草叶马尾藻提取物在防龋齿口腔护理用品中的应用
阅读：0发布：2023-06-20
专利汇可以提供草叶马尾藻提取物在防龋齿口腔护理用品中的应用专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 涉及草叶 马 尾藻提取物在防龋齿 口腔 护理用品中的应用。具体地，提供了一种从草叶马尾藻中提取获得的纯度和 生物 活性都很高的草叶马尾藻提取物，包括草叶马尾藻多糖提取物和草叶马尾藻多酚提取物，还提供了该草叶马尾藻提取物制备的牙膏，经临床试验证实其可有效去除 牙齿 污渍，因此具备防龋作用，可用于开发去渍防龋齿口腔护理用品，如牙膏、漱口 水 及口香糖等衍生产品。，下面是草叶马尾藻提取物在防龋齿口腔护理用品中的应用专利的具体信息内容。
1.一种草叶马尾藻提取物，其特征在于，它是通过以下方法制备得到的：
(a)将原料草叶马尾藻干燥后粉碎，过10-40目筛得到草叶马尾藻干粉；
(b)向草叶马尾藻干粉中加入体积分数70％-90％的乙醇后回流提取2-4小时，料液体积比为1:5-10，回流结束后除去乙醇，烘干，得到干燥脱脂的草叶马尾藻粉末；
(c)选用功率在500-1000瓦的微波对干燥脱脂的草叶马尾藻粉末以水为溶剂进行提取，料液体积比为1:10-30，每次微波处理时间为15-30分钟，共微波处理1-4次；
(d)合并所有提取液，过滤，滤液利用乙醇/无机盐双水相系统分离纯化，置于恒温振荡器中在40-50℃下振荡25-35分钟，静置；所述的乙醇的质量浓度为10％-40％；所述的无机盐选自硫酸铵、硫酸钠、磷酸氢二钾或氯化钠，质量浓度为10％-25％；
(e)收集无机盐下相，采用超滤膜过滤浓缩，所述的超滤膜工作压力为0.1-0.6MPa，超滤膜的截留分子量为3000-20000Da，超滤时间20-40min，超滤温度30-40℃，对超滤膜过滤浓缩后的截留液进行冷冻干燥，得到所述草叶马尾藻提取物之草叶马尾藻多糖提取物；收集上相，于35-45℃用真空旋转蒸发器蒸去乙醇，然后按固液比1g:(15-25)ml加入无水乙醇，待残余的无机盐完全析出后滤去其中固体，再于35-45℃用真空旋转蒸发器蒸去乙醇，冷冻干燥，得到所述草叶马尾藻提取物之草叶马尾藻多酚提取物。
2.权利要求1所述的草叶马尾藻提取物在制备去渍或防龋齿的口腔护理用品中的应用。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述的口腔护理用品为牙膏、漱口水、口香糖、牙齿脱色剂或牙贴。
4.一种牙膏，其特征在于，所述的牙膏含有权利要求1所述的草叶马尾藻提取物。
5.根据权利要求4所述的牙膏，其特征在于，所述的草叶马尾藻提取物中，草叶马尾藻多糖提取物和草叶马尾藻多酚提取物的重量比为0.25-4。
6.根据权利要求4所述的牙膏，其特征在于，它由以下重量百分比的原料组成：
草叶马尾藻提取物之草叶马尾藻多糖提取物2％-8％、草叶马尾藻提取物之草叶马尾藻多酚提取物8％-2％；
摩擦剂CaCO3：2％-4％；
增稠剂SiO2：0.1％-1.5％；
保湿剂：甘油：0.5％-1％；山梨醇：1.5％-5.5％；
胶黏剂：CMC：0.03％-0.15％；卡拉胶：0.03％-0.15％；
发泡剂K12：0.1％-0.2％；
防腐剂苯甲酸钠：0.01％-0.02％；
甜味剂糖精钠：0.005％-0.01％；
香精：0.05％-0.1％；
余量为水。
草叶马尾藻提取物在防龋齿口腔护理用品中的应用
技术领域
[0001] 本发明涉及海藻提取物，具体地说，涉及一种新的草叶马尾藻提取物，及其在防龋齿口腔护理用品中的应用。
背景技术
[0002] 马尾藻(Sargassum)是褐藻门鹿角菜目马尾藻科植物。草叶马尾藻(Sargassum.graminifolium.turn)属于马尾藻属的一种，生长于低潮带和潮下带的岩礁上，藻体绿色或褐色，高约50厘米，在我国分布在浙江舟山、象山、福建、广东及澳门沿海，资源十分丰富。目前马尾藻的加工利用范围比较窄，只有小部分被用作饲料、藻胶的原料，部分食用，大部分尚未得到全面的开发利用。马尾藻同其他类的海藻一样也含有丰富的多糖、褐藻多酚、γ-亚麻酸、氨基酸和微量元素等多种生物活性物质；其中，马尾藻多糖更是因为其较高的药用价值而备受关注。马尾藻多糖是从马尾藻中提取出来的一种易溶于水、黏度较高的多糖复合物，不同提取方法得到的多糖复合物成分是不同的，生物活性亦不同。褐藻多酚是从褐藻中提取的由间苯三酚作为单体组成的结构不同、含有多羟基酚类化合物的总称，具有优良的抗氧化功能。
[0003] 牙齿上的污渍分内源性和外源性两种类型。牙齿外源性污渍是指人们牙齿表面附着的色斑，当人们吸烟、饮茶、喝咖啡以及食用有色的食物时，这层有机薄膜很容易被这些物质染色，染色后的薄膜如果得不到及时有效的清除，就会在牙齿表面形成一种难以去除的污渍，也会形成牙菌斑，侵蚀逐渐发展成龋齿，严重的就会出现牙龈炎、牙周炎等各种口腔疾病。内源性污渍是牙齿在发育过程中形成的，如四环素牙、氟斑牙等。当前，市场上具有去除污渍功效的牙膏通常是添加物理或化学功效成分。物理去除法一般是添加二氧化硅增加牙膏的磨擦力来实现功效；化学去除法则往往添加植酸钠、柠檬酸盐、磷酸盐等来达到目的。这两类牙膏对去除牙齿外源性污渍均具有一定的效果，但如果长期使用添加了过氧化物的牙膏，有可能对牙齿或牙龈造成一定的损害。
[0004] 龋齿在儿童口腔疾病中的高发病率而受到关注，预防龋齿的牙膏也应运而生。以前防龋齿牙膏中主要是加入氟化物，如氟化钠与单氟磷酸钠，通过增加产品中的氟离子浓度，达到提高牙齿的抗牙石、抗龋齿、抗菌能力的目的。值得关注的是氟添加量过高也会造成氟斑牙甚至氟骨症，体内氟含量过高影响身体健康，过度使用含氟物品可能会引起氟中毒，从而损害神经系统，引发骨质疏松症。我国很多城市都是氟含量超标，不适宜使用含氟牙膏。
[0005] 中国专利文献CN201310630534.8，申请日2013.12.02，公开了一种含海洋生物成分的儿童用龋齿口腔喷剂及其制备方法，选择的配方如下(组分及其重量百分比％)：木糖醇10-15％；海藻多糖6-10％；甲壳素3-8％；海洋生物酶5-8％；动物抗菌肽5-10％；食用香精0.05-0.1％；余量为纯化水，该喷剂可去除口腔炎症的有害细菌，维持口腔菌群平衡；能快速温和治愈溃疡和炎症。
[0006] 然而，目前还未见使用草叶马尾藻多糖和多酚提取物强效去渍防龋齿的相关报道。
发明内容
[0007] 本发明的目的是针对现有技术中的不足，提供一种草叶马尾藻提取物及其用途，以及以所述的草叶马尾藻提取物为原料制备的牙膏。
[0008] 本发明提供了一种草叶马尾藻提取物，它是通过以下方法制备得到的：
[0009] (a)将原料草叶马尾藻干燥后粉碎，过10-40目筛得到草叶马尾藻干粉；
[0012] (d)合并所有提取液，过滤，滤液利用聚乙二醇/无机盐或乙醇/无机盐双水相系统分离纯化，置于恒温振荡器中在40-50℃下振荡25-35分钟，静置；所述的聚乙二醇或乙醇的质量浓度为10％-40％；所述的无机盐选自硫酸铵、硫酸钠、磷酸氢二钾或氯化钠，质量浓度为10％-25％；
[0013] (e)收集无机盐下相，采用超滤膜过滤浓缩，所述的超滤膜工作压力为0.1-0.6MPa，超滤膜的截留分子量为3000-20000Da，超滤时间20-40min，超滤温度30-40℃，对超滤膜过滤浓缩后的截留液进行冷冻干燥，得到所述草叶马尾藻提取物之草叶马尾藻多糖提取物；收集上相，于35-45℃用真空旋转蒸发器蒸去乙醇，然后按固液比1g:(15-25)ml加入无水乙醇，待残余的无机盐完全析出后滤去其中固体，再于35-45℃用真空旋转蒸发器蒸去乙醇，冷冻干燥，得到所述草叶马尾藻提取物之草叶马尾藻多酚提取物。
[0014] 优选地，步骤(d)中所述的双水相系统是聚乙二醇/无机盐，所述的无机盐是硫酸铵。
[0015] 更优选地，所述的聚乙二醇分子量为6000，质量浓度为10％-20％；所述的无机盐质量浓度为20％-25％。
[0016] 优选地，步骤(d)中温度为50℃。
[0017] 本发明还提供了所述的草叶马尾藻提取物在制备去渍或防龋齿的口腔护理用品中的应用。
[0018] 所述的口腔护理用品为牙膏、漱口水、口香糖、牙齿脱色剂或牙贴。
[0019] 本发明还提供了一种牙膏，所述的牙膏含有所述的草叶马尾藻提取物。
[0020] 优选地，所述的草叶马尾藻提取物中，草叶马尾藻多糖提取物和草叶马尾藻多酚提取物的重量比为0.25-4。
[0021] 更优选地，所述的牙膏由以下重量百分比的原料组成：
[0022] 草叶马尾藻提取物之草叶马尾藻多糖提取物2％-8％、草叶马尾藻提取物之草叶马尾藻多酚提取物8％-2％；
[0023] 摩擦剂CaCO3：2％-4％；
[0024] 增稠剂SiO2：0.1％-1.5％；
[0025] 保湿剂：甘油：0.5％-1％；山梨醇：1.5％-5.5％；
[0026] 胶黏剂：CMC：0.03％-0.15％；卡拉胶：0.03％-0.15％；
[0027] 发泡剂K12：0.1％-0.2％；
[0029] 甜味剂糖精钠：0.005％-0.01％；
[0030] 香精：0.05％-0.1％；
[0031] 余量为水。
[0032] 本发明优点在于：
[0033] 1、本发明的草叶马尾藻提取物——草叶马尾藻多糖提取物和草叶马尾藻多酚提取物，是应用微波辅助提取、双水相萃取和膜分离技术从草叶马尾藻中同步提取得到，由于步骤和参数设置恰当，使得提取率高、纯度高、生物活性损失小；
[0034] 2、本发明的草叶马尾藻多糖提取物和草叶马尾藻多酚提取物能够制备得到牙膏配方，且通过临床试验证实该牙膏配方可有效去除牙齿污渍，因此具备防龋作用，可用于开发去渍防龋齿口腔护理用品，如牙膏、漱口水及口香糖等衍生产品。
具体实施方式
[0035] 下面对本发明提供的具体实施方式作详细说明。
[0036] 本申请的发明人经过广泛而深入的研究，从草叶马尾藻中高效的同步提取分离获得生物活性好的草叶马尾藻多糖和草叶马尾藻多酚，并进一步将二者制备成复合配方，证实该复合配方具备优良的去渍抗龋齿效果，在此基础上完成了本发明。
[0037] 实施例1草叶马尾藻多糖提取物和草叶马尾藻多酚提取物的制备(一)[0038] 1、方法步骤
[0039] 1.1同步提取草叶马尾藻多糖提取物和草叶马尾藻多酚提取物
[0040] (1)将原料草叶马尾藻去除杂质并用水洗净，将洗净的草叶马尾藻放入烘干箱内，30℃干燥20小时至恒重，然后把干燥后的草叶马尾藻在粉碎机内粉碎得到粉末，过20目筛得到草叶马尾藻干粉，冷冻保藏备用。
[0041] (2)向草叶马尾藻干粉中加入体积分数80％的乙醇后回流提取3小时左右，料液比(草叶马尾藻干粉体积:乙醇体积)为1:8。回流结束后滤去乙醇，然后将草叶马尾藻粉末放置于通风橱内使乙醇完全挥发，最后将草叶马尾藻粉末在烘干箱中干燥，干燥温度为30℃，干燥至恒重，备用。
[0042] (3)取干燥脱脂的草叶马尾藻粉末用微波辅助提取：选用频率为2450MHz、功率在800瓦的微波对干燥脱脂的草叶马尾藻粉末以水为溶剂进行提取，料液比(干燥脱脂的草叶马尾藻粉末体积:水体积)为1:20，每次微波处理时间为20分钟，共微波处理3次。
[0043] (4)合并所有提取液，过滤，滤液利用聚乙二醇(PEG)/无机盐双水相系统分离纯化草叶马尾藻多糖和草叶马尾藻多酚，双水相萃取体系中聚乙二醇分子量6000，质量浓度为10％；无机盐为硫酸铵，质量浓度为20％。置于恒温振荡器中在50℃下振荡30分钟。静置后分成两相，草叶马尾藻多酚进入乙醇上相，草叶马尾藻多糖进入无机盐下相。
[0044] (5)纯化
[0045] a.因马尾藻多酚易氧化变色，因此得到的上相，于40℃用真空旋转蒸发器蒸去乙醇，然后按固液比(g:ml)1:20加入无水乙醇，待残余的无机盐完全析出后滤去其中固体，再于40℃用真空旋转蒸发器蒸去乙醇，冷冻干燥3天，得到草叶马尾藻多酚提取物。
[0046] b.得到的无机盐下相，采用超滤膜过滤浓缩，超滤膜工作压力为0.15MPa，膜的截留分子量为10000Da，超滤时间30min，超滤温度35℃。对超滤膜过滤浓缩后的截留液进行冷冻干燥，得到草叶马尾藻多糖提取物。
[0047] 1.2粗多糖得率、粗品中多糖含量、多糖提取率的测定
[0048] (1)收集上述步骤(3)的微波提取液，浓缩成浸膏，烘干即得粗多糖。粗多糖得率％＝(所得总粗多糖质量/原料质量)×100％。
[0049] (2)采用苯酚-硫酸比色法测定粗品中多糖的含量。以葡萄糖为标准品，准确称取标准葡萄糖20mg于500ml容量瓶中，加水至刻度，分别吸取0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6ml溶液至刻度试管中，再各以蒸馏水补至2.0ml，然后加入6％苯酚1.0ml及浓硫酸
5.0ml，摇匀冷却，室温放置20分钟后于490nm测定吸光度值，横坐标为葡萄糖浓度μg/ml，纵坐标为吸光度值，绘制标准曲线，得到线性回归方程。同样条件下取粗多糖2mg，定容至50ml容量瓶中，吸取1.0ml待测液至刻度试管中用蒸馏水补齐至2.0ml，然后加入6％苯酚1.0ml及浓硫酸5.0ml，摇匀冷却，室温放置20分钟后于490nm测定吸光度值。根据之前的标准曲线计算出待测液的浓度C。粗品中多糖含量％＝[(C×1000×50)/所取粗多糖质量]×100％。
5.0ml，摇匀冷却，室温放置20分钟后于490nm测定吸光度值，横坐标为葡萄糖浓度μg/ml，纵坐标为吸光度值，绘制标准曲线，得到线性回归方程。同样条件下取粗多糖2mg，定容至50ml容量瓶中，吸取1.0ml待测液至刻度试管中用蒸馏水补齐至2.0ml，然后加入6％苯酚1.0ml及浓硫酸5.0ml，摇匀冷却，室温放置20分钟后于490nm测定吸光度值。根据之前的标准曲线计算出待测液的浓度C。粗品中多糖含量％＝[(C×1000×50)/所取粗多糖质量]×100％。
[0050] (3)多糖提取率％＝多糖质量/原料质量＝(粗品中多糖含量％×所得总粗多糖质量)/原料质量。
[0051] 1.3草叶马尾藻多糖和草叶马尾藻多酚纯度的测定
[0052] (1)草叶马尾藻多糖的纯度＝(草叶马尾藻多糖提取物中多糖含量/草叶马尾藻多糖提取物重量)×100％。
[0053] (2)草叶马尾藻多酚的纯度＝(草叶马尾藻多酚提取物中多酚含量/草叶马尾藻多酚提取物重量)×100％。
[0054] 采用Folin-Ciocalteu法测定马尾藻多酚含量。分别取没食子酸标准溶液0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5ml置于10ml棕色容量瓶中，加超纯水稀释至lml。加入2ml Folin-Ciocalteu工作液并摇匀，2min后加入12mol/L的Na2CO3溶液6ml，混合充分后暗处静置
60min，于765nm处测定吸光度。按照上述测定方法检测提取物中多酚含量，计算草叶马尾藻提取物中多酚含量(以毫克没食子酸当量(GAE)每克干粉重表示)。
60min，于765nm处测定吸光度。按照上述测定方法检测提取物中多酚含量，计算草叶马尾藻提取物中多酚含量(以毫克没食子酸当量(GAE)每克干粉重表示)。
[0055] 1.4草叶马尾藻多糖提取物中硫酸根含量的测定
[0056] 采用硫酸钡比浊法测定硫酸基含量。
[0057] (1)实验原理
[0059] (2)实验试剂的配置
[0060] ①硫酸钾标准溶液的配制：准确称取经105℃干燥至恒重的硫酸钾200mg，以lmoL/L的盐酸溶液定容至200mL，即得硫酸基标准储备液。
[0061] ②1moL/L HCl的配置：36％-38％浓盐酸83.333mL定容至1L容量瓶。
[0062] ③0.5％明胶：1.25g明胶在60-70℃溶解于200mL水中，冷却后定容至250mL容量瓶。
[0063] ④l％氯化钡-明胶：1g氯化钡溶于100mL明胶溶液中。
[0064] ⑤三氯乙酸：3g三氯乙酸溶于100mL蒸馏水中。
[0065] (3)标准曲线的制作
[0066] 精确吸取0、0.04、0.08、0.12、0.16、0.2mL标准硫酸基溶液于试管以盐酸溶液补至0.2mL，以0.2mL HCl溶液作为空白，加入三氯乙酸溶液3.8mL及氯化钡-明胶溶液1.0mL，摇匀，室温静置15min，于360nm测吸收度A1，另用同样标准溶液系列以明胶试液代替氯化钡-明胶溶液，以0.2mL HCI溶液作为空白对照得A2。以硫酸基毫克数为横坐标，纵坐标为吸收度(A1-A2)作出标准曲线。
[0067] (4)草叶马尾藻多糖提取物的处理及测定
[0068] 精密称取草叶马尾藻多糖提取物5mg放入盛有3mL 1mol/L HCL的试管中，密封，于100℃水解6小时。取水解液0.1mL放入检测试管中，用1mol/L HCl溶液补加总体积至0.2mL，重复制作标准曲线时的操作，测定其在360nm处的吸光值。重复三次，取其平均值。
[0069] 2、结果
[0070] 2.1粗多糖得率、粗品中多糖含量、多糖提取率
[0071] 粗多糖得率、粗品中多糖含量、多糖提取率测定结果分别为15.30％、41.08％、6.285％。
[0072] 2.2草叶马尾藻多糖和草叶马尾藻多酚纯度
[0073] 草叶马尾藻多糖和草叶马尾藻多酚纯度的测定结果分别为91.53％、72.37％。
[0074] 2.3草叶马尾藻多糖提取物中硫酸根含量
[0075] 草叶马尾藻多糖提取物中硫酸根含量为25.6％。
[0076] 实施例2草叶马尾藻多糖提取物和草叶马尾藻多酚提取物的制备(二)[0077] 1、方法步骤
[0078] (1)将原料草叶马尾藻去除杂质并用水洗净，将洗净的草叶马尾藻放入烘干箱内，20℃干燥24小时至恒重，然后把干燥后的草叶马尾藻在粉碎机内粉碎得到粉末，过40目筛得到草叶马尾藻干粉，冷冻保藏备用。
[0079] (2)向草叶马尾藻干粉中加入体积分数90％的乙醇后回流提取2小时左右，料液比(草叶马尾藻干粉体积:乙醇体积)为1:10。回流结束后滤去乙醇，然后将草叶马尾藻粉末放置于通风橱内使乙醇完全挥发，最后将草叶马尾藻粉末在烘干箱中干燥，干燥温度为20℃，干燥至恒重，备用。
[0080] (3)取干燥脱脂的草叶马尾藻粉末用微波辅助提取：选用频率为2450MHz、功率在500瓦的微波对干燥脱脂的草叶马尾藻粉末以水为溶剂进行提取，料液比(干燥脱脂的草叶马尾藻粉末体积:水体积)为1:10，每次微波处理时间为30分钟，共微波处理1次。
[0081] (4)合并所有提取液，过滤，滤液利用聚乙二醇(PEG)/无机盐双水相系统分离纯化草叶马尾藻多糖和草叶马尾藻多酚，双水相萃取体系中聚乙二醇分子量6000，质量浓度为20％；无机盐为硫酸钠，质量浓度为25％。置于恒温振荡器中在40℃下振荡35分钟。静置后分成两相，草叶马尾藻多酚进入乙醇上相，草叶马尾藻多糖进入无机盐下相。
[0082] (5)纯化
[0083] a.因马尾藻多酚易氧化变色，因此得到的上相，于35℃用真空旋转蒸发器蒸去乙醇，然后按固液比(g:ml)1:15加入无水乙醇，待残余的无机盐完全析出后滤去其中固体，再于35℃用真空旋转蒸发器蒸去乙醇，冷冻干燥4天，得到草叶马尾藻多酚提取物。
[0084] b.得到的无机盐下相，采用超滤膜过滤浓缩，超滤膜工作压力为0.6MPa，膜的截留分子量为20000Da，超滤时间20min，超滤温度40℃。对超滤膜过滤浓缩后的截留液进行冷冻干燥，得到草叶马尾藻多糖提取物。
[0085] 按照实施例1的方法测定粗多糖得率、粗品中多糖含量、多糖提取率、草叶马尾藻多糖和草叶马尾藻多酚纯度，以及草叶马尾藻多糖提取物中硫酸根含量。
[0086] 2、结果
[0087] 2.1粗多糖得率、粗品中多糖含量、多糖提取率
[0088] 粗多糖得率、粗品中多糖含量、多糖提取率测定结果分别为13.36％、38.24％、5.109％。
[0089] 2.2草叶马尾藻多糖和草叶马尾藻多酚纯度
[0090] 草叶马尾藻多糖和草叶马尾藻多酚纯度的测定结果分别为89.63％、69.18％。
[0091] 2.3草叶马尾藻多糖中硫酸根含量
[0092] 草叶马尾藻多糖提取物中硫酸根含量为24.8％。
[0093] 实施例3草叶马尾藻多糖提取物和草叶马尾藻多酚提取物的制备(三)[0094] 1、方法步骤
[0095] (1)将原料草叶马尾藻去除杂质并用水洗净，将洗净的草叶马尾藻放入烘干箱内，40℃干燥12小时至恒重，然后把干燥后的草叶马尾藻在粉碎机内粉碎得到粉末，过10目筛得到草叶马尾藻干粉，冷冻保藏备用。
[0096] (2)向草叶马尾藻干粉中加入体积分数70％的乙醇后回流提取4小时左右，料液比(草叶马尾藻干粉体积:乙醇体积)为1:5。回流结束后滤去乙醇，然后将草叶马尾藻粉末放置于通风橱内使乙醇完全挥发，最后将草叶马尾藻粉末在烘干箱中干燥，干燥温度为40℃，干燥至恒重，备用。
[0097] (3)取干燥脱脂的草叶马尾藻粉末用微波辅助提取：选用频率为2450MHz、功率在1000瓦的微波对干燥脱脂的草叶马尾藻粉末以水为溶剂进行提取，料液比(干燥脱脂的草叶马尾藻粉末体积:水体积)为1:30，每次微波处理时间为15分钟，共微波处理4次。
[0098] (4)合并所有提取液，过滤，滤液利用乙醇/无机盐双水相系统分离纯化草叶马尾藻多糖和草叶马尾藻多酚，双水相萃取体系中乙醇质量浓度为20％；无机盐为磷酸氢二钾，质量浓度为10％。置于恒温振荡器中在45℃下振荡25分钟。静置后分成两相，草叶马尾藻多酚进入乙醇上相，草叶马尾藻多糖进入无机盐下相。
[0099] (5)纯化
[0100] a.因马尾藻多酚易氧化变色，因此得到的上相，于45℃用真空旋转蒸发器蒸去乙醇，然后按固液比(g:ml)1:25加入无水乙醇，待残余的无机盐完全析出后滤去其中固体，再于45℃用真空旋转蒸发器蒸去乙醇，冷冻干燥2天，得到草叶马尾藻多酚提取物。
[0101] b.得到的无机盐下相，采用超滤膜过滤浓缩，超滤膜工作压力为0.1MPa，膜的截留分子量为3000Da，超滤时间40min，超滤温度20℃。对超滤膜过滤浓缩后的截留液进行冷冻干燥，得到草叶马尾藻多糖提取物。
[0102] 按照实施例1的方法测定粗多糖得率、粗品中多糖含量、多糖提取率、草叶马尾藻多糖和草叶马尾藻多酚纯度，以及草叶马尾藻多糖提取物中硫酸根含量。
[0103] 2、结果
[0104] 2.1粗多糖得率、粗品中多糖含量、多糖提取率
[0105] 粗多糖得率、粗品中多糖含量、多糖提取率测定结果分别为12.42％、35.07％、4.356％。
[0106] 2.2草叶马尾藻多糖和草叶马尾藻多酚纯度
[0107] 草叶马尾藻多糖和草叶马尾藻多酚纯度的测定结果分别为79.65％、60.17％。
[0108] 2.3草叶马尾藻多糖提取物中硫酸根含量
[0109] 草叶马尾藻多糖提取物中硫酸根含量为20.3％。
[0110] 实施例4草叶马尾藻多糖提取物和草叶马尾藻多酚提取物的制备(四)[0111] 1、方法步骤
[0112] (1)将原料草叶马尾藻去除杂质并用水洗净，将洗净的草叶马尾藻放入烘干箱内，30℃干燥12小时至恒重，然后把干燥后的草叶马尾藻在粉碎机内粉碎得到粉末，过20目筛得到草叶马尾藻干粉，冷冻保藏备用。
[0113] (2)向草叶马尾藻干粉中加入体积分数80％的乙醇后回流提取3小时左右，料液比(草叶马尾藻干粉体积:乙醇体积)为1:8。回流结束后滤去乙醇，然后将草叶马尾藻粉末放置于通风橱内使乙醇完全挥发，最后将草叶马尾藻粉末在烘干箱中干燥，干燥温度为30℃，干燥至恒重，备用。
[0114] (3)取干燥脱脂的草叶马尾藻粉末用微波辅助提取：选用频率为2450MHz、功率在800瓦的微波对干燥脱脂的草叶马尾藻粉末以水为溶剂进行提取，料液比(干燥脱脂的草叶马尾藻粉末体积:水体积)为1:20，每次微波处理时间为15分钟，共微波处理4次。
[0115] (4)合并所有提取液，过滤，滤液利用聚乙二醇(PEG)/无机盐双水相系统分离纯化草叶马尾藻多糖和草叶马尾藻多酚，双水相萃取体系中聚乙二醇分子量为6000，质量浓度为10％；无机盐为氯化钠，质量浓度为20％。置于恒温振荡器中在40℃下振荡30分钟。静置后分成两相，草叶马尾藻多酚进入乙醇上相，草叶马尾藻多糖进入无机盐下相。
[0116] (5)纯化
[0117] a.因马尾藻多酚易氧化变色，因此得到的上相，于50℃用真空旋转蒸发器蒸去乙醇，然后按固液比(g:ml)1:20加入无水乙醇，待残余的无机盐完全析出后滤去其中固体，再于50℃用真空旋转蒸发器蒸去乙醇，冷冻干燥3天，得到草叶马尾藻多酚提取物。
[0118] b.得到的无机盐下相，采用超滤膜过滤浓缩，超滤膜工作压力为0.15MPa，膜的截留分子量为10000Da，超滤时间20min，超滤温度30℃。对超滤膜过滤浓缩后的截留液进行冷冻干燥，得到草叶马尾藻多糖提取物。
[0119] 按照实施例1的方法测定粗多糖得率、粗品中多糖含量、多糖提取率、草叶马尾藻多糖和草叶马尾藻多酚纯度，以及草叶马尾藻多糖提取物中硫酸根含量。
[0120] 2、结果
[0121] 2.1粗多糖得率、粗品中多糖含量、多糖提取率
[0122] 粗多糖得率、粗品中多糖含量、多糖提取率测定结果分别为12.28％、35.14％、4.315％。
[0123] 2.2草叶马尾藻多糖和草叶马尾藻多酚纯度
[0124] 草叶马尾藻多糖和草叶马尾藻多酚纯度的测定结果分别为75.85％、56.33％。
[0125] 2.3草叶马尾藻多糖提取物中硫酸根含量
[0126] 草叶马尾藻多糖提取物中硫酸根含量为19.6％。
[0127] 实施例5草叶马尾藻多糖提取物和草叶马尾藻多酚提取物的制备(五)[0128] 1、方法步骤
[0129] (1)将原料草叶马尾藻去除杂质并用水洗净，将洗净的草叶马尾藻放入烘干箱内，40℃干燥20小时至恒重，然后把干燥后的草叶马尾藻在粉碎机内粉碎得到粉末，过40目筛得到草叶马尾藻干粉，冷冻保藏备用。
[0130] (2)向草叶马尾藻干粉中加入体积分数80％的乙醇后回流提取2小时左右，料液比(草叶马尾藻干粉体积:乙醇体积)为1:10。回流结束后滤去乙醇，然后将草叶马尾藻粉末放置于通风橱内使乙醇完全挥发，最后将草叶马尾藻粉末在烘干箱中干燥，干燥温度为40℃，干燥至恒重，备用。
[0131] (3)取干燥脱脂的草叶马尾藻粉末用微波辅助提取：选用频率为2450MHz、功率在500瓦的微波对干燥脱脂的草叶马尾藻粉末以水为溶剂进行提取，料液比(干燥脱脂的草叶马尾藻粉末体积:水体积)为1:20，每次微波处理时间为30分钟，共微波处理2次。
[0132] (4)合并所有提取液，过滤，滤液利用乙醇/无机盐双水相系统分离纯化草叶马尾藻多糖和草叶马尾藻多酚，双水相萃取体系中乙醇质量浓度为40％；无机盐为硫酸钠，质量浓度为20％。置于恒温振荡器中在40℃下振荡30分钟。静置后分成两相，草叶马尾藻多酚进入乙醇上相，草叶马尾藻多糖进入无机盐下相。
[0133] (5)纯化
[0134] a.因马尾藻多酚易氧化变色，因此得到的上相，于50℃用真空旋转蒸发器蒸去乙醇，然后按固液比(g:ml)1:20加入无水乙醇，待残余的无机盐完全析出后滤去其中固体，再于50℃用真空旋转蒸发器蒸去乙醇，冷冻干燥3天，得到草叶马尾藻多酚提取物。
[0135] b.得到的无机盐下相，采用超滤膜过滤浓缩，超滤膜工作压力为0.15MPa，膜的截留分子量为10000Da，超滤时间20min，超滤温度30℃。对超滤膜过滤浓缩后的截留液进行冷冻干燥，得到草叶马尾藻多糖提取物。
[0136] 按照实施例1的方法测定粗多糖得率、粗品中多糖含量、多糖提取率、草叶马尾藻多糖和草叶马尾藻多酚纯度，以及草叶马尾藻多糖提取物中硫酸根含量。
[0137] 2、结果
[0138] 2.1粗多糖得率、粗品中多糖含量、多糖提取率
[0139] 粗多糖得率、粗品中多糖含量、多糖提取率测定结果分别为13.59％、38.83％、5.277％。
[0140] 2.2草叶马尾藻多糖和草叶马尾藻多酚纯度
[0141] 草叶马尾藻多糖和草叶马尾藻多酚纯度的测定结果分别为75.19％、57.43％。
[0142] 2.3草叶马尾藻多糖提取物中硫酸根含量
[0143] 草叶马尾藻多糖提取物中硫酸根含量为20.7％。
[0144] 实施例6本发明的草叶马尾藻提取物去渍牙膏配方(一)
[0145] 草叶马尾藻提取物去渍牙膏配方如下：
[0146] 草叶马尾藻提取物(实施例1制备)：草叶马尾藻多糖提取物50g、草叶马尾藻多酚提取物50g；
[0147] 摩擦剂CaCO3：30g；
[0148] 增稠剂SiO2：10g；
[0149] 保湿剂：甘油：8g；山梨醇：30g；
[0151] 发泡剂K12(月桂醇硫酸酯钠)：1.5g；
[0152] 防腐剂苯甲酸钠：0.15g；
[0153] 甜味剂糖精钠：0.08g；
[0154] 香精(薄荷香精，购于广东满庭芳香料有限公司)：0.8g；
[0155] 去离子水：余量；
[0156] 共1000g。
[0157] 制膏设备：真空制膏机ZG-100L。
[0158] 具体制备步骤如下：
[0159] 1.真空一步法制膏
[0160] ①将草叶马尾藻提取物(草叶马尾藻多糖提取物和草叶马尾藻多酚提取物)添加到保湿剂中搅拌均匀，再将增稠剂均匀分散其中，另将甜味剂和防腐剂溶解于水中。
[0161] ②主锅高速搅拌5分钟左右后开启分散开，缓慢降低转速到0，通过两个分散盘的高速运转来加快增稠剂的溶胀，分散15分钟左右，增稠剂结块明显变小，停止分散。打开胶体磨，开启主锅搅拌，搅拌速度逐渐提高，搅拌15分钟左右，此时主锅内的浆料全部通过胶体磨，浆料中不再有胶体颗粒存在，关掉胶体磨。
[0162] ③开启主锅锅盖，加入胶黏剂、摩擦剂和发泡剂，主锅高速搅拌数分钟后开启分散开，20分钟左右后停止分散，开启胶体磨，15分钟左右后膏体细腻停磨。
[0163] ④关掉所有阀门，缓慢开启真空泵，高速搅拌物料，当真空度达到0.096MPa时从香料口倒入香精，开香料口的阀门要慢，倒入香精要快，之后快速关掉阀门，以使锅内真空度变化不大。当真空度降到0.096MPa后关掉真空泵。
[0164] ⑤打开分散开均质数分钟后停止分散，开始高速搅拌再开启真空泵，当真空度达到0.096MPa后关掉真空泵，停止搅拌。
[0165] 2.出料。
[0166] 3.灌装。
[0167] 实施例7本发明的草叶马尾藻提取物去渍牙膏配方(二)
[0168] 草叶马尾藻提取物去渍牙膏配方如下：
[0169] 草叶马尾藻提取物(实施例2制备)：草叶马尾藻多糖提取物40g、草叶马尾藻多酚提取物60g；
[0170] 摩擦剂CaCO3：30g；
[0171] 增稠剂SiO2：12g；
[0172] 保湿剂：甘油：6g；山梨醇：35g；
[0173] 胶黏剂：CMC(羧甲基纤维素)：0.5g；卡拉胶：1g；
[0174] 发泡剂K12(月桂醇硫酸酯钠)：1.2g；
[0175] 防腐剂苯甲酸钠：0.15g；
[0176] 甜味剂糖精钠：0.1g；
[0177] 香精(薄荷香精，购于广东满庭芳香料有限公司)：0.5g；
[0178] 去离子水：余量；
[0179] 共1000g。
[0180] 制膏设备和具体步骤同实施例6。
[0181] 实施例8本发明的草叶马尾藻提取物去渍牙膏配方(三)
[0182] 草叶马尾藻提取物去渍牙膏配方如下：
[0183] 草叶马尾藻提取物(实施例3制备)：草叶马尾藻多糖提取物20g、草叶马尾藻多酚提取物80g；
[0184] 摩擦剂CaCO3：20g；
[0185] 增稠剂SiO2：15g；
[0186] 保湿剂：甘油：5g；山梨醇：55g；
[0187] 胶黏剂：CMC(羧甲基纤维素)：1.5g；卡拉胶：0.3g；
[0188] 发泡剂K12(月桂醇硫酸酯钠)：1g；
[0189] 防腐剂苯甲酸钠：0.1g；
[0190] 甜味剂糖精钠：0.1g；
[0191] 香精(薄荷香精，购于广东满庭芳香料有限公司)：1g；
[0192] 去离子水：余量；
[0193] 共1000g。
[0194] 制膏设备和具体步骤同实施例6。
[0195] 实施例9本发明的草叶马尾藻提取物去渍牙膏配方(四)
[0196] 草叶马尾藻提取物去渍牙膏配方如下：
[0197] 草叶马尾藻提取物(实施例4制备)：草叶马尾藻多糖提取物80g、草叶马尾藻多酚提取物20g；
[0198] 摩擦剂CaCO3：40g；
[0199] 增稠剂SiO2：1g；
[0200] 保湿剂：甘油：10g；山梨醇：15g；
[0201] 胶黏剂：CMC(羧甲基纤维素)：0.3g；卡拉胶：1.5g；
[0202] 发泡剂K12(月桂醇硫酸酯钠)：1g；
[0203] 防腐剂苯甲酸钠：0.2g；
[0204] 甜味剂糖精钠：0.05g；
[0205] 香精(薄荷香精，购于广东满庭芳香料有限公司)：0.5g；
[0206] 去离子水：余量；
[0207] 共1000g。
[0208] 制膏设备和具体步骤同实施例6。
[0209] 实施例10本发明的草叶马尾藻提取物去渍牙膏配方(五)
[0210] 草叶马尾藻提取物去渍牙膏配方如下：
[0211] 草叶马尾藻提取物(实施例5制备)：草叶马尾藻多糖提取物80g、草叶马尾藻多酚提取物20g；
[0212] 摩擦剂CaCO3：30g；
[0213] 增稠剂SiO2：8g；
[0214] 保湿剂：甘油：5g；山梨醇：25g；
[0215] 胶黏剂：CMC(羧甲基纤维素)：1.5g；卡拉胶：1.5g；
[0216] 发泡剂K12(月桂醇硫酸酯钠)：2g；
[0217] 防腐剂苯甲酸钠：0.1g；
[0218] 甜味剂糖精钠：0.1g；
[0219] 香精(薄荷香精，购于广东满庭芳香料有限公司)：0.8g；
[0220] 去离子水：余量；
[0221] 共1000g。
[0222] 制膏设备和具体步骤同实施例6。
[0223] 实施例11本发明的草叶马尾藻提取物去渍牙膏配方的效果实验
[0224] 采用双盲、随机、二单位平行观察的临床研究方法。牙齿污渍采用Lobene污渍指数(Lobene stain index)评价，该指数用0-3数字评价污渍部位大小和污渍程度。Lobene色斑指数分级计分标准见表1。
[0225] 表1 Lobene色斑指数分级计分
[0226]
[0227] 1.分组
[0228] 受试者纳入标准：⑴年龄20～60岁；⑵全身健康状况良好；⑶有12颗天然前牙且无大面积充填体；⑷前牙牙面有外源性色素沉着；⑸实验期间可随时参加检查；⑹自愿参与本实验。排除标准：⑴有严重全身性疾病；⑵有严重牙周病；⑶正在接受正畸治疗者；⑷3个月内做过洁牙治疗；⑸妊娠期妇女；⑹对实验产品有过敏史；⑺正在参加其他临床实验。
[0229] 符合条件的受试者随机分为两组，即试验组和对照组。80名受试者完成了全部的(共8周)的研究。
[0230] 2.试验样品和试验方法
[0231] 试验组：实施例6制备的去渍牙膏；
[0233] 对照组二：牙膏配方如下：
[0234] 草叶马尾藻提取物(实施例1制备)：草叶马尾藻多糖提取物90g、草叶马尾藻多酚提取物10g；
[0235] 摩擦剂CaCO3：30g；
[0236] 增稠剂SiO2：10g；
[0237] 保湿剂：甘油：8g；山梨醇：30g；
[0238] 胶黏剂：山吨胶：0.8g；卡拉胶：1.0g；
[0239] 发泡剂月桂酰肌氨酸钠：1.5g；
[0240] 防腐剂苯甲酸钠：0.15g；
[0241] 甜味剂糖精钠：0.08g；
[0242] 香精(薄荷香精，购于广东满庭芳香料有限公司)：0.8g；
[0243] 去离子水：余量；
[0244] 共1000g。
[0245] 制膏设备和具体步骤同实施例6。
[0246] 对照组三：牙膏配方如下：
[0247] 草叶马尾藻提取物(实施例1制备)：草叶马尾藻多糖提取物100g；
[0248] 摩擦剂CaCO3：30g；
[0249] 增稠剂SiO2：10g；
[0250] 保湿剂：甘油：8g；山梨醇：30g；
[0251] 胶黏剂：CMC(羧甲基纤维素)：0.8g；卡拉胶：1.0g；
[0252] 发泡剂K12(月桂醇硫酸酯钠)：1.5g；
[0253] 防腐剂苯甲酸钠：0.15g；
[0254] 甜味剂糖精钠：0.08g；
[0255] 香精(薄荷香精，购于广东满庭芳香料有限公司)：0.8g；
[0256] 去离子水：余量；
[0257] 共1000g。
[0258] 制膏设备和具体步骤同实施例6。
[0259] 对照组四：牙膏配方如下：
[0260] 草叶马尾藻提取物(实施例1制备)：草叶马尾藻多酚提取物100g；
[0261] 摩擦剂CaCO3：30g；
[0262] 增稠剂SiO2：10g；
[0263] 保湿剂：甘油：8g；山梨醇：30g；
[0264] 胶黏剂：CMC(羧甲基纤维素)：0.8g；卡拉胶：1.0g；
[0265] 发泡剂K12(月桂醇硫酸酯钠)：1.5g；
[0266] 防腐剂苯甲酸钠：0.15g；
[0267] 甜味剂糖精钠：0.08g；
[0268] 香精(薄荷香精，购于广东满庭芳香料有限公司)：0.8g；
[0269] 去离子水：余量；
[0270] 共1000g。
[0271] 制膏设备和具体步骤同实施例6。
[0272] 各组受试者早晚各刷牙一次，每次刷牙时间为5分钟。
[0273] 3.评价方案
[0274] 设定每名受试者下颌前牙的唇、舌面及上颌前牙的唇、舌面为检查面，每个牙面为两个计分区：牙龈区和牙体区。每个受试者的平均色斑计分均数分为面积计分均数和程度计分均数：色斑面积计分均数为每个牙面的色斑面积计分之和除以总的检查牙面数。全部检查由一名检查者完成。
[0275] 4.试验结果
[0276] 各组受试者第8周检查的Lobene色斑指数均数比较见表2-表5。临床结果显示，连续使用试验组牙膏8周，牙齿外源性污渍的大小及程度临床检查和统计学分析上都与对照组相比有显著降低。表明试验组牙膏具有显著的去除牙齿污渍的作用。
[0277] 表2 受试者第8周检查的Lobene色斑指数均数比较(试验组和对照组一)[0278]
[0279] 表3 受试者第8周检查的Lobene色斑指数均数比较(试验组和对照组二)[0280]
[0281] 表4 受试者第8周检查的Lobene色斑指数均数比较(试验组和对照组三)[0282]
[0283] 表5 受试者第8周检查的Lobene色斑指数均数比较(试验组和对照组四)[0284]
[0285] 以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员，在不脱离本发明方法的前提下，还可以做出若干改进和补充，这些改进和补充也应视为本发明的保护范围。
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