基于非损伤微测技术的水稻生理性青枯病评价方法
专利汇可以提供基于非损伤微测技术的水稻生理性青枯病评价方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 涉及一种 水 稻生理性青枯病的快速评价方法，所述方法采用非损伤微测技术检测水稻苗根部无机离子的离子流，所述离子流流向处于外流状态的水稻苗即为发生了生理性青枯病，所述无机离子为K+、NH4+、Ca2+中的一种或两种以上。本发明还提供了非损伤微测技术在检测水稻生理性青枯病中的用途。本发明所述的评价检测方法能够实现对水稻生理性青枯病的无损、活体、快速检测，发病水稻苗与正常水稻苗净离子流对比明显，检测一个样本只需要几分钟最多十几分钟，耗时短；相对于感官识别的评价方法，检测准确性高。本发明所述的检测方法简单、可靠，具有广泛的应用前景。，下面是基于非损伤微测技术的水稻生理性青枯病评价方法专利的具体信息内容。
1.一种水稻生理性青枯病的评价方法，其特征在于，采用非损伤微测技术检测水稻苗根部无机离子的离子流，所述离子流流向处于外流状态的水稻苗即为发生了生理性青枯+ + 2+
病，所述无机离子为K、NH4、Ca 中的一种或两种以上。
2.根据权利要求1所述的评价方法，其特征在于，所述非损伤微测技术中测试缓冲液中的测试离子浓度为0.05～0.15mM。
3.根据权利要求1所述的评价方法，其特征在于，所述水稻苗为2叶1心期水稻苗，测量位置为距所述水稻苗根尖300～500μm的根尖分生区的外表面20～50μm处。
4.根据权利要求1-3任一项所述的评价方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)向微电极末端灌入测试离子灌充液至充满所述电极尖端0.8～1.5cm，再将所述电极的前端吸入测试离子的液体离子交换剂；
(2)将经过步骤(1)处理后的电极套入已氯化的Ag/AgCl电极线基座，并放入校正液中校正；
(3)取待测水稻苗，将其根部先放在测试缓冲液中平衡20～50min，再用校正后的电极对待测水稻苗进行检测10～20min；
(4)对检测结果进行处理和分析。
5.根据权利要求4所述的评价方法，其特征在于，步骤(1)所述电极的前端吸入液体离子交换剂的长度为：
+
K ：150～200μm；
+
NH4 ：30～50μm；
2+
Ca ：10～30μm。
6.根据权利要求4所述的评价方法，其特征在于，步骤(1)所述灌充液为：
+
K ：80～120mM KCl；
+
NH4 ：80～120mM NH4Cl；
2+
Ca ：80～120mM CaCl2。
7.根据权利要求4所述的评价方法，其特征在于，步骤(2)所述的校正液为：
+
K ：0.05～0.15mM KCl和0.5～1.5mM KCl；
+
NH4 ：0.05～0.15mM NH4Cl和0.5～1.5mM NH4Cl；
2+
Ca ：0.05～0.15mM CaCl2和0.5～1.5mM CaCl2；
校正后电极的能斯特方程计算理想值为：
+
K ：55～60mV；
+
NH4 ：55～60Mv；
2+
Ca ：25～30mV。
8.根据权利要求4所述的评价方法，其特征在于，步骤(3)所述的测试缓冲液为：
+ 2+
K 或Ca ：0.05～0.15mM KCl、0.05～0.15mM CaCl2、0.05～0.15mMMgCl2、0.3～0.6mM NaCl、0.1～0.3mM Na2SO4、0.2～0.5mM MES；
+
NH4 ：0.8～1.2mM KCl、0.05～0.15mM CaCl2、0.05～0.15mMNH4Cl。
+
9.根据权利要求4所述的评价方法，其特征在于，所述K 离子流的流速为3～10pmol.-2 -1 + -2 -1 2+
cm .s ，NH4 离子流的流速为100～150pmol.cm .s ，Ca 离子流的流速为50～100pmol.-2 -1
cm .s 。
10.非损伤微测技术在评价水稻生理性青枯病中的用途。
基于非损伤微测技术的水稻生理性青枯病评价方法
技术领域
背景技术
50-52)；陈贵桂林等研究NaCl对白刺离子含量影响时也采用了原子吸收光谱法(陈贵林，王晨霞，陈建英NaCl胁迫对白刺试管苗渗透调节物质及离子含量的影响西北植物学报[J].2009，6：1233-1239)；董桃杏等检测茉莉酸甲酯对水稻叶片无机离子含量的影响时也采用了原子吸收光谱法，以上方法对于检测特定时间点材料中的离子含量是非常有效的，但是对离子进出植物材料的动态检测是无法实现的(董桃杏，蔡昆争：酸甲酯对水稻叶片质膜透性及无机离子含量的影响华北农学报[J].2010，25(1)：起止页码：136-140)。
2+ +
flux measuring technique，MIFE)测定了Ca 和K 流速，结合药理学和细胞学方法研究了植物整体的适应性反应，发现病毒对植物的抗逆性具有重要的作用(Plant，Cell and Environment，2011，34：406-417)。非损伤微测技术可以实现动态、不间断的对植物材料的检测，从而发现植物材料在不同环境及外界因素影响下的离子转运规律，从而判断植物所处的状态。
2+
&Environment，2005，28：1230-1246)；Shabala等利用非损伤微测技术研究盐胁迫下Ca 对
2+ +
拟南芥耐盐性的影响时发现：不同浓度的外源Ca 调节的NaCl引起的拟南芥根部K 外流(Shabala S，Demidchik V，Shabala L，Cuin TA，Smith SJ，Miller AJ，Davies JM，Newman
2+ +
IA：Extracellular Ca ameliorates NaCl-induced Kloss from Arabidopsisroot and leaf cells by controlling plasma membrane K+-permeable channels[J].Plant Physiol，2006，141(4)：1653-1665)。
发明内容
是必须的无机元素，正常水稻苗对NH4 是吸收的，而青枯病苗NH4 处于明显的外排；钙是植
2+
物必须的营养元素，同时也是植物体内信号转导途径的第二信使，正常水稻苗对Ca 是吸
2+ + + 2+
收的，而青枯病苗Ca 则处于明显的外排。因此，K、NH4 或Ca 的吸收和外排可作为判别水稻是否发生了生理性青枯病的依据。
具体实施方式
液中校正，其Nerst方程计算理想值分别是：K、NH4 ：58mV，Ca ：29mV。
123.78pmol.cm .s 。
86.61pmol.cm .s 。
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