一种刺梨的炮制方法及多指标检测方法
阅读：324发布：2020-07-26
专利汇可以提供一种刺梨的炮制方法及多指标检测方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 公开了一种刺梨的炮制方法及多指标检测方法；刺梨为贵州省民族药材，含有丰富的营养物质，具有多重药理活性，全身是宝，但是目前刺梨的检测方法比较简单，难以控制刺梨的 质量 ，本发明通过制定能反应其性能特征的控制指标，所提供的检测方法简便、快速、重现性及 稳定性 好；所提供的炮制方法有助于保存刺梨中维生素C等有效成分。，下面是一种刺梨的炮制方法及多指标检测方法专利的具体信息内容。
1.一种刺梨的多指标检测方法，其特征在于：所述检测方法包括理化鉴别、对没食子酸的薄层鉴别，对水分、总灰分及砷和汞的检查，对醇浸出物的测定，对维生素C、总黄酮、总多酚和氨基酸的含量测定方法。
2.根据权利要求1所述刺梨的多指标检测方法，其特征在于：所述对没食子酸的薄层鉴别方法为：取刺梨粉末，加无水乙醇80-120HZ超声提取1-3次，过滤，滤液蒸干，加水溶解，过滤，滤液用乙酸乙酯萃取1-3次，合并萃取液，水浴加热蒸干，用甲醇溶解，作为供试品溶液；再取没食子酸对照品加甲醇溶解，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述溶液，点于同一聚酰胺薄膜板上，以乙酸乙酯∶丁酮∶甲酸∶水＝
5-15∶0.5-2∶0.5-2∶0.5-2为展开剂，展开，取出，晾干，喷2％的Fecl3-乙醇试剂显色，在与对照品色谱相应的位置上显相同的蓝紫色斑点。
3.根据权利要求2所述刺梨的多指标检测方法，其特征在于：所述对没食子酸的薄层鉴别方法为：精密称取刺梨粉末2g，加30mL无水乙醇100HZ超声提取30min，共2次，过滤，滤液蒸干，加水20mL溶解，过滤，滤液用乙酸乙酯20mL萃取，共2次，合并萃取液，80℃水浴加热蒸干，2mL甲醇溶解，作为供试品溶液；再取没食子酸对照品加甲醇，制成1mL含2mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述溶液5μL，点于同一聚酰胺薄膜板上，以乙酸乙酯∶丁酮∶甲酸∶水＝10∶1∶1∶1为展开剂，展开，取出，晾干，喷
2％的Fecl3-乙醇试剂显色，在与对照品色谱相应的位置上显相同的蓝紫色斑点。
4.根据权利要求1所述刺梨的多指标检测方法，其特征在于：所述对维生素C的含量测定方法为：照中国药典高效液相色谱法测定；
色谱条件与系统适用性试验：迪马C18钻石柱4.6mm×250mm，5μm；柱温：30℃，以
0.1mol/L磷酸二氢钾∶甲醇＝80-99∶20-1为流动相，流速1.0mL/min，检测波长245nm；
对照品溶液的制备：称取维生素C对照品，精密称定，加0.5-5％的偏磷酸，超声使溶解，加水定容，制成每1mL含0.02mg的溶液，即得；
供试品溶液的制备：精密称取刺梨粉末0.4g，加0.5-3％偏磷酸50mL，称重，超声提取，放冷至室温，补足减失重量，过滤，弃去初滤液，精密量取续滤液1mL至25mL容量瓶中，水定容至刻度，0.45μm微孔滤膜过滤，即得；
测定法：取对照品溶液、供试品溶液，分别进样，测定，即得。
5.根据权利要求4所述刺梨的多指标检测方法，其特征在于：所述对维生素C的含量测定方法为：照中国药典高效液相色谱法测定；
色谱条件与系统适用性试验：迪马C18钻石柱4.6mm×250mm，5μm；柱温：30℃，以
0.1mol/L磷酸二氢钾∶甲醇＝97∶3为流动相，流速：1.0mL/min，检测波长：245nm；
对照品溶液的制备：精密称取维生素C对照品12.5mg，加1％的偏磷酸5mL，超声30秒溶解，加水定容至50ml容量瓶中，摇匀，制成每1mL含0.02mg的溶液，即得；
供试品溶液的制备：精密称取刺梨粉末0.4g，加1％偏磷酸50mL，称重，超声提取15分钟，放冷至室温，补足减失重量，过滤，弃去初滤液，精密量取续滤液1mL至25mL容量瓶中，水定容至刻度，0.45μm微孔滤膜过滤，即得；
测定法：取对照品溶液、供试品溶液，分别进样10μL，测定，即得。
6.根据权利要求1所述刺梨的多指标检测方法，其特征在于：所述对总黄酮的含量测定方法为：采用三氯化铝比色法测定；
对照品溶液的制备：精密称取芦丁对照品，加乙醇溶解，摇匀，制成每1mL含0.5mg的溶液，即得；
标准曲线的制备：精密吸取芦丁对照品溶液0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mL分别置10mL容量瓶中，各加0.05-5mol/L的三氯化铝溶液1-5mL，0.1-1mol/L的NaAC缓冲溶液0.5-5mL，NaAC缓冲溶液先用HAC调pH＝4-7，用乙醇定容至刻度，摇匀，室温静置10-60min，以相应试剂为空白，照中国药典紫外分光光度法，在406nm波长下测吸光度；以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线；
测定法：称取刺梨粉0.5g，置25mL平底烧瓶中，精密称定，加50-85％乙醇10-50mL，
50-90℃超声提取0.5-3h，过滤，滤液定容至25mL容量瓶中，摇匀；精密吸取供试品溶液
2mL，加0.05-5mol/L的三氯化铝溶液1-5mL，0.1-1mol/L的NaAC缓冲溶液0.5-5mL，NaAC缓冲溶液先用HAC调pH＝4-7，用乙醇定容至刻度，摇匀，室温静置10-60min，以相应试剂为空白，照中国药典紫外分光光度法，在406nm波长下测吸光度值，从标准曲线上读出供试品溶液中含芦丁的重量μg，计算，即得。
7.根据权利要求6所述刺梨的多指标检测方法，其特征在于：所述对总黄酮的含量测定方法为：采用三氯化铝比色法测定；
对照品溶液的制备：称取芦丁对照品25mg，置50mL容量瓶中，精密称定，加乙醇溶解定容至刻度，摇匀，制成每1mL含0.5mg的溶液，即得；
标准曲线的制备：精密吸取芦丁对照品溶液0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mL分别置10mL容量瓶中，各加0.1mol/L的三氯化铝溶液2mL，0.2mol/L的NaAC缓冲溶液1mL，NaAC缓冲溶液先用HAC调pH＝5.1，用乙醇定容至刻度，摇匀，室温静置30min，以相应试剂为空白，照中国药典紫外分光光度法，在406nm波长下测吸光度；以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线；
测定法：称取刺梨粉0.5g，置25mL平底烧瓶中，精密称定，加65％乙醇20mL，70℃超声提取1h，过滤，滤液定容至25mL容量瓶中，摇匀；精密吸取供试品溶液2mL，加0.1mol/L的三氯化铝溶液2mL，0.2mol/L的NaAC缓冲溶液1mL，NaAC缓冲溶液先用HAC调pH＝5.1，用乙醇定容至刻度，摇匀，室温静置30min，以相应试剂为空白，照中国药典紫外分光光度法，在406nm波长下测吸光度值，从标准曲线上读出供试品溶液中含芦丁的重量μg，计算，即得。
8.根据权利要求1所述刺梨的多指标检测方法，其特征在于：所述对总多酚的含量测定方法为：采用Folin-Denis法测定；
对照品溶液的制备：称取没食子酸对照品，精密称定，加50-80％乙醇溶解制成每1mL中含没食子酸24μg，即得；
标准曲线的制备：精密吸取24ug/mL的没食子酸对照溶液2mL、3mL、4mL、5mL、6mL、7mL置25mL容量瓶中，加磷钼酸显色剂1-5mL，2-10％Na2CO32-10mL，水定容至刻度，70℃水浴加热20-100min，以相应试剂作空白，照中国药典紫外分光光度法，在758nm处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线；
测定法：称取刺梨粉0.2g，置25mL平底烧瓶中，精密称定，加50-80％乙醇15mL，100HZ超声提取10-60min，过滤，合并滤液，至50mL容量瓶中，水定容至刻度，摇匀；精密量取取供试品溶液0.2mL置25mL容量瓶中，加磷钼酸显色剂1-5mL，2-10％Na2CO32-10mL，水定容至刻度，70℃水浴加热20-100min，以相应试剂作空白，照中国药典紫外分光光度法，在758nm处测定吸光度值，从标准曲线上读出供试品溶液中含芦丁的重量μg，计算，即得。
9.根据权利要求8所述刺梨的多指标检测方法，其特征在于：所述对总多酚的含量测定方法为：采用Folin-Denis法测定；
对照品溶液的制备：称取没食子酸对照品60mg精密称定，置50mL容量瓶中，加60％乙醇溶解定容至刻度摇匀；精密量取1mL，置50mL容量瓶中，加60％乙醇定容至刻度摇匀，即可；
标准曲线的制备：精密吸取24ug/mL的没食子酸对照溶液2mL、3mL、4mL、5mL、6mL、7mL置25mL容量瓶中，加磷钼酸显色剂3mL，7％Na2CO35mL，水定容至刻度，70℃水浴加热40min，以相应试剂作空白，照中国药典紫外分光光度法，在758nm处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线；
测定法：称取刺梨粉0.2g，置25mL平底烧瓶中，精密称定，加60％乙醇15mL，100HZ超声提取30min，共1次，过滤，合并滤液，至50mL容量瓶中，水定容至刻度，摇匀；精密量取取供试品溶液0.2mL置25mL容量瓶中，加磷钼酸显色剂3mL，7％Na2CO35mL水定容至刻度，
70℃水浴加热40min，以相应试剂作空白，照中国药典紫外分光光度法，在758nm处测定吸光度值，从标准曲线上读出供试品溶液中含芦丁的重量μg，计算，即得。
10.根据权利要求1所述刺梨的多指标检测方法，其特征在于：所述对氨基酸的含量测定方法为：采用反相高效液相色谱-柱前衍生化法测定；
色谱条件：Venusil-AA氨基酸分析柱4.6×250mm，5μm，流速1.0mL，检测波长254nm，柱温40℃，流动相80％乙腈-醋酸钠-HAc缓冲液，PH＝6.5，梯度洗脱，A泵醋酸钠-HAc缓冲液，B泵80％乙腈；
对照品溶液的制备：准确量取氨基酸混合标准溶液200μL，置离心管中，精密加入正亮氨酸内标溶液10-30μL，三乙胺乙腈溶液50-200μL，异硫氰酸苯酯乙腈溶液50-200μL混匀，室温放置0.5-3小时，然后加入正己烷200-500μL，振摇后放置5-30分钟，取下层溶液，0.45μm针式微孔滤膜滤器过滤，即得；
样品溶液的制备：精密称取刺梨样品置水解管中，精密加入2-10mol/L盐酸2-10mL，封口，置80-150℃恒温干燥箱中消化水解10-50小时，旋转蒸发仪蒸干溶剂，精密量取2-10mL水超声溶解，过滤，取续滤液100-300μL置1mL离心管中，精密加入正亮氨酸内标溶液
10-50μL，三乙胺乙腈，异硫氰酸苯酯乙腈溶液各50-200μL，混匀，室温放置0.5-3小时，然后加正己烷200-500μL，振摇后放置5-30分钟，取下层溶液用0.45μm微孔滤膜过滤，即得；
测定法：将氨基酸混合标准溶液与样品溶液分别上机测定，即得。
11.根据权利要求10所述刺梨的多指标检测方法，其特征在于：所述对氨基酸的含量测定方法为：采用反相高效液相色谱-柱前衍生化法测定；
色谱条件：Venusil-AA氨基酸分析柱(4.6×250mm，5μm)，流速1.0mL，检测波长
254nm，柱温40℃，流动相80％乙腈-醋酸钠-HAc缓冲液(PH＝6.5)梯度洗脱，A泵醋酸钠-HAc缓冲液，B泵80％乙腈；
对照品溶液的制备：准确量取氨基酸混合标准溶液200μL，置1mL离心管中，精密加入正亮氨酸内标溶液20μL，三乙胺乙腈溶液100μL，异硫氰酸苯酯乙腈溶液100μL混匀，室温放置1小时，然后加入正己烷400μL，振摇后放置10分钟，取下层溶液，0.45μm针式微孔滤膜滤器过滤，即得；
样品溶液的制备：精密称取刺梨样品置水解管中，精密加入6mol/L盐酸4mL，封口，置
110℃恒温干燥箱中消化水解22小时，旋转蒸发仪蒸干溶剂，精密量取5mL水超声溶解，过滤，取续滤液200μL置1mL离心管中，精密加入正亮氨酸内标溶液20μL，三乙胺乙腈，异硫氰酸苯酯乙腈溶液各100μL，混匀，室温放置1小时，然后加正己烷400μL，振摇后放置10分钟，取下层溶液用0.45μm微孔滤膜过滤，即得；
测定法：将氨基酸混合标准溶液与样品溶液分别上机测定，即得。
12.根据权利要求10或11所述刺梨的多指标检测方法，其特征在于：所述氨基酸为天门冬氨酸、谷氨酸、丝氨酸、甘氨酸、组氨酸、精氨酸，苏氨酸、丙氨酸、脯氨酸、酪氨酸、缬氨酸、蛋氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸和赖氨酸。
13.根据权利要求1所述刺梨的多指标检测方法，其特征在于：所述刺梨的检测方法为：
【性状】本品呈扁球形，直径3-4cm，表面黄绿色或黄褐色，少数带红晕，被有密刺，有的具褐色斑点，顶端有宿鄂5瓣，黄褐色，密生细刺；纵剖面观，果肉黄白色，脆；种子多数，着生于鄂筒基部凸起的花托上，卵圆形，浅黄色，骨质，直径0.15-0.3cm，气微香，味酸甜，微涩；鲜果汁呈深棕色，味微甜，涩；
【鉴别】(1)取刺梨鲜果汁2ml，加碱性酒石酸铜试液，置水浴上加热数分钟后，产生红色沉淀；
(2)取刺梨新鲜果汁点于滤纸上，滴加茚三酮试液，100℃烘烤约3-5分钟，产生蓝色；
(3)精密称取刺梨粉末2g，加30mL无水乙醇100HZ超声提取30min，共2次，过滤，滤液蒸干，加水20mL溶解，过滤，滤液用乙酸乙酯20mL萃取，共2次，合并萃取液，80℃水浴加热蒸干，2mL甲醇溶解，作为供试品溶液；再取没食子酸对照品加甲醇，制成1mL含2mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述溶液5μL，点于同一聚酰胺薄膜板上，以乙酸乙酯∶丁酮∶甲酸∶水＝10∶1∶1∶1为展开剂，展开，取出，晾干，喷
2％的Fecl3-乙醇试剂显色，在与对照品色谱相应的位置上显相同的蓝紫色斑点；
【检查】水分：照中国药典水分检测法检测，不得过14.0％；
总灰分：照中国药典总灰分检测法检测，不得过6.0％；
砷的测定：采用原子荧光法测定，取刺梨，粉碎，过3号筛，取样品1.0g精密称定，于
250mL的锥形瓶中，加入硝酸16mL、高氯酸4mL，摇动使样品充分接触酸液，静置过夜；次日置于可调温电热板上，先低于100V加热，随着温度的升高，有大量的红棕色气体逸出，当红棕色气体的量减少时可以提高温度继续消化至大量冒白烟，以赶尽HNO3，直至消化完全；当消解液完全蒸干时，取下冷却至室温；小心加入2.5mL浓盐酸，用超纯水转移至50mL容量瓶中，再加入5mL10％的硫脲，超纯水定容至50mL，摇匀，45℃加热30min并冷却至室温后上机测定；
汞的测定：采用原子荧光法测定，取刺梨，粉碎，过3号筛，准确称取样品0.3g于聚四氟乙烯塑料内罐中，加入4mL浓硝酸和2mL30％的过氧化氢，置于100℃水浴锅中煮沸1小时，赶尽NO2；取出冷却至室温，加盖并旋紧密封，然后将高压消解罐放在恒温干燥箱内，升温至
140℃后保持恒温3h，保证消解完全，将高压消解罐拿出自然冷却到室温，小心打开高压消解罐，将聚四氟乙烯塑料内罐中的消解液用4％的盐酸溶液转移到50mL容量瓶，并用盐酸溶液定容，摇匀，室温下放置30min后上机测定；
【浸出物】醇溶性浸出物：照中国药典醇溶性浸出物测定法项下的热浸法测定，用70％的乙醇作溶剂，不得少于40.04％；
【含量测定】
维生素C照中国药典高效液相色谱法测定；
色谱条件与系统适用性试验：迪马C18钻石柱4.6mm×250mm，5μm；柱温：30℃，以
0.1mol/L磷酸二氢钾∶甲醇＝97∶3为流动相，流速：1.0mL/min，检测波长：245nm；
对照品溶液的制备：精密称取维生素C对照品12.5mg，加1％的偏磷酸5mL，超声30秒溶解，加水定容至50ml容量瓶中，摇匀，制成每1mL含0.02mg的溶液，即得；
供试品溶液的制备：精密称取刺梨粉末0.4g，加1％偏磷酸50mL，称重，超声提取15分钟，放冷至室温，补足减失重量，过滤，弃去初滤液，精密量取续滤液1mL至25mL容量瓶中，水定容至刻度，0.45μm微孔滤膜过滤，即得；
测定法：取对照品溶液、供试品溶液，分别进样10μL，测定，即得；
总黄酮采用三氯化铝比色法测定；
对照品溶液的制备：称取芦丁对照品25mg，置50mL容量瓶中，精密称定，加乙醇溶解定容至刻度，摇匀，制成每1mL含0.5mg的溶液，即得；
标准曲线的制备：精密吸取芦丁对照品溶液0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mL分别置10mL容量瓶中，各加0.1mol/L的三氯化铝溶液2mL，0.2mol/L的NaAC缓冲溶液1mL，NaAC缓冲溶液先用HAC调pH＝5.1，用乙醇定容至刻度，摇匀，室温静置30min，以相应试剂为空白，照中国药典紫外分光光度法，在406nm波长下测吸光度；以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线；
测定法：称取刺梨粉0.5g，置25mL平底烧瓶中，精密称定，加65％乙醇20mL，70℃超声提取1h，过滤，滤液定容至25mL容量瓶中，摇匀；精密吸取供试品溶液2mL，加0.1mol/L的三氯化铝溶液2mL，0.2mol/L的NaAC缓冲溶液1mL，NaAC缓冲溶液先用HAC调pH＝5.1，用乙醇定容至刻度，摇匀，室温静置30min，以相应试剂为空白，照中国药典紫外分光光度法，在406nm波长下测吸光度值，从标准曲线上读出供试品溶液中含芦丁的重量μg，计算，即得；
总多酚采用Folin-Denis法测定；
对照品溶液的制备：称取没食子酸对照品60mg精密称定，置50mL容量瓶中，加60％乙醇溶解定容至刻度摇匀；精密量取1mL，置50mL容量瓶中，加60％乙醇定容至刻度摇匀，即可；
标准曲线的制备：精密吸取24ugmg/mL的没食子酸对照溶液2mL、3mL、4mL、5mL、6mL、
7mL置25mL容量瓶中，加磷钼酸显色剂3mL，7％Na2CO35mL水定容至刻度，70℃水浴加热
40min，以相应试剂作空白，照中国药典紫外分光光度法，在758nm处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线；
测定法：称取刺梨粉0.2g，置25mL平底烧瓶中，精密称定，加60％乙醇15mL，100HZ超声提取30min，共1次，过滤，合并滤液，至50mL容量瓶中，水定容至刻度，摇匀；精密量取取供试品溶液0.2mL置25mL容量瓶中，加磷钼酸显色剂3mL，7％Na2CO35mL水定容至刻度，
70℃水浴加热40min，以相应试剂作空白，照中国药典紫外分光光度法，在758nm处测定吸光度值，从标准曲线上读出供试品溶液中含芦丁的重量μg，计算，即得。
14.一种刺梨的炮制方法，其特征在于：所述炮制方法为：先在沸水上蒸1-10min，取出，间歇式微波干燥20-60min，干燥时真空度为0.075MPa，功率800-3000w，即得。
一种刺梨的炮制方法及多指标检测方法
技术领域：
[0001] 本发明涉及一种刺梨的炮制方法及多指标检测方法。背景技术：
[0002] 刺梨为蔷薇科植物缫丝花Rosae roxburghii Tratt.f.normalis Rehd.et Wils.及单瓣缫丝花Rosae roxburghii Tratt.的果实。9-10月采收，鲜用或晒干。刺梨含有丰富的活性物质，其药理作用广泛。早在很久以前民间就将其果实及根入药，用于消食健脾、收敛止泻与解暑，随着社会的不断进步，医疗、保健意识逐渐深入人心。而刺梨丰富的营养活性成分、良好的医疗保健作用及其独特的高原、无污染的生存环境等得天独厚的优势，使人们对刺梨倍加宠爱。
[0003] 刺梨作为贵州省少数民族用药，收载于2003版《贵州省中药材、民族药材质量标准》中，该标准中，关于刺梨的质量检测项仅有性状及简单的显色反应，缺少特异性的定性、定量指标，质量检测不够完善，可控性差，难以控制刺梨质量的优劣，严重影响刺梨的合理开发和应用及临床用药的安全有效，因此刺梨质量检测的完善和提高亟待解决。 发明内容：
[0004] 本发明所要解决的技术问题在于：提供一种刺梨的多指标检测方法；本发明所要解决的另一个技术问题在于：提供一种刺梨的炮制方法；刺梨具有很高的营养价值和医疗价值，本发明通过制定能反应其性能特征的质量检测指标，确保其安全性、有效性和稳定性。
[0006] 所述对没食子酸的薄层鉴别方法为：取刺梨粉末，加无水乙醇80-120HZ超声提取1-3次，过滤，滤液蒸干，加水溶解，过滤，滤液用乙酸乙酯萃取1-3次，合并萃取液，水浴加热蒸干，用甲醇溶解，作为供试品溶液；再取没食子酸对照品加甲醇溶解，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述溶液，点于同一聚酰胺薄膜板上，以乙酸乙酯∶丁酮∶甲酸∶水＝5-15∶0.5-2∶0.5-2∶0.5-2为展开剂，展开，取出，晾干，喷2％的Fecl3-乙醇试剂显色，在与对照品色谱相应的位置上显相同的蓝紫色斑点。 [0007] 具体地说，所述对没食子酸的薄层鉴别方法为：精密称取刺梨粉末2g，加30mL无水乙醇100HZ超声提取30min，共2次，过滤，滤液蒸干，加水20mL溶解，过滤，滤液用乙酸乙酯20mL萃取，共2次，合并萃取液，80℃水浴加热蒸干，2mL甲醇溶解，作为供试品溶液；再取没食子酸对照品加甲醇，制成1mL含2mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述溶液5μL，点于同一聚酰胺薄膜板上，以乙酸乙酯∶丁酮∶甲酸∶水＝
10∶1∶1∶1为展开剂，展开，取出，晾干，喷2％的Fecl3-乙醇试剂显色，在与对照品色谱相应的位置上显相同的蓝紫色斑点。
10∶1∶1∶1为展开剂，展开，取出，晾干，喷2％的Fecl3-乙醇试剂显色，在与对照品色谱相应的位置上显相同的蓝紫色斑点。
[0008] 所述对维生素C的含量测定方法为：照中国药典高效液相色谱法测定； [0009] 色谱条件与系统适用性试验：迪马C18钻石柱4.6mm×250mm，5μm；柱温：30℃，以0.1mol/L磷酸二氢钾∶甲醇＝80-99∶20-1为流动相，流速1.0mL/min，检测波长245nm； [0010] 对照品溶液的制备：称取维生素C对照品，精密称定，加0.5-5％的偏磷酸，超声使溶解，加水定容，制成每1mL含0.02mg的溶液，即得；
[0011] 供试品溶液的制备：精密称取刺梨粉末0.4g，加0.5-3％偏磷酸50mL，称重，超声提取，放冷至室温，补足减失重量，过滤，弃去初滤液，精密量取续滤液1mL至25mL容量瓶中，水定容至刻度，0.45μm微孔滤膜过滤，即得；
[0012] 测定法：取对照品溶液、供试品溶液，分别进样，测定，即得。
[0013] 具体地说，所述对维生素C的含量测定方法为：照中国药典高效液相色谱法测定； [0014] 色谱条件与系统适用性试验：迪马C18钻石柱4.6mm×250mm，5μm；柱温：30℃，以0.1mol/L磷酸二氢钾∶甲醇＝97∶3为流动相，流速：1.0mL/min，检测波长：245nm； [0015] 对照品溶液的制备：精密称取维生素C对照品12.5mg，加1％的偏磷酸5mL，超声
30秒溶解，加水定容至50ml容量瓶中，摇匀，制成每1mL含0.02mg的溶液，即得； [0016] 供试品溶液的制备：精密称取刺梨粉末0.4g，加1％偏磷酸50mL，称重，超声提取
15分钟，放冷至室温，补足减失重量，过滤，弃去初滤液，精密量取续滤液1mL至25mL容量瓶中，水定容至刻度，0.45μm微孔滤膜过滤，即得；
30秒溶解，加水定容至50ml容量瓶中，摇匀，制成每1mL含0.02mg的溶液，即得； [0016] 供试品溶液的制备：精密称取刺梨粉末0.4g，加1％偏磷酸50mL，称重，超声提取
15分钟，放冷至室温，补足减失重量，过滤，弃去初滤液，精密量取续滤液1mL至25mL容量瓶中，水定容至刻度，0.45μm微孔滤膜过滤，即得；
[0019] 对照品溶液的制备：精密称取芦丁对照品，加乙醇溶解，摇匀，制成每1mL含0.5mg的溶液，即得；
[0020] 标准曲线的制备：精密吸取芦丁对照品溶液0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mL分别置10mL容量瓶中，各加0.05-5mol/L的三氯化铝溶液1-5mL，0.1-1mol/L的NaAC缓冲溶液0.5-5mL，NaAC缓冲溶液先用HAC调pH＝4-7，用乙醇定容至刻度，摇匀，室温静置10-60min，以相应试剂为空白，照中国药典紫外分光光度法，在406nm波长下测吸光度；以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线；
[0021] 测定法：称取刺梨粉0.5g，置25mL平底烧瓶中，精密称定，加50-85％乙醇10-50mL，50-90℃超声提取0.5-3h，过滤，滤液定容至25mL容量瓶中，摇匀；精密吸取供试品溶液2mL，加0.05-5mol/L的三氯化铝溶液1-5mL，0.1-1mol/L的NaAC缓冲溶液0.5-5mL，NaAC缓冲溶液先用HAC调pH＝4-7，用乙醇定容至刻度，摇匀，室温静置10-60min，以相应试剂为空白，照中国药典紫外分光光度法，在406nm波长下测吸光度值，从标准曲线上读出供试品溶液中含芦丁的重量μg，计算，即得。
[0022] 具体地说，所述对总黄酮的含量测定方法为：采用三氯化铝比色法测定； [0023] 对照品溶液的制备：称取芦丁对照品25mg，置50mL容量瓶中，精密称定，加乙醇溶解定容至刻度，摇匀，制成每1mL含0.5mg的溶液，即得；
[0024] 标准曲线的制备：精密吸取芦丁对照品溶液0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mL分别置10mL容量瓶中，各加0.1mol/L的三氯化铝溶液2mL，0.2mol/L的NaAC缓冲溶液1mL，NaAC缓冲溶液先用HAC调pH＝5.1，用乙醇定容至刻度，摇匀，室温静置30min，以相应试剂为空白，照中国药典紫外分光光度法，在406nm波长下测吸光度；以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线；
[0025] 测定法：称取刺梨粉0.5g，置25mL平底烧瓶中，精密称定，加65％乙醇20mL，70℃超声提取1h，过滤，滤液定容至25mL容量瓶中，摇匀；精密吸取供试品溶液2mL，加0.1mol/L的三氯化铝溶液2mL，0.2mol/L的NaAC缓冲溶液1mL，NaAC缓冲溶液先用HAC调pH＝5.1，用乙醇定容至刻度，摇匀，室温静置30min，以相应试剂为空白，照中国药典紫外分光光度法，在406nm波长下测吸光度值，从标准曲线上读出供试品溶液中含芦丁的重量μg，计算，即得。
[0026] 所述对总多酚的含量测定方法为：采用Folin-Denis法测定；
[0027] 对照品溶液的制备：称取没食子酸对照品，精密称定，加50-80％乙醇溶解制成每1mL中含没食子酸24μg，即得；
[0028] 标准曲线的制备：精密吸取24ug/mL的没食子酸对照溶液2mL、3mL、4mL、5mL、6mL、7mL置25mL容量瓶中，加磷钼酸显色剂1-5mL，2-10％Na2CO32-10mL，水定容至刻度，70℃水浴加热20-100min，以相应试剂作空白，照中国药典紫外分光光度法，在758nm处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线；
[0029] 测定法：称取刺梨粉0.2g，置25mL平底烧瓶中，精密称定，加50-80％乙醇15mL，100HZ超声提取10-60min，过滤，合并滤液，至50mL容量瓶中，水定容至刻度，摇匀；精密量取取供试品溶液0.2mL置25mL容量瓶中，加磷钼酸显色剂1-5mL，2-10％Na2CO32-10mL，水定容至刻度，70℃水浴加热20-100min，以相应试剂作空白，照中国药典紫外分光光度法，在
758nm处测定吸光度值，从标准曲线上读出供试品溶液中含芦丁的重量μg，计算，即得。 [0030] 具体地说，所述对总多酚的含量测定方法为：采用Folin-Denis法测定； [0031] 对照品溶液的制备：称取没食子酸对照品60mg精密称定，置50mL容量瓶中，加
60％乙醇溶解定容至刻度摇匀；精密量取1mL，置50mL容量瓶中，加60％乙醇定容至刻度摇匀，即可；
758nm处测定吸光度值，从标准曲线上读出供试品溶液中含芦丁的重量μg，计算，即得。 [0030] 具体地说，所述对总多酚的含量测定方法为：采用Folin-Denis法测定； [0031] 对照品溶液的制备：称取没食子酸对照品60mg精密称定，置50mL容量瓶中，加
60％乙醇溶解定容至刻度摇匀；精密量取1mL，置50mL容量瓶中，加60％乙醇定容至刻度摇匀，即可；
[0032] 标准曲线的制备：精密吸取24ug/mL的没食子酸对照溶液2mL、3mL、4mL、5mL、6mL、7mL置25mL容量瓶中，加磷钼酸显色剂3mL，7％Na2CO35mL，水定容至刻度，70℃水浴加热
40min，以相应试剂作空白，照中国药典紫外分光光度法，在758nm处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线；
40min，以相应试剂作空白，照中国药典紫外分光光度法，在758nm处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线；
[0033] 测定法：称取刺梨粉0.2g，置25mL平底烧瓶中，精密称定，加60％乙醇15mL，100HZ超声提取30min，共1次，过滤，合并滤液，至50mL容量瓶中，水定容至刻度，摇匀；精密量取取供试品溶液0.2mL置25mL容量瓶中，加磷钼酸显色剂3mL，7％Na2CO35mL水定容至 刻度，70℃水浴加热40min，以相应试剂作空白，照中国药典紫外分光光度法，在758nm处测定吸光度值，从标准曲线上读出供试品溶液中含芦丁的重量μg，计算，即得。 [0034] 所述对氨基酸的含量测定方法为：采用反相高效液相色谱-柱前衍生化法测定； [0035] 色谱条件：Venusil-AA氨基酸分析柱4.6×250mm，5μm，流速1.0mL，检测波长
254nm，柱温40℃，流动相80％乙腈-醋酸钠-HAc缓冲液，PH＝6.5，梯度洗脱，A泵醋酸钠-HAc缓冲液，B泵80％乙腈；
254nm，柱温40℃，流动相80％乙腈-醋酸钠-HAc缓冲液，PH＝6.5，梯度洗脱，A泵醋酸钠-HAc缓冲液，B泵80％乙腈；
[0036] 对照品溶液的制备：准确量取氨基酸混合标准溶液200μL，置离心管中，精密加入正亮氨酸内标溶液10-30μL，三乙胺乙腈溶液50-200μL，异硫氰酸苯酯乙腈溶液50-200μL混匀，室温放置0.5-3小时，然后加入正己烷200-500μL，振摇后放置5-30分钟，取下层溶液，0.45μm针式微孔滤膜滤器过滤，即得；
[0037] 样品溶液的制备：精密称取刺梨样品置水解管中，精密加入2-10mol/L盐酸2-10mL，封口，置80-150℃恒温干燥箱中消化水解10-50小时，旋转蒸发仪蒸干溶剂，精密量取2-10mL水超声溶解，过滤，取续滤液100-300μL置1mL离心管中，精密加入正亮氨酸内标溶液10-50μL，三乙胺乙腈，异硫氰酸苯酯乙腈溶液各50-200μL，混匀，室温放置
0.5-3小时，然后加正己烷200-500μL，振摇后放置5-30分钟，取下层溶液用0.45μm微孔滤膜过滤，即得；
0.5-3小时，然后加正己烷200-500μL，振摇后放置5-30分钟，取下层溶液用0.45μm微孔滤膜过滤，即得；
[0038] 测定法：将氨基酸混合标准溶液与样品溶液分别上机测定，即得。 [0039] 具体地说，所述对氨基酸的含量测定方法为：采用反相高效液相色谱-柱前衍生化法测定；
[0040] 色谱条件：Venusil-AA氨基酸分析柱(4.6×250mm，5μm)，流速1.0mL，检测波长254nm，柱温40℃，流动相80％乙腈-醋酸钠-HAc缓冲液(PH＝6.5)梯度洗脱，A泵醋酸钠-HAc缓冲液，B泵80％乙腈；
[0041] 对照品溶液的制备：准确量取氨基酸混合标准溶液200μL，置1mL离心管中，精密加入正亮氨酸内标溶液20μL，三乙胺乙腈溶液100μL，异硫氰酸苯酯乙腈溶液100μL混匀，室温放置1小时，然后加入正己烷400μL，振摇后放置10分钟，取下层溶液，0.45μm针式微孔滤膜滤器过滤，即得；
[0042] 样品溶液的制备：精密称取刺梨样品置水解管中，精密加入6mol/L盐酸4mL，封口，置110℃恒温干燥箱中消化水解22小时，旋转蒸发仪蒸干溶剂，精密量取5mL水超声溶解，过滤，取续滤液200μL置1mL离心管中，精密加入正亮氨酸内标溶液20μL，三乙胺乙腈，异硫氰酸苯酯乙腈溶液各100μL，混匀，室温放置1小时，然后加正己烷400μL，振摇后放置10分钟，取下层溶液用0.45μm微孔滤膜过滤，即得；
[0043] 测定法：将氨基酸混合标准溶液与样品溶液分别上机测定，即得。 [0044] 所述氨基酸为天门冬氨酸、谷氨酸、丝氨酸、甘氨酸、组氨酸、精氨酸，苏氨酸、丙氨酸、脯氨酸、酪氨酸、缬氨酸、蛋氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸和赖氨酸。 [0045] 具体地说，所述刺梨的多指标检测方法为：
[0046] 【性状】本品呈扁球形，直径3-4cm，表面黄绿色或黄褐色，少数带红晕，被有密刺，有的具褐色斑点，顶端有宿鄂5瓣，黄褐色，密生细刺；纵剖面观，果肉黄白色，脆；种子多数，着生于鄂筒基部凸起的花托上，卵圆形，浅黄色，骨质，直径0.15-0.3cm，气微香，味酸甜，微涩；鲜果汁呈深棕色，味微甜，涩；
[0049] (3)精密称取刺梨粉末2g，加30mL无水乙醇100HZ超声提取30min，共2次，过滤，滤液蒸干，加水20mL溶解，过滤，滤液用乙酸乙酯20mL萃取，共2次，合并萃取液，80℃水浴加热蒸干，2mL甲醇溶解，作为供试品溶液；再取没食子酸对照品加甲醇，制成1mL含2mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述溶液5μL，点于同一聚酰胺薄膜板上，以乙酸乙酯∶丁酮∶甲酸∶水＝10∶1∶1∶1为展开剂，展开，取出，晾干，喷2％的Fecl3-乙醇试剂显色，在与对照品色谱相应的位置上显相同的蓝紫色斑点； [0050] 【检查】水分：照中国药典水分检测法检测，不得过14.0％；
[0051] 总灰分：照中国药典总灰分检测法检测，不得过6.0％；
[0052] 砷的测定：采用原子荧光法测定，取刺梨，粉碎，过3号筛，取样品1.0g精密称定，于250mL的锥形瓶中，加入硝酸16mL、高氯酸4mL，摇动使样品充分接触酸液，静置过夜；次日置于可调温电热板上，先低温档(低于100V)加热，随着温度的升高，有大量的红棕色气体逸出，当红棕色气体的量减少时可以提高温度继续消化至大量冒白烟，以赶尽HNO3(若消化不完全可以补加硝酸，遵循少量多次的原则，直至消化完全；)当消解液完全蒸干时，取下冷却至室温；小心加入2.5mL浓盐酸，用超纯水转移至50mL容量瓶中，再加入5mL10％的硫脲，超纯水定容至50mL，摇匀，45℃加热30min并冷却至室温后上机测定； [0053] 汞的测定：采用原子荧光法测定，取刺梨，粉碎，过3号筛，准确称取样品0.3g于聚四氟乙烯塑料内罐中，加入4mL浓硝酸和2mL30％的过氧化氢，置于100℃水浴锅中煮沸1小时，赶尽NO2；取出冷却至室温，加盖并旋紧密封，然后将高压消解罐放在恒温干燥箱内，升温至140℃后保持恒温3h，保证消解完全，将高压消解罐拿出自然冷却到室温，小心打开高压消解罐，将聚四氟乙烯塑料内罐中的消解液用4％的盐酸溶液转移到50mL容量瓶，并用盐酸溶液定容，摇匀，室温下放置30min后上机测定；
[0054] 【浸出物】醇溶性浸出物：照中国药典醇溶性浸出物测定法项下的热浸法测定，用70％的乙醇作溶剂，不得少于40.04％；
[0055] 【含量测定】
[0056] 维生素C照中国药典高效液相色谱法测定；
[0057] 色谱条件与系统适用性试验：迪马C18钻石柱4.6mm×250mm，5μm；柱温：30℃，以0.1mol/L磷酸二氢钾∶甲醇＝97∶3为流动相，流速：1.0mL/min，检测波长：245nm； [0058] 对照品溶液的制备：精密称取维生素C对照品12.5mg，加1％的偏磷酸5mL，超声
30秒溶解，加水定容至50ml容量瓶中，摇匀，制成每1mL含0.02mg的溶液，即得； [0059] 供试品溶液的制备：精密称取刺梨粉末0.4g，加1％偏磷酸50mL，称重，超声提取
15分钟，放冷至室温，补足减失重量，过滤，弃去初滤液，精密量取续滤液1mL至25mL容量瓶中，水定容至刻度，0.45μm微孔滤膜过滤，即得；
30秒溶解，加水定容至50ml容量瓶中，摇匀，制成每1mL含0.02mg的溶液，即得； [0059] 供试品溶液的制备：精密称取刺梨粉末0.4g，加1％偏磷酸50mL，称重，超声提取
15分钟，放冷至室温，补足减失重量，过滤，弃去初滤液，精密量取续滤液1mL至25mL容量瓶中，水定容至刻度，0.45μm微孔滤膜过滤，即得；
[0060] 测定法：取对照品溶液、供试品溶液，分别进样10μL，测定，即得； [0061] 总黄酮采用三氯化铝比色法测定；
[0062] 对照品溶液的制备：称取芦丁对照品25mg，置50mL容量瓶中，精密称定，加乙醇溶解定容至刻度，摇匀，制成每1mL含0.5mg的溶液，即得；
[0063] 标准曲线的制备：精密吸取芦丁对照品溶液0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mL分别置10mL容量瓶中，各加0.1mol/L的三氯化铝溶液2mL，0.2mol/L的NaAC缓冲溶液1mL，NaAC缓冲溶液先用HAC调pH＝5.1，用乙醇定容至刻度，摇匀，室温静置30min，以相应试剂为空白，照中国药典紫外分光光度法，在406nm波长下测吸光度；以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线；
[0064] 测定法：称取刺梨粉0.5g，置25mL平底烧瓶中，精密称定，加65％乙醇20mL，70℃超声提取1h，过滤，滤液定容至25mL容量瓶中，摇匀；精密吸取供试品溶液2mL，加0.1mol/L的三氯化铝溶液2mL，0.2mol/L的NaAC缓冲溶液1mL，NaAC缓冲溶液先用HAC调pH＝5.1，用乙醇定容至刻度，摇匀，室温静置30min，以相应试剂为空白，照中国药典紫外分光光度法，在406nm波长下测吸光度值，从标准曲线上读出供试品溶液中含芦丁的重量(μg)，计算，即得；
[0065] 总多酚 采用Folin-Denis法测定；
[0066] 对照品溶液的制备：称取没食子酸对照品60mg精密称定，置50mL容量瓶中，加60％乙醇溶解定容至刻度摇匀；精密量取1mL，置50mL容量瓶中，加60％乙醇定容至刻度摇匀，即可；(每1mL中含没食子酸24μg)；
[0067] 标准曲线的制备：精密吸取24ug/mL的没食子酸对照溶液2mL、3mL、4mL、5mL、6mL、7mL置25mL容量瓶中，加磷钼酸显色剂3mL，7％Na2CO35mL，水定容至刻度，70℃水浴加热
40min，以相应试剂作空白，照中国药典紫外分光光度法，在758nm处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线；
40min，以相应试剂作空白，照中国药典紫外分光光度法，在758nm处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线；
[0068] 测定法：称取刺梨粉0.2g，置25mL平底烧瓶中，精密称定，加60％乙醇15mL，100HZ超声提取30min，共1次，过滤，合并滤液，至50mL容量瓶中，水定容至刻度，摇匀；精密量取取供试品溶液0.2mL置25mL容量瓶中，加磷钼酸显色剂3mL，7％Na2CO35mL水定容至刻度，70℃水浴加热40min，以相应试剂作空白，照中国药典紫外分光光度法，在758nm处测定吸光度值，从标准曲线上读出供试品溶液中含芦丁的重量(μg)，计算，即得。 [0069] 所述刺梨的炮制方法为：先在沸水上蒸1-10min，取出，间歇式微波干燥
20-60min，干燥时真空度为0.075MPa，功率800-3000w，即得。
20-60min，干燥时真空度为0.075MPa，功率800-3000w，即得。
[0070] 刺梨为贵州省民族药材，含有丰富的营养物质，具有多重药理活性，全身是宝，是“十二五计划”贵州省重点开发项目。但是目前刺梨的检测方法比较简单，只有性状和理化鉴别，难以控制刺梨的真伪和优劣。为此本发明对刺梨的检测方法进行了研究，增加了薄层鉴别项、检查项(水分、总灰分及砷和汞的检查)，浸出物测定、含量测定项等检测指标。 [0071] 薄层鉴别项中增加了对没食子酸的鉴别方法，通过实验筛选，选择以乙醇为提取溶剂，以乙酸乙酯萃取两次的方法制备供试品溶液；以没食子酸为对照，聚酰胺薄膜为载体，乙酸乙酯∶丁酮∶甲酸∶水(10∶1∶1∶1)为展开剂，鉴别刺梨中的没食子酸。 [0072] 检查项中采用药典附录中水分、总灰分、浸出物的测定方法测定刺梨的水分、灰分、浸出物；采用原子荧光法测定刺梨砷和汞的量。
[0073] 刺梨中含有大量的维生素C，刺梨被誉为水果中的“维生素C大王”，维生素C是刺梨中一个非常重要的活性成分，具有抗氧化、延缓衰老等作用。为了保证刺梨的质量，本发明选取维生素C作为刺梨定量指标之一，本发明采用高效液相色谱法测定维生素C的含量。对色谱条件、提取方法、提取溶剂稳定性等进行了系统研究，通过平行性实验、正交试验选取偏磷酸为提取溶剂，超声法为提取方法，采用高效液相色谱法测定，建立了刺梨维生素C的含量测定方法。此方法避免维生素C受热易降解的影响，稳定性好，节省能源，效率高，具有较好可行性。
[0074] 总黄酮具有非常广泛的药理活性，备受研究者的青睐，目前，总黄酮的含量测定已成为中药材质量检测建立的一个重要指标。刺梨含多种黄酮类物质，总黄酮含量较高，刺梨总黄酮的含量测定目前多采用紫外分光光度法。本发明采用三氯化铝比色法测定总黄酮的含量，进行了详细，系统的研究。首先对提取方法、提取溶剂、提取温度等进行试验；然后通过排除没食子酸的干扰，调节最适pH值选取最大吸收波长为406nm，建立了刺梨总黄酮的含量测定方法。
[0075] 植物单宁又称植物多酚，主要存在于植物的皮、根、叶、果实中。刺梨味甘而酸涩，其涩味主要为多酚类物质。多酚作为一大类化学物质，据有较强的药理活性，所以本研究将刺梨多酚含量测定做为刺梨质量检测建立的一个指标。本发明以没食子酸为对照，采用Folin-Denis法测定刺梨多酚的含量。对显色温度、显色时间、提取溶剂进行考察，建立刺梨多酚含量测定方法，方法简便、快速、重复性好、可用于刺梨多酚的含量测定。 [0076] 刺梨含有氨基酸，包括除色氨酸外其他人体不能自行合成的必需氨基酸，但对刺梨氨基酸含量测方法未见系统报道，本发明采用柱前衍生化法测定刺梨中16种氨基酸的含量，并对其进行方法学考察，16种氨基酸分别为天门冬氨酸、谷氨酸、丝氨酸、甘氨酸、组氨酸、精氨酸，苏氨酸、丙氨酸、脯氨酸、酪氨酸、缬氨酸、蛋氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸。
[0077] 此外，由于刺梨鲜果同其它鲜果一样具有保存时间短，易腐烂、霉变的特点，并且在储存过程中重要的营养成分维生素C降低很快，大大降低了刺梨的质量，严重影响了刺梨的应 用价值，鉴于上述原因，本发明通过对刺梨的炮制方法进行研究，在考虑尽量不影响其他活性物质的同时，采用蒸制后微波干燥的方法作为刺梨的炮制方法。 [0078] 本发明所述刺梨的炮制方法和检测方法是经过大量的筛选试验得到的最佳方案，以下实验研究为本发明的优选过程：
[0079] 实验例1：对没食子酸的鉴别方法优选实验
[0080] 1实验材料
[0081] 1.1刺梨样品本实验所用刺梨样品均为干品。
[0082] 1.2试剂、试药
[0083] 无水乙醇(AR)：国药集团化学试剂有限公司；乙酸乙酯(AR)：国药集团化学试剂有限公司；甲醇(AR)：天津富宇化学试剂厂；丁酮(AR)：成都金山化学试剂有限公司；甲酸(AR)：天津科密欧化学试剂有限公司；氯仿(AR)：国药集团化学试剂有限公司；正丁醇(AR)：上海申博化工有限公司；超纯水：实验室自制；聚酰胺薄膜：青岛海洋生物化工有限公司；没食子酸对照(110831-200302)：中国药品生物制品检定所。
[0084] 1.3仪器
[0085] KQ-500DB型超声波清洗仪：昆山市超声仪器有限公司；数码相机：日本(Canon)；200g手提式高速万能粉碎机：温岭市林大机械有限公司；ACCULAB型万分之一电子天平：深圳市朗普电子科技有限公司；DFD700-恒温水浴锅：东风电工。
[0086] 2实验方法
[0087] 2.1对照品溶液的制备：取没食子酸对照品加甲醇，制成1mL含2mg的溶液。 [0088] 2.2供试品溶液的制备：精密称取刺梨样品2g，加30mL无水乙醇100HZ超声提取30min，共2次，过滤，滤液蒸干，加水20mL溶解，过滤，滤液用乙酸乙酯20mL萃取，共2次，合并萃取液，80℃水浴加热蒸干，2mL甲醇溶解，用于鉴别没食子酸。
[0089] 2.3薄层色谱条件：聚酰胺薄膜为固定相，乙酸乙酯∶丁酮∶甲酸∶水(10∶1∶1∶1)为展开剂，喷2％的FeCl3-乙醇试剂，聚酰胺薄膜板上显清晰的蓝紫色斑点。
[0090] 2.4刺梨的薄层鉴别：照薄层色谱法(《中国药典》2010年版一部附录VIB)吸取对照品溶液和供试品溶液5μL，点于聚酰胺薄膜板上，以乙酸乙酯∶丁酮∶甲酸∶水(10∶1∶1∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷2％的FeCl3-乙醇试剂显色，聚酰胺薄膜板上显清晰的蓝紫色斑点。所得薄层色谱图见图1。
[0091] 2.5样品测定：采用2.4刺梨的薄层鉴别方法测定3个刺梨样品，色谱图见图2。 [0092] 3讨论
[0093] 3.1提取溶剂的选择：本实验通过对不同提取溶剂甲醇、乙醇、乙酸乙酯进行选择，结果以乙醇为提取溶剂，乙酸乙酯萃取两次效果最好。
[0094] 3.2展开剂的选择：本实验考察了氯仿-乙酸乙酯-甲酸-水(5∶1∶1∶0.5)，氯仿-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(5∶1∶1∶0.7)，乙酸乙酯-甲醇-甲酸-水(2.5∶0.1∶0.3∶2.3)，乙酸乙酯-甲醇-甲酸-正丁醇(5∶2∶1∶3)氯仿-乙
酸乙酯-甲醇-甲酸(5∶3∶3∶1)等展开剂，结果以乙 酸乙酯∶丁酮∶甲酸∶水(10∶1∶1∶1)为展开剂，鉴别效果最好。
酸乙酯-甲醇-甲酸(5∶3∶3∶1)等展开剂，结果以乙 酸乙酯∶丁酮∶甲酸∶水(10∶1∶1∶1)为展开剂，鉴别效果最好。
[0095] 实验例2：刺梨维生素C含量测定方法研究
[0096] 1仪器、试药与样品：
[0097] 1.1仪器：CBM-20A型高效液相色谱仪(日本岛津公司)、StartoriusCP225D型十万分之一天平。
[0098] 1.2试剂：甲醇为色谱纯，磷酸二氢钾为化学纯、偏磷酸，醋酸、盐酸、草酸等为分析纯；维生素C对照品(批号：100425-200702，含量100.0％)，购于中国药品生物制品检定所。
[0099] 1.3样品：本研究所用刺梨样品，由本课题实验小组人员采集，炮制均经贵阳中医学院江维克教授鉴定。
[0100] 样品预处理：将刺梨样品粉碎，过三号筛，密闭，置阴凉、干燥处保存，备用。 [0101] 2溶液的制备
[0102] 2.1对照品溶液：称取维生素C对照品约12.5mg，精密称定，加1％的偏磷酸5mL，超声30秒溶解，加水定容至50ml容量瓶中，摇匀，作为对照品溶液(浓度0.02mg/mL)。 [0103] 2.2供试品溶液：精密称取刺梨粉末0.4g，加1％偏磷酸50mL，称重，超声提取15min，放冷至室温，补足减失重量，过滤，弃去初滤液，精密量取续滤液1mL至25mL容量瓶中，水定容至刻度，0.45μm微孔滤膜过滤，供HPLC进样分析。
[0104] 3实验方法与结果
[0105] 3.1供试液提取条件选择
[0106] 首先通过对比试验研究对浸渍、回流、超声等提取方法结果进行比较，结果以超声提取方法效果最好，故在后续的研究中采用超声法。
[0107] 3.1.1提取溶剂的选择
[0108] 3.1.1.1平行试验比较：选择了7种不同的有机酸作为提取维C的溶剂进行试验，以确定进一步优化的提取剂。
[0109] 方法：称取同一批次样品7份，每份0.4g置100ml量瓶中分别加入表1所列提取溶剂50ml，按2.2方法操作，并测定维C含量，记录结果如表1：
[0110] 表1提取溶剂的选择
[0111]
[0112] 由表1可知，以2％偏磷酸+2％草酸为提取溶剂测得VC的结果最高，但与以2％偏磷酸为提取溶剂测得的结果相差不大，考虑到操作的简便性，故以1％偏磷酸作为提取溶剂进行进一步的正交优化。
[0113] 3.1.1.2正交试验优化：以偏磷酸为提取溶剂分别对其浓度、用量、提取时间和超声频 率进行了四因素三水平的正交设计，建立L9(43)正交试验表，具体设计见表2。 [0114] 表2正交试验因素列表
[0115]
[0116] 测定方法：取刺梨粉0.2g，精密称定，置具塞平底烧瓶中按表1所在列和水平提取，设计正交试验。将提取液过滤，弃去初滤液，取续滤液2ml定容至25ml容量瓶中，微孔滤膜过滤，采用高效液相色谱法进样分析。结果见表3。
[0117] 表3试验方案及结果分析
[0118]
[0119] 试验中R2＞R4＞R1＞R3，四因素的重要性依次为BDAC.通过分析表2得出最佳组合条件为3.0％偏磷酸50mL，超声频率80HZ提取15min。但与以1％偏磷酸为提取溶剂测得的结果相近。由于偏磷酸环境污染较严重且价格较高，考虑到减小环境污染及降低成本等原因，采用1％偏磷酸为提取溶剂。所以确定以1％偏磷酸50mL、提取时间15min、超声频率80HZ为刺梨VC测定的提取方案。
[0121] 3.3系统适用性试验：迪马C18钻石柱(4.6mm×250mm，5μm)，柱温：30℃，流动相：0.1mol/LKH2PO4-甲醇(97∶3)，流速：1.0mL/min，检测器：PDA检测器，色谱工作站：LC-Solution色谱工作站，检测波长：245nm，维生素对照品溶液、样品溶液、空白溶液经
0.45μm微孔滤膜过滤后分别进样10μL，色谱图见图3、图4、图5。由图可知：样品与对照品在相同位置出峰，空白溶液对测定无干扰。
0.45μm微孔滤膜过滤后分别进样10μL，色谱图见图3、图4、图5。由图可知：样品与对照品在相同位置出峰，空白溶液对测定无干扰。
[0122] 3.4方法学考察
[0123] 3.4.1线性关系考察：精密吸取2.1项下的对照品溶液4μl，8μl，10μl，12μl，16μl，20μl，进样，以峰面积Y为纵坐标，进样量x(μg)为横坐标进行线性回归处理，得回
2
归方程为：Y＝2871018.417x-18443.1429，(R ＝0.9997)，结果表明VC在79.24μg/ml～
396.2μg/ml范围内线性关系良好。
2
归方程为：Y＝2871018.417x-18443.1429，(R ＝0.9997)，结果表明VC在79.24μg/ml～
396.2μg/ml范围内线性关系良好。
[0124] 3.4.2精密度实验：精密吸取对照品溶液10μl连续进样6次，记录峰面积，计算RSD值为0.773％，试验结果表明，仪器精密度良好。
[0125] 3.4.3重复性实验：取刺梨粉(过3号筛)0.2g，共6份，按2.2方法制备供试品溶液，分别进样，进样量10μl，记录色谱图，按外标一点法计算含量，RSD值为2.44％，表明此方法重复性较好。
[0126] 3.4.4稳定性实验：取对照品溶液，分别在0、1、3、5、7、9小时进样10ul，测得峰面积，其RSD值为1.76％，结果表明供试品溶液在9h内稳定性较好。
[0127] 3.4.5回收率试验：取刺梨粉9份，每份0.2g，每3份为一组，精密称定，每组分别加入对照品的量为样品含有量的80％、100％、120％，按2.2项下方法平行制备供试品溶液，在上述色谱条件下进样10μl，记录色谱图并计算含量，平均回收率为94.69％，RSD％为2.8％，详见表4。
[0128] 表4回收率试验结果(n＝9)
[0129]
[0130] 3.4.6样品的测定 取17批刺梨样品依法制备供试品溶液，按2.2.2项下色谱条件进样分析，记录色谱图，按外标法计算维生素C的含量。结果见表5。
[0131] 表5样品测定结果
[0132]
[0133]
[0134] 4讨论
[0135] 4.1柱温的考察：本实验通过对柱温为室温，25℃，30℃，35℃进行考察，以峰型、出峰时间及与其它峰的分离度为指标考察出峰情况，结果表明，在柱温为30℃时，峰型、分离效果最好，因此选择30℃为柱温。
[0136] 4.2流动相的选择：通过文献报道，选择乙腈-磷酸二氢钾-三乙胺-磷酸(10∶90∶0.02∶0.03)、甲醇-0.4％H3PO4，乙腈-0.08mol/LKH2PO4(75∶25)、0.05mol/LKH2PO4-甲醇(97∶3)，甲醇-0.01％H3PO4等为流动相进行试验，结果以0.1mol/LKH2PO4-甲醇(97∶3)，磷酸调PH＝4为流动相最好。
[0137] 4.3由表5的实验结果可发现，凡是以含偏磷酸为提取溶剂，其提取率都高，同时对提取溶液进行稳定性考察，以醋酸为提取溶剂时，维生素C的峰面积在5小时明显降低，而以偏磷酸为提取溶剂时，在9小时的RSD值为1.76％，结果表明偏磷酸作为刺梨维生素C提取溶剂稳定性优于醋酸，所以选择偏磷酸作为刺梨的提取溶剂。
[0138] 实验例3：刺梨总黄酮含量测定方法研究
[0139] 1实验材料
[0140] 1.1刺梨样品：本实验所用刺梨样品均为干品。
[0141] 1.2试剂、试药
[0142] 甲醇(AR)：上海振兴化工一厂；乙醇(AR)：重庆川东化学试剂有限公司；结晶三氯化铝：天津科密欧化学试剂有限公司；结晶醋酸钠：成都金山化学试剂有限公司；亚硝酸钠：天津科密欧化学试剂有限公司；冰乙酸(AR)：天津科密欧化学试剂有限公司；芦丁对照(100080-200707)：中国药品生物制品检定所。
[0143] 1.3仪器
[0144] KQ-500DB型超声波清洗仪：昆山市超声仪器有限公司；ACCULAB型万分之一电子天平：深圳市朗普电子科技有限公司；CARY100Bio型紫外分光光度仪：瓦里安；PHS-3C型精密PH计：上海虹益仪器仪表有限公司。
[0145] 2实验方法
[0146] 2.1试液的制备
[0147] 2.1.1对照溶液的制备：称取芦丁对照品适量置50mL容量瓶中，精密称定，加乙醇溶解定容至刻度，摇匀备用(0.461mg/mL)。
[0148] 2.1.2供试品溶液的制备：称取刺梨粉0.5g，置25mL平底烧瓶中，精密称定，加65％乙醇20mL，70℃超声提取1h，过滤，滤液定容至25mL容量瓶中，摇匀备用。 [0149] 2.1.3显色剂的制备：称取AlCl3·6H2O2.44g置100mL容量瓶中，乙醇溶解定容至刻度，配成浓度为0.1mol/L AlCl3的溶液。精密称取CH3COONa·3H2O2.72g置100ml容量瓶中，蒸馏水溶解定容至刻度，配成浓度为0.2mol/L的NaAc溶液，HAC调PH至5.1。 [0150] 2.2测定波长的选择：通过TLC鉴别试验可知刺梨含有没食子酸，没食子酸在紫外
275nm左右有最大吸收峰，芦丁在紫外270nm和360nm左右有最大吸收峰，为了排除没食子酸对黄酮含量测定的干扰，对没食子酸和芦丁在不显色及显色条件下进行紫外扫描，选择最大吸收波长。
275nm左右有最大吸收峰，芦丁在紫外270nm和360nm左右有最大吸收峰，为了排除没食子酸对黄酮含量测定的干扰，对没食子酸和芦丁在不显色及显色条件下进行紫外扫描，选择最大吸收波长。
[0151] 显色以后，没食子酸和芦丁在270nm-300nm范围内均有吸收，二者的吸收峰比较靠近，没食子酸可能对芦丁的测定产生影响，而芦丁在406nm处有一个最大吸收，没食子酸没有，所以选择最大吸收波长为406nm。
[0152] 2.3显色反应时间的选择：取芦丁对照品溶液适量，置10mL容量瓶中，精密加入0.1mol/L AlCl3的溶液2mL，0.2mol/L的NaAc(PH＝5.1)溶液1mL，乙醇定容至刻度，随行空白，在406nm处考察10、20、30、40、50、60min显色时间的吸光度，吸光度值见表6： [0153] 表6显色时间考察结果
[0154]
[0155] 结果表明，在10-60min内吸收度趋于稳定，而且在显色30min时吸收度最大，故选择显色反应时间为30min。
[0156] 2.4pH值的选择：采用NaAc-HAC缓冲溶液调节溶液的pH值，考察溶液在pH4.5、pH5.0、pH5.1、pH5.5、pH6.0条件下对吸光度值的影响，结果发现吸光度值在值pH5.0～pH5.6时最大吸收波长为406nm，且pH5.1吸收度值最大，因此选择pH5.1为溶液最适pH值。
[0157] 2.5提取溶剂的选择：称取刺梨样品0.5g置30mL平底烧瓶中，共5份，加提取溶剂15mL，500W，100HZ超声提取30min，1次，(见表7)采用三氯化铝比色测定总黄酮的含量，实验结果见图6。
[0158] 表7提取溶剂的选择
[0159]
[0160]
[0161] 由图6可知，用65％乙醇为提取溶剂，提取率最高，故选择65％乙醇作为刺梨黄酮的提取溶剂。
[0162] 2.6提取方法的选择
[0163] 2.6.1回流提取：称取刺梨粉0.5g，置25mL底烧瓶中，精密称定，加65％乙醇15mL，80℃水浴回流提取4h，过滤，滤液定容至25mL容量瓶中，做3个平行，测定含量。 [0164] 2.6.2超声提取：称取刺梨粉0.5g，置25mL底烧瓶中，精密称定，加65％乙醇15mL于水浴60℃，70℃，超声频率为100HZ，超声提取1h，过滤，滤液定容至25mL容量瓶中，分别做3个平行，测定含量。根据“2.6.1”、“2.6.2”项下含量测定结果选择最优提取方法，见表
8。
8。
[0165] 表8提取方法的选择
[0166]
[0167] 通过上述实验结果显示：三种提取条件下测得刺梨总黄酮的量以70℃超声提取1小时测定结果最高，且超声提取节省时间及能源，从效率及经济成本考虑，选择70℃超声提取1小时最理想。
[0168] 2.7正交试验设计根据上述实验结果选择考察因素及水平，建立正交试验考察因素水平表，见表9，设计正交实验方案，实验结果见表10。
[0169] 表9考察因素及水平
[0170]
[0171] 表10试验方案及结果
[0172]
[0173]
[0174] 通过正交实验可知：R1＞R3＞R2＞R4，其中影响最大的因素为料液比，提取次数影响最小，其最优组合为A3B2C1D1，最佳提取方法为料液比1∶40，提取时间60min，超声频率60HZ，提取1次。
[0175] 2.8方法学考察
[0176] 2.8.1线性关系考察：精密吸取芦丁对照品溶液(0.461mg/mL)0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mL置10mL容量瓶中，加0.1mol/L的三氯化铝溶液2mL，0.2mol/L的NaAC(HAC调pH＝5.1)缓冲溶液1mL，乙醇定容至刻度，摇匀，室温静置30min，在406nm波长下测吸收
2
度值。其线性方程为A＝0.0268C-0.0077，R ＝0.9993，果表明刺梨总黄酮在0ug/mL～
23.05ug/mL范围内线性关系良好。见表11，图7。
2
度值。其线性方程为A＝0.0268C-0.0077，R ＝0.9993，果表明刺梨总黄酮在0ug/mL～
23.05ug/mL范围内线性关系良好。见表11，图7。
[0177] 表11刺梨总黄酮标准曲线
[0178]
[0179] 2.8.2精密度试验：取按“2.1.1”项下方法制备的对照品溶依法测定，共6次。计算RSD值，结果见表12，表明精密度良好。
[0180] 表12总黄酮精密度
[0181]
[0182] 2.8.3重复性实验取刺梨粉0.5g，精密称定，共5份，按“2.1.2”项下方法制备供试品溶液，在406nm波长下测吸收度值，其RSD值为1.135％，实验结果见表13，表明重复性好。
[0183] 表13总黄酮重复性
[0184]
[0185] 2.8.4稳定性实验 取已知浓度的对照品溶液，分别在0min、10min、30min、60min、90min、120min、150min、180min，406nm波长下测定吸收度值，计算RSD值，结果见表14，表明供试品溶液在3h内稳定性良好。
[0186] 表14总黄酮稳定性
[0187]
[0188]
[0189] 2.8.5加样回收实验 取刺梨粉9份，每3份为一组，精密称定，每组分别加入对照品的量为样品含有量的80％、100％、120％，按“4.2.1.2”项下方法平行制备供试品溶液，在406nm波长下测吸收度值，计算回收率。结果见表15。
[0190] 表15加样回收试验
[0191]
[0192] 由实验结果表明回收率良好。
[0193] 2.8.6样品测定：按“2.1.2”项下方法制备供试品溶液，精密吸取供试品溶液2mL，加0.1mol/L的三氯化铝溶液2mL，0.2mol/L的NaAC(PH＝5.1)缓冲溶液1mL，乙醇定容至刻度，摇匀，室温放置30min，测定含量，结果见表16。
[0194] 表16刺梨样品中黄酮的含量(n＝17)
[0195]
[0196] 2.8.7刺梨总黄酮含量限度的制定：本试验测定10批刺梨样品中总黄酮的含量，平均值为0.90％，按均值下调20％暂定总黄酮含量标准，本品含总黄酮以芦丁计不得少于0.72％。
[0197] 3讨论
[0198] 本实验通过对亚硝酸钠显色、三氯化铝比色、保健食品中总黄酮的测定方法进行对比研究，发现亚硝酸钠显色测定结果很高，几乎是三氯化铝比色的13倍，保健食品中总黄酮测定的18倍，而三氯化铝比色的测定结果是保健食品中总黄酮测定结果的1.3倍。聚酰胺纯化总黄酮解析率差，回收率低且操作麻烦，使得测定结果偏低，同时所用试剂毒性较大。
[0199] 本实验对三氯化铝显色条件：最大吸收波长、显色pH值、显色时间、稳定性等进行系统性研究，发现三氯化比色测定总黄酮稳定性好，重复性好，且操作简单、方便，故采用三氯化铝比色测定刺梨总黄酮。
[0200] 实验例4：刺梨多酚含量测定方法研究
[0201] 1实验材料
[0202] 1.1刺梨样品：本实验所用刺梨样品均为干品。
[0203] 1.2试剂、试药
[0204] 乙醇：重庆川东化学试剂公司；甲醇(AR)：天津富宇化学试剂厂；磷钼酸：天津科密欧化学试剂有限公司；碳酸钠：重庆川东化学试剂有限公司；磷酸：重庆川江化学试剂有限公司；钨酸钠：北京化学试剂有限公司；丙酮(AR)：重庆川东化学试剂有限公司；(NH4)2SO4：天津富宇化学试剂厂；没食子酸对照(110831-200302)：中国药品生物制品检点所。 [0205] 1.3仪器
[0206] ACCULAB型万分之一电子天平：深圳市朗普电子科技有限公司；KQ-500DB型超声波清洗仪：昆山市超声仪器有限公司；CARY100Bio型紫外分光光度仪：瓦里安。 [0207] 2实验方法
[0208] 2.1溶液的制备
[0209] 2.1.1没食子酸储备溶液的制备：称取没食子酸对照品60mg置50mL容量瓶中，精密称定，加60％乙醇溶解定容至刻度摇匀备用作为储备液(浓度1.2mg/mL)。 [0210] 2.1.2没食子酸对照溶液的制备：精密吸取没食子酸储备液溶液(1.2mg/mL)1mL，置50mL容量瓶中，加60％乙醇溶解定容至刻度摇匀，备用(浓度24ug/mL)。
[0211] 2.1.3供试品溶液的制备：称取刺梨粉0.2g，置25mL平底烧瓶中，精密称定，加60％乙醇15mL，100HZ超声提取30min，共1次，过滤，合并滤液，至50mL容量瓶中，水定容至刻度，备用。
[0212] 2.1.4Folin-Denis试剂的配制：称取Na2WO4.2H2O50g，磷钼酸10g，磷酸25mL，加水350mL，水浴回流2h，冷却后水定容至500mL容量瓶中，备用。
[0213] 2.1.57％Na2CO3溶液的配置：称取Na2CO3试剂35g，加水500mL充分溶解即可。 [0214] 2.2最大吸收波长扫描：没食子酸的最大吸收波长为758nm，紫外扫描图见图8。 [0215] 2.3显色温度的选择：取没食子酸对照品溶液1mL置25mL容量瓶中，加Folin-Denis试剂3mL，7％Na2CO3溶液5mL，水定容至刻度，于室温、35℃、40℃、70℃条件下加热30min，考察水浴温度对吸收度的影响，结果表明，水浴温度70℃是没食子酸显色的优化条 件。
[0216] 2.4显色反应时间的选择：取没食子酸对照品溶液1mL置25mL容量瓶中，加Folin-Denis试剂3mL，7％Na2CO3溶液5mL，水定容至刻度，70℃水浴加热10、20、30、40、50、60min显色，758nm波长下测定吸收度，结果见表17。
[0217] 表17显色时间考察结果
[0218]
[0219] 由表17可知，显色时间在10-90min吸收度值基本稳定，而在40mmin时吸收度值最大，所以选择40min为最优显色时间。
[0220] 2.5提取方法的选则
[0221] 2.5.1提取溶剂的选择：称取刺梨样品0.2g，置25mL容量瓶中精密称定，按表18提取条件选择提取溶剂，结果见图9。
[0222] 表18提取溶剂选择
[0223]
[0224] 由图9可知以60％乙醇为提取溶剂提取率最高，同时，乙醇又较甲醇、丙酮毒性小，且价格便宜，较双水相体系操作简便，所以选60％乙醇为刺梨多酚的提取溶剂。 [0225] 2.5.2正交试验设计：精密称取刺梨粉0.2g，以总多酚的含量为考察指标，采用4
L9(3)正交试验设计(表19)，进一步优化刺梨总多酚的提取条件。结果见表20。 [0226] 表19考察的因素及水平
L9(3)正交试验设计(表19)，进一步优化刺梨总多酚的提取条件。结果见表20。 [0226] 表19考察的因素及水平
[0227]
[0228] 表20试验方案及结果分析
[0229]
[0230]
[0231] 通过正交实验可知：RA＞RD＞RB＞RC，其中影响最大的因素为溶剂浓度，提取时间影响最小，并且提取30min与提取10min，在提取率上基本没有差别，从节省时间及能源的角度考虑，确定最终提取条件为以60％乙醇为提取溶剂，料液比1∶75，超声提取30min，共1次。
[0232] 2.6系统适用性试验
[0233] 2.6.1线性关系考察：精密吸取没食子酸对照溶液(24ugmg/mL)2mL、3mL、4mL、5mL、6mL、7mL置25mL容量瓶中，加磷钼酸显色剂3mL，7％Na2CO35mL水定容至刻度，70℃水
2
浴加热40min显色，758nm测定，线性方A＝0.1032C-0.0183，R ＝0.9996，结果表明刺梨多酚在1.92ug/mL～6.72ug/mL范围内有良好的线性关系，标准曲线见表21，标准曲线见图
10。
2
浴加热40min显色，758nm测定，线性方A＝0.1032C-0.0183，R ＝0.9996，结果表明刺梨多酚在1.92ug/mL～6.72ug/mL范围内有良好的线性关系，标准曲线见表21，标准曲线见图
10。
[0234] 表21总多酚的标准曲线
[0235]
[0236] 2.6.2精密度试验：取没食子酸对照溶液(24ug/mL)依法测定，共6次。计算RSD值，结果见表22，表明精密度良好。
[0237] 表22多酚的精密度
[0238]
[0239] 2.6.3重复性实验：按“2.1.3”项下方法制备供试品溶液，取供试品溶液0.2mL置25mL容量瓶中，加磷钼酸显色剂3mL，7％Na2CO35mL水定容至刻度，70℃水浴加热40min显色，在758nm波长下测吸收度值，其RSD值，结果见表23，表明重复性好。
[0240] 表23多酚重复性实验
[0241]
[0242] 2.6.4稳定性实验：取已知浓度的对照品溶液，分别在0min，10min，20min，30min，60min，90min，120min，150min，180min，758nm波长下测定吸收度值，计算RSD值为0.318％，实验结果见表24。
[0243] 表24多酚稳定性试验
[0244]
[0245] 结果表明溶液在3h内吸收度值近似于与很坐标平行的直线，表明稳定性良好。 [0246] 2.6.5加样回收实验取刺梨粉6份，精密称定，准确加入没食子酸对照品，按“2.1.3”项下方法制备供试品溶液，取供试品溶液0.2mL置25ml容量瓶中，加磷钼酸显色剂3mL，7％Na2CO35mL水定容至刻度，70℃水浴加热40min显色，在758nm波长下测吸收度值，计算回收率。结果见表25。
[0247] 表25回收率实验
[0248]
[0249] 实验结果表明回收率良好。
[0250] 2.6.6样品测定取不同产地样品，按“2.1.3”项下方法制备供试品溶液，取供试品溶液0.2mL置25mL容量瓶中，加磷钼酸显色剂3mL，7％Na2CO35mL水定容至刻度，70℃水浴加热40min显色，在758nm波长下测吸收度值，样品测定结果见表26。
[0251] 表26样品测定(n＝22)
[0252]
[0253]
[0254] 2.6.7刺梨多酚含量限度的制定
[0255] 本试验测定10批刺梨多酚的含量，平均值为10.11％，按均值下调20％暂定多酚含量限度，本品含多酚以没食子酸计不得少于8.09％。
[0256] 3讨论
[0257] Folin-Denis法是福林酚氧化多酚中的-OH基团并显蓝色，多酚的量与蓝色的深浅成正比，采用比色法测定多酚的含量。本实验采用此方法以没食子酸为对照，测定刺梨多酚含量，通过显色温度、显色时间、等实验条件及方法学考察，发现此方法测定刺梨多酚简单，方便，重现性好，可用于刺梨多酚的含量测定。
[0258] 实验例5：刺梨氨基酸的含量测定
[0259] 1实验材料
[0260] 1.1刺梨样品：本实验所用刺梨样品均为干品。
[0261] 1.2试剂、试药
[0262] 三乙胺：博纳艾杰尔科技有限公司；异硫氰酸苯酯：博纳艾杰尔科技有限公司；醋酸钠：天津富于化学试剂有限公司；乙腈(AR)：天津科密欧化学试剂有限公司；正亮氨酸内标：博纳艾杰尔科技有限公司；正己烷：天津科密欧化学试剂有限公司；17种氨基酸混合标准对照溶液：博纳艾杰尔科技有限公司。
[0263] 1.3仪器
[0264] ACCULAB型万分之一电子天平：深圳市朗普电子科技有限公司；安捷伦1100型高效液相色谱仪：美国；RE-2000旋转蒸发仪：上海亚荣生化仪器厂；SHB-III循环水式多用真空泵：郑州长城科工贸有限公司；Venusil-AA氨基酸分析柱(4.6×250mm，5um)：博纳艾杰尔科技有限公司；MPD8000-恒温干燥烘箱：广州市博泰科技仪器有限公司。 [0265] 2实验方法
[0266] 2.1溶液的制备
[0267] 2.1.1三乙胺乙腈溶液：取三乙胺1瓶(1.4mL)，加乙腈8.6mL混匀。 [0268] 2.1.2异硫氰酸苯酯乙腈溶液：取异硫氰酸苯酯1瓶(25μL)，加乙腈2mL混匀。 [0269] 2.1.3流动相制备：
[0270] 流动相A：称取15.2g醋酸钠，加水1850mL，溶解后用冰醋酸调pH至6.5，然后加乙腈140mL，混匀，用0.45μm滤膜过滤。
[0271] 流动相B：80％乙腈。
[0272] 2.1.4正亮氨酸内标溶液：称取正亮氨酸10mg置10mL容量瓶中精密称定，加0.1mol/L盐酸溶解定容至刻度，摇匀即可。
[0273] 2.2氨基酸混合标准溶液和样品溶液的衍生化
[0274] 2.2.1氨基酸混合标准溶液衍生化
[0275] 准确量取氨基酸混合标准溶液200μL，置1mL离心管中，精密加入正亮氨酸内标溶液20μL，三乙胺乙腈溶液100μL，异硫氰酸苯酯乙腈溶液100μL混匀，室温放置1小时，然后加入正己烷400μL，振摇后放置10分钟，取下层溶液，0.45μm针式微孔滤膜滤器过滤，备用。
[0276] 2.2.2样品溶液的制备及衍生化
[0277] 精密称取刺梨样品置水解管中，精密加入6mol/L盐酸4mL，封口，置110℃恒温干燥箱中消化水解22小时，旋转蒸发仪蒸干溶剂，精密量取5mL水超声溶解，过滤，取续滤液200μL置1mL离心管中，精密加入正亮氨酸内标溶液20μL，三乙胺乙腈，异硫氰酸苯酯乙腈溶液各100μL，混匀，室温放置1小时，然后加正己烷400μL，振摇后放置10分钟，取下层溶液用0.45μm微孔滤膜过滤，滤液备用。
[0278] 2.3色谱条件：Venusil-AA氨基酸分析柱(4.6×250mm，5μm)，流速1.0mL，检测波长254nm，柱温40℃，流动相80％乙腈-醋酸钠-HAc缓冲液(PH＝6.5)梯度洗脱，A泵醋酸钠-HAc缓冲液，B泵80％乙腈。梯度洗脱如表27。对照品和样品的色谱图见图11、图12。
[0279] 表27梯度洗脱
[0280]
[0281] 2.4线性关系实验 精密吸取氨基酸标准溶液50μL，100μL、200μL、300μL、400μL、500μL，采用“2.2.1”项下方法进行氨基酸衍生化，进样分析，线性方程如表28。 [0282] 表28氨基酸线性方程
[0283]
[0284] 由表29可知，16种氨基酸在1.19μmol mL～11.9μmol/mL范围内有良好的线性关系。
[0285] 6.2.5精密度实验：精密吸取氨基酸对照品混标溶液200μL，按“2.2.1项下衍生化方法操作，进样分析，重复进样5次计算RSD值。精密度实验结果见表29。 [0286] 表29精密度试验
[0287]
[0288] 实验结果表明16种氨基酸的精密度良好。
[0289] 2.6重复性实验：称取刺梨样品0.2g，共5份，按“6.2.2.2”项下方法操作，制备刺梨样品，高校液相色谱仪进样分析，计算RSD值。试验结果见表30。
[0290] 表30重复性实验结果
[0291]
[0292]
[0293] 实验结果表明16种氨基酸除天门冬氨酸和蛋氨酸，其余14种氨基酸的重复性良好。
[0294] 2.7稳定性实验：验精密量取氨基酸对照200μL，按“2.2.2”项下方法操作制备供试品溶液，分别于0h，8h，9h，10h，11h，12h进样分析，计算RSD值，稳定性实验结果见表31。 [0295] 表31稳定性试验
[0296]
[0297] 实验结果表明氨基酸衍生化产物在12h内稳定性良好，可采用此方法测定刺梨氨基酸的含量。
[0298] 2.8加样回收试验：称取刺梨样品0.2g，制备供试品溶液，精密吸取供试品溶液200μL，氨基酸对照50μL，按“2.2.2”项下进行衍生化，共6份，进样分析，计算加样回收率。结果见表32。
[0299] 表32回收率试验
[0300]
[0301]
[0302]
[0303] 结果表明加样回收率不是很好。
[0304] 2.9样品测定称取刺梨样品16批，精密称定，按“2.2.2”项下操作，制备供试品溶液，测定。结果见表33。
[0305] 表33刺梨样品测定
[0306]
[0307]
[0308]
[0309] 3讨论
[0310] 3.1柱前衍生化法测定刺梨中氨基酸含量，可以同时测得刺梨中17种氨基酸的含量，但由于胱氨酸很不稳定，在1小时内发生降解，所以本实验只考察了16种氨基酸的含量。
[0311] 3.2本实验对衍生化时间30min、45min、60min、90min、120min进行了考察了，结果发现以衍生化时间60min峰型最好，衍生化最完全，所以选择60min为最佳衍生化时间。 [0312] 3.3采用此法测定刺梨氨基酸必须将酸完全挥发干净，否则使其不能形成衍生化产物，在紫外检测器下没有紫外吸收，导致实验失败。
[0313] 实验例6：刺梨炮制方法研究
[0314] 1实验材料
[0315] 1.1样品：本实验所用刺梨样品均为鲜果。
[0318] 2.1炮制将处理好的刺梨样品采取四种方法干燥，①自然晒干；②微波干燥3小时；③沸水上蒸2min，取出，自然晒干；④沸水上蒸2min，取出，微波干燥3小时。以维生素C、总黄酮和总多酚为指标，考察炮制前后含量的变化。
[0319] 2.2含量测定
[0320] 2.2.1维生素C的含量测定
[0321] (1)色谱条件迪马C18钻石柱(4.6mm×250mm，5μm)，柱温：30℃，流动相：0.1mol/LKH2PO4-甲醇(97∶3)，流速：1.0ml/min，检测器：PDA检测器，色谱工作站：LC-Solution色谱工作站，检测波长：245nm，进样量：10μL。
[0322] (2)测定结果，见表34。
[0323] 表34刺梨VC含量测定结果
[0324]
[0325]
[0326] 2.2.2总黄酮的含量测定
[0327] (1)测定方法精密吸取供试品品溶液0.5mL置10mL容量瓶中，加0.1mol/L的三氯化铝溶液2mL，0.2mol/L的NaAC(HAC调PH5.1)缓冲溶液1mL，乙醇定容至刻度，摇匀，室温静置30min，在406nm波长下测定。
[0328] (2)测定结果，见表35。
[0329] 表35不同炮制方法总黄酮含量测定
[0330]
[0331] 2.2.3多酚的含量测定
[0332] (1)测定方法：取供试品溶液0.2mL置25mL容量瓶中，加磷钼酸显色剂3mL，7％Na2CO35mL水定容至刻度，70℃水浴加热40min显色，在758nm波长下测吸收度值。 [0333] (2)测定结果：见表36。
[0334] 表36刺梨多酚测定结果
[0335]
[0336] 3讨论
[0337] 3.1通过上述数据及图表显示：采用微波干燥法干燥的刺梨其维生素C、总黄酮、总多酚的含量比直接晒干高，蒸制后的刺梨其维生素C、总黄酮、总多酚的含量比未炮制的高，同时炮制后微波干燥的上述三个测定指标的含量比炮制后直接晒干的含量高，由此，认为如果以维生素C、总黄酮、总多酚为指标成分，则采用蒸制2min，微波干燥作为刺梨的炮制方法较为合适。
[0338] 3.2本实验还对不同干燥方法进行考察，结果发现烘箱温度低于80℃干燥慢，大约需2～3天时间，高于80℃，又容易造成刺梨糊化，而微波干燥具有干燥速率大、节能、生产效率高、干燥均匀、清洁生产、易实现自动化控制和提高产品质量等优点，同时有助于保存刺梨中维生素C等有效成分，为刺梨鲜果的储存及新产品的开发提供思路。 [0339] 本发明的有益效果在于：本发明所述检测方法简便、快速、重现性及稳定性好，能够有效控制刺梨的产品质量。所述炮制方法有助于保存刺梨中维生素C等有效成分，达到了发明目的。附图说明：
[0340] 图1：刺梨中没食子酸的薄层鉴别图，其中1.没食子酸对照、2.样品a； [0341] 图2：刺梨中没食子酸的薄层鉴别图，其中1.没食子酸对照、2.样品b、3样品c、4.样品d；
[0342] 图3：维生素C含量测定方法研究中，对照品色谱图
[0343] 图4：维生素C含量测定方法研究中，空白溶液色谱图
[0344] 图5：维生素C含量测定方法研究中，样品色谱图
[0345] 图6：总黄酮含量测定方法研究中，提取溶剂的选择结果曲线图
[0346] 图7：总黄酮含量测定方法研究中，刺梨总黄酮标准曲线图
[0347] 图8：多酚含量测定方法研究中，没食子酸最大吸收波长扫描图
[0348] 图9：刺梨多酚含量测定方法研究中，提取溶剂的选择结果曲线图
[0349] 图10：刺梨多酚含量测定方法研究中，刺梨多酚的标准曲线图
[0350] 图11：氨基酸含量测定方法研究中，为对照品色谱图
[0351] 其中1.天门冬氨酸 2.谷氨酸 3.丝氨酸 4.甘氨酸 5.组氨酸 6.精氨酸 7.苏氨酸 8.丙氨酸 9.酪氨酸 10.缬氨酸 11.蛋氨酸 12.异亮氨酸 13.亮氨酸 14.丙氨酸15.苯丙氨酸 16.赖氨酸
[0352] 图12：氨基酸含量测定方法研究中，样品色谱图；
[0353] 其中1.天门冬氨酸 2.谷氨酸 3.丝氨酸 4.甘氨酸 5.组氨酸 6.精氨酸 7.苏氨酸 8.丙氨酸 9.酪氨酸 10.缬氨酸 11.蛋氨酸 12.异亮氨酸 13.亮氨酸 14.丙氨酸15.苯丙氨酸 16.赖氨酸
具体实施方式
[0354] 实施例1：所述刺梨的检测方法为：
[0355] 【性状】本品呈扁球形，直径3-4cm，表面黄绿色或黄褐色，少数带红晕，被有密刺，有的具褐色斑点，顶端有宿鄂5瓣，黄褐色，密生细刺；纵剖面观，果肉黄白色，脆；种子多数，着生于鄂筒基部凸起的花托上，卵圆形，浅黄色，骨质，直径0.15-0.3cm，气微香，味酸甜，微涩；鲜果汁呈深棕色，味微甜，涩；
[0356] 【鉴别】(1)取刺梨鲜果汁2ml，加碱性酒石酸铜试液，置水浴上加热数分钟后，产生红色沉淀；
[0357] (2)取刺梨新鲜果汁点于滤纸上，滴加茚三酮试液，100℃烘烤约3-5分钟，产生蓝色；
[0358] (3)精密称取刺梨粉末2g，加30mL无水乙醇100HZ超声提取30min，共2次，过滤，滤液蒸干，加水20mL溶解，过滤，滤液用乙酸乙酯20mL萃取，共2次，合并萃取液，80℃水浴加热蒸干，2mL甲醇溶解，作为供试品溶液；再取没食子酸对照品加甲醇，制成1mL含2mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述溶液5μL，点于同一聚酰胺薄膜板上，以乙酸乙酯∶丁酮∶甲酸∶水＝10∶1∶1∶1为展开剂，展开，取出，晾干，喷2％的Fecl3-乙醇试剂显色，在与对照品色谱相应的位置上显相同的蓝紫色斑点； [0359] 【检查】水分：照中国药典水分检测法检测，不得过14.0％；
[0360] 总灰分：照中国药典总灰分检测法检测，不得过6.0％；
[0361] 砷的测定：采用原子荧光法测定，取刺梨，粉碎，过3号筛，取样品1.0g精密称定， 于250mL的锥形瓶中，加入硝酸16mL、高氯酸4mL，摇动使样品充分接触酸液，静置过夜；次日置于可调温电热板上，先低于100V加热，随着温度的升高，有大量的红棕色气体逸出，当红棕色气体的量减少时可以提高温度继续消化至大量冒白烟，以赶尽HNO3，直至消化完全；当消解液完全蒸干时，取下冷却至室温；小心加入2.5mL浓盐酸，用超纯水转移至50mL容量瓶中，再加入5mL10％的硫脲，超纯水定容至50mL，摇匀，45℃加热30min并冷却至室温后上机测定；
[0362] 汞的测定：采用原子荧光法测定，取刺梨，粉碎，过3号筛，准确称取样品0.3g于聚四氟乙烯塑料内罐中，加入4mL浓硝酸和2mL30％的过氧化氢，置于100℃水浴锅中煮沸1小时，赶尽NO2；取出冷却至室温，加盖并旋紧密封，然后将高压消解罐放在恒温干燥箱内，升温至140℃后保持恒温3h，保证消解完全，将高压消解罐拿出自然冷却到室温，小心打开高压消解罐，将聚四氟乙烯塑料内罐中的消解液用4％的盐酸溶液转移到50mL容量瓶，并用盐酸溶液定容，摇匀，室温下放置30min后上机测定；
[0363] 【浸出物】醇溶性浸出物：照中国药典醇溶性浸出物测定法项下的热浸法测定，用70％的乙醇作溶剂，不得少于40.04％；
[0364] 【含量测定】
[0365] 维生素C照中国药典高效液相色谱法测定；
[0366] 色谱条件与系统适用性试验：迪马C18钻石柱4.6mm×250mm，5μm；柱温：30℃，以0.1mol/L磷酸二氢钾∶甲醇＝97∶3为流动相，流速：1.0mL/min，检测波长：245nm； [0367] 对照品溶液的制备：精密称取维生素C对照品12.5mg，加1％的偏磷酸5mL，超声
30秒溶解，加水定容至50ml容量瓶中，摇匀，制成每1mL含0.02mg的溶液，即得； [0368] 供试品溶液的制备：精密称取刺梨粉末0.4g，加1％偏磷酸50mL，称重，超声提取
15分钟，放冷至室温，补足减失重量，过滤，弃去初滤液，精密量取续滤液1mL至25mL容量瓶中，水定容至刻度，0.45μm微孔滤膜过滤，即得；
30秒溶解，加水定容至50ml容量瓶中，摇匀，制成每1mL含0.02mg的溶液，即得； [0368] 供试品溶液的制备：精密称取刺梨粉末0.4g，加1％偏磷酸50mL，称重，超声提取
15分钟，放冷至室温，补足减失重量，过滤，弃去初滤液，精密量取续滤液1mL至25mL容量瓶中，水定容至刻度，0.45μm微孔滤膜过滤，即得；
[0369] 测定法：取对照品溶液、供试品溶液，分别进样10μL，测定，即得； [0370] 总黄酮采用三氯化铝比色法测定；
[0371] 对照品溶液的制备：称取芦丁对照品25mg，置50mL容量瓶中，精密称定，加乙醇溶解定容至刻度，摇匀，制成每1mL含0.5mg的溶液，即得；
[0372] 标准曲线的制备：精密吸取芦丁对照品溶液0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mL分别置10mL容量瓶中，各加0.1mol/L的三氯化铝溶液2mL，0.2mol/L的NaAC缓冲溶液1mL，NaAC缓冲溶液先用HAC调pH＝5.1，用乙醇定容至刻度，摇匀，室温静置30min，以相应试剂为空白，照中国药典紫外分光光度法，在406nm波长下测吸光度；以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线；
[0373] 测定法：称取刺梨粉0.5g，置25mL平底烧瓶中，精密称定，加65％乙醇20mL，70℃超声提取1h，过滤，滤液定容至25mL容量瓶中，摇匀；精密吸取供试品溶液2mL，加0.1mol/L的三氯化铝溶液2mL，0.2mol/L的NaAC缓冲溶液1mL，NaAC缓冲溶液先用HAC调 pH＝5.1，用乙醇定容至刻度，摇匀，室温静置30min，以相应试剂为空白，照中国药典紫外分光光度法，在406nm波长下测吸光度值，从标准曲线上读出供试品溶液中含芦丁的重量μg，计算，即得；
[0374] 总多酚 采用Folin-Denis法测定；
[0375] 对照品溶液的制备：称取没食子酸对照品60mg精密称定，置50mL容量瓶中，加60％乙醇溶解定容至刻度摇匀；精密量取1mL，置50mL容量瓶中，加60％乙醇定容至刻度摇匀，即可；
[0376] 标准曲线的制备：精密吸取24ugmg/mL的没食子酸对照溶液2mL、3mL、4mL、5mL、6mL、7mL置25mL容量瓶中，加磷钼酸显色剂3mL，7％Na2CO35mL水定容至刻度，70℃水浴加热40min，以相应试剂作空白，照中国药典紫外分光光度法，在758nm处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线；
[0377] 测定法：称取刺梨粉0.2g，置25mL平底烧瓶中，精密称定，加60％乙醇15mL，100HZ超声提取30min，共1次，过滤，合并滤液，至50mL容量瓶中，水定容至刻度，摇匀；精密量取取供试品溶液0.2mL置25mL容量瓶中，加磷钼酸显色剂3mL，7％Na2CO35mL水定容至刻度，70℃水浴加热40min，以相应试剂作空白，照中国药典紫外分光光度法，在758nm处测定吸光度值，从标准曲线上读出供试品溶液中含芦丁的重量μg，计算，即得。 [0378] 实施例2：所述对没食子酸的薄层鉴别方法为：精密称取刺梨粉末2g，加30mL无水乙醇100HZ超声提取30min，共2次，过滤，滤液蒸干，加水20mL溶解，过滤，滤液用乙酸乙酯20mL萃取，共2次，合并萃取液，80℃水浴加热蒸干，2mL甲醇溶解，作为供试品溶液；
再取没食子酸对照品加甲醇，制成1mL含2mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述溶液5μL，点于同一聚酰胺薄膜板上，以乙酸乙酯∶丁酮∶甲酸∶水＝
10∶1∶1∶1为展开剂，展开，取出，晾干，喷2％的Fecl3-乙醇试剂显色，在与对照品色谱相应的位置上显相同的蓝紫色斑点。
再取没食子酸对照品加甲醇，制成1mL含2mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述溶液5μL，点于同一聚酰胺薄膜板上，以乙酸乙酯∶丁酮∶甲酸∶水＝
10∶1∶1∶1为展开剂，展开，取出，晾干，喷2％的Fecl3-乙醇试剂显色，在与对照品色谱相应的位置上显相同的蓝紫色斑点。
[0379] 实施例3：所述对没食子酸的薄层鉴别方法为：取刺梨粉末，加无水乙醇80-120HZ超声提取1次，过滤，滤液蒸干，加水溶解，过滤，滤液用乙酸乙酯萃取1次，合并萃取液，水浴加热蒸干，用甲醇溶解，作为供试品溶液；再取没食子酸对照品加甲醇溶解，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述溶液，点于同一聚酰胺薄膜板上，以乙酸乙酯∶丁酮∶甲酸∶水＝0.5∶2∶0.5∶2为展开剂，展开，取出，晾干，喷2％的Fecl3-乙醇试剂显色，在与对照品色谱相应的位置上显相同的蓝紫色斑点。
[0380] 实施例4：所述对没食子酸的薄层鉴别方法为：取刺梨粉末，加无水乙醇120HZ超声提取3次，过滤，滤液蒸干，加水溶解，过滤，滤液用乙酸乙酯萃取3次，合并萃取液，水浴加热蒸干，用甲醇溶解，作为供试品溶液；再取没食子酸对照品加甲醇溶解，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述溶液，点于同一聚酰胺薄膜板上，以乙酸乙酯∶丁酮∶甲酸∶水＝15∶0.5∶2∶0.5为展开剂，展开，取出，晾干，喷2％的Fecl3-乙醇试剂显色，在与对照品色谱相应的位置上显相同的蓝紫色斑点。
[0381] 实施例5：所述对维生素C的含量测定方法为：照中国药典高效液相色谱法测定； [0382] 色谱条件与系统适用性试验：迪马C18钻石柱4.6mm×250mm，5μm；柱温：30℃，以0.1mol/L磷酸二氢钾∶甲醇＝97∶3为流动相，流速：1.0mL/min，检测波长：245nm； [0383] 对照品溶液的制备：精密称取维生素C对照品12.5mg，加1％的偏磷酸5mL，超声
30秒溶解，加水定容至50ml容量瓶中，摇匀，制成每1mL含0.02mg的溶液，即得； [0384] 供试品溶液的制备：精密称取刺梨粉末0.4g，加1％偏磷酸50mL，称重，超声提取
15分钟，放冷至室温，补足减失重量，过滤，弃去初滤液，精密量取续滤液1mL至25mL容量瓶中，水定容至刻度，0.45μm微孔滤膜过滤，即得；
30秒溶解，加水定容至50ml容量瓶中，摇匀，制成每1mL含0.02mg的溶液，即得； [0384] 供试品溶液的制备：精密称取刺梨粉末0.4g，加1％偏磷酸50mL，称重，超声提取
15分钟，放冷至室温，补足减失重量，过滤，弃去初滤液，精密量取续滤液1mL至25mL容量瓶中，水定容至刻度，0.45μm微孔滤膜过滤，即得；
[0385] 测定法：取对照品溶液、供试品溶液，分别进样10μL，测定，即得。 [0386] 实施例6：所述对维生素C的含量测定方法为：照中国药典高效液相色谱法测定； [0387] 色谱条件与系统适用性试验：迪马C18钻石柱4.6mm×250mm，5μm；柱温：30℃，以0.1mol/L磷酸二氢钾∶甲醇＝99∶1为流动相，流速：1.0mL/min，检测波长：245nm； [0388] 对照品溶液的制备：精密称取维生素C对照品12.5mg，加5％的偏磷酸5mL，超声
30秒溶解，加水定容至50ml容量瓶中，摇匀，制成每1mL含0.02mg的溶液，即得； [0389] 供试品溶液的制备：精密称取刺梨粉末0.4g，加1％偏磷酸50mL，称重，超声提取
30分钟，放冷至室温，补足减失重量，过滤，弃去初滤液，精密量取续滤液1mL至25mL容量瓶中，水定容至刻度，0.45μm微孔滤膜过滤，即得；
30秒溶解，加水定容至50ml容量瓶中，摇匀，制成每1mL含0.02mg的溶液，即得； [0389] 供试品溶液的制备：精密称取刺梨粉末0.4g，加1％偏磷酸50mL，称重，超声提取
30分钟，放冷至室温，补足减失重量，过滤，弃去初滤液，精密量取续滤液1mL至25mL容量瓶中，水定容至刻度，0.45μm微孔滤膜过滤，即得；
[0390] 测定法：取对照品溶液、供试品溶液，分别进样10μL，测定，即得。 [0391] 实施例7：所述对维生素C的含量测定方法为：照中国药典高效液相色谱法测定； [0392] 色谱条件与系统适用性试验：迪马C18钻石柱4.6mm×250mm，5μm；柱温：30℃，以0.1mol/L磷酸二氢钾∶甲醇＝80∶20为流动相，流速：1.0mL/min，检测波长：245nm； [0393] 对照品溶液的制备：精密称取维生素C对照品12.5mg，加0.5％的偏磷酸5mL，超声30秒溶解，加水定容至50ml容量瓶中，摇匀，制成每1mL含0.02mg的溶液，即得； [0394] 供试品溶液的制备：精密称取刺梨粉末0.4g，加1％偏磷酸50mL，称重，超声提取
10分钟，放冷至室温，补足减失重量，过滤，弃去初滤液，精密量取续滤液1mL至25mL容量瓶中，水定容至刻度，0.45μm微孔滤膜过滤，即得；
10分钟，放冷至室温，补足减失重量，过滤，弃去初滤液，精密量取续滤液1mL至25mL容量瓶中，水定容至刻度，0.45μm微孔滤膜过滤，即得；
[0395] 测定法：取对照品溶液、供试品溶液，分别进样10μL，测定，即得。 [0396] 实施例8：所述对总黄酮的含量测定方法为：采用三氯化铝比色法测定； [0397] 对照品溶液的制备：称取芦丁对照品25mg，置50mL容量瓶中，精密称定，加乙醇溶解定容至刻度，摇匀，制成每1mL含0.5mg的溶液，即得；
[0398] 标准曲线的制备：精密吸取芦丁对照品溶液0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mL分别置10mL容量瓶中，各加0.1mol/L的三氯化铝溶液2mL，0.2mol/L的NaAC缓冲溶液1mL，NaAC缓冲溶液先用HAC调pH＝5.1，用乙醇定容至刻度，摇匀，室温静置30min，以相应试剂为空白，照中国药典紫外分光光度法，在406nm波长下测吸光度；以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线；
[0399] 测定法：称取刺梨粉0.5g，置25mL平底烧瓶中，精密称定，加65％乙醇20mL，70℃超声提取1h，过滤，滤液定容至25mL容量瓶中，摇匀；精密吸取供试品溶液2mL，加0.1mol/L的三氯化铝溶液2mL，0.2mol/L的NaAC缓冲溶液1mL，NaAC缓冲溶液先用HAC调pH＝5.1，用乙醇定容至刻度，摇匀，室温静置30min，以相应试剂为空白，照中国药典紫外分光光度法，在406nm波长下测吸光度值，从标准曲线上读出供试品溶液中含芦丁的重量μg，计算，即得。
[0400] 实施例9：所述对总黄酮的含量测定方法为：采用三氯化铝比色法测定； [0401] 对照品溶液的制备：精密称取芦丁对照品，加乙醇溶解，摇匀，制成每1mL含0.5mg的溶液，即得；
[0402] 标准曲线的制备：精密吸取芦丁对照品溶液0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mL分别置10mL容量瓶中，各加5mol/L的三氯化铝溶液5mL，1mol/L的NaAC缓冲溶液5mL，NaAC缓冲溶液先用HAC调pH＝7，用乙醇定容至刻度，摇匀，室温静置60min，以相应试剂为空白，照中国药典紫外分光光度法，在406nm波长下测吸光度；以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线；
[0403] 测定法：称取刺梨粉0.5g，置25mL平底烧瓶中，精密称定，加50％乙醇10mL，90℃超声提取0.5h，过滤，滤液定容至25mL容量瓶中，摇匀；精密吸取供试品溶液2mL，加5mol/L的三氯化铝溶液5mL，1mol/L的NaAC缓冲溶液5mL，NaAC缓冲溶液先用HAC调pH＝7，用乙醇定容至刻度，摇匀，室温静置60min，以相应试剂为空白，照中国药典紫外分光光度法，在406nm波长下测吸光度值，从标准曲线上读出供试品溶液中含芦丁的重量μg，计算，即得。
[0404] 实施例10：所述对总黄酮的含量测定方法为：采用三氯化铝比色法测定； [0405] 对照品溶液的制备：精密称取芦丁对照品，加乙醇溶解，摇匀，制成每1mL含0.5mg的溶液，即得；
[0406] 标准曲线的制备：精密吸取芦丁对照品溶液0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mL分别置10mL容量瓶中，各加0.05mol/L的三氯化铝溶液1mL，0.1mol/L的NaAC缓冲溶液5mL，NaAC缓冲溶液先用HAC调pH＝4，用乙醇定容至刻度，摇匀，室温静置10min，以相应试剂为空白，照中国药典紫外分光光度法，在406nm波长下测吸光度；以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线；
[0407] 测定法：称取刺梨粉0.5g，置25mL平底烧瓶中，精密称定，加85％乙醇50mL，50℃超声提取3h，过滤，滤液定容至25mL容量瓶中，摇匀；精密吸取供试品溶液2mL，加
0.05mol/L的三氯化铝溶液1mL，0.1mol/L的NaAC缓冲溶液5mL，NaAC缓冲溶液先用HAC调pH＝4，用乙醇定容至刻度，摇匀，室温静置10min，以相应试剂为空白，照中国药典紫外分光光度法，在406nm波长下测吸光度值，从标准曲线上读出供试品溶液中含芦丁的重量μg，计算，即得。
0.05mol/L的三氯化铝溶液1mL，0.1mol/L的NaAC缓冲溶液5mL，NaAC缓冲溶液先用HAC调pH＝4，用乙醇定容至刻度，摇匀，室温静置10min，以相应试剂为空白，照中国药典紫外分光光度法，在406nm波长下测吸光度值，从标准曲线上读出供试品溶液中含芦丁的重量μg，计算，即得。
[0408] 实施例11：所述对总多酚的含量测定方法为：采用Folin-Denis法测定； [0409] 对照品溶液的制备：称取没食子酸对照品60mg精密称定，置50mL容量瓶中，加60％乙醇溶解定容至刻度摇匀；精密量取1mL，置50mL容量瓶中，加60％乙醇定容至刻度摇匀，即可；
[0410] 标准曲线的制备：精密吸取24ug/mL的没食子酸对照溶液2mL、3mL、4mL、5mL、6mL、7mL置25mL容量瓶中，加磷钼酸显色剂3mL，7％Na2CO35mL，水定容至刻度，70℃水浴加热
40min，以相应试剂作空白，照中国药典紫外分光光度法，在758nm处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线；
40min，以相应试剂作空白，照中国药典紫外分光光度法，在758nm处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线；
[0411] 测定法：称取刺梨粉0.2g，置25mL平底烧瓶中，精密称定，加60％乙醇15mL，100HZ超声提取30min，共1次，过滤，合并滤液，至50mL容量瓶中，水定容至刻度，摇匀；精密量取取供试品溶液0.2mL置25mL容量瓶中，加磷钼酸显色剂3mL，7％Na2CO35mL水定容至刻度，70℃水浴加热40min，以相应试剂作空白，照中国药典紫外分光光度法，在758nm处测定吸光度值，从标准曲线上读出供试品溶液中含芦丁的重量μg，计算，即得。 [0412] 实施例12：所述对总多酚的含量测定方法为：采用Folin-Denis法测定； [0413] 对照品溶液的制备：称取没食子酸对照品，精密称定，加80％乙醇溶解制成每1mL中含没食子酸24μg，即得；
[0414] 标准曲线的制备：精密吸取24ug/mL的没食子酸对照溶液2mL、3mL、4mL、5mL、6mL、7mL置25mL容量瓶中，加磷钼酸显色剂5mL，10％Na2CO310mL，水定容至刻度，70℃水浴加热
100min，以相应试剂作空白，照中国药典紫外分光光度法，在758nm处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线；
100min，以相应试剂作空白，照中国药典紫外分光光度法，在758nm处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线；
[0415] 测定法：称取刺梨粉0.2g，置25mL平底烧瓶中，精密称定，加80％乙醇15mL，100HZ超声提取60min，过滤，合并滤液，至50mL容量瓶中，水定容至刻度，摇匀；精密量取取供试品溶液0.2mL置25mL容量瓶中，加磷钼酸显色剂5mL，10％Na2CO310mL，水定容至刻度，
70℃水浴加热100min，以相应试剂作空白，照中国药典紫外分光光度法，在758nm处测定吸光度值，从标准曲线上读出供试品溶液中含芦丁的重量μg，计算，即得。
70℃水浴加热100min，以相应试剂作空白，照中国药典紫外分光光度法，在758nm处测定吸光度值，从标准曲线上读出供试品溶液中含芦丁的重量μg，计算，即得。
[0416] 实施例13：所述对总多酚的含量测定方法为：采用Folin-Denis法测定； [0417] 对照品溶液的制备：称取没食子酸对照品，精密称定，加50％乙醇溶解制成每1mL中含没食子酸24μg，即得；
[0418] 标准曲线的制备：精密吸取24ug/mL的没食子酸对照溶液2mL、3mL、4mL、5mL、6mL、7mL置25mL容量瓶中，加磷钼酸显色剂1mL，2％Na2CO32mL，水定容至刻度，70℃水浴加热
20min，以相应试剂作空白，照中国药典紫外分光光度法，在758nm处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线；
20min，以相应试剂作空白，照中国药典紫外分光光度法，在758nm处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线；
[0419] 测定法：称取刺梨粉0.2g，置25mL平底烧瓶中，精密称定，加50％乙醇15mL，100HZ超声提取10min，过滤，合并滤液，至50mL容量瓶中，水定容至刻度，摇匀；精密量取取供试品溶液0.2mL置25mL容量瓶中，加磷钼酸显色剂1mL，2％Na2CO32mL，水定容至刻度，
70℃水浴加热20min，以相应试剂作空白，照中国药典紫外分光光度法，在758nm处测定吸 光度值，从标准曲线上读出供试品溶液中含芦丁的重量μg，计算，即得。
70℃水浴加热20min，以相应试剂作空白，照中国药典紫外分光光度法，在758nm处测定吸 光度值，从标准曲线上读出供试品溶液中含芦丁的重量μg，计算，即得。
[0420] 实施例14：所述对氨基酸的含量测定方法为：采用反相高效液相色谱-柱前衍生化法测定；
[0421] 色谱条件：Venusil-AA氨基酸分析柱(4.6×250mm，5μm)，流速1.0mL，检测波长254nm，柱温40℃，流动相80％乙腈-醋酸钠-HAc缓冲液(PH＝6.5)梯度洗脱，A泵醋酸钠-HAc缓冲液，B泵80％乙腈；
[0422] 对照品溶液的制备：准确量取氨基酸混合标准溶液200μL，置1mL离心管中，精密加入正亮氨酸内标溶液20μL，三乙胺乙腈溶液100μL，异硫氰酸苯酯乙腈溶液100μL混匀，室温放置1小时，然后加入正己烷400μL，振摇后放置10分钟，取下层溶液，0.45μm针式微孔滤膜滤器过滤，即得；
[0423] 样品溶液的制备：精密称取刺梨样品置水解管中，精密加入6mol/L盐酸4mL，封口，置110℃恒温干燥箱中消化水解22小时，旋转蒸发仪蒸干溶剂，精密量取5mL水超声溶解，过滤，取续滤液200μL置1mL离心管中，精密加入正亮氨酸内标溶液20μL，三乙胺乙腈，异硫氰酸苯酯乙腈溶液各100μL，混匀，室温放置1小时，然后加正己烷400μL，振摇后放置10分钟，取下层溶液用0.45μm微孔滤膜过滤，即得；
[0424] 测定法：将氨基酸混合标准溶液与样品溶液分别上机测定，即得。 [0425] 实施例15：所述对氨基酸的含量测定方法为：采用反相高效液相色谱-柱前衍生化法测定；
[0426] 色谱条件：Venusil-AA氨基酸分析柱4.6×250mm，5μm，流速1.0mL，检测波长254nm，柱温40℃，流动相80％乙腈-醋酸钠-HAc缓冲液，PH＝6.5，梯度洗脱，A泵醋酸钠-HAc缓冲液，B泵80％乙腈；
[0427] 对照品溶液的制备：准确量取氨基酸混合标准溶液200μL，置离心管中，精密加入正亮氨酸内标溶液10μL，三乙胺乙腈溶液50μL，异硫氰酸苯酯乙腈溶液50μL混匀，室温放置0.5小时，然后加入正己烷200μL，振摇后放置5分钟，取下层溶液，0.45μm针式微孔滤膜滤器过滤，即得；
[0428] 样品溶液的制备：精密称取刺梨样品置水解管中，精密加入2mol/L盐酸2mL，封口，置80℃恒温干燥箱中消化水解10小时，旋转蒸发仪蒸干溶剂，精密量取2mL水超声溶解，过滤，取续滤液100μL置1mL离心管中，精密加入正亮氨酸内标溶液10μL，三乙胺乙腈，异硫氰酸苯酯乙腈溶液各50μL，混匀，室温放置0.5小时，然后加正己烷200μL，振摇后放置5分钟，取下层溶液用0.45μm微孔滤膜过滤，即得；
[0429] 测定法：将氨基酸混合标准溶液与样品溶液分别上机测定，即得。 [0430] 实施例16：所述对氨基酸的含量测定方法为：采用反相高效液相色谱-柱前衍生化法测定；
[0431] 色谱条件：Venusil-AA氨基酸分析柱4.6×250mm，5μm，流速1.0mL，检测波长254nm，柱温40℃，流动相80％乙腈-醋酸钠-HAc缓冲液，PH＝6.5，梯度洗脱，A泵醋酸钠- HAc缓冲液，B泵80％乙腈；
[0432] 对照品溶液的制备：准确量取氨基酸混合标准溶液200μL，置离心管中，精密加入正亮氨酸内标溶液30μL，三乙胺乙腈溶液200μL，异硫氰酸苯酯乙腈溶液200μL混匀，室温放置3小时，然后加入正己烷500μL，振摇后放置30分钟，取下层溶液，0.45μm针式微孔滤膜滤器过滤，即得；
[0433] 样品溶液的制备：精密称取刺梨样品置水解管中，精密加入10mol/L盐酸10mL，封口，置150℃恒温干燥箱中消化水解50小时，旋转蒸发仪蒸干溶剂，精密量取10mL水超声溶解，过滤，取续滤液300μL置1mL离心管中，精密加入正亮氨酸内标溶液50μL，三乙胺乙腈，异硫氰酸苯酯乙腈溶液各200μL，混匀，室温放置3小时，然后加正己烷500μL，振摇后放置30分钟，取下层溶液用0.45μm微孔滤膜过滤，即得；
[0434] 测定法：将氨基酸混合标准溶液与样品溶液分别上机测定，即得。 [0435] 实施例17：所述刺梨的炮制方法为：先在沸水上蒸2min，取出，间歇式微波干燥45min，干燥时真空度为0.075MPa，功率3000w，即得。
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