技术领域
[0001] 本
发明涉及一株乳酸片球菌及其在抗动脉粥样硬化中的应用。
背景技术
[0002] 动脉粥样硬化(atherosclerosis，AS)是一组动脉硬化的血管病中常见的、最重要的一种，是冠心病、心肌梗死、脑梗死、外周血管病的主要病因。血脂异常是动脉粥样硬化最重要的危险因素。目前降脂
治疗是防治动脉粥样硬化的一种常规手段，但常用的降脂药由于是化学合成药物，都存在一定的局限性和不良反应。因此，从天然食材资源中筛选出安全可靠、具有降脂/降胆固醇作用的有效成分，对防治动脉粥样硬化具有重要意义。
[0003] 乳酸片球菌(Pediococcus acidilactici)是兼性厌
氧益生菌，能适应低氧的肠道环境，对酸和胆汁有较高的耐受性，
发酵产乳酸。
[0004] 近年来有关乳酸片球菌的研究与应用主要集中在乳酸片球菌素及畜禽食品等领域。
发明内容
[0005] 本发明的目的是提供一株乳酸片球菌及其在抗动脉粥样硬化中的应用。
[0006] 本发明提供的乳酸片球菌(Pediococcus acidilactici)AS185，已于2018年3月11日保藏于中国典型培养物保藏中心(简称CCTCC，地址为：中国，武汉，武汉大学)，保藏登记号为CCTCC NO：M 2018114。乳酸片球菌(Pediococcus acidilactici)AS185 CCTCC NO：M 2018114，简称乳酸片球菌AS185。
[0007] 本发明还保护乳酸片球菌AS185在制备抗动脉粥样硬化产品中的应用。
[0008] 本发明还保护乳酸片球菌AS185在制备治疗动脉粥样硬化的产品中的应用。
[0009] 本发明还保护乳酸片球菌AS185在制备
预防动脉粥样硬化的产品中的应用。
[0010] 本发明还保护乳酸片球菌AS185在制备产品中的应用；所述产品的功能为如下(a1)至(a37)中的至少一项：
[0011] (a1)降血脂；
[0012] (a2)降低血清中的血脂含量；
[0013] (a3)降低血清中的总胆固醇含量；
[0014] (a4)降低血清中的总甘油三酯含量；
[0015] (a5)降低血清中的低
密度脂蛋白胆固醇含量；
[0016] (a6)升高血清中的高密度脂蛋白胆固醇含量；
[0017] (a7)降低血清中的氧化型低密度脂蛋白含量；
[0018] (a8)降低血清中的细胞间黏附分子-1含量；
[0019] (a9)降低血清中的血管内皮细胞黏附分子-1含量；
[0020] (a10)降低血清中的
炎症因子白细胞介素-6含量；
[0021] (a11)降低血清中的炎症因子
肿瘤坏死因子α含量；
[0022] (a12)降低血清中的炎症因子γ干扰素含量；
[0023] (a13)升高血清中的抗炎症因子白细胞介素10含量；
[0024] (a14)减少腹主动脉中的
泡沫细胞聚集和/或脂质沉积；
[0025] (a15)改善腹主动脉各层结构排列紊乱；
[0026] (a16)抑制MAPK
信号通路关键基因的表达；
[0027] (a17)降低动脉粥样硬化患者的血脂；
[0028] (a18)降低动脉粥样硬化患者血清中的血脂含量；
[0029] (a19)降低动脉粥样硬化患者血清中的总胆固醇含量；
[0030] (a20)降低动脉粥样硬化患者血清中的总甘油三酯含量；
[0031] (a21)降低动脉粥样硬化患者血清中的低密度脂蛋白胆固醇含量；
[0032] (a22)升高动脉粥样硬化患者血清中的高密度脂蛋白胆固醇含量；
[0033] (a23)降低动脉粥样硬化患者血清中的氧化型低密度脂蛋白含量；
[0034] (a24)降低动脉粥样硬化患者血清中的细胞间黏附分子-1含量；
[0035] (a25)降低动脉粥样硬化患者血清中的血管内皮细胞黏附分子-1含量；
[0036] (a26)降低动脉粥样硬化患者血清中的炎症因子白细胞介素-6含量；
[0037] (a27)降低动脉粥样硬化患者血清中的炎症因子肿瘤坏死因子α含量；
[0038] (a28)降低动脉粥样硬化患者血清中的炎症因子γ干扰素含量；
[0039] (a29)升高动脉粥样硬化患者血清中的抗炎症因子白细胞介素10含量；
[0040] (a30)减少动脉粥样硬化患者腹主动脉中的泡沫细胞聚集和/或脂质沉积；
[0041] (a31)改善动脉粥样硬化患者腹主动脉各层结构排列紊乱；
[0042] (a32)抑
制动脉粥样硬化患者MAPK信号通路关键基因的表达；
[0043] (a33)缓解动脉粥样硬化进展；
[0044] (a34)缓解动脉粥样硬化患者的动脉粥样硬化进展；
[0045] (a35)降低高血脂症患者的血脂
水平；
[0046] (a36)改善动脉粥样硬化患者的脂质代谢紊乱；
[0047] (a37)改善动脉粥样硬化患者的高血脂症状。
[0048] 本发明还保护一种抗动脉粥样硬化产品，其活性成分为乳酸片球菌AS185。
[0049] 本发明还保护一种治疗动脉粥样硬化的产品，其活性成分为乳酸片球菌AS185。
[0050] 本发明还保护一种预防动脉粥样硬化的产品，其活性成分为乳酸片球菌AS185。
[0051] 本发明还保护一种产品，其活性成分为乳酸片球菌AS185；
[0052] 所述产品的功能为如下(a1)至(a37)中的至少一项：
[0053] (a1)降血脂；
[0054] (a2)降低血清中的血脂含量；
[0055] (a3)降低血清中的总胆固醇含量；
[0056] (a4)降低血清中的总甘油三酯含量；
[0057] (a5)降低血清中的低密度脂蛋白胆固醇含量；
[0058] (a6)升高血清中的高密度脂蛋白胆固醇含量；
[0059] (a7)降低血清中的氧化型低密度脂蛋白含量；
[0060] (a8)降低血清中的细胞间黏附分子-1含量；
[0061] (a9)降低血清中的血管内皮细胞黏附分子-1含量；
[0062] (a10)降低血清中的炎症因子白细胞介素-6含量；
[0063] (a11)降低血清中的炎症因子肿瘤坏死因子α含量；
[0064] (a12)降低血清中的炎症因子γ干扰素含量；
[0065] (a13)升高血清中的抗炎症因子白细胞介素10含量；
[0066] (a14)减少腹主动脉中的泡沫细胞聚集和/或脂质沉积；
[0067] (a15)改善腹主动脉各层结构排列紊乱；
[0068] (a16)抑制MAPK信号通路关键基因的表达；
[0069] (a17)降低动脉粥样硬化患者的血脂；
[0070] (a18)降低动脉粥样硬化患者血清中的血脂含量；
[0071] (a19)降低动脉粥样硬化患者血清中的总胆固醇含量；
[0072] (a20)降低动脉粥样硬化患者血清中的总甘油三酯含量；
[0073] (a21)降低动脉粥样硬化患者血清中的低密度脂蛋白胆固醇含量；
[0074] (a22)升高动脉粥样硬化患者血清中的高密度脂蛋白胆固醇含量；
[0075] (a23)降低动脉粥样硬化患者血清中的氧化型低密度脂蛋白含量；
[0076] (a24)降低动脉粥样硬化患者血清中的细胞间黏附分子-1含量；
[0077] (a25)降低动脉粥样硬化患者血清中的血管内皮细胞黏附分子-1含量；
[0078] (a26)降低动脉粥样硬化患者血清中的炎症因子白细胞介素-6含量；
[0079] (a27)降低动脉粥样硬化患者血清中的炎症因子肿瘤坏死因子α含量；
[0080] (a28)降低动脉粥样硬化患者血清中的炎症因子γ干扰素含量；
[0081] (a29)升高动脉粥样硬化患者血清中的抗炎症因子白细胞介素10含量；
[0082] (a30)减少动脉粥样硬化患者腹主动脉中的泡沫细胞聚集和/或脂质沉积；
[0083] (a31)改善动脉粥样硬化患者腹主动脉各层结构排列紊乱；
[0084] (a32)抑制动脉粥样硬化患者MAPK信号通路关键基因的表达；
[0085] (a33)缓解动脉粥样硬化进展；
[0086] (a34)缓解动脉粥样硬化患者的动脉粥样硬化进展；
[0087] (a35)降低高血脂症患者的血脂水平；
[0088] (a36)改善动脉粥样硬化患者的脂质代谢紊乱；
[0089] (a37)改善动脉粥样硬化患者的高血脂症状。
[0090] 以上任一所述产品为食品或保健品或药品。
[0091] 本发明从传统发酵食品中分离和筛选获得一株乳酸片球菌，该菌株通过调节血脂、抑制黏附分子及炎症因子水平来预防和治疗动脉粥样硬化，该菌株是一株在心
血管疾病预防和治疗领域具有潜在应用前景的益生菌新菌株。
附图说明
[0092] 图1为氧化型低密度脂蛋白的检测结果。
[0093] 图2为大鼠腹主动脉组织HE切片
染色结果。
[0094] 图3为Western Blot检测蛋白表达结果。
具体实施方式
[0095] 以下的
实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化
试剂商店购买得到的。以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。
[0096] 如无特殊说明，实施例中的PBS缓冲液均为pH7.0、0.1M的PBS缓冲液。
[0097] 固体M17培养基：含
酪蛋白胨2.5g/L，肉蛋白胨2.5g/L，大豆蛋白胨5g/L，
酵母粉2.5g/L，
牛肉膏5g/L，
硫酸镁0.25g/L，
抗坏血酸钠0.5g/L，β-甘油
磷酸钠25g/L，乳糖5g/L，琼脂15g/L，余量为水；pH＝7.2。液体M17培养基与固体M17培养基的区别仅在于不加入琼脂。
[0098] 6-8周龄雄性SPF级SD大鼠，体
质量(200±20)g：长春市亿斯实验动物技术有限责任公司，动物
许可证号：SCXK(吉)-2011-0004。
[0099]
基础饲料和高脂饲料(83.3％基础饲料+10％猪油+3％胆固醇+3％白砂糖+0.5％的胆酸钠+0.2％丙基硫氧嘧啶，均为质量分数)：长春市亿斯实验动物技术有限责任公司。
[0100] 维生素D3注射液(300 000U/ml)：上海通用药业股份有限公司。维生素D3的作用：有利于损伤血管内皮细胞，促进
血浆脂质及
钙对血管壁的浸入和沉积，从而
加速动脉粥样硬化的形成。
[0101] 采用南京建成总胆固醇
试剂盒(A111-1)检测血清中的总胆固醇(total cholesterol，TC)含量。采用南京建成总甘油三酯试剂盒(A110-1)检测血清中的总甘油三酯(triglyceride，TG)含量。采用上海江莱大鼠低密度脂蛋白胆固醇酶联免疫试剂盒(JL20957)检测血清中的低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein，LDL-C)含量。采用上海江莱大鼠高密度脂蛋白胆固醇酶联免疫试剂盒(JL20356)检测血清中的高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein，HDL-C)含量。采用上海江莱大鼠氧化低密度脂蛋白酶联免疫试剂盒(JL12134)检测血清中的氧化型低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein，ox-LDL)含量。采用上海江莱大鼠细胞间黏附分子-1酶联免疫试剂盒(JL12786)检测血清中的细胞间黏附分子-1(intercellular cell adhesion molecule-1，ICAM-1)含量。采用上海江莱大鼠血管内皮细胞黏附分子-1酶联免疫试剂盒(JL11762)检测血清中的血管内皮细胞黏附分子-1(vascular cell adhesion molecule-1，VCAM-1)含量。采用上海江莱大鼠白细胞介素6酶联免疫试剂盒(JL20896)检测血清中的白细胞介素6(interleukin-6，IL-6)的含量。采用上海江莱大鼠白细胞介素10酶联免疫试剂盒(JL13427)检测血清中的白细胞介素10(interleukin-10，IL-10)的含量。采用上海江莱大鼠肿瘤坏死因子α酶联免疫试剂盒(JL13202)检测血清中的大鼠肿瘤坏死因子α(Tumor necrosis factor-α，TNF-α)的含量。采用上海江莱大鼠γ干扰素酶联免疫试剂盒(JL13241)检测血清中的大鼠γ干扰素(interferon-γ，IFN-γ)的含量。
[0102] Anti-p38MAPK
抗体(t-p38抗体)、Anti-p-p38MAPK抗体(p-p38抗体)、Anti-ERK1/2抗体(t-ERK1/2抗体)、Anti-p-ERK1/2抗体(p-ERK1/2抗体)、内参Anti-beta Actin(β-actin)、二抗Goat Anti-Rabbit IgG(HRP)为英国abcam公司。
[0103] 实施例1、菌株的分离、鉴定和保藏
[0104] 一、菌株的分离
[0105] 2017年5月，从吉林省延吉市西市场进行样本取材，所取样本为传统农家大酱。
[0106] 样本经固体M17培养基平板反复划线培养，挑取产黄圈的单菌落接种于固体M17培养基平板上继续培养，再经固体M17培养基平板反复划线培养纯化，得到多株纯培养菌株。
[0107] 纯培养的菌株接种至液体M17培养基培养，然后加入20％甘油，-80℃
冰箱保存。
[0108] 从纯培养的菌株中筛选满足如下所有条件的菌株：革兰氏染色阳性、过氧化氢酶试验阴性、吲哚试验阴性、产
硫化氢试验阴性、明胶
液化试验阴性、
水解淀粉试验阴性、
硝酸盐还原试验阴性。
[0109] 将筛选得到的其中3株菌分别命名为菌株AS185、菌株AS187、菌株AS189。
[0110] 二、菌株的鉴定
[0111] 将分离得到的各个菌株进行形态鉴定、生理生化鉴定以及分子鉴定，其中菌株AS185、菌株AS187、菌株AS189这3株菌均属于乳酸片球菌(Pediococcus acidilactici)。
[0112] 菌株AS185的生理生化鉴定结果：革兰氏阳性，不运动杆菌；在15℃和45℃能够生长；耐受6.5％NaCl；过氧化氢酶试验阴性，联苯胺试验阴性，吲哚试验阴性，乙酰甲基甲醇试验阳性；不水解淀粉，不液化明胶，不产硫化氢，发酵
葡萄糖产酸不产气。
[0113] 菌株AS185在液体M17培养基中呈均匀浑浊生长，久置菌体呈白色沉淀。
[0114] 菌株AS185的最适生长
温度为37～42℃，适宜pH为5.0～7.2。
[0115] 菌株AS185的16S rDNA序列如
序列表的序列1所示。
[0116] 三、菌株的保藏
[0117] 乳酸片球菌(Pediococcus acidilactici)AS185，已于2018年3月11日保藏于中国典型培养物保藏中心(简称CCTCC，地址为：中国，武汉，武汉大学)，保藏登记号为CCTCC NO：M 2018114。乳酸片球菌(Pediococcus acidilactici)AS185CCTCC NO：M 2018114，简称乳酸片球菌AS185。
[0118] 实施例2、乳酸片球菌AS185对动脉粥样硬化大鼠的改善作用
[0119] 一、菌悬液的制备
[0120] 菌悬液的制备方法：用PBS缓冲液悬浮供试菌，使菌浓度为1.0×109CFU/ml。
[0121] 供试菌分别为乳酸片球菌AS185、乳酸片球菌AS187或乳酸片球菌AS189。
[0122] 供试菌为乳酸片球菌AS185时，得到的菌悬液命名为AS185菌悬液。
[0123] 供试菌为乳酸片球菌AS187时，得到的菌悬液命名为AS187菌悬液。
[0124] 供试菌为乳酸片球菌AS189时，得到的菌悬液命名为AS189菌悬液。
[0125] 二、分组处理方式
[0126] 50只雄性SD大鼠，随机分成5组，每组10只，分组处理如下：
[0127] 空白组：从试验开始至结束均采用基础饲料饲喂；试验第3天、第5天和第7天各给予一次无菌PBS缓冲液(给予方式：空腹12小时后一次性
腹腔注射；单次给予无菌PBS缓冲液的量依次为1ml/kg体重、1ml/kg体重、0.35ml/kg体重)；试验第85天至第140天，每天给予一次无菌PBS缓冲液(给予方式：灌胃；单次给予量：12ml/kg体重)；
[0128] 模型组：从试验开始至结束均采用高脂饲料饲喂；试验第3天、第5天和第7天各给予一次维生素D3注射液(给予方式：空腹12小时后一次性腹腔注射；单次给予维生素D3注射液的量依次为1ml/kg体重、1ml/kg体重、0.35ml/kg体重)；试验第85天至第140天，每天给予一次无菌PBS缓冲液(给予方式：灌胃；单次给予量：12ml/kg体重)；
[0129] 乳酸片球菌AS185组(简称AS185组)：从试验开始至结束均采用高脂饲料饲喂；试验第3天、第5天和第7天各给予一次维生素D3注射液(给予方式：空腹12小时后一次性腹腔注射；单次给予维生素D3注射液的量依次为1ml/kg体重、1ml/kg体重、0.35ml/kg体重)；试验第85天至第140天，每天给予一次AS185菌悬液(给予方式：灌胃；单次给予量：12ml/kg体重)；
[0130] 乳酸片球菌AS187组(简称AS187组)：从试验开始至结束均采用高脂饲料饲喂；试验第3天、第5天和第7天各给予一次维生素D3注射液(给予方式：空腹12小时后一次性腹腔注射；单次给予维生素D3注射液的量依次为1ml/kg体重、1ml/kg体重、0.35ml/kg体重)；试验第85天至第140天，每天给予一次AS187菌悬液(给予方式：灌胃；单次给予量：12ml/kg体重)；
[0131] 乳酸片球菌AS189组(简称AS189组)：从试验开始至结束均采用高脂饲料饲喂；试验第3天、第5天和第7天各给予一次维生素D3注射液(给予方式：空腹12小时后一次性腹腔注射；单次给予维生素D3注射液的量依次为1ml/kg体重、1ml/kg体重、0.35ml/kg体重)；试验第85天至第140天，每天给予一次AS189菌悬液(给予方式：灌胃；单次给予量：12ml/kg体重)；
[0132] 试验开始至结束为试验第1天至140天(即20周)。
[0133] 二、血清相关指标检测
[0134] 试验结束的第二天，大鼠禁食不禁水12h，然后腹腔注射2％戊巴比妥钠(30mg/kg体重)进行麻醉，然后心脏取血，血液4℃、3000r/min离心15min，收集血清。
[0135] 检测血清中总胆固醇(TC)、总甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、血管内皮细胞黏附分子-1(VCAM-1)、白细胞介素(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、γ干扰素(IFN-γ)和白细胞介素10(IL-10)的浓度。
[0136] 总胆固醇(TC)、总甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)的检测结果见表1(浓度单位均为mmo/L)。与空白组相比，模型组大鼠血清中TC、TG、LDL-C水平均有显著升高(P<0.01)，HDL-C水平显著降低(P<0.01)。与模型组相比，AS185组、AS187组和AS189组大鼠血清中TC和TG水平显著降低(P<0.05或P<0.01)，HDL-C水平显著升高(P<0.01)；AS185组大鼠血清中LDL-C水平显著降低(P<0.01)，且AS185组大鼠血清中TC、TG、LDL-C和HDL-C水平接近空白组，说明乳酸片球菌AS185能明显改善动脉粥样硬化模型大鼠的血清血脂水平，预防动脉硬化的发生。
[0137] 表1
[0138]
[0139]
[0140] 注：与空白组相比，#P<0.05，##P<0.01；与模型组相比，*P<0.05，**P<0.01。
[0141] 氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)的检测结果见图1。图1中，纵坐标为血清中氧化型低密度脂蛋白的浓度(单位为μg/L)，#表示与空白组相比，差异显著(P<0.05)，##表示与空白组相比，差异极显著(P<0.01)；*表示与模型组相比，差异显著(P<0.05)，**表示与模型组相比，差异极显著(P<0.01)。与空白组相比，模型组大鼠血清中ox-LDL水平明显升高(P<0.01)。与模型组相比，AS185组、AS187组和AS189组大鼠血清中ox-LDL水平明显降低(P<
0.01)，且AS185组大鼠血清中ox-LDL水平接近空白组。结果提示，乳酸片球菌AS185能明显降低动脉粥样硬化模型大鼠血清氧化型低密度脂蛋白的水平。
[0142] 细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、血管内皮细胞黏附分子-1(VCAM-1)检测结果见表2(浓度单位均为μg/L)。与空白组相比，模型组、AS185组、AS187组和AS189组大鼠血清中ICAM-1和VCAM-1水平均有升高。与模型组相比，AS185组、AS187组和AS189组大鼠血清中ICAM-1水平显著降低(P<0.01)，AS185组和AS189组大鼠血清中VCAM-1水平降低显著(P<0.01)，且AS185组大鼠血清中ICAM-1和VCAM-1水平更接近空白组。结果提示，乳酸片球菌AS185能明显降低动脉粥样硬化模型大鼠血清中的黏附分子水平。
[0143] 表2
[0144]组别 ICAM-1 VCAM-1
空白组 12.56±3.26 388.48±21.92
模型组 52.21±4.34## 511.93±64.30##
AS185组 13.83±1.98** 396.63±45.66**
# #
AS187组 19.15±4.41** 471.22±52.45
AS189组 24.34±4.97##** 413.96±37.10**
[0145] 注：与空白组相比，#P<0.05，##P<0.01，与模型组相比，*P<0.05，**P<0.01。
[0146] 白细胞介素(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素10(IL-10)检测结果见表3(浓度单位均为ng/L)。与空白组相比：模型组、AS187组和AS189组大鼠血清中IL-6、TNF-α、IFN-γ水平显著升高(P<0.01)，IL-10水平显著降低(P<0.01)；AS185组大鼠血清中IL-6和TNF-α水平无显著性差异，IFN-γ和IL-10水平差异显著(P<0.01)。与模型组相比，AS185组大鼠血清中IL-6、TNF-α和IFN-γ水平明显降低(P<0.01)，IL-10水平明显升高(P<0.01)。结果提示，乳酸片球菌AS185对动脉粥样硬化病理变化中IL-6、TNF-α、IFN-γ等炎症因子产生抑制作用，对抗炎因子IL-10有促进作用，从而抑制或减缓动脉粥样硬化的形成。
[0147] 表3
[0148]组别 IL-6 TNF-α IFN-γ IL-10
空白组 50.58±1.54 131.89±2.48 717.5±27.95 37.87±0.97
模型组 86.12±3.14## 199.67±9.97## 1195.00±21.00## 25.40±0.79##
AS185组 56.21±3.41** 142.33±3.74** 808.75±18.00##** 32.32±1.68##**AS187组 80.78±2.41## 176.11±16.05##* 1115±22.80##** 27.40±1.43##*AS189组 80.87±4.47## 173.44±7.31##** 1045±39.68##** 26.82±1.33##
[0149] 注：与空白组相比，#P<0.05，##P<0.01，与模型组相比，*P<0.05，**P<0.01。
[0150] 三、组织形态学观察
[0151] 试验结束的第二天，大鼠禁食不禁水12h，然后腹腔注射2％戊巴比妥钠(30mg/kg体重)进行麻醉，剥离腹主动脉，于预冷的生理盐水中反复冲洗干净后，取0.5cm左右长的腹主动脉置于10％的福尔
马林溶液中固定24小时，
石蜡包埋、切片，进行苏木素-伊红(hematoxylin-eosin，HE)染色，Olympus光学
显微镜观察腹主动脉病变，400×显微照相。
[0152] 大鼠腹主动脉组织HE切片染色结果见图2。图2中：A为空白组，B为模型组，C为AS185组，D为AS187组，E为AS189组；实线箭头所示为内皮层脱落，虚线箭头所示为胆固醇结晶沉积，双线箭头所示为泡沫细胞。空白组大鼠腹主动脉壁各层清晰可见，排列整齐，管腔内膜光滑、完整、连续，薄厚均匀，无脂质浸及，平滑肌细胞正常，分布整齐、有序，无脂质斑点；模型组大鼠腹主动脉各层结构排列紊乱，内膜和中膜细胞排列疏松，内皮层脱落，可见胆固醇结晶沉积，大量泡沫细胞出现；AS185组、AS187组和AS189组与模型组比较病理变化程度均有不同程度减轻。以上HE切片染色结果提示，高脂饮食能够引起动脉平滑肌细胞逐渐增生，泡沫细胞形成，最终形成动脉粥样硬化；乳酸片球菌AS185能够减少泡沫细胞的形成，对血管平滑肌细胞的增殖与再构有抑制作用，能够缓解大鼠动脉粥样硬化的
进程。
[0153] 四、Western Blotting蛋白印记检测
[0154] 试验结束的第二天，大鼠禁食不禁水12h，然后腹腔注射2％戊巴比妥钠(30mg/kg体重)进行麻醉，剥离腹主动脉，置于EP管中，按照BCA蛋白定量试剂盒
说明书的方法提取总蛋白，采用Western Blot法检测腹主动脉组织中t-p38蛋白、p-p38蛋白、t-ERK1/2蛋白和p-ERK1/2蛋白的表达情况。
[0155] Western Blot检测蛋白表达结果见图3。图3A为t-p38蛋白和p-p38蛋白的表达；图3B为p-p38蛋白的相对表达量，以p-p38与t-p38的比值表示；图3C为t-ERK1/2蛋白和p-ERK1/2蛋白的表达；图3D为p-ERK1/2蛋白的相对表达量，以p-ERK1/2与t-ERK1/2的比值表示；*表示与模型组相比，差异显著(P<0.05)，**表示与模型组相比，差异极显著(P<0.01)。
空白组大鼠腹主动脉组织中p-p38蛋白呈低水平表达；与空白组相比，模型组大鼠腹主动脉组织中p-p38的表达显著升高；与模型组相比，AS185组大鼠腹主动脉组织中p-p38的表达显著减少(P<0.05)。各组大鼠腹主动脉组织中t-ERK1/2蛋白均呈低水平表达，各组无显著差异；与空白组相比，模型组大鼠腹主动脉组织中p-ERK1/2蛋白表达显著升高；与模型组相比，AS185组大鼠腹主动脉组织中p-ERK1/2蛋白表达显著降低(P<0.01)。
[0156] Western Blot检测结果表明：高脂饮食能够上调p38MAPK、pERK1/2MAPK信号通路的表达；乳酸片球菌AS185能够抑制高脂饮食引起的p38MAPK、pERK1/2MAPK信号通路的上调，说明乳酸片球菌AS185可能通过抑制p38MAPK和ERK MAPK信号通路预防大鼠动脉粥样硬化的形成。
