人IL-17的抗体分子
专利汇可以提供人IL-17的抗体分子专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且白介素17(IL－17)的结合成员，特别是 抗体 分子。该结合成员可用于 治疗 白介素17相关的 疾病 ，例如类 风 湿性关节炎。，下面是人IL-17的抗体分子专利的具体信息内容。
1.一种分离的人IL-17A的结合成员，其中所述结合成员与成熟人IL-17A的71-87位Cys-Arg-His-Leu-Gly-Cys-Ile-Asn-Ala-Asp-Gly-Asn-Val-Asp-Tyr-His-Met(SEQ ID NO：199)的至少一个残基结合。
2. 如权利要求1所述的结合成员，其特征在于，所述结合成员在残基 Leu74、 Tyr85、 His86禾口/或Met87处结合成熟的人IL-17A。
3. 如权利要求1或2所述的结合成员，其特征在于，所述结合成员与具 有氨基酸序列SEQ ID NO:198的成熟人IL-17A的结合亲和力比结合具有氨基 酸序列SEQIDNO:201的突变型人IL-17A的结合亲和力高10倍，其中亲和力 是从采用二价分析物数据模型通过表面等离振子共振测定的速度常数之比 kdl/kal计算的Kd。
4. 如权利要求3所述的结合成员，其特征在于，所述结合成员不结合具 有氨基酸序列SEQ ID NO:201的突变型人IL-17A。
5. 如以上权利要求中任一项所述的结合成员，其特征在于，在表位竞争 试验中，所述结合成员与人IL-17A的结合受1 nMIL-17B、 IL-17C、 IL-17D、 IL-17E或IL-17F中任一种的抑制不超过50%,所述试验利用浓度等于所述结 合成员与人IL-17A相互作用的Kd的标记IL-17A，其中从采用二价分析物数 据模型通过表面等离振子共振测定的速度常数之比kdl/kal计算所述Kd。
6. 如以上权利要求中任一项所述的结合成员，其特征在于，所述结合成 员对短尾猴IL-17A的亲和力与其对人IL-17A的亲和力的差异小于5倍，其中 亲和力是从采用二价分析物数据模型通过表面等离振子共振测定的速度常数 之比kdl/kal计算的Kd。
7. 如以上权利要求中任一项所述的结合成员，其特征在于，在对lnM人 IL-17A起反应而释放IL-6的HT1080细胞试验中，所述结合成员的IC50与在 对1 nM短尾猴IL-17A起反应而释放IL-6的HT1080细胞试验中，所述结合成 员的IC50的差异不超过10倍。
8. —种分离的人IL-17A的结合成员，其包含一组CDR: HCDR1 、HCDR2 、 HCDR3、 LCDR1、 LCDR2禾n LCDR3，其中该组CDR与以下所述CDR组相比具有10个或更少的氨基酸取代，其中： HCDR1是氨基酸序列SEQ ID NO: 63; HCDR2是氨基酸序列SEQ ID NO: 64; HCDR3是氨基酸序列SEQ ID NO: 65; LCDRl是氨基酸序列SEQ ID NO: 68; LCDR2是氨基酸序列SEQ ID NO: 69;和 LCDR3是氨基酸序列SEQ ID NO: 70。
9. 一种如权利要求1-7中任一项所述的结合成员，其特征在于，包含一组 CDR: HCDRl 、 HCDR2、 HCDR3、 LCDRl 、 LCDR2禾口 LCDR3，其中该组 CDR与以下所述CDR组相比具有10个或更少的氨基酸取代，其中：HCDR1是氨基酸序列SEQ ID NO: 63; HCDR2是氨基酸序列SEQ ID NO: 64; HCDR3是氨基酸序列SEQ ID NO: 65; LCDRl是氨基酸序列SEQ ID NO: 68; LCDR2是氨基酸序列SEQ ID NO: 69;禾口 LCDR3是氨基酸序列SEQ ID NO: 70。
10. 如权利要求8或9所述的结合成员，其特征在于，该组CDR中包含0、 l或2个取代。
11. 如以上权利要求中任一项所述的结合成员，其特征在于，其包含 HCDRl,其中Kabat残基31是Ser、 Ala、 Gly、 Thr或Cys， Kabat残基32是 Tyr。
12. 如以上权利要求中任一项所述的结合成员，其特征在于，其包含 HCDR2 ，其中Kabat残基5 8是Tyr或Phe 。
13. 如以上权利要求中任一项所述的结合成员，其特征在于，其包含 HCDR3，其中Kabat残基96是疏水性残基，Kabat残基97是疏水性残基，Kabat 残基98是环状残基。
14. 如权利要求13所述的结合成员，其特征在于，Kabat残基96是Leu、 Ile、 Val、 Ala或Phe 。
15. 如权利要求13或14所述的结合成员，其特征在于，Kabat残基97是Ile、 Leu、 Val、 Ala或Phe。
16. 如权利要求13-15中任一项所述的结合成员，其特征在于，Kabat残 基98是His、 Trp或Phe。
17. 如以上权利要求中任一项所述的结合成员，其特征在于，其包含 LCDR1 ，其中Kabat残基31是Tyr或Phe ， Kabat残基32是Tyr或Phe 。
18. 如以上权利要求中任一项所述的结合成员，其特征在于，其包含 LCDR3，其中Kabat残基91是Tyr， Kabat残基93是Pro、羟脯氨酸、His或 3-甲基组氨酸。
19. 一种分离的人IL-17A的结合成员，其包含一组CDR: HCDR1、 HCDR2、 HCDR3、 LCDR1、 LCDR2和LCDR3，其中：HCDR1的Kabat残基31是Ser、 Ala、 Gly、 Thr或Cys;HCDR1的Kabat残基32是Tyr;HCDR2的Kabat残基58是Tyr或Phe;HCDR3的Kabat残基96是疏水性残基；HCDR3的Kabat残基97是疏水性残基；HCDR3的Kabat残基98是环状残基；LCDR1的Kabat残基31是Tyr或Phe;LCDR1的Kabat残基32是Tyr或Phe;LCDR3的Kabat残基91是Tyr;禾卩LCDR3的Kabat残基93是Pro、羟脯氨酸、His或3-甲基组氨酸。
20. 如以上权利要求中任一项所述的结合成员，其特征在于，其包含 HCDR3 ，其中Kabat残基98是His 。
21. 如以上权利要求中任一项所述的结合成员，其特征在于，其包含 LCDR3，其中Kabat残基93是Pro。
22. 如以上权利要求中任一项所述的结合成员，其包含一组CDR: HCDR1、 HCDR2、 HCDR3、 LCDR1、 LCDR2和LCDR3，其中：HCDR1的Kabat残基31是Ser; HCDR1的Kabat残基32是Tyr; HCDR2的Kabat残基58是Tyr;HCDR3的Kabat残基96是Leu; HCDR3的Kabat残基97是lie; HCDR3的Kabat残基98是His; LCDR1的Kabat残基31是Tyr; LCDR1的Kabat残基32是Tyr; LCDR3的Kabat残基91是Tyr;禾口 LCDR3的Kabat残基93是Pro。
23 如权利要求l-22中任一项所述的结合成员，其包含HCDR3序列，其 中HCDR3是SEQ ID NO:65。
24. 如权利要求1-23中任一项所述的结合成员，其包含LCDR3序列，其 中LCDR3是SEQ ID NO:70。
25. 如权利要求8-24中任一项所述的结合成员，其特征在于， HCDR1是SEQ ID NO: 63;HCDR2是SEQ ID NO: 64; LCDR1是SEQ ID NO: 68;禾口 LCDR2是SEQ ID NO: 69。
26. 如权利要求10-22中任一项所述的结合成员，其特征在于， HCDR1是SEQ ID NO: 63;HCDR2是SEQ ID NO: 64; HCDR3是SEQ ID NO: 65; LCDR1是SEQ ID NO: 68; LCDR2是SEQ ID NO: 69;禾口 LCDR3是SEQ ID NO: 70。
27. 如权利要求8所述的结合成员，其特征在于，所述结合成员包含一组 CDR:如表21所示抗体1-16中任何一个的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、 LCDR2禾卩LCDR3。
28. 如权利要求1-25中任一项所述的结合成员，其特征在于，在对lnM 人IL-17A起反应而释放IL-6的HT1080细胞试验中测定的所述结合成员的 IC50不超过1 nM。
29. 如权利要求l-25或28中任一项所述的结合成员，其特征在于，在对 125 pM人IL-17A和25 pM TNFa起反应而协同释放IL-6的HT1080细胞试验 中测定的所述结合成员的IC50不超过0.5 nM。
30. —种人IL-17A的分离的结合成员，其中从采用二价分析物数据模型 通过表面等离振子共振测定的速度常数之比kdl/kal计算的所述结合成员对人 IL-17A的Kd小于2.5 nM。
31. —种分离的人IL-17A的结合成员，其中在检测对l nM人IL-17A起 反应而释放IL-6的HT1080细胞试验中检测到所述结合成员的IC50不超过1 nM，其中所述IC50与在检测对1 nM短尾猴IL-17A起反应而释放IL-6的 HT1080细胞试验中检测到的IC50的差异不超过10倍。
32. 如权利要求l-5和8中任一项所述的结合成员，其特征在于，所述结 合成员包含HCDR3序列，其中HCDR3是SEQ ID NO: 15 。
33. 如权利要求l-5和8中任一项所述的结合成员，其特征在于，所述结 合成员包含LCDR3序列，其中LCDR3是SEQ ID NO:20。
34. 如以上权利要求中任一项所述的结合成员，其特征在于，所述结合成 员包含含有抗体VH结构域和VL结构域的抗体分子，其中所述抗体分子包含 一组CDR: HCDR1、 HCDR2、 HCDR3、 LCDR1、 LCDR2禾卩LCDR3，其中，所述VH结构域包含HCDR1 、HCDR2和HCDR3及重链框架区FR1 、FR2、 FR3禾口 FR4，所述VL结构域包含LCDR1、LCDR2和LCDR3及轻链框架区FR1、FR2、 FR3和FR4。
35. 如权利要求34所述的结合成员，其中： VH FR1中的Kabat残基28是Thr或Ser;VH FR1中的Kabat残基30是Ser或Thr;禾口/或 VL FR2中的Kabat残基49是Phe。
36. 如权利要求34或35所述的结合成员，其特征在于，所述结合成员包 含抗体恒定区。
37. 如权利要求36所述的结合成员，其特征在于，所述抗体分子是IgGl。
38. 如权利要求34或35所述的结合成员，其特征在于，所述抗体分子是
39. 如权利要求34-38中任一项所述的结合成员，其特征在于，所述重链 和/或轻链框架区包含人种系基因区段序列。
40. 如权利要求39所述的结合成员，其特征在于，重链FR1是SEQ ID NO: 189， FR2是SEQ ID NO: 190， FR3是SEQ ID NO: 191和FR4是SEQ ID NO: 192。
41. 如权利要求40所述的结合成员，其特征在于，所述抗体VH结构域 具有的氨基酸序列如SEQ ID NO:62所示。
42. 如权利要求39-41中任一项所述的结合成员，其特征在于，轻链FRl 是SEQ ID NO: 193 ， FR2是SEQ ID NO: 194， FR3是SEQ ID NO: 195和FR4 是SEQ ID NO: 196。
43. 如权利要求42所述的结合成员，其特征在于，所述抗体VL结构域具 有的氨基酸序列如SEQ IDNO:176所示。
44. 一种分离的抗体分子，其包含氨基酸序列如SEQ ID NO:62所示的VH 结构域和氨基酸序列如SEQ ID NO:176所示的VL结构域。
45. 如权利要求44所述的抗体分子。其特征在于，所述抗体分子是IgGl。
46. 如权利要求44所述的抗体分子。其特征在于，所述抗体分子是scFv。
47. 如权利要求34-44中任一项所述抗体分子的分离的VH结构域。
48. 如权利要求34-44中任一项所述抗体分子的分离的VL结构域。
49. 一种组合物，其包含如权利要求1-43中任一项所述结合成员或如权利 要求44-46中任一项所述抗体分子，及药学上可接受的赋形剂。
50. 用于在通过外科手术或疗法处理人或动物体的组合物，包含如权利要 求1-43中任一项所述结合成员或如权利要求44-46中任一项所述抗体分子。
51. 如权利要求50所述的组合物，该组合物用于治疗IL-17A相关疾病。
52. 如权利要求1-43中任一项所述结合成员或如权利要求44-46中任一项 所述抗体分子在制备治疗IL-17A相关疾病的药物中的应用。
53. —种治疗个体中IL-17A相关疾病的方法，该方法包括将如权利要求 1-43中任一项所述的结合成员或权利要求44-46中任一项所述的抗体分子给予 该个体。
54. 如权利要求51所述的组合物，如权利要求52所述的应用或如权利要 求53所述的方法，其特征在于，所述疾病是炎性疾病。
55. 如权利要求51所述的组合物，如权利要求52所述的应用或如权利要 求53所述的方法，其特征在于，所述疾病是类风湿性关节炎、骨关节炎、骨 丢失、气道超敏感性、脱髓鞘疾病、银屑病、真皮超敏感性、急性移植物排异、 同种异体移植物排异、移植物抗宿主病、全身性硬化症、全身性红斑狼疮、自 身免疫炎性肠病、泌尿炎性疾病、心血管疾病、血管炎、周期热、葡萄糖代谢 疾病、肺病、癌症、牙周炎、疱疹性间质角膜炎、过敏、反应性关节炎、炎性 痛、强直性脊柱炎、败血病、脓毒性休克和内毒素性休克、脑膜炎、外科手术 外伤、自身免疫性血液学疾病、阿尔茨海默病、结节病、肝硬化、肝炎、肾小 球肾炎或血脂障碍。
56. 如权利要求55所述的组合物、应用或方法，其特征在于，所述疾病 是类风湿性关节炎。
57. —种分离的核酸分子，其包含编码以下的核苷酸序列： 如权利要求1-43中任一项所述的结合成员； 如权利要求44-46中任一项所述的抗体分子； 如权利要求47所述的VH结构域；或如权利要求48所述的VL结构域。
58. —种用如权利要求57所述核酸体外转化的宿主细胞。
59. —种产生结合成员、抗体分子或抗体分子的分离的VH或VL结构域 的方法，该方法包括在产生所述结合成员、抗体分子或抗体VH或VL结构域 的条件下培养如权利要求58所述的宿主细胞。
60. 如权利要求59所述的方法，其特征在于，还包括分离和/或纯化所述 结合成员、抗体分子、VH结构域或VL结构域。
61. —种产生包含结合成员、抗体分子或VH或VL结构域的组合物的方 法，该方法包括：通过如权利要求59或60所述的方法产生结合成员、抗体分子或VH或 VL结构域；禾口将所述结合成员、抗体分子或VH或VL结构域配制成包含至少一种其它组分的组合物。
62. —种产生人IL-17A的抗体抗原-结合结构域的方法，该方法包括： 通过在包含HCDR1、 HCPR2和HCDR3的亲代VH结构域的氨基酸序列中加入、删除、取代或插入一个或多个氨基酸，而提供作为亲代VH结构域氨 基酸序列变体的VH结构域，所述亲代VH结构域HCDR1、 HCDR2和HCDR3 是如表21所示的一组HCDR，和任选将如此提供的VH结构域与一个或多个 VL结构域组合以提供一个或多个VH/VL组合；和测试作为亲代VH结构域的氨基酸序列变体的所述VH结构域或VH/VL 组合以鉴定人IL-17A的抗体抗原结合结构域。
63. 如权利要求62所述的方法，其特征在于，所述亲代VH结构域具有 的VH结构域氨基酸序列如SEQ ID NO:62所示。
64. 如权利要求62或63所述的方法，其特征在于，通过在包含LCDR1、 LCDR2和LCDR3的亲代VL结构域的氨基酸序列中加入、删除、取代或插入 一个或多个氨基酸来提供所述一个或多个VL结构域，所述亲代VL结构域 LCDR1、 LCDR2和LCDR3是如表21所示的VL组CDR，从而产生一个或多 个VL结构域，其中每个结构域是所述亲代VL结构域的氨基酸序列变体。
65. 如权利要求64所述的方法，其特征在于，所述亲代VL结构域具有的 VL结构域氨基酸序列如SEQ ID NO: 176所示。
66. 如权利要求62-65中任一项所述的方法，其特征在于，作为亲代VH 结构域的氨基酸序列变体的所述VH结构域通过CDR诱变提供。
67. 如权利要求62-66中任一项所述的方法，其特征在于，还包括产生作 为IgG、 scFv或Fab抗体分子的组分的抗体抗原-结合结构域。
68. —种产生结合人IL-17A的结合成员的方法，该方法包括： 提供编码VH结构域的起始核酸或各自编码VH结构域的核酸的起始库，其中一个或多个VH结构域包含待替换的HCDR1、 HCDR2禾B/或HCDR3或缺 乏HCDR1 、 HCDR2和/或HCDR3编码区；将所述起始核酸或起始库与编码表21所示HCDR1 、HCDR2和/或HCDR3 的氨基酸序列或通过突变产生的一种或多种供体核酸组合，从而将一种或多种 所述供体核酸插入起始核酸或起始库的CDR1、 CDR2和/或CDR3区域，进而提供编码VH结构域的核酸产物库；表达所述产物库的核酸以产生产物VH结构域；任选地，将所述产物VH结构域和一个或多个VL结构域组合；选择人IL-17A的结合成员，该结合成员包含产物VH结构域和任选的VL结构域；和回收所述结合成员或其编码核酸。
69. 如权利要求68所述的方法，其特征在于，通过突变所述HCDR1和/ 或HCDR2产生供体核酸。
70. 如权利要求68所述的方法，其特征在于，通过突变HCDR3产生所述 供体核酸。
71. 如权利要求68所述的方法，其特征在于，包括通过核酸的随机突变 提供供体核酸。
72. 如权利要求68-71中任一项所述的方法，其特征在于，还包括将包含 在回收的结合成员内的产物VH结构域与抗体恒定区相连。
73. 如权利要求68-71中任一项所述的方法，其特征在于，包括提供包含 产物VH结构域和VL结构域的IgG、 scFv或Fab抗体分子。
74. 如权利要求62-73中任一项所述的方法，其特征在于，还包括测试结 合人IL-17A的抗体抗原-结合结构域或结合成员中和人IL-17A的能力。
75. 如权利要求74所述的方法，其特征在于，获得包含结合并中和IL-17A 的抗体分子的结合成员。
76. 如权利要求75所述的方法，其特征在于，所述抗体分子是scFv。
77. 如权利要求75所述的方法，其特征在于，所述抗体分子是IgG。
78. —种产生抗体分子组合物的方法，该方法包括采用权利要求62-77中 任一项所述方法获得抗体分子，和将该抗体分子配制成含有至少一种其它组分 的组合物。
人IL-17的抗体分子
本发明涉及白介素17(IL-17，也称为IL-17A)的结合成员，特别是抗体分 子，和它们的治疗性应用，例如治疗IL-17相关疾病，如类风湿性关节炎。
IL-17A是T-细胞衍生的细胞因子，其具有多效促炎活性。在体外，IL-17A 调节成纤维细胞和滑膜细胞产生炎性介质，与其它促炎细胞因子协同作用并能 促进软骨降解和破骨性骨再吸收。
IL-17A是由155个氨基酸的两条链构成的同二聚体。各多肽链含有23氨 基酸N-末端肽，将其切割产生132个残基的成熟多肽。IL-17A结合IL-17受 体A和C，通过激活二者施加其作用(Toy等，2006)。 IL-17A存在5种同源物， 称为IL-17B到IL-17F，它们均具有截然不同的生物学作用。IL-17同源物的 Swissport登录号是：IL-17B Q9UHF5; IL-17C Q96P0M4; IL-17D Q8TAD2; IL-17EQ9H293; IL-17F Q96PD4。 IL-17B禾口 IL-17C的组织表达广泛，该蛋白 质的细胞来源不明，虽然发现IL-17B转录物在神经系统中的水平高(Moore等， 2002)。 IL-17B和IL-17C可诱导单核细胞系THP-1的TNFa(Li等，2000)，将 其注射入小鼠模型时诱导嗜中性白细胞增多(Shi等，2000)。 IL-17D在多种组 织中检测到IL-17D，其在休眠CD4+T细胞和CD19+B细胞中表达(Starnes等， 2002)。 IL-17E (IL-25)引发Th2型应答，例如气道高反应性和嗜酸性粒细胞增 多，其特性不同于其它家族成员(Fort等，2001)。 IL-17F存在两种同种型，其 与IL-17A显示最高同源性(55和40%同源性)并具有许多相似的功能特性，例 如在肺中诱导嗜中性白细胞增多和诱导促炎细胞因子，包括IL-8(Hymowitz等， 2001; Hurst等，2002; Oda等，2005)。 IL-17家族成员在先天和继承免疫中可 能有作用，因为只靶向IL-17A的抗体能确保抑制表达IL-17A的区域中IL-17A 信号传导的特定作用。
家族成员和IL-17受体家族之间的结合未完全理解。已知IL-17E能通过 IL-17RB传导信号，虽然也有报道说IL-17B以较低亲和力结合(Lee等，2001)。 除IL-17RA外，有报道说IL-17A结合IL-17RC(IL-17RL)，类似地，IL-17F也与这些受体结合(Toy等，2006; Kuestner等，2005)。还存在其它受体，IL-17RD 和IL-17RE，虽然它们的内源性配体尚未鉴定到。IL-17RC和IL-17RD存在多 种剪接变体(Haudenschild等，2002; Haudenschild等，2006; Moseley等，2003)。
IL-17A与其受体的结合可能诱导受体寡聚，从而导致其激活。IL-17A激 活IL-17RA激活了许多促炎信号途径，例如胞外信号调节蛋白激斷ERK1/2)、 c-junN-末端激酶（JNK)和p38MAP激酶途径。激活这些途径通过尚未完全明 确的机制触发促炎基因和蛋白质的表达水平范围改变。
IL-17A主要由CD4+禾卩CD8+T细胞分泌(Lubberts等，2001)。在嗜中性白 细胞、嗜酸性粒细胞和人血单核细胞中也检测到IL-17A，无论其RNA或胞内 蛋白（Molet等，2001; Ferretti等，2003)。最近(发现)，IL-6和TGFp涉及幼 稚T细胞分化成产生IL-17的T细胞(Betteli等，2006)，虽然其它两种细胞因 子涉及类风湿性关节炎，而正-15和IL-23调节T淋巴细胞释放IL-17A。
IL-17A上调滑膜成纤维细胞产生炎性细胞因子和前列腺素，促进滑膜成 纤维细胞和关节软骨细胞产生MMP，其在破骨性骨再吸收中可能有作用。就 类风湿性关节炎(RA)组织中的炎性环境而言，IL-17A可能具有与其它促炎细 胞因子，特别是TNF-a和IL-ip协同的特定作用。
几种证据提示IL-17在类风湿性关节炎(RA)的发病机理中有重要作用。与 2/12 OA外植体和0/3正常滑膜外植体相比，功能性IL-17A由16/18 RA滑膜 外植体自发分泌。RA滑膜的免疫染色揭示产生IL-17的细胞在富含T细胞的 区域(Chabaud等，1999)。与正常对照血清相比，RA患者血清中IL-17A的水 平升高(Cho等，2004)。
IL-17A显示能刺激一系列促炎细胞因子的释放。IL-17A有时与其它细胞 因子协同作用，增强滑膜成纤维细胞产生IL-1、 IL-6和LIF(Katz等，2001; Chabaud等，1998)。此外，IL-17A显示能上调炎性细胞中的COX-2表达。
IL-17A诱导人软骨细胞、滑膜成纤维细胞和巨噬细胞及人滑膜外植体中 的COX-2基因表达（例如，Faour等，2003; Le Grand等，2001)。重组IL-17A 上调滑膜细胞COX-2表达并增强TNFa-刺激的滑膜细胞COX-2表达（Stamp 等，2004)。
除了这些"经典的"促炎活性外，IL-17A还在RA关节中引发其它效应，例如促进软骨降解。IL-17还显示参与MMP上调并影响软骨降解。IL-17A能增 加人RA滑膜细胞自发产生MMP1。 IL-17A共同上调牛关节软骨细胞中的 MMP3、 MMP13和ADAMTS4基因(Sylvester等，2004)。 IL-17A在关节软骨 外植体中是强效基质分解诱导物和基质合成抑制剂(Cai等，2001)。 IL-17A抑 制关节软骨细胞合成基质的一种机制是通过增强NO产生(Lubberts等，2000)。 将腺病毒IL-17A注射入II型胶原免疫小鼠的膝关节中加速并恶化滑膜炎症， 促进该位点的关节破坏(Lubberts等，2001)。 IL-17A还可参与RA中的破骨性 骨再吸收(Kotake等，1999)。
IL-17A生物学特性的重要方面是其与其它细胞因子协同作用的能力。例 如，IL-17A增强滑膜成纤维细胞中TNF-a-诱导的IL-1 、 IL-6和IL-8合成（Katz 等，2001)。此外，在成骨细胞系中，MC-3T3、 IL-17和TNF-a显示强效的介 导IL-6分泌的协同作用（Ruddy等，2004)。 IL-17A增强IL-l卩-诱导滑膜细胞 产生IL-6和LIF (Chabaud等，1998)。
疾病动物模型的体内证据进一步支持IL-17A在RA中的作用。IL-17A的 过度表达在IL-1缺陷型小鼠的链球菌细胞壁(SCW)-诱导关节炎中诱导软骨损 伤(Koenders等，2005b)。在胶原诱导的关节炎(CIA)模型中，IL-17A的过度表 达促进关节炎(Chabaud和Miossec， 2001)。此外，IL-17A缺陷型小鼠或用抗 IL-7 mAb治疗的小鼠中CIA受抑制(Nakae等，2003; Lubberts等，2001; Lubberts 等，2004)。
除了其在RA中的作用，IL-17A活性与许多其它病理学情形有关，包括：
-骨关节炎(例如，Honorati等，2002; Malemud等，2004);
-骨丢失(Lubberts等，2003)和骨植入物疏松（VanBezooijen等，1999);
-气道超敏感性，包括过敏性气道疾病，例如哮喘（Molet等，2001; Wong 等，2001; Linden, 2006)和ARDS;
-脱髓鞘疾病，包括多发性硬化症（Lock等，2002; Touil等，2006);
-银屑病（Teunissen等，1998)和银屑病关节炎；
-真皮超敏感性，包括特应性皮炎（Toda等，2003);
-急性移植物排异（Antonysamy等，1999; Yoshida等，2006; Tang等， 2001);-同种异体移植物排异（Hsieh等，2001); -移植物抗宿主病；
-全身性硬化症（Kurasawa等，2000); -全身性红斑狼疮（Wong等，2000);
-自身免疫炎性肠病，包括溃疡性结肠炎（Nielsen等，2003; Fujino等， 2003; Yen等，2006)和克罗恩病；
-泌尿外科炎性疾病，包括良性前列腺增生（Kramer和Marberger， 2006);
-心血管疾病，包括动脉粥样硬化（Csiszar和Ungvari，2004)，川崎病（Sohn 等，2003)，缺血性心脏病（Csiszar, 2003)和中风；
-血管炎，包括贝切特病（Hamzaoui等，2002);
-周期热，包括家族性地中海热（Haznedaroglu等，2005);
-葡萄糖代谢，包括1型和2型糖尿病（Fisman， 2003);
-肺病，包括慢性阻塞性肺病（Shen等，2004a; Shen等，2004b)，支气管 炎、肺气肿、梗阻性细支气管炎（Vanaudenaerde等，2003)和肺纤维化；
-癌症，包括淋巴瘤（Maggio等，2002)和肿瘤（Numasaki等，2005);
-牙周病(peridontitis) (Vernal等，2005; Takahashi， 2005);
-病毒感染导致的疾病，包括疱疹性间质角膜炎(herpetic stromal keratitis) (Maertzdorf等，2002);
-其它iL-n介导的炎性疾病，包括例如，过敏反应、反应性关节炎、炎性
痛、脊椎关节病，包括强直性脊柱炎，皮肤和角膜的炎性疾病，炎性肌肉疾病；
-其它iL-n介导的急性炎性反应，例如包括败血病、脓毒性休克和内毒素
性休克、脑膜炎和外伤(外科手术)在内的感染；
-其它iL-n介导的自身免疫疾病，包括例如，自身免疫性血液学疾病，阿
尔茨海默病、结节病、肝硬化、胆囊和肝脏疾病，包括肝炎、肾小球肾炎； -其它IL-17介导的代谢失调，包括血脂障碍(dislipidemia)。 在许多关节炎模型中，体内阻断IL-17A抑制炎症、关节破坏和疾病进展。 在鼠科CIA中，利用IL-17R Fc融合蛋白证明能在宏观水平抑制关节损伤 (Lubberts等，2001)，大鼠佐剂诱导关节炎(AIA)模型中关节炎的组织学分析也 证明这点(Bush等，2002)。在关节炎的感染性模型中，利用针对IL-17(大鼠抗-小鼠)和IL-nR(大鼠抗-小鼠)的商品化中和抗体证明能抑制肿胀和关节炎发作 (Burchill等，2003)。家兔抗-小鼠单克隆抗体已用于关节炎的鼠科模型，证明 关节损伤和软骨破坏的严重程度降低和包括RANKL、 IL-lp和IL-6在内的促 炎介质水平降低(Lubberts等，2004; Koenders等，2005a)。
中和IL-17证明在一系列疾病的其它动物模型中有功能作用。IL-17R Fc 融合蛋白在小鼠同种异体移植模型中延长了存活期(Antonysamy等，1999)。在 三硝基苯磺酸(TNBS)诱导结肠炎的小鼠模型中，IL-17RIgG融合蛋白还减弱了 结肠炎症(Zhang等，2006)。商品化单克隆抗-IL-17通过降低卵清蛋白 (Ova-challenge)后的支气管嗜中性白细胞而证明在小鼠模型中有作用(Hellings 等，2003)。在外科手术粘连(surgical adhesion)的大鼠模型中，家兔多克隆IL-17 中和抗体还以剂量依赖性方式降低粘连发生(adhesiogenesis) (Chung等，2002)。
针对IL-17A的抗体已见描述。例如，RD系统公司(R&D Systems)已生产 了鼠科抗-IL-17单克隆抗体MAB317。从纯化的重组人IL-17(大肠杆菌衍生的) 免疫小鼠引发的小鼠杂交瘤开发该IgG2B抗体。此外，现已开发了具有中和特 性的另一鼠科抗-IL-17抗体53.159.16 (生物资源公司(Biosource Inc.))。从纯化 的重组人IL-17免疫小鼠(Balb/c)引发的小鼠杂交瘤开发该IgGlK抗体。该抗 体识别天然和重组IL-17。
WO2006/054059 (UCB细胞技术公司(UCB CellTech))描述了 IL-17A的中 和抗体分子。描述了最初从杂交瘤分离的抗-IL-17抗体某种种系形式衍生的 PEG化抗体片段。该文献声称采用BIAcore可测定该抗体片段对IL-17的亲和 力为133-365 pM。
WO2006/013107 (诺华制药股份有限公司(Novartis Pharma GmbH))描述了 IL-17A的结合成员，特别是称为AIN457，从杂交瘤分离的人抗-IL-17 IgGl抗 体。WO2006/013107报道了重组AIN457与人的（0.227 nM)、绒猴的（1.2 nM)、 弥猴的（9 nM)和短尾猴（6 nM)的IL-17之间相互作用的BIAcore亲和力检测 值（Kd)，表明对人和短尾猴IL-17的亲和力分别相差约25倍。
本文描述了 IL-17A的结合成员，也称为IL-17A-结合成员。本发明的结合 成员可以是IL-17A的抗体分子，特别是人抗体分子。
这些结合成员可用于治疗IL-17A相关疾病，例如一种或多种本文它处所
15称的IL-17-相关疾病，如类风湿性关节炎。
本文描述了结合在成熟的人IL-17A的71-87位区域内的结合成员。71-87 位的序歹!j为：Cys-Arg-His陽Leu-Gly陽Cys-Ile-Asn-Ala-Asp-Gly-Asn-Val-Asp-Tyr隱His-Met (SEQ ID NO: 199)。
本发明的结合成员可以结合Cys-Arg-His-Leu-Gly-Cys-Ile-Asn-Ala-Asp-Gly-Asn-Val-Asp-Tyr-His-Met (SEQ ID NO: 199)中至少一个残基。例如，其可 结合SEQIDNO: 199中1、 2、 3、 4、 5或5个以上的残基。
本发明的结合成员可结合成熟的人IL-17A (SEQ ID NO:198)的残基 Leu74、 Tyr85、 His86和/或Met 87。例如，其可结合Leu74、 Tyr85禾口/或His86。 结合成员可结合所有这些残基。可通过，例如检测或观察结合成员和IL-17A 残基之间的特异性相互作用(例如在结合成员:IL-17A复合物的结构中)测定结 合情况，可采用诸如X-射线晶体学进行测定。采用X-射线晶体学测定与人 IL-17A结合的抗体7的结构表明抗体7结合成熟序列(SEQ ID NO: 198)的残基 74 (Leu)、 85 (Tyr)、 86 (His)和87 (Met)。
除结合SEQ ID NO:199内的一个或多个残基外，结合成员可任选结合 IL-17A分子中的侧接残基或在结构上毗邻的残基。例如，结合成员可结合 Asn88。
本发明的结合成员可结合成熟的人IL-17A(SEQIDNO:198)中的一个或多 个以下残基，例如5个或更多个，例如10个或更多个，例如全部： Ser40 Ser41 Asp42 Tyr43 Arg46 Leu74 Tyr85 His86 Met87 Asn88Pro126諸7。
本发明的结合成员可结合成熟的人IL-17A的残基Ser40、 Ser41、 Asp42、 Tyr43和/或Arg46。
本发明的结合成员可结合成熟的人IL-17A的残基Tyr85、 His86、 Met87 禾口/或Asn88。
结合成员可结合成熟的人IL-17A的Pro126禾tl/或Ilel27。
如本文它处所述，IL-17A形成有两条多肽链的二聚体。本发明的结合成 员或VH结构域可结合二聚体中任一条成熟的IL-17A多肽。
例如，结合成员可以结合二聚体中一条IL-17A多肽的Tyr85、His86、Met87 和/或Asn88，和/或可结合同一多肽的Prol26和/或Ile127，和/或可结合二聚体 中另一IL-17A多肽的Ser40、 Ser41、 Asp42、 Tyr43禾口/或Arg46。
可采用任何合适的方法，例如氢-氘互换、定点诱变、质谱法、NMR和 X-射线晶体学测定结合成员所结合的残基序列。
本领域技术人员熟知采用X-射线晶体学以原子分辨率测定蛋白质的精确 三维结构，还可采用X-射线晶体学详细目测蛋白质中与抗体相互作用的部分 (Padavattan等，2007; Karpusas等，2001)。 一旦获得与靶抗原形成复合物的结 合成员的晶体，可用X-射线照射它们以获得取决于确切原子分布的衍射图形。 可利用检晶仪(ciystallographer)分析衍射图形以测定结构中每个原子的三维位 置坐标。从而能详细检测结合成员和IL-17A之间的相互作用位点。
因此，可以通过观察与IL-17A结合的结合成员的X-射线晶体结构中结合 成员和IL-17A残基之间的相互作用来测定与结合成员结合的IL-17A残基。例 如，结合可包括氢键和/或非极性(疏水性)相互作用。可采用3.2入的截断距离 来测定氢键，利用4.0A的截断距离来测定非极性相互作用。所结合残基的X-射线晶体结构测定和鉴定的例子示于本文的实施例7.4。
肽酰胺氢互换是用于研究蛋白质的熟知方法(Englander等，1994)。最近， 进一步开发了利用氘标记可作质子互换的蛋白质，将该方法与质谱法联用以检 测整个蛋白质的互换速度(Pantazatos等，2004)。可利用与溶剂的可接近性明显 改变氢/氘互换(H/D互换)速度，因而当蛋白质的某部分参与结合另一分子时，互换速度会明显降低。该方法已用于绘制蛋白质中涉及与抗体相互作用的区域 的图谱(Lu等，2005)，并用于研究IL-17A中涉及与本发明抗体结合的区域， 如本文实施例7.1所述。联用质谱法和H/DA互换以鉴定IL-17A中接触结合成 员的区域。例如，可以证明当IL-17A与本发明的接触成员结合时，SEQ ID NO:199内残基的H/D互换明显减缓。
本领域技术人员熟知为将结构与活性相联系而诱变蛋白质的单个氨基酸 和多个区域，该方法用于确定蛋白质中与抗体结合的区域(Lu等，2005)。采用 这些技术结合本发明结合成员的例子见实施例7.2。
可釆用与具有SEQ IDNO:201所示氨基酸序列的突变型人IL-17A结合和 /或与其中和来评估结合成员是否在成熟的人IL-17A中71-87位的区域内结合。 与野生型相比，突变型IL-17A不存在结合或中和作用，或者结合或中和作用 显著降低，表明结合成员与SEQIDNO:199的至少一个残基结合。
本发明的结合成员可任选不与具有SEQ ID NO:201所示氨基酸序列的突 变型人IL-17A结合和/或与其中和。例如，本发明的结合成员可不抑制突变型 人IL-17A (SEQ ID NO:201)与其受体结合。可通过各种试验测定IL-17A的中 和作用，本文它处描述了所述试验的例子。
本发明的结合成员可不抑制HT1080细胞中突变型人IL-17A(SEQ ID NO: 201)诱导的IL-6释放。在利用浓度为2 nM的突变型IL-17A (SEQ ID NO: 201) 的HT1080细胞IL-6释放试验中，本发明的结合成员可不显示明显的中和效力， 例如结合成员成员的浓度为最高50 nM之时。
在HT1080细胞的IL-6释放试验中，利用1 nM突变型人IL-17A(SEQ ID NO: 201)的试验中本发明结合成员的IC50比利用1 nM或2 nM成熟的人 IL-17A(SEQ ID NO: 198)的试验中高10倍、高20倍、高50倍或者高100倍。 实例数据示于实施例7.3(表20b)，显示抗体7对突变型IL-17A的效力远低于 (IC50较高)对成熟的人IL-17A。应该注意，在用突变型IL-17A的试验中未能 测定抗体7的IC50值，因此表明任何IC50值高于该试验可检测到的。
如本文它处所述，可采用表面等离振子共振，例如BIAcore测定结合成员 与IL-7的结合。例如，本发明的结合成员可显示与具有SEQ ID NO:201所示 氨基酸序列的突变型人IL-17A不明显结合，例如在表面等离振子共振试验中小于约IORU。
可根据二价分析物模型(同时ka kd)拟合表面等离振子共振数据并从速度 常数之比kdl/kal计算的亲和力常数Kd。本发明结合成员对结合成熟的人 IL-17A(SEQ ID NO: 198)的亲和力比结合突变型人IL-17A(SEQ ID NO:201)的结 合亲和力高5倍，例如高10倍或高50倍。
还可采用诸如X-射线晶体学等技术鉴定结合成员所结合的IL-17A残基， 可采用这些技术证实和/或优化其它技术的结果，例如鉴定与结合成员接触的残 基。本领域技术人员熟知采用蛋白质的X-射线晶体学测定二级、三级和四级 结构，已将该技术用于绘制蛋白质中与抗体相互作用的部分的图谱(Padavattan 等，2007; Karpusas等，2001)。包含SEQ ID NO:199所示氦基酸序列的分离 的多肽或肽，或由SEQ ID NO:199所示氨基酸序列构成的分离的肽可用于产 生、分离和/或测试本发明的其它IL-17A结合成员。
因此，本发明的其它方面涉及成熟的人IL-17A序列(SEQIDNO:198)的分 离片段，这些片段包含SEQIDNO:199所示氨基酸序列或由其构成。例如，这 些片段最多可以长达20、 25、 30、 50或100个氨基酸。更长的肽或多肽序列 中可以包含一个或多个片段，所述肽或多肽序列不是IL-17A氨基酸序列，例 如不是前体或成熟的IL-17A，例如不是SEQIDNO:198。包含IL-17A氨基酸 序列的分离片段或多个片段的肽或多肽可以包含其它氨基酸残基，其中所述其 它残基不与IL-17A氨基酸序列毗连。例如，SEQ ID NO:199之后或之前可以 是不与SEQIDNO:198毗连的一个或多个残基。这种多肽或肽的结合成员，例 如抗体分子属于本发明。
体内的内源性IL-17A经糖基化，因此，糖基化的人IL-17A是人治疗的治 疗性靶抗原。虽然细菌衍生(例如，在大肠杆菌中表达)且未经糖基化的重组人 IL-17A可以用于本文所述试验，但我们还证明本发明的结合成员可结合糖基化 的人IL-17A，例如人T细胞或人胚肾(HEK)EBNA细胞产生的IL-17A。这体 现了本发明结合成员的明显优点，因为糖基化的人IL-17A是体内人用的耙抗 原。本发明结合成员对糖基化和非糖基化IL-17A的亲和力和/或效力可大致相 同。
实施例中更详细地描述到本发明的结合成员能高效中和IL-17A。中和表
19示抑制IL-17A的生物学活性。本发明的结合成员可以中和IL-17A的一种或多 种生物学活性。抑制的生物学活性通常是IL-17A与其一种或多种其结合伴侣 或受体的结合，例如与IL-17RA的结合。
可通过生物学试验中生物学分子，例如MMP13、 PGE2或细胞因子，如 IL-6或IL-8的细胞释放情况来检测IL-17与一受体结合的中和作用，因为 IL-17A与其受体结合诱导这些分子的细胞释放，从而可采用合适的试验，例如 在HT1080细胞(ECACC号85111505)、软骨细胞或其它合适类型的细胞或组 织中测定。
可以部分或完全抑制生物学活性。在具体实施方式中，与没有结合成员存 在下的活性相比，提供的结合成员能将正-17生物学活性抑制至少95%、至少 卯％、至少85%、至少80%、至少75%、至少70%、至少60%或至少50%。 结合成员中和IL-17A的程度称为其中和效力。可采用本领域技术人员已知或 本文所述或述及的一种或多种试验测定或检测效力。例如，可在以下试验中检 验效力：
-HTRF® (均质时间-分辨荧光)受体-配体结合试验
-11丁10^表位竞争试验
-HT1080IL-6释放试验
-利用对IL-17和TNFa起反应的协同IL-6释放的HT1080细胞试验 -软骨细胞IL-6/IL-8/MMP13/PGE2-释放试验 -软骨外植体中的11^6试验
-滑膜成纤维细胞(例如，RA或0A患者的)中的IL-6释放试验，例如，利 用针对IL-17和TNFa的协同IL-6反应。
试验方法描述于实施例。
可将在利用第一物种(例如，人)的IL-17的试验中计算的结合成员的中和 效力与该结合成员在利用第二物种(例如，短尾猴)的IL-17的相同试验中的中 和效力作比较，从而评估该结合成员与两种物种的IL-17的交叉反应程度。
本发明的结合成员结合人IL-17A和短尾猴IL-17A，其中和人和短尾猴 IL-17A的效力差异小于30倍，例如小于25、 20、 15、 10、 5或2倍，例如在 HT1080 IL-6释放试验中测定的。例如，在本文所述HT1080 IL-6释放试验中，本文的数据表明1-4号和7-16 号抗体中和人和短尾猴IL-17A的效力差异分别小于20倍。数据示于实施例2。 因此，在一些实施方式中，本发明结合成员对人和短尾猴IL-17A的中和效力 在20-倍以内。在一些实施方式中，对人和短尾猴IL-17A的中和效力大致相同 或等效，即在10-倍以内。
除非另有表述，效力通常表示为以nM计的IC5o值。在功能试验中，IC5() 是将生物学反应从其最高值降低50%的结合成员浓度。可通过绘制最高生物学 反应％与log(结合成员浓度)的函数图，利用诸如图垫公司(GraphPad)的Prism 或起源实验室(Origin Labs)的Origin等软件程序来计算IQ。，从而能根据数据 拟合S形函数以产生IQo值。
在本文所述的人IL-17A HTRF⑧试验中，本发明的结合成员的中和效力或 ICso最高为15 nM。可采用该试验测定scFV形式的结合成员的IQ。。例如，IC5() 最高可以是10.0、 5.0、 4.0、 3.0、 2.0或l.OnM。示例性ICso数据见实施例2(参 见表5)。 HTRF㊣受体-配体结合试验中所用的人IL-17A的终浓度为0.75 nM， 详细方法见实施例。
在人IL-17 HT1080IL-6释放试验中，本发明的结合成员的中和效力或IC50 最高为40 nM。例如，IC5o最高可以是35、 25、 20、 15、 10或5 nM。在人IL-17 HT1080 IL-6释放试验中，本发明的结合成员的中和效力或IC5o最高为3.0、 2.0 或1.0 nM。示例性IQo数据见实施例2(参见表6A)。该试验检测对1 nM人 IL-17A起反应的IL-6释放，详细方法见实施例。
在人IL-17HT1080IL-6释放试验中，本发明的结合成员的pA2值约为10 或小于10。 ^A2分析的方法描述于实施例章节。示例性数据见实施例3(参见表 8a)。
在检测对125 pM人IL-17A和25 pM TOFa起反应的IL-6协同释放的 HT1080细胞试验中，本发明的结合成员的中和效力或IC5。不超过lnM。在该 试验中，本发明的结合成员的中和效力或IC5o不超过l、 0.5或0.3 nM。示例 性IC5o数据见实施例2(参见表6b)。
在人T细胞的糖基化IL-17A刺激的HT1080细胞中，本发明的结合成员 抑制IL-6释放的IC5o不超过lnM，例如不超过0.9、 0.8、 0.7、 0.6、 0.5、 0.4、0.3、 0.2、 0.1 nM。示例性1<:5()数据见实施例2(参见表6c)。这些数据表明本发 明的抗体可结合并中和天然人IL-17A。
优选结合高中和效力与良好的物种交叉反应性。因此，例如在IL-6释放 HT1080试验中，结合成员与人IL-17A的IC50不超过1 nM，其中所述IC50 在人IL-17A HT1080试验中和短尾猴IL-17A HT1080试验中的IC50相差小于 10倍。对人IL-17A的中和效力可高于对短尾猴IL-17A的中和效力。
在短尾猴IL-17 HT1080 IL-6释放试验中，本发明的结合成员(例如IgGl 形式)的中和效力或IC5o最高为150nM。例如，ICs。最高可以是150、 100、 50、 40、 30、 25、 20、 15、 10或5 nM。示例性ICso数据见实施例2(参见表6A)。 HT1080细胞的IL-6释放试验中所用的短尾猴IL-17A的终浓度为1 nM，详细 方法见实施例。
可采用本文所述的试验测定抑制人原代软骨细胞中IL-6、 IL-8、 MMP13 和/或PGE2释放的效力。这些试验中，本发明结合成员的示例性数据见实施例 4。在利用0.2福浓度的正-17的软骨细胞正-6释放试验中，本发明结合成员 的IC5o最高为3.0 nM，例如最高为2.0、 1.0、 0.9、 0.8、 0.7、 0.6、 0.5、 0.4、 0.3或0.2 nM。在利用2 nM浓度的IL-17的软骨细胞IL-6释放试验中，本发 明结合成员的IQo最高为20nM，例如最高为10、 5.0、 4.0、 3.0或2.0nM。
在利用0.2 nM浓度的IL-17的软骨细胞IL-8释放试验中，本发明结合成 员的IQo最高为3.0nM，例如最高为2.5、 2.3、 1.0、 0.5、 0.4、 0.3、 0.2或0.1 nM。在利用2nM浓度的IL-17的软骨细胞IL-8释放试验中，本发明结合成员 的ICs。最高为8nM，例如最高为5、 4、 3、 2、 1.8、 1.6、 1.5、 1.0或0.8nM。
在利用0.2 nM浓度的IL-17的软骨细胞MMP13释放试验中，本发明结合 成员的IC5。最高为5nM，例如最高为4、 3、 2、 1、 0.5 nM。在利用2nM浓度 的IL-17的软骨细胞MMP13释放试验中，本发明结合成员的ICM)最高为40 nM， 例如最高为30、 20、 10、 5nM。
在利用2 nM浓度的IL-17的软骨细胞PGE2释放试验中，本发明结合成 员的IC5。最高为6nM，例如最高为5、 4、 3、 2、 1、 0.5 nM。
在利用10 ng/ml浓度的IL-17A和1 ng/ml TNFa协同反应的死后软骨外植 体IL-6释放试验中，本发明结合成员可显示抑制活性，例如至少80%或90%
22抑制，或100%抑制。在利用10 ng/ml浓度的IL-17A和1 ng/ml TNFa协同反 应的死后软骨外植体IL-6释放试验中，本发明结合成员的IC5。值不超过5 nM， 例如不超过4、 3、 2、 1、 0.5 nM。示例性数据见实施例6.1 (表15a和15b)。
在本文所述的OA滑膜成纤维细胞的IL-17/TOFa协同试验中(例如，在利 用10 ng/ml或1 ng/ml IL-17与TNFa协同反应的IL-8释放试验中，其中最大 反应具有IL-17和TNFa组分)，本发明结合成员可显示抑制活性，例如至少50、 60或65%抑制。示例性数据见实施例6.2 (表16a和16b)。
在利用2 nM浓度的IL-17的滑膜成纤维细胞IL-8释放试验中，本发明结 合成员的IC5o值不超过5 nM，例如不超过4、 3或2 nM。示例性数据见实施 例6.3 (表17)。
在利用1 nM浓度的IL-17和0.1 ng/ml的TNFa的IL-17A加TNFa协同 RA滑膜成纤维细胞IL-8释放试验中，本发明结合成员的IC5。值不超过5 nM， 例如不超过4、 3或2nM。示例性数据见实施例6.3 (表17)。
在本文所述的预混合小鼠气囊(airpouch)试验中，本发明结合成员可将 IL-17A(预先与结合成员混合)诱导的IL-6释放抑制至少25%，例如至少30、35、 40、 45、 50、 55或60%。抑制可以是约100%。例如，该试验中结合成员的ID50 最髙为10，例如最高为5、 4、 3、 2、 l或0.5pg。在本文所述的小鼠预混合气 囊试验中，本发明结合成员还可将IL-17A诱导的白细胞通量抑制至少80%， 例如至少85、 90、 95、 98或99%。抑制可以是约100%。例如，该试验中结合 成员的IDso最高为5、 4、 3、 2或1吗。本发明结合成员(包括CDR的抗体2 和抗体7组)的示例性数据见实施例5(参见表13a和表14a)。
在本文所述的全身性给药小鼠气囊试验中，本发明结合成员可将IL-17A (全身性给予结合成员，然后将IL-17A给予气囊)诱导的IL-6释放抑制至少 70%,例如至少75、 80或85%。例如，该试验中结合成员的IDso最高为1昭， 例如最高为0.5、 0.4、 0.3、 0.2、 0.1或0.05吗。在本文所述的小鼠全身性给药 气囊试验中，本发明结合成员还可将IL-17A诱导的白细胞通量抑制至少70%， 例如至少75、 80、 85、 90或95%。抑制可以是约100%。例如，该试验中结合 成员的IDs。最高为2，例如最高为1.5、 1、 0.9、 0.8、 0.7或0.6jig。本发明结 合成员(包括CDR的抗体7组)的示例性数据见实施例5(参见表13b和表14b)。实施例5所述气囊试验获得的数据证明局部或全身性给药时，结合成员抑 制IL-17A诱导反应的能力。这些数据表明，给予本发明结合成员能有效治疗 炎症局部部位的IL-17A相关疾病，因此可通过抑制滑膜关节中的IL-17A诱导 反应而用于治疗诸如类风湿性关节炎等疾病。应该注意，全身性给予本发明结 合成员显示能有效抑制IL-17A的作用，有效抑制无需局部给药。这对于结合 成员的临床应用，例如用于人体中尤其有利，在该情形中可采用全身性给药， 而给药的部位常与表现出疾病的一个或多个部位不同，例如炎症的一个或多个 部位，如滑膜关节。
此外，可测定IL-17A结合成员对IL-17A的结合动力学和亲和力(表示为 平衡解离常数，Kd)，例如采用表面等离振子共振，如BIAcore，或者可通过 pA2分析估算Kd。
例如，从人IL-17 HT1080 IL-6释放试验的户八2分析计算出本发明结合成 员对IL-17A的Kd小于1000pM，例如小于600、 500、 400、 300或200pM。
如本文它处所述，表面等离振子共振包括使分析物在液相中流过与支持物 相连的配体，并测定分析物与配体之间的结合情况。例如，可使得IL-17A在 液相中流过与支持物相连的结合成员来实施等离振子共振。可根据二价分析物 数据模型或单价分析物数据模型拟合表面等离振子共振数据。如本文的实施例 章节所述，发现二价分析物数据模型尤其适于测定结合成员与IL-17的亲和力。 可采用二价分析物数据模型通过表面等离振子共振测定速度常数之比 kdl/kal，由该速度常数计算亲和力常数Kd。
采用表面等离振子共振计算的示例性IL-17结合KD估算值见实施例3(参 见表8b)。这些数据证明抗体7对在大肠杆菌或HEKEBNA细胞中表达产生的 重组人IL-17A的结合特性良好。能与HEK EBNA细胞的IL-17A结合证明该 抗体能与天然糖基化的人IL-17A结合。抗体7结合天然糖基化形式表明抗体 1-16均能结合天然糖基化的人IL-17A，假定这些抗体均衍生自一种亲代抗体 (抗体l)，因此，相信它们均能与IL-17A的相同或高度相似的表位结合。
本发明结合成员结合在人细胞中表达的人IL-17A(例如，HEKEBNA-衍生 的IL-17A)与结合在细菌细胞中表达的人IL-17A(例如，大肠杆菌衍生的IL-17A) 的亲和力的差异小于5倍，例如小于2.5倍或小于2倍。可采用二价分析物数据模型通过表面等离振子共振测定速度常数之比 kdl/kal，由该速度常数计算的本发明结合成员对人IL-17A的Kd约为或小于 2.5 nM。例如，釆用二价分析物数据模型通过表面等离振子共振测定速度常数 之比kdl/kal，由该速度常数计算的本发明结合成员对人IL-17A的Kd小于2.5 nM、 2nM、 1.5 nM、 1.0nM或0.5nM。
采用单价分析物数据模型通过表面等离振子共振测定本发明结合成员对
人IL-17A的亲和力约为或小于0.3 nM。例如，采用单价分析物数据模型通过 表面等离振子共振计算本发明结合成员对人IL-17A的Kd小于300 pM，例如 小于200pM。
釆用二价分析物数据模型通过表面等离振子共振测定速度常数之比 kdl/kal，由该速度常数计算的本发明结合成员对短尾猴IL-17A的Kd约为或 小于1.5nM。
采用单价或二价模型拟合数据，采用表面等离振子共振测定到本发明结合 成员对人和短尾猴IL-17A的亲和力差异小于10倍。因此，采用表面等离振子 共振测定到本发明结合成员结合短尾猴IL-17A的Kd与结合人IL-17A的差异 小于10倍，例如差异小于5倍或小于3倍。如本文它处所述，亲和力可以是 从速度常数之比kdl/kal计算的Kd，而所述速度常数采用二价分析物数据模型 通过表面等离振子共振测定。如实施例3和表8b所示，测定到抗体7结合人 和短尾猴IL-17A的交叉反应性良好。
可利用获得的抗体7的交叉反应性数据表示所有抗体1-16的交叉反应性， 假定所有这些抗体衍生自一种亲代抗体(抗体1)，因此相信它们均能与IL-17A 的相同或高度相似的表位结合。
本文报道的数据表明本发明结合成员不与IL-17同源物，即IL-17B、 IL-17C、 IL-17D、 IL-17E或IL-17F交叉反应。在一些情形中观察到与IL-17F 弱结合。例如，可通过检测IL-17同源物抑制IL-17A与本发明结合成员结合的 程度来测定交叉反应性，例如采用本文所述的HTRF⑧表位竞争试验。如本文 所述，在该试验中IL-17同源物B-E不明显抑制IL-17A与本发明结合成员结 合，从而证明这些结合成员不与IL-17同源物B-E交叉反应。
在利用IL-17F的表位竞争试验中，本发明结合成员显示与IL-17A结合受部分(即，小于100%)抑制，例如其中il-17F的浓度是1 mM或更高。例如，IL-17F 可抑制il-17a结合不超过50%，例如不超过约20%。
il-17b、 C、 d、 E或f无一能完全抑制结合成员与人il-17a结合。在表 位竞争试验中，lpM的IL-17B、 IL-17C、 IL-17D、 IL-17E或IL-17F (单独地) 均不能完全抑制本发明结合成员与人IL-17A结合。因此，在利用标记IL-17A 的表位竞争试验中，lpM的IL-17B、 IL-17C、 IL-17D、 IL-17E或IL-17F均不 能抑制结合成员与人il-17a的结合超过50%，例如不超过20%，所述标记 IL-17A的浓度等于结合成员与人IL-17A相互作用的解离常数Kd，其中采用二 价分析物数据模型通过表面等离振子共振，例如BIAcore测定速度常数之比 kdl/kal，而由该速度常数计算所述Kd。例如，在这种表位竞争试验中，l^iM 的il-17b、il-17c、il-17d或il-17e不能抑制结合成员与人il-17a结合，1 (jM il-17f可能不抑制，或者能抑制但小于50%。
表位竞争试验的示例性数据示于实施例2.7(参见表7)。在利用il-17b、 C、 d、 E或f的表位竞争试验中不能测定ic50值，表明ic50值太高以致于该试 验不能检测。
本发明结合成员显示对IL-17同源物的交叉反应性有限为它们的治疗性和 /或诊断性应用提供优点，特别是需要特异性抑制IL-17A的体内应用。降低了 不良交叉反应性所致的副作用。此外，可以利用浓度较低的结合成员，因为交 叉反应性有限表示可给予更多剂量的结合成员来结合靶IL-17A。这对于体内治 疗性应用给药尤其有优势。
本发明结合成员可包含抗体分子，例如人抗体分子。结合成员通常包含抗 体VH和/或VL结构域。结合成员的VH结构域也作为本发明的部分提供。各 vh和vl结构域内是互补决定区("cdr")和框架区("fr")。 vh结构域包含一 组HCDR， VL结构域包含一组LCDR。抗体分子可包含含有VH cdr1、 cdr2 和cdr3及框架的抗体vh结构域。或者其还可包含含有vl cdr1、 cdr2 和CDR3及框架的抗体VL结构域。VH或VL结构域框架包含如以下结构所 示间插有cdr的4个框架区，fr1、 fr2、 fr3禾卩fr4:
fr1-cdr1國fr2-cdr2-fr3-cdr3-fr4 。
本发明的抗体vh和vl结构域，fr和cdr的例子见随附的构成本文一部分的序列表。其它示范性CDR见下文和表21。本文披露的所有VH和VL 序列、CDR序列、多组CDR和多组HCDR及多组LCDR代表着本发明的诸 方面和实施方式。本文所述的"一组CDR"包括CDR1、 CDR2和CDR3。因此， —组HCDR指HCDR1、 HCDR2和HCDR3， 一组LCDR指LCDR1 、 LCDR2 禾口LCDR3。除非另有表述，"一组CDR"包括HCDR和LCDR。本发明的结合 成员通常是单克隆抗体。
本发明的另一方面是包含VH结构域和/或包含VL结构域的抗体分子，所 述VH结构域与随附序列表所示抗体1-16中任一种的VH结构域有至少80、 85、 90、 95、 98或99%氨基酸序列相同性，所述VL结构域与随附序列表所示 抗体1-16中任一种的VL结构域有至少80、 85、 90、 95、 98或99%氨基酸序 列相同性。可用于计算两种氨基酸序列的相同性％的算法包括，例如BLAST (Altschul等，1990)、 FASTA (Pearson和Lipman， 1988)或Smith-Waterman算 法（Sm他和Waterman, 1981)，例如采用默认参数。
本发明的结合成员可包含非抗体分子内的抗原结合位点，通常由非抗体蛋 白质支架中的一个或多个CDR提供，例如HCDR3和/或LCDR3，或一组CDR， 下文将进一步讨论。
如实施例部分更详细描述的，我们分离含有如表21所示一组CDR序列的 亲代抗体分子(第1号抗体)。通过优化，我们产生2-16号的一组抗体克隆，其 CDR3序列衍生自亲代CDR3序列并在表21所示位置具有取代。因此，例如 从表21可以看出，抗体2具有亲代HCDR1、 HCDR2、 HCDR3、 LCDR1和 LCDR2序列，并具有亲代LCDR3序列，其中Kabat残基93和94分别被P和 H替代。本文所述的亲代抗体分子和抗体分子2-16分别指含亲代抗体分子的 CDR的抗体分子和含抗体2-16的CDR的抗体分子。
本文描述了包含表21所示亲代组CDR的结合成员，其中HCDR1是SEQ ID NO: 3 (Kabat残基31-35)、 HCDR2是SEQ ID NO: 4 (Kabat残基50-65)、 HCDR3是SEQ ID NO: 5 (Kabat残基95-102)、 LCDRl是SEQ ID NO: 8 (Kabat 残基24-34)、 LCDR2是SEQ ID NO: 9 (Kabat残基50-56)和LCDR3是SEQ ID NO: 10 (Kabat残基89-97)。
本发明结合成员可包含本文所述一个或多个CDR，例如CDR3，还任选包含CDR1和CDR2，从而形成一组CDR。 CDR或CDR组可以是亲代CDR或 亲代CDR组，或者可以是抗体2-16中任一种的CDR或CDR组，或者可以是 其变体，如本文所述。
例如，本发明的结合成员或VL结构域可包含亲代LCDR3，其中Kabat 残基93和94分别被P和H替代。
结合成员或VH结构域可包含含一个或多个以下取代的亲代HCDR3:
F或H替代的Kabat残基98;
G或T替代的Kabat残基100A;
R替代的Kabat残基101;
G或N替代的Kabat残基102。
结合成员获取VL结构域可包含具有一个或多个以下取代的亲代LCDR3:
T替代的Kabat残基90;
N或S替代的Kabat残基92;
H或P替代的Kabat残基93;
H、 K、 R、 T或Y替代的Kabat残基94;
D、 N或V替代的Kabat残基95;
I或Q替代的Kabat残基96。
用P取代LCDR3中Kabat位置93的D与结合成员对人和/或短尾猴IL-17A 的效力增强有关。
本发明结合成员可包含抗体1-16中任一个的HCDR1、 HCDR2和/或 HCDR3和/或抗体1-16中任一个的LCDR1 、 LCDR2禾口/或LCDR3，例如表21 所示的抗体1-16中任一个的一组CDR。结合成员可包含这些抗体之一的一组 VHCDR。其可任选包含这些抗体之一的一组VLCDR，所述VLCDR可以来 自与VH CDR相同或不同的抗体。包含抗体1-16中任一个的一组HCDR和/ 或抗体1-16中任一个的一组LCDR的VH结构域也是本发明的各种实施方式。
VH结构域通常与VL结构域配对以提供抗体抗原-结合位点，虽然如下文 进一步讨论的，VH或VL结构域可单独用于结合抗原。在一个实施方式中， 抗体l VH结构域与抗体1 VL结构域配对，从而形成同时包含抗体l VH和 VL结构域的抗体抗原-结合位点。提供了本文所述其它VH和VL结构域的类似实施方式。在其它实施方式中，抗体1 VH与抗体1 VL以外的VL结构域配 对。本领域熟知轻链混杂。本发明还提供了本文所述其它VH和VL结构域的 类似实施方式。因此，亲代或抗体2-16中任一种的VH可以与亲代或抗体2-16 中任一种的VL配对。
本发明的一方面是包含VH结构域和VL结构域的分离抗体分子，其中 VH结构域氨基酸序列如SEQ ID NO:62所示，VL结构域氨基酸序列如SEQ ID NO:67或SEQ ID NO: 176所示。
结合成员可以包含亲代抗体或抗体2-16中任一种的一组H和/或L CDR， 其中在所披露的H和/或LCDR组内含有10或9个或更少的，例如l、 2、 3、 4或5个取代。例如，本发明结合成员可包含抗体7的H和/或LCDR组，其 中可包含10或更少的，例如0、 1或2个取代。有可能对CDR组内的任何残 基进行取代，可以在CDR1、 CDR2和/或CDR3内。
取代可以在CDR3内，例如在抗体2-16中任一种的位置，如表21所示。 因此，所述一个或多个取代可包含以下残基处的一个或多个取代：
HCDR3中的Kabat残基98、 100A、 101或102;或 —
LCDR3中的Kabat残基90、 92、 93、 94、 95或96。
因此，例如CDR3可以是在Kabat残基93和/或94处具有取代的亲代(抗 体1)LCDR3。
本文它处描述了亲代CDR中取代的例子。所述的取代可以包含表21所示 的一个或多个取代。
本发明的结合成员可包含以下HCDR1、 HCDR2和/或HCDR3:
HCDR1,其中Kabat残基31是Ser、 Ala、 Gly、 Thr或Cys，例如Ser， 禾口/或Kabat残基32是Tyr;
HCDR2，其中Kabat残基58是Tyr或Phe，例如Tyr;
HCDR3，其中
Kabat残基96是疏水性残基，即含有非极性侧链的氨基酸残基，例如Leu、 Ile、 Val、 Ala或Phe，例如Leu，
Kabat残基97是疏水性残基，例如Ile、 Leu、 Val、 Ala或Phe，例如lie
和/或Kabat残基98是环状残基，即侧链包含环状部分的氨基酸残基。例如， Kabat残基98可以是His、 Trp或Phe，例如His或Trp，如His。
如实施例7.4所示，在这些HCDR位置的残基可以结合IL-17A。
本发明结合成员可以包含以下LCDR1禾卩/或LCDR3:
LCDR1，其中Kabat残基31是Tyr或Phe，例如Tyr，禾卩/或Kabat残基 32是Tyr或Phe，例如Tyr;
LCDR3，其中Kabat残基91是Tyr和/或Kabat残基93是Pro、羟脯氨酸、 His、甲基组氨酸或Asp，例如Pra或His,如Pro。
LCDR1中的Kabat残基29任选是Ala，和/或LCDR1中的Kabat残基30 任选是Asn。
本发明结合成员可任选包含LCDR2，其中Kabat残基53是含不荷电极性
侧链的氨基酸残基，例如Gln。
如实施例7.4所示，这些LCDR位置处的残基可以结合IL-17A。
例如，本发明结合成员可包含一组CDR: HCDR1、 HCDR2、 HCDR3、
LCDR1、 LCDR2禾PLCDR3，包含7个或更多个，例如8、 9或全部的以下残
基：
-HCDR1的Kabat残基31处的Ser、 Ala、 Gly、 Thr或Cys，例如Ser; 隱HCDR1的Kabat残基32处的Tyr; -HCDR2的Kabat残基58处的Tyr或Phe，例如Tyr; -Kabat残基96处的疏水性残基，例如Leu、 Ile、 Val、 Ala或Phe，如Leu; -HCDR3的Kabat残基97处的疏水性残基，例如Ile、 Leu、 Val、 Ala或 Phe，如Ile;
-HCDR3的Kabat残基98处的环状残基，例如His、 Trp或Phe，如His 或Trp，如His;
-LCDR1的Kabat残基31处的Tyr或Phe，例如Tyr; -LCDR1的Kabat残基32处的Tyr或Phe，例如Ty; -LCDR3的Kabat残基91处的Tyr;和
-LCDR3的Kabat残基93处的Pro、羟脯氨酸、His或3-甲基组氨酸，例 如Pro或His，如Pro。结合成员可包含一组CDR，其中： HCDR1的Kabat残基31是Ser; HCDR1的Kabat残基32是Tyr; HCDR2的Kabat残基58是Tyr; HCDR3的Kabat残基96是Leu; HCDR3的Kabat残基97是lie; HCDR3的Kabat残基98是His; LCDRl的Kabat残基31是Tyr; LCDRl的Kabat残基32是Tyr; LCDR3的Kabat残基91是Tyr;禾口 LCDR3的Kabat残基93是Pro。 在本发明的结合成员中：
HCDR1可以有5个氨基酸长，由Kabat残基31-35构成； HCDR2可以有17氨基酸长，由Kabat残基50-65构成； HCDR3可以有9个氨基酸长，由Kabat残基95-102构成； LCDRl可以有13个氨基酸长，由Kabat残基24-34构成； LCDR2可以有7个氨基酸长，由Kabat残基50-56构成； 和/或
LCDR3可以有9个氨基酸长，由Kabat残基89-97构成。 . 一组HCDR和LCDR的Kabat编号的举例说明见表21 ，其中HCDR1是 Kabat残基31-35、 HCDR2是Kabat残基50-65、 HCDR3是Kabat残基95-102、 LCDRl是Kabat残基24-34、 LCDR2是Kabat残基50-56和LCDR3是Kabat 残基89-97。
结合成员可以包含在抗体框架中具有一个或多个CDR,例如一组CDR的 抗体分子。例如，可以将抗体的一个或多个CDR或一组CDR嫁接入框架(例 如，人框架)以提供抗体分子。框架区可包含人种系基因区段序列。因此，可 以将框架种系化(germlined)，从而将框架内的一个或多个残基更换以与大多数 相似的人种系框架中等价位置处的残基相匹配。技术人员可以选择序列最接近 种系化之前的抗体框架序列的种系区段，并在本文所述试验中测试该抗体的亲和力或活性以证实种系化未明显降低抗原结合或效力。本领域技术人员已知人 种系基因区段序列，可通过例如Vbase编译(软件)存取。
在一个实施方式中，本发明结合成员是具有包含人种系框架中一组HCDR 的VH结构域，例如VH3-23的分离人抗体分子。因此，VH结构域框架区FR1、 FR2和/或FR3可包含人种系基因区段VH3-23的框架区。FR4可包含人种系j 区段JH1、 JH4或JH5 (这些j区段具有相同的氨基酸序列)的框架区，或者可包 含人种系j区段JH3的框架区。VHFR1的氨基酸序列可以是SEQIDNO:189。 VH FR2的氨基酸序列可以是SEQ ID NO:190。 VH FR3的氨基酸序列可以是 SEQIDNO:191。 VHFR4的氨基酸序列可以是SEQ ID NO:192。结合成员通常 还具有VL结构域，其包含例如人种系框架，如VX6a中的一组LCDR。因此， VL结构域框架区FR1、FR2和/或FR3可包含人种系基因区段VX6a的框架区。 FR4可包含人种系j区段JL2或JL3(这些j区段具有相同的氨基酸序列)的框架 区。VLFR1的氨基酸序列可以是SEQIDNO: 193。 VLFR2的氨基酸序列可以 是SEQ ID NO: 194。 VL FR3的氨基酸序列可以是SEQ ID NO:195。 VL FR4 的氨基酸序列可以是SEQIDNO: 196。种系化的VH或VL结构域可以在一个 或多个微调残基(Vernier residue)处种系化或不在一个或多个微调残基处种系 化，但通常不在一个或多个微调残基处种系。
本发明的抗体分子或VH结构域可包含VH FR1，其中Kabat残基28是 Thr或Ser，例如Thr禾口/或Kabat残基30是Ser或Thr，例如Ser。
本发明的抗体分子或VL结构域可包含VL FR2，其中Kabat残基49是疏 水性残基，例如Phe、 Tyr或His，如Phe。
如实施例7.4所示，VH结构域框架中的Thr28和Ser30和VL结构域框架 中的Phe49可以结合IL-17A。
本发明的抗体分子或VH结构域可包含下组重链框架区：
FR1 SEQ ID NO: 189;
FR2 SEQ ID NO: 190;
FR3 SEQ ID NO: 191;
FR4SEQIDNO: 192;
或者，包含的所述一组重链框架区含有1、 2、 3、 4或5个氨基酸改变，例如取代。
本发明的抗体分子或VL结构域可包含下组轻链框架区-FRl SEQIDNO: 193; FR2 SEQIDNO: 194; FR3 SEQIDNO: 195; FR4SEQIDNO: 196;
或者，包含的所述一组轻链框架区可含有l、 2、 3、 4或5个氨基酸改变， 例如取代。
氨基酸改变可以是取代、插入或缺失。任选不在VH FR1的Kabat残基 Thr28、 VH FR1的Kabat残基Ser30禾口/或VL FR2的Kabat残基Phe49处作出改变。
例如，本发明的抗体分子可包含一组重链和轻链框架区，其中：
重链FR1是SEQ ID NO: 189;
重链FR2是SEQ ID NO: 190;
重链FR3是SEQ ID NO: 191;
重链FR4是SEQ ID NO: 192;
轻链FRl是SEQ ID NO: 193;
轻链FR2是SEQ ID NO: 194;
轻链FR3是SEQ ID NO: 195;
轻链FR4是SEQ ID NO: 196;
或者，包含的所述一组重链和轻链框架区可含有10个或更少的，例如5 个或更少的氨基酸改变，例如取代。例如，在所述一组重链和轻链框架区中可 以有1或2个氨基酸取代。
与种系化抗体相比，未种系化的抗体具有相同的CDR，但框架不同。
在本文所示的抗体序列中，将抗体2、 3、 4、 5、 6、 7、 13、 14和15的 VH结构域种系化，抗体l、 8、 9、 10、 11、 12和16的VH结构域未种系化， 将抗体2和7的VL结构域种系化，抗体l、 3、 4、 5、 6、 8、 9、 10、 11、 12、 13、 14、 15和16的VL结构域未种系化。
本发明的结合成员可以与任何结合成员竞争结合IL-17(均结合IL-17),包括本文披露的结合成员、VH和/或VL结构域、CDR，例如HCDR3和/或CDR 组。不难在体外检验结合成员之间的竞争，例如采用ELISA和/或用特定的报 道分子给一种结合成员作标记(可在一种或多种其它未标记的结合成员存在下 检测)，从而能鉴定结合相同表位或重叠表位的结合成员。例如，可采用ELISA 测定竞争，其中IL-17固定于平板，将标记的第一结合成员连同一种或多种未 标记的其它结合成员一起加入该平板。通过标记的结合成员发出的信号降低观 察到有能与标记的结合成员竞争的未标记结合成员存在。本领域普通技术人员 不难知晓这些方法，本文详细描述了这些方法。在一个实施方式中，采用本文 所述的表位竞争试验检验竞争结合。本发明的结合成员可包含与抗体分子竞争 的抗体抗原结合位点，例如特别是包含亲代抗体或结合IL-17的抗体1-16中任 一个的VH和/或VL结构域、CDR，例如HCDR3或CDR组的抗体分子。本 发明的诸方面提供与本文所述任何结合成员竞争结合IL-17的结合成员，例如 与亲代抗体或抗体2-16中任一种竞争，例如scFV或IgGl形式。与本文所述 任何结合成员竞争结合IL-17的结合成员可以具有本文披露的本发明结合成员 的任一种或多种结构和/或功能特性。
在其它方面，本发明提供包含编码本发明结合成员、VH结构域和/或VL 结构域的分离核酸，以及制备本发明结合成员、VH结构域和/或VL结构域的 方法，包括在致使产生所述结合成员、VH结构域和/或VL结构域的条件下表 达所述核酸并回收之。
本发明另一方面提供编码本文披露的VH CDR或VL CDR序列的核酸， 通常是分离的。
另一方面提供含有本发明核酸或用本发明核酸转化的宿主细胞。
本发明其它方面提供含有本发明结合成员的组合物，和它们在抑制和/或 中和IL-17的方法中的应用，包括治疗人或动物体的方法。
本发明的结合成员可用于治疗或诊断人或动物体的方法，例如治疗(可包 括预防性治疗)人患者的疾病或病症的方法，该方法包括给予所述患者有效量 的本发明结合成员。可按照本发明治疗的病症包括IL-17在其中起作用的任何 病症，如本文它处详述的。
下文进一步详述了本发明的这些和其它方面。术语
本文中应指出，本文使用"和/或"之处应理解成具体公开了两种所述特征 或组分的每一种，包括或不包括另一种。例如，"A和/或B"应该理解成具体公 开了(i)A、 （ii)B及(iii)A和B中每一种，就如同各自在本文中专门列出一样。
IL-17或IL-17A是白介素-17。除非另有表述，述及IL-17通常指人IL-17A。
体内表达的IL-17A具有23个氨基酸的N-末端信号肽，其经切割产生成 熟的IL-17A。野生型人IL-17A的序列是SEQ ID NO:198。
述及IL-17中的氨基酸残基通常是根据成熟序列的残基编号，而不包含信 号肽。除非另有表述，本文中人IL-17的残基编号指成熟序列SEQIDNO:198。 成熟的IL-17A的残基1是Gly，其位于全长多肽的24位。
人IL-17的序列以登录号Q16552保藏(Swiss-Prot)，其显示包含信号肽的 全长前体IL-17A。
短尾猴IL-17A的序列显示为SEQIDNO:162，其由SEQIDNO:161编码。 如本文它处所述，IL-17A可以是重组体和/或可以是糖基化或非糖基化的。 IL-17A在体内以N-连接的糖基化形式天然表达。糖基化IL-17A还可在重组系 统，例如HEKEBNA细胞中表达。IL-17A可在大肠杆菌细胞中以非糖基化形 式表达。
微扁
该术语描述了彼此结合的一对分子中的一个成员。结合对的成员可以天然 产生或完全或部分合成产生。分子对的成员在其表面具有一定区域或空腔，从 而能与该分子对另一成员的特定空间和极性结构结合，因此与之互补。结合对 的类型的例子是抗原-抗体、生物素和亲和素、激素-激素受体、受体-配体、酶 -底物。本发明涉及抗原-抗体型反应。
结合成员通常包括具有抗原结合位点的分子。例如，结合成员可以是抗体 分子或含有抗原结合位点的非抗体蛋白。
可通过在例如纤连蛋白或细胞色素B等非抗体蛋白质支架上排列CDR (Haan和Maggos， 2004; Koide, 1998; Nygren， 1997)，或通过使蛋白支架内
35环的氨基酸残基随机化或突变来提供抗原结合位点，从而能赋予对所需靶标的 结合特异性。Nygren等，（1997)总结了用于工程改造蛋白质中新型结合位点的 支架。抗体模拟物的蛋白支架披露于通过引用全文纳入本文的WO/0034784， 其中发明人描述了包含具有至少一个随机化环的纤连蛋白III型结构域的蛋白 质(抗体模拟物)。可通过免疫球蛋白基因超家族的任何结构域成员提供要嫁接 入一个或多个CDR，例如一组HCDR或一个HCDR禾卩/或LCDR3的合适支架。 所述支架可以是人或非人蛋白质。非人蛋白质支架的优点之一是其可在至少比 一些抗体分子更小和/或更易于操作的支架分子中提供抗原结合位点。结合成员 的体积小可赋予有用的生理学特性，例如能进入细胞、更深地穿透入组织或与 其它结构内的靶标反应，或结合于靶抗原的蛋白质空腔内。Wess, 2004总结 了抗原结合位点在非抗体蛋白质支架中的应用。蛋白质通常具有稳定的骨架和 一个或多个可变环，其中所述一个或多个环的氨基酸序列经专门或随机突变从 而产生与靶抗原结合的抗原结合位点。这些蛋白质包含金黄色葡萄球菌A蛋 白、转铁蛋白、四连接素、纤连蛋白(例如，第10个III型纤连蛋白结构域)和 脂笼蛋白的IgG-结合结构域。其它方法包括西莱科股份有限公司(Sdecore GmbH)的合成"微体"，其以植物环蛋白(cyclotide)(具有分子内二硫键的小蛋白） 为基础。
除了抗体序列和/或抗原结合位点，本发明的结合成员可包含其它氨基酸， 例如形成肽或多肽，如折叠域，或赋予该分子除结合抗原的能力以外的另一种 功能特征。本发明结合成员可携带可检测标记物，或者可与毒素或靶向部分或 酶偶联(例如，通过肽键或接头)。例如，结合成员可包含催化位点(例如，在酶 结构域中)以及抗原结合位点，其中所述抗原结合位点与抗原结合，因此靶向 抗原的催化位点。催化位点可以，例如通过切割来抑制抗原的生物学功能。
虽然知道非抗体支架可携带CDR，但携带CDR，例如CDR3或本发明的 一组CDR的结构通常是抗体重链或轻链序列或其实质部分，其中CDR或CDR 组位于重排的免疫球蛋白基因编码的天然产生VH和VL抗体可变域的CDR 或CDR组的相应位置。可参考目前利用因特网可获得(immuno.bme.nwu.edu或 采用任何搜索引擎检索"Kabat")的Kabat 1987及其升级版本测定免疫球蛋白可 变域的结构和定位。CDR区域或CDR表明Kabat等(Kabat 1991a，和随后的版本)定义的免疫 球蛋白的重链和轻链的超变区。抗体通常含有3个重链CDR和3个轻链CDR。 本文利用术语CDR表示(视情形而定)这些区域中的一个或几个或甚至全部，这 些区域含有负责借助亲和力使得抗体与其识别的抗原或表位结合的大多数氨 基酸残基。
在6个短CDR序列中，重链的第三CDR(HCDR3)的体积可变性较大(主 要是因为产生它的基因重排机制差异较大)。其可短至2个氨基酸，虽然已知 的最长体积是26。在功能上，HCDR3在决定抗体特异性中起部分作用(Segal 1974; Amit 1986; Chothia 1987; Chothia 1989; Caton 1990; Sharon 1990a; Sharon 1990b; Kabat等，1991b)。
HCDR1可以是5个氨基酸长，由Kabat残基31-35构成。 HCDR2可以是17个氨基酸长，由Kabat残基50-65构成。 HCDR3可以是9个氨基酸长，由Kabat残基95-102构成。 LCDR1可以是13个氨基酸长，由Kabat残基24-34构成。 LCDR2可以是7个氨基酸长，由Kabat残基50-56构成。 LCDR3可以是9个氨基酸长，由Kabat残基89-97。 贫,好
该术语描述了无论天然或部分或完全合成产生的免疫球蛋白。该术语还涵 盖包含抗体抗原-结合位点的任何多肽或蛋白质。在本文中必须知道，本发明 不涉及天然形式的抗体，即它们不处于其天然环境中，但它们能经纯化从天然 来源分离或获得，或者可通过遗传重组或化学合成获得，它们随后可含有非天 然氨基酸，下文将进一步描述。含有抗体抗原-结合位点的抗体片段包括但不 限于：诸如Fab、 Fab，、 Fab，-SH、 scFv、 Fv、 dAb、 Fd等分子；和双抗体(diabody)。
本发明的抗体分子可以是IgG，例如IgGl。
可能利用单克隆抗体或其它抗体并采用重组DNA技术等技术来产生结合 靶抗原的其它抗体或嵌合型分子。这些技术可包括引入编码免疫球蛋白可变 区，或抗体的CDR，或不同免疫球蛋白的恒定区或恒定区加框架区的DNA。 参见，例如EP-A-184187、 GB 2188638A或EP-A-239400，和大量的后续文献。 可对产生抗体的杂交瘤或其它细胞作出遗传突变或其它改变，从而可改变或不改变所产生抗体的结合特异性。
由于可以多种方式修饰抗体，术语"抗体分子"应理解成涵盖具有所需特异 性和/或能与抗原结合，具有抗体抗原-结合位点的任何结合成员或物质。因此， 该术语涵盖抗体片段和衍生物，包括含有抗体抗原-结合位点的任何多肽，而 无论其是天然或完全或部分合成的。因此包括包含抗体抗原-结合位点并与另 一多肽(例如，衍生自另一物种或属于另一抗体类型或亚类)融合的嵌合型分子， 或其等价物。EP-A-0120694和EP-A-0125023以及大量的后续文献描述了嵌合 型抗体的克隆和表达。
抗体工程改造领域中可用的其它技术能分离人和人源化抗体。例如，可如 Kontermann和Dubel (2001)所述制备人杂交瘤。例如以下许多出版物详细描述 了产生结合成员的另一种现有技术-噬菌体展示：WO92/01047 (下文进一步讨 论)和美国专利US5969108、 US5565332、 US5733743、 US5858657、 US5871907、 US5872215、 US5885793、 US5962255、 US6140471、 US6172197、 US6225447、 US6291650、 US6492160、 US6521404, Kontermann和Dubel (2001)。可利用转 基因小鼠分离人抗体，该小鼠中小鼠抗体基因被灭活并功能性替换为人抗体基 因，但小鼠免疫系统的其它组分维持完好(Mendez 1997)。
可借助寡核苷酸合成并在合适的表达载体中装配产生基因，通过表达基因 产生合成的抗体分子，如Knappik等，（2000)或Krebs等，（2001)所述。
现已证明完整抗体的片段可执行结合抗原的功能。结合片段的例子是(i) 由VL、 VH、 CL和CH1结构域构成的Fab片段；（ii)由VH和CH1结构域构 成的Fd片段；（iii)由单一抗体的VL和VH结构域构成的Fv片段；（iv)由 VH或VL结构域构成的dAb片段（Ward 1989; McCafferty 1990; Holt 2003); (v)分离的CDR区域；（vi)F(ab')2片段，其是包含两个连接的Fab片段的一种 二价片段；（vii)单链Fv分子（scFv)，其中VH结构域和VL结构域通过肽接 头相连，从而能连接两个结构域以形成抗原结合位点（Bird 1988; Huston 1988); (viii)双特异性单链Fv 二聚体（PCT/US92/09965)和(ix)通过基因融合 构建的"双抗体"，多价或多特异性片段（WO94/13804; Holliger 1993a)。可通 过包含连接VH和VL结构域的二硫键来稳定Fv、 scFv或双抗体分子（Reiter 1996)。还可制备包含与CH3结构域相连的scFv的小体(minibody)(Hu 1996)。结合片段的其它例子是Fab'，其与Fab片段的区别在于在重链CH1结构域的 羧基末端加入少许残基，包含抗体绞链区的一个或多个半胱氨酸，以及 Fab'-SH，其是恒定区的半胱氨酸残基许多游离巯基的Fab'片段。
可通过例如酶(如胃蛋白酶或木瓜蛋白酶)消化和/或化学还原以切割二硫 键等方法，从本文所述的任何抗体分子开始获得本发明的抗体片段，例如包含 VH和域VL结构域或抗体1-16中任一个的CDR的抗体分子。在另一种方式 中，可通过本领域技术人员熟知的遗传重组等技术，或者借助，例如自动肽合 成仪，如应用生物系统公司(Applied Biosystems)等公司提供的那些仪器通过肽 合成或通过核酸合成和表达来获得本发明的抗体片段。
本发明的功能性抗体片段包括通过化学修饰，特别是通过PEG化，或通 过掺入脂质体而增加了半衰期的任何功能性片段。
dAb(结构域抗体)是抗体的小单体性抗原结合片段，即抗体重链或轻链的 可变区(Holt 2003)。 VHdAb在驼科动物（例如，骆驼，美洲驼)中天然产生， 并可通过用靶抗原免疫驼类动物，分离抗原特异性B细胞和直接克隆各B细 胞的dAb基因来产生。还可在细胞培养物中产生dAb。体积小、溶解性良好和 温度稳定性使得它们在生理学上特别有用，从而适于选择和亲和力成熟。本发 明的结合成员可以是包含基本上如本文所述的VH或VL结构域或包含基本上 如本文所述一组CDR的VH或VL结构域的dAb。
本文所用的短语"基本上所述"表示本文所述结合成员的VH或VL结构域 的相关CDR的特征与本文所述序列的特定区域相同或高度相似。如本文所述， 关于一个或多个可变域的短语"高度相似"包括在CDR和/或VH或VL结构域 中可进行1-约5个，例如1-4，包括1-3个，或1或2或3或4个氨基酸取代。
双特异性或双功能抗体构成将两个不同的可变区组合在同一分子中的第 二代单克隆抗体(Holligerl999)。现已证明它们因能募集新的效应功能或靶向肿 瘤细胞表面的几种分子而可用于诊断领域和治疗领域。如果要利用双特异性抗 体，这些抗体可以是用常规方法(Holliger 1993b)，例如化学方法制备或从杂交 瘤制备的常规双特异性抗体，或者可以是上述双特异性抗体片段的任一种。这 些抗体可通过化学方法(Glennie 1987; Repp 1995)或体细胞方法(Staerz 1986; Suresh 1986)获得，但也可通过遗传改造技术以迫使进行异二聚化，因而促进
39所寻求抗体的纯化过程(Merchand 1998)。双特异性抗体的例子包括BiTE，技 术获得的那些抗体，其中可以利用特异性不同的两种抗体的结合结构域并通过 短的柔韧性肽直接相连。该抗体在短的单一多肽链上组合两种抗体。可只利用 可变区构建不含Fc区的双抗体和scFv，从而可能降低抗独特型反应的效应。
可将双特异性抗体构建成完整的IgG、双特异性Fab'2、 Fab'PEG、双抗体 或者双特异性scFv。此外，可采用本领域已知的常规方法连接两个双特异性抗 体以形成四价抗体。
与完整的双特异性抗体相反，双特异性二抗体可能还特别有用，因为它们 不难构建以及在大肠杆菌中表达。采用噬菌体展示(W094/13804)不难从文库中 选择结合特异性合适的二抗体(和许多其它多肽，例如抗体片段)。如果要将双 抗体的一根臂维持恒定，例如对正-17的特异性，则可制备另一臂不同的文库 并选择特异性合适的抗体。可如Ridgeway 1996所述通过交替工程改造方法制 备完整的双特异性抗体。
本领域可采用各种方法获得针对IL-17的抗体。这些抗体可以是单克隆抗 体，特别是人、鼠科、嵌合型或人源化来源的，这些抗体可通过本领域技术人 员熟知的标准方法获得。
就制备单克隆抗体或它们的功能片段，特别是鼠源的而言，通常可能表示 手册"Antibodies(抗体)"（Harlow和Lane 1988)特别描述的技术或如Kohler和 Milstein， 1975所述从杂交瘤制备的技术。
单克隆抗体可以从，例如用IL-17或含有所述单克隆抗体识别的表位的它 们片段之一免疫的动物细胞获得。尤其可按照常规方法，通过自含有编码IL-17 或其片段的cDNA序列的核酸序列开始的遗传重组，通过自包含在IL-17和/ 或其片段的肽序列中的氨基酸序列开始的肽合成来制备IL-17或其片段之一。 单克隆抗体可以利用，例如亲和柱纯化，所述亲和柱上已经固定了含有所述单 克隆抗体识别的表位的IL-17或其片段之一。更具体地说，可通过A蛋白和/ 或G蛋白层析，然后进行或不进行离子交换层析以除去自身中残留蛋白污染物 以及DNA和LPS，再进行或不进行琼脂糖凝胶排阻层析以除去因存在二聚体 或其它多聚体而导致的潜在凝聚体来纯化单克隆抗体。在一个实施方式中，可 以同时采用或连续采用所有这些技术。微微敲
该术语描述了分子中结合靶抗原的全部或部分并与之互补的部分。在抗体 分子中，该术语表示抗体抗原-结合位点，包括抗体中结合靶抗原的全部或部 分并与之互补的部分。如果抗原较大，抗体可以只结合该抗原的特定部分，该 部分称为表位。可以由一个或多个抗体可变域提供抗体抗原-结合位点。抗体 抗原-结合位点可包含抗体轻链可变区(VL)和抗体重链可变区(VH)。
分鄉
该术语表示本发明的结合成员，或编码这种结合成员的核酸通常合乎本发 明的状态。因此，提供的本发明结合成员、VH和/或VL结构域和编码核酸分
子及载体可以是例如从其天然环境分离的和/或纯化的，基本上纯的或均质的形 式，或者在核酸的情形中，为不含或基本上不含编码具有所需功能的多肽的序 列以外来源的其它序列的核酸或基因。分离的成员和分离的核酸不含或基本上
不含天然与其相连的物质，例如在其天然环境或在体外或体内实施重组DNA 技术之时在其制备环境(例如细胞培养液)中发现的其它多肽或核酸。可用稀释 剂或佐剂配制诸成员和核酸，但为实际目的仍是分离的-例如，如果用于包被 免疫测定所用的微量滴定板，通常将这些成员与明胶或其它载体混合，或者用 于诊断或治疗中时，将其与药学上可接受的载体或稀释剂混合。结合成员可以 天然地或通过异源真核细胞(例如，CHO或NS0 (ECACC 85110503))的系统糖 基化，或者它们可以是(例如，如果在原核细胞中表达)非糖基化的。
包含IL-17抗体分子的异质制品也构成本发明的一部分。例如，这些制品 可以是抗体混合物，所述抗体具有全长重链、缺乏C-末端赖氨酸的重链、糖基 化程度不同和/或具有衍生化的氨基酸，例如N-末端谷氨酸环化以形成吡咯型 谷氨酸残基。
附图简述
图1. N-末端标记的人IL-17A氨基酸序列(SEQ ID NO: 197)。下划线显示 了 N-末端标记的残基1-21。框中是对应于成熟人IL-17A的残基71-87的残基 92-108 (SEQIDNO: 199)。
图2.含C-末端His5标签的全长前体人IL-17A氨基酸序列(SEQ ID NO:200)。下划线显示了 23个氨基酸残基的N-末端信号肽。在对应于成熟人IL-17A 的残基71-87的加框序列SEQIDNO: 199内，野生型人IL-17A(SEQ ID NO: 198) 的突变残基以黑体字和下划线显示。不含N-末端肽和His标记的成熟突变型人 IL-17A是SEQ ID NO: 201 。
详述
如上所述，本发明结合成员能调节并可能中和IL-17的生物学活性。如本 文所述，可以优化本发明的IL-17结合成员的中和效力。效力优化通常包括使 选择的结合成员的序列(通常是抗体的可变域序列)突变以产生结合成员文库， 然后检验效力并选择更强效的结合成员。因此，选择的"效力优点"结合成员的 效力可能高于产生文库的结合成员。然而，还可不经优化获得高效力结合成员， 例如可从最初的筛选，例如生物化学中和试验直接获得高效力结合成员。"效 力优化的"结合成员指中和IL-17的特定活性或下游功能的效力优化的结合成 员。本文它处更详细描述了试验和效力。本发明提供效力优化的和未优化的结 合成员，以及效力优化所选结合成员的方法。因此，本发明使得技术人员能产 生高效结合成员。
虽然可采用效力优化从给定的结合成员中产生效力较高的结合成员，但应 该注意甚至可以不用效力优化而获得高效结合成员。
在另一方面，本发明提供获得能结合抗原的一种或多种结合成员的方法， 该方法包括使本发明的结合成员文库与所述抗原接触，选择该文库中能结合所 述抗原的一种或多种结合成员。
该文库可展示在颗粒或分子复合物上，例如可复制的遗传包装体 (replicable genetic package),如酵母菌、细菌或细菌噬菌体(例如，T7)颗粒、病 毒、细胞或共价、核糖体或其它体外展示系统，各颗粒或分子复合物含有编码 展示于其上的抗体VH可变域和任选展示的VL结构域(如果存在的话)的核酸。 以下文献描述了噬菌体展示：WO92/01047和例如，美国专利US5969108、 US5565332、 US5733743、 US5858657、 US5871907、 US5872215、 US5885793、 US5962255、 US6140471、 US6172197、 US6225447、 US6291650、 US6492160 和US6521404，各篇文献通过引用的方式全文纳入本文。选择能结合抗原并展示在细菌噬菌体或其它文库颗粒或分子复合物上的 结合成员后，可从展示所述选择的结合成员的细菌噬菌体或其它颗粒或分子复 合物上获得核酸。这种核酸随后可用于通过表达含有从展示所述选择的结合成 员的细菌噬菌体或其它颗粒或分子复合物上获得核酸的核酸序列来产生结合 成员或抗体VH或VL可变域。
含所述选择的结合成员的抗体VH可变域的氨基酸序列的抗体VH可变域 可以分离形式提供，例如包含这种VH结构域的结合成员。
还可以进一步测试结合IL-17的抗体与，例如亲代抗体分子或抗体分子 1-16 (例如，scFv形式和/或IgG形式，如IgGl)竞争结合IL-17的能力。中和 IL-17的能力可如本文它处所述测试。
本发明结合成员结合IL-17的亲和力与抗体1-16之一(例如，scFv或IgGl 形式)相同或更好。
本发明结合成员中和IL-17的生物学活性的效力与抗体1-16之一(例如， scFv或IgGl形式)相同或更好。
可以在合适条件下比较不同结合成员的结合亲和力与中和效力。
可以制备本文公开的抗体分子的变体并用于本发明。根据计算化学的指导 将多变量数据分析技术应用于结构/特性-活性关系(Wold 1984)，可采用熟知的 数学技术，例如统计回归、模式识别和分类(Norman 1998; Kandel和Backer 1995; Krzanowski 2000; Witten和Frank 1999; Denison (编）2002; Ghose和 Viswanadhan)获得抗体的定量活性-特性关系。可从抗体序列、功能和三维结构 的经验和理论模型(例如，分析可能接触的残基或计算的理化特性)获得抗体的 特性，这些特性可单独考虑，也可组合考虑。
由VH结构域和VL结构域构成的抗体抗原-结合位点通常由6个多肽环形 成：3个来自轻链可变域(VL)， 3个来自重链可变域(VH)。对原子结构已知的 抗体的分析阐明了序列和抗体结合位点的三维结构之间的关系(Chothia 1992; Al-Lazikani 1997)。这些关系暗示，除了 VH结构域中的第三区(环)外，结合位 点环具有少量主链构象：经典结构之一。在特定环中形成经典结构显示由其大
小和在环及框架区的关键位点中存在某些残基决定(Chothia 1992; Al-Lazikani 1997)。可采用这种序列-结构关系研究预测序列已知但三维结构未知的抗体中， 对于维持其CDR环的三维结构因而维持结合特异性至关重要的那些残基。通 过比较预测与前导优化实验的结果可支持这些预测。在结构方法中，采用任何 可自由使用或购得的软件包，例如WAM(Whitelegg和Rees 2000)可产生模型 (Chothia 1986)。然后可釆用蛋白质目测和分析软件包，例如阿克赛勒里公司 (Acceleiys, Inc.)的Insight II或Deep View (Guex禾n Peitsch 1997)评估CDR中各 位置处可能的取代。然后可利用该信息进行可能对活性的影响最小或有利的取 代。
本领域通常已知在CDR、抗体VH或VL结构域和结合成员的序列内进行 取代所需的技术。可以制备含有取代的变体序列，测试其结合和减中和IL-17 的能力和/或任何其它所需特性，所述取代可能预计或不能预计对活性的影响最 小或有利。
本发明可利用序列如本文特别公开的任何VH和VL结构域的可变域氨基 酸序列变体，如本文所述。具体变体可包含一个或多个氨基酸序列改变(一个 氨基酸残基的添加、缺失、取代和/或插入)，可以小于约20个改变，小于约 15个改变、小于约10个改变或小于约5个改变，可以是5、 4、 3、 2或1个。 可以在一个或多个框架区和/或一个或多个CDR中作出改变。改变通常不导致 功能丧失，因此包含如此改变的氨基酸序列的结合成员可保留结合和/或中和 IL-17的能力。例如，其可保留与未作改变的结合成员同样的定量结合和/或中 和能力，例如在本文所述试验中测得。包含如此改变的氨基酸序列的结合成员 结合和域中和IL-17的能力可能提高。
改变可包括用非天然产生或非标准氨基酸替代一个或多个氨基酸残基，将 一个或多个氨基酸残基修饰成非天然产生或非标准形式，或者将一个或多个非 天然产生或非标准氨基酸插入序列。本文它处描述了本发明序列中改变的示例 性数目和位置。天然产生的氨基酸包括20种"标准"L-氨基酸，根据它们的标 准单字母密码鉴别为G、 A、 V、 L、 I、 M、 P、 F、 W、 S、 T、 N、 Q、 Y、 C、 K、 R、 H、 D、 E。非标准氨基酸包括可因现有氨基酸残基的修饰而掺入多肽 主链中的任何其它残基。非标准氨基酸可以是天然产生的或非天然产生的。本 领域已知几种天然产生的非标准氨基酸，例如4-羟脯氨酸、5-羟脯氨酸、3-甲
44基组氨酸、N-乙酰基丝氨酸等(Voet和Voet 1995)。在其N-ot位置衍生的那些 氨基酸残基只位于氨基酸序列的N-末端。在本发明中，氨基酸通常是L-氨基 酸，但在一些实施方式中，也可以是D-氨基酸。因此，改变包括将L-氨基酸 修饰成D-氨基酸，或用D-氨基酸替代L-氨基酸。氨基酸的甲基化、乙酰化和 /或磷酸化形式也是已知的，在本发明中，氨基酸可进行这种修饰。
本发明的抗体结构域和结合成员的氨基酸序列可包含上述非天然或非标 准氨基酸。在一些实施方式中，可以在合成期间将非标准氨基酸(例如，D-氨 基酸)掺入氨基酸序列，虽然在其它实施方式中，可以在合成氨基酸序列后通 过修饰或替代"原始"的标准氨基酸而引入非标准氨基酸。
利用非标准和/或非天然产生的氨基酸能增加结构和功能差异，因此能增 加本发明结合成员获得所需IL-17结合与中和特性的可能性。此外，与标准L-氨基酸相比，D-氨基酸和类似物已显示更好的药代动力学分布概况，因为具有 L-氨基酸的多肽在给予动物，例如人后会体内降解。
可采用随机诱变一个或多个选择的VH和/或VL基因以在整个可变域中产 生突变，从而产生本发明的携带CDR衍生序列的新型VH或VL区。Gram等 (1992)描述了这种技术，他采用易错PCR。在一些实施方式中，在CDR组的 整个可变区中作出一个或两个氨基酸取代。可采用的另一种方法是VH或VL 基因的CDR区域的定点诱变。Barbas等（1994)和Schier等（1996)公开了这些 技术。
本领域已知所有上述技术，技术人员能采用这些技术，从而能利用本领域 常规方法提供本发明结合成员。
本发明另一方面提供获得IL-17的抗体抗原结合位点的方法，该方法包括 通过将一个或多个氨基酸添加、删除、取代或插入本文所示VH结构域的氨基 酸序列来提供VH结构域，其是所述VH结构域的氨基酸序列变体，任选组合 如此提供的VH结构域与一个或多个VL结构域，并测试该VH结构域或一种 或多种VH/VL组合以鉴定IL-17的结合成员或抗体抗原结合位点，任选具有 一种或多种功能特性，例如中和IL-17活性的能力。所述VL结构域的氨基酸 序列基本上如本文所示。可采用类似方法，其中本文公开的VL结构域的一个 或多个序列变体与一个或多个VH结构域组合。如上所述，所携带的基本上如本文所示的CDR氨基酸序列可以是人抗体 可变域中的CDR或其实质性部分。基本上如本文所示的HCDR3序列代表着 本发明的诸多实施方式，例如携带的各这些序列可以是人重链可变域中的 HCDR3或其实质性部分。
本发明所用的可变域可以从任何种系或重排人可变域获得或衍生，或者可 以是基于已知人可变域的共有或实际序列的合成可变域。可变域可以衍生自非 人抗体6可以采用重组DNA技术将本发明的CDR序列(例如，CDR3)引入缺 乏CDR(例如，CDR3)的可变域库(repertoire)。例如，Marks等（1992)描述了产 生抗体可变域库的方法，其中可变域5'端处或与之毗邻的共有引物与人VH基 因的第三框架区的共有引物连用以提供缺乏CDR3的VH可变域库。Marks等 还描述了如何将该库与特定抗体的CDR3组合。采用类似的技术，本发明的 CDR3衍生序列可以与缺乏CDR3的VH或VL结构域库改组，改组的完整VH 和VL结构域与同源VL或VH结构域组合以提供本发明的结合成员。然后可 以在合适的宿主系统中展示该库，因而可以选择合适的结合成员，所述宿主系 统例如是通过引用方式全文纳入本文的WO92/01047或大量后续文献，包括 Kay， Winter和McCafferty(1996)所述的噬菌体展示系统。 一个库可由104以上 单个成员的构成，例如至少105、至少106、至少107、至少108、至少109或至 少101()个成员。其它合适的宿主系统包括但不限于：酵母菌展示、细菌展示、 T4展示、病毒展示、细胞展示、核糖体展示和共价展示。
Stemmer (1994)还公开了类似改组或重组技术，他描述了与P-内酰胺酶基 因有关的技术，但观察到可采用该方法产生抗体。
提供了制备IL-17抗原的结合成员的方法，该方法包括：
(a) 提供编码VH结构域的核酸起始库，所述核酸包含待替代的CDR3或 缺乏CDR编码区；
(b) 将所述核酸库与编码基本上如本文所示VH CDR3的氨基酸序列的供 体核酸组合，从而将所述供体核酸插入核酸库的CDR3区域，进而提供编码 VH结构域的核酸产物库；
(c) 表达所述产物库的核酸；
(d) 选择IL-17的结合成员；和(e)回收所述结合成员或其编码核酸。
还可采用类似方法，其中本发明的VL CDR3与编码VL结构域的核酸库 组合，所述核酸包含待替代的CDR3或缺乏CDR3编码区。
类似地，可以将一个或多个或所有3个CDR嫁接入VH或VL结构域库， 然后筛选该库中IL-17的一种或多种结合成员。
在一个实施方式中，可以利用亲代或抗体2-16HCDRl 、 HCDR2 和 HCDR3中的一个或多个，或者亲代或抗体2-16 HCDR组，和/或亲代或抗体 2-16 LCDR1、 LCDR2和LCDR3中的一个或多个，或者亲代或抗体2-16 LCDR 组。
类似地，可以利用本文公幵的其它VH和VL结构域，多组CDR和多组 HCDR和/或多组LCDR。
在一个实施方式中，免疫球蛋白可变域的实质性部分包含至少所述三个 CDR区，以及它们的间插框架区。该部分还可包含至少约50%的第一或第四 框架区或二者，所述50%是第一框架区的C-末端50%和第四框架区的N-末端 50%。可变域的实质性部分的N-末端或C-末端处其它残基可以是通常不与天 然产生的可变域相连的那些残基。例如，提供重组DNA技术构建本发明的结 合成员可导致将引入以促进克隆或其它操作步骤的接头所编码的N-或C-末端 残基引入。其它操作步骤包括引入接头以连接本发明的可变域与包含抗体恒定 区、其它可变域(例如，在二抗体的产生中)或可检测/功能标记物的其它蛋白质 序列，如本文它处详述的。
虽然在本发明的一些方面，结合成员包含一对VH和VL结构域，但基于 VH或VL结构域序列的单一结合结构域构成本发明的其它方面。已知单一免 疫球蛋白结构域，特别是VH结构域能以特定方式结合耙抗原。例如，参见以 上dAb的讨论。
在每一种单一结合结构域的情形中，可用这些结构域筛选能形成与IL-17 能结合的两维结合成员的互补结构域。可采用以引用方式全文纳入的 WO92/01047公开的所谓分级双重组合方案，通过噬菌体展示筛选方法实施， 其中含有H或L链克隆的各集落用于感染编码另一链(L或H)的克隆的完整文 库，按照噬菌体展示技术，例如该参考文献中描述的那些技术选择得到的双链结合成员。Marks 1992也披露了该技术。
本发明的结合成员还可包含抗体恒定区或其诸部分，例如人抗体恒定区或 其诸部分。例如，可将VL结构域在其C-末端与含有人Ck或CX链，例如C入 链的抗体轻链恒定区相连。类似地，基于VH结构域的结合成员可以在其C-末端与衍生自任何抗体同种型，例如IgG、 IgA、 IgE和IgM和任何同种型亚类， 特别是IgGl和lgG4的免疫球蛋白重链的全部或部分(例如，CH1结构域)相连。 IgGl因其效应功能和便于操作而优选。具有这些特性并稳定可变区的任何合 成或其它恒定区变体也可用于本发明实施方式中。
可用可检测或功能标记物标记本发明的结合成员。标记物可以是能产生或 经诱导产生信号的任何分子，包括但不限于：荧光剂、放射性标记、酶、化学 发光剂或光敏剂。因此，可以通过检测荧光或发光、放射性、酶活性或吸光度 来检测和域测量结合情况。
合适的标记物包括(示例性而非限制性)酶，例如碱性磷酸酶、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶("G6PDH")和辣根过氧化物酶；染料；荧光剂，例如荧光素、罗丹 明化合物、藻红蛋白、藻蓝蛋白、别藻蓝蛋白、邻苯二甲醛、荧光胺、荧光团， 例如穴合镧系化合物和螯合剂（帕金埃尔默公司和CIS生物国际公司(Perkin Elmer and Cis Biointemational));化学发光剂，例如异氨基苯二酰肼；致敏剂； 辅酶；酶底物；放射性标记，包括但不限于125I、 131I、 35S、 32P、 14C、 3H、 "Co、 "Tc和"Se，和本文所述的其它放射性标记；颗粒，例如乳胶或碳颗粒；金属 溶胶；微晶；脂质体；细胞，等等，还可用染料、催化剂或其它可检测基团进 一步标记。合适的酶和辅酶公开于Litman等，美国专利号4,275,149，和 Boguslaski等，美国专利号4,318,980,各份专利以引用的方式全文纳入本文。 合适的荧光剂和发现发光剂公开于以引用的方式全文纳入本文的Litman等， 美国专利号4,275,149。标记物还包括化学部分，例如可通过与特定的相关可检 测部分，如标记的亲和素或链霉亲和素结合来检测的生物素。可检测标记物可 以采用本领域已知的常规化学方法连接于本发明抗体。
可以通过许多方法使标记物产生可通过外部方法检测的信号，例如通过目 测、电磁辐射、加热和化学试剂。所述标记物还可与结合本发明抗体的另一结 合成员结合，或与支持物结合。
48标记物可直接产生信号，因此，无需其它组分来产生信号。许多有机分子， 例如荧光剂能吸收紫外线和可见光，吸收的光将能量转移给这些分子并将它们 提高到激发能级。然后该吸收的能量通过发射第二波长的光而消散。该第二波 长的射线也能将能量转移给标记的接受分子，得到的能量通过发射光，例如荧 光共振能量转移(FRET)而从接受分子消散。直接产生信号的其它标记物包括放 射性同位素和染料。
或者，标记物可能需要其它组分来产生信号，那么信号产生系统将包括产 生可检测信号所需的所有组分，包括底物、辅酶、增强剂、其它酶、与酶产物 反应的物质、催化剂、激活剂、辅因子、抑制剂、清除剂、金属离子和结合信 号产生物质所需的特定结合物质。合适的信号产生系统的详述见以引用方式全 文纳入本文的Ullman等，美国专利号5,185,243。
存在的结合成员、抗体或其功能片段之一可以是免疫偶联物的形式，从而 能获得可检测和/或可定量的信号。免疫偶联物可以与酶偶联，例如过氧化物酶、 碱性磷酸酶、a-D-半乳糖苷酶、葡萄糖氧化酶、葡萄糖淀粉酶、碳酸酐酶、乙 酰胆碱酯酶、溶菌酶、苹果酸脱氢酶或葡萄糖6-磷酸脱氢酶，或通过例如生物 素、洋地黄毒苷或5-溴脱氧尿苷等分子偶联。荧光标记物可同样与本发明的免 疫偶联物或它们的功能片段偶联，尤其包括荧光素及其衍生物、荧光染料、罗 丹明及其衍生物、GFP(GFP即"绿色荧光蛋白")、丹酰基、伞形酮、镧系元素 螯合剂或穴合物，例如铕等。
免疫偶联物或它们的功能片段可通过本领域技术人员已知的方法制备。它 们可以直接或通过间隔基团或连接基团，例如聚醛，如戊二醛、乙二胺四乙酸 (EDTA)、 二乙三胺五乙酸(DPTA)的中介作用，或在偶联剂，例如以上治疗性 偶联物所述那些偶联剂存在下偶联于酶或荧光标记物。含有荧光素型标记物的 偶联物可以通过与异硫氰酸酯反应来制备。同样地，其它免疫偶联物可包括化 学发光标记物，例如鲁米诺和二氧杂环丁垸，生物发光标记物，例如萤光素酶 和萤光素，或其它放射性标记物，例如碘123、碘125、碘126、碘131、碘133、 溴77、锝99m、铟lll、铟113m、镓67、镓68、硫35、磷32、碳14、氖（氢 3)、钴57、硒75、钌95、钌97、钌103、钌105、荣107、荣203、铼99m、 铼101、铼105、钪47、碲121 m、碲122m、碲125m、铥165、铥167、铥168、氟8、钇199。本领域技术人员已知现有的将治疗性放射性同位素直接或 通过螯合剂，例如上述EDTA、 DATA偶联于抗体的方法，该方法可利用诊断 所用的放射性元素。还可能通过氯胺T方法(Hunter和Greenwood 1962)用Na[I 125]标记，或通过Crockford等的技术(以引用方式全文纳入本文的美国专利号 4,424,200)用锝99m标记或通过Hnatowich (以引用方式全文纳入本文的美国专 利号4,479,930)所述经DPTA相连。其它免疫偶联物可包含毒素部分，例如选 自下组的毒素部分：假单胞菌外毒素（PE或其细胞毒素片段或突变体)、白喉 毒素或其细胞毒素片段或突变体、肉毒杆菌毒素A-F、蓖麻毒蛋白或其细胞毒 素片段或突变体、相思豆毒素或其细胞毒素片段、皂草毒蛋白或其细胞毒素片 段、商陆抗病毒毒素或其细胞毒素片段和异株泻根毒蛋白1或其细胞毒素片段。
本发明提供的方法包括使得本文提供的结合成员与IL-17结合。应注意， 这种结合可在体内发生，例如在给予结合成员或编码结合成员的核酸后，或者 可在体外发生，例如ELISA、蛋白质印迹、免疫细胞化学、免疫沉淀、亲和层 析和生物化学或细胞试验，例如本文所述的。本发明还能利用本发明结合成员， 例如在生物传感器系统中直接检测抗原水平。
例如，本发明包括检测和/或测量与IL-17的结合情况的方法，包括(i)使 所述结合成员与IL-17接触和(ii)检测所述结合成员与IL-17的结合情况，其中 采用本文所述任何方法或可检测标记物检测结合情况。该方法和本文所述的任 何其它结合检测方法可直接由实施该方法的人员解读，例如目测观察可检测标 记物。或者，该方法或本文所述的任何其它结合检测方法可产生放射自显影照 片、照片、计算机打印输出、流式细胞术报道、图片、图表、含有结果的试管 或容器或孔、或该方法结果的任何其它可见或物理表现形式的报道。
可以测定结合成员与IL-17的结合量。定量测定可与测试样品中诊断感兴 趣的抗原量有关。筛选IL-17结合情况和/或其定量测定可用于，例如筛选IL-17 相关疾病或病症的患者，例如本文它处所述。在一个实施方式中，本发明诊断 方法包括(i)获得对象的组织或液体样品；（ii)使所述组织或液体样品与一种或 多种本发明结合成员接触；和(iii)与对照样品相比，检测结合的IL-17等步骤， 其中与对照相比，il-17结合量增加可表明il-17表达或活性水平异常。待测 试的组织或液体样品包括怀疑含有IL-17水平异常的血液、血清、尿、生物活检材料、肿瘤或任何组织。经测试IL-17水平或活性异常的阳性对象还可受益 于本文随后公开的治疗方法。
借鉴本文公开的方法，本领域技术人员可根据他们的偏好和普通知识选择 测定结合成员与抗原结合的合适方式。
可通过任何合适的方式测定样品中结合成员的反应性。放射免疫测定(RIA)
是可能的一种。放射性标记的抗原与未标记的抗原(测试样品)混合，使之与结 合成员结合。将结合的抗原与未结合的抗原物理分离，测定与结合成员结合的 放射性抗原量。测试样品中的抗原越多，与结合成员结合的放射性抗原越少。 还可采用含非放射性抗原的竞争性结合试验，利用与报道分子相连的抗原或类 似物。报道分子可以是具有独立的光谱吸收或发射特征的荧光染料、磷或激光 染料。合适的荧光染料包括荧光素、罗丹明、藻红蛋白、德克萨斯红和镧系螯 合剂或穴合物。合适的生色染料包括二氨基联苯胺。
其它报道分子包括大分子胶态颗粒或颗粒材料，例如有色的、磁性或顺磁 性的乳胶珠和能直接或间接产生可通过目测观察、电子检测或其它方式记录的 可检测信号的生物学或化学活性剂。例如，这些分子可以是酶，其催化反应以 产生或改变颜色或导致电子特性改变。它们可以是可激发的分子，因而能级之 间的电子转移可导致特征性吸收光谱或发射光谱。它们可包括与生物传感器联 用的化学实体。可以采用生物素/亲和素或生物素/链霉亲和素和碱性磷酸酶检 测系统。
可利用各结合成员-报道分子偶联物产生的信号获得样品(普通和测试)中 与结合成员结合情况有关的可定量绝对或相对数据。
本发明一方面还提供包含本发明任何方面或实施方式的结合成员的试剂 盒。在试剂盒中，可标记结合成员，从而能测定其在样品中的反应性，例如下 文所述。结合成员还可与或不与固体支持物相连。试剂盒的诸组分通常是无菌 的，放置在密封的小瓶或其它容器中。试剂盒可用于诊断分析或利用结合成员 的其它方法。试剂盒可装有在某方法，例如本发明方法中使用这些组分的使用 说明书。本发明试剂盒中可装有辅助物质从而能协助或实施这种方法。辅助物 质包括第二种不同的结合成员，其能结合第一结合成员并偶联于可检测标记物 (例如，荧光标记物、放射性同位素或酶)。抗体试剂盒还可装有用于实施免疫沉淀的珠。试剂盒的各组分通常装在适合于自身的容器中。因此，这些试剂盒 通常包含适合于各结合成员的不同容器。此外，这些试剂盒可装有实施试验及 解读和分析实施试验所得数据的方法的使用说明书。
本发明还提供以上结合成员检测竞争试验中抗原水平的应用，即在竞争试 验中利用本发明提供的结合成员检测样品中抗原水平的方法。这可能是无需物 理分离结合的与未结合的抗原的情况。可能将报道分子连接于结合成员，从而 结合的物理或光学发生改变。报道分子可以直接或间接产生可定量的可检测信 号。可以直接或间接，共价，例如通过肽键或非共价连接报道分子。经由肽键 连接可能是编码抗体或报道分子的融合基因的重组表达所致。
例如，本发明包括鉴定IL-17结合化合物的方法，包括(i)将IL-17固定于 支持物，（ii)使所述固定的IL-17同时或以分步方式与至少一种标记的测试结 合化合物接触，和(Hi)通过观察标记的结合成员的结合标签量的降低来鉴定新 IL-17结合化合物。
鉴定IL-17结合化合物的另一种方法可包括(i)将结合成员固定于支持物， (ii)使所述固定的结合成员同时或以分步方式与标记的IL-17和一种或多种未 标记的测试结合成员或结合化合物接触，和(iii)通过观察标记的IL-17的结合 标签量降低来鉴定新IL-17结合化合物。
可采用多孔或阵列形式，以高通量方式实施这些方法。还可在溶液中进行 这些试验，例如实施例2所述的HTRF⑧试验。例如，参见以引用方式全文纳 入本文的U.S. 5,814,468。如上所述，结合的检测可以直接由实施该方法的人员 解读，例如通过目测观察可检测标记物，或其存在量降低。或者，本发明的结 合成员可产生放射自显影照片、照片、计算机打印输出、流式细胞术报道、图 片、图表、含有结果的试管或容器或孔、或该方法结果的任何其它可见或物理 表现形式的报道。
竞争试验还可用于表位作图。在一个例子中，表位作图可用于鉴定IL-17 结合成员所结合的表位，所述结合成员任选具有优化的中和和/或调节特征。这 种表位可以是线形表位或构象表位。构象表位可包含至少两个不同的IL-17片 段，其中当IL-17折叠成其三级或四级结构以形成IL-17抑制剂，例如IL-17 结合成员识别的构象表位时所述片段的位置彼此毗邻。在测试竞争时，可利用抗原的肽片段，特别是包含感兴趣表位或基本上由其构成的肽。可利用具有表 位序列并在各端加有一个或多个氨基酸的肽。本发明结合成员可以如下所示， 即它们与抗原的结合被具有或包含所给定序列的肽抑制。
本发明还提供编码本发明结合成员的分离核酸。核酸可包含DNA和/或 RNA。在一方面，本发明提供编码上述本发明的CDR或CDR组或VH结构域 或VL结构域或抗体抗原-结合位点或抗体分子，例如scFv或IgG，如IgGl的 核酸。
本发明还提供质粒、载体、转录或表达盒形式的构建物，其包含至少一种 上述多核苷酸。
本发明还提供包含以上一种或多种构建物的重组宿主细胞。编码所述 CDR或CDR组或VH结构域或VL结构域或抗体抗原-结合位点或抗体分子， 例如scFv或IgGl的核酸本身构成本发明的一方面，这与产生所编码产物的方 法一样，该方法包括表达编码核酸。在合适的条件下培养含有该核酸的重组宿 主细胞不难实现表达。通过表达产生后，可采用任何合适的技术分离和/或纯化 VH或VL结构域或结合成员，然后适当使用。
本发明核酸可包含DNA或RNA，其可以是完全或部分合成的。除非另有 表述，述及本文所示核苷酸序列包括具有所示序列的DNA分子，还包括具有 所示序列的RNA分子，其中U取代T。
还有另一方面提供产生抗体VH可变域的方法，该方法包括表达编码核 酸。该方法可包括在产生所述抗体VH可变域的条件下培养宿主细胞。
产生VL结构域和包含VH和/或VL结构域的结合成员的类似方法是本发 明的其它方面。
制备方法可包括分离和/或纯化产物的步骤。制备方法可包括将产物配制 成含有至少一种其它组分，例如药学上可接受的赋形剂的组合物。
熟知在各种不同的宿主细胞中克隆和表达多核苷酸的系统。合适的宿主细 胞包括细菌、哺乳动物细胞、植物细胞、丝状真菌、酵母菌和杆状病毒系统及 转基因植物和动物。本领域熟知在原核细胞中表达抗体和抗体片段。综述可参 见Pliickthun1991。常用的细菌宿主是大肠杆菌。
作为制备结合成员的另一选择，本领域技术人员还能在培养的真核细胞中表达，例如Chadd和Chamow (2001)， Andersen和Krummen (2002)， Larrick 和Thomas (2001)。本领域可用于表达异源多肽的哺乳动物细胞系包括中国仓 鼠卵巢(CHO)细胞、HeLa细胞、幼仓鼠肾细胞、NS0小鼠黑色素瘤细胞、YB2/0 大鼠骨髓瘤细胞、人胚胎肾细胞、人胚胎视网膜细胞和许多其它细胞。
可以选择或构建含有合适的调节序列的合适载体，包括启动子序列、终止 子序列、多腺苷酸化序列、增强子序列、标记基因和其它序列(如果需要的话)。 载体可以是质粒，例如噬菌粒，或病毒，例如噬菌体(如果需要的话)。其它细 节可参见，例如Sambrook和Russell (2001)。 Ausubel 1999详细描述了操作核 酸的许多已知技术和方法，例如制备核酸构建物、诱变、测序、将DNA引入 细胞和基因表达以及分析蛋白质。
本发明的另一方面提供含有本文公开的核酸的宿主细胞。这种宿主细胞可 以在体外并可处于培养物中。这种宿主细胞可以在体内。宿主细胞的体内存在 可以将本发明结合处于分子内表达成"胞内抗体"或细胞内抗体。胞内抗体可用 于基因疗法。
还有另一方面提供了包括将本发明核酸引入宿主细胞的方法。可采用任何 合适的技术实施这种引入。对于真核细胞，合适的技术可包括磷酸钙转染、 DEAE-葡聚糖、电穿孔、脂质体介导的转染和利用逆转录病毒或其它病毒的转 导，例如痘苗病毒，或者就昆虫细胞而言是杆状病毒。将核酸引入宿主细胞， 特别是真核细胞可利用病毒或质粒系统。质粒系统可以维持于附加体或可掺入 宿主细胞或掺入人工染色体。掺入可以在随机的或在单一或多个基因座处耙向 整合一份或多份拷贝。对于细菌细胞，合适的技术可包括氯化钙转化、电穿孔 和利用细菌噬菌体转染。
引入后可表达核酸，例如通过在表达基因的条件下培养宿主细胞。可通过 本领域技术人员巳知的方法纯化表达的产物。
在一个实施方式中，本发明核酸整合入宿主细胞的基因组(例如，染色体)。 按照标准技术，纳入促进与基因组重组的序列可促进整合。
本发明还提供包括在表达系统中利用上述构建物以表达上述结合处于或 多肽的方法。
本发明结合成员可设计用于诊断或治疗人或动物对象，例如人的方法中。例如，结合成员可用于诊断或治疗IL-17相关疾病或病症，其例子如本文它处 所述。
可利用本发明结合成员治疗或诊断的病症的其它例子包括：
1. 呼吸道：气道的阻塞性疾病，包括：哮喘，包括支气管、过敏性、内 因性、外因性、运动诱发的、药物-诱发的（包括阿司匹林和NSAID-诱发的) 和灰尘诱发的哮喘，间歇的和持久的及所有严重程度，以及气道高反应性的其 它诱因；慢性阻塞性肺病（COPD);支气管炎，包括传染性和嗜曙红细胞性支 气管炎；肺气肿；支气管扩张；囊性纤维化；结节病；农民肺和相关疾病；超 敏感性肺炎；肺纤维化，包括隐原性纤维化肺泡炎、特发性间质肺炎、纤维变 性并发抗肿瘤治疗和慢性感染，包括结核病和曲霉病及其它真菌感染；肺移植 的并发症；肺血管的脉管炎和血栓疾病及肺动脉高压；止咳活性，包括治疗气 道的炎性和分泌条件相关的久咳和医源性咳嗽；急性和慢性鼻炎，包括药物性 鼻炎和血管舒缩性鼻炎；全年性鼻炎和季节性变应性鼻炎，包括神经性鼻炎 (枯草热)；鼻息肉病；急性病毒感染，包括普通感冒和呼吸道合胞体病毒、流 感病毒、冠状病毒(包括SARS)和腺病毒导致的感染；
2. 骨和关节：骨关节炎/骨关节病相关或包含骨关节炎/骨关节病的关节 炎，二者是原发性和继发性的，例如先天性髋关节发育不良；颈腰脊椎炎，和 腰颈疼痛；类风湿性关节炎和斯提耳病；血清阴性脊椎关节病，包括强直性脊 柱炎、银屑病关节炎、反应性关节炎和未分化脊柱关节病(undifferentiated spondarthropathy);脓毒性关节炎和其它感染相关的及骨疾病，例如结核病， 包括波特病和蓬塞综合征；急性和慢性晶体诱发的滑膜炎，包括尿酸痛风、磷 酸钙沉积病和钙磷灰石相关的腱、囊和滑膜炎症；贝切特病；原发性和继发性 斯耶格伦综合征；全身性硬化症和有限硬皮病；全身性红斑狼疮、混合型结缔 组织病和未分化的结缔组织病；炎性肌病，包括皮肌炎(dermatomyositits)和多 发性肌炎；风湿性多肌痛(polymalgiarheumatica);幼年型关节炎，包括任何关 节分布的特发性炎性关节炎和相关的综合征，和风湿热及其全身性并发症；血 管炎，包括巨细胞动脉炎、高安动脉炎、丘-施综合征、结节性多动脉炎、显 微多动脉炎和病毒感染、超敏反应、冷球蛋白和副蛋白相关的血管炎；腰痛； 家族性地中海热、穆-韦综合征和家族性爱尔兰热(Familial Hibernian Fever)、Kikuchi病(Kikuchi disease);药物诱发的关节痛、腱炎（tendonititides)和肌病；
3. 因损伤，例如运动损伤或疾病所致肌肉骨骼疾病的疼痛和结缔组织改 型：关节炎（例如类风湿性关节炎、骨关节炎、痛风或晶体关节病)、其它关节 疾病（例如，锥间盘变性或颞下颌关节变性)、骨改型疾病（例如，骨质疏松症、 佩吉特病或骨坏死)、多软骨炎（polychondritits)、硬皮病、混合型结缔组织 病、脊椎关节病或牙周病（例如，牙周炎)；
4. 皮肤：银屑病、特应性皮炎、接触性皮炎或其它湿疹性皮肤病和迟发 型超敏反应；植物性和光照性皮炎；脂溢性皮炎、疱疹样皮炎、扁平苔癣、硬 化萎縮苔癣、坏疽性脓皮症、皮肤结节病、盘状红斑狼疮、天疱疮、类天疱疮、 大疱性表皮松解症、荨麻疹、血管性水肿、血管炎、毒性红斑、表皮嗜曙红细 胞增多、斑秃、男性型秃发、斯威特综合征、韦伯-克里斯迁综合征、多形性 红斑；蜂窝组织炎、感染性和非感染性的；脂膜炎；表皮淋巴瘤、非黑色素瘤 皮肤癌和其它发育不良病损；药物诱发疾病，包括固定性药疹；
5. 眼睛：睑缘炎；结膜炎，包括终年和春季变应性结膜炎；虹膜炎；前 和后色素层炎；脉络膜炎；自身免疫(疾病)；影响视网膜的变性或炎性疾病； 眼炎，包括交感性眼炎；结节病；感染，包括病毒、真菌和细菌感染；
6. 胃肠道：舌炎、龈炎、牙周炎；食管炎，包括反流；嗜曙红胃肠炎、 肥大细胞增生病、克罗恩病、结肠炎，例如溃疡性结肠炎、未确定型结肠炎、 直肠炎、显微结肠炎、肛门瘙痒症(pruritisani);腹部疾病、肠应激综合征、应 激性肠病、非炎性腹泻和食品相关的过敏，其可能具有远离肠道的效应（例如， 偏头痛、鼻炎或湿疹)；
7. 腹部：肝炎，包括自身免疫性肝炎、酒精性肝炎和病毒性肝炎；肝纤 维化和肝硬化；胆囊炎；胰腺炎，急性和慢性的；
8. 生殖泌尿：肾炎，包括间质和肾小球肾炎；肾病综合征；膀胱炎，包 括急性和慢性（间质)膀胱炎和杭纳溃疡；急性和慢性尿道炎、前列腺炎、附睾 炎、卵巢炎和输卵管炎；女阴阴道炎；佩伦涅病；勃起机能障碍（男性和女性);
9. 同种异体移植物排异：在，例如肾脏、心脏、肝脏、肺、骨髓、皮肤
或角膜移植后或输血后的急性和慢性排异；或慢性移植物抗宿主病；
10. CNS:阿尔茨海默病和其它痴呆病，包括CJD和nvCJD;淀粉样变性；多发性硬化症和其它脱髓鞘综合征；脑动脉粥样硬化和血管炎；颞动脉炎；重 症肌无力；急性和慢性疼痛（急性、间歇性或持久性，无论中枢神经或外周神 经来源)，包括内脏痛、头痛、偏头痛、三叉神经痛、非典型面痛、关节和骨 疼痛、癌症和肿瘤侵袭产生的疼痛、神经性疼痛综合征，包括糖尿病、疱疹后、 和fflV-相关的神经病；神经类肉瘤病；恶性、感染性或自身免疫过程的中枢 神经系统和外周神经系统并发症；
11. 其它自身免疫和过敏性疾病，包括桥本甲状腺炎、格雷夫斯(氏)病、 阿狄森(氏)病、糖尿病、原发性血小板减少性紫癜、嗜酸细胞性筋膜炎、高-IgE 综合征(hyper-IgE syndrome)、抗磷脂综合征；
12. 具有炎性或免疫学组分的其它疾病：包括获得性免疫缺陷综合征 (AIDS)、麻风、塞扎里综合征和副肿瘤综合征(paraneoplastic syndrome);
13. 心血管：动脉粥样硬化，影响冠状动脉和外周循环；心包炎；心肌炎、 炎性和自身免疫性心肌病，包括心肌结节病；局部缺血性再灌注损伤；心内膜 炎、心瓣炎，和主动脉炎，包括感染性（例如梅毒)；血管炎；近端静脉和外周 静脉的疾病，包括静脉炎和血栓形成，包括深部静脉血栓形成和静脉曲张并发 症；禾口
14. 肿瘤学：治疗普通癌症，包括前列腺、乳腺、肺、卵巢、胰腺、肠和 结肠、胃、皮肤和脑肿瘤及影响骨髓(包括白血病)和淋巴组织增生系统的恶性 肿瘤，例如霍奇金和非霍奇金淋巴瘤；包括预防和治疗转移性疾病和肿瘤复发 及癌旁综合征。
因此，本发明结合成员可用作治疗涉及异常IL-17表达和/或活性的病症的 治疗剂。 一种实施方式是一种治疗方法，包括将有效量的本发明结合成员给予 需要其的患者，其中IL-17的异常表达和/或活性降低。另一种实施方式是一种 治疗方法，包括(i)鉴定证明IL-17水平或活性异常的患者，例如采用上述诊断 方法，和(ii)将有效量的本发明结合成员给予该患者，其中IL-17的异常表达 和/或活性降低。根据本发明，有效量是能降低IL-17的异常表达和域活性的 用量，从而能降低或减轻所治疗疾病或病症的至少一种症状，但无需治愈该疾 病或病症。因此，本发明的一个实施方式是治疗或减轻本文所述任何疾病的至 少一种症状的严重程度的方法，包括将有效量的一种或多种本发明结合成员单独或以组合治疗方案与本领域已知或本文所述的另一种合适药物联合给予有 此需要的患者，从而能降低所述疾病的至少一种症状的严重程度。本发明的另 一种实施方式是拮抗IL-17的至少一种效应的方法，包括接触或给予有效量的 一种或多种本发明结合成员，从而能拮抗IL-17的所述至少一种效应，例如 IL-17与IL-17RA结合或下游效应，例如细胞因子释放。
因此，本发明的其它方面提供治疗方法，包括给予所提供的结合成员、包 含这种结合成员的药物组合物，以及这种结合成员在制备给予的药物中的应 用，例如制备药物或药物组合物的方法，包括用药学上可接受的赋形剂配制结 合成员。药学上可接受的赋形剂可以是化合物或化合物的组合，其可纳入药物 组合物但不会造成继发性反应并能，例如促进活性化合物的给予，增加其体内 寿命和/或其效力，增加其在溶液中的溶解度或者延长其储存时间。这些药学上 可接受的载体是熟知的，本领域技术人员可改进这些载体以适应所选择活性化 合物的性质和给药方式。
本发明结合成员通常以药物组合物的形式给予，所述组合物可包含除结合 成员外的至少一种成分。因此，为用于本发明，除活性成分外，本发明的药物 组合物可包含药学上可接受的赋形剂、载体、缓冲液、稳定剂或本领域技术人 员熟知的其它物质。这些物质应无毒，不应干扰活性成分的效力。载体或其它 物质的精确性质取决于给药途径，其可以是口服、吸入或经注射，例如静脉内 给药。
本发明还考虑了口服给予的药物组合物，例如纳米体(nanobody)等。这种 口服制剂可以是片剂、胶囊、粉末、液体或半固体形式。片剂可以包含固体载 体，例如明胶或佐剂。液体药物组合物通常包含液体载体，例如水、石油、动 物或植物油、矿物油或合成的油。可以包括生理盐溶液、葡萄糖或其它糖溶液 或甘油，例如乙二醇、丙二醇或聚乙二醇。
对于静脉内注射，或在病患部位注射，活性成分可以是胃肠外可接受的水 溶液形式，其不含热原，pH、等渗性和稳定性合适。本领域相关技术人员能利 用，例如等渗载体，例如氯化钠注射液、林格注射液、乳酸林格注射液制备合 适的溶液。如果需要，可利用防腐剂、稳定剂、缓冲液、抗氧化剂和/或其它添 加剂，包括缓冲液，例如磷酸、柠檬酸、组氨酸和其它有机酸；抗氧化剂，例如抗坏血酸和甲硫氨酸；防腐剂（例如十八烷基二甲基苄基氯化铵；氯化六甲 双铵；氯化苯甲烃铵，氯化苄乙氧铵；苯酚、丁醇或苄醇；对羟基苯甲酸垸酯， 例如对羟基苯甲酸甲酯或丙酯；儿茶酚；间苯二酚；环己醇；3'-戊醇；和间-甲酚)；低分子量多肽；蛋白质，例如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水 性聚合物，例如聚乙烯吡咯垸酮；氨基酸，例如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、 组氨酸、精氨酸或赖氨酸；单糖、二糖和其它碳水化合物，包括葡萄糖、甘露 糖或糊精；螯合剂，例如EDTA;糖，例如蔗糖、甘露糖醇、海藻糖或山梨醇； 成盐抗衡离子，例如钠；金属络合物（例如，Zn-蛋白络合物)；和/或非离子表 面活性剂，例如TWEENTm、 PLURONICSTm或聚乙二醇（PEG)。
根据分子的理化特性和递送途径，可将本发明结合成员配制成液体、半固 体或固体形式。制剂可包含赋形剂或赋形剂的组合，例如糖、氨基酸和表面活 性剂。液体制剂包含的抗体浓度和pH范围很广。可通过，例如冷冻干燥、喷 雾干燥或超临界液体技术干燥来制备固体制剂。抗-IL-17的制剂取决于所需递 送途径：例如，肺部递送的制剂可由颗粒构成，其物理特性确保在吸入后能透 入肺深部；局部制剂可包含能延长药物在作用部位停留时间的粘性改性剂。在 某些实施方式中，可用能防止结合成员快速释放的载体制备结合成员，例如控 释制剂，包括植入体、透皮贴剂和微囊化递送系统。可利用生物可降解的、生 物相容的聚合物，例如乙烯乙酸乙烯酯、聚酑、聚乙醇酸、胶原、聚原酸酯和 聚乳酸。本领域技术人员已知制备这些制剂的许多方法。参见，例如Robinson， 1978。
可口服(例如，纳米体)、通过注射（例如，皮下、关节内、静脉内、腹膜 内、动脉内或肌肉内）、通过吸入、通过囊泡内途径（滴注入膀胱)或通过局部 (例如，眼内、鼻内、直肠、给予入伤口或给予皮肤上)给予利用本发明结合成 员的抗-IL-17治疗。可通过脉冲输注，特别是以剂量渐降的结合成员来给予治 疗。可以通过治疗的理化特征、通过疾病的具体考虑因素或优化效力或尽可能 降低副作用的要求来决定给药途径。 一种具体的给药途径是静脉内。给予本发 明药物组合物的另一种途径是皮下。估计抗-IL-17治疗不会局限于在诊所中使 用。因此，优选利用无针头装置的皮下注射。
依据待治疗的疾病，组合物可以单独或与其它治疗组合，同时或依次或作为含另一种治疗剂或多种药剂的组合制品给予。
IL-17的结合成员可用作与其它药物组分联用的组合治疗的一部分。可采 用组合治疗提供明显的协同作用，特别是抗-IL-17结合成员与一种或多种其它 药物的组合。就治疗本文所述的一种或多种疾病而言，IL-17的结合成员可同 时或依次或作为含另一种治疗剂或多种药剂的组合制品而给予。
可以组合或加入了一种或多种以下药剂的形式提供本发明结合成员：
-细胞因子功能的拮抗剂（例如，作用于细胞因子信号传导途径的药剂，
例如SOCS系统的调节剂)，例如a-、 P-和/或Y-干扰素；I型胰岛素样生长因子 (IGF-1),其受体和相关结合蛋白的调节剂；白介素（IL)，例如IL-l-33中的一 种或多种，和/或白介素拮抗剂或抑制剂，例如阿那白滞素；白介素家族成员的 受体的抑制剂或这些受体的特定亚单位的抑制剂；肿瘤坏死因子a (TNF-ot)抑 制剂，例如抗-TNF单克隆抗体（例如，英夫利昔单抗；阿达木单抗和/或 CDP-870)、禾口/或TNF受体拮抗剂，例如免疫球蛋白分子（例如依那西普)和/ 或低分子量药剂，例如已酮可可碱（pentoxyfylline);
-B细胞调节剂，例如耙向B-淋巴细胞（例如CDM (利妥昔单抗)或 MRA-alL16R)或T-淋巴细胞（例如，CTLA4-Ig、 HuMax 11-15或阿巴西普 (Abatacept))的单克隆抗体；
-抑制破骨细胞活性的调节剂，例如RANKL的抗体；
-趋化因子或趋化因子受体功能的调节剂，例如以下趋化因子的拮抗剂： CCR1、 CCR2、 CCR2A、 CCR2B、 CCR3、 CCR4、 CCR5、 CCR6、 CCR7、 CCR8、 CCR9、 CCR10和CCR11 (就C-C家族而言)；CXCR1 、 CXCR2、 CXCR3、 CXCR4 和CXCR5及CXCR6 (就C-X-C家族而言)和C-X3-C家族的CX3CR1;
-基质金属蛋白酶(MMP)，即以下一种或多种的抑制剂：间质溶解素、胶 原酶和明胶酶以及聚集蛋白聚糖酶；特别是胶原酶-1 (MMP1)、胶原酶-2 (MMP8)、胶原酶-3 (MMP13)、间质溶解素-1 (MMP3)、间质溶解素-2 (MMP10) 和/或间质溶解素-3 (MMPll)和/或MMP9和/或MMP12，例如强力霉素等药剂；
-白三烯生物合成抑制剂、5-脂肪氧合酶（5-L0)抑制剂或5-脂肪氧合酶活 化蛋白（FLAP)拮抗剂，例如：齐留通；ABT-761;芬留顿；替泊沙林； Abbott-79175; Abbott-85761; N-(5-取代的)-噻吩-2-垸基磺酰胺；2,6-二叔丁基苯酚腙；甲氧基四氢吡喃，例如泽尼卡ZD-2138;化合物SB-210661;吡啶基 -取代的2-氰基萘化合物，例如L-739，010; 2-氰基喹啉化合物，例如L-746，530; 吲哚和/或喹啉化合物，例如MK-591 、 MK-886和/或BAY x 1005;
-白三烯(LT) B4、LTC4、LTD4和LTE4的受体拮抗剂，选自：吩噻嗪-3-ls， 例如L-651,392;脒基化合物，例如CGS-25019c;氨基苯并恶唑类 (benzoxalamines)，例如昂唑司特；节脒类(benzenecarboximidamides)，例 如BIIL 284/260;和诸如扎鲁司特、阿鲁司特、孟鲁司特、普仑司特、维鲁司 特（MK-679)、 RG-12525、 Ro-245913、伊拉司特（CGP 45715A)和BAY x 7195 等化合物；
-磷酸二酯酶（PDE)抑制剂，例如甲基黄嘌呤（methylxanthanine)，如茶 碱和/或氨茶碱；和/或选择性PDE同工酶抑制剂，例如PDE4抑制剂和/或同种 型PDE4D的抑制剂，和/或PDE5抑制剂；
-1型组胺受体拮抗剂，例如西替立嗪、氯雷他定、地氯雷他定、非索非 那定、阿伐斯汀、特非那定、阿司咪唑、氮卓斯汀、左卡巴司汀、氯苯那敏、 普鲁本近、赛克利嗪和/或咪唑斯汀(通常口服、基部或胃肠外应用)；
-质子泵抑制剂（例如奥美拉唑)或胃保护性组胺2型受体拮抗剂；
-组胺4型受体拮抗剂；
-a-l/a-2肾上腺素受体激动剂、血管收縮剂、拟交感神经药，例如环己丙 甲胺、苯福林、苯丙醇胺、麻黄素、伪麻黄碱、盐酸萘甲唑啉、盐酸氧甲唑啉、 盐酸四氢唑啉、盐酸木甲唑啉、盐酸曲马唑啉和盐酸乙基去甲肾上腺素；
-抗胆碱药，例如毒蕈碱受体（Ml、 M2和M3)拮抗剂，例如阿托品、东 莨菪碱、甘罗溴铵（glycopynrolate)、异丙托溴铵、噻托溴铵、氧托溴铵、 哌仑西平和替仑西平；
-P-肾上腺素受体激动剂（包括P受体亚型1-4)，例如异丙肾上腺素、柳 丁氨醇、福莫特罗、沙美特罗、叔丁喘宁、间羟异丙肾上腺素、双甲苯喘定甲 磺酸盐和/或吡布特罗，例如它们的手性对映体；
-色酮，例如色甘酸钠和/或奈多罗米钠；
-糖皮质激素，例如氟尼縮松、羟氢化泼尼松縮丙酮、二丙酸氯地米松、 布地奈德、丙酸氟替卡松、环索奈德和/或糠酸莫米松；-调节核激素受体的药剂，例如aPPAR;
-免疫球蛋白（Ig)或Ig制品或调节Ig功能的拮抗剂或抗体，例如抗-IgE (例如，奥玛立珠单抗（omalizumab));
-其它全身性或局部应用的抗炎药，例如沙利度胺或其衍生物、类维生素
A、蒽三酚和/或卡泊三醇；
-氨基水杨酸盐和磺胺吡啶的组合，例如柳氮磺吡啶、美沙拉秦、巴柳氮
和奥沙拉秦；免疫调节剂，例如巯基嘌呤（thiopurines)和皮质类固醇，例如 布地奈德；
-抗菌剂，例如青霉素衍生物、四环素、大环内酯类、P-内酰胺、氟喹诺 酮、甲硝哒唑和/或吸入性氨基糖苷类；和/或抗病毒剂，例如阿昔洛维、泛昔 洛韦、缬昔洛韦、更昔洛韦、西多福韦；三环癸烷胺、金刚乙胺；利巴韦林； 扎那米韦和域奥塞米韦；蛋白酶抑制剂，例如印地那韦、那非那韦、利托那韦 和/或沙奎那韦；核苷逆转录酶抑制剂，例如地达诺新、拉米夫定、司他夫定、 扎西他滨、齐多夫定；非核苷逆转录酶抑制剂，例如奈韦拉平、依法韦仑；
-心血管药物，例如钙通道阻断剂、p-肾上腺素受体阻断剂、血管紧张素 转化酶（ACE)抑制剂、血管紧张素-2受体拮抗剂；降脂剂，例如他汀类和/或 贝特类；血细胞形态的调节剂，例如已酮可可碱；溶解血栓和/或抗凝剂，例 如血细胞聚集抑制剂；
-CNS药，例如抗抑郁药（例如舍曲林)、抗-帕金森药（例如塞利吉林、左 旋多巴、罗平尼咯、普拉克索、MAOB抑制剂，如塞乐金（selegine)和雷沙 吉兰、comP抑制剂，如托卡朋、A-2抑制剂、多巴胺再摄取抑制剂、NMDA 拮抗剂、烟碱激动剂、多巴胺激动剂和/或神经元一氧化氮合酶抑制剂)和抗阿 尔茨海默病药物，例如多奈哌齐、利凡斯的明、他克林、COX-2抑制剂、丙戊 茶碱或美曲磷酯；
-治疗急性和慢性疼痛的药剂，例如中枢或外周作用的镇痛剂，例如阿片 类似物或衍生物、卡巴米嗪、苯妥英、丙戊酸钠、阿米替林（amitiyptiline) 或其它抗抑郁药、对乙酰氨基酚或非类固醇抗炎药；
-胃肠外或局部-应用的（包括吸入的)局部麻醉剂，例如利诺卡因或其类 似物；-抗-骨质疏松剂，例如激素药物，如雷洛昔芬或双膦酸盐，如阿伦膦酸
;
-(i)胰蛋白酶抑制剂；（ii)血细胞活化因子（PAF)拮抗剂；（iii)白介素 转换酶（ICE)抑制剂；（iv)IMPDH抑制剂；（v)粘附分子抑制剂，包括VLA-4 拮抗剂；（vi)组织蛋白酶；（vii)激酶抑制剂，例如酪氨酸激酶抑制剂（例如， Btk、 Itk、 Jak3MAP抑制剂的例子可包括吉非替尼（Gefitinib)、甲磺酸伊马 替尼)、丝氨酸/苏氨酸激酶（例如，MAP激酶的抑制剂，如p38、 JNK、蛋白 激酶A、 B和C及IKK)、或参与细胞周期调节的激酶（例如，依赖周期蛋白的 激酶)；（viii)葡萄糖-6磷酸脱氢酶抑制剂；（ix)激肽-Br和/或B2-受体拮抗剂； (X)抗-痛风药剂，例如秋水仙素；（Xi)黄嘌呤氧化酶抑制剂，例如别嘌呤醇； (Xii)排尿酸剂，例如，丙磺舒、苯磺唑酮和/或苯溴马隆；（Xiii)生长激素促分 泌素；（xiv)转化生长因子（TGFP); (xv)血小板衍生的生长因子（PDGF); (xvi) 成纤维细胞生长因子，例如碱性成纤维细胞生长因子（bFGF); (xvii)粒细胞巨 噬细胞集落刺激因子（GM-CSF); (xviii)辣椒碱乳膏；（xix)速激肽NK4和/或 NK3受体拮抗剂，例如NKP-608C、 SB-233412 (他奈坦)和/或D-4418; (xx)弹 性蛋白酶抑制剂，例如UT-77和/或ZD-0892; (xxi) TNF-a转化酶抑制剂 (TACE); (xxii)诱导型一氧化氮合酶（iNOS)抑制剂或(xxiii)表达在TH2细胞 上的化学引诱物受体-同源分子，（例如，CRTH2拮抗剂)；（xxiv)P38的抑制剂； (xxv)调节Toll-样受体(TLR)的功能的药剂和(xxvi)调节嘌呤能受体活性的药 剂，例如P2X7; (xxvii)转录因子活化的抑制剂，例如NFkB、 API和/或STATS。
抑制剂可以是特异性抑制剂或可以是混合型抑制剂，例如靶向上述多种分 子(例如受体)或分子类型的抑制剂。
结合成员还可以共同给予或免疫偶联物的形式与化疗剂或另一种酪氨酸 激酶抑制剂联用。所述抗体非片段还可用在通过重组机制或生物化学偶联获得 的双特异性抗体中，从而能结合上述抗体的特异性与其它抗体的特异性，所述 其它抗体能识别涉及IL-17有关活性的其它分子。
对于治疗炎性疾病，本发明的结合成员可与一种或多种药剂组合，例如
-非类固醇抗炎药（以下称为NSAID)，包括无选择性环加氧酶（C0X)-1/ COX-2抑制剂，无论局部或全身性应用（例如吡罗昔康、双氯芬酸、丙酸，如甲氧萘丙酸、氟比洛芬、非诺洛芬、酮洛芬和布洛芬、芬那酯，如甲芬那酸、 吲哚美辛、舒林酸、阿扎丙宗、吡唑酮，例如苯丁唑酮、水杨酸盐，例如阿司 匹林)；选择性COX-2抑制剂（例如，美洛昔康、塞来考昔、罗非考昔、伐地 考昔、陆玛考昔(lumarocoxib)、帕瑞考昔和艾托考昔)；抑制一氧化氮供体的环 加氧酶(CINODs);糖皮质激素（无论通过局部、口服、肌肉内、静脉内或关节 内途径)；甲氨蝶呤、来氟米特；羟氯喹、d-青霉胺、金诺芬或其它胃肠外或口 服金制品；镇痛剂；双醋瑞因；关节内治疗，例如透明质酸衍生物；和营养添 加剂，例如葡糖胺。
本发明结合成员还可与治疗癌症的现有治疗剂组合使用。可组合使用的合 适药剂包括：
(i) 用于医学肿瘤学的抗增殖/抗肿瘤药物和它们的组合，例如烷化剂（例 如，顺铂、碳铂、环磷酰胺、氮芥、美法仑、瘤可宁、白消安和亚硝基脲)； 抗代谢物（例如，抗叶酸剂，如氟嘧啶，如5-氟尿嘧啶和替加氟、雷替曲塞、 甲氨蝶呤、阿糖胞苷、羟基脲、吉西他滨和紫杉醇；抗肿瘤抗生素（例如，蒽 环类抗生素，如阿霉素、博来霉素、多柔比星、道诺霉素、表柔比星、伊达比 星、丝裂霉素-C、更生霉素和光辉霉素)；抗(有丝分)裂剂（例如，长春花碱， 如长春新碱、长春碱、长春地辛和长春瑞滨及紫杉烷，如紫杉酚和泰索帝)； 和拓扑异构酶抑制剂（例如，鬼臼乙叉甙，如依托泊苷和替尼泊苷、安吖啶、 托泊替康及喜树碱)；
(ii) 细胞抑制药，例如抗雌激素（例如，他莫昔芬、托瑞米芬、雷洛昔芬、 屈洛昔芬和吲哚昔芬（iodoxyfene))、雌激素受体下调剂（例如，氟维司群)、 抗雄激素（例如，比卡鲁胺、氟他胺、尼鲁米特和醋酸环丙氯地孕酮)、LHRH 拮抗剂或LHRH激动剂（例如，戈舍瑞林、亮丙瑞林和布舍瑞林)、孕激素（例 如，醋酸甲地孕酮)、芳香酶抑制剂（例如，阿那曲唑、来曲唑、伏氯唑（vorazole) 和依西美坦)和5cc-还原酶的抑制剂，例如非那雄胺；
(iii) 抑制癌细胞侵袭的药剂（例如，金属蛋白酶抑制剂，如马立马司他和 尿激酶纤维蛋白溶酶原激活剂受体功能的抑制剂)；
(iv) 生长因子功能的抑制剂，例如，这种抑制剂包括生长因子抗体、生长 因子受体抗体（例如，抗-erbb2抗体，曲妥珠单抗和抗-erbbl抗体西妥昔单抗[C225])、法尼基转移酶抑制剂、酪氨酸激酶抑制剂和丝氨酸/苏氨酸激酶抑制 剂，例如，表皮生长因子家族抑制剂（例如，EGFR家族酪氨酸激酶抑制剂， 如N-(3-氯-4-氟苯基)-7-甲氧基-6-(3-吗啉基丙氧基)喹唑啉-4-胺（吉非替尼、 AZD1839)、 N-(3-乙炔基苯基)-6,7-二(2-甲氧基乙氧基)喹唑啉-4-胺（埃罗替尼 (erlotinib)、 OSI-774)和6-丙烯基酰氨基-N-(3-氯-4-氟苯基)-7-(3-吗啉基丙氧基) 喹唑啉-4-胺（CI 1033))，例如，血小板衍生的生长因子家族的抑制剂和例如， 肝细胞生长因子家族的抑制剂；
(v) 抗血管生成药剂，例如抑制血管内皮生长因子的作用的那些药剂，（例 如，抗血管内皮生长因子抗体贝伐珠单抗、国际专利申请WO 97/22596、 WO 97/30035、 WO 97/32856和WO 98/13354公开的化合物，各份专利全文纳入本 文)和以其它机制起作用的化合物（例如，利诺胺、整联蛋白ccvP3功能的抑制 剂和血管他丁)；
(vi) 血管破坏剂，例如考布他汀A4和国际专利申请WO 99/02166、 WO 00/40529、 WO 00/41669、 WO 01/92224、 WO 02/04434和WO 02/08213中公 开的化合物，各份专利全文纳入本文；
(vii) 反义治疗，例如，针对上述靶标的那些，如ISIS 2503、抗-ras反义；
(viii) 基因治疗方法，包括例如，替代异常基因，如异常p53或异常BRCA1 或BRCA2的方法、GDEPT(基因指导的酶前药治疗)方法，例如利用胞嘧啶脱 氨酶、胸苷激酶或细菌硝基还原酶的那些方法和增加患者对化疗或放疗耐受性 的方法，例如多药抗性基因治疗；和
(ix) 免疫治疗方法，包括例如，离体和体内方法以增加患者肿瘤细胞的免 疫原性，如用细胞因子，如白介素2、白介素4或粒细胞巨噬细胞集落刺激因 子转染，降低T细胞能量的方法，利用转染的免疫细胞，例如细胞因子转染的 树突细胞的方法，利用细胞因子转染的肿瘤细胞系的方法和利用抗独特型抗体 的方法。
本发明的结合成员和一种或多种上述其它医学组分可用于制备药物。药物 可以单独或组合给予个体，因此可包含结合成员和其它组分，例如组合制品或
单独的制品。单独的制品可用于促进单独且依次或同时给药，并能通过不同途 径，例如口服和胃肠外给药而给予诸组分。按照本发明，提供的组合物可给予哺乳动物。给药可以是"治疗有效量"， 这对于患者足以显示益处。这种益处可以至少缓解至少一种症状。所给予的实 际量和给药速度及时程取决于所治疗疾病的性质和严重程度，所治疗的具体哺 乳动物，各患者的临床病症，疾病的诱因，组合物的递送部位，结合成员的类 型，给药方法，给药时间表和医学开业人员已知的其它因素。普通开业人员和 其它医生负责治疗处方，例如剂量的决定等，其取决于所治疗疾病症状的严重 程度和/或进展。本领域熟知合适的抗体剂量(Ledermann 1991和Bagshawe 1991)。可利用适合于所给予药物类型的本文所述或Physician's Desk Reference(医师案头参考）（2003)的具体剂量。可通过在动物模型中比较其体外 活性和体内活性来测定本发明结合成员的治疗有效量或合适剂量。已知在小鼠 和其它测试动物中外推有效剂量的方法。精确剂量取决于许多因素，包括抗体 是用于诊断、预防还是治疗，治疗区域的大小和部位，抗体的精确性质(例如， 全抗体、片段或双抗体)和任何可检测标记物或与抗体相连的其它分子的性质。 对于全身性给药，典型抗体剂量是100 pg-l g，对于局部应用是1 pg-l mg。可 以先给予较高的加载剂量，然后给予一次或多次较低剂量。抗体一般是全抗体， 例如IgGl同种型。这是成年患者单次治疗的剂量，对于儿童和婴儿可作适当 调整，对于其它抗体形式也可根据分子量成比例地调节。治疗可遵医嘱以每日 一次、每种两次、每种一次或每月一次的间隔重复。治疗可以是每2-4周皮下 给予和每4-8州静脉内给予。在本发明的一些实施方式中，治疗是周期性的， 给药之间的时期约为两周或更长，例如约3周或更长，约4周或更长，或约每 月一次。在本发明的其它实施方式中，治疗可以在外科手术之前和/或之后给予， 可以直接给予或应用于外科手术治疗的解剖部位。
实施例l:抗体前导(Antibody lead)的分离 "遂雍
利用克隆入依据丝状噬菌体M13的噬菌粒载体的单链Fv(scFv)人抗体大 文库进行选择(Vaughan等1996; Hutchings等2001)。利用基本上如上所述的 重组人IL-17A进行多轮选择从噬菌体展示文库分离抗-IL-17A特异性scFv抗体(Vaughan等1996)。简言之，4。C将PBS(Dulbecco PBS， pH7.4)配制的人IL-17 吸附在微量滴定板的各孔上，过夜。用PBS洗涤各孔，然后用PBS-Marvel (3% w/v)封闭1小时。将PBS-Marvel (3% w/v)配制的纯化噬菌体加入各孔，使之与 包被的抗原结合1小时。用PBS-吐温（0.1% v/v)和PBS连续洗涤未结合的噬 菌体。洗脱结合的噬菌体颗粒，感染入细菌并拯救以进行下一轮选择(Vaughan 等1996)。
使代表性数量的第二轮选择的各克隆在96-孔板中生长。ScFv表达在细菌 周质中，采用人IL-17受体A结合试验筛选它们的抑制活性。对IL-17A:IL-17RA 相互作用显示明显抑制作用的scFv(作为周质粗提物)进行DNA测序(Vaughan 1996， Osbourn 1996)。独特的scFv在细菌中再次表达，亲和层析纯化(Bannister 等2006)，通过在HTRF⑧受体-配体结合试验和针对人和短尾猴IL-17的 HT1080 IL-6释放试验中检测纯化scFv的连续稀释液来测定1。5。值。
人2皿f"喊綠争微顿沐游遂雜微柙3n顺
采用DELFIA⑧表位竞争试验，通过检测与固定的各抗-IL-17抗体结合的 HIS标签IL-17A(HIS FLAG IL-17A)(内部，HEK EBNA衍生的）的抑制程度来 确定IL-17家族成员的抗体的物种交叉反应性和选择性。
在各试验中测试未标记的纯化人IL-17A(内部，大肠杆菌衍生的)、IL-17B (派普罗技术公司(Peprotech))、 IL-17C (RD系统公司(R & D Systems))、 IL-17D (派普罗技术公司)、IL-17E (RD系统公司)和IL-17F (派普罗技术公司)的滴度以 确定各IL-17家族成员的效力，如试验中ICso所测的。
在各试验中测试包括人、短尾猴（内部，大肠杆菌衍生的)和鼠科IL-17A (RD系统公司)在内的各种IL-17种类的滴度以确定这些抗体的物种交叉反应 性。
在磷酸缓冲盐水(PBS)中将纯化的IgG吸附到96-孔Maxisorp微量滴定板 (Nunc)上，对于该具体IgG，当将生物素化的人IL-17A大致以其估计Kd加入 时其浓度能获得明显的信号。用PBS-吐温（0.1% v/v)洗去过量的IgG，用 PBS-Marvel (3% w/v)封闭各孔1小时。在PBS中制备竞争对手(鼠科或短尾猴 IL-17A或IL-17家族成员)的连续稀释液，其浓度始于生物素化人IL-17A与各 自IgG之间相互作用的Kd值的约200倍。未生物素化的人IL-17A用作阳性对照。向该连续稀释液中加入浓度约是Kd2倍的等体积生物素化重组人 IL-17A(获得竞争抗原:生物素化人IL-17A的起始比例约为100:1的连续稀释 液)。然后将这些混合物转移到封闭的IgG上，平衡1小时。用PBS-吐温（0.1% v/v)洗涤除去未结合的抗原，而用链霉亲和素-铕3+偶联物(DELFIA⑧检测，帕 金埃尔默公司(PerkinElmer))检测剩下的生物素化人IL-17A。利用EnVision平 板读数计(帕金埃尔默公司)检测620 nm的时间-分辨荧光。将荧光数据转换为 %特异性结合(100%从含有生物素化人IL-17A但不含竞争对手的对照孔测定， 0。/o从含有生物素化人IL-17A和超过100倍的未生物素化人IL-17A的孔测定)。 利用图垫公司的Prism曲线拟合软件分析得到的数据以测定IC5o值。因为各IgG 对IL-17A的亲和力不同，应采用不同的试验条件，结果表示为人IL-17A和竞 争抗原之间IC5o值的差别倍数。从而能比较不同的IgG。
表/, 乂/丄-77v4券会/gG试f 「£>£丄尸"甥*/丄-77家，^^^浙^"/^/丄-77 神鄉资力
| 标题 | 发布/更新时间 | 阅读量 |
|---|---|---|
| 一种牙周炎治疗装置 | 2020-05-14 | 938 |
| 一种治疗牙周炎的药剂 | 2020-05-15 | 944 |
| 一种治疗牙周炎的药物 | 2020-05-15 | 427 |
| 一种治疗牙周炎的中药 | 2020-05-15 | 588 |
| 治疗慢性牙周炎的中药 | 2020-05-16 | 444 |
| 一种治疗牙周炎的中药 | 2020-05-16 | 123 |
| 一种治疗牙周炎的药物 | 2020-05-17 | 826 |
| 一种治疗牙周炎的中药 | 2020-05-17 | 972 |
| 一种治疗牙周炎的药物 | 2020-05-13 | 726 |
| 防治牙周炎的DNA疫苗 | 2020-05-14 | 327 |
高效检索全球专利专利汇是专利免费检索,专利查询,专利分析-国家发明专利查询检索分析平台，是提供专利分析，专利查询，专利检索等数据服务功能的知识产权数据服务商。
我们的产品包含105个国家的1.26亿组数据，免费查、免费专利分析。
专利汇分析报告产品可以对行业情报数据进行梳理分析，涉及维度包括行业专利基本状况分析、地域分析、技术分析、发明人分析、申请人分析、专利权人分析、失效分析、核心专利分析、法律分析、研发重点分析、企业专利处境分析、技术处境分析、专利寿命分析、企业定位分析、引证分析等超过60个分析角度，系统通过AI智能系统对图表进行解读，只需1分钟，一键生成行业专利分析报告。
