一株可降解特定片段褐藻多糖的菌株
阅读：944发布：2020-05-08
专利汇可以提供一株可降解特定片段褐藻多糖的菌株专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 公开了一株可降解特定 片段 褐藻多糖的菌株，该菌株分离自腐烂的海带，分类命名为Bacillus sp.，其降解褐藻多糖得到的产物只有褐藻三糖和褐藻四糖，该菌株于2019年4月28日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M 2019312。本发明的有益之处在于：本发明提供的菌株可以将海藻酸钠降解成褐藻三糖和褐藻四糖，降解产物的聚合度种类只有两种，大大减少，方便进一步分离降解产物，从而得到单一 聚合物 的褐藻寡糖。，下面是一株可降解特定片段褐藻多糖的菌株专利的具体信息内容。
1.一株可降解特定片段褐藻多糖的菌株，其特征在于，该菌株分离自腐烂的海带，分类命名为Bacillus sp.，其降解褐藻多糖得到的产物只有褐藻三糖和褐藻四糖，该菌株于
2019年4月28日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M 2019312。
一株可降解特定片段褐藻多糖的菌株
技术领域
背景技术
[0003] 褐藻的细胞壁是褐藻胶主要存在的部位。
[0004] 褐藻胶裂解酶能通过β-消除反应催化褐藻胶降解产生褐藻胶寡糖，不同来源的褐藻胶裂解酶通过相同的方式作用于褐藻胶。褐藻胶寡糖具有多种生物活性，如：促进植物生长、提高植物抗逆性、抗氧化、抗菌、抗肿瘤等，在农业、功能食品开发、医药等领域具有广阔的开发前景。
[0005] 制备褐藻胶寡糖的方法主要是化学降解法和酶解法。化学降解法存在许多问题，如：操作步骤繁琐、需要使用刺激性的化学试剂、反应剧烈、易腐蚀设备、会造成环境污染、制备的褐藻胶寡糖产量较低等，而酶解法却具有反应更加温和、底物专一性强、产量较高、副产物少、环境友好等优势。因此，酶解法是目前制备褐藻胶寡糖的主要方法。
[0006] 使用酶解法来制备褐藻胶寡糖时，需要先获得褐藻胶裂解酶，再利用褐藻胶裂解酶对底物进行降解。
[0007] 使用现有的褐藻胶裂解酶降解底物（海藻酸钠）时，降解产物（褐藻寡糖）的聚合度种类繁多，降解产物含有褐藻二糖、褐藻三糖、褐藻四糖、褐藻五糖、褐藻六糖等。
发明内容
[0008] 为解决现有技术的不足，本发明的目的在于提供一株可降解特定片段褐藻多糖、使降解产物的聚合度种类只有两种的菌株。
[0009] 为了实现上述目标，本发明采用如下的技术方案：一株可降解特定片段褐藻多糖的菌株，其特征在于，该菌株分离自腐烂的海带，分类命名为Bacillus sp.，其降解褐藻多糖得到的产物只有褐藻三糖和褐藻四糖，该菌株于2019年4月28日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M 2019312。
[0011] 图1是菌株LE6的系统发育树；图2是褐藻胶寡糖粉末的薄层层析结果。
具体实施方式
[0012] 以下结合附图和具体实施例对本发明作具体的介绍。
[0013] 一、菌株的驯化和筛选经过对产酶菌种的经年研究，我们从腐烂的海带中分离得到了一株可降解特定片段褐藻多糖的菌株，该菌株具体是通过下面的方法筛选得到的：
2019年4月19日，我们从黄海海域采摘回来5棵腐烂的海带，将这5棵腐烂的海带分别均质后留清液，并将清液分别涂布于5个MAlg平板培养基上，这5个MAlg平板培养基分别记为LA、LB、LC、LD、LE，之后将这5个MAlg平板培养基于30℃恒温培养24h，然后将各平板培养基上的单菌落挑至新的MAlg平板培养基上，其中：
从标记为LA的平板培养基上挑出了5个单菌落，分别记为LA1、LA2、LA3、LA4、LA5；
从标记为LB的平板培养基上挑出了3个单菌落，分别记为LB1、LB2、LB3；
从标记为LC的平板培养基上挑出了6个单菌落，分别记为LC1、LC2、LC3、LC4、LC5、LC6；
从标记为LD的平板培养基上挑出了4个单菌落，分别记为LD1、LD2、LD3、LD4；
从标记为LE的平板培养基上挑出了6个单菌落，分别记为LE1、LE2、LE3、LE4、LE5、LE6；
然后，将这24个新的MAlg平板培养基于30℃恒温培养24h，之后从中挑选出降解圈最明显的那个单菌落，在这一步，我们从标记为LE6的MAlg平板培养基上挑选到了降解圈最明显的单菌落，我们将该单菌落对应的菌株记为LE6，最后将该单菌落挑至MAlg斜面培养基上并于-80℃保存。
2019年4月19日，我们从黄海海域采摘回来5棵腐烂的海带，将这5棵腐烂的海带分别均质后留清液，并将清液分别涂布于5个MAlg平板培养基上，这5个MAlg平板培养基分别记为LA、LB、LC、LD、LE，之后将这5个MAlg平板培养基于30℃恒温培养24h，然后将各平板培养基上的单菌落挑至新的MAlg平板培养基上，其中：
从标记为LA的平板培养基上挑出了5个单菌落，分别记为LA1、LA2、LA3、LA4、LA5；
从标记为LB的平板培养基上挑出了3个单菌落，分别记为LB1、LB2、LB3；
从标记为LC的平板培养基上挑出了6个单菌落，分别记为LC1、LC2、LC3、LC4、LC5、LC6；
从标记为LD的平板培养基上挑出了4个单菌落，分别记为LD1、LD2、LD3、LD4；
从标记为LE的平板培养基上挑出了6个单菌落，分别记为LE1、LE2、LE3、LE4、LE5、LE6；
然后，将这24个新的MAlg平板培养基于30℃恒温培养24h，之后从中挑选出降解圈最明显的那个单菌落，在这一步，我们从标记为LE6的MAlg平板培养基上挑选到了降解圈最明显的单菌落，我们将该单菌落对应的菌株记为LE6，最后将该单菌落挑至MAlg斜面培养基上并于-80℃保存。
[0015] 二、菌株LE6的鉴定我们用试剂盒抽提法提取了菌株LE6的DNA，然后经PCR扩增获得了菌株LE6的16SrDNA，运用NCBI中的Blast 程序与数据库中的细菌16S rDNA序列进行了相似性比对，比对结果：
菌株LE6为芽孢杆菌（Bacillus sp.）。
菌株LE6为芽孢杆菌（Bacillus sp.）。
[0016] 获得菌株LE6的16SrDNA后，我们又用MEGA 5.1 软件（Neighbor-Joining）构建了该菌株的系统发育树（如图1所示），并分析了各菌株的进化关系，分析结果：菌株LE6为芽孢杆菌属。
[0020] Step1：制备种子液先将菌株LE6于Alg平板培养基上活化，然后挑取2环接种于种子培养基（100mL）中，30℃、200rpm发酵培养24h，得到种子液。
[0021] Step2：发酵产酶按2%（体积分数）的接种量将种子液接种到发酵培养基（100mL）中，30℃、200rpm发酵培养24h，得到发酵液。
[0022] Step3：制备粗酶液将发酵液在4℃下8000rpm离心10min，除去菌体，得到粗酶液。
[0023] Step4：酶解（降解）配制褐藻胶溶液：将海藻酸钠加入到磷酸盐缓冲溶液（PBS）中，海藻酸钠的浓度为3g/L。
[0024] 将粗酶液以1:9的体积比加入到褐藻胶溶液中，在35℃下酶解22h，得到褐藻胶寡糖溶液。
[0026] 四、产物检测我们利用薄层层析法（TLC）对得到的褐藻胶寡糖粉末进行了初步的检测，具体的：
使用 Silica Gel 60 F254 硅胶板（德国默克），上样量为8 µL，展开剂体系为正丁醇: 甲酸: 水=4:5:1（V:V:V），将硅胶板置于层析缸中进行两次展开，每次展开后室温下风干，用硫酸: 乙醇=1:9（V:V）作为显色剂，再次风干后，置于80℃烘箱烘干半小时。
使用 Silica Gel 60 F254 硅胶板（德国默克），上样量为8 µL，展开剂体系为正丁醇: 甲酸: 水=4:5:1（V:V:V），将硅胶板置于层析缸中进行两次展开，每次展开后室温下风干，用硫酸: 乙醇=1:9（V:V）作为显色剂，再次风干后，置于80℃烘箱烘干半小时。
[0027] 薄层层析的结果见图2。
[0028] 由图2可知，降解产物只有褐藻三糖和褐藻四糖。
[0029] 由此可见，本发明提供的菌株LE6可降解特定片段褐藻多糖，降解产物只有褐藻三糖和褐藻四糖，大大减少了降解产物的聚合度种类，更方便进一步分离降解产物，从而可以更容易得到单一聚合物的褐藻寡糖。
[0030] 五、菌种保藏由前面的研究可知，菌株LE6可降解特定片段褐藻多糖，降解产物只有褐藻三糖和褐藻四糖，大大减少了降解产物的聚合度种类，更方便进一步分离降解产物，从而可以更容易得到单一聚合物的褐藻寡糖，在实际生产应用中具有积极的意义，所以我们对菌株LE6进行了保藏，保藏日期为2019年4月28日，保藏单位为中国典型培养物保藏中心，保藏地址为中国武汉，保藏编号为CCTCC NO：M 2019312，分类命名为芽孢杆菌属（Bacillus sp.）LE6。
[0031] 需要说明的是，上述实施例不以任何形式限制本发明，凡采用等同替换或等效变换的方式所获得的技术方案，均落在本发明的保护范围内。
| 标题 | 发布/更新时间 | 阅读量 |
|---|---|---|
| 一种带有slice空洞的进位链构造及测试方法 | 2020-05-08 | 434 |
| 一种重组蛋白G3P20-31及其制备方法和应用 | 2020-05-08 | 544 |
| 垃圾投递行为监督方法及相关产品 | 2020-05-08 | 515 |
| 人类肠道病原菌感染诊断用伤寒沙门菌特异性基因探针 | 2020-05-08 | 269 |
| 一种篮球进球时刻防守区域自动生成方法及系统 | 2020-05-08 | 906 |
| 一种扩增靶核酸的方法 | 2020-05-08 | 783 |
| 用于降低生物制剂粘度的化合物 | 2020-05-08 | 58 |
| 视频解码器设备及视频编码器设备 | 2020-05-11 | 513 |
| 癌症相关的免疫抑制抑制剂 | 2020-05-08 | 337 |
| 一种便于清理的去离子水箱 | 2020-05-11 | 704 |
高效检索全球专利专利汇是专利免费检索,专利查询,专利分析-国家发明专利查询检索分析平台，是提供专利分析，专利查询，专利检索等数据服务功能的知识产权数据服务商。
我们的产品包含105个国家的1.26亿组数据，免费查、免费专利分析。
分析报告
专利汇分析报告产品可以对行业情报数据进行梳理分析，涉及维度包括行业专利基本状况分析、地域分析、技术分析、发明人分析、申请人分析、专利权人分析、失效分析、核心专利分析、法律分析、研发重点分析、企业专利处境分析、技术处境分析、专利寿命分析、企业定位分析、引证分析等超过60个分析角度，系统通过AI智能系统对图表进行解读，只需1分钟，一键生成行业专利分析报告。
QQ群二维码
意见反馈
意见反馈