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生物群系相容性化妆品

阅读:801发布:2021-01-10

专利汇可以提供生物群系相容性化妆品专利检索,专利查询,专利分析的服务。并且本公开的系统和方法特别提供了 化妆品 产品,例如可以被认为是“ 生物 群系友好的”或“生物群系相容的”化妆品成品。公开的系统和方法可以提供可与细菌(如非致病性细菌,如 氨 氧 化细菌)联合使用的化妆品产品(例如,化妆品成品)的应用,所述细菌可以以待应用于受试者的制剂或组合物的形式使用。,下面是生物群系相容性化妆品专利的具体信息内容。

1.化妆品成品,其包含最终使用容器中布置的化妆品产品,如洗发剂,如沐浴露,其中所述化妆品成品具有一个或多个以下特性:
a)所述化妆品产品或所述化妆品成品基本上不含防腐剂,如对羟苯甲酸酯;
b)所述最终使用容器配置为减少逆行流动;
c)所述化妆品产品或所述化妆品成品是经照射的;或
d)所述化妆品产品基本上由(i)或(ii)之一的组合物组成:
(i)、椰油酰胺丙基甜菜、突厥蔷薇花水、癸基葡糖苷、苹果果实提取物、甘油、水解的猴面包树种子蛋白、羟丙基纤维素;
(ii)水、椰油酰胺丙基甜菜碱、突厥蔷薇花水、癸基葡糖苷、苹果果实提取物、甘油、水解的奎奴亚藜、羟丙基纤维素柠檬酸
2.权利要求1的化妆品成品,其具有a、b、c的1、2、3、4或所有特性,并且其中所述化妆品产品包含洗发剂。
3.权利要求1的化妆品成品,其具有a、b、c的1、2、3、4或所有特性,并且其中所述化妆品产品包含清洁剂,如沐浴露。
4.权利要求1-3中任一项的化妆品成品,其具有a的特性。
5.权利要求1-4中任一项的化妆品成品,其具有b的特性。
6.权利要求1-5中任一项的化妆品成品,其具有c的特性。
7.权利要求1-6中任一项的化妆品成品,其具有d(i)的特性。
8.权利要求1-6中任一项的化妆品成品,其具有d(ii)的特性。
9.权利要求1-8中任一项的化妆品成品,其具有a和b的特性。
10.权利要求1-9中任一项的化妆品成品,其具有a和c的特性。
11.权利要求1-10中任一项的化妆品成品,其具有a和d(i)的特性。
12.权利要求1-10中任一项的化妆品成品,其具有a和d(ii)的特性。
13.权利要求1-12中任一项的化妆品成品,其具有b和c的特性。
14.权利要求1-13中任一项的化妆品成品,其具有b和d(i)的特性。
15.权利要求1-13中任一项的化妆品成品,其具有b和d(ii)的特性。
16.权利要求1-13中任一项的化妆品成品,其具有c和d(i)的特性。
17.权利要求1-13中任一项的化妆品成品,其具有c和d(ii)的特性。
18.权利要求1-17中任一项的化妆品成品,其具有a、b和c的特性。
19.权利要求1-18中任一项的化妆品成品,其具有a、b和d(i)的特性。
20.权利要求1-18中任一项的化妆品成品,其具有a、b和d(ii)的特性。
21.权利要求1-20中任一项的化妆品成品,其具有b、c和d(i)的特性。
22.权利要求1-20中任一项的化妆品成品,其具有b、c和d(ii)的特性。
23.权利要求1-22中任一项的化妆品成品,其中所述化妆品产品是经照射的化妆品成品。
24.权利要求1-23中任一项的化妆品成品,其中所述化妆品产品是经gamma照射的化妆品成品。
25.权利要求1-24中任一项的化妆品成品,其中所述化妆品产品或所述化妆品成品基本上不含附录VI中所列的防腐剂,如基本上不含附录VI中所列的至少1,2,5,10,15,20,30,
40,50种或所有的防腐剂。
26.权利要求1-25中任一项的化妆品成品,其中所述化妆品产品或所述化妆品成品具有少于约500ppb的防腐剂,如少于500ppb。
27.权利要求1-26中任一项的化妆品成品,其中所述化妆品产品或所述化妆品成品具有少于约500ppb的附录VI中所列的防腐剂,如少于500ppb的附录VI中所列的防腐剂。
28.权利要求1-26中任一项的化妆品成品,其中所述化妆品产品或所述化妆品成品不含防腐剂。
29.权利要求1-26中任一项的化妆品成品,其中所述化妆品产品或所述化妆品成品不包括附录VI中公开的防腐剂。
30.权利要求1-29中任一项的化妆品成品,其中若暴露于用生物,如细菌或真菌的攻击,则所述化妆品产品或所述化妆品成品将支持所述微生物的生长,例如如通过U.S.P.51,抗微生物有效性测试测定。
31.权利要求1-30中任一项的化妆品成品,其中所述化妆品产品或所述化妆品成品在没有处理,如灭菌处理或添加防腐剂的情况下支持微生物生长,如细菌或真菌生长,例如如通过U.S.P.51,抗微生物有效性测试测量。
32.在最终使用容器中布置的化妆品产品,如洗发剂,如沐浴露,其中化妆品成品包含:
水、椰油酰胺丙基甜菜碱、突厥蔷薇花水、癸基葡糖苷、苹果果实提取物、甘油水解的猴面包树种子蛋白、羟丙基纤维素。
33.在最终使用容器中布置的化妆品产品,如洗发剂,如沐浴露,其中化妆品成品包含:
水、椰油酰胺丙基甜菜碱、突厥蔷薇花水、癸基葡糖苷、苹果果实提取物、甘油、水解的奎奴亚藜、羟丙基纤维素,和柠檬酸。
34.在最终使用容器中布置的化妆品产品,如洗发剂,如沐浴露,其中化妆品成品基本上由以下组成:
水、椰油酰胺丙基甜菜碱、突厥蔷薇花水、癸基葡糖苷、苹果果实提取物、甘油、水解的猴面包树种子蛋白、羟丙基纤维素。
35.在最终使用容器中布置的化妆品,如洗发剂,如沐浴露,其中化妆品成品基本上由以下组成:
水、椰油酰胺丙基甜菜碱、突厥蔷薇花水、癸基葡糖苷、苹果果实提取物、甘油、水解的奎奴亚藜、羟丙基纤维素和柠檬酸。
36.在最终使用容器中布置的化妆品,如洗发剂,如沐浴露,其中化妆品成品由以下组成:
水、椰油酰胺丙基甜菜碱、突厥蔷薇花水、癸基葡糖苷、苹果果实提取物、甘油、水解的猴面包树种子蛋白、羟丙基纤维素。
37.在最终使用容器中布置的化妆品,如洗发剂,如沐浴露,其中化妆品成品由以下组成:
水、椰油酰胺丙基甜菜碱、突厥蔷薇花水、癸基葡糖苷、苹果果实提取物、甘油、水解的奎奴亚藜、羟丙基纤维素和柠檬酸。
38.权利要求1-37中任一项的化妆品成品,其中所述化妆品产品或所述化妆品成品包含为了提供以下一种或多种而添加的成分:香味颜色、粘性、泡沫形成和泡沫稳定性、粘附(adhesion)、保湿(moisture retention)、水(moisture binding)、pH稳定化、清洁(cleansing)、增稠(thickening)、软化(softening)、护理(conditioning),如毛发或皮肤护理、脂质层增强、屏障形成或膜形成。
39.权利要求1-38中任一项的化妆品成品,其中所述化妆品产品或所述化妆品成品包含以下的一种或多种:抗化剂、脂肪物质/油、增稠剂、软化剂、乳化剂、光屏蔽剂(light-screening agent)、泡沫形成和泡沫稳定性、消泡剂、保湿剂(moisturizer)、香味剂、表面活性剂、填料、螯合剂、聚合物酸化剂或碱化剂、染料、着色剂、色素、珠光剂(pearlizer)、遮光剂(opacifier)、有机或无机颗粒、粘性调节剂、清洁剂(cleanser)、粘附剂
(adherent)、锁水剂(moisture binder)、pH稳定剂、护理剂(conditioner)、顺发素(de-tangler)、生物基表面活性剂清洁剂、脂质层增强剂、皮肤护理剂和天然毛发营养物,如植物药(botanicals)、果实提取物、糖衍生物和/或基酸、水解的蛋白质,或维生素。
40.权利要求1-39中任一项的化妆品成品,其中所述化妆品产品或所述化妆品成品是以下的一种:
婴儿用品,例如婴儿洗发剂、婴儿洗剂、婴儿油、婴儿粉、婴儿霜;浴用制剂,例如浴油、浴片、浴盐、泡沫浴、浴用胶囊;眼妆制剂,例如眉笔、眼线膏、眼影、洗眼剂、眼部卸妆液、睫毛膏;香料制剂,例如古龙香水、花露水、香水、香粉(喷粉和滑石粉)、香囊;发用制剂,例如护发剂、发胶、直发膏、烫发剂、漂洗剂、洗发剂、滋补剂、敷料、毛发梳理助剂、卷发液;染发制剂,例如发用染料和颜料、染发剂、染发漂洗剂、染发洗发剂、浅色染发剂、头发漂白剂;化妆制剂,例如粉饼、粉底、腿部和身体涂剂、唇膏、妆前底霜、胭脂、定妆剂;美甲制剂,例如底部涂层和内部涂层、质层软化剂、指甲霜和洗剂、指甲延长物、指甲油和彩釉、指甲油和彩釉清洗剂口腔卫生用品,例如牙粉、漱口水和口气清新剂;浴用肥皂,如泡沫沐浴露和清洗剂、除臭剂、灌洗液、女性卫生除臭剂;剃须用制剂,例如剃须后洗剂、胡须软化剂、滑石粉、剃须前洗剂、剃须膏、剃须皂;护肤制剂,例如清洁剂、脱毛剂、面部及颈部、身体和手、脚部粉剂和喷雾、保湿剂、夜用制剂、膏状面膜、皮肤清新剂;和晒黑制剂,例如防晒凝胶、防晒霜和防晒液及室内晒黑制剂。
41.权利要求1-40中任一项的化妆品成品,其包含洗发剂。
42.权利要求1-41中任一项的化妆品成品,所述洗发剂包含水、椰油酰胺丙基甜菜碱、突厥蔷薇花水、癸基葡糖苷、苹果果实提取物、甘油、水解的猴面包树种子蛋白、羟丙基纤维素。
43.权利要求1-42中任一项的化妆品成品,所述洗发剂基本上由以下组成:水、椰油酰胺丙基甜菜碱、突厥蔷薇花水、癸基葡糖苷、苹果果实提取物、甘油、水解的猴面包树种子蛋白、羟丙基纤维素。
44.权利要求1-43中任一项的化妆品成品,所述洗发剂由以下组成:水、椰油酰胺丙基甜菜碱、突厥蔷薇花水、癸基葡糖苷、苹果果实提取物、甘油、水解的猴面包树种子蛋白、羟丙基纤维素。
45.权利要求1-40中任一项的化妆品成品,其包含泡沫沐浴露。
46.权利要求1-40,45中任一项的化妆品成品,所述泡沫沐浴露包含水、椰油酰胺丙基甜菜碱、突厥蔷薇花水、癸基葡糖苷、苹果果实提取物、甘油、水解的奎奴亚藜、羟丙基纤维素和柠檬酸。
47.权利要求1-40、45、46中任一项的化妆品成品,所述泡沫沐浴露基本上由以下组成:
水、椰油酰胺丙基甜菜碱、突厥蔷薇花水、癸基葡糖苷、苹果果实提取物、甘油、水解的奎奴亚藜、羟丙基纤维素和柠檬酸。
48.权利要求1-40,45-47中任一项的化妆品成品,所述泡沫沐浴露由以下组成:水、椰油酰胺丙基甜菜碱、突厥蔷薇花水、癸基葡糖苷、苹果果实提取物、甘油、水解的奎奴亚藜、羟丙基纤维素和柠檬酸。
49.权利要求1-40中任一项的化妆品成品,其包含护理剂。
50.权利要求1-40,49中任一项的化妆品成品,所述护理剂包含羟丙基纤维素、阳离子瓜尔胶(cationic guar)、椰子油和香味剂。
51.权利要求1-40、49、50中任一项的化妆品成品,所述护理剂基本上由以下组成:羟丙基纤维素、阳离子瓜尔胶、椰子油和香味剂。
52.权利要求1-40,49-51中任一项的化妆品成品,所述护理剂由以下组成:羟丙基纤维素、阳离子瓜尔胶、椰子油和香味剂。
53.权利要求1-52中任一项的化妆品成品,其中通过灭菌处理所述化妆品成品或化妆品产品。
54.权利要求1-53中任一项的化妆品成品,其中灭菌包括照射。
55.权利要求1-54中任一项的化妆品成品,其中灭菌包括加热。
56.权利要求1-55中任一项的化妆品成品,其中所述化妆品成品或化妆品产品是无菌的,例如如通过无菌性保证水平测试确定。
57.权利要求1-56中任一项的化妆品成品,其中至少10,20,30,40,50,60,70,80,90,
95,99或99.9%的细菌是死的或不能进行细胞分裂。
58.权利要求1-57中任一项的化妆品成品,其中至少10,20,30,40,50,60,70,80,90,
95,99或99.9%的细菌具有辐射诱导的足以抑制细胞分裂的DNA损伤。
59.权利要求1-58中任一项的化妆品成品,其中所述最终使用容器是未打开的,例如尚未破坏工厂密封。
60.权利要求1-59中任一项的化妆品成品,其中所述化妆品产品或所述化妆品成品是经照射的,如用电离辐射,如用gamma射线,例如用x射线,例如来自同位素,如钴60,或用紫外线,如紫外线C(UVC)。
61.权利要求1-60中任一项的化妆品成品,其中所述辐射足以提供无菌产品。
62.权利要求1-61中任一项的化妆品成品,其中所述无菌产品的特征在于其基本上不含能够生长的微生物,例如细菌,例如真菌,如孢子,例如与U.S.P.第1211章一致,如由U.S.P.71无菌性测试方法和标准所确定。
63.权利要求1-62中任一项的化妆品成品,其中当针对能够生长的微生物攻击时,所述化妆品产品显示无生长,例如当通过U.S.P.71无菌性测试方法和标准测量所述微生物时。
64.权利要求1-63中任一项的化妆品成品,其中所述化妆品产品或所述化妆品成品包含选自氧化剂例如天然存在的氧化剂、自由基清除剂或自由基猝灭剂的外源添加的添加剂。
65.权利要求1-64中任一项的化妆品成品,其中所述化妆品产品或所述化妆品成品含有多种组分,并且在混合所述多种组分后照射。
66.权利要求1-65中任一项的化妆品成品,其中在将所述化妆品产品布置在所述最终使用容器中后照射所述化妆品成品。
67.权利要求1-66中任一项的化妆品成品,其中在闭合所述最终使用容器后照射所述化妆品成品。
68.权利要求1-67中任一项的化妆品成品,其中在封闭所述最终使用容器后照射所述化妆品成品。
69.权利要求1-68中任一项的化妆品成品,其中在闭合所述最终使用容器前照射所述化妆品成品。
70.权利要求1-69中任一项的化妆品成品,其包含指示所述化妆品产品或所述化妆品成品是否已经经照射的指示剂。
71.权利要求1-70中任一项的化妆品成品,其中所述化妆品产品或化妆品成品是经加热的,如通过微波炉或高压灭菌器。
72.权利要求1-71中任一项的化妆品成品,其中所述加热足以提供无菌产品。
73.权利要求1-72中任一项的化妆品成品,其中所述无菌产品的特征在于其基本上不含能够生长的微生物,例如细菌,例如真菌,例如由U.S.P.71无菌性测试方法和标准所确定。
74.权利要求1-73中任一项的化妆品成品,其中当针对能够生长的微生物攻击时,所述化妆品显示无生长,例如当通过U.S.P.71无菌性测试方法和标准测量所述微生物时。
75.权利要求1-74中任一项的化妆品成品,其中所述化妆品产品或所述化妆品成品含有多种组分,并且在混合所述多种组分后加热。
76.权利要求1-75中任一项的化妆品成品,其中在将所述化妆品产品布置在所述最终使用容器中后加热所述化妆品成品。
77.权利要求1-76中任一项的化妆品成品,其中在闭合所述最终使用容器后加热所述化妆品成品。
78.权利要求1-77中任一项的化妆品成品,其中在封闭所述最终使用容器后加热所述化妆品成品。
79.权利要求1-78中任一项的化妆品成品,其中在闭合所述最终使用容器前加热所述化妆品。
80.权利要求1-79中任一项的化妆品成品,其包含指示所述化妆品产品或所述化妆品成品是否已经经加热的指示剂。
81.权利要求1-80中任一项的化妆品成品,其中在配制期间或之后,如混合后,或填充后,如布置后,将所述化妆品产品或所述成品在处于或高于121摄氏度加热至少15分钟。
82.权利要求1-81中任一项的化妆品成品,其中所述最终使用容器配置为抑制材料逆行流动,例如回流,例如反向流动,例如向后移动入所述最终使用容器中。
83.权利要求1-82中任一项的化妆品成品,其中所述最终使用容器配置为抑制材料,如所述化妆品产品逆行流动,例如回流,例如反向流动,例如向后移动入所述最终使用容器中。
84.权利要求1-83中任一项的化妆品成品,其中所述最终使用容器配置为抑制材料,如污染物逆行流动,例如回流,例如反向流动,例如向后移动入所述最终使用容器中。
85.权利要求1-84中任一项的化妆品成品,其中所述污染物是大气的,如气溶胶,或液体,如水,或固体或气体。
86.权利要求1-85中任一项的化妆品成品,其中所述最终使用容器包含其中布置有所述化妆品产品的储器,和可以分配来自所述储器的所述化妆品产品的分配器,其中所述分配器抑制材料逆行流动入所述储器中。
87.权利要求1-86中任一项的化妆品成品,其中所述最终使用容器包含布置有所述化妆品产品的储器,和可以分配来自所述储器的所述化妆品产品的分配器,其中所述分配器抑制分配的化妆品或大气气溶胶逆行流动入所述储器中。
88.权利要求1-87中任一项的化妆品成品,其中所述最终使用容器是抗逆行流动分配器,其包含布置在所述分配器中并且在所述储器近端的第一压力启动,和布置在所述分配器中并且在所述储器远端的第二压力启动阀,其中所述第一阀的启动压力高于所述第二阀的启动压力。
89.权利要求1-88中任一项的化妆品成品,其中所述最终使用容器包含抗逆行机构
(anti-retrograde mechanism),其配置为阻止所述化妆品产品以与分配所述化妆品成品相关的操作方向相反的方向运动。
90.权利要求1-89中任一项的化妆品成品,其中所述最终使用容器中化妆品产品的量对于不超过X次应用是足够的,其中X在约1和约180之间。
91.权利要求1-90中任一项的化妆品成品,其中选择所述化妆品成品中化妆品产品的量,使得所述化妆品成品对于不超过X次应用是足够的,其中X在约1和约180之间。
92.权利要求1-91中任一项的化妆品成品,其中选择所述化妆品成品中化妆品产品的量,使得所述化妆品成品对于不超过28天使用是足够的。
93.权利要求1-92中任一项的化妆品成品,其中选择所述化妆品成品中化妆品产品的量,使得所述化妆品成品对于不超过Y次/天使用的X天是足够的,其中X是约2周至约6周,并且Y是约0次每天使用至约6次每天使用。
94.权利要求1-93中任一项的化妆品成品,其具有基于变质的失效期。
95.权利要求1-94中任一项的化妆品成品,其具有基于变质的失效期的指示。
96.权利要求1-95中任一项的化妆品成品,其具有基于生物群系相容的失效期。
97.权利要求1-96中任一项的化妆品成品,其具有基于生物群系相容的失效期的指示。
98.权利要求1-97中任一项的化妆品成品,其中所述成品包含期满,或寿命,如推荐的寿命的指示。
99.权利要求1-98中任一项的化妆品成品,其中所述成品包含在预先选择的时间段后的期满,或寿命,如推荐的寿命的指示,如以天数或周数表示。
100.权利要求1-99中任一项的化妆品成品,其中所述成品包含在预先选择的时间段后的期满,或寿命,如推荐的寿命的指示,如以天数表示,所述指示是从制造、填充、封装、运输、释放到商业、或销售之一的日期起小于X天,其中X是约5-7天、约5-10天、约7-14天、约
14-21天、约21-28天、约28-35天、约35-42天、约42-49天、约49-56天、约56-63天、约63-70天、约70-77天、约75-100天、约100-150天、约150-200天、约200-300天、约300-400天、约
400-750天。
101.权利要求1-100中任一项的化妆品成品,其中所述成品包含在预先选择的时间段后期满,或寿命,如推荐的寿命的指示,如以天数表示,所述指示是从制造、填充、封装、运输、释放到商业、或销售之一的日期起小于X天,其中X是约28天,例如28天。
102.权利要求1-101中任一项的化妆品成品,其中所述成品包含以预先选择的时间段,例如从所述化妆品成品打开或开封起的天数表示的期满,或寿命,如推荐的寿命的指示。
103.权利要求1-102中任一项的化妆品成品,其中所述成品包含以预先选择的时间段,例如从所述化妆品成品打开或开封起的天数表示的期满,或寿命,如推荐的寿命的指示预先选择,其是从打开或开封日期起小于X天,其中X是约5-7天、约5-10天、约7-14天、约14-21天、约21-28天、约28-35天、约35-42天、约42-49天、约49-56天、约56-63天、约63-70天、约
70-77天、约75-100天、约100-150天、约150-200天、约200-300天、约300-400天。
104.权利要求1-103中任一项的化妆品成品,其中所述成品包含以预先选择的时间段,例如从所述化妆品成品打开或开封起的天数表示的期满,或寿命,如推荐的寿命的指示,其是从打开或开封日期起小于X天,其中X是约28天,例如28天。
105.权利要求1-104中任一项的化妆品成品,其中期满,或寿命,如推荐的寿命的指示以预先选择的使用或应用次数表示。
106.权利要求1-105中任一项的化妆品成品,其中期满,或寿命,如推荐的寿命的指示以预先选择的使用或应用次数表示,其中所述预先选择的次数是约5-7次、约5-10次、约7-
14次、约14-21次、约21-28次、约28-35次、约35-42次、约42-49次、约49-56次、约56-63次、约
63-70次、约70-77次、约75-100次、约100-150次、约150-200次、约200-300次,约300-400次。
107.权利要求1-106中任一项的化妆品成品,其具有失效期或寿命,如推荐的寿命。
108.权利要求1-107中任一项的化妆品成品,其中所述失效期或寿命,如推荐的寿命如下表示:
a)以自预先选择的事件,如所述化妆品成品的开封或所述化妆品成品的首次使用起的时间单位,如天数计;或者
b)以使用或应用的次数表示。
109.权利要求108的化妆品成品,其中所述失效期或寿命,如推荐的寿命表示为a。
110.权利要求108的化妆品成品,其中所述失效期或寿命,如推荐的寿命表示为b。
111.权利要求108的化妆品成品,其中所述失效期或寿命,如推荐的寿命表示为a和b。
112.权利要求108的化妆品成品,其中所述失效期或寿命,如推荐的寿命表示为a或b。
113.权利要求1-112中任一项的化妆品成品,其中所述最终使用容器包含聚合物,如聚对苯二甲酸乙酯(PET)、高密度聚乙烯(HDPE)、聚丙烯、聚酸酯、聚四氟乙烯
聚偏二氟乙烯(polyviylidene fluoride,PVDF)、或纤维素。
114.权利要求1-112中任一项的化妆品成品,其中所述最终使用容器包含玻璃。
115.权利要求1-114中任一项的化妆品成品,其包含指示存在活细菌的传感器,例如氧传感器。
116.权利要求1-115中任一项的化妆品成品,其中所述最终使用容器允许通过至少约
5,10,20,30,40,50,60,70,80,90,95,99或100%的电离辐射传输通过所述最终使用容器,所述电离辐射例如用gamma射线,如用x-射线,如来自同位素,如钴60,或用紫外线,例如紫外线C(UVC)。
117.分配化妆品成品的方法,其包括:
a)向最终用户供应(或使指定者供应)化妆品成品的第一单位;
b)向所述最终用户,或向由所述最终用户指定的实体,如第二最终用户提供(或使指定者提供):
i)所述化妆品成品的后续单位,或第二化妆品成品的单位;或者
ii)所述第一单位已经达到其推荐的寿命末期的通知;
c)任选地,向所述最终用户或向由所述最终用户指定的实体,如第二最终用户提供(或使指定者提供)关于处置,如再循环,所述化妆品成品的第一单位的信息,所述化妆品成品的第一单位例如为已过推荐的寿命的化妆品成品,
从而分配化妆品成品。
118.权利要求117的方法,其包括:
a)向最终用户供应化妆品成品的第一单位;
b)向所述最终用户提供:
i)所述化妆品成品的后续单位;或
ii)所述第一单位已经达到其推荐的寿命末期的通知;和
c)向所述最终用户提供关于处置,如再循环,所述化妆品成品的第一单位的信息,所述化妆品成品的第一单位例如为已过推荐的寿命的化妆品成品,
从而分配化妆品成品。
119.权利要求117-118中任一项的方法,其中所述化妆品成品包含权利要求1-116中任一项的化妆品成品。
120.权利要求117-119中任一项的方法,其中所述化妆品成品的第一单位包含本文描述的化妆品产品。
121.权利要求117-120中任一项的方法,其中所述化妆品成品的第一单位包含化妆品产品,其不含或基本不含细菌或真菌。
122.权利要求117-121中任一项的方法,其中所述化妆品成品的第一单位包含化妆品,其不含或基本不含防腐剂。
123.权利要求117-122中任一项的方法,其中所述化妆品成品的第一单位包含选自以下的化妆品产品:
婴儿用品,例如婴儿洗发剂、婴儿洗剂、婴儿油、婴儿粉、婴儿霜;浴用制剂,例如浴油、浴片、浴盐、泡沫浴、浴用胶囊;眼妆制剂,例如眉笔、眼线膏、眼影、洗眼剂、眼部卸妆液、睫毛膏;香料制剂,例如古龙香水、花露水、香水、香粉(喷粉和滑石粉)、香囊;发用制剂,例如护发剂、发胶、直发膏、烫发剂、漂洗剂、洗发剂、滋补剂、敷料、毛发梳理助剂、卷发液;染发制剂,例如发用染料和颜料、染发剂、染发漂洗剂、染发洗发剂、浅色染发剂、头发漂白剂;化妆制剂,例如粉饼、粉底、腿部和身体涂剂、唇膏、妆前底霜、胭脂、定妆剂;美甲制剂,例如底部涂层和内部涂层、角质层软化剂、指甲霜和洗剂、指甲延长物、指甲油和彩釉、指甲油和彩釉清洗剂;口腔卫生用品,例如牙粉、漱口水和口气清新剂;浴用肥皂,如泡沫沐浴露和清洗剂、除臭剂、灌洗液、女性卫生除臭剂;剃须用制剂,例如剃须后洗剂、胡须软化剂、滑石粉、剃须前洗剂、剃须膏、剃须皂;护肤制剂,例如清洁剂、脱毛剂、面部及颈部、身体和手、脚部粉剂和喷雾、保湿剂、夜用制剂、膏状面膜、皮肤清新剂;和晒黑制剂,例如防晒凝胶、防晒霜和防晒液及室内晒黑制剂。
124.权利要求123的方法,其中所述化妆品成品的第一单位包含洗发剂。
125.权利要求123的方法,其中所述化妆品成品的第一单位包含泡沫沐浴露。
126.权利要求123的方法,其中所述化妆品成品的第一单位包含护理剂。
127.权利要求117-126中任一项的方法,其中向所述最终用户供应来自基于因特网的销路(internet-based outlet)的所述化妆品成品的第一单位,例如通过出售或赠送来进行。
128.权利要求117-127中任一项的方法,其中向所述最终用户供应来自非基于因特网的销路(non-internet-based outlet)如商店的所述化妆品成品的第一单位,例如通过出售或赠送来进行。
129.权利要求117-128中任一项的方法,其中向所述最终用户提供包括向所述最终用户提供i。
130.权利要求117-129中任一项的方法,其中向所述最终用户提供包括向所述最终用户提供ii。
131.权利要求117-130中任一项的方法,其中向所述最终用户提供包括向所述最终用户提供i和ii。
132.权利要求117-131中任一项的方法,其中在所述化妆品成品的第一单位的推荐的寿命结束之前,在预先选择的天数如1-28天,如3-7天内进行所述提供。
133.权利要求117-132中任一项的方法,其中在供应所述化妆品成品的第一单位之后,在预先选择的天数如1天至约28天,如21-25天内进行所述提供。
134.权利要求117-133中任一项的方法,其中在所述化妆品成品的第一次预期使用之前或之后,在预先选择的天数如1天至约28天内进行所述提供。
135.权利要求117-134中任一项的方法,其中所述化妆品成品的后续单位包含本文描述的化妆品产品。
136.权利要求117-135中任一项的方法,其中所述化妆品成品的后续单位包含化妆品产品,其不含或基本不含细菌或真菌。
137.权利要求117-136中任一项的方法,其中所述化妆品成品的后续单位包含化妆品,其不含或基本不含防腐剂。
138.权利要求117-137中任一项的方法,其中所述化妆品成品的后续单位包含选自以下的化妆品产品:
婴儿用品,例如婴儿洗发剂、婴儿洗剂、婴儿油、婴儿粉、婴儿霜;浴用制剂,例如浴油、浴片、浴盐、泡沫浴、浴用胶囊;眼妆制剂,例如眉笔、眼线膏、眼影、洗眼剂、眼部卸妆液、睫毛膏;香料制剂,例如古龙香水、花露水、香水、香粉(喷粉和滑石粉)、香囊;发用制剂,例如护发剂、发胶、直发膏、烫发剂、漂洗剂、洗发剂、滋补剂、敷料、毛发梳理助剂、卷发液;染发制剂,例如发用染料和颜料、染发剂、染发漂洗剂、染发洗发剂、浅色染发剂、头发漂白剂;化妆制剂,例如粉饼、粉底、腿部和身体涂剂、唇膏、妆前底霜、胭脂、定妆剂;美甲制剂,例如底部涂层和内部涂层、角质层软化剂、指甲霜和洗剂、指甲延长物、指甲油和彩釉、指甲油和彩釉清洗剂;口腔卫生用品,例如牙粉、漱口水和口气清新剂;浴用肥皂,如泡沫沐浴露和清洗剂、除臭剂、灌洗液、女性卫生除臭剂;剃须用制剂,例如剃须后洗剂、胡须软化剂、滑石粉、剃须前洗剂、剃须膏、剃须皂;护肤制剂,例如清洁剂、脱毛剂、面部及颈部、身体和手、脚部粉剂和喷雾、保湿剂、夜用制剂、膏状面膜、皮肤清新剂;和晒黑制剂,例如防晒凝胶、防晒霜和防晒液及室内晒黑制剂。
139.权利要求138的方法,其中所述化妆品成品的后续单位包含洗发剂。
140.权利要求138的方法,其中所述化妆品成品的后续单位包含泡沫沐浴露。
141.权利要求138的方法,其中所述化妆品成品的后续单位包含护理剂。
142.权利要求117-141中任一项的方法,其中将所述化妆品成品的后续单位,或第二化妆品成品的单位递送至所述最终用户,例如通过邮寄或商业递送实体。
143.权利要求117-142中任一项的方法,其中将所述化妆品成品的后续单位,或第二化妆品成品的单位递送至由所述最终用户指定的实体,例如第二最终给用户,例如通过邮寄或商业递送实体。
144.权利要求117-143中任一项的方法,其中将所述化妆品成品的所述后续单位,或第二化妆品成品的单位递送至由所述最终用户指定的位置,例如通过邮寄或商业递送实体。
145.权利要求117-144中任一项的方法,其中将所述通知递送至所述最终用户,例如通过邮寄或商业递送实体,或电子递送,例如通过因特网或电话,如通过电话呼叫,如通过录制的信息,或文字信息。
146.权利要求117-145中任一项的方法,其中将所述通知递送至实体,如由所述最终用户指定的第二最终用户,例如通过邮寄或商业递送实体,或电子递送,例如通过因特网或电话,如通过电话呼叫,如通过录制的信息,或文字信息。
147.权利要求117-146中任一项的方法,其中将所述通知递送至由所述最终用户指定的位置,例如通过邮寄或商业递送实体,或电子递送,例如通过因特网或电话。
148.权利要求117-147中任一项的方法,其包括:
c)向(或使指定者向)所述最终用户或由所述最终用户指定的实体,如第二最终用户,提供关于处置如再循环所述化妆品成品的第一单位的信息,所述化妆品成品的第一单位为例如已过推荐的寿命的化妆品成品。
149.权利要求117-148中任一项的方法,其中所述信息包含实体(收集实体)的名称或位置,如地址,所述实体将接受所述化妆品成品的第一单位,例如在其推荐的寿命之后接受。
150.权利要求117-149中任一项的方法,其包括向所述最终用户或指定者提供配置为接收所述化妆品成品的第一单位的容器,例如在其推荐的寿命之后接受。
151.权利要求150的方法,其中所述容器提供有所述化妆品成品的第一单位。
152.权利要求150-151中任一项的方法,其中所述容器提供有所述通知。
153.权利要求150-152中任一项的方法,其中所述容器包含地址为所述收集实体的邮寄标签。
154.权利要求153中任一项的方法,其中所述收集实体是再循环站。
155.权利要求117-154中任一项的方法,其包括:
d)向(或使指定者向)所述最终用户或由所述最终用户指定的实体,如第二最终用户,提供关于处置如再循环所述化妆品成品的后续单位的信息,所述化妆品成品的后续单位为例如已过推荐的寿命的化妆品成品或化妆品产品。
156.权利要求155的方法,其中所述信息包含实体(收集实体)的名称或位置,如地址,所述实体将接受所述化妆品成品的后续单位,例如在其推荐的寿命之后接受。
157.权利要求155-156中任一项的方法,其包括向所述最终用户或指定者提供配置为接收所述化妆品成品的后续单位的容器,例如在其推荐的寿命之后接受。
158.权利要求157的方法,其中所述容器提供有所述化妆品成品的后续单位。
159.权利要求157-158中任一项的方法,其中所述容器提供有所述通知。
160.权利要求157-159中任一项的方法,其中所述容器包含地址为所述收集实体的邮寄标签。
161.权利要求160的方法,其中所述收集实体是再循环站。
162.获得化妆品成品的方法,其包括:
a)接收化妆品成品的第一单位;
b)接收:
i)所述化妆品成品的后续单位,或第二化妆品成品的单位;或者
ii)所述第一单位已经达到其推荐的寿命的末期的通知;
c)任选地,接受有关处置如再循环所述化妆品成品的第一单位的信息,所述化妆品成品的第一单位例如为已过推荐的寿命的化妆品成品,
从而获得化妆品成品。
163.分配化妆品成品的方法,其包括:
获得如制造上述权利要求中任一项的化妆品成品,所述化妆品成品包含布置在最终使用容器中的化妆品产品,如洗发剂,如沐浴露;
给所述成品的最终用户传达一种或多种以下信息:
所述化妆品成品或化妆品产品是生物群系友好的,如生物群系相容的;
所述化妆品成品或化妆品产品不应在指示的失效期或寿命,如推荐的寿命之后使用,所述指示的失效期或寿命基于例如变质,例如生物群系相容性,
其中所述指示的失效期或寿命,例如推荐的寿命如下表示:
a)以自预先选择的事件,如所述化妆品成品的开封或所述化妆品成品的首次使用起的时间单位,如天数计;或者
b)以使用或应用的次数表示预先选择;
所述化妆品成品或化妆品产品不应在X次应用之后使用,例如其中X是约1次和约180次之间;和
所述化妆品成品或化妆品产品不应在X天使用,例如Y/天使用的X天之后使用,其中X是约(7天)一周和约42天(6周)之间,并且Y是约0次每天和约10次使用每天之间,例如,X天可以是约7-10,10-13,14-17,18-21,22-25,26-29,30-33,34-37,38-42天;并且Y可以是约0-
1,2-4,5-7,8-10次使用每天。
164.权利要求163的方法,其还包括运输所述化妆品成品。
165.制备化妆品成品的方法,其包括:
将化妆品产品布置在最终使用容器中以形成填充的最终使用容器;和
处理所述填充的最终使用容器以杀死或灭活细菌,
从而提供化妆品成品。
166.制备生物群系友好的化妆品产品的方法,其包括:
从一批生物群系友好的成分中选择第一组分,如表面活性剂;
从一批生物群系友好的成分中选择第二组分,如保湿剂;
提供所述第一和第二组分的混合物,从而制备生物群系友好的化妆品产品。
167.权利要求166的方法,其中所述第一、第二或第一和第二组分选自表3。
168.权利要求166-167中任一项的方法,其还包括确定所述化妆品成品的生物群系友好性失效期或推荐的寿命。
169.权利要求168的方法,其中所述确定包括评估AOB的存活力或AOB在与所述第一和第二组分的混合物接触后产生亚硝酸盐的能力。
170.制备化妆品成品的方法,其包括:
提供第一和第二组分,其中每种已经显示为生物群系友好的;
组合所述第一和第二组分以形成混合物;
确定所述混合物是否是生物群系友好的,从而制备化妆品成品。
171.权利要求170的方法,其中确定包括评估AOB的存活力或AOB在与所述第一和第二组分的混合物接触后产生亚硝酸盐的能力。
172.制造(评估)化妆品产品或化妆品成品的方法,其包括:
提供具有至少2种选自表3的组分的产品;
获得所述化妆品产品对于所述用户的皮肤上的细菌,例如有益细菌,如ABO是否安全的评估,
从而制造所述化妆品产品或化妆品成品。
173.权利要求172的方法,其中评估包括评估AOB的存活力或AOB在与所述产品接触后产生亚硝酸盐的能力。
174.评估化妆品产品或化妆品成品的方法,其包括:
将化妆品产品的等分试样与测试生物体接触,所述测试生物体是例如氨氧化细菌;和评估所述化妆品产品对所述测试生物体的影响,
其中评估包括评估所述化妆品产品对所述测试生物体,如氨氧化细菌产生亚硝酸盐的能力的影响。
175.权利要求174的方法,其中评估包括确定所述氨氧化细菌产生亚硝酸盐的能力是否满足预先选择的标准,例如至少具有恢复为在给定的时间段内产生亚硝酸盐的能力,如本文公开的实施例附图所示。
176.权利要求174-175中任一项的方法,其中评估所述化妆品产品对所述测试生物体的能力的影响规定所述化妆品成品鉴定为“测试并确认为具有活的测试生物体”。
177.权利要求174-176中任一项的方法,其中评估所述化妆品产品对氨氧化细菌产生亚硝酸盐的能力的影响规定所述化妆品成品鉴定为“测试并确认为具有活的氨氧化细菌”。
178.选择氨氧化细菌友好的赋形剂的方法,其包括:
获得氨氧化细菌(AOB)细胞悬浮液,例如从连续培养系统;
从所述细胞悬浮液收获AOB细胞;
在储备溶液中洗涤AOB细胞,例如包含50mM Na2HPO4-2mM MgCl2,pH 7.6的储备溶液;
以5.0的最终光密度(OD600)(约1010个细胞/ml)在所述储备溶液中悬浮所述AOB细胞;
在约4℃贮存所述AOB细胞;
在10ml补充有铵(NH4+),如50mM铵且含有预定终浓度的赋形剂的AOB培养基中将所述AOB细胞稀释至0.5的最终光密度(OD600)(约109个细胞/ml);
在30℃温育第一预定的时间段以提供温育的培养物;
收集所述温育的培养物的等分试样;和
在所述温育的培养物的上清液中测量亚硝酸盐的浓度。
179.权利要求178的方法,其中通过离心所述温育的培养物的等分试样以提供所述上清液和细菌团粒来提供所述上清液。
180.权利要求178-179中任一项的方法,其还包括基于所述温育的培养物的所述上清液中的亚硝酸盐浓度来将所述赋形剂鉴定为氨氧化细菌友好的组分。
181.权利要求178-180中任一项的方法,其还包括:
在所述AOB培养基中洗涤所述细菌团粒;
+
在补充有NH4的AOB培养基中悬浮所述细菌团粒;
在补充有NH4+的AOB培养基中温育所述细菌团粒;
在第二预定的时间段回收AOB细胞以提供回收的AOB细胞样品;和
测量回收的AOB细胞样品的OD600值和亚硝酸盐积累中的至少一个。
182.权利要求178-181中任一项的方法,其还包括基于所述回收的AOB细胞样品中OD600值和亚硝酸盐积累中的至少一个来将所述赋形剂鉴定为氨氧化细菌友好的组分。
183.权利要求178-182中任一项的方法,其中从所述细胞悬浮液收获AOB细胞包括离心所述细胞悬浮液。
184.权利要求178-183中任一项的方法,其中赋形剂的预定的最终浓度为约0%和约
100%之间。
185.权利要求178-184中任一项的方法,其中所述第一预定的时间段为以下的至少一种:约1分钟、约10分钟、约60分钟、约2小时、约4小时、约6小时、约12小时,和约24小时。
186.权利要求178-185中任一项的方法,其中所述第二预定的时间段为以下的至少一种:约1分钟、约10分钟、约60分钟、约2小时、约4小时、约6小时、约12小时、约24小时、约36小时、约48小时、约72小时、约96小时。
187.选择氨氧化细菌友好的赋形剂的方法,其包括:
获得氨氧化细菌(AOB)的样品;
将所述AOB与赋形剂接触第一预定的时间段以提供温育的培养物;
收集所述温育的培养物的等分试样;
在所述温育的培养物的上清液中测量亚硝酸盐的浓度。
188.权利要求187的方法,其还包括基于在所述温育的培养物的所述上清液中的所述亚硝酸盐的浓度来将所述赋形剂鉴定为氨氧化细菌友好的赋形剂。
189.权利要求188的方法,其中所述温育的培养物的所述上清液中的所述亚硝酸盐的浓度至少如本文公开的实施例的附图中显示而鉴定为氨氧化细菌友好的赋形剂。
190.权利要求187-189中任一项的方法,其还包括:
+
将来自所述温育的培养物的AOB与NH4接触;和
在第二预定的时间段之后,测量回收的AOB细胞样品的OD600值和亚硝酸盐积累中的至少一个。
191.权利要求190的方法,其还包括基于所述回收的AOB细胞样品中OD600值和亚硝酸盐积累中的至少一个来将所述赋形剂鉴定为氨氧化细菌友好组分。
192.权利要求191的方法,其中所述回收的AOB细胞样品中的OD600值大于约0.01,鉴定为氨氧化细菌友好的赋形剂。
193.权利要求191的方法,其中所述回收的AOB细胞样品中的亚硝酸盐浓度至少如实施例的附图中所示并且如本文所公开,鉴定为氨氧化细菌友好的赋形剂。
194.生产生物群系友好的组合物的方法,其包括:
获得化合物对氨氧化细菌友好的知识;和
将所述化合物与氨氧化细菌接触以提供化妆品产品。
195.在受试者上维持氨氧化细菌(AOB)的方法,其包括:
应用权利要求1至116中任一项的化妆品产品或化妆品成品。
196.权利要求195的方法,其还包括在应用所述化妆品产品或所述化妆品成品之前,将包含AOB的制剂应用至所述受试者。
197.权利要求195-196中任一项的方法,其还包括在应用所述化妆品产品或所述化妆品成品之后,将包含AOB的制剂应用至所述受试者。
198.权利要求195-197中任一项的方法,其还包括在应用所述化妆品产品或所述化妆品成品之前,将包含AOB的制剂应用至所述受试者,其中在约以下范围的一个之间应用所述包含AOB的制剂:在应用所述化妆品产品或所述化妆品成品之前约1-5、5-10、10-20、20-30、
30-40、40-50、50-60分钟,2-5、5-10、10-15、15-20、20-25小时;2-5、5-10、10-15天,3-4、5-
10周。
199.权利要求195-198中任一项的方法,其还包括在应用所述化妆品产品或所述化妆品成品之后,将包含AOB的制剂应用至所述受试者,其中在约以下范围的一个之间应用所述包含AOB的制剂:在应用所述化妆品产品或所述化妆品成品之后约1-5、5-10、10-20、20-30、
30-40、40-50、50-60分钟,2-5、5-10、10-15、15-20、20-25小时;2-5、5-10、10-15天,3-4、5-
10周。
200.权利要求195-199中任一项的方法,其还包括之前或之后不应用非生物群系友好的化妆品产品或化妆品成品。
201.权利要求195-200中任一项的方法,其中将所述AOB的制剂和所述化妆品产品,如化妆品成品中的至少一个应用至所述受试者的预定的区域。
202.权利要求201的方法,其中所述受试者的所述预定的区域是以下至少一个:头部的部分,如脸、脸颊、颏、眼睑、嘴唇、鼻,毛发、前额;颈;腋下;臂;手;腿;足;胸部;腹部区域;臀部;生殖器区域;和背部。
203.权利要求195-202中任一项的方法,其中所述AOB是真养亚硝化单胞菌
(N.eutropha)D23。
204.权利要求1的化妆品成品,其具有a、b、c和d(i)的1、2、3、4个或所有特性。
205.权利要求1的化妆品成品,其具有a、b、c和d(ii)的1、2、3、4个或所有特性。
206.权利要求1-30中任一项的化妆品成品,其中所述化妆品产品或所述化妆品成品不含防腐剂。
207.权利要求1-56中任一项的化妆品成品,其中所有细菌、孢子、霉菌和真菌种类是死的或不能进行细胞分裂。
208.权利要求1-57中任一项的化妆品成品,其中所有细菌、孢子、霉菌和真菌种类具有足以抑制细胞分裂的辐射诱导的DNA损伤。
209.权利要求1-61中任一项的化妆品成品,其中所述无菌产品的特征在于其基本上不含能够生长的微生物,如细菌,如真菌,如孢子,例如如通过USP 71中描述的标准培养物方法测定。
210.权利要求1-62中任一项的化妆品成品,其中当针对能够生长的微生物攻击时,所述化妆品没有显示生长,如当通过如USP 71中描述的标准培养物方法测量所述微生物时。
211.权利要求1-72中任一项的化妆品成品,其中所述无菌产品的特征在于其基本上不含能够生长的微生物,如细菌,如真菌,例如如通过如USP71.74A.中描述的标准培养物方法测定。权利要求1-73中任一项的化妆品成品,其中当针对能够生长的微生物攻击时,所述化妆品没有显示生长,如当通过如USP 71中描述的标准培养物方法测量所述微生物时。
212.权利要求1-80中任一项的化妆品成品,其中在配制期间或之后,例如在混合或填充后,例如在分配后或密封所述最终使用容器后,没有将所述化妆品产品或化妆品成品加热得高于140华氏度。
213.权利要求1-91中任一项的化妆品成品,其中所述化妆品成品中化妆品产品的量等于或少于对于10,20,30,40或50次使用或应用足够的量。
214.权利要求1-100中任一项的化妆品成品,其中所述成品包含在预先选择的时间段之后期满或寿命如推荐的寿命的指示,例如以天数表示,所述指示是从制造、填充、密封、运输、释放到商业或销售之一的日期起的小于X天,其中X为约180天,例如180天。
215.权利要求117-133中任一项的方法,其中所述提供在失效期的预先选择的天数,例如1-28天,例如3-7天内进行。
216.权利要求174的方法,其中评估包括确定所述氨氧化细菌产生亚硝酸盐的能力是否满足预先选择的标准,如48小时温育后至少100微摩尔,或在100-1000微摩尔的范围内。
217.权利要求174的方法,其中评估包括确定所述氨氧化细菌产生亚硝酸盐的能力是否满足预先选择的标准,如48小时温育后至少1000微摩尔亚硝酸盐。
218.权利要求188的方法,其中温育后48小时测量的所述温育的培养物的上清液中亚硝酸盐的浓度为约100和1000微摩尔之间,鉴定为氨氧化细菌友好的赋形剂。
219.权利要求188的方法,其中温育后48小时测量的所述温育的培养物的上清液中亚硝酸盐的浓度为大于1000微摩尔,鉴定为氨氧化细菌友好的赋形剂。

说明书全文

生物群系相容性化妆品

[0001] 对相关申请的交叉引用
[0002] 本申请要求2015年7月2日提交的美国临时专利申请序列号62/188,343,和2015年7月6日提交的美国临时专利申请序列号62/189,105的优先权的权益,这些申请各自的全部公开出于所有目的通过引用并入本文。
[0003] 发明背景
[0004] 可以使用有益细菌(如非致病细菌)来抑制致病性细菌的生长。细菌和其它微生物在环境中无处不在,并且天然存在于受试者中,例如和和动物受试者。细菌是所有生物体的环境的正常部分。在肠道内,这些细菌在正常条件下是不会致病的,并且实际上通过使正常的肠内容物较不适于致病生物体的存活来促进健康。由多种途径实现疾病预防:消耗营养物,留给病原体较少的营养物;产生不适于病原体存活的条件,如pH和;产生对病原体有毒性的化合物;病原体被这些微生物作为食物消耗掉;给病原体留有更小的物理空间;以及占据特异性结合位点,给病原体留下更少的可用结合位点。期望细菌的存在被视为可有效预防疾病状况。
[0005] 本领域需要提供在受试者身上或受试者中维持或持续至少一定程度的有益细菌的产品,例如化妆品产品。这是可以完成的,使得有益细菌可以调节或抑制非自养细菌(例如致病细菌)的生长,和/或在受试者身上维持合适的微生物群系,从而受益于非致病细菌可以提供的健康改善。
[0006] 发明概述
[0007] 本公开特别提供了化妆品成品(finished cosmetic product)。所述化妆品成品可以包含最终使用容器中布置的化妆品产品(cosmetic product),如洗发剂(shampoo),如沐浴露(body cleanser),其中所述化妆品成品具有一个或多个以下特性:
[0008] a)所述化妆品产品或所述化妆品成品基本上不含防腐剂,如对羟苯甲酸酯;
[0009] b)所述最终使用容器配置为减少逆行流动;
[0010] c)所述化妆品产品或所述化妆品成品是经照射的;或
[0011] d)所述化妆品产品基本上由(i)或(ii)之一的组合物组成:
[0012] (i)、椰油酰胺丙基甜菜(cocamidopropyl betaine)、突厥蔷薇花水(rosa damascena flower water)、癸基葡糖苷(decyl glucoside)、苹果(pyrus malus,apple)果实提取物、甘油、水解的猴面包树(adansonia digitata,baobab)种子蛋白、羟丙基纤维素;
[0013] (ii)水、椰油酰胺丙基甜菜碱、突厥蔷薇花水、癸基葡糖苷、苹果果实提取物、甘油、水解的奎奴亚藜(quinoa)、羟丙基纤维素柠檬酸
[0014] 在一些实施方案中,化妆品成品可以具有a、b、c的1、2、3、4或所有特性,并且其中所述化妆品产品包含洗发剂。所述化妆品成品可以具有a、b、c和d(i)的1、2、3、4或所有特性。化妆品成品可以具有a、b、c的1、2、3、4或所有特性,并且其中所述化妆品产品包含清洁剂,如沐浴露。所述化妆品成品可以具有a、b、c和d(ii)的1、2、3、4或所有特性。
[0015] 在实施方案中,化妆品成品可以具有a的特性。化妆品成品可以具有b的特性。化妆品成品可以具有c的特性。化妆品成品可以具有d(i)的特性。化妆品成品可以具有d(ii)的特性。
[0016] 在实施方案中,化妆品成品可以具有a和b的特性。化妆品成品可以具有a和c的特性。化妆品成品可以具有a和d(i)的特性。化妆品成品可以具有a和d(ii)的特性。化妆品成品可以具有b和c的特性。化妆品成品可以具有b和d(i)的特性。化妆品成品可以具有b和d(ii)的特性。化妆品成品可以具有c和d(i)的特性。化妆品成品可以具有c和d(ii)的特性。
[0017] 在实施方案中,化妆品成品可以具有a,b和c的特性。化妆品成品可以具有a,b和d(i)的特性。化妆品成品可以具有a,b和d(ii)的特性。化妆品成品可以具有b,c和d(i)的特性。化妆品成品可以具有b,c和d(ii)的特性。
[0018] 在实施方案中,化妆品产品或化妆品成品是经照射的化妆品成品。所述化妆品产品或化妆品成品可以是经gamma照射的化妆品成品。
[0019] 在实施方案中,化妆品成品或化妆品产品可以基本上不含附件VI中所列的防腐剂,如基本上不含附录VI中所列的至少1,2,5,10,15,20,30,40,50种或所有的防腐剂。化妆品成品或化妆品产品可以具有少于约500ppb的防腐剂,如少于500ppb。化妆品产品或化妆品产品可以具有少于约500ppb的附录VI中所列的防腐剂,如少于500ppb的附录VI中所列的防腐剂。化妆品成品或化妆品产品可以不含防腐剂。化妆品产品或所述化妆品成品可以不含附录VI中公开的防腐剂。
[0020] 在实施方案中,若暴露于用微生物,如细菌或真菌的攻击,则化妆品产品或化妆品成品将支持所述微生物的生长,例如如通过U.S.P.51,抗微生物有效性测试测定。化妆品产品或化妆品成品在没有处理,如灭菌处理或添加防腐剂的情况下支持微生物生长,如细菌或真菌生长,例如如通过U.S.P.51,抗微生物有效性测试测量。化妆品产品或所述化妆品成品可以不含防腐剂,如无防腐剂。
[0021] 本公开特别提供了在最终使用容器中布置的化妆品,如洗发剂,如沐浴露,其中化妆品成品包含:水、椰油酰胺丙基甜菜碱、突厥蔷薇花水、癸基葡糖苷、苹果果实提取物、甘油、水解的猴面包树种子蛋白、羟丙基纤维素。
[0022] 本公开特别提供了在最终使用容器中布置的化妆品,如洗发剂,如沐浴露,其中化妆品成品包含:水、椰油酰胺丙基甜菜碱、突厥蔷薇花水、癸基葡糖苷、苹果果实提取物、甘油、水解的奎奴亚藜、羟丙基纤维素,和柠檬酸。
[0023] 本公开特别提供了在最终使用容器中布置的化妆品,如洗发剂,如沐浴露,其中化妆品成品基本上由以下组成:水、椰油酰胺丙基甜菜碱、突厥蔷薇花水、癸基葡糖苷、苹果果实提取物、甘油、水解的猴面包树种子蛋白、羟丙基纤维素。
[0024] 本公开特别提供了在最终使用容器中布置的化妆品,如洗发剂,如沐浴露,其中化妆品成品基本上由以下组成:水、椰油酰胺丙基甜菜碱、突厥蔷薇花水、癸基葡糖苷、苹果果实提取物、甘油、水解的奎奴亚藜、羟丙基纤维素和柠檬酸。
[0025] 本公开特别提供了在最终使用容器中布置的化妆品,如洗发剂,如沐浴露,其中化妆品成品由以下组成:水、椰油酰胺丙基甜菜碱、突厥蔷薇花水、癸基葡糖苷、苹果果实提取物、甘油、水解的猴面包树种子蛋白、羟丙基纤维素。
[0026] 本公开特别提供了在最终使用容器中布置的化妆品,如洗发剂,如沐浴露,其中化妆品成品由以下组成:水、椰油酰胺丙基甜菜碱、突厥蔷薇花水、癸基葡糖苷、苹果果实提取物、甘油、水解的奎奴亚藜、羟丙基纤维素和柠檬酸。
[0027] 在实施方案中,化妆品产品或所述化妆品成品包含为了提供以下一种或多种而添加的成分:香味颜色、粘性、泡沫形成和泡沫稳定性、粘附力(adhesion)、保湿(moisture retention)、水(moisture binding)、pH稳定化、清洁(cleansing)、增稠(thickening)、软化(softening)、护理(conditioning),如毛发和皮肤护理、脂质层增强、屏障形成或膜形成。
[0028] 在实施方案中,化妆品产品或所述化妆品成品包含以下的一种或多种:抗氧化剂、脂肪物质/油、增稠剂、软化剂、乳化剂、光屏蔽剂(light-screening agent)、泡沫形成和泡沫稳定性、消泡剂、保湿剂(moisturizer)、香味剂、表面活性剂、填料、螯合剂、聚合物酸化剂或碱化剂、染料、着色剂、色素、珠光剂(pearlizer)、遮光剂(opacifier)、有机或无机颗粒、粘性调节剂、清洁剂(cleanser)、粘附剂(adherent)、锁水剂(moisture binder)、pH稳定剂、护理剂(conditioner)、顺发素(de-tangler)、生物基表面活性剂清洁剂、脂质层增强剂、皮肤护理剂和天然毛发营养物,如植物药(botanicals)、果实提取物、糖衍生物和/或基酸、水解的蛋白质,或维生素。
[0029] 在实施方案中,化妆品产品或所述化妆品成品是以下的一种:
[0030] 婴儿用品,例如婴儿洗发剂、婴儿洗剂、婴儿油、婴儿粉、婴儿霜;浴用制剂,例如浴油、浴片(a tablet)、浴盐(a salt)、泡沫浴(bubble bath)、浴用胶囊;眼妆制剂,例如眉笔(eyebrow pencil)、眼线膏(eyeliner)、眼影(eye shadow)、洗眼剂、眼部卸妆液(eye makeup remover)、睫毛膏(mascara);香料制剂,例如古龙香水(colognes)、花露水、香水、香粉(powder)(喷粉(dusting)和滑石粉(talcum))、香囊(sachet);发用制剂,例如护发剂(hair conditioner)、发胶(hair spray)、直发膏(hair straightener)、烫发剂(permanent wave)、漂洗剂(rinses)、洗发剂、滋补剂(tonics)、敷料、毛发梳理助剂(hair grooming aids)、卷发液(wave set);染发制剂(hair coloring preparation),例如发用染料和颜料(hair dyes and color)、染发剂(hair tints)、染发漂洗剂(coloring hair rinses)、染发洗发剂(coloring hair shampoos)、浅色染发剂(hair lighteners with color)、头发漂白剂(hair bleach);化妆制剂,例如粉饼(face powders)、粉底
(foundations)、腿部和身体涂剂(leg and body paints)、唇膏(lipstick)、妆前底霜(makeup base)、胭脂(rouges)、定妆剂(makeup fixatives);美甲制剂,例如底部涂层(basecoats)和内部涂层(undercoats)、质层软化剂(cuticle softeners)、指甲霜(nail creams)和洗剂、指甲延长物(nail extenders)、指甲油和彩釉(nail polish and 
enamel)、指甲油和彩釉清洗(remover);口腔卫生用品,例如牙粉、漱口水和口气清新剂;浴用肥皂,如泡沫沐浴露和清洗剂、除臭剂、灌洗液(douches)、女性卫生除臭剂;剃须用制剂,例如剃须后洗剂、胡须软化剂、滑石粉、剃须前洗剂、剃须膏、剃须皂;护肤制剂,例如清洁剂、脱毛剂、面部及颈部、身体和手、脚部粉剂和喷雾、保湿剂、夜用制剂、膏状面膜(paste masks)、皮肤清新剂(skin fresheners);和晒黑制剂(suntan preparations),例如防晒凝胶、防晒霜和防晒液及室内晒黑制剂。
[0031] 在实施方案中,化妆品成品是洗发剂。所述洗发剂可以包含水、椰油酰胺丙基甜菜碱、突厥蔷薇花水、癸基葡糖苷、苹果果实提取物、甘油、水解的猴面包树种子蛋白、羟丙基纤维素。所述洗发剂可以基本上由以下组成:水、椰油酰胺丙基甜菜碱、突厥蔷薇花水、癸基葡糖苷、苹果果实提取物、甘油、水解的猴面包树种子蛋白、羟丙基纤维素。所述洗发剂可以由以下组成:水、椰油酰胺丙基甜菜碱、突厥蔷薇花水、癸基葡糖苷、苹果果实提取物、甘油、水解的猴面包树种子蛋白、羟丙基纤维素。
[0032] 在实施方案中,化妆品成品是泡沫沐浴露。所述泡沫沐浴露可以包含水、椰油酰胺丙基甜菜碱、突厥蔷薇花水、癸基葡糖苷、苹果果实提取物、甘油、水解的奎奴亚藜、羟丙基纤维素和柠檬酸。所述泡沫沐浴露可以基本上由以下组成:水、椰油酰胺丙基甜菜碱、突厥蔷薇花水、癸基葡糖苷、苹果果实提取物、甘油、水解的奎奴亚藜、羟丙基纤维素和柠檬酸。所述泡沫沐浴露可以由以下组成:水、椰油酰胺丙基甜菜碱、突厥蔷薇花水、癸基葡糖苷、苹果果实提取物、甘油、水解的奎奴亚藜、羟丙基纤维素和柠檬酸。
[0033] 在实施方案中,化妆品成品可以是护理剂。所述护理剂可以包含羟丙基纤维素、阳离子瓜尔胶(cationic guar)、椰子油和香味剂。所述护理剂可以基本上由以下组成:羟丙基纤维素、阳离子瓜尔胶、椰子油和香味剂。所述护理剂可以由以下组成:羟丙基纤维素、阳离子瓜尔胶(cationic guar)、椰子油和香味剂。
[0034] 在实施方案中,可以通过灭菌处理所述化妆品成品或化妆品产品。所述灭菌可以包括照射。所述灭菌可以包括加热。所述化妆品成品或化妆品产品可以是无菌的,例如如通过无菌性保证水平测试确定。所述化妆品成品或化妆品产品可以具有至少10,20,30,40,50,60,70,80,90,95,99或99.9%的死的或不能进行细胞分裂的细菌。可以提供具有死的或不能细胞分裂的所有细菌、孢子、霉菌和真菌种类的化妆品成品。
[0035] 化妆品成品或化妆品产品可以具有至少10,20,30,40,50,60,70,80,90,95,99或99.9%的细菌,所述细菌具有辐射诱导的足以抑制细胞分裂的DNA损伤。可以提供化妆品成品,其具有的所有细菌、孢子、霉菌和真菌种类具有足以抑制细胞分裂的辐射诱导的DNA损伤。
[0036] 在实施方案中,最终使用容器是未打开的,例如尚未破坏工厂密封。
[0037] 在实施方案中,化妆品产品或所述化妆品成品是经照射的,如用电离辐射,如用gamma射线,例如用x射线,例如来自同位素,如钴60,或用紫外线,如紫外线C(UVC)。所述辐射可以足以提供无菌产品。所述无菌产品的特征可以在于其基本上不含能够生长的微生物,例如细菌,例如真菌,例如与U.S.P.第1211章一致,如由U.S.P.71无菌性测试方法和标准所确定。
[0038] 可以提供化妆品成品,其中无菌产品的特征在于其基本上不含能够生长的微生物,例如细菌,例如真菌,如由U.S.P.71中描述的标准培养方法所确定。
[0039] 当针对能够生长的微生物攻击时,所述化妆品产品或化妆品成品显示无生长,例如当通过U.S.P.71无菌性测试方法和标准测量所述微生物时。
[0040] 当针对能够生长的微生物攻击时,所述化妆品产品显示无生长,例如当通过U.S.P.71中描述的标准培养方法测量所述微生物时。
[0041] 在实施方案中,化妆品产品或所述化妆品成品包含选自氧化剂例如天然存在的氧化剂、自由基清除剂或自由基猝灭剂的外源添加的添加剂。化妆品产品或所述化妆品成品含有多种组分,并且在混合所述多种组分后照射。可以在将所述化妆品产品布置在所述最终使用容器中后照射所述化妆品成品。可以在闭合所述最终使用容器后照射所述化妆品成品。可以在封闭所述最终使用容器后照射所述化妆品成品。可以在闭合所述最终使用容器前照射所述化妆品成品。
[0042] 在实施方案中,化妆品成品或化妆品产品可以包含指示所述化妆品产品或所述化妆品成品是否已经经照射的指示剂。
[0043] 在实施方案中,所述化妆品产品或化妆品成品是经加热的,如通过微波炉或高压灭菌器。所述加热可以足以提供无菌产品。所述无菌产品的特征可以在于其基本上不含能够生长的微生物,例如细菌,例如真菌,例如由U.S.P.71无菌性测试方法和标准所确定。
[0044] 可以提供化妆品成品,其中所述无菌产品的特征在于其基本上不含能够生长的微生物,例如细菌,例如真菌,例如通过U.S.P.71中描述的标准培养方法所确定。
[0045] 当针对能够生长的微生物攻击化妆品成品或化妆品产品时,所述化妆品显示无生长,例如当通过在通过U.S.P.71无菌性测试方法和标准测量所述微生物时测量所述微生物时。
[0046] 当针对能够生长的微生物攻击化妆品成品时,所述化妆品显示无生长,例如当通过如U.S.P.71中描述的标准培养方法测量所述微生物时。
[0047] 在实施方案中,化妆品产品或所述化妆品成品含有多种组分,并且在混合所述多种组分后加热。可以在将所述化妆品产品布置在所述最终使用容器中后加热所述化妆品成品或化妆品产品。可以在闭合所述最终使用容器后加热所述化妆品成品或化妆品产品。在封闭所述最终使用容器后可以加热所述化妆品成品或化妆品产品。在关闭所述最终使用容器前可以加热所述化妆品成品或化妆品产品。化妆品成品或化妆品产品可以包含指示所述化妆品产品或所述化妆品成品是否已经经加热的指示剂。在配制期间或之后,如混合后,或填充后,如布置后,可以将所述化妆品产品或所述化妆品成品在121摄氏度以上加热至少15分钟。
[0048] 在配制期间或之后,如混合后,或填充后,如布置后,可以不高于140华氏度(degrees F)加热化妆品产品或化妆品成品。
[0049] 在实施方案中,最终使用容器配置为抑制材料逆行流动,例如回流,例如反向流动,例如向后移动入所述最终使用容器中。最终使用容器可以配置为抑制材料(如所述化妆品产品)逆行流动,例如回流,例如反向流动,例如向后移动入所述最终使用容器中。最终使用容器可以配置为抑制材料(如污染物)逆行流动,例如回流,例如反向流动,例如向后移动入所述最终使用容器中。污染物可以是大气的,如气溶胶,或液体,如水,或固体或气体。最终使用容器可以包含其中布置有所述化妆品产品的储器,和可以分配来自所述储器的所述化妆品产品的分配器,其中所述分配器抑制材料逆行流动入所述储器中。最终使用容器可以包含其中布置有所述化妆品产品的储器,和可以分配来自所述储器的所述化妆品产品的分配器,其中所述分配器抑制分配的化妆品产品或大气气溶胶逆行流动入所述储器中。最终使用容器可以包含抗逆行流动分配器,其包含布置在所述分配器中并且在所述储器近端的第一压力启动(pressure activated valve),和布置在所述分配器中并且在所述储器远端的第二压力启动阀,其中所述第一阀的启动压力高于所述第二阀的启动压力。最终使用容器可以包含抗逆行机构(anti-retrograde mechanism),其配置为阻止所述化妆品产品以与分配所述化妆品成品相关的操作方向相反的方向运动。
[0050] 在实施方案中,所述最终使用容器中化妆品产品的量对于不超过X次应用可以是足够的,其中X在约1和约180之间。可以选择所述化妆品成品中化妆品产品的量,使得所述化妆品成品对于不超过X次应用是足够的,其中X在约1和约180之间。可以选择所述化妆品成品中化妆品产品的量,使得所述化妆品成品对于不超过28天使用是足够的。所述化妆品成品在化妆品产品的量可以等于或小于足以使用或应用10,20,30,40或50次的量。可以选择所述化妆品成品中化妆品产品的量,使得所述化妆品成品对于不超过Y次/天使用的X天是足够的,其中X是约2周至约6周,并且Y是约0次每天使用至约6次每天使用。
[0051] 在实施方案中,化妆品成品可以具有基于变质的失效期(expiration date)。化妆品成品可以具有基于变质的失效期的指示。化妆品成品可以具有基于生物群系相容(biome-compatible-based)的失效期。化妆品成品可以具有基于生物群系相容的失效期的指示。化妆品成品可以包含期满(expiration),或寿命,如推荐的寿命的指示。成品可以包含在预先选择的时间段后的期满,或寿命,如推荐的寿命的指示,如以天数或周数表示。化妆品成品可以包含在预先选择的时间段后的期满,或寿命,如推荐的寿命的指示,如以天数表示,所述指示是从制造、填充、封装、运输、释放到商业、或销售之一的日期起小于X天,其中X是约5-7天、约5-10天、约7-14天、约14-21天、约21-28天、约28-35天、约35-42天、约42-
49天、约49-56天、约56-63天、约63-70天、约70-77天、约75-100天、约100-150天、约150-200天、约200-300天、约300-400天、约400-750天。化妆品成品可以包含在预先选择的时间段后期满,或寿命,如推荐的寿命的指示,如以天数表示,所述指示是从制造、填充、封装、运输、释放到商业、或销售之一的日期起小于X天,其中X是约28天,例如28天,或例如约180天,例如180天。化妆品成品可以包含以预先选择的时间段,例如从所述化妆品成品打开或开封起的天数表示的期满,或寿命,如推荐的寿命的指示。化妆品成品可以包含以预先选择的时间段,例如从所述化妆品成品打开或开封起的天数表示的期满,或寿命,如推荐的寿命的指示预先选择,其是从打开或开封日期起小于X天,其中X是约5-7天、约5-10天、约7-14天、约14-
21天、约21-28天、约28-35天、约35-42天、约42-49天、约49-56天、约56-63天、约63-70天、约
70-77天、约75-100天、约100-150天、约150-200天、约200-300天、约300-400天、约400-750天。化妆品成品可以包含以预先选择的时间段,例如从所述化妆品成品打开或开封起的天数表示的期满,或寿命,如推荐的寿命的指示,其是从打开或开封日期起小于X天,预先选择其中X是约28天,例如28天。期满,或寿命,如推荐的寿命的指示可以以预先选择的使用或应用次数表示。期满,或寿命,如推荐的寿命的指示可以以预先选择的使用或应用次数表示,其中所述预先选择的数目是约5-7天、约5-10天、约7-14天、约14-21天、约21-28天、约28-35天、约35-42天、约42-49天、约49-56天、约56-63天、约63-70天、约70-77天、约75-100天、约
100-150天、约150-200天、约200-300天,约300-400天,约400-750天。
[0052] 在实施方案中,化妆品成品可以具有失效期或寿命,如推荐的寿命。所述失效期或寿命,如推荐的寿命可以如下表示:
[0053] a)以自预先选择的事件,如所述化妆品成品的开封或所述化妆品成品的首次使用起的时间单位,如天数计;或者
[0054] b)以使用或应用的次数表示。
[0055] 化妆品成品可以具有失效期或寿命,如推荐的寿命,其表示为a。化妆品成品可以具有失效期或寿命,如推荐的寿命,其表示为b。化妆品成品可以具有失效期或寿命,如推荐的寿命,其表示为a和b。化妆品成品可以具有失效期或寿命,如推荐的寿命,其表示为a或b。
[0056] 在实施方案中,最终使用容器可以包含聚合物,如聚对苯二甲酸乙酯(PET)、高密度聚乙烯(HDPE)、聚丙烯、聚酸酯、聚四氟乙烯 聚偏二氟乙烯(polyviylidene fluoride,PVDF)、或纤维素。最终使用容器可以包含玻璃。化妆品成品可以包含指示存在活细菌的传感器,例如氧传感器。最终使用容器可以允许通过至少约5,10,
20,30,40,50,60,70,80,90,95,99或100%的电离辐射传输通过所述最终使用容器,所述电离辐射例如用gamma射线,如用x-射线,如来自同位素,如钴60,或用紫外线,例如紫外线C(UVC)。
[0057] 本公开特别提供了分配化妆品成品的方法,其包括:
[0058] a)向最终用户供应(或使指定者供应)化妆品成品的第一单位;
[0059] b)向所述最终用户,或向由所述最终用户指定的实体,如第二最终用户提供(或使指定者提供):
[0060] i)所述化妆品成品的后续单位,或第二化妆品成品的单位;或者
[0061] ii)所述第一单位已经达到其推荐的寿命末期的通知;
[0062] c)任选地,向所述最终用户或向由所述最终用户指定的实体,如第二最终用户提供(或使指定者提供)关于处置,如再循环(recycling),所述化妆品成品的第一单位的信息,所述化妆品成品的第一单位例如为已过推荐的寿命的化妆品成品,
[0063] 从而分配化妆品成品。
[0064] 在实施方案中,所述方法可以包括:
[0065] a)向最终用户供应化妆品成品的第一单位;
[0066] b)向所述最终用户提供:
[0067] i)所述化妆品成品的后续单位;或
[0068] ii)所述第一单位已经达到其推荐的寿命末期的通知;和
[0069] c)向所述最终用户提供关于处置,如再循环,所述化妆品成品的第一单位的信息,所述化妆品成品的第一单位例如为已过推荐的寿命的化妆品成品,
[0070] 从而分配化妆品成品。
[0071] 在实施方案中,所述方法可以包括化妆品成品,该化妆品成品包含本公开全文所公开的化妆品成品。化妆品成品的第一单位可以包含本文描述的化妆品产品。所述化妆品成品的第一单位包含化妆品产品,其不含或基本不含细菌或真菌。所述化妆品成品的第一单位包含化妆品,其不含或基本不含防腐剂。
[0072] 在实施方案中,所述化妆品成品的第一单位包含选自以下的化妆品产品:
[0073] 婴儿用品,例如婴儿洗发剂、婴儿洗剂、婴儿油、婴儿粉、婴儿霜;浴用制剂,例如浴油、浴片、浴盐、泡沫浴、浴用胶囊;眼妆制剂,例如眉笔、眼线膏、眼影、洗眼剂、眼部卸妆液、睫毛膏;香料制剂,例如古龙香水、花露水、香水、香粉(喷粉和滑石粉)、香囊;发用制剂,例如护发剂、发胶、直发膏、烫发剂、漂洗剂、洗发剂、滋补剂、敷料、毛发梳理助剂、卷发液;染发制剂,例如发用染料和颜料、染发剂、染发漂洗剂、染发洗发剂、浅色染发剂、头发漂白剂;化妆制剂,例如粉饼、粉底、腿部和身体涂剂、唇膏、妆前底霜、胭脂、定妆剂;美甲制剂,例如底部涂层和内部涂层、角质层软化剂、指甲霜和洗剂、指甲延长物、指甲油和彩釉、指甲油和彩釉清洗剂;口腔卫生用品,例如牙粉、漱口水和口气清新剂;浴用肥皂,如泡沫沐浴露和清洗剂、除臭剂、灌洗液、女性卫生除臭剂;剃须用制剂,例如剃须后洗剂、胡须软化剂、滑石粉、剃须前洗剂、剃须膏、剃须皂;护肤制剂,例如清洁剂、脱毛剂、面部及颈部、身体和手、脚部粉剂和喷雾、保湿剂、夜用制剂、膏状面膜、皮肤清新剂;和晒黑制剂,例如防晒凝胶、防晒霜和防晒液及室内晒黑制剂。
[0074] 在实施方案中,所述化妆品成品的第一单位包含洗发剂。
[0075] 在实施方案中,所述化妆品成品的第一单位包含泡沫沐浴露。
[0076] 在实施方案中,所述化妆品成品的第一单位包含护理剂。
[0077] 在实施方案中,所述方法可以包括其中向所述最终用户供应来自基于因特网的销路(internet-based outlet)的所述化妆品成品的第一单位,例如通过出售或赠送来进行。可以向所述最终用户供应来自非基于因特网的销路(non-internet-based outlet)如商店的所述化妆品成品的第一单位,例如通过出售或赠送来进行。向所述最终用户提供可以包括向所述最终用户提供i。向所述最终用户提供可以包括向所述最终用户提供ii。向所述最终用户提供可以包括向所述最终用户提供i和ii。在所述化妆品成品的第一单位的推荐的寿命结束之前,可以在预先选择的天数如1-28天,如3-7天内进行所述提供。在供应所述化妆品成品的第一单位之后,可以在预先选择的天数如1天至约28天,如21-25天内进行所述提供。在所述化妆品成品的第一次预期使用之前或之后,可以在预先选择的天数如1天至约
28天内进行所述提供。可以在失效期的预先选择的天数,例如1-28天,例如3-7天内进行所述提供。
[0078] 在实施方案中,化妆品成品的后续单位可以包含本文描述的化妆品产品。所述化妆品成品的后续单位可以包含化妆品产品,其不含或基本不含细菌或真菌。所述化妆品成品的后续单位可以包含化妆品,其不含或基本不含防腐剂。
[0079] 在实施方案中,所述化妆品成品的后续单位包含选自以下之一的化妆品产品:
[0080] 婴儿用品,例如婴儿洗发剂、婴儿洗剂、婴儿油、婴儿粉、婴儿霜;浴用制剂,例如浴油、浴片、浴盐、泡沫浴、浴用胶囊;眼妆制剂,例如眉笔、眼线膏、眼影、洗眼剂、眼部卸妆液、睫毛膏;香料制剂,例如古龙香水、花露水、香水、香粉(喷粉和滑石粉)、香囊;发用制剂,例如护发剂、发胶、直发膏、烫发剂、漂洗剂、洗发剂、滋补剂、敷料、毛发梳理助剂、卷发液;染发制剂,例如发用染料和颜料、染发剂、染发漂洗剂、染发洗发剂、浅色染发剂、头发漂白剂;化妆制剂,例如粉饼、粉底、腿部和身体涂剂、唇膏、妆前底霜、胭脂、定妆剂;美甲制剂,例如底部涂层和内部涂层、角质层软化剂、指甲霜和洗剂、指甲延长物、指甲油和彩釉、指甲油和彩釉清洗剂;口腔卫生用品,例如牙粉、漱口水和口气清新剂;浴用肥皂,如泡沫沐浴露和清洗剂、除臭剂、灌洗液、女性卫生除臭剂;剃须用制剂,例如剃须后洗剂、胡须软化剂、滑石粉、剃须前洗剂、剃须膏、剃须皂;护肤制剂,例如清洁剂、脱毛剂、面部及颈部、身体和手、脚部粉剂和喷雾、保湿剂、夜用制剂、膏状面膜、皮肤清新剂;和晒黑制剂,例如防晒凝胶、防晒霜和防晒液及室内晒黑制剂。
[0081] 在实施方案中所述化妆品成品的后续单位可以包含洗发剂。
[0082] 在实施方案中所述化妆品成品的后续单位可以包含沐浴露。
[0083] 在实施方案中所述化妆品成品的后续单位可以包含护理剂。
[0084] 在实施方案中,可以将所述化妆品成品的后续单位,或第二化妆品成品的单位递送至所述最终用户,例如通过邮寄或商业递送实体。可以将所述化妆品成品的后续单位,或第二化妆品成品的单位递送至由所述最终用户指定的实体,例如第二最终给用户,例如通过邮寄或商业递送实体。可以将所述化妆品成品的所述后续单位,或第二化妆品成品的单位递送至由所述最终用户指定的位置,例如通过邮寄或商业递送实体。可以将所述通知递送至所述最终用户,例如通过邮寄或商业递送实体,或电子递送,例如通过因特网或电话,如通过电话呼叫,如通过录制的信息,或文字信息。可以将所述通知递送至实体,如由所述最终用户指定的第二最终用户,例如通过邮寄或商业递送实体,或电子递送,例如通过因特网或电话,如通过电话呼叫,如通过录制的信息,或文字信息。可以将所述通知递送至由所述最终用户指定的位置,例如通过邮寄或商业递送实体,或电子递送,例如通过因特网或电话。
[0085] 在实施方案中,所述方法可以包括c)向(或使指定者向)所述最终用户或由所述最终用户指定的实体,如第二最终用户,提供关于处置如再循环所述化妆品成品的第一单位的信息,所述化妆品成品的第一单位为例如已过推荐的寿命的化妆品成品。所述信息包含实体(收集实体)的名称或位置,如地址,所述实体将接受所述化妆品成品的第一单位,例如在其推荐的寿命之后接受。所述方法可以包括向所述最终用户或指定者提供配置为接收所述化妆品成品的第一单位的容器,例如在其推荐的寿命之后接受。所述容器可以提供有所述化妆品成品的第一单位。所述容器可以提供有所述通知。所述容器可以包含地址为所述收集实体的邮寄标签。所述收集实体可以是再循环站(recycler)。
[0086] 在实施方案中,所述方法可以包括d)向(或使指定者向)所述最终用户或由所述最终用户指定的实体,如第二最终用户,提供关于处置如再循环所述化妆品成品的后续单位的信息,所述化妆品成品的后续单位为例如已过推荐的寿命的化妆品成品或化妆品产品。所述信息可以包含实体(收集实体)的名称或位置,如地址,所述实体将接受所述化妆品成品的后续单位,例如在其推荐的寿命之后接受。所述方法可以包括向所述最终用户或指定者提供配置为接收所述化妆品成品的后续单位的容器,例如在其推荐的寿命之后接受。所述容器可以提供有所述化妆品成品的后续单位。所述容器可以提供有所述通知。所述容器可以包含地址为所述收集实体的邮寄标签。所述收集实体可以是再循环站。
[0087] 本公开特别提供获得化妆品成品的方法,其包括:
[0088] a)接收化妆品成品的第一单位;
[0089] b)接收:
[0090] i)所述化妆品成品的后续单位,或第二化妆品成品的单位;或者
[0091] ii)所述第一单位已经达到其推荐的寿命的末期的通知;
[0092] c)任选地,接受有关处置如再循环所述化妆品成品的第一单位的信息,所述化妆品成品的第一单位例如为已过推荐的寿命的化妆品成品,
[0093] 从而获得化妆品成品。
[0094] 在实施方案中,所述方法可以包括
[0095] 获得,例如制造以上要求中任一项的化妆品成品,所述化妆品成品包含最终使用容器中布置的化妆品产品,如洗发剂,如沐浴露;
[0096] 给所述成品的最终用户传达一种或多种以下信息:
[0097] 所述化妆品成品或化妆品产品是生物群系友好的,如生物群系相容的;
[0098] 所述化妆品成品或化妆品产品不应在指示的失效期或寿命,如推荐的寿命之后使用,所述指示的失效期或寿命基于例如变质,例如生物群系相容性,
[0099] 其中所述指示的失效期或寿命,例如推荐的寿命如下表示:
[0100] a)以自预先选择的事件,如所述化妆品成品的开封或所述化妆品成品的首次使用起的时间单位,如天数计;或者
[0101] b)以使用或应用的次数表示预先选择;
[0102] 所述化妆品成品或化妆品产品不应在X次应用之后使用,例如其中X是约1次和约180次之间;和
[0103] 所述化妆品成品或化妆品产品不应在X天使用,例如Y/天使用的X天之后使用,其中X是约(7天)一周和约42天(6周)之间,并且Y是约0次使用每天和约10次使用每天之间,例如,X天可以是约7-10,10-13,14-17,18-21,22-25,26-29,30-33,34-37,38-42天;并且Y可以是约0-1,2-4,5-7,8-10次使用每天。
[0104] 在实施方案中,所述方法可以包括运输所述化妆品成品。
[0105] 本公开特别提供了制备化妆品成品的方法,其包括将化妆品产品布置在最终使用容器中以形成填充的最终使用容器;和处理所述填充的最终使用容器以杀死或灭活细菌,从而提供化妆品成品。
[0106] 本公开特别提供了制备生物群系友好的化妆品产品的方法,其包括:从一批生物群系友好的成分中选择第一组分,如表面活性剂;从一批生物群系友好的成分中选择第二组分,如保湿剂;提供所述第一和第二组分的混合物,从而制备生物群系友好的化妆品产品。
[0107] 在实施方案中,所述第一、第二或第一和第二组分选自表3。所述方法可以包括确定所述化妆品成品的生物群系友好性失效期或推荐的寿命。所述确定可以包括评估AOB的存活力或AOB在与所述第一和第二组分的混合物接触后产生亚硝酸盐的能力。
[0108] 本公开特别提供了制备化妆品成品的方法,其包括:提供第一和第二组分,其中每种已经显示为生物群系友好的;组合所述第一和第二组分以形成混合物;确定所述混合物是否是生物群系友好的,从而制备化妆品成品。
[0109] 在实施方案中,确定可以包括评估AOB的存活力或AOB在与所述第一和第二组分的混合物接触后产生亚硝酸盐的能力。
[0110] 本公开特别提供了制造(评估)化妆品产品或化妆品成品的方法,其包括:
[0111] 提供具有至少2种选自表3的组分的产品;
[0112] 获得所述化妆品产品对于所述用户的皮肤上的细菌,例如有益细菌,如ABO是否安全的评估,
[0113] 从而制造所述化妆品产品或化妆品成品。
[0114] 在实施方案中,所述评估可以包括评估AOB的存活力或AOB在与所述产品接触后产生亚硝酸盐的能力。
[0115] 本公开特别提供了评估化妆品产品或化妆品成品的方法,其包括:
[0116] 将化妆品产品的等分试样与测试生物体接触,所述测试生物体是例如氨氧化细菌;和
[0117] 评估所述化妆品产品对所述测试生物体的影响,
[0118] 其中评估包括评估所述化妆品产品对所述测试生物体,如氨氧化细菌产生亚硝酸盐的能力的影响。
[0119] 在实施方案中,评估可以包括确定所述氨氧化细菌产生亚硝酸盐的能力是否满足预先选择的标准。评估所述化妆品产品对所述测试生物体的能力的影响规定所述化妆品成品鉴定为“测试并确认为具有活的测试生物体”。评估所述化妆品产品对氨氧化细菌产生亚硝酸盐的能力的影响规定所述化妆品成品鉴定为“测试并确认为具有活的氨氧化细菌”。
[0120] 本公开特别提供了选择氨氧化细菌友好的赋形剂的方法,其包括:
[0121] 获得氨氧化细菌(AOB)细胞悬浮液,例如从连续培养系统;
[0122] 从所述细胞悬浮液收获AOB细胞;
[0123] 在储备溶液中洗涤AOB细胞,例如包含50mM Na2HPO4-2mM MgCl2,pH 7.6的储备溶液;
[0124] 以5.0的最终光密度(OD600)(约1010个细胞/ml)在所述储备溶液中悬浮所述AOB细胞;
[0125] 在约4℃贮存所述AOB细胞;
[0126] 在10ml补充有铵(NH4+),如50mM铵且含有预定终浓度的赋形剂的AOB培养基中将所9
述AOB细胞稀释至0.5的最终光密度(OD600)(约10个细胞/ml);
[0127] 在30℃温育第一预定的时间段以提供温育的培养物;
[0128] 收集所述温育的培养物的等分试样;和
[0129] 在所述温育的培养物的上清液中测量亚硝酸盐的浓度。
[0130] 在实施方案中,可以通过离心温育的培养物的等分试样以提供上清液和细菌团粒来提供上清液。所述方法可以包括基于温育的培养物的上清液中的亚硝酸盐浓度来将所述赋形剂鉴定为氨氧化细菌友好的组分。所述方法还可以包括在所述AOB培养基中洗涤所述细菌团粒;在补充有NH4+的AOB培养基中悬浮所述细菌团粒;在补充有NH4+的AOB培养基中温育所述细菌团粒;在第二预定的时间段回收AOB细胞以提供回收的AOB细胞样品;和测量回收的AOB细胞样品的OD600值和亚硝酸盐积累中的至少一个。
[0131] 在实施方案中,方法可以包括基于回收的AOB细胞样品中OD600值和亚硝酸盐积累中的至少一个来将所述赋形剂鉴定为氨氧化细菌友好的组分。从细胞悬浮液收获AOB细胞可以包括离心细胞悬浮液。赋形剂的预定的最终浓度为约0%和约100%之间。第一预定的时间段为以下的至少一种:约1分钟、约10分钟、约60分钟、约2小时、约4小时、约6小时、约12小时,和约24小时。第二预定的时间段为以下的至少一种:约1分钟、约10分钟、约60分钟、约2小时、约4小时、约6小时、约12小时、约24小时、约36小时、约48小时、约72小时、约96小时。
[0132] 本公开特别提供了选择氨氧化细菌友好的赋形剂的方法,其包括:获得氨氧化细菌(AOB)的样品;将所述AOB与赋形剂接触第一预定的时间段以提供温育的培养物;收集温育的培养物的等分试样,以及在所述温育的培养物的上清液中测量亚硝酸盐的浓度。
[0133] 在实施方案中,基于在温育的培养物的上清液中的亚硝酸盐的浓度来将所述赋形剂鉴定为氨氧化细菌友好的赋形剂。
[0134] 在实施方案中,方法可以包括将来自温育的培养物的AOB与NH4+接触;和在第二预定的时间段之后,测量回收的AOB细胞样品的OD600值和亚硝酸盐积累中的至少一个。方法还可以包括基于回收的AOB细胞样品中的OD600值和亚硝酸盐浓度中的至少一个,将赋形剂鉴定为氨氧化细菌友好的成分。
[0135] 如果OD600是大于或等于约0.01,则回收的AOB细胞样品中的OD600值可以允许鉴定氨氧化细菌友好的赋形剂。
[0136] 本公开特别提供了生产生物群系友好的组合物的方法,其包括:获得化合物对氨氧化细菌友好的知识;和将所述化合物与氨氧化细菌组合以提供化妆品产品。
[0137] 本公开特别提供了在受试者上维持氨氧化细菌(AOB)的方法,其包括:应用如本公开全文中描述的化妆品产品或化妆品成品。方法可以包括在应用所述化妆品产品或所述化妆品成品之前,将包含AOB的制剂应用至所述受试者。所述方法可以包括在应用所述化妆品产品或所述化妆品成品之后,将包含AOB的制剂应用至所述受试者。所述方法可以包括:在应用所述化妆品产品或所述化妆品成品之前,将包含AOB的制剂应用至所述受试者,其中在以下范围的约一个之间应用所述包含AOB的制剂:在应用所述化妆品产品或所述化妆品成品之前约1-5、5-10、10-20、20-30、30-40、40-50、50-60分钟,2-5、5-10、10-15、15-20、20-25小时;2-5、5-10、10-15天,3-4、5-10周。所述方法可以包括在应用所述化妆品产品或所述化妆品成品之后,将包含AOB的制剂应用至所述受试者,其中在以下范围的约一个之间应用所述包含AOB的制剂:在应用所述化妆品产品或所述化妆品成品之后约1-5、5-10、10-20、20-30、30-40、40-50、50-60分钟,2-5、5-10、10-15、15-20、20-25小时;2-5、5-10、10-15天,3-4、
5-10周。所述方法可以包括不在之前或之后应用非生物群系友好的化妆品产品或化妆品成品。将AOB的制剂和化妆品产品,如化妆品成品中的至少一个应用至所述受试者的预定的区域。受试者的预定的区域是以下至少一个:头部的部分,如脸、颊、颏、睑、唇、鼻,头皮、毛发、前额;颈;腋下;臂;手;腿;足;胸部;腹部区域;臀部;生殖器区域;和背部。AOB可以是本文描述的任一种或多种AOB。AOB可以是真养亚硝化单胞菌(N.eutropha)D23。
[0138] 在整个公开中,天然玫瑰水溶胶可以称作突厥蔷薇(rose damascena)花水;并且突厥蔷薇花水可以称作天然玫瑰水溶胶,即这两个术语是可以互换的,正如贯穿本公开所使用的那样。
[0139] 附图简述
[0140] 图1A显示了温育1分钟后,与玫瑰香味和无香味的泡沫肥皂(Foaming Soap)温育后亚硝酸盐产生以及真养亚硝化单胞菌(N.eutropha)D23的恢复。亚硝酸盐浓度相对于时间作图。
[0141] 图1B显示了温育10分钟后,与玫瑰香味和无香味的泡沫肥皂温育后亚硝酸盐产生以及真养亚硝化单胞菌D23的恢复。亚硝酸盐浓度相对于时间作图。
[0142] 图1C显示了温育60分钟后,与玫瑰香味和无香味的泡沫肥皂温育后亚硝酸盐产生以及真养亚硝化单胞菌D23的恢复。亚硝酸盐浓度相对于时间作图。
[0143] 图2A显示了温育1分钟后,与各种浓度的沐浴露温育后亚硝酸盐产生以及真养亚硝化单胞菌D23的恢复。亚硝酸盐浓度相对于时间作图。
[0144] 图2B显示了温育10分钟后,与各种浓度的沐浴露温育后亚硝酸盐产生以及真养亚硝化单胞菌D23的恢复。亚硝酸盐浓度相对于时间作图。
[0145] 图2C显示了温育60分钟后,与各种浓度的沐浴露温育后亚硝酸盐产生以及真养亚硝化单胞菌D23的恢复。亚硝酸盐浓度相对于时间作图。
[0146] 图3A显示了温育1分钟后,与各种浓度的洗发剂温育后亚硝酸盐产生以及真养亚硝化单胞菌D23的恢复。亚硝酸盐浓度相对于时间作图。
[0147] 图3B显示了温育10分钟后,与各种浓度的洗发剂温育后亚硝酸盐产生以及真养亚硝化单胞菌D23的恢复。亚硝酸盐浓度相对于时间作图。
[0148] 图3C显示了温育60分钟后,与各种浓度的洗发剂温育后亚硝酸盐产生以及真养亚硝化单胞菌D23的恢复。亚硝酸盐浓度相对于时间作图。
[0149] 图4A显示了温育1分钟后,与护理剂温育后亚硝酸盐产生以及真养亚硝化单胞菌D23的恢复。亚硝酸盐浓度相对于时间作图。
[0150] 图4B显示了温育10分钟后,与护理剂温育后亚硝酸盐产生以及真养亚硝化单胞菌D23的恢复。亚硝酸盐浓度相对于时间作图。
[0151] 图4C显示了温育60分钟后,与护理剂温育后亚硝酸盐产生以及真养亚硝化单胞菌D23的恢复。亚硝酸盐浓度相对于时间作图。
[0152] 图5是表面活性剂及其与真养亚硝化单胞菌D23的相容性(compatability)的研究的表格。
[0153] 发明详述
[0154] 本公开的系统和方法特别提供了化妆品产品(例如化妆品成品),其可认为是“生物群系友好的”或“生物群系相容的”。本公开的系统和方法可以提供化妆品产品(例如化妆品成品)的用途,所述化妆品产品可与细菌(如非致病细菌,如氨氧化细菌)联合使用,所述细菌可以以待应用于受试者的制剂或组合物的形式使用。
[0155] 本公开的系统和方法还可以提供化妆品产品(例如化妆品成品)的制造,质量控制测试和确定产品或产品的一种或多种成分与细菌(例如非致病性细菌,如氨氧化细菌)和/或与受试者的微生物群系的相容性的测试。
[0156] 本公开的系统和方法可提供产品(例如化妆品成品)的商业发行和分销到商业,其包括将产品分配到商业中,重新填充产品以及再循环产品的方法。
[0157] 1.定义
[0158] 氨氧化细菌是指能够将氨或铵氧化成亚硝酸盐,并且在一定条件下氧化为一氧化氮的细菌。这可以一定速率实现。速率,例如预定的速率,可以指铵离子(NH4+)(例如,约200mM)转化为亚硝酸盐(NO2-)的速率,为至少50、75、125或150微摩尔NO2-/分钟,例如约
100-150、75-175、75-125、100-125、125-150或125-175微摩尔/分钟,例如约125微摩尔NO2-/分钟。在实施方案中,速率,例如预定的速率,可以指铵离子(NH4+)(例如,约200mM)转化为亚硝酸盐(NO2-)的速率,为至少50、75、125或150纳摩尔NO2-/分钟/ml,例如约100-150、75-
175、75-125、100-125、125-150或125-175纳摩尔/分钟/ml,例如约125纳摩尔NO2-/分钟/ml,用于连续培养,例如具有约0.5的OD。
[0159] 氨氧化细菌的实例包括真养亚硝化单胞菌(Nitrosomonas eutropha)菌株,例如D23和C91,及亚硝化单胞菌属(Nitrosomonas)、亚硝化球菌属(Nitrosococcus)、亚硝化螺菌属(Nitrosospira)、亚硝化囊菌属(Nitrosocystis)、亚硝化叶菌属(Nitrosolobus)和亚硝化弧菌属(Nitrosovibrio)的其它细菌。D23真养亚硝化单胞菌菌株是指被命名为AOB D23-100的菌株,其在2014年4月8日保藏于美国组织培养物保藏中心(ATCC)(10801University Blvd.,Manassas,VA,USA),其登录号为PTA-121157。登录号PTA-121157的核酸序列(例如基因组序列)在此通过引用整体并入。在某些实施方案中,真养亚硝化单胞菌是2015年4月15日提交的PCT申请第PCT/US2015/025909号(通过引用整体并入本文)中描述的菌株。
[0160] 优化的真养亚硝化单胞菌(N.eutropha),如该术语在本文中使用,指具有优化的生长速率;优化的NH4+氧化速率;或对NH4+优化的抗性的真养亚硝化单胞菌。在一个实施方案中,其与天然存在的真养亚硝化单胞菌相差至少一个核苷酸,例如选自氨单加氧酶、羟胺氧化还原酶、细胞色素c554和细胞色素cM552的基因中的核苷酸。例如,可以通过选择真养亚硝化单胞菌的自发产生的突变,诱导的突变或定向的基因工程产生差异。在一个实施方案中,其与天然存在的真养亚硝化单胞菌的差异在于其具有在自然界中不一起存在的一群等位基因。这些差异可以提供下列一项或多项:治疗或预防皮肤病症、治疗或预防与低亚硝酸盐水平相关的疾病或病患、治疗或预防体味、向受试者供应一氧化氮的处理,以及抑制微生物生长的处理。
[0161] 如本文中所用,“自养生物”例如自养细菌是能够通过使用无机材料作为营养源以及使用光合作用或化学合成作为能量来源进行自营养的任何生物体。自养细菌可由二氧化碳和衍生自其它来源的ATP、使氨成为亚硝酸盐的cox化(coxiation)、使硫化氢氧化和使Fe2+氧化成Fe3+合成有机化合物。本公开的自养细菌无法引起感染。
[0162] 如本文中所用,“纯性(axenic)”是指包含生物体的组合物基本上不含其它生物体。例如,氨氧化细菌的纯性培养物是基本上不含除氨氧化细菌以外的生物体的培养物。纯性组合物可以包含不是生物体的元素,例如,它可以包含营养物或赋形剂。本文所讨论的氨氧化细菌的任何实施方案、制剂(preparation)、组合物或配制物(formulation)可以包含任选纯性的氨氧化细菌、基本上由任选纯性的氨氧化细菌组成或由任选纯性的氨氧化细菌组成。
[0163] 在一些实施方案中,“基本上不含”表示通过用于检测指示为“基本上不含”的制品的方法检测不到。例如,“基本上不含防腐剂”表示通过用于检测防腐剂的方法检测不到。“基本上不含微生物”表示通过用于检测其它生物体的方法(例如,将培养物铺板并检测菌落形态,或针对保守基因如16S RNA的PCR)检测不到。
[0164] 可以进行诸如最小抑制浓度(MIC)测试的测试。MIC定义为温育预定的时间段(例如过夜温育,例如12温育,或24小时温育)后,抑制微生物的可见生长的抗微生物剂的最低浓度。
[0165] “培养”是指将一定量的期望细菌放置在促进其生长(即,促进细胞分裂)的条件下的过程。所述条件可以涉及特定培养基、设定温度的范围和/或搅拌速率。可以在液体培养基中或在平板例如琼脂平板上培养细菌。
[0166] 完全欧洲亚硝化单胞菌(N.europaea)培养基是指描述于Ensign等人,“In vitro activation of ammonia monooxygenase from Nitrosomonas europaea by copper.”J Bacteriol.1993年4月;175(7):1971-80中的欧洲亚硝化单胞菌生长培养基。
[0167] 如本文中所用,术语“分离的”是指从其原始或天然环境(例如,如果它是天然存在的,则为天然环境)中取出的物质。例如,存在于活动物中的天然存在的多核苷酸或多肽是未分离的,但通过人类干预与天然系统中的一些或全部共存物质分离的相同的多核苷酸或多肽是分离的。此类多核苷酸可以是载体的一部分和/或此类多核苷酸或多肽可以是组合物的一部分,且它们仍然是分离的,因为这种载体或组合物不是其所处的自然环境中的一部分。
[0168] 如本文中所用,术语“优化的生长速率”是指下列中的一个或多个:当在2015年4月15日提交的PCT/US2015/025909中所述的分批条件下培养时,倍增时间小于约4、5、6、7、8、9或10小时;当在2015年4月15日提交的PCT/US2015/025909中所述的恒化器条件下生长时,倍增时间小于约16、18、20、22、24或26小时;或在约1天或2天内从约0.15的OD 600生长到至少约0.3、0.4、0.5、0.6、0.7或0.8的OD 600。在一个实施方案中,优化的生长速率是倍增时间比天然存在的真养亚硝化单胞菌的倍增时间短至少10%、20%、30%、40%或50%的生长速率。
[0169] 如本文中所用,“优化的NH4+氧化速率”是指NH3或NH4+转化为NO2-的速率为至少约50、75、125或150微摩尔/分钟。例如,所述速率可以为至少约50、75、125或150微摩尔/分钟的NH4+(例如,约200mM)转化为NO2-。在一个实施方案中,优化的NH4+氧化速率是其中NH3或NH4+ -
转化为NO2的速率比在天然存在的真养亚硝化单胞菌中所见的速率快至少10%、20%、
30%、40%或50%。在实施方案中,NH3或NH4+转化为NO2-的速率为至少约50、75、125或150纳摩尔/分钟/ml。例如对于具有约0.5OD的连续培养,NH4+(例如约200mM)转化为NO2-的速率可以是至少约50、75、125或150纳摩尔/分钟/ml。
[0170] 如本文中所用,“优化的NH4+抗性”是指能够在大于50、75、100、125、150、175、200、225、250、275或300mM NH3或NH4+的条件下生长至少约24或48小时。在一个实施方案中,优化的NH4+抗性是指能够在选定浓度的NH3或NH4+下比天然存在的真养亚硝化单胞菌生长快至少
10%、20%、30%、40%或50%,或生长时间长至少10%、20%、30%、40%或50%。
[0171] 如本文中所用,“组合”施用意指在受试者罹患病症的过程中将两种(或更多种)不同的治疗递送给受试者,例如,在受试者已被诊断为患有所述病症之后以及在所述病症已经被治愈或消除之前递送所述两种或更多种治疗。在一些实施方案中,一种治疗的递送在第二治疗的递送开始时仍然在发生,从而存在重叠。这有时在本文中被称为“同时”或“伴随”或“共同递送”。在其它实施方案中,一种治疗的递送在开始另一种治疗的递送之前结束。这有时在本文中被称为“连续”或“序贯递送”或“连贯递送”。在任一种情况的实施方案中,治疗都因为组合施用而更有效。例如,第二治疗是更有效的,例如,相比于如果在缺少第一治疗的情况下施用第二治疗将观察到的情况,利用更少的第二治疗观察到同等的效果,或第二治疗在更大程度上减少症状,或者对于第一治疗将观察到类似的情况。在一些实施方案中,递送使得症状或与病症相关的其它参数的减少比在递送一种治疗而缺少另一种治疗的情况下将会观察到的减少更大。两种治疗的作用可以部分相加、全部相加或比相加更大(即,协同)。所述递送可以使得递送的第一治疗的作用在递送第二治疗时仍然是可检测的。
[0172] 如本文中所用,“组合”施用意指在给定的时间段内将两种(或更多种)不同的制剂(例如化妆品,例如化妆品成品,例如含氨氧化产品)递送至受试者。可以同时或依次递送两种或多种不同的制剂。
[0173] “天然产品”是或者可包含可至少部分源自自然界的产品。它可以是任何事物,或包括由活生物体产生的任何事物,并且可包括生物体本身。天然产品可包括或包含整个生物体和生物体的一部分(例如,植物的一部分)、来自于生物体的提取物、来自于生物体的有机化合物、来自于生物体的纯化有机化合物。天然产品可以是或包含发现的有机物和细胞,包括初级代谢物(氨基酸、碳水化合物和核酸)和次级代谢产物(在有限范围的物种中找到的有机化合物,例如,聚脂肪酸、萜类、类固醇、苯丙烷类、生物碱、专用氨基酸和肽、专用碳水化合物)。天然产品可以是或包含聚合有机材料,例如纤维素、木质素和蛋白质。
[0174] 天然产品可以是或包含商用产品,并且可以指由天然来源产生的化妆品、膳食补充剂和食品。天然产品可具有可例如在治疗疾病或病状中具有治疗益处的药理学或生物学活性。天然产品可包括在传统医学、用于美容目的的治疗和温泉疗法中。本文提到的天然产品可包含本文描述为天然产品的任何一种或多种组分以掺入包含一种或多种其它组分,例如赋形剂的制剂或配制物中。称为天然产品的制剂或配制物可包含本文定义的天然产品和一种或多种另外的组分或成分。本公开全篇所讨论的任何组合物、制剂或配制物可以是或包含一种或多种天然产品。
[0175] 如本文中所用,“存在”或“水平”可指组分,例如氨氧化细菌、氨、铵离子、尿素、亚硝酸盐或一氧化氮中的任何一种或多种的定性或定量的量。存在或水平可包括零值或缺乏组分的存在。
[0176] 术语“多肽”、“肽”和“蛋白质”(如果为单链)在本文中可互换地用于指氨基酸聚合物。该聚合物可以是直链或支链,其可以包含修饰的氨基酸,并且其可以间杂有非氨基酸。该术语还包括已被修饰的氨基酸聚合物;例如,二硫键形成、糖基化、脂质化、乙酰化、磷酸化或任何其它操作,诸如与标记组分缀合。该多肽可以从天然来源中分离,可以通过重组技术从真核或原核宿主产生,或者可以是合成程序的产物。
[0177] 如本文所用,“受试者”可以包括动物,哺乳动物,人类,非人类动物,家畜动物或伴侣动物。术语“受试者”旨在包括人类和非人类动物,例如脊椎动物,大型动物和灵长类动物。在某些实施方案中,所述受试者是哺乳动物受试者,并且在具体的实施方案中,所述受试者是人类受试者。尽管已经清楚地预见到人类的应用,但是在此也考虑了例如与非人类动物的兽医应用。本公开内容的术语“非人类动物”包括所有脊椎动物,例如非哺乳动物(例如,例如鸡,两栖动物,爬行动物)和哺乳动物,如非人灵长类动物,家养动物和农业上有用的动物,例如绵羊,狗,猫,,猪,大鼠等。
[0178] 如本文中所用,术语“表面活性剂”包括可降低两种液体之间或液体和固体之间的表面张力或界面张力的阴离子、阳离子、非离子和两性化合物。表面活性剂可作为洗涤剂、润湿剂、乳化剂、发泡剂和分散剂。表面活性剂可以称作赋形剂。表面活性剂可以包括下列中的一种或多种,单独或与所列那些,或其它表面活性剂或表面活性剂样化合物,以及贯穿本公开描述的其它化合物组合:椰油酰胺丙基甜菜碱(ColaTeric COAB)、聚乙烯山梨醇酯(例如,Tween 80和Tween 20)、乙氧基化月桂醇(RhodaSurf 6NAT)、月桂基醚硫酸钠(sodium laureth sulfate)/月桂基葡糖苷/椰油酰胺丙基甜菜碱(Plantapon 611L UP)、月桂基醚硫酸钠(例如,RhodaPex ESB 70NAT)、烷基聚葡糖苷(例如,Plantaren 2000N UP)、月桂基醚硫酸钠(Plantaren 200)、布朗纳博士的卡斯蒂利亚(Castile)肥皂、布朗纳博士的婴儿肥皂、月桂胺氧化物(ColaLux Lo)、十二烷基硫酸钠(SDS)、聚磺酸酯烷基聚葡糖苷(PolySufanate 160P)、月桂基硫酸钠(Stepanol-WA Extra K)及其组合。布朗纳博士的卡斯蒂利亚肥皂和婴儿肥皂包含水、有机椰子油、氢氧化、有机橄榄油、有机公平交易(fair deal)麻油、有机荷荷巴油、柠檬酸和生育酚。
[0179] 表面活性剂可以包括月桂基葡糖苷羟基丙基磺酸钠( nate 160NC)、月桂酰胺丙基甜菜碱( Teric LMB);椰油酰胺丙基羟基磺基甜菜碱(Cocamidopropyl 
hydroxysultaine)( Teric  CBS);椰油酰两性基二乙酸二钠(disodium 
cocoamphodiacetate)( Teric CDCX-LV);月桂基葡糖苷羟基丙基磷酸钠(
Fax D12)。
[0180] 表面活性剂可以包括月桂酰甲基羟乙基磺酸钠(sodium lauroyl methyl isethionate)( LQ-CLR-SB);甲基椰油酰牛磺酸钠(sodium methyl cocoyl 
taurate)(Pureact WS Conc.);水(和)月桂酰甲基羟乙基磺酸钠(和)椰油酰胺丙基甜菜碱(和)椰油酰羟乙基磺酸钠(和)甲基油酰牛磺酸钠( SFS-SB)。
[0181] 如本文中所用,“转基因”意指包含DNA的一个或多个外源性部分。外源性DNA衍生自另一个生物体,例如,另一种细菌、噬菌体、动物或植物。
[0182] “化妆品成品”在该术语在本文中使用时指准备好和/或适合释放到商业中的产品。例如,化妆品成品可以是产品,如化妆品产品,其含有一种或多种组分,并且已经制备并打包供最终用户,如消费者使用。在一个实施方案中,化妆品成品布置在最终使用容器中,该容器中最终用户将使用该化妆品成品。在一个实施方案中,化妆品成品可以以任何特定顺序进行下列一项或多项:制备、混合、布置在最终使用容器中、灭菌、测试和密封。
[0183] 化妆品成品的“单位”指化妆品成品的单一实体,该化妆品成品可以形成用于由最终用户使用的或用于销售的单个或完整组分。在一些实施方案中,单位可以是单一实体但可以形成更大或更复杂的整体的单个组分。在一个实施方案中,单位可以是单个最终使用容器,其含有用于销售或用于由最终用户使用的化妆品产品。
[0184] 术语“最终用户”在该术语在本文中使用时指将使用化妆品成品,例如通过将化妆品成品应用与他自身或她自身,或者向受试者例如另一个人或动物,例如伴侣动物应用或提供化妆品成品的人。
[0185] 术语“推荐的寿命”在该术语在本文中使用时指可以由化妆品成品的制造商提供的建议的时间段。推荐的寿命可以基于进行的测试,其确定在该段时间内使用该产品不会对用户产生明显的不利影响。
[0186] 术语“最终使用容器”在该术语在本文中使用时指容纳化妆品产品,例如化妆品成品的容器。最终使用容器可以允许将化妆品成品从所述容器递送至外部环境。在某些实施方案中,最终使用容器可以防止或减少所述容器的内容物的逆行流动。最终使用容器可以配置为提供单向流动和/或零死体积(zero-dead volume)。
[0187] 最终使用容器可以由与容器的内容物和外部环境相容的任何合适的材料构成。例如,最终使用容器可以由玻璃、或一种或多种聚合物(如高密度聚乙烯聚合物)制成。
[0188] 最终使用容器可以包含递送系统,如可以允许将来自容器的内容物布置到所述容器外部的系统或机构。例如,递送系统可以包含分配器,例如利用
[0189] “微生物群系”指生活在受试者表面(如肠道,口腔,皮肤)上和/或受试者的其它地方的群体,如一种或多种微生物。该群体可以具有与支持受试者寿命有关的一种或多种有利功能和/或益处。
[0190] 术语“防腐剂”在该术语在本文中使用时指杀死微生物(例如细菌或真菌)或抑制微生物(例如细菌或真菌)生长的化合物。示例性防腐剂包括本文发明详述部分结尾处附件VI中所列的那些。本文中提到的防腐剂可以称为抗细菌防腐剂。本文提到的防腐剂可不指抗氧化防腐剂。
[0191] 如本文所用,“无菌保证水平”是单个单位的概率,所述单个单位例如单个化妆品产品,例如在其已经经受灭菌后为非无菌的单个化妆品成品。无菌保证水平(SAL)可以是约10-5或为10-6,其意指非无菌单位的十万分之一的机会(对于10-5)或百万分之一的机会(对于10-6)。SAL也可以描述灭菌过程的杀伤效果。非常有效的灭菌过程有非常低的SAL,例如,
10-5,或10-6。
[0192] 如本文中所用,“疾病或病状的治疗”是指与类似的但未经治疗的患者相比,降低所述疾病或病状的至少一种症状的严重程度或频率。治疗还可以指与类似的但未经治疗的患者相比,阻止、减缓或逆转疾病或病状的进展。治疗可以包括解决疾病和/或一种或多种症状的根本原因。
[0193] 如本文中所用,“治疗有效量”是指足以防止疾病或病状的推进或引起疾病或病状的消退,或能够缓解疾病或病状的症状,或能够实现所需结果的剂量。治疗有效剂量可以被测量为例如细菌的数量或活菌的数量(例如,以CFU计)或细菌的质量(例如,以毫克、克或千克计),或细菌的体积(例如,以mm3计)。
[0194] 如本文中所用,术语“存活力”是指自养细菌(例如,氨氧化细菌)以预定速率将氨、+铵或尿素氧化为亚硝酸盐的能力。在一些实施方案中,速率是指铵离子(NH4 )(例如,约
200mM)转化为亚硝酸盐(NO2-)的速率,为至少50、75、125或150微摩尔NO2-/分钟,例如约
100-150、75-175、75-125、100-125、125-150或125-175微摩尔/分钟,例如约125微摩尔NO2-/分钟。
[0195] 如本文中所用,“活化”就自养细菌,例如,氨氧化细菌而言使用。活化是指可使氨氧化细菌处于潜在更活跃的状态,例如生长状态下的任何作用。活化可涉及自养细菌,例如氨氧化细菌的刺激,以某种方式帮助将氨、铵离子和尿素中的至少一种转化为亚硝酸盐、一氧化氮或一氧化氮前体。活化可涉及帮助建立细菌菌落,例如,以允许自养细菌例如氨氧化细菌与其它现有细菌竞争。活化可涉及提供可利于自养细菌,例如氨氧化细菌的持续性和/或生长的环境。活化可涉及加速自养细菌,例如氨氧化细菌对环境或表面的可利用率。“活化”可提供将呈“活化”或“生长状态”的氨氧化细菌。“活化”可随活化剂的使用而发生。氨氧化细菌可接触活化剂以提供呈“活化”或“生长”状态的氨氧化细菌。这可以在容器(如最终使用容器)、递送装置或递送系统内或外部发生,例如在第一腔室、第二腔室、混合腔室、第三或另外的腔室或其组合内。活化剂可为氨、铵离子或尿素中的至少一种。活化剂可为铵盐,例如氯化铵或硫酸铵。活化剂,例如铵盐,例如氯化铵或硫酸铵的浓度可在约10微摩尔至约100毫摩尔的范围内。在某些方面,活化剂,例如铵盐,例如氯化铵或硫酸铵的浓度可在约0.5mM至约50mM的范围内。活化剂可呈溶液、悬浮液、粉末,例如结晶形式、培养基、缓冲液,或置于用于保持活化剂的合适载体中或作为该载体提供。活化剂可以存在于容器(例如最终使用容器)内,或者可以与容器分开存在,例如在另一个容器中。氨氧化细菌可呈任何合适形式,以保持AOB呈所需状态,例如储存状态,例如水溶液、凝胶或粉末形式。氨、铵离子或尿素中的至少一种可处于培养基或缓冲液中以促进氨氧化细菌的生长,例如AOB培养基或生长培养基。定时释放或控释活化剂(如尿素)可用作活化剂。
[0196] 如本文中所用,“致动(actuation)”意指正在采取的某种作用,例如,正在开始过程或某物正投入运动。在一些实施方案中,致动可指打破容器(如最终使用容器)的屏障,混合容器的内容物,或开始容器的一种或多种内容物的运动,例如将容器的一种或多种内容物递送到容器外,例如递送到表面或环境中。在一些实施方案中,致动屏障可包括会随时间推移而降解的一种或多种材料将接触第一腔室和第二腔室的内容物,例如第一腔室内容物的控释,或来自第二腔室的内容物的控释,或两者。
[0197] 致动还可以意指允许将容器(最终使用容器)的内容物递送到容器外部(如至表面或环境)的一些动作。在一个实施方案中,如果含有化妆品成品的最终使用容器发生致动,则可以破坏容器的密封以将化妆品成品递送到容器外部。在一个实施方案中,如果含有化妆品成品的最终使用容器发生致动可以开启容器,如可以开启阀,或者可以触发泵以将化妆品成品递送到容器外部。
[0198] 如本文中所用,“屏障”可意指可以用于阻碍通道或保持容器(如化妆品成品)的内容物分开,例如介于容器的第一腔室和第二腔室之间的任何结构或构造。屏障可呈阀(例如止回阀)、过滤材料、薄膜、蜡、脂质、聚合物或控释材料(例如,缓释材料)的形式。屏障可以是在容器致动之后,它可以允许内容物从容器通到容器外部的材料或结构。屏障可以是在容器致动之后,可允许内容物从第一腔室通过进入第二腔室,内容物从第二腔室通过进入第一腔室,或两者情况的材料或结构。可以在致动时,例如通过刺破、击穿、刺穿、穿孔、穿透、裂开、扭开、打开或撕裂屏障而破坏屏障。屏障可呈阀门(例如止回阀)、与容器的一种或多种内容物接触后无法降解的柔性或非柔性材料,或与容器的一种或多种内容物接触后可降解的柔性或非柔性材料、过滤材料的形式。屏障可由适于其目的的任何材料制成,例如,可用于阻碍通道或保持分离的材料,例如,聚合材料或金属材料。
[0199] 屏障可以意指可以提供密封容器(例如密封容器)的任何结构以便不允许容器的内容物(例如化妆品成品)暴露在容器外部环境,并且以便不允许容器外部环境中的任何物质进入容器(例如化妆品成品)的内部。
[0200] 在一些实施方案中,与本公开最相关的状态是生长(例如,最大生长)的状态,其特征为至少约7.6的pH、氨、微量矿物质、氧和二氧化碳。另一种状态可以由约7.4或更小的pH表征以及由二氧化碳的缺乏表征。在低二氧化碳条件下,氨氧化细菌(例如,亚硝化单胞菌)继续将氨氧化成亚硝酸盐并产生ATP,但缺乏二氧化碳,例如,缺乏足够的二氧化碳来固定和生成蛋白质,其相反生成被其用作能量储存介质的多磷酸盐。这可以允许氨氧化细菌保持在“储存状态”下一段时间,例如预定的时间段,例如,至少1、2、3、4、5、6、7天;1、2、3、4周;1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12个月;1、2、3、4或5年。在一些实施方案中,氨氧化细菌可以保持在储存状态下至少约6个月至约1年。
[0201] 如本文中所用,“生长状态”是指在可以具有至少约7.6的pH的状态下或环境(例如介质,例如培养基,例如生长培养基)中的自养细菌(例如,氨氧化细菌)。氨、铵离子和尿素中的至少一种的水平可以在约1微摩尔和1000毫摩尔之间。微量物质的水平在约0.01微摩尔的和200微摩尔的铁之间。氧的水平在约5%和100%氧饱和度(例如,培养基的氧饱和度)之间。二氧化碳的水平在约20ppm和10%饱和度(例如,培养基的饱和度)之间。在某些方面,氨、铵离子和尿素中的至少一种的水平可以在约10微摩尔和100毫摩尔之间。微量物质的水平在约0.1微摩尔的铁和20微摩尔的铁之间。氧的水平在约5%和100%氧饱和度之间。二氧化碳的水平在约200ppm和5%饱和度(例如,培养基的饱和度)之间。
[0202] 如本文中所用,“多磷酸盐负载状态”是指在可以具有约7.4或更小的pH的状态下或环境(例如介质,例如培养基,例如生长培养基)中的自养细菌(例如,氨氧化细菌)。氨、铵离子和尿素中的至少一种的水平在约1微摩尔和2000毫摩尔之间。微量物质的水平在0.01微摩尔铁和200微摩尔铁之间。氧的水平在约0%和100%O2饱和度(例如,培养基的氧饱和度)之间。二氧化碳的水平介于/小于约0和400ppm之间,且磷酸盐水平大于约1微摩尔。在某些方面,氨、铵离子和尿素中的至少一种的水平在约10微摩尔和200毫摩尔之间。微量物质的水平在0.1微摩尔的铁和20微摩尔的铁之间。氧的水平在约5%和100%O2饱和度之间。二氧化碳的水平介于/小于约0和200ppm之间,且磷酸盐水平大于约10微摩尔。
[0203] 多磷酸盐负载状态的目的可以是向AOB提供充足的氨、铵离子和/或尿素和O2,以使得可以产生ATP,但不向AOB提供CO2和碳酸盐,以使得它们无法使用该ATP固定CO2,而是使用该ATP来生成可以由细菌储存的多磷酸盐。
[0204] 如本文中所用,术语“储存状态”是指在具有约7.4或更小的pH(在一些实施方案中,pH可以为7.6或更小)的状态下或环境(例如介质,例如培养基,例如生长培养基)中的自养细菌(例如,氨氧化细菌)。氨、铵离子和尿素中的至少一种的水平在约1和1000微摩尔之间。微量物质的水平在约0.1和100微摩尔之间。氧的水平在约0%和100%饱和度(例如,培养基的饱和度)之间。二氧化碳的水平在约0和800ppm之间。在某些方面,氨、铵离子和尿素中的至少一种的水平在约10和100微摩尔之间。微量物质的水平在约1和10微摩尔之间。氧的水平在约0%和100%饱和度(例如,培养基的饱和度)之间。二氧化碳的水平在约0和400ppm之间。
[0205] 根据本公开的一些实施方案,通过在生长状态期间生成AOB生物质,然后使AOB暴露于多磷酸盐负载状态,然后除去培养基并使AOB再悬浮于缓冲液(例如储存缓冲液)中(即,储存状态)来产生氨氧化细菌(AOB)。
[0206] 如本文中所提及的“生长培养基”或“AOB培养基”包括表1或表2中的下列组分:
[0207] 表1
[0208]
[0209] 向烧瓶中添加1400ml ddH2O。高压灭菌(或过滤消毒)。室温储存。
[0210] 高压灭菌后添加:
[0211] 磷酸盐缓冲液(pH 8)               100ml       32mM KH2PO4/
[0212]                                              2.7mM NaH2PO4.H2O
[0213] 5%Na2CO3                         12ml        0.04%
[0214] (预期的pH值约为8.0)
[0215] 室温储存
[0216] 表2
[0217]
[0218]
[0219] 给每种溶液高压灭菌,并在室温下储存。
[0220] 如本文所用,“基于变质的失效期”是在该日期后产品(例如化妆品产品,例如化妆品成品)预期会以某种方式降解,使其不适合其预期目的日期。在一些实例中,其可以是该日期后产品(例如化妆品产品,例如化妆品成品)已经降解的日期。可以通过提供位于化妆品产品或化妆品产品包装(例如最终使用容器)上或其内的指示剂的方式来指示所述产品已经降解,所述指示剂提供产品已经降解的一些迹象。例如,这可以通过颜色指示剂的方式实现。
[0221] 如本文所用,“基于生物群系相容的失效期”是在该日期后,产品(例如化妆品产品,例如化妆品成品)预期以某种方式被污染,使其不适合其预期目的的日期。在一些实例中,其可以是该日期后产品(例如化妆品产品,例如化妆品成品)已经被污染的日期。可以通过提供位于化妆品产品或化妆品产品包装(例如最终使用容器)上或其内的指示剂的方式来指示所述产品已经被污染,所述指示剂提供产品已经被污染的一些迹象。例如,这可以通过颜色指示剂的方式实现。污染物可以指可使产品不适合其预定用途的事物,并且可以包括任何在密封产品时和/或在产品灭菌之后不在化妆品成品中的制品。
[0222] “生物群系友好的”指可允许受试者的微生物群系最小程度破坏的某物,例如产品,例如化妆品产品,例如化妆品成品。例如,生物群系友好的是指可向受试者应用的产品,其可允许在应用时点的微生物群系得到维持、最小程度破坏,和/或能够在应用所述产品后的一段时间后回到微生物群系。在实施方案中,生物群系友好的可以指氨氧化细菌友好的,因为所述产品可允许受试者的氨氧化细菌的最小程度破坏。
[0223] 在实施方案中,“生物群系友好的”可称为“生物群系相容的”。
[0224] “再循环站”指可接受制品以相同或不同形式重复使用或更新该制品的任何实体或个人。再循环站可接受制品,该制品然后可以经受或适于进一步用或活动。再循环站可以将该制品通过系统用于进一步处理或使用。
[0225] 贯穿本公开,配制物可以指组合物或制剂。
[0226] 表3.生物群系友好的产品的潜在组分
[0227]
[0228]
[0229]
[0230] 2.化妆品产品
[0231] 提供了可以对生物群系友好的或生物群系相容的化妆品产品,例如化妆品成品。所述化妆品产品可以包含一种或多种可以对生物群系友好的组分。
[0232] 本公开的化妆品产品可以是,或包括以下中的任一种或多种,或布置在以下中的任一种或多种中:婴儿用品,例如婴儿洗发剂、婴儿洗剂、婴儿油、婴儿粉、婴儿霜;浴用制剂,例如浴油、浴片、浴盐、泡沫浴、浴用胶囊;眼妆制剂,例如眉笔、眼线膏、眼影、洗眼剂、眼部卸妆液、睫毛膏;香料制剂,例如古龙香水、花露水、香水、香粉(喷粉和滑石粉)、香囊;发用制剂,例如护发剂、发胶、直发膏、烫发剂、漂洗剂、洗发剂、滋补剂、敷料、毛发梳理助剂、卷发液;染发制剂,例如发用染料和颜料、染发剂、染发漂洗剂、染发洗发剂、浅色染发剂、头发漂白剂;化妆制剂,例如粉饼、粉底、腿部和身体涂剂、唇膏、妆前底霜、胭脂、定妆剂;美甲制剂,例如底部涂层和内部涂层、角质层软化剂、指甲霜和洗剂、指甲延长物、指甲油和彩釉、指甲油和彩釉清洗剂;口腔卫生用品,例如牙粉、漱口水和口气清新剂;浴用肥皂,如泡沫沐浴露和清洗剂、除臭剂、灌洗液、女性卫生除臭剂;剃须用制剂,例如剃须后洗剂、胡须软化剂、滑石粉、剃须前洗剂、剃须膏、剃须皂;护肤制剂,例如清洁剂、脱毛剂、面部及颈部、身体和手、脚部粉剂和喷雾、保湿剂、夜用制剂、膏状面膜、皮肤清新剂;和晒黑制剂,例如防晒凝胶、防晒霜和防晒液及室内晒黑制剂。
[0233] 可以提供包含化妆品成品,其包含例如洗发剂、沐浴露、护理剂的化妆品产品。所述化妆品成品可以布置在最终使用容器中。
[0234] 化妆品成品可以具有以下的一种或多种特性:(a)化妆品产品或所述化妆品成品可以基本上不含防腐剂,如对羟苯甲酸酯。(b)所述最终使用容器可以配置为减少逆行流动。(c)所述化妆品产品或所述化妆品成品可以是灭菌的。所述灭菌可以包括照射(如gamma照射)或加热灭菌。(d)以下(i)和(ii)的组分之一:(i)化妆品产品可以包括以下项或基本上由以下项组成,或由以下项组成:粘度调节剂、一种清洁剂/表面活性剂、两种清洁剂/表面活性剂、保湿剂、皮肤护理剂,以及香味剂。
[0235] 化妆品产品或化妆品成品可以包含以下组分、基本上由以下组分组成,或由以下组分组成:
[0236]
[0237] 该产品可用作化妆品产品,例如洗发剂,例如沐浴露。所述产品包括水以获得100%。在一些实施方案中,化妆品产品(如洗发剂)可以含有或可以不含柠檬酸,并且在需要或期望pH稳定化的情况下可以需要柠檬酸。
[0238] (ii)化妆品产品或化妆品成品可以包括以下组分,基本上由以下组分组成或由以下组分组成:
[0239]
[0240]
[0241] 该产品可用作化妆品产品,例如用于清洁剂,例如用于身体,手和脸。所述产品包括水以获得100%。在一些实施方案中,化妆品产品(如清洁剂)可以含有或可以不含柠檬酸,并且在需要或期望pH稳定的情况下可以需要柠檬酸。
[0242] 可以使用其它水解的蛋白质,并且可以包括但不限于米、大豆、猴面包树和燕麦。可以考虑其它香味剂备选。
[0243] 化妆品成品可以有一个或多个或所有本文描述的性质。
[0244] 可以考虑包括头发和/或皮肤护理剂的其它产品,所述护理剂可以包括以下各项,基本上由以下各项组成,或由以下各项组成:
[0245]
[0246]
[0247] 所述产品包括水以获得100%。在一些实施方案中,化妆品产品(如护理剂)可以含有或可以不含柠檬酸,并且在需要或期望pH稳定的情况下可以需要。
[0248] 根据一个或多个非限制性实施方案,化妆品产品或化妆品成品(例如生物群系友好的洗发剂)可以包含以下组分,基本上由以下组分组成,或由以下组分组成:
[0249]组分 样品成分 %范围(例子%)
表面活性剂/清洁剂 月桂基葡糖苷羟丙基磺酸钠 50-70%(64.3%)
  月桂酰胺丙基甜菜碱 3-10%(4.6%)
香味剂 突厥蔷薇花水 3-10%(4.6%)
软化剂 水解的猴面包树种子蛋白质 1-5%(1.85%)
保湿剂 角鲨烯 0.1-2%(0.45%)
[0250] 根据一个或多个非限制性实施方案,化妆品产品或化妆品成品(例如生物群系友好洗面奶和/或沐浴露)可以包含以下组分,基本上由以下组分组成或由以下组分组成:
[0251]组分 样品成分 %范围(例子%)
  去离子水 70-80%(76.25%)
表面活性剂/清洁剂 月桂酰胺丙基甜菜碱 5-12%(8%)
  癸基葡糖苷 3-7%(4%)
香味剂 突厥蔷薇花水 4-10%(7.5%)
保湿剂 在甘油中的苹果提取物 2-5%(3%)
锁水剂 水解的奎奴亚藜 0.5-2%(1%)
粘度调节剂/成膜剂 羟丙基纤维素 0.1-1%(0.25%)
[0252] 根据各种公开的和非限制性实施方案,产品中每种单独组分的量可以变化例如1%,5%或10%,同时仍保持产品的类似性质。
[0253] 化妆品产品可以是无防腐剂的,例如其不包括防腐剂。可以将防腐剂鉴定为在发明详述末端的附件VI中列出的化合物。化妆品成品最多可以含有少于500ppb的防腐剂,如附件VI中列出的那些中的一种或多种。在实施方案中,化妆品成品可以含有少于100ppb的防腐剂,如附件VI中列出的那些中的一种或多种。可以用作“天然”防腐剂的材料的简要列表包括:楝树油(Neem Oil)、柠檬汁或油、蜂胶(Bee Propolis)、迷迭香提取物(Rosemary Extract)、葡萄籽提取物、柠檬酸、alpha生育酚(也称为维生素E)、山梨酸钾、苯氧乙醇、水杨酸、苯甲酸钠、山梨酸、植物精油(百里香、牛至(Oregano)、柠檬草(Lemongrass)、薰衣草(Lavender)、迷迭香等)、乳酸。
[0254] 化妆品成品最多可以具有在1ppm到10ppb之间的防腐剂(如附件VI中列出的那些中的一种或多种);例如在约10ppb和50ppb之间,例如在约50ppb和100ppb之间,例如少于1000,900,800,700,600,500,400,300,200,100,50,40,10,5,1ppb的一种或多种防腐剂,如附件VI中列出的一种或多种防腐剂。
[0255] 在一些实施方案中,可以通过本文公开的测试来证明化妆品产品(例如化妆品成品)的无防腐剂性质。例如,暴露至一种或多种微生物(如微生物,如细菌或真菌)后,将支持一种或多种微生物的生长。例如,若暴露于用微生物,如细菌或真菌的攻击,则所述化妆品产品或所述化妆品成品将支持所述微生物的生长,例如如通过U.S.P.51,抗微生物有效性测试(USP31–NF26第67页)测定,通过引用以其整体并入本文。在缺少处理(例如灭菌处理或添加防腐剂)的情况下,化妆品产品或化妆品成品支持微生物的生长,例如细菌或真菌生长,例如如通过U.S.P.51,抗微生物有效性测试测定。
[0256] 在一些实施方案中,化妆品产品(如化妆品成品)的无防腐剂特性可以通过在缺少处理(如灭菌处理或添加防腐剂)的情况下支持一种或多种微生物(如微生物,如细菌或真菌)来加以证明。
[0257] 在某些实施方案中,化妆品产品可布置在最终使用容器中,并且化妆品成品可以包括以下,基本上由以下组成,或由以下组成:水、椰油酰胺丙基甜菜碱、突厥蔷薇花水、癸基葡糖苷、苹果果实提取物、甘油、水解的猴面包树种子蛋白、羟丙基纤维素。化妆品产品可以是洗发剂。
[0258] 在某些实施方案中,化妆品产品可布置在最终使用容器中,并且化妆品成品可以包括以下,基本上由以下组成,或由以下组成:水、椰油酰胺丙基甜菜碱、突厥蔷薇花水、癸基葡糖苷、苹果果实提取物、甘油、水解的奎奴亚藜、羟丙基纤维素和柠檬酸。化妆品产品可以是清洁剂。
[0259] 在某些实施方案中,化妆品产品可布置在最终使用容器中,并且化妆品成品可以包括以下,基本上由以下组成,或由以下组成:羟乙基纤维素、myritol 313C8-10甘油三酯、椰油基葡糖苷(coco-glucoside)和油酸甘油酯、聚山梨酯80和天然玫瑰水。化妆品产品可以是护理剂。
[0260] 化妆品产品或化妆品成品可以包含添加以提供一种或多种以下的组分:香味、颜色、粘性、泡沫形成和泡沫稳定性、粘附力(adhesion)、保湿(moisture retention)、锁水(moisture binding)、pH稳定化、清洁(cleansing)、增稠(thickening)、软化(softening)、护理(conditioning),如毛发和皮肤护理、脂质层增强、屏障形成或膜形成。
[0261] 化妆品成品或化妆品产品可以包含以下的一种或多种:抗氧化剂、脂肪物质/油、增稠剂、软化剂、乳化剂、光屏蔽剂(light-screening agent)、泡沫形成和泡沫稳定性、消泡剂、保湿剂(moisturizer)、香味剂、表面活性剂、填料、螯合剂、聚合物、酸化剂或碱化剂、染料、着色剂、色素、珠光剂(pearlizer)、遮光剂(opacifier)、有机或无机颗粒、粘性调节剂、清洁剂(cleanser)、粘附剂(adherent)、锁水剂(moisture binder)、pH稳定剂、护发剂(conditioner)、顺发素(de-tangler)、生物基表面活性剂清洁剂、脂质层增强剂、皮肤护发剂和天然毛发营养物,如植物药(botanicals)、果实提取物、糖衍生物和/或氨基酸、水解的蛋白质,或维生素。
[0262] 3.容器,如最终使用容器,递送装置
[0263] 容器和/或递送装置,例如容器,例如递送装置,例如最终使用容器作为化妆品,例如化妆品成品的壳体提供。在一些实施方案中,容器或递送装置也可用于将化妆品,例如化妆品成品递送至例如表面或受试者的目的。
[0264] 容器和/或递送装置可以配置为存储和/或递送本文公开的任何化妆品。可将化妆品递送到位置和环境或例如受试者的表面,有或无另外的组分。在某些实施方案中,可以同时或依序地,例如至少部分在开始递送化妆品之前或至少部分在开始递送化妆品之后递送其它组分。在某些实施方案中,该容器或递送装置可包括递送系统或称为递送系统。在一些实施方案中,一种组分的递送在第二种的递送开始时仍然在发生,从而存在重叠。这有时在本文中被称为“同时”或“伴随”或“共同递送”。在其它实施方案中,一种组分的递送在开始另一种治疗的递送之前结束。这有时在本文中被称为“连续”或“顺序递送”或“依序递送”。
[0265] 屏障可作为容器的一部分或在容器内提供以防止容器内部和外部环境之间的流体连通。屏障可呈阀门(例如止回阀)、过滤材料、薄膜、蜡、脂质、聚合物、控释材料(例如,凝胶)及可以在容器内部和外部环境之间提供永久或临时性屏障的其它材料的形式。
[0266] 容器致动后,屏障可被破坏以允许将化妆品产品从容器处置到外部环境,或位置,环境,或例如受试者的表面,以将化妆品产品与位置,环境或例如受试者的表面接触。
[0267] 容器可包括递送系统。该递送系统可以是施加器(applicator)或可配置为递送化妆品产品的内容物。
[0268] 递送系统可配置为将化妆品产品递送至受试者的表面,例如皮肤表面。化妆品可呈一种颗粒或多种颗粒的形式,所述颗粒具有会增强递送或增强定位或与期望靶部位的接触的粒度。该化妆品可呈液体、固体的形式,呈混悬剂或溶液。
[0269] 在某些实施方案中,递送系统可包括将容器内部的内容物递送至靶部位(例如环境,例如受试者的表面,如受试者的皮肤)的泵。
[0270] 在一些实施方案中,所述容器可以是一次性容器。该容器可以或可以不预先装载(例如,由生产商或使用者装载)内容物,例如化妆品产品,并且可以被使用者,例如消费者或医疗专业人员使用一次用于将容器的内容物递送到靶部位,例如环境,例如受试者的表面,如受试者的皮肤。
[0271] 在其它实施方案中,所述容器可以是多次用容器,其中该容器可以或可以不预先装载(例如,由生产商或使用者装载)内容物,例如化妆品产品,并且可以被使用者,例如消费者或医疗专业人员使用一次以将容器的内容物递送到靶部位,例如环境,例如受试者的表面,如受试者的皮肤。该容器可以重新装载(例如,由生产商或使用者装载)内容物,例如氨氧化细菌及氨、铵离子和尿素,并且可以被相同或不同的使用者,例如消费者或医疗专业人员再次使用用于将容器的内容物递送到靶部位,例如环境,例如受试者的表面,如受试者的皮肤。
[0272] 预先装载或重新装载内容物(如化妆品)可以包含灭菌过程以确保容器的内容物是无菌的。
[0273] 在一些实施方案中,容器可以是以下形式:注射器,瓶子,安瓿,施用器,袋(pouch),如吸嘴袋(spout pouch),如具有螺旋盖(screw top)。可以将泵附接至瓶子以分配来自容器的内容物。容器可以提供气溶胶喷雾或雾。容器可以是可挤压的容器以允许通过由封闭物覆盖的开口分配内容物。容器可以具有螺旋式封闭、非溢出(non-spill)封闭、弹扣盖(a snap cap)封闭或扣瓣(snap flap)封闭。容器可以具有位于发生内容物分配的分配区域上部的顶盖。封闭可以是完全可移除或部分可移除的,例如可从容器的主体移除,或可部分移除并通过铰链附接。容器可以是单次使用包装,例如层压包装,例如可以撕开以分配内容物,并在使用后处置。
[0274] 容器,例如最终使用容器可以配置为抑制抑制材料逆行流动,例如回流,例如反向流动,例如向后移动入最终使用容器中。容器,例如最终使用容器可以配置为抑制材料(如污染物)逆行流动,例如回流,例如反向流动,例如向后移动入所述最终使用容器中。所述污染物是大气的,如气溶胶,或液体,如水,或固体或气体。
[0275] 最终使用容器可以包含其中布置有化妆品产品的储器,和可以分配来自所述储器的所述化妆品产品的分配器,其中所述分配器抑制材料逆行流动入所述储器中。
[0276] 最终使用容器可以包含布置有所述化妆品产品的储器,和可以分配来自储器的化妆品产品的分配器,其中所述分配器抑制分配的化妆品或大气气溶胶逆行流动入所述储器中。
[0277] 最终使用容器可以是抗逆行流动分配器,其包含布置在所述分配器中并且在所述储器近端的第一压力启动阀,和布置在所述分配器中并且在所述储器远端的第二压力启动阀,其中所述第一阀的启动压力高于所述第二阀的启动压力。
[0278] 最终使用容器可以包含抗逆行机构(anti-retrograde mechanism),其配置为阻止所述化妆品产品以与分配所述化妆品成品相关的操作方向相反的方向运动。
[0279] 在一些实施方案中,所述容器可基本上不含生物体,例如微生物。在实施方案中,容器可以不含其它微生物。可以对容器灭菌以提供基本上不含或不含生物体(例如微生物)的容器。
[0280] 容器可置于粉末、化妆品、乳霜、棒状物、气雾剂、药膏、擦拭物或绷带中。容器可以作为粉末、化妆品、乳霜、棒状物、气雾剂、药膏、擦拭物或绷带提供。
[0281] 在一些实施方案中,容器可包含指示剂组分。指示剂组分可以是颜色标志物,该颜色标志物在微生物与容器内部接触后可显色。
[0282] 容器可由适于容纳内容物,例如化妆品,例如本文公开的化妆品成品的任何材料构造而成。例如,容器可被构造并排列成至少部分对气体交换、水和光中的至少一种有抗性。例如,容器可由玻璃或聚合材料构造而成。
[0283] 最终使用容器可以由以下构成或包含以下:聚合物,如聚对苯二甲酸乙酯(PET)、高密度聚乙烯(HDPE)、聚丙烯、聚碳酸酯、聚四氟乙烯 聚偏二氟乙烯(polyviylidene fluoride,PVDF)、或纤维素。最终使用容器可以由玻璃构成或包含玻璃。
传感器(例如氧传感器)可以包含在最终使用容器内,其可以指示活细菌的存在。最终使用容器可以允许通过至少约5,10,20,30,40,50,60,70,80,90,95,99或100%的电离辐射传输通过所述最终使用容器,所述电离辐射例如用gamma射线,如用x-射线,如来自同位素,如钴
60,或用紫外线,例如紫外线C(UVC)。
[0284] 在一些实施方案中,容器可以包含一种或多种其它微生物,如氨氧化细菌。可以在容器中提供选自乳杆菌属,链球菌属,双歧杆菌属及其组合的属的生物体。可以在容器中提供氨氧化细菌的活化剂。
[0285] 本文描述的容器可以适合于递送一种或多种化妆品产品。本文描述的容器可以适合于递送一种或多种治疗产品。
[0286] 包含或不包含容器内容物的容器,递送系统或递送装置的重量可以小于约50、100、200、300、400、500、600、700、800、900、1000、1500,或2000克。
[0287] 4.分配化妆品产品/递送化妆品产品的方法
[0288] 可以以离散的体积或量从容器(例如最终使用容器)递送产品。对于每次容器致动,容器可以分配相同的体积或大体上相同的体积。可以例如以约0.1ml和约5ml的离散的体积分配产品。离散体积例如可以是约0.1ml、0.2ml、0.25ml、0.3ml、0.4ml、0.5ml、0.6ml、0.7ml、0.75ml、0.8ml、0.9ml、1.0ml、1.1ml、1.2ml、1.4ml、1.5ml、1.6ml、1.8ml、2.0ml、
2.25ml、2.5、ml、2.75ml、3ml、3.25ml、3.5ml、3.75ml、4.0ml、5.0ml、6.0ml、7.0ml、8.0ml、
9.0ml,或10ml。
[0289] 对于每次容器致动,容器可以分配相同的量或大体上相同的量。可以例如以约0.1g和约5g的离散的量分配产品。离散的量例如可以是约0.1g、0.2g、0.25g、0.3g、0.4g、
0.5g、0.6g、0.7g、0.75g、0.8g、0.9g、1.0g、1.1g、1.2g、1.4g、1.5g、1.6g、1.8g、2.0g、2.25g、
2.5,g、2.75g、3g、3.25g、3.5g、3.75g、4.0g、5.0g、6.0g、7.0g、8.0g、9.0g,或10g。
[0290] 容器可以配置为分配用于第一致动的第一体积或量,和用于第二致动的第二体积或量。
[0291] 容器中化妆品产品的总体积可以是在约0.1和约100液体盎司、约0.2和约50液体盎司、约0.5和约25液体盎司、约0.1和约10液体盎司、约2.0和约7液体盎司、约3和约5液体盎司之间。在一些实施方案中,所述体积可以是约3.4液体盎司。
[0292] 可以构建容器以含有约0.1和约100液体盎司、约0.2和约50液体盎司、约0.5和约25液体盎司、约0.1和约10液体盎司、约2.0和约7液体盎司、约3和约5液体盎司之间,或约3和5液体盎司之间。在一些实施方案中,可以将容器构建为含有约3.4液体盎司。所述容器可以是单隔室容器,或本文公开的任何其它容器。
[0293] 5.产品的使用
[0294] 可以1次(1x)每天、两次(2x)每天、三次(3x)每天、4x每天、5x每天、6x每天、7x每天、8x每天,或更多地使用产品,例如化妆品产品,例如化妆品成品。可以1x每周、2x每周、3x每周、4x每周、5x每周、6x每周,或7x每周使用所述产品。
[0295] 最终使用容器中化妆品产品的量对于不超过预定量的应用,例如X次应用可以是足够的,其中X在约1和约60之间,例如在约1-3、4-6、7-9、10-13、14-17、18-21、22-25、26-29、30-33、34-37、38-41、42-45、46-49、50-53、54-57、58-60之间。最终使用容器中化妆品产品的量对于不超过预定量的应用,例如X次应用可以是足够的,其中X在约1和约180之间,例如约1-60、61-120、121-180之间。最终使用容器中化妆品产品的量对于不超过预定量的应用,例如X次应用可以是足够的,其中X在约1和约750之间,例如约1-100、101-200、201-300、
301-400、401-500、501-600、601-750之间。
[0296] 可以选择化妆品成品中化妆品产品的量,使得化妆品成品对于不超过预定量的应用,例如X次应用是足够的,其中X是约1和180之间。在实施方案中,X可以是在约1和180之间,例如在约1-60、61-120、121-180之间。最终使用容器中化妆品产品的量对于不超过预定量的应用,例如X次应用可以是足够的,其中X在约1和约750之间,例如在约1-100、101-200、201-300、301-400、401-500、501-600、601-750之间。
[0297] 例如,对于洗发剂,应用的次数可以是约15-40次,例如1次每天持续约4周。对于清洁剂,应用的次数可以是约数次每天,持续约4周,例如约15-90次应用。
[0298] 可以选择化妆品成品中化妆品产品的量,使得化妆品成品可以使用不超过约预定的使用次数,例如在约500-750次使用、200-500次使用、100-200次使用、50-100次使用、40-50次使用、30-40次使用、20-30次使用、10-20次使用,5-10次使用,或1-5次使用之间。
[0299] 可以选择化妆品成品中的化妆品产品的量,使得化妆品成品可以使用不超过约预定的天数,例如在约500-750天、300-500天、100-300天、50-100天、40-50天、30-40天、20-30天、10-20天、5-10天,或1-5天之间。预定的应用次数,使用次数或天数可以是约28。
[0300] 可以选择化妆品成品中的化妆品产品的量,使得所述化妆品成品对于不超过Y次/天使用的X天是足够的,其中X是在约1天和约42天(6周)之间,并且Y是约0次使用每天至约10次使用每天之间。例如,X天可以是约1-6、7-10、10-13、14-17、18-21、22-25、26-29、30-
33、34-37、38-42天;并且Y可以是约0-1、2-4、5-7、8-10次使用每天。
[0301] 化妆品成品可以具有失效期。这可以是在此日期之后,不应使用该化妆品成品,例如应当处理掉该化妆品成品的日期。失效期可以基于变质的失效期。此日期可以是该日期后预期产品(如化妆品产品,如化妆品成品)以某种方式降解或受到污染将使其不适合其预期的目的的日期。在一些实例中,其可以是该日期后,产品(如化妆品产品,如化妆品成品)已降解或受到污染的日期。可以通过在最终使用容器上的符号或一种或多种书面文字的方式提供该产品已经降解或受到污染的指示。在实施方案中,位于化妆品产品或化妆品产品包装(如最终使用容器)上或内的指示剂提供该产品已经降解或受到污染的一些迹象。例如,这可以通过颜色指示剂的方式实现。
[0302] 失效期可以是基于生物群系相容的失效期。该日期可以是其后预期产品(如化妆品产品,如化妆品成品)以某种方式受到污染使得其不适合其预期的目的的日期。在一些实例中,其可以是在该日期后,产品(如化妆品产品,如化妆品成品)已受到污染的日期。可以通过在最终使用容器上的符号或一种或多种书面文字的方式提供该产品已经受到污染的指示。在实施方案中,位于化妆品产品或化妆品产品包装(如最终使用容器)上或内的指示剂提供该产品应受到污染的一些迹象。例如,这可以通过颜色指示剂的方式实现。污染物可以指可使产品不适合其预定用途的事物,并且可以包括在密封产品时和/或在产品灭菌之后不在化妆品成品中的任何物品。
[0303] 化妆品成品可以具有期满或寿命的指示。该期满的指示可以是产品的推荐寿命,并且其可以是预定的时间段。预定的时间段可以表述为时间单位,例如以天、周或月表示。
[0304] 化妆品成品可以包含在预先选择的时间段后期满,或寿命,如推荐的寿命的指示,如以天数表示,所述指示是从下列之一的日期起小于X天:制造、填充、封装、运输、释放到商业、或销售。在实施方案中,X可以是约5-7天、约5-10天、约7-14天、约14-21天、约21-28天、约28-35天、约35-42天、约42-49天、约49-56天、约56-63天、约63-70天、约70-77天、约75-100天、约100-150天、约150-200天、约200-300天、约300-400天、约400-750天。在某些实施方案中,X可以是约28天,例如28天(4周)。
[0305] 在实施方案中,X可以涉及化妆品成品的打开或开封,或所述化妆品成品的首次使用。约5-7天、约5-10天、约7-14天、约14-21天、约21-28天、约28-35天、约35-42天、约42-49天、约49-56天、约56-63天、约63-70天、约70-77天、约75-100天、约100-150天、约150-200天、约200-300天、约300-400天、约400-750天。在某些实施方案中,X可以是约28天,例如28天。
[0306] 在实施方案中,期满或寿命(如推荐的寿命)的指示表述为使用或应用的预先选择的数目。所述指示可以表示为约以下之间的预先选择的数目:约5-7,约5-10,约7-14,约14-21,约21-28,约28-35,约35-42,约42-49,约49-56,约56-63,约63-70,约70-77,约75-100,约100-150,约150-200,约200-300,约300-400,约400-750天。
[0307] 在实施方案中,化妆品成品可以具有失效期或寿命(如推荐的寿命),其以下表述:
[0308] a)以自预先选择的事件,如所述化妆品成品的开封或所述化妆品成品的首次使用起的时间单位,如天数计;和/或
[0309] b)以使用或应用的次数表示。
[0310] 产品可以与含细菌的产品结合使用,例如与其组合使用,所述产品例如含有氨氧化细菌(AOB)的产品,例如含有真养亚硝化单胞菌的产品,例如含有真养亚硝化单胞菌D23的产品。
[0311] 可以使用本文公开的一种或多种化妆品产品(例如化妆品成品)来提供允许保持细菌的方法,所述细菌例如AOB,例如真养亚硝化单胞菌,例如真养亚硝化单胞菌D23。
[0312] 方法可以包括在使用本文公开的一种或多种化妆品产品或化妆品产品(如化妆品成品)之前或之后应用细菌,例如AOB,例如真养亚硝化单胞菌,例如真养亚硝化单胞菌D23。
[0313] 方法可以包括在应用化妆品产品之前等待一段时间,例如预定的时间段。所述时间段可以包含其中未使用非生物群系友好的化妆品产品的时间段。
[0314] 可以定期使用化妆品产品(例如化妆品成品),例如每天、每周、每月,或在以下之一的范围中:每1-2天、每2-5天、每5-10天、每10-15天、每15至30天。
[0315] 在实施方案中,可以在最后应用化妆品产品和下一次应用化妆品产品和/或细菌(例如氨氧化细菌)之间的时间段不向受试者应用非生物群系友好的化妆品产品。
[0316] 6.产品的灭菌
[0317] 可以使用灭菌来制备用于使用,例如用于销售或用于消费者使用的产品,例如化妆品产品,例如化妆品成品。可以在制造过程中的一个或多个步骤中灭菌所述产品。
[0318] 可以通过照射或通过加热进行灭菌。可以提供化妆品成品,其包含容器中布置的灭菌的(例如经照射的,例如加热灭菌的)化妆品产品。容器可以优选是防菌容器,或可以与外部环境密封的容器。
[0319] 可以对化妆品产品的单一组分,化妆品产品的两种或多种组分的混合物,或混合物中所述产品的所有组分进行灭菌(例如加热灭菌或照射),以提供化妆品产品,例如化妆品成品。可以在制造过程期间的任何步骤中进行灭菌。例如,可以在布置到容器中之前进行灭菌,例如在布置到用于商业释放的容器中之前。可以在将化妆品产品或化妆品产品的一种或多种组分布置到容器(例如用于商业释放的容器)中之后进行灭菌。可以在将化妆品产品布置到容器中后进行灭菌,例如在密封用于商业释放的容器之前或之后在用于商业释放的容器中。
[0320] 可以通过以下描述来测量确定化妆品成品或化妆品产品是无菌的。当所有细菌、霉菌、真菌或病毒的至少10,20,30,40,50,60,70,80,90,95,99或99.9%是死的或不能进行细胞分裂时,可以确定化妆品成品是无菌的。当所有细菌、霉菌、真菌或病毒是死的或不能-1进行细胞分裂时,可以确定化妆品成品是无菌的。当实现无菌保证水平(SAL)小于约10 ,
10-2,10-3,10-4,10-5,10-6,10-7,10-8,10-9时,可以确定化妆品成品是无菌的。当辐射诱导的DNA损伤足以抑制细胞分裂时,可以确定化妆品成品是无菌的。在实施方案中,无菌可以被认为是绝对状态,其中一切事物,如所有细菌、霉菌、真菌和病毒是死的,例如就给定测试方法学(如无菌保证水平)的限度而言是死的。可以如概述于美国药典USP31-NF26第670页<
1211>(Pharmacopeial Forum:Volume No.30(5),第1729页)“Sterilization and 
Sterility Assurance of Compendial Articles”和USP31-NF26,第85页<71>“Sterility Tests”进行无菌测试,其各自通过引用以其整体并入本文。当最终使用容器是未开启的(例如工厂密封未被破坏)时,可以认为化妆品成品是无菌的。
[0321] 可以在化妆品产品的单一组分,化妆品产品的两种或或多种组分的混合物,或混合物中所述产品的所有组分上进行照射,例如gamma照射以提供化妆品产品。可以在制造过程期间的任何步骤下进行照射。例如,可以在布置到容器中之前进行照射,例如在布置到用于商业释放的容器中之前。可以在将化妆品产品或化妆品产品的一种或多种组分布置到容器(例如用于商业释放的容器)中之后进行照射。可以在将化妆品产品布置到容器中后进行照射,例如在密封用于商业释放的容器之前或之后在用于商业释放的容器中。
[0322] 化妆品产品或化妆品成品可以是经照射的,例如用电离辐射,如用gamma射线,例如用x射线,例如来自同位素,如钴60,或用紫外线,如紫外线C(UVC)。化妆品产品或化妆品成品可以是经照射的以充分提供无菌产品。在实施方案中,如美国药典第1211章的灭菌和无菌保证药典制品(Sterilization and Sterility Assurance Compendial Articles)中所定义的(前段中引用,并且通过引用将其全部内容并入本文),“在最严格的无菌定义中,样本只有当其完全没有活的微生物时才视为无菌的”。无菌产品的特征可以是其不含(如基本上不含)能够生长的微生物,例如细菌,例如真菌,例如通过U.S.P.71无菌性测试方法和标准所确定(在前面段落中引用并且通过引用将其全部内容并入本文)。例如,当针对能够生长的微生物攻击时,所述化妆品产品在合适的培养基上显示无生长,例如当通过U.S.P.71无菌性测试方法和标准测量所述微生物时。
[0323] 化妆品产品或化妆品成品可以包含选自氧化剂例如天然存在的氧化剂、自由基清除剂或自由基猝灭剂的外源添加的添加剂。自由基清除剂或氧化剂可以作为灭菌过程的部分添加到化妆品产品。自由基清除剂或氧化剂可以包括以下的一种或多种:生育酚,生育三烯酚,抗坏血酸,多酚,异黄酮,辅酶Q10,和其它类似化合物。由基清除剂或氧化剂可以选自下组:脂溶性或水溶性自由基清除剂或其组合。
[0324] 化妆品产品或所述妆品成品可以含有多种成分,并且在混合多种成分后可以是经照射的。在实施方案中,在所述化妆品产品放置在最终使用容器后,所述化妆品成品可以是经照射的。在实施方案中,在封闭所述最终使用容器后,所述化妆品成品可以是经照射的。在实施方案中,在密封所述最终使用容器后,所述化妆品成品可以是经照射的。在实施方案中,在封闭所述最终使用容器前,所述化妆品成品可以是经照射的。实施方案中,化妆品成品或最终使用容器包含指示所述化妆品产品或所述化妆品成品是否已经经照射的指示剂。
[0325] 在实施方案中,化妆品产品可到达加工设施。产品可以通过批次和产品代码接受,所述代码允许运行生成,调度,处理,认证和发货产品以运输。产品可以根据合适的条件和配置装载到载体中。剂量计可以放置在载体内,周围或外部。然后可以将产品暴露至照射,例如钴60,例如钴60源架(source rack)。可以在产品照射完成后分析剂量计以确认已经递送所需剂量。可以提供剂量计以验证该过程。如果处理历史是可接受的和/或符合规格,则可以释放产品并运输以使用或进一步分配。
[0326] 在实施方案中,照射可以作为批处理进行。在其它实施方案中,照射可以作为连续过程进行。在批次处理或连续处理中,单个元件或多个元件(例如元件的包装盒)可以是经照射的。
[0327] 在实施方案中,辐射吸收剂量由kGy提供。例如为提供灭菌而吸收的辐射可以在约10kGy至约25kGy之间。在实施方案中,吸收的辐射可以在约15kGy至约25kGy之间。
[0328] 在实施方案中,化妆品成品的无菌保证水平(SAL)可以小于约10-1,10-2,10-3,10-4,10-5,10-6,10-7,10-8,10-9,通过这里描述的条件实现。在实施方案中,可以实现10-3或更高的SAL。
[0329] 基于经照射的产品的密度提供暴露时间。例如,由于密度的差异,产品的单一单位的照射时间可以小于产品的多个单位的暴露时间。
[0330] 在实施方案中,可以利用加热灭菌。化妆品产品或化妆品成品可以是加热的,例如通过微波炉或高压灭菌器。加热可以足以提供无菌产品。无菌产品的特征可以在于其基本上不含有能够生长的微生物,例如细菌,例如真菌,与U.S.P第1211章相一致,如通过U.S.P.71无菌性测试方法和标准所确定的,其各自在上文引用并且通过引用以其整体并入本文。当针对能够生长的微生物攻击时,所述化妆品产品显示无生长,例如当通过本文描述的测试方法测量所述微生物时,则化妆品产品或化妆品成品可以确定为是无菌的。
[0331] 在实施方案中,化妆品产品或化妆品成品可以含有多个成分并且在与多个成分混合后加热。在实施方案中,在将所述化妆品产品布置在所述最终使用容器中后加热化妆品产品或化妆品成品。在实施方案中,在闭合所述最终使用容器后加热所述化妆品成品。在实施方案中,在封闭所述最终使用容器后加热所述化妆品成品。在实施方案中,在闭合所述最终使用容器前加热所述化妆品成品。在实施方案中,化妆品成品或最终使用容器包含指示所述化妆品产品或所述化妆品成品是否已经经加热的指示剂。在实施方案中,在配制期间或之后,如混合后,或填充后,如布置后,或在密封最终使用容器后,将化妆品产品或化妆品成品在处于或高于121摄氏度加热至少15分钟。在配制期间或之后,如混合后,或填充后,如布置后,或在密封最终使用容器后,化妆品产品或化妆品成品可以不在高于140华氏度加热。可能由于最终使用容器和/或最终使用容器的内容物(例如化妆品产品)在高于140华氏度下经历降解。
[0332] 7.制造化妆品产品,例如化妆品成品的方法
[0333] 提供了制备化妆品成品的方法,其可以包括将化妆品产品放置在最终使用容器中以形成填充的最终使用容器。然后处理该填充的最终使用容器以杀死或灭活细菌,其然后可以提供化妆品成品。可以通过本文描述的灭菌技术实现杀死或失活细菌。
[0334] 可以提供允许制造或制备生物群系友好的化妆品产品的其它方法。该方法可以包括:从一批生物群系友好的成分中选择第一组分,如清洁剂或表面活性剂;从一批生物群系友好的成分中选择第二组分,如粘度修饰剂;和提供所述第一和第二组分(或更多)的混合物,从而制备生物群系友好的化妆品产品。
[0335] 所述方法还可以包括从一批生物群系友好的成分中选择第三组分,如湿润剂。所述方法还可以包括从一批生物群系友好的成分中选择第四组分,如香味剂。可以选择的额外组分包括,例如第五、第六和第七组分,如护理剂、脂质层增强剂和乳化剂。
[0336] 一旦已经获得混合物,可以在密封最终使用容器中的化妆品之前或之后实现灭菌。
[0337] 还可以提供方法,其中提供第一和第二组分,其中每个组分已经显示出是生物群系友好的。方法可以包括组合第一和第二组分以形成混合物。可以通过本文公开的方法来实现确定是否混合物是生物群系友好的,从而制备化妆品成品。
[0338] 还可以提供制造(例如评估)化妆品产品或化妆品成品的其它方法。方法可以包括提供具有选自表3的至少2种组分的产品。方法还可以包括获得化妆品产品对于用户皮肤上的细菌(例如有益的细菌,例如氨氧化细菌)是否安全的评估,从而制造化妆品产品或化妆品成品。评估可以包括评估如本文公开的氨氧化细菌的存活力,或评估氨氧化细菌在与化妆品产品或该化妆品产品的一种或多种组分接触后产生亚硝酸盐的能力。
[0339] 8.测试化妆品产品(例如化妆品成品)或其组分
[0340] 可以进行测试以确认产品(例如化妆品产品,例如化妆品成品,或其组分)不含微生物,例如细菌,例如真菌。
[0341] 评估产品(例如化妆品产品,例如化妆品成品,或其组分)的方法可以包括将产品的部分(例如等分试样)与测试生物体(例如氨氧化细菌)接触,并评估所述化妆品产品对测试生物体的影响。评估可以包括评估所述化妆品产品对所述测试生物体,如氨氧化细菌产生亚硝酸盐的能力的影响。
[0342] 评估产品可以包括确定氨氧化细菌产生亚硝酸盐的能力是否满足预先选择的标准,例如至少具有恢复为在给定的时间段内产生亚硝酸盐的能力,如本文公开的实施例的附图所示。
[0343] 评估产品可以提供所述化妆品成品鉴定为“测试并确认为生物群系友好的”或“测试并确认为生物相容的”。
[0344] 评估产品可以提供所述化妆品成品鉴定为“测试并确认具有活的测试生物体”。评估可以提供所述化妆品成品鉴定为“测试并确认具有活的氨氧化细菌”。
[0345] 可以提供方法以选择氨氧化细菌友好的成分。方法可以包括获得氨氧化细菌(AOB)细胞悬浮液,例如从连续培养系统中。可以从所述细胞悬浮液收获AOB细胞,并且可以在储备溶液中洗涤所述细胞。收获来自细胞悬浮液的AOB细胞可以包括离心所述细胞悬浮液。储备溶液可以包含50mM Na2HPO4-2mM MgCl2,pH 7.6。可以以5.0的最终光密度(OD600)(约1010个细胞/ml)在储备溶液中悬浮AOB细胞,并且可以在约4℃贮存AOB细胞。可以在10ml补充有铵(NH4+)(如50mM铵)且以含有预定终浓度含有产品(例如化妆品产品)或组分(例如赋形剂,如表3中所列的那些,或任何其它期望的赋形剂)的AOB培养基中将所述AOB细胞稀释至0.5的最终光密度(OD600)(约109个细胞/ml),并培养第一预定的时间段以提供温育的培养物。可以在约30℃下发生温育。可以收集等分试样的温育的培养物,并且可以测量温育的培养物的上清液中亚硝酸盐的浓度。可以通过离心培养物来获得上清液以提供上清液和细菌团粒。
[0346] 本文公开的AOB培养基可以补充有铵(NH4+),例如约1,5,10,20,30,40,50,60,70,80,90,100,120,140,160,180,200,250,300,350,400,450,500mM的铵,或更高浓度。
[0347] 基于在时间段内的亚硝酸盐测量(一次测量或多次测量),基于温育的培养物的上清液中亚硝酸盐的浓度,产品或组分(如赋形剂)可鉴定为氨氧化细菌友好的成分。
[0348] 方法还可以包括在AOB培养基中洗涤细菌团粒,在补充有NH4+的AOB培养基中悬浮所述细菌。方法还可以包括在补充有NH4+的AOB培养基中温育所述细菌团粒,并在第二预定的时间段回收AOB细胞以提供回收的AOB细胞样品。可以测量所述回收的AOB细胞样品中OD600值和亚硝酸盐积累中的至少一个。
[0349] 基于所述回收的AOB细胞样品中OD600值和亚硝酸盐积累中的至少一个,产品或组分(如赋形剂)可以鉴定为氨氧化细菌友好的组分。
[0350] 在实施方案中,提供了选择氨氧化细菌友好组分的方法,其包括获得氨氧化细菌(AOB)的样品,和将其与产品或组分(例如赋形剂)接触第一预定的时间段以提供温育的培养物。所述方法还可以包括收集所述温育的培养物的等分试样,并在所述温育的培养物的上清液中测量亚硝酸盐的浓度。所述方法还可以包括基于在温育的培养物的上清液中的亚硝酸盐的浓度来将产品或组分(例如赋形剂)鉴定为氨氧化细菌友好的组分。
[0351] 方法还可以包括将来自所述温育的培养物的AOB与NH4+接触,和在第二预定的时间段之后,测量回收的AOB细胞样品的OD600值和亚硝酸盐积累中的至少一个。所述方法还可以包括基于所述回收的AOB细胞样品中OD600值和亚硝酸盐积累中的至少一个来将产品或组分(例如赋形剂)鉴定为氨氧化细菌友好组分。
[0352] 产品或组分(如赋形剂)的预定的终浓度可以是在约0%和约100%之间。第一预定的时间段可以是至少以下之一:约1分钟、约10分钟、约60分钟、约2小时、约4小时、约6小时、约12小时,和约24小时。第二预定的时间段是至少以下之一:约1分钟、约10分钟、约60分钟、约2小时、约4小时、约6小时、约12小时、约24小时、约36小时、约48小时、约72小时、约96小时。
[0353] 取决于测试的成分、赋形剂或组分,测量的亚硝酸盐的浓度可以允许鉴定生物群系友好的成分、赋形剂或组合物,例如氨氧化细菌友好的成分、赋形剂或组合物。在某些实施方案中,测量的亚硝酸盐产生可以处于或高于亚硝酸盐产生的某些值,以便有资格作为生物群系友好的成分、赋形剂或组合物。可以在将AOB与具有NH4+的温育的培养物接触后的某些时间段测量该亚硝酸盐产生浓度。时间段可以是1分钟,5,10,20,30,40,50,60,120分钟。所述时间段可以是3,4,5,10,15,20,24,36,48,72,或96小时或更多。
[0354] 亚硝酸盐产生可以处于或高于某些值(例如处于或高于10微摩尔,20,50,100,200,300,400,500,600,700,800,900,1000,1500,2000,3000微摩尔亚硝酸盐浓度,或更高)以便将成分、赋形剂或组合物鉴定为生物群系友好的成分。
[0355] 在实施方案中,在48小时时段结束后测量的超过1000微摩尔亚硝酸盐产生将是生物群系友好的成分、赋形剂或组合物的指示。在其它实施方案中,在48小时时段结束后测量的超过100微摩尔亚硝酸盐产生将是生物群系友好的成分、赋形剂或组合物的指示。在其它实施方案中,在48小时时段结束后测量的超过10微摩尔亚硝酸盐产生将是生物群系友好的成分、赋形剂或组合物的指示。
[0356] 生产生物群系友好的组合物的方法可以包括获得化合物(或多个化合物)对氨氧化细菌友好的知识,和在最终使用容器中包装该化合物(或多个化合物),以提供产品,例如化妆品产品,例如化妆品成品。
[0357] 生产生物群系友好的组合物的方法可以包括获得化合物对氨氧化细菌友好的知识,和将所述化合物与氨氧化细菌接触以提供化妆品产品。
[0358] 9.分配产品的方法
[0359] 本文描述的方法提供了分配生物群系友好的化妆品成品的方法。在一些实施方案中,化妆品成品具有预定的使用寿命,该寿命后细菌污染的危险是不可接受的。公开的方法向最终用户或订户提供产品接近或到达其推荐的使用寿命结束的定期通知,或提供化妆品成品的新单位。任选地,方法包括“再循环”功能。
[0360] 分配化妆品成品的方法可以包括向最终用户供应(或使指定者供应)化妆品成品的第一单位。方法还可以包括向所述最终用户,或向由所述最终用户指定的实体,如第二最终用户提供(或使指定者提供)下列之一或两者:i)所述化妆品成品的后续单位,或第二化妆品成品的单位;和/或ii)所述第一单位已经达到其推荐的寿命末期的通知。所述方法还可以包括任选地向所述最终用户或向由所述最终用户指定的实体,如第二最终用户提供(或使指定者提供)关于处置,如再循环,所述化妆品成品的第一单位的信息,所述化妆品成品的第一单位例如为已过推荐的寿命的化妆品成品。这可以允许分配化妆品成品。
[0361] 方法还可以包括向最终用户供应化妆品成品的第一单位,和向所述最终用户提供化妆品成品的后续单位,或所述第一单位已经到达其推荐寿命末期的通知。方法还可以包括向最终用户提供关于处置,如再循环,所述化妆品成品的第一单位的信息,从而分配化妆品成品,所述化妆品成品的第一单位例如为已过推荐的寿命的化妆品成品。
[0362] 化妆品成品的第一单位可以包含本文描述的化妆品产品。化妆品成品的第一单位可以包括不含或基本上不含细菌或真菌的化妆品产品。化妆品成品的第一单位可以包含不含或基本上不含防腐剂的化妆品产品。
[0363] 化妆品成品的第一单位可以包含化妆品产品,其选自或包括以下的一种或多种或布置于以下的一种或多种中:婴儿用品,例如婴儿洗发剂、婴儿洗剂、婴儿油、婴儿粉、婴儿霜;浴用制剂,例如浴油、浴片、浴盐、泡沫浴、浴用胶囊;眼妆制剂,例如眉笔、眼线膏、眼影、洗眼剂、眼部卸妆液、睫毛膏;香料制剂,例如古龙香水、花露水、香水、香粉(喷粉和滑石粉)、香囊;发用制剂,例如护发剂、发胶、直发膏、烫发剂、漂洗剂、洗发剂、滋补剂、敷料、毛发梳理助剂、卷发液;染发制剂,例如发用染料和颜料、染发剂、染发漂洗剂、染发洗发剂、浅色染发剂、头发漂白剂;化妆制剂,例如粉饼、粉底、腿部和身体涂剂、唇膏、妆前底霜、胭脂、定妆剂;美甲制剂,例如底部涂层和内部涂层、角质层软化剂、指甲霜和洗剂、指甲延长物、指甲油和彩釉、指甲油和彩釉清洗剂;口腔卫生用品,例如牙粉、漱口水和口气清新剂;浴用肥皂,如泡沫沐浴露和清洗剂、除臭剂、灌洗液、女性卫生除臭剂;剃须用制剂,例如剃须后洗剂、胡须软化剂、滑石粉、剃须前洗剂、剃须膏、剃须皂;护肤制剂,例如清洁剂、脱毛剂、面部及颈部、身体和手、脚部粉剂和喷雾、保湿剂、夜用制剂、膏状面膜、皮肤清新剂;和晒黑制剂,例如防晒凝胶、防晒霜和防晒液及室内晒黑制剂。
[0364] 在实施方案中,化妆品成品的第一单位可以包含洗发剂。在实施方案中,化妆品成品的第一单位可以包含泡沫沐浴露。在实施方案中,化妆品成品的第一单位可以包含护理剂。
[0365] 方法可以向最终用户供应来自基于因特网的销路(internet-based outlet)的所述化妆品成品的第一单位,例如通过出售或赠送来进行。方法可以向所述最终用户供应来自非基于因特网的销路(non-internet-based outlet)如商店的所述化妆品成品的第一单位,例如通过出售或赠送来进行。
[0366] 可以在预先选择的天数内,例如供应化妆品成品的第一单位之后,或化妆品成品的第一单位的推荐的寿命结束之前,或首次预期使用产品之前,或当第一单位已经到达例如通过生物传感器确定的降低的活性水平时向第二最终用户提供以下之一或两者:i)所述化妆品成品的后续单位,或第二化妆品成品的单位;和/或ii)所述第一单位已达到其推荐寿命末期的通知。
[0367] 可以通过电子邮件,电子应用(如智能手机应用)或内置于瓶“坞(dock)”中的蓝牙重量传感器构件来计算预先选择的天数。
[0368] 预先选择的天数可以是约7天、14天、21天、28天、35天,或42天CV,或者在以下之间:约5-7天、8-11天、12-15天、16-19天、20-23天、24-27天、28-31天、32-35天、36-39天、40-43天。
[0369] 化妆品成品的第二单位或后续单位可以包含本文描述的化妆品产品。化妆品成品的后续单位可以包含化妆品产品,其可以不含或基本上不含细菌或真菌。化妆品成品的后续单位可以包含化妆品产品,其不含或基本上不含防腐剂。
[0370] 化妆品成品的后续单位可以包含化妆品产品,其选自或包括以下的一种或多种或布置于以下的一种或多种中:婴儿用品,例如婴儿洗发剂、婴儿洗剂、婴儿油、婴儿粉、婴儿霜;浴用制剂,例如浴油、浴片、浴盐、泡沫浴、浴用胶囊;眼妆制剂,例如眉笔、眼线膏、眼影、洗眼剂、眼部卸妆液、睫毛膏;香料制剂,例如古龙香水、花露水、香水、香粉(喷粉和滑石粉)、香囊;发用制剂,例如护发剂、发胶、直发膏、烫发剂、漂洗剂、洗发剂、滋补剂、敷料、毛发梳理助剂、卷发液;染发制剂,例如发用染料和颜料、染发剂、染发漂洗剂、染发洗发剂、浅色染发剂、头发漂白剂;化妆制剂,例如粉饼、粉底、腿部和身体涂剂、唇膏、妆前底霜、胭脂、定妆剂;美甲制剂,例如底部涂层和内部涂层、角质层软化剂、指甲霜和洗剂、指甲延长物、指甲油和彩釉、指甲油和彩釉清洗剂;口腔卫生用品,例如牙粉、漱口水和口气清新剂;浴用肥皂,如泡沫沐浴露和清洗剂、除臭剂、灌洗液、女性卫生除臭剂;剃须用制剂,例如剃须后洗剂、胡须软化剂、滑石粉、剃须前洗剂、剃须膏、剃须皂;护肤制剂,例如清洁剂、脱毛剂、面部及颈部、身体和手、脚部粉剂和喷雾、保湿剂、夜用制剂、膏状面膜、皮肤清新剂;和晒黑制剂,例如防晒凝胶、防晒霜和防晒液及室内晒黑制剂。
[0371] 在实施方案中,化妆品成品的后续单位可以包含洗发剂。在实施方案中,化妆品成品的后续单位可以包含泡沫沐浴露。在实施方案中,化妆品成品的后续单位可以包含护理剂。
[0372] 可以以任何合适的方式递送化妆品成品的后续单位或第二化妆品成品,以向最终用户提供产品。例如,可以通过邮寄或商业递送实体将产品递送至所述最终用户。
[0373] 可以将化妆品成品的后续单位或第二化妆品成品的单位递送至由所述最终用户指定的实体,例如第二最终用户,例如通过邮寄或商业递送实体。
[0374] 可以将所述化妆品成品的所述后续单位或第二化妆品成品的单位递送至由所述最终用户指定的位置,例如通过邮寄或商业递送实体。
[0375] 可以将所述通知递送至所述最终用户,例如通过邮寄或商业递送实体,或电子递送,例如通过因特网或电话,如通过电话呼叫,如通过录制的信息,或文字信息。可以将所述通知递送至实体,如由所述最终用户指定的第二最终用户,例如通过邮寄或商业递送实体,或电子递送,例如通过因特网或电话,如通过电话呼叫,如通过录制的信息,或文字信息。
[0376] 可以将所述通知递送至由所述最终用户指定的位置,例如通过邮寄或商业递送实体,或电子递送,例如通过因特网或电话,例如通过录制的信息,或文字信息。
[0377] 可以提供用于再循环化妆品成品的选项。所述方法可以包括向(或使指定者向)所述最终用户或由所述最终用户指定的实体,如第二最终用户,提供关于处置如再循环所述化妆品成品的第一单位的信息,所述化妆品成品的第一单位为例如已过推荐的寿命的化妆品成品。
[0378] 所述信息可以包含实体(收集实体)的名称或位置,如地址,所述实体将接受所述化妆品成品的第一单位,例如在其推荐的寿命之后接受。
[0379] 方法还可以包括向所述最终用户或指定者提供配置为接收所述化妆品成品的第一单位的容器,例如在其推荐的寿命之后接受。配置为接收化妆品成品的第一单位的容器可以提供有化妆品成品的第一单位。该容器可以提供有所述通知。该容器可以包含地址为所述收集实体,如再循环站的邮寄标签。
[0380] 方法还包括向(或使指定者向)所述最终用户或由如上描述的最终用户指定的实体,如第二最终用户,提供关于处置如再循环所述化妆品成品的后续单位的信息,所述化妆品成品的后续单位为例如已过推荐的寿命的化妆品成品或化妆品产品。
[0381] 还可以提供获得化妆品成品的方法并且可以包括接收化妆品成品的第一单位。获得的方法还可以包括接收:i)所述化妆品成品的后续单位,或第二化妆品成品的单位;和/或ii)所述第一单位已经达到其推荐的寿命的末期的通知。获得的方法还可以包括,任选地,接受有关处置如再循环所述化妆品成品的第一单位的信息,从而获得化妆品成品,所述化妆品成品的第一单位例如为已过推荐的寿命的化妆品成品。
[0382] 还提供了分配化妆品成品的其它方法。所述方法可以包括获得如制造上述要求中任一项的化妆品成品,所述化妆品成品包含布置在最终使用容器中的化妆品产品,例如化妆品(make-up),例如眼线膏。所述方法还可以包括给所述化妆品成品的最终用户传达一种或多种以下信息:所述化妆品成品或化妆品产品是生物群系友好的,如生物群系相容的;所述化妆品成品或化妆品产品不应在指示的失效期或寿命,如推荐的寿命之后使用,所述指示的失效期或寿命基于例如变质,例如生物群系相容性。
[0383] 指示的失效期或寿命,例如推荐的寿命可以如本文所述来表示。例如,所述失效期可以表示为:(a)以自预先选择的事件,如所述化妆品成品的开封或所述化妆品成品的首次使用起的时间单位,如天数计;和/或(b)以使用或应用的次数表示;和/或化妆品成品或化妆品产品不应在X次应用之后使用;和/或化妆品成品或化妆品产品不应在X天使用,例如Y/天使用的X天之后使用,其中X是约(7天)一周和约42天(6周)之间,并且Y是约0次使用每天和约10次使用每天之间,例如,X天可以是约7-10,10-13,14-17,18-21,22-25,26-29,30-33,34-37,38-42天;并且Y可以是约0-1,2-4,5-7,8-10次使用每天。所述方法还可以包括运输所述化妆品成品。
[0384] 10.与氨氧化细菌结合应用产品
[0385] 本文公开的产品可与非致病菌(如氨氧化细菌)的应用结合用于受试者,例如非致病菌,例如氨氧化细菌的用户。
[0386] 维持受试者上氨氧化细菌(AOB)的方法可以包括应用如贯穿本公开所描述的化妆品产品或化妆品成品。方法还可以包括在应用化妆品产品或化妆品成品之前,向受试者应用包含AOB的制剂。所述方法可以包括在应用化妆品产品或化妆品成品之后,向受试者应用包含AOB的制剂。
[0387] 方法还可以包括在应用化妆品产品或化妆品成品之前,向受试者应用包含AOB的制剂,其中大约在以下范围之一之间应用包含AOB的制剂:在应用化妆品产品或化妆品成品之前的约1-5,5-10,10-20,20-30.30-40,40-50,50-60分钟,2-5,5-10,10-15,15-20,20-25小时,2-5,5-10,10-15天,3-4,5-10周。
[0388] 方法还可以包括在应用化妆品产品或化妆品成品之后,向受试者应用包含AOB的制剂,其中大约在以下范围之一之间应用包含AOB的制剂:在应用化妆品产品或化妆品成品之后的约1-5,5-10,10-20,20-30.30-40,40-50,50-60分钟,2-5,5-10,10-15,15-20,20-25小时,2-5,5-10,10-15天,3-4,5-10周。
[0389] 方法可以包括之前或之后不应用非生物群系友好的化妆品产品或化妆品成品。
[0390] 在本公开的方法和系统实施方案中,将AOB的制剂和化妆品产品(例如化妆品成品)的至少一个应用于受试者的预定区域。受试者的预定区域可以是以下至少一个:头部的部分,如脸、颊、颏、睑、唇、鼻,头皮、毛发、前额;颈;腋下;臂;手;腿;足;胸部;腹部区域;臀部;生殖器区域;和背部。
[0391] 在下文中将描述在此涉及的氨氧化细菌。
[0392] 11.氨氧化细菌(AOB)
[0393] 自养型氨氧化细菌(在本文中可以被称为AOB)是如以下文献所记录的专性自养菌:Alan B.Hooper和A.Krummel等人,Alan B.Hooper,Biochemical Basis of Obligate Autotrophy in Nitrosomonas europaea,Journal of Bacteriology,1969年2月,第776-
779页;Antje Krummel等人,Effect of Organic Matter on Growth and Cell Yield of Ammonia-Oxidizing Bacteria,Arch Microbiol(1982)133:50-54。这些细菌只从氨氧化为硝酸盐获得所有的代谢能量(一氧化氮(NO)作为其呼吸链中的中间产物)并且通过固定二氧化碳获得几乎所有的碳。它们不能利用除了一些简单分子外的碳源。
[0394] 氨氧化细菌(AOB)广泛存在于环境中,并且在氨、氧和微量金属的存在下将固定二氧化碳和增殖。AOB可以缓慢生长,并且在AOB可以增殖并使氨减少至无毒水平之前,毒性水平的氨可能会杀死鱼类和其它生物体。AOB的缓慢生长还可能会延迟AOB在施用于皮肤时所产生的NO和亚硝酸盐的健康效益。
[0395] 向鱼缸、皮肤或加工补充针对该目的而生长和储存的充足的活AOB是理想的。AOB不形成孢子,因此以高存活力储存在干燥状态下是困难的,且储存在潮湿状态下使它们具有代谢活性。
[0396] 已经研究了在废水处理用AOB的储存期间的硝化能力的衰减,例如(Munz G,Lubello C,Oleszkiewicz JA.Modeling the decay of ammonium oxidizing 
bacteria.Water Res.2011年1月;45(2):557-64.Oi:10.1016/j.watres.2010.09.022)。
[0397] Cassidy等人(U.S.5,314,542)讨论了亚硝化单胞菌的生长、长期储存和活性恢复,其中他们公开了生长亚硝化单胞菌,去除有毒废物,在适当盐度的无菌水中储存长达一年的时间段,且然后通过添加缓冲液(CaCO3)和200ppm铵复活,所述复活需要72小时。
[0398] 本公开规定如果将AOB保持在低二氧化碳但具有足够氧和氨的条件下,在其中它们积累多磷酸盐约1个倍增时间的时间段(约10小时),则它们积累了足够的多磷酸盐以大大扩充其储存活力、储存时间并且加速其添加和不添加缓冲液和氨时的复活。
[0399] 存在储存充足的多磷酸盐允许AOB(ATP资源)在甚至不存在氨和氧的情况下维持代谢活性,并在原本将会致命的攻击下存活。
[0400] 作为专性自养生物,AOB经由使用能量固定CO2以及还原由氨氧化为亚硝酸盐所生成的等效物来合成蛋白质。生长需要氨、氧、矿物质和二氧化碳。
[0401] 根据K.R.Terry和A.B.Hooper所著的“Polyphosphate and Orthophosphate Content of Nitrosomonas europaea as a Function of Growth”,Journal of 
Bacteriology,1970年7月,第199-206页,第103卷,第I期,亚硝化单胞菌可以以几种代谢状态存在。
[0402] 在本公开中预期的AOB可以包含相对于野生型AOB的突变。这些突变可以例如自然发生、由随机诱变引入或由定点诱变引入。例如,AOB可以缺少野生型AOB通常包含的一个或多个基因或调控DNA序列。AOB还可以包含相对于测序菌株或野生型菌株的点突变、取代、插入、缺失和/或重排。AOB可以是优化AOB的纯化制品。
[0403] 在某些实施方案中,AOB是转基因的。例如,它可以包含野生型氨氧化细菌缺少的一个或多个基因或调控DNA序列。更具体地说,氨氧化细菌可以包含例如报告基因、选择标记、编码酶的基因或启动子(包括诱导型启动子或阻抑型启动子)。在一些实施方案中,额外的基因或调控DNA序列被整合到细菌染色体内;在一些实施方案中,额外的基因或调控DNA序列位于质粒上。
[0404] 在一些优选的实施方案中,AOB与天然存在的细菌的不同之处在于至少一种核苷酸。例如,AOB与天然存在的细菌的不同之处可以在于作为相关途径(例如,氨代谢途径、尿素代谢途径或用于产生一氧化氮或一氧化氮前体的途径)的一部分的基因或蛋白质。更具体地说,AOB可以包含提升所述途径的活性(例如,通过提高该途径的要素的水平或活性)的突变。
[0405] 上述突变可以使用任何合适的技术来引入。用于将突变引入给定位置中的许多方法是已知的。例如,可以使用定点诱变、寡核苷酸定向诱变或位点特异性诱变。具体诱变方案的非限制性实例描述于例如Mutagenesis,13.1-13.105页(Sambrook和Russell编辑,Molecular Cloning A Laboratory Manual,第3卷,第3增补版,2001)中。此外,可从商业供应商得到的充分表征的诱变方案的非限制性实例包括但不限于:Altered Sites.RTM.II体外诱变系统(Promega Corp.,Madison,Wis.);Erase-a-Base.RTM.系统(Promega,Madison,Wis.);GeneTailor.TM.定点诱变系统(Invitrogen,Inc.,Carlsbad,Calif.);QuikChange.RTM.II定点诱变试剂盒(Stratagene,La Jolla,Calif.);以及
Transformer.TM.定点诱变试剂盒(BD-Clontech,Mountain View,Calif.)。
[0406] 在本公开的一些实施方案中,氨氧化细菌可以是制剂的形式。氨氧化细菌可以与本公开的化妆品产品结合或组合使用。例如,AOB或AOB的制剂可以是与化妆品产品分开的产品形式,或者可以与化妆品产品一起提供,例如在相同或不同的最终使用容器中。
[0407] AOB可以是纯性的。氨氧化细菌的制剂,如配制物,如组合物可以包括纯性氨氧化细菌,或基本上由纯性氨氧化细菌组成,或由纯性氨氧化细菌组成。氨氧化细菌可以来自选自由亚硝化单胞菌属、亚硝化球菌属、亚硝化螺菌属、亚硝化囊菌属、亚硝化叶菌属、亚硝化弧菌属及其组合组成的组的属。
[0408] 在一些实施方案中,氨氧化细菌的制剂可以包含一定浓度或量的氨氧化细菌以至少部分治疗病状或疾病。氨氧化细菌的制剂可以包含一定浓度或量的氨氧化细菌,以改变(例如,减少或增加)表面(例如,皮肤表面)上的细菌或细菌属的量、浓度或比例。所述细菌可以是非致病性的或致病性的,或潜在致病性的。
[0409] 在一些实施方案中,氨氧化细菌制剂可以包含约108至约1014CFU/L。所述制剂可以包含至少108、109、1010、1011、2x1011、5x1011、1012、2x1012、5x1012、1013、2x1013、5x1013或1014;或约108-109、109-1010、1010-1011、1011-1012、1012-1013或1013-1014CFU/L。在一些实施方案中,所述制剂可以包含至少108、109、1010、1011、2x1011、5x1011、1012、2x1012、5x1012、1013、2x1013、
13 14 8 9 9 10 10 11 11 12 12 13 13 14
5x10 或10 ;或约10-10、10-10 、10 -10 、10 -10 、10 -10 或10 -10 CFU/ml。
[0410] 在某些方面,所述制剂可以包含约1x109CFU至约10x109CFU。在某些方面,所述制剂可以包含约1x109CFU/L至约10x109CFU/L。
[0411] 在一些实施方案中,氨氧化细菌制剂可以包含约0.1毫克(mg)至约1000mg氨氧化细菌。在某些方面,所述制剂可以包含约50mg至约1000mg氨氧化细菌。所述制剂可以包含约0.1-0.5mg、0.2-0.7mg、0.5-1.0mg、0.5-2mg、0.5-5mg、2.5-5mg、2.5-7.0mg、5.0-10mg、7.5-
15mg、10-15mg、15-20mg、15-25mg、20-30mg、25-50mg、25-75mg、50-75mg、50-100mg、75-
100mg、100-200mg、200-300mg、300-400mg、400-500mg、500-600mg、600-700mg、700-800mg、
800-900mg、900-1000mg、100-250mg、250-500mg、100-500mg、500-750mg、750-1000mg或500-
1000mg。
[0412] 在一些实施方案中,氨氧化细菌的制剂可以包含质量比在约0.1克/升至约1克/升的范围内的氨氧化细菌与赋形剂,例如药学上可接受的赋形剂或美容上可接受的赋形剂。所述制剂可以包含质量比在约0.1-0.2、0.2-0.3、0.1-0.5、0.2-0.7、0.5-1.0或0.7-1.0克/升的范围内的氨氧化细菌与赋形剂。
[0413] 在一些实施方案中,氨氧化细菌制剂可以包含缓冲液中的氨氧化细菌,基本上由缓冲液中的氧化细菌组成或由缓冲液中的氧化细菌组成,所述缓冲液包含磷酸二钠和氯化镁,基本上由磷酸二钠和氯化镁组成或由磷酸二钠和氯化镁组成,例如50mM Na2HPO4和2mM MgCl2。
[0414] 制剂可包含约0.1至约100液体盎司、约0.2至约50液体盎司、约0.5至约25液体盎司、约1.0至约10液体盎司、约2.0至约7液体盎司、约3至约5液体盎司的体积。在一些实施方案中,制剂可包含约3.4液体盎司的体积。
[0415] 制剂可于容器中提供,该容器构造为容纳约0.1至约100液体盎司、约0.2至约50液体盎司、约0.5至约25液体盎司、约1.0至约10液体盎司、约2.0至约7液体盎司、约3至约5液体盎司。在一些实施方案中,所述制剂是构造为容纳约3.4液体盎司的容器。所述容器可以是单室容器,或本文公开的任何其它容器。
[0416] 在一些实施方案中,氨氧化细菌制剂可呈生长状态。生长状态可以通过使氨氧化细菌暴露于可以促进生长的环境来提供。生长状态可以是例如氨氧化细菌处于允许氨氧化细菌能够即时将铵离子(NH4+)转化为亚硝酸盐(NO2-)的环境中的状态。生长状态可以包括在具有大于约7.6的pH的环境中提供氨氧化细菌。生长状态还可以包括在如在部分1中所述的具有氨、铵离子和/或尿素、微量矿物质以及充足的氧和二氧化碳的环境中提供氨氧化细菌。
[0417] 在一些实施方案中,氨氧化细菌的制剂可以处于多磷酸盐负载状态,其中所述状态或环境(例如介质,例如培养基,例如生长培养基)可以具有小于约7.4的pH。氨、铵离子和尿素中的至少一种的水平可以在约10微摩尔和200毫摩尔之间。微量物质的水平可在0.1微摩尔的铁和20微摩尔的铁之间。氧的水平可以在约5%和100%氧饱和度之间。二氧化碳的水平可以介于/小于约0和200ppm之间,且磷酸盐水平大于约10微摩尔。多磷酸盐负载状态的目的是向AOB提供氨和氧,以使得可以产生ATP,但不向AOB提供二氧化碳和碳酸盐,以使得它们无法使用该ATP固定二氧化碳,而是使用该ATP来生成可以储存的多磷酸盐。
[0418] 在一些实施方案中,氨氧化细菌制剂可以呈储存状态。储存状态可以被定义为氨氧化细菌处于它们可以被储存至稍后复活的环境中。储存状态可以是例如氨氧化细菌处于允许氨氧化细菌在复活后(例如,在放置于促进生长状态的环境中预定时间段后)可用的环境中的状态。用于复活的预定时间段可以小于72小时。例如,预定时间段可以小于约75小时或小于约72小时。预定时间段可至少部分基于为氨氧化细菌倍增时间的约0.2-10倍、0.3-5倍、0.5-3倍、0.5-1.5倍或0.5-1倍的时间段。所述预定时间段可至少部分基于为所述氨氧化细菌约1个倍增时间的时间段。预定时间段可以在约8小时和12小时之间。预定时间段可以为约10小时。预定时间段可以小于约75小时、72小时、70小时、68小时、65小时、60小时、55小时、50小时、45小时、40小时、35小时、30小时、25小时、20小时、15小时、10小时、5小时、4小时、3小时、2小时或1小时。预定时间段可以在约5分钟和5小时之间。预定时间段可以为约5-10分钟、10-15分钟、15-20分钟、20-25分钟、25-30分钟、30-45分钟、45-60分钟、60分钟-1.5小时、1.5小时-2小时、2小时-2.5小时、2.5小时-3小时、3小时-3.5小时、3.5小时-4小时、4小时-4.5小时、4.5小时-5小时。在一些实施方案中,预定时间段可以为约2小时。
[0419] 储存状态可以包括在具有小于约7.4的pH的环境中提供氨氧化细菌。储存状态还可以包括在如在部分1中所述的具有氨、氨离子和/或尿素、微量矿物质、氧和低浓度二氧化碳的环境中提供氨氧化细菌。
[0420] 储存还可以通过在4℃下储存最多几个月来完成。储存缓冲液在一些实施方案中可以包含50mM Na2HPO4-2mM MgCl2(pH 7.6)。
[0421] 在一些实施方案中,氨氧化细菌可以低温保存。可以将1.25ml氨氧化细菌对数中期培养物添加到2ml的冻存管和0.75ml无菌的80%甘油中。管可以轻轻振荡,并在室温下培养15分钟,以允许细胞吸收冷冻保护剂。可以将所述管直接储存在-80℃冷冻器中用于冷冻和储存。
[0422] 对于培养物的复苏,可以使冷冻原液在上解冻10到20分钟,然后在4℃下,在8,000xg下离心3分钟。团粒可以通过将它悬浮在2ml AOB培养基中进行洗涤,随后在4℃下,在
8,000xg下再离心3分钟,以降低冷冻保护剂的潜在毒性。可以使所述团粒再悬浮于2ml AOB培养基中,接种到含50mM NH4+的50ml AOB培养基中,并通过在200rpm下振荡,在30℃的黑暗环境中培养。
[0423] 在一些实施方案中,氨氧化细菌的制剂可以包括在储存状态下的氨氧化细菌和/或在多磷酸盐负载状态下的氨氧化细菌和/或在生长状态下的氨氧化细菌。
[0424] 在一些实施方案中,容器、递送系统或装置致动后,呈储存状态或多磷酸盐负载状态的氨氧化细菌可与活化剂混合。活化剂可以呈提供为至少约7.6的pH的形式。活化剂可以呈提供氨、铵离子和/或尿素、微量矿物质和足够的氧和二氧化碳的环境的形式。活化剂可以使呈储存状态或多磷酸盐负载状态的氨氧化细菌复活或至少部分复活为生长状态。使氨氧化细菌从储存状态(或多磷酸盐负载状态)复活所需要的时间可以是预定时间段。例如,预定时间段可以小于约75小时或小于约72小时。预定时间段可至少部分基于为氨氧化细菌倍增时间的约0.2-10倍、0.3-5倍、0.5-3倍、0.5-1.5倍或0.5-1倍的时间段。所述预定时间段可至少部分基于为所述氨氧化细菌约1个倍增时间的时间段。预定时间段可以在约8小时和12小时之间。预定时间段可以为约10小时。预定时间段可以小于约75小时、72小时、70小时、68小时、65小时、60小时、55小时、50小时、45小时、40小时、35小时、30小时、25小时、20小时、15小时、10小时、5小时、4小时、3小时、2小时或1小时。
[0425] 在一些实施方案中,容器可包括呈生长状态和呈储存状态和多磷酸盐负载状态中的至少一种状态的氨氧化细菌,以便立即向环境提供氨氧化细菌以开始将氨、铵离子和尿素中的至少一种转化为亚硝酸盐,同时允许呈储存状态和多磷酸盐负载状态中的至少一种状态的氧化细菌复活一段时间。这可以允许储存的氨氧化细菌在一段时间内控释。
[0426] 不希望受理论的束缚,通过将氨氧化细菌保持在具有低二氧化碳以及足够的氧和氨的条件下或环境中,它们可以积累多磷酸盐达预定的时期,例如,约1个倍增时间的时期,例如约8-12小时,例如约10小时。氨氧化细菌可以积累足够的多磷酸盐以延长其储存活力、储存时间,并加快其复活。这可以在添加或不添加缓冲液和氨的情况下发生。
[0427] 存在储存充足的多磷酸盐可以允许氨氧化细菌(ATP资源)在甚至不存在氨和氧的情况下维持代谢活性,并在原本将会致命的攻击下存活。
[0428] 氨氧化产生ATP的过程具有两个步骤。第一步骤是通过氨单加氧酶(Amo)使氨氧化为羟胺,然后通过羟胺氧化还原酶(Hao)使羟胺转化为亚硝酸盐。来自第二步骤(羟胺转化为亚硝酸盐)的电子被用来驱动第一步骤(氨氧化为羟胺)。
[0429] 如果氨氧化细菌不具有羟胺来生成用于Amo的电子,则羟胺不可用于Hao。例如,乙炔不可逆地抑制对于氨氧化为亚硝酸盐中的第一步骤(氨氧化为羟胺)而言关键的酶。一旦AOB暴露于乙炔,Amo即被不可逆地抑制,并且在可以产生羟胺之前必须合成新的酶。在正常的聚生体生物膜栖息地,AOB可以分享和接收来自其它AOB(甚至是对抑制剂具有不同易感性的不同菌株)的羟胺,因此生物膜趋于比单个生物体对抑制剂如乙炔更具抗性。AOB可以使用储存的多磷酸盐来合成新的Amo,即使在没有羟胺的情况下。
[0430] 本文所讨论的氨氧化细菌的任何实施方案、制剂、组合物或配制物可以包含任选纯性的氨氧化细菌、基本上由任选纯性的氨氧化细菌组成或由任选纯性的氨氧化细菌组成。
[0431] 12.生产氨氧化细菌的方法
[0432] 培养各种氨氧化细菌,例如亚硝化单胞菌属种类的方法是本领域中已知的。可以例如使用如以上表1或表2中所述的培养基来培养氨氧化细菌。
[0433] 氨氧化细菌可以生长在例如液体培养基中或平板上。合适的平板包括1.2%R2A琼脂、1.2%琼脂、1.2%琼脂糖和含有0.3g/L丙酮酸盐的1.2%琼脂糖。
[0434] 在一些实施方案中,可在无有机物培养基中培养氨氧化细菌。使用无有机物培养基的一个优点是除了由自养细菌产生的底物外它缺乏异养细菌进行代谢的底物。使用生长态培养物的另一个优点是大量的亚硝酸盐在培养基中积累,而该亚硝酸盐也抑制异养细菌且因此在储存期间作为防腐剂。
[0435] 在一些实施方案中,具有改善的(例如,优化的)性质的氨氧化细菌是通过繁殖和选出所需性质的迭代过程而产生。在一些实施方案中,选择和繁殖同时进行。在一些实施方案中,在包含50mM、75mM、100mM、125mM、150mM、175mM、200mM、225mM、250mM、275mM或300mM NH4+(例如,至少200mM NH4+)的反应介质(例如,完全真养亚硝化单胞菌培养基)中进行选择。在一些实施方案中,繁殖和/或选择的周期为至少1、2、3或6个月。在实施方案中,繁殖和/或选择的周期为至少1、2、4、6、8或10年。
[0436] 在一些方面,所述氨氧化细菌是以商业规模来生产。在一些实施方案中,商业规模是指具有至少10,000、20,000、30,000、50,000或100,000升(L)的培养基体积的液体培养方法。在一些实施方案中,在生物反应器中生产细菌。所述生物反应器可以使用例如绝缘热夹套、温度传感器以及加热或冷却元件将细菌维持在恒定温度例如约26℃-30℃下。所述生物反应器可以具有用于搅拌培养物以改善营养物如氨、尿素、氧、二氧化碳和各种矿物质的分布的装置。所述生物反应器还可以具有用于添加新培养基的进口管,以及用于收集细胞的出口管。所述生物反应器还可以具有用于将氧和/或二氧化碳分配至培养物中的曝气器。所述生物反应器可以是例如间歇式反应器、馈料分批反应器或连续反应器。在一些实施方案中,氨氧化细菌的商业规模生产以约1012CFU/升产生1,000至100,000L/天的批料。商业规模生产可以产生例如1,000-5,000L/天、5,000-10,000L/天、10,000-50,000L/天或50,000-100,000L/天的批料。商业规模生产可以产生例如1,000-5,000L/批、5,000-10,000L/批、
10,000-50,000L/批或50,000-100,000L/批的批料。在一些实施方案中,产量为至少108、
109、1010、1011、2x1011、5x1011或1012或约1010-1011、1011-1012、1012-1013或1013-1014CFU/L的浓度。在一些实施方案中,产量为至少108、109、1010、1011、2x1011、5x1011或1012或约1010-1011、
1011-1012、1012-1013或1013-1014CFU/ml的浓度。
[0437] 在一些实施方案中,通常包括商业规模生产,进行质量控制(QC)测试步骤。QC的一般步骤通常包括:1)培养氨氧化细菌;2)对培养物或其等分试样执行测试步骤;以及3)从所述测试步骤获得值,并且任选地:4)将所获得的值与参考值或可接受值的范围进行比较,和5)如果所获得的值满足可接受的参考值或范围,则将培养物分类为合格,且如果所获得的值不满足可接受的参考值或范围,则将培养物分类为不合格。如果培养物被分类为合格,则可以例如允许培养物继续生长且/或可以收获培养物并将其加入商业产品中。如果培养物被分类为不合格,则可以例如安全地处置培养物或者可以补救缺陷
[0438] 测试步骤可以包括测量培养物的光密度(OD)。OD是在分光光度计中进行测量,并且提供关于透射通过样品的光的量的信息,如与吸收或散射的光区别。在一些实施方案中,可以测定OD600(例如,具有600nm波长的光的光密度)。这种测量通常指示培养基中的细胞的浓度,其中较高的光密度对应于较高的细胞密度。
[0439] 测试步骤可以包括测量培养物的pH。氨氧化细菌培养物的pH指示氮氧化的速率,并且还可以指示培养物是否包含污染性生物体。pH可以使用例如包括电极(如氢电极、醌氢醌电极、锑电极、玻璃电极)的pH感测装置、包括半导体的pH感测装置或颜色指示试剂(如pH试纸)来测量。
[0440] 在某些实施方案中,生产氨氧化细菌包括进行各种质量控制步骤。例如,可以测试其中生长有氨氧化细菌的培养基,以例如确定它是否具有适当的pH,它是否具有足够低的废产物水平,和/或它是否具有足够高的营养物水平。还可以测试污染生物体的存在。污染性生物体通常为非氨氧化细菌的生物体,例如选自微杆菌属(Microbacterium)、产碱菌科(Alcaligenaceae)细菌、柄杆菌属(Caulobacter)、多噬伯克霍尔德氏菌(Burkodelia multivorans)、大肠杆菌(Escherichia coli)、炎克雷伯氏菌(Klebsiella pneumoniae)和金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的生物体。可以通过例如提取DNA、扩增该DNA并对保守基因如16S rRNA进行测序来测试污染物。还可以通过将培养物接种在琼脂平板上并观察菌落形态来测试污染物。氨氧化细菌通常形成红色菌落,所以非红色菌落往往指示污染性生物体。
[0441] 13.包含氨氧化细菌的组合物
[0442] 本公开尤其提供了包含氨氧化细菌的组合物,例如氨氧化细菌制剂或氨氧化细菌的纯化制剂。可以在化妆品或治疗产品中提供包含氨氧化细菌的组合物,例如,氨氧化细菌制剂或氨氧化细菌的纯化制剂。所述组合物可包括含氨氧化细菌的天然产品。
[0443] 在一些方面,本公开提供了具有限定数量的物种的组合物,例如制剂。例如,本发明提供了一种组合物,其具有氨氧化细菌,或更具体地具有一个属的氨氧化细菌,或更具体地具有一个种类的氨氧化细菌,例如真养亚硝化单胞菌和另一类型的生物体且无其它类型的生物体。在其它实例中,所述组合物具有氨氧化细菌,或更具体地具有一个属的氨氧化细菌,或更具体地具有一个种类的氨氧化细菌,例如真养亚硝化单胞菌和另外2、3、4、5、6、7、8、9或10个类型的生物体且无其它类型的生物体。适用于此目的的氨氧化细菌包括亚硝化单胞菌属、亚硝化球菌属、亚硝化螺菌属、亚硝化囊菌属、亚硝化叶菌属或亚硝化弧菌属中的氨氧化细菌。
[0444] 在一些实施方案中,在氨氧化细菌的制剂中可以包括除了氨氧化细菌以外的一种或多种其它生物体。例如,可以在氨氧化细菌的制剂中提供选自乳酸杆菌属、链球菌属、双歧杆菌属及其组合的属的生物体。在一些实施方案中,所述制剂可基本上不含其它生物体。
[0445] 在一些实施方案中,包含氨氧化细菌的组合物(例如制剂)提供支持氨氧化细菌活力的条件。例如,所述组合物可以促进氨氧化细菌生长和代谢,或者可以促进本文所述的休眠状态(例如,冷冻)或储存状态,活的氨氧化细菌可以从所述休眠状态和储存状态恢复。当所述组合物促进生长或代谢时,其可以包含水和/或氨氧化细菌消耗的营养物,例如铵离子、氨、尿素、氧、二氧化碳或微量矿物质。
[0446] 氨氧化细菌的制剂可以包含约108CFU/L至约1014CFU/L。所述制剂可以包含至少约108、109、1010、1011、2x 1011、5x 1011、1012、2x 1012、5x 1012、1013、2x 1013、5x 1013或1014;或约108-109、109-1010、1010-1011、1011-1012、1012-1013或1013-1014CFU/L。
[0447] 氨氧化细菌的制剂可以包含约108至约1014CFU/ml。所述制剂可以包含至少约108、109、1010、1011、2x1011、5x1011、1012、2x1012、5x1012、1013、2x1013、5x1013或1014;或约108-109、
109-1010、1010-1011、1011-1012、1012-1013或1013-1014CFU/ml。
[0448] 在一些实施方案中,氨氧化细菌制剂可以包含约0.1毫克(mg)至约100mg氨氧化细菌。在某些方面,所述制剂可以包含约50mg至约1000mg氨氧化细菌。所述制剂可以包含约0.1-0.5mg、0.2-0.7mg、0.5-1.0mg、0.5-2mg、0.5-5mg、2.5-5mg、2.5-7.0mg、5.0-10mg、7.5-
15mg、10-15mg、15-20mg、15-25mg、20-30mg、25-50mg、25-75mg、50-75mg、50-100mg、75-
100mg、100-200mg、200-300mg、300-400mg、400-500mg、500-600mg、600-700mg、700-800mg、
800-900mg、900-1000mg、100-250mg、250-500mg、100-500mg、500-750mg、750-1000mg或500-
1000mg。
[0449] 在一些实施方案中,氨氧化细菌制剂可以包含质量比在约0.1克/升至约1克/升的范围内的氨氧化细菌与赋形剂,例如药学上可接受的赋形剂或美容上可接受的赋形剂。所述制剂可以包含质量比在约0.1-0.2、0.2-0.3、0.1-0.5、0.2-0.7、0.5-1.0或0.7-1.0克/升的范围内的氨氧化细菌与赋形剂。
[0450] 在一些实施方案中,氨氧化细菌的制剂可以是于缓冲液中的氧化细菌,所述缓冲液包含磷酸二钠和氯化镁,基本上由磷酸二钠和氯化镁组成或由磷酸二钠和氯化镁组成,例如50mM Na2HPO4和2mM MgCl2。所述制剂可于缓冲液中按例如约0.1至约100液体盎司、约0.2至约50液体盎司、约0.5至约25液体盎司、约1.0至约10液体盎司、约2.0至约7液体盎司、约3至约5液体盎司的预定体积提供。在一些实施方案中,所述制剂可于容器中提供。所述制剂可于构造为容纳约3.4液体盎司或本文公开的任何其它体积的容器中提供。所述制剂可以呈可能能够被喷雾、喷射或雾化的形式,即呈雾状形式的形式
[0451] 氨氧化细菌可以与一种或多种赋形剂,例如一种或多种药学上可接受的赋形剂或美容上可接受的赋形剂组合。在一些实施方案中,“药学上可接受的赋形剂”是指药学上可接受的物质、组合物或媒介物,诸如液体或固体填充剂、稀释剂、溶剂或封装材料。在一些实施方案中,每种赋形剂从与药物配制物的其它成分相容的意义上说是“药学上可接受的”,并且适用于接触人类和动物的组织或器官,而没有过度的毒性、刺激、过敏反应、免疫原性或与合理的效益/险比相称的其它问题或并发症。参见Remington:The Science and Practice of Pharmacy,第21版;Lippincott Williams&Wilkins:Philadelphia,Pa.,2005;Handbook  of  Pharmaceutical Excipients,第6版;Rowe等人编辑;The 
Pharmaceutical Press and the American Pharmaceutical Association:2009;
Handbook of Pharmaceutical Additives,第3版;Ash和Ash编辑;Gower Publishing Company:2007;Pharmaceutical Preformulation and Formulation,第2版;Gibson编辑;
CRC Press LLC:Boca Raton,Fla.,2009。
[0452] 在一些实施方案中,美容上可接受的赋形剂是指美容上可接受的物质、组合物或媒介物,诸如液体或固体填充剂、稀释剂、溶剂或封装材料。在一些实施方案中,每种赋形剂从与美容配制物的其它成分相容的意义上说是美容上可接受的,并且适用于接触人类和动物的组织或器官,而没有过度的毒性、刺激、过敏反应、免疫原性或与合理的效益/风险比相称的其它问题或并发症。
[0453] 可以在本公开的容器和试剂盒中,例如在氨氧化细菌制剂内,在活化剂内或在一个或多个腔室(例如容器的第一腔室、第二腔室或混合腔室)内提供赋形剂,例如药学上可接受的赋形剂或美容上可接受的赋形剂。
[0454] 虽然活性成分(例如,氨氧化细菌)可以单独施用,但在许多实施方案中,其存在于药物配制物、制剂或组合物,或美容配制物、制剂或组合物中。因此,本公开提供一种药物配制物(制剂或组合物)或美容配制物(制剂或组合物),其包含氨氧化细菌和药学上可接受的赋形剂或美容上可接受的赋形剂。药物组合物和美容组合物可以呈如下所述的配制物的形式。
[0455] 本文所述的药物和美容配制物(例如,制剂或组合物)可包括那些适用于口服(例如,经由胃肠道或为了沉积在胃肠道中的目的)、肠胃外(包括皮下、皮内、肌内、静脉内和关节内)、吸入(包括可以通过各种类型的定量加压气雾剂、喷雾器或吹入器产生的细颗粒粉末或细雾,并且包括经鼻内(鼻部)或经肺(肺部))、直肠和局部(包括皮肤、经皮、经粘膜、口腔、舌下和眼内)施用的配制物,但最合适的途径可以取决于例如接受者的病状和病症。
[0456] 配制物(例如,制剂或组合物)可以方便地以单位剂型呈现,并且可以通过药学或美容学领域中已知的任何方法来制备。通常,方法包括使活性成分(例如,氨氧化细菌)与组成一种或多种辅助成分的药物或美容载体缔合的步骤。通常,所述配制物是通过使活性成分与液体载体或微细固体载体或两者均匀且紧密地缔合且然后在必要时使产品成型为所需配制物来制备。
[0457] 配制物可以呈现为离散单位如胶囊剂、扁囊剂或片剂,每个单位含有预定量的氨氧化细菌;呈现为粉剂或颗粒剂;呈现为在水性液体或非水性液体中的溶液或混悬剂;或呈现为水包油液体乳剂或油包水液体乳剂。活性成分还可以呈现为大丸剂、药糖剂或糊剂。各种药学上可接受的载体及其配制物描述于标准配制论文例如E.W.Martin所著的Remington's Pharmaceutical Sciences中。E.W.Martin.还参见Wang,Y.J.和Hanson,
M.A.,Journal of Parenteral Science and Technology,Technical Report No.10,
Supp.42:2S,1988。
[0458] 所述氨氧化细菌组合物或制剂可以例如以适于立即释放或控释(长期释放)的形式来施用。合适的缓释系统的实例包括合适的聚合物材料,例如呈成形制品的形式(例如,薄膜或微胶囊)的半渗透性聚合物基质;合适的疏水性材料,例如作为在可接受的油中的乳剂;或离子交换树脂。控释(长期释放)系统的施用方式可以为:口服;经直肠;肠胃外;脑池内;阴道内;腹膜内;局部,例如作为粉末、软膏、凝胶、滴剂或透皮贴剂;口腔;或作为喷雾剂。
[0459] 可以适当地配制用于施用的制剂以引起氨氧化细菌的控释。例如,配制物、制剂或组合物可以为包含生物可降解聚合物、多糖胶凝和/或生物粘附聚合物或两亲性聚合物中的一种或多种的颗粒形式。这些组合物表现出允许活性物质控释的某些生物相容性特征。参见美国专利第5,700,486号。所述制剂可包括控释材料。
[0460] 在本公开的某些情况下可将持续释放或控释系统称为屏障。
[0461] 示例性组合物,例如,作为制剂,可包括混悬液,其可以含有例如用于赋予体积的微晶纤维素、藻酸或作为悬浮剂的藻酸钠、作为增粘剂的甲基纤维素、磷酸二淀粉硬脂酸镁和/或乳糖和/或其它赋形剂、粘合剂、增量剂、崩解剂、稀释剂和润滑剂、甘露醇、乳糖、蔗糖和/或环糊精。此类配制物中还可以包括高分子量赋形剂如纤维素(微晶纤维素(avicel))或聚乙二醇(PEG)。此类制剂还可以包括用于辅助粘膜粘附的赋形剂,如羟丙基纤维素(HPC)、羟丙基甲基纤维素(HPMC)、羧甲基纤维素钠(SCMC)、来酸酐共聚物(例如,Gantrez),以及用于控制释放的试剂如聚丙烯酸类共聚物(例如,Carbopol 934)。还可以添加润滑剂、表面活性剂、助流剂、香料、着色剂和稳定剂以便于制造和使用。表面活性剂可以是两性离子型表面活性剂、非离子型表面活性剂或阴离子型表面活性剂。
[0462] 表面活性剂可以包括下列中的一种或多种,单独或与所列那些,或其它表面活性剂或表面活性剂样化合物组合:椰油酰胺丙基甜菜碱(ColaTeric COAB)、聚乙烯山梨醇酯(例如,Tween 80)、乙氧基化月桂醇(RhodaSurf 6NAT)、月桂基醚硫酸钠/月桂基葡糖苷/椰油酰胺丙基甜菜碱(Plantapon 611L UP)、月桂基醚硫酸钠(例如,RhodaPex ESB 70NAT)、烷基聚葡糖苷(例如,Plantaren 2000N UP)、月桂基醚硫酸钠(Plantaren 200)、布朗纳博士的卡斯蒂利亚(Castile)肥皂、布朗纳博士的婴儿肥皂、月桂胺氧化物(ColaLux Lo)、十二烷基硫酸钠(SDS)、聚磺酸酯烷基聚葡糖苷(PolySufanate 160P)、月桂基硫酸钠(Stepanol-WA Extra K)及其组合。布朗纳博士的卡斯蒂利亚肥皂和婴儿肥皂包含水、有机椰子油、氢氧化钾、有机橄榄油、有机公平交易麻油、有机荷荷巴油、柠檬酸和生育酚。卡斯蒂利亚肥皂,例如布朗纳博士的卡斯蒂利亚肥皂,以及许多天然和婴儿皂由以下组成:水、有机或无机动物或植物油、氢氧化钠或氢氧化钾、有机橄榄油、有机公平交易麻油、有机荷荷巴油、柠檬酸和生育酚。
[0463] 表面活性剂可以包括月桂基葡糖苷羟基丙基磺酸钠( nate 160NC)、月桂酰胺丙基甜菜碱( Teric LMB);椰油酰胺丙基羟基磺基甜菜碱( Teric CBS);椰
油酰两性基二乙酸二钠( Teric CDCX-LV);月桂基葡糖苷羟基丙基磷酸钠(
Fax D12)。
[0464] 表面活性剂可以包括月桂酰甲基羟乙基磺酸钠( LQ-CLR-SB);甲基椰油酰牛磺酸钠(Pureact WS Conc.);水(和)月桂酰甲基羟乙基磺酸钠(和)椰油酰胺丙基甜菜碱(和)椰油酰羟乙基磺酸钠(和)甲基油酰牛磺酸钠( SFS-SB)。
[0465] 在一些实施方案中,表面活性剂可以以允许亚硝酸盐产生发生的量与氨氧化细菌一起使用。在一些实施方案中,所述制剂可具有少于约0.01%至约10%的表面活性剂。在一些实施方案中,所用的表面活性剂的浓度可以在约0.0001%至约10%之间。在一些实施方案中,所述制剂可基本上不含表面活性剂。
[0466] 在一些实施方案中,配制物例如制剂可以包括可增强氨氧化细菌的效力或增强治疗或指示的其它组分。
[0467] 在一些实施方案中,制剂中可以包括螯合剂。螯合剂可以是可以与另一种化合物(例如,金属)结合的化合物。螯合剂可以帮助从环境中去除不想要的化合物,或可以以保护方式起到减少或消除特定化合物与环境(例如,氨氧化细菌,例如氨氧化细菌的制剂,例如赋形剂)的接触的作用。
[0468] 配制物(例如,制剂)还可以包含抗氧化剂、缓冲剂、防止非所需细菌生长的抑菌剂、溶质以及可以包括悬浮剂和增稠剂的水性和非水性无菌混悬液。所述配制物可以呈现在单位剂量或多剂量容器(例如,密封的安瓿和小瓶)中,并且可以储存在仅需要在使用前立即加入无菌液体载体(例如,盐水或注射用水)的冷冻干燥(冻干)条件下。临时性溶液和混悬液可以由先前所描述的种类的粉末、颗粒和片剂制备。示例性组合物包括溶液或混悬液,其可以含有例如合适的无毒的药学上可接受的稀释剂或溶剂,如甘露醇、1,3-丁二醇、水、林格氏溶液、等渗氯化钠溶液,或其它合适的分散剂或湿润剂和悬浮剂,包括合成的单甘油酯或二甘油酯,以及脂肪酸,包括油酸或Cremaphor。水性载体可以是例如在约3.0至约8.0的pH、约3.5至约7.4(例如3.5至6.0,例如3.5至约5.0)的pH下的等渗缓冲溶液。有用的缓冲剂包括柠檬酸钠-柠檬酸和磷酸钠-磷酸,以及乙酸钠/乙酸缓冲剂。在一些实施方案中,组合物不包括氧化剂。
[0469] 可以包括的赋形剂是例如蛋白质,如人血清白蛋白血浆制剂。必要时,药物组合物,例如制剂,还可以含有少量的无毒辅助物质,诸如润湿剂或乳化剂、表面活性剂、防腐剂和pH缓冲剂等,例如柠檬酸钠、乙酸钠或山梨糖醇酐单月桂酸酯。在一些实施方案中,所述赋形剂,例如药学上可接受的赋形剂或美容上可接受的赋形剂,可包含抗粘附剂、粘合剂、涂层剂、崩解剂、填充剂、调味剂、着色剂、润滑剂、助流剂、吸附剂、防腐剂或甜味剂。在一些实施方案中,所述制剂可基本上不含赋形剂。
[0470] 用于气雾剂施用的示例性组合物包括盐水溶液,其可以含有例如苄醇或其它合适的防腐剂、用于提高生物利用度的吸收促进剂和/或其它增溶剂或分散剂。方便的是,在用于气雾剂施用的组合物中,氨氧化细菌可以呈从加压包装或喷雾器的气雾剂喷雾表现的形式,使用合适的推进剂(例如,二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳、氮气或其它合适的气体)来递送。在加压气雾剂的情况下,剂量单位可以通过提供阀以递送计量的量来确定。可以将由例如明胶制成的胶囊和药盒配制成含有氨氧化细菌和合适的粉末基质(例如,乳糖或淀粉)的粉末混合物。在某些实施方案中,氨氧化细菌是作为气雾剂,通过气雾剂适配器(又称致动器)从定量阀施用。任选地,还包括稳定剂,且/或包括用于深肺递送的多孔颗粒(例如,参见美国专利第6,447,743号)。所述组合物或制剂可以呈可能能够被喷雾、喷射或雾化的形式,即呈雾状形式的形式。氨氧化细菌的制剂可以是于缓冲液中的氧化细菌,所述缓冲液包括磷酸二钠和氯化镁,基本上由磷酸二钠和氯化镁组成或由磷酸二钠和氯化镁组成,例如50mM Na2HPO4和2mM MgCl2。
[0471] 配制物可以与载体如shea或可可脂、合成甘油酯或聚乙二醇一起呈现。此类载体在常温下通常为固体,但在体温下液化和/或溶解以释放氨氧化细菌。
[0472] 用于局部施用的示例性组合物包括局部载体如Plastibase(与聚乙烯一起胶化的矿物油)。在一些方面,所述组合物,例如制剂和/或赋形剂可以呈液体、固体或凝胶中的一种或多种形式。例如,液体混悬剂可以包括但不限于水、盐水、磷酸盐缓冲盐水或氨氧化储存缓冲液。
[0473] 凝胶配制物可以包括但不限于琼脂、二氧化、聚丙烯酸(例如 )、羧甲基纤维素、淀粉、瓜胶、藻酸盐、粘土或壳聚糖。在一些实施方案中,所述配制物,例如制剂可以补充有氨源,包括但不限于氨、铵离子(例如,氯化铵或硫酸铵)和尿素中的一种或多种。
[0474] 在一些实施方案中,可以配制氨氧化细菌组合物,例如制剂以提高NO渗透到皮肤中。凝胶形成材料如KY胶或各种发胶将形成NO损失到环境空气中的扩散屏障,从而提高NO的皮肤吸收。皮肤中的NO水平一般不会大大超过20nM/L,因为该水平活化GC并且将会引起局部血管舒张和过量NO的氧化破坏。
[0475] 应当理解的是,除了上文特别提到的成分,如本文所述的配制物(例如制剂)可以包括在涉及所讨论的配制物类型的领域中常用的其它试剂。
[0476] 所述配制物(例如,制剂,例如组合物)可以在容器、递送系统或递送装置中提供,所述容器、递送系统或递送装置包括或不包括容器的内容物的重量可小于约50、100、200、300、400、500、600、700、800、900、1000、1500或2000克。
[0477] 合适的单位剂量配制物是含有如前文所述的有效剂量或其适当分数的氨氧化细菌的那些单位剂量配制物。
[0478] 治疗有效量的氨氧化细菌可以作为单脉冲剂量、作为推注剂量或作为随时间施用的脉冲剂量来施用。因此,在脉冲剂量中,提供氨氧化细菌的推注施用,在随后的时间段中将氨氧化细菌施用给受试者,接着进行第二次推注施用。在具体的非限制性实例中,在一天期间、在一周期间或在一个月期间施用脉冲剂量。
[0479] 在一些实施方案中,可以施加氨氧化细菌制剂(例如,配制物,例如组合物)预定的天数。这可以至少部分基于例如病状或疾病的严重程度、治疗反应、施用剂量和给药频率。例如,可施加所述制剂约1-3、3-5、5-7、7-9、5-10、10-14、12-18、12-21、21-28、28-35、35-
42、42-49、49-56、46-63、63-70、70-77、77-84、84-91天。在某些方面,可施加所述制剂约16天。
[0480] 在一些实施方案中,可以每天施加氨氧化细菌的制剂(例如,配制物,例如组合物)预定的次数。这可以至少部分基于例如病状或疾病的严重程度、治疗反应、施用剂量和给药频率。例如,可以每天施加所述制剂1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24次。
[0481] 在一些实施方案中,所述制剂可以每天施加一次。在其它实施方案中,所述制剂可以每天施加两次。在一些实施方案中,可以在某几天施加第一预定量的所述制剂,且在随后的某几天施加第二预定量的所述制剂。在一些实施方案中,可以施加所述制剂约16天。
[0482] 在一些实施方案中,施加氨氧化细菌约1-3天、3-5天、5-7天、7-9天、5-10天、10-14天、12-18天、12-21天、21-28天、28-35天、35-42天、42-49天、49-56天、46-63天、63-70天、70-77天、77-84天、84-91天,例如约1个月、约2个月、约3个月。在一些实施方案中,施加氨氧化细菌无限期的时间,例如,大于一年、大于5年、大于10年、大于15年、大于30年、大于50年、大于75年。
[0483] 氨氧化细菌可以与多种消费产品和治疗产品相关,且此类产品的实例如下所述。在一些实施方案中,将与产品相关的氨氧化细菌与所述产品混合,例如均匀地散布在整个产品中,并且在一些实施方案中,与产品相关的氨氧化细菌层叠在所述产品上。
[0484] 在一些实施方案中,氨氧化细菌与粉末相关。粉末通常是小颗粒固体,它们彼此不粘附并且在倾斜时可以自由流动。消费用途的示例性粉末包括滑石粉和一些化妆品(例如,粉底霜,包括粉饼)。可以考虑其它粉末,连同本公开的氨氧化细菌系统和方法一起使用。
[0485] 在一些实施方案中,氨氧化细菌与化妆品相关。化妆品可以是旨在改变个人的外观的供局部施用的物质,例如,粉底液、粉底霜、腮红或唇膏。化妆品可以是在食品和药物管理法规中例如根据21C.F.R.§720.4所列举的任何物质。
[0486] 所述制剂,例如化妆品,可以作为下述产品中的至少一种提供或置于下述产品中的至少一种中:婴儿用品,例如婴儿洗发剂、婴儿洗剂、婴儿油、婴儿粉、婴儿霜;浴用制剂,例如浴油、浴片、浴盐、泡沫浴、浴用胶囊;眼妆制剂,例如眉笔、眼线膏、眼影、洗眼剂、眼部卸妆液、睫毛膏;香料制剂,例如古龙香水、花露水、香水、香粉(喷粉和滑石粉)、香囊;发用制剂,例如护发剂、发胶、直发膏、烫发剂、漂洗剂、洗发剂、滋补剂、敷料、毛发梳理助剂、卷发液;染发制剂,例如发用染料和颜料、染发剂、染发漂洗剂、染发洗发剂、浅色染发剂、头发漂白剂;化妆制剂,例如粉饼、粉底、腿部和身体涂剂、唇膏、妆前底霜、胭脂、定妆剂;美甲制剂,例如底部涂层和内部涂层、角质层软化剂、指甲霜和洗剂、指甲延长物、指甲油和彩釉、指甲油和彩釉清洗剂;口腔卫生用品,例如牙粉、漱口水和口气清新剂;浴用肥皂和清洗剂、除臭剂、灌洗液、女性卫生除臭剂;剃须用制剂,例如剃须后洗剂、胡须软化剂、滑石粉、剃须前洗剂、剃须膏、剃须皂;护肤制剂,例如清洁剂、脱毛剂、面部及颈部、身体和手、脚部粉剂和喷雾、保湿剂、夜用制剂、膏状面膜、皮肤清新剂;和晒黑制剂,例如防晒凝胶、防晒霜和防晒液及室内晒黑制剂。
[0487] 在一些实施方案中,制剂,例如化妆品可以作为下述产品中的至少一种提供或置于下述产品中的至少一种中:婴儿用品,例如婴儿洗发剂、婴儿洗剂、婴儿油、婴儿粉、婴儿霜;浴用制剂,例如浴油、浴片、浴盐、泡沫浴、浴用胶囊;香粉(喷粉和滑石粉)、香囊;发用制剂,例如护发剂、漂洗剂、洗发剂、滋补剂、粉饼、角质层软化剂、护甲霜和洗剂、口腔卫生用品、漱口水、浴用肥皂、灌洗液、女性卫生除臭剂;剃须用制剂,例如剃须后洗剂;护肤制剂,例如清洁剂、面部和颈部、身体和手部、脚部粉剂和喷雾、保湿剂、夜用制剂、膏状面膜、皮肤清新剂;和晒黑制剂,例如防晒凝胶、防晒霜和防晒液。
[0488] 可以向药物配制物,例如制剂或美容制剂中添加由美容配制物领域的技术人员选择的其它组分,诸如(例如)水、矿物油、着色剂、香料、芦荟、甘油、氯化钠、碳酸氢钠、pH缓冲剂、紫外线阻隔剂、硅油、天然油、维生素E、草药浓缩物、乳酸、柠檬酸、滑石、粘土、碳酸钙、碳酸镁、氧化锌、淀粉、尿素和异抗坏血酸,或本领域技术人员已知的任何其它赋形剂(包括本文中所公开的那些)。
[0489] 在一些实施方案中,所述制剂可置于粉末、化妆品、乳霜、棒状物、气雾剂、药膏、擦拭物或绷带中或作为它们提供。
[0490] 在一些实施方案中,氨氧化细菌与乳霜相关。乳霜可以是包含增稠剂的流体,且一般具有允许其均匀涂敷在皮肤上的稠度。示例性乳霜包括保湿洗剂、面霜和身体洗剂。
[0491] 在一些实施方案中,氨氧化细菌与棒状物相关。棒状物通常是当放置成与表面接触时将一些棒状物内容物转移到表面的固体。示例性棒状物包括香体棒、唇膏、棒状润唇膏和防晒霜涂抹棒。
[0492] 在一些实施方案中,氨氧化细菌与气雾剂相关。气雾剂通常是微细固体颗粒或微细液滴在气体如空气中的胶体。气雾剂可以通过将氨氧化细菌(和任选载体)放置在处于压力下的容器中,然后打开阀门以释放内容物来产生。所述容器可以被设计为仅施加与氨氧化细菌活力相容的压力水平。例如,仅可以短时间施加高压力,且/或压力可以足够低而不损害活力。气雾剂的消费用途的实例包括用于防晒霜、除臭剂、香水、发胶和驱虫剂
[0493] 在一些实施方案中,氨氧化细菌与药膏相关。药膏可以是具有液体或霜样稠度的局部施用剂,其旨在保护皮肤或促进愈合。药膏的实例包括烧伤膏和润肤液。
[0494] 在一些实施方案中,氨氧化细菌与擦拭物相关。擦拭物可以是适于将液体或乳霜局部施加到皮肤上的柔性材料。擦拭物可以是例如纸基或布基的。示例性擦拭物包括纸巾和湿巾。
[0495] 包含氨氧化细菌的组合物还可以包含保湿剂、除臭剂、香味剂、着色剂、驱虫剂、清洁剂或紫外线阻隔剂中的一种或多种。
[0496] 例如,保湿剂可以是减少或防止皮肤干燥的试剂。示例性的保湿剂包括润湿剂(例如,尿素、甘油、alpha-羟基酸和聚二甲基硅氧烷)和润肤剂(例如,羊毛脂、矿物油和矿脂)。保湿剂可以包括在例如含有氨氧化细菌的乳霜、香脂、洗剂或防晒霜中。
[0497] 除臭剂可以是减少非所需的气味的试剂。除臭剂可以通过直接中和气味、防止排汗或防止产生气味的细菌的生长来起作用。示例性的除臭剂包括铝盐(例如,氯化铝或羟基氯化铝)、环甲硅油、滑石、小苏打、香精油、矿物离子、啤酒花和金缕梅。除臭剂通常存在于除臭喷雾或除臭棒中,并且还可以发现于一些皂类和服装中。
[0498] 驱虫剂可以是能够被施加至表面(例如,皮肤)以阻止昆虫和其它节肢动物停落在该表面上的试剂。驱虫剂包括DEET(N,N-二乙基-间-甲苯甲酰胺)、对-薄荷烷-3,8-二醇(PMD)、埃卡瑞丁(icaridin)、荆芥内酯(nepetalactone)、香茅油、印楝油沼泽番石榴、肼基甲酸酯二甲酯、三环癸烯基烯丙醚和IR3535(3-[N-丁基-N-乙酰基]-氨基丙酸乙酯)。
[0499] 清洁剂可以是从表面如皮肤去除污物或非所需的细菌的试剂。示例性清洁剂包括条皂、液体皂和洗发剂。
[0500] 紫外线阻隔剂可以是能够被施加到表面上以减少表面的紫外光接收量的试剂。紫外线阻隔剂可以阻隔UV-A和/或UV-B光线。紫外线阻隔剂可以通过吸收、反射或散射紫外线而起作用。示例性紫外线阻隔剂包括吸收剂,例如,胡莫柳酯(homosalate)、奥替柳酯(octisalate)(又称水杨酸辛酯)、奥西诺酯(octinoxate)(又称甲氧基肉桂酸辛酯或OMC)、奥克立林(octocrylene)、羟苯甲酮和阿伏苯宗(avobenzone);以及反射剂(例如,二氧化和氧化锌)。紫外线阻隔剂通常存在于防晒霜中,并且还可以发现于护肤霜和一些化妆品中。
[0501] 在一些实施方案中,氨氧化细菌与护理剂相关。护理剂通常是指可以施加于毛发以改善其外观、强度或顺滑性的具有霜样稠度的物质。
[0502] 在一些实施方案中,氨氧化细菌与布料相关。布料通常是指适用于制成服装的柔性材料,例如,其具有足够的材料强度来承受穿着者的日常运动。布料可以是纤维的、织造的或针织的;它可以由天然存在的材料或合成材料制成。示例性布料包括、亚麻、羊毛、苎麻、丝、牛仔布、皮革、尼龙、聚酯和氨纶及其共混物。
[0503] 在一些实施方案中,氨氧化细菌与纱相关。纱通常是指适合于针织或编织的细长柔性纺成材料。纱可以由例如羊毛、棉、聚酯和其共混物制成。
[0504] 在一些实施方案中,氨氧化细菌与线相关。线通常是指适合于缝纫的细长柔性纺成材料。线通常具有比纱更细的直径。线可以由例如棉、聚酯、尼龙、丝及其共混物制成。
[0505] 还可以用氨氧化细菌处理服装制品,如(例如)类、鞋垫、睡衣、运动鞋、皮带、帽子、衬衫、内衣、运动服装、头盔、毛巾、手套、袜子、绷带等。还可以用氨氧化细菌处理床上用品,包括床单、枕头、枕套和毛毯。在一些实施方案中,氨氧化细菌还可以接触在一段时间内不能清洗的皮肤区域。例如,封闭在矫形铸件(其在愈合过程中固定受伤肢体)中的皮肤,以及为了适当愈合而必须保持干燥的接近受伤处的区域可以受益于与氨氧化细菌的接触。
[0506] 在一些方面,本公开提供了一种可穿戴制品,其包含氨氧化细菌或如本文所述的氨氧化细菌。可穿戴制品可以是能够与使用者的身体密切相连而不妨碍行走的轻质制品。可穿戴制品的实例包括手表、腕带、头带、头筋、发网、浴帽、帽子、假发、胶粘性塑料膜和贴片、胶粘性微针贴片和阵列以及珠宝。包含本文所述的氨氧化细菌的可穿戴制品可以例如在提供下列中的一种或多种的浓度下提供:皮肤病症的治疗或预防、与低亚硝酸盐水平相关的疾病或病状的治疗或预防、体臭的治疗或预防、向受试者供给一氧化氮的治疗或抑制微生物生长的治疗。
[0507] 在一些实施方案中,氨氧化细菌与旨在接触毛发的产品(例如,刷子、梳子、洗发剂、护理剂、头带、头筋、发网、浴帽、帽子和假发)相关。在头发上,远离皮肤表面形成的一氧化氮可以被捕获在帽子、头巾或面罩内并引导至吸入的空气中。
[0508] 接触人类受试者的表面的制品如尿布可以与氨氧化细菌相关。因为尿布被设计成保持和容纳由失禁个体产生的尿液和粪便,所以尿液和粪便中的尿素可以被皮肤和粪便细菌水解而形成游离氨,所述游离氨具有刺激性且可能导致尿布疹。掺入将尿素代谢成亚硝酸盐或硝酸盐的细菌(如氨氧化细菌)可以避免游离氨的释放,并且可以释放亚硝酸盐并最终释放NO,它们可以有助于维持儿童和失禁成人的健康皮肤。一氧化氮在尿布中的释放还可以对存在于人类粪便中的致病生物体具有抗微生物作用。这种作用即使在一次性尿布被作为废物处置后仍可以持续,并且可以通过接触弄脏的一次性尿布而减少疾病传播的发生。
[0509] 在一些实施方案中,包装含氨氧化细菌的产品。包装可以用于压缩产品或保护其免受损坏、污垢或降解。包装可以包括例如塑料、纸、纸板或木材。在一些实施方案中,包装是不透细菌的。在一些实施方案中,包装可渗透氧气和/或二氧化碳。
[0510] 14.用氨氧化细菌治疗的方法
[0511] 本公开提供了使用氨氧化细菌治疗疾病和病状的各种方法,例如通过施用氨氧化细菌,例如氨氧化细菌的制剂,例如天然产品或强化的天然产品(经氨氧化细菌,例如外源性氨氧化细菌强化的强化天然产品)或包含天然产品或强化的天然产品的组合物、制剂或配制物。
[0512] 可用于治疗疾病和病状的氨氧化细菌包括本申请中描述的所有氨氧化细菌组合物,例如氨氧化细菌的制剂、天然产品或强化的天然产品,或包含天然产品或强化的天然产品组合物、制剂或配制物。
[0513] 例如,本公开提供了氨氧化细菌的组合物用于治疗病状或疾病(例如,抑制受试者皮肤上的微生物生长)的用途。在实施方案中,氨氧化细菌可用于治疗溃疡或溃疡(例如静脉性溃疡,例如下肢溃疡,例如下肢静脉性溃疡,例如糖尿病性溃疡,例如糖尿病足溃疡)中的感染、慢性伤口、痤疮(例如,寻常痤疮)、酒渣鼻、湿疹、荨麻疹或屑病。
[0514] 本公开的氨氧化细菌可以提供或含有可用于治疗或预防皮肤病症,治疗或预防与低亚硝酸盐水平有关的疾病或病状,治疗或预防体臭,治疗以向受试者供给一氧化氮,或治疗以抑制微生物生长的内容物。
[0515] 本公开的氨氧化细菌可以提供或可用于治疗以下的至少一种:HIV皮炎、溃疡(例如静脉性溃疡,例如下肢溃疡,例如下肢静脉性溃疡)中的感染(例如糖尿病足溃疡中的感染)、过敏性皮炎、痤疮(例如寻常痤疮)、湿疹、接触性皮炎、过敏反应、银屑病、荨麻疹、酒渣鼻、皮肤感染、血管疾病、阴道酵母菌感染、细菌性阴道病、性传播疾病、心脏病、动脉粥样硬化、脱发、继发于糖尿病或卧床的下肢溃疡、心绞痛(特别是慢性稳定型心绞痛)、缺血性疾病、充血性心力衰竭、心肌梗死、缺血再灌注损伤、叶炎、高血压、肥厚性器官退化、雷诺氏现象、纤维化、纤维化器官退化、过敏、自身免疫性致敏、终末期肾病、肥胖、阳痿、肺炎、原发性免疫缺陷病、大疱性表皮松解症或癌症。在实施方案中,所述病状是下肢静脉性溃疡。
[0516] 在一些实施方案中,氨氧化细菌用于治疗受试者。“受试者”可包括动物、哺乳动物、人类、非人类动物、家畜动物,或伴侣动物。术语“受试者”旨在包括人类和非人类动物,例如脊椎动物、大型动物和灵长类动物。在某些实施方案中,受试者是哺乳动物受试者,并且在具体的实施方案中,受试者是人类受试者。尽管已经清楚地预见到人类的应用,但是在此也考虑了例如与非人类动物的兽医应用。本公开内容的术语“非人类动物”包括所有脊椎动物,例如非哺乳动物(例如鸟,例如鸡,两栖动物,爬行动物)和哺乳动物,如非人灵长类动物,家养动物和农业上有用的动物,例如绵羊,狗,猫,牛,猪,大鼠等。
[0517] 在一些实施方案中,本文所述的氨氧化细菌用于抑制其它生物体的生长。例如,氨氧化细菌可以良好地适于长期定植于人类皮肤,并且在一些实施方案中,它竞争过在皮肤上非所需的其它细菌。非所需的皮肤细菌包括例如那些可以感染伤口、提高疾病的风险或严重程度或产生气味的细菌。非所需的细菌可以被称为致病性细菌。某些非所需的皮肤细菌,例如潜在致病性细菌,例如致病性细菌,包括金黄色葡萄球菌(S.aureus)例如耐甲氧西林金黄色葡萄球菌、绿假单胞菌(P.aeruginosa)、化脓性链球菌(S.pyogenes)、鲍曼不动杆菌(A.baumannii)、丙酸杆菌和寡养单胞菌。本文所述的氨氧化细菌可以通过例如消耗稀少的营养物或产生有害于其它生物体的副产物(例如,使皮肤的pH变成不利于非所需生物体生长的水平)竞争过其它生物体。
[0518] 因此,本公开尤其提供了一种抑制受试者皮肤上的微生物生长的方法,其包括向有需要的人局部施用有效剂量的如本文所述的氨氧化细菌。类似地,本公开提供了用于抑制受试者皮肤上的微生物生长的如本文所述的氨氧化细菌。同样地,本公开提供了氨氧化细菌在生产用于抑制受试者皮肤上的微生物生长的药剂中的用途。
[0519] 本公开还提供了一种向受试者供给一氧化氮的方法,其包括将有效剂量的本文所述的氨氧化细菌放置在紧邻所述受试者处。类似地,本公开提供了用于向受试者供给一氧化氮的如本文所述的氨氧化细菌。同样地,本公开提供了氨氧化细菌在生产适于放置在紧邻受试者处的药剂或组合物中的用途。
[0520] 本公开还提供了一种减少体臭的方法,其包括向有需要的受试者局部施用有效剂量的本文所述的氨氧化细菌。类似地,本公开提供了用于减少受试者的体臭的如本文所述的氨氧化细菌。同样地,本公开提供了如本文所述的氨氧化细菌在生产用于减少体臭的药剂或组合物中的用途。
[0521] 本公开还提供了一种治疗或预防与低亚硝酸盐水平有关的疾病的方法,其包括向有需要的受试者局部施用治疗有效剂量的本文所述的氨氧化细菌。类似地,本公开提供了用于治疗与低亚硝酸盐水平有关的疾病的如本文所述的氨氧化细菌的局部用配制物。同样地,本公开提供了如本文所述的氨氧化细菌在生产用于治疗与低亚硝酸盐水平有关的疾病的局部用药剂中的用途。
[0522] 本公开还提供了一种治疗或预防皮肤病症或皮肤感染的方法,其包括向有需要的受试者局部施用治疗有效剂量的如本文所述的氨氧化细菌。类似地,本公开提供了用于治疗受试者中的皮肤病症的如本文所述的氨氧化细菌。同样地,本公开提供了如本文所述的氨氧化细菌在生产用于治疗皮肤病症的药剂中的用途。在实施方案中,所述皮肤病症是痤疮(例如寻常痤疮)、酒渣鼻、湿疹、银屑病或荨麻疹;所述皮肤感染是脓疱病。
[0523] 虽然不希望受理论的束缚,但提出了用治疗有效剂量的氨氧化细菌治疗痤疮(例如寻常痤疮);和/或通过酸化的亚硝酸盐和NO产生来限制和/或抑制与寻常痤疮有关的痤疮丙酸杆菌的扩散和增殖。
[0524] 虽然不希望受理论的束缚,但提出了用治疗有效剂量的如本文所述的氨氧化细菌治疗酒渣鼻可以涉及由于NO生成所引起的下调。这可能是由于Kazal型KLK5/KLK7抑制剂的表达,其可以减少人抗菌肽(cathelicidin)LL-37从其前体前肽hCAP18的形成。
[0525] 虽然不希望受理论的束缚,但提出了用治疗有效剂量的如本文所述的氨氧化细菌治疗湿疹和/或特应性皮炎可以涉及由于NO生成所引起的炎症下调;和/或通过酸化的亚硝酸盐和NO产生来限制和/或抑制金黄色葡萄球菌和经常与特应性皮炎中的极高的定殖率和皮肤负载有关的其它皮肤病原体的扩散和增殖。
[0526] 虽然不希望受理论的束缚,但提出了用治疗有效剂量的本文所述的氨氧化细菌治疗银屑病可以涉及由于NO生成所引起的炎症下调以及人抑菌肽LL-37形成的减少。
[0527] 虽然不希望受理论的束缚,但提出了用治疗有效剂量的如本文所述的氨氧化细菌治疗银屑病可以涉及由于NO生成所引起的炎症下调。
[0528] 虽然不希望受理论的束缚,但提出了用治疗有效剂量的如本文所述的氨氧化细菌治疗脓疱病或其它皮肤感染和软组织感染可以涉及限制和/或抑制金黄色葡萄球菌(S.aureus)、铜绿假单胞菌(P.aeruginosa)、化脓性链球菌(S.pyogenes)、鲍曼不动杆菌(A.baumannii)、丙酸杆菌和寡养单胞菌的扩散和增殖。
[0529] 本公开还提供了一种促进伤口愈合的方法,其包括向伤口施用有效剂量的如本文所述的氨氧化细菌。类似地,本公开提供了用于治疗伤口的如本文所述的氨氧化细菌。同样地,本公开提供了如本文所述的氨氧化细菌在生产用于治疗伤口的药剂或组合物中的用途。
[0530] 如本文所述的氨氧化细菌可以用于促进愈合能力受损的患者(例如,糖尿病患者)中的伤口愈合。
[0531] 在一些实施方案中,本公开提供了使用如本文所述的氨氧化细菌来预防疾病或病症(例如,皮肤病症)的方法。在某些实施方案中,预防意指相比于类似的未经治疗的受试者降低受试者发展疾病的风险。不必将风险降低至零。
[0532] 在一些实施方案中,提供了一种改变受试者的皮肤微生物组的组成的方法。该方法可包括向所述皮肤的表面施用(例如,施加)含有氨氧化细菌的制剂。施用(例如,施加)的量和频率足以减少所述皮肤表面上的致病性细菌的比例。所述受试者可以基于受试者需要减少皮肤表面上的致病性细菌的比例来选择。
[0533] 沐浴频率降低的个体(如宇航员、潜艇船员、战役期间的军事人员、偏远地区的民工、难民、卧床不起的个体和许多其它人)可以通过将氨氧化细菌保持在皮肤上来维持更健康的皮肤。关于卧床不起的个体,在一些实施方案中,氨氧化细菌通过扩张不充分循环来降低褥疮的频率或严重性。
[0534] 应当理解,许多现代的退行性疾病可能由缺乏NO种类所引起,且外部皮肤上的氨氧化细菌可以通过扩散供应那些种类,并且对皮肤施加氨氧化细菌解决长期的医疗状况。在某些实施方案中,向受试者施加氨氧化细菌以抵消现代的沐浴实践,尤其是阴离子去污剂从外部皮肤上除去氨氧化细菌。
[0535] 局部施加的一种合适的方法为施加足够的氨氧化细菌,然后穿上足够的衣物,以便诱导出汗。然而,许多人将希望得到氨氧化细菌的益处,同时维持他们当前的沐浴习惯,在这种情况下,可以连同足够的底物一起施加所述细菌的培养物以供它们产生NO。接近人类汗液的无机组成的营养液可以用于此目的。利用适于接近人类汗液的培养基的细菌使它们在被施用时适应的时间减至最少。由于汗液一旦分泌到皮肤表面上便蒸发,因此使用具有较高离子强度的培养基是理想的。约两倍于人类汗液的浓度是合适的,但还考虑了其它条件。这可以作为喷雾剂,凝胶,膜形成聚合物ge,乳膏,泡沫或洗剂应用。NH3或尿素、O2、CO2和矿物质通常满足氨氧化细菌的营养需求。在一些实施方案中,所述底物包含微量矿物质,其包括铁、铜、锌、钴、钼、锰、钠、钾、钙、镁、氯化物、磷酸盐、硫酸盐或其任何组合。在一些实施方案中,营养物溶液会含有pH缓冲系统以优化底物的递送。
[0536] 在一些实施方案中,本公开提供了一种通过将含有氨氧化细菌的绷带施加到伤口上来治疗所述伤口的方法。还提供了生产此类绷带的方法。所述绷带可以包括例如将绷带固定在伤口附近的未受损皮肤上的粘附部分以及包覆或覆盖伤口的柔软的柔性部分。在一些实施方案中,所述绷带不包含除氨氧化细菌以外的其它生物体。所述绷带可以由可渗透材料制成,所述可渗透材料在绷带被施加至伤口上时允许气体如氧气和二氧化碳触及氨氧化细菌。在某些实施方案中,所述绷带包含用于氨氧化细菌的营养物,如铵、氨、尿素或微量矿物质。在某些实施方案中,所述绷带包含氨氧化细菌耐受的抗生素。所述抗生素抗性可以产生自一个或多个内源性抗性基因或产生自一个或多个转基因。
[0537] 在一些实施方案中,氨氧化细菌例如氨氧化细菌制剂,按每次施加约108–109CFU、109–1010CFU、1010–1011CFU、1011-1012CFU、1012-1013CFU或1013-1014CFU的剂量施用。在一些实施方案中,按约109-1010CFU,约1x109–5x109、1x109–3x109或1x109–10x109CFU;或约1010-
1011CFU,例如约1x1010–5x1010,1x1010–3x1010,或1x1010–2x1010CFU;或约1011-1012CFU,例如
11 11 11 11 11 11 12 13 12
约1x10 –5x10 、1x10 –3x10 或1x10 –2x10 CFU;或约10 -10 CFU,例如约1x10 –
5x1012、1x1012–3x1012或1x1012–2x1012CFU;或约1013-1014CFU,例如约1x1013–5x1013、1x1013–
3x1013或1x1013–2x1013CFU的剂量局部施用氨氧化细菌。
[0538] 在一些实施方案中,以每剂约1-2、2-5、5-10、10-15、12-18、15-20、20-25或25-50的体积施用氨氧化细菌。在一些实施方案中,溶液的浓度为约108-109、109-1010或1010-1011CFU/ml。在一些实施方案中,每天以两个15ml剂量施用氨氧化细菌,其中每个剂量的浓度为109CFU/ml。
[0539] 在一些实施方案中,每天施用氨氧化细菌一次、两次、三次或四次。在一些实施方案中,每周施用氨氧化细菌一次、两次、三次、四次、五次或六次。在一些实施方案中,在沐浴后不久施用氨氧化细菌。在一些实施方案中,在睡觉前不久施用氨氧化细菌。
[0540] 在某些方面,本公开提供了组合疗法,其包括氨氧化细菌和第二治疗剂。例如,本公开提供了物理混合的两种(或更多种)疗法的物理混合物。在其它实施方案中,将两种(或更多种)疗法作为单独的配制物组合施用。第二疗法可以是例如药物制剂、手术或治疗有关疾病或病症的任何其它医疗方法。以下段落描述能够治疗溃疡(例如静脉性溃疡,例如下肢溃疡,例如下肢静脉性溃疡,糖尿病性溃疡)、慢性创伤、痤疮(例如寻常痤疮)、酒渣鼻、湿疹和银屑病的组合疗法。所述组合疗法可包括在如本文所述的容器或递送装置中,或者可使用单独的递送装置递送。所述组合疗法可包括在容器的第一腔室、第二腔室或第三腔室或递送装置中。组合疗法可以治疗下肢静脉性溃疡。
[0541] 例如,在能够治疗溃疡(例如,静脉性溃疡,例如下肢溃疡,例如下肢静脉性溃疡,例如糖尿病性溃疡)的组合疗法中,第二疗法可以包括例如伤口敷料(例如,吸收性填充剂、水凝胶敷料或水胶体)、血管紧张素、血管紧张素类似物、富血小板纤维蛋白疗法、高压氧疗法、负压伤口疗法、清创术、引流、动脉血管再生、高压氧疗法、低强度激光疗法和腓肠肌退缩术。组合疗法可以包含上述治疗中的一种或多种。
[0542] 在能够治疗慢性创伤的组合疗法中,第二疗法可以包括例如抗生素(例如,局部或全身性的,以及杀菌或抑菌的),如青霉素、头孢菌素、多粘菌素、利福霉素(rifamycin)、台勾霉素(lipiarmycin)、喹诺酮类、磺胺类、大环内酯类、林可酰胺类、四环素类、环脂肽、甘氨酰环素类、恶唑烷酮类和台勾霉素;血管紧张素、血管紧张素类似物;清创术;引流;伤口冲洗;负压伤口疗法;加热;动脉血管再生;高压氧疗法;抗氧化剂,如抗坏血酸、谷胱甘肽、硫辛酸、胡萝卜素、α-生育酚或泛醇;低强度激光疗法;腓肠肌退缩术;生长因子,如血管内皮生长因子、胰岛素样生长因子1-2、血小板源性生长因子、转化生长因子β或表皮生长因子;施加自体血小板,如那些分泌一种或多种生长因子如血管内皮生长因子、胰岛素样生长因子1-2、血小板源性生长因子、转化生长因子β或表皮生长因子的自体血小板;角化细胞培养物的植入;同种异体移植物;胶原蛋白,例如包含胶原蛋白的敷料;或蛋白酶抑制剂如SLPI。
组合疗法可以包含上述治疗中的一种或多种。
[0543] 在能够治疗痤疮(例如寻常痤疮)的组合疗法中,第二疗法可以包括例如药物治疗(例如,全身或局部的),如过氧化苯甲酰、抗生素(如红霉素、克林霉素或四环素)、水杨酸、激素(例如,包括孕激素如去氧孕烯(desogestrel)、诺孕酯(norgestimate)或屈螺酮(drospirenone));类视色素如维甲酸(tretinoin)、阿达帕林(adapalene)、他扎罗汀(tazarotene)或异维甲酸(isotretinoin)。第二疗法还可以是诸如粉刺摘除、皮质类固醇注射或手术切缝的程序。组合疗法可以包含上述治疗中的一种或多种。
[0544] 在能够治疗酒渣鼻的组合疗法中,第二疗法可以包括例如抗生素,例如,口服四环素抗生素如四环素、多西环素或米诺环素,或局部抗生素如甲硝唑;壬二酸;α-羟基酸;可以规定异维甲酸;檀香油;可乐定(clonidine);β-阻断剂如纳多洛尔(nadolol)和普洛尔(propranolol);抗组胺药(如氯雷他定(loratadine));米氮平(mirtazapine);甲基磺酰甲烷或水飞蓟素(silymarin),任选地彼此组合;激光,如皮肤血管激光或CO2激光;或光疗法,如强脉冲光、低强度光疗法或光子嫩肤术。组合疗法可以包含上述治疗中的一种或多种。
[0545] 在能够治疗湿疹的组合疗法中,第二疗法可以包括例如皮质类固醇,如氢化可的松或丙酸氯倍他索;免疫抑制剂(局部或全身的),如吡美莫司(pimecrolimus)、他克莫司(tacrolimus)、环孢素、硫唑嘌呤或甲氨蝶呤;或光疗法,如利用紫外光。组合疗法可以包含上述治疗中的一种或多种。
[0546] 在能够治疗银屑病的组合疗法中,第二疗法可以包括例如皮质类固醇,如去羟米松;类视色素;焦油;维生素D或其类似物,如帕立骨化醇(paricalcitol)或卡泊三醇(calcipotriol);保湿剂和润肤剂,如矿物油、凡士林、卡泊三醇、decubal或椰子油;地蒽酚(dithranol);或醋酸氟轻松(fluocinonide)。组合疗法可以包含上述治疗中的一种或多种。
[0547] 15.用于改善氨氧化细菌治疗的实验模型
[0548] 包含如本文所述的氨氧化细菌(其任选与另一种疗法组合)的治疗可以使用许多模型系统加以改善。这些模型系统可以用于确定合适的剂量和施用时间安排。
[0549] 例如,对于慢性创伤和溃疡(例如静脉性溃疡,例如糖尿病性溃疡或本文公开的其它溃疡),可以使用小鼠皮肤穿刺模型。这些病症的其它模型包括豚鼠模型中的受控皮肤缺血、兔耳溃疡模型、对伤口施用钙或局部施用多柔比星(doxorubicin)。
[0550] 对于痤疮(例如寻常痤疮),可以使用(例如)墨西哥无毛犬模型、犀鼠模型或兔耳分析。对于酒渣鼻,可以使用(例如)皮内注射LL-37至小鼠皮肤中或叙利亚仓鼠(Syrian hamster)模型。对于湿疹,可以使用(例如)对致敏豚鼠或NC/Nga小鼠的耳部施加粉尘螨(Dermatophagoides farina)的粗提取物,施加二硝基氯苯。对于银屑病,可以使用(例如)异种移植模型,其中将涉及和未涉及的银屑病皮肤移植到免疫缺陷小鼠上;对SCID小鼠的皮肤施加针对白介素15的抗体;以及Sharpincpdm/Sharpincpdm小鼠模型。
[0551] 16.治疗效益的机制
[0552] 虽然不希望受理论的束缚,但据信下列的一种或多种机制有助于氨氧化细菌的有益作用,其在通过引用整体并入本文的国际申请WO/2005/030147中被找到。
[0553] 为了理解这些细菌有益的方面,理解血管生成是有帮助的。所有的体细胞,除了那些暴露在几百微米外界空气中的细胞,都从血液供应中获取所有代谢氧气。氧气被肺中的血液吸收,作为氧合血红蛋白被血红细胞运载到外周组织,在那里和二氧化碳交换,二氧化碳然后被运回,从肺中呼出。氧气必须从红细胞中扩散,通过细胞质,穿过内皮,并穿过各种组织直到到达利用氧气的细胞线粒体。人体内含有约5升血液,所以循环系统的体积与身体的体积相比而言很小。氧气不能被主动运输。它被动的通过浓度梯度从空气扩散到红细胞中,从红细胞扩散到细胞中,再从细胞到消耗氧气的细胞色素氧化酶。消耗氧气部位的氧气浓度在体内是最低的,且O2通量由扩散阻力和浓度梯度决定。完成给所有的外周组织供应充足氧气需要对毛细血管的大小和位置进行敏锐的控制。如果毛细血管的空间增加,完成同样的氧气通量就需要更大的浓度差和因此更低的细胞色素氧化酶的O2浓度。毛细血管之间的细胞越多,O2的需求就会更大。如果毛细血管之间的空间减小,完成器官代谢功能的细胞的可利用的空间也减小。
[0554] 在某些方面,应该了解,来自氨氧化细菌的NO容易被外皮肤所吸收,且由于外皮肤没有血红蛋白而转化成S-亚硝基硫醇。M.Stucker等人在“The cutaneous uptake of atmospheric oxygen contributes significantly to the oxygen supply of human dermis and epidermis”中已经表明,外皮肤从外界空气中接受所有的氧气。(Journal of Physiology(2002),538.3,第985–994页。)这是显然的,因为可以看到外皮肤基本上没有红细胞。因为它们是活的,且需要血液中的营养而不仅仅是氧气,所以这些层之间存在血浆循环。形成的S-亚硝基硫醇是稳定的,可以扩散通过身体,并构成可靠NO的体积源和使蛋白巯基转亚硝基的NO源。
[0555] 在一些方面,应该了解,毛细血管稀薄可以是NO水平不足的首要表现之一。F.T.Tarek等人表明,疏松的毛细血管或者说毛细血管稀薄在患有原发性高血压的人群中较为常见。(Structural  Skin  Capillary  Rarefaction  in  Essential 
Hypertension.Hypertension.1999;33:998-1001
[0556] 许多病状与毛细血管密度变得疏松有关。高血压是其中一种,且研究者报道稀疏的毛细血管也见于原发性高血压人群的孩童时期中以及糖尿病人群中。糖尿病的严重并发症是高血压、糖尿病性肾病,糖尿病性视网膜病,糖尿病性神经病。R.Candido等人已经发现,最后两种病状的特征是观察到症状之前流向受影响部位的血流量降低。(Haemodynamics in microvascular complications in type 1diabetes.Diabetes 
Metab Res Rev 2002;18:286-304。)降低的毛细血管密度和肥胖症相关,且普通体重降低增加毛细血管密度,如由A Philip等人在“Effect of Weight Loss on Muscle Fiber Type,Fiber Size,Capilarity,and Succinate Dehydrogenase Activity in Humans”中所示。The Journal of Clinical Endocrinology&Metabolism第84卷,第11期4185-4190,
1999。
[0557] 研究者已表明,在原发性雷诺现象(PRP)中,甲襞毛细血管比正常对照的稀薄(轻微的),且比已经发展为全身硬化(SSc)的患者丰富得多。M.Bukhari,Increased Nailfold Capillary  Dimensions In Primary Raynaud's Phenomenon And Systemic Sclerosis.British Journal of Rheumatology,第24卷,第35期:1127-1131,1996。他们发现毛细血管密度从35个环/mm2(正常对照组)降到33(PRP)、17(SSc)。对照、PRP、SSc的毛细血管支路之间的平均距离分别是18μ、18μ和30μ。
[0558] 在某些方面,应该了解,正常情况下身体用于感受“缺氧”的机制可影响到调节毛细血管密度的身体系统。根据本公开的这个方面,大量的“缺氧”组分被感受到,不是通过O2水平的降低,而是通过一氧NO水平的增加。NO基础水平的降低干扰了“缺氧”的感受,所以影响了许多通过“缺氧”调节的身体功能。例如,贫血通常被定义为“血红蛋白不足”,血红蛋白不足的一个后果就是“缺氧”,它被定义为“氧气不足”。根据一些方面,这些普通的定义不能解释两种病状的一氧化氮引起的方面。
[0559] 在休息状态时,急性等容贫血(isovolemic anemia)的耐受性良好。血细胞比容的2/3的减少对静脉回流的PvO2影响小,这暗示了无论是O2压还是整个身体的运输都没有降低。Weiskopf等人,Human cardiovascular and metabolic response to acute,severe isovolemic anemia.JAMA 1998,第279卷,第3期,217-221。在降低50%时(从140到70g Hb/L),平均PvO2(在32个受试者内)从大约77%降到约74%(饱和的)。血液中O2容量的降低通过血管舒张和心动过速来补偿,心率从63增加到85bpm。容易明显的是补偿是有效,然而,机制却不是。典型的解释是“缺氧”感受器检测“缺氧”,并用血管舒张和心动过速的方式补偿。
然而,检测不到“缺氧”。血液乳酸(厌氧呼吸的标志物)轻微地从0.77降到0.62mM/L,暗示了较少厌氧呼吸和较少“缺氧”。静脉回流PvO2的3%的降低是海拔上升300米(通常不会产生心动过速)会得到的同样水平的“缺氧”。在静脉回流的O2浓度保持不变,且O2消耗保持不变的情况下,在体内没有O2浓度降低的地方。由于O2感测,等容贫血期间的代偿不会发生。
[0560] 因此,急性等容贫血中观察到的血管舒张可归因于血管壁处的NO浓度增加。NO响应剪切应力和其它因素介导血管扩张。没有观察到NO代谢物水平改变,因为NO的产生速率没有改变,且继续等于破坏速率。由于metHb就像Hb那样结合NO,可以理解用metHb替代观察不到“低氧性”代偿,因此在metHb替代的情况下没有NO浓度增加,就像在Hb撤除的情况下有增加一样。
[0561] 一氧化氮在许多代谢途径中起作用。已经表明,NO的基本水平施加紧张(tonal)抑制应答,并且这个基本水平的降低导致那些路径的去抑制。Zanzinger等人报道了已经显示NO抑制基本交感紧张和减弱兴奋反射。(Inhibition of basal and reflex-mediated sympathetic activity in the RVLM by nitric oxide.Am.J.Physiol.268(Regulatory Integrative Comp.Physiol.37):R958-R962,1995。)
[0562] 在一些方面,应该了解,NO体积源的一种组分为低分子量S-亚硝基硫醇,其在无红细胞的皮肤上通过氨氧化细菌由外皮肤上产生的NO产生。这些低分子量S-亚硝基硫醇长期稳定,并且可以在血浆中自由扩散和循环。各种酶可从各种S-亚硝基硫醇裂解出NO,从而在酶切位点释放出NO。从皮肤上的AOB损失这个NO体积源导致破坏正常生理。远离毛细血管使用S-亚硝基硫醇产生NO对身体的优点在于从S-亚硝基硫醇产生NO无需O2。一氧化氮合酶(NOS)产生NO确实需要O2。在足够的S-亚硝基硫醇背景的情况下,甚至在缺氧区域中也可以生成NO。也不需要游离NO,因为NO只有与另一个分子附接时才发挥作用,如半胱氨酸残基的巯基或血红素的铁,因此NO的作用可以被转亚硝基化反应所介导,甚至在缺乏游离NO的情况下,只要存在S-亚硝基硫醇和转亚硝基酶。
[0563] Frank等人已表明,伴随正常创伤愈合的血管生成部分由通过增加的一氧化氮诱导的提升的VEGF产生。(Nitric oxide triggers enhanced induction of vascular endothelial growth factor expression in cultured keratinocytes(HaCaT)and 
during cutaneous wound repair.FASEB J.13,2002–2014(1999)。)
[0564] NO在形成癌症中起作用,表明本文所述细菌可用于癌症治疗和预防的方法中。根据某些方面,应该了解,在缺氧期间存在NO可阻止细胞在缺氧应激下分裂,这时细胞复制DNA的错误风险较大。一个相关的细胞功能是调控细胞周期。这是控制细胞如何和何时复制DNA、组装成双染色体和分裂的调控程序。细胞周期的调控是非常复杂的,并且没有完全理解。但是,已知,在细胞周期的路径上存在许多点,在这些点上该周期可以被停止,且分裂可以被阻止直至发生这种情况的状态被改善。p53肿瘤抑制蛋白是细胞周期调控时的关键蛋白,且它通过包括DNA损伤的不同细胞应激信号启动细胞阻滞和凋亡两者,并且P53在超过一半以上的人类癌症中发生突变,如Ashcroft等人在“Stress Signals Utilize Multiple Pathways To Stabilize p53”中所报道。(Molecular And Cellular Biology,2000年5月,第3224–3233页。)缺氧启动p53的积累,而且当缺氧在调控细胞周期中重要时,缺氧单独不能诱导p53mRNA效应蛋白的下游表达,因此不能引起细胞周期的停止。Goda等人报道了细胞阻滞的缺氧诱导需要缺氧-诱导因子-1(HIF-1α)。(Hypoxia-Inducible Factor 1αIs Essential for Cell Cycle Arrest during Hypoxia.Molecular And Cellular Biology,2003年1月,第359–369页。)Britta等人报道了,NO是HIF-1α的主要刺激物之一。
(Accumulation of HIF-1a under the influence of nitric oxide.Blood,2001年2月15日,第97卷,第4号。)相比之下,NO引起转录活性P53的积累,并且引起细胞周期的阻滞,和引起凋亡。Wang等人,P53Activation By Nitric Oxide Involves Down-Regulation Of Mdm2.THE JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY第277卷,第18期,发行期5月3日,第15697–
15702页,2002。
[0565] 在本公开的某些方面,应该了解,通过阻止会导致缺氧性死亡的毛细血管稀薄来阻止细胞坏死性死亡可以防止自身免疫性疾病。当细胞暴露于慢性缺氧时,反应性氧物质(ROS)生产增加,且对细胞代谢机能的损伤增加,最终导致细胞DNA的损伤增加。降低的代谢能力,由于ROS和外源性致癌物质暴露,将会降低损伤修复能力。随时间推移,损伤积累,并增加三个事件的机率:细胞将经历抑癌基因缺失,且细胞将变得癌化,细胞将通过坏死而死亡,或细胞通过细胞凋亡而死亡。当细胞死亡时,无论是通过坏死还是凋亡,细胞残骸必须从该部位中清除。死亡细胞被免疫细胞,包括树突细胞和巨噬细胞所吞噬。当这些细胞吞噬主体,它通过各种蛋白水解酶消化为抗原片段,然后将这些抗原附接至主要组织相容性复合物(MHC1、MHC2),并将抗原-MHC复合物移动到细胞表面,在那里它可与T细胞相互作用,并以各种方式激活T细胞。任何细胞损伤释放出通过各种方式刺激免疫系统的辅助物。一般来说,经历坏死的细胞会比经历凋亡的细胞刺激更大的免疫反应。因此,将免疫细胞长期暴露于死亡或频死的细胞可能导致自身免疫性疾病。
[0566] 在某些方面,应该了解,低基本NO导致纤维性肥大。一旦清除死亡细胞后,新的细胞无法轻易占据其位置,因为支持它的O2不足。任何此类新的细胞将遭遇相同宿命。位置可保持空置,在这种情况下,器官萎缩,毛细血管彼此靠得更紧,新的细胞现在丧失了先前由现在缺少的细胞产生的VEGF,所以毛细血管消失,并重新形成缺氧区。这可导致受影响的组织全面萎缩。在支持纤维化的组织中,相对惰性的胶原纤维可填充空间。由于所讨论的特定器官的身体代谢需求没有降低,器官就试图变大,但现在有着大量纤维含量。这可导致纤维性肥大,例如心脏和肝脏的纤维化肥大。一些器官如脑无法生长得较大或较小,因为神经和血管的三维连通性是重要的,且无法连续并同时定位到不对称萎缩的脑上。空间必须充满着某种物质,且β-淀粉样蛋白可能成为(不如此惰性的)空间填充物。肾脏因为肾囊而无法生长得较大,所以活细胞的数量变少,且它们被纤维化组织替代。如果死亡细胞被清除,则组织萎缩,而且NO/O2的比例又下降,且毛细血管又变得更稀疏。这就形成以下疾病的恶性循环:终末期肾病、充血性心力衰竭/心脏肥大、原发性胆汁性肝硬化、阿尔茨海默病、动脉粥样硬化、发炎性肠病、肥厚性瘢痕形成、和以雷诺现象开始并以全身性硬化和原发性干燥综合征结束的多发性结缔组织疾病,其中还观察到毛细血管稀薄。Ferrini等人已表明,由于用L-NAME造成的NOS的慢性抑制引起的基础NO水平的降低导致了心脏和肾脏的全面纤维化。(Antifibrotic Role of Inducible Nitric Oxide Synthase.Nitirc Oxide:Biology and Chemistry第6卷,第3期,第283–294页(2002)。)可能是低基础NO导致了纤维性肥大。
[0567] 在某些方面,应该了解,毛细血管稀薄影响受试者控制食欲的能力。在老人和动物的脑中观察到毛细血管稀薄。毛细血管稀薄与循环生长因子(包括胰岛素样生长因子-1)的下降相关。成人脑中的神经形成与血管生成相配合。因为脑调节许多稳态功能,为控制脑成分,毛细血管间的扩散长度增加可“理解”为那些物质的血液浓度不足。脑中葡萄糖的通量相当接近正常代谢需求,其中葡萄糖通量只比葡萄糖消耗大50至75%,且跨血脑屏障的葡萄糖转运体可以是饱和的,甾类特异性的,且不依赖于能量或离子梯度。胃口的大部分调节通过脑介导,且毛细血管稀薄可导致“营养物质”(或与“营养物质”成比例的标记化合物)的充足血液浓度被解读为不充足。这可能是肥胖症的一个原因。
[0568] 根据某些方面,应该了解,毛细血管稀薄可以是非胰岛素依赖型糖尿病的原因。非胰岛素依赖型糖尿病(NIDDM)也称为代谢综合征或第2型糖尿病,特征为胰岛素抗性。身体对胰岛素的敏感性降低,且胰岛素水平增加。患有NIDDM的人具有高血液葡萄糖、高血液甘油三酯,通常肥胖,有高血压,且通常具有大量内脏脂肪。
[0569] NIDDM伴有其它症状,毛细血管稀薄可能为原因。在研究40名患有或未患NIDDM、肥胖症(BMI 29)和消瘦(lean)(BMI 24)(每种10名)的男性时,Konrad等人报道,对于未患NIDDM的消瘦男性、未患NIDDM的肥胖男性、患有NIDDM的消瘦男性、患有NIDDM的肥胖男性,休息时的血液乳酸水平分别为1.78、2.26、2.42和2.76(mM/L)。(Α-Lipoic acid treatment decreases serum lactate and pyruvate concentrations and improves glucose effectiveness in lean and obese patients with type 2diabetes.Diabetes Care 22:280-287,1999。)乳酸是无氧糖酵解的量度。当O2不足以通过氧化磷酸化生成ATP时,细胞可通过无氧糖酵解产生ATP。无氧糖酵解的产物之一是乳酸,乳酸必须从细胞排出,否则pH下降,且功能受损。血液乳酸通常在运动研究中测到,其中增加暗示了可完成最大氧化工作的工作负载。在休息时较高的乳酸水平将指示休息时无氧糖酵解增加,这与毛细血管稀薄相一致。
[0570] 原发性胆汁性肝硬化与雷诺现象、瘙痒症、肖格伦氏综合征、骨质疏松、门静脉高压、神经病和胰功能不全相关,且肝异常与风湿性疾病相关。肝酶升高是肝炎症的症状,肝酶升高是作为“无症状”原发性胆汁性肝硬化的早期症状观察到。因此,本文所述细菌可用于治疗肝炎症。
[0571] Torre等人已经报道,阿尔茨海默病(AD)是微血管疾病,伴随着低灌注继发的神经性退化,这部分是由一氧化氮不足导致的。(综述:Evidence that Alzheimer's disease is a microvascular disorder:the role of constitutive nitric oxide,Brain Research Reviews 34(2000)119-136。)因此,本文所述细菌可用于治疗AD。
[0572] 与高血压相关的不利健康影响也可以是低基础NO的结果。对血管舒张的反应下降也与低基础NO相一致。NO是从来源扩散到传感器位置的可扩散分子,在那里它具有信号传导效果。在低NO水平的情况下,每个NO来源必须产生较多NO来在某一距离外生成某一强度的等同NO信号。NO在三个维度扩散,且所述扩散范围内的全部体积必须提升至将在传感器位置处给出适当信号的水平。这可在来源处和来源与传感器之间导致较高NO水平。接近来源的升高NO的不利局部效果可由过低NO背景引起。有一些证据表明实际上发生这种情况。在大鼠胰岛中,Henningsson等人已报道,用L-NAME抑制NOS通过诱导iNOS增加总NO生产。
(Chronic blockade of NO synthase paradoxically increases islet NO production and modulates islet hormone release.Am J Physiol Endocrinol Metab 279:E95–E107,2000。)通过增加NOS活性增加NO将只能在一定限度下起作用。当NOS被活化但未供应足够四氢生物喋呤(BH4)或L-精氨酸时,其“解偶联”并生成超氧化物(O2-)而非NO。这个O2-随即可以破坏NO。试图以超过供应BH4或L-精氨酸的速率生产NO反而降低NO水平。这可导致正反馈,其中低的NO水平由于NOS的刺激而变得更差,且解偶联的NOS生成大量的O2-,造成局部活性氧物质(ROS)损伤,如在动脉粥样硬化、终末期肾病、阿尔兹海默病和糖尿病中所观察到的那样。
[0573] 本文所述细菌也可以用于延迟衰老迹象。热量限制延长寿命,且Holloszy报道,限制食物摄入至随意对照的70%,将静坐大鼠的寿命从858天延长至1,051天,延长几乎25%。(Mortality rate and longevity of food restricted exercising male rats:a 
reevaluation.J.Appl.Physiol.82(2):399–403,1997。)热量限制与延长寿命之间的联系已被完善确立,然而,原因机制并不清楚。Lopez-Torres等人报道,检测大鼠中肝线粒体酶表明,H2O2的生产由于与热量限制相关的复合物I活性降低而减少。(Influence Of Aging And Long-Term Caloric Restriction On Oxygen Radical Generation And Oxidative DNA Damage In Rat Liver Mitochondria.Free Radical Biology&Medicine第32卷第9期第882-8899页,2002。)H2O2是由O2-歧化产生,它是在呼气作用期间由线粒体生产的主要ROS。Kushareva等人和其他人提出,O2-的主要来源是复合物I,它通过来自复合物III(琥珀酸盐还原位点)的电子逆流催化NAD/NADH氧化还原对。Beckman提出的老化自由基理论假定,自由基对细胞DNA、抗氧化剂系统和DNA修复系统的伤害随着年龄累积,且当关键系统的损伤到无法修复的程度,随即死亡。(The  Free  Radical  Theory  of Aging 
Matures.Physiol.Rev.78:547–581,1998。)
[0574] 作为另一机制,Vasa等人已经证实,NO激活端粒酶并延缓内皮细胞衰老。(Nitric Oxide Activates Telomerase and Delays Endothelial Cell Senescence.Circ Res.2000;87:540-542。)低基础NO将通过细胞色素氧化酶的去抑制来增加基础代谢速率。
增加的基础代谢还将增加细胞周转和生长速率。毛细血管稀薄通过诱导慢性缺氧可增加自由基损伤,且还可增加细胞周转,且因此通过两种机制加速老化。
[0575] 在一些方面,应该了解自养氨氧化细菌可产生过敏和自身免疫性疾病的保护方面。最为人所知的自身免疫疾病可能是第1型糖尿病,它是由通过免疫系统破坏胰腺中的产胰岛素细胞引起的。复发性流产也与自身免疫性疾病相关,其中阳性自体免疫抗体的数量与复发性流产的次数呈正相关。全身性硬化、原发性胆汁性肝硬化、自身免疫性肝炎、和各种风湿病是自身免疫性疾病的其它实例。观察到施用AOB减少过敏、枯草热,如WO/2005/030147中所述。
[0576] AOB借以对过敏和自身性免疫疾病发挥保护作用的一个机制是通过产生一氧化氮,主要是通过调节抑制NF-КB和防止免疫细胞活化和诱导炎症反应。NF-КB是上调基因表达的转录因子,且这些基因中的许多与炎症和免疫反应相关,包括导致释放细胞因子、趋化因子和各种粘附因子的基因。这些各种免疫因子导致免疫细胞迁移到它们的释放位点,导致炎症反应。已显示,组成型NO生产通过防止IКBα降解稳定IКBα(NF-КB的抑制剂)而抑制NF-КB。
[0577] Xu等人已证实,施用NO供体防止大鼠中实验性过敏性脑脊髓炎的发展。(SIN-1,a Nitric Oxide Donor,Ameliorates Experimental Allergic Encephalomyelitis in Lewis Rats in the Incipient Phase:The Importance of the Time Window.The 
Journal of Immunology,2001,166:5810–5816。)在此研究中,已证实,施用NO供体减少巨噬细胞浸润中枢神经系统,减少血液单核细胞增生,并增加血液单个核细胞凋亡。所有这些结果都被预期降低了诱导的免疫反应的程度和严重性。
[0578] 低基础NO可通过以下机制导致自闭症,所述机制为由于基础一氧化氮不足而不充分形成的脑中的新的连接。尽管不希望限制于理论,但在一些实施方案中,通过NO调节神经连接的形成。在这些情况下,任何降低NO扩散范围的条件都可以减小可经历连接的脑要素的体积尺寸。在低基础NO水平条件下发育的脑可布置在较小体积要素中,因为NO的有效范围减小。
[0579] 自闭症个体中呈现的其它症状也可以将低NO指定为病因,包括升高的音调辨别、肠道紊乱、免疫系统异常、脑血流量减少、脑葡萄糖消耗增加、血浆乳酸增加、依恋障碍(attachment disorder)和哼唱(humming)。这些症状中的每一种都可以归因于低基础NO水平。
[0580] Takashi Ohnishi等人已经报道,自闭症个体的血流量减少。Takashi Ohnishi等人,Abnormal regional cerebral blood flow in childhood autism.Brain(2000),123,1838-1844。J.M.Rumsey等人已报道,自闭症个体的葡萄糖消耗增加。Rumsey JM,Duara R,Grady C,Rapoport JL,Margolin RA,Rapoport SI,Cutler NR.Brain metabolism in 
autism.Resting cerebral glucose utilization rates as measured with positron emission tomography.Arch Gen Psychiatry,1985年5月;42(5):448-55(摘要)。
D.C.Chugani已报道,自闭症个体的血浆乳酸水平增加。Chugani DC等人,Evidence of altered energy metabolism in autistic children.Prog Neuropsychopharmacol Biol Psychiatry.1999年5月;23(4):635-41。出现这些效果可能是脑中毛细血管稀薄的结果,脑中毛细血管稀薄可减少血流量和O2供应,使得脑的一些代谢负载可通过糖酵解而非氧化磷酸化产生。
[0581] 已经由B.A.Klyachko等人证明一氧化氮通过离子通道的cGMP修饰而超极化后增加而增加神经元的兴奋性。Vitaly A.Klyachko等人,cGMP-mediated facilitation in nerve terminals by enhancement of the spike after hyperpolarization.Neuron,第31卷,1015-1025,2001年9月27日。C.Sandie等人已经表明,抑制NOS减少惊愕。Carmen Sandi等人,Decreased spontaneous motor activity and startle response in nitric oxide synthase inhibitor-treated rats.European journal of pharmacology 277
(1995)89-97。已经利用自发性高血压大鼠(SHR)和那不勒斯高兴奋(NHE)大鼠建立注意力缺陷多动障碍(ADHD)模型。Raffaele Aspide等人已经表明,这两个模型在急性NOS抑制期期间的注意力缺陷增加。Raffaele Aspide等人,Non-selective attention and nitric oxide in putative animal models of attention-deficit hyperactivity 
disorder.Behavioral Brain Research 95(1998)123-133。因此,本文的细菌可用于治疗ADHD。
[0582] M.R.Dzoljic还表明抑制NOS可抑制睡眠。M.R.Dzoljic,R.de Vries,R.van Leeuwen.Sleep and nitric oxide:effects of 7-nitro indazole,inhibitor of brain nitric oxide synthase.Brain Research 718(1996)145-150。G.Zoccoli已经报道,当NOS受到抑制时改变睡眠期间看到的多个生理作用,包括眼快速运动和脑循环的睡眠-清醒区别。G.Zoccoli等人,Nitric oxide inhibition abolishes sleep-wake differences in cerebral circulation.Am.J.Physiol.Heart Circ Physiol280:H2598-2606,2001。
L.Kapas等人已表明,NO供体促进非-REM睡眠,然而,这些增加比NO供体的持续时间持续长得多的时间,暗示可能是反弹效应。Levente Kapas等人Nitric oxide donors SIN-1and SNAP promote nonrapid-eye-movement sleep in rats.Brain Research Bullitin,第41卷,第5期,第293-298页,1996。M.Rosaria等人,Central NO facilitates both penile erection and yawning.Maria Rosaria Melis and Antonio Argiolas.Role of central nitric oxide in the control of penile erection and yawning.Prog Neuro-
Psychopharmacol&Biol.Phychiat.1997,第21卷,第899-922页。P.Tani等人已报道,失眠常见于患有亚斯伯格氏综合征(Asperger's)的成人中。Pekka Tani等人,Insomnia is a frequent finding in adults with Asperger's syndrome.BMC Psychiatry 2003,3:12。
Y.Hoshino还在自闭症儿童中观察到睡眠障碍。Hoshino Y,Watanabe H,Yashima Y,Kaneko M,Kumashiro  H.An  investigation on sleep  disturbance  of  autistic 
children.Folia Psychiatr Neurol Jpn.1984;38(1):45-51.(摘要)K.A.Schreck等人观察到,睡眠障碍的严重性与自闭症症状的严重性相关。Schreck KA等人,Sleep problems as possible predictors of intensified symptoms of autism.Res Dev Disabil.2004年1月-2月;25(1):57-66.(摘要)。因此,本文的细菌可用于治疗失眠。
[0583] W.D.Ratnasooriya等人报道,抑制雄性大鼠中的NOS减少性交前活动,减少性欲,并降低能育性。W.D.Ratnasooriya等人,Reduction in libido and fertility of male rats by administration of the nitric oxide(NO)synthase inhibitor N-nitro-L-arginine methyl ester.International journal of andrology,23:187-191(2000)。
[0584] 许多看似截然不同的以ATP耗竭和最终器官衰竭为特征的病症实际上可能是由硝基缺乏(nitropenia)“引起”,所述硝基缺乏由基础一氧化氮的全身缺乏引起。当这种情况出现在心脏中时,结果是扩张型心肌病。当这种情况出现在脑中时,结果是白质高强度、阿尔茨海默病、血管性抑郁、血管性痴呆、帕金森氏症和路易体痴呆。当这种情况出现在肾脏中时,结果为终末期肾病,当这种情况出现在肝脏中时,结果为原发性胆汁性肝硬化。当这种情况出现在肌肉中时,结果为纤维肌痛、海湾战争综合征或慢性疲劳综合征。当这种情况出现在肠中时,结果为缺血性肠病。当这种情况出现在胰脏中时,结果为首先第2型糖尿病,接着为慢性胰脏炎症,接着为胰脏自身免疫发作(或胰脏癌),接着为第1型糖尿病。当这种情况出现在结缔组织中时,结果为全身性硬化。
[0585] 在终末期肾病的残肾模型中,部分肾被移除,(无论是外科手术或是毒素),这样增加对剩余部分的代谢负载。生成超氧化物以降低NO,并增加O2扩散至肾线粒体中。长期超负载导致进行性肾毛细血管稀薄和进行性肾衰竭。在急性肾衰竭中,给人透析可让肾“休息”,并允许其恢复。在由横纹肌溶解(将肌红蛋白释放至血流中的肌肉损伤)诱导的急性肾衰竭中,肾损伤是以缺血性损伤为特征。肌红蛋白清除NO,就如同血红蛋白一样,且将在肾脏中引起血管收缩,导致缺血。肌红蛋白也将诱导局部硝基缺乏(local nitropenia)和一连串事件,导致进一步ATP耗竭。
[0586] 在一些方面,低NO水平导致线粒体生物发生减少。在减少的线粒体密度下生产相同ATP将导致O2消耗增加,或基础代谢速率加快。在许多病状中观察到加快的基础代谢速率,包括:镰状细胞性贫血、充血性心力衰竭、糖尿病、肝硬化、克罗恩病、肌萎缩性脊髓侧索硬化症、肥胖症、终末期肾病、阿尔茨海默病和慢性阻塞性肺病。
[0587] 虽然一定程度增加的O2消耗可被高效利用,但在这些病状中的许多中,解偶联蛋白也上调,表明增加的代谢速率的至少部分是由低效率引起。已知上调解偶联蛋白的病状包括肥胖症和糖尿病。
[0588] 随着较少线粒体将O2消耗至较低O2浓度,驱动O2扩散的O2梯度较大,所以O2扩散路径长度可增加,导致毛细血管稀薄,这在扩张型心肌病、高血压、第2型糖尿病和肾性高血压中观察到。
[0589] 铜,不管作为Cu2+或血浆铜蓝蛋白(CP)(主要的含铜的血清蛋白,在成人血清中以0.38g/L存在,也就是0.32%的Cu,且包含94%的血清铜)催化从NO和含硫醇的基团(RSH)形成S-NO-硫醇。血浆的Cu含量是可变的,且在感染条件下增加。Berger等人报道,烧伤渗出物的Cu和Zn含量相当多,1/3皮肤烧伤的患者在7天内损失20至40%正常身体Cu和5至10%的Zn含量。(Cutaneous copper and zinc losses in burns.Burns.1992年10月;18(5):373-
80.)如果患者皮肤被AOB定殖,包含AOB需要的尿素和Fe、Cu和Zn的伤口渗出物将被转化为NO和亚硝酸盐,通过iNOS大大增补NO的局部生产,而不消耗代谢激发伤口中的资源(诸如O2和L-精氨酸)。预期,伤口表面上的AOB造成的高NO和亚硝酸盐产生抑制感染,特别抑制厌氧细菌如导致破伤风、气性坏疽和肉毒中毒的梭菌感染。
[0590] 除非另有指示,否则本公开的实施可采用本领域的技术范围内的常规免疫学、分子生物学方法和重组DNA技术。文献中全面阐释此类技术。参见例如Sambrook等人Molecular Cloning:A Laboratory Manual(最新版本);和Current Protocols in 
Molecular Biology(F.M.Ausubel等人编,最新版本)。
实施例
[0591] 生物群系友好的成分和配制物测试方法
[0592] 用各种赋形剂处理后的真养亚硝化单胞菌D23的恢复
[0593] 真养亚硝化单胞菌D23悬浮液由连续培养系统获得。通过在20℃下10,000x g离心15分钟来收获真养亚硝化单胞菌D23培养物。在AOB储备溶液(50mM Na2HPO4-2mM MgCl2,pH 
7.6)中洗涤收获的细胞并且在于4℃贮存之前,在储备溶液中悬浮至0.5的最终光密度
(OD600)(约1010个细胞/ml)。为了确定每种赋形剂的效果,在10ml补充有铵(NH4+)且含有各种浓度的赋形剂(0至100%)的AOB培养基中将真养亚硝化单胞菌D23细胞悬浮液稀释至0.5
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的最终光密度(OD600)(约10 个细胞/ml)。对照培养物仅补充等体积的赋形剂稀释剂。在30℃下温育所述培养物。在11min,10min和60min时间点处收集1ml的培养物,在17,000x g下离心3分钟。通过Griess试剂将上清液用于测量亚硝酸钠。在AOB培养基中洗涤获得的细菌团粒,在补充有NH4+的10ml AOB培养基中悬浮,并在在椭圆摇床上以150rpm(直立位置)在30℃下摇动温育。通过测量24小时间隔处收集的样品中的OD600值和亚硝酸盐积累来对来自用赋形剂处理的真养亚硝化单胞菌D23细胞的恢复监测24-48小时。
[0594] 取决于测试的成分、赋形剂或组合物,测量的亚硝酸盐浓度可以允许鉴定生物群系友好的成分、赋形剂或组合物。
[0595] 在某些实施方案中,仅在48小时时期结束时测量的大于1000微摩尔的亚硝酸盐产生才将指示生物群系友好的成分,赋形剂或组合物。在其它实施方案中,仅在48小时时期结束时测量的大于100微摩尔的亚硝酸盐产生才将指示生物群系友好的成分,赋形剂或组合物。在其它实施方案中,仅在48小时期间结束时测量的大于10微摩尔的亚硝酸盐产生才将指示生物群系友好的成分,赋形剂或组合物。
[0596] 鉴定为“+++”的恢复指示在48小时时期结束时测量的大于1000微摩尔的亚硝酸盐产生,并且可以提供生物群系友好的成分,赋形剂或组合物。鉴定为“++”的恢复指示在48小时时期结束时测量的约100微摩尔-1000微摩尔的亚硝酸盐产生,并且可以提供生物群系友好的成分,赋形剂或组合物。鉴定为“+”的恢复指示在48小时时期结束时测量的约10-100微摩尔的亚硝酸盐产生,并且可以提供生物群系友好的成分,赋形剂或组合物。未恢复(-)指示没有或基本上没有测量到的亚硝酸盐产生,例如在48小时的时间段内少于10微摩尔亚硝酸盐产生,这在绝大多数情况下不指示生物群系友好的成分,赋形剂或组合物。
[0597] 该方法可适用于水溶性或混溶性成分。对于油或不混溶的成分或配制物,测试物质可首先被吸附到载体珠或网状物上。这可以在缓冲液中冲洗,然后可以将珠或网状物放置在细菌悬浮液中并温育特定的时间段。可以将空的珠或网状物作为对照进行温育。在测试暴露期结束时,可以按照上面讨论的可溶性测试方法测试上清液细菌悬浮液的活性和存活力。
[0598] 对于例如洗发剂和清洁剂的实例,测试在10%和25%进行,因为它们通常在使用期间大约以这些比例用水稀释。
[0599] 测试的组合物具有以下成分的组分:
[0600] 092214-004玫瑰香味泡沫肥皂(图1A-1C)
[0601]
[0602] 092014-003无香味的泡沫肥皂(图1A-1C)
[0603]
[0604] 092214-003沐浴露(图2A-2C)
[0605]
[0606] 092214-001洗发剂(图3A-3C)
[0607]
[0608] 092214-002护理剂(图4A-4C)
[0609]
[0610]
[0611] 如图1A-1C所示,实现了在有香味和无香味的泡沫肥皂中温育1分钟后的亚硝酸盐产生。较长时间温育后(10min,和60min),实现了亚硝酸盐产生,但少于温育1分钟后的结果。实现的亚硝酸盐产生与测试样品中恢复的AOB的量相关。
[0612] 如图2A-2B所示,在沐浴露中温育1分钟后实现亚硝酸盐产生,并且与10%和25%沐浴露浓度的对照测试样品相当(25%浓度的样品具有较少的亚硝酸盐产生)。随着温育时间的增加,实现了较少的亚硝酸盐产生。实现的亚硝酸盐产生与测试样品中恢复的AOB的量相关。
[0613] 如图3A-3B所示,在洗发剂中温育1分钟后实现亚硝酸盐产生,并且与10%和25%沐浴露浓度的对照测试样品相当(25%浓度的样品具有较少的亚硝酸盐产生)。随着温育时间的增加,实现了较少的亚硝酸盐产生。实现的亚硝酸盐产生与测试样品中恢复的AOB的量相关。
[0614] 如图4A-4B所示,在护理剂中温育1分钟后实现亚硝酸盐产生,并且与对照测试样品相当。随着温育时间的增加,实现了相似的亚硝酸盐产生。实现的亚硝酸盐产生与测试样品中恢复的AOB的量相关。
[0615] 对于图5中的表格,下表描述了一些组合物测试的组分:
[0616] 10%S:P:L和25%S:P:L(百分比是指测试条件)
[0617]
[0618]
[0619] “13%Gly Bet”(在此情况下,13%是指配方本身)
[0620]
[0621] 13%Gly Bet–5%玫瑰
[0622]
[0623] 图5显示了特定表面活性剂或表面活性剂混合物的生物群系友好程度。与对照相比,这些符号与亚硝酸盐产生相关。鉴定为“+++”的恢复指示在48小时时期结束时测量的大于1000微摩尔的亚硝酸盐产生。鉴定为“++”的恢复指示在48小时时期结束时测量的约100微摩尔-1000微摩尔的亚硝酸盐产生。鉴定为“+”的恢复指示在48小时时期结束时测量的约10-100微摩尔的亚硝酸盐产生。未恢复(-)指示没有或基本上没有测量到的亚硝酸盐产生,例如在48小时的时间段内少于10微摩尔亚硝酸盐产生。
[0624] 附录VI-ASEAN化妆品文件
[0625] 附录VI-部分1-化妆品产品中允许使用的防腐剂列表
[0626] 附录VI-部分1
[0627] 允许的防腐剂列表
[0628]
[0629]
[0630]
[0631]
[0632]
[0633]
[0634]
[0635]
[0636]
[0637]
[0638]
[0639]
[0640] 关于附录VI:
[0641] 1.防腐剂是可以添加到化妆品中的物质,其主要目的是抑制此类产品中微生物的发展。
[0642] 2.也可以从产品(如香皂中的除臭剂或洗发剂中的去头皮屑剂)的介绍中明显看出的其它目的,将标有符号(+)的物质以本附件规定以外的其它浓度添加到化妆品中。
[0643] 3.用于配制化妆品的其它物质也可具有抗微生物特性,从而有助于如例如许多精油和一些酒精产品的保存。这些物质不包括在附件中。
[0644] 4.就此清单的目的而言
[0645] -“盐”意指:阳离子钠、钾、钙、镁、铵和乙醇胺的盐;阴离子氯化物、溴化物、硫酸盐、乙酸盐的盐。
[0646] -“酯”意指:甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、苯基的酯。
[0647] 5.含有甲或本附件中释放甲醛的物质的所有成品产品必须标有警告“含有甲醛”,其中成品产品中甲醛的浓度超过0.05%。
[0648] <1211>药典制品的灭菌和无菌保证
[0649] 本信息章节提供了对必须无菌的制品进行质量控制所涉及的概念和原则的一般描述。对自无菌性测试<71>下描述的那些相比无菌性测试程序中的任何修改或变化都应在整个无菌检验程序的背景中进行验证,并且不意图作为该章节中描述的方法的替代方法。
[0650] 在无菌的最严格定义内,样本只有当它完全没有活的微生物时,才被认为是无菌的。然而,由于测试的局限性,该绝对定义目前不能应用于整个批次的药典制品成品。在未完全破坏每个制品成品的情况下,无法实际上证明完全无菌。因此,声称无菌的批次的无菌性是以概率性术语来定义的,其中被污染的单位或制品的可能性是可接受地微乎其微的。此类无菌保证状态只能经由使用适当的灭菌循环及其后的无菌操作(如果有的话),在适当的现行良好制造实践下,而不通过仅对无菌性测试的依赖来建立。如下列举了验证和证明灭菌过程的基本原则:
[0651] 1.建立工艺设备具有在所需参数范围内运行的能力。
[0652] 2.证明关键控制设备和仪器在工艺设备规定的参数范围内运行的能力。
[0653] 3.进行代表设备的所需操作范围的重复循环。并采用真实或模拟的产品。证明过程是在预定的方案限制内进行,并且最终证明所在完成的重复过程中微生物存活的可能性不大于规定的限度。
[0654] 4.在例行操作中监视已验证的过程。根据需要定期再次认证和再次检定设备。
[0655] 5.完成方案,并记录以上步骤(1)到(4)。
[0656] 验证无菌处理方案的程序的原理和实施与验证灭菌程序相似。在无菌处理中,对最终剂型的组分分别灭菌,并且以无菌方式组合制品成品。
[0657] 对灭菌过程或无菌过程适当的验证需要对灭菌和洁净室技术领域有较高的知识水平。为了符合灭菌参数目前可接受的和可实现的限度,有必要采用适当的仪器和设备来控制温度和时间、湿度、和灭菌气体浓度、或吸收辐射等关键参数。许多灭菌程序中的验证程序的一个重要方面涉及使用生物指示剂(参见生物指示剂<1035>)。应对经验证和经认证的过程定期进行再验证;然而,再验证程序不一定像原始程序一样广泛。
[0658] 如下所述,典型的验证程序是为蒸汽高压灭菌器设计的,但该原则适用于本信息章节讨论的其它灭菌程序。所述程序包括几个阶段。
[0659] 安装合格阶段旨在建立对照和其它仪器是适当设计和校准的。应当提供文件来证明诸如蒸汽、水和空气等所需设施的质量。运行合格阶段旨在确认空隔室在方案中规定的所有关键隔室位置处的温度参数内起作用。开发热分布记录通常是合适的,即在采用多个温度传感装置的隔室中同时记录温度。当隔室温度不低于121°时,空隔室的典型可接受温度范围为±1°。验证程序的确认阶段是材料或制品的实际灭菌。该确定需要使用插入到制品样品中的温度感测装置,以及添加了适当浓度的适合的测试微生物的制品样品,或者在操作上满负载的高压釜配置中使用的单独的BI。热递送或渗透到实际制品的有效性和暴露时间是决定灭菌过程的致死性的两个主要因素。验证程序的最后阶段需要记录在执行程序中发生的支持性数据。
[0660] 通常认为,当在高压釜中处理时,最终灭菌的可注射制品或声称是无菌的关键装置达到10-6个微生物存活概率,即确保存活微生物存在于灭菌制品或剂型中的几率少于100万分之一。对于热稳定的制品,这种方法经常要大大超过实现10-6微生物存活概率(过度杀伤)所必需的关键时间。然而,对于大量的热量暴露可能会造成破坏性影响的制品而言,采用这种过度杀伤方法可能是不可行的。在后一种情况下,灭菌循环的开发在很大程度上取决于产品的微生物负载的知识,基于在一段合适时间内检测大量的预先灭菌的产品的批次。
[0661] D值是在特定温度下将微生物群体减少90%或1个对数周期(即,至1/10的存活分数)所需的时间(以分钟计)。因此,在例如其中嗜热脂肪芽孢杆菌(Bacillus stearothermophilus)孢子的BI制剂的D值在全部工艺参数(例如121°)下的1.5分钟内,如果在相同条件下处理12分钟,则可以认为致死性输入是8D。将此输入应用于产品的效果将取决于最初的微生物负载。假设它对灭菌的抵抗力相当于BI的抵抗力,如果所讨论的产品的微生物负载是102个微生物,2D的致死性输入产生1的微生物负载(10°理论上),以及进一步的6D产生10-6的计算的微生物存活概率(相同的条件下,12D的致死性输入可用于典型的“过度杀伤”方法)。一般来说,在经验证的灭菌循环下制品实现的存活概率与BI可能发生的情况并不完全相关。因此,为了有效使用,BI的抗性必需大于灭菌制品的天然微生物负载的抗性。尽管典型的微生物负载分离物的最大抗性不大可能表现出由该物种所显示的量级的耐热性(经常用作蒸汽灭菌的BI),就好像其耐热性相当于BI的耐热性一样作出最坏情况的假设和处理微生物负载是合适的。在以上实例中,如果产品具有102微生物的微生物负载,则认为12分钟周期足以进行灭菌。然而,如果指示剂最初具有106个微生物含量,则实际上可以预期10-2的存活概率;即100个BI中有1个可以产生阳性的结果。可以通过选择适当的BI来避免这种情况类型。或者,可以基于预定的可接受计数减少来使用高含量的指示剂。
[0662] 当特定的验证程序改变时,应重新建立针对这些条件所确定或验证的嗜热脂肪芽孢杆菌(Bacillus stearothermophilus)制剂的D值。可以采用生存曲线的确定(参见生物指示剂<1035>)或者所谓的分次循环法(fractional cycle approach)来确定优选用于特定消毒程序的生物指示剂的D值。分次循环法也可用于评估微生物负载的抗性。对分次循环研究了微生物计数减少或者分次阴性效果。这些数值可用于在生产环境下确定过程的致死性。可以在合格的生产设备中使用数据来建立适当的灭菌循环。也可以在常规灭菌过程中采用合适的生物指示剂(如嗜热脂肪芽孢杆菌制剂)。除了定期监视其它属性外,用于无菌保证的任何微生物负载方法都需要充分监视制品的微生物抗性以检测任何变化。
[0663] 灭菌方法
[0664] 本信息章中描述了五种最终灭菌方法,其包括通过过滤除去微生物和无菌加工指南。然而,现代技术的发展已经导致使用额外的程序。这些包括充气-压模(在高温下),除饱和蒸气和UV辐射外的湿热形式,以及无菌加工过程中的在线连续填充。为给定剂型或成分选择适当的过程需要高水平的灭菌技术知识和涉及被灭菌材料的过程的任何效果的信息1。
[0665] 蒸汽灭菌
[0666] 采用压力下的饱和蒸汽的加热灭菌过程在称为高压灭菌器的隔室中进行。这可能是使用最广泛的灭菌过程2。操作的基本原理是通过采用通风孔或阱(trap)实现的饱和蒸汽置换无菌隔室中的空气。为了更有效地从隔室和制品内置换空气,灭菌循环可以包括空气和蒸汽排放两个阶段。对给定产品或组分的循环的设计或选择取决于一系列因素,包括材料的热不稳定性、热穿透制品的知识,以及验证程序下描述的其它因素(参见上面)。除了对灭菌循环参数的描述之外,使用121°的温度,F0概念可以是适当的。F0(在121°以外的特定温度下)是指与121°下规定时间内的致死性等效的致死性所需的时间(以分钟计)。现代高压灭菌器往往通过控制系统操作,这比已服务多年的较老部件的蒸汽减压阀显著更灵敏。为了使这些较老部件达到本章讨论的循环控制的精度和水平,可能必需升级或修改这些部件上的控制设备和仪器。只有当隔室和蒸汽夹套对于继续安全使用是完好无损的并且当可以去除干扰热分布的沉积物时,设备的改进才是有保证的。
[0667] 干热灭菌
[0668] 药典制品的干热灭菌过程通常是在专门设计用于该目的的烤箱内通过批次过程进行的。现代烤箱提供有加热的过滤的空气,通过对流或辐射,并采用具有传感、监视和控制关键参数装置的吹风系统均匀分布在隔室中。干热灭菌设备的验证以类似于前述蒸汽灭菌器的方式进行。在单位用于灭菌组分(如意图静脉注射液的容器)时,应注意避免在隔室内积聚颗粒物。当在不低于250°下操作单位时,空隔室中典型可接受的温度范围为±15°。
[0669] 除了前述的批次处理之外,作为集成连续无菌填充和密封系统的一部分,经常采用连续过程以对玻璃器皿进行消毒和去热原处理。可采用对流或来自开放火焰的直接热传递来进行热分布。由于停留时间短得多,连续系统比上述批次过程需要高得多的温度。然而,产品通过过程中总的温度输入应相等于隔室处理期间达到的温度。在灭菌填充操作之前,连续过程也常需要快速冷却阶段。在鉴定和验证程序中,鉴于停留时间短,应当建立温度的一致性参数,和特别是停留时间。
[0670] 对于热稳定制品或成分而言,认为10-12的微生物存活概率是能实现的。用于验证和监视干热灭菌的生物指示剂是枯草芽孢杆菌孢子制剂。由于干热灭菌法常用于使玻璃器皿或容器不含热原及活微生物,如有必要,可将热原挑战作为验证程序的一个完整部分,例如,向一种或多种要处理的制品接种1000或更高USP单位的细菌内毒素。使用鲎(Limulus)溶胞物的测试可用于证明内毒素物质已经灭活至不超过原始量的1/1000(减少3个对数循环)。为了使测试有效,应当测量内毒素的原始量以及可接受的灭活后残留的量两者。对于内毒素测定的额外信息,参见细菌内毒素测试<85>。
[0671] 气体灭菌
[0672] 当要灭菌材料不能承受蒸汽灭菌或干热灭菌过程中获得的高温时,通常选择替代加热灭菌的气体灭菌。通常用于气体灭菌的活性剂是具有可接受的杀菌质量的环氧乙烷。该灭菌剂的缺点包括高度易燃特性(除非将其与合适的惰性气体混合)、诱变性和在处理材料特别是含有氯离子的那些中残留毒性的可能性。灭菌过程常在加压的隔室内进行,该隔室的设计与高压蒸汽灭菌器类似,但应有使用该气体的灭菌器所独特的额外特征(见下文)。采用该灭菌剂的设施应设计为提供足够的灭菌后脱气以确保微生物存活监视以及使操作人员与潜在有害气体的接触减少到最小程度3。
[0673] 按照前述方法完成应用环氧乙烷的灭菌过程的鉴定。然而,该程序比其它灭菌程序更全面,因为除温度外,也要求严格控制湿度、真空度/正压、环氧乙烷浓度。重要的确定是证明在整个周期中隔室内所有关键的过程参数都是合适的。由于应用于灭菌制品的灭菌参数是关键性变数,通常建议使负荷预先条件化来实现需要的湿含量,以使需要温度时的保持时间最小化,之后将负荷置于环氧乙烷隔室中。验证过程一般采用已接种适当的BI如枯草杆菌的孢子制剂的产品进行。为了验证,可在满隔室产品或模拟产品的负荷中使用它们。监测水分及气体浓度需要利用只有经验丰富、知识广泛的工作人员才能校正、操作和维修的精密仪器。BI也可用于检测常规运行。
[0674] 如本章其它部分所述,可以以分数阴性模式应用BI以建立用接种的产品或经接种的模拟产品设计环氧乙烷灭菌循环时最终微生物存活概率。
[0675] 环氧乙烷灭菌过程的主要局限性之一在于气体扩散到需要灭菌的产品面积最深部的能力有限。因此必须确定包装设计以及隔室加载方式,以使气体扩散的阻力最小。
[0676] 电离辐射灭菌
[0677] 不能耐受加热灭菌的医疗装置的迅速增长,以及对环氧乙烷安全性的担心,使得辐射灭菌的应用有所增加。它还可应用于药物原料和最终剂型。辐射灭菌的优点包括化学反应性低,可检测出的残留物少,以及需控制的变数较少的实情。事实上,辐射灭菌的特点是控制基础主要是可精确测定的被吸收的辐射剂量。由于这个特点,已开发出一些新程序来测定灭菌剂量。然而,这些尚处于审阅及评估之中,尤其是对额外控制及安全措施的需求等。辐射只引起极小的升温,但可影响某些级别和类型的塑料和玻璃。
[0678] 目前在使用的两类电离辐射是放射性同位素衰变(gamma-辐射)和电子束辐射。任一情况下,为了产生所需灭菌保证程度而建立的辐射剂量应当使得在此最高及最低剂量设置的范围之内被灭菌的制品的特性是可接受的。
[0679] 对于gamma照射,验证程序包括建立制品材料的相容性,建立产品装载模式和完成灭菌容器中剂量定位(包括鉴定最小及最大剂量区),建立定时器的设置,以及证明递送所需灭菌剂量。另外,对于电子束辐射,必须验证电压电流输送机速度,电子束的扫描尺寸的在线控制。
[0680] 对于gamma辐射灭菌,应当选择没有破坏作用而又能耐受的有效灭菌剂量。尽管历史上选用2.5兆拉德(Mrad)的吸收的辐射,但在某些场合希望和愿意对装置、原料药以及完成的剂型使用较低的剂量。然而,在其他情况下,较高的剂量是必须的。为验证特别是较低暴露水平的效力,必须确定该产品中微生物群体对辐射的天然抵抗力的幅度(数量、程度或两者)。必须确定特定的产品加载方式,并用化学计量计测定被吸收的最低和最高剂量分布。(这些计量计通常是有色的塑料圆柱、滑尺或直角尺,其显示直接根据所吸收的辐射能的量的颜色强化;它们需要仔细校正。)
[0681] 确定优选吸收剂量基于抗性微生物的纯培养物并采用已接种的产品(如枯草芽孢杆菌孢子作为生物指示剂)进行的。分数实验循环法提供可用于确定生物指示剂的D10值的数据。然后,应用这些数据以外推出建立适当的微生物存活概率吸收的辐射量。gamma-辐射灭菌的最新方法使剂量基于待灭菌的产品上所含的天然的不均一微生物负荷对辐射的抗性。正在改进这些方法,但是它们可以对于抗辐射能力作出更有代表性的估计,尤其是有相当多的辐射抗性微生物存在时4。这些范围从具有标准的抗性生物体(如短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus))接种到取自生产线的成品样品的亚处理(亚致死)剂量暴露。某些假设对于所有这些方法是共同的。尽管存在于制品上的总微生物群体通常由对辐射的不同敏感性的微生物的混合物组成,但是使制品经受不到完全致死的灭菌剂量的步骤消除了抗性较差的微生物部分。这导致辐射抗性方面相对均一的残留群体,并且用残留群体产生产生一致且可重现的测定结果。所需的实验室操作量取决于所用的特定方法。
[0682] 一种此类方法要求对独立制造的各批产品的有代表性的样品上的微生物总数进行计数。不测定微生物群体的抗性,并且剂量设定是基于分配给微生物群体的标准任意辐射抗性,这源自从制造商和文献获得的数据。作出的假设是选定的抗性分布代表比待灭菌的产品上的天然微生物群体更严重的挑战。然而,通过实验验证该假设。在验证后,可以从表格读出适当的辐射灭菌剂量。
[0683] 另一个且更精巧的方法并不需要对微生物群体计数,而是使用一系列逐增的剂量暴露来允许建立剂量,使得经此剂量照射之后大约100个样品中有约一个将是非无菌的。这不是最终的灭菌剂量,但它提供了基础,基于该基础使用表征剩余的微生物抗性群体的适当的抗性因子,通过从100个非无菌样品中产生一个的剂量外推来确定灭菌剂量。进行定期核查以核实发现是否继续有效。
[0684] 需要更多实验和包括微生物培养物分离的更精巧的方法包括下述方法,其中在测定亚灭菌剂量(产生百分之一的未无菌样品)之后,利用存活微生物的抗性来确定灭菌剂量。另一种是基于从造成不超过50%样品非无菌的亚灭菌递增剂量开始的不同的测定。以此剂量照射足够的样品后,得到许多微生物分离株。测定其中每种对辐射的抗性。然后利用这些抗性的测定值及最初测定的50%灭菌剂量计算出灭菌剂量。这些方法与所述的其它方法一样要求有核查程序。
[0685] 当已确定所需的最低辐射剂量,并且已经证实(以化学或物理剂量计)此剂量的递送后,可以在无菌保证的整个验证过程中实现灭菌的产品出厂(这可以包括应用的剂量的此类确认、生物指示剂的使用,以及其它手段)。
[0686] 过滤灭菌
[0687] 通过微生物截留材料过滤常用于通过物理除去含有的微生物来对热不稳定溶液灭菌。滤器装置一般由密封或夹在不透水的壳体中的多孔性基质组成。过滤介质或基质的有效性取决于多孔材料孔径,并且可取决于细菌在滤器基质上或其内的吸附性,或取决于筛分机理。有一些证据表明筛分是机制中较为重要的环节。应避免使用纤维脱落滤器,尤其是含有石棉的滤器,除非备选过滤法是不可能的。在需要纤维脱落滤器时,该过程必须包括在初始过滤步骤的下游或之后引入的非纤维脱落滤器。
[0688] 滤器评级—滤膜的孔径通过由反映滤膜截留规定菌株代表大小的微生物的能力的名义评级,而不由平均孔径的测定和大小分布的描述来评级。灭菌用滤膜(用于除去绝大多数污染微生物的那些)是在压力不低于30psi(2.0bar)时,能截留100%的107/cm2个缺陷假单胞菌菌株(ATCC 19146)培养物的膜。按照生产商的实践,此类滤膜通常分级为0.22μm5
或0.2μm 。也对必须通过过滤灭菌的试剂或介质规定滤膜评级(详见章节无菌检验<71>中关于油类和含油溶液或软膏和霜剂项下的十四烷酸异丙酯的处理)。仅能够截留较大微生物的细菌过滤膜(也称为分过滤膜)标记为0.45μm的名义评级。用于评级0.45-μm滤器的单一权威方法尚无规定,并且此评级取决于生产商间的常规方法;0.45-μm的滤器能够截留特定的黏质沙雷菌(ATCC14756)或缺陷假单胞菌培养物。使用的测试压力变化范围从低值(沙雷菌为5psi,0.33bar,缺陷假单胞菌为0.5psi,0.34bar)到高值(50psi,3.4bar)。它们是为要求不太彻底的微生物截留的无菌检验(详见无菌检验<71>中要检查的产品的无菌性检验部分的滤膜过滤)规定的。测试标本只被小的微生物污染的可能性较小。具有非常低的名义评级的滤膜可以用莱氏无胆支原体(Acholeplasma laidlawii)或其它支原体属菌株的培养物在压力为7psi(0.7bar)下测试,并且名义评级为0.1μm。当通过其它手段,例如通过截留各种直径的乳胶球体完成了评级时,基于微生物截留特性的名义分级有所不同。用户有责任基于要过滤的产品的性质为特定目的选择正确评级的过滤器。重复用户建立中的过滤能力测试一般是不可行的。优选地,对每个批次的制造滤膜在制造商的条件下进行微生物挑战测试。
[0689] 用户必须确定在制造过程中使用的过滤参数是否会显著影响微生物截留效率。在过滤过程验证中一些其它重要顾虑包括产品的相容性、药品、防腐剂或其它添加剂吸收,以及初始滤出液的内毒素含量。
[0690] 由于过滤过程的有效性也受到要过滤溶液的微生物负载的影响,因此,除了确定过滤程序的其它参数如压力、流量和滤器特性外,在过滤之前确定溶液的微生物质量是过滤过程验证的一个重要方面。因此,描述过滤截留能力的另一种方法是采用对数降低值(LRV)。例如,在所述条件下,0.2-μm的能截留107个特定菌种微生物的滤器的LRV不低于7。
[0691] 溶液的过滤灭菌过程最近达到的新的熟练程度,主要是膜滤器技术发展和增加的结果。这类过滤介质使其自身更加有效的标准化和质量控制,并且还使用户有更大的机会确认使用之前和之后的滤器装配体的特征或特性。当与深度滤器如陶瓷或烧结料相比时,膜滤器为聚合薄膜的事实提供了许多优点,但也有一些缺点。由于大部分膜表面是空隙或开放空间,正确组装和灭菌的滤器具有高流速的优点。缺点在于,由于膜通常是易碎的,必须确定安装正确,以及膜在安装、灭菌或使用过程中不会发生破裂。用户必须首先验证所选用的外壳和滤器装配体的兼容性和完整性。虽然可以有可能混合不同制造商生产的装配体和滤膜,但是应首先验证这些混合装配体的相容性。此外,膜滤器的制造商要完成用户通常不会重复的其它测试。这些包括微生物挑战测试。用户必须从制造商获取每批生产的滤器膜的测试结果作为记录。
[0692] 基于不低于107个缺陷假单胞菌(ATCC No.19146)悬浮液/平方厘米滤器表面面积的已验证挑战,通常使用名义孔径分级为0.2μm或更小的膜的装配体进行用于灭菌目的的过滤。目前可用的膜滤器介质包括醋酸纤维素、硝酸纤维素、氟碳酸酯、丙烯酸聚合物、聚碳酸酯、聚酯、聚氯乙烯、乙烯基、尼龙、polytef、以及甚至金属膜,并且它们可以由内部织物加固或支撑。使用之前要检验膜滤器装配体的初始完整性,前提是此类测试不会损害系统的有效性,并且应在过滤过程完成后进行测试以证明在整个过滤方案过程中滤器装配体保持其完整性。典型的使用测试是泡点测试、扩散性气流测试、压力保持测试和顺流测试。这些测试应当与微生物截留有关。
[0693] 无菌加工
[0694] 尽管普遍认为,对作为剂型或最终包装的最后灌装容器进行灭菌是保证批次产品受微生物污染的风险最小的优选工艺,但仍有相当多种类的产品是通过一系列的无菌步骤而非经最终灭菌制备的。设计这些以防止将活的微生物引入无菌的组分,或一旦中间过程使散装产品或其组分不含有存活的微生物。本部分综述了无菌操作法生产产品,而使微生物污染这批最终剂型成品的危险最小这一过程所包含的原理。
[0695] 定义为无菌加工的产品很可能由本章前述方法之一灭菌的组分组成。例如,批次产品(如可滤液体)可进行过滤灭菌。最终空容器组分可通过加热灭菌,破璃小瓶使用干热灭菌,并且胶塞使用高压灭菌器灭菌。最关键的场所是即时微生物环境,其中在组装以生产成品剂型和无菌灌装操作过程中这些预先灭菌的组分是暴露的。
[0696] 对于设计、验证和维护适当的灌装或其它无菌加工设施的要求主要针对(1)有正确设计因而能有效维护的空气供应装置用以形成无活微生物的空气环境,和(2)提供训练有素的操作人员,他们装备齐全并有防护服。所要求的环境可通过目前可用的高水平空气过滤技术达到,主要是通过输送必不可少的微生物质量空气来实现6。这类设施包括一级(位于暴露产品附近)和二级屏障系统(进行无菌操作的地方)。
[0697] 对于适当设计的无菌加工设施或无菌灌装区,要考虑无孔和平滑表面包括能够经常消毒的墙壁天花板的特征;更衣室有足够空间给操作人员更衣和存放无菌服;操作人员预备间与最终无菌加工间分开,如有必要配备气阀门和空气吹淋;不同操作室之间有适当压差,最大的正压在无菌加工间或区;直接靠近暴露产品或成分的地方使用(单向)层流和过滤空气,有充分的换气频率;周围湿度与温度的控制和消毒程序记录。在卫生及穿着技术方面对人员进行例行训练,例如使长大衣、手套及身体的其它覆盖物能充分遮盖暴露的皮肤表面。
[0698] 无菌加工及其设施的认证和验证一般是通过微生物环境监测程序和作为模拟产品的无菌培养基的加工确定过滤系统的效率来完成的。
[0699] 无菌设施的监控应包括滤器环境的定期检测以及颗粒与微生物环境的日常监控,并且也可能包括无菌培养基的定期加工。
[0700] 批次的无菌性测试
[0701] 应当认识到,如果污染只存在于小百分比的该批次成品,仲裁人无菌性测试也许不能检出微生物污染,因为所取的规定数目的单位会使该检测结果的作用受到明显的统计学限制。然而必须接受这一固有的限制,因为现有的知识尚未提供非破坏性的检测方法来证明该批次每一成品的微生物学质量,并且显著增加标本的数量是不可行的选项。
[0702] 支持声称大量看来是无菌的制品成品符合规范的主要手段由批次的实际生产和灭菌记录以及额外确认记录的文件记录组成,其记录灭菌过程具有完全灭活已建立的产品微生物负荷或更具抗性的挑战的能力。此外,要证明涉及遵照灭菌过程的暴露产品的每个加工步骤都是在避免污染的无菌方式下完成。如果判断从生产过程无菌保证验证研究和从过程控制中得到的数据提供批次满足含有污染的单位所需的低概率的更大的保证(与来自该批次的单元成品的无菌性测试结果相比较),则所采用的任何无菌性测试程序可以是最小的,或者定期取消。然而,假设已经达到所有上述生产标准,对制品成品批次的样品进行无菌性测试仍然是可取的。此类无菌性测试通常在批次作为最终产品质量控制测试制造之7
后直接进行。在制造控制过程中这样的无菌性测试不应与无菌性测试<71>中所述的相混淆。关于培养基、接种物及样品处理方法的细节可能相同,但是检测时所选的单位数和/或培养时间可能不同。应当选择的数目与要达到的目的有关,即,应根据对为保证制造过程无菌而进行的所有测量中无菌性测试要达到的信赖程度。另外,较长时间的温育将使检测时缓慢生长的微生物较为敏感。在培养基促进生长的检测中,此类缓慢生长物,特别是从产品微生物负荷中分离出来的,应当与其它检查菌株一起包括在内。如果该批次所有有关生产记录情况良好,且已知灭菌或无菌操作是有效的,则阴性或者满意的无菌检查结果仅仅作为该批次质量的现有证据的进一步支持。然而,在制造质量控制中不满意的检测结果表明需要进一步处理(参见实施、观察和解释)。
[0703] 用于无菌性测试目的的样本批次和选择的定义
[0704] 制品最后可以在隔室中或通过连续操作法灭菌。在隔室操作中,许多制品同时在受控制的条件下(例如蒸汽高压灭菌器)进行灭菌,使得对于无菌性测试的目的而言,该批次被认为是单一隔室的内容物。在连续操作中,对制品个别而连续地灭菌(例如通过暴露于电子束辐射),使得批次被认为是不多于在不长于24小时的期间内经历均匀灭菌的类似物品的总数。
[0705] 对于无菌灌装,术语“灌装操作”描述了在所有方面都相同的最终容器的组,其已在连续的不长于24小时的时间内不间断地或不发生会影响灌装装置完整性的变化从而用来自同一大批的相同产品进行无菌灌装。测试的物品应当代表每个灌装装置并且应当在整个灌装操作中每隔适当的时间选出。如果超过3台灌装机(每台有一个或多个灌装台)用于灌装单一批次,则每台灌装机应检测至少20个被灌装的容器(每个培养基不少于10个容器),但总数一般不超过100个容器。
[0706] 对于小批次,在无菌灌装或者最后灭菌的情况下,如果该批次中的最终容器的数目在20和200之间,通常应检查约10%的容器。如果该批次中的最终容器数目是20个或更少,则应检测不少于2个最终容器。
[0707] 实施、观察和解释
[0708] 无菌测试用的设备对于待检测制品提出的微生物学挑战不应大于无菌操作生产设备提出的挑战。无菌测试操作应当由无菌技术高度熟练的人员来实施。应当为这些人员的检测实施记录提供证明文件。
[0709] 进行无菌性测试所需的全面无菌操作可能产生10-3数量级的与产品无关的污染可能性,该水平类似于无菌操作的总效率,并且相当于经无菌操作的制品微生物的存活概率。这种概率水平显著高于通常归因于最后灭菌过程的概率,即一百万分之一或10-6微生物存活概率。应当定期应用适当的已知无菌的成品作为阴性对照,作为对该检查方法可靠的检验。优选地,进行该测试的技术人员应当不知道他们测试的是阴性对照品。在这些测试中,假阳性频率不超过2%是可取的。
[0710] 对于无菌操作的制品,这些事实支持无菌性测试<71>或更详细的一个下所阐述的常规应用测试。生产和验证的证明文件应当是可接受的和完整的。然而对于有效地最终灭菌的产品,较低的微生物存活概率可以指导其应用不如无菌性测试<71>规定的药典方法广泛的测试法的使用,或者甚至完全排除进行检测的必要性。最后灭菌的无菌保证的可靠性增加当然取决于适当验证和记录的灭菌过程。无菌性测试本身是不可替代的。
[0711] 质量控制检测的解释--对测试单位的操作和对检测结果与批次可接受或排除的解释的整个职责,应交付给在微生物学方面有适当的正式训练的、具有工业灭菌、无菌操作以及取样统计概念知识的人员。这些个人应当是有知识的也关注检测设备的环境控制程序,以保证空气及关键工作表面的微生物学质量始终是可接受的。
[0712] 质量控制无菌性测试(根据法定的和仲裁检测发或经修改的检测法)可以分为两个分开的阶段进行以排除假阳性结果。第一阶段。无论使用的取样计划如何,如果没有发现微生物生长的证据,则可以认为测试结果说明该批次没有内在污染。
[0713] 如果发现微生物生长,则进入第二阶段(除非第一阶段测试是无效的)。可以从环境以及与此有关的记录的审查中获得第一阶段测试无效的证据而重复作为第一阶段测试。不应认为阴性对照物中发现微生物生长是无效第一阶段测试的唯一理由。当进入第二阶段时,特别是当依赖于批次释放的测试结果时,同时启动并记录对所有适用的生产和控制记录的全面审查。本审查中,应该考虑以下几点:(1)检查应用于产品的有效灭菌循环的监测记录,(2)涉及特定特定产品(成品和处理中样品)的无菌性测试历史,以及辅助设备、容器/塞子以及无菌组分的灭菌记录,如果有的化,以及(3)环境控制数据,包括获得自培养基灌装、暴露的平板、过滤记录、任何卫生打扫的记录,以及操作者、长大衣、手套及穿戴情况的微生物检测记录的那些。
[0714] 如从上述审查未发现任何线索,则应当将该产品目前的微生物学特点与已知的历史特点比较其可能的变化。同时应检查可能产品组分来源或处理过程中可能有贡献的任何变化。根据结果,在极端情况下,可以需要考虑整个制造过程的再验证。对于第二阶段,不可能规定用于检测的要取样本的特定数量。通常选择无菌性测试<71>中为第一阶段检测规定的数目的两倍,或者其它合理的数量。每个样本应检测的最小体积、培养基及培养时间与第一阶段的规定相同。
[0715] 如果在第二阶段没有发现微生物生长,并且对适当记录进行文件审查,并指出产品调查不支持内在污染的可能性,则该批次没有达到测试的需求。正如第一阶段测试所指出的那样,可以用合适的证据类似地无效第二阶段测试,如果这样做,则重复作为第二阶段测试。
[0716] __________________________________________
[0717] 1已经出版了许多专门论述灭菌循环的进行以及验证和有关主题的指南。这些包括非肠道药物协会(PDA)的Validation of Steam Sterilization Cycles(技术专著号1),Validation of Aseptic Filling for Solution Drug Products(技术专著号2),和Validation of Dry Heat Processes Used for Sterilization and Depyrogenation(技术专著号3);以及由药物制造商协会(PMA),Validation of Sterilization of Large-Volume Parenterals—Current Concepts(教科出版物号25),保健品工业制造商协会
(HIMA)关于这些主题的其它系列技术出版物包括Validation of Sterilization Systems(报告号78-4.1),Sterilization Cycle Development(报告号78-4.2),Industrial 
Sterility:Medical Device Standards and Guidelines(文件号9,卷1),以及Operator Training for Ethylene Oxide Sterilization,for Steam Sterilization Equipment,for Dry Heat Sterilization Equipment,and for Radiation Sterilization 
Equipment(报告号78-4.5至4.8)。医疗器械促进协会(AAMI)出版的推荐性实践指南包括:
Guideline for Industrial Ethylene Oxide Sterilization of Medical Devices—
Process Design,Validation,Routine Sterilization(No.OPEO-12/81)和Process 
Control Guidelines for the Radiation Sterilization of Medical Devices(No.RS-P 
10/82)。对本章所述原理及方法更全面的讨论应参阅这些详尽的出版物。
[0718] 2除非另有说明,本药典中为培养基或试剂规定的高压灭菌循环为121°15分钟。
[0719] 3见Ethylene Oxide,Encyclopedia of Industrial Chemical Analysis,1971,12,317-340,John Wiley&Sons,Inc.,和Use of Ethylene Oxide as a Sterilant in 
Medical Facilities,NIOSH特殊职业危害评论及控制建议,1977年8月,美国卫生及人类服务部,公共卫生服务处,疾病控制中心,国立职业安全及卫生研究所,准则文件及标准开发室,优选及研究分析部门,Rockvile,MD。
[0720] 4这些方法的详细说明已由医用器械医疗器械促进协会(AAMI)发表在题为Process Control Guidelines for Radiation Sterilization of Medical Devices
(No.RS-P 10/82)的文件中。
[0721] 5参见“Microbiological Evaluation of Filters for Sterilizing Liquids,”Health Industry Manufacturers Association,Document No.3,Vol.4,1982.
[0722] 6对这种控制的工作场地,可以得到的已发表的标准包括以下:(1)联邦标准号209B,清洁室及工作场所控制的环境的要求,1973年4月24日.(2)国家航空和航天局清洁室及工作场所控制的微生物学环境标准,出版物NHB5340.2,1967年8月.(3)美国空军航空与宇宙航行空间设备的污染控制T.O.00-25-203,1 1972年12月,修订1-1,1974年10月。
[0723] 7放射性药品--由于放射性衰变迅速,不可能为了对其进行无菌性测试而使某些放射性药品延迟出厂。这些情况下,无菌性测试结果对无菌保证仅提供追溯性的证据,因此它主要依靠制造及验证/证实过程中为此指定的主要措施。
[0724] 辅助信息--员工联络:Radhakrishna S Tirumalai,Ph.D.,科学家
[0725] 专家委员会:(MSA05)微生物学和无菌保证
[0726] USP31–NF26第670页
[0727] 药典论坛:卷号30(5)第1729页
[0728] 电话号码:1-301-816-8339
[0729] <71>无菌性测试
[0730] 这一章的部分内容与欧洲药典和/或日本药典的相应文本相一致。那些不一致的部分用符号 来标记以说明这个事实。
[0731] 以下程序适用于确定声称是无菌的药典制品是否符合个别专论中关于无菌性测试的要求。药典制品在产品性质允许的情况下,采用在要检查的产品的无菌性测试项下的膜过滤法进行检测。如果膜过滤技术不合适,使用要检查的产品的无菌性测试项下的培养基直接接种法。除了具有标记为无菌通道的设备之外,所有的设备均须使用培养基直接接种法进行检测。在结果的观测与理解项下包含了复验的规定。
[0732] 由于无菌性测试是一个非常精确的程序,在此过程中程序的无菌状态必须得到确保以实现对结果的正确理解,因此人员经过适当的培训并取得资质是非常重要的。无菌性测试在无菌条件下进行。为了实现此类条件,测试环境必须调整到适合进行无菌性测试的方式。为避免污染而采取的特定预防措施应不会对任何试图在测试中发现的微生物产生影响。通过在工作区域作适当取样并进行适当控制,来定期监测进行此测试的工作条件。
[0733] 这些药典程序自身的设计不能确保一批产品无菌或已经灭菌。这主要是通过灭菌工艺或者无菌操作程序的验证来完成。
[0734] 当通过适当的药典方法获得了某物品中微生物污染的证据,所获得的结果是该制品未能达到无菌性测试要求的结论性证据,即便使用替代程序得到了不同的结果也无法否定此结果。对于无菌检验的额外信息,参见药典制品的灭菌和无菌保证<1211>。
[0735] 培养基
[0736] 按照下面描述的方法配制测试用培养基,或者可以使用脱水配方,只要根据其制造商或者分销商说明重构之后,其能够符合好氧菌、厌氧菌、霉菌生长促进测试的要求即可。使用经过验证的工艺来灭菌培养基。
[0737] 已经发现以下培养基适合用于无菌性测试。巯基醋酸盐液体培养基是主要用于厌氧菌的培养。然而,其也用于检测好氧菌。大豆酪蛋白消化物培养基适合于培养真菌和好氧菌两者。
[0738] 巯基醋酸盐液体培养基
[0739]L-胱氨酸 0.5g
氯化钠 2.5g
葡萄糖(C6H12O6·H2O) 5.5/5.0g
琼脂,颗粒状(水分含量不超过15%) 0.75g
酵母提取物(水溶性) 5.0g
酪蛋白胰酶消化物 15.0g
巯基乙酸钠 0.5g
或者巯基乙酸 0.3mL
刃天青钠溶液(1比1000),新配制 1.0mL
纯净水 1000mL
[0740] 将L-胱氨酸、氯化钠、葡萄糖、酵母提取物和酪蛋白胰酶消化物与纯净水混合,并加热至实现溶解。将巯基乙酸钠或者巯基乙酸溶解于该溶液,并且如果需要,添加1N氢氧化钠使得在灭菌后溶液将具有7.1±0.2的pH。如果过滤是必须的,在此加热溶液但无需沸腾,并且趁热以湿润滤纸将该溶液过滤。添加刃天青钠溶液,混匀,并将该培养基置于适当容器中,该容器应为培养基提供特定的面积至深度比,以使在温育期末表明氧气摄入的变色部分不超过培养基的上半部分。使用经过验证的工艺进行灭菌。如果需要贮存该培养基,将其置于无菌、气密容器中,在2°和25°之间的温度下贮藏。如果超过上部三分之一的培养基已经呈粉色,可以用以下方法恢复该培养基一次:在水浴锅中或者自由流动蒸气中加热该容器,直至粉色消失,并迅速放凉,须小心防止非无菌空气进入到容器中。
[0741] 巯基醋酸盐液体培养基将在32.5±2.5°下温育。
[0742] 替代性巯基醋酸盐培养基
[0743] 配制与巯基醋酸盐液体培养基成分相同,但省略了琼脂和刃天青钠溶液的混合物,按上述方法灭菌,并在使用前静置至凉。灭菌后pH值为7.1±0.2。在厌氧条件下温育,温育时间同培养期。
[0744] 替代性巯基醋酸盐培养基将在32.5±2.5°下温育。
[0745] 大豆-酪蛋白消化物培养基
[0746]酪蛋白胰酶消化物 17.0g
大豆粉木瓜蛋白酶消化物 3.0g
氯化钠 5.0g
磷酸氢二钾 2.5g
葡萄糖(C6H12O6·H2O) 2.5/2.3g
纯净水 1000mL
[0747] 将固体物质溶解于纯净水,轻微加热以实现溶解。放凉溶液至室温,并用1N氢氧化钠调整pH值,以便在灭菌后其具有7.3±0.2的pH值。过滤,如需要则使之澄清,分装入适合的容器,并用经过验证的程序消毒。除非意图立刻使用,则在2°和25°之间的温度下在无菌且密闭良好的容器贮存。
[0748] 大豆-酪蛋白消化物培养基将在22.5±2.5°下温育。
[0749] 用于青霉素和头孢菌素的培养基
[0750] 当无菌检查培养基用于供试产品无菌性测试项下的培养基直接接种法时,按如下内容改变巯基醋酸盐液体培养基和大豆-酪蛋白消化物培养基的制备方法。向每一种培养基的容器中,以无菌操作转移足够灭活测试样本中所存在抗生素的β-内酰胺酶。使用此前已经对其青霉素或头孢菌素灭活能力进行了测定的β-内酰胺酶制剂来测定灭活该抗生素所必需的β-内酰胺酶数量。[注意:补充的β-内酰胺酶培养基也可以用于膜过滤测试。][0751] 或者(在与无菌性测试所用场所彻底隔离的区域中),按照验证测试项下的任意一种方法,使用少于100个菌落形成单位(cfu)的金黄色葡萄球菌(见表1)作为验证菌,来确认适当数量的β-内酰胺酶已经被整合到该培养基中。必须观测到接种后培养物中出现典型微生物生长才能确认β-内酰胺酶浓度是适当的。
[0752] 表1适合用于生长促进测试和验证测试中的测试微生物的菌株
[0753]
[0754]
[0755] 适用性测试
[0756] 所使用的培养基符合下列测试,应在检验供试产品之前或者同时进行这些测试。
[0757] 无菌性
[0758] 通过在指定培养温度下将一部分培养基温育14天来确认每一批已灭菌培养基的无菌状态。不得出现微生物生长。
[0759] 好氧菌、厌氧菌、真菌的生长促进测试
[0760] 检查每一批已经配制好的培养基和每一批用脱水培养基或配料制备的培养基适当微生物菌株如表1所示。
[0761] 在部分巯基醋酸盐液体培养基上接种少量(不超过100cfu)的下列微生物,每一种微生物均使用单独一部分培养基:产芽胞梭状芽胞杆菌、绿脓杆菌、金黄色葡萄球菌。 在部分替代巯基醋酸盐液体培养基上接种少量(不超过100cfu)的产芽胞梭状芽胞杆菌。 在部分大豆-酪蛋白消化物培养基上接种少量(不超过100cfu)的下列微生物,每一种微生物均使用单独一部分的培养基:黑曲霉、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌。细菌培养时间不超过3天,真菌培养时间不超过5天。
[0762] 如果出现清晰可见的微生物生长,则该培养基是适合的。
[0763] 贮存
[0764] 如果配制好的培养基保存于未密封的容器中,只要在使用时间的2周内对其进行了生长促进测试并且符合颜色指示剂的要求,它们就可以使用1个月。如果保存在密封的容器中,只要在使用时间的3个月内对其进行了生长促进测试并且符合颜色指示剂的要求,则该培养基可以使用1年。
[0765] 用于膜过滤的稀释剂和冲洗液
[0766] 液体A
[0767] 制剂
[0768] 将1g动物组织胃蛋白酶消化物溶于1L水中,如果需要则通过滤或离心使其澄清,再调节pH值至7.1±0.2。分装入容器中,并用经过验证的工艺灭菌。
[0769] 用于青霉素或头孢菌素的制剂
[0770] 在供试样品溶液已经过滤(见用于青霉素或头孢菌素的培养基)之后,如果需要,向上述配制品中,以无菌操作加入数量足够灭活滤膜上残余抗生素活性的β-内酰胺酶。
[0771] 液体D
[0772] 向每升液体A中,加入1mL聚山梨酯80,调节pH值至7.1±0.2,分装入容器中,并使用经过验证的工艺灭菌。此液体用于含有卵磷脂或油脂的物品,或用于标为“无菌通道”的设备。
[0773] 液体K
[0774] 将5.0g动物组织胃蛋白酶消化物、3.0g牛肉提取物、10.0g聚山梨酯80溶解于1L水中。调节pH值,以便使pH值在灭菌后呈6.9±0.2。分装入容器中,并使用经过验证的工艺灭菌。
[0775] 验证测试
[0776] 使用除了下面变更之外完全相同的方法以外,按照下面供试产品无菌检查项下的描述进行测试。
[0777] 膜过滤
[0778] 在将一个或多个供试容器中的内容物转移到滤膜之后,在最后一次的冲洗液中加入少量(不超过100cfu)的测试菌。
[0779] 直接接种
[0780] 在将一个或多个供试容器(对于兽医的肠线和其它外科缝合用线:若干股线)中的内容物转移至培养基之后,将少量测试菌(不超过100cfu)添加到培养基中。
[0781] 在这两种情况下,均按照上述好氧菌、厌氧菌和真菌生长促进测试项下的描述,使用同样的微生物。进行一个生长促进测试作为阳性对照。培养所有含有培养基的容器,培养时间不超过5天。
[0782] 如果在培养后得到清晰可见的微生物生长,看起来与没有产品的对照容器中的生长类似,则该产品在此测试条件下没有任何抗微生物活性,或者此活性已经被令人满意地消除了。然后,无菌性测试可以进行,而无需进一步的改变。
[0783] 如果用肉眼与没有产品的对照容器比较,无法在存在供试产品的情况下得到清晰可见的生长,则该产品在测试条件下所具有的抗微生物活性尚未令人满意地消除。改变条件以便消除抗微生物活性,并重复验证测试。
[0784] 当(a)一个新产品必须进行无菌性测试时,和(b)无论何时该测试的测试条件发生改变时,则需进行此验证测试。该验证可以与供试产品的无菌性测试同时进行。
[0785] 供试产品的无菌性测试
[0786] 供试物品数量
[0787] 除非在此章节的其它位置或在具体的各论中另有规定,供试物品的数量遵照表3中的规定。如果每个物品的内容物有足够数量(见表2),可以将其分成若干等份,将适当的等份加入到每个指定的培养基。[注意:使用两个或更多指定培养基来进行无菌性测试。]如果每个物品内容物的数量不够每个培养基的用量,使用表3中所规定物品数量的2倍。
[0788] 表2:用于每个培养基的最小数量
[0789]
[0790]
[0791] 表3:与物品批量相关的最小供试物品数量
[0792]
[0793]
[0794] 此测试可以使用膜过滤法或培养基直接接种法进行。应包括多个适当的阴性对照。只要该产品的性质许可,就应使用膜过滤法;这些性质是,可过滤的水溶性配制品、酒精或油性制剂、易混合或溶解于水或油性溶剂的配制品,只要这些溶剂在测试条件下没有抗生素效果。
[0795] 膜过滤
[0796] 使用标称孔径不大于0.45μm的膜滤器,此孔径已知能够有效截留微生物。例如,硝酸纤维素滤器可用于水、油、稀醇溶液;并且例如醋酸纤维素可用于浓醇溶液。特定产品(例如,抗生素)可能需要特别改造过的滤器。
[0797] 下面描述的方法所使用直径约50mm的滤膜。如果使用不同直径的滤器,稀释剂和洗液的体积应当作相应调节。以适当方法将过滤设备和滤膜灭菌。该设备设计用于在无菌条件下加入和过滤供试溶液:其使得在无菌状态下将滤膜摘掉转移至培养基成为可能,或者其适合于将培养基加入该设备自身之中,并进行培养。
[0798] 水性溶液
[0799] 如果适当,将少量适当的无菌稀释剂例如 液体A(见用于膜过滤的稀释剂和冲洗液) ,转移至设备中的滤膜上并过滤。该稀释剂可以含有适当的中和物质和/或适当的灭活物质,例如针对抗生素。
[0800] 将一个或多个供试容器的内容物转移到滤膜,如需要可先使用选定的无菌稀释剂稀释至验证测试中所用体积,但须使用不少于表2和表3中规定的供试产品数量。立即过滤。如果该产品具有抗微生物特性,冲洗滤膜不少于3次,每次均将验证测试中所使用的无菌稀释剂体积滤过该滤膜。即便验证中显示5次200mL的冲洗循环没有完全消除抗微生物活性,也不要超越这样一个循环。转移整个滤膜至培养基,或以无菌操作将其切开至相等的2部分,并将每一部分转移至适当的培养基中。每个培养基的体积与验证测试所用的一样。或者,将培养基转移至设备中的滤膜上。培养该培养基,不少于14天。
[0801] 可溶固体(非抗生素)
[0802] 使用不少于表2和表3中规定的溶于合适溶剂中的产品数量的每种培养基,例如溶液A(用于膜过滤的稀释剂和冲洗液),并用如上所述的使用适合所选溶剂的膜的液体溶液来进行测试。
[0803] 油和油性溶液
[0804] 使用不少于表2和表3中规定的产品数量的每种培养基。足够低粘度的油和油性溶液可以在没有通过干膜稀释的情况下过滤。如需要,粘稠油质可以用适合的无菌稀释剂进行稀释,例如已证实在该测试条件下不具有抗微生物活性的豆蔻酸异丙酯。使该油质依靠其自身的重量穿过滤膜,并然后渐应用压力或抽吸过滤。通过每次滤过约100mL的合适的无菌溶液 (如溶液A(见用于膜过滤的稀释和和冲洗液)) 来洗涤膜至少3次,所述合适的无菌溶液含有其浓度已证实适用于该测试的验证的适当乳化剂,例如浓度为10g/L的聚山梨酯80 (液体K) 。将膜转移至如上所述用于水性溶液的培养物培养基或培养基,或反之亦然,并在相同温度下温育相同时间。
[0805] 油膏和乳霜
[0806] 使用不少于表2和表3中规定的产品数量的每种培养基。通过加热(如果需要)至不超过40°可将脂肪基中的油膏和油包水型乳剂在如上所述的豆蔻酸异丙酯中稀释至1%。在特殊情况下,可能需要加热到不超过44°。尽可能迅速地过滤,并按照如上所述针对油和油性溶液内容继续操作。
[0807] 预装填的注射器
[0808] 对于未附接无菌针头的预装填的注射器,在转移之前,将每个注射器的内容物排出至一个或两个单独的膜滤器漏斗,或至若干单独的汇集容器。如果附接了单独的灭菌针头,按照上面的规定将注射器内容物直接排出,并按照关于水性溶液的指示进行。使用验证测试项下的直接接种,测试针头的无菌情况。
[0809] 除了抗生素之外的注射用固体
[0810] 按照其标签上的规定配制供试制品,并按照适用的关于水性溶液或油和油性溶液的指示进行。[注意:如需要,可以添加过量的稀释剂以帮助对已配制的供试制品的配制和过滤。]
[0811] 用于注射的抗生素固体
[0812] 药房散装,<5g--从20个容器各自无菌转移约300mg固体至无菌500mL锥形瓶,溶于200mL的溶液A中(见用于膜过滤的稀释和和冲洗液),并混合;或者如标签所示,配置20个容器各自并转移液体或悬浮液的量(相当于约300mg的固体)至无菌500-mL锥形瓶中,溶于约
200mL的溶液A,并混合。按照适合的关于水性溶液或油和油性溶液的指示,继续操作。
[0813] 药房散装,<5g--从6个容器各自无菌转移约1g固体至无菌500mL锥形瓶,溶于200mL的溶液A中(见用于膜过滤的稀释和和冲洗液),并混合;或者如标签所示,配置6个容器各自并转移液体的量(相当于约1g的固体)至无菌500-mL锥形瓶中,溶于约200mL的溶液A,并混合。按照适合的关于水性溶液的指示,继续操作。
[0814] 抗生素固体、散装品、混合品
[0815] 以无菌操作从适当数量的容器中(见表2)取出足够量的固体,混合以获得等同于约6g固体的混合物,并转移至无菌500mL锥形瓶中。溶于约200mL的溶液A中,并混合。根据水性溶液的指示继续进行。
[0816] 无菌气溶胶产品
[0817] 对于加压气溶胶形式的液体产品,在-20°下于乙醇干冰混合物中冷冻容器约1小时。如果可行,在以无菌操作打开容器之前允许将推进剂散发掉,并将内容物转移至无菌汇集容器中。向所述汇集容器添加100mL的溶液D,并轻柔混合。按照适合的关于水性溶液或油和油性溶液的规定,继续进行。
[0818] 具有导管的医疗器具供试品
[0819] 以无菌操作将10个通道体积的液体D通过供试设备。在适当的无菌容器中收集所述液体,并按照适合的关于水性溶液或油和油性溶液的规定,继续进行。
[0820] 对于无菌的空注射器的情况,如果附接了无菌针头,通过该无菌针头将无菌稀释剂抽吸至管身中,或者穿过专为此测试目的的无菌针头,并将内容物压出至汇集容器中。按照上述内容进行
[0821] 培养基的直接接种
[0822] 除非另有规定,将表2和表3规定的供试配制品的量直接转移到培养物培养基中使得产品体积不得超过该培养基体积的10%。
[0823] 如果该供试产品具有抗微生物活性,则在用合适的中和物质中和它或通过在足够量的培养物培养基中稀释后进行测试。当需要使用大量的产品时,可优选使用以考虑后续稀释的方式制备的浓缩的培养物培养基。在适当时,可以将该浓缩的培养基直接添加到该容器中的产品。
[0824] 油性液体
[0825] 使用已经添加显示有在验证测试中显示为适合的浓度的合适的乳化剂(例如浓度为10g/L的聚山梨酯80)的培养基。
[0826] 油膏和乳霜
[0827] 通过用选择的乳化剂在合适的无菌稀释剂 (如溶液A(见用于膜过滤的稀释剂和冲洗液)) 中乳来以约1比10稀释制备。将该稀释的产品转移至不含乳化剂的培养基中。
[0828] 温育该接种的培养基不少于14天。在培养期间观察培养物数次。每天轻柔药动含有油性产品的培养物。然而,当使用巯基醋酸盐培养基或其它相似培养基检测厌氧微生物时,将摇动或混合保持到最少以维持厌氧条件。
[0829] 兽医用肠线和其它外科缝合线
[0830] 使用不少于表2和表3中规定产品的量的每个培养基。采取无菌预防措施打开封闭包装,并且对于每个培养物培养基取该股线的3个部分。对所述三个部分进行实验,每部分30cm长,从该股线的前端、中间、末端截取。从刚刚开启的包装盒中取出的整股线。将该股线的每个部分转移至选定的培养基。使用充足的培养基以充分覆盖该供试材料(20mL至
150mL)。
[0831] 固体
[0832] 转移干燥固体形式的产品的量(或通过将无菌稀释剂添加到中间容器中来制备该产品的混悬液),其对应于不少于表2和表3中指示的量。将获得的材料转移到200mL的巯基醋酸盐液体培养基中并混合。类似地,将相同的量转移到200mL的大豆-酪蛋白消化物培养基中并混合。按照上述规定继续进行。
[0833] 消毒棉、纱布、外科敷料,和相关制品
[0834] 对于待检的来自每个包装中的棉花、卷状纱布绷带、大外科敷料,以无菌操作从该样品最核心的部位取出2个或更多部分,每个部分100至500mg。从单个包装的一次性使用的材料中无菌地取出整个制品。将该部分或制品浸没在每个培养基中,并继续按照上述内容操作。
[0835] 无菌设备
[0836] 制品可以完整地或在拆开后浸没在培养基中。为确保设备通道与培养基接触,在足以完全浸没设备的培养基的体积中,每培养基浸没适当数量的单位,并按照上述内容继续操作。对于极大的设备,将该设备中将要与患者接触的那些部分浸没到足以实现完全浸没这些部分的体积的培养基中。
[0837] 对于内部腔体和外部均需要无菌的导管,将它们切成片使得培养基与整个腔体接触,或者用培养基填充腔体,并然后浸没整个单位。
[0838] 结果的观察和解释
[0839] 在温育期期间以时间间隔和其结束时检查该培养基对微生物生长的宏观证据。如果供试材料导致培养基混浊使得通过肉眼检查不能容易地确定微生物的存在或不存在,则在开始温育后14天,将部分培养基(各自不超过1mL)转移到相同培养基的新鲜容器中,并然后温育原始和转移的容器不少于14天。
[0840] 如果没有找到微生物生长的证据,则该供试产品符合无菌测试。如果找到了微生物生长的证据,则该供试产品不符合无菌检查,除非能够清楚地证实此次测试是无效的,且无效原因与该供试产品无关。仅在满足下面一个或多个条件的情况下才有可能认为测试无效:
[0841] a.该无菌性测试设施的微生物监控数据显示有缺陷。
[0842] b.对讨论的测试过程中使用的测试步骤进行审核后揭示出缺陷。
[0843] c.在阴性对照中发现微生物生长。
[0844] d.在确定从测试中分离出的微生物的身份之后,该种属(或这些种)的生长可以明确地归咎于就材料和/或者进行无菌性测试过程中所使用的方法而言的缺陷。
[0845] 如果宣布测试是无效的,则用与原测试中同样数量的单元重复。如果在重复测试中未发现微生物生长的证据,则该供试产品符合无菌性测试。如果在重复测试中发现了微生物生长,则该供试产品不符合无菌性测试。
[0846] 将测试应用于胃肠外制剂、眼科和其它需要符合无菌性测试的非注射制剂
[0847] 当使用膜过滤法时,只要可能,就要使用该容器的全部内容物,但不少于表2和表3中指出的量,必要时,使用合适的无菌溶液(如 流体A(见用于膜过滤的稀释和冲洗液))稀释至约100mL。
[0848] 当使用培养基的直接接送技术时,除非另有证据或授权,使用表2和表3中所示的量。细菌和真菌无菌的测试在供试产品的相同样品上进行。当单个容器中的体积或量不足以进行测试时,使用两个或多个容器的内容物来接种不同的培养基。
[0849] ___________________________________________________________________
[0850] 在适当的情况下,用同一个批次的脱水培养基配制的不同批次的定期测试是可接受的。
[0851] 辅助信息--员工联络:Radhakrishna S Tirumalai,Ph.D.,科学家
[0852] 专家委员会:(MSA05)微生物学和无菌保证
[0853] USP31–NF26第85页
[0854] 电话号码:1-301-816-8339
[0855] <51>抗微生物有效性测试
[0856] 抗微生物防腐剂是添加到非无菌剂型中的物质,以保护它们免受微生物的生长或防止在制造过程中或之后无意中引入的微生物。在包装在多剂量容器中的无菌制品的情况下,添加抗微生物防腐剂以抑制可能通过重复提取单个剂量而引入的微生物的生长。
[0857] 不应将抗微生物防腐剂用作良好操作规范的替代品,或者仅仅是为了减少非消毒产品的活微生物群或控制多剂量制剂在生产过程中的预灭菌生物负载。抗微生物防腐剂是符合一般公告中成分和过程下的添加的物质的要求。
[0858] 所有有用的抗微生物剂都是有毒物质。为了最大限度地保护患者,显示在最终包装产品中有效的防腐剂的浓度应该低于可能对人类有毒的水平。
[0859] 如果制剂的活性成分具有内在的抗微生物活性,则可将添加的抗菌防腐剂的浓度保持在最低限度。对于包装在多剂量容器中的所有注射剂或含有抗菌防腐剂的其它产品,必须证明产品是否固有或者是否因添加抗微生物防腐剂而产生的抗微生物效力。必须证明多剂量局部和口服剂型和其它剂型如眼,耳,鼻,冲洗液和透析液的抗微生物效果(见药物剂型<1151>)。
[0860] 本章提供了证明抗微生物保护有效性的测试。必须在标签上注明添加的抗微生物防腐剂。有效性的测试和标准适用于由制造商分发的原始未开封容器中的产品。
[0861] 产品类别
[0862] 为了测试的目的,药典制品分为四类(见表1)。这些产品的抗微生物有效性的标准是施用途径的功能。
[0863] 表1药典产品类别
[0864]
[0865] 测试生物体
[0866] 使用以下微生物的培养物1:白色念珠菌(ATCC No.10231)、黑曲霉(ATCC No.16404)、大肠杆菌(ATCC No.8739)、铜绿假单胞菌(ATCC No.9027),和金黄色葡萄球菌(ATCC No.6538)。测试中使用的活微生物不得超过原始ATCC培养物取出的超过5次传代。为了测试的目的,将1次传代定义为从已建立的培养物向新鲜培养基的生物体转移。对所有转移计数。在通过种子批次技术维持的生物体的情况下,将新鲜培养基中的每个冷冻、解冻和复苏循环视为一次转移。种子库存技术应该用于培养物的长期贮存。从ATCC收到的培养物应根据指示进行复苏。如果在肉汤中生长,则离心沉淀细胞获得团粒。在新鲜维持肉汤的1/
20体积中重悬,并且添加等体积的20%(v/v水中)无菌甘油。在琼脂上生长的细胞可以从表面上刮到10%甘油肉汤中。将小份的悬浮液分配到无菌小瓶中。将所述小瓶在液氮或不高于-50°的机械冰箱中贮存。当需要新鲜的贮存种子瓶时,可以取出并用于接种一列的工作培养物。然后这些工作培养物可定期(细菌和酵母的情形下为每天)使用以开始接种物培养。
[0867] 培养基
[0868] 测试中使用的所有培养基必须经过增长促进测试。使用前述测试生物体项下指示的微生物。
[0869] 接种物的制备
[0870] 准备测试,接种来自每种特定微生物的近期恢复的贮存培养物的适合体积的固体琼脂培养基的表面。接种物培养的培养条件描述于表2,其中合适的培养基为大豆酪蛋白消化物培养基或沙氏葡萄糖琼脂培养基(参见微生物限度测试<61>)。
[0871] 为了收获细菌和白色念珠菌培养物,使用无菌盐水TS冲洗表面生长物,在合适的容器中收集它,并添加足量的无菌盐水TS以获得每毫升中数量约为1×108菌落形成单位(cfu)的微生物。为了收获黑曲霉的细胞,使用含有0.05%聚山梨酯80的无菌盐水TS,并添8
加足量的无菌盐水TS以获得约1×10cfu/mL的计数。
[0872] 或者,贮存培养物生物体可以在合适的液体培养基(即大豆酪蛋白消化物培养基或沙氏葡萄糖琼脂培养基)中生长并且通过离心收获细胞,然后在无菌盐水TS中洗涤或重悬以获得约1×108cfu/mL的微生物计数[注意--可以通过对挑战微生物的比浊测量法来估计接种物浓度。如果在2周内未使用,则冷藏悬浮液]。
[0873] 使用表2中列出的培养基条件和微生物恢复培养时间以确定每毫升估计的初始cfu来测定每个悬浮液中每毫升的cfu数量。该值用于校准测试中使用的接种物的大小。细菌和酵母悬浮液要在收获的24小时内使用,但是真菌制剂可以在冷藏下贮存长达7天。
[0874] 程序
[0875] 如果在每个容器中可以有足够量的产品并且产品容器可以无菌进入(即通过弹性体橡胶塞子的针和注射器),则可以在5个原始容器中进行测试,或者在已经转移了足够体积的产品的合适大小的5个无菌、加盖的细菌容器中进行。用制备的和标准化的接种物之一接种每个容器,并混合。所用悬浮液接种物的体积在产品体积的0.5%和1.0%之间。添加到产品(第1,2和3类)中的测试微生物的浓度使得接种后测试制剂的最终浓度为1×105至1×106cfu/ml之间。对于4类产品(抗酸剂),接种后测试制剂的最终浓度为产品的1×103和1×
104cfu/mL之间。
[0876] 根据通过平板计数法测定的每种标准化接种物中微生物的浓度来估计每种测试制剂中活微生物的初始浓度。
[0877] 在22.5±2.5°下对接种的容器接种。以表3中指定的适当间隔对每个容器进行采样。记录在这些时间间隔中观察到的任何外观变化。通过平板计数程序对于适用的间隔确定每个测试制剂中存在的cfu数(见微生物限制测试<61>下的程序)。将特定抗微生物剂的灭活剂(中和剂)加入到平板计数中或加入到用于铺板制备的适当的稀释液中。基于表2中列出的培养基的条件和微生物恢复培养时间,在该样品的验证研究中确定这些条件。使用测试开始时存在的每毫升cfu的计算的浓度,计算在适当的测试间隔下每个微生物的cfu/mL浓度的log10值,并用对数减少来表示变化。
[0878] 表2.接种物制备的培养条件
[0879]
[0880]
[0881] 抗微生物有效性的标准
[0882] 如果符合表3规定的标准,则符合抗微生物效果要求(见一般注意项下的重要数字和公差)。无增加定义为比先前测量的值高出不超过0.5log10单位。
[0883] 表3测试微生物的标准
[0884]
[0885]
[0886] _____________________________________________________________________[0887] 1可获得自American Type Culture Collection,10801University Boulevard,Manassas,VA 20110-2209(http://www.atcc.org)。
[0888] 辅助信息--员工联络:Radhakrishna S Tirumalai,Ph.D.,科学家
[0889] 专家委员会:(MSA05)微生物学和无菌保证
[0890] USP31–NF26第67页
[0891] 电话号码:1-301-816-8339
[0892] 引用并入
[0893] 本文所提及的所有出版物和专利在此通过引用整体并入,正如每个单独的出版物或专利被明确地和单独地指定为通过引用并入一样。
[0894] 虽然已讨论了本公开的特定实施方案,但上述说明是阐述性的而非限制性的。在回顾本说明书和以下权利要求书后,对本领域技术人员来说,本公开的很多变化将变得明显。应该参考权利要求书以及其等效权利要求的完整范围和说明书以及此类变型,确定本发明的完整范围。
[0895] 某些实施方案是在以上权利要求书的范围内。
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