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以丹参和红花制成的中药注射剂的质量控制方法

阅读：560发布：2020-11-27

专利汇可以提供以丹参和红花制成的中药注射剂的质量控制方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 是一种以丹参和红花制成的中药注射剂的 质量 控制方法，该质量控制方法是将丹参素或其钠盐、原儿茶 醛 、 丹酚酸 B、丹参乙酸镁、丹参药材、丹参 酮 IIA、红花药材、红花黄色素、腺苷、红花明苷A中全部或部分品种作为该中药注射剂的质量控制的检测指标，方法能更好的控制以丹参和红花制成的中药注射剂的产品质量，保证用药的安全性，使用本发明后，能够保证药物制成品的质量，通过这样的技术手段，使实施“一种 治疗 心脑 血管 疾病 的药物组合物及其制备方法”、 专利 申请 号为02153312.1 的发明专利申请的技术及其他以丹参和红花制成的中药注射剂的产品有了保障，得到的制剂更加可靠。，下面是以丹参和红花制成的中药注射剂的质量控制方法专利的具体信息内容。

1、一种以丹参和红花制成的中药注射剂的质量控制方法，其特 征在于：该方法包括以下全部或部分内容：
(1)丹红注射剂的指纹图谱测试，包括以丹参成分特征为主的 指纹图谱和以红花成分特征为主的指纹图谱；
(2)丹红注射剂中丹参药材、红花药材、丹参素或其钠盐、原 儿茶醛、丹酚酸B或其镁盐、红花黄色素、红花明苷A等中全部或 部分成分的鉴别测试方法；
(3)丹红注射剂中丹参素或其钠盐、原儿茶醛、丹酚酸B或其 镁盐、红花黄色素、红花明苷A等中全部或部分成分的含量测试方 法。
2、按照权利要求1所述的以丹参和红花制成的中药注射剂的质 量控制方法，其特征在于：其所述的以丹参成分特征为主的指纹图谱 和以红花成分特征为主的指纹图谱测试方法是：
a、采用液相色谱法测试丹参成分特征为主的指纹图谱
(1)供试品溶液的制备：取丹参和红花制成的中药注射剂适量， 加水或甲醇、乙醇溶解或稀释，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶 液；
(2)参照物溶液的制备：取适量丹参药材中的主要活性成分对 照品，包括丹参素或其钠盐、原儿茶醛、丹酚酸B或其镁盐、红花黄 色素、腺苷、红花明苷A中的一种或几种，用水溶解稀释至合适浓 度，作为参照物溶液；
(3)色谱条件：色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填料：流 动相为乙腈或甲醇：0.01％～0.5％磷酸溶液或0.2％～3％冰醋酸或 0.2％～3％甲酸溶液，梯度洗脱，流速为0.5～1.5ml/min、检测波 长为203-295nm范围内的一个或几个，柱温为20～50℃；
(4)以丹参成分特征为主的标准指纹图谱的制定：精密吸取供 试品溶液及参照物溶液适量，分别注入液相色谱仪，依据所测得的图 谱，制定标准指纹图谱，所述标准指纹图谱中，共有峰有15个左右， 以确定的参照物色谱峰的相对保留时间和峰面积为基准，计算其它共 有色谱峰的相对保留时间和相对峰面积；
(5)以上述方法作为待测注射剂中丹参成分指纹图谱的测试手 段；
(6)将待测注射剂的指纹图谱与上述标准指纹图谱对比，计算 相似度，应为0.80～1.00；
b、采用液相色谱法测试以红花成分特征为主的指纹图谱
(1)供试品溶液的制备：取丹参和红花制成的中药注射剂适量， 加水溶解或稀释，调节PH值，加热，取出，放至室温，定量转移至 分液漏斗中，加乙酸乙酯等中等极性溶剂提取，提取液蒸干，残渣用 甲醇、乙醇或乙酸乙酯等溶剂溶解，滤过，取续滤液作为供试品溶液；
(2)参照物溶液的制备：取适量红花或丹参药材中的主要活性 成分作为对照品，包括红花黄色素、腺苷、红花明苷A、丹参素或其 钠盐、原儿茶醛、丹酚酸B或其镁盐等中的一种或几种，用水稀释， 作为参照物溶液；
(3)色谱条件：色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填料；流 动相为乙腈或甲醇：0.01％～1％磷酸溶液或0.2％～3％冰醋酸溶液 或0.2％～3％甲酸溶液，梯度洗脱，流速为0.5～1.5ml/min、检测 波长为203-290nm，柱温为20～50℃；
(4)以红花成分特征为主的标准指纹图谱的制定：精密吸取上 述供试品溶液及参照物溶液，分别注入液相色谱仪，测定，制定标准 指纹图谱，所述标准指纹图谱中，共有峰约有26个，以参照物色谱 峰的相对保留时间和峰面积为基准，计算其它色谱峰的相对保留时间 和相对峰面积；
(5)以上述方法作为待测注射剂中红花成分指纹图谱的测试手 段；
(6)将待测注射剂指纹图谱与上述标准指纹图谱对比，计算相 似度，应为0.80～1.00。
3、按照权利要求2所述的以丹参和红花制成的中药注射剂的质 量控制方法，其特征在于该方法包括如下指纹图谱中的一种或几种：
a、采用液相色谱法测定以丹参成分特征为主的指纹图谱
(1)供试品溶液的制备：精密称取本品适量，加水制成每1ml 含20mg的溶液，摇匀，用0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液作为供 试品溶液。
(2)参照物溶液的制备：精密称取丹参素或其钠盐对照品适量， 加水制成每1ml含0.1mg的溶液，摇匀，作为参照物溶液。
(3)色谱条件：色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填料；流 动相为乙腈-0.026％磷酸水溶液，梯度洗脱，溶剂比例从0分钟至 30分钟，乙腈的比例由2％升至22％，从30分钟至60分钟，乙腈 的比例由22％升至26％，流速为1.2ml/min，检测波长为288±2nm， 柱温为30℃。
(4)以丹参成分特征为主的标准指纹图谱的制定：分别精密吸 取参照物溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，采用高效液 相色谱法测定，制定标准指纹图谱。所述标准指纹图谱中，共有峰有 15个，以参照物色谱峰的相对保留时间和峰面积为基准，计算其它 色谱峰的相对保留时间和相对峰面积。
(5)以上述方法作为待测丹红注射剂中丹参成分指纹图谱的测 试手段。
(6)将待测丹红注射剂指纹图谱与上述标准指纹图谱对比，计 算相似度，应为0.90～1.00。
b、采用液相色谱法测定以红花成分特征为主的指纹图谱
(1)供试品溶液的制备：精密称取本品适量，加水制成每1ml 含15mg的溶液，再加盐酸(每4ml水溶液加盐酸1ml)，沸水浴上加 热1小时，取出，放至室温，定量转移至分液漏斗中，加乙酸乙酯提 取3次，每次25ml，合并提取液，蒸干，残渣用甲醇溶解并定量转 移至5ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，用0.45μm微孔滤膜滤 过，取续滤液作为供试品溶液；
(2)参照物溶液的制备：精密称取丹参素或其钠盐对照品适量， 加水制成每1ml含0.2mg的溶液，摇匀，作为参照物溶液。
(3)色谱条件：色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填料；流 动相为乙腈-0.5％磷酸水溶液，梯度洗脱，溶剂比例为从0分钟至 60分钟，乙腈的比例由2％升至28％，从60分钟至70分钟，乙腈 的比例由28％降至2％，流速为1.2ml/min，检测波长为275±2nm， 柱温为30℃；
(4)以红花成分特征为主的标准指纹图谱的制定：分别精密吸 取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，用高效液相 色谱法测定，制定标准指纹图谱。所述标准指纹图谱中，共有峰有 26个，以参照物色谱峰的相对保留时间和峰面积为基准，计算其它 色谱峰的相对保留时间和相对峰面积；
(5)以上述方法作为待测注射剂中丹参成分指纹图谱的测试手 段。
(6)将待测注射剂指纹图谱与上述标准指纹图谱对比，计算相 似度，应为0.90～1.00。
4、按照权利要求3所述的以丹参和红花制成的中药注射剂的质 量控制方法，其特征在：所述以丹参成分特征为主的标准指纹图谱中， 有15个共有峰，其相对保留时间的相对标准偏差RSD均小于10％， 其中1号峰的平均相对保留时间RT为0.632；2号峰的平均RT为 0.832；S号峰，即丹参素或其钠盐峰的平均RT为1.000，；4号峰的 平均RT为1.460；5号峰的平均RT为1.922；6号峰的平均RT为2.355； 7号峰的平均RT为2.646；8号峰的平均RT为2.736；9号峰的平均 RT为3.260；10号峰的平均RT为3.351；11号峰的平均RT为3.425； 12号峰的平均RT为3.507；13号峰的平均RT为4.111；14号峰的 平均RT为4.249；15号峰的平均RT为4.389；
所述以丹参成分特征为主的标准指纹图谱中，15个共有峰的相对 峰面积的相对标准偏差RSD均小于10％，其中1号峰的平均相对峰 面积RA为0.111；2号峰的平均RA为0.225；S号峰的平均RA为1.000； 4号峰的平均RA为0.754；5号峰的平均RA为0.262；6号峰的平均 RA为0.713；7号峰的平均RA为0.145；8号峰的平均RA为0.206； 9号峰的平均RA为0.911；10号峰的平均RA为0.842；11号峰的平 均RA为0.145；12号峰的平均RA为0.078；13号峰的平均RA为1.226； 14号峰的平均RA为0.096；15号峰的平均RA为0.484；
所述以红花成分特征为主的标准指纹图谱中，26个共有峰的相对 保留时间的相对标准偏差RSD均小于10％。其中1号峰的平均相对 保留时间RT为0808；S号峰的平均RT为1.000；3号峰的平均RT为 1.128；4号峰的平均RT为1.455；5号峰的平均RT为1.502；6号 峰的平均RT为1.641；7号峰的平均RT为1.780；8号峰的平均RT 为1.841；9号峰的平均RT为1.979；10号峰的平均RT为2.074； 11号峰的平均RT为2.146；12号峰的平均RT为2.253；13号峰的 平均RT为2.360；14号峰的平均RT为2.699；15号峰的平均RT为 2.887；16号峰的平均RT为3.143；17号峰的平均RT为3.650；18 号峰的平均RT为3.851；19号峰的平均RT为3.962；20号峰的平均 RT为4.094；21号峰的平均RT为4.128；22号峰的平均RT为4.320； 23号峰的平均RT为4.424；24号峰的平均RT为4.480；25号峰的 平均RT为4.603；26号峰的平均RT为4.883；
所述以红花特征为主的标准指纹图谱中，26个共有峰的相对峰面 积的相对标准偏差RSD均小于10％。其中1号峰的平均相对峰面积 RA为1.330；S号峰的平均RA为1.000；3号峰的平均RA为0.067； 4号峰的平均RA为0.069；5号峰的平均RA为1.002；6号峰的平均 RA为0.173；7号峰的平均RA为0.115；8号峰的平均RA为0.102； 9号峰的平均RA为0.077；10号峰的平均RA为0.331；11号峰的平 均RA为0.075；12号峰的平均RA为0.067；13号峰的平均RA为0.359； 14号峰的平均RA为0.240；15号峰的平均RA为0.134；16号峰的 平均RA为0.111；17号峰的平均RA为0.269；18号峰的平均RA为 0.225；19号峰的平均RA为0.325；20号峰的平均RA为0.137；21 号峰的平均RA为0.115；22号峰的平均RA为0.132；23号峰的平 均RA为0.388；24号峰的平均RA为0.193；25号峰的平均RA为0.243； 26号峰的平均RA为0.449。
5、按照权利要求4所述的以丹参和红花制成的中药注射剂的质 量控制方法，其特征在：所述以丹参特征为主的标准指纹图谱中，15 个共有峰的相对保留时间的相对标准偏差RSD均小于3％，其中1号 峰的平均相对保留时间RT为0.632，相对标准偏差RSD为0.13％；2 号峰的平均RT为0.832，RSD为0.05％；S号峰，即丹参素或其钠盐 峰的平均RT为1.000，RSD为0.00；4号峰的平均RT为1.460，RSD 为0.12％；5号峰的平均RT为1.922，RSD为0.09％；6号峰的平均 RT为2.355，RSD为0.11％；7号峰的平均RT为2.646，RSD为0.05 ％；8号峰的平均RT为2.736，RSD为0.08％；9号峰的平均RT为 3.260，RSD为0.13％；10号峰的平均RT为3.351，RSD为0.08％； 11号峰的平均RT为3.425，RSD为0.12％；12号峰的平均RT为3.507， RSD为0.12％；13号峰的平均RT为4.111，RSD为0.09％；14号峰 的平均RT为4.249，RSD为0.08％；15号峰的平均RT为4.389，RSD 为0.07％；
所述以丹参成分特征为主的标准指纹图谱中，15个共有峰的相对 峰面积的相对标准偏差RSD均小于3％，其中1号峰的平均相对峰面 积RA为0.111，相对标准偏差RSD为0.06％；2号峰的平均RA为 0.225，RSD为0.07％；S号峰的平均RA为1.000，RSD为0.00；4 号峰的平均RA为0.754，RSD为0.14％；5号峰的平均RA为0.262， RSD为0.12％；6号峰的平均RA为0.713，RSD为0.10％；7号峰的 平均RA为0.145，RSD为0.07％；8号峰的平均RA为0.206，RSD为 0.10％；9号峰的平均RA为0.911，RSD为0.07％；10号峰的平均 RA为0.842，RSD为0.16％；11号峰的平均RA为0.145，RSD为0.08 ％；12号峰的平均RA为0.078，RSD为0.12％；13号峰的平均RA 为1.226，RSD为0.12％；14号峰的平均RA为0.096，RSD为0.07 ％；15号峰的平均RA为0.484，RSD为0.14％；
所述以红花成分特征为主的标准指纹图谱中，26个共有峰的相对 保留时间的相对标准偏差RSD均小于3％，其中1号峰的平均相对保 留时间RT为0808，相对标准偏差RSD为0.05％；S号峰的平均RT 为1.000，RSD为0.00；3号峰的平均RT为1.128，RSD为0.08％； 4号峰的平均RT为1.455，RSD为0.12％；5号峰的平均RT为1.502， RSD为0.08％；6号峰的平均RT为1.641，RSD为0.30％；7号峰的 平均RT为1.780，RSD为0.08％；8号峰的平均RT为1.841，RSD为 0.07％；9号峰的平均RT为1.979，RSD为0.12％；10号峰的平均 RT为2.074，RSD为0.13％；11号峰的平均RT2.146，RSD为0.08 ％；12号峰的平均RT为2.253，RSD为0.08％；13号峰的平均RT 为2.360，RSD为0.30％；14号峰的平均RT为2.699，RSD为0.14 ％；15号峰的平均RT为2.887，RSD为0.13％；16号峰的平均RT 为3.143，RSD为0.11％；17号峰的平均RT为3.650，RSD为0.12 ％；18号峰的平均RT为3.851，RSD为0.06％；19号峰的平均RT 为3.962，RSD为0.11％；20号峰的平均RT为4.094，RSD为0.11 ％；21号峰的平均RT为4.128，RSD为0.08％；22号峰的平均RT 为4.320，RSD为0.10％；23号峰的平均RT为4.424，RSD为0.12 ％；24号峰的平均RT为4.480，RSD为0.08％；25号峰的平均RT 为4.603，RSD为0.18％；26号峰的平均RT为4.883，RSD为0.25 ％；
所述以红花成分特征为主的标准指纹图谱中，26个共有峰的相对 峰面积的相对标准偏差RSD均小于3％，其中1号峰的平均相对峰面 积RA为1.330，相对标准偏差RSD为0.05％；S号峰的平均RA为 1.000，RSD为0.00；3号峰的平均RA为0.067，RSD为0.11％；4 号峰的平均RA为0.069，RSD为0.03％；5号峰的平均RA为1.002， RSD为0.09％；6号峰的平均RA为0.173，RSD为0.16％；7号峰的 平均RA为0.115，RSD为0.07％；8号峰的平均RA为0.102，RSD为 0.13％；9号峰的平均RA为0.077，RSD为0.10％；10号峰的平均 RA为0.331，RSD为0.09％；11号峰的平均RA为0.075，RSD为0.12 ％；12号峰的平均RA为0.067，RSD为0.11％；13号峰的平均RA 为0.359，RSD为0.10％；14号峰的平均RA为0.240，RSD为0.20 ％；15号峰的平均RA为0.134，RSD为0.10％；16号峰的平均RA 为0.111，RSD为0.15％；17号峰的平均RA为0.269，RSD为0.05 ％；18号峰的平均RA为0.225，RSD为0.07％；19号峰的平均RA 为0.325，RSD为0.06％；20号峰的平均RA为0.137，RSD为0.14 ％；21号峰的平均RA为0.115，RSD为0.09％；22号峰的平均RA 为0.132，RSD为0.14％；23号峰的平均RA为0.388，RSD为0.11 ％；24号峰的平均RA为0.193，RSD为0.12％；25号峰的平均RA 为0.243，RSD为0.19％；26号峰的平均RA为0.449，RSD为0.08 ％。
6、按照权利要求1所述的以丹参和红花制成的中药注射剂的质 量控制方法，其特征在于：所述注射剂的鉴别方法是以下全部或部分 内容：
a.注射剂中丹参的薄层色谱鉴别方法：
取各制剂适量，加乙醚等溶剂提取，滤过，滤液挥干，残渣加醋 酸乙酯或氯仿溶解，作为供试品溶液；按处方比例称取其它药味及辅 料，同法制成阴性对照溶液；另取丹参对照药材，同法制成对照药材 溶液；再取丹参酮IIA对照品，加醋酸乙酯、甲醇、乙醇等溶剂制成 每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液，采用中国药典附录公开的薄 层色谱法试验，吸取上述四种溶液各1～30μl，分别点于同一硅胶G 薄层板或硅胶H薄层板上，以苯或甲苯或二甲苯-醋酸乙酯或氯仿为 2-40∶0.2～5为展开剂，展开，取出，晾干，供试品色谱中，在与对 照药材色谱及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性无 干扰；
b、注射剂中丹参酮IIA的液相色谱鉴别方法：
取各制剂适量，置量瓶中，加水至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过， 取续滤液作为供试品溶液；按处方比例称取其它药味及辅料，同法制 成阴性对照溶液；以丹参酮IIA对照品的甲醇溶液为对照，采用液相 色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶或八烷基硅烷键合硅胶或二 烷基硅烷键合硅胶为填充剂，20％～90％∶80％～10％甲醇或乙腈- 水或0.05％～5％冰醋酸水溶液或0.02％～0.5％磷酸水溶液或0.05 ％～5％甲酸水溶液为流动相，流速为0.5～1.5ml/min，检测检测波 长为200～410nm范围内的一个或几个，柱温为10～50℃；供试品色 谱中，应具与对照品色谱有保留时间一致的色谱峰，阴性无干扰；
C、注射剂中丹酚酸B或其镁盐的薄层色谱鉴别方法：
取各制剂适量，加甲醇等溶剂提取，滤过，滤液浓缩，作为供试 品溶液；按处方比例称取其它药味及辅料，同法制成阴性对照溶液； 再取丹酚酸B或其镁盐对照品，加醋酸乙酯、甲醇、乙醇等溶剂制成 每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液，采用中国药典附录公开的薄 层色谱法试验，吸取上述三种溶液各1～30μl，分别点于同一硅胶 GF254薄层板上，以苯或甲苯-三氯甲烷或二氯甲烷-醋酸乙酯-甲醇- 甲酸或乙酸0.2～6∶0.5～8∶0.5～10∶0.1～3∶0.5～5为展开剂，展 开，取出，晾干，置紫外灯254nm检视，供试品色谱中，在与对照品 色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性无干扰；
d、注射剂中丹酚酸B或其镁盐的液相色谱鉴别方法：
取各制剂适量，置量瓶中，加水至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过， 取续滤液作为供试品溶液；按处方比例称取其它药味及辅料，同法制 成阴性对照溶液；以丹酚酸B或其镁盐对照品的水溶液为对照，采用 液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶或八烷基硅烷键合硅胶 为填充剂，甲醇或乙腈∶水或0.5％～5％冰醋酸水溶液或0.02％～ 0.5％磷酸水溶液或0.5％～5％甲酸水溶液5％～40％∶2％～10％∶ 93％～50％为流动相，流速为0.5～1.5ml/min，检测检测波长为 220～350nm范围内的一个或几个，柱温20～50℃；供试品色谱中， 应具与对照品色谱有保留时间一致的色谱峰，阴性无干扰；
e、注射剂中丹参素或其钠盐、原儿茶醛薄层色色谱鉴别：
取各制剂适量，置量瓶中，加水至刻度，用稀盐酸调节pH值至2， 用醋酸乙酯萃取，合并醋酸乙酯层，挥干，残渣用甲醇等溶剂溶解， 摇匀，作为供试品溶液；按处方比例称取其它药味及辅料，同法制成 阴性对照溶液；以丹参素纳和原儿茶醛对照品的甲醇溶液作为对照品 溶液，采用中国药典附录公开的薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液 各1～30μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以三氯甲烷-丙酮- 甲酸(1～25∶0.2～5∶0.2～5)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫 外灯254nm检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显 相同颜色的荧光斑点，阴性无干扰；
f、注射剂中丹参素或其钠盐或原儿茶醛的液相色谱鉴别方法：
取各制剂适量，置量瓶中，加水至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过， 取续滤液作为供试品溶液；按处方比例称取其它药味及辅料，同法制 成阴性对照溶液；以丹参素或其钠盐、原儿茶醛对照品的水溶液为对 照。采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶或八烷基硅烷 键合硅胶为填充剂，以5％～40％∶95％～60％甲醇或乙腈-水或1％～ 5％冰醋酸溶液或0.02％～0.5％磷酸溶液或1％～5％甲酸溶液为流 动相，流速为0.5～1.5ml/min，检测波长为220～350nm范围内的一 个或几个，柱温在10～50℃范围内；供试品色谱中，应具与对照品 色谱有保留时间一致的色谱峰，阴性无干扰；
g、注射剂中红花的薄层色谱鉴别方法：
取制剂适量，加乙醇或甲醇提取，滤过，滤液作为供试品溶液； 按处方比例称取其它药味及辅料，同法制成阴性对照溶液；另取红花 对照药材，加水超声或回流提取，滤过，滤液浓缩至干，残渣加无水 乙醇使溶解，放置，离心，取上清液，作为对照药材溶液；采用中国 药典附录公开的薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各1～30μl， 分别点于同一硅胶G薄层板或硅胶H薄层板或含1～10％醋酸钠的硅 胶G薄层板或聚酰胺薄膜上，以氯仿或环己烷-乙醚或乙酸乙酯1～ 18∶1～8或苯-乙酸乙酯-甲醇20～60∶1～5∶2～10或氯仿-甲苯-丙酮 -甲酸2～10∶0.5～5∶0.2～3∶0.02～0.5或乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水 2～10∶1～6∶0.2～5∶0.2～5或乙酸乙酯-甲酸或冰醋酸-水或氯仿 1～10∶0.2～3∶0.2～12或正丁醇或丙酮-甲醇或冰醋酸-水2～ 20∶1～6∶0.5～12为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯365nm或 254nm检视或氨气熏蒸或喷以1％～5％三氯化铁或10％硫酸乙醇或 2～20％磷钼酸乙醇，90℃～120℃烘至斑点显色清晰，供试品色谱中， 在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性无干 扰；
h、注射剂中红花明苷A的薄层色谱鉴别方法：
取各制剂适量，加乙醇等溶剂提取，滤过，滤液挥干，残渣加醋 酸乙酯或氯仿、甲醇等溶剂溶解溶解，作为供试品溶液；按处方比例 称取其它药味及辅料，同法制成阴性对照溶液；再取红花明苷A对照 品，加醋酸乙酯、甲醇、乙醇等溶剂制成每1ml含1mg的溶液，作为 对照品溶液，采用中国药典附录公开的薄层色谱法试验，吸取上述三 种溶液各1～30μl，分别点于同一硅胶G薄层板或硅胶H薄层板或 聚酰胺薄膜上，以醋酸乙酯或氯仿-甲醇-0.1％～7％盐酸0.2～ 5∶0.2～8∶1～20为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯254nm检 视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧 光斑点，阴性无干扰；
i、注射剂中红花明苷A的液相色谱鉴别方法：
取各制剂适量，置量瓶中，加甲醇等溶剂至刻度，摇匀，用微孔 滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；按处方比例称取其它药味及辅 料，同法制成阴性对照溶液；以红花明苷A对照品的水溶液为对照， 采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶或八烷基硅烷键合 硅胶或二烷基硅烷键合硅胶为填充剂，5％～40％∶95％～60％甲醇- 乙腈-水或0.05％～5％冰醋酸水溶液或0.02％～0.5％磷酸水溶液或 0.05％～5％甲酸水溶液为流动相，流速为0.4～1.5ml/min，检测检 测波长为200～410nm范围内的一个或几个，柱温10～50℃；供试品 色谱中，应具与对照品色谱有保留时间一致的色谱峰，阴性无干扰；
7、按照权利要求1所述的以丹参和红花制成的中药注射剂的质 量控制方法，其特征在于：所述注射剂的鉴别方法是以下的一种或几 种：
a、注射剂中丹参的薄层色谱鉴别方法：
取本品适量，加乙醚制成每1ml含0.1g的溶液，振摇，放置1 小时，滤过，滤液挥干，残渣加醋酸乙酯溶解，作为供试品溶液；按 处方比例称取其它药味及辅料，同法制成阴性对照溶液；另取丹参对 照药材，同法制成对照药材溶液；再取丹参酮IIA对照品，加醋酸乙 酯制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液，采用中国药典附录公 开的薄层色谱法试验，吸取上述四种溶液各5μl，分别点于同一硅 胶G薄层板上，以苯-醋酸乙酯19∶1为展开剂，展开，取出，晾干， 供试品色谱中，在与对照药材色谱及对照品色谱相应的位置上，显相 同颜色的斑点，阴性无干扰；
b、注射剂中丹参酮IIA的液相色谱鉴别方法：
取本品适量，加水制成每1ml含0.1g的溶液，摇匀，用微孔滤 膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；按处方比例称取其它药味及辅料， 同法制成阴性对照溶液；精密称取丹参酮IIA对照品适量，加甲醇制 成每1ml各含16μg的溶液，作为对照品溶液，采用液相色谱法，色 谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇-1％冰醋酸水溶液 75∶25为流动相，流速为1.0ml/min，检测检测波长为270nm，柱温 为30℃；供试品色谱中，应具与对照品色谱有保留时间一致的色谱 峰，阴性无干扰；
c、注射剂中丹酚酸B或其镁盐的薄层色谱鉴别方法：
取本品适量，加75％甲醇制成每1ml含0.1g的溶液，摇匀，作 为供试品溶液；按处方比例称取其它药味及辅料，同法制成阴性对照 溶液；再取丹酚酸B或其镁盐对照品，加75％甲醇制成每1ml含2mg 的溶液，作为对照品溶液，采用中国药典附录公开的薄层色谱法试验， 吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以甲 苯-三氯甲烷-醋酸乙酯-甲醇-甲酸2∶3∶4∶0.5∶2为展开剂，展开， 取出，晾干，置紫外灯254nm检视，供试品色谱中，在与对照品色谱 相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性无干扰；
d、注射剂中丹酚酸B或其镁盐的液相色谱鉴别方法：
取本品适量，加水制成每1ml含30mg的溶液，摇匀，用微孔滤 膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；按处方比例称取其它药味及辅料， 同法制成阴性对照溶液；精密称取丹酚酸B或其镁盐对照品适量，加 水制成每1ml含150μg的溶液，作为对照品溶液，采用液相色谱法， 色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇∶5％冰醋酸水溶液 为35∶65为流动相，流速为1.0ml/min，检测检测波长为281nm，柱 温25℃；供试品色谱中，应具与对照品色谱有保留时间一致的色谱 峰，阴性无干扰；
e、注射剂中丹参素或其钠盐、原儿茶醛薄层色谱鉴别：
取本品适量，加水制成每1ml含0.1g的溶液，用稀盐酸调节pH 值至2，用醋酸乙酯萃取4次，合并醋酸乙酯层，挥干，残渣用甲醇 1ml溶解，摇匀，作为供试品溶液；按处方比例称取其它药味及辅料， 同法制成阴性对照溶液；再取丹参素纳和原儿茶醛对照品，加甲醇制 成每1ml含丹参素纳1mg，原儿茶醛1mg的混合溶液，作为对照品溶 液，采用中国药典附录公开的薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各 5μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以三氯甲烷-丙酮-甲酸8∶1∶1 为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯254nm检视，供试品色谱中， 在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性无干扰；
f、注射剂中丹参素或其钠盐、原儿茶醛液相色谱鉴别：
精密称取本品适量，加水制成每1ml含30mg的溶液，摇匀，用 0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液。按处方比例称取 其它药味及辅料，同法制成阴性对照溶液。精密称取丹参素或其钠盐、 原儿茶醛对照品适量，加水分别制成每1ml各含50μg的溶液，作为 对照品溶液，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填 充剂，甲醇-1％冰醋酸水溶液13∶87为流动相，流速为1.0ml/min， 检测波长为280nm，柱温30℃；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶 液各10μl，注入液相色谱仪，供试品色谱中，应与对照品色谱有保 留时间一致的色谱峰，阴性无干扰；
g、注射剂中红花薄层色谱鉴别：
取本品适量，加无水乙醇超声处理20分钟，制成每1ml含0.1g 的溶液，滤过，滤液作为供试品溶液。按处方比例称取其它药味及辅 料，同法制成阴性对照溶液。另取红花对照药材1g，加水10ml，超 声处理30分钟，滤过，滤液浓缩至干，残渣加无水乙醇1ml，使溶 解，放置，离心，取上清液，作为对照药材溶液；采用薄层色谱法试验， 吸取上述三种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁 醇-冰醋酸-水6∶2.4∶5为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯 365nm下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显 相同颜色的荧光斑点，阴性无干扰；
h、注射剂中红花明苷A的薄层色谱鉴别方法：
取本品适量，加甲醇制成每1ml含0.1g的溶液，摇匀，作为供 试品溶液；按处方比例称取其它药味及辅料，同法制成阴性对照溶液； 再取红花明苷A对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照 品溶液；采用中国药典附录公开的薄层色谱法试验，吸取上述三种溶 液各10μl，分别点于聚酰胺薄膜上，以醋酸乙酯-甲醇-3.6％盐酸 1∶3∶6为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯254nm检视，供试品 色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴 性无干扰。
i、注射剂中红花明苷A的液相色谱鉴别方法：
取本品适量，加水制成每1ml含30mg的溶液，摇匀，用微孔滤 膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；按处方比例称取其它药味及辅料， 同法制成阴性对照溶液；精密称取红花明苷A对照品适量，加甲醇制 成每1ml含100μg的溶液，作为对照品溶液，采用液相色谱法，色 谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇∶乙腈-0.7％磷酸水溶 液为26∶2∶72为流动相，流速为0.6ml/min，检测检测波长为403nm， 柱温25℃；供试品色谱中，应具与对照品色谱有保留时间一致的色 谱峰，阴性无干扰；
8、按照权利要求1所述的以丹参和红花制成的中药注射剂的质 量控制方法，其特征在于：所述注射剂含量的测试方法应包括以下中 的一种或几种：
a.注射剂中丹参素或其钠盐、原儿茶醛含量测定：
取各制剂适量，置量瓶中，加水至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过， 取续滤液作为供试品溶液；以丹参素或其钠盐、原儿茶醛对照品的水 溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶或八 烷基硅烷键合硅胶为填充剂，5％～40％∶95％～60％甲醇或乙腈-水 或0.5％～5％冰醋酸水溶液或0.02％～0.5％磷酸水溶液或0.5％～5 ％甲酸溶液为流动相，检测检测波长在220～350nm范围内，柱温在 10～50℃范围内；以外标法或标准曲线法进行计算，各制剂以相当于 每日用成品量为单位量，每单位量含丹参素或其钠盐的限度不得少于 10mg，含原儿茶醛的限度不得少于1mg，含丹参素或其钠盐和原儿茶 醛的总和的限度不得少于11mg；
b.注射剂中总黄酮的含量测定：
取各制剂适量，置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，精密 量取1ml，置10ml量瓶中，加50％甲醇或水至5ml，加5％亚硝酸钠 溶液0.3～1ml，摇匀，放置6分钟，加10％硝酸铝溶液0.3～1ml， 摇匀，放置6分钟，加氢氧化钠试液4～10ml，再加50％甲醇或水至 刻度，摇匀，作为供试品溶液；以芦丁作为对照品，同法制得对照品 溶液。以随行溶剂为空白，采用分光光度法，在500±10nm处测定吸 收度，以外标法或标准曲线法进行计算，各制剂以相当于每日用成品 量为单位量，每单位量含总黄酮的限度以芦丁计，不得少于100～ 400mg；
c.注射剂中丹酚酸B或其镁盐含量测定：
取各制剂适量，置量瓶中，加水至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过， 取续滤液作为供试品溶液；以丹酚酸B或其镁盐对照品的水溶液为对 照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶或八烷基硅烷 键合硅胶为填充剂，甲醇或乙腈∶水或0.5％～5％冰醋酸水溶液或 0.02％～0.5％磷酸水溶液或0.5％～5％甲酸溶液5％～40％∶2％～ 10％∶93％～50％为流动相，检测检测波长为220～350nm，柱温20～ 50℃；以外标一点法或标准曲线法进行计算，各制剂以相当于每日用 成品量为单位量，每单位量含丹酚酸B或其镁盐的限度不得少于5mg；
d、注射剂中红花明苷A含量测定：
取各制剂适量，置量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤 过，取续滤液作为供试品溶液；以红花明苷A对照品的水溶液为对照， 采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶或八烷基硅烷键合 硅胶或二烷基硅烷键合硅胶为填充剂，5％～40％∶95％～60％甲醇- 乙腈-水或0.05％～5％冰醋酸水溶液或0.02％～0.5％磷酸水溶液为 流动相，检测检测波长为200～410nm，柱温20～50℃；以外标一点 法或标准曲线法进行计算，各制剂以相当于每日用成品量为单位量， 每单位量含红花明苷A的限度不得少于5mg；
9、按照权利要求8所述的以丹参和红花制成的中药注射剂的质 量控制方法，其特征在于：所述注射剂含量的测试方法是以下一种或 几种方法：
a.注射剂中丹参素或其钠盐、原儿茶醛含量测定：
精密称取本品适量，加水制成每1ml含30mg的溶液，摇匀，用 0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液。精密称取丹参素 或其钠盐、原儿茶醛对照品适量，加水分别制成每1ml各含50μg的 溶液，作为对照品溶液，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键 合硅胶为填充剂，甲醇-1％冰醋酸水溶液13∶87为流动相，检测波长 为280nm，柱温30℃；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μl，注入液相色谱仪，以外标一点法或标准曲线法进行计算，各制 剂以相当于每日用成品量为单位量，每单位量含丹参素或其钠盐的限 度不得少于10mg，含原儿茶醛的限度不得少于1mg，含丹参素或其钠 盐和原儿茶醛的总和的限度不得少于11mg；
b.注射剂中总黄酮含量测定：
精密称取本品适量，加水制成每1ml含5mg的溶液，摇匀，精密 量取1ml，置10ml量瓶中，加50％甲醇至5ml，加5％亚硝酸钠溶液 0.3ml，摇匀，放置6分钟，加10％硝酸铝溶液0.3ml，摇匀，放置 6分钟，加氢氧化钠试液4ml，再加50％甲醇至刻度，摇匀，作为供 试品溶液；以芦丁作为对照品，同法制得对照品溶液；以随行溶剂为 空白，照分光光度法，在500nm处测定吸收度，以外标一点法或标准 曲线法进行计算，各制剂以相当于每日用成品量为单位量，每单位量 含总黄酮的限度以芦丁计，不得少于100mg；
c、注射剂中丹酚酸B或其镁盐含量测定：
精密称取本品适量，加水制成每1ml含30mg的溶液，摇匀，用 微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；以丹酚酸B或其镁盐对照 品的水溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅 胶为填充剂，甲醇∶5％冰醋酸水溶液为35∶65为流动相，流速为 1.0ml/min，检测检测波长为281nm，柱温25℃；以外标一点法进行 计算，各制剂以相当于每日用成品量为单位量，每单位量含丹酚酸B 或其镁盐的限度不得少于5mg；
d、注射剂中红花明苷A含量测定：
精密称取本品适量，加甲醇制成每1ml含30mg的溶液，摇匀， 用微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；以红花明苷A对照品的 水溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为 填充剂，甲醇∶乙腈-0.7％磷酸水溶液为26∶2∶72为流动相，检测检测 波长为403nm，柱温25℃；以外标一点法进行计算，各制剂以相当于 每日用成品量为单位量，每单位量含红花黄色素的限度不得少于5mg；
10、按照权利要求8或9所述的以丹参和红花制成的中药注射剂 的质量控制方法，其特征在于：所述注射剂的含量测定结果，其质量 标准中可测成分：丹参素或其钠盐、原儿茶醛、总黄酮、丹酚酸B 或其镁盐、红花明苷A等中的全部或部分种类的总量大于其总固体 量的25～50％。

说明书全文

技术领域：本发明涉及一种以丹参和红花制成的中药注射剂的质 量控制方法，属于医药技术的领域。

背景技术：随着人类文明的发展，人们生活水平的提高，冠心病、 心绞痛等心脑血管疾病已成为人类的第二大杀手。开发心脏病类药物 已成为制药业一项刻不容缓的艰巨任务。目前市场上的同类品种主要 成分多为丹参，其成品的一般色泽较深，运输及贮藏不方便，且易发 生氧化变色，pH值也会随之改变，使得含有丹参的注射液产品的有 效期和储存期受到限制。本申请人将丹参与红花进行组配后研制了一 种由丹参、红花制备成丹红注射剂的技术，并提交了专利申请，专利 申请号：02153312.1，而后本申请人更进一步的利用其研制并提交了 若干相关丹红的制剂的专利；包括注射液、注射粉针剂等等；它是由 药材：丹参、红花加水煎煮二次，每次加10倍量水，每次1小时， 合并煎煮液，滤过，滤液浓缩至5000ml，加5％的明胶溶液使明胶含 量达1％(W/V)，搅匀，冷藏过夜，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.10～ 1.20(65℃)，加乙醇使含醇量80％以上，冷藏过夜，滤过，滤液用 10％NaOH调节pH值至8～9，冷藏过夜，滤过，滤液回收乙醇，浓缩 至相对密度为1.18～1.22，加注射用水稀释至1667ml(3g生药/ml)， 煮沸后加0.1％(W/V)活性炭，保持微沸30分钟，过滤，滤液用10％NaOH调pH值5.5～7.5，煮沸，冷藏过夜，精滤，滤液加注射用水至1667ml； 将667g甘露醇配制成20％的溶液，与上述滤液混匀，滤过，分装， 冷冻干燥制成的。为了有效的控制产品的质量，满足生产的要求、保 证生产的药物安全、可靠和疗效准确，本申请人建立了其质量标准。 已知的丹参和红花的化学成分有几十种。如果用其一、二种活性成分 来说明其内在质量，具有一定的片面性，更不用说无药效性的指标成 分了，因此，不仅选取了丹参的活性成分和总黄酮进行含量测定，以 其含量的多少来判定质量，更建立了指纹图谱，对其物质群整体予以 控制，从整体上有效的表征其质量。中药指纹图谱是指某种中药材或 中成药中所共有的、具有特征性的某类或数类成分的色谱或光谱的图 谱。在现阶段中药的有效成分绝大多数没有明确的情况下，对于有效 控制中药材或中成药的质量，具有重要的意义。日本汉方药主要生产 企业在20世纪80年代就已经在企业内部采用高效液相指纹图谱控制 质量。德国、法国在对银杏叶提取物联合开发的过程中，发现银杏叶 提取物的医疗作用是提取物所得物质群的整体作用结果，而对这样一 个整体的质量控制，亦采用高效液相色谱法。美国FDA制定的职务草 药指南中已经明确将指纹图谱作为混合物质群的质量控制方法。指纹 图谱作为中草药及其提取物质量控制方法，目前已经成为共识。

发明内容：本发明的目的是通过提供一种以丹参和红花制成的中 药注射剂的质量控制方法，利用本发明人提供的这种方法，能够有效 控制以丹参和红花制成的中药注射剂的质量，对药品的生产进行具体 的指导：同时提供的这种方法简单，精密度高，重现性好。

本发明是这样构成的

以丹参和红花制成的中药注射剂的质量控制方法，包括以下全部 或部分内容：

(1)丹红注射剂的指纹图谱测试，包括以丹参成分特征为主的 指纹图谱和以红花成分特征为主的指纹图谱。

(2)丹红注射剂中丹参药材、红花药材、丹参素或其钠盐、原 儿茶醛、丹酚酸B或其镁盐、红花黄色素、红花明苷A等中全部或 部分成分的鉴别测试方法。

(3)丹红注射剂中丹参素或其钠盐、原儿茶醛、丹酚酸B或其 镁盐、红花黄色素、红花明苷A等中全部或部分成分的含量测试方 法。

所述的以丹参成分特征为主的指纹图谱和以红花成分特征为主 的指纹图谱测试方法是：

a、采用液相色谱法测试丹参成分特征为主的指纹图谱

(1)供试品溶液的制备：取丹红注射剂适量，加水或甲醇、乙 醇溶解或稀释，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；

(2)参照物溶液的制备：取适量丹参药材中的主要活性成分对 照品，包括丹参素或其钠盐、原儿茶醛、丹酚酸B或其镁盐、红花黄 色素、腺苷、红花明苷A中的一种或几种，用水溶解稀释至合适浓 度，作为参照物溶液。

(3)色谱条件：色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填料：流 动相为乙腈(或甲醇)：0.01％～0.5％磷酸溶液或0.2％～3％冰醋 酸或0.2％～3％甲酸溶液，梯度洗脱，流速为0.5～1.5ml/min、检 测波长为203-295nm范围内的一个或几个，柱温为20～50℃；

(4)以丹参成分特征为主的标准指纹图谱的制定：精密吸取供 试品溶液及参照物溶液适量，分别注入液相色谱仪，依据所测得的图 谱，制定标准指纹图谱。所述标准指纹图谱中，共有峰有15个左右， 以确定的参照物色谱峰的相对保留时间和峰面积为基准，计算其它共 有色谱峰的相对保留时间和相对峰面积；

(5)以上述方法作为待测丹红注射剂中丹参成分指纹图谱的测 试手段。

(6)将待测丹红注射剂的指纹图谱与上述标准指纹图谱对比， 计算相似度，应为0.80～1.00。

b、采用液相色谱法测试以红花成分特征为主的指纹图谱

(1)供试品溶液的制备：取丹红注射剂适量，加水溶解或稀释， 调节PH值，加热，取出，放至室温，定量转移至分液漏斗中，加乙 酸乙酯等中等极性溶剂提取，提取液蒸干，残渣用甲醇、乙醇或乙酸 乙酯等溶剂溶解，滤过，取续滤液作为供试品溶液；

(2)参照物溶液的制备：取适量红花或丹参药材中的主要活性 成分作为对照品，包括红花黄色素、腺苷、红花明苷A、丹参素或其 钠盐、原儿茶醛、丹酚酸B或其镁盐等中的一种或几种，用水稀释， 作为参照物溶液。

(3)色谱条件：色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填料；流 动相为乙腈(或甲醇)：0.01％～1％磷酸溶液或0.2％～3％冰醋酸 溶液或0.2％～3％甲酸溶液，梯度洗脱，流速为0.5～1.5ml/min、 检测波长为203-290nm，柱温为20～50℃；

(4)以红花成分特征为主的标准指纹图谱的制定：精密吸取上 述供试品溶液及参照物溶液，分别注入液相色谱仪，测定，制定标准 指纹图谱。所述标准指纹图谱中，共有峰约有26个，以参照物色谱 峰的相对保留时间和峰面积为基准，计算其它色谱峰的相对保留时间 和相对峰面积；

(5)以上述方法作为待测丹红注射剂中红花成分指纹图谱的测 试手段。。

(6)将待测丹红注射剂指纹图谱与上述标准指纹图谱对比，计 算相似度，应为0.80～1.00。

所述的以丹参和红花制成的中药注射剂的质量控制方法包括如 下指纹图谱中的一种或几种：

a、采用液相色谱法测定以丹参成分特征为主的指纹图谱

(1)供试品溶液的制备：精密称取本品适量，加水制成每1ml 含20mg的溶液，摇匀，用0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液作为供 试品溶液。

(2)参照物溶液的制备：精密称取丹参素或其钠盐对照品适量， 加水制成每1ml含0.1mg的溶液，摇匀，作为参照物溶液。

(3)色谱条件：色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填料；流 动相为乙腈-0.026％磷酸水溶液，梯度洗脱，溶剂比例从0分钟至 30分钟，乙腈的比例由2％升至22％，从30分钟至60分钟，乙腈 的比例由22％升至26％，流速为1.2ml/min，检测波长为288±2nm， 柱温为30℃。

(4)以丹参成分特征为主的标准指纹图谱的制定：分别精密吸 取参照物溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，采用高效液 相色谱法测定，制定标准指纹图谱。所述标准指纹图谱中，共有峰有 15个，以参照物色谱峰的相对保留时间和峰面积为基准，计算其它 色谱峰的相对保留时间和相对峰面积。

(5)以上述方法作为待测注射剂中丹参成分指纹图谱的测试手 段。

(6)将待测注射剂指纹图谱与上述标准指纹图谱对比，计算相 似度，应为0.90～1.00。

b、采用液相色谱法测定以红花成分特征为主的指纹图谱

(1)供试品溶液的制备：精密称取本品适量，加水制成每1ml 含15mg的溶液，再加盐酸(每4ml水溶液加盐酸1ml)，沸水浴上加 热1小时，取出，放至室温，定量转移至分液漏斗中，加乙酸乙酯提 取3次，每次25ml，合并提取液，蒸干，残渣用甲醇溶解并定量转 移至5ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，用0.45μm微孔滤膜滤 过，取续滤液作为供试品溶液；

(2)参照物溶液的制备：精密称取丹参素或其钠盐对照品适量， 加水制成每1ml含0.2mg的溶液，摇匀，作为参照物溶液。

(3)色谱条件：色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填料；流 动相为乙腈-0.5％磷酸水溶液，梯度洗脱，溶剂比例为从0分钟至 60分钟，乙腈的比例由2％升至28％，从60分钟至70分钟，乙腈 的比例由28％降至2％，流速为1.2ml/min，检测波长为275±2nm， 柱温为30℃；

(4)以红花成分特征为主的标准指纹图谱的制定：分别精密吸 取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，用高效液相 色谱法测定，制定标准指纹图谱。所述标准指纹图谱中，共有峰有 26个，以参照物色谱峰的相对保留时间和峰面积为基准，计算其它 色谱峰的相对保留时间和相对峰面积；

(5)以上述方法作为待测注射剂中丹参成分指纹图谱的测试手 段。

(6)将待测注射剂指纹图谱与上述标准指纹图谱对比，计算相 似度，应为0.90～1.00。

所述以丹参成分特征为主的标准指纹图谱中，有15个共有峰， 其相对保留时间的相对标准偏差RSD均小于10％，其中1号峰的平 均相对保留时间RT为0.632；2号峰的平均RT为0.832；S号峰，即 丹参素或其钠盐峰的平均RT为1.000，；4号峰的平均RT为1.460； 5号峰的平均RT为1.922；6号峰的平均RT为2.355；7号峰的平均 RT为2.646；8号峰的平均RT为2.736；9号峰的平均RT为3.260； 10号峰的平均RT为3.351；11号峰的平均RT为3.425；12号峰的 平均RT为3.507；13号峰的平均RT为4.111；14号峰的平均RT为 4.249；15号峰的平均RT为4.389；

所述以丹参成分特征为主的标准指纹图谱中，15个共有峰的相对 峰面积的相对标准偏差RSD均小于10％，其中1号峰的平均相对峰 面积RA为0.111；2号峰的平均RA为0.225；S号峰的平均RA为1.000； 4号峰的平均RA为0.754；5号峰的平均RA为0.262；6号峰的平均 RA为0.713；7号峰的平均RA为0.145；8号峰的平均RA为0.206； 9号峰的平均RA为0.911；10号峰的平均RA为0.842；11号峰的平 均RA为0.145；12号峰的平均RA为0.078；13号峰的平均RA为1.226； 14号峰的平均RA为0.096；15号峰的平均RA为0.484；

所述以红花成分特征为主的标准指纹图谱中，26个共有峰的相对 保留时间的相对标准偏差RSD均小于10％。其中1号峰的平均相对 保留时间RT为0808；S号峰的平均RT为1.000；3号峰的平均RT为 1.128；4号峰的平均RT为1.455；5号峰的平均RT为1.502；6号 峰的平均RT为1.641；7号峰的平均RT为1.780；8号峰的平均RT 为1.841；9号峰的平均RT为1.979；10号峰的平均RT为2.074； 11号峰的平均RT为2.146；12号峰的平均RT为2.253；13号峰的 平均RT为2.360；14号峰的平均RT为2.699；15号峰的平均RT为 2.887；16号峰的平均RT为3.143；17号峰的平均RT为3.650；18 号峰的平均RT为3.851；19号峰的平均RT为3.962；20号峰的平均 RT为4.094；21号峰的平均RT为4.128；22号峰的平均RT为4.320； 23号峰的平均RT为4.424；24号峰的平均RT为4.480；25号峰的 平均RT为4.603；26号峰的平均RT为4.883；

所述以红花特征为主的标准指纹图谱中，26个共有峰的相对峰面 积的相对标准偏差RSD均小于10％。其中1号峰的平均相对峰面积 RA为1.330；S号峰的平均RA为1.000；3号峰的平均RA为0.067； 4号峰的平均RA为0.069；5号峰的平均RA为1.002；6号峰的平均 RA为0.173；7号峰的平均RA为0.115；8号峰的平均RA为0.102； 9号峰的平均RA为0.077；10号峰的平均RA为0.331；11号峰的平 均RA为0.075；12号峰的平均RA为0.067；13号峰的平均RA为0.359； 14号峰的平均RA为0.240；15号峰的平均RA为0.134；16号峰的 平均RA为0.111；17号峰的平均RA为0.269；18号峰的平均RA为 0.225；19号峰的平均RA为0.325；20号峰的平均RA为0.137；21 号峰的平均RA为0.115；22号峰的平均RA为0.132；23号峰的平 均RA为0.388；24号峰的平均RA为0.193；25号峰的平均RA为0.243； 26号峰的平均RA为0.449。

所述以丹参特征为主的标准指纹图谱中，15个共有峰的相对保留 时间的相对标准偏差RSD均小于3％，其中1号峰的平均相对保留时 间RT为0.632，相对标准偏差RSD为0.13％；2号峰的平均RT为 0.832，RSD为0.05％；S号峰，即丹参素或其钠盐峰的平均RT为 1.000，RSD为0.00；4号峰的平均RT为1.460，RSD为0.12％；5 号峰的平均RT为1.922，RSD为0.09％；6号峰的平均RT为2.355， RSD为0.11％；7号峰的平均RT为2.646，RSD为0.05％；8号峰的 平均RT为2.736，RSD为0.08％；9号峰的平均RT为3.260，RSD为 0.13％；10号峰的平均RT为3.351，RSD为0.08％；11号峰的平均 RT为3.425，RSD为0.12％；12号峰的平均RT为3.507，RSD为0.12 ％；13号峰的平均RT为4.111，RSD为0.09％；14号峰的平均RT 为4.249，RSD为0.08％；15号峰的平均RT为4.389，RSD为0.07 ％；

所述以丹参成分特征为主的标准指纹图谱中，15个共有峰的相对 峰面积的相对标准偏差RSD均小于3％，其中1号峰的平均相对峰面 积RA为0.111，相对标准偏差RSD为0.06％；2号峰的平均RA为 0.225，RSD为0.07％；S号峰的平均RA为1.000，RSD为0.00；4 号峰的平均RA为0.754，RSD为0.14％；5号峰的平均RA为0.262， RSD为0.12％；6号峰的平均RA为0.713，RSD为0.10％；7号峰的 平均RA为0.145，RSD为0.07％；8号峰的平均RA为0.206，RSD为 0.10％；9号峰的平均RA为0.911，RSD为0.07％；10号峰的平均 RA为0.842，RSD为0.16％；11号峰的平均RA为0.145，RSD为0.08 ％；12号峰的平均RA为0.078，RSD为0.12％；13号峰的平均RA 为1.226，RSD为0.12％；14号峰的平均RA为0.096，RSD为0.07 ％；15号峰的平均RA为0.484，RSD为0.14％；

所述以红花成分特征为主的标准指纹图谱中，26个共有峰的相对 保留时间的相对标准偏差RSD均小于3％，其中1号峰的平均相对保 留时间RT为0808，相对标准偏差RSD为0.05％；S号峰的平均RT 为1.000，RSD为0.00；3号峰的平均RT为1.128，RSD为0.08％； 4号峰的平均RT为1.455，RSD为0.12％；5号峰的平均RT为1.502， RSD为0.08％；6号峰的平均RT为1.641，RSD为0.30％；7号峰的 平均RT为1.780，RSD为0.08％；8号峰的平均RT为1.841，RSD为 0.07％；9号峰的平均RT为1.979，RSD为0.12％；10号峰的平均 RT为2.074，RSD为0.13％；11号峰的平均RT2.146，RSD为0.08 ％；12号峰的平均RT为2.253，RSD为0.08％；13号峰的平均RT 为2.360，RSD为0.30％；14号峰的平均RT为2.699，RSD为0.14 ％；15号峰的平均RT为2.887，RSD为0.13％；16号峰的平均RT 为3.143，RSD为0.11％；17号峰的平均RT为3.650，RSD为0.12 ％；18号峰的平均RT为3.851，RSD为0.06％；19号峰的平均RT 为3.962，RSD为0.11％；20号峰的平均RT为4.094，RSD为0.11 ％；21号峰的平均RT为4.128，RSD为0.08％；22号峰的平均RT 为4.320，RSD为0.10％；23号峰的平均RT为4.424，RSD为0.12 ％；24号峰的平均RT为4.480，RSD为0.08％；25号峰的平均RT 为4.603，RSD为0.18％；26号峰的平均RT为4.883，RSD为0.25 ％；

所述以红花成分特征为主的标准指纹图谱中，26个共有峰的相对 峰面积的相对标准偏差RSD均小于3％，其中1号峰的平均相对峰面 积RA为1.330，相对标准偏差RSD为0.05％；S号峰的平均RA为 1.000，RSD为0.00；3号峰的平均RA为0.067，RSD为0.11％；4 号峰的平均RA为0.069，RSD为0.03％；5号峰的平均RA为1.002， RSD为0.09％；6号峰的平均RA为0.173，RSD为0.16％；7号峰的 平均RA为0.115，RSD为0.07％；8号峰的平均RA为0.102，RSD为 0.13％；9号峰的平均RA为0.077，RSD为0.10％；10号峰的平均 RA为0.331，RSD为0.09％；11号峰的平均RA为0.075，RSD为0.12 ％；12号峰的平均RA为0.067，RSD为0.11％；13号峰的平均RA 为0.359，RSD为0.10％；14号峰的平均RA为0.240，RSD为0.20 ％；15号峰的平均RA为0.134，RSD为0.10％；16号峰的平均RA 为0.111，RSD为0.15％；17号峰的平均RA为0.269，RSD为0.05 ％；18号峰的平均RA为0.225，RSD为0.07％；19号峰的平均RA 为0.325，RSD为0.06％；20号峰的平均RA为0.137，RSD为0.14 ％；21号峰的平均RA为0.115，RSD为0.09％；22号峰的平均RA 为0.132，RSD为0.14％；23号峰的平均RA为0.388，RSD为0.11 ％；24号峰的平均RA为0.193，RSD为0.12％；25号峰的平均RA 为0.243，RSD为0.19％；26号峰的平均RA为0.449，RSD为0.08 ％。

所述的以丹参和红花制成的中药注射剂的鉴别方法是以下全部 或部分内容：

a.注射剂中丹参的薄层色谱鉴别方法：

取各制剂适量，加乙醚等溶剂提取，滤过，滤液挥干，残渣加醋 酸乙酯或氯仿溶解，作为供试品溶液；按处方比例称取其它药味及辅 料，同法制成阴性对照溶液；另取丹参对照药材，同法制成对照药材 溶液；再取丹参酮IIA对照品，加醋酸乙酯、甲醇、乙醇等溶剂制成 每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液，采用薄层色谱法(中国药典 附录方法)试验，吸取上述四种溶液各1～30μl，分别点于同一硅 胶G薄层板或硅胶H薄层板上，以苯或甲苯或二甲苯-醋酸乙酯或氯 仿(2-40∶0.2～5)为展开剂，展开，取出，晾干，供试品色谱中， 在与对照药材色谱及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点， 阴性无干扰；

b、注射剂中丹参酮IIA的液相色谱鉴别方法：

取各制剂适量，置量瓶中，加水至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过， 取续滤液作为供试品溶液；按处方比例称取其它药味及辅料，同法制 成阴性对照溶液；以丹参酮IIA对照品的甲醇溶液为对照，采用液相 色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶或八烷基硅烷键合硅胶或二 烷基硅烷键合硅胶为填充剂，20％～90％∶80％～10％甲醇(或乙腈) -水或0.05％～5％冰醋酸水溶液或0.02％～0.5％磷酸水溶液或0.05 ％～5％甲酸水溶液为流动相，流速为0.5～1.5ml/min，检测检测波 长为200～410nm范围内的一个或几个，柱温为10～50℃；供试品色 谱中，应具与对照品色谱有保留时间一致的色谱峰，阴性无干扰；

C、注射剂中丹酚酸B或其镁盐的薄层色谱鉴别方法：

取各制剂适量，加甲醇等溶剂提取，滤过，滤液浓缩，作为供试 品溶液；按处方比例称取其它药味及辅料，同法制成阴性对照溶液； 再取丹酚酸B或其镁盐对照品，加醋酸乙酯、甲醇、乙醇等溶剂制成 每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液，采用薄层色谱法(中国药典 附录方法)试验，吸取上述三种溶液各1～30μl，分别点于同一硅 胶GF254薄层板上，以苯或甲苯-三氯甲烷或二氯甲烷-醋酸乙酯-甲醇 -甲酸或乙酸(0.2～6∶0.5～8∶0.5～10∶0.1～3∶0.5～5)为展开 剂，展开，取出，晾干，置紫外灯254nm检视，供试品色谱中，在与 对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性无干扰；

d、注射剂中丹酚酸B或其镁盐的液相色谱鉴别方法：

取各制剂适量，置量瓶中，加水至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过， 取续滤液作为供试品溶液；按处方比例称取其它药味及辅料，同法制 成阴性对照溶液；以丹酚酸B或其镁盐对照品的水溶液为对照，采用 液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶或八烷基硅烷键合硅胶 为填充剂，甲醇或乙腈∶水或0.5％～5％冰醋酸水溶液或0.02％～ 0.5％磷酸水溶液或0.5％～5％甲酸水溶液5％～40％∶2％～10％∶ 93％～50％为流动相，流速为0.5～1.5ml/min，检测检测波长为 220～350nm范围内的一个或几个，柱温20～50℃；供试品色谱中， 应具与对照品色谱有保留时间一致的色谱峰，阴性无干扰；

e、注射剂中丹参素或其钠盐、原儿茶醛薄层色色谱鉴别：

取各制剂适量，置量瓶中，加水至刻度，用稀盐酸调节pH值至2， 用醋酸乙酯萃取，合并醋酸乙酯层，挥干，残渣用甲醇等溶剂溶解， 摇匀，作为供试品溶液；按处方比例称取其它药味及辅料，同法制成 阴性对照溶液；以丹参素纳和原儿茶醛对照品的甲醇溶液作为对照品 溶液，采用薄层色谱法(中国药典附录方法)试验，吸取上述三种溶 液各1～30μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以三氯甲烷-丙酮 -甲酸(1～25∶0.2～5∶0.2～5)为展开剂，展开，取出，晾干，置 紫外灯254nm检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上， 显相同颜色的荧光斑点，阴性无干扰；

f、注射剂中丹参素或其钠盐或原儿茶醛的液相色谱鉴别方法：

取各制剂适量，置量瓶中，加水至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过， 取续滤液作为供试品溶液；按处方比例称取其它药味及辅料，同法制 成阴性对照溶液；以丹参素或其钠盐、原儿茶醛对照品的水溶液为对 照。采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶或八烷基硅烷 键合硅胶为填充剂，以5％～40％∶95％～60％甲醇或乙腈-水或1％～ 5％冰醋酸溶液或0.02％～0.5％磷酸溶液或1％～5％甲酸溶液为流 动相，流速为0.5～1.5ml/min，检测波长为220～350nm范围内的一 个或几个，柱温在10～50℃范围内；供试品色谱中，应具与对照品 色谱有保留时间一致的色谱峰，阴性无干扰；

g、注射剂中红花的薄层色谱鉴别方法：

取制剂适量，加乙醇或甲醇提取，滤过，滤液作为供试品溶液； 按处方比例称取其它药味及辅料，同法制成阴性对照溶液；另取红花 对照药材，加水超声或回流提取，滤过，滤液浓缩至干，残渣加无水 乙醇使溶解，放置，离心，取上清液，作为对照药材溶液；采用薄层 色谱法(中国药典附录方法)试验，吸取上述三种溶液各1～30μl， 分别点于同一硅胶G薄层板或硅胶H薄层板或含1～10％醋酸钠的硅 胶G薄层板或聚酰胺薄膜上，以氯仿或环己烷-乙醚或乙酸乙酯(1～ 18∶1～8)或苯-乙酸乙酯-甲醇(20～60∶1～5∶2～10)或氯仿- 甲苯-丙酮-甲酸(2～10∶0.5～5∶0.2～3∶0.02～0.5)或乙酸乙酯 -丁酮-甲酸-水(2～10∶1～6∶0.2～5∶0.2～5)或乙酸乙酯-甲酸 或冰醋酸-水或氯仿(1～10∶0.2～3∶0.2～12)或正丁醇或丙酮- 甲醇或冰醋酸-水(2～20∶1～6∶0.5～12)为展开剂，展开，取出， 晾干，置紫外灯365nm或254nm检视或氨气熏蒸或喷以1％～5％三 氯化铁或10％硫酸乙醇或2～20％磷钼酸乙醇，90℃～120℃烘至斑 点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相 同颜色的荧光斑点，阴性无干扰；

h、注射剂中红花明苷A的薄层色谱鉴别方法：

取各制剂适量，加乙醇等溶剂提取，滤过，滤液挥干，残渣加醋 酸乙酯或氯仿、甲醇等溶剂溶解溶解，作为供试品溶液；按处方比例 称取其它药味及辅料，同法制成阴性对照溶液；再取红花明苷A对照 品，加醋酸乙酯、甲醇、乙醇等溶剂制成每1ml含1mg的溶液，作为 对照品溶液，采用薄层色谱法(中国药典附录方法)试验，吸取上述 三种溶液各1～30μl，分别点于同一硅胶G薄层板或硅胶H薄层板 或聚酰胺薄膜上，以醋酸乙酯或氯仿-甲醇-0.1％～7％盐酸(0.2～ 5∶0.2～8∶1～20)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯254nm 检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的 荧光斑点，阴性无干扰；

i、注射剂中红花明苷A的液相色谱鉴别方法：

取各制剂适量，置量瓶中，加甲醇等溶剂至刻度，摇匀，用微孔 滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；按处方比例称取其它药味及辅 料，同法制成阴性对照溶液；以红花明苷A对照品的水溶液为对照， 采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶或八烷基硅烷键合 硅胶或二烷基硅烷键合硅胶为填充剂，5％～40％∶95％～60％甲醇- 乙腈-水或0.05％～5％冰醋酸水溶液或0.02％～0.5％磷酸水溶液或 0.05％～5％甲酸水溶液为流动相，流速为0.4～1.5ml/min，检测检 测波长为200～410nm范围内的一个或几个，柱温10～50℃；供试品 色谱中，应具与对照品色谱有保留时间一致的色谱峰，阴性无干扰；

所述的以丹参和红花制成的中药注射剂的鉴别方法是以下的一 种或几种：

a、注射剂中丹参的薄层色谱鉴别方法：

取本品适量，加乙醚制成每1ml含0.1g的溶液，振摇，放置1 小时，滤过，滤液挥干，残渣加醋酸乙酯溶解，作为供试品溶液；按 处方比例称取其它药味及辅料，同法制成阴性对照溶液；另取丹参对 照药材，同法制成对照药材溶液；再取丹参酮IIA对照品，加醋酸乙 酯制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液，采用薄层色谱法(中 国药典附录方法)试验，吸取上述四种溶液各5μl，分别点于同一 硅胶G薄层板上，以苯-醋酸乙酯(19∶1)为展开剂，展开，取出， 晾干，供试品色谱中，在与对照药材色谱及对照品色谱相应的位置上， 显相同颜色的斑点，阴性无干扰；

b、注射剂中丹参酮IIA的液相色谱鉴别方法：

取本品适量，加水制成每1ml含0.1g的溶液，摇匀，用微孔滤 膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；按处方比例称取其它药味及辅料， 同法制成阴性对照溶液；精密称取丹参酮IIA对照品适量，加甲醇制 成每1ml各含16μg的溶液，作为对照品溶液，采用液相色谱法，色 谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇-1％冰醋酸水溶液(75∶ 25)为流动相，流速为1.0ml/min，检测检测波长为270nm，柱温为 30℃；供试品色谱中，应具与对照品色谱有保留时间一致的色谱峰， 阴性无干扰；

c、注射剂中丹酚酸B或其镁盐的薄层色谱鉴别方法：

取本品适量，加75％甲醇制成每1ml含0.1g的溶液，摇匀，作 为供试品溶液；按处方比例称取其它药味及辅料，同法制成阴性对照 溶液；再取丹酚酸B或其镁盐对照品，加75％甲醇制成每1ml含2mg 的溶液，作为对照品溶液，采用薄层色谱法(中国药典附录方法)试 验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上， 以甲苯-三氯甲烷-醋酸乙酯-甲醇-甲酸(2∶3∶4∶0.5∶2)为展开 剂，展开，取出，晾干，置紫外灯254nm检视，供试品色谱中，在与 对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性无干扰；

d、注射剂中丹酚酸B或其镁盐的液相色谱鉴别方法：

取本品适量，加水制成每1ml含30mg的溶液，摇匀，用微孔滤 膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；按处方比例称取其它药味及辅料， 同法制成阴性对照溶液；精密称取丹酚酸B或其镁盐对照品适量，加 水制成每1ml含150μg的溶液，作为对照品溶液，采用液相色谱法， 色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇∶5％冰醋酸水溶液 为35∶65为流动相，流速为1.0ml/min，检测检测波长为281nm，柱 温25℃；供试品色谱中，应具与对照品色谱有保留时间一致的色谱 峰，阴性无干扰；

e、注射剂中丹参素或其钠盐、原儿茶醛薄层色谱鉴别：

取本品适量，加水制成每1ml含0.1g的溶液，用稀盐酸调节pH 值至2，用醋酸乙酯萃取4次，合并醋酸乙酯层，挥干，残渣用甲醇 1ml溶解，摇匀，作为供试品溶液；按处方比例称取其它药味及辅料， 同法制成阴性对照溶液；再取丹参素纳和原儿茶醛对照品，加甲醇制 成每1ml含丹参素纳1mg，原儿茶醛1mg的混合溶液，作为对照品溶 液，采用薄层色谱法(中国药典附录方法)试验，吸取上述三种溶液 各5μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以三氯甲烷-丙酮-甲酸 (8∶1∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯254nm检视， 供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑 点，阴性无干扰；

f、注射剂中丹参素或其钠盐、原儿茶醛液相色谱鉴别：

精密称取本品适量，加水制成每1ml含30mg的溶液，摇匀，用 0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液。按处方比例称取 其它药味及辅料，同法制成阴性对照溶液。精密称取丹参素或其钠盐、 原儿茶醛对照品适量，加水分别制成每1ml各含50μg的溶液，作为 对照品溶液，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填 充剂，甲醇-1％冰醋酸水溶液(13∶87)为流动相，流速为1.0ml/min， 检测波长为280nm，柱温30℃；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶 液各10μl，注入液相色谱仪，供试品色谱中，应与对照品色谱有保 留时间一致的色谱峰，阴性无干扰；

g、注射剂中红花薄层色谱鉴别：

取本品适量，加无水乙醇超声处理20分钟，制成每1ml含0.1g 的溶液，滤过，滤液作为供试品溶液。按处方比例称取其它药味及辅 料，同法制成阴性对照溶液。另取红花对照药材1g，加水10ml，超 声处理30分钟，滤过，滤液浓缩至干，残渣加无水乙醇1ml，使溶 解，放置，离心，取上清液，作为对照药材溶液；采用薄层色谱法试验， 吸取上述三种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁 醇-冰醋酸-水(6∶2.4∶5)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外 光灯365nm下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上， 显相同颜色的荧光斑点，阴性无干扰；

h、注射剂中红花明苷A的薄层色谱鉴别方法：

取本品适量，加甲醇制成每1ml含0.1g的溶液，摇匀，作为供 试品溶液；按处方比例称取其它药味及辅料，同法制成阴性对照溶液； 再取红花明苷A对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照 品溶液。采用薄层色谱法(中国药典附录方法)试验，吸取上述三种 溶液各10μl，分别点于聚酰胺薄膜上，以醋酸乙酯-甲醇-3.6％盐 酸(1∶3∶6)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯254nm检视， 供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑 点，阴性无干扰。

i、注射剂中红花明苷A的液相色谱鉴别方法：

取本品适量，加甲醇制成每1ml含30mg的溶液，摇匀，用微孔 滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；按处方比例称取其它药味及辅 料，同法制成阴性对照溶液；精密称取红花明苷A对照品适量，加甲 醇制成每1ml含100μg的溶液，作为对照品溶液，采用液相色谱法， 色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇∶乙腈-0.7％磷酸水 溶液为26∶2∶72为流动相，流速为0.6ml/min，检测检测波长为403nm， 柱温25℃；供试品色谱中，应具与对照品色谱有保留时间一致的色 谱峰，阴性无干扰；

所述的以丹参和红花制成的中药注射剂含量的测试方法应包括 以下中的一种或几种：

a.注射剂中丹参素或其钠盐、原儿茶醛含量测定：

取各制剂适量，置量瓶中，加水至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过， 取续滤液作为供试品溶液；以丹参素或其钠盐、原儿茶醛对照品的水 溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶或八 烷基硅烷键合硅胶为填充剂，5％～40％∶95％～60％甲醇或乙腈- 水或0.5％～5％冰醋酸水溶液或0.02％～0.5％磷酸水溶液或0.5％～ 5％甲酸溶液为流动相，检测检测波长在220～350nm范围内，柱温在 10～50℃范围内；以外标法或标准曲线法进行计算，各制剂以相当于 每日用成品量为单位量，每单位量含丹参素或其钠盐的限度不得少于 10mg，含原儿茶醛的限度不得少于1mg，含丹参素或其钠盐和原儿茶 醛的总和的限度不得少于11mg；

b.注射剂中总黄酮的含量测定：

取各制剂适量，置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，精密 量取1ml，置10ml量瓶中，加50％甲醇或水至5ml，加5％亚硝酸钠 溶液0.3～1ml，摇匀，放置6分钟，加10％硝酸铝溶液0.3～1ml， 摇匀，放置6分钟，加氢氧化钠试液4～10ml，再加50％甲醇或水至 刻度，摇匀，作为供试品溶液；以芦丁作为对照品，同法制得对照品 溶液。以随行溶剂为空白，采用分光光度法，在500±10nm处测定吸 收度，以外标法或标准曲线法进行计算，各制剂以相当于每日用成品 量为单位量，每单位量含总黄酮的限度以芦丁计，不得少于100～ 400mg；

c.注射剂中丹酚酸B或其镁盐含量测定：

取各制剂适量，置量瓶中，加水至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过， 取续滤液作为供试品溶液；以丹酚酸B或其镁盐对照品的水溶液为对 照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶或八烷基硅烷 键合硅胶为填充剂，甲醇或乙腈∶水或0.5％～5％冰醋酸水溶液或 0.02％～0.5％磷酸水溶液或0.5％～5％甲酸溶液5％～40％∶2％～ 10％∶93％～50％为流动相，检测检测波长为220～350nm，柱温20～ 50℃；以外标一点法或标准曲线法进行计算，各制剂以相当于每日用 成品量为单位量，每单位量含丹酚酸B或其镁盐的限度不得少于5mg；

d、注射剂中红花明苷A含量测定：

取各制剂适量，置量瓶中，加甲醇等溶剂至刻度，摇匀，用微孔 滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；以红花明苷A对照品的水溶液 为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶或八烷基 硅烷键合硅胶或二烷基硅烷键合硅胶为填充剂，5％～40％∶95％～ 60％甲醇-乙腈-水或0.05％～5％冰醋酸水溶液或0.02％～0.5％磷酸 水溶液为流动相，检测检测波长为200～410nm，柱温20～50℃；以 外标一点法或标准曲线法进行计算，各制剂以相当于每日用成品量为 单位量，每单位量含红花明苷A的限度不得少于5mg；

所述的以丹参和红花制成的中药注射剂含量的测试方法是以下 一种或几种方法：

a.注射剂中丹参素或其钠盐、原儿茶醛含量测定：

精密称取本品适量，加水制成每1ml含30mg的溶液，摇匀，用 0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液。精密称取丹参素 或其钠盐、原儿茶醛对照品适量，加水分别制成每1ml各含50μg的 溶液，作为对照品溶液，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键 合硅胶为填充剂，甲醇-1％冰醋酸水溶液(13∶87)为流动相，检测 波长为280nm，柱温30℃；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各 10μl，注入液相色谱仪，以外标一点法或标准曲线法进行计算，各 制剂以相当于每日用成品量为单位量，每单位量含丹参素或其钠盐的 限度不得少于10mg，含原儿茶醛的限度不得少于1mg，含丹参素或其 钠盐和原儿茶醛的总和的限度不得少于11mg；

b.注射剂中总黄酮含量测定：

精密称取本品适量，加水制成每1ml含5mg的溶液，摇匀，精密 量取1ml，置10ml量瓶中，加50％甲醇至5ml，加5％亚硝酸钠溶液 0.3ml，摇匀，放置6分钟，加10％硝酸铝溶液0.3ml，摇匀，放置 6分钟，加氢氧化钠试液4ml，再加50％甲醇至刻度，摇匀，作为供 试品溶液。以芦丁作为对照品，同法制得对照品溶液。以随行溶剂为 空白，照分光光度法，在500nm处测定吸收度，以外标一点法或标准 曲线法进行计算，各制剂以相当于每日用成品量为单位量，每单位量 含总黄酮的限度以芦丁计，不得少于100mg。

c、注射剂中丹酚酸B或其镁盐含量测定：

取各制剂适量，加水制成每1ml含30mg的溶液，摇匀，用微孔 滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；以丹酚酸B或其镁盐对照品的 水溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为 填充剂，甲醇：5％冰醋酸水溶液为35∶65为流动相，流速为 1.0ml/min，检测检测波长为281nm，柱温25℃；以外标一点法进行 计算，各制剂以相当于每日用成品量为单位量，每单位量含丹酚酸B 或其镁盐的限度不得少于5mg；

d、注射剂中红花明苷A含量测定：

取各制剂适量，加甲醇制成每1ml含30mg的溶液，摇匀，用微 孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；以红花明苷A对照品的水溶 液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充 剂，甲醇∶乙腈-0.7％磷酸水溶液为26∶2∶72为流动相，检测检测 波长为403nm，柱温25℃；以外标一点法进行计算，各制剂以相当于 每日用成品量为单位量，每单位量含红花黄色素的限度不得少于5mg；

所述的以丹参和红花制成的中药注射剂的含量测试方法，根据丹 红注射剂的含量测定结果，其质量标准中可测成分(丹参素或其钠盐、 原儿茶醛、总黄酮、丹酚酸B或其镁盐、红花明苷A等中的全部或 部分种类)的总量大于其总固体量的25～50％。；

与现有技术相比，本发明能更加完善的控制以丹参和红花制成的 中药注射剂产品的质量。丹参中主要化学成分分为脂溶性成分和水溶 性成分，脂溶性成分主要有邻醌型的丹参酮类二萜化合物，对醌型的 罗列酮类二萜化合物及其它一些不属于这两种类型的二萜类化合物， 水溶性成分有丹参素、原儿茶醛、迷迭香酸、紫草酸、咖啡酸、丹酚 酸A、B、C、D、E、F、G、黄芩甙、胡萝卜甙、异阿魏酸、熊果酸、 鞣质等成分。其抗心肌缺血缺氧作用的药理活性成分主要集中在水溶 性成分部分，如果只用其中一、两种成分来说明其内在质量，具有一 定的片面性，更无法判断无药效的指标成分。因此本申请人制定了丹 参部分水溶性指纹图谱来全面控制注射剂的质量。由于丹参素和原儿 茶醛在丹参体内含量较高，活性较强，因此本申请人选择制定丹参水 溶性部分特征指纹图谱特征，丹参素是丹参水溶性成分的指标性成 分，但由于其不稳定，易发生氧化生成有色的醌类化合物，因此通过 筛选，本申请人选择了其稳定性较好的钠盐作为制定丹参水溶性部分 特征指纹图谱特征的参照物。通过资料检索，虽然已分别有丹参水溶 性成分和脂溶性成分指纹图谱，通过本产品中红花的化学成分对丹参 部分指纹图谱造成干扰，导致丹参部分指纹图谱特征不明显，难以达 到基线分离，本申请人通过反复实验摸索，最终确立了丹红注射液中 丹参水溶性部分指纹图谱。而红花中主要含有红花黄色素、红花甙， 红花甙经盐酸水解后得葡萄糖和红花素、红花醌甙及新红花甙等。水 提取及水溶性混合物有增加冠脉流量的作用及心肌营养性血流量的 作用。如果只用其中一、两种成分来说明其内在质量，具有一定的片 面性，更无法判断无药效的指标成分。因此本申请人拟制定红花部分 指纹图谱来全面控制注射剂的质量。但是由于目前红花所含活性成分 的价格昂贵，成本高，难推广，所以选择了丹参素纳作为参照物制定 丹红注射液中红花部分指纹图谱，这并不影响研究结果的表达。但是 由于丹红注射液中的丹参所含的化学成分对红花部分指纹图谱造成 干扰，导致红花部分指纹图谱特征不稳定，所以必须控制流动相等色 谱条件，才能得到良好的指纹图谱。也就是说，丹红制剂的指纹图谱 不是将丹参、红花药材或制剂的指纹图谱简单叠加就能得到的，由于 处方中两种药材所含成分相互之间的干扰影响，导致丹红制剂中丹参 部分、红花部分的指纹图谱特征峰发生改变，而只有采用本发明的条 件，才能得到理想的指纹图谱。

通过实验证明，本发明质量控制方法对以丹参和红花制成的中药 注射剂产品的质量控制更为有效，方法精密度、精密度、稳定性均较 高。本发明提供的方法使实施“一种治疗心脑血管疾病的药物组合物 及其制备方法”、专利申请号为02153312.1的发明专利申请的技术及 其他以丹参和红花制成的中药注射剂的产品有了保障，得到的制剂更 加可靠。

实验例1

(1)标准指纹图谱

由附图1、2可看出，本发明方法得到的指纹图谱特征明显，达 到基线分离。

(2)本发明控制的丹红注射剂与丹参注射液、红花注射液指纹 图谱特征峰比较

以丹参成分特征为主的指纹测定条件下

                 丹参注射液指纹

           共有指纹峰相对保留时间(n＝10)     共有峰编号     相对保留时间     相对峰峰面积     S     1     1.000     1.260     1.000     0.953     2     3     4     5     6     7     8     9     10     11     12     2.607     2.914     2.990     3.224     3.358     3.442     3.505     4.119     4.291     4.405     4.600     0.524     0.817     0.921     1.374     0.646     1.602     2.155     23.499     0.886     1.154     0.502

             红花注射液指纹图谱     共有峰编号     相对保留时间     相对峰峰面积     1     2     S     3     4     5     6     0.527     0.839     1.000     2.157     2.568     2.594     2.683     8.174     3.169     1.000     0.539     0.667     1.547     5.615

                    丹红注射液     共有峰编号     相对保留时间     相对峰峰面积     1     2     S     3     4     0.632     0.832     1.000     1.460     1.922     0.111     0.225     1.000     0.754     0.262     5     6     7     8     9     10     11     12     13     14     2.355     2.646     2.736     3.260     3.351     3.425     3.507     4.111     4.249     4.389     0.713     0.145     0.206     0.911     0.842     0.145     0.078     1.226     0.096     0.484

      以红花成分特征为主的指纹测定条件下

                 丹参注射液     共有峰编号     相对保留时间     相对峰峰面积     1     2     S     3     4     5     7     8     9     10     11     12     0.712     0.934     1.000     1.558     1.869     2.165     2.983     3.719     4.365     4.527     5.699     5.898     0.226     1.571     1.000     3.194     3.165     4.154     2.697     2.359     5.195     3.191     6.295     2.064

                   红花注射液     共有峰编号     相对保留时间   相对峰峰面积     1     S     2     3     4     5     6     7     8     0.808     1.000     1.259     1.459     2.671     4.291     4.597     4.888     0.808     16.402     1.000     0.605     1.585     1.054     1.051     1.652     1.996     16.402

                  注射用丹红     共有峰编号     相对保留时间   相对峰峰面积     1     S     2     3     4     5     6     7     8     9     10     11     12     13     14     15     16     17     0.808     1.000     1.128     1.455     1.502     1.641     1.780     1.841     1.979     2.074     2.146     2.253     2.360     2.699     2.887     3.143     3.650     3.851     1.330     1.000     0.067     0.069     1.002     0.173     0.115     0.102     0.077     0.331     0.075     0.067     0.359     0.240     0.134     0.111     0.269     0.225     18     19     20     21     22     23     24     25     3.962     4.094     4.128     4.320     4.424     4.480     4.603     4.883     0.325     0.137     0.115     0.132     0.388     0.193     0.243     0.449

从对比可看出，丹红注射剂的指纹图谱不是将丹参、红花药材 或制剂的指纹图谱简单叠加就能得到的，由于相互之间的干扰影 响，导致丹红制剂中丹参成分特征部分、红花成分特征部分的指纹 图谱特征峰发生改变，只用采用本发明的条件，才能得到理想的指 纹图谱。

实验例2  以丹参成分特征为主的指纹图谱的制备

a、实验仪器、试剂及样品

对照品：丹参素钠：中国药品生物制品检定所(0855-200102)； 原儿茶醛：中国药品生物制品检定所(110810-200205)；

b、色谱条件与系统适应性实验

1.色谱柱的选择

研究过程中，选用了常规的十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的液 相色谱柱，分别试用了Zorbax、Inertsil ODS-3、Diamonsil ODS(均为 C18，4.6mm×200mm，5um)三种牌号的色谱柱，结果显示三种牌号 的色谱柱均可达到较好的分离效果，其中Diamonsil ODS色谱柱分离 效果最好，柱效最高，可以达到28000(以参照物丹参素钠峰计算)。 故最终选用Diamonsil ODS色谱柱(4.6×200mm，5um)为实验研究 柱。

2.流动相的选择

研究过程中分别考察了(1)甲醇-水(10∶90)，(2)甲醇-0.1％ 冰醋酸(5∶95)，(3)甲醇-0.5％冰醋酸(梯度洗脱)(4)乙腈-0.026％ 磷酸水溶液(梯度洗脱体积配比为从0分钟至30分钟，乙腈的比例 由2％升至22％，从30分钟至60分钟，乙腈的比例由22％升至26 ％)四种流动相系统。结果显示流动相(1)条件下，峰形较差，分 离不好；流动相(2)条件下，峰形较好，但1小时内出峰较少，仍 有不少组分滞留在后出峰；流动相(3)条件下，峰形较好，出峰不 完全；流动相(4)条件下，峰形较好，出峰完全且分布均匀，故而 最终被选用。

3.检测波长的确定

研究中在乙腈-0.026％磷酸(梯度洗脱)流动相条件下，分别考察 了在不同波段典型波长205、230、254、288、325nm下的色谱峰情 况，结果显示，在205、230、325nm下色谱峰较少，205、230nm下 基线漂移严重，254、288nm下基线良好，其中288nm下色谱峰较多， 故最终选用288nm作为检测波长。

4.仪器、色谱柱及积分参数

4.1仪器参数：选用了液相色谱分析领域主流配置和性能良好的 Agilent 1100系列高效液相色谱仪，Chemstation色谱工作站。色谱柱 为Diamonsil ODS(200mm×4.6mm，5μm)；柱温30℃，流速1.2ml/min。

4.2积分参数：Slope Sensitivity：1，peak width：0.05，最小峰面积为 参照物(S)峰峰面积的5％，最小峰高为S峰峰高的5％。如此设定 可以避免一些很小面积的色谱峰(单峰面积占总峰面积小于0.5％) 的计算，同时保证与参照物的相关性。

5.供试品溶液的制备

精密称取本品适量，加水制成每1ml含20mg的溶液，即得.

6.参照物溶液的制备

丹参素钠为丹参主要水溶性活性成分之一，其积分面积在指纹图 谱中所占比例较大且较稳定，同时兼顾中间体和药材的研究，因此选 定丹参素钠作为参照物。

7.测定方法

由于测定成分均为水溶性物质，故选用了常规的反相HPLC法， 色谱条件与“丹参”指纹图谱研究项下一致，方法学考察情况如下。

8.供试品溶液稳定性试验

以自编号030501供试品溶液为测定对象，分别在制备当日、第 一天、第二天依照前述色谱条件测定(5℃保存)，记录各共有色谱峰 保留时间和峰面积，以参照物丹参素钠的保留时间和峰面积为参照， 换算出各共有峰的相对保留时间和峰面积比值，结果见表。结果显示 各共有峰相对保留时间的相对标准偏差为0.00％～0.12％，十分稳定。

                   稳定性试验相对保留时间 共有峰编号     0天     1天     2天     RSD     1     2     S     3     4     5     6     7     8     9     10     11     12     13     14     0.630     0.832     1.000     1.461     1.921     2.355     2.643     2.739     3.258     3.348     3.424     3.506     4.109     4.250     4.389     0.630     0.831     1.000     1.461     1.921     2.354     2.644     2.736     3.260     3.349     3.425     3.506     4.111     4.250     4.340     0.630     0.831     1.000     1.461     1.922     2.355     2.642     2.738     3.259     3.349     3.425     3.505     4.111     4.249     4.389     0.00％     0.06％     0.00％     0.00％     0.06％     0.06％     0.10％     0.12％     0.10％     0.06％     0.06％     0.06％     0.08％     0.06％     0.06％

                 稳定性试验峰面积比值 共有峰编号     0天     1天     2天     RSD     1     2     S     3     4     0.110     0.224     1.000     0.754     0.259     0.111     0.222     1.000     0.755     0.259     0.110     0.224     1.000     0.756     0.258     0.06％     0.11％     0.00％     0.10％     0.06％     5     6     7     8     9     10     11     12     13     14     0.712     0.146     0.205     0.911     0.842     0.146     0.077     1.224     0.095     0.481     0.711     0.147     0.204     0.910     0.841     0.146     0.078     1.225     0.094     0.483     0.712     0.146     0.206     0.911     0.842     0.146     0.078     1.224     0.095     0.482     0.06％     0.06％     0.10％     0.06％     0.06％     0.00％     0.06％     0.06％     0.06％     0.11％

9.精密度试验

以自编号030501供试品溶液为测定对象，依照确定的色谱条件 测定，连续进样5次，记录各共有色谱峰保留时间和积分峰面积，以 参照物丹参素钠的保留时间和峰面积为参照，换算出各共有峰的相对 保留时间和峰面积比值，统计结果见表。

                    精密度试验相对保留时间(n＝5) 共有峰编号   1   2   3   4   5     平均     RSD     S     1     2     3     4     5     6     7     8     9     10     11   0.632   0.831   1.000   1.460   1.921   2.355   2.644   2.736   3.261   3.352   3.425   3.506   0.631   0.831   1.000   1.459   1.923   2.354   2.644   2.737   3.260   3.350   3.426   3.505   0.632   0.830   1.000   1.460   1.923   2.352   2.645   2.736   3.260   3.351   3.426   3.504   0.631   0.832   1.000   1.461   1.923   2.353   2.645   2.735   3.260   3.351   3.426   3.506   0.632   0.831   1.000   1.461   1.922   2.354   2.645   2.736   3.260   3.352   3.425   3.505     0.632     0.831     1.000     1.460     1.922     2.354     2.645     2.736     3.25     3.351     3.426     3.505     0.05％     0.07％     0.00％     0.07％     0.09％     0.11％     0.05％     0.07％     0.05％     0.08％     0.05％     0.07％     12     13     14   4.110   4.249   4.388   4.110   4.249   4.389   4.110   4.248   4.388   4.110   4.249   4.389   4.110   4.248   4.387   4.110   4.249   4.388 0.00％ 0.05％ 0.07％

                        精密度试验峰面积比值(n＝5) 共有峰编号   1   2   3   4   5   平均   RSD     1     2     S     3     4     5     6     7     8     9     10     11     12     13     14   0.110   0.223   1.000   0.754   0.262   0.712   0.146   0.206   0.910   0.842   0.145   0.079   1.224   0.097   0.484   0.111   0.224   1.000   0.755   0.262   0.713   0.146   0.206   0.911   0.842   0.146   0.078   1.225   0.096   0.484   0.111   0.223   1.000   0.756   0.261   0.712   0.146   0.205   0.911   0.841   0.146   0.077   1.224   0.096   0.483   0.110   0.224   1.000   0.756   0.261   0.713   0.147   0.205   0.910   0.840   0.145   0.078   1.225   0.097   0.484   0.111   0.222   1.000   0.756   0.261   0.713   0.146   0.206   0.911   0.842   0.146   0.078   1.224   0.095   0.485   0.110   0.223   1.000   0.755   0.261   0.713   0.146   0.206   0.911   0.841   0.146   0.078   1.225   0.096   0.484   0.05％   0.08％   0.00％   0.07％   0.05％   0.05％   0.05％   0.07％   0.10％   0.09％   0.05％   0.07％   0.05％   0.09％   0.07％

各共有峰的相对保留时间的相对标准偏差为0.00％～0.11％，峰面 积比值的相对标准偏差为0.00％～0.10％，均符合要求。

10.重现性试验

以自编号030501供试品5份，依照前述方法制备测定，记录各 共有色谱峰保留时间和积分峰面积，以参照物丹参素钠的保留时间和 峰面积为参照，换算出各共有峰的相对保留时间和峰面积比值，统计 结果见表。

              重现性试验相对保留时间(n＝5) 共有峰编号  1  2  3  4  5  平均 RSD     1     2     S     3     4     5     6     7     8     9     10     11     12     13     14  0.631  0.831  1.000  1.461  1.922  2.357  2.645  2.736  3.260  3.350  3.426  3.507  4.112  4.251  4.341  0.631  0.831  1.000  1.461  1.922  2.356  2.646  2.736  3.259  3.351  3.426  3.507  4.111  4.251  4.341  0.631  0.831  1.000  1.461  1.921  2.357  2.645  2.736  3.261  3.351  3.426  3.506  4.111  4.250  4.340  0.631  0.832  1.000  1.461  1.922  2.356  2.645  2.735  3.260  3.350  3.426  3.506  4.111  4.250  4.340  0.631  0.831  1.000  1.461  1.922  2.356  2.645  2.736  3.259  3.351  3.426  3.506  4.111  4.250  4.340  0.631  0.831  1.000  1.461  1.922  2.356  2.645  2.736  3.260  3.351  3.426  3.506  4.111  4.251  4.340 0.00％ 0.05％ 0.00％ 0.00％ 0.05％ 0.05％ 0.00％ 0.05％ 0.08％ 0.05％ 0.00％ 0.05％ 0.05％ 0.07％ 0.05％

                      重现性试验峰面积比值(n＝5) 共有峰编号  1     2  3  4  5  平均 RSD     1     2     S     3     4     5     6     7     8     9  0.110  0.223  1.000  0.755  0.262  0.712  0.145  0.206  0.911  0.842     0.110     0.224     1.000     0.755     0.261     0.712     0.146     0.205     0.912     0.842  0.110  0.223  1.000  0.756  0.260  0.712  0.146  0.206  0.912  0.841  0.110  0.223  1.000  0.755  0.261  0.713  0.145  0.206  0.912  0.842  0.110  0.223  1.000  0.755  0.261  0.712  0.145  0.206  0.911  0.841  0.110  0.223  1.000  0.755  0.261  0.712  0.145  0.206  0.912  0.842 0.00％ 0.05％ 0.00％ 0.05％ 0.07％ 0.05％ 0.07％ 0.05％ 0.07％ 0.09％     10     11     12     13     14   0.147   0.079   1.225   0.096   0.485  0.147  0.078  1.225  0.096  0.485  0.147  0.079  1.225  0.096  0.484  0.147  0.078  1.226  0.096  0.484  0.147  0.078  1.225  0.097  0.485  0.147  0.079  1.225  0.096  0.485 0.00％ 0.07％ 0.05％ 0.05％ 0.04％

以上结果显示，各共有峰相对保留时间相对标准偏差均小于 0.2％；各共有峰峰面积比值相对标准偏差均小于4.0％，显示方法重 现性良好。

11.指纹图谱及技术参数

11.1指纹图谱

根据10批供试品HPLC图谱所给出的相关参数，注射用丹红测 定所得的主要色谱峰均在60分钟内出现；2小时的供试品溶液和空 白样品色谱图表明60分钟以后无色谱峰出现，比较各批样品的色谱 峰发现其中14个峰是各批共有的，由此建立标准指纹图谱。指纹图 见质量标准正文。

11.2共有指纹峰的标定

根据10批供试品指纹图谱有关数据的计算结果，各共有峰平均 相对保留时间(编号)依次为0.632(1)、0.832(2)、1.000(S)、1.460 (3)、1.922(4)、2.355(5)、2.646(6)、2.736(7)、3.260(8)、 3.351(9)、3.425(10)、3.507(11)、4.111(12)、4.249(13)、4.389 (14)以此作为共有指纹峰标定的依据，允许相对标准偏差为±10％， 各批指纹图谱和相关数据见后。

11.3共有指纹峰相对保留时间和峰面积比值

10批供试品指纹图谱中共有指纹峰相对保留时间和峰面积比值 见表。

注射用丹红以丹参成分特征为主的指纹图谱中共有指纹峰相对保留时间

                          (n＝10) 共有峰编号    1   2   3   4   5   6    7    8    9    10   平均   RSD     1    0.631   0.634   0.632   0.632   0.631   0.631    0.630    0.632    0.634    0.631   0.632   0.13％     2     S     3     4     5     6     7     8     9     10     11     12     13     14     0.831     1.000     1.460     1.922     2.356     2.646     2.736     3.261     3.352     3.426     3.506     4.111     4.248     4.389  0.831  1.000  1.460  1.922  2.354  2.645  2.737  3.261  3.350  3.425  3.506  4.111  4.248  4.389  0.832  1.000  1.460  1.921  2.354  2.646  2.736  3.259  3.351  3.426  3.507  4.110  4.248  4.389  0.832  1.000  1.461  1.921  2.354  2.646  2.736  3.261  3.352  3.425  3.506  4.111  4.248  4.388  0.832  1.000  1.461  1.921  2.355  2.645  2.735  3.260  3.351  3.426  3.507  4.110  4.249  4.388  0.832  1.000  1.461  1.921  2.355  2.645  2.737  3.259  3.350  3.425  3.506  4.110  4.250  4.389  0.831  1.000  1.459  1.921  2.355  2.646  2.736  3.260  3.351  3.425  3.507  4.112  4.250  4.390  0.831  1.000  1.460  1.923  2.356  2.645  2.735  3.261  3.352  3.426  3.507  4.111  4.250  4.389  0.832  1.000  1.459  1.921  2.357  2.646  2.736  3.260  3.352  3.426  3.506  4.111  4.249  4.390  0.832  1.000  1.460  1.922  2.354  2.646  2.735  3.260  3.351  3.425  3.506  4.111  4.250  4.390  0.832  1.000  1.460  1.922  2.355  2.646  2.736  3.260  3.351  3.425  3.507  4.111  4.249  4.389 0.05％ 0.00％ 0.12％ 0.09％ 0.11％ 0.05％ 0.08％ 0.13％ 0.08％ 0.12％ 0.12％ 0.09％ 0.08％ 0.07％

注射用丹红以丹参成分特征为主的指纹图谱中共有指纹峰峰面积比值(n＝10) 共有峰编号   1   2   3   4   5   6   7   8   9   10   平均   RSD     1     2     S     3     4     5     6     7     8     9     10     11   0.111   0.225   1.000   0.756   0.264   0.714   0.144   0.207   0.912   0.843   0.146   0.079   0.110   0.224   1.000   0.755   0.260   0.713   0.146   0.205   0.911   0.842   0.145   0.078   0.111   0.225   1.000   0.754   0.262   0.712   0.145   0.205   0.910   0.841   0.145   0.077   0.112   0.224   1.000   0.756   0.261   0.713   0.145   0.206   0.911   0.842   0.146   0.079   0.111   0.224   1.000   0.755   0.262   0.713   0.146   0.206   0.911   0.842   0.145   0.078   0.112   0.224   1.000   0.755   0.261   0.714   0.144   0.207   0.912   0.841   0.144   0.078   0.110   0.225   1.000   0.752   0.263   0.711   0.145   0.207   0.911   0.843   0.145   0.079   0.111   0.224   1.000   0.753   0.263   0.712   0.145   0.205   0.911   0.842   0.145   0.078   0.111   0.226   1.000   0.755   0.261   0.712   0.146   0.207   0.910   0.841   0.146   0.079   0.111   0.225   1.000   0.753   0.262   0.714   0.145   0.207   0.912   0.841   0.145   0.079   0.111   0.225   1.000   0.754   0.262   0.713   0.145   0.206   0.911   0.842   0.145   0.078   0.06％   0.07％   0.00％   0.14％   0.12％   0.10％   0.07％   0.10％   0.07％   0.16％   0.08％   0.12％     12     13     14   1.226   0.096   0.486  1.225  0.096  0.482  1.227  0.097  0.483  1.225  0.095  0.485  1.227  0.097  0.484  1.225  0.096  0.483  1.224  0.095  0.484  1.224  0.097  0.483  1.227  0.096  0.485  1.226  0.096  0.486  1.226  0.096  0.484 0.12％ 0.07％ 0.14％

由以上结果可以看出，共有峰相对保留时间的相对标准偏差为 0.00％～0.13％，一致性非常好；符合《中药注射剂指纹图谱研究的技 术要求(暂行)》的规定。

12.非共有峰面积

除去溶剂峰，计算了10批样品的非共有峰总面积占总峰面积的 比例，结果见表。

注射用丹红样品的非共有峰总面积占总峰面积的百分比(n＝10) 样品编号     1     2   3   4  5  6  7    8   9   10  平均 所占比例     2.46     3.11   2.43   2.18  2.17  3.39  2.30    3.04   2.89   2.64  2.661

各批粉针样品非共有峰总面积占总峰面积的比例均小于5％，均 符合《中药注射剂指纹图谱研究的技术要求(暂行)》的规定，因此 在质量标准中暂订非共有峰总面积占总峰面积不得大于5％。

实验例3  以红花成分特征为主的指纹图谱

a、实验仪器、试剂及样品

对照品：丹参素钠：中国药品生物制品检定所(0855-200102)； 原儿茶醛：中国药品生物制品检定所(110810-200205)；

b、色谱条件与系统适应性实验

1.供试品溶液的制备

精密称取本品适量，加水制成每1ml含15mg的溶液，再加盐酸(每 4ml水溶液加盐酸1ml)，沸水浴上加热1小时，取出移至分液漏斗中， 加乙酸乙酯提取3次，每次25ml，合并提取液，蒸干，残渣加甲醇至5ml 容量瓶中，定容，即得。

供试品共计10批，自编号分别为030501、030502、030503、030504、 030505、030506、030507、030508、030509、030510。

2.参照物溶液的制备

丹参素钠的积分面积在指纹图谱中所占比例相对较大且较稳定， 同时兼顾红花原药材和成品的研究，因此选定丹参素钠作为参照物

3.测定方法

注射用丹红测定成分均为水溶性物质，故在实验中选用了常规的 RP-HPLC法测定。

4.色谱柱的选择

研究过程中，选用了常规的十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的液 相色谱柱，分别试用了Zorbax、Inertsil ODS-3、Diamonsil ODS(均为 C18，4.6mm×200mm，5um)三种牌号的色谱柱，结果显示三种牌号 的色谱柱均可达到较好的分离效果，其中Diamonsil ODS色谱柱分离 效果最好，柱效最高，可以达到25542(以参照物丹参素钠峰计算)。 故最终选用Diamonsil ODS色谱柱(4.6×200mm，5um)为实验研究 柱。

5.流动相的选择

研究过程中分别考察了(1)甲醇-水(10∶90)，(2)甲醇-0.2％ 冰醋酸(5∶95)，(3)甲醇-0.5％冰醋酸(梯度洗脱)(4)乙腈-0.5％ 磷酸水溶液(体积配比为从0分钟至60分钟，乙腈的比例由2％升 至28％，从60分钟至70分钟，乙腈的比例由28％降至2％)四种 流动相系统。结果显示流动相(1)条件下，峰形较差，分离不好； 流动相(2)条件下，峰形较好，但1小时内出峰较少，仍有不少组 分滞留在后出峰；流动相(3)条件下，峰形较好，出峰不完全；流 动相(4)条件下，峰形较好，出峰完全且分布均匀，故而最终被选 用。

6.检测波长的确定

研究中在乙腈-0.5％磷酸(梯度洗脱)流动相条件下，分别考察了 在不同波段典型波长205、230、254、275、360nm下的色谱峰情况， 结果显示，在205、230、360nm下色谱峰较少，205、230nm下基线 漂移严重，254、275nm下基线良好，其中275nm下色谱峰较多，故 最终选用275nm作为检测波长。

7.仪器、色谱柱及积分参数

(1)仪器参数：选用了液相色谱分析领域主流配置和性能良好 的Agilent 1100系列高效液相色谱仪，Chemstation色谱工作站。色谱 柱为Diamonsil ODS(200mm×4.6mm，5μm)；柱温30℃，流速1.2ml/min。

(2)积分参数：Slope Sensitivity：1，peak width：0.05，最小峰面积 为参照物(S)峰峰面积的5％，最小峰高为S峰峰高的5％。如此设 定可以避免一些很小面积的色谱峰(单峰面积占总峰面积小于0.5％) 的计算，同时保证与参照物的相关性，积分限值更加合理。

8.供试品溶液稳定性试验

以自编号030501供试品溶液为测定对象，分别在制备当日、第 一天、第二天依照前述色谱条件测定(5℃保存)，记录各共有色谱峰 保留时间和峰面积，以参照物丹参素钠的保留时间和峰面积为参照， 换算出各共有峰的相对保留时间和峰面积比值，结果见表。结果显示 各共有峰相对保留时间的相对标准偏差为0.02％～0.12％，稳定。

                   稳定性试验相对保留时间 共有峰编号     0天     1天     2天     RSD     1     S     2     3     4     5     6     7     8     9     10     11     12     13     14     15     16     17     0.807     1.000     1.127     1.456     1.500     1.639     1.779     1.841     1.978     2.071     2.145     2.251     2.359     2.697     2.885     3.141     3.649     3.849     0.808     1.000     1.128     1.454     1.501     1.639     1.780     1.841     1.979     2.073     2.145     2.252     2.359     2.698     2.886     3.142     3.650     3.851     0.808     1.000     1.127     1.155     1.500     1.639     1.780     1.842     1.979     2.071     2.146     2.252     2.360     2.699     2.885     3.143     3.650     3.851     0.06％     0.00％     0.06％     0.10％     0.06％     0.00％     0.06％     0.06％     0.06％     0.12％     0.06％     0.06％     0.06％     0.10％     0.06％     0.10％     0.06％     0.12％     18     19     20     21     22     23     24     25     3.962     4.091     4.127     4.318     4.422     4.479     4.596     4.880     3.961     4.093     4.128     4.319     4.423     4.480     4.600     4.881     3.961     4.092     4.127     4.318     4.422     4.480     4.600     4.880     0.06％     0.10％     0.06％     0.06％     0.06％     0.06％     0.06％     0.06％

                稳定性试验相对峰面积比值 共有峰编号     0天     1天     2天   RSD     1     S     2     3     4     5     6     7     8     9     10     11     12     13     14     15     16     17     1.330     1.000     0.067     0.069     1.002     0.173     0.116     0.101     0.077     0.330     0.074     0.067     0.359     0.240     0.133     0.110     0.268     0.225     1.331     1.000     0.067     0.069     1.002     0.172     0.115     0.102     0.076     0.331     0.075     0.067     0.358     0.238     0.133     0.111     0.269     0.225     1.330     1.000     0.067     0.068     1.001     0.172     0.116     0.101     0.076     0.330     0.075     0.068     0.359     0.239     0.134     0.110     0.268     0.225   0.06％   0.00％   0.00％   0.06％   0.06％   0.06％   0.06％   0.06％   0.06％   0.06％   0.06％   0.06％   0.06％   0.10％   0.06％   0.06％   0.06％   0.00％     18     19     20     21     22     23     24     25     0.324     0.138     0.115     0.132     0.387     0.191     0.241     0.445     0.325     0.136     0.115     0.131     0.389     0.192     0.242     0.448     0.325     0.136     0.114     0.132     0.387     0.191     0.241     0.446     0.06％     0.12％     0.06％     0.06％     0.12％     0.06％     0.06％     0.15％

9.精密度试验

以自编号030501供试品溶液为测定对象，依照确定的色谱条件 测定，连续进样5次，记录各共有色谱峰保留时间和积分峰面积，以 参照物丹参素钠的保留时间和峰面积为参照，换算出各共有峰的相对 保留时间和峰面积比值，统计结果见表。

              精密度试验相对保留时间(n＝5) 共有峰编号   1   2   3   4   5   平均   RSD     1     S     2     3     4     5     6     7     8     9     10     11     12   0.808   1.000   1.127   1.454   1.501   1.640   1.781   1.842   1.978   2.074   2.146   2.254   2.360   0.808   1.000   1.128   1.454   1.502   1.639   1.780   1.841   1.979   2.073   2.145   2.252   2.359   0.807   1.000   1.128   1.456   1.501   1.640   1.780   1.842   1.980   2.074   2.145   2.253   2.359   0.808   1.000   1.127   1.456   1.502   1.638   1.781   1.843   1.979   2.073   2.146   2.253   2.368   0.808   1.000   1.128   1.454   1.502   1.640   1.781   1.842   1.979   2.072   2.146   2.254   2.360   0.808   1.000   1.128   1.455   1.502   1.639   1.781   1.842   1.980   2.073   2.146   2.253   2.361   0.04％   0.00％   0.05％   0.11％   0.05％   0.09％   0.05％   0.07％   0.07％   0.08％   0.05％   0.08％   0.38％     13     14     15     16     17     18     19     20     21     22     23     24     25     2.697     2.887     3.144     3.651     3.850     3.962     4.092     4.127     4.319     4.421     4.479     4.605     4.882  2.698  2.886  3.142  3.650  3.851  3.961  4.093  4.128  4.319  4.423  4.480  4.601  4.881  2.700  2.887  3.144  3.651  3.851  3.962  4.093  4.128  4.320  4.423  4.481  4.603  4.882  2.697  2.889  3.142  3.652  3.852  3.964  4.095  4.127  4.318  4.425  4.482  4.604  4.881  2.698  2.887  3.145  3.651  3.851  3.961  4.095  4.127  4.321  4.424  4.480  4.603  4.881  2.698  2.887  3.143  3.651  3.851  3.962  4.094  4.127  4.320  4.423  4.480  4.603  4.881 0.12％ 0.11％ 0.13％ 0.07％ 0.07％ 0.12％ 0.13％ 0.05％ 0.11％ 0.15％ 0.11％ 0.15％ 0.05％

                   精密度试验峰面积比值(n＝5) 共有峰编号   1   2   3   4   5   平均   RSD     1     S     2     3     4     5     6     7     8     9     10     11     12   1.330   1.000   0.067   0.069   1.001   0.173   0.114   0.103   0.075   0.330   0.075   0.067   0.359   1.330   1.000   0.068   0.069   1.002   0.172   0.114   0.104   0.076   0.331   0.074   0.065   0.358   1.331   1.000   0.067   0.069   1.002   0.172   0.115   0.102   0.076   0.331   0.075   0.067   0.358   1.331   1.000   0.067   0.070   1.001   0.172   0.115   0.103   0.078   0.330   0.076   0.066   0.359   1.330   1.000   0.068   0.069   1.001   0.173   0.114   0.104   0.078   0.331   0.075   0.067   0.358   1.330   1.000   0.067   0.069   1.001   0.172   0.114   0.103   0.077   0.331   0.075   0.066   0.358   0.05％   0.00％   0.05％   0.04％   0.05％   0.05％   0.05％   0.08％   0.13％   0.05％   0.07％   0.09％   0.05％     13     14     15     16     17     18     19     20     21     22     23     24     25     0.237     0.133     0.110     0.269     0.226     0.324     0.135     0.115     0.131     0.389     0.194     0.241     0.448  0.238  0.135  0.112  0.269  0.225  0.326  0.137  0.114  0.130  0.387  0.194  0.241  0.450  0.238  0.133  0.111  0.269  0.225  0.325  0.136  0.115  0.131  0.389  0.192  0.242  0.448  0.237  0.134  0.111  0.268  0.224  0.325  0.137  0.114  0.131  0.387  0.191  0.241  0.449  0.237  0.133  0.112  0.269  0.225  0.324  0.136  0.115  0.130  0.389  0.192  0.241  0.448  0.237  0.134  0.111  0.269  0.005  0.325  0.136  0.115  0.131  0.388  0.193  0.241  0.449   0.05％   0.09％   0.08％   0.04％   0.07％   0.08％   0.08％   0.05％   0.05％   0.11％   0.13％   0.04％   0.09％

各共有峰的相对保留时间的相对标准偏差为0.00％～0.38％，峰面 积比值的相对标准偏差为0.00％～0.13％，均符合要求。

10.重现性试验

以自编号030501供试品5份，依照前述方法制备测定，记录各 共有色谱峰保留时间和积分峰面积，以参照物丹参素钠的保留时间和 峰面积为参照，换算出各共有峰的相对保留时间和峰面积比值，统计 结果见表。

                重现性试验相对保留时间(n＝5) 共有峰编号  1  2  3  4  5   平均   RSD     1     S     2     3     4     5     6     7  0.808  1.000  1.129  1.453  1.501  1.640  1.781  1.842  0.808  1.000  1.127  1.454  1.502  1.639  1.779  1.841  0.807  1.000  1.128  1.456  1.502  1.648  1.779  1.841  0.808  1.000  1.128  1.454  1.501  1.639  1.780  1.841  0.808  1.000  1.129  1.456  1.502  1.640  1.781  1.842   0.808   1.000   1.128   1.455   1.502   1.641   1.78   1.841   0.04％   0.00％   0.08％   0.13％   0.05％   0.38％   0.10％   0.05％     8     9     10     11     12     13     14     15     16     17     18     19     20     21     22     23     24     25   1.980   2.072   2.145   2.253   2.358   2.699   2.884   3.142   3.650   3.851   3.962   4.095   4.129   4.321   4.424   4.480   4.602   4.881  1.979  2.074  2.146  2.254  2.357  2.698  2.886  3.143  3.649  3.850  3.964  4.094  4.128  4.320  4.425  4.481  4.605  4.882   1.978   2.073   2.145   2.253   2.359   2.700   2.887   3.142   3.648   3.850   3.962   4.094   4.129   4.319   4.424   4.480   4.601   4.882   1.979   2.073   2.145   2.252   2.359   2.698   2.886   3.142   3.650   3.851   3.961   4.093   4.128   4.319   4.423   4.480   4.600   4.881   1.980   2.074   2.147   2.254   2.359   2.700   2.885   3.142   3.651   3.851   3.962   4.095   4.129   4.320   4.424   4.481   4.602   4.881   1.979   2.073   2.146   2.253   2.358   2.699   2.886   3.142   3.650   3.851   3.962   4.094   4.129   4.320   4.424   4.480   4.602   4.881   0.08％   0.08％   0.09％   0.08％   0.09％   0.10％   0.11％   0.04％   0.11％   0.05％   0.11％   0.08％   0.05％   0.08％   0.07％   0.05％   0.19％   0.05％

                   重现性试验峰面积比值(n＝5) 共有峰编号   1   2   3     4     5     平均     RSD     1     S     2     3     4     5     6     7   1.331   1.000   0.067   0.069   1.002   0.173   0.115   0.102   1.331   1.000   0.065   0.068   1.003   0.174   0.115   0.100   1.330   1.000   0.066   0.068   1.002   0.175   0.115   0.102     1331     1.000     0.067     0.069     1.002     0.174     0.116     0.101     1.330     1.000     0.066     0.068     1.003     0.175     0.115     0.101     1.331     1.000     0.066     0.068     1.002     0.174     0.115     0.101     0.05％     0.00％     0.08％     0.05％     0.05％     0.08％     0.04％     0.08％     8     9     10     11     12     13     14     15     16     17     18     19     20     21     22     23     24     25     0.076     0.331     0.075     0.067     0.359     0.240     0.133     0.111     0.269     0.225     0.325     0.136     0.115     0.131     0.389     0.192     0.242     0.448   0.076   0.332   0.075   0.066   0.360   0.242   0.135   0.110   0.269   0.225   0.324   0.138   0.116   0.132   0.390   0.194   0.242   0.448   0.077   0.331   0.072   0.068   0.361   0.241   0.134   0.109   0.268   0.224   0.325   0.139   0.114   0.134   0.387   0.192   0.246   0.450   0.076   0.331   0.076   0.068   0.359   0.240   0.132   0.111   0.268   0.226   0.325   0.139   0.113   0.132   0.388   0.192   0.245   0.449   0.077   0.332   0.075   0.067   0.360   0.242   0.134   0.110   0.269   0.225   0.324   0.138   0.115   0.131   0.388   0.193   0.245   0.448   0.076   0.331   0.075   0.067   0.360   0.241   0.134   0.110   0.269   0.225   0.325   0.318   0.115   0.132   0.388   0.193   0.244   0.449   0.05％   0.05％   0.15％   0.08％   0.08％   0.10％   0.11％   0.08％   0.05％   0.07％   0.05％   0.12％   0.11％   0.12％   0.11％   0.09％   0.19％   0.09％

以上结果显示，各共有峰相对保留时间相对标准偏差均小于 0.38％；各共有峰峰面积比值相对标准偏差均小于0.15％，显示方法 重现性良好。

11.指纹图谱及技术参数

11.1指纹图谱

根据10批供试品HPLC图谱所给出的相关参数，注射用丹红粉 针按前述制备方法进行测定所得的主要色谱峰均在70分钟内出现；2 小时的供试品溶液和空白溶剂色谱图表明70分钟以后出现的色谱峰 主要为空白所含，由此建立标准指纹图谱；模式指纹图见质量标准正 文。

11.2共有指纹峰的标定

根据10批供试品指纹图谱有关数据的计算结果，各共有峰平均 相对保留时间(编号)依次为0.808(1)、1.000(S)、1.128(2)、1.455 (3)、1.502(4)1.641(5)、1.780(6)、1.841(7)、1.979(8)、2.074 (9)、2.146(10)、2.253(11)、2.360(12)、2.699(13)、2.887(14)、 3.143(15)、3.650(16)、3.851(17)、3.962(18)、4.094(19)、4.128 (20)、4.320(21)、4.424(22)、4.480(23)、4.603(24)、4.883(25)， 以此作为共有指纹峰标定的依据，允许相对标准偏差为±10％，各批 指纹图谱和相关数据见后。

11.3共有指纹峰相对保留时间和峰面积比值

10批供试品指纹图谱中共有指纹峰相对保留时间和峰面积比值 见表。

注射用丹红以红花成分特征为主的指纹图谱中共有指纹峰相对保留时间(n＝10) 共有峰编号   030501   030502   030503   030504   030505   030506   030507   030508   030509   030510   平均   RSD     1     S     2     3     4     5     6     7     8     9     10     11     12     13     14     15     16     17     18     19     20     21     22     23     24     25   0.808   1.000   1.128   1.456   1.501   1.639   1.780   1.841   1.979   2.073   2.147   2.252   2.359   2.698   2.886   3.142   3.650   3.851   3.961   4.093   4.128   4.319   4.423   4.480   4.600   4.881   0.808   1.000   1.127   1.454   1.503   1.639   1.780   1.841   1.979   2.073   2.145   2.252   2.359   2.698   2.886   3.142   3.650   3.851   3.961   4.093   4.128   4.319   4.423   4.480   4.601   4.885   0.807   1.000   1.128   1.456   1.501   1.644   1.780   1.842   1.980   2.074   2.145   2.253   2.359   2.700   2.887   3.144   3.651   3.851   3.962   4.093   4.128   4.320   4.423   4.481   4.603   4.882   0.808   1.000   1.127   1.456   1.502   1.638   1.781   1.840   1.979   2.075   2.146   2.253   2.368   2.697   2.889   3.142   3.652   3.852   3.964   4.095   4.127   4.318   4.425   4.482   4.604   4.881   0.807   1.000   1.128   1.454   1.502   1.640   1.781   1.842   1.977   2.072   2.146   2.254   2.360   2.701   2.887   3.145   3.651   3.851   3.961   4.095   4.127   4.321   4.424   4.480   4.603   4.888   0.808   1.000   1.129   1.453   1.501   1.640   1.781   1.842   1.980   2.072   2.145   2.253   2.358   2.699   2.884   3.142   3.650   3.851   3.962   4.095   4.129   4.321   4.424   4.480   4.602   4.881   0.807   1.000   1.127   1.454   1.502   1.639   1.779   1.841   1.979   2.074   2.146   2.254   2.357   2.698   2.886   3.143   3.649   3.850   3.964   4.094   4.128   4.320   4.425   4.481   4.605   4.882   0.807   1.000   1.128   1.456   1.503   1.648   1.779   1.841   1.978   2.076   2.145   2.253   2.359   2.700   2.887   3.142   3.648   3.850   3.962   4.094   4.129   4.319   4.424   4.480   4.601   4.882   0.808   1.000   1.127   1.454   1.501   1.640   1.781   1.842   1.978   2.074   2.146   2.254   2.360   2.697   2.887   3.144   3.651   3.850   3.962   4.092   4.127   4.319   4.421   4.479   4.605   4.886   0.808   1.000   1.129   1.456   1.502   1.640   1.781   1.842   1.981   2.074   2.147   2.254   2.359   2.700   2.888   3.142   3.651   3.851   3.962   4.095   4.129   4.320   4.424   4.481   4.602   4.881   0.808   1.000   1.128   1.455   1.502   1.641   1.780   1.841   1.979   2.074   2.146   2.253   2.360   2.699   2.887   3.143   3.650   3.851   3.962   4.094   4.128   4.320   4.424   4.480   4.603   4.883   0.05％   0.00％   0.08％   0.12％   0.08％   0.30％   0.08％   0.07％   0.12％   0.13％   0.08％   0.08％   0.30％   .014％   0.13％   0.11％   0.12％   0.06％   0.11％   0.11％   0.08％   0.10％   0.12％   0.08％   0.18％   0.25％

注射用丹红以红花成分特征为主的指纹图谱中共有指纹峰峰面积比值(n＝10) 共有峰编号  030501  030502  030503  030504  030505  030506  030507  030508   030509   030510   平均   RSD     1     S     2     3     4     5     6     7     8     9     10     11     12     13     14     15     16     17     18     19     20     21     22     23     24     25  1.330  1.000  0.067  0.069  1.001  0.173  0.116  0.103  0.075  0.330  0.075  0.067  0.359  0.237  0.133  0.110  0.269  0.226  0.325  0.135  0.115  0.134  0.389  0.194  0.243  0.448  1.331  1.000  0.069  0.069  1.000  0.172  0.114  0.104  0.078  0.332  0.074  0.065  0.358  0.238  0.135  0.112  0.269  0.225  0.326  0.137  0.114  0.130  0.387  0.194  0.246  0.450  1.330  1.000  0.067  0.069  1.002  0.172  0.115  0.102  0.076  0.331  0.075  0.067  0.358  0.238  0.133  0.114  0.269  0.225  0.325  0.136  0.115  0.131  0.389  0.192  0.242  0.448  1.331  1.000  0.067  0.070  1.001  0.172  0.115  0.103  0.078  0.330  0.076  0.066  0.359  0.237  0.134  0.111  0.268  0.224  0.325  0.137  0.114  0.131  0.387  0.194  0.241  0.448  1.330  1.000  0.068  0.069  1.001  0.173  0.114  0.104  0.076  0.331  0.075  0.067  0.358  0.237  0.133  0.112  0.269  0.225  0.324  0.136  0.115  0.130  0.389  0.192  0.241  0.449  1.330  1.000  0.067  0.069  1.002  0.173  0.115  0.102  0.076  0.331  0.075  0.067  0.359  0.240  0.133  0.111  0.269  0.225  0.325  0.136  0.115  0.131  0.389  0.192  0.242  0.448  1.331  1.000  0.065  0.068  1.003  0.174  0.115  0.100  0.076  0.332  0.075  0.066  0.360  0.242  0.135  0.110  0.269  0.225  0.324  0.138  0.116  0.132  0.390  0.194  0.242  0.448  1.331  1.000  0.066  0.068  1.002  0.175  0.115  0.102  0.077  0.332  0.072  0.068  0.361  0.241  0.134  0.109  0.268  0.224  0.325  0.139  0.114  0.134  0.387  0.192  0.246  0.450   1330   1.000   0.067   0.069   1.002   0.174   0.116   0.101   0.076   0.331   0.076   0.068   0.359   0.240   0.132   0.111   0.268   0.226   0.325   0.139   0.113   0.132   0.388   0.192   0.245   0.448   1.330   1.000   0.066   0.068   1.003   0.177   0.115   0.102   0.077   0.332   0.075   0.065   0.360   0.242   0.134   0.113   0.269   0.225   0.325   0.138   0.116   0.132   0.389   0.191   0.242   0.449   1.330   1.000   0.067   0.069   1.002   0.173   0.115   0.102   0.077   0.331   0.075   0.067   0.359   0.240   0.134   0.111   0.269   0.225   0.325   0.137   0.115   0.132   0.388   0.193   0.243   0.449   0.05％   0.00％   0.11％   0.03％   0.09％   0.16％   0.07％   0.13％   0.10％   0.09％   0.12％   0.11％   0.10％   0.20％   0.10％   0.15％   0.05％   0.07％   0.06％   0.14％   0.09％   0.14％   0.11％   0.12％   0.19％   0.08％

由以上结果可以看出，共有峰相对保留时间的相对标准偏差为 0.00％～0.63％，一致性非常好。

11.4非共有峰面积

除去溶剂峰，计算了10批样品的非共有峰总面积占总峰面积的 比例，结果见表。

注射用丹红以红花成分特征为主的指纹图谱中非共有峰总面积占总峰面积的百

                            分比(n＝10) 样品编号 030501  030502  030503  030504  030505  030506  030507 030508  030509 030510 平均 所占比例 2.43  2.56  3.18  2.91  2.92  3.15  3.17 3.84  2.96 3.76 2.94

实验例4：鉴别及含量测定

丹红注射剂中丹参的薄层色谱鉴别方法

为了突出丹参的特征，选择了丹参酮IIA作为其特征斑点，但是 由于药材中存在较多与丹参酮IIA结构相近、极性相似的成分，普通 条件难以达到质量控制的要求，因此我们筛选了以下薄层板和展开条 件对丹参酮IIA进行了展开： 条件   问题 苯-醋酸乙酯(2-5)硅胶G薄层板 苯-醋酸乙酯(40-0.2)硅胶H薄层板 苯-氯仿(2-5)硅胶G薄层板 苯-氯仿(40-0.2)硅胶G薄层板 甲苯-醋酸乙酯(15∶1)硅胶G薄层板 二甲苯-氯仿(20∶1)硅胶G薄层板 确定条件：苯-醋酸乙酯(19∶1) 硅胶G薄层板   对照品展开至前沿   对照品未展上去   对照品展开至前沿   对照品未展上去   对照品未分开   对照品未分开，阴性有干扰   分离清晰，Rf值适中阴性无干扰

经过筛选，确定了以硅胶G薄层板为固定相，以苯-醋酸乙酯(19∶ 1)为展开剂，在此条件下，丹参酮IIA的Rf值适中，和其它斑点分 离清晰，阴性无干扰。

丹红注射剂中丹参酮IIA的液相色谱鉴别方法

为了突出丹参的特征，选择了丹参酮IIA作为其特征成分，但是 由于药材中存在较多与丹参酮IIA结构相近、极性相似的成分，普通 条件难以达到质量控制的要求，因此我们筛选了以下色谱柱和流动相 对丹参酮IIA进行了分离： 条件     问题 甲醇-水(50∶50) 十八烷基硅烷键合硅胶 乙腈-水(40∶60) 十八烷基硅烷键合硅胶 甲醇-0.2％冰醋酸水溶液(30∶70) 八烷基硅烷键合硅胶 乙腈-0.2％冰醋酸水溶液(30∶70) 十八烷基硅烷键合硅胶 甲醇-水(40∶60) 八烷基硅烷键合硅胶 乙腈-水(20∶80) 二烷基硅烷键合硅胶 甲醇-1％冰醋酸水溶液(75∶25) 十八烷基硅烷键合硅胶     出峰时间过快       阴性有干扰       阴性有干扰       阴性有干扰       阴性有嘎绕       峰有分叉，       保留时间适中，峰行尖锐，对称，阴性无干扰  

经过筛选，确定了以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，甲醇-1 ％冰醋酸水溶液(75∶25)为流动相，在此条件下，丹参酮IIA留时 间适中，峰行尖锐，对称，阴性无干扰。 丹红注射剂中丹酚酸B或其镁盐的薄层色谱鉴别方法

为了突出丹参中水溶性成分的特征，选择了丹酚酸B或其镁盐作 为其特征斑点，但是由于药材中存在较多与丹酚酸B或其镁盐结构相 近、极性相似的成分，普通条件难以达到质量控制的要求，因此我们 筛选了以下薄层板和展开剂对丹酚酸B或其镁盐进行了分离：   条件     问题   苯-二氯甲烷-醋酸乙酯-甲醇-甲酸   (6∶3∶4∶0.5∶2)硅胶GF254薄层板   甲苯-二氯甲烷-醋酸乙酯-甲醇-甲酸   (6∶3∶4∶0.5∶2)硅胶GF254薄层板   甲苯-二氯甲烷-醋酸乙酯-甲醇-甲酸   (6∶3∶4∶2∶2)硅胶GF254薄层板   甲苯-三氯甲烷-醋酸乙酯-甲醇-甲酸   (2∶3∶2∶1∶1)硅胶GF254薄层板   甲苯-三氯甲烷-醋酸乙酯-甲醇-甲酸   (2∶3∶4∶0.5∶2)硅胶GF254薄层板     对照品点未展开       对照品点未展开       对照品展开至前沿       对照品斑点脱尾，阴性有干扰       分离清晰，Rf值适中阴性无干扰  

经过筛选，确定了以硅胶GF254薄层板为固定相，甲苯-三氯甲烷 -醋酸乙酯-甲醇-甲酸(2∶3∶4∶0.5∶2)为展开剂，在此条件下， 丹酚酸B或其镁盐的Rf值适中，和其它斑点分离清晰，阴性无干扰。 丹红注射剂中丹酚酸B或其镁盐的液相色谱鉴别方法及含量测定

为了突出丹参中水溶性成分的特征，选择了丹酚酸B或其镁盐作 为其特征成分，但是由于药材中存在较多与丹酚酸B或其镁盐结构相 近、极性相似的成分，普通条件难以达到质量控制的要求，因此我们 筛选了以下色谱柱和流动相对丹酚酸B或其镁盐进行了分离：     条件     问题     甲醇∶水35∶65     十八烷基硅烷键合硅胶     峰型较钝，出峰时间过早，阴性有干扰    甲醇∶水35∶65    八烷基硅烷键合硅胶    甲醇∶0.2％磷酸35∶65    二烷基硅烷键合硅胶    乙腈∶0.5％磷酸20∶80    十八烷基硅烷键合硅胶    甲醇∶5％冰醋酸水溶液为35∶65    十八烷基硅烷键合硅胶   峰型较钝，阴性有干扰     主峰脱尾     主峰脱尾，阴性有干扰     保留时间适中，峰型尖锐，对称，阴性无干扰  

经过筛选，确定了以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，甲醇∶5 ％冰醋酸水溶液为(35∶65)为流动相，在此条件下，丹酚酸B或其 镁盐留时间适中，峰行尖锐，对称，阴性无干扰。

丹红注射剂中丹参素或其钠盐、原儿茶醛薄层色谱鉴别

为了突出丹参中水溶性成分的特征，选择了丹参素或其钠盐、原 儿茶醛作为其特征斑点，但是由于药材中存在较多与丹参素或其钠 盐、原儿茶醛结构相近、极性相似的成分，普通条件难以达到质量控 制的要求，因此我们筛选了以下薄层板和展开剂对丹参素或其钠盐、 原儿茶醛进行了分离：     条件     问题     三氯甲烷-丙酮-甲酸(25∶2∶2)     硅胶GF254薄层板     三氯甲烷-丙酮-甲酸(10∶1∶0.5)     硅胶GF254薄层板     三氯甲烷-丙酮-甲酸(20∶1∶0.5)     硅胶GF254薄层板     三氯甲烷-丙酮-甲酸(8∶5∶0.5)     硅胶GF254薄层板     阴性有干扰       主斑点脱尾，阴性有干扰       主斑点未展开       主斑点展至前沿     三氯甲烷-丙酮-甲酸(8∶1∶1)   硅胶GF254薄层板     分离清晰，Rf值适中阴性无干扰

经过筛选，确定了以硅胶GF254薄层板为固定相，三氯甲烷-丙酮- 甲酸(8∶1∶1)为展开剂，在此条件下，丹参素或其钠盐、原儿茶 醛的Rf值适中，和其它斑点分离清晰，阴性无干扰。

丹红注射剂中丹参素或其钠盐、原儿茶醛液相色谱鉴别及含测

为了突出丹参中水溶性成分的特征，选择了丹参素或其钠盐、原 儿茶醛作为其特征成分，但是由于药材中存在较多与丹参素或其钠 盐、原儿茶醛结构相近、极性相似的成分，普通条件难以达到质量控 制的要求，因此我们筛选了以下色谱柱和流动相对丹参素或其钠盐、 原儿茶醛进行了分离：     条件   问题     乙腈-水(20∶80)     十八烷基硅烷键合硅胶     甲醇-水(40∶60)     十八烷基硅烷键合硅胶     甲醇-0.2％磷酸水溶液(20∶80)     十八烷基硅烷键合硅胶     乙腈-0.2％磷酸水溶液(20∶80)     八烷基硅烷键合硅胶     甲醇-1％冰醋酸水溶液(13∶87)     十八烷基硅烷键合硅胶   主峰出峰时间过早，阴性有干扰     主峰脱尾，出峰时间过早     出峰时间过早，阴性有干扰     出峰时间过早，阴性有干扰     保留时间适中，峰型尖锐，对称，阴性无干扰  

经过筛选，确定了以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，甲醇-1％ 冰醋酸水溶液(13∶87)为流动相，在此条件下，丹参素或其钠盐、 原儿茶醛留时间适中，峰行尖锐，对称，阴性无干扰。

丹红注射剂中红花薄层色谱鉴别

为了突出红花中的主要特征，选择了红花对照药材作为其特征成 分，但是由于药材中成分复杂，且存在很多结构相似，结构相近的成 分，普通条件难以达到质量控制的要求，因此我们筛选了以下薄层板 和展开剂对红花对照药材进行了分离：     条件     问题     聚酰胺薄膜     苯-乙酸乙酯-甲醇(60∶1∶2)     硅胶H薄层板     正丁醇-冰醋酸-水(6∶2∶5)     硅胶G薄层板     丙酮-冰醋酸-水(8∶1∶3)     醋酸乙酯-冰醋酸-水(2∶1∶5)     硅胶G薄层板     正丁醇-冰醋酸-水(6∶2.4∶5)     主斑点未展开       阴性有干扰       阴性有干扰       主斑点未展开     分离清晰，Rf值适中阴性无干扰  

经过筛选，确定了以硅胶G薄层板为固定相，正丁醇-冰醋酸- 水(6∶2.4∶5)为展开剂，在此条件下，红花对照药材各主要特征 斑点的Rf值适中，分离清晰，阴性无干扰。

丹红注射剂中红花明苷A的薄层色谱鉴别方法

为了突出红花中主要特征，选择了红花明苷A作为其特征成分， 但是由于药材中存在较多与红花明苷A结构相近、极性相似的成分， 普通条件难以达到质量控制的要求，因此我们筛选了以下薄层板和展 开剂对红花明苷A进行了分离：     条件     问题     硅胶H薄层板     阴性有干扰，主斑点脱尾   氯仿-甲醇-0.1％盐酸(2∶4∶5)   硅胶G薄层板   氯仿-甲醇-0.1％盐酸(2∶4∶5)   硅胶G薄层板   氯仿-甲醇-7％盐酸(2∶4∶5)   硅胶G薄层板   氯仿-甲醇-5％盐酸(2∶4∶5)   硅胶G薄层板   醋酸乙酯-甲醇3.6％盐酸(1∶3∶6)       阴性有干扰，主斑点脱尾       阴性有干扰，主斑点未展开       Rf值过低       分离清晰，Rf值适中阴性无干扰  

经过筛选，确定了以硅胶G薄层板为固定相，醋酸乙酯-甲醇 -3.6％盐酸(1∶3∶6)为展开剂，在此条件下，丹红花明苷A的Rf 值适中，和其它斑点分离清晰，阴性无干扰。

丹红注射剂中红花明苷A的液相色谱鉴别方法及含量测定

为了突出红花的特征，选择了红花明苷A作为其特征成分，但是 由于药材中存在较多与红花明苷A结构相近、极性相似的成分，普通 条件难以达到质量控制的要求，因此我们筛选了以下色谱柱和流动相 对红花明苷A进行了分离： 条件   问题 甲醇-乙腈-0.2％磷酸水溶液为15∶5∶80 流速：1ml/min 甲醇-乙腈-2％冰醋酸水溶液为30∶10∶60 流速：1ml/min 甲醇-乙腈-水为30-10-60 流速；1min/min 甲醇∶乙腈-0.7％磷酸水溶液为26∶2∶72 流速：1ml/min   出峰时间过晚，主峰脱尾     出峰时间过早，阴性有干扰     主峰脱尾，阴性有干扰     出峰时间过早，阴性有干扰   甲醇∶乙腈-0.7％磷酸水溶液为26∶2∶72 流速：0.6ml/min 保留时间适中，峰型尖锐，对称，阴性无干 扰

经过筛选，确定了以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，甲醇∶乙 腈-0.7％磷酸水溶液为(26∶2∶72)为流动相，在此条件下，红花明 苷A留时间适中，峰行尖锐，对称，阴性无干扰。

以上实验可看出，丹红注射剂的鉴别及含测条件筛选过程是系统 合理的，只有用本发明的实验条件，丹红注射剂的鉴别及含量测定方 法才是稳定可靠的。

实验例5  含量测定项目方法学考察

一、丹参素钠和原儿茶醛的含量。

1.仪器与试药

(1)仪器：Agilent1100高效液相色谱仪，chemstation sys工 作站。TU-1800SPC紫外分光光度计。

(2)试药：丹参素钠：中国药品生物制品检定所(0855-200102)； 原儿茶醛：中国药品生物制品检定所(110810-200205)。

试剂均为分析纯；

色谱用试剂为色谱纯。

2.检测波长的选择：精密称取经减压干燥至恒重的丹参素钠与原 儿茶醛标准品适量，分别加水溶解制成每1ml含丹参素钠0.04mg， 原儿茶醛0.05mg的溶液，在200-600nm波长范围扫描。丹参素钠与 原儿茶醛均在280nm处有最大吸收，因此选择280nm作为丹参药材含 量测定检测波长。

3.标准品溶液的制备：精密称取经减压干燥至恒重丹参素钠与原 儿茶醛标准品适量，分别加水溶解制成每1ml含丹参素钠0.04mg， 原儿茶醛0.05mg的溶液。

4.供试品制备方法：精密称取本品及阴性样品适量，分别加水制 成每1ml含20mg的溶液，摇匀，以0.45μm的微孔滤膜滤过即得。

5.色谱条件：Dikma ODS(4.6×200mm，5μm)；流动相：甲醇 -1％冰醋酸(13∶87)；柱温：30℃；检测波长：280nm；流速：1ml/min。

在此条件下，阴性样品不干扰样品中丹参素钠和原儿茶醛的测 定，且分离度好。

6.丹参素钠和原儿茶醛的标准曲线

6.1丹参素钠的标准曲线：

精密称取经减压干燥至恒重丹参素钠标准品12.15mg，置25ml 容量瓶中，加水溶解并定容至刻度，制成每1ml含0.486mg的丹参素 钠标准品溶液。精密吸取该标准品溶液0.5，1.0，2.0，3.0，4.0， 5.0ml，分别置10ml容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀即得每ml含 丹参素钠0.0243，0.0486，0.0972，0.1458，0.1944，0.2430mg的 工作液。进样10μl，照高效液相色谱法(中国药典2000年版一部 附录VI D)测定。以标准品浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，计算得 回归方程为：645.95X-2.3759，r＝0.9999(工作曲线见附图3)。结 果表明，丹参素钠在0.243μg～2.43μg之间呈良好得线性关系。数 据列于下表。

                          丹参素钠线性关系 丹参素钠(μg)   0.243   0.486   0.972   1.458   1.944   2.43 峰面积   156.7   314.1   626.0   935.8   1239.4   1579.7

6.2原儿茶醛的标准曲线：

精密称取经减压干燥至恒重原儿茶醛标准品7.30mg，置25ml容 量瓶中，加水溶解并定容至刻度，制成每1ml含0.292mg的原儿茶醛 标准品溶液。精密吸取该标准品溶液0.5，1.0，1.5，2.0，2.5，3.0ml， 分别置10ml容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀即得每ml含原儿茶醛 0.0146，0.0292，0.0438，0.0584，0.0730，0.0876mg的工作液。 进样10μl，照高效液相色谱法(中国药典2000年版一部附录VI D) 测定。以标准品浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，计算得回归方程为： 4325x+55.92，r＝0.9999(工作曲线见附图4)。结果表明，原儿茶醛 在0.146μg～0.876μg之间呈良好得线性关系。，数据列于表。

                   原儿茶醛线性关系 原儿茶醛(μg)   0.146   0.292   0.438  0.584    0.73  0.876 峰面积   694.1   1326.1   1933.9  2565.8    3225.4  3847.7

7.标准品精密度试验

取上述丹参素钠和原儿茶醛标准品工作液，分别连续进样测定5 次，考察标准品溶液的精密度，测定结果见表。

                丹参素钠和原儿茶醛标准品精密度试验 试验次数  1   2  3  4    5  平均值   RSD(％) 丹参素钠峰面积 原儿茶醛峰面积  305.3  2410.6   307.3   2423.7  307.4  2506.4  307.3  2549.3    306.8    2536.1  306.8  2485.2   0.29   2.29

结果表明，丹参素钠和原儿茶醛标准品溶液精密度良好。

8.重现性试验

取同一批供试品(批号：030721)，分别精密称取5份，按正文方 法处理，分别进样测定。结果见表。

                      重现性试验       编号     丹参素钠含量       (％)     RSD       (％)     原儿茶醛含量       (％)     RSD       (％)     1     2     3     4     5     2.67     2.61     2.65     2.66     2.65       0.18         0.21     0.20     0.21     0.21     0.21       0.04    

结果表明，供试品重现性良好。

9.稳定性试验

9.1.标准品稳定性试验

取丹参素钠(浓度0.0404mg/ml)和原儿茶醛(浓度0.0512mg/ml) 标准品溶液，分别在0、2、4、6、8小时进样测定，测定结果见表。 

                        标准品稳定性试验结果   测试时间(h)   0   2   4   6   8    RSD(％)   丹参素钠峰面积   原儿茶醛峰面积   224.2   2152.3   224.1   2127.0   225.7   2157.0   225.9   2159.7   224.0   2152.4     224.8     2149.7     0.43     0.61

结果表明，丹参素钠和原儿茶醛标准品溶液稳定性良好。

9.2.供试品溶液稳定性试验

取同一供试品(030721)溶液，分别在0、2、4、6、8小时进样测 定，测定结果见表。

                    供试品溶液稳定性试验结果 测试时间(h)  0   2   4   6   8   平均  RSD(％) 丹参素钠峰面积 原儿茶醛峰面积  1598.8  817.3   1595.3   828.9   1602.7   820.1   1589.7   835.2   1594.3   833.9   1596.2   827.1  0.31  0.98

结果表明，供试品溶液稳定性良好。

10.加样回收率试验

取同一批供试品，已知含丹参素钠0.9mg/ml、原儿茶醛 0.6mg/ml，分别加入一定量的丹参素钠和原儿茶醛标准品溶液，按正 文所述方法处理，进样测定。测定结果分别见表。

                           丹参素钠加样回收率试验       编号     样品含量     (mg)   加入量     (mg)   测得量     (mg) 回收率％     平均   RSD％       1     2     3     4     5   2.642   2.642   2.642   2.642   2.642   2.430   2.430   2.430   2.430   2.430   5.081   5.122   5.036   5.024   5.117   100.36   102.05   98.50   98.01   101.83       100.15         1.85    

                      原儿茶醛加样回收率试验       编号     样品含量     (mg)   加入量     (mg)     测得量       (mg)     回收率％       平均         RSD％       1     2     3     4     5   0.289   0.289   0.289   0.289   0.289   0.428   0.428   0.428   0.428   0.428     0.725     0.711     0.719     0.710     0.715   101.53   98.44   100.13   98.22   99.21       99.51             1.36    

11三批样品含量测定

取本品样品三批(批号：030721，030722，030723)，按正文所述 方法处理，进样测定，结果见表。

                    三批样品含量测定结果       批号       丹参素钠含量       (mg/瓶)     原儿茶醛含量       (mg/瓶)     总量(mg/瓶)       030721     030722     030723     2.86     3.02     3.01     0.35     0.29     0.33     3.21     3.31     3.34

结论：三批样品丹参素钠和原儿茶醛总量平均含量为3.2mg/瓶， 按照平均含量的80％作为下限，即3.2×80％＝2.56，取整数为2.5， 故规定本品丹参素钠(C9H9O5Na)和原儿茶醛(C7H6O3)总量不得少于 2.5mg/瓶。 

二、总黄酮含量测定

照分光光度法(中国药典2000年版一部附录VB)测定总黄酮的 含量。

1.仪器：TU-1800SPC紫外分光光度计。

芦丁：中国药品生物制品检定所(0080-9705)。

试剂均为分析纯。

2.检测波长的选择

精密称取经120℃干燥至恒重的芦丁标准品适量，加50％甲醇溶 解制成每1ml含芦丁0.2mg的溶液，在200-600nm波长范围扫描。芦 丁在500nm处有最大吸收，因此选择500nm作为总黄酮含量测定的检 测波长。

3.标准品溶液的制备精密称取经120℃干燥至恒重的芦丁标准 品20mg，置100ml量瓶中，加50％甲醇适量，振摇使溶解并稀释至刻 度，摇匀，即得(每1ml含无水芦丁0.2mg)。

4.标准曲线的制备精密量取标准品溶液1.0ml、2.0ml、3.0ml、 4.0ml、5.0ml，分别置10ml量瓶中，各加50％甲醇至5ml，加5％亚 硝酸钠溶液0.3ml，摇匀，放置6分钟，加10％硝酸铝溶液0.3ml， 摇匀，放置6分钟，加氢氧化钠试液4ml，再加50％甲醇至刻度，摇 匀。以相应的溶液为空白。照分光光度法(中国药典2000年版一部 附录V B)，在500nm波长处测定吸收度，以吸收度为纵坐标、浓度 为横坐标，绘制标准曲线(见附图5)。计算得回归方程为： Y＝7.374X+0.1409(r＝0.9995)。数据列于表。

                                芦丁线性关系   浓度(mg/ml)     0.0197     0.0393     0.0590     0.0786   0.0983   吸光度     0.283     0.428     0.584     0.723   0.86

5标准品精密度试验

取上述芦丁标准品工作液，分别连续测定5次，考察标准品溶液的 精密度，测定结果见表。

                  芦丁标准品精密度试验   试验次数     1        2          3        4            5   吸收值   平均     0.429    0.428      0.428    0.429      0.429          0.428          RSD(％)        0.13

结果表明，芦丁标准品溶液精密度良好。

6重现性试验

取同一批供试品(批号：030721)，分别精密称取5份，按正文方 法处理，分别进样测定。结果见表。

                      重现性试验   编号   1          2         3         4         5   取样量   总黄酮含量   (mg/瓶)   平均含量   (mg/瓶)   1.0533     1.1128    1.0041    1.0209    1.1013   31.62      31.48     31.86     31.68     31.87           31.70          RSD(％)         0.34

结果表明，供试品重现性良好。

7稳定性试验

7.1标准品稳定性试验

取芦丁标准品溶液，分别在0、2、4、6、8小时进样测定，测定 结果见表。

                  标准品溶液稳定性试验   测试时间(h)     0          2        4        6         8   吸收值   平均吸收值     0.429      0.428    0.429    0.428     0.428          0.428          RSD(％)        0.13

结果表明，芦丁标准品溶液稳定性良好。

7.2供试品溶液稳定性试验

取同一供试品溶液，分别在0、2、4、6、8小时进样测定，测定 结果见表。

                供试品溶液稳定性试验   试验次数     1        2          3        4        5   吸收值   平均     0.484    0.484      0.483    0.484    0.485           0.484         RSD(％)        0.10

结果表明，供试品溶液稳定性良好。

7.3加样回收率试验

取同一批供试品(批号：030721)5份，分别加入一定量的芦丁标 准品溶液，按正文所述方法处理，测定。测定结果分别见表。

                          加样回收率试验     编     号    样品含量     (mg)     加入量     (mg)     测得量     (mg)     回收率％   平均     RSD％     1     2     5.616     5.736     5.012     5.012     10.54     10.68     98.25     98.65     3     4     5  5.671  5.537  5.583  5.012  5.012  5.012  10.57  10.45  10.66  97.74  98.02  101.29  98.79     1.45

7.4三批样品总黄酮测定

取本品样品三批(批号：030721，030722，030723)，按正文所述 方法处理，进样测定，结果见表。

           三批样品总黄酮含量测定结果 批号     030721     030722     030723 总黄酮含(mg/瓶)     31.6     32.7     33.9

结论：三批样品总黄酮平均含量为33.14mg/瓶，按照平均含量的 80％作为下限，即33.14×80％＝25.64，取整数为25，故规定本品总黄 酮按芦丁(C27H30O16)计不得少于25.0mg/瓶。

三、丹酚酸B照高效液相色谱法(中国药典2000年版一部附 录VI D)测定。

仪器与试药

主要仪器：

SHIMADZU    LC-2010AHT                高效液相色谱仪

TU-1810SPC  紫外/可见分光光度仪       北京普析通用仪器有限公 司

SARTORIUS   BP211D                    电子分析天平

KQ250DB     超声波清洗机              昆山市超声仪器有限公司

试药：

丹酚酸B     中国药品生物制品检定所    111562-199902

甲   醇     分析纯                    北京市通广精细化学 品有限公司

乙  腈    色谱纯               CALEDON

冰醋酸    优级纯               北京化工厂

丹酚酸B   由中国药品生物制品检定所提供丹酚酸B(批号： 111562-199902)经高效液相色谱法(归一化法)测定纯度为99.52％， 符合含量测定用对照品要求。

检测波长的选择  精密称取丹酚酸B标准品适量，加水制成每 1ml含0.01mg的溶液，在190～600nm波长范围内扫描。结果表明， 丹酚酸B在281nm处有最大吸收，，选择281nm作为测定注射用丹红 中丹酚酸B含量的检测波长。

色谱条件

色谱仪：SHIMADZU LC-2010AHT；

色谱柱：Diamonsil ODS 250mm×4.6mm 5μm；

流动相：甲醇∶5％冰醋酸水溶液(35∶65)

流  速：1.0ml/min；

柱  温：30℃；

进样量：10μl；

检测波长：281nm。

对照品溶液的制备精密称取丹酚酸B对照品适量，加水制成每 1ml含丹酚酸B0.05mg的溶液，即得。

供试品溶液的制备  精密称取本品适量，加水制成每1ml含30mg 的溶液，摇匀，精密量取1.0ml，置10ml量瓶中，加水至刻度，摇 匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，取续滤液，即得。

测定法  分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入 液相色谱仪，测定，即得。

线性关系的考察  精密量取丹酚酸B对照品溶液(浓度： 0.978mg/ml)0.0ml、0.2ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml，分置 10ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，配置成0.00000mg/ml、 0.01956mg/ml、0.03912mg/ml、0.05868mg/ml、0.07824mg/ml、 0.09780mg/ml的对照品溶液分别从中精密吸取10μl，注入液相色谱 仪，照高效液相色谱法(中国药典2000年版一部附录VI D)测定。 以丹酚酸B量(μg)为横坐标，峰面积为纵坐标做图，绘制标准曲 线(见附图6)。

              丹酚酸B线性关系     编号     丹酚酸B量(μg)     峰面积     1     2     3     4     5     6     0.0000     0.1886     0.3771     0.5657     0.7542     0.9428     0     587358     1155313     1748884     2339521     2915122

回归方程：Y＝3095080.07X-1321.08

决定系数：γ＝0.9999

结果表明，丹酚酸B在0.00000μg～0.9428μg之间线性关系良好。 经计算，丹酚酸B的标准曲线过原点，因此选用外标一点法测定丹酚 酸B的含量。

精密度试验  精密吸取丹酚酸B对照品溶液(0.0472mg/ml) 10μl，注入液相色谱仪，测定5次，考察对照品溶液精密度，测定结 果见下表。

                            丹酚酸B标准品精密度试验 试验次数   1   2   3   4   5   平均值   RSD(％) 峰面积   1206386   1205431   1211472   1213263   1224713   1212253   0.64

结果表明，对照品溶液精密度良好。

稳定性试验

对照品稳定性试验  精密吸取丹酚酸B(浓度：0.0472mg/ml)对 照品溶液10μl，注入液相色谱仪，分别在0、2、6、10、24小时进 样测定，测定结果见下表。

                        对照品稳定性试验结果 时间(h) 0  2 6  10  24  均值   RSD(％) 峰面积 1206386  1205431 1211472  1213263  1224713  1212253   0.64

结果表明，对照品溶液在24小时内稳定性良好。

供试品溶液稳定性试验  精密吸取供试品溶液10μl，注入液相 色谱仪，分别在0、2、6、10、24小时进样测定，测定结果见下表。

                      供试品溶液稳定性试验结果 时间(h)   0   2  6  10  24  均值   RSD(％) 含量(mg/ 瓶)   1.017   1.006  1.024  1.031  1.028  1.021   0.98

结果表明，供试品溶液在24小时内稳定性良好。

重复性试验  精密称取本品适量(共5份)，按正文供试品溶液 制备和测定项下进行操作。结果见下表。

              重复性试验     编号     峰面积     含量(mg/瓶)     1     2     3     4     5     1270529     1297255     1246900     1341309     1286375     1.027     1.015     1.018     1.018     1.015

平均含量＝1.019mg/瓶，RSD＝0.48％。

结果表明，重复性良好。

加样回收率试验采用加样回收法，精密称取本品适量(共6份)， 分置10ml量瓶中，分别精密加入丹酚酸B对照品0.26mg、0.35mg、 0.40mg(各两份)，加水适量超声处理(功率250W，频率33KHz)使 溶解，取出，放至室温，加水至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm) 滤过，精密吸取续滤液10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。测定 结果见下表。

                 丹酚酸B加样回收率试验       编号       供试品中纯品       量(mg)     丹酚酸B       (mg)   测得量     (mg)     回收率       (％)     1     2     3     4     5     6     0.3583     0.3469     0.3597     0.3499     0.3648     0.3410     0.2497     0.2497     0.3405     0.3405     0.3973     0.3973   0.5994   0.5934   0.6984   0.6886   0.7596   0.7345     96.56     98.72     99.47     99.47     99.37     99.04

平均回收率＝98.48％，RSD＝0.66％。

样品含量测定  取本品十批样品，按正文供试品溶液的制备和测 定法项下的方法测定，结果见下表。

                    十批样品含量测定结果     批号 丹酚酸B平均含量(mg/瓶)   测定次数     RSD％     030501     030502     030503     030504     030505     030506     030507     030508     030509     030510     1.057     1.163     1.211     1.198     1.217     1.074     1.135     1.166     1.178     1.065     3     3     3     3     3     3     3     3     3     3     1.26     0.87     1.14     1.33     1.45     1.52     1.47     1.52     1.65     1.37

结论：根据三批样品含量测定结果暂定，本品每瓶含丹酚酸B应 不低于0.8mg。

四、红花明苷A照高效液相色谱法(中国药典2000年版一部 附录VI D)测定。

红花明苷A  由中国药品生物制品检定所提供红花明苷A(批号： 0856-9601)经高效液相色谱法(归一化法)测定纯度为99.75％，符 合含量测定用对照品要求。

检测波长的选择  精密称取红花明苷A标准品适量，加甲醇制成 每1ml含21.84μg的溶液，在190～400nm波长范围内扫描。结果表 明，红花明苷A在288nm处有最大吸收，故选择288nm作为测定水飞 蓟素中红花明苷A含量的检测波长。见图。

色谱条件

色谱仪：Aglient 1100series；

色谱柱：Kromasil-C18 250mm×4.6mm 5μm；

流动相：甲醇-乙腈-0.7％磷酸水溶液(26∶2∶72)；

流  速：1.0ml/min；

柱  温：30℃；

进样量：10μl；

检测波长：403nm。

对照品溶液的制备精密称取红花明苷A对照品适量，加甲醇制 成每1ml含0.1mg的溶液，摇匀，即得。

供试品溶液的制备精密称取本品适量，加甲醇制成每1ml含30mg 的溶液，摇匀，即得。

测定法  分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液 相色谱仪，测定，即得。

线性关系的考察  精密量取红花明苷A对照品溶液 (0.2184mg/ml)0.0ml、1.0m、2.0ml、3.0ml、4.0ml、5.0ml，分置 5ml量瓶中，加甲醇定至刻度，摇匀，配制成0.0000mg/ml、 0.04368mg/ml、0.08736mg/ml、0.13104mg/ml、0.17472mg/ml、 0.21840mg/ml的对照品溶液，分别从中精密吸取5μl，注入液相色 谱仪，照高效液相色谱法(中国药典2000年版一部附录VI D)测定。 以红花明苷A的量(μg)为横坐标，峰面积为纵坐标做图，绘制标 准曲线(见附图7)。见回归方程：

Y＝2427.4X-2.1743

相关系数：γ＝0.9998 结果表明，红花明苷A在0.0000μg～1.0920μg之间线性关系良好。

经过计算，红花明苷A标准曲线为一过原点的直线，因此选择外 标一点法测定水飞蓟素中红花明苷A的含量。

              红花明苷A线性关系     编号     红花明苷A量(μg)     峰面积     1     2     3     4     5     6     0.0000     0.2184     0.4368     0.6552     0.8736     1.0920     0.00     521.66     1046.09     1618.47     2108.45     2644.47

               红花明苷A对照品标准曲线

精密度试验  精密吸取红花明苷A对照品溶液(0.1092mg/ml) 5μl，注入液相色谱仪，重复测定5次，考察对照品溶液精密度，测 定结果见表。

                             精密度试验 试验次数   1   2    3   4   5  平均值    RSD(％) 峰面积   1319.70   1321.98    1306.82   1308.34   1321.71  1315.71    0.57

结果表明，对照品溶液精密度良好。

稳定性试验

对照品稳定性试验  精密吸取红花明苷A对照品溶液 (0.1092mg/ml)5μl，注入液相色谱仪，分别在0、2、6、8、24小 时进样测定，测定结果见表。

                           对照品稳定性试验结果 时间(h)   0    2     6   8   24  平均值  RSD(％) 峰面积   1319.70    1321.98    1306.82   1308.34   1321.71  1315.71  0.57

结果表明，对照品溶液在24小时内稳定性良好。

供试品溶液稳定性试验精密吸取供试品溶液10μl，注入液相 色谱仪，分别在0、2、6、8、24小时进样测定，测定结果见表。  

                        供试品溶液稳定性试验结果 时间(h)   0    2    6   8   24     平均值   RSD(％) 含量(mg/ 瓶)   1.004    1.039    1.015   1.034   1.017     1.021   1.41

结果表明，供试品溶液在24小时内稳定性良好。

重复性试验  精密称取本品适量(共5份)，按正文供试品溶液制 备和测定法项下进行操作。结果见表。

              重复性试验     编号     峰面积   含量(mg/瓶)     1     2     3     4     5     1430.93     1483.81     1426.35     1368.78     1367.67     1.027     0.996     1.007     1.012     1.023

平均含量＝1.013mg/瓶，RSD＝1.23％。

结果表明，重复性良好。

加样回收率试验  采用加样回收法，精密称取本品适量，分置10ml 量瓶中，分别精密加入红花明苷A0.24mg、0.3mg、0.38mg(各两份)， 加甲醇适量超声处理(功率250W，频率33KHz)使溶解，取出，放至 室温，加甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，精密吸取 续滤液10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。测定结果见表。

注射剂中红花明苷A的含量：2.036mg/瓶

                    加样回收率试验       编号       供试品中纯品       量(mg)     红花明苷A加       入量(mg) 测得量   (mg)     回收率       (％)     1     2     3     4     5     6     0.32144     0.33651     0.32049     0.33095     0.33278     0.33761     0.2276     0.2276     0.3252     0.3252     0.3794     0.3794  0.5467  0.5602  0.6422  0.6513  0.7103  0.7138     98.97     98.28     98.93     98.51     99.50     99.16

平均回收率＝98.60％，RSD＝0.72％。

样品含量测定  取本品样品十批，按正文所述方法处理，进样测 定，结果见表。

                三批样品含量测定结果     批号    红花明苷A平均含量  (mg/瓶)     测定次数       RSD％       030501     030502     030503     030504     030505     030506     030507     030508     030509     1.0841     1.0714     1.0269     1.0698     1.1522     1.0765     1.5247     1.0655     1.0987     3     3     3     3     3     3     3     3     3     0.74     1.63     1.29     0.77     1.56     1.09     2.04     1.38     0.74     030510     1.0644     3     1.63

结论：根据三批样品含量测定结果暂定，本品含红花明苷A，不 得少于0.8mg/瓶。

附图说明：附图1、2分别是以丹参成分特征为主和以红花成分特 征为主的标准指纹图谱，附图3是本发明丹参素钠标准曲线，附图4 是本发明原儿茶醛标准曲线，附图5是本发明芦丁标准曲线，附图6 是本发明丹酚酸B的标准曲线，附图7是本发明红花明苷A对照品标 准曲线。

具体的实施方式：

实施例1  指纹图谱

a、采用液相色谱法测试丹参成分特征为主的指纹图谱

(1)供试品溶液的制备：取丹红注射剂适量，加水或甲醇、乙 醇溶解或稀释，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；

(2)参照物溶液的制备：取适量丹参药材中的主要活性成分对 照品，包括丹参素或其钠盐、原儿茶醛、丹酚酸B或其镁盐、红花黄 色素、腺苷、红花明苷A中的一种或几种，用水溶解稀释至合适浓 度，作为参照物溶液。

(3)色谱条件：色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填料：流 动相为乙腈(或甲醇)：0.01％～0.5％磷酸溶液或0.2％～3％冰醋 酸或0.2％～3％甲酸溶液，梯度洗脱，流速为0.5～1.5ml/min、检 测波长为203-295nm范围内的一个或几个，柱温为20～50℃；

(4)以丹参成分特征为主的标准指纹图谱的制定：精密吸取供 试品溶液及参照物溶液适量，分别注入液相色谱仪，依据所测得的图 谱，制定标准指纹图谱。所述标准指纹图谱中，共有峰有15个左右， 以确定的参照物色谱峰的相对保留时间和峰面积为基准，计算其它共 有色谱峰的相对保留时间和相对峰面积；

(5)以上述方法作为待测丹红注射剂中以丹参成分特征为主的 指纹图谱的测试手段。

(6)将待测丹红注射剂的指纹图谱与上述标准指纹图谱对比， 计算相似度，应为0.80～1.00。

b、采用液相色谱法测试以红花成分特征为主的指纹图谱

(1)供试品溶液的制备：取丹红注射剂适量，加水溶解或稀释， 调节PH值，加热，取出，放至室温，定量转移至分液漏斗中，加乙 酸乙酯等中等极性溶剂提取，提取液蒸干，残渣用甲醇、乙醇或乙酸 乙酯等溶剂溶解，滤过，取续滤液作为供试品溶液；

(2)参照物溶液的制备：取适量红花或丹参药材中的主要活性 成分作为对照品，包括红花黄色素、腺苷、红花明苷A、丹参素或其 钠盐、原儿茶醛、丹酚酸B或其镁盐等中的一种或几种，用水稀释， 作为参照物溶液。

(3)色谱条件：色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填料；流 动相为乙腈(或甲醇)：0.01％～1％磷酸溶液或0.2％～3％冰醋酸 溶液或0.2％～3％甲酸溶液，梯度洗脱，流速为0.5～1.5ml/min、 检测波长为203-290nm，柱温为20～50℃；

(4)以红花成分特征为主的标准指纹图谱的制定：精密吸取上 述供试品溶液及参照物溶液，分别注入液相色谱仪，测定，制定标准 指纹图谱。所述标准指纹图谱中，共有峰约有26个，以参照物色谱 峰的相对保留时间和峰面积为基准，计算其它色谱峰的相对保留时间 和相对峰面积；

(5)以上述方法作为待测丹红注射剂中红花成分指纹图谱的测 试手段。。

(6)将待测丹红注射剂指纹图谱与上述标准指纹图谱对比，计 算相似度，应为0.80～1.00。

所述以丹参成分特征为主的标准指纹图谱中，15个共有峰的相对 保留时间的相对标准偏差RSD均小于3％，其中1号峰的平均相对保 留时间RT为0.632，相对标准偏差RSD为0.13％；2号峰的平均RT 为0.832，RSD为0.05％；S号峰，即丹参素或其钠盐峰的平均RT为 1.000，RSD为0.00；4号峰的平均RT为1.460，RSD为0.12％；5 号峰的平均RT为1.922，RSD为0.09％；6号峰的平均RT为2.355， RSD为0.11％；7号峰的平均RT为2.646，RSD为0.05％；8号峰的 平均RT为2.736，RSD为0.08％；9号峰的平均RT为3.260，RSD为 0.13％；10号峰的平均RT为3.351，RSD为0.08％；11号峰的平均 RT为3.425，RSD为0.12％；12号峰的平均RT为3.507，RSD为0.12 ％；13号峰的平均RT为4.111，RSD为0.09％；14号峰的平均RT 为4.249，RSD为0.08％；15号峰的平均RT为4.389，RSD为0.07 ％；

所述以丹参成分特征为主的标准指纹图谱中，15个共有峰的相对 峰面积的相对标准偏差RSD均小于3％，其中1号峰的平均相对峰面 积RA为0.111，相对标准偏差RSD为0.06％；2号峰的平均RA为 0.225，RSD为0.07％；S号峰的平均RA为1.000，RSD为0.00；4 号峰的平均RA为0.754，RSD为0.14％；5号峰的平均RA为0.262， RSD为0.12％；6号峰的平均RA为0.713，RSD为0.10％；7号峰的 平均RA为0.145，RSD为0.07％；8号峰的平均RA为0.206，RSD为 0.10％；9号峰的平均RA为0.911，RSD为0.07％；10号峰的平均 RA为0.842，RSD为0.16％；11号峰的平均RA为0.145，RSD为0.08 ％；12号峰的平均RA为0.078，RSD为0.12％；13号峰的平均RA 为1.226，RSD为0.12％；14号峰的平均RA为0.096，RSD为0.07 ％；15号峰的平均RA为0.484，RSD为0.14％；

所述以红花成分特征为主的标准指纹图谱中，26个共有峰的相对 保留时间的相对标准偏差RSD均小于3％，其中1号峰的平均相对保 留时间RT为0808，相对标准偏差RSD为0.05％；S号峰的平均RT 为1.000，RSD为0.00；3号峰的平均RT为1.128，RSD为0.08％； 4号峰的平均RT为1.455，RSD为0.12％；5号峰的平均RT为1.502， RSD为0.08％；6号峰的平均RT为1.641，RSD为0.30％；7号峰的 平均RT为1.780，RSD为0.08％；8号峰的平均RT为1.841，RSD为 0.07％；9号峰的平均RT为1.979，RSD为0.12％；10号峰的平均 RT为2.074，RSD为0.13％；11号峰的平均RT2.146，RSD为0.08 ％；12号峰的平均RT为2.253，RSD为0.08％；13号峰的平均RT 为2.360，RSD为0.30％；14号峰的平均RT为2.699，RSD为0.14 ％；15号峰的平均RT为2.887，RSD为0.13％；16号峰的平均RT 为3.143，RSD为0.11％；17号峰的平均RT为3.650，RSD为0.12 ％；18号峰的平均RT为3.851，RSD为0.06％；19号峰的平均RT 为3.962，RSD为0.11％；20号峰的平均RT为4.094，RSD为0.11 ％；21号峰的平均RT为4.128，RSD为0.08％；22号峰的平均RT 为4.320，RSD为0.10％；23号峰的平均RT为4.424，RSD为0.12 ％；24号峰的平均RT为4.480，RSD为0.08％；25号峰的平均RT 为4.603，RSD为0.18％；26号峰的平均RT为4.883，RSD为0.25 ％；

所述以红花成分特征为主的标准指纹图谱中，26个共有峰的相对 峰面积的相对标准偏差RSD均小于3％，其中1号峰的平均相对峰面 积RA为1.330，相对标准偏差RSD为0.05％；S号峰的平均RA为 1.000，RSD为0.00；3号峰的平均RA为0.067，RSD为0.11％；4 号峰的平均RA为0.069，RSD为0.03％；5号峰的平均RA为1.002， RSD为0.09％；6号峰的平均RA为0.173，RSD为0.16％；7号峰的 平均RA为0.115，RSD为0.07％；8号峰的平均RA为0.102，RSD为 0.13％；9号峰的平均RA为0.077，RSD为0.10％；10号峰的平均 RA为0.331，RSD为0.09％；11号峰的平均RA为0.075，RSD为0.12 ％；12号峰的平均RA为0.067，RSD为0.11％；13号峰的平均RA 为0.359，RSD为0.10％；14号峰的平均RA为0.240，RSD为0.20 ％；15号峰的平均RA为0.134，RSD为0.10％；16号峰的平均RA 为0.111，RSD为0.15％；17号峰的平均RA为0.269，RSD为0.05 ％；18号峰的平均RA为0.225，RSD为0.07％；19号峰的平均RA 为0.325，RSD为0.06％；20号峰的平均RA为0.137，RSD为0.14 ％；21号峰的平均RA为0.115，RSD为0.09％；22号峰的平均RA 为0.132，RSD为0.14％；23号峰的平均RA为0.388，RSD为0.11 ％；24号峰的平均RA为0.193，RSD为0.12％；25号峰的平均RA 为0.243，RSD为0.19％；26号峰的平均RA为0.449，RSD为0.08 ％。

实施例2：指纹图谱

a、采用液相色谱法测定以丹参成分特征为主的指纹图谱

(1)供试品溶液的制备：精密称取本品适量，加水制成每1ml 含20mg的溶液，摇匀，用0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液作为供 试品溶液。

(2)参照物溶液的制备：精密称取丹参素或其钠盐对照品适量， 加水制成每1ml含0.1mg的溶液，摇匀，作为参照物溶液。

(3)色谱条件：色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填料；流 动相为乙腈-0.026％磷酸水溶液，梯度洗脱，溶剂比例从0分钟至 30分钟，乙腈的比例由2％升至22％，从30分钟至60分钟，乙腈 的比例由22％升至26％，流速为1.2ml/min，检测波长为288±2nm， 柱温为30℃。

(4)以丹参成分特征为主的标准指纹图谱的制定：分别精密吸 取参照物溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，采用高效液 相色谱法测定，制定标准指纹图谱。所述标准指纹图谱中，共有峰有 15个，以参照物色谱峰的相对保留时间和峰面积为基准，计算其它 色谱峰的相对保留时间和相对峰面积。

(5)以上述方法作为待测丹红注射剂中丹参成分指纹图谱的测 试手段。

(6)将待测丹红注射剂指纹图谱与上述标准指纹图谱对比，计 算相似度，应为0.90～1.00。

b、采用液相色谱法测定以红花成分特征为主的指纹图谱

(1)供试品溶液的制备：精密称取本品适量，加水制成每1ml 含15mg的溶液，加盐酸(每4ml水溶液加1ml盐酸)，沸水浴上加热 1小时，取出，放至室温，定量转移至分液漏斗中，加乙酸乙酯提取 3次，每次25ml，合并提取液，蒸干，残渣用甲醇溶解并定量转移至 5ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，用0.45μm微孔滤膜滤过， 取续滤液作为供试品溶液；

(2)参照物溶液的制备：精密称取丹参素或其钠盐对照品适量， 加水制成每1ml含0.2mg的溶液，摇匀，作为参照物溶液。

(3)色谱条件：色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填料；流 动相为乙腈-0.5％磷酸水溶液，梯度洗脱，溶剂比例为从0分钟至 60分钟，乙腈的比例由2％升至28％，从60分钟至70分钟，乙腈 的比例由28％降至2％，流速为1.2ml/min，检测波长为275±2nm， 柱温为30℃；

(4)以红花成分特征为主的标准指纹图谱的制定：分别精密吸 取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，用高效液相 色谱法测定，制定标准指纹图谱。所述标准指纹图谱中，共有峰有 26个，以参照物色谱峰的相对保留时间和峰面积为基准，计算其它 色谱峰的相对保留时间和相对峰面积；

(5)以上述方法作为待测丹红注射剂中以丹参成分特征为主的 指纹图谱的测试手段。

(6)将待测丹红注射剂指纹图谱与上述标准指纹图谱对比，计 算相似度，应为0.90～1.00。

所述以丹参成分特征为主的标准指纹图谱中，有15个共有峰， 其相对保留时间的相对标准偏差RSD均小于10％，其中1号峰的平 均相对保留时间RT为0.632；2号峰的平均RT为0.832；S号峰，即 丹参素或其钠盐峰的平均RT为1.000，；4号峰的平均RT为1.460； 5号峰的平均RT为1.922；6号峰的平均RT为2.355；7号峰的平均 RT为2.646；8号峰的平均RT为2.736；9号峰的平均RT为3.260； 10号峰的平均RT为3.351；11号峰的平均RT为3.425；12号峰的 平均RT为3.507；13号峰的平均RT为4.111；14号峰的平均RT为 4.249；15号峰的平均RT为4.389；

所述以丹参成分特征为主的标准指纹图谱中，15个共有峰的相对 峰面积的相对标准偏差RSD均小于10％，其中1号峰的平均相对峰 面积RA为0.111；2号峰的平均RA为0.225；S号峰的平均RA为1.000； 4号峰的平均RA为0.754；5号峰的平均RA为0.262；6号峰的平均 RA为0.713；7号峰的平均RA为0.145；8号峰的平均RA为0.206； 9号峰的平均RA为0.911；10号峰的平均RA为0.842；11号峰的平 均RA为0.145；12号峰的平均RA为0.078；13号峰的平均RA为1.226； 14号峰的平均RA为0.096；15号峰的平均RA为0.484；

所述以红花成分特征为主的标准指纹图谱中，26个共有峰的相对 保留时间的相对标准偏差RSD均小于10％。其中1号峰的平均相对 保留时间RT为0808；S号峰的平均RT为1.000；3号峰的平均RT为 1.128；4号峰的平均RT为1.455；5号峰的平均RT为1.502；6号 峰的平均RT为1.641；7号峰的平均RT为1.780；8号峰的平均RT 为1.841；9号峰的平均RT为1.979；10号峰的平均RT为2.074； 11号峰的平均RT为2.146；12号峰的平均RT为2.253；13号峰的 平均RT为2.360；14号峰的平均RT为2.699；15号峰的平均RT为 2.887；16号峰的平均RT为3.143；17号峰的平均RT为3.650；18 号峰的平均RT为3.851；19号峰的平均RT为3.962；20号峰的平均 RT为4.094；21号峰的平均RT为4.128；22号峰的平均RT为4.320； 23号峰的平均RT为4.424；24号峰的平均RT为4.480；25号峰的 平均RT为4.603；26号峰的平均RT为4.883；

所述以红花特征为主的标准指纹图谱中，26个共有峰的相对峰面 积的相对标准偏差RSD均小于10％。其中1号峰的平均相对峰面积 RA为1.330；S号峰的平均RA为1.000；3号峰的平均RA为0.067； 4号峰的平均RA为0.069；5号峰的平均RA为1.002；6号峰的平均 RA为0.173；7号峰的平均RA为0.115；8号峰的平均RA为0.102； 9号峰的平均RA为0.077；10号峰的平均RA为0.331；11号峰的平 均RA为0.075；12号峰的平均RA为0.067；13号峰的平均RA为0.359； 14号峰的平均RA为0.240；15号峰的平均RA为0.134；16号峰的 平均RA为0.111；17号峰的平均RA为0.269；18号峰的平均RA为 0.225；19号峰的平均RA为0.325；20号峰的平均RA为0.137；21 号峰的平均RA为0.115；22号峰的平均RA为0.132；23号峰的平 均RA为0.388；24号峰的平均RA为0.193；25号峰的平均RA为0.243； 26号峰的平均RA为0.449。

实施例3：鉴别

a.丹红注射剂中丹参的薄层色谱鉴别方法：

取各制剂适量，加乙醚等溶剂提取，滤过，滤液挥干，残渣加醋 酸乙酯或氯仿溶解，作为供试品溶液；按处方比例称取其它药味及辅 料，同法制成阴性对照溶液；另取丹参对照药材，同法制成对照药材 溶液；再取丹参酮IIA对照品，加醋酸乙酯、甲醇、乙醇等溶剂制成 每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液，采用薄层色谱法(中国药典 附录方法)试验，吸取上述四种溶液各1～30μl，分别点于同一硅 胶G薄层板或硅胶H薄层板上，以苯或甲苯或二甲苯-醋酸乙酯或氯 仿(2-40∶0.2～5)为展开剂，展开，取出，晾干，供试品色谱中， 在与对照药材色谱及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点， 阴性无干扰；

b、丹红注射剂中丹参酮IIA的液相色谱鉴别方法：

取各制剂适量，置量瓶中，加水至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过， 取续滤液作为供试品溶液；按处方比例称取其它药味及辅料，同法制 成阴性对照溶液；以丹参酮IIA对照品的甲醇溶液为对照，采用液相 色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶或八烷基硅烷键合硅胶或二 烷基硅烷键合硅胶为填充剂，20％～90％∶80％～10％甲醇(或乙腈) -水或0.05％～5％冰醋酸水溶液或0.02％～0.5％磷酸水溶液或0.05 ％～5％甲酸水溶液为流动相，流速为0.5～1.5ml/min，检测检测波 长为200～410nm范围内的一个或几个，柱温为10～50℃；供试品色 谱中，应具与对照品色谱有保留时间一致的色谱峰，阴性无干扰；

C、丹红注射剂中丹酚酸B或其镁盐的薄层色谱鉴别方法：

取各制剂适量，加甲醇等溶剂提取，滤过，滤液浓缩，作为供试 品溶液；按处方比例称取其它药味及辅料，同法制成阴性对照溶液； 再取丹酚酸B或其镁盐对照品，加醋酸乙酯、甲醇、乙醇等溶剂制成 每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液，采用薄层色谱法(中国药典 附录方法)试验，吸取上述三种溶液各1～30μl，分别点于同一硅 胶GF254薄层板上，以苯或甲苯-三氯甲烷或二氯甲烷-醋酸乙酯-甲醇 -甲酸或乙酸(0.2～6∶0.5～8∶0.5～10∶0.1～3∶0.5～5)为展开 剂，展开，取出，晾干，置紫外灯254nm检视，供试品色谱中，在与 对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性无干扰；

d、丹红注射剂中丹酚酸B或其镁盐的液相色谱鉴别方法：

取各制剂适量，置量瓶中，加水至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过， 取续滤液作为供试品溶液；按处方比例称取其它药味及辅料，同法制 成阴性对照溶液；以丹酚酸B或其镁盐对照品的水溶液为对照，采用 液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶或八烷基硅烷键合硅胶 为填充剂，甲醇或乙腈∶水或0.5％～5％冰醋酸水溶液或0.02％～ 0.5％磷酸水溶液或0.5％～5％甲酸水溶液5％～40％∶2％～10％∶ 93％～50％为流动相，流速为0.5～1.5ml/min，检测检测波长为 220～350nm范围内的一个或几个，柱温20～50℃；供试品色谱中， 应具与对照品色谱有保留时间一致的色谱峰，阴性无干扰；

e、丹红注射剂中丹参素或其钠盐、原儿茶醛薄层色色谱鉴别：

取各制剂适量，置量瓶中，加水至刻度，用稀盐酸调节pH值至2， 用醋酸乙酯萃取，合并醋酸乙酯层，挥干，残渣用甲醇等溶剂溶解， 摇匀，作为供试品溶液；按处方比例称取其它药味及辅料，同法制成 阴性对照溶液；以丹参素纳和原儿茶醛对照品的甲醇溶液作为对照品 溶液，采用薄层色谱法(中国药典附录方法)试验，吸取上述三种溶 液各1～30μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以三氯甲烷-丙酮 -甲酸(1～25∶0.2～5∶0.2～5)为展开剂，展开，取出，晾干，置 紫外灯254nm检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上， 显相同颜色的荧光斑点，阴性无干扰；

f、丹红注射剂中丹参素或其钠盐或原儿茶醛的液相色谱鉴别方 法：

取各制剂适量，置量瓶中，加水至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过， 取续滤液作为供试品溶液；按处方比例称取其它药味及辅料，同法制 成阴性对照溶液；以丹参素或其钠盐、原儿茶醛对照品的水溶液为对 照。采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶或八烷基硅烷 键合硅胶为填充剂，以5％～40％∶95％～60％甲醇或乙腈-水或1％～ 5％冰醋酸溶液或0.02％～0.5％磷酸溶液或1％～5％甲酸溶液为流 动相，流速为0.5～1.5ml/min，检测波长为220～350nm范围内的一 个或几个，柱温在10～50℃范围内；供试品色谱中，应具与对照品 色谱有保留时间一致的色谱峰，阴性无干扰；

g、丹红注射剂中红花的薄层色谱鉴别方法：

取制剂适量，加乙醇或甲醇提取，滤过，滤液作为供试品溶液； 按处方比例称取其它药味及辅料，同法制成阴性对照溶液；另取红花 对照药材，加水超声或回流提取，滤过，滤液浓缩至干，残渣加无水 乙醇使溶解，放置，离心，取上清液，作为对照药材溶液；采用薄层 色谱法(中国药典附录方法)试验，吸取上述三种溶液各1～30μl， 分别点于同一硅胶G薄层板或硅胶H薄层板或含1～10％醋酸钠的硅 胶G薄层板或聚酰胺薄膜上，以氯仿或环己烷-乙醚或乙酸乙酯(1～ 18∶1～8)或苯-乙酸乙酯-甲醇(20～60∶1～5∶2～10)或氯仿- 甲苯-丙酮-甲酸(2～10∶0.5～5∶0.2～3∶0.02～0.5)或乙酸乙酯 -丁酮-甲酸-水(2～10∶1～6∶0.2～5∶0.2～5)或乙酸乙酯-甲酸 或冰醋酸-水或氯仿(1～10∶0.2～3∶0.2～12)或正丁醇或丙酮- 甲醇或冰醋酸-水(2～20∶1～6∶0.5～12)为展开剂，展开，取出， 晾干，置紫外灯365nm或254nm检视或氨气熏蒸或喷以1％～5％三 氯化铁或10％硫酸乙醇或2～20％磷钼酸乙醇，90℃～120℃烘至斑 点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相 同颜色的荧光斑点，阴性无干扰；

h、丹红注射剂中红花明苷A的薄层色谱鉴别方法：

取各制剂适量，加乙醇等溶剂提取，滤过，滤液挥干，残渣加醋 酸乙酯或氯仿、甲醇等溶剂溶解溶解，作为供试品溶液；按处方比例 称取其它药味及辅料，同法制成阴性对照溶液；再取红花明苷A对照 品，加醋酸乙酯、甲醇、乙醇等溶剂制成每1ml含1mg的溶液，作为 对照品溶液，采用薄层色谱法(中国药典附录方法)试验，吸取上述 三种溶液各1～30μl，分别点于同一硅胶G薄层板或硅胶H薄层板 或聚酰胺薄膜上，以醋酸乙酯或氯仿-甲醇-0.1％～7％盐酸(0.2～ 5∶0.2～8∶1～20)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯254nm 检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的 荧光斑点，阴性无干扰；

i、丹红注射剂中红花明苷A的液相色谱鉴别方法：

取各制剂适量，置量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤 过，取续滤液作为供试品溶液；按处方比例称取其它药味及辅料，同 法制成阴性对照溶液；以红花明苷A对照品的水溶液为对照，采用液 相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶或八烷基硅烷键合硅胶或 二烷基硅烷键合硅胶为填充剂，5％～40％∶95％～60％甲醇-乙腈- 水或0.05％～5％冰醋酸水溶液或0.02％～0.5％磷酸水溶液或0.05 ％～5％甲酸水溶液为流动相，流速为0.4～1.5ml/min，检测检测波 长为200～410nm范围内的一个或几个，柱温10～50℃；供试品色谱 中，应具与对照品色谱有保留时间一致的色谱峰，阴性无干扰；

实施例4：鉴别

a、丹红注射剂中丹参的薄层色谱鉴别方法：

取本品适量，加乙醚制成每1ml含0.1g的溶液，振摇，放置1 小时，滤过，滤液挥干，残渣加醋酸乙酯溶解，作为供试品溶液；按 处方比例称取其它药味及辅料，同法制成阴性对照溶液；另取丹参对 照药材，同法制成对照药材溶液；再取丹参酮IIA对照品，加醋酸乙 酯制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液，采用薄层色谱法(中 国药典附录方法)试验，吸取上述四种溶液各5μl，分别点于同一 硅胶G薄层板上，以苯-醋酸乙酯(19∶1)为展开剂，展开，取出， 晾干，供试品色谱中，在与对照药材色谱及对照品色谱相应的位置上， 显相同颜色的斑点，阴性无干扰；

b、丹红注射剂中丹参酮IIA的液相色谱鉴别方法：

取本品适量，加水制成每1ml含0.1g的溶液，摇匀，用微孔滤 膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；按处方比例称取其它药味及辅料， 同法制成阴性对照溶液；精密称取丹参酮IIA对照品适量，加甲醇制 成每1ml各含16μg的溶液，作为对照品溶液，采用液相色谱法，色 谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇-1％冰醋酸水溶液(75∶ 25)为流动相，流速为1.0ml/min，检测检测波长为270nm，柱温为 30℃；供试品色谱中，应具与对照品色谱有保留时间一致的色谱峰， 阴性无干扰；

c、丹红注射剂中丹酚酸B或其镁盐的薄层色谱鉴别方法：

取本品适量，加75％甲醇制成每1ml含0.1g的溶液，摇匀，作 为供试品溶液；按处方比例称取其它药味及辅料，同法制成阴性对照 溶液；再取丹酚酸B或其镁盐对照品，加75％甲醇制成每1ml含2mg 的溶液，作为对照品溶液，采用薄层色谱法(中国药典附录方法)试 验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上， 以甲苯-三氯甲烷-醋酸乙酯-甲醇-甲酸(2∶3∶4∶0.5∶2)为展开 剂，展开，取出，晾干，置紫外灯254nm检视，供试品色谱中，在与 对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性无干扰；

d、丹红注射剂中丹酚酸B或其镁盐的液相色谱鉴别方法：

取本品适量，加水制成每1ml含30mg的溶液，摇匀，用微孔滤 膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；按处方比例称取其它药味及辅料， 同法制成阴性对照溶液；精密称取丹酚酸B或其镁盐对照品适量，加 水制成每1ml含150μg的溶液，作为对照品溶液，采用液相色谱法， 色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇∶5％冰醋酸水溶液 为35∶65为流动相，流速为1.0ml/min，检测检测波长为281nm，柱 温25℃；供试品色谱中，应具与对照品色谱有保留时间一致的色谱 峰，阴性无干扰；

e、丹红注射剂中丹参素或其钠盐、原儿茶醛薄层色谱鉴别：

取本品适量，加水制成每1ml含0.1g的溶液，用稀盐酸调节pH 值至2，用醋酸乙酯萃取4次，合并醋酸乙酯层，挥干，残渣用甲醇 1ml溶解，摇匀，作为供试品溶液；按处方比例称取其它药味及辅料， 同法制成阴性对照溶液；再取丹参素纳和原儿茶醛对照品，加甲醇制 成每1ml含丹参素纳1mg，原儿茶醛1mg的混合溶液，作为对照品溶 液，采用薄层色谱法(中国药典附录方法)试验，吸取上述三种溶液 各5μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以三氯甲烷-丙酮-甲酸 (8∶1∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯254nm检视， 供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑 点，阴性无干扰；

f、丹红注射剂中丹参素或其钠盐、原儿茶醛液相色谱鉴别：

精密称取本品适量，加水制成每1ml含30mg的溶液，摇匀，用 0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液。按处方比例称取 其它药味及辅料，同法制成阴性对照溶液。精密称取丹参素或其钠盐、 原儿茶醛对照品适量，加水分别制成每1ml各含50μg的溶液，作为 对照品溶液，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填 充剂，甲醇-1％冰醋酸水溶液(13∶87)为流动相，流速为1.0ml/min， 检测波长为280nm，柱温30℃；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶 液各10μl，注入液相色谱仪，供试品色谱中，应与对照品色谱有保 留时间一致的色谱峰，阴性无干扰；

g、丹红注射剂中红花薄层色谱鉴别：

取本品适量，加无水乙醇超声处理20分钟，制成每1ml含0.1g 的溶液，滤过，滤液作为供试品溶液。按处方比例称取其它药味及辅 料，同法制成阴性对照溶液。另取红花对照药材1g，加水10ml，超 声处理30分钟，滤过，滤液浓缩至干，残渣加无水乙醇1ml，使溶 解，放置，离心，取上清液，作为对照药材溶液；采用薄层色谱法试验， 吸取上述三种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁 醇-冰醋酸-水(6∶2.4∶5)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外 光灯365nm下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上， 显相同颜色的荧光斑点，阴性无干扰；

h、丹红注射剂中红花明苷A的薄层色谱鉴别方法：

取本品适量，加甲醇制成每1ml含30mg的溶液，摇匀，作为供 试品溶液；按处方比例称取其它药味及辅料，同法制成阴性对照溶液； 再取红花明苷A对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照 品溶液。采用薄层色谱法(中国药典附录方法)试验，吸取上述三种 溶液各10μl，分别点于聚酰胺薄膜上，以醋酸乙酯-甲醇-3.6％盐 酸(1∶3∶6)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯254nm检视， 供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑 点，阴性无干扰。

i、丹红注射剂中红花明苷A的液相色谱鉴别方法：

取本品适量加甲醇制成每1ml含30mg的溶液，摇匀，用微孔滤 膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；按处方比例称取其它药味及辅料， 同法制成阴性对照溶液；精密称取红花明苷A对照品适量，加甲醇制 成每1ml含100μg的溶液，作为对照品溶液，采用液相色谱法，色 谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇∶乙腈-0.7％磷酸水溶 液为26∶2∶72为流动相，流速为0.6ml/min，检测检测波长为403nm， 柱温25℃；供试品色谱中，应具与对照品色谱有保留时间一致的色 谱峰，阴性无干扰；

实施例5：含量测定

a.丹红注射剂中丹参素或其钠盐、原儿茶醛含量测定：

取各制剂适量，置量瓶中，加水至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过， 取续滤液作为供试品溶液；以丹参素或其钠盐、原儿茶醛对照品的水 溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶或八 烷基硅烷键合硅胶为填充剂，5％～40％∶95％～60％甲醇或乙腈- 水或0.5％～5％冰醋酸水溶液或0.02％～0.5％磷酸水溶液或0.5％～ 5％甲酸溶液为流动相，检测检测波长在220～350nm范围内，柱温在 10～50℃范围内；以外标法或标准曲线法进行计算，各制剂以相当于 每日用成品量为单位量，每单位量含丹参素或其钠盐的限度不得少于 10mg，含原儿茶醛的限度不得少于1mg，含丹参素或其钠盐和原儿茶 醛的总和的限度不得少于11mg；

b.丹红注射剂中总黄酮的含量测定：

取各制剂适量，置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，精密 量取1ml，置10ml量瓶中，加50％甲醇或水至5ml，加5％亚硝酸钠 溶液0.3～1ml，摇匀，放置6分钟，加10％硝酸铝溶液0.3～1ml， 摇匀，放置6分钟，加氢氧化钠试液4～10ml，再加50％甲醇或水至 刻度，摇匀，作为供试品溶液；以芦丁作为对照品，同法制得对照品 溶液。以随行溶剂为空白，采用分光光度法，在500±10nm处测定吸 收度，以外标法或标准曲线法进行计算，各制剂以相当于每日用成品 量为单位量，每单位量含总黄酮的限度以芦丁计，不得少于100～ 400mg；

c.丹红注射剂中丹酚酸B或其镁盐含量测定：

取各制剂适量，置量瓶中，加水至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过， 取续滤液作为供试品溶液；以丹酚酸B或其镁盐对照品的水溶液为对 照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶或八烷基硅烷 键合硅胶为填充剂，甲醇或乙腈∶水或0.5％～5％冰醋酸水溶液或 0.02％～0.5％磷酸水溶液或0.5％～5％甲酸溶液5％～40％∶2％～ 10％∶93％～50％为流动相，检测检测波长为220～350nm，柱温20～ 50℃；以外标一点法或标准曲线法进行计算，各制剂以相当于每日用 成品量为单位量，每单位量含丹酚酸B或其镁盐的限度不得少于5mg；

d、丹红注射剂中红花明苷A含量测定：

取各制剂适量，置量瓶中，加水至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过， 取续滤液作为供试品溶液；以红花明苷A对照品的水溶液为对照，采 用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶或八烷基硅烷键合硅 胶或二烷基硅烷键合硅胶为填充剂，5％～40％∶95％～60％甲醇- 乙腈-水或0.05％～5％冰醋酸水溶液或0.02％～0.5％磷酸水溶液为 流动相，检测检测波长为200～410nm，柱温20～50℃；以外标一点 法或标准曲线法进行计算，各制剂以相当于每日用成品量为单位量， 每单位量含红花明苷A的限度不得少于5mg；

实施例6：含量测定

a.丹红注射剂中丹参素或其钠盐、原儿茶醛含量测定：

精密称取本品适量，加水制成每1ml含30mg的溶液，摇匀，用 0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液。精密称取丹参素 或其钠盐、原儿茶醛对照品适量，加水分别制成每1ml各含50μg的 溶液，作为对照品溶液，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键 合硅胶为填充剂，甲醇-1％冰醋酸水溶液(13∶87)为流动相，检测 波长为280nm，柱温30℃；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各 10μl，注入液相色谱仪，以外标一点法或标准曲线法进行计算，各 制剂以相当于每日用成品量为单位量，每单位量含丹参素或其钠盐的 限度不得少于10mg，含原儿茶醛的限度不得少于1mg，含丹参素或其 钠盐和原儿茶醛的总和的限度不得少于11mg；

b.丹红注射剂中总黄酮含量测定：

精密称取本品适量，加水制成每1ml含5mg的溶液，摇匀，精密 量取1ml，置10ml量瓶中，加50％甲醇至5ml，加5％亚硝酸钠溶液 0.3ml，摇匀，放置6分钟，加10％硝酸铝溶液0.3ml，摇匀，放置 6分钟，加氢氧化钠试液4ml，再加50％甲醇至刻度，摇匀，作为供 试品溶液。以芦丁作为对照品，同法制得对照品溶液。以随行溶剂为 空白，照分光光度法，在500nm处测定吸收度，以外标一点法或标准 曲线法进行计算，各制剂以相当于每日用成品量为单位量，每单位量 含总黄酮的限度以芦丁计，不得少于100mg。

c、丹红注射剂中丹酚酸B或其镁盐含量测定：

取各制剂适量，加水制成每1ml含30mg的溶液，摇匀，用微孔 滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；以丹酚酸B或其镁盐对照品的 水溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为 填充剂，甲醇∶5％冰醋酸水溶液为35∶65为流动相，流速为 1.0ml/min，检测检测波长为281nm，柱温25℃；以外标一点法进行 计算，各制剂以相当于每日用成品量为单位量，每单位量含丹酚酸B 或其镁盐的限度不得少于5mg；

d、丹红注射剂中红花明苷A含量测定：

取各制剂适量，加甲醇制成每1ml含30mg的溶液，摇匀，用微 孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；以红花明苷A对照品的水溶 液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充 剂，甲醇∶乙腈-0.7％磷酸水溶液为26∶2∶72为流动相，检测检测 波长为403nm，柱温25℃；以外标一点法进行计算，各制剂以相当于 每日用成品量为单位量，每单位量含红花黄色素的限度不得少于5mg；

含量测定结果，其质量标准中可测成分(丹参素或其钠盐、原儿 茶醛、总黄酮、丹酚酸B或其镁盐、红花明苷A等中的全部或部分 种类)的总量大于其总固体量的25～50％。

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