骨再生材料试剂盒、糊状骨再生材料、骨再生材料和骨接合材料
阅读：698发布：2020-05-11
专利汇可以提供骨再生材料试剂盒、糊状骨再生材料、骨再生材料和骨接合材料专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 的目的在于提供一种包括由 生物 体吸收性高分子构成的微粒，短期上能够弥补骨的缺损部或损伤部，确保骨的 力 学强度，并且长期上能够促进患者自身的骨的再生，且能够发挥在填充后即使 接触 到血液或体液等 水 分也不会崩解的非崩解性的 骨再生 材料 试剂 盒 、糊状骨再生材料、骨再生材料和骨接合材料。本发明的骨再生材料试剂盒包括：表面 吸附 有肌醇 磷酸 或其盐的由 钙 盐构成的微粒、由生物体吸收性高分子构成的微粒、和水系介质。，下面是骨再生材料试剂盒、糊状骨再生材料、骨再生材料和骨接合材料专利的具体信息内容。
1.一种骨再生材料试剂盒，其特征在于，包括：
表面吸附有肌醇磷酸或其盐的由钙盐构成的微粒、由生物体吸收性高分子构成的微粒、和水系介质，
所述骨再生材料试剂盒还包括表面未吸附肌醇磷酸或其盐的由磷酸钙系化合物构成的微粒，
所述表面吸附有肌醇磷酸或其盐的由钙盐构成的微粒与所述表面未吸附肌醇磷酸或其盐的由磷酸钙系化合物构成的微粒的配合比，以重量比计为10：90～50：50。
2.如权利要求1所述的骨再生材料试剂盒，其特征在于：
肌醇磷酸或其盐为肌醇六磷酸。
3.如权利要求1或2所述的骨再生材料试剂盒，其特征在于：
由生物体吸收性高分子构成的微粒是由交联明胶构成的微粒。
4.如权利要求1或2所述的骨再生材料试剂盒，其特征在于：
水系介质的含量相对于表面吸附有肌醇磷酸或其盐的由钙盐构成的微粒、表面未吸附肌醇磷酸或其盐的磷酸钙系化合物和由生物体吸收性高分子构成的微粒的合计100重量份为50～150重量份。
5.一种糊状骨再生材料，其特征在于：
其是使用权利要求1～4中任一项所述的骨再生材料试剂盒而成的糊状骨再生材料，将表面吸附有肌醇磷酸或其盐的由钙盐构成的微粒、表面未吸附肌醇磷酸或其盐的由磷酸钙系化合物构成的微粒、由生物体吸收性高分子构成的微粒和水系介质混合，制成了糊状。
6.一种将权利要求5所述的糊状骨再生材料固化而成的骨再生材料。
7.一种将权利要求5所述的糊状骨再生材料固化而成的骨接合材料。
骨再生材料试剂盒、糊状骨再生材料、骨再生材料和骨接合
材料
技术领域
[0001] 本发明涉及包括由生物体吸收性高分子构成的微粒，短期上能够弥补骨的缺损部或损伤部，确保骨的力学强度，并且长期上能够促进患者自身的骨的再生，且能够发挥填充后即使接触血液或体液等的水分也不会崩解的非崩解性的骨再生材料试剂盒、糊状骨再生材料、骨再生材料以及骨接合材料。
背景技术
[0002] 骨的缺损部或损伤部的治疗中使用人造骨骼。
[0003] 作为现有的人造骨骼，已知由磷酸钙构成的致密体和多孔的人造骨骼。这样的人造骨骼需要对应于作为治疗对象的骨的状态来调整形状等。但是，在手术现场中难以对人造骨骼进行切断加工或切削加工，存在使用困难的问题。
[0004] 相对于此，提出了使磷酸钙颗粒悬浮于水系介质中的糊状骨填补材料(例如、专利文献1～3)。糊状骨填补材料能够利用注射器等填充在骨的缺损部或损伤部。糊状骨填补材料在填充后固化而被固定于骨的缺损部或损伤部。如果使用糊状骨填补材料，即使是复杂的缺损部或损伤部也能够容易地进行治疗。
[0005] 然而，即使使用专利文献1～3所述的糊状骨填补材料，也仅仅是弥补骨的缺损部或损伤部，并不能促进骨的再生。实际上，骨的再生限于填充的骨填补材料的表面。另外，该骨填补材料尽管力学强度极高，但由于并不含有骨组织所具有的胶原蛋白纤维等有机成分，因此还存在弹性模量和韧性差的重大缺点。因此，寻求短期上能够弥补骨的缺损部或损伤部，确保骨的力学强度，并且长期上能够促进患者自身的骨的再生的骨再生材料。
[0006] 相对于此，专利文献4公开了一种包括由磷酸钙系化合物构成的微粒、由生物体吸收性高分子构成的微粒、和水系介质的骨再生材料试剂盒。将将专利文献4所述的骨再生材料试剂盒填充于骨的缺损部或损伤部时，由生物体吸收性高分子构成的微粒被生物体吸收，由此在填充部产生连续孔，成骨细胞侵入该连续孔而能够增殖。即，专利文献4所述的骨再生材料试剂盒能够发挥弥补骨的缺损部、并且还发挥作为用于使成骨细胞增殖的支架材料的作用。
[0007] 现有技术文献
[0008] 专利文献
[0009] 专利文献1：日本特开2000－262609号公报
[0010] 专利文献2：日本特开2000－245823号公报
[0011] 专利文献3：日本特开2002－35106号公报
[0012] 专利文献4：日本特开2011－15957号公报
发明内容
[0013] 发明所要解决的课题
[0014] 骨再生材料试剂盒的实际的用法中，在手术现场进行将构成试剂盒的由磷酸钙系化合物构成的微粒、由生物体吸收性高分子构成的微粒和水系介质混合的糊状骨再生材料的调制，将所得到的糊状骨再生材料用注射器等填充于骨的缺损部或损伤部后，闭合创口，完成手术术式。然而，填充糊状骨再生材料的部位为血液或体液等的水分多的部位，存在一旦填充的糊状骨再生材料吸收水而崩解，就无法发挥弥补骨缺损部的作用的问题。
[0015] 本发明鉴于上述现状，其目的在于提供一种包括由生物体吸收性高分子构成的微粒，短期上能够弥补骨的缺损部或损伤部，确保骨的力学强度，并且长期上能够促进患者自身的骨的再生，且能够发挥在填充后即使接触血液或体液等水分也不会崩解的非崩解性的骨再生材料试剂盒、糊状骨再生材料、骨再生材料和骨接合材料。
[0016] 用于解决课题的方法
[0017] 本发明为一种骨再生材料试剂盒，其包括表面吸附有肌醇磷酸或其盐的由钙盐构成的微粒、由生物体吸收性高分子构成的微粒、和水系介质。
[0018] 下面对本发明进行详细说明。
[0019] 本发明的发明人进行了深入研究，结果发现在由生物体吸收性高分子构成的微粒中组合表面吸附有肌醇磷酸或其盐的由钙盐构成的微粒的情况下，能够发挥在填充后即使接触血液或体液等水分也不会崩解的非崩解性，从而完成了本发明。其理由尚不明确，可以认为是由于在由钙盐构成的微粒的表面吸附的肌醇磷酸或其盐与由生物体吸收性高分子构成的微粒相互作用的缘故。
[0020] 本发明的骨再生材料试剂盒包括表面吸附有肌醇磷酸或其盐的由钙盐构成的微粒(以下，也称为“肌醇磷酸吸附钙盐微粒”)、由生物体吸收性高分子构成的微粒、和水系介质。
[0021] 上述表面吸附有肌醇磷酸或其盐的由钙盐构成的微粒，一旦与水系介质混合就形成糊状，在体内固化，具有弥补骨的力学强度的作用，并且在表面吸附的肌醇磷酸或其盐与上述由生物体吸收性高分子构成的微粒相互作用，由此能够对所得到的糊状骨再生材料赋予能够在较短时间内固化且发挥充分的非崩解性的性能。
[0022] 上述肌醇磷酸吸附钙盐微粒例如能够通过在溶解有上述肌醇磷酸或其盐的水溶液中浸渍上述由钙盐构成的微粒，并进行粉碎处理来调制。上述肌醇磷酸或其盐可以认为以化学方式吸附在由钙盐构成的微粒的表面。
[0024] 作为上述磷酸钙，可以列举例如羟基磷灰石、α－磷酸三钙、β－磷酸三钙、磷酸四钙、磷酸八钙、磷酸氢钙、磷酸二氢钙、非晶磷酸钙等。这些磷酸钙可以单独使用，也可以并用2种以上。其中，优选羟基磷灰石、α－磷酸三钙或β－磷酸三钙，更优选羟基磷灰石。
[0025] 上述由钙盐构成的微粒的比表面积的优选的下限为0.1m2/g，优选的上限为120m2/g。比表面积在该范围内时，上述由钙盐构成的微粒的表面能够吸附充分量的上述肌醇磷酸或其盐。上述比表面积的更优选的下限为20m2/g，进一步优选的下限为40m2/g。
[0026] 其中，上述由钙盐构成的微粒的比表面积例如能够使用Micromeritics自动比表面积测定装置FlowSorb III2305(岛津制作所制)通过BET法测定。
[0027] 作为上述肌醇磷酸，可以列举肌醇一磷酸、肌醇二磷酸、肌醇三磷酸、肌醇四磷酸、肌醇五磷酸、植酸(肌醇六磷酸)等。
[0028] 另外，作为肌醇磷酸的盐，可以列举碱金属盐或碱土金属盐，更具体而言，可以列举钠盐、钾盐、镁盐、钙盐、钡盐等。这些肌醇磷酸或其盐可以单独使用，也可以并用2种以上。其中，优选植酸、植酸钠盐或植酸钾盐。
[0029] 其中，植酸钠盐已知有例如植酸钠盐38水合物、植酸钠盐47水合物、植酸钠盐12水合物等这样的结晶水含量不同的数种，任一种均适合使用。
[0030] 作为溶解有上述肌醇磷酸或其盐的水溶液的浓度，没有特别限定，优选为1000～11000ppm，更优选为5000～11000ppm，进一步优选为7000～10000ppm。
[0031] 此外，在调制溶解有上述肌醇磷酸或其盐的水溶液时，优选预先在水溶液中添加碱性水溶液，优选调节为pH6～11，更优选调节为pH6～8。pH的调节所使用的碱性水溶液没有特别限定，可以列举氢氧化钠水溶液、氢氧化钾水溶液等。
[0032] 作为在溶解有上述肌醇磷酸或其盐的水溶液中浸渍上述由钙盐构成的微粒并粉碎的方法，没有特别限定，例如可以列举如下方法等：在保温在优选20～60℃、更优选20～40℃的溶解有上述肌醇磷酸或其盐的水溶液中加入上述由钙盐构成的微粒，利用粉碎机搅拌或振荡优选0.5～24小时、更优选0.5～10小时。
[0033] 另外，作为此时的上述肌醇磷酸或其盐与钙盐的摩尔比，优选为0.001～0.1，优选为0.01～0.08。
[0034] 如上所述将由上述钙盐构成的微粒与溶解有上述肌醇磷酸或其盐的水溶液混合，使肌醇磷酸或其盐吸附在微粒的表面后，将所得到的微粒分离，并进行干燥，由此能够得到上述肌醇磷酸吸附钙盐微粒。
[0035] 上述肌醇磷酸吸附钙盐微粒的平均粒径的优选的下限为0.5μm，优选的上限为100μm。上述肌醇磷酸吸附钙盐微粒的平均粒径小于0.5μm时，在与上述水系介质混合形成糊状时，粘度上升，有时难以注射。平均粒径超过100μm时，固化物的强度低，有时无法充分地弥补骨的力学强度。上述肌醇磷酸吸附钙盐微粒的平均粒径的更优选的上限为50μm。
[0036] 本发明的骨再生材料试剂盒优选还包括表面未吸附肌醇磷酸或其盐的由磷酸钙系化合物构成的微粒(以下，也简称为“由磷酸钙系化合物构成的微粒”)。通过在上述肌醇磷酸吸附钙盐微粒中并用由磷酸钙系化合物构成的微粒，能够进一步提高固化物的力学强度。
[0037] 此外，通过调节由磷酸钙系化合物构成的微粒粉碎调制时的时间，也能够使固化物的力学强度变化。
[0038] 上述磷酸钙系化合物没有特别限定，可以列举例如α－磷酸三钙、β－磷酸三钙、磷酸四钙、磷酸八钙、磷酸氢钙、磷酸二氢钙、非晶磷酸钙、羟基磷灰石、含碳磷灰石、氟磷灰石、含骨矿物质磷灰石、含硅磷灰石等。这些磷酸钙系化合物既可以单独使用，也可以并用2种以上。其中，优选α－磷酸三钙或β－磷酸三钙，更优选α－磷酸三钙。
[0039] 由上述磷酸钙系化合物构成的微粒的平均粒径的优选的下限为0.5μm，优选的上限为100μm。由上述磷酸钙系化合物构成的微粒的平均粒径低于0.5μm时，与上述水系介质混合制成糊状时，粘度上升，有时难以注射。平均粒径超过100μm时，固化物的强度低，有时无法充分地弥补骨的力学强度。由上述磷酸钙系化合物构成的微粒的平均粒径的更优选的上限为50μm。
[0040] 上述由生物体吸收性高分子构成的微粒在施术后缓慢被吸收到生物体内，具有在填充部生成成骨细胞能够侵入的连续孔的作用。
[0041] 作为上述生物体吸收性高分子，可以列举例如明胶、胶原、透明质酸、白蛋白、血纤维蛋白等蛋白质、淀粉、或藻酸、甲壳素、果胶酸及其衍生物等的多糖类等的天然高分子；聚乳酸、聚乙醇酸、乳酸－乙醇酸共聚物、乙醇酸－ε－己内酯共聚物、乳酸－ε－己内酯共聚物、聚苹果酸、聚－α－氰基丙烯酸酯、聚－β－羟基酸、聚三亚甲基草酸酯、聚四亚甲基草酸酯、聚原酸酯、聚原碳酸酯、聚碳酸乙烯酯、聚－γ－苄基－L－谷氨酸酯、聚－L－谷氨酸、聚－γ－甲基－L－谷氨酸酯、聚－L－赖氨酸、聚－L－丙氨酸等的合成高分子等。这些生物体吸收性高分子可以单独使用，也可以并用2种以上。
[0042] 上述由生物体吸收性高分子构成的微粒在由明胶、胶原或透明质酸构成时，优选明胶、胶原或透明质酸被交联。
[0043] 其中，优选交联明胶。在使用由交联明胶构成的微粒作为上述由生物体吸收性高分子构成的微粒的情况下，特别是能够以短时间的固化发挥充分的非崩解性。另外，由于交联明胶是亲水性高的高分子，所以通过包含水分而膨润。因此，在移植到骨孔内后，吸收周围的水分，体积增大，也可以得到提高向填充部分的密合性的效果。另外，在现有的仅含有无机材料的糊状骨填补材料的情况下，在应用部存在大量体液或血液时，有时固化延迟，或不固化而流出。并且，即使在发生了固化的情况下，也存在强度降低、或崩解并流出等问题。在使用由亲水性高的交联明胶构成的微粒的情况下，由于发挥止血效果，所以也能够用于存在一些出血的部位。
[0044] 上述由交联明胶构成的微粒的交联状态能够通过调节利用热脱水交联、紫外线交联、化学交联、离子交联等现有公知的交联方法将明胶交联时的条件进行控制。例如，在将未交联明胶微粒热交联时，在真空下110～170℃进行5分钟～48小时左右的热处理，可以通过调节交联温度或热处理时间来控制所得到的由交联明胶构成的微粒的交联状态。
[0045] 上述由生物体吸收性高分子构成的微粒也可以使用经过γ射线、电子束等放射线处理后的微粒。通过使用经过放射线处理后的由生物体吸收性高分子构成的微粒，能够维持作为骨再生材料试剂盒的优异的性能，使固化物的力学强度进一步提高。另外，由于利用放射线处理将由生物体吸收性高分子构成的微粒灭菌，所以不需要预先进行环氧乙烷气体灭菌等的其他的灭菌处理，这也是优点。
[0046] 上述由生物体吸收性高分子构成的微粒的平均粒径的优选的下限为10μm，优选的上限为400μm。上述由生物体吸收性高分子构成的微粒的平均粒径低于10μm时，有时无法形成成骨细胞能够侵入的连续孔，超过400μm时，固化物的强度低，有时无法充分弥补骨的力学强度。上述由生物体吸收性高分子构成的微粒的平均粒径的更优选的下限为20μm，更优选的上限为200μm。
[0047] 上述水系介质是作为糊状骨再生材料的介质的物质。
[0048] 上述水系介质可以列举注射用水等。从调节pH的目的出发，上述水系介质也可以含有缓冲成分。另外，作为上述水系介质，还能够使用骨髓液或细胞悬浮液。
[0051] 本发明的骨再生材料试剂盒还可以具有各种细胞增殖因子、抗菌剂、抗生物质等药剂。如果使用具有这些药剂的骨再生材料试剂盒，在填充到骨的缺损部或损伤部并使其固化后，伴随该固化物分解，该药剂缓慢释放，所以长期上能够发挥药理效果。例如，通过细胞增殖因子的缓释，可以期待早期的骨再生。另外，通过抗菌剂、抗生物质等的缓释，在骨缺损部附近存在大量细菌等的环境下(例如骨感染例或口腔内)也能够使用。此外，在将细胞增殖因子与包含骨髓间充质细胞的骨髓细胞并用的情况下，伴有骨质疏松症的难治性骨折或脊椎压迫骨折等被认为在骨修复部周围缺乏骨形成所需要的细胞的情况、或者无法期待对骨形成有效的细胞侵入到骨修复部中心部的情况等时，也能够期待发挥高的治愈效果。此外，上述药剂不仅仅限于与骨再生相关的药剂。
[0052] 使用本发明的骨再生材料试剂盒，能够调制糊状骨再生材料。
[0053] 这里，糊状骨再生材料是指，在使用时为糊状，能够用手或利用注射器容易地填充到骨的缺损部或损伤部，填充后能够使其在体内固化的骨再生材料。
[0054] 将构成本发明的骨再生材料试剂盒的表面吸附有肌醇磷酸或其盐的由钙盐构成的微粒、由生物体吸收性高分子构成的微粒和水系介质混合制成糊状而得到的糊状骨再生材料也是本发明之一。
[0055] 在调制本发明的糊状骨再生材料时，将上述肌醇磷酸吸附钙盐微粒、由生物体吸收性高分子构成的微粒和水系介质配合的比率没有特别限定，考虑到混练操作的容易度、使用注射器的注射的容易度、固化所需的时间、固化物的强度等来确定。
[0056] 通过调节上述肌醇磷酸吸附钙盐微粒和由生物体吸收性高分子构成的微粒的配合比率，能够调节固化物的空隙率，从而能够控制固化物的强度和骨的再生速度。
[0057] 上述肌醇磷酸吸附钙盐微粒(在包含上述磷酸钙系化合物的情况下，为上述肌醇磷酸吸附钙盐微粒和磷酸钙系化合物的合计)与由生物体吸收性高分子构成的微粒的配合比率以重量比计优选为97：3～76：24的范围。当在该范围内时，能够同时确保短期的骨的力学强度和长期的骨的再生。在上述由生物体吸收性高分子构成的微粒小于该范围时，不会形成充分的连续孔，有时骨的再生不进行，在上述由生物体吸收性高分子构成的微粒大于该范围时，有时固化物的强度低。更优选以重量比计为95：5～80：20的范围，进一步优选以重量比计为90：10～85：15的范围。
[0058] 骨再生材料所需要的强度因所应用的部位而有所不同。因此，在上述肌醇磷酸吸附钙盐微粒与由生物体吸收性高分子构成的微粒的优选的配合比率的范围内，可以考虑其应用部位来确定配合比率。
[0059] 例如，跟骨、大腿骨、胫骨、椎体等是承受大的负荷的部位，因此在应用于这些部位时，强度应当优先于骨的再生速度。即，较低地设定由生物体吸收性高分子构成的微粒的配合比率。
[0060] 例如，头盖骨、肱骨、前臂(桡尺)骨、指骨等是不承受大的负荷的部位，因此在应用于这些部位时，骨的再生速度应当优选于强度。即，较高地设定由生物体吸收性高分子构成的微粒的配合比率。
[0061] 在本发明的骨再生材料试剂盒包含上述磷酸钙系化合物的情况下，调制糊状骨再生材料时的上述肌醇磷酸吸附钙盐微粒与上述磷酸钙系化合物的配合比以重量比计优选为90：10～10：90。在该范围内时，能够使固化物的力学强度提高。更优选为10：90～50：50。
[0062] 上述水系介质的含量，相对于上述肌醇磷酸吸附钙盐微粒和由生物体吸收性高分子构成的微粒的合计100重量份，优选的下限为50重量份，优选的上限为150重量份。上述水系介质的含量低于50重量份时，糊状骨再生材料的粘度高，有时注射困难，超过150重量份时，在使其固化时有时会发生收缩。上述水系介质的含量的更优选的下限为60重量份，更优选的上限为100重量份。
[0063] 将上述肌醇磷酸吸附钙盐微粒、由生物体吸收性高分子构成的微粒和水系介质混合的方法没有特别限定，优选将上述肌醇磷酸吸附钙盐微粒、由生物体吸收性高分子构成的微粒和水系介质加入注射器中，进行混炼混合的方法，或者将上述肌醇磷酸吸附钙盐微粒、由生物体吸收性高分子构成的微粒和水系介质混炼混合的方法。
[0064] 在调制本发明的糊状骨再生材料时，关于配合上述肌醇磷酸吸附钙盐微粒、由生物体吸收性高分子构成的微粒和水系介质的顺序没有特别限定，可以将上述肌醇磷酸吸附钙盐微粒、由生物体吸收性高分子构成的微粒和水系介质的全部量同时混合。
[0065] 但是，优选将上述肌醇磷酸吸附钙盐微粒和由生物体吸收性高分子构成的微粒混合后，在该混合物中添加上述水系介质的方法，或者在上述肌醇磷酸吸附钙盐微粒中加入上述水系介质的部分量进行混炼混合后，加入上述由生物体吸收性高分子构成的微粒和上述水系介质的剩余量进行混合的方法。通过用这样的方法调制糊状骨再生材料，可以得到强度高的骨再生材料。
[0066] 本发明的糊状骨再生材料能够用手或使用填注器(syringe)等的注射器(injector)容易地填充在骨的缺损部或损伤部。填充后的糊状骨再生材料即使在室温下也会固化而成为骨再生材料，补充骨的力学强度。本发明的糊状骨再生材料使用由生物体吸收性高分子构成的微粒，但通过并用上述肌醇磷酸吸附钙盐微粒，能够发挥在填充后即使接触血液或体液等水分也不会崩解的非崩解性。在施术后，随着时间的经过，上述由生物体吸收性高分子构成的微粒被吸收，由此形成连续孔，成骨细胞侵入该连续孔，从而使得患者自身的骨再生。
[0067] 此外，也可以使本发明的糊状骨再生材料暂时在外部固化形成骨再生材料，之后，将该骨再生材料填充于骨的缺损部或损伤部，或作为骨接合材料使用。将本发明的糊状骨再生材料固化而成的骨再生材料、骨接合材料也是本发明之一。
[0068] 发明的效果
[0069] 根据本发明，能够提供一种包括由生物体吸收性高分子构成的微粒，短期上能够弥补骨的缺损部或损伤部，确保骨的力学强度，并且长期上能够促进患者自身的骨的再生，且能够发挥在填充后即使接触血液或体液等水分也不会崩解的非崩解性的骨再生材料试剂盒、糊状骨再生材料、骨再生材料和骨接合材料。
具体实施方式
[0070] 以下，列举实施例，进一步详细地说明本发明的方案，但本发明不仅仅限定于这些实施例。
[0071] (实验例1)
[0072] (1)湿式合成羟基磷灰石粉体的制备
[0073] 调制0.5M氢氧化钙悬浮液1000mL，在其中滴加0.3M磷酸水溶液1000mL。将氢氧化钙和磷酸的浓度调节为Ca/P＝1.67(摩尔比)。另外，用pH调节剂(25％氨水)进行调节使得反应槽中的pH达到10＜pH＜11。磷酸水溶液滴加完毕后，再搅拌1小时，然后在设定为37℃的保温箱内静置24小时，使其熟化。熟化后，通过抽滤回收浆料，在－80℃的冷冻机中冻结一晩。将冻结后的浆料用冻结干燥机(LABCONCO公司制、Free Zone(商标)干燥48小时，制成湿式合成羟基磷灰石粉体。
[0074] (2)肌醇六磷酸吸附羟基磷灰石微粒的制备
[0075] 精确称量肌醇六磷酸的50重量％水溶液(和光纯药工业株式会社制)8.00g，用精制水稀释到300mL左右后，使用氢氧化钠水溶液和盐酸将pH调节到7.3，使用容量瓶定容到500mL，制备浓度8000ppm的肌醇六磷酸水溶液。
[0076] 使用行星式球磨机(FRITCH公司制、P－6型)以下述条件使肌醇六磷酸吸附于羟基磷灰石。在氧化锆制坩埚中，加入所得到的肌醇六磷酸水溶液50mL、湿式合成羟基磷灰石粉体(平均粒径10μm)10.0g、φ2mm氧化锆球180g，以转速300rpm搅拌1小时。然后，以9000rpm离心分离30分钟，过滤残渣，将所得到的浆料在－80℃冻结一晩。将冻结后的浆料用冻结干燥机(LABCONCO公司制、Free Zone(商标))冻结干燥24小时，得到肌醇六磷酸吸附羟基磷灰石微粒。
[0077] (3)α－磷酸三钙微粒粉碎体的制备
[0078] 使用行星式球磨机(FRITCH公司制、P－6型)以下述条件将α－磷酸三钙粉碎。在氧化锆制坩埚中，加入精制水40mL、α－磷酸三钙微粒(平均粒径10μm、太平化学产业株式会社制)10.0g、φ2mm氧化锆球180g，以转速300rpm搅拌1小时。然后，过滤，在－80℃冻结一晩。将冻结后的浆料用冻结干燥机(LABCONCO公司制、Free Zone(商标))冻结干燥24小时，得到α－磷酸三钙微粒粉碎体。
[0079] (4)肌醇六磷酸吸附羟基磷灰石微粒和α－磷酸三钙微粒粉碎体的混合粉体的制备
[0080] 在V型混合机(筒井理化学器械株式会社制)中，将肌醇六磷酸吸附羟基磷灰石微粒和α－磷酸三钙微粒粉碎体以重量比0：100、10：90、20：80、50：50、80：20、100：0加入，搅拌5分钟，得到混合粉体。
[0081] (5)由交联明胶构成的微粒的制造
[0082] 将平均粒径为200μm的未交联明胶微粒在真空下于140℃热处理14小时间，得到热交联明胶微粒。
[0083] (6)骨再生材料试剂盒和糊状骨再生材料的制造
[0084] 由所得到的肌醇六磷酸吸附羟基磷灰石微粒与α－磷酸三钙微粒粉碎体的混合粉体、所得到的热交联明胶微粒、和水系介质(10％壳聚糖、2.5％磷酸二氢钠)构成骨再生材料试剂盒。即，以相对于上述混合粉体的配合量为10重量％的方式加入热交联明胶微粒，相对于其1.0g加入700～800μL的水系介质，混合120秒钟，得到糊状骨再生材料。
[0085] (实验例2)
[0086] 除了使热交联明胶微粒的配合量为5重量％以外，与实验例1同样操作，制造骨再生材料试剂盒和糊状骨再生材料。
[0087] (比较例1、2)
[0088] 除了使用未吸附肌醇六磷酸的羟基磷灰石微粒来代替肌醇六磷酸吸附羟基磷灰石微粒以外，与实验例1、2同样操作，制造骨再生材料试剂盒和糊状骨再生材料。
[0089] 其中，未吸附肌醇六磷酸的羟基磷灰石微粒使用利用行星式球磨机搅拌精制水和湿式合成羟基磷灰石粉体而得到的微粒。
[0090] (参考例)
[0091] 由未吸附肌醇六磷酸的平均粒径为10μm的磷酸钙系微粒(α型磷酸三钙75重量％、磷酸四钙18重量％、磷酸氢钙二水合物5重量％和羟基磷灰石2重量％)、热交联明胶微粒和水系介质(5.4％硫酸软骨素钠、13％无水琥珀酸二钠、含0.3％亚硫酸氢钠的水溶液)构成骨再生材料试剂盒。即，以相对于上述磷酸钙系微粒配合量为10重量％的方式加入热交联明胶微粒，相对于其1.5g加入700μL的水系介质，混合120秒钟，得到糊状骨再生材料。
[0092] (评价)
[0093] 对于实验例、比较例和参考例所得到的糊状骨再生材料，用以下的方法进行评价。结果表示在表1中。
[0094] (1)糊状骨再生材料的固化时间的评价
[0095] 将刚制造好的糊状骨再生材料填充于直径6.0mm、高度12mm的对开铸模中，在37℃、相对湿度100％的恒温恒湿器中以各时间固化。
[0096] 按照JIS T 6602，测定固化各时间后的固化物的硬度，将达到吉尔摩(gillmore)(轻)的时间作为初期固化时间，将达到吉尔摩(重)的时间作为最终固化时间。
[0097] (2)非崩解性的评价
[0098] 将刚制造好的糊状骨再生材料填充于直径6.0mm、高度12mm的对开铸模，在室温下使其固化5分钟。将得到的固化物立即投入蒸馏水中，在室温下静置24小时。然后，目测观察蒸馏水中固化物的状态，按照以下基准评价非崩解性。
[0099] ○：几乎没有确认到崩解
[0100] △：在端部确认到少量崩解
[0101] ×：完全崩解
[0102] (3)固化物的压缩强度和体积密度的评价
[0103] 将刚制造好的糊状骨再生材料填充于直径6mm、高度12mm的对开铸模，在37℃、相对湿度100％的恒温恒湿器中熟化24小时。然后，从对开铸模中取出样品，得到固化物。
[0104] 使用万能试验机(EZ－Graph、岛津制作所制)，以试验速度0.5mm/min的条件，测定所得到的固化物的压缩强度。
[0105] 另外，测定各固化物的直径、高度和重量，算出体积密度(g/cm3)。
[0106]
[0107] 工业上的可利用性
[0108] 根据本发明，能够提供一种包括由生物体吸收性高分子构成的微粒、短期上能够弥补骨的缺损部或损伤部，确保骨的力学强度，并且长期上能够促进患者自身的骨的再生，且能够发挥在填充后即使接触血液或体液等水分也不会崩解的非崩解性的骨再生材料试剂盒、糊状骨再生材料、骨再生材料和骨接合材料。
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