一种β-甘露聚糖酶密码子优化序列及提高毕赤酵母工程菌表达水平的方法
专利汇可以提供一种β-甘露聚糖酶密码子优化序列及提高毕赤酵母工程菌表达水平的方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 涉及 生物 技术领域，具体公开了一种β-甘露聚糖酶密码子优化序列及提高毕赤 酵母 工程菌表达 水 平的方法。本发明为提高耐热酸性β-甘露聚糖酶Man5AS11R在毕赤酵母工程菌中的诱导表达量，首先应用Gene Designer(DNA2.0,Menlo Park,CA,USA) 软件 对man5AS11R基因的核苷酸序列进行密码子偏向性优化，通过pPIC9k-man5AS11R-opt重组载体，成功构建了毕赤酵母工程菌GS115/man5AS11R-opt。在此 基础 上，通过重组载体pPICZ-αA-vgb在菌株GS115/man5AS11R-opt中完成了血红蛋白VHb的共表达，显著促进了毕赤酵母工程菌 发酵 过程中的溶 氧 水平，提高了该工程菌发酵 密度 和产量，10L 发酵罐 发酵产酶达到20000U/mL以上，较原始菌株GS115/man5AS11R产量提高了一倍，显示了良好的产业化生产前景。，下面是一种β-甘露聚糖酶密码子优化序列及提高毕赤酵母工程菌表达水平的方法专利的具体信息内容。
1.一种耐热酸性β-甘露聚糖酶Man5AS11R针对毕赤酵母宿主菌的密码子优化序列，其特征在于，其序列如SEQ ID NO.1所示。
2.一种提高毕赤酵母工程菌表达水平的重组菌株构建方法，其特征在于如下步骤：
（1）对man5AS11R基因的核酸序列进行针对毕赤酵母菌的密码子优化，得到优化后的编码序列man5AS11R-opt；
（2）应用优化后序列man5AS11R-opt构建重组表达载体pPIC9k-man5AS11R-opt，并将其转化到毕赤酵母GS115中，得到重组表达菌株GS115/man5AS11R-opt；
（3）将透明颤菌的血红蛋白基因vgb合成到载体pPICZ-αA的多克隆位点中，将其转化到GS115/man5AS11R-opt工程菌中，得到高产工程菌GS115/man5AS11R-opt-VHb。
3.权利要求2所述的血红蛋白VHb序列由NCBI（GenBank AY278220）获得。
4.权利要求2所述高产工程菌GS115/man5AS11R-opt-VHb较原始菌株GS115/man5AS11R产量提高了一倍，10L发酵罐酶活可达到20000U/ml以上。
一种β-甘露聚糖酶密码子优化序列及提高毕赤酵母工程菌表
达水平的方法
技术领域
背景技术
发明内容
ACTGGTTTCTACGTTAACGGTGGTAAGTTGTACGACTCTACTGGTTGTCC 50
ATTCTACATCGTTGGTATCAACCACGGTCACTCTTGGTTCAAGAACGACA 100
CTGCTACTGCTATCCCAGCTATCGCTAAGACTGGTGCTAACACTGTTAGA 150
ATCGTTTTGTCTAACGGTACTCAATACACTAAGGACGACTTGAACTCTGT 200
TAAGAACATCATCAACTTGGCTGAAGAAAACAAGATCGACGCTGTTTTGG 250
AAGTTCACGACGCTACTGGTAAGGACGACTTCAACTCTTTGGACGCTGCT 300
GTTAACTACTGGATCTCTATCAAGGAAGCTTTGATCGGTAAGGAAGACAG 350
AGTTATCGTTAACATCGCTAACGAATGGTACGGTACTTGGAACGGTTCTG 400
CTTGGGCTGACGGTTACAAGAAGGCTATCCCAAAGTTGAGAGACGCTGGT 450
ATCAAGAACACTTTGATCGTTGACGCTGCTGGTTGGGGTCAATACCCACA 500
ATCTATCGTTGACTACGGTCAATCTGTTTTCGCTGCTGACTCTCAAAAGA 550
ACACTGCTTTCTCTATCCACATCTACGAATACGCTGGTAAGGACGCTGCT 600
ACTGTTAAGTCTAACATCGAAAACGTTTTGAACAAGGGTTTGGCTTTGAT 650
CGAAGGTGAATTCGGTGGTTACCACACTAACGGTGACGTTGACGAATACG 700
CTATCATCAAGTACGGTTTGGAAAAGGGTGTTGGTTGGTTGGCTTGGTCT 750
TGGTACGGTAACGGTATCAAGTGGAACTACTTGGACTTGGCTACTGGTCC 800
AAACGGTTCTTTGACTTCTTACGGTAACACTGTTGTTAACGACACTTACG 850
GTATCAAGAACACTTCTCAAAAGGCTGGTATCTTCTGTGGTGACGACGGT 900
GTTGGTGACGGTGGTCCAGGTGACTCTAACGGTACTAAGACTACTTTGTA 950
CAACTTCGAAACTGGTACTGAAGGTTGGTCTGGTAAGAACATCGAAACTG 1000
GTCCATGGTCTGTTAACGAATGGGCTGCTAAGGGTAACCACTCTTTGAAG 1050
GCTGACGTTAACTTGGGTGACAACTCTGAACACTACTTGAAGTTGACTCA 1100
AAACTTGAACTTCTCTGGTAAGTCTCAATTGACTGCTACTGTTAAGCACG 1150
CTGACTGGGGTAACTTCGGTGACGAAATCAACGCTAAGTTGTACGTTAAG 1200
ACTGAATCTGACTGGTAA 1218
（2）应用优化后序列man5AS11R-opt构建重组表达载体pPIC9k-man5AS11R-opt，并将其转化到毕赤酵母GS115中，得到重组表达菌株GS115/man5AS11R-opt；
（3）将透明颤菌的血红蛋白基因vgb（GenBank AY278220）合成到载体pPICZ-αA的多克隆位点中，将其转化到GS115/man5AS11R-opt工程菌中，得到高产工程菌GS115/man5AS11R-opt-VHb。
图3 Man5AS11R和VHb共表达的10L发酵罐产酶情况
图4 Man5AS11R密码子优化后和VHb共表达的10L发酵罐产酶情况。
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