专利汇可以提供一种无酶标记DNA逻辑体系检测miRNA的方法专利检索,专利查询,专利分析的服务。并且本 专利 公开了一种无酶标记DNA逻辑体系检测miRNA的方法,涉及 荧光 检测miRNA领域。通过设计互补探针,无需加入相应的标记和特异性酶,达到目标物的特异性识别。利用原卟啉和G-四链体结合后荧光增强的特性实现光 信号 增大的表征,达到检测目标物的目的。使用互补的自发进行链置换反应探针破坏上述结合,实现NOT 门 输出。本方法检测成本低、灵敏度高。,下面是一种无酶标记DNA逻辑体系检测miRNA的方法专利的具体信息内容。
1.一种无酶标记DNA逻辑体系检测miRNA的方法,其特征是包括以下步骤:
1.1主要溶液的配制
Tris-EDTA-KCl 缓冲液:取0.0605 g 三羟甲基氨基甲烷,0.0146 g 乙二胺四乙酸,
5.84 g 氯化钠,0.375 g 氯化钾,用灭菌水溶解,定容至50 mL容量瓶中,于4 ℃环境保存备用,使用时pH调至8.0;
6 mM 原卟啉溶液:取0.1879 g原卟啉,用灭菌水溶解,定容至50 mL 容量瓶中,于4 ℃环境保存避光备用,全程在避光条件下进行;
10 % 过硫酸铵:取0.2 g过硫酸铵,加入2 mL 灭菌水,混匀,于4 ℃环境保存备用;
1.2探针设计
根据目标物序列设计出相应的G1、G2和I链,G1、G2富含G碱基构成G-四链体部分,目标物及I链具有必需部分,发挥着启动链置换反应的作用,这两部分是体系中固定不变的,链中的其他序列根据目标miRNA的不同进行相应的设计;
1.3构建DNA逻辑体系
无RNA酶环境下,将所使用的目标物miRNA、G1和G2分别离心,低温操作,向离心管中加入15 μL TEK缓冲液,1 μM G1、G2和目标物miRNA各10 μL,混匀,离心;
1.4荧光检测
进行荧光强度信号测试,激发波长固定为410 nm,发射波长为550—750 nm,激发狭缝宽度为20 nm,发射狭缝宽度为20 nm;
上述溶液加热到88 ℃,反应10分钟,缓慢降至室温,加入5 μL 6 mM原卟啉溶液,室温下反应1小时,进行YES门荧光强度信号测试,管中加入10 μL的4 μ M I链,室温下反应1小时,进行NOT门荧光强度信号测试。
2.根据权利要求1所述,一种无酶标记DNA逻辑体系检测miRNA的方法,其特征在于,利用原卟啉与G-四链体结合后荧光强度会明显上升的特点,将光学信号作为最后输出建立DNA逻辑体系。
3.根据权利要求1所述,一种无酶标记DNA逻辑体系检测miRNA的方法,其特征在于,无需加入相应的标记和特异性酶,使得构建相对简单而且成本低廉。
4.根据权利要求1所述,一种无酶标记DNA逻辑体系检测miRNA的方法,其特征在于,通过必需部分控制启动链置换反应,破坏之前构建的G-四链体结构,使得荧光强度大幅下降。
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