位选择性地成酯，紧接着钯催化脱除AOC，最后于核苷类药物5’-位氨基酸酯的区域选择性合酸性条件下脱除Boc并成相应的盐。本发明的方成方法法具有收率高，所得产物易于分离纯化，更适合专利检索-选择发明发明专利权专利检索查询-专利查询网

位选择性地成酯，紧接着钯催化脱除AOC，最后于核苷类药物5’-位氨基酸酯的区域选择性合酸性条件下脱除Boc并成相应的盐。本发明的方成方法法具有收率高，所得产物易于分离纯化，更适合

阅读：735发布：2020-05-11

专利汇可以提供位选择性地成酯，紧接着钯催化脱除AOC，最后于核苷类药物5’-位氨基酸酯的区域选择性合酸性条件下脱除Boc并成相应的盐。本发明的方成方法法具有收率高，所得产物易于分离纯化，更适合专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本发明涉及结构特征如通式I所示的核苷类药物5'-位氨基酸酯及其在药学上可接受盐的区于工业化生产的优点。域选择性合成方法。其中Base,R，R2，R3如说明书定义，该方法通过利用三芳基甲基(Ar3C-)选择性地保护核苷类药物5'-位羟基，然后利用烯丙氧羰基(allyloxycarbonyl,AOC)保护核苷类药物碱基部分及糖结构部分中的其余所有活性位点，再酸性下选择性脱除三芳基甲基，进而与Boc保护的氨基酸缩合、在核苷类药物分子中的5'-，下面是位选择性地成酯，紧接着钯催化脱除AOC，最后于核苷类药物5’-位氨基酸酯的区域选择性合酸性条件下脱除Boc并成相应的盐。本发明的方成方法法具有收率高，所得产物易于分离纯化，更适合专利的具体信息内容。

权利要求

1.核苷类药物5'-位氨基酸酯的区域选择性合成方法，其特征在于，利用三芳基甲基选择性地保护核苷类药物5'-位羟基，然后利用烯丙氧羰基保护核苷类药物碱基部分及糖结构部分中的活性位点，再酸性下选择性脱除三芳基甲基，进而与Boc保护的氨基酸缩合、在核苷类药物分子中的5'-位选择性地成酯，然后钯催化脱除烯丙氧羰基，最后于酸性条件下脱除Boc并成相应的盐，具体步骤如下：
(1)通式VII与三芳基甲基化试剂成醚制得通式VI；
(2)通式VI与烯丙氧羰基化试剂缩合制得通式V；
(3)通式V在酸性条件下选择性脱除5'-位三芳基甲基保护基团制得通式IV；
(4)通式IV与相应的Boc保护的α-氨基酸缩合成酯制得通式III；
(5)通式III在均相钯催化条件下脱除所有的AOC保护基而制得通式II；
(6)通式II于酸性条件下、常规方法脱除Boc而制得通式I相应的盐；
其中：
通式I～VII结构式分别为：

其中，碱基Base部分为天然的嘧啶碱基类、嘌呤碱基类、或它们的结构修饰型碱基类；X为碳原子、氧或硫原子；式VII、VI、I、II中的R2或R3为羟基，并以R-型或S-型中的任一构型存在，式V-III中的R2或R3为烯丙氧羰基保护的羟基；5'-位的RCH(NH2)COO-酯键部分的氨基酸来自于各种天然或人工改造的α-氨基酸RCH(NH2)COOH，其中氨基酸为甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、丁氨酸，并以L-型、D-型或消旋体形式存在。
2.根据权利要求1所述的合成方法，其特征在于，获得碱基核苷的5'-位氨基酸酯及其药用盐。
3.根据权利要求2所述的合成方法，其特征在于，所述的盐为2'-去氧-2'-氟-2'-C-甲基胞苷的5'-位氨基酸酯双盐酸盐。
4.根据权利要求1所述的合成方法，其特征在于，步骤(1)中，所述的三芳基甲基化试剂为三苯甲基氯、三氟甲磺酸三苯甲酯、二(对甲氧苯基)苯基甲基氯、三对甲氧苯基甲基氯。
5.根据权利要求1所述的合成方法，其特征在于，步骤(1)或(2)在碱性条件下进行，反应所用的碱为有机碱或无机碱，所述的有机碱为吡啶、二甲氨基吡啶、三乙胺、二异丙基乙基胺或N,N-二甲基苯胺，无机碱为碳酸钠、碳酸钾、碳酸氢钠、碳酸氢钾、氢氧化钠或氢氧化钾。
6.根据权利要求1所述的合成方法，其特征在于，步骤(1)、(2)、(4)或(5)中的反应溶剂为吡啶、二氯甲烷、二氯乙烷、氯仿、乙醚、苯、甲苯、二甲苯、氯苯、甲基叔丁基醚、二异丙基醚、四氢呋喃、2-甲基四氢呋喃、1,2-二甲氧基乙烷、1,4-二氧六环、N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺，或上述溶剂的不同组合，反应温度为-20℃～溶剂回流温度。
7.根据权利要求1所述的合成方法，其特征在于，步骤(2)中，所述的烯丙氧羰基化试剂为1-烯丙氧羰基四唑、1-(烯丙氧基碳氧基)-1H-苯并三唑、氯甲酸烯丙酯。
8.根据权利要求1所述的合成方法，其特征在于，步骤(2)中，所述的烯丙氧羰基化试剂为氯甲酸烯丙酯。
9.根据权利要求1所述的合成方法，其特征在于，步骤(3)中，所述酸性条件中的酸为氯化氢、甲酸、冰醋酸、三氟乙酸或对甲苯磺酸；该反应选用的溶剂选自1～6个碳的醇类溶剂、醚性溶剂或酯类溶剂，所述的醇类溶剂选自甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、正丁醇、异丁醇、叔丁醇、或这些溶剂的不同组合；所述的醚性溶剂选自乙醚、甲基叔丁基醚、二异丙基醚、四氢呋喃、2-甲基四氢呋喃、1,2-二甲氧基乙烷、1,4-二氧六环、或这些溶剂的不同组合；所述的酯类溶剂选自乙酸甲酯、乙酸乙酯、乙酸丁酯，或者为水，或上述溶剂的不同组合，反应温度为-20℃～溶剂回流温度。
10.根据权利要求1所述的合成方法，其特征在于，步骤(4)中，反应的缩合剂为N,N'-二环己基碳二亚胺、1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亚胺盐酸盐、羰基二咪唑、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-四甲基脲六氟磷酸酯、
1-羟基-7-偶氮苯并三氮唑、1-羟基苯并三唑；催化剂为4-二甲氨基吡啶、吡啶、三乙胺或二异丙基乙胺。
11.根据权利要求1所述的合成方法，其特征在于，步骤(4)中，反应的缩合剂为1-乙基-
3-(3-二甲胺丙基)碳二亚胺盐酸盐。
12.根据权利要求1所述合成方法，其特征在于，步骤(5)中的钯催化剂为四(三苯基膦)钯、氯化钯、醋酸钯、三(二亚苄基丙酮)二钯。
13.根据权利要求1所述的合成方法，其特征在于，反应的催化剂与有机膦配位体组合配位，选用中性或弱酸性亲核试剂，选自双甲酮、1,3-二甲基巴比妥酸，甲酸、乙酸，伯胺、仲胺与甲酸或碳酸的混和物。
14.根据权利要求13所述的合成方法，其特征在于，所述的亲核试剂选自甲酸铵、甲酸正丁铵、甲酸二乙铵、碳酸二乙铵、碳酸氢二乙铵。

说明书全文

核苷类药物5’-位氨基酸酯的区域选择性合成方法

技术领域

[0001] 本发明属于医药技术领域，涉及采用三芳基甲基与烯丙氧羰基保护策略的核苷类药物5'-位氨基酸酯的区域选择性合成方法。

背景技术

[0002] 核苷类药物临床广泛用于抗病毒及抗肿瘤等，这类药物是利用生物电子等排原理，将DNA合成中所需嘌呤、嘧啶等代谢物的结构作细微改变而得，即抗代谢类药物。给药之后，经细胞内三磷酸化过程活化，通过抑制合成嘌呤或嘧啶核苷酸的相关酶使细胞内三磷酸碱基脱氧核苷酸合成失调、掺入DNA或RNA大分子中干扰细胞复制、竞争性抑制DNA的合成相关酶等三类主要作用，特异性干扰核酸的代谢，阻止细胞的分裂和繁殖，最终导致肿瘤细胞死亡或抑制病毒复制。但由于多数核苷类药物极性大、膜通透性差、代谢稳定性低等原因，使得该类药物的口服生物利用度较低。针对此方面问题，目前研究的热点是利用具有特定空间结构的氨基酸或寡肽修饰母体药物，制成寡肽转运蛋白(The Peptide Transporter1,PepT1)靶向性前药，以提高其膜转运，进而改善其口服生物利用度。已经成功上市的此类前药有：伐昔洛韦(Valaciclovir)、缬更昔洛韦(Valganciclovir)，其口服生物利用度分别由原来的10%～20%与6%提高到55%与61%。

[0003] 何仲贵等人(Molecular Pharmaceutics,2009,6(1),315～325)利用氯甲酸苄酯(carbobenzyloxy chloride,Cbz-Cl)选择性保护阿糖胞苷(cytarabine,arainosylcytosine,ara-C)4-位氨基，然后与叔丁氧甲酰基(Boc)保护的氨基酸在羰基二咪唑(CDI)催化下缩合成酯，再利用钯碳(Pd/C)催化氢化以脱去4-位氨基的Cbz保护基团，最后在酸性条件下脱除Boc并成盐酸盐，合成了一系列阿糖胞苷5'-位氨基酸酯类衍生物(CN101250209)。然而此路线中，首先，利用Cbz保护4-位氨基时的反应选择性差，产生较多副产物，须通过柱层析进行分离纯化，操作不便，且收率较低；其次，在与Boc保护氨基酸酰化成酯时，阿糖胞苷分子中糖的三个羟基的反应选择性较差，副产物较多，除生成所需要的
5'-位单酯之外，还有类似量的位置异构体3'-位单酯同时生成，两者在硅胶板上的Rf值基本一致，普通硅胶层析法很难将其分离，只能借助制备液相分离获得少量样品，因而无法满足深入研究所需大量样品的制备，更不适合工业化生产(如Scheme1所示)。

[0004]

[0005] Gallop,M.A.等人(WO2004041203)利用三甲基氯硅烷(trimethyl chlorosilane,TMSCl)保护吉西他滨(gemcitabine)4-位氨基和3',5'-位羟基，然后利用1-(烯丙氧基碳氧基)-1H-苯并三唑(allyl1-benzotriazolyl carbonate,AOC-OBt)选择性地保护其4-位氨基，再在酸性条件下选择性脱除TMS、与Boc保护的氨基酸在4-二甲基氨基吡啶(4-dimethylaminopyridine,DMAP)、二环己基碳二亚胺(dicyclohexylcarbodiimide,DCC)作用下缩合成酯，接着钯催化脱除烯丙氧羰基，最后酸性下脱除Boc并成盐酸盐，合成了一系列吉西他滨5'-位氨基酸酯类衍生物。与孙勇兵等的阿糖胞苷氨基酸酯的合成路线相似，其在缩合成酯过程中亦存在难以控制5'-位单酯的选择性生成从而有效阻止3'-位异构体的生成，不仅收率低、且极难分离纯化，无法满足大量样品的制备(如Scheme2所示)。

[0006]

[0007] Scheme2.经Gallop法合成吉西他滨5'-位氨基酸酯时出现的选择性问题[0008] 综上所述，已报道的这类核苷类药物5'-氨基酸酯前药的合成路线，由于对核苷分子中糖的多个羟基未作选择性保护，成酯反应时产生5'-位氨基酸酯的同时，也伴有可观量的3'-位位置异构体，难以分离纯化，不适合工业化生产。因此，针对这类核苷类药物5'-氨基酸酯的选择性合成就显得非常必要。

发明内容

[0009] 本发明所要解决的技术问题是提供一种核苷类药物5'-位氨基酸酯的区域选择性合成方法。

[0010] 本发明是通过如下技术方案实现的：

[0011] 利用三芳基甲基(Ar3C-)选择性地保护核苷类药物5'-位羟基，然后利用烯丙氧羰基(allyloxycarbonyl,AOC)保护核苷类药物碱基部分及糖结构部分中的其余所有活性位点，再酸性下选择性脱除三芳基甲基，进而与Boc保护的氨基酸缩合、在核苷类药物分子中的5'-位选择性地成酯，然后钯催化脱除AOC，最后于酸性条件下脱除Boc并成相应的盐。

[0012] 具体反应步骤如下：

[0013] (1)通式VII与三芳基甲基化试剂成醚制得通式VI；

[0014] (2)通式VI与烯丙氧羰基化试剂缩合制得通式V；

[0015] (3)通式V在酸性条件下选择性脱除5'-位三芳基甲基保护基团制得通式IV；

[0016] (4)通式IV与相应的Boc保护的α-氨基酸缩合成酯制得通式III；

[0017] (5)通式III在均相钯催化条件下脱除所有的AOC保护基而制得通式II；

[0018] (6)通式II在均相钯催化条件下脱除所有的AOC保护基而制得通式I。

[0019] 其中：

[0020] 通式I～VII结构式分别为：

[0021]

[0022] 其中，碱基Base部分为天然的嘧啶碱基类、嘌呤碱基类、或它们的结构修饰型碱基类，碱基Base对应的碱基核苷为阿糖胞苷(Cytarabine)、吉西他滨(Gemcitabine)、阿糖腺苷(Vidarabine)、PSI–6130、氯法拉宾(Clofarabine)、Thiarabine、曲西立滨(Triciribine)；X为碳原子、氧或硫原子；R2或R3为氢原子、羟基、卤素原子、叠氮基、甲基或三氟甲基，并以R-型或S-型中的任一构型存在，R2或R3也可以是双卤原子如双氟原子、氟氯原子或者为上述两种原子或原子团的任意组合；5'-位的RCH(NH2)COO-酯键部分的氨基酸来自于各种天然或人工改造的α-氨基酸RCH(NH2)COOH，其中氨基酸为甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、丁氨酸，并以L-型、D-型或消旋体形式存在。

[0023] 根据该选择性合成方法，获得碱基核苷的5'-位氨基酸酯及其药用盐，优选PSI-6130的5'-位氨基酸酯双盐酸盐。

[0024] 步骤(1)中，所述的三芳基甲基化试剂为三苯甲基氯(Triphenylmethyl Chloride,TrCl)、三氟甲磺酸三苯甲酯(Triphenylmethyl triflate TrOTf)、二(对甲氧苯基)苯基甲基氯(4,4'-Dimethoxytrityl Chloride,DMTr-Cl)、三对甲氧苯基甲基氯(4,4',4''-trimethoxytrityl Chloride,TMTr-Cl)，优选三苯甲基氯(Triphenylmethyl chloride,TrCl)；反应溶剂为吡啶、二氯甲烷、二氯乙烷、氯仿、苯、甲苯、二甲苯、氯苯、四氢呋喃、2-甲基四氢呋喃、1,2-二甲氧基乙烷、N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺，或上述溶剂的不同组合；反应所用的有机碱为吡啶、二甲氨基吡啶、三乙胺、二异丙基乙基胺、N,N-二甲基苯胺，或无机碱如碳酸钠、碳酸钾、碳酸氢钠、碳酸氢钾、氢氧化钠、氢氧化钾；该反应温度为-20°C～溶剂回流温度；反应时间视具体底物不同而不同。

[0025] 步骤(2)中，所述的烯丙氧羰基化试剂为1-烯丙氧羰基四唑 (1-(Allyloxycarbonyl)tetrazole,AOC-Tet)、1-(烯丙氧基碳氧基)-1H-苯并三唑(allyl1-benzotriazolyl carbonate,AOC-OBt)、氯甲酸烯丙酯(allyl chloroformate,AOC-Cl)，优选氯甲酸烯丙酯(allyl chloroformate,AOC-Cl)；反应溶剂为二氯甲烷、二氯乙烷、氯仿、苯、甲苯、二甲苯、氯苯、四氢呋喃、2-甲基四氢呋喃、1,2-二甲氧基乙烷、N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺，或上述溶剂的不同组合；反应所用的有机碱为二甲氨基吡啶、三乙胺、二异丙基乙基胺、N,N-二甲基苯胺、吡啶，或无机碱如碳酸钠、碳酸钾、碳酸氢钠、碳酸氢钾、氢氧化钠、氢氧化钾；该反应温度为-20°C～溶剂回流温度；反应时间视具体底物不同而不同。

[0026] 步骤(3)中，所述的酸为氯化氢、甲酸、冰醋酸、三氟乙酸、对甲苯磺酸，所述酸优选氯化氢；该反应选用的溶剂选自1～6个碳的醇类如甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、正丁醇、异丁醇、叔丁醇、或这些溶剂的不同组合，或者醚性溶剂如乙醚、甲基叔丁基醚、二异丙基醚、四氢呋喃、2-甲基四氢呋喃、1,2-二甲氧基乙烷、1,4-二氧六环、或这些溶剂的不同组合，或者酯类溶剂如乙酸甲酯、乙酸乙酯、乙酸丁酯，或者为水，或上述溶剂的不同组合；该反应温度为-20°C～溶剂回流温度；反应时间视具体底物不同而不同。

[0027] 步骤(4)中，所述的反应缩合剂选自N,N'-二环己基碳二亚胺(DCC)、1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亚胺盐酸盐(EDCI)、羰基二咪唑(CDI)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(HATU)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-四甲基脲六氟磷酸酯(HBTU)、1-羟基-7-偶氮苯并三氮唑(HOAt)、1-羟基苯并三唑(HOBt)，所述缩合剂优选EDCI；催化剂选自4-二甲氨基吡啶(DMAP)、吡啶、三乙胺、二异丙基乙胺；该反应溶剂选自二氯甲烷、二氯乙烷、氯仿、苯、甲苯、二甲苯、氯苯、四氢呋喃、2-甲基四氢呋喃、1,2-二甲氧基乙烷、1,4-二氧六环、N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺，或上述溶剂的不同组合；该反应温度在-20°C～溶剂回流温度下进行，优选0～45°C；反应时间视具体底物不同而不同。

[0028] 步骤(5)中，可选用的钯催化剂为四(三苯基膦)钯[Pd(PPh3)4]、氯化钯(PdCl2)、醋酸钯[Pd(OAc)2]、三(二亚苄基丙酮)二钯[Pd2(dba)3·CHCl3]，所述钯催化剂优选四(三苯基膦)钯；为增加钯催化剂的稳定性，将上述催化剂与有机膦配位体组合配位；该反应选用的中性或弱酸性亲核试剂为双甲酮(Dimedone)、1,3-二甲基巴比妥酸(NDMBA)，甲酸、乙酸，伯胺、仲胺与甲酸或碳酸的混和物[甲酸铵(HCOO-NH4+)、甲酸正丁铵(HCOOH/n-BuNH2)、甲酸二乙铵(HCOOH/Et2NH)、碳酸二乙铵[(Et2NH2+)2CO32-]、碳酸氢二乙铵(Et2NH2+HCO3-)]，所述亲核试剂优选甲酸正丁铵(HCOOH/n-BuNH2)；该反应可选用的溶剂选自二氯甲烷、1,2-二氯乙烷、氯仿、乙醚、甲基叔丁基醚、二异丙基醚、四氢呋喃、2-甲基四氢呋喃、1,2-二甲氧基乙烷、1,4-二氧六环、或上述溶剂的不同组合，所述溶剂优选四氢呋喃；该反应温度为-20°C～溶剂回流温度，优选0～45°C。

[0029] 步骤(6)的反应式为：

[0030]

[0031] 为明确起见，当Base为阿糖胞苷时，通式I～VII对应的结构分别为I1～VII1，具体如下所示。

[0032]

[0033] 本发明的方法具有收率高，所得产物易于分离纯化，更适合于工业化生产的优点。

具体实施方式

[0034] 下列的具体实施实例是为更完整地说明本发明，并不意味着以任何方式限制如权利要求中所定义的本发明的范围。

[0035] 实施例1:S-2-氨基-3-甲基丁酸2-{(2R,3S,4S,5R)-5-[4-氨基-2-氧代-1(1H)-嘧啶基]-3,4-二羟基四氢呋喃基}甲酯盐酸盐(阿糖胞苷5'-位L-缬氨酸酯,I1a)的制备方法一[0036] 步骤1：氩气保护、冷水冷却下，将三苯甲基氯256.5g(0.92mol)缓慢加至阿糖胞苷(VII1)194.6g(0.80mol)与无水吡啶1500mL的混和液中，注意通过机械搅拌充分搅拌反应体系，控制加料速度使加入的物料逐渐分散或溶解于体系中。加毕，继续搅拌2h后，再缓慢升温至30°C并继续反应20h，TLC检测反应完毕。

[0037] 减压浓缩尽量回收反应体系中的吡啶，再向残留物中加入无水乙醇300mL充分分散内容物。将该混和物缓慢倾至冰水5.0L中，快速搅拌冰解，析出白色固体。

[0038] 抽滤，水洗，干燥，得淡黄色粗品480.5g。将粗品以乙酸乙酯1000mL重结晶，抽滤，滤液冷却后逐渐析出白色固体。放置过夜，抽滤，干燥，得白色固体(VI1)462.2g，收率95.2%，m.p.210～213°C。

[0039] 1H NMR(d6-DMSO)δ3.15(m,2H,5’-CH2),3.81(m,1H,4'-CH2),3.84(m,1H,2'-CH),3.88(m,1H,3'-CH),5.32(d,1H,3'-OH),5.41(d,H,2'-OH),5.55(d,1H,J=7.4Hz,5-CH),
6.05(d,1H,1'-H),7.00(s,2H,4-NH2),7.30(m,15H,Ph3),7.42(d,1H,J=7.4Hz,6-CH);

[0040] ESI-MS(m/z):486.2[M+H]+,508.3[M+Na]+,524.2[M+K]+.

[0041] 步骤2：氩气保护下，将氯甲酸烯丙酯211.4mL(2.0mol)的DME500mL溶液缓慢滴加至化合物VI1242.8g(0.5mol)、氢氧化钠100.0g(2.5mol)和无水DME1000mL混和液中，过程中需要快速机械搅拌、并控制内温于-5～0°C，约需3.0h滴加完毕。缓慢将反应体系升至室温并继续搅拌反应4.0h，TLC检测反应完毕。

[0042] 抽滤，减压浓缩母液。残余物依次以乙酸乙酯600mL与冷水400mL搅拌分散，静置分层。分取有机层，水层以乙酸乙酯(300mL×2)萃取，合并有机层，饱和食盐水(500mL×2)洗，无水硫酸钠干燥。过滤，滤液减压浓缩至干，再充分减压干燥，得类白色固体(V1)297.0g。粗品经乙酸乙酯与石油醚的混和溶剂重结晶，得白色固体169.6g，收率73.1%，m.p.155～158°C。

[0043] 1H NMR(d6-DMSO)δ3.35(m,2H,5'-CH2),4.25(q,1H,4'-CH),4.48(t,2H,CH2-CH-CH2),4.60(t,4H,CH2-CH-CH2),5.21(m,1H,2'-CH),5.19～5.37(m,6H,CH2-CH-CH2),5.44(m,1H,3'-CH),5.80(m,3H,CHCH2),6.23(d,1H,1'-CH),6.93(d,1H,J=7.5Hz,5-CH),7.30(m,
15H,Ph3),7.91(d,1H,J=7.5Hz,6-CH),10.84(s,1H,4-NH);

[0044] ESI-MS(m/z):738.3[M+H]+,760.3[M+Na]+,776.3[M+K]+.

[0045] 步骤3：0～5°C、氩气保护下，将化合物V1约147.5g(0.20mol)加至氯化氢乙酸乙酯溶液(2.0mol/L)500mL中，注意边加边搅拌。随着反应进行，逐渐析出白色固体，TLC检测显示约2.0h反应结束。

[0046] 抽滤，乙酸乙酯洗，减压干燥，得白色固体75.4g。向母液中加入冰水500mL，以饱和Na2CO3溶液调pH7，充分搅拌后静置，分取有机层，水层再以乙酸乙酯200mL萃取。合并有机层，饱和食盐水(200mL×2)洗，无水硫酸钠干燥。过滤，减压浓缩至出现浑浊，并搅拌过夜，再次析出白色固体，抽滤，减压干燥，得23.7g。两次所得固体(IV1)累计总收率：89.4%，m.p.69～73°C。

[0047] 1H NMR(d6-DMSO)δ3.68(d,2H,5'-CH2),4.14(d,1H,4'-CH),4.50(t,2H,CH2-CH-CH2),4.64(t,4H,CH2-CH-CH2),5.21(m,1H,2’-CH),5.15～5.42(m,6H,CH2-CH-CH2),5.32(s,1H,5'-OH)5.45(m,1H,3'-CH),5.90(m,3H,CHCH2),6.23(d,1H,1'-CH),7.06(d,1H,J=
7.5Hz,5-CH),8.18(d,1H,J=7.5Hz,6-CH),10.84(s,1H,4-NH);

[0048] ESI-MS(m/z):496.2[M+H]+,518.2[M+Na]+,534.2[M+K]+.

[0049] 步骤4：冰水浴、氩气保护下，将EDCI41.3g(0.20mol)缓慢加至化合物IV149.5g(0.10mol)、Boc保护L-缬氨酸26.1g(0.12mol)、DMAP1.2g(0.01mol)与无水二氯甲烷300mL的混和液中，，注意控制加料速度并控制反应内温不超过10°C。加毕，缓慢将反应体系升至室温，继续反应约2.0h，TLC检测反应完毕。

[0050] 加入冰水300mL，充分搅拌后静置分层，分取有机层，水层以二氯甲烷(150mL×2)萃取，合并有机层，依次以1.0mol/L盐酸溶液(150mL×2)、饱和碳酸钠溶液(200mL)、饱和食盐水(200mL)洗，无水硫酸钠干燥。过滤，滤液减压浓缩至干，减压干燥，得白色固体(III1)64.0g，收率92.1%，m.p.149～151°C。

[0051] 1H NMR(d6-DMSO)δ0.83(d,6H,(CH3)2CH),1.35(s,9H,(CH3)3C),1.98(t,1H,CH(CH3)2),3.86(t,1H,CH(CH3)2),4.28～4.38(d,2H,5'-CH2),4.41(d,1H,4'-CH),4.48(t,2H,CH2-CH-CH2),4.61(t,4H,CH2-CH-CH2),5.12(m,1H,2'-CH),5.19～5.36(m,6H,CH2-CH-CH2),5.42(t,1H,3’-CH),5.80(m,3H,CHCH2),6.26(d,1H,1'-CH),7.07(d,1H,J=7.5Hz,5-CH),
7.15(d,1H,NH-CH),7.98(d,1H,J=7.5Hz,6-CH),10.83(s,1H,4-NH);

[0052] ESI-MS(m/z):693.1[M+H]+.

[0053] 步骤5：氩气保护下，于-50°C左右时将四(三苯基膦)钯1.15g(5.0mol%)加至化合物III113.89g(0.02mol)、无水甲酸4.49mL(0.12mol)、正丁胺11.70mL(0.12mol)和无水四氢呋喃200mL混和液中。加毕，通过减压真空反复置换氩气以排除体系中的空气，然后缓慢升至室温反应，TLC检测显示搅拌反应4.0h后反应结束。

[0054] 减压浓缩反应液，残余物依次以二氯甲烷100mL与冷水100mL搅拌分散，静置分层。分取有机层，水层以二氯甲烷(40mL×2)萃取，合并有机层。以1.0mol/L盐酸溶液(80mL×2)将产物反萃至水层。水层与乙酸乙酯(100mL)充分搅拌，以饱和碳酸钠溶液调pH7后静置分层，分取有机层，以乙酸乙酯100mL萃取水层。合并有机层，饱和食盐水(200mL×2)洗，无水硫酸钠干燥。过滤，滤液减压浓缩至干，得灰白色固体7.20g。粗品经四氢呋喃重结晶，得白色固体(II1)6.50g，收率73.9%，m.p.168～172°C。

[0055] 1H NMR(d6-DMSO)δ0.84(d,6H,(CH3)2CH),1.34(s,9H,(CH3)3C),1.97(m,1H,CH(CH3)2), 3.85(m,2H,5'-CH2),3,91(m,1H,2'-CH),3.94(m,1H,CH-NH),4.13(q,1H,3'-CH),4.35(q,1H,4'-CH),5.55(t,2H,2'-OH,3'-OH),5.60(d,1H,J=7.5Hz,5-CH),6.05(d,1H,1'-CH),6.98(d,2H,4-NH2),7.11(d,1H,NH-CH),7.42(d,1H,J=7.5Hz,6-CH);

[0056] 13C NMR(d6-DMSO)δ18.78(CH3-CH),19.38(CH3-CH),28.68((CH3)3-C),30.14(CH-CH3),59.83(CH-NH),64.72(C-5'),74.64(C-3'),77.20(C-2'),78.71(C-(CH3)3),82.37(C-4'),86.91(C-5),92.92(C-1'),143.23(C-6),155.54(C-2),156.23(CONH),166.08(C-4),
172.47(COO);

[0057] ESI-MS(m/z):443.3[M+H]+,465.3[M+Na]+,481.2[M+K]+.

[0058] 步骤6：氩气保护下，0～5°C时，将化合物II122.1g(0.05mol)加至氯化氢乙酸乙酯溶液(2.0mol/L)100mL中，注意边加边搅拌。加毕，缓慢将反应体系升至室温，随着反应进行，逐渐析出白色固体。约4.0h反应完毕。

[0059] 抽滤，乙酸乙酯洗，减压干燥，得白色固体(I1a)19.2g，纯度98.65%，m.p.225～228°C，收率92.5%。

[0060] 1H NMR(d6-DMSO)δ0.94(q,6H,(CH3)2CH)),2.16(m,1H,CH(CH3)2),3.87(s,1H,CHNH),3.97(m,2H,5'-CH2),4.05(m,1H,2'-CH)4.31(q,1H,3'-CH),4.50(q,1H,4'-CH),5.83(s,2H,2'-OH,3'-OH),6.01(d,1H,1'-CH),6.12(d,1H,J=7.5Hz,5-CH),7.79(d,1H,J=
7.5Hz,6-CH),8.56(s,2H,4-NH2),8.63(d,2H,NH2-CH);

[0061] 13C NMR(d6-DMSO)δ17.92(CH3-CH),17.98(CH3-CH),29.82(CH-CH3),57.84(CH-NH),65.44(C-5'),74.44(C-3'),76.41(C-2'),83.61(C-4'),87.67(C-5),93.17(C-1'),146.23(C-6),147.07(C-2),160.03(C-4),169.13(COO);

[0062] ESI-MS(m/z):343.3[M+H]+,365.3[M+Na]+,381.3[M+K]+.

[0063] 实施例2:S-2-氨基-3-甲基丁酸2-{(2R,3S,4S,5R)-5-[4-氨基-2-氧代-1(1H)-嘧啶基]-3,4-二羟基四氢呋喃基}甲酯盐酸盐(阿糖胞苷5'-位L-缬氨酸酯,I1a)的制备方法二[0064] 以CDI代替EDCI，进行实施例1中步骤4的反应，收率为88.3%。按照实施例1中的步骤进行其余各步反应制备化合物I1a，纯度98.78%。六步累计收率36.2%。

[0065] 实施例3:S-2-氨基-3-甲基丁酸2-{(2R,3S,4S,5R)-5-[4-氨基-2-氧代-1(1H)-嘧啶基]-3,4-二羟基四氢呋喃基}甲酯盐酸盐(阿糖胞苷5'-位L-缬氨酸酯,I1a)的制备方法三[0066] 以DCC代替EDCI，进行实施例1中步骤4的反应，收率为93.4%。按照实施例1中的步骤进行其余各步反应制备化合物I1a，纯度98.56%。六步累计收率37.6%。

[0067] 实施例4:S-2-氨基-3-甲基丁酸2-{(2R,3S,4S,5R)-5-[4-氨基-2-氧代-1(1H)-嘧啶基]-3,4-二羟基四氢呋喃基}甲酯盐酸盐(阿糖胞苷5'-位L-缬氨酸酯,I1a)的制备方法四[0068] 以PdCl2代替Pd(PPh3)4，并向反应体系中加入配体PPh3，进行实施例1中步骤5的反应，收率为70.1%。按照实施例1中的步骤进行其余各步反应制备化合物I1a，纯度98.40%。六步累计收率35.2%。

[0069] 实施例5:S-2-氨基-3-甲基丁酸2-{(2R,3S,4S,5R)-5-[4-氨基-2-氧代-1(1H)-嘧啶基]-3,4-二羟基四氢呋喃基}甲酯盐酸盐(阿糖胞苷5'-位L-缬氨酸酯,I1a)的制备方法五[0070] 以Pd(OAc)2代替Pd(PPh3)4，并向反应体系中加入配体PPh3，进行实施例1中步骤5的反应，收率为66.9%。按照实施例1中的步骤进行其余各步反应制备化合物I1a，纯度98.73%。六步累计收率32.8%。

[0071] 实施例6:S-2-氨基-3-甲基丁酸2-{(2R,3S,4S,5R)-5-[4-氨基-2-氧代-1(1H)-嘧啶基]-3,4-二羟基四氢呋喃基}甲酯盐酸盐(阿糖胞苷5'-位L-缬氨酸酯,I1a)的制备方法六[0072] 以Pd2(dba)3·CHCl3代替Pd(PPh3)4，并向反应体系中加入配体PPh3，进行实施例1中步骤5的反应，收率为63.8%。按照实施例1中的步骤进行其余各步反应制备化合物I1a，纯度98.36%。六步累计收率32.4%。

[0073] 实施例7:S-2-氨基-3-甲基丁酸2-{(2R,3S,4S,5R)-5-[4-氨基-2-氧代-1(1H)-嘧啶基]-3,4-二羟基四氢呋喃基}甲酯盐酸盐(阿糖胞苷5'-位L-缬氨酸酯,I1a)的制备方法七[0074] 以Dimedone代替HCOOH/n-BuNH2，进行实施例1中步骤5的反应，收率为68.2%。按照实施例1中的步骤进行其余各步反应制备化合物I1a，纯度98.69%。六步累计收率32.6%。

[0075] 实施例8:S-2-氨基-3-甲基丁酸2-{(2R,3S,4S,5R)-5-[4-氨基-2-氧代-1(1H)-嘧啶基]-3,4-二羟基四氢呋喃基}甲酯盐酸盐(阿糖胞苷5'-位L-缬氨酸酯,I1a)的制备方法八[0076] 以NDMBA代替HCOOH/n-BuNH2，进行实施例1中步骤5的反应，收率为67.2%。按照实施例1中的步骤进行其余各步反应制备化合物I1a，纯度98.47%。六步累计收率31.5%。

[0077] 实施例9:S-2-氨基-3-甲基丁酸2-{(2R,3S,4S,5R)-5-[4-氨基-2-氧代-1(1H)-嘧啶基]-3,4-二羟基四氢呋喃基}甲酯盐酸盐(阿糖胞苷5'-位L-缬氨酸酯,I1a)的制备方法九[0078] 以HCOOH/Et2NH代替HCOOH/n-BuNH2，进行实施例1中步骤5的反应，收率为66.7%。按照实施例1中的步骤进行其余各步反应制备化合物I1a，纯度98.77%。六步累计收率33.9%。

[0079] 实施例10:S-2-氨基-3-甲基丁酸2-{(2R,3S,4S,5R)-5-[4-氨基-2-氧代-1(1H)-嘧啶基]-3,4-二羟基四氢呋喃基}甲酯盐酸盐(阿糖胞苷5'-位L-缬氨酸酯,I1a)的制备方法十

[0080] 以HCOOH/Et3N代替HCOOH/n-BuNH2，进行实施例1中步骤5的反应，收率为67.4%。按照实施例1中的步骤进行其余各步反应制备化合物I1a，纯度98.68%。六步累计收率34.2%。

[0081] 实施例11:R-2-氨基-3-甲基丁酸2-{(2R,3S,4S,5R)-5-[4-氨基-2-氧代-1(1H)-嘧啶基]-3,4-二羟基四氢呋喃基}甲酯盐酸盐(阿糖胞苷5'-位D-缬氨酸酯,I1b)的制备方法一

[0082] 以Boc保护D-缬氨酸代替Boc保护L-缬氨酸，进行实施例1中步骤4的反应，收率为 92.2%。按照实施例1中的步骤进行其余各步反应制备化合物I1b，得白色固体10.4g，纯度
99.02%，m.p.212～215°C。六步累计收率35.2%。

[0083] 1H NMR(d6-DMSO)δ0.95(q,6H,(CH3)2CH)),2.16(m,1H,CH(CH3)2),3.86(s,1H,CHNH),4.00(m,2H,5'-CH2),4.07(m,1H,2'-CH),4.35(q,1H,3'-CH),4.40(q,1H,4'-CH),5.86(s,2H,2'-OH,3'-OH),6.00(d,1H,1'-CH),6.17(d,1H,J=7.8Hz,5-CH),7.79(d,1H,J=
7.8Hz,6-CH),8.62(s,2H,4-NH2),8.71(d,2H,NH2-CH);

[0084] 13C NMR(d6-DMSO)δ18.02(CH3-CH),18.86(CH3-CH),29.85(CH-CH3),57.74(CH-NH),65.62(C-5'),74.61(C-3'),76.51(C-2'),83.20(C-4'),87.82(C-5),93.35(C-1'),146.40(C-6),147.39(C-2),160.00(C-4),169.22(COO);

[0085] ESI-MS(m/z):343.3[M+H]+,365.3[M+Na]+,381.3[M+K]+.

[0086] 实施例12:R-2-氨基-3-甲基丁酸2-{(2R,3S,4S,5R)-5-[4-氨基-2-氧代-1(1H)-嘧啶基]-3,4-二羟基四氢呋喃基}甲酯盐酸盐(阿糖胞苷5'-位D-缬氨酸酯,I1b)的制备方法二

[0087] 以Boc保护D-缬氨酸代替Boc保护L-缬氨酸、DCC代替EDCI，进行实施例1中步骤4的反应，收率为90.6%。按照实施例1中的步骤进行其余各步反应制备化合物I1b，纯度98.86%。六步累计收率34.8%。

[0088] 实施例13:R-2-氨基-3-甲基丁酸2-{(2R,3S,4S,5R)-5-[4-氨基-2-氧代-1(1H)-嘧啶基]-3,4-二羟基四氢呋喃基}甲酯盐酸盐(阿糖胞苷5'-位D-缬氨酸酯,I1b)的制备方法三

[0089] 以Boc保护D-缬氨酸代替Boc保护L-缬氨酸、HATU代替EDCI，进行实施例1中步骤4的反应，收率为88.4%。按照实施例1中的步骤进行其余各步反应制备化合物I1b，纯度98.25%。六步累计收率32.2%。

[0090] 实施例14:R-2-氨基-3-甲基丁酸2-{(2R,3S,4S,5R)-5-[4-氨基-2-氧代-1(1H)-嘧啶基]-3,4-二羟基四氢呋喃基}甲酯盐酸盐(阿糖胞苷5'-位D-缬氨酸酯,I1b)的制备方法四

[0091] 以Boc保护D-缬氨酸代替Boc保护L-缬氨酸，进行实施例1中步骤4的反应。并以PdCl2代替Pd(PPh3)4，同时向反应体系中加入配体PPh3，进行实施例1中步骤5的反应，收率为69.5%。按照实施例1中的步骤进行其余各步反应制备化合物I1b，纯度98.10%。六步累计收率33.0%。

[0092] 实施例15:R-2-氨基-3-甲基丁酸2-{(2R,3S,4S,5R)-5-[4-氨基-2-氧代-1(1H)-嘧啶基]-3,4-二羟基四氢呋喃基}甲酯盐酸盐(阿糖胞苷5'-位D-缬氨酸酯,I1b)的制备方法五

[0093] 以Boc保护D-缬氨酸代替Boc保护L-缬氨酸，进行实施例1中步骤4的反应。并以HCOO NH4+代替HCOOH/n-BuNH2，进行实施例1中步骤5的反应，收率为68.2%。按照实施例1中的步骤进行其余各步反应制备化合物I1b，纯度98.68%。六步累计收率34.2%。

[0094] 实施例16:S-2-氨基丙酸2-{(2R,3S,4S,5R)-5-[4-氨基-2-氧代-1(1H)-嘧啶基]-3,4-二羟基四氢呋喃基}甲酯盐酸盐(阿糖胞苷5'-位L-丙氨酸酯,I1c)的制备方法一[0095] 以Boc保护L-丙氨酸代替Boc保护L-缬氨酸，进行实施例1中步骤4的反应，收率为
90.6%。按照实施例1中的步骤进行其余各步反应制备化合物I1c，得白色固体8.9g，纯度
98.93%，m.p.203～207°C。六步累计收率37.6%。

[0096] 1H NMR(d6-DMSO)δ1.39(d,3H,CH3-CH),3.96(s,1H,CHNH),4.05(m,2H,5'-CH2),4.11(m,1H,2'-CH),4.32(q,1H,3'-CH),4.43(q,1H,4'-CH),5.81(s,2H,2'-OH,3'-OH),
6.00(d,1H,1'-CH),6.13(d,1H,J=7.6Hz,5-CH),7.77(d,1H,J=7.6Hz,6-CH),8.55(s,2H,4-NH2),8.60(d,2H,NH2-CH);

[0097] 13C NMR(d6-DMSO)δ16.15(CH3-CH),48.38(CH-CH3),65.50(C-5'),74.66(C-3'),76.44(C-2'),83.18(C-4'),87.55(C-5),93.34(C-1'),146.26(C-6),147.58(C-2),160.15(C-4),170.36(COO);

[0098] ESI-MS(m/z):315.3[M+H]+,337.2[M+Na]+,353.2[M+K]+.

[0099] 实施例17:S-2-氨基丙酸2-{(2R,3S,4S,5R)-5-[4-氨基-2-氧代-1(1H)-嘧啶基]-3,4-二羟基四氢呋喃基}甲酯盐酸盐(阿糖胞苷5'-位L-丙氨酸酯,I1c)的制备方法二[0100] 以Boc保护L-丙氨酸代替Boc保护L-缬氨酸、CDI代替EDCI，进行实施例1中步骤4的反应，收率为85.3%。按照实施例1中的步骤进行其余各步反应制备化合物I1c，纯度98.59%。
六步累计收率36.4%。

[0101] 实施例18:S-2-氨基丙酸2-{(2R,3S,4S,5R)-5-[4-氨基-2-氧代-1(1H)-嘧啶基]-3,4-二羟基四氢呋喃基}甲酯盐酸盐(阿糖胞苷5'-位L-丙氨酸酯,I1c)的制备方法三[0102] 以Boc保护L-丙氨酸代替Boc保护L-缬氨酸、HBTU代替EDCI，进行实施例1中步骤4的反应，收率为89.0%。按照实施例1中的步骤进行其余各步反应制备化合物I1c，纯度
98.23%。六步累计收率31.6%。

[0103] 实施例19:S-2-氨基丙酸2-{(2R,3S,4S,5R)-5-[4-氨基-2-氧代-1(1H)-嘧啶基]-3,4-二羟基四氢呋喃基}甲酯盐酸盐(阿糖胞苷5'-位L-丙氨酸酯,I1c)的制备方法四[0104] 以Boc保护L-丙氨酸代替Boc保护L-缬氨酸，进行实施例1中步骤4的反应。并以Pd(OAc)2代替Pd(PPh3)4，同时向反应体系中加入配体PPh3，进行实施例1中步骤5的反应，收率为68.3%。按照实施例1中的步骤进行其余各步反应制备化合物I1c，纯度98.55%。六步累计收率32.9%。

[0105] 实施例20:S-2-氨基丙酸2-{(2R,3S,4S,5R)-5-[4-氨基-2-氧代-1(1H)-嘧啶基]-3,4-二羟基四氢呋喃基}甲酯盐酸盐(阿糖胞苷5'-位L-丙氨酸酯,I1c)的制备方法五[0106] 以Boc保护L-丙氨酸代替Boc保护L-缬氨酸，进行实施例1中步骤4的反应。并以(Et2NH2+)2CO32代替HCOOH/n-BuNH2，进行实施例1中步骤5的反应，收率为69.3%。按照实施例1中的步骤进行其余各步反应制备化合物I1c，纯度98.22%。六步累计收率34.1%。

[0107] 实施例21:S-2-氨基-4-甲基戊酸2-{(2R,3S,4S,5R)-5-[4-氨基-2-氧代-1(1H)-嘧啶基]-3,4-二羟基四氢呋喃基}甲酯盐酸盐(阿糖胞苷5'-位L-亮氨酸酯,I1d)的制备方法一

[0108] 以Boc保护L-亮氨酸代替Boc保护L-缬氨酸，进行实施例1中步骤4的反应，收率为92.3%。按照实施例1中的步骤进行其余各步反应制备化合物I1d，得白色固体9.7g，纯度
98.52%，m.p.203～207°C。六步累计收率35.4%。

[0109] 1H NMR(d6-DMSO)δ0.86(q,6H,(CH3)2CH)),1.64(t,2H,CH2),1,75(m,1H,CH(CH3)2),3.92(s,1H,CHNH),4.00(m,2H,5'-CH2),4.06(m,1H,2'-CH),4.31(q,1H,3'-CH),4.43(q,1H,4'-CH),5.86(s,2H,2'-OH,3'-OH),5.99(d,1H,1'-CH),6.17(d,1H,J=7.8Hz,5-CH),7.79(d,1H,J=7.8Hz,6-CH),8.66(s,2H,4-NH2),8.75(d,2H,NH2-CH);

[0110] 13C NMR(d6-DMSO)δ22.44(CH3-CH2),22.67(CH3-CH2),24.22(CH-(CH3)2),40.24(CH2-CHNH2),51.10(CH-NH),65.52(C-5'),74.57(C-3'),76.48(C-2'),83.36(C-4'),87.74(C-5),93.24(C-1’),146.29(C-6),147.21(C-2),160.03(C-4),170.19(COO);

[0111] ESI-MS(m/z):357.3[M+H]+,379.2[M+Na]+,395.2[M+K]+.

[0112] 实施例22:S-2-氨基-4-甲基戊酸2-{(2R,3S,4S,5R)-5-[4-氨基-2-氧代-1(1H)-嘧啶基]-3,4-二羟基四氢呋喃基}甲酯盐酸盐(阿糖胞苷5'-位L-亮氨酸酯,I1d)的制备方法二

[0113] 以Boc保护L-亮氨酸代替Boc保护L-缬氨酸、HATU代替EDCI，进行实施例1中步骤4的反应，收率为87.6%。按照实施例1中的步骤进行其余各步反应制备化合物I1d，纯度98.56%。六步累计收率34.1%。

[0114] 实施例23:S-2-氨基-4-甲基戊酸2-{(2R,3S,4S,5R)-5-[4-氨基-2-氧代-1(1H)-嘧啶基]-3,4-二羟基四氢呋喃基}甲酯盐酸盐(阿糖胞苷5'-位L-亮氨酸酯,I1d)的制备方法三

[0115] 以Boc保护L-亮氨酸代替Boc保护L-缬氨酸、HOAt代替EDCI，进行实施例1中步骤4的反应，收率为85.6%。按照实施例1中的步骤进行其余各步反应制备化合物I1d，纯度98.78%。六步累计收率31.9%。

[0116] 实施例24:S-2-氨基-4-甲基戊酸2-{(2R,3S,4S,5R)-5-[4-氨基-2-氧代-1(1H)-嘧啶基]-3,4-二羟基四氢呋喃基}甲酯盐酸盐(阿糖胞苷5'-位L-亮氨酸酯,I1d)的制备方法四

[0117] 以Boc保护L-亮氨酸代替Boc保护L-缬氨酸，进行实施例1中步骤4的反应。并以Pd2(dba)3·CHCl3代替Pd(PPh3)4，同时向反应体系中加入配体PPh3，进行实施例1中步骤5的反应，收率为69.1%。按照实施例1中的步骤进行其余各步反应制备化合物I1d，纯度98.63%。六步累计收率32.6%。

[0118] 实施例25:S-2-氨基-4-甲基戊酸2-{(2R,3S,4S,5R)-5-[4-氨基-2-氧代-1(1H)-嘧啶基]-3,4-二羟基四氢呋喃基}甲酯盐酸盐(阿糖胞苷5'-位L-亮氨酸酯,I1d)的制备方法五

[0119] 以Boc保护L-亮氨酸代替Boc保护L-缬氨酸，进行实施例1中步骤4的反应。并以Et2NH2+HCO3代替HCOOH/n-BuNH2，进行实施例1中步骤5的反应，收率为66.3%。按照实施例1中的步骤进行其余各步反应制备化合物I1d，纯度98.67%。六步累计收率34.9%。

[0120] 实施例26:S-2-氨基-3-甲基戊酸2-{(2R,3S,4S,5R)-5-[4-氨基-2-氧代-1(1H)-嘧啶基]-3,4-二羟基四氢呋喃基}甲酯盐酸盐(阿糖胞苷5'-位L-异亮氨酸酯,I1e)的制备方法一

[0121] 以Boc保护L-异亮氨酸代替Boc保护L-缬氨酸，进行实施例1中步骤4的反应，收率为90.8%。按照实施例1中的步骤进行其余各步反应制备化合物I1e，得白色固体8.8g，纯度99.01%，m.p.216～218°C。六步累计收率34.3%。

[0122] 1H NMR(d6-DMSO)δ0.87(q,6H,CH3CH2,CH3CH),1.25(t,1H,CH2CH3),1.43(t,1H,CH2CH3),1.92(m,1H,CH3CH),3.91(s,1H,CHNH),4.00(m,2H,5'-CH2),4.07(m,1H,2'-CH),4.29(q,1H,3'-CH),4.51(q,1H,4'-CH),5.80(s,1H,3'-OH),5.84(s,1H,2'-OH),6.01(d,
1H,1'-CH),6.10(d,1H,J=7.8Hz,5-CH),7.75(d,1H,J=7.8Hz,6-CH),8.60(s,2H,4-NH2),
8.60(s,2H,NH2-CH);

[0123] 13C NMR(d6-DMSO)δ12.00(CH3-CH2),14.67(CH3-CH),25.84(CH2-CH3),36.38(CH-CH3),56.54(CH-NH),65.42(C-5'),74.45(C-3'),76.45(C-2'),83.62(C-4'),87.90(C-5),93.15(C-1'),146.15(C-6),147.14(C-2),160.06(C-4),169.02(COO);

[0124] ESI-MS(m/z):357.3[M+H]+,379.2[M+Na]+,395.2[M+K]+.

[0125] 实施例27:S-2-氨基-3-甲基戊酸2-{(2R,3S,4S,5R)-5-[4-氨基-2-氧代-1(1H)-嘧啶基]-3,4-二羟基四氢呋喃基}甲酯盐酸盐(阿糖胞苷5'-位L-异亮氨酸酯,I1e)的制备方法二

[0126] 以Boc保护L-异亮氨酸代替Boc保护L-缬氨酸、HBTU代替EDCI，进行实施例1中步骤4的反应，收率为86.1%。按照实施例1中的步骤进行其余各步反应制备化合物I1e，纯度
98.91%。六步累计收率33.5%。

[0127] 实施例28:S-2-氨基-3-甲基戊酸2-{(2R,3S,4S,5R)-5-[4-氨基-2-氧代-1(1H)-嘧啶基]-3,4-二羟基四氢呋喃基}甲酯盐酸盐(阿糖胞苷5'-位L-异亮氨酸酯,I1e)的制备方法三

[0128] 以Boc保护L-异亮氨酸代替Boc保护L-缬氨酸、HOBt代替EDCI，进行实施例1中步骤4的反应，收率为87.6%。按照实施例1中的步骤进行其余各步反应制备化合物I1e，纯度
98.46%。六步累计收率32.9%。

[0129] 实施例29:S-2-氨基-3-甲基戊酸2-{(2R,3S,4S,5R)-5-[4-氨基-2-氧代-1(1H)-嘧啶基]-3,4-二羟基四氢呋喃基}甲酯盐酸盐(阿糖胞苷5'-位L-异亮氨酸酯,I1e)的制备方法四

[0130] 以Boc保护L-异亮氨酸代替Boc保护L-缬氨酸，进行实施例1中步骤4的反应。并以Dimedone代替HCOOH/n-BuNH2，进行实施例1中步骤5的反应，收率为65.7%。按照实施例1中的步骤进行其余各步反应制备化合物I1e，纯度98.38%。六步累计收率30.9%。

[0131] 实施例30:S-2-氨基-3-甲基戊酸2-{(2R,3S,4S,5R)-5-[4-氨基-2-氧代-1(1H)-嘧啶基]-3,4-二羟基四氢呋喃基}甲酯盐酸盐(阿糖胞苷5'-位L-异亮氨酸酯,I1e)的制备方法五

[0132] 以Boc保护L-异亮氨酸代替Boc保护L-缬氨酸，进行实施例1中步骤4的反应。并以HCOOH/Et2NH代替HCOOH/n-BuNH2，进行实施例1中步骤5的反应，收率为70.1%。按照实施例1中的步骤进行其余各步反应制备化合物I1e，纯度98.28%。六步累计收率32.6%。

[0133] 实施例31:S-2-氨基-3-苯基丙酸2-{(2R,3S,4S,5R)-5-[4-氨基-2-氧代-1(1H)-嘧啶基]-3,4-二羟基四氢呋喃基}甲酯盐酸盐(阿糖胞苷5'-位L-苯丙氨酸酯,I1f)的制备方法一

[0134] 以Boc保护L-苯丙酸代替Boc保护L-缬氨酸，进行实施例1中步骤4的反应，收率为92.3%。按照实施例1中的步骤进行其余各步反应制备化合物I1f，得白色固体8.2g，纯度
98.67%，m.p.200～203°C。六步累计收率38.7%。

[0135] 1H NMR(d6-DMSO)δ3.13(q,2H,CH2Ph),3.92(s,1H,CHNH),3.99(m,2H,5'-CH2),4.14(m,1H,2'-CH),4.28(q,1H,3'-CH),4.31(q,1H,4'-CH),5.82(s,2H,3'-OH,2'-OH),
5.99(d,1H,1'-CH),6.14(d,1H,J=7.8Hz,5-CH),7.26(m,5H,Ph),7.74(d,1H,J=7.8Hz,6-CH),8.68(s,2H,4-NH2),8.68(s,2H,NH2-CH);

[0136] 13C NMR(d6-DMSO)δ36.22(CH-Ph),53.85(CH-NH),65.58(C-5'),74.59(C-3'),76.44(C-2'),83.22(C-4'),87.70(C-5),93.30(C-1'),127.71,129.03,129.96,135.20(Ph-CH),146.31(C-6),147.24(C-2),160.02(C-4),169.22(COO);

[0137] ESI-MS(m/z):391.3[M+H]+,413.3[M+Na]+.

[0138] 实施例32:S-2-氨基-3-苯基丙酸2-{(2R,3S,4S,5R)-5-[4-氨基-2-氧代-1(1H)-嘧啶基]-3,4-二羟基四氢呋喃基}甲酯盐酸盐(阿糖胞苷5'-位L-苯丙氨酸酯,I1f)的制备方法二

[0139] 以Boc保护L-苯丙氨酸代替Boc保护L-缬氨酸、HATU代替EDCI，进行实施例1中步骤4的反应，收率为86.9%。按照实施例1中的步骤进行其余各步反应制备化合物I1f，纯度
98.61%。六步累计收率32.5%。

[0140] 实施例33:S-2-氨基-3-苯基丙酸2-{(2R,3S,4S,5R)-5-[4-氨基-2-氧代-1(1H)-嘧啶基]-3,4-二羟基四氢呋喃基}甲酯盐酸盐(阿糖胞苷5'-位L-苯丙氨酸酯,I1f)的制备方法三

[0141] 以Boc保护L-苯丙氨酸代替Boc保护L-缬氨酸，进行实施例1中步骤4的反应。并以Et3N/HCOOH代替HCOOH/n-BuNH2，进行实施例1中步骤5的反应，收率为68.2%。按照实施例1中的步骤进行其余各步反应制备化合物I1f，纯度98.53%。六步累计收率34.0%。

[0142] 实施例34:S-2-氨基-3-苯基丙酸2-{(2R,3S,4S,5R)-5-[4-氨基-2-氧代-1(1H)-嘧啶基]-3,4-二羟基四氢呋喃基}甲酯盐酸盐(阿糖胞苷5'-位L-苯丙氨酸酯,I1f)的制备方法四

[0143] 以Boc保护L-苯丙氨酸代替Boc保护L-缬氨酸，进行实施例1中步骤4的反应。并以NDMBA代替HCOOH/n-BuNH2，进行实施例1中步骤5的反应，收率为64.7%。按照实施例1中的步骤进行其余各步反应制备化合物I1f，纯度98.47%。六步累计收率34.7%。

[0144] 实施例35:R-2-氨基-3-苯基丙酸2-{(2R,3S,4S,5R)-5-[4-氨基-2-氧代-1(1H)-嘧啶基]-3,4-二羟基四氢呋喃基}甲酯盐酸盐(阿糖胞苷5'-位D-苯丙氨酸酯,I1g)的制备方法一

[0145] 以Boc保护D-苯丙氨酸代替Boc保护L-缬氨酸，进行实施例1中步骤4的反应，收率为91.2%。按照实施例1中的步骤进行其余各步反应制备化合物I1g，得白色固体8.2g，纯度98.49%，m.p.209～211°C。六步累计收率37.6%。

[0146] 1H NMR(d6-DMSO)δ3.14(m,2H,CH2Ph),3.90(s,1H,CHNH),3.95(m,2H,5'-CH2),4.15(m,1H,2'-CH),4.22(q,1H,3'-CH),4.35(q,1H,4'-CH),5.74(s,1H,3'-OH),5.80(s,
1H,2'-OH),5.98(d,1H,1'-CH),6.09(d,1H,J=7.8Hz,5-CH),7.25(m,5H,Ph),7.72(d,1H,J=
7.8Hz,6-CH),8.56(s,2H,4-NH2),8.72(s,2H,NH2-CH);

[0147] 13C NMR(d6-DMSO)δ36.34(CH-Ph),53.81(CH-NH),65.63(C-5'),74.59(C-3'),76.49(C-2'),82.94(C-4'),87.65(C-5),93.36(C-1'),127.74,129.07,129.90,135.14(Ph-CH),146.09(C-6),148.31(C-2),160.75(C-4),169.32(COO);

[0148] ESI-MS(m/z):391.3[M+H]+,413.3[M+Na]+,429.2[M+K]+.

[0149] 实施例36:R-2-氨基-3-苯基丙酸2-{(2R,3S,4S,5R)-5-[4-氨基-2-氧代-1(1H)-嘧啶基]-3,4-二羟基四氢呋喃基}甲酯盐酸盐(阿糖胞苷5'-位D-苯丙氨酸酯,I1g)的制备方法二

[0150] 以Boc保护D-苯丙氨酸代替Boc保护L-缬氨酸、HOAt代替EDCI，进行实施例1中步骤4的反应，收率为87.1%。按照实施例1中的步骤进行其余各步反应制备化合物I1g，纯度
98.36%。六步累计收率34.6%。

[0151] 实施例37:R-2-氨基-3-苯基丙酸2-{(2R,3S,4S,5R)-5-[4-氨基-2-氧代-1(1H)-嘧啶基]-3,4-二羟基四氢呋喃基}甲酯盐酸盐(阿糖胞苷5'-位D-苯丙氨酸酯,I1g)的制备方法三

[0152] 以Boc保护D-苯丙氨酸代替Boc保护L-缬氨酸，进行实施例1中步骤4的反应。并以PdCl2代替Pd(PPh3)4，同时向反应体系中加入配体PPh3，进行实施例1中步骤5的反应，收率为64.7%。按照实施例1中的步骤进行其余各步反应制备化合物I1g，纯度98.69%。六步累计收率33.6%。

[0153] 实施例38:R-2-氨基-3-苯基丙酸2-{(2R,3S,4S,5R)-5-[4-氨基-2-氧代-1(1H)-嘧啶基]-3,4-二羟基四氢呋喃基}甲酯盐酸盐(阿糖胞苷5'-位D-苯丙氨酸酯,I1g)的制备方法四

[0154] 以Boc保护D-苯丙氨酸代替Boc保护L-缬氨酸，进行实施例1中步骤4的反应。并以HCOOH/Et2NH代替HCOOH/n-BuNH2，进行实施例1中步骤5的反应，收率为69.9%。按照实施例1中的步骤进行其余各步反应制备化合物I1g，纯度98.62%。六步累计收率34.7%。

[0155] 实施例39:S-2-氨基-3-甲基丁酸2-{(2R,3R,5R)-5-[4-氨基-2-氧代-1(1H)-嘧啶基]-4,4-二氟-3-羟基四氢呋喃基}甲酯盐酸盐(吉西他滨5'-位L-缬氨酸酯,I2a)的制备方法一

[0156] 步骤1：氩气保护、冷水冷却下，将三苯甲基氯10.70g(38.37mmol)缓慢加至盐酸吉西他滨(VII2)10.00g(33.37mmol)与无水吡啶100mL的混和液中，注意充分搅拌反应体系，控制加料速度使加入的物料逐渐分散或溶解于体系中。加毕，继续搅拌2h后，再缓慢升温至30°C并继续反应20h，TLC检测反应完毕。

[0157] 减压浓缩尽量回收反应体系中的吡啶，再向残留物中加入无水乙醇20mL充分分散内容物。将该混和物缓慢倾至冰水500mL中，快速搅拌冰解，析出白色固体。

[0158] 抽滤，水洗，干燥，得淡黄色粗品16.50g。将粗品以乙酸乙酯40mL重结晶，抽滤，滤液冷却后逐渐析出白色固体。放置过夜，抽滤，干燥，得白色固体(VI2)15.39g，收率91.2%。m.p.267～269°C

[0159] 1H NMR(d6-DMSO)δ3.28(d,2H,5'-CH2),3.98(m,1H,3'-CH),4.28(q,1H,4'-CH),5.63(d,1H,J=7.5Hz,5-CH),6.17(s,1H,3'-OH),6.33(d,1H,1'-H),7.21(s,2H,4-NH2),
7.37(m,15H,Ph3),7.62(d,1H,J=7.5Hz,6-CH);

[0160] ESI-MS(m/z):506.2[M+H]+,528.2[M+Na]+,544.2[M+K]+.

[0161] 步骤2：氩气保护下，将氯甲酸烯丙酯3.91mL(37.86mmol)的二氯甲烷20mL溶液缓慢滴加至化合物VI28.70g(17.21mmol)、氢氧化钠2.38g(60.23mmol)和无水二氯甲烷50mL混和液中，过程中需要快速搅拌、并控制内温于-5～0°C，约需0.5h滴加完毕。缓慢将反应体系升至室温并继续搅拌反应4.0h，TLC检测反应完毕。

[0162] 加入冰水80mL，充分搅拌后静置分层，分取有机层，水层以二氯甲烷(40mL×2)萃取，合并有机层，以饱和食盐水(150mL×2)洗，无水硫酸钠干燥。过滤，滤液减压浓缩至干，再充分减压干燥，得淡黄色蜡状固体11.32g。粗品经乙酸乙酯与石油醚的混和溶剂重结晶，得白色固体(V2)10.35g，收率89.3%。m.p.140～142°C。

[0163] 1H NMR(d6-DMSO)δ3.42(m,2H,5'-CH2),4.40(q,1H,4'-CH),4.67(m,4H,CH2-CH-CH2),5.23～5.38(m,4H,CH2-CH-CH2),5.42(m,1H,3'-CH),5.92(m,2H,CHCH2),6.30(m,1H,1’-CH),7.04(d,1H,J=7.6Hz,5-CH),7.31(m,15H,Ph3),8.01(d,1H,J=7.6Hz,6-CH),11.04(s,1H,4-NH);

[0164] ESI-MS(m/z):674.4[M+H]+,696.4[M+Na]+,712.3[M+K]+,672.2[M-H]-.[0165] 步骤3：0～5°C、氩气保护下，将化合物V26.76g(0.01mol)加至氯化氢乙酸乙酯溶液(2.0mol/L)50mL中，注意边加边搅拌。随着反应进行，逐渐析出白色固体，TLC检测约2.0h反应结束。

[0166] 抽滤，乙酸乙酯洗，减压干燥，得白色固体2.95g。向母液中加入冰水20mL，以饱和Na2CO3溶液调pH7，充分搅拌后静置，分取有机层，水层再以乙酸乙酯50mL萃取。合并有机层，饱和食盐水(100mL×2)洗，无水硫酸钠干燥。过滤，减压浓缩至出现浑浊，并搅拌过夜，再次析出白色固体，抽滤，减压干燥，得0.88g。两次所得固体(IV2)累计总收率：88.6%。m.p.155～156°C。

[0167] 1H NMR(d6-DMSO)δ3.70(m,2H,5'-CH2),4.24(q,1H,4'-CH),4.62(m,4H,CH2-CH-CH2),5.19(s,1H,5'-OH),5.27(m,4H,CH2-CH-CH2),5.36(m,1H,3'-CH),5.91(m,2H,CHCH2),6.26(t,1H,1'-CH),7.08(d,1H,J=7.6Hz,5-CH),8.12(d,1H,J=7.6Hz,6-CH),10.96(s,1H,
4-NH);

[0168] ESI-MS(m/z):432.1[M+H]+,454.1[M+Na]+,430.0[M-H]-.

[0169] 步骤4：冰水浴、氩气保护下，将EDCI3.56g(18.55mmol)缓慢加至化合物IV24.00g(9.27mmol)、Boc保护L-缬氨酸2.22g(10.2mmol)、DMAP0.12g(1.00mmol)与无水二氯甲烷40mL的混和液中，，注意控制加料速度并控制反应内温不超过10°C。加毕，缓慢将反应体系升至室温，继续反应约2.0h，TLC检测反应完毕。

[0170] 加入冰水40mL，充分搅拌后静置分层，分取有机层，水层以二氯甲烷(15mL×2)萃取，合并有机层，依次以1.0mol/L盐酸溶液(50mL×2)、饱和碳酸钠溶液(50mL)、饱和食盐水(50mL)洗，无水硫酸钠干燥。过滤，滤液减压浓缩至干，减压干燥，得白色固体(III2)5.17g，收率88.4%。m.p.136～138°C。

[0171] 1H NMR(d6-DMSO)δ0.83(d,6H,(CH3)2CH),1.33(s,9H,(CH3)3C),1.96(t,1H,CH(CH3)2),3.82(t,1H,CH-NH),4.34(q,1H,4'-CH),4.50(d,2H,5'-CH2),4.63(q,4H,CH2-CH-CH2),5.25(m,4H,CH2-CH-CH2),5.36(t,1H,3'-CH),5.90(m,2H,CHCH2),6.31(t,1H,1'-CH),7.14(d,1H,NH-CH),7.25(d,1H,J=8.0Hz,5-CH),8.00(d,1H,J=8.0Hz,6-CH),11.00(s,1H,
4-NH);

[0172] ESI-MS(m/z):631.2[M+H]+,653.2[M+Na]+,669.2[M+K]+.

[0173] 步骤5：氩气保护下，于-50°C左右时将四(三苯基膦)钯0.28g(5.0mol%)加至化合物III23.00g(4.76mmol)、无水甲酸1.07mL(28.54mmol)、正丁胺2.78mL(28.54mmol)和无水四氢呋喃60mL混和液中。加毕，通过减压真空反复置换氩气以排除体系中的空气，然后缓慢升至室温反应，TLC检测显示搅拌反应6.0h后反应结束。

[0174] 减压浓缩反应液，残余物依次以二氯甲烷40mL与冷水50mL搅拌分散，静置分层。分取有机层，水层以二氯甲烷(30mL×2)萃取，合并有机层。以1.0mol/L盐酸溶液(50mL×2)将产物反萃至水层。水层与乙酸乙酯(80mL)充分搅拌，以饱和碳酸钠溶液调pH7后静置分层，分取有机层，以乙酸乙酯80mL萃取水层。合并有机层，饱和食盐水(150mL×2)洗，无水硫酸钠干燥。过滤，滤液减压浓缩至干，得灰白色固体1.68g。粗品经四氢呋喃重结晶，得白色固体(II2)1.55g，收率70.4%。m.p.151～153°C。

[0175] 1H NMR(d6-DMSO)δδ0.83(q,6H,(CH3)2CH),1.33(s,9H,(CH3)3C),1.96(m,1H,CH(CH3)2),3.82(t,1H,CH-NH),3.98(m,1H,3'-CH),4.20(m,1H,4'-CH),4.31(q,2H,5'-CH2),5.76(d,1H,J=7.6Hz,5-CH),6.13(t,1H,1'-CH),6.42(d,1H,3'-OH),7.24(d,1H,NH-CH),
7.38(d,2H,4-NH2),7.47(d,1H,J=7.6Hz,6-CH);

[0176] ESI-MS(m/z):463.2[M+H]+,485.1[M+Na]+,501.1[M+K]+.

[0177] 步骤6：氩气保护下，0～5°C时，将化合物II21.55g(3.35mmol)加至氯化氢乙酸乙酯溶液(2.0mol/L)20mL中，注意边加边搅拌。加毕，缓慢将反应体系升至室温，随着反应进行，逐渐析出白色固体。约4.0h反应完毕。

[0178] 抽滤，乙酸乙酯洗，减压干燥，得白色固体(I2a)1.34g，纯度98.75%，m.p.230～232°C。收率91.8%。

[0179] 1H NMR(d6-DMSO)δ0.93(q,6H,(CH3)2CH)),2.15(m,1H,CH(CH3)2),3.91(m,1H,CHNH2),4.13(m,1H,3'-CH),4.27(q,1H,4'-CH),4.46(q,2H,5'-CH2),6.12(t,1H,1'-CH),6.19(d,1H,J=7.6Hz,5-CH),7.88(d,1H,J=7.6Hz,6-CH),8.60(s,2H,4-NH2),8.69(s,2H,NH2-CH);

[0180] ESI-MS(m/z):363.1[M+H]+,385.1[M+Na]+,401.1[M+K]+.

[0181] 实施例40:S-2-氨基-3-甲基丁酸2-{(2R,3R,5R)-5-[4-氨基-2-氧代-1(1H)-嘧啶基]-4,4-二氟-3-羟基四氢呋喃基}甲酯盐酸盐(吉西他滨5'-位L-缬氨酸酯,I2a)的制备方法二

[0182] 以CDI代替EDCI，进行实施例39中步骤4的反应，收率为89.6%。按照实施例39中的步骤进行其余各步反应制备化合物I2a，纯度98.90%。六步累计收率32.1%。

[0183] 实施例41:S-2-氨基-3-甲基丁酸2-{(2R,3R,5R)-5-[4-氨基-2-氧代-1(1H)-嘧啶基]-4,4-二氟-3-羟基四氢呋喃基}甲酯盐酸盐(吉西他滨5'-位L-缬氨酸酯,I2a)的制备方法三

[0184] 以DCC代替EDCI，进行实施例39中步骤4的反应，收率为91.3%。按照实施例39中的步骤进行其余各步反应制备化合物I2a，纯度98.60%。六步累计收率31.5%。

[0185] 实施例42:S-2-氨基-3-甲基丁酸2-{(2R,3R,5R)-5-[4-氨基-2-氧代-1(1H)-嘧啶基]-4,4-二氟-3-羟基四氢呋喃基}甲酯盐酸盐(吉西他滨5'-位L-缬氨酸酯,I2a)的制备方法四

[0186] 以PdCl2代替Pd(PPh3)4，并向反应体系中加入配体PPh3，进行实施例39中步骤5的反应，收率为67.2%。按照实施例39中的步骤进行其余各步反应制备化合物I2a，纯度98.42%。六步累计收率31.0%。

[0187] 实施例43:S-2-氨基-3-甲基丁酸2-{(2R,3R,5R)-5-[4-氨基-2-氧代-1(1H)-嘧啶基]-4,4-二氟-3-羟基四氢呋喃基}甲酯盐酸盐(吉西他滨5'-位L-缬氨酸酯,I2a)的制备方法五

[0188] 以Pd(OAc)2代替Pd(PPh3)4，并向反应体系中加入配体PPh3，进行实施例39中步骤5的反应，收率为66.8%。按照实施例39中的步骤进行其余各步反应制备化合物I2a，纯度98.51%。六步累计收率32.9%。

[0189] 实施例44:S-2-氨基-3-甲基丁酸2-{(2R,3R,5R)-5-[4-氨基-2-氧代-1(1H)-嘧啶基]-4,4-二氟-3-羟基四氢呋喃基}甲酯盐酸盐(吉西他滨5'-位L-缬氨酸酯,I2a)的制备方法六

[0190] 以Pd2(dba)3·CHCl3代替Pd(PPh3)4，并向反应体系中加入配体PPh3，进行实施例39中步骤5的反应，收率为62.8%。按照实施例39中的步骤进行其余各步反应制备化合物I2a，纯度98.28%。六步累计收率31.8%。

[0191] 实施例45:S-2-氨基-3-甲基丁酸2-{(2R,3R,5R)-5-[4-氨基-2-氧代-1(1H)-嘧啶基]-4,4-二氟-3-羟基四氢呋喃基}甲酯盐酸盐(吉西他滨5'-位L-缬氨酸酯,I2a)的制备方法七

[0192] 以Dimedone代替HCOOH/n-BuNH2，进行实施例39中步骤5的反应，收率为64.9%。按照实施例39中的步骤进行其余各步反应制备化合物I2a，纯度98.44%。六步累计收率32.8%。

[0193] 实施例46:S-2-氨基-3-甲基丁酸2-{(2R,3R,5R)-5-[4-氨基-2-氧代-1(1H)-嘧啶基]-4,4-二氟-3-羟基四氢呋喃基}甲酯盐酸盐(吉西他滨5'-位L-缬氨酸酯,I2a)的制备方法八

[0194] 以NDMBA代替HCOOH/n-BuNH2，进行实施例39中步骤5的反应，收率为65.9%。按照实施例39中的步骤进行其余各步反应制备化合物I2a，纯度98.34%。六步累计收率33.1%。

[0195] 实施例47:S-2-氨基-3-甲基丁酸2-{(2R,3R,5R)-5-[4-氨基-2-氧代-1(1H)-嘧啶基]-4,4-二氟-3-羟基四氢呋喃基}甲酯盐酸盐(吉西他滨5'-位L-缬氨酸酯,I2a)的制备方法九

[0196] 以HCOOH/Et2NH代替HCOOH/n-BuNH2，进行实施例39中步骤5的反应，收率为68.6%。按照实施例39中的步骤进行其余各步反应制备化合物I2a，纯度98.72%。六步累计收率
33.5%。

[0197] 实施例48:S-2-氨基-3-甲基丁酸2-{(2R,3R,5R)-5-[4-氨基-2-氧代-1(1H)-嘧啶基]-4,4-二氟-3-羟基四氢呋喃基}甲酯盐酸盐(吉西他滨5'-位L-缬氨酸酯,I2a)的制备方法十

[0198] 以HCOOH/Et3N代替HCOOH/n-BuNH2，进行实施例39中步骤5的反应，收率为69.1%。按照实施例39中的步骤进行其余各步反应制备化合物I2a，纯度98.92%。六步累计收率32.2%。

[0199] 实施例49:R-2-氨基-3-甲基丁酸2-{(2R,3R,5R)-5-[4-氨基-2-氧代-1(1H)-嘧啶基]-4,4-二氟-3-羟基四氢呋喃基}甲酯盐酸盐(吉西他滨5'-位D-缬氨酸酯,I2b)的制备方法一

[0200] 以Boc保护D-缬氨酸代替Boc保护L-缬氨酸，进行实施例39中步骤4的反应，收率为92.0%。按照实施例39中的步骤进行其余各步反应制备化合物I2b，得白色固体1.52g，纯度
98.71%，m.p.226～228°C。六步累计收率33.2%。

[0201] 1H NMR(d6-DMSO)δ0.94(d,6H,(CH3)2CH)),2.16(m,1H,CH(CH3)2),3.92(s,1H,CHNH),4.10(m,1H,3'-CH),4.32(q,1H,4'-CH),4.47(m,2H,5'-CH2),6.13(t,1H,1'-CH),6.18(d,1H,J=7.8Hz,5-CH),7.90(d,1H,J=7.8Hz,6-CH),8.58(s,2H,4-NH2),8.73(d,2H,NH2-CH);

[0202] ESI-MS(m/z):363.1[M+H]+,385.1[M+Na]+.

[0203] 实施例50:R-2-氨基-3-甲基丁酸2-{(2R,3R,5R)-5-[4-氨基-2-氧代-1(1H)-嘧啶基]-4,4-二氟-3-羟基四氢呋喃基}甲酯盐酸盐(吉西他滨5'-位D-缬氨酸酯,I2b)的制备方法二

[0204] 以Boc保护D-缬氨酸代替Boc保护L-缬氨酸、DCC代替EDCI，进行实施例39中步骤4的反应，收率为92.2%。按照实施例39中的步骤进行其余各步反应制备化合物I2b，纯度 98.65%。六步累计收率35.2%。

[0205] 实施例51:R-2-氨基-3-甲基丁酸2-{(2R,3R,5R)-5-[4-氨基-2-氧代-1(1H)-嘧啶基]-4,4-二氟-3-羟基四氢呋喃基}甲酯盐酸盐(吉西他滨5'-位D-缬氨酸酯,I2b)的制备方法三

[0206] 以Boc保护D-缬氨酸代替Boc保护L-缬氨酸，进行实施例39中步骤4的反应。并以PdCl2代替Pd(PPh3)4，同时向反应体系中加入配体PPh3，进行实施例39中步骤5的反应，收率为66.9%。按照实施例39中的步骤进行其余各步反应制备化合物I2b，纯度98.37%。六步累计收率34.0%。

[0207] 实施例52:R-2-氨基-3-甲基丁酸2-{(2R,3R,5R)-5-[4-氨基-2-氧代-1(1H)-嘧啶基]-4,4-二氟-3-羟基四氢呋喃基}甲酯盐酸盐(吉西他滨5'-位D-缬氨酸酯,I2b)的制备方法四

[0208] 以Boc保护D-缬氨酸代替Boc保护L-缬氨酸，进行实施例39中步骤4的反应。并以HCOO NH4+代替HCOOH/n-BuNH2，进行实施例39中步骤5的反应，收率为62.1%。按照实施例39中的步骤进行其余各步反应制备化合物I2b，纯度98.62%。六步累计收率32.4%。

[0209] 实施例53:S-2-氨基丙酸2-{(2R,3R,5R)-5-[4-氨基-2-氧代-1(1H)-嘧啶基]-4,4-二氟-3-羟基四氢呋喃基}甲酯盐酸盐(吉西他滨5'-位L-丙氨酸酯,I2c)的制备方法一[0210] 以Boc保护L-丙氨酸代替Boc保护L-缬氨酸，进行实施例39中步骤4的反应，收率为
90.6%。按照实施例39中的步骤进行其余各步反应制备化合物I2c，得白色固体1.15g，纯度
98.50%，m.p.237～239°C。六步累计收率32.1%。

[0211] 1H NMR(d6-DMSO)δ1.38(d,3H,CH3-CH),3.86(q,1H,CHNH),4.10(m,1H,3'-CH),4.32(q,1H,4'-CH),4.47(m,2H,5'-CH2),6.13(t,1H,1'-CH),6.18(d,1H,J=7.6Hz,5-CH),
7.90(d,1H,J=7.6Hz,6-CH),8.58(s,2H,4-NH2),8.73(d,2H,NH2-CH);

[0212] ESI-MS(m/z):335.0[M+H]+,357.0[M+Na]+,372.9[M+K]+.

[0213] 实施例54:S-2-氨基丙酸2-{(2R,3R,5R)-5-[4-氨基-2-氧代-1(1H)-嘧啶基]-4,4-二氟-3-羟基四氢呋喃基}甲酯盐酸盐(吉西他滨5'-位L-丙氨酸酯,I2c)的制备方法二[0214] 以Boc保护L-丙氨酸代替Boc保护L-缬氨酸、CDI代替EDCI，进行实施例39中步骤4的反应，收率为89.5%。按照实施例39中的步骤进行其余各步反应制备化合物I2c，纯度
98.85%。六步累计收率36.7%。

[0215] 实施例55:S-2-氨基丙酸2-{(2R,3R,5R)-5-[4-氨基-2-氧代-1(1H)-嘧啶基]-4,4-二氟-3-羟基四氢呋喃基}甲酯盐酸盐(吉西他滨5'-位L-丙氨酸酯,I2c)的制备方法三[0216] 以Boc保护L-丙氨酸代替Boc保护L-缬氨酸，进行实施例39中步骤4的反应。并以Pd(OAc)2代替Pd(PPh3)4，同时向反应体系中加入配体PPh3，进行实施例39中步骤5的反应，收率为68.4%。按照实施例39中的步骤进行其余各步反应制备化合物I2c，纯度98.70%。六步累计收率34.9%。

[0217] 实施例56:S-2-氨基丙酸2-{(2R,3R,5R)-5-[4-氨基-2-氧代-1(1H)-嘧啶基]-4,4-二氟-3-羟基四氢呋喃基}甲酯盐酸盐(吉西他滨5'-位L-丙氨酸酯,I2c)的制备方法四[0218] 以Boc保护L-丙氨酸代替Boc保护L-缬氨酸，进行实施例39中步骤4的反应。并以Et2NH2+HCO3代替HCOOH/n-BuNH2，进行实施例39中步骤5的反应，收率为68.1%。按照实施例39中的步骤进行其余各步反应制备化合物I2c，纯度98.67%。六步累计收率33.3%。

[0219] 实施例57:R-2-氨基丙酸2-{(2R,3R,5R)-5-[4-氨基-2-氧代-1(1H)-嘧啶基]-4,4-二氟-3-羟基四氢呋喃基}甲酯盐酸盐(吉西他滨5'-位D-丙氨酸酯,I2d)的制备方法一[0220] 以Boc保护D-丙氨酸代替Boc保护L-缬氨酸，进行实施例39中步骤4的反应，收率为
90.8%。按照实施例39中的步骤进行其余各步反应制备化合物I2d，得白色固体1.22g，纯度
98.42%，m.p.241～243°C。六步累计收率33.6%。

[0221] 1H NMR(d6-DMSO)δ1.39(d,3H,CH3-CH),3.98(q,1H,CHNH2),4.12(m,1H,3'-CH),4.34(q,1H,4'-CH),4.46(m,2H,5'-CH2),6.11(t,1H,1'-CH),6.20(d,1H,J=7.8Hz,5-CH),
7.99(d,1H,J=7.8Hz,6-CH),8.59(s,2H,4-NH2),8.77(s,2H,NH2-CH);

[0222] ESI-MS(m/z):335.1[M+H]+,357.1[M+Na]+,332.9[M-H]-,378.9[M+HCOO]-.[0223] 实施例58:R-2-氨基丙酸2-{(2R,3R,5R)-5-[4-氨基-2-氧代-1(1H)-嘧啶基]-4,4-二氟-3-羟基四氢呋喃基}甲酯盐酸盐(吉西他滨5'-位D-丙氨酸酯,I2d)的制备方法二[0224] 以Boc保护D-丙氨酸代替Boc保护L-缬氨酸、HATU代替EDCI，进行实施例39中步骤4的反应，收率为85.6%。按照实施例39中的步骤进行其余各步反应制备化合物I2d，纯度
98.69%。六步累计收率33.9%。

[0225] 实施例59:R-2-氨基丙酸2-{(2R,3R,5R)-5-[4-氨基-2-氧代-1(1H)-嘧啶基]-4,4-二氟-3-羟基四氢呋喃基}甲酯盐酸盐(吉西他滨5'-位D-丙氨酸酯,I2d)的制备方法三[0226] 以Boc保护D-丙氨酸代替Boc保护L-缬氨酸，进行实施例39中步骤4的反应。并以Pd2(dba)3·CHCl3代替Pd(PPh3)4，同时向反应体系中加入配体PPh3，进行实施例39中步骤5的反应，收率为67.2%。按照实施例39中的步骤进行其余各步反应制备化合物I2d，纯度
98.64%。六步累计收率33.7%。

[0227] 实施例60:R-2-氨基丙酸2-{(2R,3R,5R)-5-[4-氨基-2-氧代-1(1H)-嘧啶基]-4,4-二氟-3-羟基四氢呋喃基}甲酯盐酸盐(吉西他滨5'-位D-丙氨酸酯,I2d)的制备方法四[0228] 以Boc保护D-丙氨酸代替Boc保护L-缬氨酸，进行实施例39中步骤4的反应。并以(Et2NH2+)2CO32代替HCOOH/n-BuNH2，进行实施例39中步骤5的反应，收率为62.4%。按照实施例39中的步骤进行其余各步反应制备化合物I2d，纯度98.51%。六步累计收率32.0%。

[0229] 实施例61:S-2-氨基-4-甲基戊酸2-{(2R,3R,5R)-5-[4-氨基-2-氧代-1(1H)-嘧啶基]-4,4-二氟-3-羟基四氢呋喃基}甲酯盐酸盐(吉西他滨5'-位L-亮氨酸酯,I2e)的制备方法一

[0230] 以Boc保护L-亮氨酸代替Boc保护L-缬氨酸，进行实施例39中步骤4的反应，收率为89.3%。按照实施例39中的步骤进行其余各步反应制备化合物I2e，得白色固体1.18g，纯度
98.89%，m.p.194～196°C。六步累计收率31.1%。

[0231] 1H NMR(d6-DMSO)δ0.84(d,6H,(CH3)2CH)),1.62(t,2H,CH2),1,72(m,1H,CH(CH3)2),3.98(q,1H,CHNH2),4.11(m,1H,3'-CH),4.29(q,1H,4'-CH),4.46(m,2H,5'-CH2),6.11(t,1H,1'-CH),6.18(d,1H,J=7.9Hz,5-CH),7.87(d,1H,J=7.9Hz,6-CH),8.59(s,2H,4-NH2),8.67(s,2H,NH2-CH);

[0232] ESI-MS(m/z):377.0[M+H]+,399.0[M+Na]+,415.0[M+K]+.

[0233] 实施例62:S-2-氨基-4-甲基戊酸2-{(2R,3R,5R)-5-[4-氨基-2-氧代-1(1H)-嘧啶基]-4,4-二氟-3-羟基四氢呋喃基}甲酯盐酸盐(吉西他滨5'-位L-亮氨酸酯,I2e)的制备方法二

[0234] 以Boc保护L-亮氨酸代替Boc保护L-缬氨酸、HBTU代替EDCI，进行实施例39中步骤4的反应，收率为87.4%。按照实施例39中的步骤进行其余各步反应制备化合物I2e，纯度98.29%。六步累计收率32.7%。

[0235] 实施例63:S-2-氨基-4-甲基戊酸2-{(2R,3R,5R)-5-[4-氨基-2-氧代-1(1H)-嘧啶基]-4,4-二氟-3-羟基四氢呋喃基}甲酯盐酸盐(吉西他滨5'-位L-亮氨酸酯,I2e)的制备方法三

[0236] 以Boc保护L-亮氨酸代替Boc保护L-缬氨酸，进行实施例39中步骤4的反应。并以HCOOH/Et3N代替HCOOH/n-BuNH2，进行实施例39中步骤5的反应，收率为65.0%。按照实施例39中的步骤进行其余各步反应制备化合物I2e，纯度98.30%。六步累计收率32.0%。

[0237] 实施例64:S-2-氨基-3-甲基戊酸2-{(2R,3R,5R)-5-[4-氨基-2-氧代-1(1H)-嘧啶基]-4,4-二氟-3-羟基四氢呋喃基}甲酯盐酸盐(吉西他滨5'-位L-异亮氨酸酯,I2f)的制备方法一

[0238] 以Boc保护L-异亮氨酸代替Boc保护L-缬氨酸，进行实施例39中步骤4的反应，收率为88.1%。按照实施例39中的步骤进行其余各步反应制备化合物I2f，得白色固体1.02g，纯度98.46%，m.p.208～210°C。六步累计收率31.6%。

[0239] 1H NMR(d6-DMSO)δ0.81(m,6H,CH3CH2,CH3CH),1.21(m,1H,CH2CH3),1.91(m,1H,CH3CH),3.94(q,1H,CHNH2),4.09(m,1H,3'-CH),4.26(q,1H,4'-CH),4.43(m,2H,5'-CH2),6.10(t,1H,1'-CH),6.18(d,1H,J=7.7Hz,5-CH),7.84(d,1H,J=7.7Hz,6-CH),8.69(s,2H,4-NH2),8.69(s,2H,NH2-CH);

[0240] ESI-MS(m/z):377.1[M+H]+,399.1[M+Na]+.

[0241] 实施例65:S-2-氨基-3-甲基戊酸2-{(2R,3R,5R)-5-[4-氨基-2-氧代-1(1H)-嘧啶基]-4,4-二氟-3-羟基四氢呋喃基}甲酯盐酸盐(吉西他滨5'-位L-异亮氨酸酯,I2f)的制备方法二

[0242] 以Boc保护L-异亮氨酸代替Boc保护L-缬氨酸、HOAt代替EDCI，进行实施例39中步骤4的反应，收率为82.9%。按照实施例39中的步骤进行其余各步反应制备化合物I2f，纯度98.16%。六步累计收率30.8%。

[0243] 实施例66:S-2-氨基-3-甲基戊酸2-{(2R,3R,5R)-5-[4-氨基-2-氧代-1(1H)-嘧啶基]-4,4-二氟-3-羟基四氢呋喃基}甲酯盐酸盐(吉西他滨5'-位L-异亮氨酸酯,I2f)的制备方法三

[0244] 以Boc保护L-异亮氨酸代替Boc保护L-缬氨酸，进行实施例39中步骤4的反应。并以HCOOH/Et2NH代替HCOOH/n-BuNH2，进行实施例39中步骤5的反应，收率为63.8%。按照实施例39中的步骤进行其余各步反应制备化合物I2f，纯度98.48%。六步累计收率32.7%。

[0245] 实施例67:S-2-氨基-3-苯基丙酸2-{(2R,3R,5R)-5-[4-氨基-2-氧代-1(1H)-嘧啶基]-4,4-二氟-3-羟基四氢呋喃基}甲酯盐酸盐(吉西他滨5'-位L-苯丙氨酸酯,I2g)的制备方法一

[0246] 以Boc保护L-苯丙氨酸代替Boc保护L-缬氨酸，进行实施例39中步骤4的反应，收率为90.4%。按照实施例39中的步骤进行其余各步反应制备化合物I2g，得白色固体1.17g，纯度98.43%，m.p.242～244°C。六步累计收率33.4%。

[0247] 1H NMR(d6-DMSO)δ3.12(q,2H,CH2Ph),4.01(m,1H,CHNH),4.09(m,1H,3'-CH),4.32(m,2H,5'-CH2),4.44(q,1H,4'-CH),6.07(t,1H,1'-CH),6.20(d,1H,J=7.8Hz,5-CH),7.24(m,5H,Ph),7.78(d,1H,J=7.8Hz,6-CH),8.68(s,2H,4-NH2),8.68(s,2H,NH2-CH);

[0248] ESI-MS(m/z):411.0[M+H]+,433.0[M+Na]+,449.0[M+K]+.

[0249] 实施例68:S-2-氨基-3-苯基丙酸2-{(2R,3R,5R)-5-[4-氨基-2-氧代-1(1H)-嘧啶基]-4,4-二氟-3-羟基四氢呋喃基}甲酯盐酸盐(吉西他滨5'-位L-苯丙氨酸酯,I2g)的制备方法二

[0250] 以Boc保护L-苯丙氨酸代替Boc保护L-缬氨酸、HOBt代替EDCI，进行实施例39中步骤4的反应，收率为82.3%。按照实施例39中的步骤进行其余各步反应制备化合物I2g，纯度98.15%。六步累计收率32.1%。

[0251] 实施例69:R-2-氨基-3-苯基丙酸2-{(2R,3R,5R)-5-[4-氨基-2-氧代-1(1H)-嘧啶基]-4,4-二氟-3-羟基四氢呋喃基}甲酯盐酸盐(吉西他滨5'-位D-苯丙氨酸酯,I2h)的制备方法一

[0252] 以Boc保护D-苯丙氨酸代替Boc保护L-缬氨酸，进行实施例39中步骤4的反应，收率为89.9%。按照实施例39中的步骤进行其余各步反应制备化合物I2h，得白色固体1.04g，纯度98.92%，m.p.233～235°C。六步累计收率34.9%。

[0253] 1H NMR(d6-DMSO)δ3.12(q,2H,CH2Ph),3.91(m,1H,CHNH),4.23(m,1H,3'-CH),4.31(m,2H,5'-CH2),4.37(q,1H,4'-CH),6.07(t,1H,1'-CH),6.14(d,1H,J=7.8Hz,5-CH),7.25(m,5H,Ph),7.82(d,1H,J=7.8Hz,6-CH),8.66(s,2H,4-NH2),8.66(s,2H,NH2-CH);

[0254] ESI-MS(m/z):411.1[M+H]+,433.1[M+Na]+,449.0[M+K]+.

[0255] 实施例70:R-2-氨基-3-苯基丙酸2-{(2R,3R,5R)-5-[4-氨基-2-氧代-1(1H)-嘧啶基]-4,4-二氟-3-羟基四氢呋喃基}甲酯盐酸盐(吉西他滨5'-位D-苯丙氨酸酯,I2h)的制备方法二

[0256] 以Boc保护D-苯丙氨酸代替Boc保护L-缬氨酸，进行实施例39中步骤4的反应。并以NDMBA代替HCOOH/n-BuNH2，进行实施例39中步骤5的反应，收率为62.9%。按照实施例39中的步骤进行其余各步反应制备化合物I2h，纯度98.28%。六步累计收率32.7%。

[0257] 实施例71:2-氨基乙酸2-{(2R,3R,5R)-5-[4-氨基-2-氧代-1(1H)-嘧啶基]-4,4-二氟-3-羟基四氢呋喃基}甲酯盐酸盐(吉西他滨5'-位甘氨酸酯,I2i)的制备方法一[0258] 以Boc保护甘氨酸代替Boc保护L-缬氨酸，进行实施例39中步骤4的反应，收率为82.6%。按照实施例39中的步骤进行其余各步反应制备化合物I2i，得白色固体1.13g，纯度
98.08%，m.p.202～204°C。六步累计收率30.8%。

[0259] 1H NMR(d6-DMSO)δ3.98(m,1H,3'-CH),4.09(m,2H,CH2NH2),4.29(q,1H,4'-CH),4.48(m,2H,5'-CH2),6.11(t,1H,1'-CH),6.24(d,1H,J=7.9Hz,5-CH),7.90(d,1H,J=7.9Hz,
6-CH),8.50(s,2H,4-NH2),8.85(s,2H,NH2-CH);

[0260] ESI-MS(m/z):321.0[M+H]+,343.0[M+Na]+.

[0261] 实施例72:2-氨基乙酸2-{(2R,3R,5R)-5-[4-氨基-2-氧代-1(1H)-嘧啶基]-4,4-二氟-3-羟基四氢呋喃基}甲酯盐酸盐(吉西他滨5'-位甘氨酸酯,I2i)的制备方法二[0262] 以Boc保护甘氨酸代替Boc保护L-缬氨酸，进行实施例39中步骤4的反应。并以Dimedone代替HCOOH/n-BuNH2，进行实施例39中步骤5的反应，收率为63.2%。按照实施例39中的步骤进行其余各步反应制备化合物I2i，纯度98.23%。六步累计收率31.0%。

[0263] 实施例73:S-2-氨基-3-甲基丁酸2-{(2R,3R,4R,5R)-5-[4-氨基-2-氧代-1(1H)-嘧啶基]-4-氟-3-羟基

[0264]4.45(q,2H,5'-CH),6.16(t,1H,1'-CH),6.58(d,1H,J=7.9Hz,5-CH),7.94(d,1H,J=7.9Hz,
6-CH),8.56(s,2H,4-NH2),8.82(s,2H,NH2-CH);

[0265] ESI-MS(m/z):359.2[M+H]+,381.2[M+Na]+,397.1[M+K]+.

[0266] 实施例74:S-2-氨基-3-甲基丁酸2-{(2R,3R,4R,5R)-5-[4-氨基-2-氧代-1(1H)-嘧啶基]-4-氟-3-羟基-4-甲基四氢呋喃基}甲酯盐酸盐(PSI–61305'-位L-缬氨酸酯,I3a)的制备方法二

[0267] 以PSI–6130代替阿糖胞苷，并以CDI代替EDCI，进行实施例1中步骤4的反应，收率为86.3%。按照实施例1中的步骤进行其余各步反应制备化合物I3a，纯度98.48%。六步累计收率31.1%。

[0268] 实施例75:S-2-氨基-3-甲基丁酸2-{(2R,3R,4R,5R)-5-[4-氨基-2-氧代-1(1H)-嘧啶基]-4-氟-3-羟基-4-甲基四氢呋喃基}甲酯盐酸盐(PSI–61305'-位L-缬氨酸酯,I3a)的制备方法三

[0269] 以PSI–6130代替阿糖胞苷，并以PdCl2代替Pd(PPh3)4，同时向反应体系中加入配体PPh3，进行实施例1中步骤5的反应，收率为66.3%。按照实施例1中的步骤进行其余各步反应制备化合物I3a，纯度98.36%。六步累计收率30.2%。

[0270] 实施例76:S-2-氨基-3-甲基丁酸2-{(2R,3R,4R,5R)-5-[4-氨基-2-氧代-1(1H)-嘧啶基]-4-氟-3-羟基-4-甲基四氢呋喃基}甲酯盐酸盐(PSI–61305'-位L-缬氨酸酯,I3a)的制备方法四

[0271] 以PSI–6130代替阿糖胞苷，并以Dimedone代替HCOOH/n-BuNH2，进行实施例1中步骤5的反应，收率为67.0%。按照实施例1中的步骤进行其余各步反应制备化合物I3a，纯度98.23%。六步累计收率31.8%。

[0272] 实施例77:R-2-氨基-3-甲基丁酸2-{(2R,3R,4R,5R)-5-[4-氨基-2-氧代-1(1H)-嘧啶基]-4-氟-3-羟基-4-甲基四氢呋喃基}甲酯盐酸盐(PSI–61305'-位D-缬氨酸酯,I3b)的制备方法一

[0273] 以PSI–6130代替阿糖胞苷，并以Boc保护D-缬氨酸代替Boc保护L-缬氨酸、DCC代替EDCI，进行实施例1中步骤4的反应，收率为92.0%。按照实施例1中的步骤进行其余各步反应制备化合物I3b，纯度98.81%。六步累计收率31.1%。

[0274] 1H NMR(d6-DMSO)δ0.95(d,6H,(CH3)2CH)),1.32(d,3H,CH3CF),2.13(m,1H,CH(CH3)2),3.94(s,1H,CHNH),4.12(m,1H,3'-CH),4.31(q,1H,4'-CH),4.48(m,2H,5'-CH2),6.15(t,1H,1'-CH),6.20(d,1H,J=7.8Hz,5-CH),7.87(d,1H,J=7.8Hz,6-CH),8.56(s,2H,4-NH2),8.70(d,2H,NH2-CH);

[0275] ESI-MS(m/z):359.1[M+H]+,381.1[M+Na]+.

[0276] 实施例78:R-2-氨基-3-甲基丁酸2-{(2R,3R,4R,5R)-5-[4-氨基-2-氧代-1(1H)-嘧啶基]-4-氟-3-羟基-4-甲基四氢呋喃基}甲酯盐酸盐(PSI–61305'-位D-缬氨酸酯,I3b)的制备方法三

[0277] 以PSI–6130代替阿糖胞苷、Boc保护D-缬氨酸代替Boc保护L-缬氨酸，并以Pd(OAc)2代替Pd(PPh3)4，同时向反应体系中加入配体PPh3，进行实施例1中步骤5的反应，收率为68.3%。按照实施例1中的步骤进行其余各步反应制备化合物I3b，纯度98.63%。六步累计收率30.9%。

[0278] 实施例79:R-2-氨基-3-甲基丁酸2-{(2R,3R,4R,5R)-5-[4-氨基-2-氧代-1(1H)-嘧啶基]-4-氟-3-羟基-4-甲基四氢呋喃基}甲酯盐酸盐(PSI–61305'-位D-缬氨酸酯,I3b)的制备方法四

[0279] 以PSI–6130代替阿糖胞苷、Boc保护D-缬氨酸代替Boc保护L-缬氨酸，并以NDMBA 代替HCOOH/n-BuNH2，进行实施例1中步骤5的反应，收率为63.9%。按照实施例1中的步骤进行其余各步反应制备化合物I3b，纯度98.52%。六步累计收率31.7%。

[0280] 实施例80:S-2-氨基丙酸2-{(2R,3R,4R,5R)-5-[4-氨基-2-氧代-1(1H)-嘧啶基]-4-氟-3-羟基-4-甲基四氢呋喃基}甲酯盐酸盐(PSI–61305'-位L-丙氨酸酯,I3c)的制备方法一

[0281] 以PSI–6130代替阿糖胞苷、Boc保护L-丙氨酸代替Boc保护L-缬氨酸，经由实施例1的类似制备方法，可制备化合物I3c，纯度98.43%。六步累计收率31.8%。

[0282] 1H NMR(d6-DMSO)δ1.32～1.38(d,d,6H,CH3-CH,CH3CF),3.84(q,1H,CHNH),4.08(m,1H,3'-CH),4.30(q,1H,4'-CH),4.45(m,2H,5'-CH2),6.15(t,1H,1'-CH),6.20(d,1H,J=7.7Hz,5-CH),7.80(d,1H,J=7.7Hz,6-CH),8.60(s,2H,4-NH2),8.75(d,2H,NH2-CH);

[0283] ESI-MS(m/z):331.0[M+H]+,353.0[M+Na]+,368.9[M+K]+.

[0284] 实施例81:S-2-氨基丙酸2-{(2R,3R,4R,5R)-5-[4-氨基-2-氧代-1(1H)-嘧啶基]-4-氟-3-羟基-4-甲基四氢呋喃基}甲酯盐酸盐(PSI–61305'-位L-丙氨酸酯,I3c)的制备方法二

[0285] 以PSI–6130代替阿糖胞苷，并以Boc保护L-丙氨酸代替Boc保护L-缬氨酸、HATU代替EDCI，进行实施例1中步骤4的反应，收率为83.8%。按照实施例1中的步骤进行其余各步反应制备化合物I3c，纯度98.41%。六步累计收率32.9%。

[0286] 实施例82:S-2-氨基丙酸2-{(2R,3R,4R,5R)-5-[4-氨基-2-氧代-1(1H)-嘧啶基]-4-氟-3-羟基-4-甲基四氢呋喃基}甲酯盐酸盐(PSI–61305'-位L-丙氨酸酯,I3c)的制备方法三

[0287] 以PSI–6130代替阿糖胞苷、Boc保护L-丙氨酸代替Boc保护L-缬氨酸，并以HCOO-NH4+代替HCOOH/n-BuNH2，进行实施例1中步骤5的反应，收率为67.0%。按照实施例1中的步骤进行其余各步反应制备化合物I3c，纯度98.49%。六步累计收率32.1%。

[0288] 实施例83:R-2-氨基丙酸2-{(2R,3R,4R,5R)-5-[4-氨基-2-氧代-1(1H)-嘧啶基]-4-氟-3-羟基-4-甲基四氢呋喃基}甲酯盐酸盐(PSI–61305'-位D-丙氨酸酯,I3d)的制备方法一

[0289] 以PSI–6130代替阿糖胞苷，Boc保护D-丙氨酸代替Boc保护L-缬氨酸，经由实施例1的类似制备方法，可制备化合物I3d，纯度98.10%。六步累计收率32.6%。

[0290] 1H NMR(d6-DMSO)δ1.35～1.40(d,d,6H,CH3-CH,CH3CF),3.85(q,1H,CHNH),4.10(m,1H,3'-CH),4.28(q,1H,4'-CH),4.42(m,2H,5'-CH2),6.12(t,1H,1'-CH),6.22(d,1H,J=7.9Hz,5-CH),7.78(d,1H,J=7.9Hz,6-CH),8.56(s,2H,4-NH2),8.69(d,2H,NH2-CH);

[0291] ESI-MS(m/z):331.1[M+H]+,353.1[M+Na]+.

[0292] 实施例84:R-2-氨基丙酸2-{(2R,3R,4R,5R)-5-[4-氨基-2-氧代-1(1H)-嘧啶基]-4-氟-3-羟基-4-甲基四氢呋喃基}甲酯盐酸盐(PSI–61305'-位D-丙氨酸酯,I3d)的制备方法二

[0293] 以PSI–6130代替阿糖胞苷、Boc保护D-缬氨酸代替Boc保护L-缬氨酸，并以 Pd2(dba)3·CHCl3代替Pd(PPh3)4，同时向反应体系中加入配体PPh3，进行实施例1中步骤5的反应，收率为66.7%。按照实施例1中的步骤进行其余各步反应制备化合物I3d，纯度98.56%。六步累计收率31.8%。

[0294] 实施例85:R-2-氨基丙酸2-{(2R,3R,4R,5R)-5-[4-氨基-2-氧代-1(1H)-嘧啶基]-4-氟-3-羟基-4-甲基四氢呋喃基}甲酯盐酸盐(PSI–61305'-位D-丙氨酸酯,I3d)的制备方法三

[0295] 以PSI–6130代替阿糖胞苷、Boc保护D-丙氨酸代替Boc保护L-缬氨酸，并以HCOOH/Et2NH代替HCOOH/n-BuNH2，进行实施例1中步骤5的反应，收率为65.3%。按照实施例1中的步骤进行其余各步反应制备化合物I3d，纯度98.62%。六步累计收率32.8%。

[0296] 实施例86:S-2-氨基-4-甲基戊酸2-{(2R,3R,4R,5R)-5-[4-氨基-2-氧代-1(1H)-嘧啶基]-4-氟-3-羟基-4-甲基四氢呋喃基}甲酯盐酸盐(PSI–61305'-位L-亮氨酸酯,I3e)的制备方法一

[0297] 以PSI–6130代替阿糖胞苷，Boc保护L-亮氨酸代替Boc保护L-缬氨酸，经由实施例1的类似制备方法，可制备化合物I3e，纯度99.04%。六步累计收率34.3%。

[0298] 1H NMR(d6-DMSO)δ0.85(d,6H,(CH3)2CH)),1.33(d,3H,CH3CF),1.64(t,2H,CH2(CH)2),1,73(m,1H,CH(CH3)2),3.96(q,1H,CHNH2),4.10(m,1H,3'-CH),4.28(q,1H,4'-CH),4.44(m,2H,5’-CH2),6.13(t,1H,1'-CH),6.20(d,1H,J=8.0Hz,5-CH),7.88(d,1H,J=8.0Hz,
6-CH),8.60(s,2H,4-NH2),8.72(s,2H,NH2-CH);

[0299] ESI-MS(m/z):373.0[M+H]+,395.0[M+Na]+,411.0[M+K]+.

[0300] 实施例87:S-2-氨基-4-甲基戊酸2-{(2R,3R,4R,5R)-5-[4-氨基-2-氧代-1(1H)-嘧啶基]-4-氟-3-羟基-4-甲基四氢呋喃基}甲酯盐酸盐(PSI–61305'-位L-亮氨酸酯,I3e)的制备方法二

[0301] 以PSI–6130代替阿糖胞苷，并以Boc保护L-亮氨酸代替Boc保护L-缬氨酸、HBTU代替EDCI，进行实施例1中步骤4的反应，收率为80.5%。按照实施例1中的步骤进行其余各步反应制备化合物I3e，纯度98.67%。六步累计收率33.0%。

[0302] 实施例88:S-2-氨基-3-甲基戊酸2-{(2R,3R,4R,5R)-5-[4-氨基-2-氧代-1(1H)-嘧啶基]-4-氟-3-羟基-4-甲基四氢呋喃基}甲酯盐酸盐(PSI–61305'-位L-异亮氨酸酯,I3f)的制备方法一

[0303] 以PSI–6130代替阿糖胞苷，Boc保护L-异亮氨酸代替Boc保护L-缬氨酸，经由实施例1的类似制备方法，可制备化合物I3f，纯度98.87%。六步累计收率33.2%。

[0304] 1H NMR(d6-DMSO)δ0.82(m,6H,CH3CH2,CH3CH),1.20(m,1H,CH2CH3),1.33(d,3H,CH3CF),1.90(m,1H,CH3CH),3.95(q,1H,CHNH2),4.10(m,1H,3'-CH),4.25(q,1H,4'-CH),4.46(m,2H,5’-CH2),6.12(t,1H,1'-CH),6.20(d,1H,J=7.8Hz,5-CH),7.85(d,1H,J=7.8Hz,
6-CH),8.68(s,2H,4-NH2),8.69(s,2H,NH2-CH);

[0305] ESI-MS(m/z):373.1[M+H]+,395.1[M+Na]+.

[0306] 实施例89:S-2-氨基-3-甲基戊酸2-{(2R,3R,4R,5R)-5-[4-氨基-2-氧代-1(1H)-嘧啶基]-4-氟-3-羟基-4-甲基四氢呋喃基}甲酯盐酸盐(PSI–61305'-位L-异亮氨酸酯,I3f)的制备方法二

[0307] 以PSI–6130代替阿糖胞苷、Boc保护L-异亮氨酸代替Boc保护L-缬氨酸，并以(Et2NH2+)2CO32-代替HCOOH/n-BuNH2，进行实施例1中步骤5的反应，收率为61.6%。按照实施例1中的步骤进行其余各步反应制备化合物I3f，纯度98.32%。六步累计收率31.1%。

[0308] 实施例90:S-2-氨基-3-苯基丙酸2-{(2R,3R,4R,5R)-5-[4-氨基-2-氧代-1(1H)-嘧啶基]-4-氟-3-羟基-4-甲基四氢呋喃基}甲酯盐酸盐(PSI–61305'-位L-苯丙氨酸酯,I3g)的制备方法一

[0309] 以PSI–6130代替阿糖胞苷，Boc保护L-苯丙氨酸代替Boc保护L-缬氨酸，经由实施例1的类似制备方法，可制备化合物I3g，纯度98.79%。六步累计收率35.2%。

[0310] 1H NMR(d6-DMSO)δ1.35(d,3H,CH3CF),3.15(q,2H,CH2Ph),4.00(m,1H,CHNH),4.10(m,1H,3'-CH),4.33(m,2H,5’-CH2),4.45(q,1H,4'-CH),6.08(t,1H,1'-CH),6.18(d,1H,J=7.9Hz,5-CH),7.25(m,5H,Ph),7.87(d,1H,J=7.9Hz,6-CH),8.70(s,2H,4-NH2),8.70(s,2H,NH2-CH);

[0311] ESI-MS(m/z):407.1[M+H]+,429.1[M+Na]+,445.0[M+K]+.

[0312] 实施例91:S-2-氨基-3-苯基丙酸2-{(2R,3R,4R,5R)-5-[4-氨基-2-氧代-1(1H)-嘧啶基]-4-氟-3-羟基-4-甲基四氢呋喃基}甲酯盐酸盐(PSI–61305'-位L-苯丙氨酸酯,I3g)的制备方法二

[0313] 以PSI–6130代替阿糖胞苷，并以Boc保护L-苯丙氨酸代替Boc保护L-缬氨酸、HOAt代替EDCI，进行实施例1中步骤4的反应，收率为82.0%。按照实施例1中的步骤进行其余各步反应制备化合物I3g，纯度98.50%。六步累计收率31.5%。

[0314] 实施例92:R-2-氨基-3-苯基丙酸2-{(2R,3R,4R,5R)-5-[4-氨基-2-氧代-1(1H)-嘧啶基]-4-氟-3-羟基-4-甲基四氢呋喃基}甲酯盐酸盐(PSI–61305'-位D-苯丙氨酸酯,I3h)的制备方法一

[0315] 以PSI–6130代替阿糖胞苷，Boc保护D-苯丙氨酸代替Boc保护L-缬氨酸，经由实施例1的类似制备方法，可制备化合物I3h，纯度98.29%。六步累计收率34.8%。

[0316] 1H NMR(d6-DMSO)δ1.32(d,3H,CH3CF),3.13(q,2H,CH2Ph),4.03(m,1H,CHNH),4.12(m,1H,3'-CH),4.30(m,2H,5’-CH2),4.41(q,1H,4'-CH),6.10(t,1H,1'-CH),6.21(d,1H,J=7.8Hz,5-CH),7.22(m,5H,Ph),7.85(d,1H,J=7.8Hz,6-CH),8.67(s,2H,4-NH2),8.67(s,2H,NH2-CH);

[0317] ESI-MS(m/z):407.0[M+H]+,429.0[M+Na]+.

[0318] 实施例93:R-2-氨基-3-苯基丙酸2-{(2R,3R,4R,5R)-5-[4-氨基-2-氧代-1(1H)-嘧啶基]-4-氟-3-羟基-4-甲基四氢呋喃基}甲酯盐酸盐(PSI–61305'-位D-苯丙氨酸酯,I3h)的制备方法二

[0319] 以PSI–6130代替阿糖胞苷、Boc保护D-苯丙氨酸代替Boc保护L-缬氨酸，并以Et2NH2+HCO3-代替HCOOH/n-BuNH2，进行实施例1中步骤5的反应，收率为64.8%。按照实施例1中的步骤进行其余各步反应制备化合物I3h，纯度98.54%。六步累计收率32.9%。

[0320] 实施例94:2-氨基乙酸2-{(2R,3R,4R,5R)-5-[4-氨基-2-氧代-1(1H)-嘧啶基]-4-氟-3-羟基-4-甲基四氢呋喃基}甲酯盐酸盐(PSI–61305'-位甘氨酸酯,I3i)的制备方法一[0321] 以PSI–6130代替阿糖胞苷，Boc保护甘氨酸代替Boc保护L-缬氨酸，经由实施例1的类似制备方法，可制备化合物I3i，纯度98.06%。六步累计收率30.2%。

[0322] 1H NMR(d6-DMSO)δ1.34(d,3H,CH3CF),4.00(m,1H,3'-CH),4.10(m,2H,CH2NH2),4.30(q,1H,4'-CH),4.46(m,2H,5’-CH2),6.14(t,1H,1'-CH),6.26(d,1H,J=7.7Hz,5-CH),
7.89(d,1H,J=7.7Hz,6-CH),8.57(s,2H,4-NH2),8.82(s,2H,NH2-CH);

[0323] ESI-MS(m/z):317.0[M+H]+,339.0[M+Na]+.

[0324] 实施例95:2-氨基乙酸2-{(2R,3R,4R,5R)-5-[4-氨基-2-氧代-1(1H)-嘧啶基]-4-氟-3-羟基-4-甲基四氢呋喃基}甲酯盐酸盐(PSI–61305'-位甘氨酸酯,I3i)的制备方法二[0325] 以PSI–6130代替阿糖胞苷，并以Boc保护甘氨酸代替Boc保护L-缬氨酸、HOBt代替EDCI，进行实施例1中步骤4的反应，收率为62.3%。按照实施例1中的步骤进行其余各步反应制备化合物I3i，纯度98.36%。六步累计收率30.7%。

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