辐射损伤是暴露于辐射而引起的组织损伤。在此，辐射指的是由高能 电磁波(X射线、伽玛射线)或粒子(阿尔法粒子、贝塔粒子、中子)产生的 电离辐射。此类辐射由放射性物质(放射性同位素)例如铀、氡、和钚释 放。此类辐射也可由人造辐射源产生，例如X射线和放疗仪器。辐射剂量 的测量使用多种不同的单位，但它们均涉及能量沉积的量。这些单位包括 伦琴(R)、戈瑞(gray，Gy)、和希沃特(sievert，Sv)。希沃特与戈瑞类似， 不同之处在于希沃特考虑到了不同辐射类型的生物学效应。两种主要类型 的辐射暴露是照射和污染。许多辐射事故使得人同时暴露于这两种类型。
照射是暴露于从体外直接穿透机体的辐射波。照射可立即致病(急性 辐射病)。此外，照射、特别是高剂量辐射，可损害人的遗传物质(DNA)， 导致慢性(迟发性)疾病，例如癌症和先天缺陷。不过，照射不会造成人或 其组织具有放射性。污染是接触并滞留放射性物质，后者典型地是灰尘或 液体的形式。放射性物质可留在皮肤上，并可以从皮肤掉落或擦掉，污染 其他人和物体。这些物质也可以通过肺、消化道或者皮肤破损处而被机体 吸收。吸收的物质被转运到机体的各个部位，例如骨髓，在该处继续释放 辐射。这种内在化的辐射不仅会引起急性辐射病例如内出血，而且也会产 生慢性疾病如癌症。
人们长期暴露于低水平的天然辐射(背景辐射)。辐射来自于外层空间 (宇宙辐射)，不过其大部分被地球大气层阻挡。在高放射性元素条件中生 活或工作的人暴露于更多的宇宙辐射，特别是氡气，其也存在于许多岩石 和矿物中。这些元素最终出现在各种物质中，包括食物和建筑材料。此 外，人们还暴露于来自人造辐射源的辐射，包括来自核武器试验的环境辐 射和来自各种医学检查和治疗的辐射。普通人每年受到总量为大约3到4 mSv(1mSv＝1/1000 Sv)的来自天然辐射和人造辐射源的辐射。工作中接触 放射性物质和X射线源的人容易暴露于更高水平的辐射。接受癌症辐射治 疗的人可受到很高水平的辐射。核武器释放大量的辐射。自1945年以来还 没有对人类使用过此类武器。不过，现在许多国家拥有核武器，而一些恐 怖分子集团也在设法获得核武器，这增加了此类武器有朝一日被再次使用 的可能性。
辐射的损伤效应取决于多种因素，包括暴露的量(剂量)和持续时间。 对整个机体的快速的单一剂量辐射可以是致死性的，而同一总剂量在数周 或数月以上暴露则效应可明显轻得多。对于一给定的剂量，快速暴露更容 易造成遗传学损害。辐射的效应也取决于机体的暴露范围。例如，超过6 Gy的辐射如果分散于全身则通常导致死亡；但如果仅集中于一个小的区 域，例如象癌症放疗那样，则可以施用3到4倍该剂量的辐射而对对象整 体没有严重的伤害。辐射的分布也是重要的，因为机体的某些部分对辐射 更加敏感。细胞迅速增殖的器官和组织例如肠道和骨髓，比细胞缓慢增殖 的器官和组织例如肌肉和肌腱更容易受到辐射的损害。精子和卵细胞的遗 传物质可被辐射破坏。因此，在癌症放疗过程中，要尽可能遮蔽机体这些 更加脆弱的部位使之免于辐射，以便可以将高剂量的辐射主要施用于癌 症。
辐射暴露产生两种损伤：急性(即刻)和慢性(迟发性)。急性辐射损伤 通过血管内皮损伤导致血管渗漏而引发炎症。随后是血管应答和细胞应 答。电离辐射抑制免疫力并损害肠道上皮，两者均促进微生物自肠道发生 移位。
癌症放疗主要在机体接受辐射的部位产生症状。例如，在直肠癌的放 疗中，由于辐射对小肠的影响，腹部绞痛和腹泻十分常见。
第二次世界大战后不久便开始寻找非毒性的辐射防护剂，以保护正常 组织抵抗辐射损伤。深入的放射生物学研究发现了多种防护剂，如果在辐 射暴露之前施用，它们保护动物(主要是啮齿动物)免于辐射损伤[Prasad KN.Handbook of radiobiology.2nd edn.Boca Raton，FL：CRC Press，1995]。 这些研究发现那些清除自由基和/或引起低氧的药剂具有辐射防护价值。不 过，这些化合物的大多数在辐射防护剂量对人是有毒的。随着在冷战过程 中出现的核对抗的危险性的下降，后来对辐射防护剂的研究兴趣显著下 降。由于基于X射线的诊断仪器的迅速增多以及放射学方法在疾病早期诊 断中的应用在增加，开始更加关心频率日益增加的体细胞和遗传性突变， 其能够使当前的人们以及后代发生基因连锁疾病的危险升高。因此，一定 要保护正常组织使之免于潜在的辐射损伤，哪怕这种损伤十分微小。
通常，辐射防护剂被定义为这样的化合物，所述化合物在暴露于电离 辐射之前施用可降低辐射的损伤效应，包括辐射引起的死亡[H.B.Stone et al.，Models for evaluating agents intended for the prophylaxis，mitigation and treatment of radiation injuries.Report of an NCI Workshop，December 3-4，2003， Radiat Res 162：711-728.]。它们可用于放射学恐怖主义、军事事件、临床肿 瘤学、空间旅行、辐射点清除[R.H.Johnson，Dealing with the terror of nuclear terrorism，Health Phys 87：S3-7.，F.A.J.Mettler，G.L.Voelz，Major radiation exposure—what to expect and how to respond，N Engl J Med 346： 1554-1561，2001]C.K.Nair，D.K.Parida，T.Nomura，Radioprotectors in radiotherapy，J Radiat Res(Tokyo)42：21-37，J.K.Waselenko，T.J.Mac Vittie， W.F.Blakely，N.Pesik，A.L.Wiley，W.E.Dickerson，H.Tsu，D.L.Confer，C.N. Coleman，T.Seed，P.Lowry，J.O.Armitage，N.Dainiak，Medical management of the acute radiation syndrome：Recommendations of the Strategic National Stockpile Radiation Working Group，Ann Intern Med 140：1037-1051.]。最 近，美国科学技术政策局(U.S.Office of Science and Technology Policy)和国 土安全部(Homeland Security Council)已经将开发新的辐射防护药物列为最 优先研究项目。尽管合成的辐射防护药物如氨基硫醇类(aminothiols)可产生 最高的防护系数，但通常它们比天然存在的防护剂毒性更大。通常，最好 的辐射防护剂也被认为可导致最高的毒性。
在军事辐射事件中，有效减轻辐射诱导的健康问题和战斗力下降效应 可降低医学救治处的伤亡负荷，在辐射暴露事件后保持更加有效的行动 力，允许指挥官在辐射地环境指导行动且受到急性组织损伤导致行动能力 下降的危险减小，并降低那些在被污染环境中执行任务的人员的负面心理 创伤。理想的辐射防护剂应该是无毒的，不会降低工作能力，并且单次施 用之后即起效，特别是在需要快速进入具有外部辐射危险区域的情况下尤 为如此。
在2005年6月21日在美国马里兰州Bethesda召开的NATO Human Factors and Medicine Panel Research Task Group 099“Radiation Bioeffects and Countermeasures”大会上报告(Landauer et al.，NATO RTG-099 2005)并发表 于AFRRI CD 05-2的一篇文章中，提出染料木黄酮(genisteine)可保护小鼠 免于伽玛辐射诱导的死亡，其在最佳剂量(200mg/kg；在照射前24小时施 用该剂量可获得最高的存活率)时的“剂量降低系数”(dose reduction factor， DRF)为1.16。如果在全身照射(WBI)之前1小时施用则没有观察到辐射保 护作用。在第51届辐射研究学会(2004年4月)上，其他研究报告了代号 为ON-01210的药物的辐射防护作用，指出该药物ON-01210(与目前正在 研究的针对辐射暴露的其他药物类似)仅在辐射暴露前施用才有保护作 用。该药物具有巯基成分(4-carboxystyrl-4-chlorobenzylsulfone)，可作为抗 氧化剂起作用，将辐射损伤细胞时产生的自由基清除掉。
同样，正如美国国防部大会的年度报告中所述(March 2005； http://medchembio.amedd.army.mil/docs/CBDP_Report_To_Congress.pdf)，目 前还没有商品化的适合用于军事行动环境中的无毒药物或诊断能力。氨磷 汀(amifostine)是一种氨基硫醇类化合物，已被FDA批准用于接受化疗或放 疗的患者，但其降低性能的毒性不良反应使其无法用于合适的战斗部队， 而其静脉施用途径需要专业医疗人员。其他药物如用于治疗骨髓损伤的造 血细胞因子可由各个医生根据不同病例的具体情况而使用标注外的剂量， 但此类用途的规定限制使其难以用于处理军事行动中的大量伤亡人员。抗 生素常用于治疗放射学损伤的感染性后遗症，但必须经过适当选择以有效 治疗外源性和内源性全身性感染而同时几乎不影响有益的肠道厌氧菌。为 了解决目前可选择的医疗对策有限这一局面，Armed Forces Radiobiology Research Institute(AFRRI)已经在研究新化合物5-雄烯二醇(5-AED； Whitnall et al.，Experimental Biology and Medicine 226：625-627(2001))。同 样，该化合物在小鼠模型中在照射攻击之前施用可产生良好的辐射防护剂 功效。在伽玛照射小鼠之前24小时和之后2小时皮下施用AED可提高存 活率。从WBI之前施用的概率值存活曲线计算出的剂量降低系数为1.3。 在随后接种或者不接种致死量肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae)的雄性 和雌性小鼠均观察到了保护作用。多种其他类固醇则没有观察到保护作 用：去氢表雄酮(DHEA)、5-雄甾烯-3B，7B，17B-三醇(AET)、雄烯二酮、或 雌二醇。不过，在过去的一年中，为了准备IND应用而在非人灵长类动物 (NHP)模型上进行的深入研究证实，5-AED作为辐射防护剂施用时远不及 在小鼠模型上那样有效，但在照射后不久以连续剂量治疗性施用时在NHP 模型上产生了良好的功效。
急性辐射病。急性辐射病通常出现于全身暴露于辐射的人。急性辐射 病的进展有多个阶段，开始为早期症状(prodrome)，随后是无症状阶段(潜 伏期)。随后根据人所接受的辐射的量而出现不同的症状(症状谱)。辐射量 越大，症状越严重，且自早期症状进展至急性综合征越快。对于特定的辐 射暴露量，不同人之间的症状和时间过程是一致的。医生根据症状的时间 过程和性质能够判断出人的辐射暴露情况。根据受累的主要器官系统，医 生将急性辐射综合征分为三组，不过各组之间有重叠。
造血综合征是由辐射对骨髓、脾脏和淋巴结—产生血细胞(造血)的主 要部位—的影响引起的。食欲下降(厌食)、嗜睡、恶心和呕吐出现在暴露 于2Gy或更高辐射后的2到12小时。在暴露后的24到36之内，这些症 状缓解，在一周或更长的时间内人会感觉良好。在此无症状阶段中，骨 髓、脾脏和淋巴结中的造血细胞开始耗竭并且没有更新，导致白细胞严重 缺乏，随后缺少血小板，再后是红细胞。缺少白细胞可导致严重感染。缺 少血小板可导致难以控制的出血。缺少红细胞(贫血)引起乏力、虚弱、苍 白以及在体力活动时呼吸困难。4到5周后，如果人能够存活下来，则血 细胞开始重新产生，但人会感觉虚弱乏力达数月。
胃肠道综合征由辐射对消化道被覆细胞层(cells lining the digestive tract) 的效应引起。严重的恶心、呕吐和腹泻出现在暴露于4Gy或更高辐射后的 2到12小时。这些症状可引起严重脱水，但2天后这些症状缓解。在随后 4到5天内人会感觉良好，但通常作为保护屏障的消化道被覆细胞层在死 亡病脱落。此后，再次出现严重的腹泻—通常是血性腹泻，导致脱水。来 自消化道的细菌侵入体内，造成严重感染。接受这么强的辐射的人也很可 能发生造血综合征，导致出血和感染，并增加其死亡风险。
辐射的总剂量超过20至30Gy时会出现脑血管(脑)综合征。人迅速发 生意识模糊、恶心、呕吐、血性腹泻和休克。数小时内血压下降、伴有抽 搐和昏迷。脑血管综合征被认为均是致死性的。
辐射的慢性影响。辐射的慢性影响由分裂细胞中遗传物质的损伤引 起。这些改变可引起细胞生长异常，例如癌症。在受到严重照射的动物， 已经发现生殖细胞的损伤引起缺陷后代(出生缺陷)。不过，在日本原子弹 爆炸幸存者的后代中很少观察到照射引起的畸形。原因可能是低于特定(未 知)水平的辐射暴露不足以产生导致出生缺陷的遗传物质改变。
如果人在接受放疗或者意外暴露于辐射后生病，则可能是照射损伤。 没有特殊的测试用于诊断这种病症，不过某些测试可用于检测感染、低血 细胞计数或者器官功能异常。为确定辐射暴露的严重程度，医生会测量血 液的淋巴细胞(一种白细胞)数量。暴露后48小时的淋巴细胞计数越低，则 辐射暴露越严重。
不同于照射的是，可通过能够检测辐射的Geiger计数器测量人体的放 射性污染。来自鼻部、咽喉以及任何伤口的拭子也可用于检查放射性。
辐射损伤的后果取决于剂量、剂量速率(暴露发生的如何迅速)、以及 在机体的分布，还取决于人原来的健康状态。总之，绝大多数受到超过6 Gy的WBI的人会死于胃肠道综合征。由于医生难以得知人受到的精确辐 射量，因此他们一般根据人的症状来判断结果。脑血管综合征通常在数小 时至几天内导致死亡。胃肠道综合征通常在3到10天导致死亡，不过部分 人能够存活数周。根据他们的总辐射量，许多接受了适当医疗救助的人没 有死于造血综合征；那些没有存活下来的人通常是在8到50天后死亡。
照射目前没有急诊治疗，但医生会密切监测人出现的各种症状，并在 症状出现时进行治疗。同时，遗憾的是目前几乎没有什么对付由核攻击或 放射攻击引起的各种急性和长期毒性的医药产品。遇到污染时需要立即清 除放射性物质以防止其被机体摄取。被放射性物质污染的皮肤应该立即以 大量肥皂和水或者以为此目的而设计的溶液(如果有的话)进行擦洗。小的 破损伤口应该充分清洁以清除所有放射性颗粒，尽管擦洗可引起疼痛。污 染的头发要剪掉而非刮掉，刮可擦伤皮肤并使得污染物进入机体。擦洗要 持续至Geiger计数器显示放射性消失为止。如果人吞噬了放射性物质则要 诱导呕吐。一些放射性物质具有特殊的解毒剂，可防止吞入的物质被吸 收。大多数此类解毒剂仅用于暴露于显著放射性污染的人，例如是大的反 应堆事故或核爆炸。碘化钾可防止甲状腺吸收放射性碘并降低发生甲状腺 癌的风险。其他药物，例如二乙撑三胺五乙酸(diethylene triamine pentaacetic acid，DTPA)、乙二胺四乙酸(ethylenediamine tetraacetic acid， EDTA)、和青霉胺，可静脉施用以清除某些已经被吸收的放射性元素。
当没有可疑污染时，可通过使用预防呕吐的药物(止吐剂)来减轻恶心 和呕吐；这些药物是进行放疗的患者的常规用药。脱水可进行静脉补液治 疗。
发生胃肠道或造血综合征的人应该隔离以便他们不会接触感染性微生 物。可进行输血和注射刺激血细胞产生的生长因子(如促红细胞生成素和 集落刺激因子)以减少出血并增加血细胞计数。如果骨髓严重受损，这些 生长因子是无效的，有时需要进行骨髓移植，不过成功率较低。
出现胃肠道综合征者需要止吐剂、静脉输液和镇静剂。一些人可以吃 清淡饮食。可施用抗生素如新霉素以杀死肠道内的可能侵入机体的细菌。 必要时静脉施用抗生素以及抗真菌和抗病毒药物。脑血管综合征治疗的目 的是通过缓解疼痛、焦虑和呼吸困难而使得病人舒适。可施用抗抽搐药。
出现放疗引起的辐射的慢性影响或疾病的人接受的是对症治疗。溃破 或溃疡可进行外科清除或修复并使用高压氧以促进愈合。辐射诱导的白血 病以化疗治疗。血细胞可通过输血来补充。不育症是无法逆转的，但卵巢 和睾丸功能异常导致的性激素水平降低可通过激素替代进行治疗。研究者 目前在研发采用细胞因子、生长因子和各种其他治疗来预防或降低辐射诱 导的正常组织损伤的途径。已经发现氨磷汀或盐酸毛果芸香碱能够降低接 受放疗的头颈部癌症患者的口干(口腔干燥)症状。
关于辐射对细胞的急性和迟发性效应的临床和实验研究增强了我们在 放射治疗方面的知识，使得现在能够优化辐射治疗方案和采用更加精确的 辐射施用模式。不过，由于正常组织和癌组织对辐射暴露具有相似的反 应，因此在放疗期间或者放疗完成之后可能出现辐射引起的对正常组织的 损伤。研究确实发现NSAID类和前列腺素具有放射保护性的一些迹象。这 两类药物均能够增加细胞的存活，但机制却完全不同。细胞动力学研究发 现，与S早期和G1/G0期的细胞相比，处于细胞周期的有丝分裂期(M)和 G2晚期的细胞通常对辐射最为敏感。此外，辐射导致细胞周期的有丝分裂 延迟。因此，限制细胞周期中M和G2期的细胞比例的化学剂或增强细胞 快速生长的化学剂原则上可用来研究其在注射过程中作为正常组织辐射防 护药物的潜在用途。已经发现NSAID通过引起细胞周期停滞使得细胞趋向 于静息状态(G0/G1)而发挥抗癌作用。在对正常组织的放射保护作用中观察 到了相同的作用机制。暴露于NSAID后花生四烯酸浓度的增加还导致产生 凋亡诱导剂神经酰胺。NSAID还升高细胞内超氧化物岐化酶的水平。热休 克蛋白被NSAID活化后可通过改变细胞因子的表达而提高细胞的存活。 NSAID还可能具有通过抗血管生成机制而抑制细胞增殖的作用。一些体内 研究提供的证据提示NSAID可保护正常组织免受辐射损伤。前列腺素不调 节细胞周期，但它们对细胞的生长和分化具有多种作用。PGE2介导血管 生成，增加氧气和细胞存活和生长所必需的营养素的供给。因此，PGE2 在足够高的血浆浓度能够通过抑制促炎细胞因子如TNF-a和IL-1β而增强 细胞存活。因此，PGE2所起到的是炎症的调节物而非介导物的作用。前 瞻性研究提示照射之前施用米索前列醇(misoprostol)，即一种PGE1类似 物，在预防辐射诱导的不良反应方面具有潜在用途。目前对NSAID类和前 列腺素类药理学的理解说明，当预防性使用时，它们有可能将辐射对正常 组织的不良反应最小化。
除了瞬时抑制细胞周期进程和杀死那些能够增殖的细胞之外，照射还 干扰受细胞间通信的内源性介导物(组织应答于辐射的体液成分)影响的内 稳态。介导物水平的变化可通过促进恢复正常(例如通过升高H型细胞系特 异性生长因子)或者通过加重损害而调节辐射效应。后一种模式通过有关照 射后类花生酸(eicosanoid)水平变化的报道以及有关使用抗炎药物经验性治 疗辐射损伤的结果的报道而阐明。辐射的前驱、急性和慢性影响伴随过量 产生类花生酸类(前列腺素、前列环素、血栓素和白三烯)。这些炎症反应 的内源性介质可引起辐射暴露之后的血管扩张、血管收缩、微血管通透性 增加、血栓形成和趋化作用。糖皮质激素通过干扰磷脂酶A2而抑制类花 生酸合成，而非甾体抗炎药通过抑制环加氧酶而阻断前列腺素/血栓素合 成。在照射后基于经验而施用属于这两类的药物均有助于在人和动物中减 轻辐射的前驱、急性和慢性影响。
Herron的美国专利5,380,668(Jan.10，1995)公开了各种具有hCG的抗 原结合活性的化合物等等，在此通过引用将其全部内容并入本申请。其中 一般性披露了所述寡肽的诊断用途。Gallo等的多个专利和专利申请(如美 国专利5,677,275(相应于WO 96/04008A1)、美国专利5,877,148(也相应于 WO 96/04008 A1)、WO 97/49721 A1、美国专利6,319,504(相应于WO 97/49373)、美国专利申请2003/0049273 A1(也相应于WO 97/49373)、美国 专利5,968,513(相应于WO 97/49418)、美国专利5,997,871(相应于WO 97/49432)、美国专利6,620,416、美国专利6,596,688、WO 01/11048 A2、 WO 01/10907 A2.和美国专利6,583,109)涉及不同的寡肽及其用途，如“抑 制HIV感染”、“治疗或预防HIV感染”、“治疗或预防癌症”、“治疗或预防 特征在于体细胞量下降的病症”、“治疗或预防与病理性血管生成有关的病 症”、“治疗或预防造血缺陷”、“离体基因治疗”、体外扩增血细胞”和/或“将 血细胞提供给患者”。如PCT国际公开文本No.WO 03/029292 A2(公开 日：April 10，2003)、PCT国际公开文本No.WO 01/72831 A2(公开日： October 4，2001)和美国专利申请出版物20020064501 A1(公开日：May 30， 2002)、20030119720 A1(公开日：June26，2003)、20030113733 A1(公开 日：June 19，2003)和20030166556 A1(公开日：September 4，2003)、美国 专利申请No.11/249,541，申请日October 13，2005、国际申请No. PCT/EP2005/003707，申请日April 8，2005、美国专利申请No. 10/821,256，申请日April 8，2004、美国专利申请No.10/262,522，申请日 September 30，2002、国际申请No.PCT/NL01/00259(国际公开文本No.WO 01/72831 A2)，申请日March 3，2001、美国专利6,844,315和美国专利 6,921,751所述，含有一些在此所述的寡肽的组合物具有免疫调节活性，可 由于例如治疗败血症和其他疾病状态或者病症，通过引用将上述所有文献 的内容并入本申请。
本发明涉及机体调节重要生理学过程的天然途径，并基于PCT国际公 开文本WO99/59617和WO01/72831和PCT国际申请PCT/NL02/00639中 的认识，在此通过引用将上述文献的全部内容并入本申请。这些申请公开 了存在于妊娠妇女体内的、由胎盘促性腺激素如hCG的蛋白水解断裂而产 生的基因调节性肽。这些断裂产物的长度通常仅为2到6个氨基酸，已经 发现它们具有优越的免疫活性，所述活性是通过调节编码炎性介质如细胞 因子的基因表达而实现的。出乎意料的是，发现hCG的断裂产生了一系列 有助于维持妊娠妇女的免疫学内稳态的肽。这些肽平衡免疫系统以确保母 体保持免疫学稳定，同时其胎儿在孕期不会被排斥而是被安全地孕育直至 出生。
此外，本发明涉及美国申请10/821,240，其提供了用于筛选和鉴定其 他小的基因调节性肽并使用根据此类筛选的结果例如来自参照肽的肽的方 法。例如，待分析的肽来自C反应蛋白(CRP)(如人CRP)，此类肽包括 LTSL、FVLS、NMWD、LCFL、MWDF、FSYA、FWVD、AFTV、和 WDFV；来自β-连环蛋白(如人CTNB)的肽，例如GLLG、TAPS、 VCQV、CLWT、VHQL、GALH、LGTL、TLVQ、QLLG、YAIT、 LCEL、GLIR、APSL、ITTL、QALG、HPPS、GVLC、LCPA、LFYA、 NIMR、NLIN、LHPP、LTEL、SPIE、VGGI、QLLY、LNTI、LWTL、 LYSP、YAMT、LHNL、TVLR、和LFYA；来自β-hCG(如人CG)的肽， 例如GLLLLLLLS、MGGTWA、TWAS、TLAVE、RVLQ、VCNYRDV、 FESI、RLPG、PRGV、NPVVS、YAVALS、LTCDDP、EMFQ、PVVS、 VSYA、GVLP、FQGL、和AVAL；来自布鲁顿型酪氨酸激酶(Bruton′s tyrosine kinase)(如人BTK)的肽，例如LSNI、YVFS、LYGV、YVVC、 FIVR、NILD、TIMY、LESI、FLLT、VFSP、FILE、TFLK、FWID、 MWEI、QLLE、PCFW、VHKL、LYGV、LESI、LSNI、YVFS、IYSL、 和NILD；以及来自基质金属蛋白酶-2(如人MM02)的肽，例如FKGA、 FFGL、GIAQ、LGCL、YWIY、AWNA、ARGA、PFRF、APSP、CLLS、 GLPQ、TFWP、AYYL、FWPE、CLLG、FLWC、RIIG、WSDV、PIIK、 GLPP、RALC、LNTF、LSHA、ATFW、PSPI、AHEF、WRTV、FVLK、 VQYL、KFFG、FPFR、IYSA、和FDGI，等等。

本发明涉及针对因暴露于高能电磁波(X射线/光子和/或天然伽玛射线) 和/或其他高能电离粒子(阿尔法粒子、贝塔粒子、中子、质子、π-介子)而 引起的急性辐射损伤的药物研发领域。迄今尚无有效的药物能够在意外暴 露于电离照射之后，或者在治疗性辐射过程中或放射性模拟剂造成正常组 织损伤之后减轻辐射损伤；也没有有效的预防性药物能够在事件之前(例 如，第一应答者)施用来预防此类损伤或者使之最小化。本发明人出乎意料 地观察到相对小的非毒性肽可有效地用作抗辐射损伤药物。重要的是，本 发明的抗辐射肽不仅可用作预防剂，当在暴露于辐射后数小时施用时还具 有保护作用。这使得它们特别适合用于军事辐射事件，例如用于对付核恐 怖主义的恐怖活动。因此，本发明提供用于预防或治疗有需要的对象的辐 射损伤的方法，包括给所述对象施用小于30个氨基酸的肽或其功能性类似 物。优选地，在辐射后给所述对象施用所述肽或其功能性类似物，即在所 述对象暴露于辐射源之后。此外，本发明提供小于30个氨基酸的肽或其功 能性类似物在制备用于治疗患有辐射损伤或被认为患有辐射损伤的对象的 药物组合物中的用途。具体地，本发明提供抗辐射肽，其针对急性全身照 射的剂量降低系数(DRF)为至少1.10，所述DRF可如下确定：测试何种剂 量的全身照射(WBI)在WBI后30天导致测试组实验啮齿动物(如小鼠)出现 50％的死亡率(LD50/30)，所述测试组在WBI后立即或最多72小时内用所 述肽进行处理，与WBI后30天导致未处理对照组出现50％的死亡率 (LD50/30)的WBI剂量相比，其中通过将肽处理组动物的LD50/30辐射剂 量除以载体处理组动物的LD50/30辐射剂量来计算所述DRF。
本发明提供治疗患有辐射损伤或被认为患有辐射损伤的对象的方法， 该方法包括给所述对象提供药物组合物，所述药物组合物包括小于30个氨 基酸的抗辐射肽。目前的辐射保护剂是非肽性的或者包括大的蛋白质如细 胞因子。本发明公开了可用于防护和治疗辐射损伤的小于30个氨基酸的 肽，例如MTRVLQGVLPALPQVVC。这是首次发现在已经暴露于辐射之 后施用肽类药物能够降低辐射的损伤效应。例如，所述抗辐射肽由至多 29、至多28、至多27、至多26、至多25、至多24、至多23、至多22、 至多21、至多20、至多19、至多18、至多17、至多16或至多15个氨基 酸组成。
不过，所述肽优选地小于15个氨基酸。例如，所述抗辐射肽优选地由 至多14、至多13、至多12、至多11、至多10、至多9或至多8个氨基酸 组成。一些有用的肽的实例是LPGCPRGVNPVVS、DINGFLPAL和 QPLAPLVG。不过，如果肽是用于自身治疗，例如在此所述的使用自用式 注射器(autoinjector)进行自身治疗，则出于安全性考虑，优选地所述肽小于 7个氨基酸。这样的肽通常不会结合MHC受体，由此降低了发生由针对所 施用的肽的免疫应答而引发的自身免疫的风险。
小于7个氨基酸(aa)是特别优选的另一个原因是，发现大小为7个氨基 酸的肽(当比较来自人的蛋白酶体的肽和来自病原体(特别是病毒或细菌)蛋 白酶体的肽时(Burroughs et al.，Immunogenetics，2004，56：311-320))在自身和 非自身之间仅有3％的重叠。对于6个氨基酸的肽，人类自身与病原体非自 身之间的重叠被确定为30％，对于5个氨基酸的肽，人类蛋白酶体中存在 的肽与病原体蛋白酶体中存在的肽之间的重叠被确定为90％，而对于4个 氨基酸和更小的肽，该重叠被确定为100％。基于这些数据，现在认识到 当不存在自身-非自身差异时，不良免疫反应例如过敏性休克的风险极大地 减少，这对于未受过医学训练的人给自己或者他人施用任何药物而言是有 益的。
因此，就预防不良反应如过敏性休克而言，优选地所述肽由2到6个 氨基酸、更优选地由3到5个氨基酸、且最优选地由3或4个氨基酸组 成。就活性而言，基于一般性的观点，只要能够更长地经受完全的蛋白水 解作用则肽越大活性便越显著，由此3个氨基酸的代谢片段仍具有活性， 优选地，所述肽由4个氨基酸组成。上文和下文所描述的组合物优选地用 于治疗急性辐射损伤。
现有技术已经提到使用肽来防护辐射损伤。日本专利申请JP09157291 和JP09157292公开了具体的6聚体和9聚体肽序列，其具有体外抑制活性 氧的作用、清除活性氧自由基和抗氧化活性。这些肽被认为可用于体内抑 制与活性氧形成相关的包括辐射损伤在内的各种事件的不良反应。但其未 进行体内辐射实验。
JP09176187教导了含组氨酸的6聚体肽类似物，其具有清除活性氧的 活性。照射前20分钟腹腔施用660mg/kg体重的肽使得小鼠的存活率由对 照组的10％上升至处理组的70％。但其未进行体内的照射后实验。
WO2006/032269公开了一种血细胞匀浆物，从中已经去除了分子量超 过3kDa的成分。据报道该匀浆物适合用于改善对象的细胞免疫应答。在 诸多不同的免疫学疾病和病理情况中，认为该匀浆物可在使用化疗和/或放 疗的治疗中预防性施用于患者以改善患者的一般状况。但该研究没有涉及 任何辐射实验。此外，尽管该匀浆物可能包括蛋白质的混合物，但活性成 分的性质根本不清楚，而且活性成分也可能是非蛋白性的。不管怎样，该 文献没有分离或鉴定任何具体的肽。
EP 0572688公开了包括14个氨基酸残基的具体的肽，该肽在20 mg/kg体重能够保护小鼠抵抗全身照射。仅在辐射前1小时施用时观察到 该肽的保护作用。而在暴露于照射后1小时施用该肽则没有观察到其与对 照组数据具有区别。
这些现有技术公开的内容与本发明形成显著的对照；本发明的抗辐射 肽甚至在全身照射后数小时施用仍有保护作用。
接受亚致死辐射剂量的对象已经可以从本发明所鉴定的一些小肽的抗 炎特性中获益，但出乎意料的是，绝大部分获益来自这些小肽的抗胃肠道 综合征活性，特别是来自当剂量为1mg/kg体重以上、优选地5mg/kg体重 以上、更优选地10mg/kg体重以上时的3聚体和4聚体肽。考虑到小肽 (即3到4个氨基酸的肽)的低免疫原性特征，小肽剂量可高达100mg/kg， 且在一些情况下考虑到需要治疗的对象的情况需要紧急治疗，其剂量可高 达200mg/kg、500mg/kg、或者甚至1g/kg。因此，现在可以对那些存在 包括肠道被覆层(lining)损害即所谓的胃肠道综合征在内的辐射损伤的对象 进行治疗；所述的肽能够使得上皮被覆层慢慢恢复。
为了使得肽在高辐射剂量情况下具有更好的活性，优选地选择肽将其 置于本发明的药物组合物或者本发明的自用式注射器中，所述肽具有的针 对急性伽玛照射的剂量降低系数(DRF)为至少1.10，所述DRF可如下确 定：测试何种剂量的辐射在全身照射(WBI)后30天导致测试组小鼠出现 50％的死亡率(LD50/30)，所述测试组小鼠在WBI后72小时用所述肽进行 处理，和测试何种剂量的辐射在全身照射(WBI)后30天导致对照组小鼠出 现50％的死亡率(LD50/30)，所述对照组小鼠在WBI后72小时仅用所述肽 的载体进行处理，和其中通过将肽处理组动物的LD50/30除以载体处理组 动物的LD50/30来计算所述DRF。
更加优选地，所使用的肽具有的剂量降低系数(DRF)为至少1.20，更 加优选地为至少1.25，对于所述辐射损伤是照射损伤的情况尤其如此。本 发明所鉴定的肽也称为抗辐射肽。本发明提供用于治疗照射损伤的方法和 药物组合物，所述辐射是由放射性物质(放射性同位素)如铀、氡、和钚发 出的或者是由人造辐射源例如X射线和放疗仪器所产生的。
本发明还提供小于30个氨基酸的肽在制备用于治疗患有辐射损伤或被 认为患有辐射损伤的对象的药物组合物中的用途。如上所述，所述肽优选 地小于15个氨基酸，且用于自我医治或由非专业人士施用，更优选地，所 述肽小于7个氨基酸。在此鉴定的一些可用来制备用于治疗辐射损伤的药 物组合物的3聚体肽是VVC、LAG、和AQG。
类似地，一些可用于治疗辐射损伤的4聚体肽是LQGV、QVVC、 MTRV、AQGV、LAGV、LQAV、PGCP、VGQL、RVLQ、EMFQ、 AVAL、FVLS、NMWD、LCFL、FSYA、FWVD、AFTV、LGTL、 QLLG、YAIT、APSL、ITTL、QALG、GVLC、NLIN、SPIE、LNTI、 LHNL、CPVQ、EVVR、MTEV、EALE、EPPE、LGTL、VGGI、RLPG、 LQGA、和LCFL，可用于治疗辐射损伤的5聚体肽是TLAVE、VEGNL、 和LNEAL，可用于治疗辐射损伤的6聚体肽是VLPALP、MGGTWA、 LTCDDP，可用于治疗辐射损伤的7聚体肽是VLPAPLQ、VCNYRDV、和 CPRGVNP，可用于治疗辐射损伤的8聚体肽是QPLAPLVG，且可用于治 疗辐射损伤的9聚体肽是DINGFLPAL。
可通过在增殖分析中测试肽的抗细胞周期活性而找到其他的肽，特别 是3或4聚体肽，例如通过采用在此所述的植物生长分析法。在此特别提 供由2至6个氨基酸组成的肽在制备用于治疗患有辐射损伤或被认为患有 辐射损伤的对象的药物组合物中的用途。同样，就预防不良反应如过敏性 休克而言，用于制备所述药物组合物的肽优选地由2到6个氨基酸、更优 选地由3到5个氨基酸、且最优选地由3或4个氨基酸组成。如果仅就活 性而言，基于一般性的观点，只要(施用后)能够更长地经受完全的蛋白水 解作用则肽越大活性便越显著，由此3个氨基酸的代谢片段仍具有活性， 优选地，所述肽由4个氨基酸组成。
此外，特别有用的是，那些需要治疗辐射损伤的对象现在可以通过简 单的皮下或者肌肉内注射进行治疗，由此使得能够以自用式注射器进行自 我治疗，或者由未经训练的或者非医疗人员进行治疗，由此在成千上万人 需要治疗的紧急情况下使得救护组织工作极为便捷。而假如只有静脉注射 或者同样危险的腹腔内注射才是有效的，那么相对于存在简单的施用工具 如本发明提供的自用式注射器的情况，需要治疗的对象将更难得到救助。
具体地，本发明还提供小于30个氨基酸的肽在制备用于治疗辐射损伤 的药物组合物中的用途，其中所述药物组合物被置于自用式注射器中。自 用式注射器是一种医疗装置，用于施用单剂量的特殊药物(典型地是急救药 物)，有时也称为预充式注射器，用于自己注射或者由非医疗人员或非专业 人士注射。在本申请中，术语＂自用式注射器＂并不是指在分析系统、如 Husek et al.(J.of Chromatography B：Biomedical Sciences & Applications， Elsevier，Amsterda，Vol.767，no.1，(2002)pg.169-174)所述的色谱装置中用于 自动化施加生物学样品(例如肽)的注射器。
通过设计，自用式注射器易于使用并可由患者给自己施用或者由非专 业人士给患者施用。注射部位典型地是大腿或者臀部内，其中所述治疗包 括皮下或肌肉内注射所述肽。由于自用式注射器可设计为自动而可靠地施 用所需剂量的药物，因此它们有助于快速、简便和准确地施用药物。具体 而言，自用式注射器很适合由那些必须给自己施用治疗物质的对象或者由 那些必须在较短时间内给多个对象实施注射(如急诊的情况)的医护人员使 用。此外，可设计具有针刺注射机构(needled injection mechanism)的自用式 注射器，以便在注射操作之前、期间、甚至之后均看不到针头，由此降低 或者消除与可见针头刺入对象组织时有关的任何焦虑。尽管针刺自用式注 射器的具体规格差异很大，但它们通常包括体部或者壳体、针刺注射器或 者类似装置、以及一或多个驱动机构，后者用于将针头刺入对象的组织并 通过刺入的针头输送所需剂量的液体药物。现有的针刺自用式注射器中的 驱动机构通常包括能够为驱动机构提供动力的能量源。这种能量源可以是 例如机械式的(即弹簧加压式)、气动式的、机电式的、或者化学的，见美 国专利6,149,626、6,099,504、5,957,897、5,695,472、5,665,071、 5,567160、5,527,287、5,354,286、5,300,030、5,102,393、5,092,843、 4,894,054、4,678,461、和3,797,489，通过引用将上述各专利的内容并入本 申请。国际公开文本WO 01/17593、WO 98/00188、WO 95/29720、WO 95/31235、和WO 94/13342也公开了包括不同驱动机构的各种注射器。大 多数自用式注射器是(任选地弹簧加压式)注射器。
本发明的自用式注射器，特别是与肽直接接触的体部或者壳体，优选 地由与肽具有最小亲和力的材料制得。这可最大程度减小肽粘附或黏着于 自用式注射器。一种非常合适的材料是聚丙烯，特别是基本上纯的聚丙 烯。
自用式注射器最初被设计用于克服用针给自己施用药物时的犹豫感。 此类自用式注射器的实例是Epipen或最近引入的Twinject，后者通常用 于具有过敏性反应危险的人。自用式注射器的另一个实例是用于施用干扰 素β以治疗多发性硬化的Rebiject。自用式注射器时常用于陆军以保护人 员抵抗化学作战剂。在美国陆军中，每个生物或化学武器反应包中均有自 用式注射器。该反应包被分发给每个可能面对生物或化学武器的士兵。一 旦启动，针会自动对人进行注射，刺透人身上的任何衣物(甚至是多层衣 物)。本发明的自用式注射器不仅包括上述的注射装置(通常是弹簧驱动的) 以自动进行皮肤穿刺和/或药物注射，还包括预充式注射器或自用式注射药 筒等等。
本发明提供可用于治疗(放)辐射损伤的此类自用式注射器，而无论辐 射是由放射性物质(放射性同位素)例如铀、氡、和钚发出的，还是由人造 辐射源例如X射线和放疗仪器产生的。本发明还提供保护的药物组合物的 自用式注射器，所述药物组合物由小于30个氨基酸的肽(在此称为抗辐射 肽)和合适的赋形剂组成。赋形剂是本领域已知的，例如见Handbook of Pharmaceutical Manufacturing Formulations(Sarfaraz K Niazi编辑；ISBN： 0849317460，在此通过引用并不本申请)。
赋形剂的组成为例如水、丙二醇、乙醇、苯甲酸钠和苯甲酸作为缓冲 物、和苯甲醇作为防腐剂；或者为甘露醇、人血清白蛋白、乙酸钠、乙 酸、氢氧化钠、以及注射用水。其他用于通过自用式注射器胃肠外施用的 示例性组合物包括注射溶液或混悬液，其含有，例如，合适的非毒性、胃 肠外可接受的稀释剂或溶剂，例如甘露醇、1，3-丁二醇、水、林格氏液、 等张氯化钠溶液、或其他合适的分散剂或湿化剂和混悬剂，包括合成的甘 油一酯或甘油二酯、和脂肪酸，包括油酸。
在一个实施方式中，自用式注射器包括作为活性成分的抗辐射肽(或 其功能性类似物)，当在对象暴露于辐射后施用时其能够降低辐射的不良反 应。优选地，如果在照射后至少30分钟、更优选地至少1小时、最优选地 至少数小时或甚至数天(如3天)施用，所述肽能够产生针对辐射损伤的至 少部分保护作用。此类自用式注射器也称为＂急救自用式注射器＂，代表了 其在突发紧急情况下的用途。
在一个实施方式中，本发明提供含有包装于注射器样装置内的无菌溶 液的自用式注射器，启动后该注射器样装置能够自动输送其全部5mL内 容物。每mL含有100mg，优选地200mg抗辐射肽和赋形剂，例如包括 丙二醇、乙醇、苯甲酸钠和苯甲酸作为缓冲物、和苯甲醇作为防腐剂的赋 形剂。在优选的实施方式中，用于治疗辐射损伤的自用式注射器携带小于 15个氨基酸的抗辐射肽，更优选地小于7个氨基酸。
优选的用于治疗急性辐射损伤的自用式注射器携带长度为3到4个氨 基酸的肽，优选地，肽具有的抗急性伽玛照射的剂量降低系数(DRF)为至 少1.10，所述DRF可如下确定：测试何种剂量的辐射在全身照射(WBI)后 30天导致测试组小鼠出现50％的死亡率(LD50/30)，所述测试组小鼠在 WBI后72小时用所述肽进行处理，和测试何种剂量的辐射在全身照射 (WBI)后30天导致对照组小鼠出现50％的死亡率(LD50/30)，所述对照组小 鼠在WBI后72小时仅用所述肽的载体进行处理，且其中通过将肽处理组 动物的LD50/30除以对照组动物的LD50/30来计算DRF。
更优选的自用式注射器携带的肽所具有的剂量降低系数(DRF)为至少 1.20，更优选地为至少1.25。抗置于自用式注射器内的合适的肽还有那些 如本发明所确定的在植物中具有抗细胞周期活性的肽。非常适合用于本发 明的自用式注射器的肽是VVC、LAG、AQG、LQGV、QVVC、MTRV、 AQGV、LAGV、LQAV、PGCP、VGQL、RVLQ、EMFQ、AVAL、 FVLS、NMWD、LCFL、FSYA、FWVD、AFTV、LGTL、QLLG、 YAIT、APSL、ITTL、QALG、GVLC、NLIN、SPIE、LNTI、LHNL、 CPVQ、EVVR、MTEV、EALE、EPPE、LGTL、VGGI、RLPG、LQGA、 LCFL、TLAVE、VEGNL或LNEAL。
本发明还提供用于治疗患有辐射损伤或被认为患有辐射损伤的对象的 药物组合物，所述药物组合物包含：药用有效量的抗辐射肽或其功能性类 似物，或如在此所鉴定的药物组合物以及药用可接受的稀释剂。本发明在 此提供在有需要或者有潜在需要的对象中治疗或预防辐射损伤的方法，所 述方法包括：给对象施用药物组合物，所述组合物包括治疗或预防辐射损 伤的手段以及药用可接受的赋形剂，其中所述手段包含在此所鉴定的抗辐 射肽或药物组合物，特别是其中所述辐射损伤包括照射损伤。
在一个实施方式中，本发明提供用于治疗患有辐射损伤的对象的方 法，其包含给对象施用一种组合物，所述组合物包括寡肽，所述寡肽获得 自或衍生自肽MTRVLQGVLPALPQVVC或肽LPGCPRGVNPVVS。优选 地，所述寡肽选自由MTR、MTRV、LQG、LQGV、VLPALP、 VLPALPQ、QVVC、VVC、AQG、AQGV、LAG、LAGV及其任意组合组 成的组。在另一个实施方式中，优选地，所述寡肽选自LPGC、CPRGVNP 和PGCP。当所述辐射损伤包括照射损伤时，此类寡肽特别有用。本发明 还提供用于治疗辐射损伤的药物组合物，其包括寡肽，所述寡肽获得自或 衍生自肽MTRVLQGVLPALPQVVC或肽LPGCPRGVNPVVS，例如寡肽 选自由MTR、MTRV、LQG、LQGV、VLPALP、VLPALPQ、QVVC、 VVC、AQG、AQGV、LAG、LAGV、LPGC、CPRGVNP和PGCP、及其 任意组合，并提供所述(寡)肽在制备用于治疗辐射损伤的药物组合物中的 用途。
先前我们报道了衍生自人绒毛膜促性腺激素的β-链的6聚体寡肽 (VLPALP)在小鼠中抑制感染性休克。同样，我们发现，衍生自hCG的β 链环2(残基41-57)的其他一些短肽(自三聚体肽开始)以及通过以丙氨酸 进行单个氨基酸取代而得到的所述肽的一些修饰物具有类似的抗炎活性。 进而，我们产生了在这些肽中筛选出一些以继续研发用于治疗意外暴露于 电离照射后的急性炎症的治疗性化合物的推理。
人绒毛膜促性腺激素(hCG)是孕妇产生的一种异二聚体胎盘糖蛋白激 素。其在孕妇的尿中和商品化hCG制剂中存在多种形式，包括断裂产物。 由于推定其在妊娠过程中对预防胎儿同种异体移植物排异具有作用，因此 一些研究者研究了异二聚体hCG及其变体对免疫系统的影响。一些报道提 示完整的激素抗调节免疫系统，但断裂产物的此类作用还没有被报道过。 先前我们(Khan et al.，Hum.Immunol.2002 Jan；63(1)：1-7)报道了衍生自人绒 毛膜促性腺激素的β-链的6聚体寡肽(VLPALP)在小鼠中抑制感染性休克。 给小鼠注射高剂量的脂多糖(LPS)后以这种六肽进行单次治疗抑制了小鼠 的感染性休克。Benner和Khan(Scand.J.Immunol.2005 Jul；62 Suppl 1：62-6) 研究了体内释放的肽片段所可能具有的免疫学活性，所述肽片段通过hCG β-亚单位环2的序列MTRVLQGVLPALPQVVC(残基41-57)的断裂而产 生。在此报道了取自β-亚单位环2的一些3到7个氨基酸的肽——以及通 过丙氨酸取代而自其衍生的一些肽——展现出显著的抗炎活性(通过抑制小 鼠的感染性休克综合征而测定)，并超过了被认为可用于治疗辐射损伤、特 别是包括胃肠道综合征的辐射损伤的活性，也超过了被认为可用于制备用 于治疗辐射损伤、特别是包括胃肠道综合征的辐射损伤的药物组合物的活 性。
本发明还提供具有抗细胞周期活性的药物组合物。细胞周期是一组有 序的事件，其结果是细胞生长并分裂为两个姊妹细胞。细胞周期的阶段是 G1-S-G2-M。G1期代表＂GAP1＂。S期代表＂合成(Synthesis)＂。这是发生 DNA复制的阶段。G2期代表＂GAP2＂。M期代表＂有丝分裂(mitosis)＂，是 发生细胞核(染色质分离)和细胞质(胞质分裂(cytokinesis))分裂的时候。术 语“抗细胞周期活性”在此指的是所述肽能够改变细胞周期动力学。例 如，其包括改变，即提高或降低，细胞分裂的频率。在一个实施方式中， 其指的是抗增殖活性。
还提供了具有抗细胞周期活性的药物组合物，其包含PGCP；具有抗 细胞周期活性的药物组合物，其包含VGQL；具有抗细胞周期活性的药物 组合物，其包含RVLQ；具有抗细胞周期活性的药物组合物，其包含 EMFQ；具有抗细胞周期活性的药物组合物，其包含AVAL；具有抗细胞 周期活性的药物组合物，其包含FVLS；具有抗细胞周期活性的药物组合 物，其包含NMWD；具有抗细胞周期活性的药物组合物，其包含LCFL； 具有抗细胞周期活性的药物组合物，其包含FSYA；具有抗细胞周期活性 的药物组合物，其包含FWVD；具有抗细胞周期活性的药物组合物，其包 含AFTV；具有抗细胞周期活性的药物组合物，其包含LGTL；具有抗细 胞周期活性的药物组合物，其包含QLLG；具有抗细胞周期活性的药物组 合物，其包含YAIT；具有抗细胞周期活性的药物组合物，其包含APSL； 具有抗细胞周期活性的药物组合物，其包含ITTL；具有抗细胞周期活性的 药物组合物，其包含QALG；具有抗细胞周期活性的药物组合物，其包含 GVLC；具有抗细胞周期活性的药物组合物，其包含NLIN；具有抗细胞周 期活性的药物组合物，其包含SPIE；具有抗细胞周期活性的药物组合物， 其包含LNTI；具有抗细胞周期活性的药物组合物，其包含LHNL；具有抗 细胞周期活性的药物组合物，其包含CPVQ；具有抗细胞周期活性的药物 组合物，其包含EVVR；具有抗细胞周期活性的药物组合物，其包含 MTEV；具有抗细胞周期活性的药物组合物，其包含EALE；具有抗细胞 周期活性的药物组合物，其包含EPPE；具有抗细胞周期活性的药物组合 物，其包含LGTL；具有抗细胞周期活性的药物组合物，其包含VGGI；具 有抗细胞周期活性的药物组合物，其包含RLPG；具有抗细胞周期活性的 药物组合物，其包含LQGA；具有抗细胞周期活性的药物组合物，其包含 LCFL；具有抗细胞周期活性的药物组合物，其包含TLAVE；具有抗细胞 周期活性的药物组合物，其包含VEGNL；具有抗细胞周期活性的药物组 合物，其包含LNEAL；具有抗细胞周期活性的药物组合物，其包含 MGGTWA；具有抗细胞周期活性的药物组合物，其包含LTCDDP；具有 抗细胞周期活性的药物组合物，其包含VCNYRDV；具有抗细胞周期活性 的药物组合物，其包含CPRGVNP；和具有抗细胞周期活性的药物组合 物，其包含DINGFLPAL。
附图说明
图1：以AQGV(肽EA-230)处理的全身照射的小鼠
＂WBI＂代表全身照射。使用麻醉的C57B1/6小鼠，在WBI(6.5至9.8Gy， Philips MG 30，81cGy/min)之后评估对辐射损伤的体内保护作用，通过 Kaplan-Meirer分析测量存活的差异。所有组的小鼠在WBI后3小时均首先 注射肽或载体(对照组动物)。注射安慰剂的组死亡率为80％，与对该模型 的预测一致。已知8.6戈瑞(＝8.6Gy)的辐射剂量能够在该物种造成大约 80％的死亡率，因此称为LD80(80％致死剂量)。死亡在第10天左右开始 出现——这在动物或人的WBI是通常的情况：在第10天左右，肠道被覆 层因辐射而损伤和泄漏导致细菌进入循环并引起胃肠道综合征，而骨髓的 损伤导致无法产生足够的白细胞以抵抗感染(“骨髓综合征”)，继而出现死 亡。符号＂x＂代表的组接受首次静脉注射，首次注射3小时后第二次皮下注 射(SC)。这些动物100％存活。图中没有显示它们其实根本没有出现任何疾 病征象。对于不知情的观察者来说，它们看上去与完全正常的小鼠一样。 三角符号代表的组通过SC途径首次注射肽，然后每48小时进行额外的 SC注射，共3剂(除首剂之外)——即在第3、5、和7天。这些动物中仅 有一只死亡。方块符号代表的组除了48小时SC注射持续进行共6剂(除 首剂之外)之外，其他与三角符号组的程序相同。因此其给药持续至第13 天。这种延长的治疗带来了完全的保护作用(该组无一死亡)。该组动物中 没有出现任何疾病征象。从这些数据中我们可以得出结论，如果动物在第 一天接受两倍剂量的肽(首剂为静脉注射)，可对致死剂量的WBI产生完全 的保护作用。如果动物接受较低水平的治疗(仅SC)，则将治疗延长至第二 周也产生完全的保护作用。
图2：以肽AQGV进行的第二组放射防护实验
采用剂量渐增的全身照射(WBI)，对于各组均为单次暴露，而随后的 组暴露剂量逐渐升高。皮下施用单剂肽EA-230(AQGV)，但治疗延迟至 WBI后3天(72hr)进行。该测试称为剂量降低系数(“DRF”)，其被定义为 处理组的LD50与对照组的LD50之间的比值。LD50代表的是导致50％的 测试动物死亡的剂量。可接受的DRF值为1.20。为通过该测试，在WBI 后第30天，一种候选药物必须使得LD50辐射剂量比对照动物的LD50剂 量高至少20％(系数为1.20的升高)。例如，如果对照动物的LD50是8.2 Gy，那么候选药物造成的LD50应该高至少20％，即在这种情况下该剂量 应该为8.2 x 1.20＝10.4 Gy。
图3：寡肽在拟南芥(Arabidopsis thaliana)细胞周期分析中作用。化合 物NAK4(LQGV)和NAK9(VVC)对标测试的记物显示出明确的影响。对 于细胞周期标记物(pCDG)，在两个时间点均观察到对根有明确影响。在过 渡区和子叶观察到了时间和/或剂量依赖性的影响。对于植物生长激素应答 标记物(DR5::GUS)，观察到了与细胞周期标记物相同的情况。NAK 26 (DINGFLPAL)显示出不太一致的时间依赖性影响。仅在根及时观察到了影 响。在过渡区和子叶没有观察到影响。
图4：测试代表性寡肽在通过CD3诱导的鼠单核细胞快速生长过程中 当细胞发生迅速分裂时对细胞增殖的作用。小鼠(n＝5)腹腔注射PBS、Nak4 (LQGV)、Nak47(LAGV)、Nak46(AQGV)(Ansynth BV，The Netherlands提 供)、或Nak46*(Diosynth BV，The Netherlands提供的AQGV)。以0.5mg/kg 或5mg/kg的肽处理小鼠1小时，随后分离脾脏制备脾细胞悬液。汇集各 组的脾细胞悬液并在存在PBS或抗CD3抗体的条件下体外培养(三份)，在 培养后0、12、24和48小时测定增殖。
发明详述
在本申请中，“纯化的、合成的或分离的”肽是已经自其天然来源或生 物技术来源纯化出的肽，或者更优选地，是如本发明所述合成的肽。
在本申请中，“组合物”指的是含有寡肽或者由寡肽组成的多种化合 物。优选地，寡肽被分离之后再加入到组合物中。优选地，寡肽由2至6 个氨基酸组成，更优选地，由3至4个氨基酸组成。
例如，在一个实施方式中，优选的化合物可以是：NT A Q G V CT， 其中N末端的NT选自H--、CH3--、酰基、或一般的保护基团；而C末端 的CT选自小肽(如1至5个氨基 酸)、--OH、--OR1、--NH2、--NHR1、--NR1R2、或--N(CH2)1-6NR1R2，其中 R1和R2，如果存在的话，独立地选自H、烷基、芳基、(芳)烷基，且其中 R1和R2可彼此连接成环。
在本申请中，“烷基”优选地是饱和的支链或直链的烃，具有1到6个 碳原子，例如甲基、乙基和异戊基。
在本申请中，“芳基”是芳烃基，优选地具有6到10个碳原子，例如苯 基或萘基。
在本申请中，“(芳)烷基”是芳烃基(同时具有脂肪族部分和芳香族部 分)，优选地具有7到13个碳原子，例如苄基、乙基苄基、正丙基苄基、 和异丁基苄基。
在本申请中，“寡肽”是由肽键连接在一起的具有2到12个氨基酸的 肽。寡肽的等价物是具有与寡肽中的特定氨基酸相同或等同侧链的化合 物，且其排列顺序与所述肽的顺序相同，但通过非肽键连接在一起，例如 通过等排连接(isosteric linkages)如酮等排物、羟基等排物、二酮等排物、 或酮-二氟甲基等排物。
“组合物”还包括例如寡肽的可接受的盐或标记的寡肽。在本申请中， “可接受的盐”指的是保留寡肽或等价化合物的所需活性的盐，优选地不会 对寡肽或使用所述寡肽的系统中的其他组分产生不良影响。此类盐的实例 为由无机酸如盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、硝酸硝酸等等形成的酸加成 盐。盐也可以是与有机酸如乙酸、草酸、酒石酸、琥珀酸、顺丁烯二酸、 反丁烯二酸、葡糖酸、柠檬酸、苹果酸、抗坏血酸、苯甲酸、鞣酸、双羟 萘酸、海藻酸、聚谷氨酸等等形成的。盐可以是与多价金属阳离子如锌、 钙、铋、钡、镁、铝、铜、钴、镍等等、或是与由N，N′-二苄乙烯二胺 (N，N′-dibenzylethylenediamine)或乙二胺形成的有机阳离子、或它们的组合 (如鞣酸锌)形成的。
这样的药物组合物可通过胃肠外或口服施用于对象。这样的药物组合 物可基本上由寡肽和PBS组成。优选地，寡肽是合成的。合适的治疗例如 需要将药物组合物中的寡肽静脉施用于患者，施用的量为大约0.1至大约 35mg/kg体重。药物组合物可以基本上由一至三种不同的寡肽组成。
这样产生的化学实体可全身性地、表面地或局部地施用和引入体内。 肽或其修饰物可以其实体本身施用或者作为药用可接受的酸或碱加成盐而 施用，所述的酸或碱加成盐通过与无机酸(如盐酸、氢溴酸、高氯酸、硝 酸、硫氰酸、硫酸和磷酸)反应而形成；或通过与有机酸(如甲酸、乙酸、 丙酸、羟基乙酸、乳酸、丙酮酸、草酸、丙二酸、琥珀酸、顺丁烯二酸和 反丁烯二酸)反应而形成；或通过与无机碱(如氢氧化钠、氢氧化铵、氢氧 化钾)反应而形成；或通过与有机碱(如单胺、二胺、三胺、和芳胺以及取 代的乙醇胺)反应而形成。选定的肽和任何衍生的实体还可偶联于糖、脂 质、其他多肽、核酸和PNA；并作为偶联物在原位起作用或在达到靶组织 或器官之后局部释放起作用。
就各种氨基酸而言，“取代”通常涉及以例如烷氧基、卤素、羟基、氮 或低级烷基的基团取代芳环上存在的氢。取代还可在连接芳香族部分与肽 主链的烷基链上进行，例如以低级烷基取代氢。其他的取代还可在氨基酸 的α位进行，也使用烷基。
优选的取代使用氟或氯作为卤素以及使用甲氧基作为烷氧基。至于烷 基和低级烷基，通常，具有较少(1至3个)碳原子的烷基是优选的。
可采用制备这些化合物的常规方法制备符合通式的化合物。为此，将 合适的N端α被保护(以及，如果存在反应性侧链时，侧链被保护的)氨基 酸类似物或肽活化并在溶液中或固相支持物上偶联于合适的羧基被保护的 氨基酸或肽衍生物。α-氨基官能团的保护通常以乌拉坦官能团进行，如使 用耐酸的叔丁氧羰基(tertiary-butyloxycarbonyl group，“Boc”)、苄氧羰基 (benzyloxycarbonyl，“Z”)和取代的类似物、或耐碱的9-芴甲氧羰基 (9-fluoremyl-methyloxycarbonyl，“Fmoc”)。Z基团还可通过催化氢化作用而 去除。合适的其他保护基包括Nps，Bmv，Bpoc，Aloc，MSC等等。氨基保护 基团的综述见The peptides，Analysis，Synthesis，Biology，Vol.3，E.Gross and J. Meienhofer，eds.(Academic Press，New York，1981)。羧基保护可通过酯化进 行，例如耐碱酯如甲酯或乙酯、耐酸酯如叔丁酯或取代的、苯甲酯或通过 氢解反应进行。可使用前述基团进行侧链官能团如赖氨酸和谷氨酸或天冬 氨酸的侧链的保护。巯基(虽然并不总是需要的)、胍基、醇和咪唑基团的 保护可采用多种试剂实现，例如参见The Peptides，Analysis，Synthesis， Biology，id.或见Pure and Applied Chemistry，59(3)，331-344(1987)。对合适 的被保护的氨基酸或肽的羧基进行活化可使用叠氮化物、混合酸酐、活性 酯、或碳二亚胺方法，特别是采用添加催化性的抑制外消旋化作用的化合 物如1-N-N-羟基苯并三唑、N-羟基琥珀酰亚胺、3-羟基-4-氧代-3，4-二 氢-1，2，3，-苯并三嗪、N-羟基-5降冰片烯-2，3-二羧酸亚胺。也可使用含磷的 酸的酸酐。见，例如，The Peptides，Analysis，Synthesis，Biology，supra and Pure and Applied Chemistry，59(3)，331-344(1987)。
还可通过Merrifield的固相方法制备所述化合物。不同的固相支持物和 不同的策略是已知的，例如见Barany and Merrifield，The Peptides，Analysis， Synthesis，Biology，Vol.2，E.Gross and J.Meienhofer，eds.(Acad.Press，New York，1980)；Kneib-Cordonier and Mullen，Int.J.Peptide Protein Res.，30， 705-739(1987)；和Fields and Noble，Int.J.Peptide Protein Res.，35，161-214 (1990)。那些其中肽键被等排物取代的化合物通常可采用前述的保护基团 和活化方法进行合成。合成修饰的等排物的方法可参考文献，例如有 关--CH2--NH--等排物和--CO--CH2--等排物的文献。
根据保护基团的性质和固相肽合成方法中使用的连接于固相支持物的 接头的类型，可采用不同方法去除保护基团以及自固相支持物上裂解。通 常在酸性条件下和存在清除剂的情况下进行去保护。例如见volumes 3，5 and 9 of the series on The Peptides Analysis，Synthesis，Biology，supra。
另一种可能的方法是使用酶合成此类化合物。例如参见综述H.D. Jakubke in The Peptides，Analysis，Synthesis，Biology，Vol.9，S.Udenfriend and J.Meienhofer，eds.(Acad.Press，New York，1987)。
尽管从环境出发可能不太合适，但也可以采用重组DNA方法制备本 发明的寡肽。此类方法涉及通过在合适的宿主微生物中表达重组多核苷酸 的方法制备所需寡肽，所述多核苷酸的序列编码感兴趣的一或多个寡肽。 此方法通常涉及将编码一或多种具体寡肽的DNA序列导入克隆载体(如质 粒、噬菌体DNA、或能够在宿主细胞中复制的其他DNA序列)，将克隆载 体导入合适的真核或原核宿主细胞，并培养如此转化的宿主细胞。如果使 用真核宿主细胞，化合物会含有糖蛋白部分。
在本申请中，肽的“功能性类似物”包括氨基酸序列或其他序列单体， 其序列已经被改变，使得序列的功能特性在性质上基本相同，但在量上不 必完全相同。
肽或其功能性类似物的功能可采用体内和/或体外测试来确定。体外测 试是优选的。在一个实施方式中，对功能性肽类似物进行比较测试，其中 采用参比或者对照肽，例如仅由L氨基酸组成的肽类似物。合适的测试包 括确定候选肽影响细胞周期动力学的能力。例如，可采用植物模型系统确 定对细胞周期进程的影响，例如在此所例举的拟南芥系统，或采用培养的 (哺乳动物)细胞。在另一方面其涉及确定候选肽抑制凋亡的能力，例如通 过诱导(暂时性)G2-M细胞周期停滞。
可以多种方式产生类似物，例如通过“保守性氨基酸取代”。此外，可 设计肽模拟物化合物，它们能够在功能上或结构上类似于作为起始点的原 始肽，但例如由非天然氨基酸或聚酰胺组成。通过“保守性氨基酸取代”， 一种氨基酸残基被另一种性质大体类似(大小、疏水性)的残基取代，由此 总体功能基本不会受到严重影响。不过，一般更加期望能够改善具体的功 能。也可通过全面提高氨基酸序列的至少一种所需特性而产生类似物。这 可以例如通过Ala扫描(Ala-scan)和/或置换网制图(replacement net mapping) 方法而实现。采用这些方法，可以基于原始的氨基酸序列产生很多不同的 肽，但每一种均含有至少一个氨基酸残基的取代。氨基酸残基可被丙氨酸 取代(Ala-扫描)或通过任何其他氨基酸残基取代(置换网制图)。这样便合成 了原始氨基酸序列的许多位置性变体(positional variant)。筛选每个位置性 变体的比活性。产生的数据用于设计特定氨基酸序列的改良的肽衍生物。
也可通过例如将L-氨基酸残基替换为D-氨基酸残基而产生类似物。这 种取代导致产生非天然存在的肽，可改善氨基酸序列的特性。可例如提供 逆向反转(retro inversion)形式的全部由D氨基酸组成的已知活性的肽序 列，由此能够保持其活性并增加半衰期。通过产生原始氨基酸序列的许多 位置性变体并筛选其比活性，可设计具有进一步改进的特性的包括此类D 氨基酸的改良的肽衍生物。现有技术已经发现，在一端或两端用D氨基酸 保护的肽比仅由L氨基酸组成的肽更加稳定。其他类型的修饰包括本领域 已知的研发肽类药物使之具有可用于药物组合物的有益效应的修饰。这些 效应可包括功效提高、药代动力学改变、稳定性提高并导致半衰期延长、 以及对冷链处理严格性要求的降低。
在本发明的一个实施方式中，抗辐射肽包括由其氨基和羧基之间的肽 键连接在一起的氨基酸序列，其中至少一个氨基酸是D氨基酸。例如，抗 辐射肽选自如下一组：VVC、LAG、AQG、LQGV、QVVC、MTRV、 AQGV、LAGV、LQAV、PGCP、VGQL、RVLQ、EMFQ、AVAL、 FVLS、NMWD、LCFL、FSYA、FWVD、AFTV、LGTL、QLLG、 YAIT、APSL、ITTL、QALG、GVLC、NLIN、SPIE、LNTI、LHNL、 CPVQ、EVVR、MTEV、EALE、EPPE、LGTL、VGGI、RLPG、LQGA、 LCFL、TLAVE、VEGNL、LNEAL、VLPALP、MGGTWA、LTCDDP、 VLPAPLQ、VCNYRDV、CPRGVNP、QPLAPLVG和DINGFLPAL，其中 至少一个由标准的单字母代码表示的氨基酸残基是D氨基酸。
本领域人员能够产生氨基酸序列的类似物化合物。这可通过例如筛选 肽文库而进行。这种类似物基本上具有与原序列相同的功能特性，但在量 上不必完全相同。此外，肽或类似物可以被环化，例如通过给它们提供(末 端)半胱氨酸；被二聚化或多聚化，例如通过连接于赖氨酸或半胱氨酸或其 他具有允许发生连接或多聚化的侧链的化合物；形成串联或重复构型；偶 联或以其他方式连接于本领域已知的载体，只要通过允许解离的可靠连接 即可。如上所述的这些寡肽的合成物以及功能性类似物或断裂产物，可用 于治疗辐射损伤和后续疾病的方法中。
在本申请中，肽的“功能性类似物”优选地小于衍生出它的肽，因此最 好是通过缺失和/或取代来制备，而非增加其长度。此外，在本申请中，肽 的“功能性类似物”不涉及那些含有在此被鉴定为抗辐射肽的氨基酸序列同 时其一侧或两侧存在更多氨基酸的更大的蛋白质或肽。
术语“药物组合物”在此旨在同时涵盖本发明的活性组合物本身和含有 本发明的组合物以及药用可接受的载体、稀释剂或赋形剂的组合物。药物 组合物可含有至少两种在此所述的抗辐射肽或类似物的混合物。在此详述 的寡肽的可接受的稀释剂例如为生理学盐溶液或磷酸缓冲盐溶液。在一个 实施方式中，寡肽或组合物以有效浓度全身性施用于动物或人，例如通过 静脉、肌肉内或腹腔内施用。另一种施用途径包括器官或组织灌注，可以 在体内或体外，使用包括本发明的寡肽或组合物的灌注液进行。可以单一 剂量施用，不连续的多剂量施用，或持续一段足以允许充分调节基因表达 的时间。对于持续施用，持续施用的时间随多种因素而变，这是本领域人 员容易理解的。
活性分子的施用剂量可以有相当大的范围。可施用的活性分子的浓度 通常受到较低浓度时的功效以及较高浓度时化合物的溶解度限制。对具体 患者的最佳剂量应该而且能够由有关的医生或医学专家确定，其中药考虑 到熟知的相关因素例如患者的病情、体重和年龄等等。
活性分子可在合适的载体中直接施用，例如磷酸缓冲液(“PBS”)或酒精 或DMSO中的溶液。不过，根据本发明优选的实施方式，采用药物输送系 统通过单剂输送施用活性分子。合适的药物输送系统应该是药理学无活性 的或至少是可耐受的。其优选地既不具有免疫原性也不引起炎症反应，并 且应该使得活性分子的释放能够在所需时间内维持其有效水平。适合于控 释目的的可选方案是本领域已知的并属于本发明的范围之内。合适的输送 载体包括但不限于：微胶囊或微球；脂质体和其他基于脂质的释放体系； 粘滴(viscous instillates)；可吸收和/或可生物降解的机械屏障和植入物；以 及聚合物输送材料，如聚氧化乙烯/聚氧化丙烯嵌段共聚物、聚酯、交联聚 乙烯醇、聚酐、聚甲基丙烯酸酯和聚甲基丙烯酰胺水凝胶、阴离子碳水化 合物聚合物等等。可用的输送系统是本领域熟知的。
实现活性分子释放的一种制剂包括注射用微胶囊或微球，其由可生物 降解聚合物制得，如聚(dl-丙交酯)、聚(dl-丙交酯-共-乙交酯)、聚已酸内 酯、聚乙交酯、聚乳酸-共-乙交酯、聚(羟丁酸)、聚酯或缩醛树脂。包括直 径为大约50微米至大约500微米的微胶囊或微球的注射用系统较其他输送 系统具有优势。例如，它们通常使用较少的活性分子并可由辅助医疗人员 施用。此外，通过选择微胶囊或微球的大小、装药量和施用剂量，此类系 统在不同药物释放的时间和速度的设计上具有内在的灵活性。此外，可通 过伽玛照射使其无菌化。
微胶囊和微球的设计、制备和使用是本领域人员熟知的，有关这方面 的具体技术细节可参见文献。也可用可生物降解聚合物(如丙交酯、乙交 酯和己内酯聚合物)制备微胶囊和微球以外的制剂；如含有活性分子的预 制膜和喷涂膜可用于本发明。包含活性分子的滤膜或纤维也在本发明的范 围内。
另一种高度适合用于单剂输送本发明的活性分子的制剂是脂质体。将 活性分子包囊化于脂质体或多层囊泡是靶向药物输送和延长药物存留的熟 知技术。装有药物的脂质体的制备和使用是本领域人员已知的并在文献中 有详细描述。
单剂输送本发明的活性分子的另一种合适的方式涉及粘滴。在该技术 中，高分子量载体与活性分子混合使用，得到的结构可产生具有高粘度的 溶液。合适的高分子量载体包括但不限于：葡聚糖和环糊精；水凝胶；(交 联)粘性材料，包括(交联)粘弹性材料；羧甲纤维素；透明质酸；和硫酸软 骨素。装有药物的粘滴的制备和使用是本领域人员已知的。
根据另一种方式，活性分子可与可吸收机械屏障如氧化再生纤维素组 合施用。活性分子可共价或非共价(如通过离子键)结合于这种屏障，或仅 仅是分散于其上即可。
通过以下示例性实施例进一步解释本发明。
实施例
肽的选择
基于hCGβ-亚单位环2的序列MTRVLQGVLPALPQVVC(残基41-57) 上已知的优先裂解位点进行选择(Cole et al.，J.Clin.Endocr.Metab.1993； 76：704-710；H.Alfthan，U.H.Stenman，Mol.Cell.Endocrinol.1996； 125：107-120；A.Kardana，et al.，Endocrinology 1991；129：1541-1550；Cole et al.，Endocrinology 1991；129：1559-1567；S.Birken，Y.Maydelman，M.A. Gawinowicz，Methods 2000；21：3-14)，并在来自C反应蛋白(CRP)(β-连环蛋 白，如人CTNB)、布鲁顿型酪氨酸激酶(如人BTK)、基质金属蛋白酶-2和 p-53的氨基酸序列上进行选择。
肽的合成
通过专有方法(Diosynth BV)或使用基于9-芴甲氧羰基(Fmoc)/叔丁基的 方法以2-氯三苯甲基氯树脂(2-chlorotrityl chloride resin)作为固相支持物通 过固相合成法(Ansynth BV)商品化制备在此所述的肽。以三苯甲基官能团 保护谷胺酰胺的侧链。手工合成了这些肽。每个偶联包括以下步骤：(i)以 二甲基甲酰胺(DMF)中的哌啶去除α-氨基的Fmoc保护，(ii)将Fmoc氨基 酸(3eq)与二异丙基碳二亚胺(DIC)/1-羟基苯并三唑(HOBt)在DMF/N-甲 基甲酰胺(NMP)中偶联，和(iii)以乙酸酐/二异丙基乙胺(DIEA)在 DMF/NMP中对剩余的氨基官能团进行加帽。合成完毕，以三氟乙酸 (TFA)/H2O/三异丙基硅烷(TIS)95:2.5:2.5的混合物处理肽树脂。30分钟 后，加入TIS直至脱色。溶液在真空中脱水，以乙醚沉淀肽。粗制的肽溶 解于水(50-100mg/ml)并通过反相高效液相层析(RP-HPLC)纯化。HPLC条 件：柱：Vydac TP21810C18(10 x 250mm)；洗脱体系：梯度系统为0.1％ TFA溶于水v/v(A)和0.1％TFA溶于乙腈(ACN)v/v(B)；流速6ml/分钟； 在190-370nm测定到吸收。使用了不同的梯度体系。例如对于肽LQG和 LQGV：10分钟100％A，继之以线性梯度0-10％B，50分钟。例如对于肽 VLPALP和VLPALPQ：5分钟5％B，继之以线性梯度1％B/分钟。通过在 40℃低压条件旋转膜蒸发将收集的组分浓缩至大约5ml。通过在醋酸盐形 式的阴离子交换树脂(Merck II)柱上洗脱两次，使得残余的TFA与醋酸盐 发生交换。浓缩洗脱物并冻干28小时。随后将肽溶解于PBS，备用。
实施例1和实施例2
在第一个实验中，给12-周龄雌性BALB/c小鼠腹腔内单次注射PBS (n＝9)或肽(LGQV、VLPALP、LPGCPRGVNPVVS、 MTRVLQGVLPALPQVVC；n＝8，10mg/kg)。处理后1个半小时小鼠全身暴 露于单剂10 Gy137Cs-γ-照射。在第二个实验中，12-周龄雌性BALB/c小鼠 先全身暴露于单剂10 Gy137Cs-γ-照射，然后在照射后1.5小时腹腔内单次 注射PBS(n＝9)或肽(n＝8或9，10mg/kg)。实验过程中在不同时间点观察死 亡率和临床征象(如，眼睛流泪代表结膜炎，以及体重减轻)。从表2可 见，所有的测试肽在处理组小鼠中均具有良好的减轻结膜炎的作用，而对 死亡率没有影响，这促使我们去选择一种最适合对抗急性炎症的肽，以便 在后期进行的重复剂量的较低照射中对其进行测试。


实施例3
在双盲动物实验中测试了6种寡肽(即A：LAGV，B：AQGV，C： LAG，D：AQG，E：MTR，和F：MTRV)并与PBS(对照)比较，测试各个 肽在小鼠肾脏缺血再灌注试验中促进恢复的相对能力。实验中，将小鼠麻 醉，切除一侧肾脏。另一侧肾脏结扎25分钟，血清尿素水平升高。结扎前 后给30只不同小鼠静脉施用每种不同的肽(5mg寡肽/kg体重)，随后在2 小时、24小时和72小时确定各种肽处理的小鼠的死亡率以及BUN浓度。 结果见表3(不包括实施例3获得的肽A(LAGV(SEQ ID NO：4))的结果)。
在吸入麻醉条件下，分离出左侧肾脏连同其动脉和静脉并以微血管钳 阻断25分钟。手术中动物放置在加热垫上以保持体温在37℃。放置血管 钳之前5分钟和松开血管钳之前5分钟，给动物静脉施用5mg/kg的肽， 溶解于0.1mL的无菌盐水中。左侧肾脏再灌注之后切除右肾。通过测定夹 闭之前和再灌注后2、24、和72小时的血尿素氮评价肾功能。
结果-表3(再灌注后72小时的死亡率)
  PBS A (LAGV) B (AQGV) C (LAG) D (AQG) E (MTR) F (MTRV) 6/10 6/10 0/10 4/10 4/10 4/10 2/10 *P<(vs PBS) NS 0.01 0.01 0.01 0.01 0.01
*2 x 2卡方检验。df＝1
肽A(SEQ ID NO：4)是在肾脏缺血再灌注试验中施用的第一种肽。进 行实验的人员在使用肽A时在熟悉学习曲线。在下腔静脉施用该肽过程 中，一些动物在注射部位出现中度失血，但其他动物没有。无意中将这些 动物送回笼子但在术后第一夜没有在笼中放饮用水。此外，这些动物本应 该在72小时处死，但却错误地在再灌注后48小时被处死。对于肽B-F， 实验过程中没有出现这些或者其他问题。
可以看出，施用了寡肽MTRV且特别是AQGV的动物在存活(相对于 PBS对照组死亡率明显降低)以及BUN浓度下降方面较对照组(PBS)或施 用其他寡肽的组要好得多，有更多的小鼠存活且血清尿素水平较其他组低 得多。不过，寡肽LAG、AQG、和MTR在本实验中没有降低BUN浓 度，但与PBS对照组相比分别明显降低了死亡率，其中MTR甚至在72小 时时使测试小鼠的BUN水平升高。
实施例4
出于前面提到的原因，重新测试了一种寡肽(A)降低小鼠BUN水平的 能力。结果见表4。可以看出，接受寡肽LAGV的小鼠相对于对照组(PBS) 在存活(相对于PBS对照组死亡率明显降低)和降低BUN浓度方面均好得 多。
实施例5
在如上所述的小鼠实验中测试了另外4种寡肽(G(VLPALPQ)，H (VLPALP)，I(LQGV)和J(LQG))降低BUN水平的能力。结果见表4。可 以看出，接受了寡肽LQG的小鼠在实验早期显示出BUN浓度降低(再灌注 后24小时)，而接受了VLPALPQ的小鼠在实验后期(再灌注后72小时)的 降低BUN浓度方面较对照组(PBS)或其他寡肽处理组要好得多，有更多小 鼠存活且血清尿素水平较其他组低得多。
表4：肾脏缺血25分钟的小鼠以肽A-J处理后的BUN


再灌注后2小时统计学分析得到的P值：
 A  p＝0.0491 NMPF-47  LAGV
-B  p＝0.0008 NMPF-46  AQGV
-C  p＝0.9248 NMPF-44  LAG
-D  p＝0.4043 NMPF-43  AQG
-E  p＝0.1848 NMPF-12  MTR
-F  p＝0.0106 NMPF-11  MTRV
-G  p＝0.1389 NMPF-7   VLPALPQ
-H  p＝0.5613 NMPF-6   VLPALP
-I  p＝0.9301 NMPF-4   LQGV
-J  p＝0.0030 NMPF-3   LQG
再灌注后24小时统计学分析得到的P值：
 A  p＝0.0017 NMPF-47  LAGV
-B  p<0.0001  NMPF-46  AQGV
-C  p＝0.8186 NMPF-44  LAG
-D  p＝0.2297 NMPF-43  AQG
-E  p＝0.0242 NMPF-12  MTR
-F  p＝0.0021 NMPF-11  MTRV
 G  p＝0.0049 NMPF-7   VLPALPQ
 H  p＝0.3297 NMPF-6   VLPALP
-I  p＝0.8328 NMPF-4   LQGV
-J  p＝0.9445 NMPF-3  LQG
通过Mann Whitney U-检验(SPSS for Windows)计算出P值。
实施例6
为了确定剂量应答关系，在如上所述的小鼠肾衰实验中测试了两种肽 (D(AQG，在实施例3测试的小鼠中对死亡率表现出很好的结果)和B (AQGV，在实施例3测试的小鼠中对BUN具有优越的结果)的剂量应答方 式。如实施例3所述以0.3、1、3、10和30mg/kg的剂量测试所述肽。相 对于PBS的血清尿素水平，肽D组在夹闭后72小时的P值(通过Mann Whitney U-test(SPSS for Windows)计算)为：0.3mg/kg 0.001，1mg/kg 0.009，3mg/kg 0.02，10mg/kg 0.000，和30mg/kg 0.23，对于肽B组，这 些P值为0.88，0.054，0.000，0.001和0.003。可以看出，相对于肽B (AQGV)，肽D(AQG)在所测试的较低剂量在降低BUN水平方面出乎意料 地好，而且在所测试的较低剂量对死亡率的有益作用也是显著的。

  表6：剂量应答实验中的尿素水平 24h 72h PBS 57.8 85.4 肽D(AQG)0.3mg/kg 38.4 30.4 肽D(AQG)1.0mg/kg 48.4 38.4 肽D(AQG)3.0mg/kg 39.3 40.3 肽D(AQG)10.0mg/kg 46.8 25.8 肽D(AQG)30.0mg/kg 52.8 58.9 肽B(AQGV0.3mg/kg 62.4 86.7 肽B(AQGV1.0mg/kg 50.0 52.6 肽B(AQGV3.0mg/kg 37.4 19.6 肽B(AQGV10.0mg/kg 41.2 37.1 肽B(AQGV30.0mg/kg 47.8 38.0
  标准误 24h 72h PBS 7.1 14.7 肽D(AQG)0.3mg/kg 8.6 3.5 肽D(AQG)1.0mg/kg 7.2 10.2 肽D(AQG)3.0mg/kg 3.5 10.7 肽D(AQG)10.0mg/kg 8.0 3.4 肽D(AQG)30.0mg/kg 9.5 12.9 肽B(AQGV)0.3mg/kg 10.8 14.1 肽B(AQGV)1.0mg/kg 11.7 14.3 肽B(AQGV)3.0mg/kg 7.6 2.6 肽B(AQGV)10.0mg/kg 8.5 6.9 肽B(AQGV)30.0mg/kg 5.8 7.8

设置感染性休克实验以确定哪种肽最适合抵御急性炎症。
用于败血症或感染性休克实验的小鼠：8-12周龄的雌性BALB/c小鼠 用于所有实验。按照Report of European Laboratory Animal Science Associations(FELASA)Working group on Animal Health(Laboratory Animals 28：1-24，1994)的方案，将动物饲养在无特定病原体条件下的设施中。
注射方案：对于内毒素模型，给BALB/c小鼠腹腔注射150-300μg LPS (E.coli 026:B6；Difco Lab.，Detroit，MI，USA)。对照组仅腹腔注射PBS。为 了测试肽的作用，将肽溶解于PBS并在PBS处理后的预定时间点腹腔注 射。
采用如下测量方案对小鼠疾病严重程度评分：
0 无异常
1 毛皮渗出液，但与正常小鼠相比没有可检测到的行为差异
2 毛皮渗出液，卷缩反射，应答于刺激(如拍打笼子)，在触碰过 程中同健康小鼠一样表现活跃
3 对拍打笼子反应迟缓，触碰时被动或温顺，但独自处于新环境 中仍然好奇
4 缺乏好奇感，对刺激极少或没有应答，很少活动
5 呼吸费力，不动或在被翻倒后缓慢摆正(垂死，处死)
D 死亡
设置第一组感染性休克实验以确定哪种肽LQG、LQGV、VLPALP、 VLPALPQ、MTR、MTRV、VVC或QVVC能够在小鼠中抑制脂多糖(LPS) 诱导的感染性休克，在LPS处理后2小时以单剂肽处理小鼠。使用5 mg/kg体重的肽给BALB/c小鼠腹腔注射，LPS(E.coli 026：B6；Difco Lab.， Detroit，MI，USA)的剂量是渐增的，预计LPS在24至72小时导致 80-100％死亡。对照组仅腹腔注射PBS，无死亡。
设置第二组感染性休克实验以确定哪种肽LQG、LQGV、VLPALP、 VLPALPQ、MTR、MTRV、VVC或AQG、AQGV、LAG和LAGV能够 在小鼠中抑制高剂量LPS诱导的感染性休克，在LPS处理后2和24小时 以双倍剂量的肽处理小鼠。在各处理组中，使用5mg/kg体重的肽。给 BALB/c小鼠腹腔注射高剂量LPS(E.coli 026：B6；Difco Lab.，Detroit，MI， USA)，预计LPS在24至72小时导致80-100％死亡。对照组仅腹腔注射 PBS，无死亡。
设置另一组感染性休克实验以确定所研究的哪种肽LQG、LQGV、 VLPALP、VLPALPQ、MTR、MTRV、VVC或AQGV最适合在休克发生 早期和/或后期或整个过程中使用。为了确定以肽进行后期或早期处理的内 毒素休克存活率的百分数，给BALB/c小鼠腹腔注射300μg LPS(E.coli 026：B6；Difco Lab.，Detroit，MI，USA)，预计无肽处理情况下在48小时导致 100％死亡。对照组仅腹腔注射PBS，无死亡。
设置比较实验以比较肽MTR和AQGV，均是商品化来源的。比较实 验有6组，每组6只动物，其中两组(1A和1B)接受安慰剂(PBS)，一组(2) 接受肽MTR(来源：Pepscan)，一组(3)接受肽MTR(来源：Ansynth)，一组 (4)接受肽AQGV(来源：Pepscan)，以及另一组接受AQGV(来源： Ansynth)。肽/安慰剂在LPS之后2小时施用。LPS(来源)剂量为10-11 mg/kg。在注射LPS后0、2、22、26、42和48小时进行疾病评分。
结果
肽的选择
我们选择合成肽MTR、MTRV、LQG、LQGV、VLPALP和 VLPALPQ，以及QVVC和VVC。在研究的后期，我们还选择合成衍生自 LQG和LQGV的丙氨酸取代的肽变体，其中将一个氨基酸取代为丙氨酸， 对其中的4种(AQG、AQGV、LAG、和LAGV)，结果如下。
感染性休克实验
为了测试肽在休克发生早期的作用，在以不同剂量的LPS处理后2小 时或24小时给小鼠腹腔注射测试肽，剂量为5mg/kg体重。对无肽处理的 小鼠，LPS的剂量在48-72小时导致100％死亡。结果见表8。在测试的7 种肽中，肽VLPALP和LQGV显示出显著的抗LPS诱导的败血症的保护 作用。





为了评价肽处理在休克发生早期或后期的作用，在注射LPS处理后2 小时或24小时给小鼠腹腔注射测试肽，剂量为5mg/kg体重。观察小鼠84 小时而不是先前实验中的48小时。结果见表10。在测试的所有肽中，仅 有AQGV在发生休克的早期或后期给药时能够在LPS处理后84小时保持 100％存活且没有遗留临床征象。

比较测试MTR和AQGV，两种肽均有两种来源，均以5mg/kg剂量施 用。
表11
LPS＝10-11mg/kg
#970＝5mg/kg       LPS    化合物
#971＝5mg/kg       处理   处理
#Ansynth 12
#Ansynth 46                 疾病评分

表11
LPS＝10-11mg/kg
#970＝5mg/kg      LPS    化合物
#971＝5mg/kg      处理   处理
#Ansynth 12
#Ansynth 46               疾病评分

一些报道提示完整的hCG可调节免疫系统，但其断裂产物的此类在科 技文献中未见报道。Benner and Khan(Scand.J.Immunol.2005 Jul；62 Suppl 1：62-6)研究了hCGβ-亚单位环2的序列MTRVLQGVLPALPQVVC(残基 41-57)裂解产生的体内释放肽片段可能具有的免疫活性，尽管事实是小到 3至7个氨基酸的肽通常被认为没有明显的生物学活性。
我们设计了在小鼠中能够完全阻断LPS诱导的感染性休克的肽，在一 些情况下甚至在注射LPS后24小时开始以这些肽进行处理仍然有效。这 些肽还能够抑制MIF的产生。这些发现为使用这些肽来治疗患有辐射损伤 的患者的治疗用途提供了可能性。
实施例7
本实施例显示了肽AQGV对8.6Gy全身照射(WBI)的小鼠的实验结 果，其中所有组的小鼠均在TBI后3小时接受第一次注射。接受安慰剂注 射组的动物80％死亡，正如对该模型所预计的那样。已知所施用的辐射 (8.6戈瑞＝8.6Gy)的辐射剂量能够在该物种造成大约80％的死亡率，因此 称为LD80(80％致死剂量)。死亡在第10天左右开始出现——这在动物或 人的WBI是通常的情况：在第10天左右，肠道被覆层因辐射而损伤和泄 漏导致细菌进入循环并因胃肠道综合征而引起败血症，而骨髓的损伤导致 无法产生足够的白细胞以抵抗感染(“骨髓综合征”)，继而出现死亡。
以符号＂x＂代表(图1)的第一组肽处理小鼠组接受首次的静脉注射 AQGV，该首次注射3小时后接受第二次的皮下注射(SC)。出乎意料的 是，这些动物100％存活。此外，这些动物没有出现任何疾病征象。对于 不知情的观察者来说，它们看上去与完全正常的小鼠一样，特别是肽处理 的这些小鼠没有出现GI综合征。
第二组小鼠通过SC途径接受首次的肽注射，然后每48小时进行额外 的SC注射，共3剂(除首剂之外)——即在第3、5、和7天。这些动物中 仅有一只死亡，其他没有出现任何GI综合征的症状。
除了48小时的SC注射持续进行共6剂(除首剂之外)之外，第三组的 小鼠与第二组的程序相同。因此其给药持续至第13天。这种延长的治疗带 来了完全的保护作用(该组无一死亡)。该组动物中没有出现任何疾病征 象，同样没有出现任何GI综合征的症状。
从这些数据中我们可以得出结论，如果动物在第一天接受两倍剂量的 肽(首剂为静脉注射)，AQGV可对致死剂量的WBI产生完全的保护作用， 且特别是针对该剂量所伴随的GI综合征产生保护作用。如果动物接受较低 水平的治疗(仅SC)，则将治疗延长至第二周也产生完全的保护作用，且特 别是针对该高剂量所伴随的GI综合征产生保护作用。
当将这些结果与在第51届辐射研究学会(2004年4月)上报告的有关 代号为ON-01210的药物的辐射防护作用的研究相比较时，可以发现该药 物ON-01210(与目前正在研究的针对辐射暴露的其他药物类似)仅在辐射 暴露前施用才有保护作用。这使得该药在对“脏弹”的防护上不是十分有 用。该药物具有巯基成分(4-carboxystyrl-4-chlorobenzylsulfone)，可作为抗 氧化剂起作用，将辐射损伤细胞时产生的自由基清除掉。但如果在辐射暴 露的当时体内没有该药，那么无论如何它都不会有作用。相反，使用本发 明的肽来治疗可以在暴露后起作用。
同样，回顾以其他现有药物进行的治疗，关于这些药物的所有数据 (即有关使用蛋白同化甾类的治疗)均显示现有的非肽类药物需要在WBI之 前(即24小时)施用，以后施用对急性辐射损伤的防护没有支援作用。
实施例8：DRF研究
在本实施例中，我们报道了对剂量渐增的全身照射(WBI)的研究，对 于各组均为单次暴露，而随后的各组暴露剂量逐渐升高。皮下施用单剂肽 AQGV，但治疗延迟至WBI后3天(72hr)进行。该测试称为剂量降低系数 (“DRF”)，其被定义为处理组的LD50与对照组的LD50之间的比值。LD50 代表的是导致50％的测试动物死亡的剂量。
可接受的DRF比值是该系数至少为1.10；但优选地是至少1.20或甚 至是至少1.25。为通过DRF 1.20的测试，在WBI后第30天，一种候选药 物必须使得LD50辐射剂量比对照动物的LD50剂量高至少20％(系数为 1.20的升高)。例如，如果对照动物的LD50是8.2Gy，那么为了通过该测 试，候选药物造成的LD50应该高至少20％，即在这种情况下该剂量应该 为8.2 x 1.20＝10.4Gy。
DRF测试中测试动物的数量和结果见表12。
表12
  剂量(Gy) “n” WB1后30天存活 动物的绝对数 30天存活百分数 30天死亡百分数 7.4 50 45 90％ 10％ 8 100 60 60％ 40％ 8.6 120 24 20％ 80％ 9.2 30 0 0％ 100％ 8.6+AQGV，第3天 20 20 100％ 0％ 9.2+AQGV，第3天 10 10 100％ 0％ 9.8+AQGV，第3天 10 10 100％ 0％ 10.4+AQGV，第3天 10 4 40％ 60％ 11.0+AQGV，第3天 10 0 0％ 100％
讨论将治疗延迟72小时这一决定的理由是十分重要的：在一些放射性 暴露的情况下(如暴露于运输轮船的核裂变装置，或飞机撞击到邻近中心 城市的核反应堆等等)，其破坏力之大可能导致需要数天才能将所有伤者送 至治疗中心。因此军事科学家(其关注保护最初的反应者)和民间科学家 (其关注治疗大量伤亡人员)会自然地需要确定一种候选药物是否能够以任 何方式消除急性辐射的毒性(GI综合征，骨髓综合征)，否则其将在如此长 的延迟后突然爆发。
AQGV的DFR测试结果。杀死50％对照组动物的辐射剂量为～8.2 Gy。肽AQGV的保护作用如此之好，以至于必须将辐射剂量提高25％(系 数为1.25)直至达到～10.4Gy，才能杀死50％的动物，而这是在延迟3天治 疗的情况下得到的结果。假如这种治疗能够更快施用，例如在24hr或48 hr时，那么杀死50％的动物的辐射将会更高。
实施例9
为了进一步研究不同寡肽的抗细胞周期活性，在拟南芥幼苗中进行了 增殖实验。目的是要测试一组140种不同长度的寡肽在发生迅速分裂的细 胞快速生长过程中对植物标记物基因表达的影响。两种标记物基因均涉及 细胞周期进程，高标记物活性代表高细胞周期活性，而无标记物活性代表 没有细胞周期活性，因此也就没有增殖。寡肽在拟南芥细胞周期分析中的 作用的实例见图3。
方法
肽重悬于1x磷酸缓冲液(PBS)pH8，终浓度为5mg/ml。所得溶液分 配到96-孔圆底板中(Corning Incorporated)，每孔40微升。板在-20℃存放 4天备用。将拟南芥生态变种Ws-0的种子置于2％商品化漂白剂(Glorix) 中10分钟进行表面消毒，以无菌MQ水洗涤5次。然后将种子重悬于 0.1％的琼脂中并铺在MS20板上，其中补充了80mg/l的卡那霉素。
板在4℃放置两夜，然后转移至气候室210℃，光照周期16/8小时。 生长4天后，将幼苗转移至含有肽溶液的96-孔板中(每孔4株幼苗)，孵育 4到8小时。
为了本实验，使用了携带融合于GUS的两种报告基因的拟南芥纯合子 幼苗。使用的第一个报告基因是细胞周期标记物，pCDG(Carmona et al.， The Plant Journal，1999，20(4)，503-508)，第二个是植物生长激素应答标记物， DR5::GUS(Ulmasov et al.，The Plant Cell，Vol.9，1963-1971)。与化合物孵育 后，针对GUS对幼苗进行染色。染色反应在100mM磷酸钠缓冲液(pH 7.0)(含有10mM EDTA，10％ DMSO，0.1％ Triton X-100，2mM X-Gluc，0.5 mM K3Fe(CN)6和0.5mM K4Fe(CN)6)中于37℃进行16小时。为了终止 GUS反应并去除叶绿素，幼苗随后以96％乙醇处理1小时，然后存放于 70％乙醇中。在立体显微镜下观察染色的幼苗，以出现化合物处理作用的 幼苗制备切片。在水合氯醛溶液中固定并清洁幼苗以便显微镜下仔细观 察，并在装备了DIC镜片的显微镜下拍照。
结果
测试了肽对快速生长的拟南芥幼苗标记物基因表达的影响。通过GUS 在不同器官内分布的变化对此进行监测：根、根-胚轴过渡区和子叶。
在所测试的140种化合物中，共有43种显示出对测试的两种标记物的 表达有明确的影响。图3详细显示了测试化合物引起的明显变化的实例， 肽LQGV，VVC和DINGFLPAL引起的显微镜水平的变化。出乎意料的 是，这种作用明显与不同测试肽的长度相关。自表13可以看出，抗细胞周 期活性在短肽中表现极强，而长度超过9个氨基酸的肽无一能够降低细胞 周期活性。长度为5至9个氨基酸的肽中，大约22％显示出降低，但在测 试的3聚体和4聚体中超过50％显示出降低细胞周期活性。
表13：拟南芥细胞周期测试中发现的阳性测试肽/肽长度的频率分布。#AA ＝肽的长度(氨基酸)；#＝测试的数量；#+＝阳性的数量；％+＝阳性百分数

实施例10
为了进一步研究不同寡肽的抗细胞周期活性，使用经抗CD3抗体刺激 的小鼠外周血细胞进行体外实验。目的是测试在CD3诱导的鼠单核细胞快 速生长过程中当细胞发生迅速分裂时一些代表性寡肽对细胞增殖的作用。 小鼠(n＝5)腹腔注射PBS、Nak4(LQGV)、Nak47(LAGV)、Nak46(AQGV) (Ansynth BV，The Netherlands提供)、或Nak46*(Diosynth BV，The Netherlands提供的AQGV)。以0.5mg/kg或5mg/kg的肽处理小鼠1小 时，随后分离脾脏制备脾细胞悬液。汇集每组的脾细胞悬液并在存在PBS 或抗CD3抗体的条件下体外培养(三份)，在培养后0、12、24和48小时 测定增殖。所有的测试肽均显示出能够降低增殖(见图4)。
实施例9和10的结果
根据植物中的细胞周期研究和体外降低外周血细胞增殖的研究，经鉴 定可用于治疗辐射损伤的3聚体肽是VVC、LAG、AQG。类似地，可用于 治疗辐射损伤的4聚体肽是LQGV、QVVC、MTRV、AQGV、LAGV、 LQAV、PGCP、VGQL、RVLQ、EMFQ、AVAL、FVLS、NMWD、 LCFL、FSYA、FWVD、AFTV、LGTL、QLLG、YAIT、APSL、ITTL、 QALG、GVLC、NLIN、SPIE、LNTI、LHNL、CPVQ、EVVR、MTEV、 EALE、EPPE、LGTL、VGGI、RLPG、LQGA、LCFL，可用于治疗辐射 损伤的5聚体肽是TLAVE、VEGNL、LNEAL，可用于治疗辐射损伤的6 聚体肽是VLPALP、MGGTWA、LTCDDP，可用于治疗辐射损伤的7聚体 肽是VLPAPLQ、VCNYRDV、CPRGVNP，可用于治疗辐射损伤的8聚体 肽是QPLAPLVG，以及可用于治疗辐射损伤的9聚体肽是DINGFLPAL。
参考文献
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