的方法在琼脂平板上划线分离时，它们作为单个菌落生长。优选地，用于此目的的琼脂平板对乳酸菌，特别优选地对乳杆菌种是选择性的。本领域知悉此类选择性琼脂平板。
[0119] 为获得片段，优选地通过本领域知悉的方法，例如超声、弗氏细胞压碎器或球磨，破裂活的或经热灭活的结合子微生物细胞，并通过离心将片段与其他细胞残留物分开。然后可冲洗片段沉淀并再次离心以获得片段沉淀。
[0120] 更优选地，上述属于乳酸菌的组的结合子微生物分别选自具有DSMZ登陆号DSMZ16667(类干酪乳杆菌类干酪亚种Lb-Ob-KI)、DSMZ16668(类干酪乳杆菌类干酪亚种Lb-Ob-K2)、DSMZ16669(类干酪乳杆菌类干酪亚种Lb-Ob-K3)、DSMZ16670(类干酪乳杆菌类干酪亚种Lb-Ob-K4)、DSMZ16671(类干酪乳杆菌类干酪亚种Lb-Ob-K5)、DSMZ16672(鼠李糖乳杆菌Lb-Ob-K6)和DSMZ16673(鼠李糖乳杆菌Lb-Ob-K7)的类干酪乳杆菌或鼠李糖乳杆菌或其突变体或衍生物，其中所述突变体或衍生物保留特异性结合变形链球菌群的能力。
术语“具有DSMZ登陆号的类干酪乳杆菌或鼠李糖乳杆菌”指属于于2004年8月26日保藏于德国微生物与细胞保藏中心(“DSMZ”)，具有保藏号DSMZ16667、16668、16669、16670、
16671、16672或16673的类干酪乳杆菌或鼠李糖乳杆菌种的微生物的细胞。上述DSMZ保藏物是根据《为专利申请程序的微生物备案取得国际承认的布达佩斯条约》保藏的。
术语“具有DSMZ登陆号的类干酪乳杆菌或鼠李糖乳杆菌”指属于于2004年8月26日保藏于德国微生物与细胞保藏中心(“DSMZ”)，具有保藏号DSMZ16667、16668、16669、16670、
16671、16672或16673的类干酪乳杆菌或鼠李糖乳杆菌种的微生物的细胞。上述DSMZ保藏物是根据《为专利申请程序的微生物备案取得国际承认的布达佩斯条约》保藏的。
[0121] 上述属于乳酸菌的组的结合子微生物的，优选地保藏的类干酪乳杆菌或鼠李糖乳杆菌细胞的“突变体或衍生物”优选地与各保藏的菌株具有相同的特征，即它保留特异性结合变形链球菌群的能力，优选地具有如本文所述的结合特征。例如，所述衍生物可被遗传改造。在本发明的背景下，术语“遗传改造的”以其最宽泛的意义用于本领域技术人员知悉的方法，所述方法在体内或体外修饰希望的核酸，使得遗传修饰被影响，并且基因被重组DNA技术改变。因此，所述方法优选地包含重组核酸的克隆、测序和转化。为此目的，包括表达载体的乳杆菌种的适当的载体例如在EP 0506 789 B1、EP 0 316 677 B1、EP 0 251 064 B1、EP 0 218 230 B1、EP 0 133046 B1或WO 89/01970中说明。
[0122] 可以使用用于克隆中间构建物的引物、酶、其他宿主细胞等并且是本领域技术人员所知悉的。优选地，经遗传改造的突变体包含属于乳酸菌的组，优选地乳杆菌科，甚至更优选地乳杆菌属，并且最优选地保藏的乳杆菌种之一的结合子微生物的细胞，所述细胞携带重组核酸，所述重组核酸包含于其细菌染色体中或一个或多个质粒上，或者包含于其细菌染色体中和/或一个或多个质粒中。所述重组核酸优选地对上述属于乳酸菌的组的结合子微生物是外源的。“外源”表示多核苷酸或核酸分子与宿主细胞是异源的，这意指源自具有不同基因组背景的细胞或生物，或与宿主细胞是同源的但位于与所述核酸分子的天然存在的对应物不同的基因组环境中。在此情况下，异源多核苷酸可受其自身启动子控制，或受异源启动子控制。上述存在于宿主细胞中的载体或核酸分子可被整合到宿主细胞的基因组中，或其以某些染色体外的形式维持。在此方面，也应理解上述核酸分子可用于通过同源重组恢复或创造突变体基因。质粒可以是低、中或高拷贝数质粒。所述遗传改造的突变体可携带这样的核酸，所述核酸编码能降解蔗糖亚基的齿斑葡聚糖特异性1，3-糖苷键的葡聚糖酶或变聚糖酶(mutanase)。真菌葡聚糖酶在例如Fuglsang等人，J.Biol.Chem.275(2000)，2009-2018中说明。也设想经遗传改造的突变体包含携带重组核酸的细胞，所述重组核酸编码优选地被分泌或锚定于细菌细胞壁的抗体。术语“抗体”涵盖完整抗体及其抗体片段，例如分离的轻链和重链、Fab、Fab/c、Fv、Fab′、F(ab′)2。术语“抗体”也包含人源化的抗体、双功能抗体和抗体构建物，如单链Fv(scFv)或抗体融合蛋白。也考虑，在本发明的背景下，术语“抗体”包含可在上述保藏的微生物的衍生物的细胞中表达的抗体构建物，例如可通过本领域知悉的方法，经过，特别是载体转化的抗体构建物。特别地考虑，此类抗体构建物特异性地识别，例如链球菌抗原I/II。此类方法例如在Krueger等人，Nat.Biotechnol.20(2002)，702-706or Shiroza，Biochim Biophys Acta1626(2003)，57-64中说明。
[0123] 优选地通过将编码抗体的核酸与分泌信号序列有效连接完成表达的抗体的分泌。可通过利用酶分选酶的机制完成锚定于细菌细胞壁中。即，革兰氏阳性细菌的表面蛋白通过这样的机制与细菌细胞壁连接，所述机制涉及切除保守的亮氨酸-脯氨酸-X-苏氨酸-甘氨酸(LPXTG)基序并且在肽聚糖细胞壁的组装过程中发生。因此，编码抗体的核酸分子可与编码上述保守基序的序列融合，所述基序被分选酶用于将蛋白质锚定于细菌细胞壁中。
[0124] 也考虑，上述属于乳酸菌的组的结合子微生物被遗传修饰以携带编码罗氏菌素(reuterin)的核酸分子，罗氏菌素是抗微生物物质，特别对变形链球菌有效。在例如Talarico等人，Chemother.33(1989)，674-679中说明罗氏菌素。
[0125] 属于乳酸菌的组的结合子微生物的突变体，优选地保藏的乳杆菌菌株的突变体优选地是人工突变的。根据本发明，术语“突变的”表示遗传材料(即核酸)的一个或多个永久修饰，由例如天然或物理方法或化学化合物/物质/活性剂例如EMS或ENU造成。所述修饰包括点突变，例如核酸/基因/染色体内一个或多个碱基的转换或颠换、缺失/插入/增加，从而修饰核酸/基因/染色体，这可以导致，特别地异常的基因表达/转录/翻译或无活性基因产物、组成型活性/无活性基因产物，导致例如，显性失活作用。优选地，突变导致增加的特异性结合变形链球菌群的能力。因此，保藏的微生物的突变体细胞也是优选的，所述突变体细胞在一个或多个希望的基因中携带一个或多个突变，或其中一个或多个希望的基因中的一个或多个突变是用本领域技术人员知悉的方法诱导的。现有技术也知悉，可用任何适当的方法/表现型选择突变或遗传改造的细菌细胞。在本发明的背景下，可根据本文说明的方法测试具有增加的特异性结合变形链球菌群的能力的突变体。然而，术语“突变体”也包括上述属于乳酸菌的组的结合子微生物的细胞，优选地保藏的微生物的细胞，所述细胞在其基因组，即细菌染色体中携带天然存在的，自发的突变。“自发的突变”是自然发生，即没有人的直接遗传操纵，或暴露于诱变剂的突变。可通过培养菌株并通过例如，变体细菌显示对变形链球菌群的改善的结合的能力选择所需变体，完成自发的突变体的选择。选择自发的突变体的方法为本领域所熟知(参见例如Sambrook，Russell″Molecular Cloning，A Laboratory Manual ″，Cold Spring Harbor Laboratory，N.Y.(2001)；Ausubel，″Current Protocols in Molecular Biology″，Green Publishing Associates and Wiley Interscience，N.Y.(1989))。例如，此类突变可在培养过程中发生，例如在与DNA复制偶联的正常细胞分裂过程中或在传代和/或保存上述属于乳酸菌的组的结合子微生物的突变体的过程中发生。
[0126] 然而，尽管微生物的遗传操纵可给予微生物有益或甚至高度有益的性质，备选地优选地，结合子微生物以及优选地根据本发明使用的全部微生物不是如在此申请的申请日适用的各版本的2001/18/EC号令第2条第(2)款中限定的遗传修饰的微生物。然而，通过在所述2001/18/EC号令附录1B所列的遗传修饰技术获得的根据本发明的微生物优选地不被认为是如2001/18/EC号令第2条第(2)款中限定的遗传修饰的微生物。通过排除遗传修饰的微生物，可避免消费者理性和非理性的担忧，从而增加消费者对口腔健康指导的顺从。
[0127] 根据本发明，结合子微生物，优选地属于乳杆菌科的结合子微生物，更优选地属于乳杆菌属的结合子微生物，最优选地上述特别优选的菌株之一，不包含以不通过交配和/或天然重组天然发生的方式改变的遗传材料。此类技术包括：
[0128] (1)重组核酸技术，其涉及通过将以任何方式在生物体外生产的核酸分子插入任何病毒、细菌、质粒或其他载体系统中以及其掺入到宿主生物中，形成遗传材料的新的组合，所述核酸分子在所述宿主生物中非天然存在但能继续增殖；
[0129] (2)涉及将在生物体外制备的可遗传材料直接引入生物的技术，包括显微注射、宏观注射和微包囊；
[0130] (3)包括原生质体融合或杂交技术的细胞融合，其中通过用非天然发生的方法融合两个或多个细胞形成具有新的可遗传材料的组合的活细胞。
[0131] 然而，根据本发明优选地不排除天然过程例如接合、转导和转化。根据本发明，在其不涉及使用除了通过下文列出的一种或多种技术/方法生产的那些之外的重组核酸分子或经遗传修饰的生物的条件下，其他优选地不被排除的技术有：
[0132] (1)用自发或诱导的自发突变的诱变；和
[0133] (2)细胞融合，包括微生物的原生质体融合，其可以通过传统育种方法交换遗传材料。
[0134] 因此，根据本发明，结合子微生物以及也优选地根据本发明使用的其他微生物优选地不包含古细菌或真核生物超级界的生物的遗传材料，当然可在与根据本发明使用的微生物同一种或，较少优选地，至少同一属的菌株中天然存在的此类遗传材料除外。还优选地，根据本发明使用的微生物不包含除厚壁菌门之外的其他门中发现的微生物的遗传材料，并且甚至更优选地不包含只见于或取自除芽孢杆菌纲之外的其他纲的微生物的遗传材料，甚至更优选地不包含只见于或取自除乳杆菌目之外的其他目的微生物的遗传材料。
[0135] 当根据本发明使用的微生物并且特别地结合子微生物属于乳杆菌科时，则优选地各微生物不包含只见于或取自除乳杆菌科之外的其他科的微生物的遗传材料。甚至更优选地，如果本发明的微生物并且特别地结合子微生物属于乳杆菌属时，则各微生物不包含只见于或取自除乳杆菌属之外的属的微生物的遗传材料。
[0136] 根据本发明的组合物优选地是抗生龋食品或饲料组合物，或抗生龋药物组合物。因此，本发明涉及上述结合子微生物或其片段用于制备治疗或预防由变形链球菌群和/或变形链球菌导致的龋的抗生龋组合物，优选地药物或化妆用组合物的用途。
[0137] 根据本发明使用的术语“组合物”指这样的组合物，其包含至少一种结合子微生物——可能是经热灭活或冻干形式的——或其片段，优选地如上所述的保藏的微生物——可能是经热灭活或冻干形式的——或所述微生物的片段。设想根据本发明使用的组合物包含上述成分的任意组合。任选地，它可包含适于预防和/或治疗龋的至少一种其他成分。因此，它可任选地包含下文说明的其他成分的任意组合。术语“适于预防和/或治疗龋的成分”涵盖这样的化合物或组合物和/或其组合，所述化合物或组合物和/或其组合抑制变形链球菌群与牙表面、与表膜的结合和/或使变形链球菌群失活。更优选地，所述术语涵盖这样的化合物或组合物和/或其组合，所述化合物或组合物和/或其组合可抑制变形链球菌群粘附到牙表面、抑制变形链球菌群的糖基转移酶活性、抑制或使变形链球菌群失活、抑制变形链球菌群的凝集素依赖性结合和/或抑制变形链球菌群的蔗糖依赖性结合，如下所述。
[0138] 本发明的组合物优选地是用于宠物动物的口腔健康组合物，更优选地是用于预防或减少牙结石的组合物。此类组合物从例如EP 01 41 645 A2、WO0150882A2、WO2001/070043A2、WO02/078462A1、WO2004/082518A2、WO2005/092087A2 和
WO2010/052467A2中知悉。这些文件中，特别是在这些文件说明的实施例中说明的食品和饲料作为优选的基础组合物的实例合并入本文。根据本发明，通过掺入本发明的结合子微生物或其片段，进一步改进这些基础组合物。
WO2010/052467A2中知悉。这些文件中，特别是在这些文件说明的实施例中说明的食品和饲料作为优选的基础组合物的实例合并入本文。根据本发明，通过掺入本发明的结合子微生物或其片段，进一步改进这些基础组合物。
[0139] 本发明的特别的优势是通过结合子微生物或其片段的作用，即通过特异性结合变形链球菌群和最优选地通过特异性结合变形链球菌，可延迟或减慢牙结石的形成，而不必须依赖于杀菌剂或其他可杀死口腔中微生物的化学剂的作用。怀疑正常口腔微生物群落对人和动物的健康有益，例如此类正常微生物群落的微生物会与病原体竞争营养，从而限制病原体的生长并避免感染。本发明允许使正常口腔微生物群落保持大体上不受影响，并仍然赋予口腔护理性质，优选地对牙结石形成的预防或减慢。
[0140] 本发明在预防和治疗牙结石中的另一优势是本发明不需要脱钙剂例如硫酸锌、可溶性焦磷酸盐、三聚磷酸钠和可溶性二磷酸盐的存在。此类活性剂从口腔分离钙，从而移除牙结石形成的关键组分。然而，牙釉质主要由羟磷灰石构成，羟磷灰石是具有高钙含量的矿物质。因此，从口腔移除钙意味着进一步削弱牙齿，这是不希望的。另一方面，本发明允许治疗或预防牙结石形成而不分离维持健康牙釉质所需的钙。
[0141] 为获得预防牙结石形成的最佳结果，本发明的组合物因而包含结合子微生物或其片段，其中结合子微生物优选地属于乳杆菌科，更优选地属于乳杆菌属，并且最优选地是上述保藏的结合子微生物的菌株之一，并且还包含脱钙剂，其浓度使得通过浊度测量法确定的结合子微生物或其片段与变形链球菌群的结合被降低最多10％，并且优选地不包含此类活性剂。在此类优选的组合物中，脱钙剂优选地选自硫酸锌、氯化锌、可溶性焦磷酸盐、三聚磷酸钠和可溶性二磷酸盐。
[0142] 本发明也提供如上所述的结合子微生物或其片段用于制备优选地在儿童或宠物动物中预防或治疗牙结石的药物的用途。如上所述，结合子微生物也可以处于经热灭活的形式，特别是高压灭菌的形式，或是冻干的形式。结合子微生物优选地属于乳杆菌科，更优选地属于乳杆菌属，更优选地属于类干酪乳杆菌种或鼠李糖乳杆菌种。特别地，本发明的结合子微生物可分别选自上述具有16667至16673的任何DSMZ登陆号的类干酪乳杆菌或鼠李糖乳杆菌的菌株，或其突变体或衍生物。
[0143] 最优选地，根据本发明的组合物是食品或饲料组合物，特别地用于儿童或宠物动物。此类口腔健康食品或饲料组合物有时称为功能食品或功能饲料。根据本发明使用的术语“食品”和“饲料”不考虑相应的组合物的营养价值，并因此不限于特定营养目的，尽管根据本发明的食品和饲料组合物可被调整至此类特别的目的。术语“食品”和“饲料”因而指适于放入口腔并摄取的各种组合物。
[0144] 根据本发明特别重要的是用于动物，优选地用于宠物动物，最优选地用于猫、狗、大鼠、仓鼠和豚鼠的食品或饲料组合物。在此类动物中，龋的形成特别恶名昭著并且也难以治疗，因为任何牙科治疗例如移除牙结石需要麻醉宠物。因此，本发明特别适于防止对此类有压力的治疗的需要。
[0145] 本发明的饲料组合物优选地是宠物饲料，即在欧洲共同体用于动物饲养、繁育或喂养，但通常不用于人消费的组合物。优选地，根据本发明的“宠物”是属于食肉目，优选地属于犬形亚目或猫型亚目，最优选地属于犬科或猫科的哺乳动物。其他优选的宠物属于啮齿目，其中特别优选的动物是小鼠、兔、仓鼠和豚鼠。
[0146] 对于宠物饲料，本发明的化合物优选地是配合饲料、完全饲料、补充饲料或矿物质饲料。根据本发明，术语“配合饲料”表示至少两种饲料材料的混合物，含或不含饲料添加剂，用于以完全或补充饲料的形式经口饲养动物。术语“完全饲料”意指由于其组分，足以用于日常定量的配合饲料。根据本发明的术语“补充饲料”意指这样的配合饲料，其具有高含量的某些物质，但是由于其组分，只有在与其他饲料组合时才足以用于日常定量。术语“矿物质饲料”意指含有至少40％粗灰分的补充饲料。最后，根据本发明的术语“饲料材料”意指植物或动物来源的、主要目的是满足动物的营养需求，处于其天然状态、新鲜状态或保存的产品，以及源自其工业加工的产品，以及有机或无机物质，含或不含饲料添加剂，其旨在用于如此直接地或在加工后经口饲养动物，或用于制备配合饲料，或作为预混物的载体。术语“经口饲养动物”表示为了满足动物的营养需求和/或保持正常健康动物的生产力为目的，通过口将饲料引入动物的胃肠道。
[0147] 根据本发明，包含结合子微生物的组合物也可以是口腔健康组合物。根据本发明的口腔护理组合物的优选实例是牙膏、洁牙剂、牙粉、局部口服胶冻、漱口水、假牙产品、口喷雾剂、锭剂、口服片剂、口香糖、牙线或牙带，特别地对于动物，咀嚼产品。
[0148] 根据本发明的优选的口腔护理组合物不仅包含结合子微生物或其片段，也包含口腔可接受的载体，此类载体可以是能够以安全和有效的方式用于口腔的任何适当的载体，使得本发明的结合子微生物和/或其片段可结合一株或多株变形链球菌群，优选地一株或多株变形链球菌，因而发挥抗牙结石和/或抗生龋和/或抗口臭效果。口腔护理组合物可以是单相或多相组合物。
[0149] 特别地，除非另有说明，本发明的洁牙剂可以是糊剂、凝胶或液体制剂。洁牙剂组合物可以处于任何希望的形式，例如有深条纹的、有表面条纹的、多层的、凝胶包围糊剂的，或其任何组合。洁牙剂组合物可盛放于散发器的物理上分开的隔室中，并一起分散。洁牙剂组合物在例如EP 0 617608 B1中说明。
[0150] 优选的洁牙剂组合物在WO2008/074473A2的实施例21至24中说明。除了上述组分，本发明的洁牙剂组合物可含有多种任选的洁牙剂成分，其中一些在下文说明。任选地，成分包括但不限于，例如粘合剂、起泡剂、调味剂、甜味剂、额外的抗斑剂、额外的磨蚀剂和着色剂。这些和其他任选的组分在例如US5,004,597、US4,885,155、US3,959,458和US3,937,807中进一步说明。
[0152] 优选的根据本发明使用的任选的活性剂之一是表面活性剂，优选地是选自肌氨酸盐表面活性剂、羟乙基磺酸盐表面活性剂和牛磺酸盐表面活性剂的表面活性剂。优选地用于本文的是这些表面活性剂的碱金属和铵盐。本文中最优选的是以下的钠和钾盐：月桂酰肌氨酸盐、肉豆蔻酰肌氨酸盐、棕榈酰肌氨酸盐、硬脂酰肌氨酸盐和油酰肌氨酸盐。
[0153] 另一个优选的任选的活性剂是螯合剂，例如酒石酸及其可药用的盐、柠檬酸和碱金属柠檬酸盐及其混合物。螯合剂能络合细菌细胞壁中存在的钙。螯合剂也能通过从帮助保持生物质完整的钙桥移除钙来破坏斑。然而，如上所述，存在旨在用于特别温和地处理牙的此类活性剂或此类组合物的优选的最大浓度。
[0154] 洁牙剂和其他口腔组合物中通常有额外的水溶性氟化合物，所述氟化物化合物的量足以在25℃和/或当使用时在组合物中提供以重量计从约0.0025％至约5.0％，优选地以重量计从约0.005％至约2.0％的氟离子浓度，以提供额外的抗龋效果。多种产生氟离子的材料可用作本发明的可溶性氟化物的来源。适当的产生氟离子的材料的实例在US3,535,421和US3,678,154中说明。代表性的氟离子源包括氟化压锡、氟化钠、氟化钾、单氟磷酸钠等。特别优选氟化亚锡和氟化钠以及其混合物。
[0155] 根据本发明的口腔护理组合物也可包含牙增白活性剂，包括漂白或氧化剂例如过氧化物、过硼酸盐、过碳酸盐、过氧酸、过硫酸盐、金属亚氯酸盐及其组合。适当的过氧化物化合物包括过氧化氢、过氧化脲、过氧化钙及其混合物。优选的过碳酸盐是过碳酸钠。其他适当的增白剂包括钾、钠和锂过硫酸盐和过硼酸盐单和四水合物，以及过氧水合焦磷酸钠。适当的金属亚氯酸盐包括亚氯酸钙、亚氯酸钡、亚氯酸镁、亚氯酸锂、亚氯酸钠和亚氯酸钾。
优选的亚氯酸盐是亚氯酸钠。额外的增白活性剂可以是次氯酸盐和二氧化氯。
优选的亚氯酸盐是亚氯酸钠。额外的增白活性剂可以是次氯酸盐和二氧化氯。
[0156] 除了漂白剂和牙增白剂，在用于本发明的口腔护理活性剂之中可考虑牙色改变物质。这些物质适于改变牙色以满足消费者。这些物质包含颗粒，当所述颗粒应用于牙表面时，其在吸收和/或反射光方面改变此表面。当含有此类颗粒的膜被施用于牙表面时，此类颗粒提供外表上的益处。
[0157] 在制备牙膏或凝胶时，需要加入一些增稠材料以提供所希望的组合物的稠度、提供所希望的使用时的活性物质释放特征、提供货架稳定性和提供组合物的稳定性等。优选的增稠剂是羧基乙烯基聚合物、卡拉胶、羟乙基纤维素、锂皂石(laponite)和纤维素醚的水溶性盐例如羧甲基纤维素钠和羧甲基羟乙基纤维素钠。也可使用天然树胶例如梧桐胶、黄胞胶、阿拉伯胶和黄蓍胶。也可使用胶体镁铝硅酸盐或精细分割的硅土作为增稠剂的部分，以进一步改善质地。
[0158] 本发明的组合物的局部口腔载体的另一任选组分是湿润剂。湿润剂起到避免牙膏组合物由于暴露于空气而变硬、给予组合物对口腔的湿润感觉以及对于特定的湿润剂，赋予牙膏组合物所希望的甜味的作用。湿润剂，在纯湿润剂的基础上，通常构成以本文的组合物重量计的从约0％至约70％，优选地从约5％至约25％。用于本发明的组合物的适当的湿润剂包括可食用多元醇例如甘油、山梨醇、木糖醇、丁二醇、聚乙二醇和丙二醇，特别是山梨醇和甘油。
[0159] 也可向组合物添加调味和甜味剂。适当的调味剂包括鹿蹄草油、薄荷油、绿薄荷油、丁香苞油、薄荷醇、茴香脑、水杨酸甲酯、桉叶脑、肉桂、1-乙酸薄荷酯、鼠尾草、丁香油酚、欧芹油、oxanone、α-紫罗兰酮、墨角兰、柠檬、橙子、丙烯基乙基愈创木酚、桂皮、香草醛、百里香酚、芳樟醇、肉桂醛甘油缩醛又名CGA，及其混合物。调味剂通常以按重量计约0.001％至约5％的水平用于组合物。
[0160] 可使用的甜味剂包括蔗糖、葡萄糖、糖精、右旋糖、左旋糖、如上所述的乳糖、甘露醇、山梨醇、果糖、麦芽糖、木糖醇、糖精盐、沙马汀(thaumatin)、天冬甜素、D-色氨酸、二氢查尔酮、安赛蜜和环己烷氨基磺酸盐，特别是环己烷氨基磺酸钠和糖精钠及其混合物。婴儿食品组合物优选地含有以本发明的组合物的重量计从约0.1％至约10％，优选地从约0.1％至约1％的此类活性剂。优选地，根据本发明的宠物食品只具有低含量的此类可被变形链球菌群和优选地变形链球菌代谢的糖，以避免变形链球菌群的生龋活性。因此，优选地保持低蔗糖、甘蔗糖、焦糖、玉米糖浆、玉米糖蜜、葡萄糖、果糖和山梨醇的含量，优选最大含量为总婴儿或宠物食品的20wt％；更优选地最大含量为5wt％，最优选地最大含量为2wt％。也优选地，糖精、右旋糖、左旋糖、乳糖、甘露醇、麦芽糖和木糖醇每者的含量少于
20wt％，更优选地少于5wt％，最优选地少于2wt％，宠物食品优选地完全不含有木糖醇。
20wt％，更优选地少于5wt％，最优选地少于2wt％，宠物食品优选地完全不含有木糖醇。
[0161] 本发明的口腔护理组合物也可包含碱金属碳酸氢盐。碱金属碳酸氢盐在水中可溶，除非被稳定化，在水性系统中倾向于释放二氧化碳。碳酸氢钠，又称为小苏打，是优选的碱金属碳酸氢盐。本组合物可含有从约0.5％至约30％，优选地从约0.5％至约15％，最优选地从约0.5％至约5％的碱金属碳酸氢盐。用于制备适于市售的口服组合物的水应当优选地具有低离子含量并不含有机杂质。水通常构成以本文的水性牙膏组合物重量计的从约10％至约50％，优选地从约20％至约40％。这些量的水包括加入的游离水和与其他材料例如山梨醇一起引入的水。也可将二氧化钛添加至本组合物。二氧化钛是白色粉末，其增加组合物的不透明度。二氧化钛通常构成以洁牙剂组合物重量计的从约0.25％至约5％。
[0162] 优选地通过使用缓冲剂调整本组合物的pH。如本文所用的缓冲剂指可用于将组合物的pH调整到约4.5至约9.5，优选地约4.5至约8.5的范围的活性剂。缓冲剂包括磷酸单钠、磷酸三钠、氢氧化钠、碳酸钠、酸式焦磷酸钠、柠檬酸和柠檬酸钠。可以以本组合物重量计的从约0.5％至约10％的水平加入缓冲剂。洁牙剂组合物的pH是从3∶1的洁牙剂水浆测量的，例如3份水比1份牙膏。
[0163] 可用于本发明的其他任选的活性剂包括选自烷基和烷氧基二甲聚硅氧烷共聚醇的二甲聚硅氧烷共聚醇，例如C12至C20烷基聚二甲基硅氧烷共聚醇及其混合物。高度优选的是十六烷基聚二甲基硅氧烷共聚醇，市售商标为Abil EM90。聚二甲基硅氧烷共聚醇通常以按重量计从约0.01％至约25％，优选地从约0.1％至约5％，更优选地从约0.5％至约1.5％的水平存在。聚二甲基硅氧烷共聚醇帮助提供积极的牙感觉益处。其他有用的载体包括两相性洁牙剂制剂例如在US5,213.790、US5,145,666、US5,281,410、US4,849,213和US4,528,180中公开的那些。
[0164] 本组合物也可包含其他活性剂，例如抗微生物剂。此类活性剂中包括水溶性非阳离子抗微生物剂例如卤化二苯醚、酚化合物包括苯酚及其同系物、单和多烷基和芳基卤酚、间苯二酚及其衍生物、双酚化合物和卤化水杨酰苯胺、苯甲酸酯和卤化N-碳酰苯胺。水溶性抗微生物剂包括季铵盐和双二胍类盐等。三氯生单磷酸是额外的水溶性抗微生物剂。季铵活性剂包括其中季氮上的一个或两个取代基具有从约8至约20，通常从约10至18个碳原子的碳链长度(通常是烷基基团)，而剩余的取代基(通常是烷基或苯甲基基团)具有较低数量的碳原子，例如从约1至约7个碳原子，通常是甲基或乙基基团。典型的季铵抗微生物剂的实例是十二烷基三甲基溴化铵、十四烷氯化吡啶、度米芬、N-十四烷基-4-乙基氯化吡啶、十二烷基二甲基(2-苯氧乙基)溴化铵、苯甲基二甲基硬脂酰基氯化铵、十六烷基氯化吡啶、四级化的(quanternized)5-氨基-1，3-双(2-乙基-己基)-5-甲基六氢吡啶、苯扎氯铵、苄索氯铵和甲基苄索氯铵。其他化合物是如US4,206,215中公开的双[4-(R-氨基)-1-吡啶]烷类。也可包括其他抗微生物剂例如双甘氨酸铜、甘氨酸铜、柠檬酸锌和乳酸锌。酶是另一类可用于本组合物的活性物质。有用的酶包括属于蛋白酶、分解酶、斑基质抑制剂和氧化酶分类的酶：蛋白酶包括木瓜蛋白酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶、无花果蛋白酶、菠萝蛋白酶；细胞壁分解酶包括溶菌酶；斑基质抑制剂包括葡聚糖酶、变聚糖酶；氧化酶包括葡萄糖氧化酶、乳酸氧化酶、半乳糖氧化酶、尿酸氧化酶、包括辣根过氧化物酶、髓过氧化物酶、乳过氧化物酶、氯化物过氧化物酶的过氧化物酶。除了抗微生物性质，过氧化物酶也具有增白/清洁活性。此类活性剂在US2,946,725和US4,051,234中公开。其他抗微生物剂包括双氯苯双胍己烷、三氯生、三氯生单磷酸和调味油例如百里香酚。三氯生和其他此类活性剂在US5,015,466和US4,894,220中公开。提供抗斑益处的这些活性剂可以以洁牙剂组合物重量计从约0.01％至约5.0％的水平存在。
[0165] 如本文限定的术语“口香糖”表示糖果组合物，其适于咀嚼且包含本领域技术人员知悉的任何适当量的，优选地以组合物的重量计2％或更多的量的弹性体。适当的锭剂和口香糖组分在例如US4,083,955、US6,770,264或US6,270,781中公开。优选的锭剂在WO2008/074473A2的实施例19和20中说明。优选的口香糖组合物在WO2008/074473A2的实施例25中说明。
[0166] 本发明的组合物优选地包含弹性体或若干种不同弹性体的混合物。本领域广泛知悉弹性体材料，而示例性实例包括苯乙烯-丁二烯橡胶(SBR)；合成胶；聚异丁烯和异丁烯-异戊二烯共聚物；天然树胶；糖胶树胶；天然橡胶；节路顿胶；巴拉塔树胶；马来树胶；lechi caspi；sorva；及其混合物。根据本发明使用的组合物优选地包含以重量计从约2％至约30％，更优选地从约5％至约25％的弹性体。这些水平由口香糖所需的终质地确定，因为当弹性体的总水平低于约2％时基础组合物缺乏弹性、咀嚼质地和粘着性，而在高于约
30％的水平，制剂坚硬、有弹性并维持紧密的咀嚼。根据本发明使用的组合物中也优选地存在弹性体溶剂，因为它们帮助软化弹性体组分。用于本文的弹性体溶剂的优选的实例包括部分氢化的木松香的季戊四醇酯、木松香的季戊四醇酯、部分二聚化的松香的甘油酯、多聚化松香的甘油酯、妥尔油(tall oil)的甘油酯、木或树胶松香、部分氢化的松香的甘油酯、部分氢化的松香的甲酯，及其混合物。根据本发明使用的组合物优选地包含以重量计从约
2％至约50％，更优选地从约10％至约35％的弹性体溶剂。
30％的水平，制剂坚硬、有弹性并维持紧密的咀嚼。根据本发明使用的组合物中也优选地存在弹性体溶剂，因为它们帮助软化弹性体组分。用于本文的弹性体溶剂的优选的实例包括部分氢化的木松香的季戊四醇酯、木松香的季戊四醇酯、部分二聚化的松香的甘油酯、多聚化松香的甘油酯、妥尔油(tall oil)的甘油酯、木或树胶松香、部分氢化的松香的甘油酯、部分氢化的松香的甲酯，及其混合物。根据本发明使用的组合物优选地包含以重量计从约
2％至约50％，更优选地从约10％至约35％的弹性体溶剂。
[0167] 可通过例如本领域熟知的形成压缩的片剂的技术制备本发明的锭剂，其中二糖分散于可压缩的固体载体中，任选地与任何适当的压片助剂例如润滑剂(例如硬脂酸镁)组合并压缩为片剂。用于此类压片制剂的固体载体组分可是可溶于唾液的固体，例如可溶于冷水的淀粉或单糖，使得当锭剂被含于口中时，锭剂可在口中方便地溶解，以在唾液溶液中释放所含的二糖酸，与口/咽粘膜接触并被吸附。上述制剂的pH可在从约4至约8.5的范围。也可利用其它本领域熟知的固体单剂量制剂技术制备根据本发明的锭剂。
[0168] 本发明的漱口水或口腔清洗剂可含有乙醇或可不含乙醇，并且可含有其它活性成分，例如抗微生物剂诸如双氯苯双胍己烷。本发明优选的漱口水或口腔清洗剂可以是如下：
[0169] A薄荷油(Olium menthae) 1.2份
[0170] 山金车酊(Tinctura Arnica) 3.0份
[0171] 没药酊(Tinctura Myrrhae) 3.0份
[0172] 吐温 5.0份
[0173] B酒精90％ 5.0份
[0174] C苯甲酸钠 0.2份
[0175] 甜味剂(例如天冬甜素) 0.02份
[0176] 蒸馏水 ad100.0
[0177] 充分混合A，在搅拌下加入B，然后加入C。获得的澄清液体在制备后48小时内过滤。另一种优选的漱口水在WO2008074473A2的实施例26中说明。
[0178] 无论剂型为液体或固体，在本发明的一个优选的实施方式中，剂型被含在消费者，优选地宠物动物的口中一段时间，以促进微生物或属于乳酸菌的组的上述微生物的类似物或片段与患者的口腔接触。
[0179] 如本文所用的术语“牙线”和“牙带”指去除并移除在间隙和牙龈下的表面累积的腐烂食品，并去除并移除在口腔中累积的细菌、斑和/或结石的材料。除了如本文说明的根据本发明的微生物，牙线或牙带还可含有清洁剂、磨蚀剂、牙垢控制成分、增白剂、表面活性剂和/或活性成分例如氟化物、抗微生物剂、化疗剂或抗生素。其他额外的活性剂是抗斑剂、调味剂和着色剂。牙线或牙带可以处于本领域技术人员知悉的任何适当的形式，例如处于如在US3,664,915、US3,953,566、US3,962,153、US4,096,227、US4,187,390、US4,256,806、US4,385,093、US4,478,665、US4,776,358、US5,033,488、US5,209,251、US5,220,932、US5,518,012、US5,718,251、US5,765,576 或 US5,911,228 中 说 明 的PTFE(特氟龙)牙线形式、处于如US3,800,812、US4,974,615、US5,760,117、US5,433,226、US5,479,952、US5,503,842、US5,755,243、US5,884,639、US6,003,525或US6,027,592中说明的单丝间隙设备的形式，或处于双组分带的形式。优选地，牙线或牙带可以处于如US20050226820中说明的弹性体包被的单丝形式，或处于如US20020144704中说明的基于定向热塑性塑料的牙带的形式。
[0180] 如本文说明的口腔护理化妆组合物，特别是抗牙结石组合物、抗龋组合物和抗口臭组合物可用于人口腔施用范围以及兽医，优选地非人哺乳动物，更优选地宠物口腔施用领域。如果组合物用于兽医口腔施用领域，组合物可包含如本领域技术人员所知的适于此类施用的其他成分。
[0181] 根据本发明的药物组合物优选地还包含可药用的载体或赋形剂。
[0182] 药物组合物包含治疗有效量的上述微生物或其片段并且能够被配制为多种形式，例如固体、液体、粉末、水性、冻干的形式。
[0183] 可以用可药用的载体对患者，优选地人或动物，并且最优选地儿童或宠物动物施用药物组合物。术语“可药用的”表示由管理机构或其他受普遍承认的药典批准在动物中使用，更特别地在人中使用。根据本发明使用的优选的药物组合物不含范围在1％(w/w)至6％(w/w)之间的乳糖。药物组合物也优选地不含多于1％(w/w)的乳糖，例如它含少于1％，优选地少于0.9％(w/w)、0.8％(w/w)的乳糖等，或者药物组合物含多于6％、7％、8％等(w/w)的乳糖。备选地，也优选地，药物组合物不含乳糖。
[0184] 术语“载体”指与治疗剂一起施用的稀释剂、助剂、赋形剂或运载体。此类载体是可药用的，即在使用的剂量和浓度对受体是非毒性的。它优选地是等渗的、低渗的或弱高渗的，并且具有相对低的离子强度，例如由蔗糖溶液提供的。此类药物载体可以是灭菌液体，例如水和油，包括石油、动物、植物或合成来源的油，例如花生油、大豆油、矿物油、芝麻油等。盐水溶液和水性右旋糖和甘油溶液也可用作液体载体，特别地用于可注射溶液。适当的药物赋形剂包括淀粉、葡萄糖、蔗糖、明胶、麦芽、米、面粉、白垩、硅胶、硬脂酸钠、单硬脂酸甘油酯、滑石粉、钠离子、经干燥的脱脂乳、甘油、丙烯、乙二醇、水、乙醇等。赋形剂可含有如上文所述的乳糖，最优选地其不含乳糖。如果希望，组合物也可含有少量湿润剂或乳化剂，或pH缓冲剂。这些组合物可以采取溶液、悬液、乳液、片剂、丸剂、胶囊、粉末、缓释制剂等的形式。口服制剂可包括标准载体例如药物级麦芽糊精、甘露醇、淀粉、硬脂酸镁、糖精钠、纤维素、碳酸镁等。适当的药物载体的实例在E.W.Martin的″Remington′s Pharmaceutical Sciences″中说明。也可使用脱脂乳、脱脂乳粉末、不含乳或不含乳糖的产品。脱脂乳粉末习惯上悬于磷酸盐缓冲液(PBS)中，高压灭菌或过滤以根除蛋白质的和活的污染物，然后冷冻干燥、加热干燥、真空干燥或冻干。可用作药物载体的物质的其他一些实例是例如糖类，例如葡萄糖和蔗糖；淀粉例如玉米淀粉和马铃薯淀粉；纤维素及其衍生物例如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素和乙酸纤维素；粉状的黄蓍胶；麦芽；明胶；滑石粉；硬脂酸；硬脂酸镁；硫酸钙；碳酸钙；植物油例如花生油、棉花种子油、芝麻油、橄榄油、玉米油和可可油；多元醇例如丙二醇、甘油、山梨醇、甘露醇和聚乙二醇；琼脂；褐藻酸；不含热原的水；等渗盐水；蔓越橘提取物和磷酸盐缓冲液；脱脂乳粉末；以及用于药物制剂的其他非毒性相容性物质例如维生素C、雌激素和紫锥花(Echinacea)。湿润剂和润滑剂例如月桂酰硫酸钠，以及着色剂、调味剂、润滑剂、赋形剂、压片剂、稳定剂、抗氧化剂和防腐剂也可存在。
[0185] 优选地，口服制剂含有如本文说明的乳糖，并且最优选地不含乳糖。本领域众所周知的多种适于口服施用的载体和/或赋形剂可用于本发明的目的。如果希望，非生龋组合物还可含有多种已知的添加剂例如防腐剂、硬化剂、润滑剂、乳化剂、稳定剂、香精等。此类组合物将含有治疗有效量的优选地处于纯化的形式的上述化合物，连同适当量的载体，以提供用于向患者适当地施用的形式。制剂应适于施用模式。
[0186] 本发明的优选的组合物不含范围在1％(w/w)至6％(w/w)之间的乳糖。组合物也优选地不含多于1％(w/w)的乳糖，例如它含少于1％，优选地少于0.9％(w/w)、0.8％(w/w)的乳糖等，或者组合物含有多于6％、7％、8％等(w/w)的乳糖。备选地，也优选地，组合物不含乳糖。
[0187] 在其他方面，可通过包括配制结合子微生物其片段与可化妆、口服或药用的载体或赋形剂的步骤生产本发明的组合物。优选地，此微生物是如上文所述的保藏的微生物或其突变体、衍生物、类似物或片段。根据本发明的优选的组合物不含范围在1％(w/w)至6％(w/w)之间的乳糖。组合物也优选地不含多于1％(w/w)的乳糖，例如它含少于1％，优选地少于0.9％(w/w)、0.8％(w/w)的乳糖等，或者组合物含多于6％、7％、8％等(w/w)的乳糖。备选地，也优选地，组合物不含乳糖。
[0188] 本发明的组合物，优选地包括药物组合物的食品或饲料组合物，在组合物的固体2 12 3 8
的形式中包含每mg10 至10 个细胞，优选地10 至10 个细胞的量的、可能处于经热灭活或冻干形式的如上所述的结合子微生物。在组合物的液体形式的情况下，微生物的量是每
2 13
ml 10 至10 个细胞。然而，对于具体组合物，微生物的量可与本文说明的不同。
的形式中包含每mg10 至10 个细胞，优选地10 至10 个细胞的量的、可能处于经热灭活或冻干形式的如上所述的结合子微生物。在组合物的液体形式的情况下，微生物的量是每
2 13
ml 10 至10 个细胞。然而，对于具体组合物，微生物的量可与本文说明的不同。
[0189] 优选地，本发明的组合物中结合子微生物的浓度为0.01wt％至10wt％，相对于组合物的总质量。更优选地，本发明的组合物中结合子微生物的浓度为0.025wt.-％至2wt.-％。如上所述，当使用片段而不是结合子细胞时，选择片段的浓度与结合子细胞的肽聚糖含量相同。
[0190] 根据本发明，术语食品涵盖所有可食和可饮的食品和饮料。因此，微生物或其片段可包含于食品或饮料中。这些是例如，口香糖、喷雾、饮料、甜食、婴儿配方、冰激凌、冷冻甜点、甜色拉调味料、乳制品、奶酪、夸克、无乳糖酸奶、酸化乳、咖啡奶油或生奶油等。
[0191] 在本发明的范围内考虑基于乳的产品。然而，乳被理解为源自动物，例如牛、山羊、绵羊、水牛、斑马、马、驴或骆驼等。乳可以处于例如天然状态、重构乳、脱脂乳或用补充了细菌培养必须的或用于发酵乳的随后加工的化合物(例如脂肪、酵母提取物的蛋白质、蛋白胨和/或表面活性剂)的乳。术语乳也用于通常称为植物乳的产品，即表示经处理或未处理的植物材料(例如豆科植物(大豆、鹰嘴豆、小扁豆等)或油料种子(菜籽、大豆、芝麻、棉花等))的提取物，所述提取物在溶液或胶体悬液中含有可通过化学反应、通过酸发酵和/或热凝结的蛋白质。最后，单词乳也表示动物乳和植物乳的混合物。
[0192] 当向酸奶等具有类似内含物的产品添加本发明的结合子微生物或其片段时，添加5 7
约10-10 细胞/ml浓度的本发明的微生物，或等量的其片段是足够的。在此情况下，可完全预防或抑制变形链球菌群，优选地变形链球菌形成生物膜，从而预防或减慢牙结石、口臭或由生龋菌株诱导的牙龋的发展，而对饮料本身的质量没有显著副作用。
约10-10 细胞/ml浓度的本发明的微生物，或等量的其片段是足够的。在此情况下，可完全预防或抑制变形链球菌群，优选地变形链球菌形成生物膜，从而预防或减慢牙结石、口臭或由生龋菌株诱导的牙龋的发展，而对饮料本身的质量没有显著副作用。
[0193] 可通过生产食品和饮料或饲料的普遍方法生产此类食品、饮料或饲料，包括将活性成分添加至食品、饮料或饲料的原料或经烹调的材料。可用与食品、饮料或饲料普遍使用的相同方法造型和粒化根据本发明的食品、饮料或饲料。造型和粒化的方法包括粒化方法例如流体层粒化、搅拌粒化、挤出粒化、滚动粒化、气流粒化、压实造型粒化、裂化粒化、喷雾粒化和注射粒化，包被方法例如锅包被、流体层包被和干燥包被、喷出干燥、过量蒸汽方法、泡沫垫方法、膨胀方法例如微波炉孵育方法，以及用挤出粒化机器和挤出器的挤出方法。
[0194] 本发明的食品、饮料和饲料包括任何包含本发明的结合子微生物或其片段作为活性成分的食品、饮料或饲料。只要获得的食品、饮料或饲料可发挥其特异性结合变形链球菌群的活性，食品、饮料或饲料的活性成分不具体限制到任何浓度。活性成分的浓度优选地是以包含此类活性成分的食品、饮料或饲料的重量计的0.001至100％，更优选地以重量计0.01至100％，并且最优选地以重量计0.1至100％，或相对于本文说明的细胞数量。
[0195] 加入活性成分的具体食品或饮料包括例如果汁、清凉饮料、汤、茶、酸乳饮料、乳制品例如发酵乳、冰激凌、黄油、奶酪、经加工的乳和脱脂乳、肉产品例如火腿、香肠和汉堡、鱼肉蛋糕产品、蛋产品例如经调味的蛋卷和蛋凝块、糖果例如饼干、胶冻、点心和口香糖、面包、面条、泡菜、熏制产品、鱼干和调味品。食品或饮料的形式包括例如粉末食品、片样食品、瓶装食品、罐装食品、甑煮食品、胶囊食品、片剂食品和流体食品。
[0196] 待被婴儿摄取的，即包含具有特异性结合变形链球菌群的活性的结合子微生物或其片段的根据本发明的食品或饮料，优选地是婴儿营养组合物。此类婴儿营养组合物包括为婴儿制备的改性乳、已分解的蛋白质的乳、特别营养改性乳或婴儿食品和为幼儿制备的食品。用于婴儿的营养组合物的形式包括但不特别地限于经干燥的和粉碎的奶粉和婴儿食品，并且也包括用于婴儿摄取的普通食品例如冰激凌、发酵乳和胶冻。
[0197] 根据本发明的婴儿的营养组合物，以及动物，特别是宠物动物的营养食品或饲料组合物主要由蛋白质、脂、糖类、维生素和/或矿物质组成。在营养组合物中，活性成分与这些组分掺合。蛋白质包括乳蛋白例如脱脂乳、酪蛋白、干酪乳清、乳清蛋白浓缩物和乳清蛋白分离物及其部分例如αs-酪蛋白、β-酪蛋白、α-乳白蛋白和β-乳球蛋白。此外，可使用蛋蛋白质例如蛋黄蛋白、蛋白蛋白和卵白蛋白，或者大豆蛋白例如脱脂肪的大豆蛋白、分离的大豆蛋白和浓缩的大豆蛋白。除了这些，也可满意地使用小麦谷蛋白、鱼肉蛋白质、牛肉蛋白质和胶原蛋白。此外，也可满意地使用这些蛋白质的部分、来自其酸或酶处理的肽或游离氨基酸。游离氨基酸可作为氮源，并且还可额外地用于给出具体生理反应。此类游离氨基酸包括例如牛磺酸、精氨酸、半胱氨酸、胱氨酸和谷氨酰胺。对于狗，这些包括精氨酸、甲硫氨酸、组氨酸、苯丙氨酸、异亮氨酸、苏氨酸、亮氨酸、色氨酸、赖氨酸和缬氨酸。对于猫，牛磺酸也是基本的。脂包括动物脂肪和油例如乳脂肪、猪油、牛脂肪和鱼油、植物油例如大豆油、菜籽油、玉米油、椰油、棕榈油、棕榈仁油、红花油、紫苏油、亚麻籽油、月见草油、中链脂肪酸甘油三酯，和棉花籽油、细菌生成的脂肪和油及其分馏的油、其氢化的油和其酯交换的油。待掺合的脂的量根据用途不同。
[0198] 食品和饲料，特别是宠物饲料的其他优选的成分是ω-6脂肪酸和ω-3脂肪酸。特别优选的是亚油酸，优选地处于玉米、大豆、卡诺拉、红花和向日葵油、全谷物和/或家禽身体脂肪的形式；花生四烯酸，优选地处于家禽身体脂肪、瘦肉、蛋黄和/或鱼油的形式；γ亚麻酸，优选地处于黑加仑籽油、琉璃苣油和/或月见草油的形式；二高-γ-亚麻酸，优选地处于脾、肾、肾上腺的形式和/或代谢自gla；α亚麻酸，优选地处于亚麻籽油、卡诺拉、大豆和/或胡桃油的形式；二十碳五烯酸，优选地处于冷水鱼及其油的形式；二十二碳六烯酸，优选地以冷水鱼及其油的形式。
[0199] 糖类包括例如一种或多种淀粉、可溶多糖、糊精、单糖例如如本文说明的蔗糖、乳糖、麦芽糖、葡萄糖，以及果糖和其他寡糖。优选的糖类包括葡萄糖、果糖、蜜、半乳糖、乳糖、蔗糖、麦芽糖、糊精、糖原和淀粉。然而，如上所述，葡萄糖、果糖、蜜、半乳糖、乳糖、蔗糖和麦芽糖的最大含量优选地是总组合物的20wt.-％，更优选地总组合物的5wt.-％，最优选地总组合物的2wt.-％。甚至更优选地，上述20wt.-％，更优选地5wt.-％，最优选地2wt.-％的最大含量应用于蔗糖、焦糖、玉米糖蜜、玉米糖浆、右旋糖、果糖、半乳糖、葡萄糖、蜂蜜、乳糖、左旋糖、麦芽糖、甘露醇、糖精、山梨醇、蔗糖和木糖醇的组的总的全部物质，最优选地应用于总的单和多糖。
[0200] 同样优选的是选自纤维素、半纤维素、果胶、植物胶和黏胶、甜菜浆、瓜尔胶、阿拉伯胶、黄原胶和刺槐豆胶的膳食纤维。此类糖的总量优选地是以营养组合物中总固体重量计的40％至80％。此外，可满意地使用人工甜味剂例如天冬甜素。此类人工甜味剂的量优选地是以重量计0.05至1.0％/营养组合物中的总固体。
[0201] 维生素包括但不限于作为基本组分的番茄红素，并且额外地包括例如维生素例如维生素A、维生素B族、维生素C、D和E和维生素K族、叶酸、泛酸、烟碱、肉碱、胆碱、肌醇和生物素，只要此类维生素可施用于婴儿或宠物动物。此类维生素优选地是以重量计10mg至5g/婴儿营养组合物中的总固体。用于婴儿和/或动物，优选地宠物动物的营养组合物的优选的维生素包括：
[0202] 维生素A(视黄醇)，和/或作为前体的β胡萝卜素。维生素优选地以肝、鱼肝油、胡萝卜、绿叶蔬菜、蛋黄和/或黄色水果的形式存在，或以合成形式的维生素A和/或β胡萝卜素的形式存在。
[0203] 维生素D(钙化醇)。此维生素优选地以大比目鱼和/或鳕鱼肝油、咸水鱼、奶酪、酸奶和/或蛋类的形式或以合成形式的维生素D的形式存在。
[0204] 维生素E(生育酚)。此维生素优选地以胚、谷物、坚果、种子、菠菜和/或其他绿叶蔬菜、芦笋、植物油的形式或以合成形式的维生素E的形式存在。
[0205] 维生素K(萘醌)。此维生素优选地以甘蓝、花椰菜、菠菜和/或其他绿叶蔬菜、谷物、大豆，和/或其他蔬菜的形式或以合成形式的维生素K的形式存在。优选地，食品或饲料不含甲萘醌。
[0206] 维生素B1(硫胺素)。此维生素优选地以小麦胚芽、大米和/或其他全谷类、瘦肉(特别是猪肉)、肝、鱼、酵母、干豆、豌豆和/或大豆的形式或以合成形式的维生素B1的形式存在。
[0207] 维生素B2(核黄素)。此维生素优选地以瘦肉、肝、鱼、蛋、酵母、奶酪、豆科植物、坚果和/或绿叶蔬菜的形式或以合成形式的维生素B2的形式存在。
[0208] 维生素B3(烟酸)。此维生素优选地以肝、瘦肉、家禽、鱼、坚果、酵母、豆科植物、芦笋、种子和/或绿叶蔬菜的形式或以合成形式的维生素B3的形式存在。
[0209] 维生素B5(泛酸)。此维生素优选地以蛋、鱼、瘦牛肉、豆科植物、酵母、嫩茎花椰菜和/或甘蓝家族的其他蔬菜、白马铃薯和/或甘薯的形式或以合成形式的维生素B5的形式存在。
[0210] 维生素B6(吡哆醇)。此维生素优选地以肉、鱼、蛋、香蕉和/或全谷类的形式或以合成形式的维生素B6的形式存在。
[0211] 维生素B8(生物素)。此维生素优选地以生蛋黄、肝和/或蔬菜的形式或以合成形式的维生素B8的形式存在。
[0212] 维生素B9(叶酸，叶酸盐)。此维生素优选地以胡萝卜、酵母、肝、蛋黄、瓜、杏、南瓜、豆、黑麦、全麦和/或绿叶蔬菜的形式或以合成形式的维生素B9的形式存在。
[0213] 维生素B12(钴胺素)。此维生素优选地以鱼、肝、肉、家禽、蛋和/或奶酪的形式或以合成形式的维生素B12的形式存在。
[0214] 维生素C(抗坏血酸)。此维生素优选地以柑橘果汁或果浆、浆果、番茄、花椰菜、马铃薯、绿叶蔬菜和/或绿胡椒的形式或以合成形式的维生素C的形式存在。因为其对罹患慢性关节和肌肉骨骼病症的狗有有益效果，优选地以适当形式，优选地作为抗坏血酸钙进行补充。在小狗中，它帮助防止发生此类病症。
[0215] 此外，矿物质包括钙、镁、钾、钠、铁、铜、锌、磷、氯、锰、硒和碘。此类矿物质优选地是从以重量计1mg至5g/婴儿营养组合物中的总固体。
[0216] 除了上述组分，根据本发明使用的婴儿营养组合物以及动物，优选地宠物动物的食品或饲料组合物可与期望在营养组合物中掺合的任何组分例如膳食纤维、核苷酸、核酸、香料和着色剂掺合。
[0217] 根据本文使用的食品或饮料可用作预防和/或治疗龋和/或预防或治疗口臭和/或预防或治疗牙结石的健康食品或饮料或者功能性食品或饮料。
[0218] 当摄取根据本发明的食品或饮料时，摄取的量不具体限制。基于活性成分的总量，摄取的量一般地是0.1至50g，优选地0.5g至20g每天。
[0219] 以此量持续摄取食品或饮料从1天多至5年，优选地从2周至1年的一段时间。在本文中，可根据摄取食品或饮料的个体的症状的严重程度、其年龄和体重等，将摄取的量调整至适当的范围。
[0220] 除了结合子微生物或其片段之外，本发明的组合物可包含谷物、麸类、油籽粉、源自动物的饲料原料、其他饲料原料和纯化的产品。谷物可包括mile、小麦、大麦、燕麦、黑麦、糙米、荞麦、狐尾粟、中国粟、Deccan草、玉米和大豆。麸类可包括稻麸、脱脂稻麸、麸、最低级别面粉、小麦胚、大麦麸、筛选颗粒(screening pellet)、玉米麸和玉米胚。油籽粉包括例如大豆粉、大豆粉末、亚麻籽粉、棉花籽粉、豌豆粉、红花粉、椰子粉、棕榈粉、芝麻粉、向日葵粉、油菜粉、木棉籽粉和芥菜粉。源自动物的饲料原料包括例如鱼粉、进口粉、全麦面粉和海岸粉、鱼可溶物、肉粉、肉和骨粉、血粉、腐烂毛发、骨粉、屠宰副产品、羽毛粉、蚕蛹、脱脂奶、酪蛋白、干乳清和磷虾。其他饲料原料包括例如植物茎和叶例如紫花苜蓿、hey cube、紫花苜蓿叶粉和洋槐叶粉、来自玉米加工工业的副产品，例如玉米谷蛋白粉、玉米谷蛋白饲料和玉米浸出液、淀粉、糖、酵母、来自发酵工业的副产品例如啤酒渣、麦芽根、酒类残渣和酱油残渣，以及农业副产品例如柑橘经加工的残渣、豆腐残渣、咖啡残渣和可可残渣、木薯、马蚕豆、瓜尔粉、海藻、螺旋藻和小球藻。纯化的产品包括例如蛋白质例如酪蛋白和白蛋白、氨基酸、淀粉、纤维素、糖类例如蔗糖和葡萄糖、矿物质和维生素。
[0221] 本发明的组合物还可包含一种或多种添加剂。可用生产食品、饮料或饲料的添加剂的通用方法生产用于食品的此类添加剂。如果需要，可令人满意地加入食品、饮料或饲料中一般使用的添加剂，例如在《食品添加剂手册》(日本食品添加剂协会；1997年1月6日颁布)中说明的添加剂，包括甜味剂、着色剂、防腐剂、增稠剂和稳定剂、抗氧化剂、固色剂、漂白剂、杀菌剂、胶基、苦味剂、酶、增亮剂、酸化剂、调味剂、乳化剂、增强剂、用于制造的活性剂、香料和香料提取物。此外，可令人满意地加入上述用于药物片剂的常规糖类、淀粉、无机材料、植物粉、赋形剂、粉碎剂、润滑剂、粘合剂、表面活性剂和塑化剂。
[0222] 甜味剂包括布拉齐因(Brazzein)；库克灵(Curculin)；赤藓醇；甘草素；甘油，E422；氢化淀粉水解物；菊粉；Isomalt，E953；乳糖醇，E966；罗汉果；马宾灵；麦芽糖醇，E965；麦芽寡糖；甘露醇，E421；神秘果素(Miraculin)；Monatin；莫乃灵(Monellin)；喷塔汀(Pendatin)；山梨醇，E420；甜菊提取物或甜菊醇糖苷，特别是甜菊苷、莱鲍迪甙(Rebaudioside)A、莱鲍迪甙C、杜克甙(Dulcoside)A、甜茶苷、甜菊双糖甙H和莱鲍迪甙B；
塔格糖；沙马汀，E957；木糖醇，E967；乙酰磺胺酸钾，E950；阿力甜(Alitame)；天冬甜素，E951；天冬甜素-乙酰磺胺酸盐，E962；环己烷氨基磺酸盐，E952；甘素；亚糖精；新橘皮苷二氢查耳酮，E959；纽甜；P-4000；糖精，E954；三氯蔗糖，E955；甘草；木糖和罗汉果(罗汉果(Momordica grosvenori)果实)。
塔格糖；沙马汀，E957；木糖醇，E967；乙酰磺胺酸钾，E950；阿力甜(Alitame)；天冬甜素，E951；天冬甜素-乙酰磺胺酸盐，E962；环己烷氨基磺酸盐，E952；甘素；亚糖精；新橘皮苷二氢查耳酮，E959；纽甜；P-4000；糖精，E954；三氯蔗糖，E955；甘草；木糖和罗汉果(罗汉果(Momordica grosvenori)果实)。
[0224] 防腐剂包括例如亚硫酸钠、苯甲酸盐、安息香提取物、山梨酸酯和丙酸酯。
[0225] 增稠剂和稳定剂包括例如树胶例如阿拉伯胶和黄原胶、藻酸盐、几丁质、壳聚糖、芦荟提取物、瓜尔胶、羟丙基纤维素、酪蛋白钠、玉米淀粉、羧甲基纤维素、明胶、琼脂、糊精、甲基纤维素、聚乙烯醇、微纤维纤维素、微晶纤维素、海藻纤维素、聚丙烯酸钠、聚磷酸钠、卡拉胶或酵母细胞壁。
[0226] 抗氧化剂包括例如维生素C族、乙二胺四乙酸钠、乙二胺四乙酸钙、异抗坏血酸、谷维素、儿茶素、槲皮素、丁香提取物、经酶处理的芦丁、苹果提取物、芝麻籽提取物、二丁基羟甲苯、茴香提取物、辣根提取物、水芹菜提取物、茶提取物、生育酚类、油菜提取物、咖啡豆提取物、向日葵籽提取物、阿魏酸、丁基羟基苯甲醚、蓝莓叶提取物、蜂胶提取物、胡椒提取物、凤仙花提取物、没食子酸、桉树提取物和迷迭香提取物。
[0227] 固色剂包括例如亚硝酸钠。漂白剂包括例如亚硫酸钠。
[0228] 杀菌剂包括例如邻苯基苯酚。胶基包括例如乙酰蓖麻醇酸甲酯、漆蜡、酯胶、榄香树脂、urucury wax、贝壳杉树胶、巴西棕榈蜡、脂肪酸甘油酯、鲸脑蜡、苦配巴香脂(copaibabalsam)、珂巴树脂、橡胶、稻麸蜡、甘蔗蜡、虫漆、节路顿胶、蔗糖脂肪酸酯、解聚的天然橡胶、石蜡、冷杉香脂、丙二醇脂肪酸酯、粉碎的果浆、粉碎的稻壳、荷荷芭油、聚异丁烯、聚丁烯、微晶蜡、乳香黄连木树胶、蜂蜡和磷酸钙。苦味剂包括例如异-α苦味酸、咖啡因、云芝(云芝(coriolus versieolor))提取物、红金鸡纳树提取物、黄柏树皮提取物、龙胆根提取物、香料提取物、经酶改性的柚苷、牙买加肉桂提取物、可可碱、柚苷、肉桂提取物、苦艾提取物、香茶草提取物、橄榄茶、苦柑橘(酸橙(Citrus aurantium))提取物、啤酒花提取物和艾草提取物。酶包括例如淀粉酶、胰蛋白酶或凝乳酶。增亮剂包括例如漆蜡和日本蜡。酸化剂包括例如己二酸、衣康酸、柠檬酸、琥珀酸、醋酸钠、酒石酸、二氧化碳、乳酸、植酸、延胡索酸、苹果酸和磷酸。调味剂包括例如氨基酸例如天冬酰胺、天冬氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、丙氨酸、异亮氨酸、甘氨酸、丝氨酸、胱氨酸、酪氨酸、亮氨酸和脯氨酸、核酸例如肌苷酸钠、尿苷酸钠、鸟苷酸钠、胞苷酸钠、核苷酸钙和核苷酸钠、有机酸例如柠檬酸和琥珀酸、氯化钾、降低氯化钠的盐水、粗氯化钾、乳清盐、磷酸三钾、磷酸氢二钾、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、磷酸三钠和小球藻提取物。
[0229] 增强剂包括例如锌盐、维生素C族、多种氨基酸、5-腺苷酸、氯化铁、橘皮苷、多种经煅烧的钙、多种未经煅烧的钙、二苯甲酰硫胺素、氢氧化钙、碳酸钙、硫胺素的盐酸盐、杜氏藻、Oarotene、生育酚、烟酸、胡萝卜胡萝卜素、棕榈油胡萝卜素、泛酸钙、维生素A、羟基脯氨酸、焦磷酸二氢钙、焦磷酸亚铁、焦磷酸铁、铁蛋白、血红素铁、甲基萘醌、叶酸和核黄素。
[0230] 用于制造的活性剂包括例如，加工辅剂例如丙酮和离子交换树脂。
[0231] 香料包括，例如香草精和香料提取物，包括例如辣椒提取物。
[0232] 考虑到施用模式，可根据本发明将这些多种添加剂添加至活性成分。
[0233] 考虑本发明的组合物，优选地食品或饲料组合物或药物组合物包含处于益生微生物形式的上述属于乳酸菌的组的结合子微生物。即，除了益生效果，上述属于乳酸菌的组的益生微生物对于治疗和/或预防由变形链球菌群导致的生物膜形成是有用的。在合理的医学判断的范围内，所述益生微生物的量足够高以显著地有利地改变待治疗的病况，优选地龋、牙结石和/或口臭，但足够低以避免严重的副作用(处于合理的益处/风险比率)。所述益生微生物的有效量将随着待实现的具体目标、治疗的患者的年龄和身体状况、潜在的疾病的严重程度、治疗持续时间、同时进行的疗法的性质和使用的具体微生物而改变。因此，所述益生微生物的有效量将是提供希望的与变形链球菌群特异性结合的最小量。当以从约0.05ml至约20ml的量施用时，在0.05ml磷酸盐缓冲的盐水溶液，或0.05ml琼脂悬液9
中存在例如，活性或非活性完整细胞的1x10 个细菌，或干重等量的细胞壁片段，是有效的。
确定的实践优势是可以方便的方式，例如通过口服途径施用益生生物。取决于施用途径，可能需要将包含所述益生生物的活性成分包被于材料中，以保护所述生物免受酶、酸和可使所述生物失去活性的其他天然条件的作用。为通过除肠胃外途径施用益生生物，它们应当用防止失活的材料包被或与所述材料一起施用。例如，益生生物可与酶抑制剂共同施用或在脂质体中施用。酶抑制剂包括胰蛋白酶抑制剂、二异丙基氟代磷酸(DFP)和抑肽酶。脂质体包括水包油包水P40乳剂以及将乳杆菌或其副产品运输至泌尿生殖器表面的常规和特别设计的脂质体。也可在例如甘油、液态聚乙二醇及其混合物以及油中制备分散剂。通常，通过将多种经灭菌的益生生物掺入到无菌载体中制备分散剂，所述无菌载体含有基础分散剂介质和上述所需其他成分。在用于制备无菌可注射溶液的无菌粉的情况下，优选的制备方法是真空干燥和冻干技术，所述技术从其预先过滤灭菌的溶液生产活性成分以及任何额外的希望的成分的粉。额外的优选的制备方法包括但不限于冻干和加热干燥。
中存在例如，活性或非活性完整细胞的1x10 个细菌，或干重等量的细胞壁片段，是有效的。
确定的实践优势是可以方便的方式，例如通过口服途径施用益生生物。取决于施用途径，可能需要将包含所述益生生物的活性成分包被于材料中，以保护所述生物免受酶、酸和可使所述生物失去活性的其他天然条件的作用。为通过除肠胃外途径施用益生生物，它们应当用防止失活的材料包被或与所述材料一起施用。例如，益生生物可与酶抑制剂共同施用或在脂质体中施用。酶抑制剂包括胰蛋白酶抑制剂、二异丙基氟代磷酸(DFP)和抑肽酶。脂质体包括水包油包水P40乳剂以及将乳杆菌或其副产品运输至泌尿生殖器表面的常规和特别设计的脂质体。也可在例如甘油、液态聚乙二醇及其混合物以及油中制备分散剂。通常，通过将多种经灭菌的益生生物掺入到无菌载体中制备分散剂，所述无菌载体含有基础分散剂介质和上述所需其他成分。在用于制备无菌可注射溶液的无菌粉的情况下，优选的制备方法是真空干燥和冻干技术，所述技术从其预先过滤灭菌的溶液生产活性成分以及任何额外的希望的成分的粉。额外的优选的制备方法包括但不限于冻干和加热干燥。
[0234] 本发明的组合物也涵盖旨在口服或口腔施用的产品，所述产品包含如本文说明的可接受的药物载体，在所述药物载体上添加了处于例如新鲜、浓缩或干燥的形式的、上述属于乳酸菌的组的微生物的细胞。可以可摄取的悬液、凝胶、扩散剂、胶囊、硬明胶胶囊、糖浆或任何其他本领域技术人员知悉的草本药剂形式提供这些产品。
[0235] 当如上所述地适当地保护益生生物时，活性化合物可例如与惰性稀释剂或可吸收的可食载体共同口服施用，或者它可被封装于硬或软明胶胶囊中，或者它可被压缩为设计通过胃的片剂(即肠溶衣包被的)，或者它可直接与食品掺合。对于口腔治疗施用，益生生物可与赋形剂掺合并以可摄取的片剂、口腔片剂、锭剂、胶囊、酏剂、悬液、糖浆、糯米纸囊剂9
等的形式使用。制备根据本发明的组合物或制剂，使得口服剂量单位形式含有例如约1x10个活的或非活性细胞/ml，例如乳杆菌/ml。为方便和有效地施用有效量，益生生物与上文
9
公开的单位剂型的适当的药物或食品可接受的载体复合。剂量单位形式可含有例如约10个活的或非活性的例如乳杆菌/ml的量的主要活性化合物。在含有补充成分例如益生元的组合物的情况下，通过参考所述成分的常用剂量和施药方式确定剂量。
等的形式使用。制备根据本发明的组合物或制剂，使得口服剂量单位形式含有例如约1x10个活的或非活性细胞/ml，例如乳杆菌/ml。为方便和有效地施用有效量，益生生物与上文
9
公开的单位剂型的适当的药物或食品可接受的载体复合。剂量单位形式可含有例如约10个活的或非活性的例如乳杆菌/ml的量的主要活性化合物。在含有补充成分例如益生元的组合物的情况下，通过参考所述成分的常用剂量和施药方式确定剂量。
[0236] 根据本发明的食品和饲料组合物中优选的成分是紫花苜蓿、紫花苜蓿浓缩粉、紫花苜蓿脱水粉、紫花苜蓿营养浓缩物、α-硫辛酸、动物消化物、动物脂肪、精氨酸、人工香料、抗坏血酸、芦笋、枯草芽孢杆菌、熏肉、熏肉香料、大麦、大麦草、大麦麦芽粉、罗勒、豆类、牛肉、牛肉&骨粉、牛肉汤、牛肉副产品、牛肉香料、牛肝、牛肉粉、牛脂、甜菜浆、甜菜浆(移除糖)、甜菜、β胡萝卜素、BHA、长双歧杆菌(bifidobacterium longum)、假长双歧杆菌(bifidobacterium pseudolongum)、嗜热双歧杆菌(bifidobacterium thermophilum)、生物素、blue2、blue2和其他色素、蓝莓、骨粉、琉璃苣油、酿酒干酵母、酿酒酵母、酿酒酵母提取物(酿酒酵母(saccharomyces cerevisiae)发酵可溶物)、酿酒稻、绿花椰菜、糙米、糙米面粉、钙、抗坏血酸钙、碳酸钙、氯化钙、碘酸钙、泛酸钙、磷酸钙、丙酸钙、硫酸钙、蔗糖蜜、卡诺拉粉、卡诺拉油、角黄素、焦糖、焦糖色素、胭脂红、卡拉胶、卡拉树胶、胡萝卜粉、胡萝卜、酪蛋白、鲶鱼、鲶鱼粗粉、芹菜、纤维素、纤维素粉、奶酪粉、螯合钴、螯合铜、螯合铁、螯合钾、鸡、鸡汤、鸡副产品仅器官、鸡副产品、鸡副产品粉、鸡副产品仅器官肉、鸡天然软骨、鸡脂肪、鸡天然脂肪、鸡香料、鸡内脏杂碎、鸡肝、鸡肝消化物、鸡肝香料、鸡肉粉、天然鸡、鸡高汤(stock)、菊苣提取物、氯化胆碱、硫酸胆碱、肉桂、柠檬酸、柠檬酸和迷迭香、柠檬酸和迷迭香提取物、柑橘果胶、丁香苞油、钴氨基酸螯合物、碳酸钴、钴蛋白盐、鳕鱼、铜、铜氨基酸螯合物、铜氨基酸复合物、氧化铜、铜蛋白盐、硫酸铜、玉米、玉米麸、玉米面粉、玉米胚芽粉、玉米谷蛋白、玉米谷蛋白粉、玉米渣、玉米粉、玉米油、玉米淀粉、改性玉米淀粉、玉米浆、碎大麦、碎珍珠大麦、蔓越橘、蔓越橘粉、剔骨鸡、剔骨羊、剔骨火鸡、脱水紫花苜蓿、脱水紫花苜蓿粗粉、脱水胡萝卜、脱水马铃薯、右旋糖、DHA、磷酸二钙、DL-α生育酚醋酸酯、DL-甲硫氨酸、干燥的动物消化物、干燥的苹果、干燥的地衣芽孢杆菌发酵提取物、干燥的枯草芽孢杆菌发酵提取物、干燥的甜菜浆、干燥的甜菜浆(移除糖)、干燥的蓝莓、干燥的酿酒酵母、干燥的酪乳、干燥的辣椒、干燥的胡萝卜、干燥的纤维素、干燥的车达奶酪、干燥的奶酪、干燥的奶酪粉、干燥的鸡软骨、干燥的鸡肝、干燥的鸡高汤、干燥的菊苣根、干燥的柑橘浆、干燥的经烹调的火鸡、干燥的蔓越橘、干燥的蛋、干燥的蛋粉、干燥的蛋产品、干燥的蛋类、干燥的大蒜、干燥的姜、干燥的葡萄渣、干燥的青豆、干燥的海藻、干燥的海藻粉、干燥的肝消化物、干燥的肉副产品、干燥的红辣椒、干燥的欧芹片、干燥的豌豆、干燥的甜菜浆、干燥的马铃薯、干燥的菠菜、干燥的甘薯、干燥的番茄渣、干燥的植物纤维胡萝卜、干燥的乳清、干燥的山药、鸭、硬质小麦粉、富集单硝酸硫胺的硬质粗粒小麦粉、蛋面条、蛋片、蛋产品、蛋类、屎肠球菌(enterococcus faecium)、乙氧喹、桉树油、硫酸亚铁、纤维、鱼、鱼汤、鱼粉、天然鱼粉、鱼油、亚麻粉、亚麻籽、亚麻籽粉、叶酸、盐酸叶酸吡哆醇、食品淀粉、新鲜品、鲜鸡肉、鲜鸡肉副产品、寡聚果糖、延胡索酸、大蒜、大蒜提取物、大蒜香料、大蒜油、大蒜粉、明胶、姜、姜提取物、葡萄糖胺、盐酸葡萄糖胺、甘油、甘油、单硬脂酸甘油酯、甘氨酸、青豆、绿茶、磨碎的玉米、磨碎的亚麻籽、磨碎的洋车前草籽、磨碎的稻、磨碎的小麦、磨碎的小麦粉、磨碎的全谷物大麦、磨碎的全谷物玉米、磨碎的全谷物高粱、磨碎的全谷物小麦、磨碎的全豌豆、磨碎的全小麦、磨碎的黄玉米、瓜儿胶、阿拉伯胶、大比目鱼、鲱粉、鲱油、盐酸、肌醇、碘、加碘盐、铁氨基酸螯合物、铁氨基酸复合物、氧化铁、铁蛋白盐、硫酸铁、L-丙氨酸、L-精氨酸、L-抗坏血酸基-2-聚磷酸、L-抗坏血酸基-2-聚磷酸a、L-左旋肉碱、L-赖氨酸、单盐酸L-赖氨酸、L-色氨酸、嗜酸乳杆菌、羊、羊汤、羊副产品、羊消化物、羊脂肪、羊肝、羊粉、羊高汤、羊内脏、卵磷脂、小扁豆、莴苣、肝、刺槐豆胶、叶黄素、番茄红素、赖氨酸、鲭、氧化镁、麦芽提取物、发芽的大麦粉、硫酸亚锰、锰氨基酸螯合物、氧化锰、锰蛋白盐、硫酸锰、氧化亚锰、氧化亚锰碘酸钙、亚锰蛋白盐、硫酸亚锰、枫浆、万寿菊提取物、万寿菊粗粉、天然肉和骨粉、肉和肝粉、肉副产品、甲萘醌二甲基羟基嘧啶亚硫酸氢盐、甲萘醌亚硫酸氢钠复合物、甲萘醌维生素K3、鲱鱼鱼粉、鲱鱼鱼油、乳、混合生育酚、混合植物纤维胡萝卜、改性食品淀粉、改性淀粉、糖蜜、磷酸单钙、磷酸单钠、天然和人工鸡香料、天然和人工香料、天然鸡香料、天然色素、天然香料、天然家禽香料、天然烟熏香料、烟酸、烟酸和硫酸亚铁、无脂肪酸奶、燕麦麸、燕麦纤维、去壳燕麦粒、燕麦粉、燕麦、海鱼、海鱼粉、太平洋白鲑、ω脂肪酸、洋葱提取物、洋葱粉、泛酸、红辣椒油树脂、欧芹、欧芹片、欧芹油、欧芹粉、部分氢化的大豆油、面团、豌豆纤维、豌豆蛋白、10.8％豌豆壳、珍珠大麦、豌豆、胡椒、矿脂、叶绿醌维生素K1、磷酸、猪肉汤、猪肉副产品、猪肝、山梨酸钾、钾氨基酸复合物、氯化钾、柠檬酸钾、碘化钾、碘化钾、山梨酸钾、马铃薯、马铃薯纤维、马铃薯淀粉、家禽、家禽副产品粉、家禽副产品、家禽脂肪、家禽内脏杂碎、家禽肝、粉碎的纤维素、11.1％粉碎纤维素、丙酸、没食子酸丙酯和柠檬酸、丙二醇、盐酸吡哆醇、洋车前草、兔、兔副产品、兔高汤、red3、red40和其他色素、红椒、核黄素、稻、稻麸、稻粉、稻谷蛋白、稻壳、稻蛋白浓缩物、迷迭香、迷迭香提取物、迷迭香提取物和柠檬酸、黑麦、鼠尾草、鲑鱼、鲑鱼汤、鲑鱼粉、鲑鱼油、盐、海盐、硒、虾、烟熏香料、褐藻酸钠、抗坏血酸钠、硫酸氢钠、碳酸钠、酪蛋白酸钠、氯化钠、六偏磷酸钠、偏硫酸氢钠、用于颜色保留的亚硝酸钠、磷酸钠、丙酸钠、亚硒酸钠、硅铝酸钠、三聚磷酸钠、三聚磷酸钠、山梨酸、山梨醇、大豆粉、大豆壳、大豆卵磷脂、大豆蛋白浓缩物、大豆蛋白分离物、大豆油、大豆壳、大豆粉、大豆磨渣、大豆油、荷兰薄荷、菠菜、螺旋藻、淀粉、蒸汽处理的骨粉、蔗糖、用于加工的足够的水、糖、晒干的紫花苜蓿粉、向日葵粉、向日葵油、甘薯粉、甘薯、牛脂、木薯淀粉、牛磺酸、焦磷酸四钠、有纹理的植物蛋白、硫胺素、盐酸硫胺素、单硝酸硫胺、百里香、二氧化钛、二氧化钛色素、番茄片、番茄糊、番茄渣、番茄、微量矿物质(硫酸钙)、微量矿物质(硫酸铜)、微量矿物质(氯化钾)、微量矿物质(三聚磷酸钠)、微量矿物质(氧化锌)、微量矿物质(锌蛋白盐)、微量矿物质(硫酸锌)、磷酸三钙、金枪鱼、金枪鱼粉、火鸡、火鸡汤、火鸡副产品粉、天然火鸡、火鸡高汤、姜黄、小牛肉、小牛肉汤、植物油、鹿肉、鹿肉副产品、鹿肝、鹿肉粉、鹿肉、鹿肉高汤、维生素A、维生素A和D3、维生素A乙酸酯、维生素B1、维生素B12、维生素B12和D3、维生素B2、维生素B6、维生素C、维生素D3、维生素D3和E、维生素E、维生素K、水、水田芥、足以加工的水、水田芥和菠菜、小麦、小麦麸、小麦粉、小麦胚芽粉、小麦谷蛋白、小麦粗粉、粗小麦(wheat mill run)、小麦淀粉、乳清、白鱼、白鲑鱼、白鲑鱼粉、全糙米、全胡萝卜、全蔓越橘、全蛋、全蒜瓣、全谷物玉米、全谷物小麦、全研磨大麦、全研磨糙米、全研磨燕麦、全研磨小麦、全稻、全甘薯、全小麦、全小麦粉、野生稻、黄原胶、酵母培养物、yellow5、yellow6、黄南瓜、黄西葫芦、丝兰(yucca schidigera)、丝兰提取物、锌氨基酸螯合物、锌氨基酸复合物、氧化锌、锌蛋白盐、锌蛋白盐和硫酸锌。
[0237] 最优选的成分是：α-硫辛酸，优选地为足以促进形成健康皮肤和/或涂层的量；对于抗微生物目的优选的成分是α-硫辛酸、干燥的大蒜、大蒜提取物、大蒜油和大蒜粉；
卵磷脂，优选地作为抗氧化剂；碎大麦、碎珍珠大麦、粉碎的全谷物玉米、粉碎的全谷物高粱、鲱油、鲭、鲱鱼鱼油、海鱼、全糙米和全甘薯优选地作为能量源；优选的纤维源是脱水胡萝卜、干燥的苹果、粉碎的全谷物大麦、燕麦麸、去壳燕麦粒、燕麦粉、全粉碎大麦、全粉碎燕麦；钴蛋白盐(螯合钴源)、铜蛋白盐、铁蛋白盐、锰蛋白盐、亚锰蛋白盐、微量矿物质和，锌蛋白盐是优选的矿物质源；优选的ω-3脂肪酸源是琉璃苣油、卡诺拉油、卡诺拉油(用混合的生育酚防腐)和亚麻籽；迷迭香提取物和柠檬酸是优选的防腐剂；优选的蛋白源是牛肉粉、鸡肉粉、干燥的豌豆、大比目鱼、羊粉、鲱鱼粉、太平洋白鲑、豌豆、鹿肉粉、全研磨糙米和全研磨小麦；优选的维生素源是抗坏血酸钙、胡萝卜、干燥的胡萝卜、混合的生育酚、全胡萝卜；优选的淡水代替物，以及优选的香料是牛肉汤、鸡汤、羊汤、羊高汤和火鸡汤。
卵磷脂，优选地作为抗氧化剂；碎大麦、碎珍珠大麦、粉碎的全谷物玉米、粉碎的全谷物高粱、鲱油、鲭、鲱鱼鱼油、海鱼、全糙米和全甘薯优选地作为能量源；优选的纤维源是脱水胡萝卜、干燥的苹果、粉碎的全谷物大麦、燕麦麸、去壳燕麦粒、燕麦粉、全粉碎大麦、全粉碎燕麦；钴蛋白盐(螯合钴源)、铜蛋白盐、铁蛋白盐、锰蛋白盐、亚锰蛋白盐、微量矿物质和，锌蛋白盐是优选的矿物质源；优选的ω-3脂肪酸源是琉璃苣油、卡诺拉油、卡诺拉油(用混合的生育酚防腐)和亚麻籽；迷迭香提取物和柠檬酸是优选的防腐剂；优选的蛋白源是牛肉粉、鸡肉粉、干燥的豌豆、大比目鱼、羊粉、鲱鱼粉、太平洋白鲑、豌豆、鹿肉粉、全研磨糙米和全研磨小麦；优选的维生素源是抗坏血酸钙、胡萝卜、干燥的胡萝卜、混合的生育酚、全胡萝卜；优选的淡水代替物，以及优选的香料是牛肉汤、鸡汤、羊汤、羊高汤和火鸡汤。
[0238] 不是最优选，但也高度优选的成分是：紫花苜蓿浓缩物粉、紫花苜蓿脱水粉、鸡脂肪、鸡肝、新鲜品、海鱼粉和珍珠大麦作为能量源；青豆、研磨全豌豆、研磨和豌豆纤维作为纤维源；钴氨基酸螯合物、铜氨基酸螯合物、铜氨基酸复合物、干燥的海藻粉、铁氨基酸螯合物、锰氨基酸螯合物、硫酸锰、钾氨基酸复合物、锌氨基酸螯合物作为矿物质源；菊苣提取物、姜提取物和丝兰提取物作为益生元；良好的防腐剂是大蒜、迷迭香和鼠尾草；紫花苜蓿营养浓缩物、鲶鱼、鲶鱼粉、鳕鱼、鸭、蛋、研磨全小麦、.鲱鱼粉、豌豆蛋白、兔、虾、金枪鱼、鹿、鹿肉、白鱼、白鲑鱼、白鲑鱼粉、全小麦是优选的蛋白源；β胡萝卜素和叶酸是优选的维生素源；鸡高汤、兔高汤、火鸡高汤、小牛肉汤和鹿高汤是优选的淡水替代物以及优选的香料。
[0239] 本发明的标准食品或饲料组合物，优选地宠物食品，优选地包含由维生素B-12、生物素、碳酸钙、泛酸钙、氯化胆碱、碳酸钴、硫酸铜、维生素D3和E补充物、DL-甲硫氨酸、干燥的海藻、硫酸亚铁、叶酸、肌醇、氧化锰、氧化亚锰、硫酸亚锰、甲萘醌亚硫酸氢钠复合物、包括硫酸锌、天然香料、烟酸和硫酸亚铁的矿物质补充物、烟酸补充物、氯化钾、碘化钾、盐酸吡哆醇、核黄素、亚硒酸钠、牛磺酸、硫胺素、单硝酸硫胺、单硝酸硫胺、维生素A、维生素A和D3、维生素A乙酸酯、维生素B12、维生素D3、水、氧化锌和硫酸锌组成的组中的一种或多种成分。
[0240] 根据本发明使用的饲料可以是包含结合子微生物或其片段作为活性成分的任何饲料。饲料包括例如用于狗、猫和大鼠的宠物饲料，以及用于牛和猪的牛饲料。
[0241] 可通过在饲料原料中适当地混合如上文说明的活性成分生产饲料，所述饲料原料包括，例如，如上所述的谷类食品、麸、油籽粉、源自动物的饲料原料、其他饲料原料和纯化的产品。本发明的优选的饲料是咀嚼产品。优选的产品是猪耳、牛腱、牛尾、食管、干燥的肌肉、猪蹄和干燥的压制的牛皮、水牛皮或含植物材料例如纤维、麸等的复合咀嚼产品。本领域知悉其他咀嚼产品，并且也优选例如，US 2,988,045、WO 01/50882A2、EP 1 151 674 A1、EP 1 006 789 A1和CH 676200 A5的咀嚼产品。咀嚼产品优选地具有骨、卷、面包圈、弓、椒盐卷饼、8字或薯片的形状。
[0242] 在向动物提供根据本发明的饲料的情况下，待摄取的饲料的量不具体限制，但优选地是例如，0.1mg至50mg每1kg体重每天，优选地0.5mg至20g每1kg体重每天。以此量持续摄取饲料从1天多至5年，优选地从2周至1年的一段时间，基于活性成分的量。同样，摄取的量可根据摄取饲料的动物的物种、年龄和体重等调整到合适的范围。
[0243] 同样优选地，本发明的组合物包含一种或多种益生微生物或获得的其产品，独立于结合子微生物及其片段。优选的益生微生物和其各种产品是枯草芽孢杆菌、长双歧杆菌、假长双歧杆菌、嗜热双歧杆菌、干燥的地衣芽孢杆菌发酵提取物、干燥的枯草芽孢杆菌发酵提取物、屎肠球菌和嗜酸乳杆菌。
[0244] 特别优选的是除了结合子微生物或其片段，还包含用于预防和/或治疗口臭的其他微生物的食品和饲料组合物。最优选的是还包含如WO2009/149816A1中公开的微生物的食品和饲料组合物，所述文件以整体合并入本文。其中，其他微生物优选地选自具有DSMZ登陆号DSMZ19825、DSMZ19826、DSMZ19827的嗜酸乳杆菌。
[0245] 现在通过选择的实施例和实施方式进一步说明本发明。这些实施方式和实施例旨在代表本发明的某些优选的特征，而不限制此说明书或权利要求书的范围。应当理解，本领域技术人员可通过其公有一般知识和本说明书中给出的说明和解释，以及以引文合并入本文的文件，设计其他有效的实施例和实施方式。
[0246] 实施例1：结合子微生物的贮藏和培养
[0247] 菌株的贮藏和培养可根据普通流程进行。根据本实施例，菌株作为冷冻储液贮藏于-80℃。将1ml的培养物在MRS培养基中培养到稳定期(OD600：4-8)并与500μl无菌50％甘油溶液混合并冷冻。将变形链球菌群的培养物在TSY培养基中培养到稳定期(OD6001-2)并按上述冷冻贮藏处理。
[0248] 变形链球菌群(变形链球菌、远缘链球菌、鼠链球菌、仓鼠链球菌、野鼠链球菌或猕猴链球菌)的培养以及乳杆菌的培养可在密闭的Falcon试管中的5ml培养基中，在37℃不振荡过夜完成。
[0249] 特别地，将本申请中使用的菌株作为冷冻储液贮藏于-80℃。将1ml的培养物在MRS肉汤中培养到稳定期(OD600：4-8)并与500μl无菌50％甘油溶液混合并冷冻。
[0250] 特别地，将变形链球菌群的培养物在TSY肉汤中培养到稳定期(OD600/ml_1-2)并按如上处理。
[0251] 变形链球菌群(变形链球菌(DSMZ20523，血清型c；NCTC10923，血清型e；NCTC11060，血清型f)、远缘链球菌DSMZ20742、鼠链球菌DSMZ20564、仓鼠链球菌
DSMZ20562、野鼠链球菌DSMZ20646或猕猴链球菌DSMZ20714)的培养以及乳杆菌的培养在密闭的Falcon试管中的5ml培养基中，在37℃不振荡过夜完成。变形链球菌DSMZ20523用于如实施例5中说明的荧光测定。
DSMZ20562、野鼠链球菌DSMZ20646或猕猴链球菌DSMZ20714)的培养以及乳杆菌的培养在密闭的Falcon试管中的5ml培养基中，在37℃不振荡过夜完成。变形链球菌DSMZ20523用于如实施例5中说明的荧光测定。
[0252] 为进行聚集测定，在MRS培养基中培养乳杆菌。用10μl储液接种5mlMRS培养基并在37℃在有氧条件下孵育3天。测量培养物在600nm处的光密度(OD600)。然后用PBS缓冲液将培养物稀释到OD600为2。在7ml TSY培养基中培养变形链球菌群。用10μl储液接种7ml TSY培养基并在37℃无氧条件下孵育。
[0253] MRS肉汤：
[0254] MRS混合物(Difco，美国)55g/l，pH：6.5
[0255] TSY肉汤：
[0256] TSY混合物(Difco，美国)30g/l
[0257] 酵母提取物(Deutsche Hefewerke，德国)3g/l
[0258] 缓冲液：
[0259] PBS缓冲液：
[0260] Na2HPO42H2O 1.5g/l
[0261] KH2PO4 0.2g/l
[0262] NaCl 8.8g/l
[0263] 用HCl调整pH
[0264] 实施例2：结合子菌株和链球菌属菌株的分类学分类
[0265] 根据它们的碳水化合物发酵图样进行菌株的分类学分类。这是用API50CH(bioMerieux，法国)系统确定的并用APILAB PLUS软件版本3.3.3(bioMerieux，法国)分析。
[0266] 实施例3：细胞染色
[0267] 在按实施例1中说明培养乳杆菌和变形链球菌群后，用荧光染料对变形链球菌群进行染色。为此，测量培养物的OD600。通过在3200xg离心5min收获培养物。将沉淀重悬于PBS缓冲液。计算缓冲液的量，使得获得的悬液OD600为4。将2ml悬液与2μl根据制造商的说明制备的CFDA-SE溶液(Invitrogen，美国)混合。通过将混合物在37℃孵育2h进行细胞染色。通过在3200xg离心5min收获经染色的细胞。然后将细胞重悬在2ml PBS缓冲液中。
[0268] 实施例4：变形链球菌群的沉淀聚集测定
[0269] 为此测定，以3∶1至60∶1的体积比(变形链球菌群∶乳杆菌)混合乳杆菌和变形链球菌群，这对应于从1∶50至1∶2.5的菌落形成单位的比率。
[0270] 在1ml中在600nm的波长处测量的光密度表示优选地对于变形链球菌群3x108个9
菌落形成单位，对于乳杆菌优选地7x10 个菌落形成单位。在15ml Falcon试管中，在2ml体积中完成混合。用PBS缓冲液稀释培养悬液，以获得上述的体积比率，而同时保持终体积为2ml。将混合物漩涡混合15秒。聚集作为可见的立即出现的悬液的浊度。将试管静置
20min，此段时间后聚集物作为可见沉淀下沉，而非聚集的混合物留在悬液中。通过在500xg离心30秒分离形成的聚集物。然后，通过测量留在上清中的非聚集细胞的量定量聚集的量。相应地，小心移取1ml上清以测量光密度。在600nm处测量光密度。减去各自的没有乳杆菌的对照实验后的值代表未聚集的细胞的量。
菌落形成单位，对于乳杆菌优选地7x10 个菌落形成单位。在15ml Falcon试管中，在2ml体积中完成混合。用PBS缓冲液稀释培养悬液，以获得上述的体积比率，而同时保持终体积为2ml。将混合物漩涡混合15秒。聚集作为可见的立即出现的悬液的浊度。将试管静置
20min，此段时间后聚集物作为可见沉淀下沉，而非聚集的混合物留在悬液中。通过在500xg离心30秒分离形成的聚集物。然后，通过测量留在上清中的非聚集细胞的量定量聚集的量。相应地，小心移取1ml上清以测量光密度。在600nm处测量光密度。减去各自的没有乳杆菌的对照实验后的值代表未聚集的细胞的量。
[0271] 作为对照，总是通过仅将乳杆菌或变形链球菌群菌株添加至试管进行测试，来研究各乳杆菌菌株和变形链球菌群菌株的自聚集。乳杆菌对变形链球菌的聚集在图1(左侧试管)和图2中说明。
[0272] 如上文说明的乳杆菌菌株，特别是保藏于DSMZ的乳杆菌菌株，显示聚集全部变形链球菌血清型，而没有自聚集行为。
[0273] 实施例5：变形链球菌群的荧光聚集测定
[0274] 为此测定，混合各乳杆菌和各经染色的变形链球菌群的悬液(变形链球菌DSMZ20523与Lb-OB-K1(DSMZ16667)，变形链球菌DSMZ20523与Lb-OB-K2(DSMZ16668)，变 形 链 球 菌 DSMZ20523 与 Lb-OB-K3(DSMZ16669)，变 形 链 球 菌 DSMZ20523 与Lb-OB-K4(DSMZ16670)，变形链球菌DSMZ20523与Lb-OB-K5(DSMZ16671)，变形链球菌DSMZ20523与Lb-OB-K6(DSMZ16672)，变形链球菌DSMZ20523与Lb-OB-K7(DSMZ16673)；
远 缘 链 球 菌 DSMZ20742 与 Lb-OB-KI(DSMZ16667)，远 缘 链 球 菌 DSMZ20742 与Lb-OB-K2(DSMZ16668)，远缘链球菌DSMZ20742与Lb-OB-K3(DSMZ16669)，远缘链球菌DSMZ20742与Lb-OB-K4(DSMZ16670)，远缘链球菌DSMZ20742与Lb-OB-K5(DSMZ16671)，远 缘 链 球 菌 DSMZ20742 与 Lb-OB-K6(DSMZ16672)，远 缘 链 球 菌 DSMZ20742 与Lb-OB-K7(DSMZ16673)；仓鼠链球菌DSMZ20562与Lb-OB-KI(DSMZ16667)，仓鼠链球菌DSMZ20562与Lb-OB-K2(DSMZ16668)，仓鼠链球菌DSMZ20562与Lb-OB-K3(DSMZ16669)，仓 鼠 链 球 菌 DSMZ20562 与 Lb-OB-K4(DSMZ16670)，仓 鼠 链 球 菌 DSMZ20562 与Lb-OB-K5(DSMZ16671)，仓鼠链球菌DSMZ20562与Lb-OB-K6(DSMZ16672)，仓鼠链球菌DSMZ20562与Lb-OB-K7(DSMZ16673)；
远 缘 链 球 菌 DSMZ20742 与 Lb-OB-KI(DSMZ16667)，远 缘 链 球 菌 DSMZ20742 与Lb-OB-K2(DSMZ16668)，远缘链球菌DSMZ20742与Lb-OB-K3(DSMZ16669)，远缘链球菌DSMZ20742与Lb-OB-K4(DSMZ16670)，远缘链球菌DSMZ20742与Lb-OB-K5(DSMZ16671)，远 缘 链 球 菌 DSMZ20742 与 Lb-OB-K6(DSMZ16672)，远 缘 链 球 菌 DSMZ20742 与Lb-OB-K7(DSMZ16673)；仓鼠链球菌DSMZ20562与Lb-OB-KI(DSMZ16667)，仓鼠链球菌DSMZ20562与Lb-OB-K2(DSMZ16668)，仓鼠链球菌DSMZ20562与Lb-OB-K3(DSMZ16669)，仓 鼠 链 球 菌 DSMZ20562 与 Lb-OB-K4(DSMZ16670)，仓 鼠 链 球 菌 DSMZ20562 与Lb-OB-K5(DSMZ16671)，仓鼠链球菌DSMZ20562与Lb-OB-K6(DSMZ16672)，仓鼠链球菌DSMZ20562与Lb-OB-K7(DSMZ16673)；
[0275] 鼠 链 球 菌 DSMZ20564 与Lb-OB-K1(DSMZ16667)，鼠 链 球 菌 DSMZ20564 与Lb-OB-K2(DSMZ16668)，鼠链球菌DSMZ20564与Lb-OB-K3(DSMZ16669)，鼠链球菌DSMZ20564与Lb-OB-K4(DSMZ16670)，鼠链 球菌DSMZ20564与Lb-OB-K5(DSMZ16671)，鼠链球 菌DSMZ20564与Lb-OB-K6(DSMZ16672)，鼠链球菌DSMZ20564与Lb-OB-K7(DSMZ16673)；
[0276] 野鼠链球菌DSMZ20646与Lb-OB-K1(DSMZ16667)，野鼠链球菌DSMZ20646与Lb-OB-K2(DSMZ16668)，野鼠链球菌DSMZ20646与Lb-OB-K3(DSMZ16669)，野鼠链球菌DSMZ20646与Lb-OB-K4(DSMZ16670)，野鼠链球菌DSMZ20646与Lb-OB-K5(DSMZ16671)，野 鼠 链 球 菌 DSMZ20646 与 Lb-OB-K6(DSMZ16672)，野 鼠 链 球 菌 DSMZ20646 与Lb-OB-K7(DSMZ16673)；
[0277] 猕猴链球菌DSMZ20724与Lb-OB-K1(DSMZ16667)，猕猴链球菌DSMZ20724与Lb-OB-K2(DSMZ16668)，猕猴链球菌DSMZ20724与Lb-OB-K3(DSMZ16669)，猕猴链球菌DSMZ20724与Lb-OB-K4(DSMZ16670)，猕猴链球菌DSMZ20724与Lb-OB-K5(DSMZ16671)，猕 猴 链 球 菌 DSMZ20724 与 Lb-OB-K6(DSMZ16672)，猕 猴 链 球 菌 DSMZ20724 与Lb-OB-K7(DSMZ16673))。在96孔微量滴定板中将50μl乳杆菌悬液添加至50μl经染色的变形链球菌群中。将板全速漩涡混合12分钟。然后将板在500xg离心10秒。小心移出上清并弃去。将沉淀重悬于100μl PBS缓冲液中。在微量滴定板荧光酶标仪中在495nm的激发波长和525nm的发射波长处测量悬液的荧光。作为对照，按上述说明处理和测量单独的乳杆菌和经染色的变形链球菌群。从与各乳杆菌聚集测得的值减去对单独的各变形链球菌群测量的背景荧光。所有测量重复3次。所有测试的乳杆菌聚集变形链球菌群(见图
3)。
3)。
[0278] 实施例6：聚集对典型口腔群落成员的特异性
[0279] 如实施例1说明的培养乳杆菌培养物。将口腔细菌——即：唾液链球菌嗜热亚种(由OrganoBalance分离，由API50CH(Biomerieux，法国)根据制造商的说明鉴定)；口腔链球菌(DSMZ20066)；口腔链球菌(DSMZ20395)；口腔链球菌(DSMZ20627)；表皮葡萄球菌(DSMZ1798)；表皮葡萄球菌(DSMZ20044)；轻链球菌(DSMZ12643)；血链球菌(DSMZ20567)——在密闭的15ml Falcon试管中，在5ml BHI培养基中37℃过夜培养。上述每种口腔细菌优选地以3∶1的体积比与乳杆菌培养物混合，并按实施例4所述测定聚集。
对于每个聚集/非聚集测试，优选地仅使用上述细菌中的一种，以迅速确定测试的结果。
对于每个聚集/非聚集测试，优选地仅使用上述细菌中的一种，以迅速确定测试的结果。
[0280] 作为对照，总是通过仅将乳杆菌或口腔群落菌株添加至试管进行测试，研究各口腔细菌和测试的乳杆菌菌株的自聚集。
[0281] 类干酪乳杆菌类干酪亚种菌株Lb-OB-KI(DSMZ16667)、Lb-OB-K2(DSMZ16668)、Lb-OB-K3(DSMZ16669)、Lb-OB-K4(DSMZ16670)、Lb-OB-K5(DSMZ16671)不 聚 集 上 述 的口腔细菌。因此，根据上述限定，它们“特异性地结合变形链球菌群”。鼠李糖乳杆菌Lb-OB-K6(DSMZ16672)和Lb-OB-K7(DSMZ16673)聚集唾液链球菌嗜热亚种。然而，根据上述较不优选的限定，它们被认为“特异性地结合变形链球菌群”。
[0282] BHI肉汤：
[0283] BHI混合物(Difco，美国)37g，pH：7.2
[0284] 实施例7：乳杆菌的聚集能力的温度抗性
[0285] 按实施例1中所述培养细菌。培养的乳杆菌培养物在121℃，2巴下在饱和蒸汽中高压灭菌20min。在将经高压灭菌的培养物冷却到室温后，将乳杆菌以1∶3的体积比与培养的变形链球菌培养物混合，并按实施例4中所述测定聚集，包括对照实验。也用实施例6中列出的口腔细菌测定聚集。
[0286] 发现乳杆菌对测试的变形链球菌血清型或对口腔细菌的聚集行为未被高压灭菌程序改变。
[0287] 实施例8：经热灭活的乳杆菌导致的聚集
[0288] 按实施例1说明的培养乳杆菌。变形链球菌群按实施例1和实施例3说明的培养和染色。将培养的乳杆菌培养物按实施例1中所述调整至OD600为2。将1ml此悬液按上述方法在121℃，2巴下高压灭菌20min。在将经高压灭菌的培养物冷却到室温后，按实施例5所述测量聚集，包括对照实验。经热灭活的乳杆菌仍然聚集全部变形链球菌群。
[0289] 实施例9：聚集对pH值的依赖性
[0290] 按实施例1中所述培养细菌。通过在3200xg离心10min收获0.5ml的乳杆菌和1.5ml的变形链球菌并弃去上清。在调整到不同pH值的不同PBS缓冲液中重悬细胞到其原体积(分别是0.5ml和1.5ml)。以0.5pH单位逐步将缓冲液的pH值调整到从7.0至3.0
的值。在具有用于聚集行为测定的各pH值的缓冲液中重悬培养物。
的值。在具有用于聚集行为测定的各pH值的缓冲液中重悬培养物。
[0291] 然后将乳杆菌以1∶3的体积比与变形链球菌培养物混合，并按实施例4所述测定聚集，包括对照实验。在低于4.5的pH没有发生可见的乳杆菌对变形链球菌的聚集。
[0292] 实施例10：聚集对pH值的依赖性
[0293] 按实施例1所述培养乳杆菌。按实施例1和实施例3说明的培养和染色变形链球菌群。然后，在不同的pH值测定聚集。为此目的，在调整到各pH的醋酸缓冲液中重悬乳杆菌以及链球菌。测试的pH值是4.0、4.5和5.0。按实施例5所述测定聚集。在低于4.5的pH值没有发生变形链球菌群的聚集。
[0294] 实施例11：聚集行为对冻干的敏感性
[0295] 按实施例1中所述培养细菌。通过在3200xg离心10分，收获乳杆菌培养物的1ml等分试样。弃去上清，将沉淀在室温下真空冻干2小时。获得的每个测试乳杆菌菌株的干沉淀分别在室温和4℃下贮藏1天、1周、2周、3周和4周。在贮藏时间后，将冻干的沉淀重悬于1ml PBS缓冲液，pH7.0中。以1∶3的体积比混合重悬的乳杆菌与新培养的变形链球菌培养物，并按实施例4所述测定聚集，包括对照实验。
[0296] 所述乳杆菌对变形链球菌的聚集行为未被冻干或贮藏流程改变。
[0297] 实施例12：聚集行为对冻干的敏感性
[0298] 按实施例1所述培养乳杆菌。按实施例1和实施例3说明的培养和染色变形链球菌群。按实施例1所述将培养的乳杆菌培养物调整至OD600为2。将1ml此悬液在室温下真空冻干2小时。然后将冻干的沉淀重悬于1ml PBS缓冲液。按实施例5所述测量聚集，包括对照实验。
[0299] 所述乳杆菌对变形链球菌群的聚集行为未被冻干改变。
[0300] 实施例13：对蛋白酶抗性的测试
[0301] 按实施例1中所述培养细菌。使用的蛋白酶是链霉蛋白酶E、蛋白酶K、胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶(全部从Sigma，德国获得)。通过在3200xg离心10分收获细胞并将沉淀重悬于1ml PBS缓冲液(pH7.0)中，在PBS缓冲液中洗乳杆菌的1ml等分试样。然后按如上所述再次收获细胞并重悬于含终浓度为2.5mg/ml的各个蛋白酶的PBS缓冲液(pH7.0)中。将悬液在37℃孵育1小时。然后按如上所述洗细胞并重悬于PBS缓冲液(pH7.0)中。
[0302] 按实施例3所述测定聚集，包括对照实验。所述乳杆菌对变形链球菌的聚集行为未被任何所述蛋白酶的处理改变。
[0303] 实施例14：乳杆菌的聚集行为的蛋白酶易感性
[0304] 按实施例1所述培养乳杆菌。按实施例1和实施例3说明的培养和染色变形链球菌群。使用的蛋白酶是链霉蛋白酶E、蛋白酶K、胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶(全部从Sigma，德国获得)。通过在3200xg离心10分收获细胞并将沉淀重悬于1ml PBS缓冲液(pH7.0)中，在PBS缓冲液中洗乳杆菌的1ml等分试样。然后按如上所述再次收获细胞并重悬于含终浓度为2.5mg/ml的各个蛋白酶的PBS缓冲液(pH7.0)中。将悬液在37℃孵育1小时。然后按如上所述洗细胞并重悬于PBS缓冲液(pH7.0)中。按实施例5所述测定聚集，包括对照实验。乳杆菌对变形链球菌的聚集行为未被任何所述蛋白酶的处理改变。
[0305] 实施例15：聚集行为的离子依赖性
[0306] 按实施例1中所述培养细菌。按如上所述在1ml200mM EDTA缓冲液中洗乳杆菌的1ml等分试样2次。然后收获细胞并重悬于1ml PBS缓冲液(pH7.0)中。
[0307] 按实施例4所述测定聚集，并且观察到聚集能力完全消失。在200mMEDTA溶液中洗2次之后将乳杆菌重悬于1ml2mM钙溶液中恢复了聚集变形链球菌的能力。在至多100mM镁溶液中重悬经EDTA洗的细胞未恢复聚集变形链球菌的能力。
[0308] 实施例16：聚集行为的离子依赖性
[0309] 按实施例1所述培养乳杆菌。按实施例1和实施例3说明的培养和染色变形链球菌群。按如上所述在1ml200mM EDTA缓冲液中洗乳杆菌的1ml等分试样2次。然后收获细胞并重悬于1ml PBS缓冲液(pH7.0)中。按实施例5所述测定聚集，并观察到聚集能力完全消失。在200mM EDTA溶液中洗2次之后将乳杆菌重悬于1ml2mM钙溶液中恢复了聚集变形链球菌的能力。在至多100mM镁溶液中重悬经EDTA洗的细胞未恢复聚集变形链球菌群的能力。
[0310] 实施例17：在唾液存在下测试聚集
[0311] 按实施例1中所述培养细菌。按如上所述收获变形链球菌的2ml等分试样并重悬于2ml唾液中。唾液由2位志愿者提供，并在获得后立即使用。按实施例4所述测定聚集。
[0312] 所述乳杆菌对变形链球菌的聚集行为未在唾液存在下改变。
[0313] 实施例18：在唾液存在下变形链球菌的聚集
[0314] 新鲜唾液采样自志愿者。通过咀嚼无糖口香糖诱导唾液流。每次采样志愿者收集15ml唾液。用PBS缓冲液1∶2稀释新收集的唾液，用于测定流程。按实施例1所述培养乳杆菌和变形链球菌群。变形链球菌群按实施例3所述染色，除了在染色步骤后经染色的细胞重悬于唾液而不是PBS缓冲液中。按实施例5所述测量聚集，包括对照实验。唾液的存在不抑制聚集。
[0315] 分离实施例1：获得其他乳杆菌
[0316] 乳杆菌科从任何来源获得，例如通过对具有低量龋和/或牙结石的志愿者的口腔擦拭。乳杆菌也可从细胞培养物保藏处例如DSMZ和ATCC获得，或从其他已知的乳酸菌来源，例如植物、食品或饲料获得。然后用标准微生物技术纯化获得的菌株。用于乳杆菌的选择性培养基由例如Rogosa等人，1951.A selective medium for the isolation of oral and fecal lactobacilli，J.Bacteriol.62：132-133说明。
[0317] 按实施例1所述培养分离的菌株。按分离实施例2所述进行结合的选择。
[0318] 分离实施例2：
[0319] 按如上实施例5所述制备经染色的变形链球菌(DSMZ20523)并分布到96孔微量滴定板中。也如实施例5所述，将根据实施例1培养的待筛选结合的50μl菌株添加至每个微量滴定板孔并以全速漩涡混合12分。然后将板在500xg离心10秒并小心移除上清。将沉淀重悬于100μlPBS并按实施例5所述测量悬液的荧光。
[0320] 然后按实施例5所述测试待筛选的菌株与变形链球菌DSMZ20523、远缘链球菌DSMZ20742、仓鼠链球菌DSMZ20562、鼠链球菌DSMZ20564、野鼠链球菌DSMZ20646和猕猴链球菌DSMZ20724的结合。发现阳性结合子生产聚集物。
[0321] 食品和饲料实施例1：小狗饲料
[0322] 主要成分：牛肉、糙米、卡诺拉籽、亚麻籽粉、向日葵籽、荞麦种子(荞麦面)、大麦、粟。
[0323] 较少成分：胡萝卜、红甜菜、绿花椰菜、高油酸向日葵油、卡诺拉油、海盐、牛至、大蒜、抗坏血酸、蜂胶、维生素(维生素A、B12、D3、C、E、硫胺素、核黄素、吡哆醇、生物素、叶酸、泛酸、烟酸)、矿物质(铬、亚硒酸钠、铁、柠檬酸铜、硫酸锌、钴)。
[0324] 向具有上述主要和较少成分的1kg基础组合物中添加3g干燥的经高压灭菌的结合子微生物及其片段。通过按实施例1所述培养结合子微生物制备微生物材料。即，在MRS培养基中培养乳杆菌。用10μl储液接种5mlMRS培养基并在37℃有氧条件下孵育3天。通过离心沉淀微生物并用PBS洗一次。按实施例8所述高压灭菌经重悬的微生物。在烤箱中75℃下干燥经高压灭菌的微生物过夜，以获得干燥的经热灭活的结合子微生物及其片段。单独地用保藏的乳杆菌菌株DSMZ16667、16668、16669、16670、16671、16672和16673中的每种制备小狗食物，以获得7种单独的小狗食物。
[0325] 以下部分的总含量是(总饲料的wt.-％)：
[0326] 蛋白质(最少) 26.0
[0327] 脂肪(最少) 14.0
[0328] 纤维(最多) 5.0
[0329] 水分(最多) 10.5
[0330] 成年狗饲料
[0331] 主要成分：牛肉、糙米、卡诺拉籽、亚麻籽粗粉、向日葵籽、荞麦种子(荞麦)、大麦、粟。
[0332] 较少成分：胡萝卜、红甜菜、绿花椰菜、高油酸向日葵油、卡诺拉油、海盐、牛至、大蒜、抗坏血酸、蜂胶、维生素(即维生素A、B12、D3、C、E、硫胺素、核黄素、吡哆醇、生物素、叶酸、泛酸、烟酸)、矿物质(铬、亚硒酸钠、铁、柠檬酸铜、硫酸锌、钴)。
[0333] 如对小狗食物所述，用保藏的乳杆菌菌株DSMZ16667、16668、16669、16670、16671、16672和16673单独地制备了7种成年狗食品制剂。
[0334] 以下部分的总含量是(总饲料的wt.-％)：
[0335] 蛋白质(最少) 20.0
[0336] 脂肪(最少) 12.0
[0337] 纤维(最多) 5.0
[0338] 水分(最多) 10.5
[0339] 素食狗饲料
[0340] 主要成分：大豆粉、糙米、卡诺拉籽、亚麻籽粗粉、向日葵籽、荞麦种子、大麦、粟。
[0341] 较少成分：胡萝卜、红甜菜、绿花椰菜、高油酸向日葵油、卡诺拉油、海盐、牛至、大蒜、抗坏血酸、蜂胶、维生素(即维生素A、B12、D3、C、E、硫胺素、核黄素、吡哆醇、生物素、叶酸、泛酸、烟酸)、矿物质(即铬、亚硒酸钠、铁、柠檬酸铜、硫酸锌、钴)。
[0342] 如对小狗食物所述，用保藏的乳杆菌菌株DSMZ16667、16668、16669、16670、16671、16672和16673单独制备了7种素食狗食品制剂。
[0343] 以下部分的总含量是(总饲料的wt.-％)：
[0344] 蛋白质(最少) 20.0
[0345] 脂肪(最少) 12.0
[0346] 纤维(最多) 9.0
[0347] 水分(最多) 10.5。
[0348] 用所有食品制剂饲喂5只适当年龄(分别是1-8月、2-4岁和2-4岁)狗的单独组，每天1次。根据狗需要，每天其他时候提供其他标准饲料。然而，除了上述根据本发明的食品制剂，不提供其他各生产商宣传为特别促进口腔健康的饲料。在6个月后，没有狗发生牙结石。同样，10位志愿者认为在最后饲喂3h后测量的口臭可忍受。
[0349] 食品和饲料实施例2：狗咀嚼产品
[0350] 分别将生牛皮条浸入结合子微生物菌株DSMZ16667、16668、16669、16670、16671、16672和16673的培养物中。如食品和饲料实施例1所述培养结合子微生物。然后将牛皮条制成骨样形状并按食品和饲料实施例1所述高压灭菌。
[0351] 风干经高压灭菌的条。将干燥的骨样的条喂给5只刚移除牙结石的5-8岁狗。然后每周喂2次新的干燥的骨样的条。除了干燥的骨样的条，与移除牙结石之前相同饲喂狗。在8个月内，没有狗再发生牙结石。同样，10位志愿者认为在最后饲喂3h后测量的口臭可忍受。
[0352] 食品和饲料实施例3：其他狗饲料
[0353] 小狗饲料：
[0354] 主要成分：鸡、鸡肉粉、大麦、豌豆、糙米、研磨挤出的全大豆、鸡脂肪(用混合的生育酚防腐)。
[0355] 较少成分：鲑鱼粉、天然鸡肝香料、酿酒干酵母、亚麻籽粗粉、干燥的蛋、苹果、胡萝卜、氯化钾、磷酸二钙、矿物质(即锌蛋白盐、铁蛋白盐、铜蛋白盐、锰蛋白盐、亚硒酸钠、钴蛋白盐、碘酸钙)、盐、氯化胆碱、维生素(即维生素E补充物、l-抗坏血酸基-2-聚磷酸、维生素B12补充剂、d-泛酸钙、维生素A补充剂、烟酸、核黄素、叶酸、生物素、盐酸吡哆醇、单硝酸硫胺、维生素D3补充剂、碳酸钙)、酵母培养物(saccharomyces cerevisiae)、干燥的屎肠球菌发酵产品、干燥的嗜酸乳杆菌发酵产品、干燥的黑曲霉(aspergillus niger)发酵提取物、长枝木霉(trichoderma longibrachiatum)发酵提取物、干燥的枯草芽孢杆菌发酵提取物和发酵可溶物。
[0356] 以下部分的总含量是(总饲料的wt.-％)：
[0357] 蛋白质wt.-％(最少)：28.0
[0358] 脂肪wt.-％(最少)：15.0
[0359] 纤维wt.-％(最多)：3.5
[0360] 水分wt.-％(最多)：10.0.
[0361] 成年狗饲料：
[0362] 主要成分：鸡、鸡肉粉、大麦、豌豆、燕麦、糙米、鸡脂肪(用混合的生育酚防腐)。
[0363] 较少成分：天然鸡肝香料、酿酒干酵母、鲑鱼粉、干燥的蛋、苹果、全亚麻籽、胡萝卜、磷酸二钙、氯化钾、盐、矿物质(即锌蛋白盐、铁蛋白盐、铜蛋白盐、锰蛋白盐、亚硒酸钠、钴蛋白盐、碘酸钙)、氯化胆碱、维生素(即维生素E补充物、1-抗坏血酸基-2-聚磷酸、维生素B12补充剂、d-泛酸钙、维生素A补充剂、烟酸、核黄素、叶酸、生物素、盐酸吡哆醇、单硝酸硫胺、维生素D3补充剂)、酵母培养物(saccharomyces cerevisiae)、干燥的屎肠球菌发酵产品、干燥的嗜酸乳杆菌发酵产品、干燥的黑曲霉发酵提取物、干燥的长枝木霉发酵提取物，干燥的枯草芽孢杆菌发酵提取物和发酵可溶物。
[0364] 以下部分的总含量是(总饲料的wt.-％)：
[0365] 蛋白质wt.-％(最少)：26.0
[0366] 脂肪wt.-％(最少)：13.0
[0367] 纤维wt.-％(最多)：3.5
[0368] 水分wt.-％(最多)：10.0.
[0369] 体重控制狗饲料：
[0370] 主要成分：糙米、鸡肉粉、大麦、燕麦、豌豆、鸡、鸡脂肪(用混合的生育酚防腐)。
[0371] 较少成分：天然鸡肝香料、酿酒干酵母、鲑鱼粉、干燥的蛋、苹果、全亚麻籽、胡萝卜、磷酸二钙、氯化钾、盐、矿物质(即锌蛋白盐、铁蛋白盐、铜蛋白盐、锰蛋白盐、亚硒酸钠、钴蛋白盐、碘酸钙)、氯化胆碱、维生素(即维生素E补充物、1-抗坏血酸基-2-聚磷酸、维生素B12补充剂、d-泛酸钙、维生素A补充剂、烟酸、核黄素、叶酸、生物素、盐酸吡哆醇、单硝酸硫胺、维生素D3补充剂)、酵母培养物(saccharomyces cerevisiae)、干燥的屎肠球菌发酵产品、干燥的嗜酸乳杆菌发酵产品、干燥的黑曲霉发酵提取物、干燥的长枝木霉发酵提取物，干燥的枯草芽孢杆菌发酵提取物和发酵可溶物。
[0372] 以下部分的总含量是(总饲料的wt.-％)：
[0373] 蛋白质wt.-％(最少)：24.0
[0374] 脂肪wt.-％(最少)：10.0
[0375] 纤维wt.-％(最多)：3.5
[0376] 水分wt.-％(最多)：10.0.
[0377] 如对于食物和饲料实施例1的小狗食物所述，用保藏的乳杆菌菌株DSMZ16667、16668、16669、16670、16671、16672和16673单独制备了7种相应的小狗、成年狗和体重控制狗食品制剂。
[0378] 高蛋白成年狗饲料：
[0379] 主要成分：剔骨鸡肉、鸡肉粉、火鸡粗粉、褐色马铃薯、湖白鲑、鸡脂肪(用混合的生育酚防腐)。
[0380] 较少成分：甘薯、全蛋、火鸡、鲑鱼粉、鲑鱼和鲚鱼油、鲑鱼、天然鸡香料、向日葵油、晒干的紫花苜蓿、干燥的褐色海带、胡萝卜、菠菜、豌豆、番茄、苹果、洋车前草、掌状红皮藻、菊苣根、甘草根、姜黄根、葫芦巴、盐酸葡萄糖胺、蔓越橘、黑加仑、万寿菊、L-左旋肉碱、甜茴香、玉米、薄荷叶、甘菊花、蒲公英、夏香薄荷、迷迭香提取物、硫酸软骨素、玫瑰果、维生素(即维生素E、氯化胆碱、维生素A、维生素D3、单硝酸硫胺、维生素B12、叶酸、生物素)、海盐、矿物质(即铁蛋白盐、锌蛋白盐、锰蛋白盐、铜蛋白盐)、干燥的嗜酸乳杆菌发酵产品、干燥的屎肠球菌发酵产品。
[0381] 以下部分的总含量是(总饲料的wt.-％)：
[0382] 蛋白质最少：
[0383] 脂肪最少：16％
[0384] 纤维最多 3％
[0385] 水分最多：10％
[0386] 灰分最多：7％。
[0387] 如对于食物和饲料实施例1的小狗食物所述，用保藏的乳杆菌菌株DSMZ16667、16668、16669、16670、16671、16672和16673单独制备了7种相应的狗饲料制剂。
[0388] 素食狗饲料：
[0389] 主要成分：糙米、卡诺拉籽、亚麻籽粗粉、向日葵籽、荞麦种子(荞麦)、大麦、粟、胡萝卜、红甜菜、绿花椰菜、高油酸向日葵油。
[0390] 较少成分：卡诺拉油、海盐、牛至、大蒜、抗坏血酸、蜂胶、维生素(即维生素A、B12、D3、C、E、K3、硫胺素、核黄素、吡哆醇、生物素、叶酸、泛酸、烟酸)、矿物质(即铬、亚硒酸钠、铁、柠檬酸铜、硫酸锌、钴)。
[0391] 以下部分的总含量是(总饲料的％)：
[0392] 蛋白质最少：20％
[0393] 脂肪最少：12％
[0394] 纤维最多：9％
[0395] 水分最多：10.5％。
[0396] 如对于食物和饲料实施例1的小狗食物所述，用保藏的乳杆菌菌株DSMZ16667、16668、16669、16670、16671、16672和16673单独制备了7种相应的狗饲料制剂。
[0397] 其他实施方式：
[0398] 1.结合子微生物或其片段，其中微生物或其片段能结合变形链球菌群组的至少一种，优选地至少两种，更优选地至少三种链球菌属菌株，并且其中结合对热处理具有抗性和/或对蛋白酶处理具有抗性和/或依赖于钙的和/或在高于4.0的pH内形成和/或不依赖于镁和/或在唾液存在下形成口腔护理剂。
[0399] 2.根据实施方式1的结合子微生物或其片段，其中结合对在≥55℃，优选地在≥65℃，更优选地在95-121℃，最优选地在121℃的热处理具有抗性。
[0400] 3.根据实施方式1的结合子微生物或其片段，其中结合对≥15min，优选地15-120min，优选地15-30min，和最优选地20min的热处理具有抗性。
[0401] 4.根据实施方式3的结合子微生物或其片段，其中结合对在压力为1-5巴，优选地1-3巴，优选地2巴的饱和蒸汽中的热处理具有抗性。
[0402] 5.根据实施方式1的结合子微生物或其片段，其中结合对在压力为1-5巴，优选地1-3巴，优选地2巴的饱和蒸汽中，在95-121℃，更优选地在121℃，≥15min，优选地15-120min，优选地15-30min，和最优选地20min的热处理具有抗性。
[0403] 6.根据实施方式1的结合子微生物或其片段，其中结合对热处理具有抗性，其中热处理是在压力为2巴的饱和蒸汽中，在121℃的温度20min。
[0404] 7.根据实施方式1的结合子微生物或其片段，其中结合对链霉蛋白酶E、蛋白酶K、胰蛋白酶和/或胰凝乳蛋白酶的蛋白酶处理具有抗性，优选地也对弹性蛋白酶、凝血酶、氨基肽酶I、羧基肽酶、dostripain、内蛋白酶、木瓜蛋白酶、组织蛋白酶B、胃蛋白酶、胃亚蛋白酶、凝乳酶和/或组织蛋白酶D的蛋白酶处理具有抗性。
[0405] 8.根据实施方式7的结合子微生物或其片段，其中结合对链霉蛋白酶E、蛋白酶K、胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶的蛋白酶处理具有抗性。
[0406] 9.根据实施方式7的结合子微生物或其片段，其中结合对弹性蛋白酶、凝血酶、氨基肽酶I、羧基肽酶、dostripain、内蛋白酶、木瓜蛋白酶、组织蛋白酶B、胃蛋白酶、胃亚蛋白酶、凝乳酶和组织蛋白酶D的蛋白酶处理具有抗性。
[0407] 10.根据实施方式1的结合子微生物或其片段，其中结合对在压力为1-5巴，优选地1-3巴，优选地2巴的饱和蒸汽中，在95-121℃，更优选地121℃，≥15min，优选地15-120min，优选地15-30min，并且最优选地20min的热处理具有抗性；也对链霉蛋白酶E、蛋白酶K、胰蛋白酶和/或胰凝乳蛋白酶的蛋白酶处理具有抗性，优选地也对弹性蛋白酶、凝血酶、氨基肽酶I、羧基肽酶、dostripain、内蛋白酶、木瓜蛋白酶、组织蛋白酶B、胃蛋白酶、胃亚蛋白酶、凝乳酶和/或组织蛋白酶D的蛋白酶处理具有抗性。
[0408] 11.根据实施方式6的结合子微生物或其片段，其中结合对链霉蛋白酶E、蛋白酶K、胰蛋白酶和/或胰凝乳蛋白酶的蛋白酶处理具有抗性，优选地也对弹性蛋白酶、凝血酶、氨基肽酶I、羧基肽酶、dostripain、内蛋白酶、木瓜蛋白酶、组织蛋白酶B、胃蛋白酶、胃亚蛋白酶、凝乳酶和/或组织蛋白酶D的蛋白酶处理具有抗性。
[0409] 12.根据实施方式8的结合子微生物或其片段，其中结合对热处理具有抗性，其中热处理是在压力为2巴的饱和蒸汽中，在121℃的温度20min。
[0410] 13.根据实施方式1的结合子微生物或其片段，其中结合依赖于以至少2mM，更优2+
选地至少1mM，最优选地至少0.05mM的浓度存在的Ca 离子。
选地至少1mM，最优选地至少0.05mM的浓度存在的Ca 离子。
[0411] 14.根据实施方式1的结合子微生物或其片段，其中结合依赖于以0.05-500mM，更2+
优选地1-100mM，最优选地2-30mM的浓度存在的Ca 离子。
优选地1-100mM，最优选地2-30mM的浓度存在的Ca 离子。
[0412] 15.根据实施方式12或13的结合子微生物或其片段，其中结合对热处理具有抗性，其中热处理是在压力为2巴的饱和蒸汽中，在121℃的温度20min。
[0413] 16.根据实施方式12或13的结合子微生物或其片段，其中结合对链霉蛋白酶E、蛋白酶K、胰蛋白酶和/或胰凝乳蛋白酶的蛋白酶处理具有抗性，并且优选地也对弹性蛋白酶、凝血酶、氨基肽酶I、羧基肽酶、dostripain、内蛋白酶、木瓜蛋白酶、组织蛋白酶B、胃蛋白酶、胃亚蛋白酶、凝乳酶和/或组织蛋白酶D的蛋白酶处理具有抗性。
[0414] 17.根据实施方式1的结合子微生物或其片段，其中结合在4.0-9.0，优选地4.0-7.0，更优选地4.2-5.0，最优选地4.5的pH形成。
[0415] 18.根据实施方式16的结合子微生物或其片段，其中结合对热处理具有抗性，其中热处理是在压力为2巴的饱和蒸汽中，在121℃的温度20min。
[0416] 19.根据实施方式16的结合子微生物或其片段，其中结合对链霉蛋白酶E、蛋白酶K、胰蛋白酶和/或胰凝乳蛋白酶的蛋白酶处理具有抗性，优选地也对弹性蛋白酶、凝血酶、氨基肽酶I、羧基肽酶、dostripain、内蛋白酶、木瓜蛋白酶、组织蛋白酶B、胃蛋白酶、胃亚蛋白酶、凝乳酶和/或组织蛋白酶D的蛋白酶处理具有抗性。
[0417] 20.根据实施方式16的结合子微生物或其片段，其中结合依赖于以至少2mM，更优2+
选地至少1mM，最优选地至少0.05mM的浓度存在的Ca 离子。
选地至少1mM，最优选地至少0.05mM的浓度存在的Ca 离子。
[0418] 21.根据实施方式1的结合子微生物或其片段，其中结合不依赖镁离子的存在，并且优选地对热处理具有抗性，其中热处理是在压力为2巴的饱和蒸汽中，在121℃的温度20min。
[0419] 22.根据实施方式1的结合子微生物或其片段，其中结合在唾液存在下形成，并且优选地对热处理具有抗性，其中热处理是在压力为2巴的饱和蒸汽中，在121℃的温度20min。
[0420] 23.根据实施方式1的结合子微生物或其片段，其中结合对热处理具有抗性，对蛋白酶处理具有抗性，并且在唾液存在下形成。
[0421] 24.根据前述实施方式中任一项的结合子微生物或其片段，其中变形链球菌群的菌株选自变形链球菌血清型c(DSMZ20523)、变形链球菌血清型e(NCTC10923)、变形链球菌血清型f(NCTC11060)、远缘链球菌DSMZ20742、鼠链球菌DSMZ20564、仓鼠链球菌DSMZ20562、野鼠链球菌DSMZ20646和猕猴链球菌DSMZ20714，并且优选地其中结合子微生物或其片段的特异性结合可按如下测定：
[0422] 将所述结合子微生物培养到稳定期，或者，在待测试的是片段的情况下，获得此类片段，
[0423] 将所述结合子微生物或片段与已经培养到稳定期的变形链球菌群混合，
[0424] 在允许形成所述微生物和所述链球菌的聚集物的条件下孵育步骤(b)中获得的混合物，和
[0425] 通过沉淀的出现检测聚集物。
[0426] 25.根据实施方式1-22中任一项的结合子微生物或其片段，其中结合子微生物或其片段能结合选自变形链球菌血清型c(DSMZ20523)、变形链球菌血清型e((NCTC10923)和变形链球菌血清型f(NCTC11060)的每个菌株。
[0427] 26.根据实施方式1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23或24的结合子微生物或其片段，其中微生物或其片段不能结合选自唾液链球菌嗜热亚种、口腔链球菌DSMZ20066、口腔链球菌DSMZ20395、口腔链球菌DSMZ20627、轻链球菌DSMZ12643和血链球菌DSMZ20567中的至少一种，优选地至少两种，更优选地至少三种，并且甚至更优选地全部微生物。
[0428] 27.根据实施方式1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25的结合子微生物或其片段，其中结合子微生物属于乳杆菌科，优选地属于乳杆菌属、副乳杆菌属、小球菌属或沙皮氏属，更优选地属于类干酪乳杆菌物种、鼠李糖乳杆菌物种、干酪乳杆菌物种或玉米乳杆菌物种，并且最优选地是菌株DSMZ16667、DSMZ16668、DSMZ16669、DSMZ16670、DSMZ16671、DSMZ16672或DSMZ16673中的任一株，或其突变体或衍生物。
[0429] 28.根据实施方式26的结合子微生物或其片段，其中微生物或其片段能够结合选自变形链球菌血清型c(DSMZ20523)、变形链球菌血清型e(NCTC10923)和变形链球菌血清型f(NCTC11060)的每株菌株，并且不能结合选自唾液链球菌嗜热亚种、口腔链球菌DSMZ20066、口腔链球菌DSMZ20395、口腔链球菌DSMZ20627、轻链球菌DSMZ12643和血链球菌DSMZ20567的微生物。
[0430] 29.根据实施方式26或27的结合子微生物或其片段，其中在压力为2巴的饱和蒸汽中，121℃的温度热处理20min后，微生物或其片段保留在至少0.05mM钙离子存在下，并且在唾液存在下，并且不依赖于链霉蛋白酶E、蛋白酶K、胰蛋白酶和/或胰凝乳蛋白酶的处理，结合选自变形链球菌血清型c(DSMZ20523)、变形链球菌血清型e(NCTC10923)、变形链球菌血清型f(NCTC11060)、远缘链球菌DSMZ20742、鼠链球菌DSMZ20564、仓鼠链球菌、DSMZ20562、野鼠链球菌DSMZ20646和猕猴链球菌DSMZ20714的变形链球菌群的能力，其中在这些条件下，经热处理的微生物或其片段不能结合选自唾液链球菌嗜热亚种、口腔链球菌DSMZ20066、口腔链球菌DSMZ20395、口腔链球菌DSMZ20627、轻链球菌DSMZ12643和血链球菌DSMZ20567的微生物。
[0431] 30.根据实施方式1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30中任一项的结合子微生物，其中结合子微生物处于通过热灭活、冻干或喷雾干燥可获得或获得的灭活形式，其中优选地通过以下完成热灭活：
[0432] -在121℃的温度，在存在气压为2巴的饱和蒸汽的条件下，高压灭菌所述结合子微生物的细胞至少20min，或
[0433] -在-20℃冷冻所述细胞至少1h。
[0434] 31.根据实施方式29的经灭活的结合子微生物，其通过在≥55℃的温度，优选地在≥65℃的温度，更优选地在95-121℃的温度和最优选地在121℃的温度热灭活可获得或获得。
[0435] 32.根据实施方式30的经灭活的结合子微生物，其通过热灭活≥15min，优选地15-120min，优选地15-30min和最优选地20min可获得或者获得。
[0436] 33.根据实施方式29、30或31的经灭活的结合子微生物，其通过在压力为1-5巴，优选地1-3巴，更优选地2巴，和最优选地压力为2巴的饱和蒸汽中，在121℃的温度热灭活20min可获得或者获得。
[0437] 34.上述实施方式中任一项的结合子微生物的片段，其中片段是结合子微生物的裂解物或膜片段。
[0438] 35.根据实施方式1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32或33中任一项的结合子微生物或其片段，作为感觉中性的口腔护理剂。
[0439] 36.根据实施方式1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32或33中任一项的结合子微生物或其片段，作为抗牙结石剂、感觉中性的抗龋剂和/或抗口臭剂。
[0440] 37.根据实施方式35的结合子微生物或其片段，作为感觉中性的抗牙结石剂、感觉中性的抗龋剂和/或感觉中性的抗口臭剂。
[0441] 38.根据实施方式34、35或36中任一项的结合子微生物或其片段，其中结合子微生物或其片段是分离的或纯化的结合子微生物或其片段。
[0442] 39.包含根据实施方式1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36或37中任一项的结合子微生物或其片段的组合物，所述结合子微生物或其片段作为口腔护理剂，优选地作为抗牙结石剂、抗龋剂和/或抗口臭剂。
[0443] 40.包含根据实施方式1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36或37中任一项的结合子微生物或其片段的组合物，所述结合子微生物或其片段作为感觉中性的口腔护理剂，优选地作为感觉中性的抗牙结石剂、感觉中性的抗龋剂和/或感觉中性的抗口臭剂。
[0444] 41.包含根据实施方式1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36或37中任一项的结合子微生物或其片段的组合物，所述结合子微生物或其片段的量：
[0445] -足以防止或减少口臭的强度，和/或
[0446] -足以防止龋或减慢龋生成和/或
[0447] -足以防止牙结石形成或减慢牙结石形成。
[0448] 42.包含根据实施方式1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36或37中任一项的结合子微生物的组合物，所示结合子微生物浓度为：
[0449] -102-1013细胞/mg，优选地102-1012细胞/mg，更优选地103-108细胞/mg，或[0450] -102-1013细胞/ml，或
[0451] -相对于总组合物≥0.01wt.-％，优选地0.01-10wt.-％，并且更优选地0.025-2wt.-％，或
[0452] -≥0.01mg干重/g总组合物，优选地0.01-100mg干重/g总组合物，并且更优选地0.025-2mg干重/g总组合物。
[0453] 43.包含根据实施方式32、33、34、35、36或37中任一项的结合子微生物的片段的组合物，所述片段的浓度为：
[0454] -相对于总组合物≥0.01wt.-％，优选地0.01-10wt.-％，并且更优选地0.025-2wt.-％，或
[0455] -≥0.01mg干重/g总组合物，优选地0.01-100mg干重/g总组合物，更优选地0.025-2mg干重/g总组合物。
[0456] 44.根据实施方式38、39、40、41或42中任一项的组合物，所述组合物包含处于活的、经热灭活的或冻干形式的其他微生物，其中经热灭活的形式通过在压力为1-5巴，优选地1-3巴，更优选地2巴，并且最优选地压力为2巴的饱和蒸汽中，在121℃的温度热灭活20min可获得或者获得。
[0457] 45.根据实施方式43的组合物，其中其他微生物是抗口臭微生物，所述微生物的浓度足以预防、改变或降低口臭，优选地能刺激唾液链球菌的生长，但不刺激变形链球菌和/或牙龈卟啉单胞菌(porphyromonas gingivalis)的生长。
[0458] 46.根据实施方式44的组合物，其中抗口臭微生物属于嗜酸乳杆菌物种，优选地是乳杆菌菌株DSMZ19825、DSMZ19826或DSMZ19827中的任一株。
[0459] 47.根据实施方式38、39、30、41、42、43、44或45中任一项的组合物，
[0460] -其中组合物用于人或动物，并且是牙膏、洁牙剂、牙粉、局部口腔凝胶、口腔清洗剂、假牙产品、口腔喷雾剂、锭剂、口服片剂、口香糖、漱口水、牙线、咀嚼产品或食品、饲料或饮料添加剂，或
[0461] -其中组合物处于粉末、片剂、膜制剂、溶液、气溶胶、颗粒、丸剂、悬液、乳液、胶囊、糖浆、液体、酏剂、提取物、酊剂或流体提取物、片样食品、瓶装食品、罐装食品、甑煮食品或流体食品的形式，或者
[0462] -其中组合物是选自口香糖、喷雾剂、饮料、甜食、婴儿配方、冰激凌、冷冻甜食、甜沙拉调味料、乳制品、奶酪、夸克、酸奶、酸化乳、咖啡奶油、生奶油、黄油、奶酪、经加工的乳和脱脂乳、肉产品-优选地火腿、香肠和汉堡、鱼肉、蛋糕产品、蛋产品——优选地经调味的蛋卷和蛋凝块，糖果-优选地饼干、果冻、点心，和口香糖——面包、面条、泡菜、熏制产品、鱼干、调味品的食品或饮料。
[0463] 48.根据实施方式38、39、30、41、42、43、44或45的组合物，其中组合物是食品或饲料组合物。
[0464] 49.根据实施方式47的食品或饲料组合物，其中组合物用于婴儿或用于宠物动物，优选地狗、猫、大鼠、小鼠、仓鼠、豚鼠或猴子。
[0465] 50.根据实施方式48的宠物食品或饲料组合物，其中组合物是宠物咀嚼产品，并且优选地具有骨、卷、面包圈、弓、椒盐卷饼、8字或薯片的形状。
[0466] 51.根据实施方式38、39、30、41、42、43、44、45、46、47或48中任一项的组合物，其中组合物是化妆品、药物或兽医组合物。
[0467] 52.宠物食品或饲料组合物，
[0468] 所述组合物包含处于经热灭活或冻干形式的经灭活的结合子微生物，其中经灭活的微生物能够结合属于变形链球菌群组的链球菌菌株，并且其中结合在唾液存在下形成，并且对热处理具有抗性并且依赖于钙，其中热处理是在压力为2巴的饱和蒸汽中在121℃的温度20min，
[0469] 并且其中变形链球菌菌株选自变形链球菌血清型c(DSMZ20523)、变形链球菌血清型e(NCTC10923)和变形链球菌血清型f(NCTC11060)，
[0470] 并且其中其经灭活的结合子微生物不能结合选自唾液链球菌嗜热亚种、口腔链球菌DSMZ20066、口腔链球菌DSMZ20395、口腔链球菌DSMZ20627、轻链球菌DSMZ12643和血链球菌DSMZ20567的微生物，
[0471] 并且其中结合子微生物以感觉中性的量存在，所述量
[0472] -足以防止或降低口臭强度，和/或
[0473] -足以防止龋或减慢龋生成和/或
[0474] -足以防止牙结石形成或减慢牙结石形成。
[0475] 53.根据实施方式51的宠物食品组合物，其中经灭活的结合子微生物的浓度为[0476] -102-1013细胞/mg，优选地102-1012细胞/mg，甚至更优选地103-108细胞/mg，或[0477] -102-1013细胞/ml，或
[0478] -相对于 总组合 物≥0.01wt.-％，优 选地0.01-10wt.-％，更优选 地0.025-2wt.-％，或
[0479] -≥0.01mg干重/g总组合物，优选地0.01-100mg干重/g总组合物，并且更优选地0.025-2mg干重/g总组合物。
[0480] 54.宠物食品或饲料组合物，所述组合物包含根据实施方式33的片段，所述片段浓度为
[0481] -相对于总组合物≥0.01wt.-％，优选地0.01-10wt％，更优选地0.025-2wt％，或[0482] -≥0.01mg干重/g总组合物，优选地0.01-100mg干重/g总组合物，并且更优选地0.025-2mg干重/g总组合物。
[0483] 55.根据实施方式1-37中任一项的结合子微生物或其片段作为感觉中性的口腔护理剂，优选地作为感觉中性的抗牙结石剂和/或感觉中性的抗龋剂和/或感觉中性的抗口臭剂的用途。
[0484] 56.根据实施方式1-37中任一项的结合子微生物或其片段在制造：
[0485] -用于预防或治疗牙结石形成的药物，
[0486] -用于预防或治疗龋的药物，
[0487] -用于预防或治疗口臭的药物，
[0488] 的任一项中的用途，其中结合子微生物和/或其片段以感觉中性的量存在。
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