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用碱性磷酸酶治疗肌肉无力

阅读：369发布：2021-04-10

专利汇可以提供用碱性磷酸酶治疗肌肉无力专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本公开的特征在于用于治疗或改善患有或易患肌肉无力疾病的受试者的至少一种症状的方法，其包括向所述受试者施用治疗有效量的至少一种具有碱性磷酸酶活性的重组多肽。，下面是用碱性磷酸酶治疗肌肉无力专利的具体信息内容。

权利要求

1.一种在患有或易患肌肉无力疾病的人受试者中治疗或改善肌肉无力的方法，其包括向所述受试者施用治疗有效量的至少一种具有碱性磷酸酶活性的重组多肽。
2.如权利要求1所述的方法，其中所述受试者具有升高的焦磷酸盐(PPi)血清浓度和/或低碱性磷酸酶活性。
3.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中在选自肌肉纤维类型比例和纤维收缩特性的至少一种特性方面，所述受试者的肌肉与没有所述肌肉无力疾病的正常受试者的肌肉没有明显不同。
4.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述肌肉是至少一种类型的腿部肌肉，特别是选自比目鱼肌和趾长伸肌(EDL)肌肉的至少一种类型的肌肉。
5.如权利要求1所述的方法，其中所述肌肉无力疾病由升高的焦磷酸盐(PPi)浓度和/或低碱性磷酸酶活性引起。
6.如权利要求1所述的方法，其中升高的焦磷酸盐(PPi)浓度增强所述受试者的肌肉无力。
7.如权利要求1所述的方法，其中所述肌肉无力疾病是低磷酸酯酶症(HPP)、焦磷酸钙二水合物晶体沉积(CPPD)和家族性低磷酸盐血症中的至少一种。
8.如权利要求7所述的方法，其中所述家族性低磷酸盐血症包括常染色体显性低磷酸盐血症性佝偻病(ADHR)、常染色体隐性低磷酸盐血症性佝偻病、X连锁低磷酸盐血症性佝偻病和X连锁低磷酸盐血症(XLH)中的至少一种。
9.如权利要求1所述的方法，其中所述至少一种具有碱性磷酸酶活性的重组多肽降低所述受试者中的焦磷酸盐(PPi)浓度。
10.一种方法，其包括：
(i)鉴定患有或易患肌肉无力疾病的受试者群体；
(ii)鉴定步骤(i)中所述群体中的受试者的亚群，其中：
(a)所述亚群中的受试者具有升高的焦磷酸盐(PPi)血清浓度和/或低碱性磷酸酶活性；
(b)升高的焦磷酸盐(PPi)浓度增强所述亚群中受试者的肌肉无力；或
(c)(a)和(b)；以及
(iii)治疗或改善步骤(ii)中的所述亚群中的受试者的至少一个症状，其包括向所述受试者施用治疗有效量的至少一种具有碱性磷酸酶活性的重组多肽。
11.如权利要求10所述的方法，其中在肌肉纤维类型比例和纤维收缩特性的至少一种特性方面，步骤(iii)中所述受试者的肌肉与没有所述类型肌肉无力的正常受试者的肌肉没有明显不同。
12.如权利要求11所述的方法，其中所述肌肉是选自比目鱼肌和趾长伸肌(EDL)肌肉的至少一种类型。
13.如权利要求10所述的方法，其中所述类型的肌肉无力由升高的无机焦磷酸盐(PPi)浓度和/或低碱性磷酸酶活性引起。
14.如权利要求10所述的方法，其中升高的焦磷酸盐(PPi)浓度在步骤(iii)中增强所述受试者的肌肉无力。
15.如权利要求10所述的方法，其中步骤(iii)中的所述受试者患有或易患低磷酸酯酶症(HPP)、焦磷酸钙二水合物晶体沉积(CPPD)和家族性低磷酸盐血症中的至少一种。
16.如权利要求15所述的方法，其中所述家族性低磷酸盐血症包括常染色体显性低磷酸盐血症性佝偻病(ADHR)、常染色体隐性低磷酸盐血症性佝偻病和X连锁低磷酸盐血症性佝偻病以及X连锁低磷酸盐血症(XLH)中的至少一种。
17.如权利要求10所述的方法，其中所述至少一种具有碱性磷酸酶活性的重组多肽降低所述受试者中的焦磷酸盐(PPi)浓度。
18.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述至少一种具有碱性磷酸酶活性的重组多肽每天向所述受试者施用持续至少一周、一个月、三个月、六个月或一年。
19.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述至少一种具有碱性磷酸酶活性的重组多肽通过皮下、静脉内、肌肉内、舌下、鞘内和皮内途径中的至少一种施用。
20.如权利要求19所述的方法，其中所述至少一种具有碱性磷酸酶活性的重组多肽是皮下施用的。
21.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述至少一种具有碱性磷酸酶活性的重组多肽包含以下中的至少一种：组织非特异性碱性磷酸酶(TNALP)、胎盘碱性磷酸酶(PALP)、生殖细胞碱性磷酸酶(GCALP)、肠碱性磷酸酶(IALP)，及其生物功能片段、融合物或嵌合构建体。
22.如权利要求21所述的方法，其中所述至少一种具有碱性磷酸酶活性的重组多肽包含TNALP、PALP、GCALP和IALP的可溶性片段中的至少一种。
23.如权利要求21所述的方法，其中所述组织非特异性碱性磷酸酶(TNALP)包含SEQ ID NO:1的氨基酸1-485的氨基酸序列。
24.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述至少一种具有碱性磷酸酶活性的重组多肽是融合蛋白。
25.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述至少一种具有碱性磷酸酶活性的重组多肽包含免疫球蛋白分子。
26.如权利要求25所述的方法，其中所述免疫球蛋白分子是片段可结晶区(Fc)。
27.如权利要求26所述的方法，其中所述Fc包含SEQ ID NO:20的氨基酸序列。
28.如权利要求1-27中任一项所述的方法，其中所述至少一种具有碱性磷酸酶活性的重组多肽包含带负电荷的肽。
29.如权利要求28所述的方法，其中所述带负电荷的肽包含D10、D16、E10和E16中的至少一种。
30.如权利要求1或10所述的方法，其中所述至少一种具有碱性磷酸酶活性的重组多肽包含骨靶向碱性磷酸酶，其包含具有以下结构的多肽：
Z-sALP-Y-间隔子-X-Wn-V，
其中sALP是所述碱性磷酸酶的细胞外结构域；
V不存在或是至少一个氨基酸的氨基酸序列；
X不存在或是至少一个氨基酸的氨基酸序列；
Y不存在或是至少一个氨基酸的氨基酸序列；
Z不存在或是至少一个氨基酸的氨基酸序列；并且
Wn是聚天冬氨酸或聚谷氨酸，其中n＝10至16。
31.如权利要求30所述的方法，其中所述间隔子包含片段可结晶区(Fc)。
32.如权利要求31所述的方法，其中所述Fc包含SEQ ID NO:20的氨基酸序列。
33.如权利要求30所述的方法，其中所述至少一种具有碱性磷酸酶活性的重组多肽包含sALP-Fc-D10的结构。
34.如权利要求30所述的方法，其中所述至少一种具有碱性磷酸酶活性的重组多肽包含二聚体，所述二聚体包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的单体。
35.如权利要求34所述的方法，其中所述至少一种具有碱性磷酸酶活性的重组多肽以约0.1mg/kg/天至约20mg/kg/天的剂量或相当的每周剂量施用。
36.如权利要求34所述的方法，其中所述至少一种具有碱性磷酸酶活性的重组多肽以约0.5mg/kg/天至约20mg/kg/天的剂量或相当的每周剂量施用。
37.如权利要求34所述的方法，其中所述至少一种具有碱性磷酸酶活性的重组多肽以约0.5mg/kg/天至约10mg/kg/天的剂量或相当的每周剂量施用。
38.如权利要求34所述的方法，其中所述至少一种具有碱性磷酸酶活性的重组多肽以约1mg/kg/天至约10mg/kg/天的剂量或相当的每周剂量施用。
39.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述至少一种具有碱性磷酸酶活性的重组多肽是阿司弗泰斯阿尔法并且以6mg/kg/周的剂量皮下施用。
40.如权利要求1至39中任一项所述的方法，其中，在施用所述至少一种具有碱性磷酸酶活性的重组多肽之前，所述受试者的特征在于具有六分钟内约350米或更少的平均行走距离。
41.如权利要求1至40中任一项所述的方法，其中施用所述至少一种具有碱性磷酸酶活性的重组多肽导致六分钟内平均行走距离增加至少100米或更长。
42.如权利要求1至41中任一项所述的方法，其中所述受试者在施用所述至少一种具有碱性磷酸酶活性的重组多肽后，表现出约500米或更长的六分钟内平均行走距离。
43.如权利要求1至42中任一项所述的方法，其中所述受试者在施用所述至少一种具有碱性磷酸酶活性的重组多肽后，表现出对辅助移动性设备的依赖性降低。
44.如权利要求43所述的方法，其中所述辅助移动性设备是选自由以下组成的组的至少一种设备：助行器、轮椅、背带、拐杖和矫形器。
45.如权利要求1至44中任一项所述的方法，其中，在施用所述至少一种具有碱性磷酸酶活性的重组多肽之前，所述受试者的特征在于具有约4.5μM或更大的血浆PPi浓度。
46.如权利要求1至45中任一项所述的方法，其中施用所述至少一种具有碱性磷酸酶活性的重组多肽导致来自所述患者的血浆样品中PPi浓度的中值降低至少约1μM。
47.如权利要求1至46中任一项所述的方法，其中所述受试者在施用所述至少一种具有碱性磷酸酶活性的重组多肽后，表现出约2μM至约5μM的血浆PPi浓度。
48.如权利要求1至47中任一项所述的方法，其中，在施用所述至少一种具有碱性磷酸酶活性的重组多肽之前，所述受试者的特征在于对于0至14日龄的受试者具有约90U/L或更低；对于15日龄至小于1岁的受试者具有约134U/L或更低；对于约1岁至小于10岁的受试者具有约156U/L或更低；对于约10岁至小于约13岁的受试者具有约141U/L或更低；对于约13岁至小于约15岁的女性受试者具有约62U/L或更低；对于约13岁至小于约15岁的男性受试者具有约127U/L或更低；对于约15岁至小于约17岁的女性受试者具有约54U/L或更低；对于对于约15岁至小于约17岁的男性受试者具有约89U/L或更低；对于约17岁或更老的女性受试者具有约48U/L或更低；或者对于约17岁或更老的男性受试者具有约59U/L或更低的血浆ALP浓度。
49.如权利要求1至48中任一项所述的方法，其中施用所述至少一种具有碱性磷酸酶活性的重组多肽导致来自所述受试者的血浆样品中ALP浓度的中值增加至少约100U/L或更大。
50.如权利要求1至49中任一项所述的方法，其中，在施用所述至少一种具有碱性磷酸酶的重组多肽后，所述受试者表现出对于0至14日龄的受试者为约273U/L或更大；对于15日龄至小于1岁的受试者为约518U/L或更大；对于约1岁至小于10岁的受试者为约369U/L或更大；对于约10岁至小于约13岁的受试者为约460U/L或更大；对于约13岁至小于约15岁的女性受试者为约280U/L或更大；对于约13岁至小于约15岁的男性受试者可为约517U/L或更大；对于约15岁至小于约17岁的女性受试者为约128U/L或更大；对于对于约15岁至小于约
17岁的男性受试者为约365U/L或更大；对于约17岁或更老的女性受试者可为约95U/L或更大；或者对于约17岁或更老的男性受试者为约164U/L或更大的血浆ALP浓度。
51.如权利要求1至50中任一项所述的方法，其中，在施用所述至少一种具有碱性磷酸酶活性的重组多肽之前，所述受试者的特征在于具有约10或更小的平均布鲁茵因克斯-欧西瑞斯运动能力测试第2版(BOT-2)强度评分。
52.如权利要求1至51中任一项所述的方法，其中施用所述至少一种具有碱性磷酸酶活性的重组多肽导致所述受试者的平均BOT-2强度评分为约10或更大。
53.如权利要求1至52中任一项所述的方法，其中，在施用所述至少一种具有碱性磷酸酶活性的重组多肽之前，所述受试者的特征在于具有约5或更小的平均BOT-2跑步速度和敏捷性评分。
54.如权利要求1至53中任一项所述的方法，其中施用所述至少一种具有碱性磷酸酶活性的重组多肽导致所述受试者的平均BOT-2跑步速度和敏捷性评分为约5或更大。
55.如权利要求1至54中任一项所述的方法，其中，在施用所述至少一种具有碱性磷酸酶活性的重组多肽之前，所述受试者的特征在于具有约0.8或更大的平均儿童健康评估问卷(CHAQ)指数评分。
56.如权利要求1至55中任一项所述的方法，其中施用所述至少一种具有碱性磷酸酶活性的重组多肽导致所述受试者的平均CHAQ指数评分为约0.5或更小。
57.如权利要求1至56中任一项所述的方法，其中，在施用所述至少一种具有碱性磷酸酶活性的重组多肽之前，所述受试者的特征在于具有约40或更小的平均儿科结果数据收集工具(PODCI)评分。
58.如权利要求1至57中任一项所述的方法，其中施用所述至少一种具有碱性磷酸酶活性的重组多肽导致所述受试者的平均PODCI评分为约40或更大。
59.如权利要求1至58中任一项所述的方法，其中，在施用所述至少一种具有碱性磷酸酶活性的重组多肽之前，所述受试者的特征在于具有小于约5的平均肌肉强度等级。
60.如权利要求1至59中任一项所述的方法，其中施用所述至少一种具有碱性磷酸酶活性的重组多肽导致所述受试者的肌肉强度等级平均增加约1或更大。
61.如权利要求1至60中任一项所述的方法，其中施用所述至少一种具有碱性磷酸酶活性的重组多肽导致所述受试者的肌肉强度等级平均增加约1或更大。
62.如权利要求1至61中任一项所述的方法，其中，在施用所述至少一种具有碱性磷酸酶活性的重组多肽之前，所述受试者的特征在于具有小于预测HHD值的约80％的平均手持式测力法(HHD)值。
63.如权利要求1至62中任一项所述的方法，其中施用所述至少一种具有碱性磷酸酶活性的重组多肽导致所述受试者的平均HHD值为预测HHD值的约80％或更大。
64.如权利要求62或63所述的方法，其中所述HHD值表示所述受试者的抓握强度、膝屈曲、膝伸展、髋屈曲、髋伸展或髋外展。
65.如权利要求1或10所述的方法，其中施用所述至少一种具有碱性磷酸酶活性的重组多肽导致六分钟内平均行走距离增加至少100米或更长。
66.如权利要求1或10所述的方法，其中所述受试者在施用所述至少一种具有碱性磷酸酶活性的重组多肽后，表现出约500米或更长的六分钟内平均行走距离。
67.如权利要求1或10所述的方法，其中所述受试者在施用所述至少一种具有碱性磷酸酶活性的重组多肽后，表现出对辅助移动性设备的依赖性降低。
68.如权利要求67所述的方法，其中所述辅助移动性设备是选自由以下组成的组的至少一种设备：助行器、轮椅、背带、拐杖和矫形器。
69.如权利要求1或10所述的方法，其中，在施用所述至少一种具有碱性磷酸酶活性的重组多肽之前，所述受试者的特征在于具有约4.5μM或更大的血浆PPi浓度。
70.如权利要求1或10所述的方法，其中施用所述至少一种具有碱性磷酸酶活性的重组多肽导致来自所述患者的血浆样品中PPi浓度的中值降低至少约1μM。
71.如权利要求1或10所述的方法，其中所述受试者在施用所述至少一种具有碱性磷酸酶活性的重组多肽后，表现出约2μM至约5μM的血浆PPi浓度。
72.如权利要求1或10所述的方法，其中，在施用所述至少一种具有碱性磷酸酶活性的重组多肽之前，所述受试者的特征在于对于0至14日龄的受试者具有约90U/L或更低；对于
15日龄至小于1岁的受试者具有约134U/L或更低；对于约1岁至小于10岁的受试者具有约
156U/L或更低；对于约10岁至小于约13岁的受试者具有约141U/L或更低；对于约13岁至小于约15岁的女性受试者具有约62U/L或更低；对于约13岁至小于约15岁的男性受试者具有约127U/L或更低；对于约15岁至小于约17岁的女性受试者具有约54U/L或更低；对于对于约
15岁至小于约17岁的男性受试者具有约89U/L或更低；对于约17岁或更老的女性受试者具有约48U/L或更低；或者对于约17岁或更老的男性受试者具有约59U/L或更低的血浆ALP浓度。
73.如权利要求1或10所述的方法，其中施用所述至少一种具有碱性磷酸酶活性的重组多肽导致来自所述受试者的血浆样品中ALP浓度的中值增加至少约100U/L或更大。
74.如权利要求1或10所述的方法，其中，在施用所述至少一种具有碱性磷酸酶的重组多肽后，所述受试者表现出对于0至14日龄的受试者为约273U/L或更大；对于15日龄至小于
1岁的受试者为约518U/L或更大；对于约1岁至小于10岁的受试者为约369U/L或更大；对于约10岁至小于约13岁的受试者为约460U/L或更大；对于约13岁至小于约15岁的女性受试者为约280U/L或更大；对于约13岁至小于约15岁的男性受试者可为约517U/L或更大；对于约
15岁至小于约17岁的女性受试者为约128U/L或更大；对于对于约15岁至小于约17岁的男性受试者为约365U/L或更大；对于约17岁或更老的女性受试者可为约95U/L或更大；或者对于约17岁或更老的男性受试者为约164U/L或更大的血浆ALP浓度。
75.如权利要求1或10所述的方法，其中，在施用所述至少一种具有碱性磷酸酶活性的重组多肽之前，所述受试者的特征在于具有约10或更小的平均布鲁茵因克斯-欧西瑞斯运动能力测试第2版(BOT-2)强度评分。
76.如权利要求1或10所述的方法，其中施用所述至少一种具有碱性磷酸酶活性的重组多肽导致所述受试者的平均BOT-2强度评分为约10或更大。
77.如权利要求1或10所述的方法，其中，在施用所述至少一种具有碱性磷酸酶活性的重组多肽之前，所述受试者的特征在于具有约5或更小的平均BOT-2跑步速度和敏捷性评分。
78.如权利要求1或10所述的方法，其中施用所述至少一种具有碱性磷酸酶活性的重组多肽导致所述受试者的平均BOT-2跑步速度和敏捷性评分为约5或更大。
79.如权利要求1或10所述的方法，其中，在施用所述至少一种具有碱性磷酸酶活性的重组多肽之前，所述受试者的特征在于具有约0.8或更大的平均儿童健康评估问卷(CHAQ)指数评分。
80.如权利要求1或10所述的方法，其中施用所述至少一种具有碱性磷酸酶活性的重组多肽导致所述受试者的平均CHAQ指数评分为约0.5或更小。
81.如权利要求1或10所述的方法，其中，在施用所述至少一种具有碱性磷酸酶活性的重组多肽之前，所述受试者的特征在于具有约40或更小的平均儿科结果数据收集工具(PODCI)评分。
82.如权利要求1或10所述的方法，其中施用所述至少一种具有碱性磷酸酶活性的重组多肽导致所述受试者的平均PODCI评分为约40或更大。
83.如权利要求1或10所述的方法，其中，在施用所述至少一种具有碱性磷酸酶活性的重组多肽之前，所述受试者的特征在于具有小于约5的平均肌肉强度等级。
84.如权利要求1或10所述的方法，其中施用所述至少一种具有碱性磷酸酶活性的重组多肽导致所述受试者的肌肉强度等级平均增加约1或更大。
85.如权利要求1或10所述的方法，其中，在施用所述至少一种具有碱性磷酸酶活性的重组多肽之前，所述受试者的特征在于具有小于预测HHD值的约50％的平均手持式测力法(HHD)值。
86.如权利要求1或10所述的方法，其中施用所述至少一种具有碱性磷酸酶活性的重组多肽导致所述受试者的平均HHD值为预测HHD值的约50％或更大。
87.如权利要求85或86所述的方法，其中所述HHD值表示所述受试者的抓握强度、膝屈曲、膝伸展、髋屈曲、髋伸展或髋外展。

说明书全文

用碱性磷酸酶治疗肌肉无力

[0001] 序列表

[0002] 所附序列表中列出的氨基酸序列使用标准的三字母氨基酸代码示出，如37C.F.R.1.822中所定义。序列表作为ASCII文本文件提交，在2017年3月30日创建，约84KB，
其通过引用并入本文。

背景技术

[0003] 低磷酸酯酶症(HPP)是一种罕见的、可遗传性骨骼疾病，对于最严重的疾病形式，其发病率为1例/100,000出生例。当在出生时观察时，HPP经常是致命的，具有约70％的婴儿
死亡率。由于进行性胸廓畸形，严重受影响的患者经常在婴儿期死于呼吸功能不全。

[0004] HPP可由编码组织非特异性碱性磷酸酶(TNALP)的基因中的功能缺失突变引起。HPP导致一系列明显的症状和严重程度，从佝偻病(骨软化症)到子宫内几乎完全没有骨矿
化。大多数患者表现出骨骼变化、身材矮小、下肢疼痛、步态紊乱和牙齿过早脱落的特征。例
如，HPP的婴儿症状可能包括体重增加不足、佝偻病的出现、骨骼矿化受损、进行性骨骼脱
矿、肋骨骨折和胸廓畸形，而HPP的儿童症状可能包括身材矮小和骨骼畸形，诸如弓形腿和
由喇叭形干骺端导致的扩大的手腕、膝盖和脚踝。肌肉无力(或肌张力减退)也是与HPP相关
的重要症状。由于与HPP相关的身体损伤，患有HPP的患者经常表现出降低的执行健康患者
无需辅助每天执行的常规活动的能力或没有所述能力。

[0005] 在没有数据的情况下，HPP中的肌张力减退已被断言是由PPi毒性引起的(Whyte,M.；J.Bone Mineral Res.(2017年1月))。一篇论文显示PPi能够破坏牛肌肉模型中的肌动
蛋白/肌球蛋白相互作用(Meat Science 84:364-370(2010))。然而，还没有可用的关于肌
肉无力和PPi/ALP水平的具体数据。早期数据涉及骨骼变化(侧重于放射摄影总体变化印象
(RGI-C))，但未能将肌肉无力与HPP的表型异质性区分开。

[0006] 值得注意的是，HPP的治疗，特别是与HPP相关的外出损伤(诸如肌肉无力)持续很长一段时间是未知的。因此，需要可用于治疗与HPP或其他疾病相关的肌肉无力的方法。另
外，还需要治疗如由升高的PPi和/或低碱性磷酸酶活性引起或与之相关的人受试者的肌张
力减退或肌肉无力的方法。
发明内容

[0007] 肌肉无力已被报道为一些HPP患者和其他疾病或病症中的一种症状。在HPP中，升高的PPi浓度归因于编码碱性磷酸酶的组织非特异性同工酶(TNALP；又称肝/骨/肾型ALP)
的基因ALPL中的功能缺失突变，所述同工酶是用于底物诸如无机焦磷酸盐(PPi)、磷酸乙醇
胺(PEA)和5'-磷酸吡哆醛(PLP)的酶。本公开教导了治疗其特征在于升高的焦磷酸盐(PPi)
浓度和/或降低的碱性磷酸酶浓度的受试者中肌肉无力疾病的方法。

[0008] HPP患者的肌肉无力表型可能被认为是继发性的并且由骨矿化缺陷引起，所述骨矿化缺陷被视为是HPP的特征性特征。令人惊讶的是，本公开教导HPP中的肌肉无力可能不
是由于骨缺陷，因为野生型(WT)小鼠和AKP2-/-小鼠的肌肉在其比目鱼肌纤维类型比例或比
目鱼肌或离体EDL肌肉收缩特性方面未被观察到差异。相反，发现HPP中的肌肉无力与升高
的PPi浓度更相关，因为通过施用阿司弗泰斯阿尔法(asfotase alfa)减少PPi改善了
AKP2-/-小鼠肌肉抓握强度。因此，具有以升高的PPi浓度为特征的肌肉无力疾病的受试者，
即使没有其他HPP症状或尚未被诊断为HPP，仍可通过阿司弗泰斯阿尔法治疗。已公开了测
试抓握强度的方法，参见例如，Whyte,M.等，Bone 2016年12月；93:125-138；Whyte,M.等，
JCI Insight 2016；27:87-102；Whyte,M.等，Bone 2015年6月；75:229-39。

[0009] 公开了(1)鉴定患有或易患肌肉无力疾病的受试者(例如人)用于用具有碱性磷酸酶活性的重组多肽(诸如TNALP，例如SEQ ID NO:1的sALP多肽或与SEQ ID NO:1的序列具有
至少95％序列同一性的多肽变体，例如，阿司弗泰斯阿尔法)进行治疗的方法，和(2)用具有
碱性磷酸酶活性的重组多肽治疗此类受试者。可用于评估使用具有碱性磷酸酶活性的重组
多肽进行的治疗的需求或功效的示例性度量包括(1)血浆PPi和/或碱性磷酸酶浓度，(2)布
鲁茵因克斯-欧西瑞斯(Bruininks-Oseretsky)运动能力测试第2版(BOT-2)，(3)儿童健康
评估问卷(CHAQ)，(4)儿科结果数据收集工具(PODCI)，(5)Bayley婴幼儿发育量表，第3版
(BSID-III)，(6)Peabody发育运动量表，第2版(PDMS-2)，(7)六分钟行走测试(6MWT)，(8)肌
肉强度等级，和(9)手持式测力法(HHD)。所述方法还包括单独或以任何组合使用所述指标
(例如，血浆PPi浓度、碱性磷酸酶浓度、BOT-2、CHAQ、PODCI、BSID-III、PDMS-2、6MWT、肌肉强度等级和HHD)中的一种或多种，以评估在患有或易患肌肉无力疾病的受试者中使用具有碱
性磷酸酶活性的重组多肽的治疗功效，其中相对于某一评分或值的改善表明具有碱性磷酸
酶活性的重组多肽对于治疗肌肉无力疾病是有效的。

[0010] 在一个方面，本公开提供了一种在患有或易患肌肉无力疾病的受试者中治疗或改善肌肉无力的方法，其包括向所述受试者施用治疗有效量的至少一种具有碱性磷酸酶活性
的重组多肽。在一些实施方案中，所述受试者具有升高浓度的无机焦磷酸盐(PPi)和/或低
碱性磷酸酶活性或浓度。在一个实施方案中，所述受试者具有升高的无机焦磷酸盐(PPi)血
清浓度。在其他实施方案中，所述受试者具有升高浓度的至少一种碱性磷酸酶底物(例如
PPi、PLP、PEA等)。

[0011] 在另一方面，本公开还提供了一种鉴定患有或易患肌肉无力疾病的受试者亚群的方法，其中所述亚群中的受试者具有升高的无机焦磷酸盐(PPi)浓度。

[0012] 在一些实施方案中，在这种肌肉的至少一种特性方面，所述受试者的肌肉与没有所述肌肉无力疾病的正常受试者的肌肉没有明显不同。这种特性可选自肌肉纤维类型比
例、纤维收缩特性或本领域已知的其他肌肉特性。此类肌肉可包括受试者的任何肌肉，包括
例如骨骼或横纹肌、心肌或平滑肌。在一些实施方案中，此类肌肉包括至少一种类型的手臂
和腿部肌肉，特别是选自比目鱼肌和趾长伸肌(EDL)肌肉的至少一种类型的肌肉。

[0013] 在一些实施方案中，本文所述的肌肉无力疾病是由升高的无机焦磷酸盐(PPi)浓度(诸如大于约4.5μM的PPi浓度)引起的。在一个实施方案中，本文所述的肌肉无力疾病是
由升高的无机焦磷酸盐(PPi)血清浓度引起的。例如，来自婴儿或儿童(例如，小于约12岁的
受试者)的样品(例如，血浆样品)中升高的PPi浓度可为约5.71μM或更大，来自青少年(例
如，约13至约18岁的受试者)的样品(例如，血浆样品)中升高的PPi浓度可为约4.78μM或更
大；以及来自成人(例如，大于18岁的受试者)的样品(例如，血浆样品)中升高的PPi浓度可
为约5.82μM或更大。在其他实施方案中，本文所述的肌肉无力疾病是由至少一种碱性磷酸
酶底物(例如PPi、PLP、PEA等)的浓度升高引起的。在一些实施方案中，升高的焦磷酸盐
(PPi)浓度增强所述受试者中本文所述的肌肉无力疾病。在一个实施方案中，升高的PPi血
清浓度增强所述受试者中本文所述的肌肉无力疾病。例如，增强肌肉无力疾病的升高的无
机PPi血清浓度在来自婴儿或儿童(例如，小于约12岁的受试者)的样品(例如，血浆样品)中
可为例如约5.71μM或更大，在来自青少年(例如，约13至约18岁的受试者)的样品(例如，血
浆样品)中可为约4.78μM或更大；并且在来自成人(例如，大于18岁的受试者)的样品(例如，
血浆样品)中可为约5.82μM或更大。

[0014] 在一些实施方案中，肌肉无力疾病由受试者中的低碱性磷酸酶浓度引起或增强。例如，来自受试者的样品(例如，血浆样品)中的低碱性磷酸酶浓度对于0至14日龄的受试者
可为例如约90U/L或更低；对于15日龄至小于1岁的受试者可为约134U/L或更低；对于约1岁
至小于10岁的受试者可为约156U/L或更低；对于约10岁至小于约13岁的受试者可为约
141U/L或更低；对于约13岁至小于约15岁的女性受试者可为约62U/L或更低；对于约13岁至
小于约15岁的男性受试者可为约127U/L或更低；对于约15岁至小于约17岁的女性受试者可
为约54U/L或更低；对于对于约15岁至小于约17岁的男性受试者可为约89U/L或更低；对于
约17岁或更老的女性受试者可为约48U/L或更低；或者对于约17岁或更老的男性受试者可
为约59U/L或更低。

[0015] 在其他实施方案中，升高浓度的至少一种碱性磷酸酶底物(例如PPi、PLP、PEA等)增强所述受试者中本文所述的肌肉无力疾病。

[0016] 本文所述的肌肉无力疾病包括以下中的至少一种：例如低磷酸酯酶症(HPP)、焦磷酸钙二水合物晶体沉积(CPPD)、家族性低磷酸盐血症(诸如常染色体显性低磷酸盐血症性
佝偻病(ADHR)、常染色体隐性低磷酸盐血症性佝偻病、X连锁低磷酸盐血症性佝偻病、X连锁
低磷酸盐血症(XLH)等)，或具有肌肉无力表型和升高浓度的至少一种碱性磷酸酶底物(例
如PPi、PLP、PEA等)的其他疾病。在一个实施方案中，本文所述的肌肉无力疾病包括以下中
的至少一种：例如低磷酸酯酶症(HPP)、焦磷酸钙二水合物晶体沉积(CPPD)、家族性低磷酸
盐血症(诸如常染色体显性低磷酸盐血症性佝偻病(ADHR)、常染色体隐性低磷酸盐血症性
佝偻病、X连锁低磷酸盐血症性佝偻病、X连锁低磷酸盐血症(XLH)等)，或具有肌肉无力表型
和升高浓度(例如，血清浓度)的无机焦磷酸盐(PPi)的其他疾病。

[0017] 在一些实施方案中，施用至少一种具有碱性磷酸酶活性的重组多肽(诸如TNALP，例如SEQ ID NO:1的sALP多肽或与SEQ ID NO:1的序列具有至少95％序列同一性的多肽变
体，例如，阿司弗泰斯阿尔法)降低来自所述受试者的样品(例如，血浆样品)中PPi的浓度。
例如，向受试者施用至少一种具有碱性磷酸酶活性的重组多肽将样品(例如，血浆样品)中
的PPi浓度降低至对于婴儿或儿童为小于约5.71μM(例如，约3.5μM、约4μM、约4.5μM、约5μM或约5.5μM的血浆PPi浓度或者约3.5μM至约5.5μM范围内的血浆PPi浓度)；对于青少年为小
于约4.78μM(例如，约3.5μM、约4μM或约4.5μM的血浆PPi浓度或者约3.5μM至约4.5μMa范围内的血浆PPi浓度)；或者对于成人为小于约5.82μM(例如，约3.5μM、约4μM、约4.5μM、约5μM或约5.5μM的血浆PPi浓度或者约3.5μM至约5.5μM范围内的血浆PPi浓度)。

[0018] 在另一方面，本公开还提供了一种方法，其包括：(i)鉴定患有或易患肌肉无力疾病的受试者群体；(ii)在步骤(i)中的群体中鉴定受试者亚群，其中：(a)所述亚群中的受试
者具有升高浓度的无机焦磷酸盐(PPi)；(b)增强所述亚群中受试者的肌肉无力的升高浓度
的无机焦磷酸盐(PPi)；或(c)(a)和(b)两者；以及(iii)治疗步骤(ii)中的所述亚群。

[0019] 在另一方面，本公开还提供了一种方法，其包括：(i)鉴定患有或易患肌肉无力疾病的受试者群体；(ii)在步骤(i)中的群体中鉴定受试者亚群，其中：(a)所述亚群中的受试
者具有升高浓度的无机焦磷酸盐(PPi)；(b)增强所述亚群中受试者的肌肉无力的升高浓度
的无机焦磷酸盐(PPi)；或(c)(a)和(b)两者；以及(iii)治疗或改善步骤(ii)中的亚群中受
试者的肌肉无力疾病的至少一种症状，其包括向所述受试者施用治疗有效量的至少一种具
有碱性磷酸酶活性的重组多肽。在一个实施方案中，亚群中的所述受试者具有升高的无机
焦磷酸盐(PPi)的血清浓度。

[0020] 在一些实施方案中，在肌肉的至少一种特性方面，本文所述步骤(iii)中受试者的肌肉与没有所述类型肌肉无力的正常受试者的肌肉没有明显不同。在一个实施方案中，肌
肉的至少一种特性包括例如纤维类型比例和/或纤维收缩特性。此类肌肉可包括受试者的
任何肌肉，包括例如骨骼或横纹肌、心肌或平滑肌。在一些实施方案中，此类肌肉包括至少
一种类型的手臂和/或腿部肌肉，特别是选自比目鱼肌和趾长伸肌(EDL)肌肉的至少一种类
型的肌肉。在一些实施方案中，所述方法包括鉴定患有或易患肌肉无力疾病并且具有以下
的受试者：升高的PPi浓度、升高的碱性磷酸酶浓度、降低的抓握强度、例如小于10的平均
BOT-2强度评分、例如小于5的平均BOT-2跑步速度和敏捷性评分、例如大于约0.8的平均
CHAQ指数评分、例如小于约40的平均PODCI评分、例如小于预测6MWT值的约80％的平均
6MWT，和/或例如小于5的肌肉强度等级。

[0021] 例如，来自婴儿或儿童(例如，小于约12岁的受试者)的样品(例如，血浆样品)中升高的PPi浓度可为约5.71μM或更大，来自青少年(例如，约13至约18岁的受试者)的样品(例
如，血浆样品)中升高的PPi浓度可为约4.78μM或更大；以及来自成人(例如，大于约18岁的
受试者)的样品(例如，血浆样品)中升高的PPi浓度可为约5.82μM或更大。另外，来自受试者
的样品(例如，血浆样品)中的升高的碱性磷酸酶浓度例如对于0至14日龄的受试者可为约
90U/L或更低；对于15日龄至小于1岁的可为约134U/L或更低；对于约1岁至小于10岁的受试
者可为约156U/L或更低；对于约10岁至小于约13岁的受试者可为约141U/L或更低；对于约
13岁至小于约15岁的女性受试者可为约62U/L或更低；对于约13岁至小于约15岁的男性受
试者可为约127U/L或更低；对于约15岁至小于约17岁的女性受试者可为约54U/L或更低；对
于对于约15岁至小于约17岁的男性受试者可为约89U/L或更低；对于约17岁或更老的女性
受试者可为约48U/L或更低；或者对于约17岁或更老的男性受试者可为约59U/L或更低。

[0022] 在一些实施方案中，本文所述的肌肉无力疾病是由升高的无机焦磷酸盐(PPi)浓度引起的。在一个实施方案中，本文所述的肌肉无力疾病是由升高的无机焦磷酸盐(PPi)血
清浓度引起的。例如，来自婴儿或儿童(例如，小于约12岁的受试者)的样品(例如，血浆样
品)中升高的PPi浓度可为约5.71μM或更大，来自青少年(例如，约13至约18岁的受试者)的
样品(例如，血浆样品)中升高的PPi浓度可为约4.78μM或更大；以及来自成人(例如，大于约
18岁的受试者)的样品(例如，血浆样品)中升高的PPi浓度可为约5.82μM。在其他实施方案
中，本文所述的肌肉无力疾病是由至少一种碱性磷酸酶底物(例如PPi、PLP、PEA等)的浓度
升高引起的。

[0023] 在一些实施方案中，升高的焦磷酸盐(PPi)浓度增强本文所述步骤(iii)中的所述受试者中本文所述的肌肉无力疾病。在一个实施方案中，升高的无机焦磷酸盐(PPi)血清浓
度增强所述受试者中本文所述的肌肉无力疾病。例如，来自婴儿或儿童(例如，小于约12岁
的受试者)的样品(例如，血浆样品)中升高的PPi浓度可为约5.71μM或更大，来自青少年(例
如，约13至约18岁的受试者)的样品(例如，血浆样品)中升高的PPi浓度可为约4.78μM或更
大；以及来自成人(例如，大于约18岁的受试者)的样品(例如，血浆样品)中升高的PPi浓度
可为约5.82μM

[0024] 在其他实施方案中，由升高浓度的至少一种碱性磷酸酶底物(例如PPi、PLP、PEA等)增强所述受试者中本文所述的肌肉无力疾病。

[0025] 本文所述的用于亚群选择的肌肉无力疾病包括以下中的至少一种：例如低磷酸酯酶症(HPP)、焦磷酸钙二水合物晶体沉积(CPPD)、家族性低磷酸盐血症(诸如常染色体显性
低磷酸盐血症性佝偻病(ADHR)、常染色体隐性低磷酸盐血症性佝偻病、X连锁低磷酸盐血症
性佝偻病、X连锁低磷酸盐血症(XLH)等)，或具有肌肉无力表型和升高浓度的至少一种碱性
磷酸酶底物(例如PPi、PLP、PEA等)的其他疾病。在一个实施方案中，本文所述的肌肉无力疾
病包括以下中的至少一种：例如低磷酸酯酶症(HPP)、焦磷酸钙二水合物晶体沉积(CPPD)、
家族性低磷酸盐血症(诸如常染色体显性低磷酸盐血症性佝偻病(ADHR)、常染色体隐性低
磷酸盐血症性佝偻病、X连锁低磷酸盐血症性佝偻病、X连锁低磷酸盐血症(XLH)等)，或具有
肌肉无力表型和升高浓度(例如，血清浓度)的无机焦磷酸盐(PPi)的其他疾病。

[0026] 在一些实施方案中，施用至少一种具有碱性磷酸酶活性的重组多肽(诸如TNALP，例如SEQ ID NO:1的sALP多肽或与SEQ ID NO:1的序列具有至少95％序列同一性的多肽变
体，例如，阿司弗泰斯阿尔法)降低来自所述受试者的样品(例如，血浆样品)中无机焦磷酸
盐(PPi)的浓度。例如，向受试者施用至少一种具有碱性磷酸酶活性的重组多肽将样品(例
如，血浆样品)中的PPi浓度降低至对于婴儿或儿童为小于约5.71μM(例如，约3.5μM、约4μM、约4.5μM、约5μM或约5.5μM的血浆PPi浓度或者约3.5μM至约5.5μM范围内的血浆PPi浓度)；
对于青少年为小于约4.78μM(例如，约3.5μM、约4μM或约4.5μM的血浆PPi浓度或者约3.5μM至约4.5μMa范围内的血浆PPi浓度)；或者对于成人为小于约5.82μM(例如，约3.5μM、约4μM、约4.5μM、约5μM或约5.5μM的血浆PPi浓度或者约3.5μM至约5.5μM范围内的血浆PPi浓度)。

[0027] 在一些实施方案中，施用至少一种具有碱性磷酸酶活性的重组多肽(诸如TNALP，例如SEQ ID NO:1的sALP多肽或与SEQ ID NO:1的序列具有至少95％序列同一性的多肽变
体，例如，阿司弗泰斯阿尔法)增加来自所述受试者的样品(例如，血浆样品)中碱性磷酸酶
的浓度。例如，施用至少一种具有碱性磷酸酶活性的重组多肽将来自受试者的样品(例如，
血浆样品)中的碱性磷酸酶浓度增加至例如对于0至14日龄的受试者为约273U/L或更大；对
于15日龄至小于1岁的受试者为约518U/L或更大；对于约1岁至小于10岁的受试者为约
369U/L或更大；对于约10岁至小于约13岁的受试者为约460U/L或更大；对于约13岁至小于
约15岁的女性受试者为约280U/L或更大；对于约13岁至小于约15岁的男性受试者可为约
517U/L或更大；对于约15岁至小于约17岁的女性受试者为约128U/L或更大；对于对于约15
岁至小于约17岁的男性受试者为约365U/L或更大；对于约17岁或更老的女性受试者可为约
95U/L或更大；或者对于约17岁或更老的男性受试者为约164U/L或更大。

[0028] 在一些实施方案中，在施用至少一种具有碱性磷酸酶活性的重组多肽后，受试者还可表现出对辅助移动性设备(例如，助行器、轮椅、背带、拐杖和矫形器)的依赖性降低。

[0029] 在任何以上方面中，在施用至少一种具有碱性磷酸酶活性的重组多肽之前，受试者的特征在于具有小于预测HHD值的约80％的平均手持式测力法(HHD)值(例如，相对于约
相同年龄、相同性别和/或相同身高的正常受试者)，特别地，其中HHD值表示受试者的抓握
强度、膝屈曲、膝伸展、髋屈曲、髋伸展或髋外展。例如，施用至少一种具有碱性磷酸酶活性
的重组多肽导致受试者的平均HHD值为预测HHD值的约50％或更多，例如，其中HHD值表示受
试者的抓握强度、膝屈曲、膝伸展、髋屈曲、髋伸展或髋外展。

[0030] 在一些实施方案中，本文所述的至少一种具有碱性磷酸酶活性的重组多肽是或可每天、每周两次、每周一次或甚至更低的频率向受试者施用。在一个实施方案中，本文所述
的至少一种具有碱性磷酸酶活性的重组多肽每天向受试者施用。本文所述的至少一种具有
碱性磷酸酶活性的重组多肽可持续至少一周、两周、一个月、三个月、六个月、一年或更长的
时期，直至受试者的整个寿命向受试者施用。

[0031] 在一些实施方案中，本文所述的至少一种具有碱性磷酸酶活性的重组多肽是或可通过至少一种途径施用。此类途径包括例如皮下、静脉内、肌肉内、舌下、鞘内、皮内或本领
域已知的其他途径。在一个实施方案中，本文所述的至少一种具有碱性磷酸酶活性的重组
多肽是皮下施用的。

[0032] 在一些实施方案中，本文所述的至少一种具有碱性磷酸酶活性的重组多肽包含以下中的至少一种：组织非特异性碱性磷酸酶(TNALP)、胎盘碱性磷酸酶(PALP)、生殖细胞碱
性磷酸酶(GCALP)、肠碱性磷酸酶(IALP)，及其生物功能片段、融合物或嵌合构建体。在一个
实施方案中，本文所述的至少一种具有碱性磷酸酶活性的重组多肽包含TNALP、PALP、GCALP
和IALP的可溶性片段中的至少一种。在一个实施方案中，本文所述的组织非特异性碱性磷
酸酶(TNALP)包含SEQ ID NO:1的氨基酸1-485的氨基酸序列或由其组成。在另一个实施方
案中，本文所述的组织非特异性碱性磷酸酶(TNALP)包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列或由其
组成。

[0033] 在一些实施方案中，本文所述的至少一种具有碱性磷酸酶活性的重组多肽是融合蛋白。在一个实施方案中，本文所述的至少一种具有碱性磷酸酶活性的重组多肽包含免疫
球蛋白分子。这种免疫球蛋白分子可以是例如IgG的片段可结晶区(Fc)或其全长或片段，包
括但不限于IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgG2/4或其他IgG融合物。在一个实施方案中，本文所述的Fc包含SEQ ID NO:20的氨基酸序列。

[0034] 在一些实施方案中，本文所述的至少一种具有碱性磷酸酶活性的重组多肽包含带负电荷的肽。这种带负电荷的肽可包括至少一种聚(谷氨酸)(polyE)或聚(天冬氨酸)
(polyD)肽，例如至少一种具有碱性磷酸酶活性的重组多肽包括6、7、8、9、10、11、12、13、14、
15或16个连续的酸性残基，特别是天冬氨酸(D)或谷氨酸(E)，诸如D10、D16、E10和E16中的至少一种。在一些实施方案中，至少一种具有碱性磷酸酶活性的重组多肽包括E6、E7、E8、E9、E10、E11、E12、E13、E14、E15、E16、D6、D7、D8、D9、D10、D11、D12、D13、D14、D15或D16，例如E6、E10、D6或D10。

[0035] 在一些实施方案中，本文所述的至少一种具有碱性磷酸酶活性的重组多肽包含骨靶向碱性磷酸酶，其包含具有以下结构的多肽：Z-sALP-Y-间隔子-X-Wn-V，其中sALP是碱性
磷酸酶的细胞外结构域；V不存在或是至少一个氨基酸的氨基酸序列；X不存在或是至少一
个氨基酸的氨基酸序列；Y不存在或是至少一个氨基酸的氨基酸序列；Z不存在或是至少一
个氨基酸的氨基酸序列；并且Wn是聚天冬氨酸或聚谷氨酸，其中n＝10至16。

[0036] 在一些实施方案中，本文所述的间隔子包含片段可结晶区(Fc)。在一个实施方案中，本文所述的Fc包含SEQ ID NO:20的氨基酸序列。

[0037] 在一些实施方案中，本文所述的至少一种具有碱性磷酸酶活性的重组多肽包含sALP-Fc-D10的结构。

[0038] 在一个实施方案中，本文所述的至少一种具有碱性磷酸酶活性的重组多肽包含二聚体，所述二聚体包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的单体。

[0039] 在一些实施方案中，本文所述的至少一种具有碱性磷酸酶活性的重组多肽以约0.1mg/kg/天至约20mg/kg/天的剂量或相当的每周剂量施用。在一个实施方案中，本文所述
的至少一种具有碱性磷酸酶活性的重组多肽以约0.5mg/kg/天至约20mg/kg/天的剂量或相
当的每周剂量施用。在另一个实施方案中，本文所述的至少一种具有碱性磷酸酶活性的重
组多肽以约0.5mg/kg/天至约10mg/kg/天的剂量或相当的每周剂量施用。在另一个实施方
案中，本文所述的至少一种具有碱性磷酸酶活性的重组多肽以约1mg/kg/天至约10mg/kg/
天的剂量或相当的每周剂量施用。

[0040] 在一些实施方案中，本文所述的受试者是哺乳动物(例如人)。

[0041] 定义

[0042] 如本文所用，除非另外说明，否则“一个”意指“至少一个”或“一个或多个”。此外，除非上下文明确地另外规定，否则单数形式“一个”、“一种”和“所述”包括多个指示物。

[0043] 如本文所用，“约”是指所述值的±10％并且优选为所述值的±5％，或更优选为所述值的±2％的量。

[0044] 如本文所用，“至少”是指所述值的≤10％并且优选为所述值的≤5％，或更优选为所述值的≤2％的量。

[0045] “阿司弗泰斯阿尔法”意指配制用于治疗HPP的人TNALP(hTNALP)融合蛋白。阿司弗泰斯阿尔法是包括两条相同多肽链的可溶性糖蛋白的融合蛋白，其中每条多肽链包括SEQ
ID NO:1的氨基酸残基1-726。每条多肽链的结构包括hTNALP的催化结构域、人免疫球蛋白
G1Fc结构域和用作骨靶向结构域的deca-天冬氨酸肽(结构hTNALP-Fc-D10)。两条多肽链通
过两个二硫键共价连接。阿司弗泰斯阿尔法已在美国、欧洲、日本、加拿大、以色列、澳大利
亚和韩国以商品名 (Alexion Pharmaceuticals,Inc.,New Haven,CT)批准。

[0046] 术语“个体”、“受试者”和“患者”可互换使用并且是指希望诊断、治疗或疗法的任何受试者，具体是人。其他受试者可包括例如牛、狗、猫、豚鼠、兔，大鼠、小鼠、马等。如本文所用，“有风险”的受试者或“易患”疾病的受试者是被鉴定为具有发展与肌肉无力疾病相关的疾病、病症或症状的风险的受试者。

[0047] 如本文所用，“平均值”是指表示数据集的平均值或中值的数值。通过将数据集中的值的总和除以它们的数量来计算数据集的平均值。通过确定奇数列表数据中的中间值或
通过确定偶数列表中间的两个数据值的平均值来计算数据集的中值。

[0048] 本公开中用于TNALP或其他基因或蛋白质的术语“野生型”或“野生型序列”是指此类基因或蛋白质的典型形式，因为它在自然界中发生在正常的人、非人哺乳动物或其他生
物体中。与由非标准、“突变”等位基因或氨基酸序列/修饰/相互作用产生的相反，野生型序
列可以指基因的基因座处的标准“正常”等位基因或者多肽或蛋白质的标准“正常”一级氨
基酸序列(任选地具有标准“正常”翻译后修饰和/或链间键和/或氨基酸残基之间的相互作
用)。“突变”等位基因可在很大程度上变化，并且在群体内发生遗传漂移的情况下，甚至变
成野生型。现在认识到，大多数或所有基因位点(并且对于大多数多肽序列而言频率较少但
仍可能)以多种等位基因形式存在，其在整个物种的地理范围内频率变化，并且可能不一定
存在统一的野生型。然而，一般而言，最普遍的等位基因或氨基酸序列-即在正常个体人或
其他生物中具有最高频率的序列或氨基酸序列-在本公开中被认为是野生型。

[0049] 除另有说明之外，本说明书中用于人或其他生物的术语“正常”是指人或其他生物没有由相关基因或多肽/蛋白质的异常活动(其可能归因于例如，基因或蛋白质产物的缺陷
或缺乏和/或基因或蛋白质产物的缺陷或功能缺失)引起或与之相关的任何疾病(例如，
HPP)、病症和/或症状或生理后果(例如，肌肉无力)。正常人的最明显的实例是缺乏肌肉无
力或肌肉无力症状并且缺乏对可导致HPP相关的肌肉无力的基因或蛋白质(例如，ALPL基因
和ALP蛋白质)的突变或修饰的人。在关注ALP功能的另一种情况中，本公开中的“正常”人的
范围可扩展到包括不具有异常内源性碱性磷酸酶活性的任何人(这可通过例如底物(PPi、
PEA和PLP)水平进行测试，并且与其他健康或正常人的相应活性进行比较)。

[0050] 如本文所用，“升高的”或“增加的”浓度是指患有或易患本文所述的肌肉无力疾病的受试者中的(例如，PPi)浓度高于野生型受试者、没有肌肉无力疾病的另一受试者、在受
试者没有这种肌肉无力疾病的时间点时的同一受试者、或受试者应没有这种肌肉无力疾病
的同一受试者中的浓度。这种“升高的浓度”是指本文所述的受试者(包括任何细胞、组织、
器官或受试者的一部分)内升高的浓度。在一个实施方案中，这种“升高的浓度”包含受试者
血清中升高的浓度。

[0051] 如本文所用的术语“Bayley婴幼儿发育量表，第3版”或“BSID-III”是指用于评估患者的运动(精细和粗大)、语言(接受和表达)和认知发展的标准化测量系列。参见Bayley,
(2006).Bayleyscales ofinfant and toddler development:administration
manual.San Antonio,TX:Harcourt Assessment，据此全文以引用方式并入。BSID-III测量
包括待向患者施用的一系列发育游戏任务。将成功完成项目的原始评分转换为量表评分。
然后将量表评分用于确定与健康的、年龄调整的患者相比的患者表现。BSID-III还可包括
由父母/监护人完成的社交-情绪适应性行为问卷，以建立患者的适应性行为范围。例如，用
于确定BSID-III评分(例如，BSID-III粗大运动功能评分)的测量可包括握捉、感知-运动整
合、运动计划和速度、视觉跟踪、伸展、对象抓取、对象操纵、功能手技能、对触觉信息的反
应、肢体和躯干的运动、静态定位、动态运动、平衡和运动计划。然后将这些患者测量结果转
换成范围从0至14的BSID-III量表评分(例如，BSID-III粗大运动功能量表评分)，其中约7
至约13的评分被认为是健康患者的正常范围。

[0052] 如本文所用，术语“骨靶向部分”是指长度为1至50个氨基酸残基的氨基酸序列，其对骨基质具有足够的亲和力，使得骨靶向部分单独地对约10-6M至约10-15M(例如，10-7M、10-
8 -9 -10 -11 -12 -13 -14 -15
M、10 M、10 M、10 M、10 M、10 M、10 M或10 M)的骨基质具有体内结合亲和力。

[0053] 如本文所用，术语“布鲁茵因克斯-欧西瑞斯运动能力测试第2版”或“BOT-2”是指例如从约4至约21岁的患者的粗大和精细运动表现的第二版标准化测试。参见Bruininks,
R.H.(2005).Bruininks-Oseretsky Test of Motor Proficiency,(BOT-2).Minneapolis,
MN:Pearson Assessment，据此全文以引用方式并入。单独施用BOT-2以评估一系列患者的
粗大和精细运动技能。特别地，BOT-2可用于评估患有HPP的患者的身体损伤和移动性限制。
BOT-2在以下方面提供复合BOT-2评分：强度、跑步速度和敏捷性、精细运动精确度、精细运
动整合、手灵巧性、双侧协调、平衡和上肢协调。例如，可通过使患者进行仰卧起坐、V型仰卧起坐、立定跳远、坐卧和俯卧撑来确定BOT-2强度评分。可通过使患者跨越平衡木或进行穿
梭跑步、双腿侧跳或单腿侧跳来确定跑步速度和敏捷性评分。BOT-2强度和BOT-2跑步速度
和敏捷性评分两者均在0至25范围内，其中约10至20的评分被认为代表健康患者。

[0054] 如本文所用，术语“儿童健康评估问卷”或“CHAQ”是指用于评估1至19岁患者(诸如HPP患者)的健康状况(例如，进行日常生活活动(ADL)和疼痛发生的能力)的问卷。关于CHAQ
指数的描述，参见Bruce&Fries(J.Rheumatol.30(1):167-178,2003)，据此全文以引用方式
并入。CHAQ可通过面谈或自我报告施用于大于8岁的儿童。CHAQ包括八个子量表，用于穿衣/
梳理、起立、进食、行走、卫生、伸展、抓握和活动。每个类别中的评分范围为0至3，其中评分为0表示没有任何困难；评分为1表示有一定难度；评分为2表示难度很大；以及评分为3表示
患者无法进行活动。CHAQ指数还可用于确定疼痛的存在和严重程度。

[0055] “细胞外结构域”意指天然蛋白质(例如碱性磷酸酶)的任何功能性细胞外部分。特别地，细胞外结构域缺乏信号肽。

[0056] “Fc”意指免疫球蛋白(例如IgG-1、IgG-2、IgG-3、IgG-3或IgG-4)的片段可结晶区，包括免疫球蛋白重链的CH2和CH3结构域。Fc还可包括连接Fab和Fc区的铰链区的任何部分。
Fc可以是任何哺乳动物，包括人的，并且可以是翻译后修饰的(例如，通过糖基化)。在非限
制性实例中，Fc可以是具有SEQ ID NO:20的氨基酸序列的人IgG-1的片段可结晶区。

[0057] “片段”意指多肽或核酸分子的一部分，其优选地含有参考核酸分子或多肽的整个长度的至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、
97％、98％、99％或更多。片段可含有例如10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、
80、85、90、95、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、200、210、220、230、240、250、
260、270、280、290、300、400、500、600、700或更多个氨基酸残基，直至多肽的整个长度。示例性sALP片段具有ALP(例如，SEQ ID NO:2-6)的氨基酸残基18-498、18-499、18-500、18-501、
18-502、18-503、18-504、18-505、18-506、18-507、18-508、18-509、18-510、18-511或18-
512，并且可包括另外的C-末端和/或N-末端部分。

[0058] 如本文中可互换使用的术语“手持式测力法”和“HHD”是指测量受试者(特别是具有或易患肌肉无力疾病的受试者)的抓握和肌肉强度的方法。测力计可用于评估受试者(例
如，患有或易患肌肉无力疾病的受试者)的抓握强度、膝屈曲、膝伸展、髋屈曲、髋伸展和髋
外展。例如，可使用例如MICROFET2TM测力计测量患有或易患肌肉无力疾病的受试者的膝屈
曲和伸展以及髋屈曲、伸展和外展，同时可使用例如Jamar Grip测力计测量受试者的抓握
强度。特别地，管理员使测力计保持静止，并且受试者对测力计施加最大的力。峰值力数据
以磅为单位收集，然后转换为牛顿(N)。然后使用以N米为单位的肢体长度计算扭矩值。然后
可将扭矩值与例如约相同年龄、相同性别和/或相同身高的正常受试者的值进行比较，并且
表示为百分比值以生成受试者的HHD值。

[0059] 如本文所用，术语“低磷酸酯酶症”或“HPP”是指由例如ALPL(碱性磷酸酶，肝/骨/肾)基因中的一种或多种功能缺失突变引起的罕见的、可遗传性骨骼病症，所述ALPL基因编
码组织非特异性碱性磷酸酶(TNALP)。HPP可进一步表征为婴儿HPP、儿童HPP、围产期HPP(例
如，良性围产期HPP或致死性围产期HPP)或牙齿型HPP。

[0060] “初治患者”或“初治受试者”意指患有本文所述的肌肉无力疾病的患者或受试者，其从未接受过用碱性磷酸酶或具有碱性磷酸酶活性的多肽(诸如sALP(例如，TNALP，例如
SEQ ID NO:1的sALP多肽或与SEQ ID NO:1的序列具有至少95％序列同一性的多肽变体，例
如，阿司弗泰斯阿尔法))进行的治疗。

[0061] 如本文所用的“疼痛”是指由本文所述的肌肉无力疾病引起的身体痛苦或不适，诸如肌肉疼痛。例如，疼痛的症状可包括例如酸痛、紧绷或僵硬。疼痛的严重程度可因患者而
异(例如，慢性疼痛或急性疼痛)。特别地，慢性疼痛是指持续超过三至六个月的疼痛或延长
超过预期愈合期的疼痛。相反，急性疼痛是指通常持续不到三至六个月的疼痛。如本文所
述，治疗组合物(例如，包括sALP，诸如阿司弗泰斯阿尔法)可以足以减轻或至少部分地减轻
疼痛(例如，不适、酸痛、紧绷或僵硬)及其并发症(例如疲劳、失眠、免疫系统减弱、抑郁、焦虑、压力、烦躁或残疾)症状的量向患有疼痛(例如，肌肉疼痛)的患者施用。

[0062] 如本文所述，术语“肽”、“多肽”和“蛋白质”可互换使用，并且是指两个或更多个天然或非天然氨基酸残基的任何链，无论翻译后修饰(例如糖基化或磷酸化)如何，构成天然存在的或非天然存在的多肽或肽的全部或部分。

[0063] “药学上可接受的载体”或“药学上可接受的赋形剂”分别意指至少一种载体或赋形剂，其对于治疗的患者是生理学上可接受的，同时保持与其一起施用的化合物的治疗特
性。一种示例性药学上可接受的载体物质是生理盐水。例如，药学上可接受的载体可包括氯
化钠(例如，150mM 氯化钠)和磷酸钠(例如，25mM磷酸钠)。其他生理学上可接受的载体及其
制剂是本领域技术人员已知的，并且描述于例如Remington’s Pharmaceutical Sciences
(第20版)，A.Gennaro,Ed.,2000,Lippincott,Williams&Wilkins,Philadelphia,PA中。

[0064] “药物组合物”意指含有如本文所述的多肽或核酸分子的组合物，其与至少一种药学上可接受的赋形剂、稀释剂或载体一起配制。作为治疗或预防患者疾病或事件的治疗方
案的一部分，药物组合物可在政府管理机构的批准下制造或销售。药物组合物可被配制成
例如以单位剂型，例如用于皮下施用、静脉内施用(例如，作为无颗粒栓剂的无菌溶液和适
于静脉内使用的溶剂系统)、用于口服施用(例如片剂、胶囊、囊片、胶囊锭或糖浆)，或本文
所述的任何其他制剂。在一个实施方案中，本公开的药物组合物是皮下施用的或被配制用
于皮下施用。

[0065] 如本文所用，术语“身体损伤”是指生理状况，诸如本文所述的骨无力和肌肉无力疾病，所述疾病可能限制或消除患者的例如行走、功能耐力和进行日常生活活动(ADL)的能
力。特别地，身体损伤可能限制或消除患者进行ADL的能力，ADL是健康患者无需辅助每天进
行的常规活动，诸如功能活动或转移(例如，行走)、洗澡和淋浴、穿衣、自我喂养以及个人卫
生和梳理。如本文所述，治疗组合物(例如，包括sALP，诸如阿司弗泰斯阿尔法的组合物)可
向患者施用，以降低与肌肉无力相关的身体损伤的严重程度和/或频率。

[0066] 如本文所用，术语“儿科结果数据收集工具”或“PODCI”是指用于评估19岁以下患者，特别是患有慢性健康病症的患者，诸如HPP患者的总体健康状况、疼痛发生率和进行ADL
的能力的问卷。关于PODCI的描述，参见Plint等(J.Pediatr.Orthop.23(6):788-790,
2003)，据此全文以引用方式并入。问卷可由患者或由了解患者病状的患者的父母/监护人
完成。由PODCI生成的八个量表包括以下：1)上肢和身体功能量表，用于衡量在进行日常个
人护理和学生活动中所遇到的困难；2)转移和基本移动性量表，用于衡量在日常活动中进
行常规运动和运动活动所经历的困难；3)运动/身体功能量表，用于衡量参加更积极的活动
或运动时所遇到的困难或限制；4)疼痛/舒适度量表，用于衡量过去一周所经历的疼痛程
度；5)治疗期望量表，用于衡量治疗的长期预期；6)幸福量表，用于衡量对个人外表以及与
同龄朋友和其他人的相似感的总体满意度；7)对症状的满意度量表，用于衡量患者对应是
终生状态的当前限制的接受程度；以及8)全局功能量表，其是从以上列出的前四个量表计
算的一般组合量表。标准化评分由PODCI中的一系列问题生成，并且转换为0至100量表，其
中0表示显著残疾且100表示较少残疾。

[0067] 如本文所用，术语“Peabody发育运动量表，第2版”或“PDMS-2”是指幼儿期运动发育计划，其提供从出生到整个儿童期(例如婴儿和儿童)对患者的粗大和精细运动技能的评
估。关于PDMS-2量表的描述，参见van Hartingsveldt等(Occup.Ther.Int.12(1):1-13,
2005)，据此全文以引用方式并入。PDMS-2由测量早期发育的相关运动能力的六个子测试构
成。六个子测试包括以下：1)运动子测试，用于测量患者从一个地方移动到另一个地方的能
力(测量包括爬行、行走、跑步、跳跃和向前跳跃)；2)反射子测试，用于测量患者自动对环境
事件做出反应的能力；3)静止子测试，用于测量患者在重心内维持他或她的身体控制并保
持平衡的能力；4)对象操纵子测试，用于测量患者操纵对象的能力，诸如捕捉、投掷和踢球；
5)抓取子测试，用于测量患者使用他或她的手的能力，诸如用一只手握住对象的能力和涉
及双手手指的受控使用的动作；以及6)视觉-运动整合子测试，用于测量患者使用他或她的
视觉感知技能进行复杂的眼-手协调任务的能力，诸如到达和抓握对象，用块构建和复制设
计。将每个子测试的PDMS-2测量转换成PDMS-2评分，诸如范围从0至13的PDMS-2运动标准评
分，其中健康患者的范围是从约7至约13。

[0068] 术语“sALP”、“可溶性碱性磷酸酶”和“碱性磷酸酶的细胞外结构域”可互换使用，并且是指可溶性、非膜结合的碱性磷酸酶或结构域、生物活性片段或其生物活性变体。sALP包括，例如，缺乏C-末端糖脂锚的碱性磷酸酶(GPI信号序列，例如，包括人TNALP的氨基酸残
基18-502或由其组成的多肽(SEQ ID NO:2、3、4、5或6))。特别地，TNALP可包括例如包括SEQ ID NO:1的氨基酸残基1-485或由其组成的多肽，诸如阿司弗泰斯阿尔法，或与SEQ ID NO:1
的氨基酸残基1-485具有至少95％序列同一性的多肽变体。sALP还包括，例如，人TNALP的哺
乳动物直向同源物，诸如恒河猴TNALP(SEQ ID NO:7)、大鼠TNALP(SEQ ID NO:8)、犬TNALP
(SEQ ID NO:9)、猪TNALP(SEQ ID NO:10)、鼠TNALP(SEQ ID NO:11)、牛TNALP(SEQ ID NO:
12-14)或猫TNALP(SEQ ID NO:15)。sALP还包括可溶性、非膜结合形式的人PALP(例如，包括
SEQ ID NO:16或17的氨基酸残基18-502或由其组成的多肽)、GCALP(例如，包括SEQ ID NO:
18的氨基酸残基18-502或由其组成的多肽)和IALP(例如，包括SEQ ID NO:19的氨基酸残基
18-502或由其组成的多肽)，及其保留碱性磷酸酶活性(例如，水解PPi的能力)的另外变体
和类似物。特别地，sALP缺乏N-末端信号肽(例如，SEQ ID NO:2-6、8、11-13或15的aa 1-17，或者SEQ ID NO:7的aa 1-25)。

[0069] “sALP多肽”意指具有结构A-sALP-B的多肽，其中sALP如本文所定义，并且A和B各自不存在或是至少一个氨基酸的氨基酸序列。示例性sALP多肽具有包含SEQ ID NO:1的氨
基酸1-485或由其组成的氨基酸序列。其他示例性sALP多肽包括本文所述的任何sALP融合
多肽(例如SEQ ID NO:1的sALP融合多肽或与SEQ ID NO:1的序列具有至少95％序列同一性
的多肽变体，例如，阿司弗泰斯阿尔法)。

[0070] “信号肽”意指多肽的N-末端处的短肽(5-30个氨基酸长)，其朝向分泌途径(例如，细胞外空间)指导多肽。信号肽通常在多肽的分泌期间被裂解。信号序列可将多肽导向细胞
内区室或细胞器，例如高尔基体。信号序列可通过同源性或生物活性鉴定为具有将多肽靶
向细胞特定区域的已知功能的肽。本领域普通技术人员可通过使用容易获得的软件(例如，
遗传学计算机小组的序列分析软件包，University of Wisconsin Biotechnology
Center,1710University Avenue,Madison,Wis.53705、BLAST或PILEUP/PRETTYBOX程序)鉴
定信号肽。信号肽可以是例如与SEQ ID NO:2-6的氨基酸残基1-17或SEQ ID NO:7的氨基酸
残基1-25基本相同的信号肽。

[0071] 如本文所用，当多肽或核酸序列被称为与参考序列具有“至少X％序列同一性”时，其中“X”是实数，其意指当序列最佳比对时，多肽或核酸中的至少X％的氨基酸残基或核苷
酸与参考序列的那些氨基酸残基或核苷酸相同。可以本领域技术范围内的各种方式确定序
列的最佳比对，例如，Smith Waterman比对算法(Smith等，J.Mol.Biol.147:195-7,1981)和
BLAST(Basic Local Alignment Search Tool；Altschul等，J.Mol.Biol.215:403-10,
1990)。这些和其他比对算法可使用公共可用的计算机软件访问，诸如并入GeneMatcher
Plus(Schwarz和Dayhoff,Atlas ofProtein Sequence and Structure,Dayhoff,M.O.编
辑，第353-358页，1979)中的“Best Fit”(Smith和Waterman,Advances in Applied
Mathematics,482-489,1981)、BLAST、BLAST-2、BLAST-P、BLAST-N、BLAST-X、WU-BLAST-2、
ALIGN、ALIGN-2、CLUSTAL、Megalign(DNASTAR)，或其他用于比对的软件/硬件。此外，本领域技术人员可确定适于测量比对的参数，包括为在所比较序列的长度上实现最佳对准所需的
任何算法。

[0072] 术语“患者”和“受试者”可互换使用，并且是指哺乳动物，包括但不限于人或非人哺乳动物，诸如牛、马、犬、绵羊或猫。

[0073] “治疗有效量”意指本文所述的多肽或核酸分子的量足以显著改善、治疗、预防、延迟、抑制或阻止至少一种HPP症状。本文所述组合物的治疗有效量可取决于所治疗病症的严
重程度以及患者的病状、体重和一般状态，并且可由普通技术人员在考虑此类因素的情况
下确定。治疗有效量的本文所述组合物可在一段时间内以单剂量或多剂量向患者施用。

[0074] “治疗(treating)”、“治疗(treat)”或“治疗(treatment)”意指例如通过施用药物组合物，旨在(例如，在HPP患者中)治愈、改善、稳定、降低肌肉无力疾病的可能性或对其进行预防的患者医疗管理，和/或表现出或可能具有肌肉无力疾病的患者(例如，在HPP患者
中)的管理。

[0075] 此术语包括积极治疗，即治疗直接具体针对疾病、病理病状、病症或事件的改善或与其治愈相关；并且还包括病因治疗，即治疗针对去除相关疾病、病理病状、病症或事件的
病因。此外，此术语包括姑息治疗，即设计用于消除或改善至少一种症状而不是治愈疾病、
病理病状、病症或事件的治疗；症状治疗，即针对相关疾病、病理病状、病症或事件的全身症
状的治疗；预防性治疗，即例如，在尚未患病，但易患特定疾病、病理病状、病症或事件或以
其他方式具有所述特定疾病、病理病状、病症或事件风险的患者中针对最小化或者部分或
完全抑制相关疾病、病理病状、病症或事件的发展的治疗；以及支持性治疗，即用于补充针
对相关疾病、病理病状、病症或事件的改善的另一种特定疗法的治疗。

[0076] 如本文所用，“行走能力”是指患者(例如，患有本文所述的肌肉无力疾病的患者)依次抬起和放下每只脚的能力。行走能力可通过测试，特别地，六分钟行走测试(6MWT)来评
估。参见美国胸科学会声明：六分钟行走测试指南(American Journal of Respiratory
and Critical Care Medicine,166(1):111-7,2002)，据此全文以引用方式并入。

[0077] 根据以下详细说明、附图和权利要求书，本公开的其他特征和优点将显而易见。

附图说明

[0078] 图1是示出来自野生型(WT)小鼠或AKP2-/-小鼠的所有比目鱼肌肌肉纤维中肌球蛋白纤维类型的百分比的图。

[0079] 图2A-2D是从野生型(WT)小鼠或AKP2-/-小鼠解剖的比目鱼肌肌肉中纤维尺寸分布的图。示出了所有纤维(图2A)、I型纤维(图2B)、IIa型纤维(图2C)或IIb型纤维(图2D)的不
同最小尺寸(μm2)的纤维百分比。

[0080] 图3A-3D是来自野生型(WT)小鼠或AKP2-/-小鼠的比目鱼肌肌肉的收缩特性的图。在雄性和雌性小鼠两者中比较肌肉质量(图3A)、强度(图3B)、力频率(图3C)和疲劳特征(图
3D)。

[0081] 图4A-4D是来自野生型(WT)小鼠或AKP2-/-小鼠的趾长伸肌(EDL)肌肉的收缩特性的图。在雄性和雌性小鼠两者中比较肌肉质量(图4A)、强度(图4B)、力频率(图4C)和疲劳特
征(图4D)。对于疲劳和力频率：每组n＝3。对于容量和特定力：每组n＝6。

[0082] 图5A-5B是来自野生型(WT)小鼠或AKP2-/-小鼠的解剖的比目鱼肌(图5A)和趾长伸肌(EDL)(图5B)肌肉与PPi浓度相关的收缩特性的图。

[0083] 图6是野生型(WT)小鼠、在第35天后接受连续阿司弗泰斯阿尔法(Tx-Tx)治疗的AKP2-/-小鼠，或在第35天后停止阿司弗泰斯阿尔法(Tx-V)治疗的AKP2-/-小鼠的前肢或后肢
的抓握强度图。

具体实施方式

[0084] 据报道，肌肉无力是HPP的几种症状之一(Seshia等，1990Archives of Disease in Childhood 65:130-131)。除HPP之外，其他疾病或病症也可能导致肌肉无力。例如，镁短
缺导致焦磷酸钙沉积疾病(CPPD或CPDD)患者的肌肉无力(Hahn等，2012BMC
Gastroenterology 12-19)。一些肌肉无力疾病或病症，诸如HPP、CPPD、家族性低磷酸盐血
症(诸如常染色体显性低磷酸盐血症性佝偻病(ADHR)、常染色体隐性低磷酸盐血症性佝偻
病、X连锁低磷酸盐血症性佝偻病、X连锁低磷酸盐血症(XLH)等)，在患有疾病或病症的受试
者中具有升高的焦磷酸盐(PPi)浓度的特征性特征。在HPP中，升高的PPi浓度归因于编码碱
性磷酸酶的组织非特异性同工酶(TNALP；又称肝/骨/肾型ALP)的基因ALPL中的功能缺失突
变，所述同工酶是用于底物诸如PPi、磷酸乙醇胺(PEA)和5'-磷酸吡哆醛(PLP)的酶。在CPPD
中，缺乏作为各种磷酸酶的辅因子的Mg导致更高量的PPi，PPi是形成CPPD晶体的必需前体。
焦磷酸钙的沉积可进一步导致慢性炎症性关节炎、低磷酸酯酶症、低血镁症和甲状旁腺功
能亢进伴软骨钙质沉着症以及“假性痛风”的急性发作。

[0085] 本公开教导了在其特征在于具有以下中的一种或多种的受试者中治疗肌肉无力疾病的方法：升高的PPi浓度、降低的碱性磷酸酶浓度、例如小于10的平均BOT-2强度评分、
例如小于5的平均BOT-2跑步速度和敏捷性评分、例如大于约0.8的平均CHAQ指数评分、或例
如小于约40的平均PODCI评分、例如小于预测6MWT值(例如，其中预测6MWT值是年龄匹配和/
或性别匹配的正常受试者的6MWT值)的约80％的平均6MWT、例如小于5的肌肉强度等级，和/
或例如小于预测HHD值(例如，其中预测HHD值是年龄匹配和/或性别匹配的正常受试者的
HHD值)的约50％的平均HHD值(例如，平均HHD肌肉或抓握强度值)。特别地，受试者已被鉴定
为患有或易患肌肉无力。

[0086] 例如，公开了鉴定患有或易患肌肉无力疾病的受试者(例如，人)的方法，以便用具有碱性磷酸酶活性的重组多肽(诸如TNALP，例如SEQ ID NO:1的sALP多肽或与SEQ ID NO:1
的序列具有至少95％序列同一性的多肽变体，例如，阿司弗泰斯阿尔法)进行治疗，所述患
者的特征在于具有升高的PPi浓度、降低的ALP浓度、例如小于10的平均BOT-2强度评分、例
如小于5的平均BOT-2跑步速度和敏捷性评分、例如大于约0.8的平均CHAQ指数评分、例如小
于约40的平均PODCI评分、例如小于预测6MWT值的约80％的平均6MWT、例如小于5的肌肉强
度等级，和/或例如小于预测HHD值的约80％的平均HHD值(例如，平均HHD肌肉或抓握强度
值)。例如，来自婴儿或儿童(例如，小于约12岁的受试者)的样品(例如，血浆样品)中升高的
PPi浓度可为约5.71μM或更大，来自青少年(例如，约13至约18岁的受试者)的样品(例如，血
浆样品)中升高的PPi浓度可为约4.78μM或更大；以及来自成人(例如，大于约18岁的受试
者)的样品(例如，血浆样品)中升高的PPi浓度可为约5.82μM或更大。特别地，来自受试者的
样品(例如，血浆样品)中的降低的ALP浓度对于0至14日龄的受试者可为例如约90U/L或更
低；对于15日龄至小于1岁的受试者可为约134U/L或更低；对于约1岁至小于10岁的受试者
可为约156U/L或更低；对于约10岁至小于约13岁的受试者可为约141U/L或更低；对于约13
岁至小于约15岁的女性受试者可为约62U/L或更低；对于约13岁至小于约15岁的男性受试
者可为约127U/L或更低；对于约15岁至小于约17岁的女性受试者可为约54U/L或更低；对于
对于约15岁至小于约17岁的男性受试者可为约89U/L或更低；对于约17岁或更老的女性受
试者可为约48U/L或更低；或者对于约17岁或更老的男性受试者可为约59U/L或更低。

[0087] 本公开提供了一种在患有或易患肌肉无力疾病的受试者中治疗或改善肌肉无力的方法，其包括向所述受试者施用治疗有效量的至少一种具有碱性磷酸酶活性的重组多
肽。特别地，受试者已被鉴定为患有或易患肌肉无力。

[0088] 本公开还提供了一种鉴定患有或易患肌肉无力疾病的受试者的亚群的方法，其中所述亚群中的受试者具有升高的PPi浓度、降低的碱性磷酸酶浓度，和/或减小的抓握强度
或肌肉强度(例如，如使用BOT-2、6MWT、CHAQ、PODCI、肌肉强度等级和/或HHD评估)。

[0089] 还描述了用于以下的方法：1)鉴定患有或易患肌肉无力疾病的受试者的亚群，其中所述亚群中的受试者具有升高的PPi浓度、降低的ALP浓度，和/或减小的抓握强度或肌肉
强度；和2)然后在所述亚群中的受试者中治疗或改善肌肉无力疾病的至少一种症状。

[0090] 还描述了鉴定患有或易患肌肉无力疾病的受试者的亚群的方法，所述受试者的特征在于升高的PPi浓度、降低的ALP浓度，和/或减小的抓握强度或肌肉强度。

[0091] 无论是否先前已被诊断为低磷酸酯酶症(HPP)、焦磷酸钙沉积疾病(CPPD)或家族性低磷酸盐血症(诸如常染色体显性低磷酸盐血症性佝偻病(ADHR)、常染色体隐性低磷酸
盐血症性佝偻病、X连锁低磷酸盐血症性佝偻病、X连锁低磷酸盐血症(XLH)等)，受试者的亚
群均可被鉴定。例如，基于此类受试者中升高的PPi浓度来鉴定亚群。PPi浓度升高的原因包
括例如，调节产生、降解的信号分子中的缺陷，或编码此类信号分子的基因中的突变，或影
响PPi稳定性的其他方式。例如，信号分子的缺陷或突变可能导致PPi的过表达或者PPi的降
解或水解减少。HPP患者具有缺陷或缺失的组织非特异性碱性磷酸酶，其可水解PPi。因此，
与HPP类似，在归因于碱性磷酸酶缺陷的其他疾病中，PPi浓度可能升高。信号分子中的缺陷
还包括辅因子或促进信号分子功能的其他分子中的缺陷。例如，在CPPD中，缺乏作为各种磷
酸酶的辅因子的镁，导致PPi水平升高。

[0092] 本文描述了用于鉴定受试者亚群的方法，所述受试者表现出肌肉无力疾病相关症状，或者具有发展此类肌肉无力疾病相关症状的风险。鉴定的群体可包括先前被鉴定为患
有此类肌肉无力疾病或在没有先前诊断的情况下无症状的受试者。本公开中的肌肉无力疾
病包括例如，HPP或HPP相关疾病、CPPD或CPPD相关疾病、家族性低磷酸盐血症(诸如常染色
体显性低磷酸盐血症性佝偻病(ADHR)、常染色体隐性低磷酸盐血症性佝偻病、X连锁低磷酸
盐血症性佝偻病、X连锁低磷酸盐血症(XLH)等)，或具有升高的PPi的任何其他肌肉无力疾
病。用于鉴定受试者亚群的方法包括，例如，在这样的受试者中检测升高的无机焦磷酸盐
(PPi)浓度。

[0093] 靶向肌肉无力疾病

[0094] 本文提供了用于治疗或改善患有或易患肌肉无力疾病的受试者的至少一种症状的方法。本文所述的肌肉无力疾病、肌病或肌无力可包括引起、归因于肌肉无力的至少一种
症状，或与其相关的任何疾病或病症。术语“肌肉无力”、“肌病”、“肌无力”或本公开中的其他类似表达是指与没有这种病状的其他受试者或在具有这种病状之前的时间点处的同一
受试者相比，与肌肉功能受损状态相关的病状，诸如肌肉强度的缺乏或缺陷。肌肉无力可分
为具有真实或感知肌肉无力的病状。真实的肌肉无力可包括其中由肌肉施加的力小于预期
的病状。例如，真实的肌肉无力包括各种骨骼肌疾病，包括肌肉萎缩症和炎症性肌病。示例
性疾病或病症包括神经肌肉接头病症，诸如重症肌无力。肌肉无力还可能由肌肉细胞内低
水平的钾和其他电解质引起，其中由肌肉施加的力小于预期。感知肌肉无力(或非神经肌肉
无力)描述了一种病状，其中受试者感到需要比正常人(即，与没有这种病状的其他受试者
或在具有这种病状之前的时间点处的同一受试者相比)更多的努力来施加一定量的力但实
际肌肉强度是正常的，例如慢性疲劳综合征。

[0095] 在一些情况下，诸如重症肌无力，肌肉强度在休息时是正常的，但在肌肉经受锻炼后出现真实的虚弱。对于慢性疲劳综合征的一些病例也是如此，其中已测量了具有延迟恢
复时间的客观的运动后肌肉无力并且是一些公开定义的特征。这些疾病或病症也包括在本
公开的“肌肉无力疾病”中。

[0096] 肌肉无力还可基于其所影响的肌肉的位置被分类为“近端”或“远端”。近端肌肉无力影响最接近身体中线的肌肉，而远端肌肉无力影响进一步在四肢上的肌肉。在库欣综合
征和甲状腺功能亢进症中可看到近端肌肉无力。

[0097] 在实践中存在其他类别的肌肉无力。例如，神经肌肉疲劳可根据其原因分类为“中枢”或“外周”。中枢肌肉疲劳表现为整体的能量消耗感，而外周肌肉疲劳表现为局部、肌肉
特异性无法工作

[0098] 基于以下示例性标准，肌肉无力的严重程度可分类为不同的“等级”：

[0099] 等级0：没有收缩或肌肉运动。

[0100] 等级1：收缩痕迹，但在关节处没有运动。

[0101] 等级2：消除了重力作用下关节处的运动。

[0102] 等级3：抵抗重力的运动，但不抵抗附加阻力。

[0103] 等级4：抵抗外部阻力的运动，其强度小于平时。

[0104] 等级5：正常强度。

[0105] 低磷酸酯酶症(HPP)和肌肉无力

[0106] 低磷酸酯酶症(HPP)是由组织非特异性碱性磷酸酶(TNSALP)基因中的功能缺失突变引起的罕见遗传性代谢紊乱。生化标志是血清中低于正常的ALP活性(低磷酸酯酶症)，其
导致以下三种磷酸化合物底物的血液和/或尿液水平升高：无机焦磷酸盐(PPi)、磷酸乙醇
胺(PEA)和5'-磷酸吡哆醛(PLP)。TNSALP缺乏可能导致一系列后遗症，包括过早失去乳牙、
佝偻病、生长不良、肌肉无力、身体功能受损和疼痛。几十年前，已发现了与HPP相关的肌肉
无力或肌病。例如，Seshia等(1990)报道，三名患有HPP的儿童还患有发生在病症早期的肌
肉疼痛、僵硬和近端下肢肌肉无力的症状(其中两例仍存在)。有趣的是，Seshia等(1990)发
现这些症状“无法通过骨骼损伤来解释”，而是“与骨软化性肌病相似”。HPP的其他体征和症状可包括：肌肉或关节的长期疼痛、关节炎(成人和儿童)、由关节内钙沉积引起的假性痛
风，在没有辅助设备诸如拐杖、助行器或轮椅等的情况下无法行走。最近，据报道，阿司弗泰
斯阿尔法，一种重组骨靶向的人TNASLP(即sALP-Fc-D10)降低HPP患者的无机焦磷酸盐(PPi)
浓度升高并且改善骨骼矿化、生长和身体功能。通过手持式测力法(HHD)和布鲁茵因克斯-
欧西瑞斯运动能力测试第2版(BOT-2)的个体子测试(包括强度和跑步速度/敏捷性量表评
分)测量，患有HPP的5-12岁儿童使用阿司弗泰斯阿尔法治疗超过三年显示肌肉强度的改
善。结果，他们的肌肉的身体功能显著增加，这影响了进行日常生活活动的能力。

[0107] 阿司弗泰斯阿尔法可用于治疗，例如，围产期HPP、婴儿HPP、儿童HPP和牙齿型HPP。例如，患有儿童HPP(例如，患有HPP的约5岁至约12岁的儿童)或婴儿HPP(例如，约3岁或小于
3岁的婴儿)的患者可用sALP(诸如TNALP，例如SEQ ID NO:1的sALP多肽或与SEQ ID NO:1的
序列具有至少95％序列同一性的多肽，例如，阿司弗泰斯阿尔法)治疗持续至少一年的时间
(例如，至少五年、至少六年、至少七年、至少八年、至少九年、至少十年或超过十年(例如，患者的一生))。

[0108] 由于阿司弗泰斯阿尔法治疗显著改善了患者的骨矿化，因此不确定其对患者肌肉强度的影响是否仅仅是恢复的骨形成和随后的骨骼肌附着/生长恢复的结果或直接对患者
肌肉的治疗效果。如本文所述，我们已发现，阿司弗泰斯阿尔法对患者(例如，患有肌肉无力
疾病(诸如患有HPP的患者的肌肉无力)的患者)的肌肉具有治疗效果。

[0109] 焦磷酸钙沉积疾病(CPPD或CPDD)和肌肉无力

[0110] 焦磷酸钙沉积疾病(CPPD或CPDD)或焦磷酸钙二水合物晶体沉积疾病，是由关节(尤其是关节软骨和纤维软骨)内及其周围焦磷酸钙二水合物晶体沉积引起的代谢性关节
病。尽管CPPD经常是无症状的，其中仅观察到放射摄影变化(即，软骨钙质沉着症)，但可能
发生各种临床表现，包括急性(假性痛风)和慢性关节炎。晶体沉积物引起关节炎症，这可能
导致关节软骨分解。所述疾病可能采取一些不同的关节炎相关形式：骨关节炎、慢性类风湿
性关节炎(RA)样炎症性关节炎，或称为假性痛风的急性疼痛性炎症病状。假性痛风的名字
来自以下事实：其类似称为痛风的另一种急性疼痛性病状。主要差异在于炎症和损害中涉
及的晶体类型。CPPD可能涉及几乎任何关节，尽管膝盖、手腕和臀部最经常受到影响。这种
情况是继发性代谢性骨关节炎的最常见原因。患有CPPD的患者由于假性痛风的急性发作或
慢性关节病症状的疼痛可能经历显著的发病率。治疗症状性CPPD对于预防进一步的端器官
损害很重要，但其不能逆转关节疾病。

[0111] CPPD发展的确切机制仍不清楚。从衰老、遗传因素或两者来看，患者具有增加的三磷酸腺苷分解，从而导致关节中无机焦磷酸盐浓度增加。软骨基质的变化可能在促进焦磷
酸钙二水合物晶体沉积中起重要作用。已在患有CPPD的患者的软骨中观察到分解三磷酸的
酶(诸如核苷三磷酸焦磷酸水解酶)的过度活性。因此，无机焦磷酸盐可结合钙，从而导致软
骨和滑膜中的沉积。(参见Beutler等，1993Arthritis Rheum.36(5):704-715)。透明软骨最
常受影响，但也可能涉及纤维软骨，诸如膝盖的半月板软骨。(Pritzker等，1988J
Rheumatol.15(5):828-835)。

[0112] 其他疾病和肌肉无力

[0113] 与HPP和CPPD(或CPDD)类似，其他疾病或病症可包括肌肉无力的至少一种症状。其中，一些类型的肌肉无力疾病具有特征性升高的无机焦磷酸盐(PPi)浓度。这些具有升高的
PPi浓度的肌肉无力疾病也是本公开中用阿司弗泰斯阿尔法治疗的靶标。

[0114] 例如，家族性低磷酸盐血症(诸如常染色体显性低磷酸盐血症性佝偻病(ADHR)、常染色体隐性低磷酸盐血症性佝偻病、X连锁低磷酸盐血症性佝偻病、X连锁低磷酸盐血症
(XLH)等)通常具有肌肉无力表型。低磷酸盐血症或低磷酸盐血症性佝偻病是一种形式的佝
偻病，其特征在于低血清磷酸盐水平和对用紫外线辐射或维生素D摄入进行治疗的抗性。X
连锁低磷酸盐血症(XLH)是一种显性病症，并且占所有家族性低磷酸盐血症的超过80％。
XLH被认为是一种系统性病症，来自与X染色体上的内肽酶同源的磷酸调节基因(PHEX)的突
变。XLH患者展示出1,25-二羟基维生素D3的正常或低血清浓度，提示此维生素D代谢物的形
成不充分。其余20％的家族性低磷酸盐血症患者具有来自功能获得性常染色体隐性低磷酸
盐血症性佝偻病和具有高钙尿症的遗传性低磷酸盐血症性佝偻病的常染色体显性低磷酸
盐血症性佝偻病。

[0115] 治疗方法

[0116] 本文提供了用于治疗或改善患有或易患肌肉无力疾病的受试者、儿童、青少年或成人的至少一种症状的方法。这种治疗可包括施用碱性磷酸酶或具有碱性磷酸酶活性的多
肽，以降低这种受试者中升高的PPi浓度。例如，可溶性碱性磷酸酶(sALP，诸如TNALP，例如
SEQ ID NO:1的sALP多肽或与SEQ ID NO:1的序列具有至少95％序列同一性的多肽变体，例
如，阿司弗泰斯阿尔法)可在儿童、青少年或成人受试者的一系列年龄段内施用。

[0117] 在施用碱性磷酸酶或具有碱性磷酸酶活性的多肽(例如，sALP，诸如TNALP，例如SEQ ID NO:1的sALP多肽或与SEQ ID NO:1的序列具有至少95％序列同一性的多肽变体，例
如，阿司弗泰斯阿尔法)之前，受试者可被诊断患有肌肉无力疾病(诸如本文所述的HPP、
CPPD、家族性低磷酸盐血症等)。另外，患有或易患肌肉无力疾病的受试者可以是先前未接
受过用sALP(诸如TNALP，例如SEQ ID NO:1的sALP多肽或与SEQ ID NO:1的序列具有至少
95％序列同一性的多肽变体，例如，阿司弗泰斯阿尔法)治疗的初治受试者。

[0118] 所述方法涉及在一段时间内以单剂量或多剂量向患有或易患肌无力疾病的受试者施用碱性磷酸酶或具有碱性磷酸酶活性的多肽(例如，sALP，诸如TNALP，例如SEQ ID NO:
1的sALP多肽或与SEQ ID NO:1的序列具有至少95％序列同一性的多肽变体，例如，阿司弗
泰斯阿尔法)。特别地，sALP，诸如阿司弗泰斯阿尔法，可施用给先前确定具有升高的无机焦
磷酸盐(PPi)浓度或具有至少一个预定的肌肉无力的生物标志物/评分(诸如小于10的平均
BOT-2强度评分、小于5的平均BOT-2跑步速度和敏捷性评分、大于约0.8的平均CHAQ指数评
分、和/或小于约40的平均PODCI评分、小于预测6MWT值的约80％的平均6MWT、小于5的肌肉
强度等级，和/或例如小于预测HHD值的约80％的平均HHD值(例如，平均HHD肌肉或抓握强度
值))的受试者。例如，sALP可施用给先前确定具有对于婴儿和儿童(例如，小于约12岁的受
试者)而言，大于约5.71μM；对于青少年(例如，约13至约18岁的受试者)而言，大于约4.78μ
M；或对于成人(例如，大于约18岁的受试者)而言，大于约5.82μM的样品(例如，血浆样品)中
PPi浓度的受试者。在其他实施方案中，本文所述的肌肉无力疾病是由至少一种碱性磷酸酶
底物(例如PPi、PLP、PEA等)的浓度升高引起的。可替代地，在确定此类评分(例如，BOT-2强
度评分、BOT-2跑步速度和敏捷性评分、CHAQ指数评分、BSID-III量表评分、PDMS-2标准评
分、肌肉强度评分、6MWT值和/或HHD值)之前，碱性磷酸酶或具有碱性磷酸酶活性的多肽(例
如，sALP，诸如TNALP，例如SEQ ID NO:1的sALP多肽或与SEQ ID NO:1的序列具有至少95％
序列同一性的多肽变体，例如，阿司弗泰斯阿尔法)可施用给患有或易患肌肉无力疾病的受
试者，以允许例如增加ADL活动、减轻疼痛和/或改善运动发育。

[0119] 另外，患有或易患本文所述肌肉无力疾病的受试者的每个描述的评分(例如，BOT-2强度评分、BOT-2跑步速度和敏捷性评分、CHAQ指数评分、BSID-III量表评分、PDMS-2标准
评分、6MWT、12-POMA-G、改进的以绩效为导向的移动性评估(mPOMA-G，诸如Phillips等，
2015年Bone Abstracts 4:P136中所示的那个)或HHD值)可单独或以任何组合使用以评估
使用sALP(诸如TNALP，例如SEQ ID NO:1的sALP多肽或与SEQ ID NO:1的序列具有至少95％
序列同一性的多肽变体，例如，阿司弗泰斯阿尔法)的治疗功效，其中相对于某一测试评分
的改善表明sALP对于治疗这种肌肉无力疾病是有效的。

[0120] 例如，当向患有或易患肌肉无力疾病的受试者施用碱性磷酸酶或具有碱性磷酸酶活性的多肽(例如，sALP，诸如TNALP，例如SEQ ID NO:1的sALP多肽或与SEQ ID NO:1的序列
具有至少95％序列同一性的多肽变体，例如，阿司弗泰斯阿尔法)导致BOT-2强度评分平均
增加至约10或大于约10时，其中受试者先前具有小于约10的平均BOT-2强度评分，则碱性磷
酸酶或具有碱性磷酸酶活性的多肽治疗在治疗例如与肌肉无力疾病相关的身体损伤时是
有效的。可替代地，当施用sALP未导致BOT-2强度评分平均增加至约10或大于约10时，可改
变碱性磷酸酶或具有碱性磷酸酶活性的多肽施用的剂量和/或频率，以便确定碱性磷酸酶
或具有碱性磷酸酶活性的多肽用于受试者的有效量。例如，sALP(诸如TNALP，例如SEQ ID
NO:1的sALP多肽或与SEQ ID NO:1的序列具有至少95％序列同一性的多肽变体，例如，阿司
弗泰斯阿尔法)的剂量可从例如约3mg/kg/周增加至约6mg/kg/周或从约6mg/kg/周增加至
约9mg/kg/周。

[0121] 另外，当向患有或易患肌肉无力疾病的受试者施用碱性磷酸酶或具有碱性磷酸酶活性的多肽(例如，sALP，诸如TNALP，例如SEQ ID NO:1的sALP多肽或与SEQ ID NO:1的序列
具有至少95％序列同一性的多肽变体，例如，阿司弗泰斯阿尔法)导致一个或多个受试者的
肌肉强度等级分类的改善(例如，从先前的、较低肌肉强度等级改善至1、2、3、4或5的肌肉强
度等级)时，其中受试者先前具有小于约5的平均肌肉强度等级，则碱性磷酸酶或具有碱性
磷酸酶活性的多肽治疗在治疗例如与肌肉无力疾病相关的身体损伤时是有效的。可替代
地，当施用sALP未导致一个或多个受试者的肌肉强度等级分类从先前的、较低肌肉强度等
级得到改善时，可改变(例如，增加)碱性磷酸酶或具有碱性磷酸酶活性的多肽施用的剂量
和/或频率，以便确定碱性磷酸酶或具有碱性磷酸酶活性的多肽用于受试者的有效量。例
如，sALP(诸如TNALP，例如SEQ ID NO:1的sALP多肽或与SEQ ID NO:1的序列具有至少95％
序列同一性的多肽变体，例如，阿司弗泰斯阿尔法)的剂量可从例如约3mg/kg/周增加至约
6mg/kg/周或从约6mg/kg/周增加至约9mg/kg/周。

[0122] 用于诊断和/或治疗肌肉无力疾病的生物标志物/端点

[0123] 在优选的实施方案中，肌肉无力疾病(诸如HPP，包括例如，如本文所述的围产期HPP、婴儿HPP、儿童HPP和牙齿型低磷酸酯酶症、CPPD和家族性低磷酸盐血症)用碱性磷酸酶
或具有碱性磷酸酶活性的多肽(例如，sALP，诸如TNALP，例如SEQ ID NO:1的sALP多肽或与
SEQ ID NO:1的序列具有至少95％序列同一性的多肽变体，例如，阿司弗泰斯阿尔法)来治
疗。本文所述的方法还可用于诊断患有或易患肌肉无力疾病的受试者、将受试者鉴定为患
有或易患肌肉无力疾病的受试者特定亚群中的成员，或测试肌肉无力疾病的治疗效果。例
如，如果受试者显示某些特征性生物标志物，则此类受试者可被诊断为患有或易患肌肉无
力疾病。受试者可用碱性磷酸酶或具有碱性磷酸酶活性的多肽(例如，sALP，诸如TNALP，例
如SEQ ID NO:1的sALP多肽或与SEQ ID NO:1的序列具有至少95％序列同一性的多肽变体，
例如，阿司弗泰斯阿尔法)治疗，而治疗功效或效果可使用某些特征性生物标志物或端点进
行分析。此类生物标志物可包括例如受试者的血清、骨或肌肉组织或尿液中升高的无机焦
磷酸盐(PPi)浓度和/或减少的碱性磷酸酶(ALP)。在本文所述的用于肌肉无力治疗的方法
中可用的示例性端点可包括：(1)布鲁茵因克斯-欧西瑞斯运动能力测试第2版(BOT-2)，(2)
儿童健康评估问卷(CHAQ)，(3)儿科结果数据收集工具(PODCI)，(4)Bayley婴幼儿发育量
表，第3版(BSID-III)，(5)Peabody发育运动量表，第2版(PDMS-2)，(6)六分钟行走测试
(6MWT)，(7)肌肉强度等级，和(8)手持式测力法(HHD)，其在以下进一步详细描述。

[0124] 血浆无机焦磷酸盐(PPi)和碱性磷酸酶(ALP)浓度

[0125] 通过确定来自患者的样品(诸如血浆或尿液样品)中的无机焦磷酸盐(PPi)和/或碱性磷酸酶(ALP)浓度，可鉴定患有或易患肌肉无力疾病的受试者以便用碱性磷酸酶或具
有碱性磷酸酶活性的多肽(例如，sALP，诸如TNALP，例如SEQ ID NO:1的sALP多肽或与SEQ
ID NO:1的序列具有至少95％序列同一性的多肽变体，例如，阿司弗泰斯阿尔法)治疗。本领
域技术人员已知的任何方法可用于量化血浆样品或可替代地尿液样品中的PPi和/或ALP浓
度，如Whyte等，1995(J.Clin.Invest.95(4):1440–1445)中详细描述，据此全文以引用方式
并入。量化血浆或尿液样品中PPi浓度的方法还描述于Cheung等，1977(Anal.Biochem.83:
61-63)、Cook等，1978(Anal.Biochem.91:557-565)和Johnson等，1968(Anal.Biochem.26:
137-145)中，它们各自据此全文以引用方式并入。

[0126] 特别地，碱性磷酸酶或具有碱性磷酸酶活性的多肽(例如，sALP，诸如TNALP，例如SEQ ID NO:1的sALP多肽或与SEQ ID NO:1的序列具有至少95％序列同一性的多肽变体，例
如，阿司弗泰斯阿尔法)可施用给患有或易患肌肉无力疾病的受试者(例如，人)，其先前确
定具有高达约6μM的血浆PPi浓度(例如，约4.5μM、约5μM或约5.5μM或者约4.5μM至约6μM范围内的血浆PPi浓度)。例如，将碱性磷酸酶或具有碱性磷酸酶活性的多肽施用给例如，婴儿
或儿童(例如，小于约12岁的受试者)，其具有约5.71μM或更大的血浆PPi浓度；青少年(例
如，约13岁至约18岁的受试者)，其具有约4.78μM或更大的血浆PPi浓度；或成人(例如，大于
约18岁的受试者)，其具有约5.82μM或更大的血浆PPi浓度。另外，碱性磷酸酶或具有碱性磷
酸酶活性的多肽可施用给患有或易患肌肉无力疾病的受试者(例如，人)，其先前确定具有
例如对于0至14日龄的受试者约90U/L或更低；对于15日龄至小于1岁的受试者约134U/L或
更低；对于约1岁至小于10岁的受试者约156U/L或更低；对于约10岁至小于约13岁的受试者
约141U/L或更低；对于约13岁至小于约15岁的女性受试者约62U/L或更低；对于约13岁至小
于约15岁的男性受试者约127U/L或更低；对于约15岁至小于约17岁的女性受试者约54U/L
或更低；对于对于约15岁至小于约17岁的男性受试者约89U/L或更低；对于约17岁或更老的
女性受试者约48U/L或更低；或者对于约17岁或更老的男性受试者约59U/L或更低的血浆
ALP浓度。

[0127] 可将患有或易患肌肉无力疾病的受试者(例如，人)的血浆PPi浓度和/或血浆ALP浓度与正常受试者的血浆PPi浓度和/或血浆ALP进行比较，以确定在受试者中施用碱性磷
酸酶或具有碱性磷酸酶活性的多肽(例如，sALP，诸如TNALP，例如SEQ ID NO:1的sALP多肽
或与SEQ ID NO:1的序列具有至少95％序列同一性的多肽变体，例如，阿司弗泰斯阿尔法)
的治疗效果。特别地，碱性磷酸酶或具有碱性磷酸酶活性的多肽可施用至少一年(例如，至
少两年、至少三年、至少四年、至少五年、至少六年、至少七年、至少八年、至少九年、至少十年或长于十年，诸如患者的一生)的治疗期。可替代地，所述方法可包括在施用碱性磷酸酶
或具有碱性磷酸酶活性的多肽之前确定血浆PPi浓度和/或血浆ALP浓度，以评估用碱性磷
酸酶或具有碱性磷酸酶活性的多肽进行治疗的受试者中的效果。

[0128] 所述方法导致来自患有或易患肌肉无力疾病的受试者(例如，人)的样品(例如，血浆样品)中PPi浓度的减少和/或ALP浓度的增加。例如，用碱性磷酸酶或具有碱性磷酸酶活
性的多肽(例如，sALP，诸如TNALP，例如SEQ ID NO:1的sALP多肽或与SEQ ID NO:1的序列具
有至少95％序列同一性的多肽变体，例如，阿司弗泰斯阿尔法)进行治疗导致来自患者的样
品(例如，血浆样品)中的PPi浓度减少约1μM、约1.5μM、约2μM、约2.5μM或约3μM或25％或更大(例如30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％或超过60％)。因此，在施用碱性磷酸酶或具有碱性磷酸酶活性的多肽后，受试者表现出例如，约2μM至约5μM、约3μM至约5μM、约2μM至约4μM，或约2μM至约3μM的血浆PPi浓度。

[0129] 同样，相对于施用碱性磷酸酶或具有碱性磷酸酶活性的多肽之前的受试者，用碱性磷酸酶或具有碱性磷酸酶活性的多肽进行治疗导致来自患有或易患肌肉无力疾病的受
试者(例如，人)的样品(例如，血浆样品)中的ALP浓度增加30％、35％、40％、45％、50％、
55％、60％或超过60％。例如，施用碱性磷酸酶或具有碱性磷酸酶活性的多肽将来自受试者
的样品(例如，血浆样品)中的ALP浓度增加至例如对于0至14日龄的受试者为约273U/L或更
大；对于15日龄至小于1岁的受试者为约518U/L或更大；对于约1岁至小于10岁的受试者为
约369U/L或更大；对于约10岁至小于约13岁的受试者为约460U/L或更大；对于约13岁至小
于约15岁的女性受试者为约280U/L或更大；对于约13岁至小于约15岁的男性受试者可为约
517U/L或更大；对于约15岁至小于约17岁的女性受试者为约128U/L或更大；对于对于约15
岁至小于约17岁的男性受试者为约365U/L或更大；对于约17岁或更老的女性受试者可为约
95U/L或更大；或者对于约17岁或更老的男性受试者为约164U/L或更大。

[0130] 患有或易患肌肉无力疾病的受试者(例如，人)的血浆PPi减少和/或ALP浓度增加可在碱性磷酸酶或具有碱性磷酸酶活性的多肽(例如，sALP，诸如TNALP，例如SEQ ID NO:1
的sALP多肽或与SEQ ID NO:1的序列具有至少95％序列同一性的多肽变体，例如，阿司弗泰
斯阿尔法)的整个施用中维持。例如，血浆PPi浓度减少约25％并在用sALP治疗期间保持在
减少的血浆PPi浓度的±10％处，并且/或者血浆ALP浓度增加约50％并在用碱性磷酸酶或
具有碱性磷酸酶活性的多肽治疗期间保持在增加的血浆ALP浓度的±10％处。

[0131] 可替代地，当施用碱性磷酸酶或具有碱性磷酸酶活性的多肽(例如，sALP，诸如TNALP，例如SEQ ID NO:1的sALP多肽或与SEQ ID NO:1的序列具有至少95％序列同一性的
多肽变体，例如，阿司弗泰斯阿尔法)未导致来自患有或易患肌肉无力疾病的受试者(例如，
人)的血浆样品中的PPi浓度平均减少约25％或更大时，可改变sALP施用的剂量和/或频率，
以便确定sALP用于受试者的有效量。同样，当施用碱性磷酸酶或具有碱性磷酸酶活性的多
肽未导致来自受试者的血浆样品中的ALP浓度平均增加约50％或更大时，可改变碱性磷酸
酶或具有碱性磷酸酶活性的多肽施用的剂量和/或频率，以便确定碱性磷酸酶或具有碱性
磷酸酶活性的多肽用于受试者的有效量。例如，碱性磷酸酶或具有碱性磷酸酶活性的多肽
的剂量可从例如约2.1mg/kg/周或约3.5mg/kg/周增加至约6mg/kg/周或约9mg/kg/周。

[0132] 布鲁茵因克斯-欧西瑞斯运动能力测试第2版(BOT-2)

[0133] 示例性布鲁茵因克斯-欧西瑞斯运动能力测试第2版(BOT-2)描述于Bruininks,R.H.(2005).Bruininks-Oseretsky Test of Motor Proficiency,(BOT-2),Minneapolis,
MN:Pearson Assessment中，据此全文以引用方式并入。特别地，BOT-2可用于评估患有或易
患肌肉无力疾病(例如，HPP)的受试者中的身体损伤和移动性限制，以为受试者生成BOT-2
评分。

[0134] BOT-2包括一系列测试以评估受试者的身体损伤，这些测试可用例如包括测试的试剂盒进行。BOT-2在以下方面提供复合BOT-2评分：强度、跑步速度和敏捷性、精细运动精
确度、精细运动整合、手灵巧性、双侧协调、平衡和上肢协调。例如，患有或易患肌肉无力疾
病的受试者可进行仰卧起坐、V型仰卧起坐、立定跳远、坐卧和/或俯卧撑以确定BOT-2强度
评分；患有或易患肌肉无力疾病的受试者可跨越平衡木或进行穿梭跑步、双腿侧跳和/或单
腿侧跳以确定BOT-2跑步速度和敏捷性评分；患有或易患肌肉无力疾病的受试者可切出一
个圆圈和/或连接点以确定BOT-2精细运动精确度评分；患有或易患肌肉无力疾病的受试者
可复制一个星形和/或复制一个正方形以确定BOT-2精细运动整合评分；患有或易患肌肉无
力疾病的受试者可转移便士、分类卡和/或字符串块以确定手灵巧性评分；患有或易患肌肉
无力疾病的受试者可轻拍他或她的脚和手指和/或进行跳跃以确定BOT-2双侧协调评分；患
有或易患肌肉无力疾病的受试者可在一条线上向前行走和/或用一条腿站在平衡木上以确
定BOT-2平衡评分；以及患有或易患肌肉无力疾病的受试者可将球扔向目标和/或抓住被抛
球以确定BOT-2上肢协调评分。

[0135] 患有或易患肌肉无力疾病(例如，HPP)的受试者可在所述方面(强度、跑步速度和敏捷性、精细运动精确度、精细运动整合、手灵巧性、双侧协调、平衡和上肢协调)中的一个
或多个中进行测试，以生成指示受试者身体损伤的BOT-2评分。在每个BOT-2方面(强度、跑
步速度和敏捷性、精细运动精确度、精细运动整合、手灵巧性、双侧协调、平衡和上肢协调)
内，这样的受试者可进行一个或多个测试以确定受试者的BOT-2评分，例如，受试者可进行
仰卧起坐、V型仰卧起坐、立定跳远、坐卧和俯卧撑中的一个或多个以确定BOT-2强度评分。
因此，可仅进行一个测试(例如，一个选自由仰卧起坐、V型仰卧起坐、立定跳远、坐卧和俯卧
撑组成的组的测试)以确定患有或易患肌肉无力疾病(例如，HPP)的受试者的BOT-2评分(例
如，BOT-2强度评分)。

[0136] 可将患有或易患肌肉无力疾病(例如，HPP)的受试者的每个BOT-2评分(强度、跑步速度和敏捷性、精细运动精确度、精细运动整合、手灵巧性、双侧协调、平衡和上肢协调)与
没有肌肉无力疾病(例如，HPP)的受试者的BOT-2评分进行比较，以例如确定BOT-2评分的标
准偏差。可将患有或易患肌肉无力疾病(例如，HPP)的受试者的每个BOT-2评分(例如，强度、
跑步速度和敏捷性、精细运动精确度、精细运动整合、手灵巧性、双侧协调、平衡和上肢协
调)与患有或易患肌肉无力疾病(例如，HPP)的其他受试者的BOT-2评分进行比较，以例如确
定受试者的平均BOT-2评分。

[0137] BOT-2评分(例如，强度、跑步速度和敏捷性、精细运动精确度、精细运动整合、手灵巧性、双侧协调、平衡和上肢协调评分)范围为约0至等于或小于约25，其中约10至约20的评
分被认为代表健康受试者(例如，没有肌肉无力疾病(例如，HPP)的受试者)。具有小于约10
的平均BOT-2评分(例如，强度、跑步速度和敏捷性、精细运动精确度、精细运动整合、手灵巧
性、双侧协调、平衡和上肢协调评分)的受试者可用碱性磷酸酶或具有碱性磷酸酶活性的多
肽(例如，sALP，诸如TNALP，例如SEQ ID NO:1的sALP多肽或与SEQ ID NO:1的序列具有至少
95％序列同一性的多肽变体，例如，阿司弗泰斯阿尔法)来治疗。

[0138] 例如，BOT-2强度评分小于10(例如，约0、约1、约2、约3、约4、约5、约6、约7、约8、约9或约10)的患有或易患肌肉无力疾病的受试者可用sALP(诸如TNALP，例如SEQ ID NO:1的sALP多肽或与SEQ ID NO:1的序列具有至少95％序列同一性的多肽变体，例如，阿司弗泰斯
阿尔法)治疗一段时间，直至患者的一生。同样，然后BOT-2跑步速度和敏捷性评分小于10
(例如，约0、约1、约2、约3、约4、约5、约6、约7、约8、约9或约10)的患有或易患肌肉无力疾病的受试者可用sALP(诸如TNALP，例如SEQ ID NO:1的sALP多肽或与SEQ ID NO:1的序列具有
至少95％序列同一性的多肽变体，例如，阿司弗泰斯阿尔法)治疗一段时间，直至受试者的
一生。

[0139] 所述方法可导致改善患有或易患肌肉无力疾病(例如，HPP)的受试者的BOT-2评分(例如，强度、跑步速度和敏捷性、精细运动精确度、精细运动整合、手灵巧性、双侧协调、平衡和/或上肢协调评分)。例如，用碱性磷酸酶或具有碱性磷酸酶活性的多肽，诸如sALP(例
如TNALP，例如SEQ ID NO:1的sALP多肽或与SEQ ID NO:1的序列具有至少95％序列同一性
的多肽变体，例如，阿司弗泰斯阿尔法)治疗，诸如用sALP治疗一段时间，可导致BOT-2强度
评分平均增加至约10至约20(例如约10、约11、约12、约13、约14、约15、约16、约17、约18、约
19或约20)。另外，用sALP(诸如TNALP，例如SEQ ID NO:1的sALP多肽或与SEQ ID NO:1的序
列具有至少95％序列同一性的多肽变体，例如，阿司弗泰斯阿尔法)治疗可导致BOT-2跑步
速度和敏捷性评分平均增加至约5至约20(例如约5、约6、约7、约8、约9、约10、约11、约12、约
13、约14、约15、约16、约17、约18、约19或约20)。

[0140] BOT-2评分(例如，强度、跑步速度和敏捷性、精细运动精确度、精细运动整合、手灵巧性、双侧协调、平衡和/或上肢协调评分)的增加可在碱性磷酸酶或具有碱性磷酸酶活性
的多肽，诸如sALP(例如TNALP，例如SEQ ID NO:1的sALP多肽或与SEQ ID NO:1的序列具有
至少95％序列同一性的多肽变体，例如，阿司弗泰斯阿尔法)的整个施用中维持例如一段时
间。同样，在施用碱性磷酸酶或具有碱性磷酸酶活性的多肽后，肌肉的物理损伤的减少可在
碱性磷酸酶或具有碱性磷酸酶活性的多肽的整个施用中维持。

[0141] 患有或易患肌肉无力疾病(诸如，HPP)的受试者的BOT-2评分(强度、跑步速度和敏捷性、精细运动精确度、精细运动整合、手灵巧性、双侧协调、平衡和上肢协调评分)可单独
或与其他端点组合使用，以便评估使用碱性磷酸酶或具有碱性磷酸酶活性的多肽，诸如
sALP(例如TNALP，例如SEQ ID NO:1的sALP多肽或与SEQ ID NO:1的序列具有至少95％序列
同一性的多肽变体，例如，阿司弗泰斯阿尔法)的治疗功效，其中相对于某个测试评分的改
善表明碱性磷酸酶或具有碱性磷酸酶活性的多肽对于治疗与肌肉无力疾病相关的肌肉损
伤是有效的。例如，当向患有或易患肌肉无力疾病的受试者施用sALP导致BOT-2跑步速度和
敏捷性评分平均增加至约5或大于约5时，其中受试者先前具有小于约5的平均BOT-2跑步速
度和敏捷性评分，则sALP被认为在例如治疗与肌肉无力疾病相关的身体损伤方面是有效
的。

[0142] 另外，在每个BOT-2方面(强度、跑步速度和敏捷性、精细运动精确度、精细运动整合、手灵巧性、双侧协调、平衡和上肢协调)内，患有或易患肌肉无力疾病(例如，本文所述的
HPP、CPPD、家族性低磷酸盐血症等)的受试者可进行一个或多个测试以确定受试者的BOT-2
评分。例如，患有或易患肌肉无力疾病的受试者可进行仰卧起坐、V型仰卧起坐、立定跳远、
坐卧和俯卧撑中的一个或多个以确定BOT-2强度评分、确定BOT-2强度评分并且评估sALP施
用的治疗功效。患有或易患肌肉无力疾病的受试者可进行平衡木、穿梭跑、双腿侧跳和/或
单腿侧跳中的一个或多个，以确定BOT-2跑步速度和敏捷性评分并且评估sALP施用的治疗
功效。患有或易患肌肉无力疾病的受试者可切出一个圆圈和/或连接点以确定BOT-2精细运
动精确度评分并且评估sALP施用的治疗功效。患有或易患肌肉无力疾病的受试者可复制一
个星形和/或复制一个正方形以确定BOT-2精细运动整合评分并且评估sALP施用的治疗功
效。患有或易患肌肉无力疾病的受试者可进行转移便士、分类卡和字符串块中的一个或多
个以确定BOT-2手灵巧性评分并且评估sALP施用的治疗功效。患有或易患肌肉无力疾病的
受试者可轻拍他或她的脚和手指和/或进行跳跃以确定BOT-2双侧协调评分并且评估sALP
施用的治疗功效。患有或易患肌肉无力疾病的受试者可在一条线上向前行走和/或用一条
腿站在平衡木上以确定BOT-2平衡评分并且评估sALP施用的治疗功效。患有或易患肌肉无
力疾病的受试者可将球扔向目标和/或抓住被抛球以确定BOT-2上肢协调评分并且评估
sALP施用的治疗功效。

[0143] 可替代地，当施用碱性磷酸酶或具有碱性磷酸酶活性的多肽(诸如sALP)未导致BOT-2跑步速度和敏捷性评分平均增加至大于约5时，可改变施用的剂量和/或频率，以便确
定碱性磷酸酶或具有碱性磷酸酶活性的多肽用于患有或易患肌肉无力疾病(例如，HPP)的
受试者的有效量。例如，sALP(诸如TNALP，例如SEQ ID NO:1的sALP多肽或与SEQ ID NO:1的
序列具有至少95％序列同一性的多肽变体，例如，阿司弗泰斯阿尔法)的剂量可从例如约
3mg/kg/周增加至约6mg/kg/周或从约6mg/kg/周增加至约9mg/kg/周。

[0144] 儿童健康评估问卷(CHAQ)

[0145] 可施用儿童健康评估问卷(CHAQ)以评估患有肌肉无力疾病(例如，HPP)的儿童的健康状况，从而生成所述儿童的CHAQ指数评分，如Bruce&Fries(J.Rheumatol.30(1):167-
178,2003)和Klepper(Arthritis&Rheumatism,49:S5–S14,2003)中所述，据此全文以引用
方式并入。CHAQ包括八个类别的问题，用于穿衣/梳理、起立、进食、行走、卫生、伸展、抓握和活动，其中父母或监护人记录患有肌肉无力疾病(例如，HPP)的儿童在进行相应活动时所具
有的困难程度。每个类别中的评分范围为0至3，其中评分为0表示没有任何困难；评分为1表
示有一定难度；评分为2表示难度很大；以及评分为3表示儿童无法进行活动。

[0146] 具有大于约0.8(例如，约0.8、约1、约1.2、约1.4、约1.6、约1.8、约2.0、约2.2、约2.4、约2.6、约2.8或约3.0)的平均CHAQ指数评分(例如，指示日常生活活动(ADL)和/或疼痛
的残疾)的患有或易患肌肉无力疾病的儿童可通过施用碱性磷酸酶或具有碱性磷酸酶活性
的多肽，诸如sALP(例如TNALP，例如SEQ ID NO:1的sALP多肽或与SEQ ID NO:1的序列具有
至少95％序列同一性的多肽变体，例如，阿司弗泰斯阿尔法)来治疗。例如，具有大于约0.8
的平均CHAQ指数评分的儿童可通过施用碱性磷酸酶或具有碱性磷酸酶活性的多肽，诸如
sALP(例如TNALP，例如SEQ ID NO:1的sALP多肽或与SEQ ID NO:1的序列具有至少95％序列
同一性的多肽变体，例如，阿司弗泰斯阿尔法)持续一段时间，直至患者的一生来治疗。此
外，可向患有或易患本文公开的肌肉无力疾病的儿童询问所述八个类别(穿衣/梳理、起立、
进食、行走、卫生、伸展、抓握和活动)中的一个或多个中的一个或多个问题以得出平均CHAQ
指数评分，并且如果平均CHAQ指数评分大于约0.8，则所述儿童可通过施用碱性磷酸酶或具
有碱性磷酸酶活性的多肽，诸如sALP来治疗。

[0147] 可将患有或易患本文公开的肌肉无力疾病的儿童的CHAQ指数评分与没有这种肌肉无力疾病的儿童的CHAQ指数评分进行比较，以例如确定CHAQ指数评分的标准偏差。另外，
可将患有或易患本文公开的肌肉无力疾病的儿童的CHAQ指数评分与患有或易患本文公开
的肌肉无力疾病的其他儿童的CHAQ指数评分进行比较，以例如确定CHAQ指数评分的标准偏
差。

[0148] 所述方法可导致改善患有或易患本文公开的肌肉无力疾病的儿童的CHAQ指数评分(例如，指示ADL和/或疼痛的残疾)。例如，用sALP(诸如TNALP，例如SEQ ID NO:1的sALP多
肽或与SEQ ID NO:1的序列具有至少95％序列同一性的多肽变体，例如，阿司弗泰斯阿尔
法)治疗，诸如用sALP治疗一段时间，直至所述儿童的一生，可导致患有HPP的儿童的CHAQ指
数评分平均减少至约0至等于或小于约0.5(例如约0、约0.1、约0.2、约0.4或约0.5)。

[0149] 患有或易患肌肉无力疾病(例如，HPP)的儿童的CHAQ指数评分的减少可在碱性磷酸酶或具有碱性磷酸酶活性的多肽，诸如sALP(例如TNALP，例如SEQ ID NO:1的sALP多肽或
与SEQ ID NO:1的序列具有至少95％序列同一性的多肽变体，例如，阿司弗泰斯阿尔法)的
整个施用中维持例如一段时间，直至所述儿童的一生。同样，所述儿童的ADL的增加和/或疼
痛的减少可在sALP(诸如TNALP，例如SEQ ID NO:1的sALP多肽或与SEQ ID NO:1的序列具有
至少95％序列同一性的多肽变体，例如，阿司弗泰斯阿尔法)的整个施用中维持一段时间，
直至所述儿童的一生。

[0150] 患有或易患肌肉无力疾病(例如，HPP)的儿童的CHAQ指数评分可用于评估使用碱性磷酸酶或具有碱性磷酸酶活性的多肽，诸如sALP(例如TNALP，例如SEQ ID NO:1的sALP多
肽或与SEQ ID NO:1的序列具有至少95％序列同一性的多肽变体，例如，阿司弗泰斯阿尔
法)的治疗功效，其中相对于某个测试评分的改善表明碱性磷酸酶或具有碱性磷酸酶活性
的多肽对于治疗例如与肌肉无力疾病相关的日常生活活动(ADL)和/或疼痛的残疾是有效
的。特别地，可向患有或易患肌肉无力疾病的儿童询问所述八个类别(穿衣/梳理、起立、进
食、行走、卫生、伸展、抓握和活动)中的一个或多个中的一个或多个问题以得出平均CHAQ指
数评分并且评估sALP施用的治疗功效。例如，当向患有或易患肌肉无力疾病的儿童施用
sALP导致CHAQ指数评分平均减少至等于或小于约0.5时，其中所述儿童先前具有大于约0.8
的平均CHAQ指数评分，则sALP在治疗例如与肌肉无力疾病相关的日常生活活动(ADL)和疼
痛的残疾时是有效的。可替代地，当施用sALP未导致CHAQ指数评分平均减少至等于或小于
约0.5时，可改变sALP施用的剂量和/或频率，以便确定sALP用于患有或易患肌肉无力疾病
的儿童的有效量。例如，sALP(诸如TNALP，例如SEQ ID NO:1的sALP多肽或与SEQ ID NO:1的
序列具有至少95％序列同一性的多肽变体，例如，阿司弗泰斯阿尔法)的剂量可从例如约
3mg/kg/周增加至约6mg/kg/周或从约6mg/kg/周增加至约9mg/kg/周。

[0151] 儿科结果数据收集工具(PODCI)

[0152] 可使用儿科结果数据收集工具(PODCI)鉴定患有或易患肌肉无力疾病(例如，HPP)的某些受试者，以便用碱性磷酸酶或具有碱性磷酸酶活性的多肽，诸如sALP(例如TNALP，例
如SEQ ID NO:1的sALP多肽或与SEQ ID NO:1的序列具有至少95％序列同一性的多肽变体，
例如，阿司弗泰斯阿尔法)治疗。可施用PODCI以评估儿童的健康状况从而生成患者的PODCI
评分，如Plint等(J.Pediatr.Orthop.23(6):788-790,2003)中所述。PODCI包括八个类别的
问题，所述问题可由患有或易患肌肉无力疾病(例如，HPP)的受试者或由受试者的父母/监
护人完成。可用于确定患有或易患肌肉无力疾病的受试者的PODCI的类别包括以下：1)上肢
和身体功能量表，用于衡量在进行日常个人护理和学生活动中所遇到的困难；2)转移和基
本移动性量表，用于衡量在日常活动中进行常规运动和运动活动所经历的困难；3)运动/身
体功能量表，用于衡量参加更积极的活动或运动时所遇到的困难或限制；4)疼痛/舒适度量
表，用于衡量过去一周所经历的疼痛程度；5)治疗期望量表，用于衡量治疗的长期预期；6)
幸福量表，用于衡量对个人外表以及与同龄朋友和其他人的相似感的总体满意度；7)对症
状的满意度量表，用于衡量患者对应是终生状态的当前限制的接受程度；以及8)全局功能
量表，其是从以上列出的前四个量表计算的一般组合量表。在每个类别中，确定患有或易患
肌肉无力疾病的受试者的标准化评分，并且然后转换为0至100量表，其中0表示显著残疾且
100表示较少残疾。

[0153] 具有小于约40(例如，约5、约10、约15、约20、约25、约30、约35或约39)的平均PODCI评分(例如，指示ADL和/或疼痛的残疾)的患有或易患肌肉无力疾病(例如，HPP)的受试者可通过施用碱性磷酸酶或具有碱性磷酸酶活性的多肽，诸如sALP(例如TNALP，例如SEQ ID
NO:1的sALP多肽或与SEQ ID NO:1的序列具有至少95％序列同一性的多肽变体，例如，阿司
弗泰斯阿尔法)来治疗。例如，平均PODCI评分小于40的受试者可通过施用sALP一段时间，直
至患者的一生来治疗。此外，可向患有或易患肌肉无力疾病的受试者询问上述八个量表中
的一个或多个(例如转移和基本移动性、运动/身体功能和疼痛/舒适度量表)中的一个或多
个问题以得出平均PODCI评分，并且如果平均PODCI评分大于小于40，则患者可通过施用
sALP来治疗。

[0154] 本文所述的方法可导致增加患有或易患肌肉无力疾病的受试者的PODCI评分(例如，指示ADL和/或疼痛的残疾)。例如，用碱性磷酸酶或具有碱性磷酸酶活性的多肽，诸如
sALP(例如TNALP，例如SEQ ID NO:1的sALP多肽或与SEQ ID NO:1的序列具有至少95％序列
同一性的多肽变体，例如，阿司弗泰斯阿尔法)治疗，诸如用sALP治疗一段时间，直至受试者
的一生，可导致PODCI评分平均增加至约40至约50(例如约40、约41、约42、约43、约44、约45、约46、约47、约48、约49或约50)。

[0155] PODCI评分的增加可在碱性磷酸酶或具有碱性磷酸酶活性的多肽，诸如sALP(例如TNALP，例如SEQ ID NO:1的sALP多肽或与SEQ ID NO:1的序列具有至少95％序列同一性的
多肽变体，例如，阿司弗泰斯阿尔法)的整个施用中维持例如一段时间，直至患有或易患肌
肉无力疾病的受试者的一生。同样，ADL的增加和/或疼痛的减少可在sALP(诸如TNALP，例如
SEQ ID NO:1的sALP多肽或与SEQ ID NO:1的序列具有至少95％序列同一性的多肽变体，例
如，阿司弗泰斯阿尔法)的整个施用中维持一段时间，直至所述受试者的一生。

[0156] 患有或易患肌肉无力疾病(例如，HPP)的受试者的PODCI评分可用于评估使用碱性磷酸酶或具有碱性磷酸酶活性的多肽，诸如sALP(例如TNALP，例如SEQ ID NO:1的sALP多肽
或与SEQ ID NO:1的序列具有至少95％序列同一性的多肽变体，例如，阿司弗泰斯阿尔法)
的治疗功效，其中相对于某个测试评分的改善表明碱性磷酸酶或具有碱性磷酸酶活性的多
肽对于治疗例如与肌肉无力疾病相关的日常生活活动(ADL)和/或疼痛的残疾是有效的。特
别地，可向患有或易患肌肉无力疾病的受试者询问八个量表(上肢和身体功能量表、转移和
基本移动性量表、运动/身体功能量表、疼痛/舒适度量表、治疗期望量表、幸福量表、对症状
的满意度量表和全局功能量表)中的一个或多个中的一个或多个问题以得出平均PODCI评
分，并且评估sALP施用的治疗功效。

[0157] 例如，当向患有或易患肌肉无力疾病的受试者施用sALP导致PODCI评分平均增加至约40或大于约40时，其中所述受试者先前具有小于约40的平均PODCI评分，则sALP在治疗
例如与肌肉无力疾病相关的日常生活活动(ADL)和疼痛的残疾时是有效的。可替代地，当施
用sALP未导致PODCI评分平均增加至约40或大于约40时，可改变sALP施用的剂量和频率，以
便确定sALP用于患有或易患肌肉无力疾病的受试者的有效量。例如，sALP(诸如TNALP，例如
SEQ ID NO:1的sALP多肽或与SEQ ID NO:1的序列具有至少95％序列同一性的多肽变体，例
如，阿司弗泰斯阿尔法)的剂量可从例如约3mg/kg/周增加至约6mg/kg/周或从约6mg/kg/周
增加至约9mg/kg/周。

[0158] Bayley婴幼儿发育量表，第3版(BSID-III)

[0159] 可施用另一个端点，Bayley婴幼儿发育量表，第3版(BSID-III)，以评估患有或易患肌肉无力疾病(例如，HPP)的受试者从出生的健康状况从而生成受试者的BSID-III评分，
如Bayley.(2006).Bayley scales of infant and toddler development:
administration manual.San Antonio,TX:Harcourt Assessment中所述。BSID-III包括一
系列发育游戏任务，其可向受试者施用以确定原始BSID-III评分。例如，用于确定患有或易
患肌肉无力疾病的受试者(例如，患有HPP的约3岁或更小的婴儿)的BSID-III评分的类别可
包括握捉、感知-运动整合、运动计划和速度、视觉跟踪、伸展、对象抓取、对象操纵、功能手技能、对触觉信息的反应、肢体和躯干的运动、静态定位、动态运动、平衡和运动计划。然后
将BSID-III测量转换为量表BSID-III评分，其可用于确定与健康的、年龄调整的患者相比
的患者表现。患有或易患肌肉无力疾病的受试者(例如，患有HPP的患者)的BSID-III量表评
分范围为0至14，其中约7至约13的评分被认为是健康受试者的正常范围。

[0160] 作为婴儿(例如，约3岁或小于3岁)，患有或易患肌肉无力疾病的受试者可在所述类别(握捉、感知-运动整合、运动计划和速度、视觉跟踪、伸展、对象抓取、对象操纵、功能手技能、对触觉信息的反应、肢体和躯干的运动、静态定位、动态运动、平衡和运动计划)中的
一个或多个中进行测试，以生成指示延迟运动发育的BSID-III评分。作为婴儿，在所述类别
(握捉、感知-运动整合、运动计划和速度、视觉跟踪、伸展、对象抓取、对象操纵、功能手技
能、对触觉信息的反应、肢体和躯干的运动、静态定位、动态运动、平衡和运动计划)中的一
个或多个中，平均BSID-III评分小于约2的患有或易患肌肉无力疾病的受试者可通过施用
sALP(诸如TNALP，例如SEQ ID NO:1的sALP多肽或与SEQ ID NO:1的序列具有至少95％序列
同一性的多肽变体，例如，阿司弗泰斯阿尔法)来治疗。特别地，作为婴儿，平均BSID-III评
分小于约2的患有或易患肌肉无力疾病的受试者可通过施用sALP一段时间，直至受试者的
一生来治疗。

[0161] 所述方法可导致改善患有或易患肌肉无力疾病的受试者的平均BSID-III评分(例如，指示延迟的运动发育)。例如，用sALP(诸如TNALP，例如SEQ ID NO:1的sALP多肽或与SEQ
ID NO:1的序列具有至少95％序列同一性的多肽变体，例如，阿司弗泰斯阿尔法)治疗，诸如
用sALP治疗一段时间，直至受试者的一生，可导致BSID-III评分平均增加至大于约5(例如
约5、约6、约7、约8、约9、约10、约11、约12或约13)。

[0162] BSID-III评分的增加可在碱性磷酸酶或具有碱性磷酸酶活性的多肽，诸如sALP(例如TNALP，例如SEQ ID NO:1的sALP多肽或与SEQ ID NO:1的序列具有至少95％序列同一
性的多肽变体，例如，阿司弗泰斯阿尔法)的整个施用中维持一段时间，直至患有或易患肌
肉无力疾病的受试者的一生。同样，运动发育的增加可在碱性磷酸酶或具有碱性磷酸酶活
性的多肽，诸如sALP(例如TNALP，例如SEQ ID NO:1的sALP多肽或与SEQ ID NO:1的序列具
有至少95％序列同一性的多肽变体，例如，阿司弗泰斯阿尔法)的整个施用中维持例如一段
时间，直至受试者的一生。

[0163] 患有或易患肌肉无力疾病(例如，HPP)的受试者的BSID-III评分可用于评估使用碱性磷酸酶或具有碱性磷酸酶活性的多肽，诸如sALP(例如TNALP，例如SEQ ID NO:1的sALP
多肽或与SEQ ID NO:1的序列具有至少95％序列同一性的多肽变体，例如，阿司弗泰斯阿尔
法)的治疗功效，其中相对于某个测试评分的改善表明碱性磷酸酶或具有碱性磷酸酶活性
的多肽对于治疗例如与肌肉无力疾病相关的延迟运动发育是有效的。特别地，作为婴儿(例
如，约3岁或小于3岁，患有HPP)，患有或易患肌肉无力疾病的受试者可在所述类别(握捉、感
知-运动整合、运动计划和速度、视觉跟踪、伸展、对象抓取、对象操纵、功能手技能、对触觉信息的反应、肢体和躯干的运动、静态定位、动态运动、平衡和运动计划)中的一个或多个中
进行测试，以得出平均BSID-III评分，并且评估sALP施用的治疗功效。

[0164] 例如，当向患有或易患肌肉无力疾病的儿童施用sALP导致BSID-III量表评分平均增加至大于约5时，其中作为婴儿(例如，约3岁或小于3岁)，所述儿童先前具有小于约2的平
均BSID-III量表评分，则sALP在治疗例如与HPP相关的延迟运动发育时是有效的。可替代
地，当施用sALP未导致BSID-III量表评分平均增加至大于约5时，可改变sALP施用的剂量
和/或频率，以便确定sALP用于患有或易患肌肉无力疾病的儿童的有效量。例如，sALP(诸如
TNALP，例如SEQ ID NO:1的sALP多肽或与SEQ ID NO:1的序列具有至少95％序列同一性的
多肽变体，例如，阿司弗泰斯阿尔法)的剂量可从例如约3mg/kg/周增加至约6mg/kg/周或从
约6mg/kg/周增加至约9mg/kg/周。

[0165] Peabody发育运动量表，第2版(PDMS-2)

[0166] 可施用另一个端点，Peabody发育运动量表，第2版(PDMS-2)，以评估患有或易患肌肉无力疾病(例如，HPP)的受试者从出生的健康状况从而生成受试者的PDMS-2评分，如
vanHartingsveldt等(Occup.Ther.Int.12(1):1-13,2005)中所述。PDMS-2包括六个类别的
子测试以测量受试者(诸如患有HPP的患者)的运动技能。

[0167] 特别地，PDMS-2测量可从以下子测试确定：1)运动子测试，用于测量受试者从一个地方移动到另一个地方的能力(测量包括爬行、行走、跑步、跳跃和向前跳跃)；2)反射子测
试，用于测量受试者自动对环境事件做出反应的能力；3)静止子测试，用于测量受试者在重
心内维持身体控制并保持平衡的能力；4)对象操纵子测试，用于测量受试者操纵对象的能
力，诸如捕捉、投掷和踢球；5)抓取子测试，用于测量受试者使用他或她的手的能力，诸如用
一只手握住对象的能力和涉及双手手指的受控使用的动作；以及6)视觉-运动整合子测试，
用于测量受试者使用他或她的视觉感知技能进行复杂的眼-手协调任务的能力，诸如到达
和抓握对象，用块构建和复制设计。可针对患有或易患肌肉无力疾病(例如，HPP)的受试者
确定这些类别中的一个或多个的PDMS-2测量值，并且然后转换为范围从0到13的PDMS-2评
分(诸如PDMS-2运动标准评分)，其中健康受试者(例如，没有肌肉无力疾病的受试者)的范
围为约7至约13。

[0168] 具有平均PDMS评分(例如，指示延迟的运动发育)的患有或易患肌肉无力疾病的受试者可通过施用sALP(诸如TNALP，例如SEQ ID NO:1的sALP多肽或与SEQ ID NO:1的序列具
有至少95％序列同一性的多肽变体，例如，阿司弗泰斯阿尔法)来治疗。

[0169] 本文所述的方法可导致改善患有或易患肌肉无力疾病的受试者的PDMS-2评分(例如，指示延迟的运动发育)。例如，用碱性磷酸酶或具有碱性磷酸酶活性的多肽，诸如sALP
(例如TNALP，例如SEQ ID NO:1的sALP多肽或与SEQ ID NO:1的序列具有至少95％序列同一
性的多肽变体，例如，阿司弗泰斯阿尔法)治疗，可导致PDMS-2评分平均增加至约7至约13
(例如约7、约8、约9、约10、约11、约12或约13)。

[0170] PDMS-2评分的增加可在碱性磷酸酶或具有碱性磷酸酶活性的多肽，诸如sALP(例如TNALP，例如SEQ ID NO:1的sALP多肽或与SEQ ID NO:1的序列具有至少95％序列同一性
的多肽变体，例如，阿司弗泰斯阿尔法)的整个施用中维持延长的时间，例如一段时间，直至
患有或易患肌肉无力疾病的受试者的一生。同样，运动发育的增加可在sALP(诸如TNALP，例
如SEQ ID NO:1的sALP多肽或与SEQ ID NO:1的序列具有至少95％序列同一性的多肽变体，
例如，阿司弗泰斯阿尔法)的整个施用中维持一段时间，直至患有或易患肌肉无力疾病的受
试者的一生。

[0171] 患有或易患肌肉无力疾病(例如，HPP)的受试者的PDMS-2评分可用于评估使用碱性磷酸酶或具有碱性磷酸酶活性的多肽，诸如sALP(例如TNALP，例如SEQ ID NO:1的sALP多
肽或与SEQ ID NO:1的序列具有至少95％序列同一性的多肽变体，例如，阿司弗泰斯阿尔
法)的治疗功效，其中相对于某个测试评分的改善表明碱性磷酸酶或具有碱性磷酸酶活性
的多肽对于治疗例如与肌肉无力疾病相关的延迟运动发育是有效的。例如，约5岁或小于5
岁的患有或易患肌肉无力疾病的儿童可在所述类别(运动、反射、静止、对象操纵、抓取以及
视觉-运动)中的一个或多个中进行测试，以得出平均PDMS-2评分，并且评估sALP施用的治
疗功效。

[0172] 例如，当向患有或易患肌肉无力疾病的儿童施用sALP导致PDMS-2标准评分平均增加至约7时，其中所述儿童先前具有约5的平均PDMS-2标准评分，则sALP在治疗例如与HPP相
关的延迟运动发育时是有效的。可替代地，当施用sALP未导致PDMS-2标准评分平均增加至
约7时，可改变sALP施用的剂量和/或频率，以便确定sALP用于所述儿童的有效量。例如，
sALP(诸如TNALP，例如SEQ ID NO:1的sALP多肽或与SEQ ID NO:1的序列具有至少95％序列
同一性的多肽变体，例如，阿司弗泰斯阿尔法)的剂量可从例如约3mg/kg/周增加至约6mg/
kg/周或从约6mg/kg/周增加至约9mg/kg/周。

[0173] 六分钟行走测试(6MWT)

[0174] 可使用6MWT鉴定患有肌肉无力疾病的受试者，以便用碱性磷酸酶或具有碱性磷酸酶活性的多肽(例如，sALP，诸如TNALP，例如SEQ ID NO:1的sALP多肽或与SEQ ID NO:1的序
列具有至少95％序列同一性的多肽变体，例如，阿司弗泰斯阿尔法)治疗。特别地，6MWT可用
于评估患有肌肉无力疾病的成人的行走能力以生成所述成人的6MWT值。6MWT可在室内或室
外使用具有坚硬表面的平坦、直的封闭走廊(例如长约30米)进行。可使用秒表或其他计时
器来跟踪时间，并且可使用机械计数器或其他设备来确定患有肌肉无力疾病的受试者行走
的距离(例如，以米为单位)。例如，走廊的长度可每三米标记一次，以确定患有肌肉无力疾
病的受试者行走的米数，其中折返点在30米处，并且还标记了起始线。然后可将患有肌肉无
力疾病的受试者六分钟内行走的距离与例如约相同年龄、相同性别和/或相同身高的正常
受试者行走的预测米数进行比较，并且表示为百分比值以生成受试者的6MWT值。可将患有
肌肉无力疾病的受试者的6MWT值与受试者基线处的6MWT值进行比较。另外，可将患有肌肉
无力疾病的受试者的6MWT值与正常受试者的6MWT值进行比较。

[0175] 平均6MWT小于预测6MWT值(例如，相对于约相同年龄、相同性别和/或相同身高的正常受试者)的约80％的患有肌肉无力疾病的受试者可用碱性磷酸酶或具有碱性磷酸酶活
性的多肽(例如，sALP，诸如TNALP，例如SEQ ID NO:1的sALP多肽或与SEQ ID NO:1的序列具
有至少95％序列同一性的多肽变体，例如，阿司弗泰斯阿尔法)治疗，诸如通过施用碱性磷
酸酶或具有碱性磷酸酶活性的多肽持续至少两周(例如，至少三周、至少四周、至少五周、至
少六周、至少七周、至少八周、至少九周、至少十周、至少三个月、至少四个月、至少五个月、至少六个月、至少七个月、至少八个月、至少九个月、至少一年、至少两年、至少三年、至少四年、至少五年、至少六年、至少七年、至少八年、至少九年或至少十年或患者的一生；特别是
至少六周)的治疗期。例如，平均6MWT小于预测6MWT值的约80％(例如，预测6MWT值的约
50％、约55％、约60％、约65％、约70％或约75％)的患有肌肉无力疾病的受试者可用碱性磷
酸酶或具有碱性磷酸酶活性的多肽治疗持续至少两周(例如，至少三周、至少四周、至少五
周、至少六周、至少七周、至少八周、至少九周、至少十周、至少三个月、至少四个月、至少五个月、至少六个月、至少七个月、至少八个月、至少九个月、至少一年、至少两年、至少三年、至少四年、至少五年、至少六年、至少七年、至少八年、至少九年或至少十年或患者的一生；
特别是至少六周)的治疗期。

[0176] 所述方法可导致改善患有肌肉无力疾病的受试者的6MWT值。例如，用碱性磷酸酶或具有碱性磷酸酶活性的多肽(例如，sALP，诸如TNALP，例如SEQ ID NO:1的sALP多肽或与
SEQ ID NO:1的序列具有至少95％序列同一性的多肽变体，例如，阿司弗泰斯阿尔法)治疗，
诸如用碱性磷酸酶或具有碱性磷酸酶活性的多肽治疗持续至少两周(例如，至少三周、至少
四周、至少五周、至少六周、至少七周、至少八周、至少九周、至少十周、至少三个月、至少四个月、至少五个月、至少六个月、至少七个月、至少八个月、至少九个月、至少一年、至少两
年、至少三年、至少四年、至少五年、至少六年、至少七年、至少八年、至少九年或至少十年或患者的一生；特别是至少六周)的治疗期，可导致6MWT值平均增加至患者预测6MWT值的约
80％或更大(例如预测6MWT值的约82％、约84％、约86％、约88％、约90％、约92％、约94％、约96％、约98％或更多)。

[0177] 患有肌肉无力疾病的受试者的6MWT值的增加可在碱性磷酸酶或具有碱性磷酸酶活性的多肽(例如，sALP，诸如TNALP，例如SEQ ID NO:1的sALP多肽或与SEQ ID NO:1的序列
具有至少95％序列同一性的多肽变体，例如，阿司弗泰斯阿尔法)的整个施用中维持例如至
少两周(例如，至少三周、至少四周、至少五周、至少六周、至少七周、至少八周、至少九周、至少十周、至少三个月、至少四个月、至少五个月、至少六个月、至少七个月、至少八个月、至少九个月、至少一年、至少两年、至少三年、至少四年、至少五年、至少六年、至少七年、至少八年、至少九年或至少十年或患者的一生；特别是至少六周)的治疗期。例如，6MWT值增加至大
于患有肌肉无力疾病的受试者的预测6MWT值的约80％，并且在用碱性磷酸酶或具有碱性磷
酸酶活性的多肽治疗期间保持在增加的6MWT值的±10％处。

[0178] 同样，患有肌肉无力疾病的受试者的行走能力的改善可在碱性磷酸酶或具有碱性磷酸酶活性的多肽的整个施用中维持例如至少两周(例如，至少三周、至少四周、至少五周、
至少六周、至少七周、至少八周、至少九周、至少十周、至少三个月、至少四个月、至少五个
月、至少六个月、至少七个月、至少八个月、至少九个月、至少一年、至少两年、至少三年、至少四年、至少五年、至少六年、至少七年、至少八年、至少九年或至少十年或患者的一生；特
别是至少六周)的治疗期。例如，患有肌肉无力疾病的受试者在使用sALP治疗期间表现出对
辅助移动性设备(诸如助行器、轮椅、背带、拐杖或矫形器)的依赖性降低。

[0179] 可替代地，当施用碱性磷酸酶或具有碱性磷酸酶活性的多肽(例如，sALP，诸如TNALP，例如SEQ ID NO:1的sALP多肽或与SEQ ID NO:1的序列具有至少95％序列同一性的
多肽变体，例如，阿司弗泰斯阿尔法)未导致6MWT值平均增加至大于(例如约相同年龄、相同
性别和/或身高的正常受试者的)预测6MWT值的80％时，可改变碱性磷酸酶或具有碱性磷酸
酶活性的多肽施用的剂量和/或频率，以便确定碱性磷酸酶或具有碱性磷酸酶活性的多肽
用于患有肌肉无力疾病的受试者的有效量。例如，碱性磷酸酶或具有碱性磷酸酶活性的多
肽的剂量可从例如约2.1mg/kg/周或约3.5mg/kg/周增加至约6mg/kg/周或约9mg/kg/周。

[0180] 手持式测力法(HHD)

[0181] 可使用手持式测力法(HHD)评估患有或易患肌肉无力疾病的受试者的抓握和肌肉强度。例如，可使用例如MICROFET2TM测力计测量患有或易患肌肉无力疾病的受试者的膝屈
曲和伸展以及髋屈曲、伸展和外展，同时可使用例如Jamar Grip测力计测量受试者的抓握
强度。特别地，管理员使测力计保持静止，并且受试者对测力计施加最大的力。峰值力数据
以磅为单位收集，然后转换为牛顿(N)。然后使用以N米为单位的肢体长度计算扭矩值。然后
可将扭矩值与例如约相同年龄、相同性别和/或相同身高的正常受试者的扭矩值进行比较，
并且表示为百分比值以生成受试者的HHD值。

[0182] 平均HHD值小于预测HHD值(例如，相对于约相同年龄、相同性别和/或相同身高的正常受试者)的约80％的患有肌肉无力疾病的受试者可用碱性磷酸酶或具有碱性磷酸酶活
性的多肽(例如，sALP，诸如TNALP，例如SEQ ID NO:1的sALP多肽或与SEQ ID NO:1的序列具
有至少95％序列同一性的多肽变体，例如，阿司弗泰斯阿尔法)治疗，诸如通过施用碱性磷
酸酶或具有碱性磷酸酶活性的多肽持续至少两周(例如，至少三周、至少四周、至少五周、至
少六周、至少七周、至少八周、至少九周、至少十周、至少三个月、至少四个月、至少五个月、至少六个月、至少七个月、至少八个月、至少九个月、至少一年、至少两年、至少三年、至少四年、至少五年、至少六年、至少七年、至少八年、至少九年或至少十年或患者的一生；特别是
至少六周)的治疗期。例如，平均HHD小于预测HHD值的约80％(例如，预测HHD值的约30％、约
35％、约40％、约45％、约50％、约55％、约60％、约65％、约70％或约75％)的患有肌肉无力疾病的受试者可用碱性磷酸酶或具有碱性磷酸酶活性的多肽治疗持续至少两周(例如，至
少三周、至少四周、至少五周、至少六周、至少七周、至少八周、至少九周、至少十周、至少三个月、至少四个月、至少五个月、至少六个月、至少七个月、至少八个月、至少九个月、至少一年、至少两年、至少三年、至少四年、至少五年、至少六年、至少七年、至少八年、至少九年或至少十年或患者的一生；特别是至少六周)的治疗期。

[0183] 所述方法可导致改善患有肌肉无力疾病的受试者的HHD值。例如，用碱性磷酸酶或具有碱性磷酸酶活性的多肽(例如，sALP，诸如TNALP，例如SEQ ID NO:1的sALP多肽或与SEQ
ID NO:1的序列具有至少95％序列同一性的多肽变体，例如，阿司弗泰斯阿尔法)治疗，诸如
用碱性磷酸酶或具有碱性磷酸酶活性的多肽治疗持续至少两周(例如，至少三周、至少四
周、至少五周、至少六周、至少七周、至少八周、至少九周、至少十周、至少三个月、至少四个月、至少五个月、至少六个月、至少七个月、至少八个月、至少九个月、至少一年、至少两年、至少三年、至少四年、至少五年、至少六年、至少七年、至少八年、至少九年或至少十年或患
者的一生；特别是至少六周)的治疗期，可导致HHD值平均增加至患者预测HHD值的约80％或
更大(例如预测HHD值的约83％、约85％、约87％、约90％、约93％、约95％、约97％或约100％或约100％)。

[0184] 患有肌肉无力疾病的受试者的HHD值的增加可在碱性磷酸酶或具有碱性磷酸酶活性的多肽(例如，sALP，诸如TNALP，例如SEQ ID NO:1的sALP多肽或与SEQ ID NO:1的序列具
有至少95％序列同一性的多肽变体，例如，阿司弗泰斯阿尔法)的整个施用中维持例如至少
两周(例如，至少三周、至少四周、至少五周、至少六周、至少七周、至少八周、至少九周、至少十周、至少三个月、至少四个月、至少五个月、至少六个月、至少七个月、至少八个月、至少九个月、至少一年、至少两年、至少三年、至少四年、至少五年、至少六年、至少七年、至少八年、至少九年或至少十年或患者的一生；特别是至少六周)的治疗期。例如，HHD值增加至大于患
有肌肉无力疾病的受试者的预测HHD值的约80％，并且在用碱性磷酸酶或具有碱性磷酸酶
活性的多肽治疗期间保持在增加的HHD值的±10％处。

[0185] 可替代地，当施用碱性磷酸酶或具有碱性磷酸酶活性的多肽(例如，sALP，诸如TNALP，例如SEQ ID NO:1的sALP多肽或与SEQ ID NO:1的序列具有至少95％序列同一性的
多肽变体，例如，阿司弗泰斯阿尔法)未导致HHD值平均增加至大于(例如约相同年龄、相同
性别和/或身高的患有肌肉无力疾病的受试者的)预测HHD值的80％时，可改变碱性磷酸酶
或具有碱性磷酸酶活性的多肽施用的剂量和/或频率，以便确定碱性磷酸酶或具有碱性磷
酸酶活性的多肽用于患有肌肉无力疾病的受试者的有效量。例如，碱性磷酸酶或具有碱性
磷酸酶活性的多肽的剂量可从例如约2.1mg/kg/周或约3.5mg/kg/周增加至约6mg/kg/周或
约9mg/kg/周。

[0186] 碱性磷酸酶

[0187] 阿司弗泰斯阿尔法是配制用于治疗HPP的人TNALP(hTNALP；SEQ ID NO:1)融合蛋白。特别地，阿司弗泰斯阿尔法(SEQ ID NO:1)可有效地用于持续很长一段时间(例如，至少
一天、至少一周、至少两周、至少三周、至少一个月、至少三个月、至少六个月、至少一年、至少两年、至少三年、至少四年、至少五年、至少六年、至少七年、至少八年、至少九年、至少十年、或超过十年(例如，受试者的一生))治疗患有或易患肌肉无力疾病的受试者的低磷酸酯
酶症(HPP)、其症状和与之相关的身体损伤。

[0188] 鉴于本文所述的结果，本公开不限于特定的碱性磷酸酶(ALP)或编码ALP的核酸序列。碱性磷酸酶包括催化磷酸部分裂解(例如，焦磷酸盐，PPi的水解)的一组酶。存在四种已
知的哺乳动物碱性磷酸酶(ALP)同工酶：组织非特异性碱性磷酸酶(TNALP；以下进一步描
述)、胎盘碱性磷酸酶(PLALP)(例如，登录号P05187、NP_112603和NP_001623)、生殖细胞碱
性磷酸酶(GALP)(例如，登录号P10696)和肠碱性磷酸酶(IALP)(例如，登录号P09923和NP_
001622)。除以上讨论的示例性ALP之外，本公开还提供了具有相同或相似的ALP催化位点结
构和/或酶活性的任何多肽，用于治疗患有或易患肌肉无力疾病的受试者。包括sALP的骨递
送缀合物进一步描述于PCT公布号：WO 2005/103263和WO 2008/138131中。

[0189] 可根据本文所述方法使用的TNALP包括例如，人TNALP(登录号NP_000469、AAI10910、AAH90861、AAH66116、AAH21289和AAI26166)；恒河猴TNALP(登录号XP_
01109717)；大鼠TNALP(登录号NP_037191)；狗TNALP(登录号AAF64516)；猪TNALP(登录号
AAN64273)、小鼠(登录号NP_031457)、牛TNALP(登录号NP_789828，NP_776412、AAM 8209和
AAC33858)以及猫TNALP(登录号NP_001036028)。特别地，TNALP可以是重组人TNALP(例如，
SEQ ID NO:1，阿司弗泰斯阿尔法；参见美国专利号7,763,712和7,960,529，全文以引用方
式并入本文中)，用于治疗患有或易患肌肉无力疾病的受试者。TNALP还可以是与上述TNALP
的多肽或核酸序列表现出至少约95％序列同一性的TNALP。

[0190] 可溶性碱性磷酸酶

[0191] 本发明的ALP包括本文所述的任何碱性磷酸酶的可溶性(例如，细胞外或非膜结合)形式。本发明的sALP可以是，例如，可溶形式的人组织非特异性碱性磷酸酶(人TNALP
(hTNALP))。本公开不限于特定的sALP，并且可包括对于例如磷酸乙醇胺(PEA)、无机焦磷酸
盐(PPi)和5'-磷酸吡哆醛(PLP)具有生理学活性的任何sALP多肽。特别地，本发明的sALP具
有催化能力，以改善骨中的骨骼矿化。本公开进一步包括编码本文所述sALP的核酸，所述
sALP可用于治疗本文所述的肌肉无力病状，包括例如，HPP、CPPD、家族性低磷酸盐血症(诸
如常染色体显性低磷酸盐血症性佝偻病(ADHR)、常染色体隐性低磷酸盐血症性佝偻病、X连
锁低磷酸盐血症性佝偻病、X连锁低磷酸盐血症(XLH)等)等。

[0192] TNALP是一种在C-末端处由糖脂部分锚定的膜结合蛋白(Swiss-Prot，P05186)。在去除疏水性C-末端后，在翻译后添加此糖脂锚(GPI)，其用作临时膜锚和添加GPI的信号两
者。虽然GPI锚定位于细胞膜中，但TNALP的剩余部分是细胞外的。特别地，TNALP(例如，人
TNALP(hTNALP))可被工程化以用终止密码子替换疏水性C-末端序列的第一个氨基酸(丙氨
酸)，从而产生含有TNALP的天然锚定形式的所有氨基酸残基并且缺乏GPI膜锚的工程化
hTNALP。本领域技术人员将理解，GPI膜锚的位置将在不同的ALP中变化，并且可包括例如多
肽的C-末端上的最后10、12、14、16、18、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、32、34、36、
38、40、45、50或更多个氨基酸残基。重组sTNALP可包括，例如氨基酸1至502(分泌时为18至
502)、氨基酸1至501(分泌时为18至501)、氨基酸1至504(分泌时为18至504)、氨基酸1至505
(分泌时为18-505)，或氨基酸1至502。因此，天然ALP的C-末端可被某些氨基酸截短而不影
响ALP活性。

[0193] 除C-末端GPI锚之外，TNALP还具有N-末端信号肽序列。当合成时，N-末端信号肽存在于合成的蛋白质上，但在易位到ER中后从TNALP裂解。本发明的sALP包括其分泌的(即，缺
少N-末端信号)和非分泌的(即，具有N-末端信号)两种形式。本领域技术人员将理解，N-末
端信号肽的位置将在不同的碱性磷酸酶中变化，并且可包括例如多肽的N-末端上的前5、8、
10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、27、30或更多个氨基酸残基。本领域技术人员可例如，通过诸如描述于Bendtsen等(J.Mol.Biol.340(4):783-795,2004)中并
且在www.cbs.dtu.dk/services/SignalP/的网站上可得的适当计算机算法来预测信号序
列裂解位点的位置。

[0194] 本发明还包括衍生自ALP同工酶(例如，TNALP、PALP、GCALP、IALP等)的细胞外结构域的sALP共有序列。因此，类似于以上讨论的sTNALP，本公开还提供了其他可溶性人ALP同
工酶，即没有肽信号，优选地包含ALP的细胞外结构域。本发明的sALP还包括满足衍生自人
ALP同工酶和哺乳动物TNALP直向同源物(人、小鼠、大鼠、牛、猫和狗)的ALP细胞外结构域的
共有序列或衍生自仅哺乳动物TNALP直向同源物(人、小鼠、大鼠、牛、猫和狗)的ALP细胞外
结构域的共有序列的多肽序列。本发明的sALP还包括满足衍生自这些TNALP直向同源物或
人ALP同工酶的各种组合的类似共有序列的那些。例如，此类共有序列在WO 2008/138131中
给出。

[0195] 本发明的sALP不仅可包括上述sALP的野生型序列，还可包括与这些碱性磷酸酶(例如，SEQ ID NO:1-24；例如SEQ ID NO:1的sALP多肽或与SEQ ID NO:1的序列具有至少
95％序列同一性的多肽变体，例如，阿司弗泰斯阿尔法)具有至少50％(例如，55％、60％、
65％、70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、
96％、97％、98％、99％或更多)序列同一性的任何多肽。可引入ALP序列中的突变的实例描
述于美国公布号2013/0323244中，据此全文以引用方式并入。sALP可任选地在任何适当的
一个或多个氨基酸残基处糖基化。此外，sALP可与本文所述的任何sALP(诸如TNALP，例如
SEQ ID NO:1的sALP多肽或与SEQ ID NO:1的序列具有至少95％序列同一性的多肽变体，例
如，阿司弗泰斯阿尔法)具有至少50％(例如，55％、60％、65％、70％、75％、80％、81％、
82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、
97％、98％、99％或更多)序列同一性。相对于本文所述的任何sALP(诸如TNALP，例如SEQ ID
NO:1的sALP多肽或与SEQ ID NO:1的序列具有至少95％序列同一性的多肽变体，例如，阿司
弗泰斯阿尔法)，sALP可具有1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或更多个添加、删除或取代。

[0196] sALP融合多肽

[0197] 本文所述的任何sALP和接头可组合在sALP多肽(例如，A-sALP-B的sALP多肽)中，其中A和B各自不存在或者是至少一个氨基酸(诸如TNALP，例如SEQ ID NO:1的sALP多肽或
与SEQ ID NO:1的序列具有至少95％序列同一性的多肽变体，例如，阿司弗泰斯阿尔法)的
氨基酸序列。当存在时，A和/或B可以是本文所述的任何接头。在一些sALP多肽中，A不存在，
B不存在，或者A和B两者均不存在。如本文所述，本发明的sALP多肽可任选地包括Fc区以提
供sALP融合多肽。如本文所述，sALP多肽可任选地包括骨靶向部分。在一些sALP多肽中，骨
靶向部分与sALP，诸如二肽序列(例如，亮氨酸-赖氨酸或天冬氨酸-异亮氨酸)之间可包括
接头，例如，柔性接头。其他示例性Fc区、接头和骨靶向部分描述如下。

[0198] 本文所述的任何sALP、接头和Fc区可在融合多肽(例如，重组融合多肽，其包括结构Z-sALP-Y-间隔子-X-Wn-V、Z-Wn-X-间隔子-Y-sALP-V、Z-sALP-Y-Wn-X-间隔子-V和Z-Wn-
X-sALP-Y-间隔子-V(诸如TNALP，例如SEQ ID NO:1的sALP多肽或与SEQ ID NO:1的序列具
有至少95％序列同一性的多肽变体，例如，阿司弗泰斯阿尔法))中组合。特别地，所述结构
可以是Z-sALP-Y-间隔子-X-Wn-V或Z-Wn-X-间隔子-Y-sALP-V。sALP可以是ALP的全长或功能
片段，诸如ALP的可溶性细胞外结构域，如本文所述(例如，TNALP、PALP、GCALP和IALP)。X、Y、Z和V中的任一个和/或间隔子可不存在或者是至少一个氨基酸的氨基酸序列。Wn可以是骨
靶向部分，例如，具有一系列连续的Asp或Glu残基，其中n＝1至50，例如，n＝3-30，例如，5-
15，例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、
27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、36、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50。骨靶向部分(如果存在的话)可位于融合多肽中的任何位置，例如，在N-末端或C-末端处或附近，
和/或在接头区中。例如，骨靶向部分在C-末端处。sALP多肽和融合多肽也可不包括骨靶向
部分。

[0199] 本发明的sALP融合多肽可具有结构hTNALP-Fc-D10。特别地，sALP融合多肽可包括SEQ ID NO:1的氨基酸序列或与SEQ ID NO:1的序列具有至少95％序列同一性的多肽变体，
例如，阿司弗泰斯阿尔法。

[0200] 可用的间隔子包括但不限于包含Fc的多肽，以及能够减轻由末端高度带负电荷的肽(例如，Wn)的存在引起的排斥力的亲水性和柔性多肽。例如，sALP可以是融合多肽，其在
N-末端或C-末端结构域处包括免疫球蛋白的Fc区。免疫球蛋白分子具有本领域熟知的结
构。其包括通过链间二硫键连接的两条轻链(每条约23kD)和两条重链(每条约50-70kD)。免
疫球蛋白易于蛋白水解裂解(例如，通过木瓜蛋白酶裂解)成Fab(含有轻链和重链的VH和
CH1结构域)和Fc(含有重链的CH2和CH3结构域，以及邻接的序列)。如本文所述的可用的Fc
片段包括来自任何哺乳动物(例如，人)的任何免疫球蛋白分子的Fc片段，包括IgG、IgM、
IgA、IgD或IgE，及其各种亚类(例如，IgG-1、IgG-2、IgG-3、IgG-4、IgA-1、IgA-2)。例如，Fc片段是人IgG-1。本发明的Fc片段可包括例如，重链的CH2和CH3结构域以及铰链区的任何部
分。Fc区可任选地在本领域技术人员已知的任何适当的一个或多个氨基酸残基处糖基化。
特别地，融合多肽的Fc片段具有SEQ ID NO:20的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:20具有至少
50％(例如，55％、60％、65％、70％、75％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、
88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更多)序列同一性。
工程化的，例如，非天然存在的Fc区可用于本发明的方法中，例如，如国际申请公布号
WO2005/007809中所述，其据此以引用的方式并入。相对于本文所述的任何Fc片段，如本文
所述的Fc片段可具有1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、25、30、
35、40、50或更多个添加、删除或取代。

[0201] 本文所述的sALP融合多肽(诸如TNALP，例如SEQ ID NO:1的sALP多肽或与SEQ ID NO:1的序列具有至少95％序列同一性的多肽变体，例如，阿司弗泰斯阿尔法)可包括Fc片段
之间的肽接头区。此外，肽接头区可包括在Fc片段与任选的骨靶向部分之间。接头区可具有
允许sALP保持生物活性，例如，不受空间位阻的任何序列和长度。示例性接头长度在1与200
个氨基酸残基之间，例如，1-5、6-10、11-15、16-20、21-25、26-30、31-35、36-40、41-45、46-
50、51-55、56-60、61-65、66-70、71-75、76-80、81-85、86-90、91-95、96-100、101-110、111-
120、121-130、131-140、141-150、151-160、161-170、171-180、181-190或191-200个氨基酸残基。例如，接头包括柔性部分(例如，没有显著固定的二级或三级结构的区域)或由其组
成。示例性柔性接头是富含甘氨酸(例如含有至少50％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、
90％、95％或甚至100％甘氨酸残基)的接头。接头还可含有例如丝氨酸残基。在一些情况
下，接头的氨基酸序列仅由甘氨酸和丝氨酸残基组成。接头可任选地在任何适当的一个或
多个氨基酸残基处糖基化。另外，如本文所述的接头可包括共价或非共价连接的任何其他
序列或部分。还可不存在接头，其中Fc片段和sALP直接融合在一起，没有中间残基。根据本
公开，可将某些Fc-sALP或sALP-Fc融合多肽视为1)不具有接头，或2)具有对应于sALP的一
部分的接头。例如，可将与hsTNALP(1-502)直接融合的Fc视为，例如，不具有接头，其中
hsTNALP是氨基酸1-502，或具有17个氨基酸的接头，其中hsTNALP(18-502)。

[0202] 根据用于产生融合多肽的克隆策略，可将另外的氨基酸残基引入多肽中。例如，另外的氨基酸残基不提供另外的GPI锚定信号，以便将多肽保持在可溶形式。此外，任何这样
的另外的氨基酸残基，在掺入本发明的多肽中时，不为宿主细胞的内切蛋白酶提供裂解位
点。设计的序列将被宿主细胞的内切蛋白酶裂解的可能性可如，例如由Ikezawa
(Biol.Pharm.Bull.25:409-417,2002)所描述的那样预测。

[0203] 本发明的sALP和sALP融合多肽(诸如TNALP，例如SEQ ID NO:1的sALP多肽或与SEQ ID NO:1的序列具有至少95％序列同一性的多肽变体，例如，阿司弗泰斯阿尔法)可与二聚
体或四聚体相关联。例如，两个sALP-Fc单体可通过位于Fc片段的铰链区中的两个二硫键共
价连接。另外，本发明的多肽或融合多肽(例如，sALP多肽或融合多肽)可以是糖基化或聚乙
二醇化的。

[0204] 核酸和多肽的生产

[0205] 编码本发明sALP和sALP融合多肽(诸如TNALP，例如SEQ ID NO:1的sALP多肽或与SEQ ID NO:1的序列具有至少95％序列同一性的多肽变体，例如，阿司弗泰斯阿尔法)的核
酸可通过本领域已知的任何方法生产。通常，使用分子克隆方法生成编码所需融合多肽的
核酸，并且通常将其置于载体(诸如质粒或病毒)中。载体用于将核酸转换到适于表达融合
多肽的宿主细胞中。代表性方法在例如Maniatis等(Cold Springs Harbor Laboratory,
1989)中公开。许多细胞类型可用作适当的宿主细胞，尽管哺乳动物细胞是优选的，因为它
们能够赋予适当的翻译后修饰。本发明的宿主细胞可包括例如中国仓鼠卵巢(CHO)细胞、L
细胞、C127细胞、3T3细胞、BHK细胞、COS-7细胞或本领域已知的任何其他合适的宿主细胞。
例如，宿主细胞是中国仓鼠卵巢(CHO)细胞(例如，CHO-DG44细胞)。

[0206] sALP和sALP融合多肽(诸如TNALP，例如SEQ ID NO:1的sALP多肽或与SEQ ID NO:1的序列具有至少95％序列同一性的多肽变体，例如，阿司弗泰斯阿尔法)可在适合于在宿主
细胞中实现sALP多肽表达的任何条件下产生。此类条件包括适当选择用组分(诸如缓冲剂、
碳酸氢盐和/或HEPES、离子(如氯化物、磷酸盐、钙、钠、钾、镁、铁)、碳源(如单糖、氨基酸、潜在脂质、核苷酸)、维生素和生长因子(如胰岛素)；常规的可商购获得培养基(如补充2-4mM
L-谷氨酰胺和5％胎牛血清的α-MEM、DMEM、Ham's-F12和IMDM)；常规的可商购获得无动物蛋
白质培养基(如补充有2-4mM L-谷氨酰胺的HycloneTMSFM4CHO、Sigma CHO DHFR-、Cambrex
POWERTMCHO CD))制备的培养基。理想地制备这些培养基而不使用胸苷、次黄嘌呤和L-甘氨
酸，以维持选择压力，从而允许稳定的蛋白质-产物表达。

[0207] 药物组合物和制剂

[0208] 本发明的组合物(例如，包括sALP或sALP融合多肽，诸如TNALP，例如SEQ ID NO:1的sALP多肽或与SEQ ID NO:1的序列具有至少95％序列同一性的多肽变体，例如，阿司弗泰
斯阿尔法)可通过本领域已知的各种方法施用。如本领域技术人员将了解，施用途径和/或
模式将视所需结果而变化。施用途径可取决于多种因素，诸如环境和治疗目的。特别地，本
文所述的多肽和融合多肽可通过本领域已知的任何途径施用，例如，皮下(例如，通过皮下
注射)、静脉内、口服、经鼻、肌肉内、舌下、鞘内或皮内。举例来说，本发明的药物组合物可以是液体、溶液、悬浮液、丸剂、胶囊、片剂、胶囊锭、粉末、凝胶、膏剂、霜膏、星云、雾、雾化蒸气、气溶胶或磷脂复合物的形式。

[0209] 剂量

[0210] 任何量的药物组合物(例如，包括sALP或sALP融合多肽，诸如TNALP，例如SEQ ID NO:1的sALP多肽或与SEQ ID NO:1的序列具有至少95％序列同一性的多肽变体，例如，阿司
弗泰斯阿尔法)可向患有或易患肌肉无力疾病的受试者施用。所述剂量将取决于许多因素，
包括施用模式和患者的年龄。通常，单剂量内含有的组合物(例如，sALP或sALP融合多肽，诸
如TNALP，例如SEQ ID NO:1的sALP多肽或与SEQ ID NO:1的序列具有至少95％序列同一性
的多肽变体，例如，阿司弗泰斯阿尔法)的量将是有效治疗如本文所述的病状(例如，HPP)而
不会引起显著毒性的量。

[0211] 例如，本文所述的sALP多肽(诸如TNALP，例如SEQ ID NO:1的sALP多肽或与SEQ ID NO:1的序列具有至少95％序列同一性的多肽变体，例如，阿司弗泰斯阿尔法)可以例如范围
从0.01mg/kg至500mg/kg(例如，0.05mg/kg至500mg/kg、0.1mg/kg至20mg/kg、5mg/kg至
500mg/kg、0.1mg/kg至100mg/kg、10mg/kg至100mg/kg、0.1mg/kg至50mg/kg、0.5mg/kg至
25mg/kg、1.0mg/kg至10mg/kg、1.5mg/kg至5mg/kg或2.0mg/kg至3.0mg/kg)或1μg/kg至1,
000μg/kg(例如，5μg/kg至1,000μg/kg、1μg/kg至750μg/kg、5μg/kg至750μg/kg、10μg/kg至
750μg/kg、1μg/kg至500μg/kg、5μg/kg至500μg/kg、10μg/kg至500μg/kg、1μg/kg至100μg/kg、5μg/kg至100μg/kg、10μg/kg至100μg/kg、1μg/kg至50μg/kg、5μg/kg至50μg/kg或10μg/kg至50μg/kg)的单个剂量向患有或易患肌肉无力疾病的受试者施用。

[0212] sALP的示例性剂量包括例如0.01、0.05、0.1、0.5、1、2、2.5、5、10、20、25、50、100、125、150、200、250或500mg/kg；或1、2、2.5、5、10、20、25、50、100、125、150、200、250、500、
750、900或1,000μg/kg。对于本文所述的所有剂量或范围，术语“约”可用于将这些剂量修改为所述值或范围端点的±10％。特别地，根据本公开的组合物(例如，包括sALP(诸如TNALP，
例如SEQ ID NO:1的sALP多肽或与SEQ ID NO:1的序列具有至少95％序列同一性的多肽变
体，例如，阿司弗泰斯阿尔法))可以范围从约0.001mg/kg/天至约500mg/kg/天、约0.01mg/
kg/天至约100mg/kg/天或约0.01mg/kg/天至约20mg/kg/天的剂量向患者施用。例如，sALP
组合物(诸如TNALP，例如SEQ ID NO:1的sALP多肽或与SEQ ID NO:1的序列具有至少95％序
列同一性的多肽变体，例如，阿司弗泰斯阿尔法)可以例如范围从约0.5mg/kg/周至约
140mg/kg/周，例如约0.8mg/kg/周至约50mg/kg/周，或约1mg/kg/周至约10mg/kg/周(例如
约6或约9mg/kg/周)的周剂量向患者施用。特别地，sALP(诸如TNALP，例如SEQ ID NO:1的
sALP多肽或与SEQ ID NO:1的序列具有至少95％序列同一性的多肽变体，例如，阿司弗泰斯
阿尔法)可以2mg/kg，每周3次(总剂量6mg/kg/周)、1mg/kg，每周6次(总剂量6mg/kg/周)、
3mg/kg，每周3次(总剂量9mg/kg/周)、0.5mg/kg，每周3次(总剂量1.5mg/kg/周)，或9.3mg/
kg，每周3次(总剂量28mg/kg/周)的剂量施用。所述剂量将由临床医生根据常规因素(诸如
疾病的程度和来自患有或易患肌肉无力疾病的受试者的不同参数)来调整。

[0213] 包括sALP和sALP融合多肽(诸如TNALP，例如SEQ ID NO:1的sALP多肽或与SEQ ID NO:1的序列具有至少95％序列同一性的多肽变体，例如，阿司弗泰斯阿尔法)的组合物的剂
量可以单剂量或多剂量方案提供。剂量可例如，每小时、每两小时、每天、每两天、每周两次、每周三次、每周四次、每周五次、每周六次、每周、每两周、每月、每两个月或每年施用。可替代地，剂量可每天施用例如，2次、3次、4次、5次、6次、7次、8次、9次、10次、11次或12次。特别地，给药方案是每周一次。给药方案的持续时间可以是例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、
13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30天、周或月或者甚至患有或易患肌肉无力疾病的受试者的剩余寿命。剂量的量、频率和持续时间将由临床医生根据常
规因素(诸如疾病的程度和来自患有或易患肌肉无力疾病的受试者的不同参数)来调整。

[0214] 例如，sALP或sALP融合多肽(诸如TNALP，例如SEQ ID NO:1的sALP多肽或与SEQ ID NO:1的序列具有至少95％序列同一性的多肽变体，例如，阿司弗泰斯阿尔法)可配制成注射
溶液，其是一种透明、无色至微黄色的水性溶液，pH为7.4。sALP或sALP多肽(诸如TNALP，例
如SEQ ID NO:1的sALP多肽或与SEQ ID NO:1的序列具有至少95％序列同一性的多肽变体，
例如，阿司弗泰斯阿尔法)可配制成浓度为12mg/0.3mL、18mg/0.45mL、28mg/0.7mL、40mg/
1ml或80mg/0.8mL。特别地，所述组合物可配制成40mg/ml注射溶液，其中每ml溶液含有40mg
sALP或sALP多肽(例如，每个小瓶含有0.3ml溶液和12mg sALP(40mg/ml)，每个小瓶含有
0.45ml溶液和18mg sALP(40mg/ml)，每个小瓶含有0.7ml溶液和28mg sALP(40mg/ml)，或每
个小瓶含有1.0ml溶液和40mg阿司弗泰斯阿尔法(40mg/ml))。sALP或sALP多肽(诸如TNALP，
例如SEQ ID NO:1的sALP多肽或与SEQ ID NO:1的序列具有至少95％序列同一性的多肽变
体，例如，阿司弗泰斯阿尔法)可配制成浓度为100mg/ml的注射溶液，其中每1ml溶液含有
100mg sALP或sALP多肽(例如，每个小瓶含有0.8ml溶液和80mg阿司弗泰斯阿尔法(100mg/
ml))。

[0215] 例如，sALP或sALP融合多肽(诸如TNALP，例如SEQ ID NO:1的sALP多肽或与SEQ ID NO:1的序列具有至少95％序列同一性的多肽变体，例如，阿司弗泰斯阿尔法)的推荐剂量是
每周皮下施用3次2mg/kg体重，或者每周皮下施用6次1mg/kg体重的剂量方案。以下提供了
另外的剂量信息(表1)。

[0216] 表1.阿司弗泰斯阿尔法的剂量

[0217]

[0218] 制剂

[0219] 包括sALP和sALP融合多肽(诸如TNALP，例如SEQ ID NO:1的sALP多肽或与SEQ ID NO:1的序列具有至少95％序列同一性的多肽变体，例如，阿司弗泰斯阿尔法)的组合物可根
据标准方法配制。药物配制是沿用已久的领域，并且进一步描述于例如Gennaro(2000)
“Remington:The Science and Practice of Pharmacy,”第20版,Lippincott,Williams&
Wilkins(ISBN:0683306472)；Ansel等(1999)“Pharmaceutical Dosage Forms and Drug
Delivery Systems,”第7版,Lippincott Williams&Wilkins Publishers(ISBN:
0683305727)；和Kibbe(2000)“Handbook of Pharmaceutical Excipients American
Pharmaceutical Association,”第3版(ISBN:091733096X)。例如，sALP组合物(诸如TNALP，
例如SEQ ID NO:1的sALP多肽或与SEQ ID NO:1的序列具有至少95％序列同一性的多肽变
体，例如，阿司弗泰斯阿尔法)可配制成例如浓度合适并适于在2℃-8℃(例如4℃)下储存的
缓冲溶液。组合物还可配制用于在低于0℃(例如，-20℃或-80℃)的温度下储存。组合物可
进一步配制用于在2℃-8℃(例如，4℃)下储存长达2年(例如，1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月、1年、1.5年或2年)。因此，本文所述的组合物在2℃-8℃(例如，4℃)下可在至少1年的储存中是稳定的。

[0220] 包括sALP和sALP融合多肽(诸如TNALP，例如SEQ ID NO:1的sALP多肽或与SEQ ID NO:1的序列具有至少95％序列同一性的多肽变体，例如，阿司弗泰斯阿尔法)的组合物可以
是多种形式的。这些形式包括例如液体、半固体和固体剂型，诸如液体溶液(例如可注射和
可输注溶液)、分散液或混悬液、片剂、丸剂、粉末、脂质体和栓剂。优选形式部分取决于意图施用模式和治疗应用。

[0221] 例如，意图用于全身或局部递送的组合物可以是可注射或可输注溶液的形式。因此，组合物(诸如TNALP，例如SEQ ID NO:1的sALP多肽或与SEQ ID NO:1的序列具有至少
95％序列同一性的多肽变体，例如，阿司弗泰斯阿尔法)可配制用于通过肠胃外模式(例如，
皮下、静脉内、腹膜内或肌肉内注射)施用。如本文所用，“肠胃外施用”、“肠胃外进行施用”和其他语法上等同的短语是指除肠内和局部施用之外的施用模式，通常通过注射，并且包
括但不限于皮下、皮内、静脉内、鼻内、眼内、肺、肌肉内、动脉内、鞘内、囊内、眶内、心内、皮内、肺内、腹膜内、经气管、表皮下、关节内、包膜下、蛛网膜下、脊柱内、硬膜外、脑内、颅内、颈动脉内和胸骨内注射和输注。

[0222] 包括sALP和sALP融合多肽(诸如TNALP，例如SEQ ID NO:1的sALP多肽或与SEQ ID NO:1的序列具有至少95％序列同一性的多肽变体，例如，阿司弗泰斯阿尔法)的组合物可配
制成溶液、微乳液、分散体、脂质体或适于在高浓度下稳定储存的其他有序结构。无菌可注
射溶液可通过将所需量的本文所述组合物在适当溶剂中与以上列举成分中的一种或其组
合(需要时)合并，随后过滤除菌来制备。总体上，分散液通过将本文所述组合物并入无菌媒
介物中来制备，所述媒介物含有基本分散介质和来自以上列举的那些成分的所需其他成
分。在用于制备无菌可注射溶液的无菌粉末的情况下，制备方法包括真空干燥和冷冻干燥，
从而产生本文所述组合物的粉末加上来自其先前无菌过滤溶液的任何另外所需成分(参见
下文)。溶液的适当流动性可例如通过使用涂料(诸如卵磷脂)，在分散液的情况下通过维持
所需粒度以及通过使用表面活性剂来维持。可注射组合物的延长吸收可通过在组合物中包
含延迟吸收的试剂(例如单硬脂酸盐和明胶)来实现。

[0223] 本文所述的组合物还可配制在免疫脂质体组合物中。此类制剂可通过本领域已知的方法(例如像，描述于Epstein等(1985)Proc Natl Acad Sci USA 82:3688；Hwang等
(1980)Proc Natl Acad Sci USA 77:4030；以及美国专利号4,485,045和4,544,545中的方
法)来制备。循环时间增加的脂质体公开于美国专利号5,013,556中。

[0224] 包括sALP和sALP融合多肽(诸如TNALP，例如SEQ ID NO:1的sALP多肽或与SEQ ID NO:1的序列具有至少95％序列同一性的多肽变体，例如，阿司弗泰斯阿尔法)的组合物还可
用载体(诸如控释制剂，包括植入物和微囊化递送系统)配制，所述载体将保护组合物(例
如，sALP多肽或sALP融合多肽)免于快速释放。可使用可生物降解、生物相容的聚合物，诸如
乙烯乙酸乙烯酯、聚酐、聚乙醇酸、胶原、聚原酸酯以及聚乳酸。用于制备此类制剂的许多方
法是本领域已知的。参见例如，J.R.Robinson(1978)“Sustained and Controlled Release
Drug Delivery Systems,”Marcel Dekker,Inc.,New York。

[0225] 当组合物与第二活性剂组合使用时，组合物可与第二药剂共同配制，或者组合物可与第二药剂制剂分开配制。例如，各药物组合物可在例如，施用之前混合并且一起施用或
者可例如，在相同或不同的时间分开施用。

[0226] 包括sALP和sALP融合多肽(诸如TNALP，例如SEQ ID NO:1的sALP多肽或与SEQ ID NO:1的序列具有至少95％序列同一性的多肽变体，例如，阿司弗泰斯阿尔法)的组合物可配
制用于连同静脉内丙种球蛋白疗法(IVIG)、血浆除去法、血浆置换或血浆交换一起向患者
施用，或者如果向胎儿施用，则向携带此类胎儿的女性施用。

[0227] 载体/媒介物

[0228] 含有sALP或sALP融合多肽(诸如TNALP，例如SEQ ID NO:1的sALP多肽或与SEQ ID NO:1的序列具有至少95％序列同一性的多肽变体，例如，阿司弗泰斯阿尔法)的制剂与药学
上可接受的无菌水性或非水性溶剂、悬浮液或乳液组合提供给患有或易患肌肉无力疾病的
受试者。非水性溶剂的实例是丙二醇、聚乙二醇、植物油、鱼油以及可注射的有机酯。水性载
体包括水、水醇溶液、乳液或混悬液，包括盐水和缓冲医药肠胃外媒介物，其包括氯化钠溶
液、林格氏(Ringer's)葡萄糖溶液、葡萄糖加氯化钠溶液、含乳糖的林格氏溶液，或不挥发
性油类。例如，药学上可接受的载体可包括氯化钠和/或磷酸钠，其中组合物包括例如约
150mM氯化钠和/或约25mM磷酸钠，pH为7.4。

[0229] 静脉内媒介物可包括体液和营养补充物、电解质补充物，诸如基于林格氏葡萄糖的补充物等。其中可包括药学上可接受的盐，例如，无机酸盐，诸如盐酸盐、氢溴酸盐、磷酸
盐、硫酸盐等；有机酸盐诸如乙酸盐、丙酸盐、丙二酸盐、苯甲酸盐等。另外，此类媒介物中可存在辅助物质，诸如湿润剂或乳化剂、pH缓冲物质等。药学上可接受的载体的详尽讨论在
Remington's Pharmaceutical Sciences(Mack Pub.Co.,N.J.1991)中可得。

[0230] 以下实施例旨在说明，而不是限制本公开。

[0231] 实施例

[0232] 实施例1.AKP2-/-小鼠研究

[0233] AKP2-/-敲除小鼠通过灭活基因AKP2产生，AKP2基因编码人组织非特异性碱性磷酸酶(TNSALP)的小鼠对应物。AKP2-/-敲除小鼠已被用作人HPP的模型，其重现在婴儿期发作的
HPP(Narisawa等Dev Dyn.1997；208:432-446)。此实施例总结了与野生型(WT)小鼠相比检
测AKP2-/-小鼠中肌肉纤维组成和强度的效果，并确定了阿司弗泰斯阿尔法在校正AKP2-/-小
鼠的肌肉无力表型方面的效果。

[0234] 具体地，检查了比目鱼肌和趾长伸肌(EDL)肌肉。为了确定肌肉纤维组成，测量或检测了纤维尺寸和类型。如先前所述(参见Barton等2005J Orthop Res.23:259-265；
Barton等2012Faseb J.26:3691-3702；和Evans等2008Physiol.Genomics 35:86-95)，收获
肌肉、切片并且使用识别层粘连蛋白或肌球蛋白重链I、IIa或IIB的抗体使其经受免疫组织
化学检测。使用OpenLab软件在Leica DMR落射荧光显微镜上进行图像采集。使用MatLAB测
定纤维大小和类型，其中层粘连蛋白信号限定每个肌肉纤维的边界，并且抗肌球蛋白抗体
检测纤维类型。

[0235] 为了确定肌肉纤维强度，在出生后约2周监测小鼠比目鱼肌和EDL肌肉的收缩特性。待测量的特性包括：在超大刺激电流下使用120和100Hz的最大力生成能力；比力(每横
截面积的力；经由钙调控和/或纤维类型差异的力频率；以及使用每1秒330毫秒刺激持续时
间(33％占空比)的疲劳。通过将解剖的肌肉暴露于PPi浓度范围(例如，2、4、8和10μM)来测
量PPi水平对比目鱼肌和EDL肌肉的收缩功能的影响。在一个示例性实验中，将第1组肌肉暴
露于1和8μM或4和10μM，并且将第2组肌肉暴露于4和8μM或2和10μM。

[0236] 结果，在来自AKP2-/-小鼠的比目鱼肌肌肉与来自野生型(WT)小鼠的比目鱼肌肌肉之间未观察到纤维类型比例的差异(图1)。与来自野生型(WT)小鼠的肌肉相比，AKP2-/-肌肉
-/-
总之具有更小的纤维(图2)。例如，AKP2 肌肉具有更大百分比的短尺寸(例如，小于260μ
m2)的I型纤维(图2B)、IIa型纤维(图2C)和IIb型纤维(图2D)。有趣的是，AKP2-/-肌肉具有小
的较大肌球蛋白IIb纤维群体，而野生型肌肉缺乏此类纤维(图2D)。可解释这一点的一个因
素是比目鱼肌肌肉内小比例(约2％)的IIb纤维。成熟的比目鱼肌肌肉很少具有IIb纤维，但
未成熟肌肉比成熟肌肉具有更快的肌肉表型，并且因此残留的IIb纤维在这个年龄仍明显。
总之，AKP2-/-小鼠具有较小的纤维，其中纤维类型没有明显改变。

[0237] 对来自2周龄AKP2-/-小鼠和WT对照的EDL和比目鱼肌肌肉进行分离的肌肉功能测试。对雄性和雌性两者均进行了测试，以区分依赖于性别的力生成的任何差异。

[0238] 在超大刺激电流下，使用120和100Hz对EDL和比目鱼肌测试最大力生成能力。确定所有肌肉的比力(每横截面积的力)。不同菌株或不同性别之间的强度没有统计学差异。力
频率关系还被确定为钙调控和/或纤维类型差异的评估。各组之间没有明显差异。还使用每
1秒330毫秒刺激持续时间(33％占空比)，进行了疲劳测试。各组之间没有明显差异。如图3
所示，在来自AKP2-/-小鼠的比目鱼肌肌肉与来自野生型(WT)小鼠的比目鱼肌肌肉之间未观
察到质量(图3A)、强度(图3B)、力频率(图3C)或疲劳参数(图3D)的差异。类似地，在来自
AKP2-/-小鼠的EDL肌肉与来自野生型(WT)小鼠的EDL肌肉之间未观察到质量(图4A)、强度
(图4B)、力频率(图4C)或疲劳参数(图4D)之间的差异。注意，对于频率和疲劳的附图，为清
楚起见，未显示误差条。虽然疲劳和力频率结果的N很低(N＝3)，但各组之间缺乏任何明显
的差异表明确实没有差异。此结果与先前测量的纤维类型分布一致(图2)。

[0239] HPP患者、CPPD患者和AKP2-/-小鼠在其循环中均具有升高的PPi。因此，这些升高的水平可能与肌肉达到平衡。然后测试PPi浓度对肌肉收缩功能的影响。使用10μM PPi进行初
步研究，而野生型(WT)肌肉在暴露于10μM PPi时表现出可逆的力产生损失。然后测试高PPi
对来自WT和AKP2-/-小鼠的肌肉中力的影响，测试一系列浓度(2、4、8、10μM)以排除
(bracket)AKP2-/-小鼠和HPP患者中发现的生理学水平。测试初始肌肉群组的2和8μM，或4和
10μM PPi浓度。在4和8或2和10μM下测试第二肌肉群组。首先在正常林格氏溶液(Ringers
solution)中测试肌肉，随后在两个测试条件下各测试30分钟，并且最后回到正常林格氏。
-/-
丢弃来自未回到正常林格氏中的初始力值的肌肉的数据。如图5B所示，来自AKP2 小鼠的
EDL肌肉比来自野生型(WT)小鼠的EDL肌肉对升高的PPi更敏感。例如，超过4μM PPi降低了
来自AKP2-/-小鼠的EDL肌肉的相对力，而来自野生型(WT)小鼠的EDL肌肉的相对力没有显著
变化，除非PPi浓度为至少10μM(图5B))。相反，来自AKP2-/-小鼠和野生型(WT)小鼠的比目鱼
肌肌肉对升高的PPi敏感程度类似(图5A)。

[0240] 可进行将来的实验来探索PPi的影响。例如，在升高的PPi中，力频率或易疲劳性可改变，从而加剧无力。如果要这样做，使用单个PPi浓度(例如，8μM)将简化研究。

[0241] 然后向AKP2-/-小鼠施用阿司弗泰斯阿尔法，以确定在AKP2-/-小鼠中降低的肌肉力与增加的PPi循环水平之间是否存在相关性，并且在校正相关表型方面评价阿司弗泰斯阿
尔法功效。由于未治疗的AKP2-/-小鼠通常在约12日龄时死亡(如果补充有吡哆醇，则寿命可
延长至18-20天，但仍不足以进行肌肉测量)并且太小而无法体内测量肌肉力，因此难以使
用未治疗的AKP2-/-小鼠作为对照来分析阿司弗泰斯阿尔法的治疗效果。相反，使用了戒断
实验。具体地，从出生直至35日龄用阿司弗泰斯阿尔法治疗AKP2-/-小鼠。此时，使一些小鼠
戒断治疗，并且测量它们的PPi浓度和肌肉力，并与接受持续治疗的小鼠进行比较。整个研
究设计总结如下：

[0242] 表2.使用并行和随机对照研究设计的开放标签治疗。

[0243]

[0244] WT：表示AKP2-/-小鼠的野生型同窝出生

[0245] 从出生当天至出生后第35天，每日一次向AKP2-/-小鼠皮下(SC)施用8.2mg/kg的阿司弗泰斯阿尔法。然后，一半的敲除小鼠在相同的剂量方案中继续接受阿司弗泰斯阿尔法
的皮下施用，而另一半在相同的剂量方案中接受对照媒介物的皮下施用。在第42天，测试
AKP2-/-小鼠组以及未治疗的野生型(WT)C57BL/6-129J小鼠组两组的抓握力。

[0246] 进行了五次试验。在这些试验中取平均评分并将其归一化至体重。测量并比较野生型小鼠(WT)、接受连续治疗的AKP2-/-小鼠(Tx-Tx)和第35天后停止治疗的AKP2-/-小鼠
-/-
(Tx-V))的前肢和后肢的抓握强度。与第35天后停止治疗的AKP2 小鼠(Tx-V)相比，接受连
续治疗的AKP2-/-小鼠(Tx-Tx)对于前肢和后肢两者均展示出更强的抓握强度，这证明了连
续阿司弗泰斯阿尔法治疗对肌肉无力疾病的有益作用(图6)。

[0247] 这些小鼠研究表明，小鼠模型中存在肌肉无力(在HPP中观察到)。更令人惊讶的是，他们认为HPP中的肌肉无力可能不归因于骨缺陷(其被认为是HPP的特征性特征)，因为
在野生型(WT)小鼠与AKP2-/-小鼠之间没有观察到其离体比目鱼肌纤维类型比例或比目鱼
肌或EDL肌肉收缩特性方面的差异，甚至AKP2-/-小鼠具有一定程度的较小肌肉纤维。相反，
HPP中的肌肉无力与升高的PPi浓度更相关，因为通过施用阿司弗泰斯阿尔法减少PPi改善
了AKP2-/-小鼠肌肉抓握强度。因此，具有以升高的PPi浓度为特征的肌肉无力疾病的人患
者，即使没有其他HPP症状或尚未被诊断为HPP，仍可通过阿司弗泰斯阿尔法治疗。类似地，
患有或易患其他肌肉无力疾病的患者，诸如CPPD患者和家族性低磷酸盐血症患者，还可由
通过施用阿司弗泰斯阿尔法降低升高的PPi或其他碱性磷酸酶底物(例如，PLP、PEA等)来治
疗。

[0248] 实施例2.治疗人肌肉无力

[0249] 如上述AKP2-/-敲除小鼠的研究所示，升高的PPi循环水平(归因于碱性磷酸酶活性降低)与降低的肌肉力之间存在相关性。这种相关性还可能存在于HPP患者中。阿司弗泰斯
阿尔法治疗还可有效校正HPP患者或患有其特征在于低碱性磷酸酶活性和/或升高的PPi浓
度(诸如CPPD和/或家族性低磷酸盐血症)的其他肌肉无力疾病的患者的肌肉无力表型。该
实施例公开了鉴定患有具有低碱性磷酸酶活性和/或升高的PPi浓度的肌肉无力疾病(例
如，HPP、CPPD、家族性低磷酸盐血症等)的患者亚群的方法，和用阿司弗泰斯阿尔法治疗或
改善这种亚群中患者的肌肉无力表型的方法。如果具有增加的PPi浓度(或增加的至少一种
碱性磷酸酶底物(诸如PLP和PEA)浓度)和肌肉无力表型(例如，肌肉力损失)，则患者可被鉴
定为这种亚群之一。另外，患者可被鉴定为具有低碱性磷酸酶浓度(表4)。

[0250] 表3.女性和男性按年龄分组的低和正常碱性磷酸酶浓度。

[0251]

[0252] 肌肉无力疾病或表型的鉴定可使用本领域已知的常规技术进行。在这样的患者中测量PPi(或PLP、PEA或其他碱性磷酸酶底物)浓度也可使用本领域已知的常规技术进行，并
且与正常受试者或没有这种肌肉无力疾病或表型的受试者的PPi浓度进行比较(表3)。然后
可通过此比较鉴定升高的PPi浓度。

[0253] 表4.婴儿和儿童、青少年和成人中焦磷酸盐(PPi)水平的正常范围。

[0254]类别年龄样品(N) 范围(μM)
婴儿和儿童 <12 100 1.33–5.71
青少年 13-18 120 <0.75–4.78
成人 >18 120 1.00–5.82

[0255] 更常见的是，测量血清或血浆中碱性磷酸酶活性的水平，并且与年龄和性别调整的标准数据进行比较。对鼠比目鱼肌和鼠EDL肌肉进行AKP2-/-敲除小鼠研究，以便了解肌张
力减退的潜在病因，如果在人体中进行，这将被认为是过度侵入性测试。另外，由于鼠肌肉
组织是生理学塑料，因此预期来自鼠肌肉的数据比相应的人肌肉组织受到的影响更小。因
此，鼠响应的小变化将与人肌肉组织中的较大响应相关。此外，由于PPi不是可商购获得的
测定，因此碱性磷酸酶活性是PPi水平的可接受的替代标记(并且是反相关的)。

[0256] 可测试相同或不同的肌肉用于诊断动物或人的肌肉无力疾病或表型。例如，可测试其他骨骼肌或横纹肌、或心肌或平滑肌的各种特性。例如，可用本领域已知的方法测试肌
肉(例如，腓肠肌和跟腱)的被动机械特性(例如，跟骨节段特性)。还可测试肌肉硬度的粘弹
性特性。

[0257] 先前已显示阿司弗泰斯阿尔法有效用于治疗HPP患者，并且建议皮下施用剂量为3、6或9mg/kg/周，每周三次或每天一次。在如实施例1中所示的类似研究后，可给予HPP患
者、CPPD患者或没有HPP的低磷酸盐血症患者相同的剂量方案，或不同的剂量方案，以治疗
肌肉无力表型。为了测试治疗效果，可使用多个端点。在HPP治疗中使用的一些此类端点包
括例如，布鲁茵因克斯-欧西瑞斯运动能力测试第2版(BOT-2)、放射摄影总体变化印象
(RGI-C)量表(7分量表，其中评级为-3表示严重恶化并且评级为+3表示接近或完全愈合)、
Bayley婴幼儿发育量表，第3版(BSID-III)、儿童健康评估问卷(CHAQ)、儿科结果数据收集
工具测试(PODCI)、Peabody发育运动量表，第2版(PDMS-2)、六分钟行走测试(6MWT)、12点以
绩效为导向的移动性评估(POMA-G)、改进的以绩效为导向的移动性评估(mPOMA-G，诸如
Phillips等，2015Bone Abstracts 4:P136中所示的那种)，以及本领域已知的其他方法或
测试。初治患者和已施用其他碱性磷酸酶疗法的患者两者均可用阿司弗泰斯阿尔法或具有
碱性磷酸酶活性的其他相关多肽来治疗。

[0258] 实施例3.治疗患者1的肌肉无力

[0259] 患者被鉴定为患有肌张力减退结合低ALP(与高PPi相关)、升高的PLP和升高的尿PEA。一名6岁的患者出现病因不明的肌张力减退。患者的另外病状包括小脑萎缩、轴突感觉
和运动周围多发性神经病以及发育迟缓，其中临床和生化结果支持低磷酸酯酶症(HPP)的
诊断。患者自从出生就接受了持续的物理疗法，并且在没有支持的情况下从未能行走，并全
时使用轮椅。患者不能自己进食，是G管依赖性的，并且仅能自进给啜饮牛奶，并显示出接受
性和表达性语言延迟两者。

[0260] 初始的内分泌评估是多学科肌肉营养不良临床的一部分，其中患者在整个就诊期间没有说一个单词，并且仅使用了基于计算机的通信设备。除了在神经学评估期间患者能
够重复的几个单词之外，多位医生确认基本上没有话语输出。患者使用普米克雾化器
(pulmicort nebulizer)。初始的实验室结果是：ALP 149(正常150-420U/L)；PLP 172.4(正
常范围20-125nnmol/L)；和尿PEA 180(正常0-106nmol/mgCr)。

[0261] 在患者首次就诊后三个月开始以6mg/kg/周进行皮下阿司弗泰斯阿尔法注射。在三个月的随访预约时，父母报告说，自从开始治疗，患者站立时似乎有更高的强度，并且通
过开始使用助行器从轮椅上站起了。虽然患者仍需要大量支持，但患者显示出体重承受能
力有所改善。患者能够移动她的腿并且显示出一些具有相当好的强度的上肢的使用。总体
上，注意到患者躯干和颈部的姿势控制得到了改善。这些改善归因于患者在整体肌肉张力
和肌肉强度方面的整体改善，证实了由体外鼠数据生成的假设。

[0262] 多位医疗专业人员和父母注意到患者言语的显著增加。还注意到患者的整体语言习得的改善，包括使用更多的词，并且将词组合在一起形成简单的句子。患者的发言能力增
强还可能是响应于治疗的肌肉张力和强度改善的结果。

[0263] 具体地，3个月的随访预约注意到阿司弗泰斯阿尔法治疗后的以下改善：提高生长速率(5.8cm/年，相比之下，治疗之前为1.3cm/年)；提高强度；改善言语，即自发地说话，并
且甚至形成简单的句子；并且将腰椎内的骨矿物质密度改善0.5SD。

[0264] 患者在开始阿司弗泰斯阿尔法治疗之前的一个月内失去了两颗牙齿。在放射摄影发现中，手腕的X射线显示骨矿化减少，但在正常情况下，膝盖的X射线显示骨矿物质密度降
低、骨骼细小和胫骨骨骺异常。患者显示出低骨矿物质密度的证据。在基线处，DXA扫描显示
腰椎和去头外全身的Z-评分分别为-4.6和-3.3。在开始阿司弗泰斯阿尔法后3个月进行重
复DXA扫描示出改善0.5SD的LBD Z-评分，尽管Z-评分仍较低。腰椎和去头外全身的BMD Z-
评分分别为-4.1和-3.3。在开始治疗后约一个月患者发生肱骨特发性骨折；继续使用阿司
弗泰斯阿尔法治疗，并且骨折愈合良好。肾脏超声和眼科检查在基线处是正常的。

[0265] 实施例4.治疗患者2的肌肉无力

[0266] 第二患者被鉴定为患有肌张力减退结合低ALP(与高PPi相关)、升高的PLP和升高的尿PEA。还注意到一名出现染色体复制、发育迟缓、自闭症谱系障碍(阿斯伯格综合征
(Asperger's syndrome))和感觉处理困难的12岁患者具有为90U/L(正常范围141-460)的
低ALP水平。重复水平再次低至91(在4天后测试)。患者很容易疲倦，即在涉及最少行走的正
常生活活动期间需要休息，并且不能长途行走。患者还抱怨肩部、上背部和其他区域的模糊
疼痛。患者表示他们有时会在疼痛和肩膀疼痛中醒来并且腿部不断疼痛。

[0267] 患者没有过早缺失牙齿或骨折的病史。初始的职业疗法评估指出精细运动评分为13(第1百分位数)。响应速度的年龄等效性为6.2岁。视觉运动控制显示多年延迟，即7.9岁
水平。对于上肢速度和灵巧性，患者为4.7岁水平。然而，对于牙齿缺失，家族史显示父母一
方在21岁时就开始佩戴假牙，并且类似地，外祖父母也过早缺失恒牙，并且在年轻时就佩戴
假牙。发现母亲的ALP水平为50U/L(实验室的参考范围为40-150)。患者的初始实验室结果
是：ALP 82(正常150-420U/L)；PLP 210(正常范围20-125nmol/L)；和尿PEA 46(正常0-
44nmol/mgCr)。

[0268] 虽然患者没有过过早牙齿缺失的历史，但一些家庭成员确实显示过早牙齿缺失。放射摄影分析显示正常的手腕和膝盖X射线。通过DXA扫描的骨矿物质密度分析显示正常
BMD(L1-L4Z-评分2.1，TBLH Z-评分2.4)。患者没有骨折史。患者报告在不同时间存在于多
个部位的疼痛，包括足以扰乱睡眠的频繁腿部疼痛、站立/行走5-10分钟的足底面的疼痛、
疲劳四肢的紧张/疼痛、双侧膝疼痛以及模糊的肩膀/胸疼痛。肾脏超声未揭示肾钙质沉着
症。患者一致测量为高度的90％百分位数和体重的92％百分位数。

[0269] 患者在完全休息时没有明显的身体活动损伤，然而，在步行超过两分钟后，展示出归因于背屈无力的膝控制受损的四肢疲劳和双侧足部拍打。患者能够脚趾行走，但试图脚
跟步行时展示出显著的补偿。患者初始的六分钟行走测试是320米，明显低于年龄/性别标
准＝672+55米。继发于疲劳，患者需要两次靠在墙壁上的站立休息。患者展示出逐渐增加的
步态障碍，包括归因于背屈无力的四肢疲劳和足部拍打，以及6MWT后需要坐姿休息。患者在
锻炼时遇到麻烦，并且容易变得喘不过气。

[0270] 患者以6mg/kg/周开始皮下阿司弗泰斯阿尔法注射，并且在治疗4个月后重新评估。总体上，患者显示出多项改善，包括强度、敏捷性和耐力。患者的6分钟行走测试改善至
597米(从320米的初始值开始)。总体上，在治疗后，患者具有小得多的疼痛(10分中的2分，
而不是先前随访中报告的10分中的5分)和改善的移动性。这些改善归因于患者在整体肌肉
张力和肌肉强度方面的整体改善，证实了由体外鼠数据生成的假设。

[0271] 其他实施方案

[0272] 以上说明书中提及的所有公布、专利和专利申请均据此全文以引用方式并入，所述引用的程度就如同已特定地和个别地指示将各个别公布、专利或专利申请以引用的方式
并入一般。本发明的所述方法、药物组合物和试剂盒的各种改进和变化对于本领域技术人
员是显而易知的，并且不背离所要求保护的本发明的范围和精神。虽然已结合特定实施方
案描述了本公开，但应理解，其能够进一步修改，并且要求保护的本发明不应不适当地局限
于所述特定实施方案。

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用碱性磷酸酶治疗肌肉无力

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