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一种具有防治抗肺癌作用的猕猴桃胶囊的制备方法

阅读：175发布：2023-03-04

专利汇可以提供一种具有防治抗肺癌作用的猕猴桃胶囊的制备方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本发明涉及一种具有防治抗肺癌作用的猕猴桃胶囊的制备方法，包括：取猕猴桃根粗粉，进行三次煎煮，合并煎液，静置过夜，滤取上清液，真空浓缩至相对密度 1.06-1.12；加入澄清剂至无沉淀后，滤取上清液，加乙醇搅拌、静置沉淀，过滤；将上述过滤后的沉淀物经抽干、用乙醇洗涤、干燥，粉碎成细粉；将含醇滤液回收乙醇后，经大孔吸附树脂层析，收集，干燥，粉碎成细粉；最后将二个细粉充分混匀，制成细颗粒，填充胶囊即得。本发明的制备方法能够实现工业化生产，将猕猴桃根中的有效成分精制，保留水溶性的多糖和脂溶性的甾萜及苷类；除了生产工艺方面的成熟，还解决了质量标准的稳定性保障，猕猴桃胶囊可以用于防治肺癌及消化道肿瘤。，下面是一种具有防治抗肺癌作用的猕猴桃胶囊的制备方法专利的具体信息内容。

权利要求

1.一种具有防治抗肺癌作用的猕猴桃胶囊的制备方法，包括：
(1)取猕猴桃根粗粉，加6-12倍量去离子水，浸泡10-60分钟，加热煮沸，保持沸腾1-3小时，滤取药液；第二次煎煮加6-10倍量去离子水，煎煮1-2小时；第三次煎煮加4-8倍量去离子水，煎煮0.5-1.5小时；合并三次煎液，静置过夜，滤取上清液，真空浓缩至相对密度
1.06-1.12；
(2)将澄清剂加入到上述水提浓缩液中，边加入边搅拌，至无沉淀后静置12小时，滤取上清液，加乙醇至药液含醇量达15-30％(V/V)，过滤，弃沉淀，滤液再加乙醇至药液含醇量达75-85％(V/V)，过滤；
(3)沉淀物：将上述过滤后的沉淀物抽干，加乙醇洗涤，抽干，真空干燥，粉碎成细粉；
(4)滤液：回收乙醇，至无醇，加水溶解，通过D型大孔吸附树脂的柱子，先用去离子水洗脱至无色，再用浓度为15％(V/V)乙醇液洗脱至无色，继用55％(V/V)乙醇液洗脱至无色，收取55％(V/V)乙醇液洗脱液，回收乙醇，流份浓缩至浸膏，比重为1.30-1.35，再用
70-80％(V/V)乙醇溶解，过滤，抽干，真空干燥，粉碎成细粉；
(5)制剂：将步骤(3)和(4)所制得的细粉按质量比1～3∶1混匀，制成细颗粒，填充胶囊即得。
2.根据权利要求1所述的具有防治抗肺癌作用的猕猴桃胶囊的制备方法，其特征在于：所述步骤(2)中的澄清剂为每100ml醋酸溶液含有0.1-0.8g壳聚糖，该醋酸溶液的浓度为0.5-1.5％。
3.根据权利要求1所述的具有防治抗肺癌作用的猕猴桃胶囊的制备方法，其特征在于：所述步骤(4)中的D型大孔吸附树脂的用量为步骤(1)中猕猴桃根粗粉重量的0.5-1.5倍。

说明书全文

一种具有防治抗肺癌作用的猕猴桃胶囊的制备方法

技术领域

[0001] 本发明属植物药猕猴桃的制备领域，特别是涉及一种具有防治抗肺癌作用的猕猴桃胶囊的制备方法。

背景技术

[0002] 作为药用的猕猴桃根系猕猴桃科猕猴桃属植物《中华猕猴桃Actinidia chinensisPlanch.》或猕猴梨《软枣猕猴桃Actinidia arguta(Sieb.et Zucc)Planch.》的根，收载于中国药典1977年版P551。具有解毒活血、清热利湿之功效，民间临床上常用于抗肿瘤。

[0003] 在CN01128730、CN1093594A、CN1478495A CN02114318、CN02129513、CN03156252、CN200410022919等中国专利中都涉及了制备具有抗癌作用的复方中成药中使用了藤梨根或猕猴桃根，这些专利大多涉及复方中成药的配方组成、制备和应用，而不是强调单方藤梨根提取有效部位和胶囊制剂的新药制备。

[0004] 申请号2005100326685公开了藤梨根抗肿瘤提取物及其制备方法和用途，该藤梨根抗肿瘤提取物可通过水或有机溶剂在70∽100℃温度下浸提、然后减压浓缩、调酸、乙酸乙酯萃取、聚酰胺层析、溶剂洗脱、浓缩干燥制得。但上述专利中未使用大孔树脂分离，而用乙酸乙酯萃取，此方法在大工业生产时带来设备、劳防、环保等问题，此方法未解决提取物制备新药的制剂。

[0005] 专利CN100457116C中，阐述了猕猴桃素的制备方法和通用制剂的制备，缺少制剂的实际操作和质量标准。

发明内容

[0006] 本发明所要解决的技术问题是提供一种具有防治抗肺癌作用的猕猴桃胶囊的制备方法，该方法能够实现工业化生产，除了生产工艺方面的成熟，还解决了质量标准的稳定性保障，猕猴桃胶囊可以用于防治肺癌及消化道肿瘤。

[0007] 本发明的一种具有防治抗肺癌作用的猕猴桃胶囊的制备方法，包括：

[0008] (1)取中华猕猴桃根(市售)粗粉，加6-12倍量去离子水，浸泡10-60分钟，加热煮沸，保持沸腾1-3小时，滤取药液；第二次煎煮加6-10倍量去离子水，煎煮1-2小时；第三次煎煮加4-8倍量去离子水，煎煮0.5-1.5小时；合并三次煎液，静置过夜，滤取上清液，真空浓缩至相对密度1.06-1.12；

[0009] (2)将澄清剂加入到上述水提浓缩液中，边加入边搅拌，至无沉淀后静置12小时，滤取上清液，加乙醇至药液含醇量达15-30％(V/V)，过滤，弃沉淀，滤液再加乙醇至药液含醇量达75-85％(V/V)，过滤；

[0010] (3)沉淀物：将上述过滤后的沉淀物抽干，加乙醇洗涤，抽干，真空干燥，粉碎成细粉(多糖)；

[0011] (4)滤液：回收乙醇，至无醇，加水溶解，通过D型大孔吸附树脂的柱子，先用去离子水洗脱至无色，再用15％(V/V)乙醇洗脱至无色，继用55％(V/V)乙醇洗脱至无色，收取55％(V/V)乙醇洗脱液，回收乙醇，流份浓缩至浸膏(比重1.30-1.35)，再用70-80％(V/V)乙醇溶解，过滤，抽干，真空干燥，粉碎成细粉(提取物)；

[0012] (5)制剂：将步骤(3)和(4)所制得的细粉按质量比1～3∶1，充分混匀，制成细颗粒，填充胶囊即得。

[0013] 所述步骤(2)中的为每100ml醋酸溶液含有0.1-0.8g壳聚糖，该醋酸溶液的浓度为0.5-1.5％(V/V)。

[0014] 所述步骤(4)中的D型大孔吸附树脂的用量为步骤(1)中猕猴桃根粗粉重量的0.5-1.5倍。

[0015] 本发明提供了从猕猴桃根提取猕猴桃中的有效成分的方法，用纯净水煎煮使用本煎煮方法，杂质少，有效成分转移率高；醇提加大孔树脂分离，富集了脂溶性有效成分。制成胶囊后，避免了通常煎服的使用原药材量大、煎煮不方便、携带麻烦、剂量不准、杂质太多等弊病。

[0016] 有益效果

[0017] 本发明的制备方法能够实现工业化生产，将猕猴桃根中的有效成分精制，保留水溶性的多糖和脂溶性的甾萜及苷类；除了生产工艺方面的成熟，还解决了质量标准的稳定性保障，猕猴桃胶囊可以用于防治肺癌及消化道肿瘤。

具体实施方式

[0018] 下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。此外应理解，在阅读了本发明讲授的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。

[0019] 实施例1

[0020] 取藤梨根(中华猕猴桃根别名)10kg，加100L去离子水，浸泡30分钟，加热煮沸，保持沸腾2小时，滤取药液；第二次煎煮加80L去离子水，煎煮1.5小时；第三次煎煮加80L去离子水，煎煮1小时；合并三次煎液，静置过夜，滤取上清液，真空浓缩至相对密度1.08；用澄清剂含0.5％(g/ml)壳聚糖的1％(v/v)醋酸溶液，加入水提浓缩液中，边加入边搅拌，至无沉淀后静置12小时，滤取上清液，加乙醇至药液含醇量达28％(v/v)，过滤，弃沉淀，滤液再加乙醇至药液含醇量达78％(v/v)，过滤；

[0021] 沉淀物：将上述过滤后的沉淀物抽干，加约500ml乙醇洗涤，抽干，真空干燥，粉碎成细粉约200g；

[0022] 滤液：回收乙醇，至无醇，加水溶解，通过已活化的D101-II型大孔吸附树脂10kg的柱子，用去离子水洗脱至无色，再用15％(v/v)乙醇洗脱至无色，继用55％(v/v)乙醇洗脱至无色，收取55％(v/v)乙醇洗脱液，回收乙醇，浓缩至浸膏(比重1.30)，再用75％(v/v)乙醇溶解，过滤，抽干，真空干燥，粉碎成细粉约100g；

[0023] 将沉淀物与萃取物混合，制成细颗粒，填充胶囊1000粒，即得。

[0024] 实施例2

[0025] 取藤梨根10kg，加120L去离子水，浸泡20分钟，加热煮沸，保持沸腾2小时，滤取药液；第二次煎煮加100L去离子水，煎煮1小时；第三次煎煮加80L去离子水，煎煮1小时；合并三次煎液，静置过夜，滤取上清液，真空浓缩至相对密度1.08；用澄清剂含0.1％(g/ml)壳聚糖的0.5％(V/V)醋酸溶液，加入水提浓缩液中，边加入边搅拌，至无沉淀后静置12小时，滤取上清液，加乙醇至药液含醇量达15％(V/V)，过滤，弃沉淀，滤液再加乙醇至药液含醇量达75％(V/V)，过滤；

[0026] 沉淀物：将上述过滤后的沉淀物抽干，加600ml乙醇洗涤，抽干，真空干燥，粉碎成细粉约210g；

[0027] 滤液：回收乙醇，至无醇，加水溶解，通过已活化的D101-II型大孔吸附树脂12kg的柱子，用去离子水洗脱至无色，再用10％(V/V)乙醇洗脱至无色，继用50％(V/V)乙醇洗脱至无色，收取50％(v/v)乙醇洗脱液，回收乙醇，浓缩至浸膏(比重1.33)，再用70％(V/V)乙醇溶解，过滤，抽干，真空干燥，粉碎成细粉约105g；

[0028] 将沉淀物与萃取物混合，制成细颗粒，填充胶囊1000粒，即得。

[0029] 实施例3

[0030] 取藤梨根10kg，加60L去离子水，浸泡60分钟，加热煮沸，保持沸腾1小时，滤取药液；第二次煎煮加60L去离子水，煎煮1小时；第三次煎煮加60L去离子水，煎煮1小时；合并三次煎液，静置过夜，滤取上清液，真空浓缩至相对密度1.08；用澄清剂含0.8％(g/ml)壳聚糖的1.5％(V/V)醋酸溶液，加入水提浓缩液中，边加入边搅拌，至无沉淀后静置12小时，滤取上清液，加乙醇至药液含醇量达30％(V/V)，过滤，弃沉淀，滤液再加乙醇至药液含醇量达85％(V/V)，过滤；

[0031] 沉淀物：将上述过滤后的沉淀物抽干，加450ml洗涤，抽干，真空干燥，粉碎成细粉约185g；

[0032] 滤液：回收乙醇，至无醇，加水溶解，通过已活化的D101-II型大孔吸附树脂8kg的柱子，用去离子水洗脱至无色，再用20％(V/V)乙醇洗脱至无色，继用60％(V/V)乙醇洗脱至无色，收取60％(V/V)乙醇洗脱液，回收乙醇，浓缩至浸膏(比重1.35)，再用80％乙醇溶解，过滤，抽干，真空干燥，粉碎成细粉约96g；

[0033] 将沉淀物与萃取物混合，制成细颗粒，填充胶囊1000粒，即得。

[0034] 实施例4

[0035] 【性状】本品为胶囊剂，内容物为棕黄色至淡褐色的粉末。

[0036] 【鉴别】

[0037] 1、取本品0.1g，加水10ml溶解，取2-3ml，加入等量的菲林试剂(碱性酒石酸铜试剂)置沸水浴中加热数分钟，即产生红色沉淀。

[0038] 2、另取本品溶液2-3ml，加入α-萘酚试剂3滴，沿壁加入浓硫酸，分层处呈显紫色环反应。

[0039] 3、取本品1.0g，加甲醇30ml，超声提取30min，过滤，滤液水浴蒸干，残渣加水25ml溶解，用醋酸乙酯20ml提取2次，取醋酸乙酯层，水浴蒸干，残渣加甲醇5ml使溶解，作为供试品溶液。另取猕猴桃根5g对照品，同上方法处理，加甲醇制成每1ml，作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水(15∶40∶22∶10)10℃以下放置过夜的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

[0040] 【检查】

[0041] 水分：不得过9.0％。

[0042] 崩解时限：不得过30分钟。

[0043] 微生物限度检查

[0044] 细菌数：应不得过1000个/g。

[0045] 霉菌数：应不得过100个/g。

[0046] 大肠杆菌：应不得检出。

[0047] 【含量测定】

[0048] 对照品溶液的制备：精密称取105℃干燥至恒重的葡萄糖对照品适量，加水制成每1ml含0.1mg的溶液，即得。

[0049] 标准曲线的制备：分别精密吸取对照品溶液0.2ml，0.4ml，0.6ml，0.8ml，1.0ml，1.2mlml，置10ml具塞试管中，加水至2.0ml，精密加入硫酸蒽酮溶液(精密称取蒽酮0.1g，加80％的硫酸溶液100ml使溶解，摇匀)6ml，摇匀，置水浴中加温热15分钟，取出，放人冰浴中冷却15分钟，以相应的试剂作空白，照紫外-可见分光光度法(附录VA)，在625nm 波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。

[0050] 供试品溶液的制备：取本品粉末约2g，精密称定，置索氏提取器中，加水90ml，电加热器加热回流提取至提取液无色，提取液转移至100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，精密量取10ml，加入乙醇150ml，摇匀，4℃放置12个小时，取出，离心，倾去上清液，，沉淀加水溶解并转移至50ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得。

[0051] 测定法：精密量取供试品溶液2ml，置10ml具塞试管中，照标准曲线制备项下的方法，自“精密加入硫酸蒽酮溶液6ml”起，依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中的含葡萄糖的重量(mg)，计算，即得。

[0052] 本品每粒胶囊内容物含猕猴桃多糖以葡萄糖计，不得少于10mg。

[0053] 【功能主治】扶正祛邪，清肺抑瘤，活血益气。

[0054] 【用法与用量】口服，一次2粒，一日2-3次。或遵医嘱。

[0055] 【规格】每粒装0.3g。40粒/瓶

[0056] 【贮藏】阴凉处密封保存

[0057] 实施例5

[0058] 1、实验目的：猕猴桃胶囊体外抗肿瘤作用研究。

[0059] 2、仪器设备

[0060] (1)CO2细胞培养箱，PHARMA SCIENTIFIC

[0061] (2)酶联免疫检测仪，Labsystems，wellscan，MK.2

[0062] (3)垂直单面双人超净工作台，苏州净化设备厂

[0063] (4)倒置生物显微镜，37XB/37×BTV，上海光学仪器六厂

[0064] 3、实验材料及配制

[0065] (1)细胞株：NCI-H460(人大细胞肺癌细胞)、K562(人慢性髓原白血病细胞株)、A549(人肺癌细胞)、上述细胞株按实验规范冻存和传代。

[0066] (2)RPMI-1640细胞培养基(GIBCO)：含10％灭活新生小牛血清(上海赛达生物药5 -1 -1
业有限公司)；L-谷氨酰氨(进口分装，SANGON)；丙酮酸钠；1×10U.L 青霉素，100mg.L 链霉素；无菌过滤，4℃保存。

[0067] (3)0.25％胰蛋白酶溶液(Trypsin)：购自Invitrogen公司，-20℃保存。

[0068] (4)磷酸缓冲液(PBS)：NaCl8g，KCl0.2g，Na2HPO41.15g，KH2PO40.2g，溶于1L双蒸水，121℃高压消毒20min，4℃保存。

[0069] (5)MTT(AMRESCO)溶液：用PBS配成5mg/ml溶液。

[0070] (6)溶解液：每100ml去离子双蒸水含SDS10g，异丁醇5ml，浓硫酸0.12ml。

[0071] (7)样品：猕猴桃胶囊

[0072] (8)对照品：顺铂

[0073] 4、实验方法

[0074] 对上述肿瘤细胞株的细胞毒性通过MTT法测得。具体步骤如下：

[0075] (1)细胞培养：①将细胞从液氮中取出，在37℃水浴中迅速解冻，细胞在无菌操作台中移入10ml无菌离心管中加6ml RPMI-1640细胞培养基，1000转/分离心5分钟。弃去上清液，沉淀中加入5-6ml RPMI-1640细胞培养基，滴管吹打使其悬浮后移入细胞培养瓶中，置37℃细胞培养箱内。②次日，自培养箱中取出细胞，弃去细胞瓶中RPMI-1640细胞培养基〔除K562(人慢性髓原白血病细胞株)悬浮细胞〕，加入5-6ml RPMI-1640细胞培养基，置37℃细胞培养箱内。③隔日，自培养箱中取出细胞，弃去细胞瓶中RPMI-1640细胞培养基〔除K562(人慢性髓原白血病细胞株)，加入PBS(PH7.4)2-3ml晃动清洗，倒掉PBS溶液后再重复一次清洗。在培养瓶中加入3-5滴0.25％胰蛋白酶溶液晃动均匀，加盖置于37℃细胞培养箱内3分钟左右，于显微镜下观察发现细胞自培养瓶壁上脱离，加RPMI-1640细胞培养基2ml，滴管吹打使细胞完全脱离瓶壁后，分别移入2个干净培养瓶中，加入RPMI-1640细胞培养基5-6ml吹打均匀，置于37℃细胞培养箱内。K562(人慢性髓原白血病细胞株)悬浮细胞取出1-2ml悬浮液，分别移入2个干净培养瓶中，加入RPMI-1640细胞培养基5-6ml，置于37℃细胞培养箱内。④隔日，重复③步骤。在整个培养过程中，贴壁细胞不允许生长过密，悬浮细胞始终保持对数生长期。

[0076] (2)样品制备：用DMSO溶解后，加入PBS配成1000μg/ml的溶液或均匀的混悬液，然后用PBS稀释。

[0077] 对照品制备：用DMSO溶解后，加入PBS配成1000μg/ml的溶液或均匀的混悬液，然后用PBS稀释为100、10、1、0.1μg/ml。

[0078] (3)将稀释好的样品加入平底96孔板中，每孔10μl，每点作两个平行测试。将DMSO相应作梯度稀释后加入板中，作为对照。

[0079] (4)取处于对数生长期的细胞，细胞经胰酶消化并洗涤后悬浮于含10％小牛血清5
的RPMI-1640培养基中，经苔盼蓝染色排除法计活细胞数，并调节细胞悬浮液密度至2×10细胞/ml。

[0080] (5)在平底96孔板中，每孔加入90微升细胞，于37℃、5％CO2细胞培养箱中培养过夜。

[0081] (6)将加入细胞的平底96孔板在37℃、5％CO2细胞培养箱中培养48小时。

[0082] (7)每孔中加入20μl 5mg/mlMTT溶液，继续在培养箱中保温3～4小时。

[0083] (8)每孔加入100μl溶解液，继续在培养箱中保温过夜，使生成的甲臢晶体充分溶解。测定492nm光吸收值。

[0084] (9)根据光吸收值计算SMC003处理后细胞相对存活率。计算公式如下：

[0085]

[0086] (10)通过软件计算对各肿瘤细胞的IC50。

[0087] 5、实验结果：

[0088] 表1.对各细胞株的体外增殖抑制作用

[0089]

[0090] 实施例6

[0091] 1猕猴桃胶囊对小鼠溶血素的影响

[0092] 1.1实验目的：观察猕猴桃胶囊对小鼠溶血素的影响。

[0093] 1.2受试药物

[0094] 药物名称：猕猴桃胶囊

[0095] 提供单位：赵正福

[0096] 1.3实验动物

[0097] 昆明种小鼠，♂性，18-20g，由上海斯莱克动物责任有限公司提供。合格证号：SCXK(沪)2003-0003

[0098] 1.4实验剂量

[0099] 设计实验剂量为：0.5g/kg；1.5g/kg

[0100] 1.5阳性药

[0101] 名称：云芝糖肽胶囊

[0102] 规格：0.34g/粒

[0103] 用法用量：一次3粒，一日3次。

[0104] 实验剂量：1g/kg

[0105] 1.6给药途径及容量

[0106] 灌胃给药，0.5ml/20g。

[0107] 1.7实验方法

[0108] 小鼠随机分组，每组10只。猕猴桃胶囊2个剂量组，阳性药组，空白对照组。分组后第二天开始给药，连续一个月，每星期称重一次，根据体重调正给药量，于实验结束前4天将浓度为20％的绵羊红细胞悬液，按0.2ml/鼠从腹腔注入。4天后眼球取血，分离离心血清。所得血清按500倍稀释，取1ml稀释血清加入10％0.5ml绵羊红细胞、再加入1ml经预处理的1∶10豚鼠血清，37℃水浴10分钟后置入冰水终止反应。2000r/min离心10分钟取上清液1ml加3ml都氏试剂，放置10分钟后在722s分光光度计540nm波长处测定OD值。

[0109] HC50测定：取10％绵羊红细胞0.25ml加3ml都氏试剂，放置10分钟后测定OD值。按下列公式计算每个样品的半鼠溶血值(HC50)。

[0110] HC50＝(样品OD值/羊红细胞半数溶血时OD值)×稀释倍数

[0111] 1.8实验结果

[0112] 根据表2可知：猕猴桃胶囊具有增加小鼠溶血素作用，提高体液免疫。阳性药也显示一定的作用。

[0113] 表2猕猴桃胶囊对小鼠HC50的影响

[0114]* *

[0115] 各组与模型组比较 P＜0.05；*P＜0.01。

[0116] 2猕猴桃胶囊对小鼠腹腔巨嗜细胞吞噬功能的影响

[0117] 2.1实验目的：观察猕猴桃胶囊对小鼠腹腔巨嗜细胞吞噬功能的影响。

[0118] 2.2受试药物：

[0119] 药物名称：猕猴桃胶囊

[0120] 提供单位：赵正福

[0121] 2.3实验动物

[0122] 昆明种小鼠，♂性，18-20g，由上海斯莱克动物责任有限公司提供。合格证号：SCXK(沪)2003-0003

[0123] 2.4实验剂量

[0124] 设计实验剂量为：0.5g/kg；1.5g/kg

[0125] 2.5阳性药

[0126] 名称：云芝糖肽胶囊

[0127] 规格：0.34g/粒

[0128] 用法用量：一次3粒，一日3次。

[0129] 实验剂量：1g/kg

[0130] 2.6给药途径及容量

[0131] 灌胃给药，0.5ml/20g。

[0132] 2.7实验方法

[0133] 小鼠随机分组，每组10只。猕猴桃胶囊2个剂量组，阳性药、空白对照各一组。分组后第二天开始给药，连续一个月，每星期称重一次，根据体重调正用药量。连续给药一个月，在最后一次给药后一小时小鼠腹腔内注射2％鸡红细胞(经去除纤维蛋白，生理盐水多次洗涤)0.2ml/只，4小时后处死小鼠，用生理盐水冲洗腹腔，收集冲洗液、离心，倾去上清液，收集细胞涂片，凉干后用瑞氏染色液染色，油镜下观察。计数100个巨嗜细胞吞噬鸡红细胞数，按下公式计算。(1)吞噬百分率＝吞噬鸡红细胞的巨嗜细胞数/100个巨嗜细胞数，(2)吞噬指数＝被吞噬的鸡红细胞数/100巨嗜细胞数。

[0134] 2.8实验结果

[0135] 由表3可知：猕猴桃胶囊具有促进小鼠腹腔巨噬细胞吞噬作用，表明该药对非特异性免疫也有促进作用。

[0136] 表3猕猴桃胶囊对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响

[0137]

[0138] 各组与模型组比较*P＜0.05；**P＜0.01。

[0139] 3.猕猴桃胶囊对C57小鼠NK细胞活性及淋巴细胞转化的影响

[0140] 3.1实验目的：观察猕猴桃胶囊对小鼠腹腔巨嗜细胞吞噬功能的影响。

[0141] 3.2受试药物：

[0142] 药物名称：猕猴桃胶囊

[0143] 提供单位：赵正福

[0144] 3.3实验动物

[0145] 近交系小鼠C57BL/6，♂性，18-20g，由上海斯莱克动物责任有限公司提供。合格证号：SCXK(沪)2003-0003

[0146] 3.4实验剂量

[0147] 设计实验剂量为：0.5g/kg；1.5g/kg

[0148] 3.5阳性药

[0149] 名称：云芝糖肽胶囊

[0150] 规格：0.34g/粒

[0151] 用法用量：一次3粒，一日3次。

[0152] 实验剂量：1g/kg

[0153] 3.6给药途径及容量

[0154] 灌胃给药，0.5ml/20g。

[0155] 3.73H-TdR

[0156] 上海原子核研究所，放射浓度20muci/ml

[0157] 3.8实验方法

[0158] 小鼠随机分组，每组6只。猕猴桃胶囊2个剂量组，阳性药、空白对照各一组。分组后第二天开始给药，连续一个月，每星期称重一次，根据体重调正用药量。最后一次给药后1小时断颈处死小鼠，无菌取脾，用手术剪刀将脾脏剪碎、制成悬液，离心去上清液，用1640
6
培养剂调整细胞浓度为1×10/ml细胞，进行NK活性测定及淋转实验。(1)NK活性测定：在
6
96孔培养板中加入1×10/ml浓度脾细胞100ul作为效应细胞，另取已培养24小时处于
4 3
旺盛生长期的YAC-1、浓度1×10/ml细胞100ul作为靶细胞加入培养板中，同时加 H-TdR
0.4uci/孔在37℃、CO2培养箱中培养24小时，收集细胞在液闪仪上测定CPM值，各组设6复
7
管，自然掺入组不加脾细胞。(2)淋巴细胞转化测定：在96孔培养板中加入1×10/ml浓度
3
脾细胞100ul，ConA(50ug/ml)50ul，在5％CO2、37℃培养箱中培养48小时，加入20ulH-TdR培养24小时，各组设6复管，对照管用培养剂代替，培养结束后在多孔细胞收集器上收集细胞，5％TCA固定，无水乙醇脱水，液闪仪上测定CPM值。NK活性＝(对照组CPM值-实验组CPM值)/(对照组CPM值-自然掺入组CPM值)×100％

[0159] 淋转指数＝实验组CPM值/对照组CPM值

[0160] 3.9实验结果

[0161] 猕猴桃胶囊对小鼠NK细胞活性具有促进作用，表明该药对细胞免疫也有作用。

[0162] 表4猕猴桃胶囊对小鼠NK活性的影响

[0163]

[0164] 实施例7

[0165] 表5猕猴桃胶囊对小鼠Lewis肺癌的抑瘤作用

[0166]组别剂量动物数瘤重(g) 抑瘤率
(mg/kg) 始终 (X±SD) (％)
空白对照 10 10 1.64±0.53
猕猴桃胶囊 50 10 10 1.15±0.53 37.20

[0167]猕猴桃胶囊 150 10 10 1.08±0.53* 51.22
CTX 0.1 10 10 0.18±0.07** 89.02

[0168] 表6猕猴桃胶囊对小鼠S180抑瘤试验

[0169]

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