单胺氧化酶-B选择性抑制剂化合物、其药物组合物及应用
阅读：1007发布：2021-01-15
专利汇可以提供单胺氧化酶-B选择性抑制剂化合物、其药物组合物及应用专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 描述了一系列用于抑制单胺 氧 化酶 具有如式I所示结构的化合物，以及其用于 治疗 一屏障性 疾病 、肥胖、固体上皮细胞 肿瘤 转移、糖尿病、一自身免疫和 炎症 性疾病或一心血管代谢紊乱的用途。，下面是单胺氧化酶-B选择性抑制剂化合物、其药物组合物及应用专利的具体信息内容。
1.一种化合物，所述化合物具有如式II所示的结构：
其中，
A1选自H、F、Cl、Br、I、CN、OMe、NO2和CO2H；
A2选自H、F、Cl、Br、I、CN、OMe、NO2和CO2H；
E1为 以及E2为H；或者、
E1和E2形成具有 结构的环；
其中，
D为H、Me、CH2Cl、CH2F、CH2Br、CH2I、CH2CN、CH2CH2OH、CH2OCH2-苯基、CH2OH或CO2Me；
以及G为CH2N(Me)CH2CO2H。
2.如权利要求1所述的化合物，其中，
A1选自H、F、Cl、Br、CN、OMe、NO2和CO2H；
A2选自H、F、Cl、Br、CN、OMe、NO2和CO2H；以及
D为H、Me、CH2Cl、CH2CN、CH2CH2OH、CH2OCH2-苯基、CH2OH或CO2Me。
3.如权利要求1所述的化合物，其中，
A1选自H、F、Cl、Br、CN、OMe、NO2和CO2H；
A2选自H、F、Cl、Br、CN、OMe、NO2和CO2H；以及
D为Me、CH2Cl、CH2CN、CH2CH2OH、CH2OCH2-苯基、CH2OH或CO2Me。
4.如权利要求1所述的化合物，其中，
A1选自H、F、Cl、Br、OMe和NO2；
A2选自H、F、Cl、Br、OMe和NO2；以及
D为Me、CH2Cl、CH2CN、CH2OH或CO2Me。
5.如权利要求1所述的化合物，其中，
A1为H、F、Cl、Br或OMe；
A2为H、F、Cl、Br或OMe；以及
D为Me、CH2Cl或CH2OH。
6.如权利要求1所述的化合物、其中所述化合物选自
中的一个。
7.如权利要求1所述的化合物、其中所述化合物选自：
中的一个。
8.如权利要求1所述的化合物、其中所述化合物选自：
中的一个。
9.权利要求1-8的MAO-B选择性抑制剂在制备用于治疗屏障性疾病、肥胖、固体上皮细胞肿瘤转移、糖尿病、自身免疫和炎症性疾病或心血管代谢紊乱的药物中的应用。
10.如权利要求9所述的应用，其中所述屏障性疾病为败血症、克罗恩病、溃疡性结肠炎、牙周炎、致病菌引起的腹泻疾病或哮喘。
11.如权利要求9所述的应用，其中所述心血管代谢紊乱为高血压、血脂异常、高血压或胰岛素抵抗。
12.如权利要求9所述的应用，其中所述自身免疫和炎症性疾病为类风湿性关节炎。
13.一商用包装，其包括：(a)权利要求1-8中任一项的化合物；和(b)使用所述化合物治疗屏障性疾病、肥胖、固体上皮细胞肿瘤转移、糖尿病、自身免疫和炎症性疾病或心血管代谢紊乱的说明书。
14.一商用包装，其包括：(a)具有减弱的血脑屏障渗透能力的选自权利要求1-8中任一项的化合物的MAO-B选择性抑制剂；和(b)使用所述具有减弱的血脑屏障渗透能力的MAO-B选择性抑制剂治疗屏障性疾病的说明书，所述方法包括给所需对象施药。
15.具有减弱的血脑屏障渗透能力的选自权利要求1-8中任一项的化合物的MAO-B选择性抑制剂在制备治疗屏障性疾病药物中的应用。
16.如权利要求15所述的应用，其中所述具有减弱的血脑屏障渗透能力的MAO-B选择性抑制剂为权利要求1-12中任一项的化合物。
17.一种药物组合物，所述药物组合物包括：(a)权利要求1-8任一项化合物；和(b)药学上可接受的载体。
单胺氧化酶-B选择性抑制剂化合物、其药物组合物及应用
[0001] 相关申请的交叉引用
[0002] 本申请要求于2013年8月30日提交的美国临时申请No.61/872,552的优先权。
技术领域
背景技术
[0004] 上皮形成生命所需的屏障。对于一直暴露于食物性抗原、环境抗原、常驻菌群和外来菌群的口腔和胃肠道粘膜组织，这尤为正确。一个屏障要存在，需要维持细胞间隙，而这通过紧密连接(TJ)复合体的组织来实现。多分子的紧密连接复合体在细胞的顶端部分形成一个带部，并最好分为三组：(i)形成桥接细胞间隙线的完整的紧密连接蛋白，其由claudin蛋白、闭合蛋白(occludins)，以及连接粘附分子等蛋白构成；(ii)胞质交界分子，例如具有PDZ结构域的紧密连接蛋白，即小带闭合蛋白(ZO-1、ZO-2、ZO-3)；和(iii)肌动蛋白细胞骨架。当聚集时，因配对的紧密连接跨膜蛋白中存在含水孔，紧密连接显示出对细胞间转运的离子和尺寸选择性。紧密连接复合体的完整依赖于claudin蛋白和肌动蛋白细胞骨架间的连接，其主要由含有PDZ结构域的胞质蛋白ZO-1、-2和-3介导。
[0005] 双调蛋白，一种自分泌生长因子，调控屏障的机理尚未完全弄清，但近来提出了H2O2/TACE/EGFR配体/EGFR信号轴，也被称作“氧化剂诱导的金属蛋白酶依赖的EGFR反激活”通路(Forsyth,C.B.,et al.J Pharmacol Exp Ther,2007.321(1):84-97)。Putnins等使用牙周疾病小鼠模型发现了在病态的牙周组织中EGFR信号增长(Firth,J.D.,et al.J Clin Periodontol.2013 40(1):8-17)。对炎症性肠病(IBD)，例如，克罗恩病和溃疡性结肠炎，的病人的组织分析也显示双调蛋白的表达主要在上皮，然而在健康病人中双调蛋白缺失(Nishimura,T.,et al.Oncol Rep,2008.19(1):105-10)。
发明内容
[0006] 本发明部分基于偶然发现某些化合物可以选择性抑制单胺氧化酶-B(MAO-B)，并且这些化合物可具有减弱的渗透血脑屏障的能力。因此，这些化合物可能在抑制MAO-B是有益的疾病的治疗中有重要应用。这些化合物可能对本发明描述的抑制MAO-B可能有益的非中枢神经系统(non-CNS)疾病有特别的用途，其中，这些化合物有限的或减弱的血脑屏障渗透度可有利于减弱或消除不期望的副作用，这些副作用在现有的多种MAO-B抑制剂，例如丙炔苯丙胺，中很常见。
[0007] 依据一个实施方案，提供了一种化合物，该化合物具有如式I所示的结构：
[0008]
[0009] 其中，
[0010] R1可选自下述基团：H、C1-4烷基，其中所述C1-4烷基中的一碳可选地被一O或NR13杂原子取代，并且一个或多个所述C1-4烷基氢原子可选地被一C5-7环烷基取代，其中所述C5-7环烷基环可选地被一O或N杂原子取代，并且一个或多个所述C5-7环烷基的环氢原子可选独立地被CF3、F、Cl、Br、I、CN、NO2、COR14、SO2N(R14)2、CO2H、CON(R14)2、NHCHO、OR15、N(R15)2、Ar和HetAr取代；R2可选自下述基团：H、C1-4烷基，其中所述C1-4烷基中一碳可选地被一O或NR13杂原子取代，并且一个或多个所述C1-4烷基的氢原子可选地被一C5-7环烷基取代，其中所述C5-7环烷基环可选地被一O或N杂原子取代，并且一个或多个所述C5-7环烷基的环氢原子可选独立地被CF3、F、Cl、Br、I、CN、NO2、COR14、SO2N(R14)2、CO2H、CON(R14)2、NHCHO、OR15、N(R15)2、Ar和HetAr取代；R3可选自下述基团：H、C1-4烷基，其中所述C1-4烷基中的一碳可选地被一O或NR13杂原子取代，并且一个或多个所述C1-4烷基的氢原子可选地被一C5-7环烷基取代，其中所述C5-7环烷基环可选地被一O或N杂原子取代，并且一个或多个所述C5-7环烷基的环氢原子可选独立地被CF3、F、Cl、Br、I、CN、NO2、COR14、SO2N(R14)2、CO2H、CON(R14)2、NHCHO、OR15、N(R15)2、Ar和HetAr取代；R13可为H或甲基；R14可为H或甲基；R15可为H，甲基或CF3；Ar可为
[0011] 其中，R16-R20可任意并独立地选自H、C1-4烷基、F、Cl、Br、I、CF3、CN、NO2、OR13、N(R13)2、COR14、CO2R14、CONHR14、SO2N(R14)2；其中，HetAr可为一未取代或被多样取代的嘧啶、呋喃、噻吩、咪唑、吡咯、噁唑、异噁唑、噻唑或异噻唑环；R4可选自H、CN、NO2、COR14、NHCHO、SO2N(R14)2、CONHR14、CO2R14、吡咯、四唑、噁二唑和N-羟基吡唑；R5可选自H、CN、NO2、COR14、NHCHO、SO2N(R14)2、CONHR14、CO2R14、吡咯、四唑、噁二唑和N-羟基吡唑；R6可为H或CH2N(Me)CH2CO2H；R7可选自H、甲基、CH2Cl、CH2F、CH2Br、CH2CN、CH2CH2OH、CH2OCH2-苯基、CH2OR14、CON(R14)2、CO2R14、吡咯、四唑、噁二唑、N-羟基吡唑；
[0012] R8为其中，X可为N或C；R9可为H、甲基、乙基、异丙基；R10可为H、甲基、乙基、CH2OH、CH2SH、CH2CO2H、CH2CH2CO2H、CH2C(O)NH2、CH2CH2CONH2；R11可为CO2H、磷酸基(phosphate)、N-羟基吡唑、芳基-R12、杂芳基-R12；R12可为CO2H、磷酸基(phosphate)、CN；并且其中：R1和R2可选地通过a共价连接形成一C5-7环状结构，其中该环状结构可选地包括二氧亚甲基(-
OCH2O-)、四氢呋喃(-OCH2CH2-)、二氧六环(-OCH2CH2O-)、内酯(-O(C＝O)CH2-或-O(C＝O)CH2CH2-)、不饱和内酯(-O(C＝O)CHCH-)、嘧啶、呋喃、噻吩、咪唑、吡咯、噁唑、异噁唑、噻唑或异噻唑环状结构；R2和R3可选地通过b共价连接形成一C5-7环状结构，其中该环状结构可选地包括二氧亚甲基(-OCH2O-)、四氢呋喃(-OCH2CH2-)、二氧六环(-OCH2CH2O-)、内酯(-O(C＝O)CH2-或-O(C＝O)CH2CH2-)、不饱和内酯(-O(C＝O)CHCH-)、嘧啶、呋喃、噻吩、咪唑、吡咯、噁唑、异噁唑、噻唑或异噻唑环状结构；R5和R6可选地通过c共价连接形成一C5-7环状结构，其中所述键d可为单键或双键，并且其中该环结构可为吡啶、嘧啶、异噁唑、异噻唑、呋喃、吡唑、吡咯、噻吩或具有通式结构 的不饱和δ-内酯；R4和R7可选地通过e共价连接
形成一选自 的双环结构；R9和R11可选地通过f共价连接形成
氮杂环，其中所述氮杂环可包括：吡咯、咪唑、噻唑、噁唑。
OCH2O-)、四氢呋喃(-OCH2CH2-)、二氧六环(-OCH2CH2O-)、内酯(-O(C＝O)CH2-或-O(C＝O)CH2CH2-)、不饱和内酯(-O(C＝O)CHCH-)、嘧啶、呋喃、噻吩、咪唑、吡咯、噁唑、异噁唑、噻唑或异噻唑环状结构；R2和R3可选地通过b共价连接形成一C5-7环状结构，其中该环状结构可选地包括二氧亚甲基(-OCH2O-)、四氢呋喃(-OCH2CH2-)、二氧六环(-OCH2CH2O-)、内酯(-O(C＝O)CH2-或-O(C＝O)CH2CH2-)、不饱和内酯(-O(C＝O)CHCH-)、嘧啶、呋喃、噻吩、咪唑、吡咯、噁唑、异噁唑、噻唑或异噻唑环状结构；R5和R6可选地通过c共价连接形成一C5-7环状结构，其中所述键d可为单键或双键，并且其中该环结构可为吡啶、嘧啶、异噁唑、异噻唑、呋喃、吡唑、吡咯、噻吩或具有通式结构 的不饱和δ-内酯；R4和R7可选地通过e共价连接
形成一选自 的双环结构；R9和R11可选地通过f共价连接形成
氮杂环，其中所述氮杂环可包括：吡咯、咪唑、噻唑、噁唑。
[0013] 依据一进一步的实施方案，提供了一具有如式II所示结构的化合物：其中：A1可选自F、Cl、Br、I、CN、OMe、NO2和CO2H；A2可选自F、
Cl、Br、I、CN、OMe、NO2和CO2H；E1可为 以及E2可为H；或者，E1和E2形成一具有
结构的环；其中：D可为H、Me、CH2Cl、CH2F、CH2Br、CH2I、CH2CN、CH2CH2OH、CH2OCH2-苯基、CH2OH或CO2Me；以及G可为CH2N(Me)CH2CO2H。
Cl、Br、I、CN、OMe、NO2和CO2H；E1可为 以及E2可为H；或者，E1和E2形成一具有
结构的环；其中：D可为H、Me、CH2Cl、CH2F、CH2Br、CH2I、CH2CN、CH2CH2OH、CH2OCH2-苯基、CH2OH或CO2Me；以及G可为CH2N(Me)CH2CO2H。
[0014] 依据一进一步的实施方案，提供了一具有如式III所示结构的化合物：其中：A1可选自F、Cl、Br、I、CN、OMe、NO2和CO2H；A2可选自F、
Cl、Br、I、CN、OMe、NO2和CO2H；E1可为 以及E2可为H；或者E1和E2形成一具有
结构的环；其中：D可为H、Me、CH2Cl、CH2F、CH2Br、CH2I、CH2CN、CH2CH2OH、CH2OCH2-苯基、CH2OH或CO2Me；以及G可为CH2N(Me)CH2CO2H
Cl、Br、I、CN、OMe、NO2和CO2H；E1可为 以及E2可为H；或者E1和E2形成一具有
结构的环；其中：D可为H、Me、CH2Cl、CH2F、CH2Br、CH2I、CH2CN、CH2CH2OH、CH2OCH2-苯基、CH2OH或CO2Me；以及G可为CH2N(Me)CH2CO2H
[0015] 依据一进一步的实施方案，提供了一商用包装，其包括：(a)本发明所描述的化合物；和(b)使用所述化合物在治疗屏障性疾病、肥胖、固体上皮细胞肿瘤转移、糖尿病、自身免疫和炎症性疾病或心血管代谢紊乱的说明书。
[0016] 依据一进一步的实施方案，提供了一商用包装，其包括：(a)具有减弱的血脑屏障渗透能力的MAO-B选择性抑制剂；和(b)使用所述具有减弱的血脑屏障渗透能力的MAO-B选择性抑制剂治疗屏障性疾病的说明书，所述方法包括给需要治疗的对象施药。
[0017] 依据一进一步的实施方案，提供了本发明所述化合物在治疗屏障性疾病、肥胖、固体上皮细胞肿瘤转移、糖尿病、自身免疫和炎症性疾病或心血管代谢紊乱中的应用。
[0018] 依据一进一步的实施方案，提供了本发明所述化合物在制备用于治疗屏障性疾病、肥胖、固体上皮细胞肿瘤转移、糖尿病、自身免疫和炎症性疾病或心血管代谢紊乱的药物中的应用。
[0019] 依据一进一步的实施方案，提供了一种用于治疗屏障性疾病的具有减弱的血脑屏障渗透能力的MAO-B选择性抑制剂。
[0020] 依据一进一步的实施方案，提供了一种用于制备治疗屏障性疾病药物的具有减弱的血脑屏障渗透能力的MAO-B选择性抑制剂。
[0021] 依据一进一步的实施方案，提供了用于治疗屏障性疾病、肥胖、固体上皮细胞肿瘤转移、糖尿病、自身免疫和炎症性疾病或心血管代谢紊乱的本发明所述化合物。
[0022] 依据一进一步的实施方案，提供了一药物组合物，所述药物组合物包括：(a)本发明所述化合物；和(b)药学上可接受的载体。
[0023] 依据一进一步的实施方案，提供了治疗屏障性疾病、肥胖、固体上皮细胞肿瘤转移、糖尿病、自身免疫和炎症性疾病或心血管代谢紊乱的方法，所述方法包括给需要治疗的对象施予本发明所述MAO-B选择性抑制剂。
[0024] 依据一进一步的实施方案，提供了治疗屏障性疾病的方法，所述方法包括给需要治疗的对象施予具有减弱的血脑屏障渗透能力的MAO-B选择性抑制剂。
[0025] R1可选自下述基团：H、CF3、F、Cl、Br、I、CN、NO2、COR14、SO2N(R14)2、CO2H、CON(R14)2、NHCHO、OR15、N(R15)2、Ar、HetAr、C1-4烷基，其中所述C1-4烷基中一碳可选地被一O或NR13杂原子取代，并且一个或多个所述C1-4烷基的氢原子可选地被C5-7环烷基取代，其中所述C5-7环烷基环可选地被一O或N杂原子取代，并且其中一个或多个所述C5-7环烷基的环氢原子可选独立地被CF3、F、Cl、Br、I、CN、NO2、COR14、SO2N(R14)2、CO2H、CON(R14)2、NHCHO、OR15、N(R15)2、Ar和HetAr取代。
[0026] R2可选自下述基团：H、CF3、F、Cl、Br、I、CN、NO2、COR14、SO2N(R14)2、CO2H、CON(R14)2、NHCHO、OR15、N(R15)2、Ar、HetAr、C1-4烷基，其中所述C1-4烷基中一碳可选地被一O或NR13杂原子取代，并且一个或多个所述C1-4烷基的氢原子可选地被C5-7环烷基取代，其中所述C5-7环烷基环可选地被O或N杂原子取代，并且其中一个或多个所述C5-7环烷基的环氢原子可选独立地被CF3、F、Cl、Br、I、CN、NO2、COR14、SO2N(R14)2、CO2H、CON(R14)2、NHCHO、OR15、N(R15)2、Ar和HetAr取代。
[0027] R3可选自下述基团：H、CF3、F、Cl、Br、I、CN、NO2、COR14、SO2N(R14)2、CO2H、CON(R14)2、NHCHO、OR15、N(R15)2、Ar、HetAr、C1-4烷基，其中所述C1-4烷基中一碳可选地被O或NR13杂原子取代，并且一个或多个所述C1-4烷基的氢原子可选地被C5-7环烷基取代，其中所述C5-7环烷基环可选地被O或N杂原子取代，并且其中一个或多个所述C5-7环烷基的环氢原子可选独立地被CF3、F、Cl、Br、I、CN、NO2、COR14、SO2N(R14)2、CO2H、CON(R14)2、NHCHO、OR15、N(R15)2、Ar和HetAr取代。
[0028] R1可为H。R2可为C1-4烷基，其中所述C1-4烷基中一碳可选地被O取代，并且其中一个或多个所述C1-4烷基的氢原子可选地被C5-7环烷基取代，其中所述C5-7环烷基环可选地被O或N杂原子取代，并且其中一个或多个所述C5-7环烷基的环氢原子可选独立地被CF3、F、Cl、Br、I、CN、NO2、OMe、COR14、SO2N(R14)2、CO2H、CON(R14)2和NHCHO取代。R3可为H。R4可选自H、CN、NO2、COR14、NHCHO、SO2N(R14)2、CONHR14和CO2R14。R5可选自H、CN、NO2、COR14、NHCHO、SO2N(R14)2、CONHR14和CO2R14。R6可为H或CH2N(Me)CH2CO2H。R7可选自H、Me、CH2Cl、CH2F、CH2Br、CH2CN、CH2CH2OH、CH2OCH2-苯基、CH2OR14和CO2R14。R8可为 R9可为H、甲基或乙基。R10可为H、甲基、乙基、CH2OH、CH2SH、CH2CO2H、CH2CH2CO2H、CH2C(O)NH2或CH2CH2CONH2。R13可为H或甲基。R14可为H或甲基。R15可为H、甲基或CF3。R1和R2可选地通过a共价连接形成C5-7环状结构，其中该环状结构可选地包括二氧亚甲基(-OCH2O-)、四氢呋喃(-OCH2CH2-)、二氧六环(-OCH2CH2O-)、内酯(-O(C＝O)CH2-或-O(C＝O)CH2CH2-)、不饱和内酯(-O(C＝O)CHCH-)、嘧啶、呋喃、噻吩、咪唑、吡咯、噁唑、异噁唑、噻唑或异噻唑环状结构。R4和R7可选地通过e共价连接形成具有下述结构的双环结构：
[0029] R2可为C1-4烷基，其中所述C1-4烷基中一碳可选地被O取代，并且一个或多个所述C1-4烷基的氢可选地被C5-7环烷基取代，其中一个或多个所述C5-7环烷基的环氢原子可选独立地被F、Cl、Br、I、CN、NO2、OMe和CO2H取代。R4可为H。R5可为H。R6可为H。R7可为H、甲基、CH2Cl、CH2F、CH2Br、CH2CN、CH2CH2OH、CH2OCH2-苯基、CH2OH或CO2Me。R8可为 R1和R2可选地通过a共价连接形成具有如下结构的双环结构： R4和R7可选地通过e
共价连接形成具有如下结构的双环结构：
共价连接形成具有如下结构的双环结构：
[0030] A1可选自F、Cl、Br、CN、OMe、NO2和CO2H。A2可选自F、Cl、Br、CN、OMe、NO2和CO2H。D可为H、甲基、CH2Cl、CH2CN、CH2CH2OH、CH2OCH2-苯基、CH2OH或CO2Me。A1可选自F、Cl、Br、CN、OMe、NO2和CO2H。A2可选自F、Cl、Br、CN、OMe、NO2和CO2H。D可为甲基、CH2Cl、CH2CN、CH2CH2OH、CH2OCH2-苯基、CH2OH或CO2Me。
[0031] A1可选自F、Cl、Br、OMe和NO2。A2可选自F、Cl、Br、OMe和NO2。D可为甲基、CH2Cl、CH2CN、CH2OH或CO2Me。
[0032] A1可为F、Cl、Br或OMe。A2可为F、Cl、Br或OMe。D可为甲基、CH2Cl或CH2OH。
[0033] 所述化合物可选自：
[0034]中的一个。
[0035] 所述化合物可选自：中
的一个。
的一个。
[0036] 所述化合物可选自：中的一个。
[0037] 所述化合物可为
[0038] 所述屏障性疾病可为败血症、克罗恩病、溃疡性结肠炎、牙周炎、致病菌引起的腹泻疾病或哮喘。所述心血管代谢紊乱可为高血压、血脂异常、高血压或胰岛素抵抗。所述自身免疫和炎症性疾病可为类风湿性关节炎。
[0039] 所述具有减弱的血脑屏障渗透能力的MAO-B选择性抑制剂可为本发明所述化合物。所述屏障性疾病可为败血症、克罗恩病、溃疡性结肠炎、牙周炎、致病菌引起的腹泻疾病或哮喘。所述心血管代谢紊乱可为高血压、血脂异常、高血压或胰岛素抵抗。所述自身免疫和炎症性疾病可为类风湿性关节炎。所述具有减弱的血脑屏障渗透能力的MAO-B选择性抑制剂可为本发明所述化合物。所述屏障性疾病可为败血症、克罗恩病、溃疡性结肠炎、牙周炎、致病菌引起的腹泻疾病或哮喘。所述心血管代谢紊乱可为高血压、血脂异常、高血压或胰岛素抵抗。所述自身免疫和炎症性疾病可为类风湿性关节炎。
附图说明
附图说明
[0040] 现在参照附图对本发明进行更为详尽的说明。
[0041] 图1为合成极性丙炔苯丙胺类似物A-T的合成方案。
[0042] 图2为制备极性丙炔苯丙胺类似物U的合成方案。
[0043] 图3为制备极性丙炔苯丙胺类似物V和W的合成方案。
[0044] 图4为制备极性丙炔苯丙胺类似物X、Y、Z、AA和AB的合成方案。
[0045] 图5为制备极性丙炔苯丙胺类似物AC的合成方案。
[0046] 图6为合成香豆素衍生物AD的合成方案。
[0047] 图7为修饰丙炔苯丙胺以得到新极性类似物的三区域图解，该新极性类似物保持对MAO-B的亲和力，同时消除或降低血脑屏障渗透能力。
[0048] 图8为衍生自沙芬酰胺(Safinamide)和香豆素的分子1到4。
[0049] 图9为丙炔苯丙胺和氯吉兰(clorgyline)对于MAO-A和MAO-B酶活力的活性和选择性。一进行无细胞荧光MAO-A和B检测分析以评价重组人MAO-A和MAO-B的酶活力。不出所料，MAO-B选择性抑制剂丙炔苯丙胺，展现出对MAO-B的高抑制活性，通过计算IC50为0.0068μM。MAO-A选择性抑制剂氯吉兰，展现出对MAO-A的高抑制活性，通过计算IC50为0.00027μM。重复该分析以确证数据。
[0050] 图10A和B显示了新合成MAO-B抑制剂对于MAO-A和MAO-B酶活力的活性和选择性。进行无细胞荧光MAO-A和B的检测分析以评价化合物PS-RG0103，PS-RG0216，PS-RG0245和PS-AD0191对重组人MAO-A和MAO-B的酶活力。我们新合成的MAO-B抑制剂PS-RG0103，PS-RG0216，PS-RG0245和PS-AD0191，分别对MAO-B的IC50值为0.27，0.20，0.21和0.30μM。化合物PS-RG0103和PS-RG0216对MAO-A无活性。化合物PS-RG0245和PS-AD0191对MAO-A的IC50值分别为17.2和54.6μM。重复该分析以确证数据。
[0051] 图11显示了丙炔苯丙胺，西替利嗪(cetirizine)和新合成的MAO-B抑制剂体外血脑屏障渗透度的比较。野生型Madin-Darby犬细胞(MDCK-WT)用于预测化合物PS-RG0103，PS-RG0216，PS-RG0245和PS-AD0191的中枢神经系统渗透度。同样测试了已知的可渗透和不可渗透中枢神经系统的化合物，分别为丙炔苯丙胺和西替利嗪，以用于比较。丙炔苯丙胺展-6现出高渗透度，通过计算表观渗透度(Papp)为44.0±2.5(x10 cm/s)。西替利嗪，由于其减弱的血脑屏障渗透能力1而具有低镇静作用的H1拮抗抗组胺剂，具有低Papp值1.7±1.3(x10-
6cm/s)。为了比较，我们新合成的MAO-B抑制剂PS-RG0103，PS-RG0216，PS-RG0245和PS-AD0191，同样分别具有低Papp值2.2±0.2，1.2±0.1，3.6±0.2和7.9±1.4(x10-6cm/s)。具有事后Dunnett多重比较实验的单因素方差分析显示在MDCK-WT细胞中，所有四个新合成的MAO-B抑制剂具有显著弱于丙炔苯丙胺的可渗透性，但是PS-RG0103，PS-RG0216和PS-
RG0245与西替利嗪无不同。重复实验三次。
6cm/s)。为了比较，我们新合成的MAO-B抑制剂PS-RG0103，PS-RG0216，PS-RG0245和PS-AD0191，同样分别具有低Papp值2.2±0.2，1.2±0.1，3.6±0.2和7.9±1.4(x10-6cm/s)。具有事后Dunnett多重比较实验的单因素方差分析显示在MDCK-WT细胞中，所有四个新合成的MAO-B抑制剂具有显著弱于丙炔苯丙胺的可渗透性，但是PS-RG0103，PS-RG0216和PS-
RG0245与西替利嗪无不同。重复实验三次。
[0052] 1Snowman AM and Snyder SH.Cetirizine:actions on neurotransmitter receptors.J Allergy Clin Immunol.1990；86(6pt 2):p.1025-8.
[0053] 图12A-C显示了丙炔苯丙胺，PS-RG0103和PS-RG0216在小鼠和人肝微粒体中的稳定性试验。(A)丙炔苯丙胺，已知的不可逆的MAO-B选择性抑制剂，在室温下60分钟后在小鼠和人微粒体中留存分别显示少于2.5％和15％。化合物(B)PS-RG0103和(C)PS-RG0216显示60分钟的稳定性，69％和74％的化合物分别留存于小鼠微粒体中，93％和91％的化合物分别留存于人微粒体中。
[0054] 图13为丙炔苯丙胺，PS-RG0103和PS-RG0216的小鼠肝细胞稳定性分析。丙炔苯丙胺，已知的MAO-B抑制剂，在室温下60分钟后显示少于2.5％留存。化合物PS-RG0103和PS-RG0216分别显示稳定性为101％和100％。
[0055] 图14显示了MAO-B蛋白表达优先被诱导于患有溃疡性结肠炎(UC)病人的病灶。从患有溃疡性结肠炎病人的肠的病灶处和非病灶(对照)处取活体组织。所述活体组织在使用预冷的异戊烷/液氮浴的冷模中经快速冷冻并插入待测化合物(O.C.T.compound)。对于免疫荧光，组织在3％多聚甲醛中固定并用5％血清，0.05％吐温-20和含0.1％BSA的PBS溶液封闭。使用5μg/mL的小鼠抗-MAO-A抗体(MilliporeTM，Cat#MABN306)对MAO-A进行组织染色，TM用1.25μg/mL的兔抗claudin蛋白-3抗体(Invitrogen ，Cat#341700)进行复染以突显上皮细胞紧密连接，并用AlexaFluor594TM山羊抗-兔IgG(红色–未显示)和AlexaFluor488TM山羊抗-小鼠IgG(绿色–未显示)分别标注作为第二抗体。使用15μg/mL兔抗-MAO-B抗体(SigmaTM，Cat#M1946)对MAO-B进行组织染色，用10μg/mL小鼠抗-claudin蛋白-1抗体(InvitrogenTM，Cat#37-4900)进行复染以突显上皮细胞紧密连接，并用AlexaFluor568TM山羊抗-小鼠IgG(红色–未显示)以及AlexaFluor488TM山羊抗-兔IgG(绿色–未显示)分别标注作为第二抗体，并使用共聚焦显微术在63×倍放大下检测。代表性的图片(来自病人2)显示MAO-A表达(红色)主要位于上皮细胞(绿色–未显示)，在健康位置和病灶位置有微小变化。相反，与MAO-A表达相比，在非病灶上皮细胞中MAO-B蛋白表达(红色–未显示)微弱。然而，在病灶位置MAO-B表达明显增长在上皮和结缔组织区。
[0056] 图15A-C为丙炔苯丙胺在三种上皮细胞系中减弱LPS-诱导的屏障损失。在TranswellTM培养室中培养的猪韧带上皮细胞系(PLE)，大鼠肠上皮细胞系(IEC-6)以及MadinDarby犬肾细胞系(MDCK-I)并使用LPS±丙炔苯丙胺(D)处理。PLE，IEC-6，和MDCK在72小时受到LPS(L)±丙炔苯丙胺的检验。MDCK-I培养系用系列浓度的LPS和40μM丙炔苯丙胺处理。在每一例中，处理后每48小时测量TEER。发现具有统计学上显著差异。特别地，在全部三种细胞系中，LPS显著减少了所述屏障(TEER)(p<0.01)[#s2，4，和6]以及LPS+丙炔苯丙胺显著诱导了TEER在对照(CTL)(p<0.01)[#s1，3，和5]之上。
[0057] 图16显示了MAO-A/B，MAO-B和MAO-A系抑制剂唯一地影响MDCK-I细胞TEER。Transwell培养系在72小时(T)后细胞盘中处理。使用具有Tukey事后测试的单因素方差分析实验，对144小时屏障(TEER)的分析发现在使用LPS的TER中(p<0.01)显著减少。相对于对照(CTL)(p<0.01)，5和40μm苯乙肼，5和40μm丙炔苯丙胺和帕吉林(pargyline)，和5μm吗氯贝胺(moclobemide)的TEER得到提高。然而，5和40μm氯吉兰显著地减少了屏障(p<0.01)。
[0058] 图17显示了在MDCK(NBL-2)细胞中，丙炔苯丙胺和新的MAO-B抑制剂对跨膜电阻(TEER)的影响。(A).MDCK(NBL-2)细胞以42000cells/cm2的密度接种在包含10％FBS的MEMα介质(#12561-056，GibcoTM)的24-孔聚酯Transwell小室。在接种后第2天开始使用ERS-2压阻计(MilliporeTM)测量TEER，随后改变介质。在第3天测量TEER并使用在
介质(箭头处)中的10μM丙炔苯丙胺，RG0103，RG0216，RG0245或溶剂(H2O)对照处理细胞。在第6，7，8，9，10和13天测试TEER。仅在第6和8天改变包括上述处理的介质。数据表示平均±标准偏差(n＝4)。(B).每天的P值和处理组与溶剂对照比较。使用SPSS(IBM)中的单因素方差分析实验和Tukey事后测试确定统计学意义。
介质(箭头处)中的10μM丙炔苯丙胺，RG0103，RG0216，RG0245或溶剂(H2O)对照处理细胞。在第6，7，8，9，10和13天测试TEER。仅在第6和8天改变包括上述处理的介质。数据表示平均±标准偏差(n＝4)。(B).每天的P值和处理组与溶剂对照比较。使用SPSS(IBM)中的单因素方差分析实验和Tukey事后测试确定统计学意义。
[0059] 图18显示了在Caco-2细胞中，丙炔苯丙胺和新的MAO-B抑制剂对跨膜电阻(TEER)2
的影响。A.Caco-2细胞以76000cells/cm 的密度接种于包含10％FBS、1×GlutaMax(#
35050-061，GibcoTM)和1×青霉素-链霉素(#15140-122，GibcoTM)DMEM介质(#10313-021，GibcoTM)的24-孔聚酯Transwell小室。在接种后第2天开始使用 ERS-2压阻计
(MilliporeTM)测量TEER，随后改变介质。在第5，7，9，11和13天介质改变后测量TEER。在第14天使用在介质(箭头处)中的20μM丙炔苯丙胺，RG0103，RG0216，RG0245，AD0191或溶剂(H2O)对照处理细胞。在第16，19，21和23天测量TEER，并且包括上述处理改变介质。数据表示平均±标准偏差(n＝4)。(B).每天的P值和处理组与溶剂对照比较。使用SPSS(IBM)中的单因素方差分析实验和Tukey事后测试确定统计学意义。
的影响。A.Caco-2细胞以76000cells/cm 的密度接种于包含10％FBS、1×GlutaMax(#
35050-061，GibcoTM)和1×青霉素-链霉素(#15140-122，GibcoTM)DMEM介质(#10313-021，GibcoTM)的24-孔聚酯Transwell小室。在接种后第2天开始使用 ERS-2压阻计
(MilliporeTM)测量TEER，随后改变介质。在第5，7，9，11和13天介质改变后测量TEER。在第14天使用在介质(箭头处)中的20μM丙炔苯丙胺，RG0103，RG0216，RG0245，AD0191或溶剂(H2O)对照处理细胞。在第16，19，21和23天测量TEER，并且包括上述处理改变介质。数据表示平均±标准偏差(n＝4)。(B).每天的P值和处理组与溶剂对照比较。使用SPSS(IBM)中的单因素方差分析实验和Tukey事后测试确定统计学意义。
[0060] 图19显示了LPS-和TNFα处理的人结肠癌上皮细胞(Caco-2)在使用丙炔苯丙胺和RG0216后的IL-8蛋白表达衰减。Caco-2细胞以83300cells/cm2的密度接种于包含10％FBS的DMEM介质(#10313-021，GibcoTM)的聚苯乙烯96-孔板中。在接种后的第5天，使用包含2.5％FBS的新鲜介质替换孔。在第6或7天仅使用1μg/mLLPS或50ng/mLTNFα、或者1μg/mLLPS或TNFα+20μM丙炔苯丙胺或RG0216处理细胞4，12或24h。经处理细胞的上层清液使用人促炎症7-PlexUltra-SensitiveKitTM(K15008C，MSDTM)分析促炎症细胞因子蛋白和抗炎症细胞因子蛋白，通过SectorImager2400A(MSDTM)检测。左侧图：使用对照样(仅介质)、1μg/mLLPS或50ng/mLTNFα处理的细胞的上清液中IL-8蛋白的绝对浓度。右侧图：使用1μg/mLLPS或
50ng/mLTNFα±丙炔苯丙胺或RG0216诱导或减弱的IL-8绝对浓度。处理细胞的上清液细胞因子浓度减去对照的上清液细胞因子浓度即得数据。结果表示为平均±标准偏差(n＝3)。
使用SPSS(IBMTM)中的单因素方差分析实验和Tukey事后测试，比较对照和LPS或TNFα(E&F)(上侧图)或LPS或TNFα和丙炔苯丙胺或RG0216(下侧图)比较，确定统计学意义。*p<.05，**p<.001
50ng/mLTNFα±丙炔苯丙胺或RG0216诱导或减弱的IL-8绝对浓度。处理细胞的上清液细胞因子浓度减去对照的上清液细胞因子浓度即得数据。结果表示为平均±标准偏差(n＝3)。
使用SPSS(IBMTM)中的单因素方差分析实验和Tukey事后测试，比较对照和LPS或TNFα(E&F)(上侧图)或LPS或TNFα和丙炔苯丙胺或RG0216(下侧图)比较，确定统计学意义。*p<.05，**p<.001
[0061] 图20A-F显示了在LPS-处理的人肠微脉管内皮细胞(HIMEC)在使用丙炔苯丙胺和新的MAO-B抑制剂后的IL-8(A&B)，IL-6(C&D)和TNFα蛋白表达衰减。人微脉管内皮细胞以37500cells/cm2的密度接种于包含20％FBS的MCDB131介质(#10372-019，GibcoTM)的纤连蛋白包覆的聚苯乙烯96-孔板中。在接种后的第2天，使用包含2.5％FBS的新鲜介质替换孔。在第3天仅使用10，100，1000ng/mlLPS、或者1000ng/mLLPS+10μM丙炔苯丙胺，RG0103，RG0216，RG0245或AD191处理细胞1或3h。使用人促炎症7-PlexUltra-SensitiveKitTM(K15008C，MSD)分析经处理的细胞的上清液促炎症细胞因子蛋白和抗炎症细胞因子蛋白，通过
SectorImager2400A(MSD)测量。左侧图：使用对照样(仅介质)或递进浓度的LPS处理的细胞的上清液中IL-8，IL-6和TNFα蛋白的绝对浓度。右侧图：使用1000ng/mLLPS±新的MAO-B抑制剂诱导或减弱的IL-8，IL-6或TNFα绝对浓度。经处理的细胞上清液细胞因子浓度减去对照的上清液细胞因子浓度即得数据。结果表示为平均±标准偏差(n＝3)。使用SPSS(IBM)中的单因素方差分析实验和Tukey事后测试，比较对照和LPS(左侧图)或LPS和新的MAO-B抑制剂(右侧图)比较，确定统计学意义。*p<.05，**p<.001
SectorImager2400A(MSD)测量。左侧图：使用对照样(仅介质)或递进浓度的LPS处理的细胞的上清液中IL-8，IL-6和TNFα蛋白的绝对浓度。右侧图：使用1000ng/mLLPS±新的MAO-B抑制剂诱导或减弱的IL-8，IL-6或TNFα绝对浓度。经处理的细胞上清液细胞因子浓度减去对照的上清液细胞因子浓度即得数据。结果表示为平均±标准偏差(n＝3)。使用SPSS(IBM)中的单因素方差分析实验和Tukey事后测试，比较对照和LPS(左侧图)或LPS和新的MAO-B抑制剂(右侧图)比较，确定统计学意义。*p<.05，**p<.001
[0062] 图21A和B显示了3％DSS诱导的结肠炎和保护上皮细胞-细胞cliaudin蛋白-3位置。对照，丙炔苯丙胺±DSS处理的C57BL/6小鼠使用含3％DSS的饮用水处理并于第7天宰杀。(A).在DSS-处理的小鼠中总结肠影像与较松的粪便有关，H&E染色部分表示更深的隐窝和无序的上皮细胞。(B).对照小鼠展示了经典的claudin蛋白-3定位，其于DSS-处理的小鼠中被严重阻断。相反，于DSS+丙炔苯丙胺处理的动物中claudin蛋白-3更好地集中于上皮细胞与细胞间连接。通过DAPI(蓝)染色显示了在DSS-处理的动物中提升的细胞渗透。
[0063] 图22A和B显示了丙炔苯丙胺对C57BL/6小鼠中DSS-诱导的结肠炎的影响。雌性8-12周龄C57BL/6小鼠，体重近似20g，获得于CharlesRiver。通过在饮用水中添加2.5％DSS(40-50kDa，AffymetrixTM)7天诱导结肠炎。从第8天起，给所有组水。在DSS处理前两天，对小鼠皮下注射3mg/kg丙炔苯丙胺，随后在剩余的研究中每天一次。每一个处理小组由5只在同一笼子中的小鼠组成。在整个实验过程中，饮用溶液在给小鼠之前称重，并于随后几天里确定消耗量(A)。每日测量体重，并通过将特定日的体重除以第2天的体重计算。数据以自第2天起的百分数变化表示(B)。
具体实施方式
[0064] 任何本发明未直接定义的术语应当被理解为具有其在本发明的技术领域中通常被理解的含义。除非有其它的说明，说明书中所使用的下属术语应当被理解为具有下述的含义。
[0065] 发明人已经展示了在上皮屏障疾病模型中，促氧化酶单胺氧化酶B(MAO-B)的基因和蛋白表达增长。在两个体外模型中，发明人已经展示了临床上允许的MAO抑制剂惊人地提高了屏障，减少了牙周病并在人致病E.coli感染的Citrobacter rodentium腹泻模型中保护了胃肠道屏障。这些发现表明了MAO抑制剂可以用于控制黏膜疾病。然而，目前的MAO抑制剂渗透血脑屏障(BBB)，而这与明显的不良作用和药物间相互作用相关。MAO抑制剂，尤其是具有减弱的渗透血脑屏障能力的MAO-B抑制剂，可在不具有本发明描述的这些不期望的副作用的情况下，用于治疗非中枢神经系统疾病，例如上皮屏障疾病。
[0066] 本发明所使用的术语上皮疾病和内皮疾病分别是指包括上皮细胞和内皮细胞的疾病。本发明所使用的屏障性疾病是指上皮疾病和内皮疾病。在胃肠道中，上皮细胞形成屏障以防止间质组织微生物污染的同时支持营养物和水的传输。与质膜一起，胞间紧密连接是上皮屏障功能的首要细胞决定因素。作为特定蛋白突变或异常的监管信号的结果，紧密连接结构的破坏可为疾病的起因和结果。多种胃肠道疾病被表征为上皮屏障疾病，包括克罗恩病和溃疡性结肠炎。相似的，许多口腔疾病，例如牙周炎，是上皮屏障疾病。其他涉及上皮细胞的疾病可包括哮喘。内皮细胞疾病可包括LPS诱导的内皮细胞渗透力过大。
[0067] 屏障性疾病的另一例子为败血症。在内皮细胞中LPS诱导的细胞因子/趋势因子表达基于一个前提，即MAO-B抑制剂可能能够用于治疗败血症引起的血管崩溃。人们相信，败血症诱导了内皮细胞系统范围的细胞因子风暴，转而导致细胞因子表达，失去屏障这可能导致血管崩溃。
[0068] 尽管上皮细胞固态肿瘤可能并不被视作屏障性疾病，但其也很可能从还可用于减少上皮细胞固态肿瘤转移的MAO-B特定抑制剂中获益。
[0069] 据报道，使用非选择性的MAO抑制剂(苯乙肼和反苯环丙胺(tranylcypromine))治疗可能会中止或缓解类风湿性关节炎，可能通过抑制PGE2的合成(Lieb，(1983)IntJImmunopharmacol.983；5(4):353-7；US4409243；和US4490385)和/或通过降低肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平(Altschuleretal.，(2000)IntJImmunopharmacol.2000Nov；22(11):
1007-8)。
1007-8)。
[0070] 肥胖是由脂肪组织过多积累所定义的一种慢性疾病。近30年，随着全球肥胖普及度近翻倍，肥胖的患病率显著增加。世界卫生组织报道在2008年，10％20岁以上的男性和14％20岁以上的女性被归为肥胖，代表了合并估计世界范围内多于五亿的成人(WHO，
2013)。肥胖经常导致一系列的不良并发症的形成，包括2型糖尿病，炎症性疾病(例如类风湿性关节炎)、心血管代谢紊乱，并增加一系列肿瘤形成的风险。肥胖定义为具有大于等于
30的身体质量指数(BMI)。该指数是一个人的体重相对于身高的量度。BMI通过体重(单位为千克)除以身高(单位为米)的平方计算得到。正常和健康的体重被定义为具有20到24.9之间的BMI。治疗肥胖聚焦于减少患者的脂肪组织量，进而降低BMI水平到较正常范围。
2013)。肥胖经常导致一系列的不良并发症的形成，包括2型糖尿病，炎症性疾病(例如类风湿性关节炎)、心血管代谢紊乱，并增加一系列肿瘤形成的风险。肥胖定义为具有大于等于
30的身体质量指数(BMI)。该指数是一个人的体重相对于身高的量度。BMI通过体重(单位为千克)除以身高(单位为米)的平方计算得到。正常和健康的体重被定义为具有20到24.9之间的BMI。治疗肥胖聚焦于减少患者的脂肪组织量，进而降低BMI水平到较正常范围。
[0071] 临床上显示，MAO抑制剂能被用于治疗中枢神经系统疾病。然而，他们还拥有通过外围机理(例如非中枢神经系统)抗肥胖的活性的发现提供了治疗肥胖的新方法。MAO-被发现存在于许多外围组织(非中枢神经系统)(Saura et al.,(1992)J Neurosci.12(5):1977-99)，人腹部和乳房脂肪细胞具有高水平的MAO活性(Pizzinat et al.,(1999)
Biochem Pharmacol.58(11):1735-42)。资料显示，使用非选择性MAO-A/B抑制剂苯乙肼可抑制脂肪细胞中MAO活性(Carpénéet al.,Pharmacol Res.(2008)57(6):426-34)。此外，在肥胖和不肥胖的大鼠中，苯乙肼抑制了MAO活性，减少了体重增加，并减少了腹内脂肪组织(Carpénéet al.,Pharmacol Res.(2007)56(6):522-30；Carpénéet al.,Pharmacol Res.(2008)57(6):426-34)。
Biochem Pharmacol.58(11):1735-42)。资料显示，使用非选择性MAO-A/B抑制剂苯乙肼可抑制脂肪细胞中MAO活性(Carpénéet al.,Pharmacol Res.(2008)57(6):426-34)。此外，在肥胖和不肥胖的大鼠中，苯乙肼抑制了MAO活性，减少了体重增加，并减少了腹内脂肪组织(Carpénéet al.,Pharmacol Res.(2007)56(6):522-30；Carpénéet al.,Pharmacol Res.(2008)57(6):426-34)。
[0072] 在Jenrin Discovery，Inc.进一步的工作中(US 2007/0078172；US 2014/0155355；US 8541475；US 8,138,209；US 7956220)发现，通过14周的研究，与未处理的对照相比，使用选择性MAO-B抑制剂L-司来吉兰(L-selegiline)处理的大鼠少了14％的体重增加。显然，两组的进食量是相当的，意味着减少的体重增加并非中枢神经系统介导的食欲抑制作用的结果。在研究结束时，个体组织和器官重量的分析揭示了减少的体重增加几乎唯一地是因为在脂肪组织中的选择性减少。对总体脂的评估揭示，与对照大鼠相比，给予L-司来吉兰的大鼠总体脂减少了30％。最后，总体肥胖的生物标记血浆瘦素水平，在给予L-司来吉兰的大鼠中显著降低(41％)。
[0073] 如果MAO抑制剂对中枢神经系统的影响可以减少或消除，其外围介导的抗肥胖性质可使其用作临床相关的治疗肥胖病和其引致的各种并发症的治疗剂。因此，亟需寻找具有有限或无中枢神经系统作用的MAO-B抑制剂。这些MAO-B抑制剂有望在基本不减少摄入卡路里的情况下促进体重减轻。这些抑制剂可以与设计用作食欲抑制剂或脂肪酶抑制剂的试剂联用，以期望产生减轻体重的额外或协同作用。类似地，展示出能够治疗上述适应症(例如糖尿病、心血管代谢紊乱、炎症性疾病及其组合)的MAO-B抑制剂与一种或多种其他试剂联用希望是有益的，通过产生，例如，额外或协同作用。
[0074] 本发明所使用的术语“MAO-B”是指单胺氧化酶B，在人体内通过MAOB基因，EntrezGene ID:4129编码的酶。单胺氧化酶是催化单胺氧化的一族酶。在人体中，有两种类型，单胺氧化酶A(MAO-A)和单胺氧化酶B(MAO-B)。
[0075] 在本领域内，MAO-抑制剂是已知的(例如，丙炔苯丙胺和氯吉兰以及JenrinDiscovery,Inc.中，US 2007/0078172,US 2014/0155355,US 8541475,US 8,138,
209和US 7956220中所描述的化合物)。此外，本申请给出了一系列具有理想活性的化合物。
测试过的化合物列于下表1中。
209和US 7956220中所描述的化合物)。此外，本申请给出了一系列具有理想活性的化合物。
测试过的化合物列于下表1中。
[0076] 表1 测试过的化合物
[0077]
[0078]
[0079]
[0080]
[0081]
[0082]
[0083] 技术人员可以理解COOH和N(R)2可包含相应的离子，例如分别地包含羧酸盐离子和铵离子。或者，在显示离子的部位，本领域技术人员会理解其反离子也可能存在。
[0084] 本领域技术人员一般认为在特定的环境本发明所描述的所述基团与所述化合物的共价连接点可，例如但不限于，断开。特定环境可包括，例如但不限于，体内酶或非酶方法。基团的断开可，例如但不限于，自发地或在其他试剂的催化或诱导下，或者物理参数或环境参数，例如酶、光、酸、温度或pH，的变化下发生。基团可以为，例如但不限于，用作掩饰官能团的保护基团，作为一种或多种主动或被动转运机理底物的基团，或者用作影响或增强所述化合物性质的基团，例如，溶解性、生物利用度或定位能力。
[0085] 在一些实施方案中，上述式I和式II化合物可用于以下一种或多种中至少一种适应症的系统治疗：炎症性肠道疾病(例如克劳恩病、溃疡性结肠炎)、牙周疾病，哮喘和LPS诱导的内皮细胞渗透力过大。在一些实施方案中，式I或式II化合物可用于制备系统治疗本发明所述适应症的药物或组合物。在一些实施方案中，还提供了系统治疗本发明所述任一适应症的方法。
[0086] 本发明所述化合物可为游离形式或其盐的形式。在一些实施方案中，本发明所述化合物可为药学上可接受的盐的形式，这在本领域内是公知的(Berge S.M.et al.,J.Pharm.Sci.(1977)66(1):1-19)。本发明所使用的药学上可接受的盐包括，例如，具有母体化合物所期望的药学活性的盐(该盐保持了母体化合物的生物学活性和/或性质，且其不是生物学不期望的和/或其他不期望的盐)。本发明所述化合物具有一个或多个能够成盐的官能团可以，例如，形成药学上可以接受的盐。包含一个或多个基础官能团的化合物可与药学上可接受的有机或无机酸形成药学上可接受的盐。药学上可接受的盐可源自，例如但不限于，乙酸、己二酸、海藻酸、天冬氨酸、抗坏血酸、苯甲酸、苯磺酸、丁酸、肉桂酸、柠檬酸、樟脑酸、樟脑磺酸、环戊基丙酸、二乙基乙酸、二葡糖酸、十二烷基磺酸、乙基磺酸、甲酸、反丁烯二酸、葡庚糖酸、葡糖酸、甘油磷酸、乙醇酸、半磺酸、庚酸、己酸、盐酸、氢溴酸、氢碘酸、2-羟基乙烷磺酸、异烟酸、乳酸、苹果酸、马来酸、丙二酸、扁桃酸、甲基磺酸、2-萘磺酸、萘二磺酸、对甲苯磺酸、烟碱酸、硝酸、草酸、扑酸、果胶酯酸、3-苯基丙酸、磷酸、苦味酸、庚二酸、特戊酸、丙酸、丙酮酸、水杨酸、琥珀酸、硫酸、氨基磺酸、酒石酸、硫氰酸或十一烷酸。包含一个或多个酸性官能团的化合物可与药学上可接受的碱形成药学上可接受的盐，所述药学上可接受的碱例如但不限于，基于碱金属或碱土金属的无机碱或诸如伯胺化合物、仲胺化合物、叔胺化合物、季胺化合物、取代的胺、天然存在的取代的胺、环胺或碱性离子交换树脂的有机碱。药学上可接受的盐可源自，例如但不限于，药学上可接受的金属阳离子的氢氧化物、碳酸盐或碳氢酸盐，所述药学上可接受的金属阳离子例如铵、钠、钾、锂、钙、镁、铁、锌、铜、锰或铝、氨、苄星青霉素(benzathine)、甲葡胺、甲胺、二甲胺、三甲胺、乙胺、二乙胺、三乙胺、异丙胺、三丙胺、三丁胺、乙醇胺、二乙醇胺、2-二甲基氨基乙醇、2-二乙基氨基乙醇、二环己基胺、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、咖啡因、海巴胺(hydrabamine)、胆碱、甜菜碱、乙二胺、氨基葡萄糖、葡糖胺(glucamine)、甲葡糖胺、可可碱、嘌呤、哌嗪、哌啶、普鲁卡因、N-乙基哌啶、可可碱、四甲铵化合物、四乙铵化合物、吡啶、N,N-二甲基苯胺、N-甲基哌啶、吗啉、N-甲基吗啉、N-乙基吗啉、二环己胺、二苄胺、N,N-二苄基苯乙胺、1-二苯羟甲胺(l-
ephenamine)、N,N'-二苄基乙二胺或聚胺树脂。在一些实施方案中，本发明述化合物可包含酸性基团和碱性基团，并可为内盐或两性离子形式，例如但不限于内铵盐(betaines)。本领域技术人员可通过已知常规方法制备本发明所述的盐，例如但不限于，通过使游离形式与有机酸、无机酸或碱反应，或通过与其它盐的阴离子交换或阳离子交换。本领域技术人员理解盐的制备可在化合物的分离和纯化过程中同时发生，或者盐的制备可通过使经分离和纯化的化合物单独反应而发生。
ephenamine)、N,N'-二苄基乙二胺或聚胺树脂。在一些实施方案中，本发明述化合物可包含酸性基团和碱性基团，并可为内盐或两性离子形式，例如但不限于内铵盐(betaines)。本领域技术人员可通过已知常规方法制备本发明所述的盐，例如但不限于，通过使游离形式与有机酸、无机酸或碱反应，或通过与其它盐的阴离子交换或阳离子交换。本领域技术人员理解盐的制备可在化合物的分离和纯化过程中同时发生，或者盐的制备可通过使经分离和纯化的化合物单独反应而发生。
[0087] 在一些实施方案中，本发明所述化合物及其所有不同形式(例如，游离形式、盐、多晶型、同分异构形式)可为溶剂添加形式，例如，溶剂化物。溶剂化物包含化学计量或非化学计量的溶剂与化合物或其盐物理结合。溶剂可为，例如但不限于，药物可接受的溶剂。例如，当溶剂为水时形成水合物，或者当溶剂为乙醇时形成乙醇化物。
[0088] 在一些实施方案中，本发明所述化合物及其所有不同形式(例如，游离形式、盐、溶剂化物、同分异构形式)可包括晶体和非晶体形式，例如，多晶型、假多晶型、构象多晶型、无定形形式或其组合。多晶型包括化合物的相同元素组成的不同晶体堆积排列。多晶型通常具有不同的X-射线衍射图谱、红外光谱、熔点、密度、硬度、晶形、光学或电学性质、稳定性和/或溶解性。本领域技术人员会理解包括重结晶溶剂、结晶速率和储存温度的多种因素可能导致一种晶体形式占优势。
[0089] 在一些实施方案中，本发明所述化合物及其所有不同形式(例如，游离形式、盐、溶剂化物、多晶型)包括异构体，例如几何异构体、基于不对称碳的光学异构体、立体异构体、互变异构体、单独的对映异构体、单独的非对映异构体、外消旋体、非对映异构体混合物及其组合，并且不受限于为了方便而例示的通式的描述。
[0090] 在一些实施方案中，本发明的药物组合物可包含这类化合物的盐，优选药学上或生理上可接受的盐。药物制剂通常包含一种或多种制剂给药模式可接受的载体、赋形剂或稀释剂，例如通过注射、吸入、局部给药、灌洗或其他适用于所选治疗的模式。合适的载体、赋形剂或稀释剂(本发明可交换使用)为用于这种给药方式的本领域已知的那些。
[0091] 合适的药物组合物可通过本领域已知的方法进行配制并且其给药方式和剂量由熟练的执业医生确定。对于肠胃外给药，可将化合物溶解于无菌水或盐水或用于非水溶性化合物的给药的药学上可接受的介质中，例如用于维生素K的那些。对于肠内给药，可以片剂、胶囊剂或溶解后的液体形式给予化合物。所述片剂或胶囊剂可为肠溶包衣的，或缓释剂型。许多合适的剂型为已知的，包括聚合物或蛋白质微粒包封待释放的化合物、软膏剂、糊剂、凝胶剂、水凝胶剂或溶液，其能用于针对性地(topically)或局部(locally)给予化合物。可采用缓释膏药或植入剂以提供持续时间的释放。本领域技术人员已知的许多技术在AlfonsoGennaro的Remington:the Science&Practice of Pharmacy(雷明顿：药学科学与实践)，第20版，LippencottWilliams和Wilkins,(2000)中描述。肠胃外给药的剂型可例如包含赋形剂、聚二醇诸如聚乙二醇、植物来源的油或者氢化萘。生物相容的生物可降解的丙交酯聚合物、丙交酯/乙交酯共聚物或聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物可用于控制化合物的释放。用于调节化合物的其它可能有用的肠胃外递送体系包括乙烯-乙酸乙烯酯共聚物颗粒、渗透泵、可植入的灌输系统以及脂质体。吸入剂型可包含诸如乳糖的赋形剂，或可为包含诸如聚氧乙烯-9-月桂醚、甘胆酸盐和脱氧胆酸盐的水溶液，或可为以鼻滴剂形式或凝胶形式给药的油性溶液。
[0092] 本发明化合物或药物组合物，或者本发明所述用途的化合物或药物组合物可通过诸如植入物、移植片、假体、支架等医疗装置或器械来给药。此外，植入物可被设计为意图包含并释放这类化合物或组合物。一实例可为适于在一段时间内释放化合物的由聚合物材料制成的植入物。
[0093] 本发明所述药物组合物的"有效量"包括治疗有效量或预防有效量。"治疗有效量"是指在所需时间内实现理想治疗效果的有效剂量，理想效果例如减小肿瘤尺寸、增加寿命或增加预期寿命。化合物的治疗有效量可根据诸如个体的疾病状态、年龄、性别和体重以及化合物在个体中引起期望应答的能力等因素而变化。可调节剂量以提供最佳治疗应答。治疗有效量还为治疗有益作用大于化合物的任何毒性或有害作用的量。"预防有效量"是指在所需时间内实现理想预防效果的有效剂量，该理想预防效果例如更小的肿瘤体积、增加的寿命、增加的预期寿命或防止前列腺癌发展成雄激素非依赖性的形态。通常，在患病前或疾病早期阶段在个体中使用预防剂量，因而预防有效量可以小于治疗有效量。
[0094] 应注意剂量值可随着适应症严重程度的减轻而变化。对于任何特定的个体，可根据个体需要和施行或指导组合物给药人员的专业判断随时间调整具体的剂量。本发明之前所述剂量范围仅为示例性的，并不限制可由医师选择的剂量范围。组合物中活性化合物的量可根据诸如个体的疾病状态、年龄、性别和体重等因素而变化。可调整剂量以提供最佳的治疗应答。例如，可给予一种丸剂，可随时间分开几次剂量给药，或者可根据治疗情况需要成比例地降低或增加剂量。有利的是以易于给药和剂量均匀的剂量单位形式来配制肠胃外组合物。
[0095] 在一些实施方案中，本发明所述化合物及其所有不同形式可，例如但不限于，与其他治疗方法联合用于以下一种或多种中的至少一种适应症：炎症性肠道疾病(包括克劳恩病、溃疡性结肠炎、牙周疾病，哮喘和LPS诱导的内皮细胞渗透力过大。
[0096] 通常，本发明所述化合物应在不引起明显毒性的情况下使用。本发明化合物的毒性可以使用标准技术确定，例如，通过在细胞培养系或实验动物中测试并确定治疗指数，也即，LD50(半数致死剂量)和LD100(全部致死剂量)的比值。然而，在一些环境下，例如在严重的疾病状态下，可能适当施用明显过量的组合物。本发明所述的一些化合物在一些浓度下可能是有毒的。可使用滴定法研究来确定毒性和非毒性浓度。可通过检查特定化合物或组合物穿过细胞系的特异性来评价毒性。如果化合物对其它组织具有任何影响，那么可以使用动物研究来提供指示。
[0097] 可将本发明所述化合物施予个体。如本发明使用的，"个体"可为人、非人灵长类动物、大鼠、小鼠、牛、马、猪、绵羊、山羊、狗、猫等。个体可能疑似患有或有风险患有与MAO-B相关的疾病。所述疾病可为上皮或内皮疾病。所述疾病可选自炎症性肠道疾病(包括克劳恩病、溃疡性结肠炎)、牙周疾病，哮喘和LPS诱导的内皮细胞渗透力过大。
[0098] 一般方法
[0099] 合成的MAO-B化合物使用三步筛选分析：(1)无细胞分析用于确定酶活性和选择性；(2)化合物转移到一堆细胞培养系试验中以验检生存能力，细胞毒性和细胞凋亡；(3)化合物之后转移到基于第二堆细胞培养系试验中以验检积极屏障保护作用和基于血脑屏障模型的细胞培养系渗透的缺乏。
[0100] 1)无细胞酶分析—使用商用试剂盒[荧光MAO-A和B检测试剂盒(Cell Technology Inc.TM)]分析MAO-B特定的抑制活性和相对于MAO-A的选择性。该试剂盒使用非荧光测试剂测量MAO-A和MAO-B底物特定地转化为其醛时释放的H2O2。此外，双氧水以化学计量1:1氧化检测试剂以产生荧光产物(试卤灵)。MAO-A和B的活性参照丙炔苯丙胺筛选。该信息之后提供给药物化学家以帮助随后迭代的直接合成。显示出选择指数(SI)＝MAO B/MAO A>100以及IC50活性在1到300nm之间的目标化合物之后使用基于细胞的分析筛选。
[0101] 2)基于细胞的分析(生存能力、细胞毒性、细胞凋亡)—在无细胞酶活性筛选中获得的抑制剂使用ApoTox-GloTM Triplex Assay(PromegaTM)测试其毒性。使用该分析筛选Madine Darby犬肾细胞(MDCK-I)和CaCo 2肠上皮细胞(胃肠道组织模型)。简而言之，20000细胞接种于96孔板并使用丙炔苯丙胺或新的MAO-B抑制剂±LPS或H2O2处理，以及按照制造商的说明分析细胞活力(400Ex/505Em)和细胞毒性(485Ex/520Em)。之后通过加入半胱天冬酶血清球蛋白3/7测试半胱天冬酶-3和-7(细胞凋亡标识物)的活性。丙炔苯丙胺和新的MAO-B抑制剂在一个宽的浓度和时间范围内测试。
[0102] 3a)上皮细胞屏障形成、破坏和MAO-B抑制剂保护的分析—跨上皮电阻(TER)是一种筛选屏障完整性的常规方法。加入相同微摩尔浓度的对照、丙炔苯丙胺(阳性对照)和新的MAO-B抑制剂±LPS，并在6天内分析TER。由于近来在测试TJ完整性时TER的准确性遭到了质疑(Van Itallie et al.,2008)，因此使用示踪研究测试屏障完整性和保护作用以选择化合物。将异硫氰酸荧光素与10kD右旋糖酐(InvitrogenTM)一起加入到TranswellTM的顶端隔间，固定，并测试右旋糖酐的渗透作用(Umeda et al.,2006)。我们期望对照和丙炔苯丙胺处理的细胞具有完整的屏障以保持示踪剂在顶端膜区域，然而有缺口的单层膜显示示踪剂渗透到了细胞之间。
[0103] 3b)分析血脑屏障渗透能力—使用血脑屏障体外模型筛选基于上述的筛选程序选择的新的MAO-B抑制剂。Madin-Darby犬肾细胞(MDCK-WT)和转染了人MDR1基因的MDCK细胞(MDCK-MDR1)是成熟的用于预测化合物渗透血脑屏障能力的体外模型。由于MDCK-MDR1细胞转染了编码人P-糖蛋白(P-gp)的MDR1基因，一阻止毒性物质，包括治疗化合物，进入脑部的主要外流性转运蛋白，故其特别有用。通过计算得到的表观渗透性(Papp)、外流比(Papp B-A/PappA-B)以及净通量比(外流比MDCK-MDR1/外流比MDCK-WT)可以确定化合物的血脑屏障渗透能力和鉴别作为P-gp底物的化合物。
[0104] 本发明描述了多种供选择的实施方案和实施例。这些实施方案和实施例是说明性的，并不应解释为限制本发明的范围。
[0105] 附图1到6的实验方法
[0106] 图1(化合物A到T)
[0107] L-酪氨酸甲酯盐酸盐(2)
[0108]
[0109] 由购买的L-酪氨酸1通过Sanda,F.et al.in Polymer,2010,51,2255-2263描述的方法，得到灰白色固体化合物2(19.0g,99％收率)。
[0110] L-N-(甲氧羰基)酪氨酸甲酯(3)
[0111]
[0113] L-(N-甲氧羰基)(O-苯基)酪氨酸甲酯(4A)
[0114]
[0115] 通过Olofsson,B.et al.,Org.Lett.2011,13,1552-1555
[0116] 在0℃，化合物3(200mg,0.79mmol)加入到搅拌着的tBuOK(97mg,0.87mmol)的THF(2mL)悬浮液中，该混合物搅拌30min。之后二苯基碘硝酸盐(325mg,0.95mmol)一次性加入，得到的深黄色混合物室温下搅拌过夜。该反应之后在0℃用水淬灭并使用DCM萃取。合并的有机层使用Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。粗制残留物，一淡黄色蜡状物，使用快速硅胶柱层析(己烷/乙酸乙酯95:5至70:30)获得无色蜡状物4A(193mg,74％收率)。
[0117] 1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:7.36-7.31(m,2H),7.12-7.06(m,3H),7.01-6.98(m,2H),6.95-6.91(m,2H),5.16(br d,J＝7.8Hz,1H),4.63(dt,J＝7.8,6.0Hz,1H),3.73(s,3H),
3.67(s,3H),3.13-3.03(m,2H).
3.67(s,3H),3.13-3.03(m,2H).
[0118] L-(N-甲氧羰基)(O-苯基))酪氨醇(5A)
[0119]
[0120] 根据合成5B的步骤，甲酯4A(2.0g,6.1mmol)转化成产物5A的5:3的混合物(计算收率:1.1g,59％)，无色蜡状。该混合物无需进一步纯化，直接应用到下一步。
[0121] L-(N-甲氧羰基)(O-苯基))酪氨醇甲苯磺酸酯(6A)
[0122]
[0123] 根据合成6B的步骤，醇5A(500mg,1.66mmol)转化成6A(白色固体,330mg,44％收率)。
[0124] 1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:7.79-7.77(m,2H),7.36-7.32(m,4H),7.13-7.09(m,1H),7.03-7.01(m,2H),6.99-6.96(m,2H),6.87-6.85(m,2H),4.89(br d,J＝7.6Hz,1H),4.06-
3.99(m,2H),3.94(dd,J＝9.5,3.0Hz,1H),3.62(s,3H),2.87-2.75(m,2H),2.43(s,3H).
3.99(m,2H),3.94(dd,J＝9.5,3.0Hz,1H),3.62(s,3H),2.87-2.75(m,2H),2.43(s,3H).
[0125] (R)-(1-(4-苯氧基苯基)丙-2-基)氨基甲酸甲酯(7A)
[0126]
[0127] 根据合成7B的步骤，甲苯磺酸酯6A(2.5g,5.5mmol)转化成7A(白色固体,1.3g,83％收率)。
[0128] (R)-1-(4-(苯氧基)苯基)-N-甲基丙基-2-amine(8A)
[0129]
[0130] 根据合成7B的步骤，甲苯磺酸酯7A转化成8A(白色固体)。
[0131] N-((R)-(1-(4-(苯氧基)苯基)丙-2-基)(甲基))甘氨酸叔丁酯(9A)
[0132]
[0133] 化合物8A(200mg,1.65mmol)在10-20mL微波管中溶于DMF(10mL)。Cs2CO3(538mg,1.65mmol)和K2CO3(456mg,3.31mmol)和溴乙酸叔丁酯(244μL,1.65mmol)相继加入，所述混合物于微波条件下80℃加热90分钟。之后粗制混合物过滤，真空浓缩，倒入H2O中，并用DCM萃取。合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤，真空浓缩。残留物使用快速硅胶柱层析(DCM至DCM/MeOH 95:5)，获得淡黄色蜡状物9A(507mg，80％收率)。
[0134] 1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:7.36-7.31(m,2H),7.17-7.14(m,2H),7.12-7.08(m,1H),7.03-6.99(m,2H),6.96-6.93(m,2H),3.24(s,2H),3.02-2.95(m,2H),2.44(s,3H),2.39(m/dd,J＝14.1,10.8Hz,1H),1.50(s,9H),0.97(d,J＝6.6Hz,3H).
[0135] 13C NMR(100MHz,CDCl3)δ:170.2(Cquat.),157.8(Cquat.),155.5(Cquat.),135.5(Cquat.),130.6(2CH),129.9(2CH),123.2(CH),119.1(2CH),118.8(2CH),81.0(Cquat.),60.6(CH),56.2(CH2),39.2(CH2),38.4(CH3),28.4(3CH3),14.7(CH3).
[0136] N-((R)-(1-(4-(苯氧基)苯基)丙-2-基)(甲基))甘氨酸盐酸盐(A)(PS-RG0008)
[0137]
[0138] 浓盐酸(1.5mL)滴加到冷却的(0℃)叔丁酯9A(295mg,0.83mmol)的THF(1.5mL)溶液中，搅拌3h。随后在真空条件下去除溶剂，粗产品混合物倒入水中并用DCM洗涤。浓缩水层获得淡黄色固体产品A(186mg,67％收率)。
[0139] 1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:10.05(br s,1H),7.40-7.37(m,2H),7.30-7.27(m,2H),7.15-7.11(m,1H),7.00-6.97(m,4H),4.16(br s,2H),3.63(br s,2H),3.25(d,J＝
11.9Hz,1H),2.86(s,3H),2.70(t,J＝11.9,1H),1.12(d,J＝6.2Hz,3H).
11.9Hz,1H),2.86(s,3H),2.70(t,J＝11.9,1H),1.12(d,J＝6.2Hz,3H).
[0140] 13C NMR(100MHz,MeOD)δ:168.7(Cquat.),158.6(Cquat.),158.3(Cquat.),132.1(2CH),132.0(Cquat.),131.1(2CH),124.7(CH),120.2(2CH),120.1(2CH),65.2(CH),54.1(CH2),
37.5(CH3),37.3(CH2),13.2(CH3).
37.5(CH3),37.3(CH2),13.2(CH3).
[0141] HRMS:m/z C18H22NO3+计算值:300.15942，实测值:300.15891。
[0142] L-(N-甲氧羰基)(O-苄基)酪氨酸甲酯(4B)
[0143]
[0144] 化合物3(8.0g,32mmol)，苄溴(4.5mL,38mmol)和K2CO3(5.2g,38mmol)的丙酮(125mL)溶液室温下搅拌16h随后回流3h。过滤去除固体，滤液在真空下浓缩至干。粗产品混合物经柱层析(硅胶；己烷/乙酸乙酯9:1至1:1)，获得半透明蜡状物4B，静置转变为白色固体(9.3g,85％收率)。
[0145] 1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:7.44-7.37(m,4H),7.35-7.30(m,1H),7.05-7.01(m,2H),6.92-6.88(m,2H),5.13(br d,J＝7.8Hz,1H),5.04(s,2H),4.61(dt,J＝7.8,5.8Hz,1H),
3.72(s,3H),3.67(s,3H),3.09-3.00(m,2H).
3.72(s,3H),3.67(s,3H),3.09-3.00(m,2H).
[0146] L-(N-甲氧羰基)(O-苄基))酪氨醇(5B)
[0147]
[0148] 于0℃，NaBH4(2.2g,54mmol)分批加入到化合物4B(7.4g,22mmol)的乙醇(100mL)溶液中。所得悬浊液室温下搅拌过夜。反应通过加入MeOH淬灭并于0℃搅拌30min。之后混合物真空浓缩，残留物倒入DCM中并使用食盐水和水洗涤两次。有机层通过Na2SO4干燥，过滤，真空浓缩至干。产物通过短硅胶板柱析(己烷/乙酸乙酯1:2)，获得10:3的5B混合物(6.3g)(计算收率:4.8g,71％)和未鉴定的无色蜡状副产物。混合物无需进一步纯化，直接应用到下一步。
[0149] L-(N-甲氧羰基)(O-苄基))酪氨醇对甲苯磺酸酯(6B)
[0150]
[0151] 化合物5B(500mg,1.59mmol)溶于DCM(6mL)和吡啶(2mL)。分批加入甲苯磺酰氯(907mg,4.76mmol)，所得溶液室温下搅拌过夜。于0℃加入水淬灭该反应，用DCM萃取所得混合物。有机层用Na2SO4干燥，过滤，真空浓缩。粗产物快速柱层析(硅胶；己烷/乙酸乙酯9:1至
7:3)，获得白色固体6B(508mg,68％收率)。
7:3)，获得白色固体6B(508mg,68％收率)。
[0152] 1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:7.79-7.76(m,2H),7.44-7.31(m,7H),7.00-6.98(m,2H),6.85-6.83(m,2H),5.03(s,2H),4.82(br d,J＝7.7Hz,1H),4.03-3.95(m,2H),3.92(dd,J＝
9.5,2.9Hz,1H),3.61(s,3H),2.84-2.71(m,2H),2.46(s,3H)
9.5,2.9Hz,1H),3.61(s,3H),2.84-2.71(m,2H),2.46(s,3H)
[0153] (R)-(1-(4-苄氧基苯基)丙-2-基)氨基甲酸甲酯(7B)
[0154]
[0155] 参照Yamada,K.et al.,Syn.Commun.1998,28,1935-1940
[0156] 化合物6B(550mg,1.17mmol)，锌粉(7.66mg,11.71mmol)和NaI(878mg,5.86mmol)的THF(5mL)–H2O(0.3mL)混合物回流2.5h。过滤锌粉，滤液在真空下浓缩。之后残留物倒入DCM/水中，分层，水层用DCM萃取两遍。合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤，真空浓缩，获得无色蜡状物7B，静置转变为白色固体(357mg,定量收率)。
[0157] 1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:7.45-7.43(m,2H),7.41-7.37(m,2H),7.35-7.31(m,1H),7.12-7.09(m,2H),6.94-6.91(m,2H),5.05(s,2H),4.63(br s,1H),3.94(br s,1H),3.65(s,3H),2.80(dd,J＝13.6,5.2Hz,1H),2.66(dd,J＝13.6,7.1Hz,1H),1.13(d,J＝6.6Hz,
3H).
3H).
[0158] 13C NMR(100MHz,CDCl3)δ:157.6(Cquat.),156.5(Cquat.),137.2(Cquat.),130.53(2CH),130.45(Cquat.),128.7(2CH),128.1(CH),127.6(2CH),114.9(2CH),70.1(CH2),52.0(CH3),48.2(CH),42.1(CH2),20.3(CH3).
[0159] (R)-1-(4-(苄氧基)苯基)-N-甲基丙基-2-胺(8B)
[0160]
[0161] 于0℃，7B(1.15g，3.84mmol)的无水THF(5mL)溶液缓慢加入到LiAlH4(583mg,15.37mmol)的无水THF(10mL)溶液中。所得混合物在回流下搅拌4h，之后在0℃通过依次加入H2O(600μL)，10％NaOHaq(600μL)，和H2O(1.2mL)淬灭，真空抽滤除去固体。粗产物通过快速硅胶柱层析纯化(DCM/MeOH 98:2至9:1)，获得无色油状物8B(529mg,54％收率)。
[0162] 1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:7.45-7.42(m,2H),7.41-7.37(m,2H),7.35-7.30(m,1H),7.12-7.09(m,2H),6.94-6.90(m,2H),5.05(s,2H),2.81(m,1H),2.67(dd,J＝13.4,7.0Hz,
1H),2.58(dd,J＝13.4,6.3Hz,1H),2.40(s,3H),1.78(br s,1H),1.06(d,J＝6.1Hz,3H).[0163] N-((R)-(1-(4-(苄氧基)苯基)丙-2-基)(甲基))甘氨酸叔丁酯(9B)
1H),2.58(dd,J＝13.4,6.3Hz,1H),2.40(s,3H),1.78(br s,1H),1.06(d,J＝6.1Hz,3H).[0163] N-((R)-(1-(4-(苄氧基)苯基)丙-2-基)(甲基))甘氨酸叔丁酯(9B)
[0164]
[0165] 溴乙酸叔丁酯(304μL,2.06mmol)滴加到快速搅拌的化合物8B(525mg,2.06mmol)的DMF(3mL)溶液中。5分钟后加入Cs2CO3(1.34g,4.11mmol)，所得悬浊液室温下搅拌过夜。粗制混合物用水稀释并用DCM萃取。合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤，真空浓缩。粗产品混合物柱层析(硅胶；己烷/乙酸乙酯8:2至5:5)，获得粘稠的淡黄色油状物9B(603mg,79％收率)。
[0166] 1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:7.45-7.42(m,2H),7.40-7.36(m,2H),7.34-7.30(m,1H),7.11-7.07(m,2H),6.91-6.88(m,2H),5.04(s,2H),3.22(br s,2H),2.97-2.88(m,2H),2.41(s,3H),2.36-2.29(m,1H),1.48(s,9H),0.93(d,J＝6.7Hz,3H).
[0167] N-((R)-(1-(4-(苄氧基)苯基)丙-2-基)(甲基))甘氨酸盐酸盐(B)(PS-RG0031A)[0168]
[0169] 浓盐酸(1.5mL)滴加到冷的(0℃)叔丁酯9B(200mg，(0.54mmol)的THF(1.5mL)溶液中，搅拌3h。在真空条件下去除溶剂，使用DCM对粗制固体残留物打浆后，分离得到产物B(105mg,55％收率)。随后通过C-18反相柱层析(H2O/MeOH，95:5至50:50)从小批量的去O-苄基的产物中分离粗制残留物。
[0170] 1H NMR(400MHz,MeOD)δ:7.43-7.41(m,2H),7.38-7.34(m,2H),7.32-7.28(m,1H),7.21-7.18(m,2H),6.99-6.96(m,2H),5.07(s,2H),3.70-3.59(m,2+1H),3.13(dd,J＝13.2,
4.2Hz,1H),2.88(s,3H),2.73(dd,J＝13.2,10.5Hz,1H),1.21(d,J＝6.7Hz,3H).
4.2Hz,1H),2.88(s,3H),2.73(dd,J＝13.2,10.5Hz,1H),1.21(d,J＝6.7Hz,3H).
[0171] 13C NMR(100MHz,MeOD)δ:170.0(Cquat.),159.6(Cquat.),138.8(Cquat.),131.6(2CH),129.65(2CH),129.57(Cquat.),129.0(CH),128.7(2CH),116.5(2CH),71.1(CH2),64.5(CH),
56.6(CH2),38.9(CH3),37.7(CH2),13.3(CH3).
56.6(CH2),38.9(CH3),37.7(CH2),13.3(CH3).
[0172] HRMS:m/z C19H24NO3+计算值:314.17507，实测值:314.17456.
[0173] N-((R)-(1-(4-羟基苯基)丙-2-基)(甲基))甘氨酸叔丁酯(10)
[0174]
[0175] 化合物9B溶于吹氮处理的MeOH(600mg,1.62mmol)，加入钯碳(60mg)，反应在氢气氛、1个大气压下室温搅拌过夜。之后混合物依次经硅藻土和氧化铝过滤以除去催化剂，滤液在真空下浓缩，获得淡黄色油状物10(453mg,99％收率)。
[0176] 1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:7.00(d,J＝8.1Hz,2H),6.74(d,J＝8.1Hz,2H),3.23(s,2H),2.95-2.90(m,2H),2.41(s,3H),2.30(dd,J＝13.3,11.2Hz),1.47(s,9+1H),0.92(d,J＝6.1Hz,3H).
[0177] N-((R)-(1-(4-(2-氯苄氧基)苯基)丙-2-基)(甲基))甘氨酸叔丁酯(11C)
[0178]
[0179] 化合物10(100mg,0.36mmol)，2-氯苄溴(0.40mmol,51μL)和K2CO3(148mg,1.07mmol)加入到DMF(2.0mL)中，所得混合物室温下搅拌过夜。过滤除去悬浮液中的固体，真空下蒸除溶剂。粗产品混合物经柱层析(硅胶；己烷/乙酸乙酯8:2至5:5)，获得粘稠的淡黄色油状物11C(83mg,57％收率)。
[0180] 1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:7.57-7.54(m,1H),7.40-7.37(m,1H),7.30-7.22(m,2H),7.12-7.08(m,2H),6.92-6.88(m,2H),5.14(s,2H),3.22(br s,2H),2.97-2.89(m,2H),2.41(s,3H),2.36-2.30(m,1H),1.48(s,9H),0.93(d,J＝6.7Hz,3H).
[0181] N-((R)-(1-(4-(2-氯苄氧基)苯基)丙-2-基)(甲基))甘氨酸盐酸盐(C)(PS-RG0121)
[0182]
[0183] 浓盐酸(1.5mL)滴加到冷的(0℃)叔丁酯11C(83mg,0.21mmol)的THF(1.5mL)溶液中，搅拌3h。在真空条件下去除溶剂，通过C-18反相柱层析分离产物C(69mg,87％收率)(H2O/MeOH,95:5至50:50)。
[0184] 1H NMR(400MHz,MeOD)δ:7.56-7.52(m,1H),7.44-7.40(m,1H),7.33-7.28(m,2H),7.23-7.20(m,2H),6.98-6.96(m,2H),5.13(s,2H),3.70-3.61(m,2+1H),3.15(dd,J＝13.1,
4.0Hz,1H),2.88(s,3H),2.72(dd,J＝13.1,10.6Hz,1H),1.21(d,J＝6.7Hz,3H).
4.0Hz,1H),2.88(s,3H),2.72(dd,J＝13.1,10.6Hz,1H),1.21(d,J＝6.7Hz,3H).
[0185] 13C NMR(100MHz,MeOD)δ:170.0(Cquat.),159.4(Cquat.),136.2(Cquat.),134.2(Cquat.),131.7(2CH),130.6(3CH),129.9(Cquat.),128.3(CH),116.4(2CH),68.4(CH2),64.4(CH),56.6(br,CH2),38.9(br,CH3),37.7(CH2),13.3(CH3).
[0186] HRMS:m/z C19H23ClNO3+计算值:348.13610，实测值:348.13620.
[0187] N-((R)-(1-(4-(3-氯苄氧基)苯基)丙-2-基)(甲基))甘氨酸盐酸盐(D)(PS-RG0103)
[0188]
[0189] 按照11C的制备方法，用酸处理使其转化为化合物C，C-18反相柱层析(H2O/MeOH,95:5至30:70)后获得白色固体化合物D(54mg,71％收率)。
[0190] 1H NMR(400MHz,MeOD)δ:7.43(br s 1H),7.35-7.33(m,2H),7.31-7.27(m,1H),7.20(d,J＝8.7Hz,2H),6.96(d,J＝8.7Hz,2H),5.04(s,2H),3.70-3.55(m,2+1H),3.14(dd,J＝13.1,4.0Hz,1H),2.88(s,3H),2.71(dd,J＝13.1,10.6Hz,1H),1.20(d,J＝6.6Hz,3H).[0191] 13C NMR(100MHz,MeOD)δ:170.0(Cquat.),159.3(Cquat.),141.2(Cquat.),135.5(Cquat.),131.7(2CH),131.2(CH),129.8(Cquat.),129.0(CH),128.4(CH),126.8(CH),116.5(2CH),70.1(CH2),64.4(CH),56.7(br,CH2),38.9(br,CH3),37.7(CH2),13.2(CH3).
[0192] HRMS:m/z C19H23ClNO3+计算值:348.13610，实测值:348.13617.
[0193] (R)-N-(1-(4-((4-氯苄基)氧基)苯基)丙-2-基)-N-甲基甘氨酸盐酸盐(E)(PS-RG00226)
[0194]
[0195] 按照11C的制备方法，用酸处理使其转化为化合物C，C-18反相柱层析(H2O/MeOH,90:10至30:70)后获得无色固体化合物E(25mg,66％收率)。
[0196] 1H NMR(400MHz,MeOD)δ:7.40(d,J＝8.4Hz,2H),7.35(d,J＝8.4Hz,2H),7.20(d,J＝8.4Hz,2H),6.96(d,J＝8.4Hz,2H),5.03(s,2H),3.70-3.59(m,2+1H),3.14(dd,J＝13.1,3.8Hz,1H),2.88(s,3H),2.72(dd,J＝13.1,10.6Hz,1H),1.20(d,J＝6.6Hz,3H).
[0197] 13C NMR(100MHz,MeOD)δ:170.0(Cquat.),159.4(Cquat.),137.6(Cquat.),134.7(Cquat.),131.6(2CH),130.2(2CH),129.8(Cquat.),129.7(2CH),116.5(2CH),70.3(CH2),64.5(CH),56.6(br,CH2),38.8(br,CH3),37.7(CH2),13.2(CH3).
[0198] HRMS:m/z C19H23ClNO3+计算值:348.13610，实测值:348.13519.
[0199] (R)-N-(1-(4-((2-氰基苄基)氧基)苯基)丙-2-基)-N-甲基甘氨酸盐酸盐(F)(PS-RG0171)
[0200]
[0201] 按照11C的制备方法，用酸处理使其转化为化合物C，C-18反相柱层析(H2O/MeOH,90:10至30:70)后获得无色固体化合物F(88mg,77％收率)。
[0202] 1H NMR(400MHz,MeOD)δ:7.77(br d,J＝7.6,1H),7.70-7.66(m,2H),7.54-7.47(m,1H),7.25-7.21(m,2H),7.02-6.99(m,2H),5.21(s,2H),3.71-3.60(m,2+1H),3.16(dd,J＝13.2,4.0Hz,1H),2.89(s,3H),2.73(dd,J＝13.2,10.5Hz,1H),1.21(d,J＝6.7Hz,3H).[0203] 13C NMR(100MHz,MeOD)δ:170.0(Cquat.),159.2(Cquat.),141.9(Cquat.),134.5(CH),134.4(CH),131.8(2CH),130.5(CH),130.3(Cquat.),130.1(CH),118.3(Cquat.),116.5(2CH),
113.0(Cquat.),69.2(CH2),64.4(CH),56.6(br,CH2),38.9(br,CH3),37.7(CH2),13.2(CH3).[0204] HRMS:m/z C20H23N2O3+计算值:339.17032，实测值:339.17056.
113.0(Cquat.),69.2(CH2),64.4(CH),56.6(br,CH2),38.9(br,CH3),37.7(CH2),13.2(CH3).[0204] HRMS:m/z C20H23N2O3+计算值:339.17032，实测值:339.17056.
[0205] (R)-N-(1-(4-((3-氰基苄基)氧基)苯基)丙-2-基)-N-甲基甘氨酸盐酸盐(G)(PS-RG0172)
[0206]
[0207] 按照11C的制备方法，用酸处理使其转化为化合物C，C-18反相柱层析(H2O/MeOH,90:10至30:70)后获得无色固体化合物G(90mg，75％收率)。
[0208] 1H NMR(400MHz,MeOD)δ:7.78(br s 1H),7.74(br d,J＝7.7Hz,1H),7.66(dt,J＝7.7,1.3Hz,1H),7.55(t,J＝7.7Hz,1H),7.24-7.20(m,2H),7.00-6.96(m,2H),5.11(s,2H),
3.70-3.58(m,2+1H),3.15(dd,J＝13.2,4.2Hz,1H),2.89(s,3H),2.73(dd,J＝13.2,
10.6Hz,1H),1.21(d,J＝6.7Hz,3H).
3.70-3.58(m,2+1H),3.15(dd,J＝13.2,4.2Hz,1H),2.89(s,3H),2.73(dd,J＝13.2,
10.6Hz,1H),1.21(d,J＝6.7Hz,3H).
[0209] 13C NMR(100MHz,MeOD)δ:170.0(Cquat.),159.2(Cquat.),140.7(Cquat.),133.1(CH),132.7(CH),132.0(CH),131.7(2CH),130.8(CH),130.1(Cquat),119.8(Cquat),116.5(2CH),
113.7(Cquat),69.8(CH2),64.4(CH),56.7(br,CH2),38.9(br,CH3),37.7(CH2),13.2(CH3).[0210] HRMS:m/z C20H23N2O3+计算值:339.17032，实测值:339.17050.
113.7(Cquat),69.8(CH2),64.4(CH),56.7(br,CH2),38.9(br,CH3),37.7(CH2),13.2(CH3).[0210] HRMS:m/z C20H23N2O3+计算值:339.17032，实测值:339.17050.
[0211] (R)-N-(1-(4-((4-氰基苄基)氧基)苯基)丙-2-基)-N-甲基甘氨酸盐酸盐(H)(PS-AD0065)
[0212]
[0213] 按照11C的制备方法，用酸处理使其转化为化合物C，C-18反相柱层析(H2O/MeOH,90:10至30:70)后获得灰白色固体化合物H(51mg,49％收率)。
[0214] 1H NMR(400MHz,MeOD)δ:7.72(d,J＝8.2Hz,2H),7.60(d,J＝8.2Hz,2H),7.22(d,J＝8.6Hz,2H),6.97(d,J＝8.6Hz,2H),5.15(s,2H),3.70-3.59(m,2+1H),3.15(dd,J＝13.1,4.2Hz,1H),2.89(s,3H),2.73(dd,J＝13.1,10.6Hz,1H),1.21(d,J＝6.6Hz,3H).
[0215] 13C NMR(100MHz,MeOD)δ:170.0(Cquat.),159.2(Cquat.),144.7(Cquat.),133.6(2CH),131.7(2CH),130.1(Cquat),129.1(2CH),119.8(Cquat),116.5(2CH),112.6(Cquat),70.0(CH2),64.4(CH),56.7(br,CH2),38.9(br,CH3),37.7(CH2),13.3(CH3).
[0216] HRMS:m/z C20H23N2O3+计算值:339.17032，实测值:339.17065.
[0217] (R)-N-(1-(4-((3-氟苄基)氧基)苯基)丙-2-基)-N-甲基甘氨酸盐酸盐(I)(PS-RG0173)
[0218]
[0219] 按照11C的制备方法，用酸处理使其转化为化合物C，C-18反相柱层析(H2O/MeOH,90:10至30:70)后获得无色固体化合物I(86mg,77％收率)。
[0220] 1H NMR(400MHz,MeOD)δ:7.35(td,J＝8.0,6.0Hz,1H),7.22-7.18(m,3H),7.16-7.13(m,1H),7.01(td,J＝8.5,2.5Hz,1H),6.97-6.93(m,2H),5.03(s,2H),3.70-3.59(m,2+
1H),3.15(dd,J＝13.2,3.9Hz,1H),2.88(s,3H),2.70(dd,J＝13.2,10.6Hz,1H),1.19(d,J＝6.6Hz,3H).
1H),3.15(dd,J＝13.2,3.9Hz,1H),2.88(s,3H),2.70(dd,J＝13.2,10.6Hz,1H),1.19(d,J＝6.6Hz,3H).
[0221] 13C NMR(100MHz,MeOD)δ:170.0(Cquat.),164.4(d,J＝244.2Hz,Cquat),159.3(Cquat.),141.7(d,J＝7.3Hz,Cquat.),131.7(2CH),131.4(d,J＝8.1Hz,CH),129.9(Cquat.),124.2(d,J＝2.8Hz,CH),116.4(2CH),115.6(d,J＝21.3Hz,CH),115.1(d,J＝22.3Hz,CH),
70.1(d,J＝2.1Hz,CH2),64.3(CH),56.6(br,CH2),38.8(br,CH3),37.7(CH2),13.2(CH3).[0222] HRMS:m/z C19H23FNO3+计算值:332.16565，实测值:332.16595.
70.1(d,J＝2.1Hz,CH2),64.3(CH),56.6(br,CH2),38.8(br,CH3),37.7(CH2),13.2(CH3).[0222] HRMS:m/z C19H23FNO3+计算值:332.16565，实测值:332.16595.
[0223] (R)-N-(1-(4-((3,5-二氟苄基)氧基)苯基)丙-2-基)-N-甲基甘氨酸盐酸盐(J)(PS-RG0174)
[0224]
[0225] 按照11C的制备方法，用酸处理使其转化为化合物C，C-18反相柱层析(H2O/MeOH,90:10至30:70)后获得无色固体化合物J(108mg,79％收率)。
[0226] 1H NMR(400MHz,MeOD)δ:7.24-7.20(m,2H),7.07-7.01(m,2H),6.99-6.96(m,2H),6.87(tt,J＝9.2,2.3Hz,1H),5.09(s,2H),3.70-3.59(m,2+1H),3.15(dd,J＝13.2,4.2Hz,
1H),2.88(s,3H),2.73(dd,J＝13.2,10.5Hz,1H),1.21(d,J＝6.7Hz,3H).
1H),2.88(s,3H),2.73(dd,J＝13.2,10.5Hz,1H),1.21(d,J＝6.7Hz,3H).
[0227] 13C NMR(100MHz,MeOD)δ:170.0(Cquat.),164.7(dd,J＝247.2,12.4Hz,Cquat),159.1(Cquat.),143.6(t,J＝9.1Hz,Cquat.),131.7(2CH),130.1(Cquat.),116.8(2CH),111.0(dd,J＝19.1,6.9Hz,CH),103.9(t,J＝25.9Hz,CH),69.6(t,J＝2.2Hz,CH2),64.4(CH),56.6(br,CH2),38.8(br,CH3),37.7(CH2),13.2(CH3).
[0228] HRMS:m/z C19H22F2NO3+计算值:350.15623，实测值:350.15649.
[0229] (R)-N-(1-(4-((4-溴-3-氯苄基)氧基)苯基)丙-2-基)-N-甲基甘氨酸盐酸盐(K)(PS-RG00216)
[0230]
[0231] 按照11C的制备方法，用酸处理使其转化为化合物C，C-18反相柱层析(H2O/MeOH,90:10至30:70)后获得无色固体化合物K(87mg,76％收率)。
[0232] 1H NMR(400MHz,MeOD)δ:7.65(d,J＝8.3Hz,1H),7.58(d,J＝1.7Hz,1H),7.26(dd,J＝8.3,1.7Hz,1H),7.21(d,J＝8.6Hz,2H),6.96(d,J＝8.6Hz,2H),5.02(s,2H),3.69-3.58(m,2+1H),3.14(dd,J＝13.2,4.1Hz,1H),2.88(s,3H),2.72(dd,J＝13.2,10.6Hz,1H),1.20(d,J＝6.7Hz,3H).
[0233] 13C NMR(100MHz,MeOD)δ:170.0(Cquat.),159.2(Cquat.),140.5(Cquat.),135.5(Cquat.),135.1(CH),131.7(2CH),130.3(CH),130.0(Cquat),128.4(CH),122.3(Cquat),116.5(2CH),69.5(CH2),64.4(CH),56.6(br,CH2),38.8(br,CH3),37.7(CH2),13.3(CH3).
[0234] HRMS:m/z C19H22BrClNO3+计算值:426.03001，实测值:426.03046(主同位素).[0235] (R)-N-(1-(4-((3,4-二氯苄基)氧基)苯基)丙-2-基)-N-甲基甘氨酸盐酸盐(L)(PS-RG0245)
[0236]
[0237] 按照11C的制备方法，用酸处理使其转化为化合物C，C-18反相柱层析(H2O/MeOH,90:10至30:70)后获得无色固体化合物L(43mg,68％收率)。
[0238] 1H NMR(400MHz,MeOD)δ:7.58(d,J＝1.1Hz,1H),7.50(d,J＝8.2Hz,1H),7.34(dd,J＝8.2,1.1Hz,1H),7.21(d,J＝8.4Hz,2H),6.96(d,J＝8.4Hz,2H),5.04(s,2H),3.70-3.59(m,2+1H),3.14(dd,J＝13.2,4.1Hz,1H),2.88(s,3H),2.72(dd,J＝13.2,10.5Hz,1H),1.21(d,J＝6.6Hz,3H).
[0239] 13C NMR(100MHz,MeOD)δ:170.0(Cquat.),159.2(Cquat.),139.8(Cquat.),133.5(Cquat.),132.7(Cquat),131.8(CH),131.7(2CH),130.4(CH),130.0(Cquat),128.3(CH),116.5(2CH),69.5(CH2),64.4(CH),56.7(br,CH2),38.9(br,CH3),37.7(CH2),13.3(CH3).
[0240] HRMS:m/z C19H20Cl2NO3-计算值:380.08257，实测值:380.08289(主同位素).
[0241] (R)-N-(1-(4-((2,5-二氯苄基)氧基)苯基)丙-2-基)-N-甲基甘氨酸盐酸盐(M)(PS-AD0064)
[0242]
[0243] 按照11C的制备方法，用酸处理使其转化为化合物C，C-18反相柱层析(H2O/MeOH,90:10至50:50)后获得灰白色固体化合物M(61mg,77％收率)。
[0244] 1H NMR(400MHz,MeOD)δ:7.53(d,J＝1.7Hz,1H),7.39(d,J＝8.4Hz,1H),7.30(dd,J＝8.4,1.7Hz,1H),7.23(d,J＝7.7Hz,2H),6.97(d,J＝7.7Hz,2H),5.08(s,2H),3.71-3.58(m,2+1H),3.16(br d,J＝12.1Hz,1H),2.88(s,3H),2.73(br t,J＝11.6Hz,1H),1.21(d,J＝5.9Hz,3H).
[0245] 13C NMR(100MHz,MeOD)δ:170.1(Cquat.),159.0(Cquat.),138.2(Cquat.),134.2(Cquat.),132.2(Cquat),131.9(CH),131.8(2CH),130.33(CH),130.27(Cquat),129.9(CH),116.4(2CH),67.8(CH2),64.4(CH),56.6(br,CH2),38.9(br,CH3),37.7(CH2),13.3(CH3).[0246] N-((R)-(1-(4-(3-硝基苄基氧基)苯基)丙-2-基)(甲基))甘氨酸盐酸盐(N)(PS-RG0128)
[0247]
[0248] 按照11C的制备方法，用酸处理使其转化为化合物C，C-18反相柱层析(H2O/MeOH,90:10至30:70)后获得浅黄色固体化合物N(34mg,65％收率)。
[0249] 1H NMR(400MHz,MeOD)δ:8.30(br s,1H),8.16(dd,J＝8.0,1.8Hz,1H),7.83(d,J＝7.6Hz,1H),7.61(t,J＝8.0Hz,1H),7.22(d,J＝8.4Hz,2H),7.00(d,J＝8.4Hz,2H),5.18(s,2H),3.66(br s,2+1H),3.15(dd,J＝13.0,3.7Hz,1H),2.89(s,3H),2.73(dd,J＝13.0,10.6Hz,1H),1.21(d,J＝6.6Hz,3H).
[0250] 13C NMR(100MHz,MeOD)δ:170.0(Cquat.),159.1(Cquat.),149.9(Cquat.),141.3(Cquat.),134.6(CH),131.7(2CH),131.0(CH),130.1(Cquat.),123.8(CH),123.1(CH),116.5(2CH),69.7(CH2),64.4(CH),56.6(br,CH2),38.9(br,CH3),37.7(CH2),13.2(CH3).
[0251] HRMS:m/z C19H21N2O5-计算值:357.14560，实测值:357.14594.
[0252] (R)-N-(1-(4-((3-甲氧基苄基)氧基)苯基)丙-2-基)-N-甲基甘氨酸盐酸盐(O)(PS-RG0264)
[0253]
[0254] 按照11C的制备方法，用酸处理使其转化为化合物C，C-18反相柱层析(H2O/MeOH,60:40至30:70)后获得无色固体化合物O(57mg,68％收率)。
[0255] 1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:7.27(t,J＝7.8Hz,1H),7.13(d,J＝8.2Hz,2H),6.98-6.95(m,2H),6.88(d,J＝8.2Hz,2H),6.84(dd,J＝8.4,2.2Hz,1H),4.98(s,2H),3.80(s,
3H),3.71(br s,1H),3.57(d,J＝15.8Hz,1H),3.50(d,J＝15.8Hz,1H),3.24(dd,J＝13.1,
3.8Hz,1H),2.83(s,3H),2.52(dd,J＝13.1,10.6Hz,1H),1.17(d,J＝6.5Hz,3H).
3H),3.71(br s,1H),3.57(d,J＝15.8Hz,1H),3.50(d,J＝15.8Hz,1H),3.24(dd,J＝13.1,
3.8Hz,1H),2.83(s,3H),2.52(dd,J＝13.1,10.6Hz,1H),1.17(d,J＝6.5Hz,3H).
[0256] 13C NMR(100MHz,CDCl3)δ:168.0(Cquat.),160.0(Cquat.),158.1(Cquat.),138.6(Cquat.),130.5(2CH),129.8(2CH),128.4(Cquat.),119.8(CH),115.4(CH),113.7(2CH),113.0(CH),70.1(CH2),62.5(CH),55.8(br,CH2),55.4(CH3),38.3(br,CH3),37.5(CH2),13.2(CH3).
[0257] HRMS:m/z C20H26NO4+计算值:344.18563，实测值:344.18469.
[0258] (R)-N-(1-(4-((4-(甲氧羰基)苄基)氧基)苯基)丙-2-基)-N-甲基甘氨酸盐酸盐(P)(PS-RG0246)
[0259]
[0260] 按照11C的制备方法，用酸处理使其转化为化合物C，C-18反相柱层析(H2O/MeOH,90:10至30:70)后获得白色固体化合物P(37mg,48％收率)。
[0261] 1H NMR(400MHz,MeOD)δ:8.00(d,J＝8.1Hz,2H),7.53(d,J＝8.1Hz,2H),7.20(d,J＝8.4Hz,2H),6.97(d,J＝8.4Hz,2H),5.13(s,2H),3.89(s,3H),3.71-3.59(m,2+1H),3.14(dd,J＝13.1,4.0Hz,1H),2.88(s,3H),2.72(dd,J＝13.1,10.6Hz,1H),1.21(d,J＝6.7Hz,3H).
[0262] 13C NMR(100MHz,MeOD)δ:170.0(Cquat.),168.4(Cquat.),159.4(Cquat.),144.4(Cquat.),134.5(Cquat.),131.7(2CH),130.9(Cquat.),130.8(2CH),129.9(Cquat.),128.4(2CH),116.5(2CH),70.4(CH2),64.5(CH),56.7(br,CH2),52.8(CH3),38.8(br,CH3),37.7(CH2),
13.3(CH3).
13.3(CH3).
[0263] HRMS:m/z C21H24NO5-计算值:370.16600，实测值:370.1739.
[0264] (R)-4-((4-(2-((羧甲基)(甲基)氨基)丙基)苯氧基)甲基)苯甲酸盐酸盐(Q)(PS-RG0065B)
[0265]
[0266] 按照11C的制备方法，用酸处理使其转化为化合物C，C-18反相柱层析(H2O/MeOH,90:10至50:50)后获得灰白色固体化合物Q(13mg,12％收率)。
[0267] 1H NMR(400MHz,MeOD)δ:7.88(d,J＝8.2Hz,2H),7.53(d,J＝8.2Hz,2H),7.21(d,J＝8.3Hz,2H),6.98(d,J＝8.3Hz,2H),5.15(s,2H),3.64(br s,2+1H),3.13(dd,J＝13.0,3.7Hz,1H),2.88(s,3H),2.73(dd,J＝13.0,10.6Hz,1H),1.21(d,J＝6.6Hz,3H).
[0268] 13C NMR(100MHz,MeOD)δ:172.2(Cquat.),170.0(Cquat.),159.5(Cquat.),143.0(Cquat.),134.5(Cquat.),131.7(2CH),129.8(Cquat.),129.0(2CH),128.4(2CH),116.6(2CH),70.5(CH2),64.4(CH),56.7(br,CH2),38.9(br,CH3),37.7(CH2),13.3(CH3).
[0269] (R)-N-甲基-N-(1-(4-(萘-2-基甲氧基)苯基)丙-2-基)甘氨酸盐酸盐(R)(PS-RG0227)
[0270]
[0271] 按照11C的制备方法，用酸处理使其转化为化合物C，C-18反相柱层析(H2O/MeOH,90:10至30:70)后获得米黄色固体化合物R(30mg,62％收率)。
[0272] 1H NMR(400MHz,MeOD)δ:7.87-7.81(m,4H),7.52(br d,J＝8.3Hz,1H),7.47-7.45(m,2H),7.18(d,J＝8.2Hz,2H),7.00(d,J＝8.2Hz,2H),5.19(s,2H),3.62(br s,2+1H),3.11(dd,J＝13.1,3.3Hz,1H),2.85(s,3H),2.69(dd,J＝13.1,10.6Hz,1H),1.17(d,J＝
6.5Hz,3H).
6.5Hz,3H).
[0273] 13C NMR(100MHz,MeOD)δ:170.0(Cquat.),159.6(Cquat.),136.3(Cquat.),134.9(Cquat.),134.6(Cquat.),131.6(2CH),129.6(Cquat),129.4(CH),129.1(CH),128.9(CH),127.5(CH),127.4(CH),127.2(CH),126.6(CH),116.6(2CH),71.2(CH2),64.5(CH),56.7(br,CH2),38.8(br,CH3),37.7(CH2),13.3(CH3).
[0274] HRMS:m/z C23H26NO3+计算值:364.19072，实测值:364.18982.
[0275] (R)-N-甲基-N-(1-(4-(吡啶-2-基甲氧基)苯基)丙-2-基)甘氨酸盐酸盐(S)(PS-RG0217)
[0276]
[0277] 按照11C的制备方法，用酸处理使其转化为化合物C，C-18反相柱层析(H2O/MeOH,90:10至30:70)后获得浅棕色固体化合物S(55mg,68％收率)。
[0278] 1H NMR(400MHz,MeOD)δ:8.54(d,J＝4.9Hz,1H),7.86(td,J＝7.8,1.4Hz,1H),7.59(d,J＝7.8Hz,1H),7.37(dd,J＝7.8,4.9Hz,1H),7.22(d,J＝8.4Hz,1H),7.00(d,J＝
8.4Hz,1H),5.16(s,2H),3.69-3.60(m,2+1H),3.15(dd,J＝13.1,3.9Hz,1H),2.89(s,3H),
2.73(dd,J＝13.1,10.6Hz,1H),1.21(d,J＝6.6Hz,3H).
8.4Hz,1H),5.16(s,2H),3.69-3.60(m,2+1H),3.15(dd,J＝13.1,3.9Hz,1H),2.89(s,3H),
2.73(dd,J＝13.1,10.6Hz,1H),1.21(d,J＝6.6Hz,3H).
[0279] 13C NMR(100MHz,MeOD)δ:170.0(Cquat.),159.3(Cquat.),158.4(Cquat.),150.0(CH),139.1(CH),131.7(2CH),130.0(Cquat.),124.6(CH),123.5(CH),116.5(2CH),71.4(CH2),
64.5(CH),56.7(br,CH2),38.9(br,CH3),37.6(CH2),13.3(CH3).
64.5(CH),56.7(br,CH2),38.9(br,CH3),37.6(CH2),13.3(CH3).
[0280] HRMS:m/z C18H21N2O3-计算值:313.15577，实测值:313.15601.
[0281] (R)-N-甲基-N-(1-(4-(吡啶-4-基甲氧基)苯基)丙-2-基)甘氨酸盐酸盐(T)(PS-AD0068)
[0282]
[0283] 按照11C的制备方法，用酸处理使其转化为化合物C，C-18反相柱层析(H2O/MeOH,90:10至30:70)后获得灰白色蜡状物化合物T(16mg,35％收率)。
[0284] 1H NMR(400MHz,MeOD)δ:8.52(d,J＝4.9Hz,2H),7.51(d,J＝4.9Hz,2H),7.23(d,J＝8.2Hz,2H),7.00(d,J＝8.2Hz,2H),5.18(s,2H),3.69-3.57(m,2+1H),3.14(dd,J＝13.0,3.5Hz,1H),2.88(s,3H),2.74(dd,J＝13.0,10.7Hz,1H),1.21(d,J＝6.5Hz,3H).
[0285] 13C NMR(100MHz,MeOD)δ:170.0(Cquat.),159.1(Cquat.),150.3(2CH),149.7(Cquat.),131.8(2CH),130.2(Cquat.),123.4(2CH),116.5(2CH),69.1(CH2),64.4(CH),56.7(br,CH2),
38.9(br,CH3),37.7(CH2),13.3(CH3).
38.9(br,CH3),37.7(CH2),13.3(CH3).
[0286] 图2(化合物U)
[0287] (4-羟基苯乙基)氨基甲酸甲酯(13)
[0288]
[0289] 酪胺(1.5g,10.9mmol)和碳酸氢钠(2.8g,33.9mmol)溶于THF和水(各20mL)1:1的混合液中，冷至0℃滴入氯甲酸甲酯(0.9mL,12.0mmol)。混合物在0℃搅拌3小时，之后用水稀释，用EtOAc和DCM萃取。有机层用水洗涤，合并，用Na2SO4干燥，过滤，真空浓缩。获得浅黄色蜡状化合物13(2.2g，定量收率)，随后转变为近乎无色的固体。
[0290] 1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:7.03-7.01(m,2H),6.80-6.75(m,2H),4.76(br s,1H),3.66(s,3H),3.42-3.37(m,2H),2.72(t,J＝6.8Hz,2H).
[0291] (4-(苄基氧基)苯乙基)氨基甲酸甲酯(14)
[0292]
[0293] 根据合成4B的O-烷基化方法，化合物13(1.0g,5.13mmol)转化成14(白色固体；1.5g,定量收率)。
[0294] 1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:7.45-7.36(m,4H),7.34-7.30(m,1H),7.11-7.09(m,2H),6.94-6.90(m,2H),5.05(s,2H),4.66(br s,1H),3.66(s,3H),3.43-3.28(m,2H),2.77(t,J＝6.8Hz,2H).
[0295] (4-(苄基氧基)苯乙基)甲基胺(15)
[0296]
[0297] 根据合成8的LiAlH4还原方法，氨基甲酸酯14(500mg,1.75mmol)转化成15(无色蜡状物；251mg,59％收率)。
[0298] 1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:7.45-7.36(m,4H),7.35-7.30(m,1H),7.15-7.11(m,2H),6.93-6.90(m,2H),5.04(s,2H),2.85-2.75(m,4H),2.45(s,3H).
[0299] N,N-(4-(苄基氧基)苯乙基)(甲基)甘氨酸叔丁酯(16)
[0300]
[0301] 溴乙酸叔丁酯(80μL,0.54mmol)加到15(130mg,0.54mmol)和Cs2CO3(351mg,1.08mmol)的DMF(3mL)溶液中，所得混合物室温下搅拌过夜。随后混合物用水稀释并用DCM萃取。合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤，真空浓缩。粗产品快速硅胶柱层析(己烷/乙酸乙酯
9:1至5:5)，获得淡黄色蜡状物16(108mg,56％收率)。
9:1至5:5)，获得淡黄色蜡状物16(108mg,56％收率)。
[0302] 1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:7.44-7.36(m,4H),7.34-7.30(m,1H),7.14-7.10(m,2H),6.92-6.98(m,2H),5.04(s,2H),3.21(s,2H),2.77-2.69(m,4H),2.44(s,3H),1.47(s,9H).[0303] N,N-(4-(苄基氧基)苯乙基)(甲基)甘氨酸盐酸盐(U)(PS-RG0064)
[0304]
[0305] 按照由11C制备化合物C的方法，C-18反相柱层析(H2O/MeOH,90:10to 30:70)后自16获得白色粉末化合物U(80mg,89％收率)。
[0306] 1H NMR(400MHz,MeOD)δ:7.43-7.40(m,2H),7.38-7.34(m,2H),7.32-7.27(m,1H),7.24-7.20(m,2H),6.99-6.95(m,2H),5.06(s,2H),4.19-4.09(m,2H),3.40(br s,2H),
3.05-3.01(m,2+3H).
3.05-3.01(m,2+3H).
[0307] 13C NMR(100MHz,MeOD)δ:168.4(Cquat.),159.6(Cquat.),138.8(Cquat.),131.1(2CH),129.6(2CH),129.4(Cquat.),129.0(CH),128.7(2CH),116.6(2CH),71.1(CH2),59.4(CH2),
56.9(CH2),42.2(CH3),30.7(CH2).
56.9(CH2),42.2(CH3),30.7(CH2).
[0308] HRMS:m/z C18H22NO3+计算值:300.15942，实测值:300.15900.
[0309] 图3(化合物V和W)
[0310] N-(Boc)酪氨酸甲酯(17)
[0311]
[0312] 参照Blacker,A.John et al.在Eur.J.Org.Chem.2009,3413-3426中所述方法制备。
[0313] 化合物2(3.5g,15.1mmol)悬浮于DCM(50mL)中，冷至0℃随后滴加三乙胺(4.2mL,30.2mmol)。30分钟后再滴入Boc2O(3.6g,16.6mmol)的DCM(3mL)溶液。撤去冰浴，反应混合物室温下搅拌过夜。于0℃用水淬灭，分层，有机层用水洗涤。水层用DCM萃取，合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤，真空浓缩。粗制混合物快速硅胶柱层析(己烷/乙酸乙酯9:1至7:3)，获得无色蜡状物17，静置缓慢转变为白色固体(4.1g,91％收率)。
[0314] 1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:6.98-6.94(m,2H),6.73(d,J＝8.2Hz,2H),5.00(br d,J＝8.0Hz,1H),4.56-4.51(m,1H),3.71(s,3H),3.49(s,1H),3.03(dd,J＝13.9,5.7Hz,1H),2.96(dd,J＝13.9,6.1Hz,1H),1.42(s,9H).
[0315] N-(Boc)(O-苄基氧基)酪氨酸甲酯(18V)
[0316]
[0317] 按照合成4A的方法，化合物17(1.0g,3.39mmol)转化成白色固体18V(1.3g,95％收率)。
[0318] 1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:7.44-7.36(m,4H),7.35-7.30(m,1H),7.06-7.02(m,2H),6.92-6.88(m,2H),5.04(s,2H),4.97(br d,J＝8.2Hz,1H),4.57-4.52(m,1H),3.71(s,3H),
3.08-2.97(m,2H),1.42(s,9H).
3.08-2.97(m,2H),1.42(s,9H).
[0319] N-(Boc)-N-(甲基)(O-苄基氧基)酪氨酸(19V)
[0320]
[0321] 冷至0℃，向18V(1.30g,3.37mmol)和MeI(1.05mL,16.86mmol)的无水THF(15mL)溶液中，分批加入NaH(60％悬浮液于油中,674mg,16.86mmol)。所得混合物室温下搅拌过夜，随后冷至0℃用冰水淬灭。真空移除THF后，残留物倒入水中并用正己烷洗涤两遍。随后用柠檬酸将水层酸化至pH 4，用DCM萃取。合并的有机层用食盐水和水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤，真空浓缩。粗制混合物快速硅胶柱层析(己烷/乙酸乙酯6:4)，获得浅黄色油状物19V(453mg,35％收率)。
[0322] 1H NMR(400MHz,CDCl3)δ(阻转异构体混合物):7.44-7.36(m,4H),7.34-7.30(m,1H),7.14-7.09(m,2H),6.93-6.89(m,2H),5.04(s,2H),[4.76(dd,J＝10.8,5.0Hz,1H)/
4.56(dd,J＝10.8,4.2Hz,1H]阻转异构体,[3.29-3.21(m,2H)/3.07(dd,J＝14.3,11.1Hz,
1H),2.98(dd,J＝14.3,11.1,1H)]阻转异构体,[2.75(s,3H)/2.69(s,3H)]阻转异构体,
[1.41(s,9H)/1.35(s,9H)]阻转异构体.
4.56(dd,J＝10.8,4.2Hz,1H]阻转异构体,[3.29-3.21(m,2H)/3.07(dd,J＝14.3,11.1Hz,
1H),2.98(dd,J＝14.3,11.1,1H)]阻转异构体,[2.75(s,3H)/2.69(s,3H)]阻转异构体,
[1.41(s,9H)/1.35(s,9H)]阻转异构体.
[0323] N-(甲基)(O-苄基氧基)酪氨酸甲酯(20V)
[0324]
[0325] 化合物19V(450mg,1.17mmol)溶于MeOH(6.0mL)，冷至0℃后滴加亚硫酰氯(169μL,2.34mmol)。所得溶液室温下搅拌过夜。随后蒸除溶剂，残留物溶于DCM，用5％NaHCO3水溶液洗涤，用Na2SO4干燥，过滤，真空浓缩。获得浅黄色油状化合物20V(245mg,62％收率)。
[0326] 1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:7.44-7.36(m,4H),7.34-7.30(m,1H),7.10-7.07(m,2H),6.92-6.88(m,2H),5.04(s,2H),3.67(s,3H),3.41(t,J＝6.7Hz,1H),2.94-2.86(m,2H),
2.36(s,3H),1.66(br s,1H).
2.36(s,3H),1.66(br s,1H).
[0327] N-(乙酸叔丁酯)-N-(甲基)(O-苄基氧基)酪氨酸甲酯(21V)
[0328]
[0329] 化合物20V(230mg,0.77mmol)溶于DMF(1.5mL)中，并滴加溴乙酸叔丁酯(114μL,0.77mmol)。搅拌5分钟后，加入Cs2CO3(501mg,1.54mmol)，所得混合物室温下搅拌过夜。随后用大量水稀释，用DCM萃取。合并有机层，并用Na2SO4干燥，过滤，真空蒸除溶剂。粗产品通过自动快速硅胶柱层析纯化(己烷/乙酸乙酯9:1至7:3)，获得淡黄色蜡状物21V(157mg,49％收率)。
[0330] 1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:7.44-7.35(m,4H),7.34-7.29(m,1H),7.15-7.11(m,2H),6.90-6.87(m,2H),5.02(s,2H),3.59(dd,J＝9.4,5.9Hz,1H),3.59(s,3H),3.42(d,J＝
17.0Hz,1H),3.26(d,J＝17.0Hz,1H),2.99(dd,J＝13.4,9.4Hz,1H),2.93(dd,J＝13.4,
5.9Hz,1H),2.48(s,3H),1.47(s,9H).
17.0Hz,1H),3.26(d,J＝17.0Hz,1H),2.99(dd,J＝13.4,9.4Hz,1H),2.93(dd,J＝13.4,
5.9Hz,1H),2.48(s,3H),1.47(s,9H).
[0331] N-羧甲基)-N-(甲基-O-苄基氧基酪氨酸甲酯盐酸盐(V)(PS-RG0123)
[0332]
[0333] 按照由11C制备化合物C的方法，由21V(100mg,0.24mmol)于C-18反相柱层析(H2O/MeOH,90:10至30:70)后，获得白色粉末化合物V(82mg,86％收率)。
[0334] 1H NMR(400MHz,MeOD)δ:7.42-7.39(m,2H),7.37-7.32(m,2H),7.31-7.26(m,1H),7.16-7.12(m,2H),6.96-6.89(m,2H),5.03(s,2H),3.89(dd,J＝8.4,6.8Hz,1H),3.59(s,
3H),3.58(d,J＝16.9Hz,1H),3.48(d,J＝16.9Hz,1H),3.09-2.99(m,2H),2.62(s,3H).
3H),3.58(d,J＝16.9Hz,1H),3.48(d,J＝16.9Hz,1H),3.09-2.99(m,2H),2.62(s,3H).
[0335] 13C NMR(100MHz,MeOD)δ:173.0(Cquat.),172.3(Cquat.),159.4(Cquat.),138.8(Cquat.),131.4(2CH),130.2(Cquat.),129.6(2CH),129.0(CH),128.7(2CH),116.2(2CH),71.1(CH2),69.3(CH),56.8(CH2),52.4(CH3),40.4(CH3),35.5(CH2).
[0336] HRMS:m/z C20H24NO5+计算值:358.16490，实测值:358.16473.
[0337] N-羧甲基-N-甲基-O-3-氯苄基氧基酪氨酸甲酯盐酸盐(W)(PS-RG0122)
[0338]
[0339] 按照由11C制备化合物C的方法，由21W(100mg，0.22mmol)于C-18反相柱层析(H2O/MeOH,90:10至30:70)后，获得黄色固体化合物W(72mg,75％收率)。
[0340] 1H NMR(400MHz,MeOD)δ:7.43(br s,1H),7.34-7.27(m,3H),7.16-7.13(m,2H),6.92-6.89(m,2H),5.03(s,2H),3.90(t,J＝7.6Hz,1H),3.59(d,J＝16.9Hz,1H),3.59(s,
3H),3.49(d,J＝16.9Hz,1H),3.05-3.03(m,2H),2.62(s,3H).
3H),3.49(d,J＝16.9Hz,1H),3.05-3.03(m,2H),2.62(s,3H).
[0341] 13C NMR(100MHz,MeOD)δ:172.9(Cquat.),172.2(Cquat.),159.1(Cquat.),141.3(Cquat.),135.5(Cquat.),131.5(2CH),131.2(CH),130.4(Cquat.),129.0(CH),128.4(CH),126.8(CH),116.2(2CH),70.1(CH2),69.3(CH),56.8(CH2),52.4(CH3),40.4(CH3),35.5
(CH2).
(CH2).
[0342] HRMS:m/z C20H24NO5+计算值:392.12593，实测值:392.12552.
[0343] 图4(化合物X,Y,Z,AA和AB)
[0344] (S)-N-(1-(4-(苄基氧基)苯基)-3-羟基丙-2-基)-N-甲基胺22
[0345]
[0346] 化合物4B(5.0g,14.6mmol)溶于无水THF(75mL)中，并分批加入LiAlH4(2.2g,58.2mmol)。所得悬浊液回流搅拌3h。一旦反应完毕，随之连续用水、10％NaOH水溶液和水(各2.2mL)淬灭。一旦悬浊液中的固体变白，过滤并用DCM和THF洗涤。随后滤液在真空下蒸发，残留物通过快速硅胶柱纯化(己烷:乙酸乙酯1:1至EtOAc,然后DCM:MeOH 7:3)获得白色固体(3.48g,88％)。
[0347] 1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:7.44-7.31(m,5H),7.10(d,J＝8.4Hz,2H),6.92(d,J＝8.4Hz,2H),5.05(s,2H),3.64(dd,J＝10.8,3.6Hz,1H),3.34(dd,J＝10.8,4.8Hz,1H),
2.78-2.64(m,2H+1H),2.41(s,3H),2.06(br s,2H).
2.78-2.64(m,2H+1H),2.41(s,3H),2.06(br s,2H).
[0348] (S)-N-(1-(4-(苄基氧基)苯基)-3-羟基丙-2-基)-N-甲基甘氨酸叔丁酯23
[0349]
[0350] Et3N(615μL,4.41mmol)和溴乙酸叔丁酯(665μL,4.41mmol)加到22(1.14g,4.20mmol)的DMF(20mL)溶液中。混合物室温搅拌过夜。真空蒸除DMF。残留物溶于DCM并用柠檬酸溶液洗涤。水层用DCM萃取三次。随后合并的有机层用饱和NaHCO3溶液、食盐水和水依次洗涤。有机层用Na2SO4干燥，过滤，真空浓缩。粗产品通过自动快速柱层析纯化(己烷/乙酸乙酯70/30至50/50.)获得无色油状物23(1,30g,80％)。
[0351] 1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:7.44-7.30(m,5H),7.06(d,J＝8.4Hz,2H),6.90(d,J＝8.4Hz,2H),5.04(s,2H),3.44(dd,J＝10.4,4.4Hz,1H),3.32(br t,J＝10.4Hz,1H),3.28(d,J＝16.4Hz,1H),3.13(d,J＝16.4Hz,1H),3.01-2.94(m,1H),2.78(dd,J＝13.6,5.6Hz,
1H),2.43(s,3H),2.35(dd,J＝13.6,8.8Hz,1H),1.47(s,9H).
1H),2.43(s,3H),2.35(dd,J＝13.6,8.8Hz,1H),1.47(s,9H).
[0352] (S)-N-(1-(4-(苄基氧基)苯基)-3-羟基丙-2-基)-N-甲基甘氨酸X(PS-RG0188)
[0353]
[0354] 按照由11C制备化合物C的方法，由23于C-18反相柱层析(H2O/MeOH,90:10至30:70)后，获得白色粉末化合物X(120mg,66％收率)。
[0355] 1H NMR(400MHz,MeOD)δ:7.43-7.27(m,5H),7.09(d,J＝8.6Hz,2H),6.91(d,J＝8.6Hz,2H),5.05(s,2H),3.47(dd,J＝11.4,10.0Hz,1H),3.39(dd,J＝11.4,3.8Hz,1H),
3.27(d,J＝15.5Hz,1H),3.12(d,J＝15.5Hz,1H),2.95(br s,1H),2.84(dd,J＝13.4,
3.8Hz,1H),2.39(s,3H),2.28(dd,J＝13.4,10.7Hz,1H).
3.27(d,J＝15.5Hz,1H),3.12(d,J＝15.5Hz,1H),2.95(br s,1H),2.84(dd,J＝13.4,
3.8Hz,1H),2.39(s,3H),2.28(dd,J＝13.4,10.7Hz,1H).
[0356] 13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ:175.3(Cquat.),156.5(Cquat.),137.2(Cquat.),132.4(Cquat.),129.9(2CH),128.4(2CH),127.8(CH),127.7(2CH),114.6(2CH),69.1(CH2),66.7(CH),59.7(CH2),58.4(CH2),37.1(CH3),30.4(CH2).
[0357] (S)-N-(1-(4-(苄基氧基)苯基)-3-氯丙-2-基)-N-甲基甘氨酸叔丁酯24
[0358]
[0359] 于0℃，向23(1.23g,3.20mmol)的无水DCM(20mL)溶液中加入Et3N(900μL,6.40mmol)，随后加入TsCl(1.22g,6.40mmol)和DMAP(117mg,0.96mmol)。混合物自0℃室温下搅拌过夜。一旦反应完毕，所得混合物用DCM稀释，用10％柠檬酸溶液洗涤。分出有机相，水相用DCM(3x)萃取。随后合并的有机相依次用饱和NaHCO3溶液和食盐水洗涤，再用Na2SO4干燥，过滤，真空蒸发。所得粗产物通过自动快速层析纯化(己烷比己烷/乙酸乙酯85/15)获得浅黄色油状物24(1,14g,88％)。
[0360] 1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:7.45-7.31(m,5H),7.18(d,J＝8.4Hz,2H),6.93(d,J＝8.4Hz,2H),5.05(s,2H),4.16-4.10(m,1H),3.31(s,2H),3.20(dd,J＝14.4,4.8Hz,1H),
2.90-2.85(m,3H),2.49(s,3H),1.47(s,9H).
2.90-2.85(m,3H),2.49(s,3H),1.47(s,9H).
[0361] (S)-N-(1-(4-(苄基氧基)苯基)-3-氯丙-2-基)-N-甲基甘氨酸Y(PS-AD0095)
[0362]
[0363] 按照由11C制备化合物C的方法，由24(84mg,0.21mmol)于C-18反相柱层析(H2O/MeOH,90:10至30:70)后，获得黄色固体化合物X(24mg,30％收率)。
[0364] 1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:7.43-7.30(m,5H),7.18(d,J＝8.4Hz,2H),6.94(d,J＝8.4Hz,2H),5.07(s,2H),4.33-4.27(m,1H),3.37-3.28(m,2H),3.19(dd,J＝14.5,3.9Hz,1H),2.83(d,J＝6.3Hz,2H),2.74(dd,J＝14.5,8.9Hz,1H),2.40(s,3H).
[0365] 13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ:171.9(Cquat.),157.0(Cquat.),137.2(Cquat.),130.4(2CH),130.0(Cquat.),128.4(2CH),127.8(CH),127.7(2CH),114.4(2CH),69.1(CH2),62.1(CH2),61.9(CH),57.8(CH2),41.9(CH3),40.5(CH2).
[0366] (S)-N-(1-(4-(苄基氧基)苯基)-3-氰基丙-2-基)-N-甲基甘氨酸叔丁酯25
[0367]
[0368] 向24(235mg,0.58mmol)的无水DMF(2.5mL)溶液中加入KCN(379mg,5.82mmol),18-冠-6醚(31mg,0.12mmol)和催化量的NaI。所得混合物在微波下于100℃搅拌1h30。之后，所得混合物在DCM和饱和NaHCO3溶液之间分配。有机层用饱和NaHCO3溶液和食盐水依次洗涤，再用Na2SO4干燥，过滤，真空蒸发。粗产物通过自动快速柱层析纯化(己烷比己烷/乙酸乙酯80/20)获得浅黄色油状物25(183mg,80％)。
[0369] 1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:7.45-7.31(m,5H),7.14(d,J＝8.0Hz,2H),6.93(d,J＝8.0Hz,2H),5.05(s,2H),3.39(d,J＝16.8Hz,1H),3.33(d,J＝16.8Hz,1H),3.26-3.20(m,
1H),3.02(dd,J＝13.6,4.8Hz,1H),2.67(dd,J＝13.6,9.6Hz,1H),2.53(s,3H),2.46(dd,J＝17.2,4.8Hz,1H),2.37(dd,J＝17.2,6.4Hz,1H),1.48(s,9H).
1H),3.02(dd,J＝13.6,4.8Hz,1H),2.67(dd,J＝13.6,9.6Hz,1H),2.53(s,3H),2.46(dd,J＝17.2,4.8Hz,1H),2.37(dd,J＝17.2,6.4Hz,1H),1.48(s,9H).
[0370] 13C NMR(100MHz,CDCl3)δ:170.3(Cquat.),157.6(Cquat.),136.9(Cquat.),130.3(Cquat.),130.0(2CH),128.5(2CH),127.9(CH),127.4(2CH),118.6(Cquat.),115.0(2CH),81.2(Cquat.),69.9(CH2),61.6(CH),56.4(CH2),37.8(CH3),36.3(CH2),28.0(3CH3),18.8(CH2).
[0371] (S)-N-(1-(4-(苄基氧基)苯基)-3-氰基丙-2-基)-N-甲基甘氨酸Z(PS-AD0186)
[0372]
[0373] 按照由11C制备化合物C的方法，由25(74mg,0.18mmol)于C-18反相柱层析(H2O/MeOH,90:10至30:70)后，获得白色固体化合物Z(54mg,77％)。
[0374] 1H NMR(400MHz,MeOD)δ:7.41-7.27(m,5H),7.20(d,J＝8.3Hz,2H),6.95(d,J＝8.3Hz,2H),5.03(s,2H),3.60-3.50(m,3H),3.10(dd,J＝13.3,5.0Hz,1H),2.79(dd,J＝
13.3,9.8Hz,1H),2.75-2.62(m,2H),2.69(s,3H).
13.3,9.8Hz,1H),2.75-2.62(m,2H),2.69(s,3H).
[0375] 13C NMR(100MHz,MeOD)δ:172.6(Cquat.),159.5(Cquat.),138.8(Cquat.),131.5(2CH),130.1(Cquat.),129.7(2CH),129.0(CH),128.7(2CH),119.1(Cquat.),116.5(2CH),71.1(CH2),
63.6(CH),57.2(CH2),38.8(CH3),36.2(CH2),18.8(CH2).
63.6(CH),57.2(CH2),38.8(CH3),36.2(CH2),18.8(CH2).
[0376] (S)-N-(1-氰基-3-(4-羟基苯基)丙-2-基)-N-甲基甘氨酸26
[0377]
[0378] 按照图1描述的从9B制备化合物10的方法，由25(213mg,0.54mmol)制备相应的化合物26，化合物26为无色油状物静置后固化(148mg,90％)。
[0379] 1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:7.06(d,J＝8.0Hz,2H),6.77(d,J＝8.0Hz,2H),5.43(br s,OH),3.38(d,J＝16.8Hz,1H),3.33(d,J＝16.8Hz,1H),3.22-3.17(m,1H),2.99(dd,J＝13.6,4.8Hz,1H),2.64(dd,J＝13.6,9.6Hz,1H),2.52(s,3H),2.46(dd,J＝17.0,4.8Hz,
1H),2.36(dd,J＝17.0,6.2Hz,1H),1.47(s,9H).
1H),2.36(dd,J＝17.0,6.2Hz,1H),1.47(s,9H).
[0380] (S)-N-(1-氰基-3-(4-((3,4-二氯苄基)氧基)苯基)丙-2-基)-N-甲基甘氨酸叔丁酯27
[0381]
[0382] 氮气氛下，向26(131mg,0.43mmol)的无水DMF(2mL)溶液中加入K2CO3(179mg,1.29mmol)和3,4-二氯苄基溴(83μL,0.56mmol)。反应室温搅拌过夜。粗制混合物通过硅藻土过滤并用DCM洗涤。真空蒸发滤液。粗产物通过自动快速层析纯化(己烷/乙酸乙酯90/10至75/25)获得无色油状物27(175mg,88％)。
[0383] 1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:7.53(s,1H),7.45(d,J＝8.4Hz,1H),7.25(d,J＝8.4Hz,1H),7.14(d,J＝8.4Hz,2H),6.88(d,J＝8.4Hz,2H),4.99(s,2H),3.38(d,J＝17.0Hz,1H),
3.32(d,J＝17.0Hz,1H),3.26-3.19(m,1H),3.02(dd,J＝13.6,5.2Hz,1H),2.68(dd,J＝
13.6,9.2Hz,1H),2.52(s,3H),2.46(dd,J＝17.2,4.8Hz,1H),2.37(dd,J＝17.2,6.0Hz,
1H),1.47(s,9H).
3.32(d,J＝17.0Hz,1H),3.26-3.19(m,1H),3.02(dd,J＝13.6,5.2Hz,1H),2.68(dd,J＝
13.6,9.2Hz,1H),2.52(s,3H),2.46(dd,J＝17.2,4.8Hz,1H),2.37(dd,J＝17.2,6.0Hz,
1H),1.47(s,9H).
[0384] 13C NMR(100MHz,CDCl3)δ:170.3(Cquat.),157.1(Cquat.),137.3(Cquat.),132.7(Cquat.),131.9(Cquat.),130.8(Cquat.),130.6(CH),130.2(2CH),129.2(CH),126.5(CH),118.6(Cquat.),115.0(2CH),81.3(Cquat.),68.5(CH2),61.6(CH),56.4(CH2),37.8(CH3),36.4(CH2),28.1(3CH3),18.9(CH2).
[0385] (S)-N-(1-氰基-3-(4-((3,4-二氯苄基)氧基)苯基)丙-2-基)-N-甲基甘氨酸AA(PS-AD0191)
[0386]
[0387] 按照由11C制备化合物C的方法，C-18反相柱层析(H2O/MeOH,90:10至30:70)后，由27(162mg,0.44mmol)制备白色固体化合物AA(120mg,66％)。
[0388] 1H NMR(400MHz,MeOD)δ:7.58(s,1H),7.49(d,J＝8.2Hz,1H),7.33(d,J＝8.2Hz,1H),7.22(d,J＝8.2Hz,2H),6.95(d,J＝8.2Hz,2H),5.03(s,2H),3.57-3.48(m,3H),3.10(dd,J＝13.3,3.8Hz,1H),2.79(dd,J＝13.3,9.9Hz,1H),2.74-2.62(m,2H),2.66(s,3H).[0389] 13C NMR(100MHz,MeOD)δ:173.1(Cquat.),159.1(Cquat.),139.8(Cquat.),133.5(Cquat.),132.6(Cquat.),131.8(CH),131.6(2CH),130.9(Cquat.),130.4(CH),128.3(CH),
119.3(Cquat.),116.5(2CH),69.5(CH2),63.6(CH),57.2(CH2),38.7(CH3),36.4(CH2),18.8(CH2).
119.3(Cquat.),116.5(2CH),69.5(CH2),63.6(CH),57.2(CH2),38.7(CH3),36.4(CH2),18.8(CH2).
[0390] HRMS:m/z C20H20Cl2N2O3-计算值:405.07782，实测值:405.07819.
[0391] (S)-N-(1-(苄基氧基)-3-(4-((3,4-二氯苄基)氧基)苯基)丙-2-基)-N-甲基甘氨酸AB(PS-RG0221)
[0392]
[0393] 化合物23(200mg,0.52mmol)加到无水THF溶液中，冷至0℃，随后加入NaH(60％悬浊液于油中,42mg,1.04mmol)。搅拌10分钟后，滴加苄溴(93μL,0.78mmol)，所得溶液室温下搅拌过夜。之后冷却至0℃，并滴加浓盐酸(2.0mL)。所得溶液额外搅拌2h，随后真空除去溶剂。粗产物通过两根连续的C-18反相柱纯化(H2O/MeOH 90:10至5:95随后50:50至20:80)，获得白色固体AB(108mg,46％).
[0394] 1H NMR(400MHz,MeOD)δ:7.43-7.42(m,2H),7.38-7.27(m,8H),7.15(d,J＝8.6Hz,2H),6.94(d,J＝8.6Hz,2H),5.06(s,2H),4.55(d,J＝11.7Hz,1H),4.45(d,J＝11.7Hz,1H),
3.83-3.68(m,3H),3.64(dd,J＝11.7,2.9Hz,1H),3.55(dd,J＝11.7,7.1Hz,1H),3.07(dd,J＝13.3,4.6Hz,1H),2.93(s,3H),2.90(dd,J＝13.3,10.9Hz,1H).
3.83-3.68(m,3H),3.64(dd,J＝11.7,2.9Hz,1H),3.55(dd,J＝11.7,7.1Hz,1H),3.07(dd,J＝13.3,4.6Hz,1H),2.93(s,3H),2.90(dd,J＝13.3,10.9Hz,1H).
[0395] 13C NMR(100MHz,MeOD)δ:170.0(Cquat.),159.7(Cquat.),138.8(Cquat.),138.6(Cquat.),131.5(2CH),129.74(2CH),129.66(2CH),129.4(2CH),129.3(CH),129.0(CH),128.9(Cquat),128.7(2CH),116.6(2CH),74.5(CH2),71.1(CH2),67.4(CH),66.6(CH2),58.1(CH2),39.9(CH3),32.1(CH2).
[0396] 图5(化合物AC)
[0397] (S)-3-(4-(苄基氧基)苯基)-2-((甲氧羰基)氨基)丙酸28
[0398]
[0399] 化合物4B(2.06g,6.0mmol)溶于THF(10mL)，一次性加入预溶于水(5mL)的LiOH(0.50g,21.0mmol)。所得悬浊夜混合物室温搅拌2h30。用1M KHSO4溶液将所得溶液酸化至pH＝4。所得混合物变白色浆状，并于DCM和水之间分配。水层用DCM萃取(三次)。合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤，真空蒸发。所得粗产物不用进一步纯化直接用于下一步。化合物28为白色固体(2.0g,100％)。
[0400] 1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:7.42-7.30(m,5H),7.09(d,J＝8.2Hz,2H),6.91(d,J＝8.2Hz,2H),5.10(br d,J＝7.6Hz,1H),5.03(s,2H),4.66-4.62(m,1H),3.67(s,3H),3.16-
3.04(m,2H).
3.04(m,2H).
[0401] (S)-4-(4-(苄基氧基)苯基)-3-((甲氧羰基)氨基)丁酸29
[0402]
[0403] 自28三步制得目标酯29。
[0404] 第一步(形成酰氯):28(1.52g,4.62mmol)悬浮于无水DCM(17mL)中，并冷至0℃。在加入5滴DMF后，于0℃向所得溶液中加入草酰氯(590μL,6.93mmol)。所得混合物室温下搅拌过夜。真空蒸除溶剂，粗产物直接应用到下一步中。
[0405] 第二步(形成重氮甲酮):在N2氛围中，上一步的酰氯粗产物(1.60g,4.62mmol)溶于无水THF(20mL)。所得溶液冷至-10℃，滴加入2M TMSD的Et2O(5.2mL,10.4mmol)溶液，随后加入Et3N(1.44mL,10.4mmol)后。所得溶液自-10℃到室温搅拌20h。反应混合物用DCM稀释，依次用饱和NaHCO3溶液和饱和NH4Cl溶液洗涤。有机层用Na2SO4干燥，过滤，真空蒸发。所得粗产物不必进一步纯化，直接用于下一步。
[0406] 第三步(形成目标酯):向上一步的重氮甲酮(161mg,0.46mmol)的MeOH(2mL)溶液中加入AgOBz(63mg,0.27mmol)的Et3N(1.21mL,8.66mmol)溶液。黑色混合物避光室温下搅拌过夜。之后真空蒸出溶剂，粗产物在DCM和10％的柠檬酸溶液之间分配。有机层之后用饱和NaHCO3溶液洗涤，而后用Na2SO4干燥，过滤，真空蒸发。所得粗产物通过自动快速层析纯化。(己烷比己烷/乙酸乙酯80/20)获得浅黄色油状物29(82mg,48％)。
[0407] 1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:7.44-7.30(m,5H),7.10(d,J＝8.2Hz,2H),6.92(d,J＝8.2Hz,2H),5.28(br s,1H),5.04(s,2H),4.17(br d,J＝5.6Hz,1H),3.68(s,3H),3.64(s,
3H),2.91-2.85(m,1H),2.80-2.75(m,1H),2.55-2.45(m,1H).4.66-4.62(m,1H).
3H),2.91-2.85(m,1H),2.80-2.75(m,1H),2.55-2.45(m,1H).4.66-4.62(m,1H).
[0408] 13C NMR(100MHz,CDCl3)δ171.9(Cquat.),157.5(Cquat.),156.1(Cquat.),137.1(Cquat.),130.2(2CH),129.7(Cquat.),128.5(2CH),127.8(CH),127.4(2CH),114.8(2CH),69.8(CH2),51.9(CH3),51.6(CH3),49.3(CH),39.3(CH2),37.2(CH2).
[0409] (S)-4-(4-(苄基氧基)苯基)-3-(甲基氨基)丁-1-醇30
[0410]
[0411] 酯29(200mg,0.57mmol)溶于无水THF(3mL)。于0℃分几批加入LiAlH4(129mg,3.39mmol)。之后所得混合物加热至回流过夜。一旦反应完毕，混合物通过依次添加水、10％NaOH溶液和水淬灭。于0℃搅拌1小时后，通过硅藻土层过滤白色悬浊液并用DCM洗涤。滤液真空蒸发。粗产物通过自动快速层析纯化(DCM比DCM/MeOH 94/6)获得无色油状物，静置后固化(82mg；51％)。
[0412] 1H NMR(400MHz,MeOD)δ:7.42-7.27(m,5H),7.12(d,J＝8.4Hz,2H),6.93(d,J＝8.4Hz,2H),5.04(s,2H),3.69-3.57(m,2H),2.84-2.73(m,2H),2.61(dd,J＝13.2,7.2Hz,
1H),2.37(s,3H),1.67-1.57(m,2H).
1H),2.37(s,3H),1.67-1.57(m,2H).
[0413] 13C NMR(100MHz,MeOD)δ:158.9(Cquat.),138.8(Cquat.),132.4(Cquat.),131.3(2CH),129.5(2CH),128.8(CH),128.5(2CH),116.1(2CH),71.0(CH2),60.9(CH2),60.7(CH),40.0(CH2),35.9(CH2),33.4(CH3).
[0414] (S)-N-(1-(4-(苄基氧基)苯基)-4-羟基丁-2-基)-N-甲基甘氨酸叔丁酯31
[0415]
[0416] 按照图4描述的从22制备化合物23的方法，由30(81mg,0.28mmol)制备相应的化合物31。获得化合物31为无色油状物无需进一步纯化(107mg,94％).
[0417] 1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:7.43-7.29(m,5H),7.03(d,J＝8.0Hz,2H),6.89(d,J＝8.0Hz,2H),5.02(s,2H),3.73-3.64(m,2H),3.33(d,J＝16.2Hz,1H),3.17(d,J＝16.2Hz,
1H),2.92-2.84(m,3H),2.39(br s,3H),2.26(dd,J＝12.8,10.0Hz,1H),1.74-1.64(m,1H),
1.48(s,9H).
1H),2.92-2.84(m,3H),2.39(br s,3H),2.26(dd,J＝12.8,10.0Hz,1H),1.74-1.64(m,1H),
1.48(s,9H).
[0418] (S)-N-(1-(4-(苄基氧基)苯基)-4-羟基丁-2-基)-N-甲基甘氨酸AC(PS-AD0179)[0419]
[0420] 按照由11C制备化合物C的方法，C-18反相层析(H2O/MeOH,90:10至30:70)后，由31(30mg,0.08mmol)制得白色固体化合物AC(12mg,42％)。
[0421] 1H NMR(400MHz,MeOD)δ:7.43-7.28(m,5H),7.21(d,J＝8.2Hz,2H),6.98(d,J＝8.1Hz,2H),5.06(s,2H),3.76-3.69(m,4H),3.59(br td,J＝10.7,2.3Hz,1H),3.14(dd,J＝
13.4,3.8Hz,1H),2.92(s,3H),2.76(dd,J＝13.4,10.7Hz,1H),2.06-1.95(m,1H),1.68(br dd,J＝15.6,2.6Hz,1H).
13.4,3.8Hz,1H),2.92(s,3H),2.76(dd,J＝13.4,10.7Hz,1H),2.06-1.95(m,1H),1.68(br dd,J＝15.6,2.6Hz,1H).
[0422] 13C NMR(100MHz,MeOD)δ:169.7(Cquat.),159.8(Cquat.),138.7(Cquat.),131.5(2CH),129.5(2CH),129.3(Cquat),128.9(CH),128.6(2CH),116.5(2CH),71.0(CH2),69.4(CH),61.3(CH2),57.7(CH2),37.9(CH3),34.8(CH2),30.8(CH2).
[0423] 图6(化合物AD
[0424] 4-氯甲基-7-羟基香豆素(32)
[0425]
[0426] 参照Carotti,A.et al.,J.Med.Chem.2009,52,6685-6706制备
[0427] 4-氯甲基-7-苄基氧基香豆素(33)
[0428]
[0429] 参照Carotti,A.et al.,J.Med.Chem.2009,52,6685-6706制备
[0430] N-((7-(苄基氧基)-2-氧代-2H-苯并吡喃-4-基)甲基)-N-甲基甘氨酸叔丁酯(34)[0431]
[0432] 包含K2CO3(207mg,1.5mmol)的肌氨酸叔丁酯盐酸盐(217mg,1.2mmol)的DMF(2mL)溶液搅拌5分钟(溶液变清)。加入化合物33(300mg,1.0mmol)，5min后加入Cs2CO3(488mg,1.5mmol)，所得混合物避光室温下搅拌过夜。随后混合物用水稀释，用DCM萃取，真空浓缩。
粗产品混合物快速硅胶柱层析(己烷/乙酸乙酯8:2至5:5)，获得黄色蜡状物34(141mg,35％收率)。
粗产品混合物快速硅胶柱层析(己烷/乙酸乙酯8:2至5:5)，获得黄色蜡状物34(141mg,35％收率)。
[0433] 1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:7.90(d,J＝8.8Hz,1H),7.44-7.32(m,5H),6.92(dd,J＝8.8,2.5Hz,1H),6.88(d,J＝2.5Hz,1H),6.34(t,J＝1.0Hz,1H),5.13(s,2H),3.82(d,J＝
1.0Hz,2H),3.27(s,2H),2.42(s,3H),1.49(s,9H).
1.0Hz,2H),3.27(s,2H),2.42(s,3H),1.49(s,9H).
[0434] 13C NMR(100MHz,CDCl3)δ:170.2(Cquat.),161.8(Cquat.),161.7(Cquat.),155.7(Cquat.),152.8(Cquat.),136.1(Cquat.),128.9(2CH),128.5(CH),127.7(2CH),126.5(CH),113.1(CH),112.8(Cquat.),112.4(CH),102.1(CH),81.6(Cquat.),70.6(CH2),59.1(CH2),57.6(CH2),42.4(CH3),28.4(3CH3).
[0435] MS:432.2[M+Na]+,410.2[M+H]+
[0436] N-((7-(苄基氧基)-2-氧代-2H-苯并吡喃-4-基)甲基)-N-甲基甘氨酸盐酸盐(R)(PS-RG0098)
[0437]
[0438] 按照由11C制备化合物C的方法，经DCM打浆，由相应的叔丁酯34(75mg,0.18mmol)获得深米色粉末化合物AD(46mg,64％收率)。
[0439] 1H NMR(400MHz,MeOD)δ:8.00(d,J＝8.9Hz,1H),7.48-7.45(m,2H),7.41-7.37(m,2H),7.35-7.31(m,1H),7.12(dd,J＝8.9,2.5Hz,1H),7.08(d,J＝2.5Hz,1H),6.55(s,1H),
5.23(s,2H),4.65(br s,2H),4.31(s,2H),3.00(s,3H).
5.23(s,2H),4.65(br s,2H),4.31(s,2H),3.00(s,3H).
[0440] 13C NMR(100MHz,MeOD)δ:168.7(Cquat.),164.4(Cquat.),161.8(Cquat.),157.4(Cquat.),145.7(Cquat.),137.7(Cquat.),129.8(2CH),129.5(CH),128.9(2CH),127.4(CH),117.9(CH),114.9(CH),112.7(Cquat.),103.7(CH),71.9(CH2),57.9(CH2),56.4(CH2),42.8(CH3).
[0441] HRMS:m/z C20H20NO5+计算值:354.13360，实测值:354.13342.
[0442] 进一步的实施方案参照下述，非限定，实施例。
[0443] 实施例
[0444] 实施例1 具有有限血脑屏障渗透度的MAO-B抑制剂的合成
[0445] 与生物胺多巴胺和去甲肾上腺素(MAO底物)和不同的合成的苯乙胺类化合物(例如安非他命)一样，丙炔苯丙胺渗透血脑屏障的能力与其亲脂性/极性表面积有关。
[0446] 为了从基于中枢神经系统的MAO活性中区分所需的外围MAO-B活性，发明人着手设计具有减弱的血脑屏障渗透能力同时保持了MAO-B选择亲和性的极性丙炔苯丙胺类似物。对MAO-A/MAO-B结合不同类型抑制剂的结构数据分析，表明可以在分子的三个区域进行极性修饰(图7)：替换乙炔片段(区域1)；修饰三级胺(区域2)；和功能化芳香环(区域3)。
[0447] 考虑到这些选择，主要聚焦于使用羧酸官能团(CO2H)替换乙炔官能团(其在丙炔苯丙胺中不可逆地与FAD辅助因子反应)，因为该片段可以参与与FAD辅助因子相互作用形成稳定的盐桥型。然而，血脑屏障和药物相互作用的计算机模拟模型(ADMET predictor；Simulations PlusTM)预计这种简单的极性修饰可能不足以完全阻滞血脑屏障渗透(表2)。
幸运的是，预计在芳香环(全部4和5)的C-4位上具有苯氧基或苄氧基片段的“更大的”分子不能渗透血脑屏障。重要的是，在沙芬酰胺(safinamide)和高亲脂性香豆素类MAO-B抑制剂中，通过苄氧取代基上间位H>Cl取代，MAO-B选择性显著增长。因此，制备并评价了原型苯乙胺化合物1和2以及相应的香豆素衍生物3和4(图8)。不出所料，四种苄氧基取代的分子均为强效MAO抑制剂。进一步，间氯取代凸显了MAO-B的选择性，并且这些分子显示出了相对于丙炔苯丙胺的减弱的血脑屏障渗透力(见实施例2)。为了研发新的、极性、具有体内活性的、在中枢神经系统之外生效的MAO-B选择性抑制剂，发明人继续对丙炔苯丙胺的区域1到3的不同结构修饰的探索。几种可能的修饰如图8所示，并且表2显示了预测的这些化合物渗透，或不渗透，血脑屏障的能力。一系列修饰的不同交叉结构可能因此适合于减弱血脑屏障渗透度并同时保持MAO-B选择性。
幸运的是，预计在芳香环(全部4和5)的C-4位上具有苯氧基或苄氧基片段的“更大的”分子不能渗透血脑屏障。重要的是，在沙芬酰胺(safinamide)和高亲脂性香豆素类MAO-B抑制剂中，通过苄氧取代基上间位H>Cl取代，MAO-B选择性显著增长。因此，制备并评价了原型苯乙胺化合物1和2以及相应的香豆素衍生物3和4(图8)。不出所料，四种苄氧基取代的分子均为强效MAO抑制剂。进一步，间氯取代凸显了MAO-B的选择性，并且这些分子显示出了相对于丙炔苯丙胺的减弱的血脑屏障渗透力(见实施例2)。为了研发新的、极性、具有体内活性的、在中枢神经系统之外生效的MAO-B选择性抑制剂，发明人继续对丙炔苯丙胺的区域1到3的不同结构修饰的探索。几种可能的修饰如图8所示，并且表2显示了预测的这些化合物渗透，或不渗透，血脑屏障的能力。一系列修饰的不同交叉结构可能因此适合于减弱血脑屏障渗透度并同时保持MAO-B选择性。
[0448] 表2显示了丙炔苯丙胺类似物的血脑屏障(BBB)渗透度的计算机模拟值。空间A对应于在区域1修饰的类似物(图7)。空间B和C对应于在区域1和2修饰的类似物。空间D说明丙炔苯丙胺向香豆素系统(化合物11)的发展过程。空间D对应于在区域3修饰的类似物。
[0449] 表2
[0450]
[0451] 修饰1:通过评价CO2H相对于其他替换丙炔苯丙胺中的乙炔官能团极性片段，来确定在区域1用CO2H修饰是否是最理想的。包括极性杂环片段，例如N-羟基吡唑(编号(9a，b；表2)，其能潜在地与FDA辅助因子和衬于底物腔中的多个芳香残基进行相互作用。这些残基(Tyr60,188,398,435,Phe343and Trp388)排布在对于香豆素类MAO-B抑制剂的底物袋中(未显示)。
[0452] 修饰2:用酯/酰胺或酯/酰胺的生物电子等排体片段(编号10-12，表2)替换侧链甲基基团或C-2Ar-H，以捕获观测香豆素类MAO-B抑制剂较佳地连接相互作用(见编号13；表2)，并增加分子的极性特征/水溶性。
[0453] 修饰3:将丙炔苯丙胺中的三级氮并入杂环(例如咪唑)，以改变其电子(氧化还原)性质(编号14-15，表2)。
[0454] 修饰4:丙炔苯丙胺中，将极性取代基/片段并入苯环上的不同位置以及在苯环中交换极性原子(C->N)。这种修饰有非常多的选择(见图7选择的例子)。众所周知，与MAO-A相反，MAO-B的连接/活性位点可分成两个明显的腔(未显示)：一“底物”腔靠近FAD辅助因子，以及一“进入”腔(或I2连接位点)连接酶的表面。这两个结合口袋被两个“门”残基(Ile199,Tyr326)分开，形成了紧压点。每一个均具有不同的性质(构成、亲脂性、形状等)。MAO抑制剂已知与任一位点连接(cf.2-BFI和雷沙吉兰(rasagiline)/丙炔苯丙胺)，或者同时与这些位点连接(香豆素类抑制剂和沙芬酰胺；未显示)。因为我们的极性丙炔苯丙胺类似物设计用于连接两个口袋并与FAD辅助因子形成强连接，MAO-B活性/选择性将由分子的所有结构决定，例如区域1/区域3修饰基团的性质结合苯环上的假象修饰(区域2)。
[0455] 例2MAO-B选择性抑制剂
[0456] 图9显示了氯吉兰对MAO-A的选择性抑制作用和丙炔苯丙胺对MAO-B的选择性抑制作用。这些结果显示MAO-B选择性抑制剂的鉴别分析的合适性。图10A-B显示一系列本发明的化合物对MAO-B的选择性抑制作用。此外，表3显示这一系列测试化合物对MAO-A和MAO-B的抑制活性。这些结果显示区域1的修饰是有功能的并且在区域2的苄氧基取代(RG0031A相对于RG0103和RG0121)可增长对MAO-B的抑制活性和选择性。这可与区域3的修饰结合起来，根据RG0098，RG0122和RG0123获得的结果显示该区域可被修饰且不影响抑制活性。
[0457] 表3
[0458]
[0459]
[0460]
[0461]
[0462] 实施例3 具有减弱的血脑屏障渗透能力的选择性MAO-B抑制剂作为治疗剂用于治疗疾病
[0463] 通过在血脑屏障渗透度试验中测试候选化合物，如实施例1和2中描述的化合物，来完成具有减弱的血脑屏障渗透能力的选择性MAO-B抑制剂的鉴别。之后测试具有减弱的血脑屏障渗透能力的化合物提升上皮屏障的能力，例如使用MDCK-1体外细胞模型。之后，测试这些化合物体内改善疾病的能力。
[0464] 符合选择性和功能活性标准的测试化合物之后在使用丙炔苯丙胺作为阴性对照药的单剂量药动学研究中进行测试。基于每个时间点三只小鼠、总共六个时间点来计算药动学常数。化合物通过静脉注射给药，使用生物分析方法确定血浆和大脑的化合物浓度。生物分析方法首先应用于血浆和大脑，并潜在地在感兴趣的目标组织，例如肠中。在效力概念验证中评估丙炔苯丙胺和新的类似物的效力，使用3种不同的化合物剂量、路线或时间表、以及与介质处理的动物相比，来研究其改善疾病的能力。用参考化合物在整个研究过程中处理动物(n＝8/组*4组＝32只动物)。主要的测量参数包括每日的体重和每日临床观察的相关评估。这证明了在老鼠疾病模型中通过口服给药的MAOB抑制剂的效力，其中，上皮屏障完整性的丧失是该疾病的关键参数。
[0465] 实施例4 MAO-B抑制剂作为治疗剂治疗上皮屏障疾病
[0466] 使用包括激光捕获显微解剖和总体基因排列分析的一系列技术，Ekuni等认识到在慢性牙周炎的大鼠模型体内牙周的上皮细胞中，促氧化酶MAO B的基因表达增长了六倍(Ekuni et al 2009)。更早的研究报道了在发言的牙周组织活体检查中单胺氧化酶的增长，但未描述类型，也未描述位置(Satyanarayana et al 1990)。在细胞培养研究中，Putnins等证明了LPS显著诱导MAO B，而非MAO A蛋白表达(Ekuni et al 2009)。此外，轶名报道表明临床允许的MAO抑制剂似乎减少了炎症介质并改善了慢性疾病，例如类风湿性关节炎和克劳恩病(Lieb 1983；Kast 1998；Nagatsu et al 2006；Sawada et al 2006；Williams 2008；Nair et al 1993)。
[0467] 黏膜屏障完整性的破坏和保护的体外数据：培养于TranswellTM膜上的MDCK-I细胞长出明显的可通过跨上皮电阻(TEER)测量的屏障。使用H2O2处理明显降低浓度依赖性的TEER并明显增加介质中的AR蛋白分泌物。双调蛋白(AR)是EGFR结合配体并在之前描述的信号轴中扮演关键角色(见图15-17)。Putnins等已经证明与MAO B抑制剂丙炔苯丙胺共同处理消除了H2O2作用，在对照之上显著增加TEER，并且在三个时间点均将AR分泌物降低到了对照组水平或更低。丙炔苯丙胺共同处理同样在三种屏障细胞系中拯救了TEER的LPS降低：(i)口腔[猪韧带上皮细胞(PLE)](ii)胃肠道[肠上皮细胞(IEC)]和(iii)经典[Madin-
Darby犬肾(MDCK-1)]。
Darby犬肾(MDCK-1)]。
[0468] Putnins等也测试了MAO-A，MAO-B和MAO-AB抑制剂对TEER和AR分泌的作用。MAO A/B抑制剂(苯乙肼)和MAO B抑制剂(丙炔苯丙胺和巴吉林)增加了TEER并降低了AR表达，但MAO A抑制剂(吗氯贝胺(moclobemide)和氯吉兰)一般降低TEER，诱导屏障丧失，并增加AR蛋白分泌。在低剂量时，吗氯贝胺处理导致了屏障完整性的小幅增长并观察到AR的减少，可能反应了弱的MAO B活性(Willliams 2008；Nair et al 1993)。MAO A/B抑制剂(苯乙肼)同样有效；然而，MAO A选择性抑制剂活性的缺乏表明MAO B的抑制是有益效果的原因。进一步，因为MAO A抑制作用伴随着严重的副作用，例如高血压危机，MAO A抑制活性限制了其潜在的应用。
[0469] 黏膜屏障完整性的破坏和保护的初步体内数据：牙周炎是口腔粘膜上对存在于牙齿上的主要富LPS的革兰氏阴性菌生物膜应激的慢性炎症。在细胞培养中，Porphyromonas gingivalis，一种革兰氏阴性牙周病菌，显著降低了TEER(Groeger et al 2010)。使用大鼠牙周疾病体内模型表明上皮增值和牙槽骨损失与疾病相一致。Putnins等发现在这些疾病开始时claudin蛋白-1显著减少。以及，在细胞培养中，慢性LPS治疗减少了TEER和claudin-1蛋白表达(Fujita et al 2012)。早期的体内概念验证研究使用非选择性MAO A/B抑制剂苯乙肼并证明当制剂与LPS共同使用时，牙周炎的组织学标记减少(总结于Ekuniet al
2009)。每日使用LPS处理诱导了MAO B蛋白表达以及在疾病相关的上皮细胞中的H2O2生成，增长了疾病的组织学信号。此外，苯乙肼的处理减少了本地上皮细胞增殖和沿着根表面的迁移，牙槽骨损失以及多形核(PMN)的渗透和系统的H2O2。初步检查伴随着丙炔苯丙胺处理以及七天C.rodentium感染，表明位于细胞外围的TJ蛋白是完整的以及增生表现不明显，尽管在动物结肠中细菌显著繁殖。丙炔苯丙胺本身不影响细菌增殖速率。因此，在两种讨论的动物模型中(牙周和C.rodentium腹泻疾病)，发明人显示了使用MAO抑制剂保持屏障的完整性。相结合，这些数据支持了屏障保护剂的限制发展的概念到MAO-B选择性抑制剂的使用。
2009)。每日使用LPS处理诱导了MAO B蛋白表达以及在疾病相关的上皮细胞中的H2O2生成，增长了疾病的组织学信号。此外，苯乙肼的处理减少了本地上皮细胞增殖和沿着根表面的迁移，牙槽骨损失以及多形核(PMN)的渗透和系统的H2O2。初步检查伴随着丙炔苯丙胺处理以及七天C.rodentium感染，表明位于细胞外围的TJ蛋白是完整的以及增生表现不明显，尽管在动物结肠中细菌显著繁殖。丙炔苯丙胺本身不影响细菌增殖速率。因此，在两种讨论的动物模型中(牙周和C.rodentium腹泻疾病)，发明人显示了使用MAO抑制剂保持屏障的完整性。相结合，这些数据支持了屏障保护剂的限制发展的概念到MAO-B选择性抑制剂的使用。
[0470] 图11显示了丙炔苯丙胺，西替利嗪和新合成的MAO-B抑制剂在野生型Madin-Darby犬细胞(MDCK-WT)中，体外血脑屏障渗透能力的比较，以测试PS-RG0103，PS-RG0216，PS-RG0245和PS-AD0191的中枢神经系统渗透能力。同样测试了已知的可渗透和不可渗透中枢神经系统的化合物，分别为丙炔苯丙胺和西替利嗪，用于比较。丙炔苯丙胺显示了具有计算表观渗透度(Papp)为44.0±2.5(x 10-6cm/s)的高渗透度。西替利嗪(cetirizine)，由于其减1
弱的血脑屏障渗透能力而具有低镇静作用的抗组胺H1受体拮抗剂，具有低Papp值1.7±1.3(x10-6cm/s)。为了比较，PS-RG0103，PS-RG0216，PS-RG0245和PS-AD0191，我们新合成的MAO-B抑制剂，同样分别具有低Papp值2.2±0.2，1.2±0.1，3.6±0.2和7.9±1.4(x10-6cm/s)。图
12A-C显示了丙炔苯丙胺，PS-RG0103和PS-RG0216在小鼠和人肝微粒体中的稳定性试验。
(A)丙炔苯丙胺，已知的不可逆的选择性MAO-B抑制剂，在室温下60分钟后在小鼠和人微粒体中分别显示少于2.5％和15％残留。(B)化合物PS-RG0103和(C)PS-RG0216显示60分钟的稳定性，结果69％和74％的化合物分别残留于小鼠微粒体中，93％和91％的化合物分别残留于人微粒体中。
弱的血脑屏障渗透能力而具有低镇静作用的抗组胺H1受体拮抗剂，具有低Papp值1.7±1.3(x10-6cm/s)。为了比较，PS-RG0103，PS-RG0216，PS-RG0245和PS-AD0191，我们新合成的MAO-B抑制剂，同样分别具有低Papp值2.2±0.2，1.2±0.1，3.6±0.2和7.9±1.4(x10-6cm/s)。图
12A-C显示了丙炔苯丙胺，PS-RG0103和PS-RG0216在小鼠和人肝微粒体中的稳定性试验。
(A)丙炔苯丙胺，已知的不可逆的选择性MAO-B抑制剂，在室温下60分钟后在小鼠和人微粒体中分别显示少于2.5％和15％残留。(B)化合物PS-RG0103和(C)PS-RG0216显示60分钟的稳定性，结果69％和74％的化合物分别残留于小鼠微粒体中，93％和91％的化合物分别残留于人微粒体中。
[0471] 图13显示了丙炔苯丙胺，PS-RG0103和PS-RG0216的小鼠肝细胞稳定性试验。丙炔苯丙胺，已知的MAO-B抑制剂，在室温下60分钟后显示少于2.5％残留。化合物PS-RG0103和PS-RG0216分别显示稳定性为101％和100％。图14显示MAO-B蛋白表达优先地被诱导于患有溃疡性结肠炎(UC)的病人的病灶。自患有溃疡性结肠炎的病人肠子的病灶处和邻近的非病灶处(对照)取活体组织检查。活体组织检查在使用预冷的异戊烷/液氮浴的冷模中经快速冷冻并插入待测(O.C.T.)化合物。
[0472] 图15A-C显示了丙炔苯丙胺在三种上皮细胞系中减弱LPS-诱导的屏障损失。在TranswellTM培养室中培养，猪韧带上皮细胞(PLE)，大鼠肠上皮细胞(IEC-6)和Madin Darby犬肾细胞系(MDCK-I)并使用LPS±丙炔苯丙胺(D)处理。PLE，IEC-6，和MDCK在72小时(T)受到LPS(L)±丙炔苯丙胺的挑战。MDCK-I培养系用系列浓度的LPS和40μM丙炔苯丙胺处理。在每一个例子中，在处理之后每48小时测量TEER。鉴别出统计学上的显著差异。特别地，在所有的三种细胞系中，LPS显著减少了屏障(TEER)(p<0.01)[#s2，4，和6]以及LPS+丙炔苯丙胺显著诱导了TEER在对照(CTL)(p<0.01)[#s 1，3，和5]之上。
[0473] 图16显示了MAO-A/B，MAO-B和MAO-A系抑制剂唯一地影响MDCK-I细胞TEER。在72小时(T)后细胞镀处理Transwell培养室。对144小时屏障(TEER)使用具有Tukey事后测试的单因素方差实验的分析发现在使用LPS的TER中显著减少(p<0.01)。相对于对照(CTL)(p<0.01)，5和40μm苯乙肼，5和40μm丙炔苯丙胺和帕吉林，和5μm吗氯贝胺的TEER增长。然而，5和40μm氯吉兰显著地减少了屏障(p<0.01)。
[0474] 图17显示了在MDCK(NBL-2)细胞中，丙炔苯丙胺和新的MAO-B抑制剂对跨膜电阻(TEER)的影响。(A).MDCK(NBL-2)细胞以42000cells/cm2的密度接种在包含10％FBS的MEMα介质(#12561-056，GibcoTM)的24-孔聚酯Transwell小室。在接种后第2天开始使用ERS-2压阻计(MilliporeTM)测量TEER，随后改变介质。在第3天测量TEER并使用在
介质(箭头处)中的10μM丙炔苯丙胺，RG0103，RG0216，RG0245或溶剂(H2O)对照处理细胞。在第6，7，8，9，10和13天测试TEER。仅在第6和8天改变包括上述处理的介质。数据代表平均±标准偏差(n＝4)。(B).
介质(箭头处)中的10μM丙炔苯丙胺，RG0103，RG0216，RG0245或溶剂(H2O)对照处理细胞。在第6，7，8，9，10和13天测试TEER。仅在第6和8天改变包括上述处理的介质。数据代表平均±标准偏差(n＝4)。(B).
[0475] 图18显示了在Caco-2细胞中，丙炔苯丙胺和新的MAO-B抑制剂对跨膜电阻(TEER)的影响。在第5,7,9,11和13天测试TEER，随后改变介质。在第14天用在介质(箭头处)中的20μM丙炔苯丙胺，RG0103，RG0216，RG0245，AD0191或溶剂(H2O)对照处理细胞。在第16,19,21和23天测试TEER并改变包括上述处理的介质。
[0476] 图19显示了经由丙炔苯丙胺和RG0216在LPS-和TNFα处理的人结肠癌上皮细胞(Caco-2)中IL-8蛋白表达的衰减。左侧图显示使用对照(仅介质)、1μg/mLLPS或50ng/mLTNFα处理的细胞的上清液中IL-8蛋白的绝对浓度。同时，右侧图显示使用1μg/mLLPS或50ng/mLTNFα±丙炔苯丙胺或RG0216诱导或减弱的绝对IL-8浓度。处理细胞的上清液细胞因子浓度减去对照的上清液细胞因子浓度即得数据。
[0477] 图20A-F显示了经由丙炔苯丙胺和新的MAO-B抑制剂在LPS-处理的人肠微脉管内皮细胞(HIMEC)中IL-8(A&B)，IL-6(C&D)和TNFα蛋白表达的衰减。左侧图显示了使用对照(仅介质)或递进浓度的LPS处理的细胞的上清液中IL-8，IL-6和TNFα蛋白的绝对浓度。右侧图显示了使用1000ng/mLLPS±新的MAO-B抑制剂诱导或减弱的IL-8，IL-6或TNFα绝对浓度。处理细胞的上清液细胞因子浓度减去对照的上清液细胞因子浓度即得数据。
[0478] 图21A和B显示了3％DSS诱导的结肠炎和保护上皮细胞-细胞cliaudin蛋白-3定位。对照，丙炔苯丙胺±DSS处理的C57BL/6小鼠使用含3％DSS的饮用水处理并于第7天宰杀。(A).在DSS-处理的小鼠中总的结肠影像与较松的粪便有关，H&E染色部分表示更深的隐窝和无序的上皮细胞。(B).对照小鼠展示了经典的claudin蛋白-3定位，其于DSS-处理的小鼠中被严重阻断。相反，于DSS+丙炔苯丙胺处理的动物中claudin蛋白-3更好地集中于上皮胞间连接。
[0479] 图22A和B显示了丙炔苯丙胺对C57BL/6小鼠的DSS-诱导结肠炎的影响。每日测量体重，并通过将特定日的体重除以第2天的体重计算。数据以自第2天起的百分变化表示(B)。
[0480] 尽管本文公开了本发明的各种实施方案，但根据本领域技术人员的公知常识在本发明的范围内可进行许多改动和变型。这种变型包括为了以基本相同的方式实现相同的结果而对本发明任何方面的已知等效物的替代。数值范围包括确定范围的数字。本文所用的词语“包括(comprising)”是开放式术语，基本等同于短语“包括，但不限于”，并且词语“包括(comprises)”具有相应的含义。除非上下文另外明确规定，本文使用的单数形式“a(一个)”、“an(一个)”和“the(所述)”包括复数的指代物。因此，例如，“一个事物”包括多于一个这样的事物。本文参考文献的引用并非承认这些参考文献是本发明的现有技术。
[0481] 参考文献:
[0482] Ekuni D,Firth JD,Nayer T,Tomofuji T,Sanbe T,Irie K,Yamamoto T,Oka T,Liu Z,Vielkind J,Putnins EE.(2009)Lipopolysaccharide-induced epithelial monoamine oxidase mediates alveolar bone loss in a rat chronic wound model.Am J Pathol 175(4):1398-1409.
[0483] Lengyel J,Magyar K,Hollósi I,Bartók T,Báthori M,Kalász H,Fürst S.(1997)Urinary excretion of deprenyl metabolites.J Chromatogr A 762(1-2):321-
326.
326.
[0484] Nakashima K.(2005)High-performance liquid chromatographic analysis of drugs of abuse in biologic samples.J Health Sci 51(3):272-277.
[0485] Umeda K,Ikenouchi J,Katahira-Tayama S,Furuse K,Sasaki H,Nakayama M,Matsui T,Tsukita S,Furuse M,Tsukita S.(2006)ZO-1and ZO-2independently
determine where claudins are polymerized in tight-junction strand
formation.Cell 126:741-754.
determine where claudins are polymerized in tight-junction strand
formation.Cell 126:741-754.
[0486] Van Itallie CM,Holmes J,Bridges A,Gookin JL,Coccaro MR,Proctor W,Colegio OR,Anderson JM.(2008)The density of small tight junction pores varies among cell types and is increased by expression of claudin-2.J Cell Sci 121:
298-305.
298-305.
[0487] Satyanarayana,M.and Rajeswari,K.R.,Biogenic amines in human gingiva in healthy and inflamed states.Indian J Dent Res,1990.2(2-3):p.170-3.
[0488] Lieb,J.,Remission of rheumatoid arthritis and other disorders of immunity in patients taking monoamine oxidase inhibitors.Int J
Immunopharmacol,1983.5(4):p.353-7.
Immunopharmacol,1983.5(4):p.353-7.
[0489] Kast,R.E.,Crohn's disease remission with phenelzine treatment.Gastroenterology,1998.115(4):p.1034-5.
[0490] Nagatsu,T.and Sawada,M.,Molecular mechanism of the relation of monoamine oxidase B and its inhibitors to Parkinson's disease:possible
implications of glial cells.J Neural Transm Suppl,2006(71):p.53-65.
implications of glial cells.J Neural Transm Suppl,2006(71):p.53-65.
[0491] Sawada,M.,et al.,Role of cytokines in inflammatory process in Parkinson's disease.J Neural Transm Suppl,2006(70):p.373-81.
[0492] Williams,D.A.,Antidepressants.Foye’s Principles of Medicinal Chemistry,ed.Lemke,T.L.,et al.Vol.6th edition.2008,Philadelphia:Lippincott Williams&Wilkins.
[0493] Nair,N.P.,et al.,Biochemistry and pharmacology of reversible inhibitors of MAO-A agents:focus on moclobemide.J Psychiatry Neurosci,1993.18(5):p.214-25.
[0494] Groeger,S.,et al.,Effects of Porphyromonas gingivalis infection on human gingival epithelial barrier function in vitro.Eur J Oral Sci,2010.118(6):p.582-9.
[0495] Fujita,T.,et al.,Loss of claudin-1 in lipopolysaccharide-treated periodontal epithelium.J Periodontal Res,2012.47(2):p.222-7.
| 标题 | 发布/更新时间 | 阅读量 |
|---|---|---|
| 一种治疗牙周炎的中药 | 2020-05-11 | 722 |
| 治疗牙周炎的中药 | 2020-05-12 | 976 |
| 一种治疗牙周炎的中药 | 2020-05-12 | 617 |
| 一种防牙周炎牙膏 | 2020-05-13 | 767 |
| 一种治疗牙周炎的药剂 | 2020-05-13 | 836 |
| 牙周炎特效液的配方 | 2020-05-14 | 545 |
| 一种牙周炎治疗装置 | 2020-05-16 | 562 |
| 治牙周炎的配方 | 2020-05-11 | 948 |
| 一种治疗牙周炎的药剂 | 2020-05-15 | 811 |
| 防治牙周炎的DNA疫苗 | 2020-05-14 | 327 |
高效检索全球专利专利汇是专利免费检索,专利查询,专利分析-国家发明专利查询检索分析平台，是提供专利分析，专利查询，专利检索等数据服务功能的知识产权数据服务商。
我们的产品包含105个国家的1.26亿组数据，免费查、免费专利分析。
分析报告
专利汇分析报告产品可以对行业情报数据进行梳理分析，涉及维度包括行业专利基本状况分析、地域分析、技术分析、发明人分析、申请人分析、专利权人分析、失效分析、核心专利分析、法律分析、研发重点分析、企业专利处境分析、技术处境分析、专利寿命分析、企业定位分析、引证分析等超过60个分析角度，系统通过AI智能系统对图表进行解读，只需1分钟，一键生成行业专利分析报告。
QQ群二维码
意见反馈
意见反馈