香蜂草苷在防治2型糖尿病中的应用
阅读：897发布：2020-05-11
专利汇可以提供香蜂草苷在防治2型糖尿病中的应用专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 涉及香蜂草苷在防治2型糖尿病中的应用。本发明证明了香蜂草苷在体内调控 葡萄糖 代谢的潜在应用，可作为制备药品、保健品、 功能性食品 或 食品添加剂 的有效成分，用于2型糖尿病等糖代谢异常相关 疾病 的防治。，下面是香蜂草苷在防治2型糖尿病中的应用专利的具体信息内容。
1.一种香蜂草苷在制备防治2型糖尿病药品中的应用。
2.一种香蜂草苷在制备防治2型糖尿病保健品中的应用。
3.一种香蜂草苷在制备防治2型糖尿病功能性食品或食品添加剂中的应用。
4.根据权利要求1～3任一所述的应用，其特征在于：所述香蜂草苷来源于香蜂草或柑橘果皮。
5.根据权利要求1～3任一所述的应用，其特征在于：所述香蜂草苷处理降低空腹和餐后血糖，提高小鼠对葡萄糖的耐受能力，增加小鼠的胰岛素敏感性，促进小鼠肝脏AMPK的磷酸化。
6.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述药品以香蜂草苷为活性成分，配以药学上可接受的辅料或辅助性成分制备成制剂使用。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于：所述制剂选自注射液、皮下埋植剂、片剂、粉剂、颗粒剂、胶囊、口服液、缓释剂中的一种。
香蜂草苷在防治2型糖尿病中的应用
技术领域
[0001] 本发明属于医药领域，特别涉及一种香蜂草苷在防治2型糖尿病中的应用。
背景技术
[0002] 糖尿病是以体内高血糖为特征的一种流行病。糖尿病分为两种：1型糖尿病和2型糖尿病，两者受遗传和环境因素共同影响。2型糖尿病占糖尿病的90％，它的发生由于胰岛素抵抗或胰岛素分泌受损，表现为高血糖和葡萄糖不耐受。糖尿病的发展通常伴随其它代谢综合征，如肥胖、高血脂和炎症等。在过去的几十年间，糖尿病及其并发症的发生率显著增加，根据世界卫生组织(WHO)的数据，全世界范围内有4.22亿糖尿病患者(2014年)。根据2010年瑞金医院内分泌科发表在《JAMA》期刊上的一项研究成果，中国成年人中糖尿病的患病率为11.6％，而前期糖尿病的流行率高达50.1％。2019年，中国糖尿病患者已超过1.4亿，糖尿病患病人数已位居全球第一。因此，对于糖尿病及其并发症的预防和控制项目刻不容缓。
[0003] 目前，从天然化合物中寻找安全、毒副作用较低的糖代谢调控物质是代谢领域的研究方向之一。香蜂草苷(Isosakuranetin 7-O-rutinoside，Didymin)又名香风草甙，分子式为C28H34O14，分子量为594.56，化学结构式如图1。香蜂草苷主要来源为香蜂草、风轮菜和荫风轮等，在某些柑橘的果皮中也可检测到。香蜂草苷不溶于水，可溶于甲醇、乙醇、DMSO等有机溶剂。香蜂草苷具有多种生物活性，目前，已报道的活性包括神经保护、改善神经母细胞瘤、肝保护、抑制细胞凋亡和改善人脐内皮细胞功能等。然而，关于香蜂草苷是否调控体内糖代谢，在防治2型糖尿病方面的应用仍未见报道。
发明内容
[0004] 本发明所要解决的技术问题是提供一种香蜂草苷在防治2型糖尿病中的应用，证明了香蜂草苷在体内调控葡萄糖代谢的潜在应用，可作为制备药品、保健品、功能性食品或食品添加剂的有效成分，用于2型糖尿病等糖代谢异常相关疾病的防治。
[0005] 一方面，本发明提供了一种香蜂草苷在制备防治2型糖尿病药品中的应用。
[0006] 一方面，本发明提供了一种香蜂草苷在制备防治2型糖尿病保健品中的应用。
[0007] 一方面，本发明提供了一种香蜂草苷在制备防治2型糖尿病功能性食品或食品添加剂中的应用。
[0008] 进一步的，所述香蜂草苷来源于香蜂草或柑橘果皮。
[0010] 进一步的，所述药品以香蜂草苷为活性成分，配以药学上可接受的辅料或辅助性成分制备成制剂使用。
[0011] 进一步的，所述制剂选自注射液、皮下埋植剂、片剂、粉剂、颗粒剂、胶囊、口服液、缓释剂中的一种。
[0012] 有益效果
[0013] 本发明通过实验发现香蜂草苷在HepG2细胞中抑制糖异生相关基因的表达，且具有良好的浓度依赖性，促进经典能量分子AMPK的磷酸化。在高脂饮食诱导2型糖尿病的C57BL/6小鼠模型中，香蜂草苷处理降低空腹和餐后血糖，提高小鼠对葡萄糖的耐受能力，增加小鼠的胰岛素敏感性，促进小鼠肝脏AMPK的磷酸化，表明香蜂草苷在体内调控葡萄糖代谢的潜在应用。可作为制备药品、保健品、功能性食品或食品添加剂的有效成分，用于2型糖尿病等糖代谢异常相关疾病的防治。附图说明
[0014] 图1是香蜂草苷的化学结构式。
[0015] 图2是香蜂草苷(DDM)处理HepG2细胞24h对细胞糖异生相关基因表达的影响。DMSO空白对照组浓度为0.1％(v/v)，香蜂草苷设4个浓度处理组(分别为0.5、1、5、10μg/mL)，n＝4。用SPSS软件进行差异显著性分析，进行t检验，*p<0.05，**p<0.01，与DMSO空白对照组比较。
[0016] 图3是香蜂草苷(DDM)处理HepG2细胞24h对细胞AMPKα和p-AMPKα蛋白表达的影响，n＝6。
[0017] 图4是香蜂草苷(DDM)处理对高脂饮食C57BL/6小鼠空腹血糖(a)和餐后血糖(b)的影响。Water组每天灌胃双蒸水，处理组每天灌胃DDM(2mg/kg BW)，n＝7-9。用SPSS软件进行差异显著性分析，进行t检验，*p<0.05，**p<0.01。
[0018] 图5是香蜂草苷(DDM)处理对高脂饮食C57BL/6小鼠IPGTT(a)和曲线下面积(b)的影响。Water组每天灌胃双蒸水，处理组每天灌胃DDM(2mg/kg BW)，n＝9。用SPSS软件进行差异显著性分析，进行t检验，*p<0.05，**p<0.01。
[0019] 图6是香蜂草苷(DDM)处理对高脂饮食C57BL/6小鼠ITT(a)和曲线下面积(b)的影响。Water组每天灌胃双蒸水，处理组每天灌胃DDM(2mg/kg BW)，n＝9。用SPSS软件进行差异显著性分析，进行t检验，*p<0.05。
[0020] 图7是香蜂草苷(DDM)处理对高脂饮食C57BL/6小鼠肝脏AMPKα和p-AMPKα蛋白表达的影响，n＝6。
具体实施方式
[0021] 下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。此外应理解，在阅读了本发明讲授的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
[0022] 实施例1
[0023] (一)对HepG2细胞糖异生相关基因表达的影响
[0024] HepG2细胞用含10％胎牛血清的高糖型DMEM培养基于37℃、5％CO2细胞培养箱中孵育，2-3天传代1次。实验时，HepG2细胞接种于24孔板。待细胞生长至70-80％融合，弃去原培养基，分别换上已加DMSO或不同浓度香蜂草苷的DMEM培养基。设DMSO空白对照组和不同浓度香蜂草苷(用DMSO溶解，终浓度分别为0.5μg/mL、1μg/mL、5μg/mL和10μg/mL)处理组。作用24小时后，用RNA提取试剂盒(Promega)提取不同孔HepG2细胞的RNA，对提取好的RNA进行逆转录(Takara)，用实时定量PCR仪(ABI System)对不同糖异生基因进行qRT-PCR试验。数据用平均值±标准误(x±SE)表示，使用SPSS软件进行数据分析，进行t检验。
[0025] 结果表明，香蜂草苷在HepG2细胞中抑制糖异生相关基因G6p和Pepck的表达，且具有良好的浓度依赖性(图2)，并促进经典能量分子AMPK的磷酸化(图3)。
[0026] (二)香蜂草苷对高脂饮食诱导2型糖尿病C57BL/6小鼠的影响
[0027] C57BL/6小鼠购自上海灵畅生物技术有限公司，饲喂的高脂饲料(含60％脂肪)购自美国Research Diets公司。所有小鼠在恒温恒湿环境下饲养，提供12h光照12h黑暗环境。每组9只小鼠，所有小鼠可以自由摄取食物和水。Water组每天灌胃双蒸水，处理组每天灌胃香蜂草苷(2mg/kg BW)，通过灌胃针灌胃的方式给药，灌胃体积为5mL/kg BW，对照组灌胃双蒸水。试验为期20周，1周连续给药6天，停药1天。第18周测定空腹血糖和餐后血糖，空腹血糖测定前小鼠禁食过夜，对小鼠尾静脉剪尾取血，用强生One Touch Ultra ZSJ 843ETT型血糖仪测定空腹血糖值。数据用平均值±标准误(x±SE)表示，使用SPSS软件进行数据分析，进行t检验。具体的空腹血糖和餐后血糖测定值见附图4，香蜂草苷处理显著降低小鼠的空腹和餐后血糖。
[0028] 试验进行的第14周测定IPGTT。测IPGTT之前，小鼠禁食过夜，给药，1h后测OGTT。采血作为0min血糖值，然后给小鼠腹腔注射葡萄糖(2g/kg BW)，于15、30、60、90、120min 5个时间点分别尾静脉采血，用强生One Touch Ultra ZSJ 843ETT型血糖仪测定血糖值，绘制糖耐量曲线。曲线下面积计算公式为：AUC＝(G0+G15)×7.5+(G15+G30)×7.5+(G30+G60)×15+(G60+G90)×15+(G90+G120)×15。数据用平均值±标准误(x±SE)表示，使用SPSS软件进行数据分析，进行t检验。
[0029] 具体的C57BL/6小鼠糖耐量曲线和曲线下面积(AUC)见图5，香蜂草苷处理显著提高小鼠对葡萄糖的耐受能力。
[0030] 试验进行的第16周测定ITT。测ITT之前，小鼠禁食6h，先测0min血糖值，然后给小鼠腹腔注射胰岛素(1U/kg BW)，于15、30、60、90、120min 5个时间点分别尾静脉采血，用强生One Touch Ultra ZSJ 843ETT型血糖仪测定血糖值，绘制ITT曲线。曲线下面积计算公式为：AUC＝(G0+G15)×7.5+(G15+G30)×7.5+(G30+G60)×15+(G60+G90)×15+(G90+G120)×15。数据用平均值±标准误(x±SE)表示，使用SPSS软件进行数据分析，进行t检验。具体的C57BL/6小鼠糖耐量曲线和曲线下面积(AUC)见图6，香蜂草苷处理增加小鼠的胰岛素敏感性。
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