用D－氨基酸氧化酶和D－天冬氨酸氧化酶拮抗剂治疗中枢神经系统障碍
阅读：671发布：2021-10-10
专利汇可以提供用D－氨基酸氧化酶和D－天冬氨酸氧化酶拮抗剂治疗中枢神经系统障碍专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 揭示了D－ 氨 基酸 氧 化酶 和D－天冬氨酸氧化酶拮抗剂的化合物、用所述化合物 治疗 中枢神经系统障碍的方法，包括双相性 精神障碍 、 精神病 和 精神分裂症 以及含有这些拮抗剂的药学上可接受的组合物。，下面是用D－氨基酸氧化酶和D－天冬氨酸氧化酶拮抗剂治疗中枢神经系统障碍专利的具体信息内容。
1.一种用于治疗中枢神经系统障碍的候选分子的鉴定方法，其特征在于：所 述方法包括：
a)使D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶多肽或其生物活性片段与测试 化合物接触；
b)确定所述的化合物是否(i)与所述的多肽结合，或者(ii)抑制所述的多 肽的活性；以及
c)如果所述的化合物与所述的多肽结合或者抑制所述的多肽的活性，就将 所述的化合物施加给精神分裂症、抑郁症或双相性精神障碍动物模型，
其中确定所述的化合物改善了所述的动物模型中枢神经系统障碍的典型 症状，则表示所述的化合物就是治疗中枢神经系统障碍的候选分子。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述的化合物选择性与所述的多 肽结合。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述的化合物选择性抑制所述的 多肽的活性。
4.如权利要求1至3中任何一项所述的方法，其特征在于：所述的化合物能 够抑制一D-氨基酸的氧化或降解，所述的D-氨基酸选自由D-Met、D-Pro、 D-Phe、D-Tyr、D-Ile、D-Leu、D-Ala、D-Val、D-Ser、D-Arg、D-His、 D-正亮氨酸、D-Trp、D-鸟氨酸、顺-4-羟基-D-脯氨酸、D-Thr、D-Trp-甲 酯、N-乙酰基-D-Ala、D-Lys、D-Asp、D-Glu、D-Asn、D-Gln、D-Asp-二 甲酯和N-甲基-D-Asp组成的组。
5.如权利要求4所述的方法，其特征在于：所述的化合物能够抑制D-丝氨酸 的氧化和降解。
6.一种治疗精神分裂症、抑郁症或双相性精神障碍的候选分子的鉴定方法， 其特征在于：所述方法包括：
a)使D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶或其生物活性片段多肽与测试 化合物接触；以及
b)确定所述的化合物是否选择性抑制所述的多肽的活性；
其中确定所述的化合物选择性抑制所述的多肽的活性，则表示所述的化合 物就是治疗精神分裂症、抑郁症或双相性精神障碍的候选分子。
7.一种治疗精神分裂症、抑郁症或双相性精神障碍的候选分子的鉴定方法， 其特征在于：所述方法包括：
a)使D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶或其生物活性片段多肽与测试 化合物接触；以及
b)确定所述的化合物是否选择性与所述的多肽结合，
其中确定所述的化合物选择性与所述的多肽结合，则表示所述的化合物就 是治疗精神分裂症、抑郁症或双相性精神障碍的候选分子。
8.一种编码D-氨基酸氧化酶多肽的分离的或纯化的核酸，其特征在于：所述 的核酸选自由下列核酸分子组成的组：
(i)一编码多肽的核酸分子，所述的核酸分子包括一选自由SEQ ID NO 8 到10组成的序列组的氨基酸序列；以及
(ii)一含有核酸序列的核酸分子，所述的核酸序列选自由SEQ ID NO 1 到6组成的序列组或其互补序列。
9.一种分离的或纯化的D-氨基酸氧化酶多肽，其特征在于：所述的D-氨基 酸氧化酶多肽含有一氨基酸序列，所述的氨基酸序列选自由SEQ ID NO 8 到10组成的序列组。
10.一种分离的或纯化的D-氨基酸氧化酶多肽，其特征在于：所述的D-氨基 酸氧化酶多肽由含有一核酸序列的核酸分子编码，所述的核酸序列选自由 SEQ ID NO 1到6组成的序列组或其互补序列。
11.一种与精神分裂症、抑郁症或双相性精神障碍有关的关联性的检测方法， 其特征在于：所述的方法包括以生物样本中D-氨基酸氧化酶相关的双等位 标记测定核苷酸或其补体的同一性。
12.如权利要求11所述的方法，其特征在于：所述的生物样本取自单个受试 者。
13.如权利要求12所述的方法，其特征在于：所述的生物样本取自多个受试 者。
14.如权利要求11所述的方法，其特征在于：所述的方法还包括在所述的测 定步骤之前扩增部分含有双等位标记的所述序列。
15.如权利要求14所述的方法，其特征在于：通过PCR技术进行所述的扩增。
16.如权利要求11所述的方法，其特征在于：通过杂交分析、排序分析、微 排序分析或基于酶的错配检测分析而进行所述的测定。
17.一种群体中双等位标记等位基因的频率的估计方法，其特征在于：所述方 法包括：
a)根据权利要求11所述的方法以所述的双等位标记使所述群体中的个体 基因分型；以及
b)确定所述的群体中所述的双等位标记的比例表示。
18.一种基因型和性状之间关联性的检测方法，其特征在于：所述方法包括以 下步骤：
a)根据权利要求17所述的方法，确定性状呈阳性的群体中至少一个双等 位标记的频率；
b)根据权利要求17所述的方法，确定对照群体中至少一个双等位标记的 频率；以及
c)确定所述的基因型与所述的性状之间是否有一种差异显著的关联性。
19.一种个体是否有精神分裂症、抑郁症或双相性精神障碍风险的判断方法， 其特征在于：所述方法包括：
a)根据权利要求11所述的方法，使至少一个双等位标记基因分型；以及
b)将步骤a)所得的结果与发展精神分裂症、抑郁症或双相性精神障碍的 风险联系起来。
20.如权利要求11至19中任何一项所述的方法，其特征在于：所述的双等位 标记选自由SEQ ID NO 1、24、26和29或其互补序列所述的标记组成的 组。
21.一种受试者对精神分裂症、抑郁症或双相性精神障碍易感因素或易感性的 诊断、检测方法，其特征在于：所述方法包括：
a)由所述的受试者采集核酸样本；以及
b)测定所述的生物样本在D-氨基酸氧化酶相关的多态性的核苷酸或其补 体的同一性。
22.如权利要求1-7所述的方法，其特征在于：所述的测试化合物选自由下列 化合物组成的组：
(1)以包括下列结构式的结构表示的化合物或其药学上可接受的盐类：
式中，
a)A是烷基，例如甲基、乙基、丙基或丁基；支链烷基，例如异丁基、 异丙基、异戊基或者环烷基，例如环丙基、环戊基或环己基。这 些基团本身可由C1-C6烷基、卤素、羟基或氨基取代；
b)X是氧或氮；
c)Ar是芳香族单环、双环或三环稠合杂环，其中环或者未取代或者1 至5位上由氢、卤素、羟基、-CN、COR2、--CONR2R3、--S(O)nR2、 --OPO(OR2)OR3、--PO(OR3)R3、--OC(O)NR2R3、--COOR2、--CONR2R3、 --SO3H、--NR2R3、--NR2COR3、--NR3COOR3、--SO2NR2R3、--N(R2)SO2R3、 --NR2CONR2R2、--SO2NHCOR2、--CONHSO2R2、--SO2NHCN、--OR1、C1-C6 直链或支链烷基或链烯基、或者由一个或多个卤素、羟基、氨基、 羧基、羧酰胺、腈、硝基、烷氧基、三氟甲基、硫、磺酸盐、膦 酸盐、磷酸盐、Ar1、N3或其组合取代的C1-C6支链或直链烷基或链 烯基，其中杂环含有1-6个选自由氧、氮、硫及其组合组成的组 的杂原子；
d)R4是H、烷基、Ar1、O、取代的烷基；
e)R1是(C1-C6)烷基、Ar1、(C1-C4)烷氧基羰基甲基、取代的烷基；
f)R2和R3各自独立地是氢、C1-C6直链或支链烷基或链烯基、或者由 一个或多个卤素、羟基、氨基、羧基、羧酰胺、腈、硝基、烷氧 基、三氟甲基、硫、磺酸盐、膦酸盐、磷酸盐、Ar1、N3取代的C1-C6 支链或直链烷基或链烯基；以及
g)Ar1是单环、双环或三环、碳环或杂环，其中环或者未取代或者1 至3位上由卤素、羟基、硝基、三氟甲基、C1-C6直链或支链烷基 或链烯基、C1-C4烷氧基、C1-C4链烯氧基、苯氧基、苄氧基、氨基、 或其组合取代；其中单个环的大小是3-7个原子；而且杂环含有 1-6个选自由氧、氮、硫及其组合组成的组的杂原子；
(2)以包括下列结构式的结构表示的化合物：
式中，
a)A和B由碳或氮组成，D可含有0-2个由碳或氮组成的原子；
b)W是C1-C4烷基，如(CH2)n、支链烷基；
c)n是0-4；此外，当n＝0时假定-NHR2与B共价键合；
d)X是氧或氮；
e)R2是氢、烷基、Ar1、或氧取代的烷基；
f)R1是(C1-C6)烷基、Ar1、(C1-C4)烷氧羰基甲基或取代的烷基；
g)Ar是芳香族单环、双环或三环稠合杂环，其中环或者未取代或者1 至6位上由卤素、羟基、硝基、三氟甲基、C1-C6直链或支链烷基 或链烯基、C1-C4烷氧基、C1-C4链烯氧基、苯氧基、苄氧基、氨基、 C3-C6环烷基或其组合取代；其中单个环的大小是5-6个原子；而 且杂环含有1-6个选自由氧、氮、硫及其组合组成的组的杂原子；
以及
h)Ar1是单环、双环或三环、碳环或杂环，其中环或者未取代或者1 至3位上由卤素、羟基、硝基、三氟甲基、C1-C6直链或支链烷基 或链烯基、C1-C4烷氧基、C1-C4链烯氧基、苯氧基、苄氧基、氨基、 或其组合取代；其中单个环的大小是3-7个原子；而且杂环含有 1-6个选自由氧、氮、硫及其组合组成的组的杂原子；
(3)以包括下列结构式的结构表示的化合物：
式中，
a)A、G、K、J、E是六元碳环或杂环芳族环的原子，其中杂环含有 1-6个选自由碳、氮及其组合组成的组的杂原子；
b)A、G、K、J、E可各自独立地是未取代或由氢、卤素、羟基、-CN、 COR2、--CONR2R3、--S(O)nR2、--OPO(OR2)OR3、--PO(OR3)R3、 --OC(O)NR2R3、--COOR2、--CONR2R3、--SO3H、--NR2R3、--NR2COR3、 --NR3COOR3、--SO2NR2R3、--N(R2)SO2R3、--NR2CONR2R2、--SO2NHCOR2、 --CONHSO2R2、--SO2NHCN、--OR1、C1-C6直链或支链烷基或链烯基 取代，或者由一个或多个卤素、羟基、氨基、羧基、羧酰胺、腈、 硝基、烷氧基、三氟甲基、硫、磺酸盐、膦酸盐、磷酸盐、Ar1、 N3取代的C1-C6支链或直链烷基或链烯基；
c)R1是CN、COR2、--CONR2R3、--S(O)nR2、--OPO(OR2)OR3、--PO(OR3)R3、 --OC(O)NR2R3、--COOR2、--CONR2R3、--SO3H、--NR2R3、--NR2COR3、 --NR3COOR3、--SO2NR2R3、--N(R2)SO2R3、--NR2CONR2R2、--SO2NHCOR2、 --CONHSO2R2、--SO2NHCN、SCN、COCO2H、C1-C6直链或支链烷基或 链烯基、或者由一个或多个卤素、羟基、氨基、羧基、羧酰胺、 腈、硝基、烷氧基、三氟甲基、硫、磺酸盐、膦酸盐、磷酸盐、 Ar1、N3取代的C1-C6支链或直链烷基或链烯基；
d)W是N、(CH2)x、或-NCH2；
e)x＝0-4；
f)n＝0-2；
g)R2和R3各自独立地是氢、C1-C6直链或支链烷基或链烯基、或者由 一个或多个卤素、羟基、氨基、羧基、羧酰胺、腈、硝基、烷氧 基、三氟甲基、硫、磺酸盐、膦酸盐、磷酸盐、Ar1、N3取代的C1-C6 支链或直链烷基或链烯基；以及
h)Ar1是单环、双环或三环、碳环或杂环，其中环或者未取代或者1 至3位上由卤素、羟基、硝基、三氟甲基、C1-C6直链或支链烷基 或链烯基、C1-C4烷氧基、C1-C4链烯氧基、苯氧基、苄氧基、氨基、 或其组合取代；其中单个环的大小是5-6个原子；而且杂环含有 1-6个选自由氧、氮、硫及其组合组成的组的杂原子。
23.如权利要求1-7所述的方法，其特征在于：所述的测试化合物选自由下列 化合物组成的组：
(1)以包括下列结构式的结构表示的化合物：
式中，
a)W＝(CH2)n；
b)n＝0-5；
c)Z是氧或羟基；
d)Y＝H、Ar1、R4(CH2)x、R1S(CH2)x--、R1SO(CH2)x--、R1SO2(CH2)x--、 R1SO3(CH2)x--、HNR1SO2(CH2)x--、R1R2N(CH2)x、R1O(CH2)--、CF3或 OH；
e)x＝0-6；
f)R1、R2和R3各自独立地是氢、C1-C6直链或支链烷基、或者由一个 或多个卤素、羟基、氨基、羧基、羧酰胺、腈、硝基、烷氧基、 三氟甲基、硫、磺酸盐、膦酸盐、磷酸盐、Ar1取代的C1-C6支链 或直链烷基；
g)R4是卤素、CN、N3、C1-C6直链或支链烷基、或者由一个或多个卤 素、羟基、硝基、烷氧基、三氟甲基、磺酸盐、膦酸盐、磷酸盐、 Ar1、--COR1、--COOR1、--CONR1R2、CN、--NR1、--NR1R2、--SR1、 --SO2NHCN或者N3取代的C1-C6支链或直链烷基；以及
h)Ar1是单环、双环或三环、碳环或杂环，其中环或者未取代或者1 至3位上由卤素、羟基、硝基、三氟甲基、C1-C6直链或支链烷基 或链烯基、C1-C4烷氧基、C1-C4链烯氧基、苯氧基、苄氧基、氨基、 或其组合取代；其中单个环的大小是5-6个原子；而且杂环含有 1-6个选自由氧、氮、硫及其组合组成的组的杂原子；
(2)以包括下列结构式的结构表示的化合物：
式中，
a)Y是Ar1；
b)Z是羰基或羟基；
c)W是(CH2)n，其中(n＝0、1或2)，R3＝H；以及
d)Ar1是单环、双环或三环、碳环或杂环，其中环或者未取代或者1 至3位上由卤素、羟基、硝基、三氟甲基、C1-C6直链或支链烷基 或链烯基、C1-C4烷氧基、C1-C4链烯氧基、苯氧基、苄氧基、氨基、 或其组合取代；其中单个环的大小是5-6个原子；而且杂环含有 1-6个选自由氧、氮、硫及其组合组成的组的杂原子。
24.如权利要求1-7所述的方法，其特征在于：所述的测试化合物以包括下列 结构式的结构表示：
式中，
a)A和B一起形成一个5-8元饱和或部分不饱和杂环，其含有至少一 个处于化学稳定氧化状态的附加杂原子O、S、SO、SO2、NH、或NR1；
b)V是O、OR1、NR2、NR1R2、CHR1R2、CH2R3、CHR3R4或CH2N3；
c)R1和R2各自独立地是氢、C1-C6直链或支链烷基、或者由一个或多 个卤素、羟基、氨基、羧基、羧酰胺、硝基、烷氧基、三氟甲基、 硫、磺酸盐、膦酸盐、或Ar1取代的C1-C6支链或直链烷基；
d)R3和R4或者是卤素、C1-C6直链或支链烷基、或者由一个或多个羟 基、氨基、羧基、羧酰胺、硝基、烷氧基、三氟甲基、硫、磺酸 盐、膦酸盐、Ar1、--OC(O)R1、--COOR1、--CONR1R2、CN，NR1、NR1R2、 SR1、SO2NHCN或N3取代的C1-C6支链或直链烷基；以及
e)Ar1是单环、双环或三环、碳环或杂环，其中环或者未取代或者1 至3位上由卤素、羟基、硝基、三氟甲基、C1-C6直链或支链烷基 或链烯基、C1-C4烷氧基、C1-C4链烯氧基、苯氧基、苄氧基、氨基、 或其组合取代；其中单个环的大小是5-6个原子；而且杂环含有 1-6个选自由氧、氮、硫及其组合组成的组的杂原子。
25.如权利要求24所述的方法，其特征在于：所述的化合物是胱硫醚酮亚胺 和环硫堇。
26.如权利要求1-7所述的方法，其特征在于：所述的测试化合物以包括下列 结构式的结构表示：
式中，
a)W-Y-Z-A-B包括六元饱和或部分饱和碳环或杂环，其中杂环含有选 自由氧、氮、硫及其任意组合组成的组的杂原子；
b)B是C、CH或N；
c)A、W、Y、Z各自独立地是CH2、CHR3、CR3R4、O、S、SO、SO2、NH、 NR1、NR1R2或C＝O；
d)V是O、OR1、NR2、NR1R2、CHR1R2、CH2R3、CHR3R3或CH2N3；
e)R1和R2各自独立地是氢、C1-C6直链或支链烷基、或者由一个或多 个卤素、羟基、氨基、羧基、羧酰胺、腈、硝基、烷氧基、三氟 甲基、硫、磺酸盐、膦酸盐、磷酸盐或Ar1取代的C1-C6支链或直 链烷基；
f)R3和R4各自独立地是卤素、--OC(O)R1、--COOR1、--CONR1R2、CN、 --NR1、--NR1R2、--SR1、--SO2NHCN、N3、C1-C6直链或支链烷基、 或者由一个或多个卤素、羟基、硝基、烷氧基、三氟甲基、磺酸 盐、膦酸盐、Ar1、--OC(O)R1、--COOR1、--CONR1R2、CN，--NR1、 --NR1R2、--SR1、--SO2NHCN或N3取代的C1-C6支链或直链烷基；以 及
g)Ar1是单环、双环或三环、碳环或杂环，其中环或者未取代或者1 至3位上由卤素、羟基、硝基、三氟甲基、C1-C6直链或支链烷基 或链烯基、C1-C4烷氧基、C1-C4链烯氧基、苯氧基、苄氧基、氨基、 或其组合取代；其中单个环的大小是5-6个原子；而且杂环含有 1-6个选自由氧、氮、硫及其任意组合组成的组的杂原子。
27.如权利要求26所述的方法，其特征在于：所述的化合物是选自由氨基乙 基半胱氨酸酮亚胺(2H-1，4-噻嗪-5，6-二氢-3-羧酸)、硫代吗啉-2-羧酸、 羊毛硫氨酸酮亚胺和1，4-硫代吗啉-3，5-二羧酸组成的组。
28.如权利要求1-7所述的方法，其特征在于：所述的测试化合物选自由下列 化合物组成的组：
(1)以包括下列结构式的结构表示的化合物：
式中，
a)Z是O或NH；
b)R1是(C1-C6)烷基、Ar1、或者(C1-C4)烷氧基羰基甲基；
c)X、Y各自独立地是氢、Ar1、(C1-C6)烷基(可由杂原子断开或取代， 如氮、磷、氧、硫或硅，杂原子本身可由(C1-C3)烷基取代一次或 多次)、(C2-C6)链烯基、(C1-C6)卤代烷基、或卤素。当X和Y各自 都是碳时，它们可共价结合形成一种饱和或部分不饱和独立地由 碳、氮、氧和硫组成的3-8元碳环化合物，此外，环的原子本身 可以是未取代或由卤素、羟基、羧基、硝基、三氟甲基、C1-C6直 链或支链烷基或链烯基、C1-C4烷氧基、C1-C4链烯氧基、苯氧基、 苄氧基、氨基、取代的烷基、Ar1或其组合取代；
d)R2是氢、烷基、Ar1或氧取代的烷基；以及
e)Ar1是单环、双环或三环、碳环或杂环，其中环或者未取代或者1 至3位上由卤素、羟基、硝基、三氟甲基、C1-C6直链或支链烷基 或链烯基、C1-C4烷氧基、C1-C4链烯氧基、苯氧基、苄氧基、氨基、 或其组合取代；其中单个环的大小是3-7个原子；而且杂环含有 1-6个选自由氧、氮、硫及其任意组合组成的组的杂原子。
(2)以包括下列结构式的结构表示的化合物：
式中，
a)*＝不对称中心，及
b)R1＝(C1-C6)烷基、Ar1、(C1-C4)烷氧羰基甲基及
c)X是氢、(C1-C6)烷基(可由杂原子断开或取代，如氮、磷、氧、硫 或硅，杂原子本身可由(C1-C3)烷基取代一次或多次)、(C2-C6)链烯 基、(C1-C6)卤代烷基、卤素或Ar1；
d)R2是氢、烷基、Ar1或氧取代的烷基；
e)Ar1是单环、双环或三环、碳环或杂环，其中环或者未取代或者1 至3位上由卤素、羟基、硝基、三氟甲基、C1-C6直链或支链烷基 或链烯基、C1-C4烷氧基、C1-C4链烯氧基、苯氧基、苄氧基、氨基、 或其组合取代；其中单个环的大小是3-7个原子；而且杂环含有 1-6个选自由氧、氮、硫及其任意组合组成的组的杂原子。
(3)以包括下列结构式的结构表示的化合物：
式中，
a)X和Y各自是碳；
b)X和Y以3-8个碳原子的饱和或部分饱和环连接，这样一个环本身 的1至5位上可由卤素、羟基、羧基、氨基、硝基、氰基、三氟 甲基、C1-C6直链或支链烷基或链烯基、C1-C4烷氧基、C1-C4链烯氧 基、或取代的烷基取代；
c)R1是(C1-C6)烷基、Ar1或(C1-C4)烷氧羰基甲基；
d)R2是氢、烷基、Ar1或氧取代的烷基；以及
e)Ar1是单环、双环或三环、碳环或杂环，其中环或者未取代或者1 至3位上由卤素、羟基、硝基、三氟甲基、C1-C6直链或支链烷基 或链烯基、C1-C4烷氧基、C1-C4链烯氧基、苯氧基、苄氧基、氨基、 或其组合取代；其中单个环的大小是3-7个原子；而且杂环含有 1-6个选自由氧、氮、硫及其任意组合组成的组的杂原子。
(4)以包括下列结构式的结构表示的化合物：
式中，
a)X、Y各自独立地是氢、Ar1、(C1-C6)烷基(可由杂原子断开或取代， 如氮、磷、氧、硫或硅，杂原子本身可由(C1-C3)烷基取代一次或 多次)、(C2-C6)链烯基、(C1-C6)卤代烷基、或卤素如萘基或苯基；
b)R2是氢、烷基、Ar1或氧取代的烷基；以及
c)Ar1是单环、双环或三环、碳环或杂环，其中环或者未取代或者1 至3位上由卤素、羟基、硝基、三氟甲基、C1-C6直链或支链烷基 或链烯基、C1-C4烷氧基、C1-C4链烯氧基、苯氧基、苄氧基、氨基、 或其组合取代；其中单个环的大小是3-7个原子；而且杂环含有 1-6个选自由氧、氮、硫及其任意组合组成的组的杂原子。
29.如权利要求1-7所述的方法，其特征在于：所述的测试化合物以包括下列 结构式的结构表示：
式中，
a)R1是(C1-C6)烷基、Ar1或(C1-C4)烷氧羰基甲基；
b)R2是氢、烷基、Ar1或氧取代的烷基；
c)Y是氢、Ar1、(C1-C6)烷基(可由杂原子断开或取代，如氮、磷、 氧、硫或硅，杂原子本身可由(C1-C3)烷基取代一次或多次)、(C2- C6)链烯基、(C1-C6)卤代烷基、或卤素；以及
d)X是烷基或苯基。
30.一种能够抑制D-氨基酸转化为相应的α-酮酸的化合物在制备治疗精神分 裂症或双相性精神障碍的药物中的应用，其特征在于：所述的化合物选自 由苯甲酸盐、氨基乙基半胱氨酸-酮亚胺、氨基乙基半胱氨酸(硫赖氨酸)、 半胱胺、泛酰巯基乙胺、胱硫醚和S-腺苷甲硫氨酸及其衍生物组成的组。
31.一种能够抑制D-氨基酸转化为相应的α-酮酸的化合物在制备治疗精神分 裂症或双相性精神障碍的药物中的应用，其特征在于：所述的化合物选自 由权利要求22至30所述的化合物组成的组。
32.如权利要求30或31所述的应用，其特征在于：所述的化合物能够抑制D -丝氨酸的氧化或降解。
33.如权利要求32所述的应用，其特征在于：所述的化合物可抑制D-氨基酸 氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶多肽的活性。
技术领域
本发明提供用于治疗与中枢神经系统障碍相关的诸如精神分裂症、抑郁症及 其他情绪失常的疾病的化合物的鉴定装置、个体对所述疾病罹病倾向的判断装置、 以及所述疾病的疾病诊断和预后装置。更加具体地说，本发明涉及用D-氨基酸氧 化酶(DAO)和D-天冬氨酸氧化酶(DDO)拮抗剂治疗所述障碍的装置。
发明背景
技术装备方面的进步使基础和临床研究人员能够对健康和患病中的脑及神经 系统功能进行越来越深入的研究。就与中枢神经系统(CNS)障碍包括精神障碍和神 经退化性疾病有关的神经化学和基因机理而论，人们业已提出了许多神经生物学上 及药理学上的假设。然而，中枢神经系统障碍很复杂，病原学上知之甚少以及症状 重迭，性状不显，故而难以判断。所以，进一步的治疗方案和药物研制的努力会更 加复杂，并集中在多基因病因上，而且需要一些新测试去把患病人群分开，从而为 患有中枢神经系统障碍的病人提供更准确的诊断和预后信息。 中枢神经系统障碍的神经学基础
神经递质起全身的信号递质的作用。所以影响神经传递的疾病可导致严重后 果。例如，三十多年来解释许多精神障碍如抑郁症的生物基础的主導理论一直是单 胺假说。这一理论提出抑郁症部分是由于三种主要生物胺即多巴胺、去甲肾上腺素 和/或5-羟色胺中一种有缺陷。
除了单胺假说之外，很多争论都趋向重视考虑脑的整体功能，不再只考虑单 一个神经系统。在本文中，中枢胺能系统包括第二和第三信使系统的双重特异性作 用的重要性已显现出来。
中枢神经系统障碍的内分泌基础
显然，主要单胺系统，即多巴胺、去甲肾上腺素和5-羟色胺不能完全解释许 多中枢神经系统障碍的病理生理学。具体地说，很明显，中枢神经系统障碍可能有 一内分泌组分；下丘脑-垂体-肾上腺轴(HPA)在中枢神经系统障碍的病理生理学中 起着重要作用，包括促肾上腺皮质激素释放因子和糖皮质激素的作用。
在下丘脑-垂体-肾上腺轴中，下丘脑位于调节激素分泌的级系顶部。它制造 和释放作用于脑底的垂体的肽(小氨基酸链)，刺激或抑制各种激素将垂体释放到血 液中。这些激素包括生长激素、促甲状腺激素和促肾上腺皮质激素，控制靶腺释放 出其它激素。除了在神经系统外起作用外，随垂体激素而释放的激素也反馈回到垂 体和下丘脑。它们在那里输出抑制信号，以限制生物合成过量的激素。
中枢神经系统障碍
神经递质和内分泌失调与运动障碍(例如，帕金森氏病、杭廷顿舞蹈病、运动 神经元病等等)、情绪失常(例如单相性抑郁症、双相性精神障碍、焦虑等等)以及 涉及智力的疾病(例如阿耳茨海默氏病、雷维氏体痴呆症、精神分裂症等)相牵连。 另外，这些系统也与许多其它疾病，例如昏迷、头部创伤、脑梗塞、癫痫、酒精中 毒和代谢源的智力迟钝状态有连带关系，尤其见于小童。
中枢神经系统障碍可包括很多疾病，而且，相当多为遗传因子的疾病。中枢 神经系统障碍的例子包括神经退化性疾病、精神病(psychotic disorders)、情绪 失常、自闭症、药物依赖和酒精中毒、弱智及其它精神疾病(psychiatric diseases)，包括认知能力(cognitive)、焦虑、饮食、冲动控制(impulse-control) 及人格障碍(personality disorders)。疾病的定义可采用精神病的诊断和统计手 册第四版(Diagnosis and Statistical Manual of Mental Disorders，DSM-VI-R) 的分类。
即使只考虑中枢神经系统障碍的小亚型(subset)，由于对精神病、精神分裂 症和双相性精神障碍缺乏足够的治疗和对其疾病的分子基础又缺乏认识，很显然， 需要在治疗发明上有新目标及改进的治疗方法。对于精神分裂症和双相性精神障 碍，所有用于治疗精神分裂症的已知分子都有副作用，而且只对疾病症状起作用。 故目前迫切需要有一些没有副作用、并针对涉及精神分裂症和双相性精神障碍因果 机制的目标的新分子。所以，有助发现和表征这些目标的工具是必要的，而且十分 有用。
精神分裂症和双相性精神障碍的家族聚集、从双胞胎和收养研究所得的证据 以及全球发病率没有变化，都表明虽然环境危险因子在一定程度上是必要、充分或 互相作用的原因，但精神分裂症和双相性精神障碍主要还是遗传条件。例如，普通 人中有1％会患上精神分裂症，但若一个人的祖父母有精神分裂症，则他患病的危 险增大至约3％；若父母一方有精神分裂症，则他患病的危险增大至约10％；若父母 双方都有精神分裂症，则他患病的危险增大至约40％。
染色体13q31-q33上的精神分裂症易感性基因的鉴定
鉴定涉及特定中枢神经系统障碍如精神分裂症等具体性状(trait)的基因主 要有两种策略，目前均用于基因图谱，它们是：连锁分析(linkage analysis)和关 联性研究(association studies)。连锁分析需要研究其成员有多人患病的家族， 这种分析现在用于检测单个或寡基因固有性状。与之相反，关联性研究检查与阴性 性状(T-)对照组相比无亲戚关系的性状(T+)个体的标记等位基因频率，这种研究通 常用于检测多基因遗传。
遗传连锁或“连锁性”是基于在减数分裂过程中通过交换对染色体上两个相 邻序列中的那一个含有最少重组的作分析。要进行遗传连锁，先使诸如微卫星标记 等染色体标记准确定位于基因组上。遗传连锁分析根据系统树、疾病的传播和标记 的传递计算靶基因与所用染色体标记重组的概率。因此，如果预定标记的特定等位 基因与疾病一起传播的频率比带有该等位基因(重组水平在0和0.5之间)的机会要 多，就可以推断在标记附近可找到所述靶基因。用这种技术可以确定一些表示家族 性癌症的遗传倾向性的基因。为了能够用遗传连锁进行研究，患有遗传型疾病的家 族成员必须符合“信息性”标准：每一代要有数个成员患病(可获得其体质上的 DNA)，而且该家族最好有众多兄弟姐妹。
以前的连锁研究结果支持染色体13可能在13q32上隐藏一个精神分裂症易感 性基因座的假设(Blouin JL等人，Nature Genetics，20：70-73页，1998年；Lin MW等人，Hum.Genet.，99(3)：417-410页，1997年)。这些发现表明通过进行连 锁研究可以确定染色体13q32位点上存在精神分裂症基因座。连锁研究也已成功用 于绘制清楚显示孟德尔遗传模式以及具有高外显率的简单遗传性状，但这种方法存 在许多缺点。首先，连锁分析受制于选择适合每种研究性状的遗传模型的可靠性。 而且，用连锁分析所得到的分辨率也有限，需要进行补充研究来细化最初通过这种 方法鉴定的常见20Mb区。此外，当应用于复杂的基因性状时，例如由于多基因和/ 或环境因子综合作用而产生的性状时，连锁分析也被证实无能为力。在这样的情况 下，需要庞大的人力和财力才能招募到足够数目的患病家族成员，这是用连锁分析 对这些情形所需要的。最后，连锁分析不能用于研究无法获得大量信息的家族的性 状。
新的精神分裂症基因：g34872(sbg1)
最近，采用进行关联性研究的另一种方法，而不是采用连锁研究来鉴定一种 与新型精神分裂症和双相情感障碍有关的基因，其被称为g34872基因，位于染色 体13q31-q33基因座上。这种变换方法包括在感兴趣的区内产生双等位标记(主要 是单核苷酸多态性)，鉴定与精神分裂症连锁失衡的标记，以及在没有亲戚关系的 精神分裂症和双相情感障碍病人及对照组人群中进行关联性研究。
简而言之，用位于染色体13q31-q33区的27个公共序列标记位点(STSs)构建 一覆盖候选基因组区的细菌人工染色体(BAC)重迭群(contig)，以便筛选一个7种 基因组相当的专有BAC文库。从这些材料产生新的序列标记位点，构建该区的密集 型物理图谱。总之，275个STSs可以鉴定255个BAC，这些BAC全部依大小排列， 并通过原位染色体杂交技术作图以作验证。以一些位于人染色体13q31-q33区的 BAC插入片段的亚克隆插入端的局部排序产生新的双等位标记。在分析的第一阶 段，在精神分裂症病例和对照组中分析染色体13q31-q33候选基因座之间9个不同 BAC上第一组34个双等位标记，从而鉴定精神分裂症相关亚区(subregion)。第一 次分析后，如上所述，产生另外一些双等位标记，以绘制高度密集型靶区图谱。鉴 定最小一组有35个BAC，使其完全排序，结果出现几个重迭群，包括一个900kb 以上包含靶区序列的重迭群。
这些双等位标记用在关联性研究中，为了使含有候选精神分裂症基因g34872 的感兴趣的特定亚区更加细化。在对不同人群进行的一些研究中双等位标记被基因 型分型，以确认与亚区的关联性。关联性研究首先在法裔加拿大人群中精神分裂症 病人和对照组的两种不同筛选样本，其分别包括139病例和141个对照受试者以及 215病例和241个对照受试者，以及在阿根廷人群中双相情感障碍病例和对照受试 者中进行。用这些人进行的一些研究后所得的结果显示大约150kb的基因组区与精 神分裂症密切相关。这种关联在用美国精神分裂症人群的病例和对照受试者进行的 独立研究以及其它阿根廷人和法裔加拿大人群的样本中再次得到证实。
已发现，与精神分裂症相关的约150kb基因组区含有候选基因g34872。除了 对g34872基因的内含子—外显子结构进行特性分析外，还鉴定了包括组织特异性 mRNA剪接变异型在内的一系列mRNA剪接变异型，而且证明了mRNA的存在。其后， 一肽片段自g34872多肽产物中衍生，其氨基酸序列示于SEQ ID No5中，这表明 当它们被注入小鼠腹膜内，移位动作频率下降，而刻板性动作(stereotypy)增加。 于2000年3月30日提交、题为“与精神分裂症有关的基因、蛋白质及双等位标记” 的共同待批美国专利申请号09/539,333与共同待批国际专利申请号 PCT/IB00/00435都对g34872基因的鉴定作了进一步的讨论，以上两件申请均纳入 其整体内容作为参考。
与蛋白质相互作用的g34872及精神分裂症
目前迫切需要鉴定涉及精神分裂症和双相情感障碍的基因。同时也有必要鉴 定一些包含在g34872途径的基因以及一些其产物在功能上与g34872基因产物相互 作用的基因。这些基因在治疗精神分裂症或双相情感障碍中提供一些新的介入点， 而且可以进一步研究和表征g34872基因和有关生物途径。认识这些基因和与精神 分裂症有关的生物途径使研究人员能理解精神分裂症和双相情感障碍的病原，从而 研究出针对这些病因的药物和治疗方案。此外，也急切需要寻找检测精神分裂症和 双相情感障碍易感性以及预防或跟踪这些疾病发展的新方法。诊断工具也证明十分 有用。事实上，越早鉴定受试者有演变精神分裂症的危险，就可以施以早期和/或 预防性治疗。而且，准确评估药物的最终效能以及病人对该药物的最终耐量可使临 床医生提高精神分裂症和双相情感障碍治疗方案的效益/风险比。
因此，本发明涉及任何一种为与g34872多肽相互作用的蛋白质编码的基因， 本文称之g34872结合配偶体。本发明人通过酵母双杂交技术克隆了多种g34872 结合配偶体。本发明人证实了所述g34872结合配偶体的组包含D-氨基酸氧化酶。 认识g34872结合配偶体有助开发治疗中枢神经系统疾病的药物，其由选自由 g34872、D-氨基酸氧化酶和任何一种其它g34872结合配偶体组成的组的基因介导。 此外，认识g34872结合配偶体还可以提供g34872、g34872结合配偶体、g34872 结合配偶体复合物或g34872与其结合配偶体相互作用的检测装置。
与蛋白质相互作用的g34872及精神分裂症：D-氨基酸氧化酶
最早有记载的其中一种酶是D-氨基酸氧化酶(DAO)，它是在二十世纪三十年代 发现的第二种黄素蛋白。D-氨基酸氧化酶将D-氨基酸转化为相应的.α.-酮酸。这 是通过使D-氨基酸催化脱氢生成亚氨基对应物和还原黄素产物复合物来完成。然 后用双氧(再)氧化还原的黄素，生成FADox和双氧水，而亚氨基酸自动水解成酮酸 和NH4+。虽然大部分生物体和哺乳类组织都有D-氨基酸氧化酶，但它在脊椎动物 中的生理作用还不清楚。D-氨基酸氧化酶可以氧化D-Met、D-Pro、D-Phe、D-Tyr、 D-Ile、D-Leu、D-Ala和D-Val。D-Ser、D-Arg、D-His、D-正亮氨酸和D-Trp的氧 化速度很低。D-鸟氨酸、顺-4-羟基-D-脯氨酸、D-Thr、D-Trp-甲酯、N-乙酰基-D-Ala 和D-Lys的氧化速度极低。D-Asp、D-Glu及其衍生物、Gly和所有L-氨基酸不氧 化(或者检测不到它们的氧化速度)。D-天冬氨酸氧化酶只能氧化D-Asp、D-Glu及 其下列衍生物：D-Asn、D-Gln、D-Asp-二甲酯和N-甲基-D-Asp。
中枢神经系统障碍是一类神经障碍。中枢神经系统障碍可以由药物诱发；可 以因遗传罹病倾向性、感染或创伤而引起；或者由未知的病原引起。中枢神经系统 障碍包括神经精神障碍、神经病和精神病(mental illnesses)；包括神经退化性疾 病、行为障碍、认知障碍和认知情感障碍(cognitive affective disorders)。一 些中枢神经系统障碍的临床表现是由于中枢神经系统机能异常(即因释放不适当水 平的神经递质、神经递质受体的不适当性质和/或神经递质与神经递质受体之间不 适当的相互作用)而引起的。另一些中枢神经系统障碍可由胆碱不正常分泌、多巴 胺能不正常分泌、肾上腺素能不正常分泌和/或5-羟色胺能不正常分泌所造成。较 常见的中枢神经系统障碍包括早衰性痴呆(早期发作的阿耳茨海默氏病)、老年性痴 呆(阿耳茨海默氏型痴呆)、帕金森氏症包括帕金森氏病、杭廷顿舞蹈病、迟发性运 动障碍、运动过度、躁狂症、注意力缺陷障碍、焦虑、诵读困难、精神分裂症、精 神病、双相性精神障碍、抑郁症和图雷特氏综合征(Tourette’s syndrome)。
神经递质和内分泌失调与运动障碍(例如，帕金森氏病、杭廷顿舞蹈病、运动 神经元病等等)、情绪失常(例如单相性抑郁症、双相性精神障碍、焦虑等等)以及 涉及智力的疾病(例如阿耳茨海默氏病、雷维氏体痴呆症、精神分裂症等)相牵连。 另外，这些系统也与许多其它疾病，例如昏迷、头部创伤、脑梗塞、癫痫、酒精中 毒和代谢源的智力迟钝状态有连带关系，尤其见于小童。
精神分裂症
在发达国家中，大约有1％成年人在其一生的某一点会出现精神分裂症。估计 全球有四千五百万人患有精神分裂症，其中在发达国家超过三千三百万。此外，精 神分裂症占去全部精神卫生费用的四分之一，并且精神医院的病床有三分之一是精 神分裂症病人。大部分精神分裂症患者没有工作能力。社会为精神分裂症所耗的费 用十分庞大。例如，美国治疗精神分裂症的直接费用估计接近国民生产总值的 0.5％。精神分裂症患者的标准化死亡率估计比一般人高2到4倍，他们的预期寿命 较一般人短20％。
精神分裂症患者最常见的死因是自杀(10％患者自杀)，风险比一般人高20倍。 精神分裂症患者由于心脏病与呼吸和消化系统疾病而死亡的数目也不断上升。
精神分裂症包括一组具有“阳性”或“阴性”症状的精神病。阳性症状由幻 觉、妄想和思想障碍组成；阴性症状包括情绪低落、缺乏意志和减少活动。
近年已经识别了许多生化异常情况，结果发展了一些基于神经递质的假说； 最为人熟知的一种假说是“多巴胺假说”，其中一种形式宣称D2受体水平上中脑边 缘的多巴胺通路过度活动。然而，研究人员发现在多巴胺能系统的各种受体与精神 分裂症之间的关联性并不一致。
双相性精神障碍
双相性精神障碍是较常见的精神障碍，发病率约占人口的1.3％，据报导，精 神病临床所见中大约一半的情绪失常者后果严重，甚至可能致残。业已发现，性别 不同，双相性精神障碍也不同，取决于精神障碍的类型；例如，发现男性和女性同 样可患上双相性精神障碍I，但据说，双相性精神障碍II多见于女性。双相性精 神障碍的发病年龄一般在十多岁，通常在患者二十岁出头的时候被诊断出。双相性 精神障碍也发生于老年人，一般是由神经障碍或其它健康状况所造成。除了对患者 的社会发展有严重影响外，据报导，约15％双相性精神障碍患者自杀成功。
双相性精神障碍以亢奋和经常性抑郁阶段为特点；亢奋阶段指躁狂或轻度躁 狂，抑郁阶段可能交替发作或各个阶段混合发作，严重程度不同，持续时间也各异。 由于双相性精神障碍有不同形式，表现为不同症状，对双相性精神障碍亚型的定义 和整体概念扩展为包括以前被认为患有不同精神障碍的病人，都导致双相性精神障 碍的分类成为一个广泛研究的主题。双相性精神障碍通常有一些共同的临床迹象、 症状、治疗和一般精神病的神经生物特征，所以要作出准确诊断对精神病医生来说 是一个颇大的挑战。另外，因为双相性精神障碍和各种情绪失常与精神障碍的病程 差别很大，所以越早对疾病进行表征，制订长期控制疾病的方案变得至关重要。
社会对双相性精神障碍的负担十分庞大。与该疾病相关的躁狂症使工作能力 下降，并导致精神病，最后的结果往往需要住院治疗。无论在直接还是间接费用上， 这种疾病对病人家属和亲戚都造成极大负担，社会上对该疾病的歧视有时甚至延续 几代。这样的歧视通常会造成孤立和忽视。此外，越早发病，被中断的教育与社会 发展的效应越严重。
双相性精神障碍的DSM-IV分类根据躁狂症或轻度躁狂症的程度和持续时间分 为四种精神障碍，以及根据明显的健康状况或其治疗或者药物滥用分为两种精神障 碍。躁狂症的症状是情绪高涨或暴躁、注意力分散、行为冲动、过度活跃、夸大、 过份乐观、脑筋转动很快以及说话急速。四种双相性精神障碍的征状是躁狂症有特 定的程度和持续时间，DSM-IV包括：
-双相性精神障碍I型，包括躁狂症至少持续一星期的病人；
-双相性精神障碍II型，包括轻度躁狂症至少持续四天的病人，特点是亢奋
症状比躁狂症轻，病人从来未有过躁狂症，以前有过重度抑郁症；
-其它未注明(NOS)之双相性精神障碍，包括有双相性精神障碍II的症状但 亢奋期不足4天的病人，或者有轻度躁狂症但从来未有过重度抑郁症的病 人；
-循环性精神病，包括有各种不符合轻度躁狂症或重度抑郁症标准的躁狂和 抑郁症状，但这些症状持续超过两年，中间无症状的时间不超过两个月的 病人。
按DSM-IV分类的其余两种双相性精神障碍是症状明显或由各种健康状况及其 治疗所造成的精神障碍，以及涉及或与药物滥用有关的精神障碍。医学上可引起双 相性精神障碍的精神障碍通常包括内分泌失调和脑血管受损，引起双相性精神障碍 的医学疗法已知包括糖皮质激素和滥用刺激物。与使用或滥用药物相关的精神障碍 称为“药物诱导的具有躁狂或混合特征的情绪失常”。
诊断双相性精神障碍富于挑战性。一个特别困难之处在于某些病人同时有躁 狂症和焦虑症或抑郁症的混合状态，但因为至少一个星期不是每天都全部符合躁狂 症和重度抑郁所规定的标准，所以不在DSM-IV分类之内。其它的困难还包括基于 持续期对病人按DSM-IV组分类，因为病人通常反复处于亢奋期和抑郁期，但程度 又不同。具体地说，据报导，在引起“快速循环”病程中用抗抑郁药可使病程变坏。 使诊断变得更加困难的是以下一个事实：双相性病人，特别是处于称为第III阶段的 躁狂症，与双相性精神障碍病人具有相同的混乱思想和行为。此外，精神病医生必 须区分焦虑型抑郁症与混合型躁狂症；重度抑郁症病人一般会焦躁，导致有类似双 极性症状。另一个复杂因素是双极性病人滥用药物特别是酒精的比例非常高。而酗 酒病人中躁狂症的比率较低，众所周知，药物滥用者可表现为亢奋症状。所以，这 些困难会将双极性病人诊断为滥用药物。
抑郁症
抑郁症在医学上是一种严重疾病，全球有三亿四千万人患有抑郁症。与正常 的情感体验悲伤、沮丧、心情欠佳不同，临床上的抑郁症是持续和长期的，能严重 影响个人的生活能力。所以，抑郁症是世界上丧失能力的主因，估计仅美国每年为 此耗费五百三十亿美元。
抑郁症的症状包括情绪低落、对活动失去兴趣和悲观、食欲或体重改变、失 眠或嗜睡、精神性运动激动或阻抑、疲倦或精神不振、无价值感受或过份自疚、焦 虑、精神难以集中或难作决定、以及重复想死亡或自杀。如果病人有五种或以上这 些症状，并且两星期内几乎每天日常生活与处事能力都受到影响，就可以诊断为单 极性重度抑郁症(或重度抑郁情感障碍)。抑郁症一般出现在青春期的末期或成人期 的早期；不过，最近有证据显示，三十年前出生的人可能在很早期就出现抑郁症。
世界卫生组织预测，到2020年抑郁症对发展中国家的人民而言是最严重的疾 病，到那时抑郁症将是死亡和丧失能力的第二大诱因。除了它引起难以忍受的痛苦 外，重度抑郁症最大的危险是自杀。估计25％的病人在患有重度抑郁症5年内试图 自杀。另外，抑郁症也引发心脏病发作、中风、糖尿病和癌症等经常性和严重併发 症。根据一项持续13年的近期研究，有重度抑郁症的个体心脏病发作可能是无此 病史的人的4倍。
高达50％有中枢神经系统障碍如帕金森氏病、阿耳茨海默氏病的病人的一个特 征是抑郁症。
在抑郁症病人的脑脊液中发现多巴胺代谢物HVA的水平很低。另外，多巴胺 激动剂对抑郁症具有治疗反应。
目前的抗抑郁药用于针对多种抑郁症状，提高胺能突触中神经递质的浓度。 不同的药理机制将抗抑郁药分为七种不同类型。二种典型机制是三环抗抑郁药 (TCAs)和单胺氧化酶抑制剂(MAOIs)。最常用的药物是选择性5-羟色胺再吸收抑制 剂(SSRIs)。其它三类抗抑郁药，如SSRIs提高5-羟色胺能的神经传递，但它们也 有其它作用，即双重抑制5-羟色胺和去甲肾上腺素再吸收；抑制5-羟色胺-2-拮抗 性/再吸收；α2拮抗性加上5-羟色胺-2和-3-拮抗性。选择性去甲肾上腺素和多巴 胺再吸收抑制剂限定了一类新的抗抑郁药，它们对5-羟色胺系统无直接作用。
对于中枢神经系统障碍，如精神分裂症、双相性精神障碍、抑郁症和其它情 绪失常，所有用于治疗的已知分子都有副作用，而且只对疾病症状起作用。故迫切 需要有一些没有相关副作用或减少副作用、并针对涉及这些中枢神经系统障碍病因 机制的目标的新分子。有必要提供一种有用的方法，给容易患上或已患上中枢神经 系统障碍的病人施加D-氨基酸氧化酶拮抗剂化合物来预防和治疗这样一些障碍。 此外，也有必要提供一种有用的方法，给容易患上或已患上中枢神经系统障碍的病 人施加D-天冬氨酸氧化酶拮抗剂化合物来预防和治疗这样一些障碍。
对于中枢神经系统障碍，如帕金森氏病、阿耳茨海默氏病和其它神经退化性 疾病，目前可用于治疗的药物组合物十分有限，用于治疗的已知分子都有副作用， 而且只对疾病症状起作用。故迫切需要有一些没有相关副作用或减少副作用、并针 对涉及这些中枢神经系统障碍病因机制的目标的新分子。有必要提供一种有用方 法，给容易患上或已患上中枢神经系统障碍的病人施加D-氨基酸氧化酶活化剂化 合物来预防和治疗这样一些障碍。此外，也有必要提供一种有用方法，给容易患上 或已患上中枢神经系统障碍的病人施加D-天冬氨酸氧化酶活化剂化合物来预防和 治疗这样一些障碍。
本发明的药物组合物用于预防和治疗这些中枢神经系统障碍。
治疗
由于目前还不能治愈中枢神经系统障碍，例如精神分裂症、双相性精神障碍、 抑郁症和其它情绪失常，所以治疗的目的是使症状减轻，如果可能的话，减到缓解 的程度。因为症状具有相似性，因此精神分裂症、抑郁症和双相性精神障碍往往用 同一些药物治疗。两种疾病经常用抗精神病药和安定药治疗。
例如，对于精神分裂症，抗精神病药最常用和最有效。通常开给精神分裂症 的抗精神病药有四大类。第一类安定药例如是氯丙嗪(chlorpromazine)，由于减轻 了阳性(精神病)症状以及防止复发，对精神分裂症病人的治疗取得重大进步。服用 氯丙嗪的病人已经能够离开精神病院，在社区或他们的家中生活。但这些药物远未 为理想。约20％到30％的病人对它们完全无反应，其他人最终旧病复发。这些药物 被称为安定药是因为它们对神经产生严重副作用，包括手臂和腿僵硬和颤抖、肌肉 痉挛、身体移动反常和静坐不能(行走和坐立不安)。这些副作用令人心烦以致很多 病人都拒绝服用这些药物。此外，安定药也不能改善精神分裂症所谓的阴性症状， 副作用甚至会加重这些症状。所以，尽管安定药有着明显的有益效果，但是一些短 期有良好反应的病人的生活和处事能力在最后甚至会恶化。
标准安定药的这些公知缺陷刺激人们寻找新治疗，并导致发现一类新的药物， 称为非典型安定药。第一种非典型安定药是氯扎平(clozapine)，对大约三分之一 对标准安定药无反应的病人有效。它似乎可减轻阴性和阳性症状，或对阴性症状的 加重程度至少较标准安定药轻。而且，它对整体的生活和处事能力具有有益的效果， 并且可降低精神分裂症病人自杀的危险。它也不会象标准安定药那样产生令人心烦 的神经症状，或者提高激素催乳素的血液水平，催乳素过量可使女性月经异常和不 孕，使男性性无能或乳房增大。许多不能忍受标准安定药的病人都能够服用氯扎平。 然而，氯扎平也有严重限制。它最初从市场上收回是因为它可引起粒细胞缺乏症， 这是一种有可能致命的不能产生白血细胞的疾病。粒细胞缺乏症乃是一种需要小心 监控并且进行周期性验血的预兆。氯扎平还可能引起疾病发作或其它不良副作用 (例如，渴睡、血压下降、流涎、尿床和体重增加)。所以，它通常只用于对其它药 物无反应的病人。
研究人员已研制成第三类抗精神症药，它具有氯扎平的功效但没有其缺点。 其中一种是利培酮(risperidone)。早期研究表明，它对阳性症状的效果像标准安 定药一样，对阴性症状的效果可能更好。它对神经产生的副作用比氯扎平多，但较 标准安定药少。然而，它会提高催乳素水平。现在利培酮可开药方给更多的精神病 患者，越来越多医生似乎给对标准药物无反应的病人优先考虑采用利培酮而不是氯 扎平，因为他们认为它较安全。另一种新药是奥扎平(Olanzapine)，它对阳性症状 的效果至少与标准安定药一样有效，对阴性症状的效果则更好。正常临床剂量时它 的神经副作用很少，它也不会显著提高催乳素水平。虽然它没有氯扎平大部分副作 用，但一些服用奥扎平的病人可能变得镇静或晕眩、引发口腔干燥、或体重增加。 在一些罕见的情况下，肝脏功能测试会有瞬时异常。
精神分裂症的结果研究通常基于医院的治疗研究，可能不能代表精神分裂症 患者人群。极端的结果是20％的患者似乎发作过一次精神病后完全康复，而14-19％ 的病人会发展为慢性持续性精神病，不会完全康复。一般来说，五年的临床结果似 乎遵循以下三种情况的规律：约35％的病人的结果很差；36％的病人的结果良好， 而其余的病人的结果为中间情况。精神分裂症预后似乎在五年后不会变差。
不论何种原因，不断有证据显示精神分裂症不在发病初期进行长期治疗可能 对结果产生负面影响。不过，药物的选用通常会延迟病人第一次发病的时间。病人 可能没有意识到他们已经病了，或者他们可能害怕寻求协助；家人有时希望问题简 单消失或者无法说服病人去治疗；当潜在的副作用使诊断不确定时，医生可能犹豫 开出抗精神药处方。事实上，在疾病最早表现时，很难将精神分裂症与双极性躁狂 -抑郁精神障碍、重度抑郁症、与药物滥用有关的精神障碍、以及与压力有关的精 神障碍区分开来。因为这些疾病的最佳治疗是不同的，所以这些精神障碍的长期预 后也使治疗的开始时间不同。
对于中枢神经系统障碍，如精神分裂症、双相性精神障碍、抑郁症和其它情 绪失常，用于治疗的已知分子都有副作用，而且只对疾病症状起作用。故迫切需要 有一些没有副作用、并针对涉及中枢神经系统障碍因果机制的目标的新分子。所以， 有助发现和表征这些目标的工具是必要的，而且十分有用。
精神分裂症和双相性精神障碍的家族聚集、从双胞胎和收养研究所得的证据 以及全球发病没有变化，都表明虽然环境危险因子在一定程度上是必要、充分或互 相作用的原因，但精神分裂症和双相性精神障碍主要还是遗传条件。例如，普通人 中有1％会患上精神分裂症，但若一个人的祖父母有精神分裂症，则他患病的危险 增大至约3％；若父母一方有精神分裂症，则他患病的危险增大至约10％；若父母双 方都有精神分裂症，则他患病的危险增大至约40％。
所以，目前迫切需要鉴定涉及这些中枢神经系统障碍中包含的基因。认识这 些基因可使研究人员能理解精神分裂症、抑郁症、双相性精神障碍以及其它情绪失 常的病原，从而可能研究出针对这些疾病病因的药物和治疗方案，而不仅仅针对它 们的症状。
此外，也很需要有检测这些中枢神经系统障碍如精神分裂症和双相性精神障 碍、抑郁症易感性以及预防或跟踪这些疾病发展的新方法。诊断工具也证明十分有 用。事实上，越早识别受试者有演变精神分裂症的危险，就可以施以早期和/或预 防性治疗。而且，准确评估药物的最终效能以及病人对该药物的最终耐量可使临床 医生提高中枢神经系统障碍治疗方案的效益/风险比，例如精神分裂症、抑郁症、 双相性精神障碍以及其它情绪失常的效益/风险比。
神经递质起全身的信号递质的作用。所以影响神经传递的疾病可导致严重后 果。例如，三十多年来解释许多精神障碍如抑郁症的生物基础的主導理论一直是单 胺假说。这一理论提出抑郁症部分是由于三种主要生物胺即多巴胺、去甲肾上腺素 和/或5-羟色胺中一种有缺陷。
除了单胺假说之外，很多争论都趋向重视考虑脑的整体功能，不再只考虑单 一个神经系统。在本文中，中枢胺能系统包括第二和第三信使系统的双重特异性作 用的重要性已显现出来。
中枢神经系统障碍的内分泌基础
显然，主要单胺系统，即多巴胺、去甲肾上腺素和5-羟色胺不能完全解释许 多中枢神经系统障碍的病理生理学。具体地说，很明显，中枢神经系统障碍可能有 一内分泌组分；下丘脑-垂体-肾上腺轴(HPA)在中枢神经系统障碍的病理生理学中 起着重要作用，包括促肾上腺皮质激素释放因子和糖皮质激素的作用。
在下丘脑-垂体-肾上腺轴中，下丘脑位于调节激素分泌的级系顶部。它制造 和释放作用于脑底的垂体的肽(小氨基酸链)，刺激或抑制各种激素将垂体释放到血 液中。这些激素包括生长激素、促甲状腺激素和促肾上腺皮质激素，控制靶腺释放 出其它激素。除了在神经系统外起作用外，随垂体激素而释放的激素也反馈回到垂 体和下丘脑。它们在那里输出抑制信号，以限制生物合成过量的激素。
中枢神经系统障碍
神经递质和内分泌失调与运动障碍(例如，帕金森氏病、杭廷顿舞蹈病、运动 神经元病等等)、情绪失常(例如单相性抑郁症、双相性精神障碍、焦虑等等)以及 涉及智力的疾病(例如阿耳茨海默氏病、雷维氏体痴呆症、精神分裂症等)相牵连。 另外，这些系统也与许多其它疾病，例如昏迷、头部创伤、脑梗塞、癫痫、酒精中 毒和代谢源的智力迟钝状态有连带关系，尤其见于小童。
中枢神经系统障碍可包括很多疾病，而且，相当多为遗传因子的疾病。中枢 神经系统障碍的例子包括神经退化性疾病、精神病(psychotic disorders)、情绪 失常、自闭症、药物依赖和酒精中毒、弱智及其它精神疾病(psychiatric diseases)，包括认知能力(cognitive)、焦虑、饮食、冲动控制(impulse-control) 及人格障碍(personality disorders)。疾病的定义可采用精神病的诊断和统计手 册第四版(Diagnosis and Statistical Manual of Mental Disorders，DSM-VI-R) 的分类。
即使只考虑中枢神经系统障碍的小亚型(subset)，由于对精神病、精神分裂 症和双相性精神障碍缺乏足够的治疗和对其疾病的分子基础又缺乏认识，很显然， 需要在治疗发明上有新目标及改进的治疗方法。对于精神分裂症和双相性精神障 碍，所有用于治疗精神分裂症的已知分子都有副作用，而且只对疾病症状起作用。 故目前迫切需要有一些没有副作用、并针对涉及精神分裂症和双相性精神障碍因果 机制的目标的新分子。所以，有助发现和表征这些目标的工具是必要的，而且十分 有用。
精神分裂症和双相性精神障碍的家族聚集、从双胞胎和收养研究所得的证据 以及全球发病率没有变化，都表明虽然环境危险因子在一定程度上是必要、充分或 互相作用的原因，但精神分裂症和双相性精神障碍主要还是遗传条件。例如，普通 人中有1％会患上精神分裂症，但若一个人的祖父母有精神分裂症，则他患病的危 险增大至约3％；若父母一方有精神分裂症，则他患病的危险增大至约10％；若父母 双方都有精神分裂症，则他患病的危险增大至约40％。
染色体13q31-q33上的精神分裂症易感性基因的鉴定
鉴定涉及特定中枢神经系统障碍如精神分裂症等具体性状(trait)的基因主 要有两种策略，目前均用于基因图谱，它们是：连锁分析(linkage analysis)和关 联性研究(association studies)。连锁分析需要研究其成员有多人患病的家族， 这种分析现在用于检测单个或寡基因固有性状。与之相反，关联性研究检查与阴性 性状(T-)对照组相比无亲戚关系的性状(T+)个体的标记等位基因频率，这种研究通 常用于检测多基因遗传。
遗传连锁或“连锁性”是基于在减数分裂过程中通过交换对染色体上两个相 邻序列中的那一个含有最少重组的作分析。要进行遗传连锁，先使诸如微卫星标记 等染色体标记准确定位于基因组上。遗传连锁分析根据系统树、疾病的传播和标记 的传递计算靶基因与所用染色体标记重组的概率。因此，如果预定标记的特定等位 基因与疾病一起传播的频率比带有该等位基因(重组水平在0和0.5之间)的机会要 多，就可以推断在标记附近可找到所述靶基因。用这种技术可以确定一些表示家族 性癌症的遗传倾向性的基因。为了能够用遗传连锁进行研究，患有遗传型疾病的家 族成员必须符合“信息性”标准：每一代要有数个成员患病(可获得其体质上的 DNA)，而且该家族最好有众多兄弟姐妹。
以前的连锁研究结果支持染色体13可能在13q32上隐藏一个精神分裂症易感 性基因座的假设(Blouin JL等人，Nature Genetics，20：70-73页，1998年；Lin MW等人，Hum.Genet.，99(3)：417-410页，1997年)。这些发现表明通过进行连 锁研究可以确定染色体13q32位点上存在精神分裂症基因座。连锁研究也已成功用 于绘制清楚显示孟德尔遗传模式以及具有高外显率的简单遗传性状，但这种方法存 在许多缺点。首先，连锁分析受制于选择适合每种研究性状的遗传模型的可靠性。 而且，用连锁分析所得到的分辨率也有限，需要进行补充研究来细化最初通过这种 方法鉴定的常见20Mb区。此外，当应用于复杂的基因性状时，例如由于多基因和/ 或环境因子综合作用而产生的性状时，连锁分析也被证实无能为力。在这样的情况 下，需要庞大的人力和财力才能招募到足够数目的患病家族成员，这是用连锁分析 对这些情形所需要的。最后，连锁分析不能用于研究无法获得大量信息的家族的性 状。
新的精神分裂症基因：g34872(sbg1)
最近，采用进行关联性研究的另一种方法，而不是采用连锁研究来鉴定一种 与新型精神分裂症和双相情感障碍有关的基因，其被称为g34872基因，位于染色 体13q31-q33基因座上。这种变换方法包括在感兴趣的区内产生双等位标记(主要 是单核苷酸多态性)，鉴定与精神分裂症连锁失衡的标记，以及在没有亲戚关系的 精神分裂症和双相情感障碍病人及对照组人群中进行关联性研究。
简而言之，用位于染色体13q31-q33区的27个公共序列标记位点(STSs)构建 一覆盖候选基因组区的细菌人工染色体(BAC)重迭群(contig)，以便筛选一个7种 基因组相当的专有BAC文库。从这些材料产生新的序列标记位点，构建该区的密集 型物理图谱。总之，275个STSs可以鉴定255个BAC，这些BAC全部依大小排列， 并通过原位染色体杂交技术作图以作验证。以一些位于人染色体13q31-q33区的 BAC插入片段的亚克隆插入端的局部排序产生新的双等位标记。在分析的第一阶 段，在精神分裂症病例和对照组中分析染色体13q31-q33候选基因座之间9个不同 BAC上第一组34个双等位标记，从而鉴定精神分裂症相关亚区(subregion)。第一 次分析后，如上所述，产生另外一些双等位标记，以绘制高度密集型靶区图谱。鉴 定最小一组有35个BAC，使其完全排序，结果出现几个重迭群，包括一个900kb 以上包含靶区序列的重迭群。
这些双等位标记用在关联性研究中，为了使含有候选精神分裂症基因g34872 的感兴趣的特定亚区更加细化。在对不同人群进行的一些研究中双等位标记被基因 型分型，以确认与亚区的关联性。关联性研究首先在法裔加拿大人群中精神分裂症 病人和对照组的两种不同筛选样本，其分别包括139病例和141个对照受试者以及 215病例和241个对照受试者，以及在阿根廷人群中双相情感障碍病例和对照受试 者中进行。用这些人进行的一些研究后所得的结果显示大约150kb的基因组区与精 神分裂症密切相关。这种关联在用美国精神分裂症人群的病例和对照受试者进行的 独立研究以及其它阿根廷人和法裔加拿大人群的样本中再次得到证实。
已发现，与精神分裂症相关的约150kb基因组区含有候选基因g34872。除了 对g34872基因的内含子—外显子结构进行特性分析外，还鉴定了包括组织特异性 mRNA剪接变异型在内的一系列mRNA剪接变异型，而且证明了mRNA的存在。其后， 一肽片段自g34872多肽产物中衍生，其氨基酸序列示于SEQ ID No5中，这表明 当它们被注入小鼠腹膜内，移位动作频率下降，而刻板性动作(stereotypy)增加。 于2000年3月30日提交、题为“与精神分裂症有关的基因、蛋白质及双等位标记” 的共同待批美国专利申请号09/539,333与共同待批国际专利申请号 PCT/IB00/00435都对g34872基因的鉴定作了进一步的讨论，以上两件申请均纳入 其整体内容作为参考。
与蛋白质相互作用的g34872及精神分裂症
目前迫切需要鉴定涉及精神分裂症和双相情感障碍的基因。同时也有必要鉴 定一些包含在g34872途径的基因以及一些其产物在功能上与g34872基因产物相互 作用的基因。这些基因在治疗精神分裂症或双相情感障碍中提供一些新的介入点， 而且可以进一步研究和表征g34872基因和有关生物途径。认识这些基因和与精神 分裂症有关的生物途径使研究人员能理解精神分裂症和双相情感障碍的病原，从而 研究出针对这些病因的药物和治疗方案。此外，也急切需要寻找检测精神分裂症和 双相情感障碍易感性以及预防或跟踪这些疾病发展的新方法。诊断工具也证明十分 有用。事实上，越早鉴定受试者有演变精神分裂症的危险，就可以施以早期和/或 预防性治疗。而且，准确评估药物的最终效能以及病人对该药物的最终耐量可使临 床医生提高精神分裂症和双相情感障碍治疗方案的效益/风险比。
因此，本发明涉及任何一种为与g34872多肽相互作用的蛋白质编码的基因， 本文称之g34872结合配偶体。本发明人通过酵母双杂交技术克隆了多种g34872 结合配偶体。本发明人证实了所述g34872结合配偶体的组包含D-氨基酸氧化酶。 认识g34872结合配偶体有助开发治疗中枢神经系统疾病的药物，其由选自由 g34872、D-氨基酸氧化酶和任何一种其它g34872结合配偶体组成的组的基因介导。 此外，认识g34872结合配偶体还可以提供g34872、g34872结合配偶体、g34872 结合配偶体复合物或g34872与其结合配偶体相互作用的检测装置。
与蛋白质相互作用的g34872及精神分裂症：D-氨基酸氧化酶
最早有记载的其中一种酶是D-氨基酸氧化酶(DAO)，它是在二十世纪三十年代 发现的第二种黄素蛋白。D-氨基酸氧化酶将D-氨基酸转化为相应的.α.-酮酸。这 是通过使D-氨基酸催化脱氢生成亚氨基对应物和还原黄素产物复合物来完成。然 后用双氧(再)氧化还原的黄素，生成FADox和双氧水，而亚氨基酸自动水解成酮酸 和NH4+。虽然大部分生物体和哺乳类组织都有D-氨基酸氧化酶，但它在脊椎动物 中的生理作用还不清楚。D-氨基酸氧化酶可以氧化D-Met、D-Pro、D-Phe、D-Tyr、 D-Ile、D-Leu、D-Ala和D-Val。D-Ser、D-Arg、D-His、D-正亮氨酸和D-Trp的氧 化速度很低。D-鸟氨酸、顺-4-羟基-D-脯氨酸、D-Thr、D-Trp-甲酯、N-乙酰基-D-Ala 和D-Lys的氧化速度极低。D-Asp、D-Glu及其衍生物、Gly和所有L-氨基酸不氧 化(或者检测不到它们的氧化速度)。D-天冬氨酸氧化酶只能氧化D-Asp、D-Glu及 其下列衍生物：D-Asn、D-Gln、D-Asp-二甲酯和N-甲基-D-Asp。
中枢神经系统障碍是一类神经障碍。中枢神经系统障碍可以由药物诱发；可 以因遗传罹病倾向性、感染或创伤而引起；或者由未知的病原引起。中枢神经系统 障碍包括神经精神障碍、神经病和精神病(mental illnesses)；包括神经退化性疾 病、行为障碍、认知障碍和认知情感障碍(cognitive affective disorders)。一 些中枢神经系统障碍的临床表现是由于中枢神经系统机能异常(即因释放不适当水 平的神经递质、神经递质受体的不适当性质和/或神经递质与神经递质受体之间不 适当的相互作用)而引起的。另一些中枢神经系统障碍可由胆碱不正常分泌、多巴 胺能不正常分泌、肾上腺素能不正常分泌和/或5-羟色胺能不正常分泌所造成。较 常见的中枢神经系统障碍包括早衰性痴呆(早期发作的阿耳茨海默氏病)、老年性痴 呆(阿耳茨海默氏型痴呆)、帕金森氏症包括帕金森氏病、杭廷顿舞蹈病、迟发性运 动障碍、运动过度、躁狂症、注意力缺陷障碍、焦虑、诵读困难、精神分裂症、精 神病、双相性精神障碍、抑郁症和图雷特氏综合征(Tourette’s syndrome)。
神经递质和内分泌失调与运动障碍(例如，帕金森氏病、杭廷顿舞蹈病、运动 神经元病等等)、情绪失常(例如单相性抑郁症、双相性精神障碍、焦虑等等)以及 涉及智力的疾病(例如阿耳茨海默氏病、雷维氏体痴呆症、精神分裂症等)相牵连。 另外，这些系统也与许多其它疾病，例如昏迷、头部创伤、脑梗塞、癫痫、酒精中 毒和代谢源的智力迟钝状态有连带关系，尤其见于小童。
精神分裂症
在发达国家中，大约有1％成年人在其一生的某一点会出现精神分裂症。估计 全球有四千五百万人患有精神分裂症，其中在发达国家超过三千三百万。此外，精 神分裂症占去全部精神卫生费用的四分之一，并且精神医院的病床有三分之一是精 神分裂症病人。大部分精神分裂症患者没有工作能力。社会为精神分裂症所耗的费 用十分庞大。例如，美国治疗精神分裂症的直接费用估计接近国民生产总值的 0.5％。精神分裂症患者的标准化死亡率估计比一般人高2到4倍，他们的预期寿命 较一般人短20％。
精神分裂症患者最常见的死因是自杀(10％患者自杀)，风险比一般人高20倍。 精神分裂症患者由于心脏病与呼吸和消化系统疾病而死亡的数目也不断上升。
精神分裂症包括一组具有“阳性”或“阴性”症状的精神病。阳性症状由幻 觉、妄想和思想障碍组成；阴性症状包括情绪低落、缺乏意志和减少活动。
近年已经识别了许多生化异常情况，结果发展了一些基于神经递质的假说； 最为人熟知的一种假说是“多巴胺假说”，其中一种形式宣称D2受体水平上中脑边 缘的多巴胺通路过度活动。然而，研究人员发现在多巴胺能系统的各种受体与精神 分裂症之间的关联性并不一致。
双相性精神障碍
双相性精神障碍是较常见的精神障碍，发病率约占人口的1.3％，据报导，精 神病临床所见中大约一半的情绪失常者后果严重，甚至可能致残。业已发现，性别 不同，双相性精神障碍也不同，取决于精神障碍的类型；例如，发现男性和女性同 样可患上双相性精神障碍I，但据说，双相性精神障碍II多见于女性。双相性精 神障碍的发病年龄一般在十多岁，通常在患者二十岁出头的时候被诊断出。双相性 精神障碍也发生于老年人，一般是由神经障碍或其它健康状况所造成。除了对患者 的社会发展有严重影响外，据报导，约15％双相性精神障碍患者自杀成功。
双相性精神障碍以亢奋和经常性抑郁阶段为特点；亢奋阶段指躁狂或轻度躁 狂，抑郁阶段可能交替发作或各个阶段混合发作，严重程度不同，持续时间也各异。 由于双相性精神障碍有不同形式，表现为不同症状，对双相性精神障碍亚型的定义 和整体概念扩展为包括以前被认为患有不同精神障碍的病人，都导致双相性精神障 碍的分类成为一个广泛研究的主题。双相性精神障碍通常有一些共同的临床迹象、 症状、治疗和一般精神病的神经生物特征，所以要作出准确诊断对精神病医生来说 是一个颇大的挑战。另外，因为双相性精神障碍和各种情绪失常与精神障碍的病程 差别很大，所以越早对疾病进行表征，制订长期控制疾病的方案变得至关重要。
社会对双相性精神障碍的负担十分庞大。与该疾病相关的躁狂症使工作能力 下降，并导致精神病，最后的结果往往需要住院治疗。无论在直接还是间接费用上， 这种疾病对病人家属和亲戚都造成极大负担，社会上对该疾病的歧视有时甚至延续 几代。这样的歧视通常会造成孤立和忽视。此外，越早发病，被中断的教育与社会 发展的效应越严重。
双相性精神障碍的DSM-IV分类根据躁狂症或轻度躁狂症的程度和持续时间分 为四种精神障碍，以及根据明显的健康状况或其治疗或者药物滥用分为两种精神障 碍。躁狂症的症状是情绪高涨或暴躁、注意力分散、行为冲动、过度活跃、夸大、 过份乐观、脑筋转动很快以及说话急速。四种双相性精神障碍的征状是躁狂症有特 定的程度和持续时间，DSM-IV包括：
-双相性精神障碍I型，包括躁狂症至少持续一星期的病人；
-双相性精神障碍II型，包括轻度躁狂症至少持续四天的病人，特点是亢奋
症状比躁狂症轻，病人从来未有过躁狂症，以前有过重度抑郁症；
-其它未注明(NOS)之双相性精神障碍，包括有双相性精神障碍II的症状但 亢奋期不足4天的病人，或者有轻度躁狂症但从来未有过重度抑郁症的病 人；
-循环性精神病，包括有各种不符合轻度躁狂症或重度抑郁症标准的躁狂和 抑郁症状，但这些症状持续超过两年，中间无症状的时间不超过两个月的 病人。
按DSM-IV分类的其余两种双相性精神障碍是症状明显或由各种健康状况及其 治疗所造成的精神障碍，以及涉及或与药物滥用有关的精神障碍。医学上可引起双 相性精神障碍的精神障碍通常包括内分泌失调和脑血管受损，引起双相性精神障碍 的医学疗法已知包括糖皮质激素和滥用刺激物。与使用或滥用药物相关的精神障碍 称为“药物诱导的具有躁狂或混合特征的情绪失常”。
诊断双相性精神障碍富于挑战性。一个特别困难之处在于某些病人同时有躁 狂症和焦虑症或抑郁症的混合状态，但因为至少一个星期不是每天都全部符合躁狂 症和重度抑郁所规定的标准，所以不在DSM-IV分类之内。其它的困难还包括基于 持续期对病人按DSM-IV组分类，因为病人通常反复处于亢奋期和抑郁期，但程度 又不同。具体地说，据报导，在引起“快速循环”病程中用抗抑郁药可使病程变坏。 使诊断变得更加困难的是以下一个事实：双相性病人，特别是处于称为第III阶段的 躁狂症，与双相性精神障碍病人具有相同的混乱思想和行为。此外，精神病医生必 须区分焦虑型抑郁症与混合型躁狂症；重度抑郁症病人一般会焦躁，导致有类似双 极性症状。另一个复杂因素是双极性病人滥用药物特别是酒精的比例非常高。而酗 酒病人中躁狂症的比率较低，众所周知，药物滥用者可表现为亢奋症状。所以，这 些困难会将双极性病人诊断为滥用药物。
抑郁症
抑郁症在医学上是一种严重疾病，全球有三亿四千万人患有抑郁症。与正常 的情感体验悲伤、沮丧、心情欠佳不同，临床上的抑郁症是持续和长期的，能严重 影响个人的生活能力。所以，抑郁症是世界上丧失能力的主因，估计仅美国每年为 此耗费五百三十亿美元。
抑郁症的症状包括情绪低落、对活动失去兴趣和悲观、食欲或体重改变、失 眠或嗜睡、精神性运动激动或阻抑、疲倦或精神不振、无价值感受或过份自疚、焦 虑、精神难以集中或难作决定、以及重复想死亡或自杀。如果病人有五种或以上这 些症状，并且两星期内几乎每天日常生活与处事能力都受到影响，就可以诊断为单 极性重度抑郁症(或重度抑郁情感障碍)。抑郁症一般出现在青春期的末期或成人期 的早期；不过，最近有证据显示，三十年前出生的人可能在很早期就出现抑郁症。
世界卫生组织预测，到2020年抑郁症对发展中国家的人民而言是最严重的疾 病，到那时抑郁症将是死亡和丧失能力的第二大诱因。除了它引起难以忍受的痛苦 外，重度抑郁症最大的危险是自杀。估计25％的病人在患有重度抑郁症5年内试图 自杀。另外，抑郁症也引发心脏病发作、中风、糖尿病和癌症等经常性和严重併发 症。根据一项持续13年的近期研究，有重度抑郁症的个体心脏病发作可能是无此 病史的人的4倍。
高达50％有中枢神经系统障碍如帕金森氏病、阿耳茨海默氏病的病人的一个特 征是抑郁症。
在抑郁症病人的脑脊液中发现多巴胺代谢物HVA的水平很低。另外，多巴胺 激动剂对抑郁症具有治疗反应。
目前的抗抑郁药用于针对多种抑郁症状，提高胺能突触中神经递质的浓度。 不同的药理机制将抗抑郁药分为七种不同类型。二种典型机制是三环抗抑郁药 (TCAs)和单胺氧化酶抑制剂(MAOIs)。最常用的药物是选择性5-羟色胺再吸收抑制 剂(SSRIs)。其它三类抗抑郁药，如SSRIs提高5-羟色胺能的神经传递，但它们也 有其它作用，即双重抑制5-羟色胺和去甲肾上腺素再吸收；抑制5-羟色胺-2-拮抗 性/再吸收；α2拮抗性加上5-羟色胺-2和-3-拮抗性。选择性去甲肾上腺素和多巴 胺再吸收抑制剂限定了一类新的抗抑郁药，它们对5-羟色胺系统无直接作用。
对于中枢神经系统障碍，如精神分裂症、双相性精神障碍、抑郁症和其它情 绪失常，所有用于治疗的已知分子都有副作用，而且只对疾病症状起作用。故迫切 需要有一些没有相关副作用或减少副作用、并针对涉及这些中枢神经系统障碍病因 机制的目标的新分子。有必要提供一种有用的方法，给容易患上或已患上中枢神经 系统障碍的病人施加D-氨基酸氧化酶拮抗剂化合物来预防和治疗这样一些障碍。 此外，也有必要提供一种有用的方法，给容易患上或已患上中枢神经系统障碍的病 人施加D-天冬氨酸氧化酶拮抗剂化合物来预防和治疗这样一些障碍。
对于中枢神经系统障碍，如帕金森氏病、阿耳茨海默氏病和其它神经退化性 疾病，目前可用于治疗的药物组合物十分有限，用于治疗的已知分子都有副作用， 而且只对疾病症状起作用。故迫切需要有一些没有相关副作用或减少副作用、并针 对涉及这些中枢神经系统障碍病因机制的目标的新分子。有必要提供一种有用方 法，给容易患上或已患上中枢神经系统障碍的病人施加D-氨基酸氧化酶活化剂化 合物来预防和治疗这样一些障碍。此外，也有必要提供一种有用方法，给容易患上 或已患上中枢神经系统障碍的病人施加D-天冬氨酸氧化酶活化剂化合物来预防和 治疗这样一些障碍。
本发明的药物组合物用于预防和治疗这些中枢神经系统障碍。
治疗
由于目前还不能治愈中枢神经系统障碍，例如精神分裂症、双相性精神障碍、 抑郁症和其它情绪失常，所以治疗的目的是使症状减轻，如果可能的话，减到缓解 的程度。因为症状具有相似性，因此精神分裂症、抑郁症和双相性精神障碍往往用 同一些药物治疗。两种疾病经常用抗精神病药和安定药治疗。
例如，对于精神分裂症，抗精神病药最常用和最有效。通常开给精神分裂症 的抗精神病药有四大类。第一类安定药例如是氯丙嗪(chlorpromazine)，由于减轻 了阳性(精神病)症状以及防止复发，对精神分裂症病人的治疗取得重大进步。服用 氯丙嗪的病人已经能够离开精神病院，在社区或他们的家中生活。但这些药物远未 为理想。约20％到30％的病人对它们完全无反应，其他人最终旧病复发。这些药物 被称为安定药是因为它们对神经产生严重副作用，包括手臂和腿僵硬和颤抖、肌肉 痉挛、身体移动反常和静坐不能(行走和坐立不安)。这些副作用令人心烦以致很多 病人都拒绝服用这些药物。此外，安定药也不能改善精神分裂症所谓的阴性症状， 副作用甚至会加重这些症状。所以，尽管安定药有着明显的有益效果，但是一些短 期有良好反应的病人的生活和处事能力在最后甚至会恶化。
标准安定药的这些公知缺陷刺激人们寻找新治疗，并导致发现一类新的药物， 称为非典型安定药。第一种非典型安定药是氯扎平(clozapine)，对大约三分之一 对标准安定药无反应的病人有效。它似乎可减轻阴性和阳性症状，或对阴性症状的 加重程度至少较标准安定药轻。而且，它对整体的生活和处事能力具有有益的效果， 并且可降低精神分裂症病人自杀的危险。它也不会象标准安定药那样产生令人心烦 的神经症状，或者提高激素催乳素的血液水平，催乳素过量可使女性月经异常和不 孕，使男性性无能或乳房增大。许多不能忍受标准安定药的病人都能够服用氯扎平。 然而，氯扎平也有严重限制。它最初从市场上收回是因为它可引起粒细胞缺乏症， 这是一种有可能致命的不能产生白血细胞的疾病。粒细胞缺乏症乃是一种需要小心 监控并且进行周期性验血的预兆。氯扎平还可能引起疾病发作或其它不良副作用 (例如，渴睡、血压下降、流涎、尿床和体重增加)。所以，它通常只用于对其它药 物无反应的病人。
研究人员已研制成第三类抗精神症药，它具有氯扎平的功效但没有其缺点。 其中一种是利培酮(risperidone)。早期研究表明，它对阳性症状的效果像标准安 定药一样，对阴性症状的效果可能更好。它对神经产生的副作用比氯扎平多，但较 标准安定药少。然而，它会提高催乳素水平。现在利培酮可开药方给更多的精神病 患者，越来越多医生似乎给对标准药物无反应的病人优先考虑采用利培酮而不是氯 扎平，因为他们认为它较安全。另一种新药是奥扎平(Olanzapine)，它对阳性症状 的效果至少与标准安定药一样有效，对阴性症状的效果则更好。正常临床剂量时它 的神经副作用很少，它也不会显著提高催乳素水平。虽然它没有氯扎平大部分副作 用，但一些服用奥扎平的病人可能变得镇静或晕眩、引发口腔干燥、或体重增加。 在一些罕见的情况下，肝脏功能测试会有瞬时异常。
精神分裂症的结果研究通常基于医院的治疗研究，可能不能代表精神分裂症 患者人群。极端的结果是20％的患者似乎发作过一次精神病后完全康复，而14-19％ 的病人会发展为慢性持续性精神病，不会完全康复。一般来说，五年的临床结果似 乎遵循以下三种情况的规律：约35％的病人的结果很差；36％的病人的结果良好， 而其余的病人的结果为中间情况。精神分裂症预后似乎在五年后不会变差。
不论何种原因，不断有证据显示精神分裂症不在发病初期进行长期治疗可能 对结果产生负面影响。不过，药物的选用通常会延迟病人第一次发病的时间。病人 可能没有意识到他们已经病了，或者他们可能害怕寻求协助；家人有时希望问题简 单消失或者无法说服病人去治疗；当潜在的副作用使诊断不确定时，医生可能犹豫 开出抗精神药处方。事实上，在疾病最早表现时，很难将精神分裂症与双极性躁狂 -抑郁精神障碍、重度抑郁症、与药物滥用有关的精神障碍、以及与压力有关的精 神障碍区分开来。因为这些疾病的最佳治疗是不同的，所以这些精神障碍的长期预 后也使治疗的开始时间不同。
对于中枢神经系统障碍，如精神分裂症、双相性精神障碍、抑郁症和其它情 绪失常，用于治疗的已知分子都有副作用，而且只对疾病症状起作用。故迫切需要 有一些没有副作用、并针对涉及中枢神经系统障碍因果机制的目标的新分子。所以， 有助发现和表征这些目标的工具是必要的，而且十分有用。
精神分裂症和双相性精神障碍的家族聚集、从双胞胎和收养研究所得的证据 以及全球发病没有变化，都表明虽然环境危险因子在一定程度上是必要、充分或互 相作用的原因，但精神分裂症和双相性精神障碍主要还是遗传条件。例如，普通人 中有1％会患上精神分裂症，但若一个人的祖父母有精神分裂症，则他患病的危险 增大至约3％；若父母一方有精神分裂症，则他患病的危险增大至约10％；若父母双 方都有精神分裂症，则他患病的危险增大至约40％。
所以，目前迫切需要鉴定涉及这些中枢神经系统障碍中包含的基因。认识这 些基因可使研究人员能理解精神分裂症、抑郁症、双相性精神障碍以及其它情绪失 常的病原，从而可能研究出针对这些疾病病因的药物和治疗方案，而不仅仅针对它 们的症状。
此外，也很需要有检测这些中枢神经系统障碍如精神分裂症和双相性精神障 碍、抑郁症易感性以及预防或跟踪这些疾病发展的新方法。诊断工具也证明十分有 用。事实上，越早识别受试者有演变精神分裂症的危险，就可以施以早期和/或预 防性治疗。而且，准确评估药物的最终效能以及病人对该药物的最终耐量可使临床 医生提高中枢神经系统障碍治疗方案的效益/风险比，例如精神分裂症、抑郁症、 双相性精神障碍以及其它情绪失常的效益/风险比。
发明内容
本发明基于新的多态性，包括位于人染色体13q31-q33基因座上双等位标记 的鉴定、位于人染色体13q31-q33基因座上与精神分裂症相关的新基因的鉴定和特 性分析、以及位于人染色体13q31-q33基因座上双等位标记等位基因与一组人受试 者已确定和表征的疾病之间的基因相关性。美国专利申请号09/539,333与国际专 利申请号PCT/IB00/00435提交了新的多态性和与精神分裂症相关的基因，它们的 公开资料纳入其整体内容作为参考。
可按照本发明的方法治疗的中枢神经系统障碍包括早衰性痴呆(早期发作的 阿耳茨海默氏病)、老年性痴呆(阿耳茨海默氏型痴呆)、帕金森氏症包括帕金森氏 病、杭廷顿舞蹈病、迟发性运动障碍、运动过度、躁狂症、注意力缺陷活动过度障 碍(ADHD)、注意力缺陷障碍(ADD)、焦虑症、诵读困难、精神病、精神分裂症、双 相性精神障碍、重度抑郁症、躁狂症、轻度躁狂症、抑郁症、孤独症、滥用药物、 过度攻击(excessive aggression)、抽搐症和图雷特氏综合征。本发明优选的中枢 神经系统障碍包括精神分裂症、抑郁症和双相性精神障碍。精神分裂症和精神分裂 症样精神障碍的较优选例子包括：精神分裂症(紧张型)、精神分裂症(无组织型)、 精神分裂症(妄想型)、精神分裂症(混合型)、精神分裂症(残余型)、精神分裂症样 精神障碍、短期反应性精神病、情感分裂性精神障碍、诱发性精神病、精神分裂型 人格障碍、精神分裂样人格障碍、妄想型人格障碍和妄想(类偏执狂)性精神障碍。
本发明涉及给容易患上中枢神经系统障碍的受试者提供这样一种精神障碍的 治疗方法、给患有中枢神经系统障碍的受试者提供治疗方法。具体地说，该方法包 括给患者施加一定量的D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶拮抗剂或抑制剂化合 物，一定程度上有效制止或改善中枢神经系统障碍的进展、制止或改善中枢神经系 统障碍的症状以及制止或改善中枢神经系统障碍的復發。
本发明涉及给容易患上中枢神经系统障碍的受试者提供这样一种精神障碍的 预防方法、给患有中枢神经系统障碍的受试者提供治疗方法。具体地说，该方法包 括给患者施加一定量的D-氨基酸氧化酶和D-天冬氨酸氧化酶拮抗剂化合物，一定 程度上有效预防中枢神经系统障碍的进展(即提供保护作用)、预防中枢神经系统障 碍的症状和预防中枢神经系统障碍的复发。
本发明还涉及D-氨基酸氧化酶的基因组序列、D-氨基酸氧化酶基因中发现的 新型外显子、D-氨基酸氧化酶基因中发现的新型多态双等位标记(SNPs)、容易患上 中枢神经系统障碍的人的检测方法，拮抗、抑制、或降低D-氨基酸氧化酶活性的 新方法，增加、激动或促进D-氨基酸氧化酶活性的新方法以及影响D-氨基酸氧化 酶活性的新型组合物。本发明还涉及核酸分子，其含有编码g34872(sbg1)蛋白质 的新型人基因的基因组序列、由该核酸分子编码的蛋白质及其抗体，共同待批的美 国专利申请号09/539,333与国际专利申请号PCT/IB00/00435对此作了叙述，它 们的公开资料纳入其整体内容作为参考。本发明也涉及编码g34872、D-氨基酸氧 化酶和D-天冬氨酸氧化酶蛋白质、及其变异型的cDNA序列。与g34872、D-氨基酸 氧化酶和D-天冬氨酸氧化酶基因组或cDNA序列特异性杂交的寡核苷酸探针或引 物，及使用所述引物和探针的DNA扩增和检测方法也是本发明的一部分内容。
本发明的另一个目的包括含有上述任何一段核酸序列的重组载体，特别是含 有g34872、D-氨基酸氧化酶和D-天冬氨酸氧化酶调控序列或编码g34872、D-氨基 酸氧化酶和D-天冬氨酸氧化酶蛋白质的序列的重组载体，以及含有所述核酸序列 或重组载体的细胞宿主和转基因非人的动物。
本发明还涉及g34872、D-氨基酸氧化酶和D-天冬氨酸氧化酶基因的双等位标 记及其应用。本发明包括用于本发明双等位标记基因分型(genotyping)的探针和引 物。
本发明的一实施例包括附着于固相支持物上的任何一种本发明的多核苷酸。 多核苷酸可以含有本说明书所揭示的序列；所述多核苷酸可任选地包括任何本说明 书所叙述的任何一种多核苷酸，可任选地由或基本上由本说明书所叙述的任何一种 多核苷酸组成；可任选地在杂交分析、排序分析、微排序分析或基于酶的错配检测 分析中进行所述的确定；所述多核苷酸可任选地附着于固相支持物、阵列或选通式 阵列(addressable array)；所述多核苷酸可任选地带上标记。
最后，本发明的目的在于基于g34872、D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶 核苷酸和多核苷酸在疾病中的作用，提供药物筛选分析和治疗精神分裂症、双相性 精神障碍或相关中枢神经系统障碍的药物的筛选方法。本发明的一个目的在于基于 g34872、D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶在疾病中的作用，提出精神分裂症 动物模型，包括小鼠、灵长类动物、非人灵长类动物双相性精神障碍或相关中枢神 经系统障碍。本发明也涉及抑制g34872、D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶表 达的物质或分子的筛选方法，以及应用这些筛选方法来筛选与g34872、D-氨基酸 氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶多肽相互作用，或者调节g34872、D-氨基酸氧化酶或 D-天冬氨酸氧化酶多肽的活性的物质或分子。
如上所述，本发明的某些方面基于精神分裂症和双相性精神障碍与g34872基 因和D-氨基酸氧化酶基因的双等位标记等位基因之间的基因关联性的鉴定。本发 明提供一些合适的方法来进一步建立g34872和D-氨基酸氧化酶基因座的双等位标 记等位基因与由于施加作用于包括精神分裂症、抑郁症或双相性精神障碍在内的中 枢神经系统障碍或症状的药物，或者精神分裂症或双相性精神障碍症状的药物，包 括氯丙嗪、氯扎平、利培酮、奥扎平、舍吲哚(sertindole)、喹的平(quetiapine) 和齐拉西酮(ziprasidone)而产生的副作用或有益效果之间的其它基因关联性。
本发明提供一些合适的方法来进一步建立特定性状(trait)的D-氨基酸氧化 酶与g34872的双等位标记等位基因之间的其它基因关联性。本发明提供一些人对 精神分裂症或双相性精神障碍遗传易感性的分子检测方法和产物。它们可用于疾病 的诊断、分期、预后和监控，所述方法还可包括在治疗方法之内。本发明也提供有 效设计和评估合适的治疗方案，包括药物的最佳使用方法、潜在的候选新药物的筛 选的个人化策略。
本发明的一优选实施例包括对有需要的中枢神经系统障碍病人实施的治疗方 法，该方法包括给所述病人施加一有效量的含有D-氨基酸氧化酶拮抗剂或抑制剂 或者D-天冬氨酸氧化酶抑制剂或拮抗剂的组合物或化合物。
较优选是精神病的治疗方法，该方法包括给精神病病人施加一有效治疗量的 含有D-氨基酸氧化酶拮抗剂或抑制剂或者D-天冬氨酸氧化酶抑制剂或拮抗剂的组 合物或化合物。
较优选是精神分裂症的治疗方法，该方法包括给精神分裂症病人施加一有效 治疗量的含有D-氨基酸氧化酶拮抗剂或抑制剂或者D-天冬氨酸氧化酶抑制剂或拮 抗剂的组合物或化合物。
较优选是双相性精神障碍的治疗方法，该方法包括给双相性精神障碍病人施 加一有效治疗量的含有D-氨基酸氧化酶拮抗剂或抑制剂或者D-天冬氨酸氧化酶抑 制剂或拮抗剂的组合物或化合物。
本发明一优选实施例包括对有需要的中枢神经系统障碍病人实施的治疗方 法，该方法包括给所述病人施加一有效量的含有D-氨基酸氧化酶拮抗剂或抑制剂 或者D-天冬氨酸氧化酶拮抗剂或抑制剂的组合物或化合物。
较优选是精神病的治疗方法，该方法包括给精神病病人施加一有效治疗量的 含有D-氨基酸氧化酶拮抗剂或抑制剂或者D-天冬氨酸氧化酶拮抗剂或抑制剂的组 合物或化合物。
较优选是精神分裂症的治疗方法，该方法包括给精神分裂症病人施加一有效 治疗量的含有D-氨基酸氧化酶拮抗剂或抑制剂或者D-天冬氨酸氧化酶拮抗剂或抑 制剂的组合物或化合物。
较优选是双相性精神障碍的治疗方法，该方法包括给双相性精神障碍病人施 加一有效治疗量的含有D-氨基酸氧化酶拮抗剂或抑制剂或者D-天冬氨酸氧化酶抑 制剂或拮抗剂的组合物或化合物。
本发明一优选实施例包括对有需要的中枢神经系统障碍病人实施的治疗方 法，该方法包括给所述病人施加一有效量的含有g34872拮抗剂或抑制剂的组合物 或化合物。
较优选是精神病的治疗方法，该方法包括给精神病病人施加一有效治疗量的 含有g34872拮抗剂或抑制剂的组合物或化合物。
较优选是精神分裂症的治疗方法，该方法包括给精神分裂症病人施加一有效 治疗量的含有g34872拮抗剂或抑制剂的组合物或化合物。
较优选是双相性精神障碍的治疗方法，该方法包括给双相性精神障碍病人施 加一有效治疗量的含有g34872拮抗剂或抑制剂的组合物或化合物。
本发明一优选实施例包括对有需要的中枢神经系统障碍病人实施的治疗方 法，该方法包括给所述病人施加一有效量的含有D-氨基酸氧化酶拮抗剂或抑制剂 或者D-天冬氨酸氧化酶拮抗剂或抑制剂的组合物或化合物，并结合g34872拮抗剂 或抑制剂组合物或化合物。
较优选是精神病的治疗方法，该方法包括给精神病病人施加一治疗有效量的 含有D-氨基酸氧化酶拮抗剂或抑制剂或者D-天冬氨酸氧化酶拮抗剂或抑制剂的组 合物或化合物，并结合g34872拮抗剂或抑制剂组合物或化合物。
较优选是精神分裂症的治疗方法，该方法包括给精神分裂症病人施加一有效 治疗量的含有D-氨基酸氧化酶拮抗剂或抑制剂或者D-天冬氨酸氧化酶拮抗剂或抑 制剂的组合物或化合物，并结合g34872拮抗剂或抑制剂组合物或化合物。
较优选是双相性精神障碍的治疗方法，该方法包括给双相性精神障碍病人施 加一有效治疗量的含有D-氨基酸氧化酶拮抗剂或抑制剂或者D-天冬氨酸氧化酶拮 抗剂或抑制剂的组合物或化合物，并结合g34872拮抗剂或抑制剂组合物或化合物。
本发明一优选实施例包括对有需要的中枢神经系统障碍病人实施的治疗方 法，该方法包括给所述病人施加一有效量的结合有D-氨基酸氧化酶拮抗剂或抑制 剂、D-天冬氨酸氧化酶拮抗剂或抑制剂和g34872拮抗剂或抑制剂组合物或化合物 的组合物或化合物。
较优选是精神病的治疗方法，该方法包括给精神病病人施加一治疗有效量的 结合有D-氨基酸氧化酶拮抗剂或抑制剂、D-天冬氨酸氧化酶拮抗剂或抑制剂和 g34872拮抗剂或抑制剂组合物或化合物的组合物或化合物。
较优选是精神分裂症的治疗方法，该方法包括给精神分裂症病人施加一有效 治疗量的结合有D-氨基酸氧化酶拮抗剂或抑制剂、D-天冬氨酸氧化酶拮抗剂或抑 制剂和g34872拮抗剂或抑制剂组合物或化合物的组合物或化合物。
较优选是双相性精神障碍的治疗方法，该方法包括给双相性精神障碍病人施 加一有效治疗量的结合有D-氨基酸氧化酶拮抗剂或抑制剂、D-天冬氨酸氧化酶拮 抗剂或抑制剂和g34872拮抗剂或抑制剂组合物或化合物的组合物或化合物。
本发明一优选实施例包括对有需要的中枢神经系统障碍病人实施的治疗方 法，该方法包括给所述病人施加一有效量的含有至少以下一种物质的组合物或化合 物：D-氨基酸氧化酶拮抗剂或抑制剂、D-天冬氨酸氧化酶拮抗剂或抑制剂，或者 g34872拮抗剂或抑制剂组合物或化合物。
较优选是精神病的治疗方法，该方法包括给精神病病人施加一治疗有效量的 含有至少以下一种物质的组合物或化合物：D-氨基酸氧化酶拮抗剂或抑制剂、D- 天冬氨酸氧化酶拮抗剂或抑制剂，或者g34872拮抗剂或抑制剂组合物或化合物。
较优选是精神分裂症的治疗方法，该方法包括给精神分裂症病人施加一有效 治疗量的含有至少以下一种物质的组合物或化合物：D-氨基酸氧化酶拮抗剂或抑制 剂、D-天冬氨酸氧化酶拮抗剂或抑制剂，或者g34872拮抗剂或抑制剂组合物或化 合物。
较优选是双相性精神障碍的治疗方法，该方法包括给双相性精神障碍病人施 加一有效治疗量的含有至少以下一种物质的组合物或化合物：D-氨基酸氧化酶拮抗 剂或抑制剂、D-天冬氨酸氧化酶拮抗剂或抑制剂，或者g34872拮抗剂或抑制剂组 合物或化合物。
应该指出的是，本发明优先排除对有需要的中枢神经系统障碍、精神病、精 神分裂症或双相性精神障碍病人实施的治疗方法中所用的公知或固有起到抑制或 拮抗D-氨基酸氧化酶、D-天冬氨酸氧化酶或g34872的本领域已知的组合物或化合 物。
本发明一优选实施例涉及D-氨基酸氧化酶活性的抑制方法。此外，本发明涉 及通过抑制D-氨基酸氧化酶活性来治疗精神分裂症的方法。较优选是通过用含有 酮亚胺的组合物抑制D-氨基酸氧化酶活性来治疗精神分裂症的方法。
本发明的另一优选实施例涉及D-天冬氨酸氧化酶活性的抑制方法。此外，本 发明涉及通过抑制D-天冬氨酸氧化酶活性来治疗精神分裂症的方法。较优选是通 过用含有酮亚胺的组合物来抑制D-天冬氨酸氧化酶活性来治疗精神分裂症的方 法。
本发明的另一优选实施例涉及抑制D-氨基酸氧化酶与g34872之间相互作用的 方法。
本发明的另一优选实施例涉及抑制g34872与D-天冬氨酸氧化酶之间相互作用 的方法。
本发明的另一优选实施例涉及SEQ ID NO：7、8、9、10或18的D-氨基酸氧 化酶多肽的任何多肽片段，其拮抗所述D-氨基酸氧化酶多肽与SEQ ID NO：14的 g34872多肽或其片段之间相互作用。较优选D-氨基酸氧化酶多肽片段含有SEQ ID NO：7的氨基酸23-347。较优选D-氨基酸氧化酶多肽片段含有SEQ ID NO：7的氨 基酸227-347。较优选D-氨基酸氧化酶多肽片段含有SEQ ID NO：7的氨基酸31- 347。较优选D-氨基酸氧化酶多肽片段含有SEQ ID NO：7的氨基酸51-347。较优 选D-氨基酸氧化酶多肽片段含有SEQ ID NO：7的氨基酸66-347。较优选D-氨基 酸氧化酶多肽片段含有SEQ ID NO：7的氨基酸101-347。较优选D-氨基酸氧化酶 多肽片段含有SEQ ID NO：7的氨基酸126-347。较优选D-氨基酸氧化酶多肽片段 含有SEQ ID NO：7的氨基酸146-347。较优选D-氨基酸氧化酶多肽片段含有SEQ ID NO：7的氨基酸175-347。较优选D-氨基酸氧化酶多肽片段含有SEQ ID NO：7的 氨基酸180-347。较优选D-氨基酸氧化酶多肽片段含有SEQ ID NO：7的氨基酸 1-189。较优选D-氨基酸氧化酶多肽片段含有SEQ ID NO：7的氨基酸1-205。较优 选D-氨基酸氧化酶多肽片段含有SEQ ID NO：7的氨基酸31-189。较优选D-氨基 酸氧化酶多肽片段含有SEQ ID NO：7的氨基酸31-205。较优选D-氨基酸氧化酶多 肽片段含有SEQ ID NO：7的氨基酸84-205。
本发明另一优选实施例涉及与D-氨基酸氧化酶多肽或其片段结合的组合物。 较优选与D-氨基酸氧化酶多肽片段结合的组合物含有SEQ ID NO：7的氨基酸 227-347。较优选与D-氨基酸氧化酶多肽片段结合的组合物含有SEQ ID NO：7的 氨基酸227-347。较优选与D-氨基酸氧化酶多肽片段结合的组合物含有SEQ ID NO： 7的氨基酸31-347。较优选与D-氨基酸氧化酶多肽片段结合的组合物含有SEQ ID NO：7的氨基酸51-347。较优选与D-氨基酸氧化酶多肽片段结合的组合物含有SEQ ID NO：7的氨基酸66-347。较优选与D-氨基酸氧化酶多肽片段结合的组合物含有 SEQ ID NO：7的氨基酸101-347。较优选与D-氨基酸氧化酶多肽片段结合的组合 物含有SEQ ID NO：7的氨基酸126-347。较优选与D-氨基酸氧化酶多肽片段结合 的组合物含有SEQ ID NO：7的氨基酸146-347。较优选与D-氨基酸氧化酶多肽片 段结合的组合物含有SEQ ID NO：7的氨基酸175-347。较优选与D-氨基酸氧化酶 多肽片段结合的组合物含有SEQ ID NO：7的氨基酸180-347。较优选与D-氨基酸 氧化酶多肽片段结合的组合物含有SEQ ID NO：7的氨基酸1-189。较优选与D-氨 基酸氧化酶多肽片段结合的组合物含有SEQ ID NO：7的氨基酸1-205。较优选与 D-氨基酸氧化酶多肽片段结合的组合物含有SEQ ID NO：7的氨基酸31-189。较优 选与D-氨基酸氧化酶多肽片段结合的组合物含有SEQ ID NO：7的氨基酸31-205。 较优选与D-氨基酸氧化酶多肽片段结合的组合物含有SEQ ID NO：7的氨基酸84- 205。
另一优选实施例涉及精神分裂症的治疗方法，所述方法包括给精神分裂症病 人施加一有效治疗量的组合物，其含有与D-氨基酸氧化酶多肽或其片段结合的组 合物。较优选的精神分裂症的治疗方法包括给精神分裂症病人施加一有效治疗量的 组合物，其含有与包含SEQ ID NO：7的氨基酸23-347的D-氨基酸氧化酶多肽结 合的组合物。较优选的精神分裂症的治疗方法包括给精神分裂症病人施加一有效治 疗量的组合物，其含有与包含SEQ ID NO：7的氨基酸227-347的D-氨基酸氧化酶 多肽结合的组合物。较优选的精神分裂症的治疗方法包括给精神分裂症病人施加一 有效治疗量的组合物，其含有与包含SEQ ID NO：7的氨基酸31-347的D-氨基酸 氧化酶多肽结合的组合物。较优选的精神分裂症的治疗方法包括给精神分裂症病人 施加一有效治疗量的组合物，其含有与包含SEQ ID NO：7的氨基酸51-347的D- 氨基酸氧化酶多肽结合的组合物。较优选的精神分裂症的治疗方法包括给精神分裂 症病人施加一有效治疗量的组合物，其含有与包含SEQ ID NO：7的氨基酸66-347 的D-氨基酸氧化酶多肽结合的组合物。较优选的精神分裂症的治疗方法包括给精 神分裂症病人施加一有效治疗量的组合物，其含有与包含SEQ ID NO：7的氨基酸 101-347的D-氨基酸氧化酶多肽结合的组合物。较优选的精神分裂症的治疗方法包 括给精神分裂症病人施加一有效治疗量的组合物，其含有与包含SEQID NO：7的 氨基酸126-347的D-氨基酸氧化酶多肽结合的组合物。较优选的精神分裂症的治 疗方法包括给精神分裂症病人施加一有效治疗量的组合物，其含有与包含SEQ ID NO：7的氨基酸146-347的D-氨基酸氧化酶多肽结合的组合物。较优选的精神分裂 症的治疗方法包括给精神分裂症病人施加一有效治疗量的组合物，其含有与包含 SEQ ID NO：7的氨基酸175-347的D-氨基酸氧化酶多肽结合的组合物。较优选的 精神分裂症的治疗方法包括给精神分裂症病人施加一有效治疗量的组合物，其含有 与包含SEQ ID NO：7的氨基酸180-347的D-氨基酸氧化酶多肽结合的组合物。较 优选的精神分裂症的治疗方法包括给精神分裂症病人施加一有效治疗量的组合物， 其含有与包含SEQ ID NO：7的氨基酸1-189的D-氨基酸氧化酶多肽结合的组合物。 较优选的精神分裂症的治疗方法包括给精神分裂症病人施加一有效治疗量的组合 物，其含有与包含SEQ ID NO：7的氨基酸1-205的D-氨基酸氧化酶多肽结合的组 合物。较优选的精神分裂症的治疗方法包括给精神分裂症病人施加一有效治疗量的 组合物，其含有与包含SEQ ID NO：7的氨基酸31-189的D-氨基酸氧化酶多肽结 合的组合物。较优选的精神分裂症的治疗方法包括给精神分裂症病人施加一有效治 疗量的组合物，其含有与包含SEQ ID NO：7的氨基酸31-205的D-氨基酸氧化酶 多肽结合的组合物。较优选的精神分裂症的治疗方法包括给精神分裂症病人施加一 有效治疗量的组合物，其含有与包含SEQ ID NO：7的氨基酸84-205的D-氨基酸 氧化酶多肽结合的组合物。
另一优选实施例涉及双极性精神障碍的治疗方法，所述方法包括给双极性精 神障碍病人施加一有效治疗量的组合物，其含有与D-氨基酸氧化酶多肽或其片段 结合的组合物。较优选的双极性精神障碍的治疗方法包括给双极性精神障碍病人施 加一有效治疗量的组合物，其含有与包含SEQ ID NO：7的氨基酸23-347的D-氨 基酸氧化酶多肽结合的组合物。较优选的双极性精神障碍的治疗方法包括给双极性 精神障碍病人施加一有效治疗量的组合物，其含有与包含SEQ ID NO：7的氨基酸 227-347的D-氨基酸氧化酶多肽结合的组合物。较优选的双极性精神障碍的治疗方 法包括给双极性精神障碍病人施加一有效治疗量的组合物，其含有与包含SEQ ID NO：7的氨基酸31-347的D-氨基酸氧化酶多肽结合的组合物。较优选的双极性精 神障碍的治疗方法包括给双极性精神障碍病人施加一有效治疗量的组合物，其含有 与包含SEQ ID NO：7的氨基酸51-347的D-氨基酸氧化酶多肽结合的组合物。较 优选的双极性精神障碍的治疗方法包括给双极性精神障碍病人施加一有效治疗量 的组合物，其含有与包含SEQ ID NO：7的氨基酸66-347的D-氨基酸氧化酶多肽 结合的组合物。较优选的双极性精神障碍的治疗方法包括给双极性精神障碍病人施 加一有效治疗量的组合物，其含有与包含SEQ ID NO：7的氨基酸101-347的D-氨 基酸氧化酶多肽结合的组合物。较优选的双极性精神障碍的治疗方法包括给双极性 精神障碍病人施加一有效治疗量的组合物，其含有与包含SEQ ID NO：7的氨基酸 126-347的D-氨基酸氧化酶多肽结合的组合物。较优选的双极性精神障碍的治疗方 法包括给双极性精神障碍病人施加一有效治疗量的组合物，其含有与包含SEQ ID NO：7的氨基酸146-347的D-氨基酸氧化酶多肽结合的组合物。较优选的双极性精 神障碍的治疗方法包括给双极性精神障碍病人施加一有效治疗量的组合物，其含有 与包含SEQ ID NO：7的氨基酸175-347的D-氨基酸氧化酶多肽结合的组合物。较 优选的双极性精神障碍的治疗方法包括给双极性精神障碍病人施加一有效治疗量 的组合物，其含有与包含SEQ ID NO：7的氨基酸180-347的D-氨基酸氧化酶多肽 结合的组合物。较优选的双极性精神障碍的治疗方法包括给双极性精神障碍病人施 加一有效治疗量的组合物，其含有与包含SEQ ID NO：7的氨基酸1-189的D-氨基 酸氧化酶多肽结合的组合物。较优选的双极性精神障碍的治疗方法包括给双极性精 神障碍病人施加一有效治疗量的组合物，其含有与包含SEQ ID NO：7的氨基酸1-205 的D-氨基酸氧化酶多肽结合的组合物。较优选的双极性精神障碍的治疗方法包括 给双极性精神障碍病人施加一有效治疗量的组合物，其含有与包含SEQ ID NO：7 的氨基酸31-189的D-氨基酸氧化酶多肽结合的组合物。较优选的双极性精神障碍 的治疗方法包括给双极性精神障碍病人施加一有效治疗量的组合物，其含有与包含 SEQ ID NO：7的氨基酸31-205的D-氨基酸氧化酶多肽结合的组合物。较优选的双 极性精神障碍的治疗方法包括给双极性精神障碍病人施加一有效治疗量的组合物， 其含有与包含SEQ ID NO：7的氨基酸84-205的D-氨基酸氧化酶多肽结合的组合 物。
本发明另一优选实施例涉及与SEQ ID NO：14的g34872多肽或其片段结合的 组合物。较优选与g34872多肽结合的组合物含有SEQ ID NO：14的氨基酸65-153 或其片段。较优选的是与SEQ ID NO：16的多肽或其片段结合的组合物。
另一优选实施例涉及精神分裂症的治疗方法，所述方法包括给精神分裂症病 人施加一有效治疗量的组合物，其含有与SEQ ID NO：14的g34872多肽或其片段 结合的组合物。较优选的精神分裂症的治疗方法包括给精神分裂症病人施加一有效 治疗量的组合物，其含有与包含SEQ ID NO：14的氨基酸65-153或其片段的g34872 多肽结合的组合物。较优选的精神分裂症的治疗方法包括给精神分裂症病人施加一 有效治疗量的组合物，其含有与SEQ ID NO：16的多肽或其片段结合的组合物。
另一优选实施例涉及双极性精神障碍的治疗方法，所述方法包括给双极性精 神障碍病人施加一有效治疗量的组合物，其含有与SEQ ID NO：14的g34872多肽 或其片段结合的组合物。较优选的双极性精神障碍的治疗方法包括给双极性精神障 碍病人施加一有效治疗量的组合物，其含有与包含SEQ ID NO：14的氨基酸65-153 或其片段的g34872多肽结合的组合物。较优选的双极性精神障碍的治疗方法包括 给双极性精神障碍病人施加一有效治疗量的组合物，其含有与SEQ ID NO：16的多 肽或其片段结合的组合物。
本发明另一优选实施例涉及SEQ ID NO：14的g34872多肽的任何多肽片段， 其拮抗所述g34872多肽或其片段与D-氨基酸氧化酶多肽或其片段之间的相互作 用。较优选的是通过g34872多肽拮抗D-氨基酸氧化酶增加活性的任何g34872多 肽片段。较优选的是含有SEQ ID NO：16的氨基酸的g34872多肽片段。
本发明另一优选实施例涉及拮抗SEQ ID NO：14的g34872多肽或其片段与SEQ ID NO：7-10或18的D-氨基酸氧化酶多肽或其片段之间的相互作用的组合物。
本发明另一优选实施例涉及拮抗SEQ ID NO：14的g34872多肽或其片段与SEQ ID NO：21或22的D-天冬氨酸氧化酶多肽或其片段之间的相互作用的组合物。
本发明又一优选实施例涉及用g34872多肽或其片段增加D-氨基酸氧化酶活性 的方法。此外，本发明还涉及用g34872多肽或其片段增加D-天冬氨酸氧化酶活性 的方法。
本发明另一优选实施例涉及抑制D-氨基酸氧化酶糖基化的方法。
本发明另一优选实施例涉及增强D-氨基酸氧化酶多聚化的方法。
本发明另一优选实施例涉及抑制D-氨基酸氧化酶翻译的方法。
本发明另一优选实施例涉及D-氨基酸氧化酶变异型差别性鉴定的方法。
本发明一优选实施例涉及降低、抑制或拮抗D-氨基酸氧化酶活性的组合物或 化合物。较优选的组合物或化合物是D-氨基酸氧化酶活性的竞争性抑制剂或拮抗 剂。较优选的组合物或化合物是D-氨基酸氧化酶活性的非竞争性抑制剂或拮抗剂。 较优选的组合物或化合物是D-氨基酸氧化酶活性的无竞争性抑制剂或拮抗剂。较 优选的组合物或化合物是D-氨基酸氧化酶活性的变构抑制剂或拮抗剂。较优选的 组合物或化合物是D-氨基酸氧化酶活性的可逆性抑制剂或拮抗剂。较优选的组合 物或化合物是D-氨基酸氧化酶活性的不可逆抑制剂或拮抗剂。
本发明一优选实施例涉及降低、抑制或拮抗D-天冬氨酸氧化酶活性的组合物 或化合物。较优选的组合物或化合物是D-天冬氨酸氧化酶活性的竞争性抑制剂或 拮抗剂。较优选的组合物或化合物是D-天冬氨酸氧化酶活性的非竞争性抑制剂或 拮抗剂。较优选的组合物或化合物是D-天冬氨酸氧化酶活性的无竞争性抑制剂或 拮抗剂。较优选的组合物或化合物是D-天冬氨酸氧化酶活性的变构抑制剂或拮抗 剂。较优选的组合物或化合物是D-天冬氨酸氧化酶活性的可逆性抑制剂或拮抗剂。 较优选的组合物或化合物是D-天冬氨酸氧化酶活性的不可逆抑制剂或拮抗剂。较 优选的组合物或化合物是能够降低、抑制或拮抗D-氨基酸氧化酶和D-天冬氨酸氧 化酶活性。
较优选的是利用能降低、抑制或拮抗D-氨基酸氧化酶活性的组合物或化合物 来治疗中枢神经系统障碍的方法。较优选的是利用能降低、抑制或拮抗D-天冬氨 酸氧化酶活性的组合物或化合物来治疗中枢神经系统障碍的方法。较优选的是利用 能降低、抑制或拮抗D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶活性的组合物或化合物 来治疗中枢神经系统障碍的方法。较优选的是利用能降低、抑制或拮抗D-氨基酸 氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶活性的组合物或化合物来治疗中枢神经系统障碍的方 法。较优选的是利用能降低、抑制或拮抗D-氨基酸氧化酶活性的第一组合物或化 合物与能降低、抑制或拮抗D-天冬氨酸氧化酶活性的第二组合物或化合物结合来 治疗中枢神经系统障碍的方法。较优选的是利用能降低、抑制或拮抗D-氨基酸氧 化酶活性的组合物或化合物与另一种组合物结合来治疗中枢神经系统障碍的方法。 较优选的是利用能降低、抑制或拮抗D-氨基酸氧化酶活性的组合物或化合物与另 一种所述中枢神经系统障碍治疗所用的常规组合物结合来治疗中枢神经系统障碍 的方法。较优选的是利用能降低、抑制或拮抗D-氨基酸氧化酶活性的组合物或化 合物与另一种治疗所述中枢神经系统障碍不相关的组合物结合来治疗中枢神经系 统障碍的方法。较优选的是利用能降低、抑制或拮抗D-天冬氨酸氧化酶活性的组 合物或化合物与另一种组合物结合治疗中枢神经系统障碍的方法。较优选的是利用 能降低、抑制或拮抗D-天冬氨酸氧化酶活性的组合物或化合物与另一种治疗所述 中枢神经系统障碍所用的常规组合物结合治疗中枢神经系统障碍的方法。较优选的 是利用能降低、抑制或拮抗D-天冬氨酸氧化酶活性的组合物或化合物与另一种治 疗所述中枢神经系统障碍不相关的组合物结合治疗中枢神经系统障碍的方法。
本发明能降低、抑制或拮抗D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶活性的优选 组合物或化合物选自但不限于下表：
i.IRI，2-氧代-3-戊炔酸盐；
ii.CMI，氨基胍(脒基肼；氨甲基亚氨基酰肼；匹马吉定(Pimagedine)；GER 11；肼基羧亚氨基酰胺)或盐酸盐(脒基肼盐酸盐)，碳酸氢盐，硝酸盐， 硫酸盐(2∶1)，亚硫酸盐(1∶1)，及其半硫酸盐；
iii.FI，苯甲酸；
iv.FI，苯甲酸钠；
v.FI，2-氨基苯甲酸盐；
vi.FI，3-氨基苯甲酸盐；
vii.FI，4-氨基苯甲酸盐(对氨基苯甲酸盐，PABA，维生素Bx，维生素H1)；
viii.CMI，甲基乙二醛双(脒腙)(也称：甲基GAG；米托胍腙；1，1’-((甲基
联二亚甲基)双次氮基)二胍；肼基羧亚氨基酰胺，2，2’-(1-甲基-1，2-
联二亚甲基)双-；丙酮醛双(脒腙)；Megag；米托胍腙[INN-Spanish]；
胍，1，1’-((甲基联二亚甲基)双次氮基)二-；1，1’-((甲基联二亚甲基)
双次氮基)二胍)；
ix.CMI，甲基乙二醛双(脒基腙)，二盐酸盐；
x.CMI，苯基乙二醛双(脒基腙)(PhGBG)；
xi.CMI，乙二醛双(脒基腙)(GBG；胍，1，1’-(联二亚甲基双次氮基)二-(8CI)；
肼基羧亚氨基酰胺，2，2’-(1，2-联二亚甲基)二-(9CI))；
xii.CMI，吲哚-丙酸(IPA，3-(3-吲哚基)丙酸)；
xiii.CMI，3-吲哚-乙酸(异植物生长素，IAA)；
xiv.CMI，吲哚-3-乙酸钠盐；
xv.CMI，吲哚-3-丙酮；
xvi.CMI，吲哚-3-乙酰胺；
xvii.CMI，吲哚-3-乙酰基-L-天冬氨酸；
xvii.CMI，吲哚-3-乙酰基-L-丙氨酸；
xix.CMI，吲哚-3-乙酰基甘氨酸；
xx.CMI，吲哚-3-乙醛亚硫酸钠加成化合物；
xxi.CMI，吲哚-3-羧酸；
xxii.CMI，吲哚-3-丙酮酸(3-(3-吲哚基)-2-氧代丙酸)；
xxiii.FI，水杨酸(2-羟基苯甲酸)；
xxiv.FI，水杨酸钠盐；
xxv.FI，水杨酸钾盐；
xxvi.IRI，丹磺酰氯(5-(二甲基氨基)萘-1-磺酰氯)；
xxvii.IRI，丹磺酰氟(5-(二甲基氨基)萘-1-磺酰氟)；
xxviii.CMI，丹磺酰甘氨酸；
xxix.CMI，丙氨酸四唑；
xxx.FI，苯甲酸四唑；
xxxi.CMI，四唑；
xxxii.CMI，核黄素5’-焦磷酸盐(RPP，5-磷酸-α-D-核糖二磷酸盐，P-Rib-PP，
P-RPP)；
xxxiii.IRI，DL-炔丙基甘氨酸(DL-PG，2-氨基-4-戊炔酸)；
xxxiv.IRI，L-C-炔丙基甘氨酸；
xxxv.IRI，N-乙酰基-DL-炔丙基甘氨酸；
xxxvi.FII，(±)-3-羟基丁酸钠；
xxxvii.FI，葫芦巴碱盐酸盐(1-甲基吡啶鎓-3-羧酸盐)；
xxxviii.FI，N-烟酸甲酯；
xxxix.FI，6-甲基烟酸甲酯；
xl.FI，2-甲基烟酸乙酯；
xli.CMI，曲酸(2-羧基甲基-5-羧基-γ-吡喃酮，5-羧基-2-羧基甲基-4-吡喃
酮)；
xlii.CMI，曲酸衍生物，例如：6-(吡咯烷基甲基)-曲酸盐酸盐，6-(吗啉代
甲基)-曲酸，6-(二乙基氨基甲基)-曲酸盐酸盐；
xliii.IRI，O-(2，4-二硝基苯基)羟胺；
xliv.CMI，2，4-二硝基苯基甘氨酸；
xlv.CMI，羟胺盐酸盐；
xlvi.IRI，对硝基苯磺酸甲酯(4-硝基苯磺酸甲酯)；
xlvii.FIV，氨基乙基半胱氨酸酮亚胺(AECK，硫赖氨酸酮亚胺，2H-1，4-噻嗪
-5，6-二氢-3-羧酸，S-氨基乙基-L-半胱氨酸酮亚胺，2H-1，4-噻嗪-3-
羧酸，5，6-二氢-)；
xlviii.FIV，1，4-噻嗪衍生物；
xlix.CMI，4-苯基-1，4-sulfonazan(四氢-4-苯基-4H-1，4-噻嗪1-氧化物，
4H-1，4-噻嗪，四氢-4-苯基-，1-氧化物)；
l.CMI，吩噻嗪(硫代二苯胺，10H-吩噻嗪，AFI-Tiazin，Agrazine，Antiverm，
二苯并-1，4-噻嗪)；
li.CMI，3，4-二氢-2H-1，4-噻嗪-3，5-二羧酸(3，4-Dhtca，CAS#86360-
62-5)；
lii.CMI，硝呋莫司(Nifurtimox)(硝呋莫司[BAN：INN]，1-((5-硝基亚糠基)
氨基)-2-甲基四氢-1，4-噻嗪-4，4-二氧化物，3-甲基-4-(5’-硝基亚呋
喃基-氨基)-四氢-4H-1，4-噻嗪-1，1-二氧化物，BAY 2502，4-((5-硝
基亚糠基)氨基)-3-甲基硫代码啉1，1-二氧化物，等等)；
liii.FIV，3-(1-吡咯烷基甲基)-4-(5，6-二氯-1-二氢化茚羰基)-四氢-1，4-
噻嗪盐酸盐(R84760；R84761；硫代吗啉，4-((5，6-二氯-2，3-二氢
-1H-二氢化茚-1-基)羰基)-3-(1-吡咯烷基甲基)-，单盐酸盐，(R-(R*，
S*))-)；
liv.FIV，酮亚胺还原形式；
lv.CMI，胱硫醚；
lvi.FIII，胱硫醚酮亚胺；
lvii.FIV，羊毛硫氨酸酮亚胺；
lviii.FIV，硫代吗啉-2-羧酸；
lix.CMI，硫代吗啉-2，6-二羧酸；
lx.FIV，TMDA(1，4-硫代吗啉-3，5-二羧酸)；
lxi.IRI，1-氯-1-硝基乙烷；
lxii.FI，氨基苯甲酸盐；
lxiii.FI，2-氨基苯甲酸乙酯(氨基苯甲酸乙酯)；
lxiv.FI，2-氨基苯甲酸甲酯(氨基苯甲酸甲酯)；
lxv.FI，吡啶甲酸盐；
lxvi.FI，吡啶甲酸乙酯(2-(乙氧基羰基)吡啶，2-吡啶羧酸乙酯，；
lxvii.CMI，L-亮氨酸甲酯，盐酸盐；
lxviii.CMI，L-亮氨酸([(S)-(+)-亮氨酸])；
lxix.IRI，氟二硝基苯(1-氟-2，4-二硝基苯，2，4-DNFB，苯，1-氟-2，4-二
硝基-，VAN，等等)；
lxx.IRI，二硝基氯苯(1-氯-2，4-二硝基苯，1，3-二硝基-4-氯苯，等等)；
lxxi.IRI，1，2-环己二酮；
lxxii.IRI，烯丙基甘氨酸(D-烯丙基甘氨酸，4-戊烯酸，2-氨基-)；
lxxiii.CMI，2-氨基-2，4-戊二烯酸盐；
lxxiv.CMI，2-羧基-2，4-戊二烯酸盐；
lxxv.CMI，2-氨基-4-酮-2-戊烯酸盐；
lxxvi.FII，2-羧基丁酸盐；
lxxvii.FII，2-羧基丁酸钠；
lxxviii.IRI，N-氯-D-亮氨酸；
lxxix.CMI，N-乙酰基-D-亮氨酸；
lxxx.CMI，D-亮氨酸(D-2-氨基-4-甲基戊酸)；
lxxxi.IRI，D-炔丙基甘氨酸；2-氨基-4-戊炔酸；D，L-炔丙基甘氨酸；L-2-氨
基-4-戊炔酸；
lxxxii.CMI，孕酮(4-孕烯-3，20-二酮)；
lxxxiii.CMI，FAD(黄素腺嘌呤二核苷酸，1H-嘌呤-6-胺，黄素二核苷酸，腺苷
5’-(三氢焦磷酸盐)，带有核黄素的5’-5’-酯，等等)；
lxxxiv.CMI，6-OH-FAD；
lxxxv.IRI，苯基乙二醛(2，2-二羧基苯乙酮)；
lxxxvi.IRI，苯基乙二醛一水合物(2，2-二羧基苯乙酮一水合物)；
lxxxvii.FIII，环硫堇(全氢-1，4-硫氮杂-3，5-二羧酸，1，4-六氢硫氮杂-3， 5-二羧酸，1，4-硫氮杂-3，5-二羧酸，六氢-)；
lxxxviii.CMI，α-α’-亚氨基二丙酸(Alanopine；2，2’-亚氨基二丙酸基；L-丙氨
酸，N-(1-羧乙基)-)；
lxxxix.CMI，内消旋二氨基琥珀酸(3-氨基天冬氨酸；二氨基琥珀酸；CAS RN：
921-52-8)；内消旋2，3-二氨基琥珀酸(CAS RN：23220-52-2)；
xc.CMI，氨基硫脲(氨基硫碳基酰肼)；
xci.CMI，硫脲(硫代尿素；硫脲)；
xcii.CMI，甲基硫尿嘧啶(4(6)-甲基-2-硫尿嘧啶，4-羧基-2-巯基6-甲基嘧
啶)；
xciii.CMI，磺胺噻唑(N1-(2-噻唑基)磺胺，4-氨基-N-2-噻唑基苯磺酰胺)；
xciv.CMI，磺胺噻唑钠盐(4-氨基-N-2-噻唑基苯磺酰胺钠盐)；
xcv.CMI，硫氰酸盐；
xcvi.FI，3-甲基苯甲基硫氰酸盐；
xcvii.CMI，甲巯咪唑(2-巯基-1-甲基咪唑，1-甲基咪唑-2-硫醇)；
xcviii.FII，二羧基羟酸；
xcix.FII，1，3-丙酮二羧酸(3-氧代戊二酸)；
c.CMI，D-酒石酸([(2S，3S)-(-)-酒石酸，非天然酒石酸])；
ci.CMI，L-酒石酸([(2R，3R)-(+)-酒石酸，天然酒石酸])；
cii.CMI，DL-酒石酸；
ciii.酒石酸钾；
civ.FII，D-苹果酸；[(R)-(+)-苹果酸，(R)-(+)-羟基琥珀酸]；
cv.FII，L-苹果酸；[(S)-(-)-苹果酸，(S)-(-)-羟基琥珀酸]；
cvi.FII，DL-苹果酸(DL-羟基琥珀酸)；
cvii.FII，α-酮酸，其为氨基酸丙氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、苯甘氨酸，酪氨
酸、丝氨酸、天冬氨酸盐等及其盐和衍生物的类似物；
cviii.FII，丙酮酸(2-氧代丙酸，α-酮丙酸)；
cix.FII，丙酮酸钠；
cx.FII，丙酮酸甲酯(丙酮酸甲酯)；
cxi.FI，苯基丙酮酸；
cxii.FII，苯基丙酮酸钙(丙酮酸钙)；
cxiii.FI，苯基丙酮酸钠盐(苯基丙酮酸钠)；
cxiv.FII，4-羟基苯基丙酮酸；
cxv.FII，α-酮异戊酸钠(3-甲基-2-氧代丁酸钠盐，3-甲基-2-氧代丁酸钠盐，
a-酮异戊酸钠盐；酮戊酸钠盐)；
cxvi.FI，苯酰甲酸(a-氧代苯乙酸，苯基乙醛酸)；
cxvii.FII，4-甲基硫代-2-氧代戊酸；
cxviii.FII，4-甲基-2-氧代戊酸(4-甲基-2-氧代戊酸；α-酮异己酸；
cxix.FII，4-甲基硫代-2-氧丁酸；
cxx.FII，2-氧丁酸(羟基丁酸盐；2-羟基丁酸；α-羟基-正丁酸；
cxxi.FII，DL-α-羟基丁酸钠盐((±)-2-羟基丁酸钠)；
cxxii.FII，吲哚-3-丙酮酸(色氨酸的α-酮类似物)；
cxxiii.半胱胺与溴丙酮酸盐的反应产物；
cxxiv.CMI，半胱胺(2-氨基乙硫醇；2-巯基乙胺)；
cxxv.CMI，泛酰巯基乙胺；
cxxvi.CMI，S-腺苷甲硫氨酸；
cxxvii.IRI，溴丙酮酸乙酯；
cxxviii.IRI，溴丙酮酸甲酯；
cxxix.IRI，溴丙酮酸盐；以及
cxxx.CMI，5-S-半胱氨酰基多巴胺，
其中IRI表示不可逆抑制剂组合物；CMI表示竞争性抑制剂组合物但不包在以 一般式I-IV表示的组合物中；FI表示本文以一般式I表示的组合物；FII表示本 文以一般式II表示的组合物；FIII表示本文以一般式III表示的组合物；以及FIV 表示本文以一般式IV表示的组合物。需要指出的是，以一般式I-IV表示的组合物 是D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶的竞争性、非竞争性、无竞争性或变构抑 制剂。
用于本发明方法能够在体内或体外降低、抑制或拮抗D-氨基酸氧化酶催化活 性的优选组合物选自以上列出的所有组合物“i”，直到并包括“cxxx”；较优选的组 合物选自不可逆抑制剂组合物、一般式I表示的组合物、一般式II表示的组合物、 一般式III表示的组合物和一般式IV表示的组合物；更优选的组合物选自一般式 I表示的组合物、一般式II表示的组合物、一般式III表示的组合物和一般式IV 表示的组合物；最优选的组合物选自一般式I表示的组合物和一般式IV表示的组 合物。用于本发明方法能够在体内或体外降低、抑制或拮抗D-氨基酸氧化酶或D- 天冬氨酸氧化酶催化活性的较优选组合物选自包括苯甲酸盐、氨基乙基半胱氨酸酮 亚胺(AECK)及其衍生物的组。
在另一优选实施例中，用于本发明治疗中枢神经系统障碍的方法中优选组合 物或化合物选自以上列出的所有组合物“i”，直到并包括“cxxx”；较优选的组合物 选自不可逆抑制剂组合物、一般式I表示的组合物、一般式II表示的组合物、一 般式III表示的组合物和一般式IV表示的组合物；更优选的组合物选自一般式I 表示的组合物、一般式II表示的组合物、一般式III表示的组合物和一般式IV 表示的组合物；最优选的组合物选自一般式I表示的组合物和一般式IV表示的组 合物。用于本发明治疗中枢神经系统障碍的方法中较优选组合物选自包括苯甲酸 盐、氨基乙基半胱氨酸酮亚胺(AECK)及其衍生物的组。
本发明能降低、抑制或拮抗D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶活性的高度 优选化合物或组合物选自包括但不限于以下所列的：氨基乙基半胱氨酸-酮亚胺 (AECK，硫赖氨酸酮亚胺，2H-1，4-噻嗪-5，6-二氢-3-羧酸，S-氨基乙基-L-半胱 氨酸酮亚胺，2H-1，4-噻嗪-3-羧酸，5，6-二氢-)；氨基乙基半胱氨酸(硫赖氨酸)； 半胱胺；泛酰巯基乙胺；胱硫醚和S-腺苷甲硫氨酸。
本发明另一优选实施例涉及能降低、抑制或拮抗氨基酸或其衍生物氧化或降 解的化合物或组合物。本发明的另一优选实施例涉及能降低、抑制或拮抗L-氨基 酸或其衍生物氧化或降解的化合物或组合物。本发明的另一优选实施例涉及能降 低、抑制或拮抗D-氨基酸或其衍生物氧化或降解的化合物或组合物。本发明的另 一优选实施例涉及能降低、抑制或拮抗甘氨酸或其衍生物氧化或降解的化合物或组 合物。本发明的又一优选实施例涉及能降低、抑制或拮抗至少一种D-氨基酸氧化 或降解的化合物或组合物，所述D-氨基酸选自：D-Met、D-Pro、D-Phe、D-Tyr、 D-Ile、D-Leu、D-Ala、D-Val、D-Ser、D-Arg、D-His、D-正亮氨酸、D-Trp、D- 鸟氨酸、顺-4-羟基-D-脯氨酸、D-Thr、D-Trp-甲酯、N-乙酰基-D-Ala、D-Lys、D-Asp、 D-Glu、D-Asn、D-Gln、D-Asp-二甲酯和N-甲基-D-Asp。较优选的是能降低、抑制 或拮抗D-丝氨酸氧化或降解的组合物。较优选的是能降低、抑制或拮抗D-Ser、N- 甲基-D-Asp、D-Asp或Gly氧化或降解的组合物或化合物。本发明能降低、抑制或 拮抗一种氨基酸或其衍生物氧化或降解的优选化合物或组合物选自包括但不限于 以下所列的：氨基乙基半胱氨酸-酮亚胺(AECK，硫赖氨酸酮亚胺，2H-1，4-噻嗪- 5，6-二氢-3-羧酸，S-氨基乙基-L-半胱氨酸酮亚胺，2H-1，4-噻嗪-3-羧酸，5， 6-二氢-)；氨基乙基半胱氨酸(硫赖氨酸)；半胱胺；泛酰巯基乙胺；胱硫醚和S- 腺苷甲硫氨酸。本发明能降低、抑制或拮抗D-Met、D-Pro、D-Phe、D-Tyr、D-Ile、 D-Leu、D-Ala、D-Val、D-Ser、D-Arg、D-His、D-正亮氨酸、D-Trp、D-鸟氨酸、 顺-4-羟基-D-脯氨酸、D-Thr、D-Trp-甲酯、N-乙酰基-D-Ala、D-Lys、D-Asp、D- Glu、D-Asn、D-Gln、D-Asp-二甲酯、N-甲基-D-Asp或Gly氧化或降解的优选化合 物或组合物选自包括但不限于以下所列的：氨基乙基半胱氨酸-酮亚胺(AECK，硫赖 氨酸酮亚胺，2H-1，4-噻嗪-5，6-二氢-3-羧酸，S-氨基乙基-L-半胱氨酸酮亚胺， 2H-1，4-噻嗪-3-羧酸，5，6-二氢-)；氨基乙基半胱氨酸(硫赖氨酸)；半胱胺；泛 酰巯基乙胺；胱硫醚和S-腺苷甲硫氨酸。本发明能降低、抑制或拮抗D-丝氨酸氧 化或降解的优选化合物或组合物选自包括但不限于以下所列的：氨基乙基半胱氨酸 -酮亚胺(AECK，硫赖氨酸酮亚胺，2H-1，4-噻嗪-5，6-二氢-3-羧酸，S-氨基乙基 -L-半胱氨酸酮亚胺，2H-1，4-噻嗪-3-羧酸，5，6-二氢-)；氨基乙基半胱氨酸(硫 赖氨酸)；半胱胺；泛酰巯基乙胺；胱硫醚和S-腺苷甲硫氨酸。
本发明另一优选实施例涉及能降低、抑制或拮抗还原的黄素腺嘌呤二核苷酸 (Re-FAD)氧化的组合物。本发明另一优选实施例涉及能降低、抑制或拮抗氧化的黄 素腺嘌呤二核苷酸(Ox-FAD)还原的组合物。本发明又一优选实施例涉及能降低、抑 制或拮抗黄素激酶活性的组合物。本发明又一优选实施例涉及能降低、抑制或拮抗 黄素腺嘌呤二核苷酸焦磷酸化酶活性的组合物。本发明又一优选实施例涉及能与还 原的黄素腺嘌呤二核苷酸或氧化的黄素腺嘌呤二核苷酸结合或相互作用的组合物。 本发明又一优选实施例涉及能与黄素激酶或黄素腺嘌呤二核苷酸焦磷酸化酶结合 或相互作用的组合物。
本发明另一优选实施例涉及能增加、激动或促进胱硫醚β-合成酶活性的组合 物或化合物。能增加、促进或激动胱硫醚β-合成酶活性的优选组合物包括S-腺苷 甲硫氨酸或高半胱氨酸。能增加、激动或促进胱硫醚β-合成酶活性的另一优选组 合物是维生素B6或其衍生物。
本发明另一优选实施例涉及一种能与D-氨基酸氧化酶、D-天冬氨酸氧化酶、 还原的黄素腺嘌呤二核苷酸、氧化的黄素腺嘌呤二核苷酸、黄素激酶、黄素腺嘌呤 二核苷酸焦磷酸化酶、胱硫醚β-合成酶、L-氨基酸氧化酶、或者谷氨酰胺转氨酶 结合或相互作用的组合物的筛选方法。本发明另一优选实施例涉及一种能降低、抑 制或拮抗D-氨基酸氧化酶、D-天冬氨酸氧化酶、黄素激酶、黄素腺嘌呤二核苷酸 焦磷酸化酶、L-氨基酸氧化酶、或者谷氨酰胺转氨酶活性的组合物的筛选方法。本 发明另一优选实施例涉及一种能激动、增加或促进胱硫醚β-合成酶、L-氨基酸氧 化酶或者谷氨酰胺转氨酶活性的组合物的筛选方法。
所以，本发明的一方面内容提供一种用于治疗疾病或用于提高氨基酸水平或 减少氨基酸降解的候选分子的鉴定方法，所述方法包括：a)使D-氨基酸氧化酶、 D-天冬氨酸氧化酶、黄素激酶、黄素腺嘌呤二核苷酸焦磷酸化酶、L-氨基酸氧化酶、 或者谷氨酰胺转氨酶多肽或其具有生物活性的片段与测试化合物接触；及b)确定 所述化合物是否与所述多肽选择性结合；其中所述化合物与所述多肽选择性结合的 确定表示所述化合物是治疗疾病或者提高氨基酸水平或减少氨基酸降解的候选分 子。
本发明也提供一种用于治疗疾病或用于提高氨基酸水平或减少氨基酸降解的 候选分子的鉴定方法，所述方法包括：a)使D-氨基酸氧化酶、D-天冬氨酸氧化酶、 黄素激酶、黄素腺嘌呤二核苷酸焦磷酸化酶、L-氨基酸氧化酶、或者谷氨酰胺转氨 酶多肽或其具有生物活性的片段与测试化合物接触；及b)确定所述化合物是否选 择性抑制所述多肽的活性；其中所述化合物选择性抑制所述多肽的活性的确定表示 所述化合物是治疗疾病或者提高氨基酸水平或减少氨基酸降解的候选分子。
本发明还提供一种用于治疗疾病或用于提高氨基酸水平或减少氨基酸降解的 候选分子的鉴定方法，所述方法包括：a)提供含有D-氨基酸氧化酶、D-天冬氨酸 氧化酶、黄素激酶、黄素腺嘌呤二核苷酸焦磷酸化酶、L-氨基酸氧化酶、或者谷氨 酰胺转氨酶多肽或其具有生物活性的片段的细胞；及b)使所述细胞与测试化合物 接触；及c)确定所述化合物是否选择性抑制D-氨基酸氧化酶、D-天冬氨酸氧化酶、 黄素激酶、黄素腺嘌呤二核苷酸焦磷酸化酶、L-氨基酸氧化酶、或者谷氨酰胺转氨 酶的活性；其中所述化合物选择性抑制所述多肽的活性的确定表示所述化合物是治 疗疾病或者提高氨基酸水平或减少氨基酸降解的候选分子。
本发明还提供一种用于治疗疾病或用于提高氨基酸水平或减少氨基酸降解的 候选分子的鉴定方法，所述方法包括：a)使胱硫醚β-合成酶、L-氨基酸氧化酶或 者谷氨酰胺转氨酶多肽或其具有生物活性的片段与测试化合物接触；及b)确定所 述化合物是否选择性增加所述多肽的活性；其中所述化合物选择性增加所述多肽的 活性的确定表示所述化合物是治疗疾病或者提高氨基酸水平或减少氨基酸降解的 候选分子。
本发明另一实施例提供一种用于治疗疾病或用于提高氨基酸水平或减少氨基 酸降解的候选分子的鉴定方法，所述方法包括：a)提供含有胱硫醚β-合成酶、L- 氨基酸氧化酶或者谷氨酰胺转氨酶多肽或其具有生物活性的片段的细胞；b)使所述 细胞与测试化合物接触；及c)确定所述化合物是否选择性增加胱硫醚β-合成酶、 L-氨基酸氧化酶或者谷氨酰胺转氨酶的活性；其中所述化合物选择性增加所述多肽 的活性的确定表示所述化合物是治疗疾病或者提高氨基酸水平或减少氨基酸降解 的候选分子。
本发明另一优选实施例涉及一种拮抗、降低或抑制D-氨基酸氧化酶体外活性 的方法。较优选的是一种拮抗、降低或抑制D-氨基酸氧化酶体内活性的方法。较 优选的是一种拮抗、降低或抑制D-氨基酸氧化酶体外或体内活性的方法，所述方 法包括使D-氨基酸氧化酶与能降低、抑制或拮抗D-氨基酸氧化酶活性的组合物接 触的步骤。待抑制的D-氨基酸氧化酶优选活性是底物的氧化，该底物最好是D-氨 基酸，而该D-氨基酸最好是D-Ser、D-Asp、或N-甲基-D-Asp。
本发明另一优选实施例涉及一种拮抗、降低或抑制D-天冬氨酸氧化酶体外活 性的方法。较优选的是一种拮抗、降低或抑制D-天冬氨酸氧化酶体内活性的方法。 较优选的是一种拮抗、降低或抑制D-天冬氨酸氧化酶体外或体内活性的方法，所 述方法包括使D-天冬氨酸氧化酶与能降低、抑制或拮抗D-氨基酸氧化酶活性的组 合物接触的步骤。待抑制的D-天冬氨酸氧化酶优选活性是底物的氧化，该底物最 好是D-氨基酸，而该D-氨基酸最好是D-Asp、D-Glu、D-Asn、D-Gln、D-Asp-二甲 酯或N-甲基-D-Asp。
本发明另一优选实施例涉及能提高至少一种D-氨基酸在体外的水平的组合 物。较优选的是能提高至少一种D-氨基酸在体内的水平的组合物，优选在哺乳动 物组织内，更优选在小鼠、大鼠、狗、牛、猪、猿、猴或人的组织内。较优选的是 能提高至少一种D-氨基酸在中枢神经系统最好在脑或脊髓的组织内的水平的组合 物。较优选的是能提高至少一种D-氨基酸在脑最好在海马、扁桃体、黑质、小脑、 胼胝体、尾状核、大脑皮层、丘脑或垂体的组织内的水平的组合物。本发明的组合 物能提高至少一种D-氨基酸在其它优选组织的水平，所述的其它优选组织包括但 不限于肾、肝脏、脂肪、肌肉和睾丸。
本发明一优选实施例涉及SEQ ID NO：15的多肽或其片段在一种增加D-氨基 酸氧化酶活性的方法中的应用。较优选的是SEQ ID NO：15的多肽或其片段在一种 增加D-天冬氨酸氧化酶活性的方法中的应用。较优选的是SEQ ID NO：15的多肽 或其片段在一种降低丝氨酸消旋酶活性的方法中的应用。
本发明一优选实施例涉及SEQ ID NO：15的多肽或其片段在一种提高化合物 或组合物产量的方法中的应用，所述化合物或组合物是以D-氨基酸氧化酶为催化 剂的反应产物。
本发明一优选实施例涉及一种与g34872多肽(SEQ ID NO：15)或g34872多核 苷酸(SEQ ID NO：14)或其片段结合的组合物或化合物的筛选方法。较优选的是这 样一种方法：使g34872多肽或其片段与D-氨基酸氧化酶接触，从而使D-氨基酸氧 化酶活性增加到基本水平以上。较优选的是一种能降低、抑制、拮抗或阻断D-氨 基酸氧化酶与g34872相互作用的方法。较优选的是一种通过阻断g34872与D-氨 基酸氧化酶相互作用来治疗中枢神经系统障碍的方法。较优选的是一种用能降低、 阻断、抑制或拮抗g34872与D-氨基酸氧化酶相互作用的化合物或组合物来治疗中 枢神经系统障碍的方法。
本发明优选的D-氨基酸氧化酶多肽包括SEQ ID NO：7-10和19的多肽及其片 段以及编码它们的多核苷酸。本发明优选的D-天冬氨酸氧化酶多肽包括SEQ ID NO： 22和23的多肽及其片段以及编码它们的多核苷酸。本发明优选的D-氨基酸氧化酶 多核苷酸包括SEQ ID NO：2-6和18及其片段以及由它们编码的多肽。本发明优选 的D-天冬氨酸氧化酶多核苷酸包括SEQ ID NO：20和21及其片段以及由它们编码 的多肽。
SEQ ID NO：1所述以及以标记24-1443-126(SEQ ID NO：24)、标记24-1457-52 (SEQ ID NO：26)和标记24-1461-256(SEQ ID NO：29)的47-mers表示优选的D- 氨基酸酸氧化酶双等位标记。
本发明另一优选实施例涉及与SEQ ID NO：7的多肽差异结合的组合物。本发 明另一优选实施例涉及与SEQ ID NO：8的多肽差异结合的组合物。本发明另一优 选实施例涉及与SEQ ID NO：9的多肽差异结合的组合物。本发明另一优选实施例 涉及与SEQ ID NO：10的多肽差异结合的组合物。较优选的是与SEQ ID NO：10 的多肽结合但不与SEQ ID NO：7、8或9的多肽结合的组合物。较优选的是与SEQ ID NO：9的多肽结合但不与SEQ ID NO：7、8或10的多肽结合的组合物。较优选 的是与SEQ ID NO：8的多肽结合但不与SEQ ID NO：7、9或10的多肽结合的组合 物。较优选的是与SEQ ID NO：7的多肽结合但不与SEQ ID NO：8、9或10的多肽 结合的组合物。较优选的是与SEQ ID NO：8、9或10的多肽结合但不与SEQ ID NO： 7的多肽结合的组合物。
本发明另一优选实施例涉及与含有SEQ ID NO：7、8、9、10或15的单体多 肽或其多肽片段差异结合的组合物。较优选的是与SEQ ID NO：7的单体多肽或其 片段结合但不与含有至少一种SEQ ID NO：7的单体多肽或其片段的同或异多聚体 形式结合的组合物。较优选的是与SEQ ID NO：8的单体多肽或其片段结合但不与 含有至少一种SEQ ID NO：8的单体多肽或其片段的同或异多聚体形式结合的组合 物。较优选的是与SEQ ID NO：9的单体多肽或其片段结合但不与含有至少一种SEQ ID NO：9的单体多肽或其片段的同或异多聚体形式结合的组合物。较优选的是与 SEQ ID NO：10的单体多肽或其片段结合但不与含有至少一种SEQ ID NO：10的单 体多肽或其片段的同或异多聚体形式结合的组合物。较优选的是与SEQ ID NO：15 的单体多肽或其片段结合但不与含有至少一种SEQ ID NO：15的单体多肽或其片段 的同或异多聚体形式结合的组合物。
本发明另一优选实施例涉及与含有SEQ ID NO：7、8、9、10或15的至少一 种多肽或其片段的多聚体多肽结合的组合物。较优选的是与含有SEQ ID NO：7的 至少一种单体多肽或其片段的同或异多聚体形式结合但不与SEQ ID NO：7的单体 多肽或其片段结合的组合物。较优选的是与含有SEQ ID NO：8的至少一种单体多 肽或其片段的同或异多聚体形式结合但不与SEQ ID NO：8的单体多肽或其片段结 合的组合物。较优选的是与含有SEQ ID NO：9的至少一种单体多肽或其片段的同 或异多聚体形式结合但不与SEQ ID NO：9的单体多肽或其片段结合的组合物。较 优选的是与含有SEQ ID NO：10的至少一种单体多肽或其片段的同或异多聚体形式 结合但不与SEQ ID NO：10的单体多肽或其片段结合的组合物。较优选的是与含有 SEQ ID NO：15的至少一种单体多肽或其片段的同或异多聚体形式结合但不与SEQ ID NO：15的单体多肽或其片段结合的组合物。
本发明另一实施例涉及与含有SEQ ID NO：2的多核苷酸差异结合的组合物。 本发明另一实施例涉及与含有SEQ ID NO：3的多核苷酸差异结合的组合物。本发 明另一实施例涉及与含有SEQ ID NO：4的多核苷酸差异结合的组合物。本发明另 一实施例涉及与含有SEQ ID NO：5的多核苷酸差异结合的组合物。本发明另一实 施例涉及与含有SEQ ID NO：6的多核苷酸差异结合的组合物。较优选的是与SEQ ID NO：6的多核苷酸结合但不与SEQ ID NO：2、3、4或5的多核苷酸结合的组合物。 较优选的是与SEQ ID NO：5的多核苷酸结合但不与SEQ ID NO：2、3、4或6的多 核苷酸结合的组合物。较优选的是与SEQ ID NO：4的多核苷酸结合但不与SEQ ID NO：2、3、5或6的多核苷酸结合的组合物。较优选的是与SEQ ID NO：3的多核 苷酸结合但不与SEQ ID NO：2、4、5或6的多核苷酸结合的组合物。较优选的是 与SEQ ID NO：2的多核苷酸结合但不与SEQ ID NO：3、4、5或6的多核苷酸结合 的组合物。较优选的是与SEQ ID NO：3、4、5或6的多核苷酸结合但不与SEQ ID NO：2的多核苷酸结合的组合物。
本发明的另一优选实施例涉及含有SEQ ID NO：1的多核苷酸的基因组序列。 较优选的是使SEQ ID NO：1的多核苷酸区基因分型的方法。
本发明一实施例涉及含有SEQ ID NO：1的序列或其互补序列的纯化的或分离 的核酸。较优选的是一种纯化的或分离的核酸，其含有至少10个SEQ ID NO：1 的序列或其互补序列的连续核苷酸。较优选的是一种核酸，其含有至少15个SEQ ID NO：1的序列或其互补序列的连续核苷酸。
本发明一优选实施例涉及一种纯化的或分离的核酸，其含有至少10个SEQ ID NO：1的序列或其互补序列或一个或多个外显子的连续核苷酸。较优选的是一种SEQ ID NO：1的序列或其互补序列所示的纯化的或分离的核酸，其含有SEQ ID NO：1 的序列或其互补序列所示的核苷酸40389至40670中至少10个连续核苷酸。一种 优选的SEQ ID NO：1的序列或其互补序列所示的纯化的或分离的核酸含有SEQ ID NO：1的序列或其互补序列所示的核苷酸42666至42778中至少10个连续核苷酸。 另一种优选的SEQ ID NO：1的序列或其互补序列所示的纯化的或分离的核酸含有 SEQ ID NO：1的序列或其互补序列所示的核苷酸43416至43519中至少10个连续 核苷酸。另一种优选的SEQ ID NO：1的序列或其互补序列所示的纯化的或分离的 核酸含有SEQ ID NO：1的序列或其互补序列所示的核苷酸61159至61402中至少 10个连续核苷酸。另一种优选的SEQ ID NO：1的序列或其互补序列所示的纯化的 或分离的核酸含有SEQ ID NO：1的序列或其互补序列所示的核苷酸64050至64711 中至少10个连续核苷酸。另一种优选的SEQ ID NO：1的序列或其互补序列所示的 纯化的或分离的核酸含有SEQ ID NO：1的序列或其互补序列所示的核苷酸68126 至68261中至少10个连续核苷酸。另一种优选的SEQ ID NO：1的序列或其互补序 列所示的纯化的或分离的核酸含有SEQ ID NO：1的序列或其互补序列所示的核苷 酸84906至85541中至少10个连续核苷酸。
本发明另一优选实施例涉及一种含有SEQ ID NO：2的序列或其互补序列的纯 化的或分离的核酸。本发明又一优选实施例涉及一种含有SEQ ID NO：3的序列或 其互补序列的纯化的或分离的核酸。本发明另一优选实施例涉及一种含有SEQ ID NO：4的序列或其互补序列的纯化的或分离的核酸。本发明另一优选实施例涉及一 种含有SEQ ID NO：5的序列或其互补序列的纯化的或分离的核酸。本发明另一优 选实施例涉及一种含有SEQ ID NO：6的序列或其互补序列的纯化的或分离的核酸。 本发明另一优选实施例涉及一种含有SEQ ID NO：14的序列或其互补序列的纯化的 或分离的核酸。本发明另一优选实施例涉及一种含有SEQ ID NO：16的序列或其互 补序列的纯化的或分离的核酸。本发明另一优选实施例涉及一种含有SEQ ID NO： 18、20或21的序列中任何一段序列或其互补序列的纯化的或分离的核酸。
本发明另一实施例涉及一种纯化的或分离的核酸，其含有SEQ ID NO：2-6的 序列中至少之一或其互补序列所示的至少10个连续核苷酸。较优选的是一种纯化 的或分离的核酸，其含有SEQ ID NO：2-6的序列中至少之一或其互补序列所示的 至少15个连续核苷酸。
本发明另一实施例涉及一种纯化的或分离的核酸，其含有SEQ ID NO：14的 序列或其互补序列所示的至少10个连续核苷酸。较优选的是一种纯化的或分离的 核酸，其含有SEQ ID NO：14的序列或其互补序列所示的至少15个连续核苷酸。
本发明另一实施例涉及一种编码SEQ ID NO：7的多肽的纯化的或分离的核酸。 较优选的是一种编码SEQ ID NO：7的多肽的至少10个连续氨基酸的纯化的或分离 的核酸。较优选的是一种纯化的或分离的核酸，所述核酸编码SEQ ID NO：7的多 肽的至少15个连续氨基酸。
本发明另一实施例涉及一种编码SEQ ID NO：8的多肽的纯化的或分离的核酸。 较优选的是一种编码SEQ ID NO：8的多肽的至少10个连续氨基酸的纯化的或分离 的核酸。较优选的是一种纯化的或分离的核酸，所述核酸编码SEQ ID NO：8的多 肽的至少15个连续氨基酸。
本发明另一实施例涉及一种编码SEQ ID NO：9的多肽的纯化的或分离的核酸。 较优选的是一种编码SEQ ID NO：9的多肽的至少10个连续氨基酸的纯化的或分离 的核酸。较优选的是一种纯化的或分离的核酸，所述核酸编码SEQ ID NO：9的多 肽的至少15个连续氨基酸。
本发明另一实施例涉及一种编码SEQ ID NO：10的多肽的纯化的或分离的核 酸。较优选的是一种编码SEQ ID NO：10的多肽的至少10个连续氨基酸的纯化的 或分离的核酸。较优选的是一种纯化的或分离的核酸，所述核酸编码SEQ ID NO： 10的多肽的至少15个连续氨基酸。
本发明另一实施例涉及一种编码SEQ ID NO：15的多肽的纯化的或分离的核 酸。较优选的是一种编码SEQ ID NO：15的多肽的至少10个连续氨基酸的纯化的 或分离的核酸。较优选的是一种纯化的或分离的核酸，所述核酸编码SEQ ID NO： 15的多肽的至少15个连续氨基酸。
本发明另一实施例涉及一种编码SEQ ID NO：17的多肽的纯化的或分离的核 酸。较优选的是一种编码SEQ ID NO：17的多肽的至少10个连续氨基酸的纯化的 或分离的核酸。较优选的是一种纯化的或分离的核酸，所述核酸编码SEQ ID NO： 17的多肽的至少15个连续氨基酸。
本发明另一实施例涉及一种编码SEQ ID NO：19的多肽的纯化的或分离的核 酸。较优选的是一种编码SEQ ID NO：19的多肽的至少10个连续氨基酸的纯化的 或分离的核酸。较优选的是一种纯化的或分离的核酸，所述核酸编码SEQ ID NO： 19的多肽的至少15个连续氨基酸。
本发明另一实施例涉及一种编码SEQ ID NO：22的多肽的纯化的或分离的核 酸。较优选的是一种编码SEQ ID NO：22的多肽的至少10个连续氨基酸的纯化的 或分离的核酸。较优选的是一种纯化的或分离的核酸，所述核酸编码SEQ ID NO： 22的多肽的至少15个连续氨基酸。
本发明另一实施例涉及一种编码SEQ ID NO：23的多肽的纯化的或分离的核 酸。较优选的是一种编码SEQ ID NO：23的多肽的至少10个连续氨基酸的纯化的 或分离的核酸。较优选的是一种纯化的或分离的核酸，所述核酸编码SEQ ID NO： 23的多肽的至少15个连续氨基酸。
本发明另一优选实施例涉及双等位标记。
附图说明
图1所示为表达酵母菌的重组g34782多肽和D-氨基酸氧化酶多肽的活性。
图2所示为表达细菌的重组g34782多肽和D-氨基酸氧化酶多肽的活性。
图3所示为用D-丝氨酸作为底物通过g34782在体外活化纯化的D-氨基酸氧 化酶。
图4所示为g34782的剂量与D-氨基酸氧化酶活性的依赖性关系。
图5所示为g34782多肽和D-氨基酸氧化酶之间相互作用的动力学。
图6所示为法裔加拿大人精神分裂症病例与对照组之间的D-氨基酸氧化酶双 等位标记的关联性分析结果。
序列表所提供的序列的概述
SEQ ID NO：1D-氨基酸氧化酶的基因组序列；
SEQ ID NO：2D-氨基酸氧化酶的cDNA；
SEQ ID NO：3具有外显子U 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11Long的新cDNA；
SEQ ID NO：4具有外显子B C Ulong V 2 3 4 5 6 7 9 10 11Long的新cDNA；
SEQ ID NO：5具有外显子U 2 4 5 6 7 8 9 10 11Long的新cDNA；
SEQ ID NO：6具有外显子B 2 3 7 8 9 10 11的新cDNA；
SEQ ID NO：7来自SEQ ID NO：2和3的cDNA的D-氨基酸氧化酶多肽；
SEQ ID NO：8来自SEQ ID NO：4的cDNA的D-氨基酸氧化酶多肽；
SEQ ID NO：9来自SEQ ID NO：5的cDNA的D-氨基酸氧化酶多肽5；
SEQ ID NO：10来自SEQ ID NO：6的cDNA的D-氨基酸氧化酶多肽；
SEQ ID NO：11-12含有g34872双等位标记99/16105-152和99/5919-215的 多核苷酸；
SEQ ID NO：13包括多态性的g34872多核苷酸；
SEQ ID NO：14g34872多肽，其中位置10上的氨基酸是酪氨酸或丝氨酸，位
置30上的氨基酸是赖氨酸或精氨酸，位置50上的氨基酸是谷氨
酸或早熟终止子，位置60上的氨基酸是精氨酸或甘氨酸，以及
位置115上的氨基酸是天冬氨酸或丙氨酸；
SEQ ID NO：15编码双杂交实验所用的SEQ ID NO：16的多肽的g34872多核
苷酸；
SEQ ID NO：17编码SEQ ID NO：18的多肽的D-氨基酸氧化酶多核苷酸；
SEQ ID NO：19和20分别是编码SEQ ID NO：21和22的多肽的D-天冬氨酸
氧化酶多核苷酸；以及
SEQ ID NO：23-26分别是含有D-氨基酸氧化酶双等位标记24-1443/126、
24-1457/52、27-93/181和24-1461/256的多核苷酸，在位
置24显示多态性碱基。
美国专利申请号09/539，333与国际专利申请号PCT/IB00/00435都对g34872 基因组序列和双等位标记进行了叙述，以上两件申请均纳入其整体内容作为参考。
根据有关序列表的规定，在本序列表中采用以下代号表示双等位标记在序列 内的位置，并确定多态性碱基含有的每个等位基因。序列中的代号“r”表示多态 性碱基的其中一个等位基因是鸟嘌呤，而另一个等位基因是腺嘌呤。序列中的代号 “y”表示多态性碱基的其中一个等位基因是胸腺嘧啶，而另一个等位基因是胞嘧 啶。序列中的代号“m”表示多态性碱基的其中一个等位基因是腺嘌呤，而另一个 等位基因是胞嘧啶。序列中的代号“k”表示多态性碱基的其中一个等位基因是鸟 嘌呤，而另一个等位基因是胸腺嘧啶。序列中的代号“s”表示多态性碱基的其中 一个等位基因是鸟嘌呤，而另一个等位基因是胞嘧啶。序列中的代号“w”表示多 态性碱基的其中一个等位基因是腺嘌呤，而另一个等位基因是胸腺嘧啶。
可按照本发明的方法治疗的中枢神经系统障碍包括早衰性痴呆(早期发作的 阿耳茨海默氏病)、老年性痴呆(阿耳茨海默氏型痴呆)、帕金森氏症包括帕金森氏 病、杭廷顿舞蹈病、迟发性运动障碍、运动过度、躁狂症、注意力缺陷活动过度障 碍(ADHD)、注意力缺陷障碍(ADD)、焦虑症、诵读困难、精神病、精神分裂症、双 相性精神障碍、重度抑郁症、躁狂症、轻度躁狂症、抑郁症、孤独症、滥用药物、 过度攻击(excessive aggression)、抽搐症和图雷特氏综合征。本发明优选的中枢 神经系统障碍包括精神分裂症、抑郁症和双相性精神障碍。精神分裂症和精神分裂 症样精神障碍的较优选例子包括：精神分裂症(紧张型)、精神分裂症(无组织型)、 精神分裂症(妄想型)、精神分裂症(混合型)、精神分裂症(残余型)、精神分裂症样 精神障碍、短期反应性精神病、情感分裂性精神障碍、诱发性精神病、精神分裂型 人格障碍、精神分裂样人格障碍、妄想型人格障碍和妄想(类偏执狂)性精神障碍。
本发明涉及给容易患上中枢神经系统障碍的受试者提供这样一种精神障碍的 治疗方法、给患有中枢神经系统障碍的受试者提供治疗方法。具体地说，该方法包 括给患者施加一定量的D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶拮抗剂或抑制剂化合 物，一定程度上有效制止或改善中枢神经系统障碍的进展、制止或改善中枢神经系 统障碍的症状以及制止或改善中枢神经系统障碍的復發。
本发明涉及给容易患上中枢神经系统障碍的受试者提供这样一种精神障碍的 预防方法、给患有中枢神经系统障碍的受试者提供治疗方法。具体地说，该方法包 括给患者施加一定量的D-氨基酸氧化酶和D-天冬氨酸氧化酶拮抗剂化合物，一定 程度上有效预防中枢神经系统障碍的进展(即提供保护作用)、预防中枢神经系统障 碍的症状和预防中枢神经系统障碍的复发。
本发明还涉及D-氨基酸氧化酶的基因组序列、D-氨基酸氧化酶基因中发现的 新型外显子、D-氨基酸氧化酶基因中发现的新型多态双等位标记(SNPs)、容易患上 中枢神经系统障碍的人的检测方法，拮抗、抑制、或降低D-氨基酸氧化酶活性的 新方法，增加、激动或促进D-氨基酸氧化酶活性的新方法以及影响D-氨基酸氧化 酶活性的新型组合物。本发明还涉及核酸分子，其含有编码g34872(sbg1)蛋白质 的新型人基因的基因组序列、由该核酸分子编码的蛋白质及其抗体，共同待批的美 国专利申请号09/539,333与国际专利申请号PCT/IB00/00435对此作了叙述，它 们的公开资料纳入其整体内容作为参考。本发明也涉及编码g34872、D-氨基酸氧 化酶和D-天冬氨酸氧化酶蛋白质、及其变异型的cDNA序列。与g34872、D-氨基酸 氧化酶和D-天冬氨酸氧化酶基因组或cDNA序列特异性杂交的寡核苷酸探针或引 物，及使用所述引物和探针的DNA扩增和检测方法也是本发明的一部分内容。
本发明的另一个目的包括含有上述任何一段核酸序列的重组载体，特别是含 有g34872、D-氨基酸氧化酶和D-天冬氨酸氧化酶调控序列或编码g34872、D-氨基 酸氧化酶和D-天冬氨酸氧化酶蛋白质的序列的重组载体，以及含有所述核酸序列 或重组载体的细胞宿主和转基因非人的动物。
本发明还涉及g34872、D-氨基酸氧化酶和D-天冬氨酸氧化酶基因的双等位标 记及其应用。本发明包括用于本发明双等位标记基因分型(genotyping)的探针和引 物。
本发明的一实施例包括附着于固相支持物上的任何一种本发明的多核苷酸。 多核苷酸可以含有本说明书所揭示的序列；所述多核苷酸可任选地包括任何本说明 书所叙述的任何一种多核苷酸，可任选地由或基本上由本说明书所叙述的任何一种 多核苷酸组成；可任选地在杂交分析、排序分析、微排序分析或基于酶的错配检测 分析中进行所述的确定；所述多核苷酸可任选地附着于固相支持物、阵列或选通式 阵列(addressable array)；所述多核苷酸可任选地带上标记。
最后，本发明的目的在于基于g34872、D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶 核苷酸和多核苷酸在疾病中的作用，提供药物筛选分析和治疗精神分裂症、双相性 精神障碍或相关中枢神经系统障碍的药物的筛选方法。本发明的一个目的在于基于 g34872、D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶在疾病中的作用，提出精神分裂症 动物模型，包括小鼠、灵长类动物、非人灵长类动物双相性精神障碍或相关中枢神 经系统障碍。本发明也涉及抑制g34872、D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶表 达的物质或分子的筛选方法，以及应用这些筛选方法来筛选与g34872、D-氨基酸 氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶多肽相互作用，或者调节g34872、D-氨基酸氧化酶或 D-天冬氨酸氧化酶多肽的活性的物质或分子。
如上所述，本发明的某些方面基于精神分裂症和双相性精神障碍与g34872基 因和D-氨基酸氧化酶基因的双等位标记等位基因之间的基因关联性的鉴定。本发 明提供一些合适的方法来进一步建立g34872和D-氨基酸氧化酶基因座的双等位标 记等位基因与由于施加作用于包括精神分裂症、抑郁症或双相性精神障碍在内的中 枢神经系统障碍或症状的药物，或者精神分裂症或双相性精神障碍症状的药物，包 括氯丙嗪、氯扎平、利培酮、奥扎平、舍吲哚(sertindole)、喹的平(quetiapine) 和齐拉西酮(ziprasidone)而产生的副作用或有益效果之间的其它基因关联性。
本发明提供一些合适的方法来进一步建立特定性状(trait)的D-氨基酸氧化 酶与g34872的双等位标记等位基因之间的其它基因关联性。本发明提供一些人对 精神分裂症或双相性精神障碍遗传易感性的分子检测方法和产物。它们可用于疾病 的诊断、分期、预后和监控，所述方法还可包括在治疗方法之内。本发明也提供有 效设计和评估合适的治疗方案，包括药物的最佳使用方法、潜在的候选新药物的筛 选的个人化策略。
本发明的一优选实施例包括对有需要的中枢神经系统障碍病人实施的治疗方 法，该方法包括给所述病人施加一有效量的含有D-氨基酸氧化酶拮抗剂或抑制剂 或者D-天冬氨酸氧化酶抑制剂或拮抗剂的组合物或化合物。
较优选是精神病的治疗方法，该方法包括给精神病病人施加一有效治疗量的 含有D-氨基酸氧化酶拮抗剂或抑制剂或者D-天冬氨酸氧化酶抑制剂或拮抗剂的组 合物或化合物。
较优选是精神分裂症的治疗方法，该方法包括给精神分裂症病人施加一有效 治疗量的含有D-氨基酸氧化酶拮抗剂或抑制剂或者D-天冬氨酸氧化酶抑制剂或拮 抗剂的组合物或化合物。
较优选是双相性精神障碍的治疗方法，该方法包括给双相性精神障碍病人施 加一有效治疗量的含有D-氨基酸氧化酶拮抗剂或抑制剂或者D-天冬氨酸氧化酶抑 制剂或拮抗剂的组合物或化合物。
本发明一优选实施例包括对有需要的中枢神经系统障碍病人实施的治疗方 法，该方法包括给所述病人施加一有效量的含有D-氨基酸氧化酶拮抗剂或抑制剂 或者D-天冬氨酸氧化酶拮抗剂或抑制剂的组合物或化合物。
较优选是精神病的治疗方法，该方法包括给精神病病人施加一有效治疗量的 含有D-氨基酸氧化酶拮抗剂或抑制剂或者D-天冬氨酸氧化酶拮抗剂或抑制剂的组 合物或化合物。
较优选是精神分裂症的治疗方法，该方法包括给精神分裂症病人施加一有效 治疗量的含有D-氨基酸氧化酶拮抗剂或抑制剂或者D-天冬氨酸氧化酶拮抗剂或抑 制剂的组合物或化合物。
较优选是双相性精神障碍的治疗方法，该方法包括给双相性精神障碍病人施 加一有效治疗量的含有D-氨基酸氧化酶拮抗剂或抑制剂或者D-天冬氨酸氧化酶抑 制剂或拮抗剂的组合物或化合物。
本发明一优选实施例包括对有需要的中枢神经系统障碍病人实施的治疗方 法，该方法包括给所述病人施加一有效量的含有g34872拮抗剂或抑制剂的组合物 或化合物。
较优选是精神病的治疗方法，该方法包括给精神病病人施加一有效治疗量的 含有g34872拮抗剂或抑制剂的组合物或化合物。
较优选是精神分裂症的治疗方法，该方法包括给精神分裂症病人施加一有效 治疗量的含有g34872拮抗剂或抑制剂的组合物或化合物。
较优选是双相性精神障碍的治疗方法，该方法包括给双相性精神障碍病人施 加一有效治疗量的含有g34872拮抗剂或抑制剂的组合物或化合物。
本发明一优选实施例包括对有需要的中枢神经系统障碍病人实施的治疗方 法，该方法包括给所述病人施加一有效量的含有D-氨基酸氧化酶拮抗剂或抑制剂 或者D-天冬氨酸氧化酶拮抗剂或抑制剂的组合物或化合物，并结合g34872拮抗剂 或抑制剂组合物或化合物。
较优选是精神病的治疗方法，该方法包括给精神病病人施加一治疗有效量的 含有D-氨基酸氧化酶拮抗剂或抑制剂或者D-天冬氨酸氧化酶拮抗剂或抑制剂的组 合物或化合物，并结合g34872拮抗剂或抑制剂组合物或化合物。
较优选是精神分裂症的治疗方法，该方法包括给精神分裂症病人施加一有效 治疗量的含有D-氨基酸氧化酶拮抗剂或抑制剂或者D-天冬氨酸氧化酶拮抗剂或抑 制剂的组合物或化合物，并结合g34872拮抗剂或抑制剂组合物或化合物。
较优选是双相性精神障碍的治疗方法，该方法包括给双相性精神障碍病人施 加一有效治疗量的含有D-氨基酸氧化酶拮抗剂或抑制剂或者D-天冬氨酸氧化酶拮 抗剂或抑制剂的组合物或化合物，并结合g34872拮抗剂或抑制剂组合物或化合物。
本发明一优选实施例包括对有需要的中枢神经系统障碍病人实施的治疗方 法，该方法包括给所述病人施加一有效量的结合有D-氨基酸氧化酶拮抗剂或抑制 剂、D-天冬氨酸氧化酶拮抗剂或抑制剂和g34872拮抗剂或抑制剂组合物或化合物 的组合物或化合物。
较优选是精神病的治疗方法，该方法包括给精神病病人施加一治疗有效量的 结合有D-氨基酸氧化酶拮抗剂或抑制剂、D-天冬氨酸氧化酶拮抗剂或抑制剂和 g34872拮抗剂或抑制剂组合物或化合物的组合物或化合物。
较优选是精神分裂症的治疗方法，该方法包括给精神分裂症病人施加一有效 治疗量的结合有D-氨基酸氧化酶拮抗剂或抑制剂、D-天冬氨酸氧化酶拮抗剂或抑 制剂和g34872拮抗剂或抑制剂组合物或化合物的组合物或化合物。
较优选是双相性精神障碍的治疗方法，该方法包括给双相性精神障碍病人施 加一有效治疗量的结合有D-氨基酸氧化酶拮抗剂或抑制剂、D-天冬氨酸氧化酶拮 抗剂或抑制剂和g34872拮抗剂或抑制剂组合物或化合物的组合物或化合物。
本发明一优选实施例包括对有需要的中枢神经系统障碍病人实施的治疗方 法，该方法包括给所述病人施加一有效量的含有至少以下一种物质的组合物或化合 物：D-氨基酸氧化酶拮抗剂或抑制剂、D-天冬氨酸氧化酶拮抗剂或抑制剂，或者 g34872拮抗剂或抑制剂组合物或化合物。
较优选是精神病的治疗方法，该方法包括给精神病病人施加一治疗有效量的 含有至少以下一种物质的组合物或化合物：D-氨基酸氧化酶拮抗剂或抑制剂、D- 天冬氨酸氧化酶拮抗剂或抑制剂，或者g34872拮抗剂或抑制剂组合物或化合物。
较优选是精神分裂症的治疗方法，该方法包括给精神分裂症病人施加一有效 治疗量的含有至少以下一种物质的组合物或化合物：D-氨基酸氧化酶拮抗剂或抑制 剂、D-天冬氨酸氧化酶拮抗剂或抑制剂，或者g34872拮抗剂或抑制剂组合物或化 合物。
较优选是双相性精神障碍的治疗方法，该方法包括给双相性精神障碍病人施 加一有效治疗量的含有至少以下一种物质的组合物或化合物：D-氨基酸氧化酶拮抗 剂或抑制剂、D-天冬氨酸氧化酶拮抗剂或抑制剂，或者g34872拮抗剂或抑制剂组 合物或化合物。
应该指出的是，本发明优先排除对有需要的中枢神经系统障碍、精神病、精 神分裂症或双相性精神障碍病人实施的治疗方法中所用的公知或固有起到抑制或 拮抗D-氨基酸氧化酶、D-天冬氨酸氧化酶或g34872的本领域已知的组合物或化合 物。
本发明一优选实施例涉及D-氨基酸氧化酶活性的抑制方法。此外，本发明涉 及通过抑制D-氨基酸氧化酶活性来治疗精神分裂症的方法。较优选是通过用含有 酮亚胺的组合物抑制D-氨基酸氧化酶活性来治疗精神分裂症的方法。
本发明的另一优选实施例涉及D-天冬氨酸氧化酶活性的抑制方法。此外，本 发明涉及通过抑制D-天冬氨酸氧化酶活性来治疗精神分裂症的方法。较优选是通 过用含有酮亚胺的组合物来抑制D-天冬氨酸氧化酶活性来治疗精神分裂症的方 法。
本发明的另一优选实施例涉及抑制D-氨基酸氧化酶与g34872之间相互作用的 方法。
本发明的另一优选实施例涉及抑制g34872与D-天冬氨酸氧化酶之间相互作用 的方法。
本发明的另一优选实施例涉及SEQ ID NO：7、8、9、10或18的D-氨基酸氧 化酶多肽的任何多肽片段，其拮抗所述D-氨基酸氧化酶多肽与SEQ ID NO：14的 g34872多肽或其片段之间相互作用。较优选D-氨基酸氧化酶多肽片段含有SEQ ID NO：7的氨基酸23-347。较优选D-氨基酸氧化酶多肽片段含有SEQ ID NO：7的氨 基酸227-347。较优选D-氨基酸氧化酶多肽片段含有SEQ ID NO：7的氨基酸31- 347。较优选D-氨基酸氧化酶多肽片段含有SEQ ID NO：7的氨基酸51-347。较优 选D-氨基酸氧化酶多肽片段含有SEQ ID NO：7的氨基酸66-347。较优选D-氨基 酸氧化酶多肽片段含有SEQ ID NO：7的氨基酸101-347。较优选D-氨基酸氧化酶 多肽片段含有SEQ ID NO：7的氨基酸126-347。较优选D-氨基酸氧化酶多肽片段 含有SEQ ID NO：7的氨基酸146-347。较优选D-氨基酸氧化酶多肽片段含有SEQ ID NO：7的氨基酸175-347。较优选D-氨基酸氧化酶多肽片段含有SEQ ID NO：7的 氨基酸180-347。较优选D-氨基酸氧化酶多肽片段含有SEQ ID NO：7的氨基酸 1-189。较优选D-氨基酸氧化酶多肽片段含有SEQ ID NO：7的氨基酸1-205。较优 选D-氨基酸氧化酶多肽片段含有SEQ ID NO：7的氨基酸31-189。较优选D-氨基 酸氧化酶多肽片段含有SEQ ID NO：7的氨基酸31-205。较优选D-氨基酸氧化酶多 肽片段含有SEQ ID NO：7的氨基酸84-205。
本发明另一优选实施例涉及与D-氨基酸氧化酶多肽或其片段结合的组合物。 较优选与D-氨基酸氧化酶多肽片段结合的组合物含有SEQ ID NO：7的氨基酸 227-347。较优选与D-氨基酸氧化酶多肽片段结合的组合物含有SEQ ID NO：7的 氨基酸227-347。较优选与D-氨基酸氧化酶多肽片段结合的组合物含有SEQ ID NO： 7的氨基酸31-347。较优选与D-氨基酸氧化酶多肽片段结合的组合物含有SEQ ID NO：7的氨基酸51-347。较优选与D-氨基酸氧化酶多肽片段结合的组合物含有SEQ ID NO：7的氨基酸66-347。较优选与D-氨基酸氧化酶多肽片段结合的组合物含有 SEQ ID NO：7的氨基酸101-347。较优选与D-氨基酸氧化酶多肽片段结合的组合 物含有SEQ ID NO：7的氨基酸126-347。较优选与D-氨基酸氧化酶多肽片段结合 的组合物含有SEQ ID NO：7的氨基酸146-347。较优选与D-氨基酸氧化酶多肽片 段结合的组合物含有SEQ ID NO：7的氨基酸175-347。较优选与D-氨基酸氧化酶 多肽片段结合的组合物含有SEQ ID NO：7的氨基酸180-347。较优选与D-氨基酸 氧化酶多肽片段结合的组合物含有SEQ ID NO：7的氨基酸1-189。较优选与D-氨 基酸氧化酶多肽片段结合的组合物含有SEQ ID NO：7的氨基酸1-205。较优选与 D-氨基酸氧化酶多肽片段结合的组合物含有SEQ ID NO：7的氨基酸31-189。较优 选与D-氨基酸氧化酶多肽片段结合的组合物含有SEQ ID NO：7的氨基酸31-205。 较优选与D-氨基酸氧化酶多肽片段结合的组合物含有SEQ ID NO：7的氨基酸84- 205。
另一优选实施例涉及精神分裂症的治疗方法，所述方法包括给精神分裂症病 人施加一有效治疗量的组合物，其含有与D-氨基酸氧化酶多肽或其片段结合的组 合物。较优选的精神分裂症的治疗方法包括给精神分裂症病人施加一有效治疗量的 组合物，其含有与包含SEQ ID NO：7的氨基酸23-347的D-氨基酸氧化酶多肽结 合的组合物。较优选的精神分裂症的治疗方法包括给精神分裂症病人施加一有效治 疗量的组合物，其含有与包含SEQ ID NO：7的氨基酸227-347的D-氨基酸氧化酶 多肽结合的组合物。较优选的精神分裂症的治疗方法包括给精神分裂症病人施加一 有效治疗量的组合物，其含有与包含SEQ ID NO：7的氨基酸31-347的D-氨基酸 氧化酶多肽结合的组合物。较优选的精神分裂症的治疗方法包括给精神分裂症病人 施加一有效治疗量的组合物，其含有与包含SEQ ID NO：7的氨基酸51-347的D- 氨基酸氧化酶多肽结合的组合物。较优选的精神分裂症的治疗方法包括给精神分裂 症病人施加一有效治疗量的组合物，其含有与包含SEQ ID NO：7的氨基酸66-347 的D-氨基酸氧化酶多肽结合的组合物。较优选的精神分裂症的治疗方法包括给精 神分裂症病人施加一有效治疗量的组合物，其含有与包含SEQ ID NO：7的氨基酸 101-347的D-氨基酸氧化酶多肽结合的组合物。较优选的精神分裂症的治疗方法包 括给精神分裂症病人施加一有效治疗量的组合物，其含有与包含SEQID NO：7的 氨基酸126-347的D-氨基酸氧化酶多肽结合的组合物。较优选的精神分裂症的治 疗方法包括给精神分裂症病人施加一有效治疗量的组合物，其含有与包含SEQ ID NO：7的氨基酸146-347的D-氨基酸氧化酶多肽结合的组合物。较优选的精神分裂 症的治疗方法包括给精神分裂症病人施加一有效治疗量的组合物，其含有与包含 SEQ ID NO：7的氨基酸175-347的D-氨基酸氧化酶多肽结合的组合物。较优选的 精神分裂症的治疗方法包括给精神分裂症病人施加一有效治疗量的组合物，其含有 与包含SEQ ID NO：7的氨基酸180-347的D-氨基酸氧化酶多肽结合的组合物。较 优选的精神分裂症的治疗方法包括给精神分裂症病人施加一有效治疗量的组合物， 其含有与包含SEQ ID NO：7的氨基酸1-189的D-氨基酸氧化酶多肽结合的组合物。 较优选的精神分裂症的治疗方法包括给精神分裂症病人施加一有效治疗量的组合 物，其含有与包含SEQ ID NO：7的氨基酸1-205的D-氨基酸氧化酶多肽结合的组 合物。较优选的精神分裂症的治疗方法包括给精神分裂症病人施加一有效治疗量的 组合物，其含有与包含SEQ ID NO：7的氨基酸31-189的D-氨基酸氧化酶多肽结 合的组合物。较优选的精神分裂症的治疗方法包括给精神分裂症病人施加一有效治 疗量的组合物，其含有与包含SEQ ID NO：7的氨基酸31-205的D-氨基酸氧化酶 多肽结合的组合物。较优选的精神分裂症的治疗方法包括给精神分裂症病人施加一 有效治疗量的组合物，其含有与包含SEQ ID NO：7的氨基酸84-205的D-氨基酸 氧化酶多肽结合的组合物。
另一优选实施例涉及双极性精神障碍的治疗方法，所述方法包括给双极性精 神障碍病人施加一有效治疗量的组合物，其含有与D-氨基酸氧化酶多肽或其片段 结合的组合物。较优选的双极性精神障碍的治疗方法包括给双极性精神障碍病人施 加一有效治疗量的组合物，其含有与包含SEQ ID NO：7的氨基酸23-347的D-氨 基酸氧化酶多肽结合的组合物。较优选的双极性精神障碍的治疗方法包括给双极性 精神障碍病人施加一有效治疗量的组合物，其含有与包含SEQ ID NO：7的氨基酸 227-347的D-氨基酸氧化酶多肽结合的组合物。较优选的双极性精神障碍的治疗方 法包括给双极性精神障碍病人施加一有效治疗量的组合物，其含有与包含SEQ ID NO：7的氨基酸31-347的D-氨基酸氧化酶多肽结合的组合物。较优选的双极性精 神障碍的治疗方法包括给双极性精神障碍病人施加一有效治疗量的组合物，其含有 与包含SEQ ID NO：7的氨基酸51-347的D-氨基酸氧化酶多肽结合的组合物。较 优选的双极性精神障碍的治疗方法包括给双极性精神障碍病人施加一有效治疗量 的组合物，其含有与包含SEQ ID NO：7的氨基酸66-347的D-氨基酸氧化酶多肽 结合的组合物。较优选的双极性精神障碍的治疗方法包括给双极性精神障碍病人施 加一有效治疗量的组合物，其含有与包含SEQ ID NO：7的氨基酸101-347的D-氨 基酸氧化酶多肽结合的组合物。较优选的双极性精神障碍的治疗方法包括给双极性 精神障碍病人施加一有效治疗量的组合物，其含有与包含SEQ ID NO：7的氨基酸 126-347的D-氨基酸氧化酶多肽结合的组合物。较优选的双极性精神障碍的治疗方 法包括给双极性精神障碍病人施加一有效治疗量的组合物，其含有与包含SEQ ID NO：7的氨基酸146-347的D-氨基酸氧化酶多肽结合的组合物。较优选的双极性精 神障碍的治疗方法包括给双极性精神障碍病人施加一有效治疗量的组合物，其含有 与包含SEQ ID NO：7的氨基酸175-347的D-氨基酸氧化酶多肽结合的组合物。较 优选的双极性精神障碍的治疗方法包括给双极性精神障碍病人施加一有效治疗量 的组合物，其含有与包含SEQ ID NO：7的氨基酸180-347的D-氨基酸氧化酶多肽 结合的组合物。较优选的双极性精神障碍的治疗方法包括给双极性精神障碍病人施 加一有效治疗量的组合物，其含有与包含SEQ ID NO：7的氨基酸1-189的D-氨基 酸氧化酶多肽结合的组合物。较优选的双极性精神障碍的治疗方法包括给双极性精 神障碍病人施加一有效治疗量的组合物，其含有与包含SEQ ID NO：7的氨基酸1-205 的D-氨基酸氧化酶多肽结合的组合物。较优选的双极性精神障碍的治疗方法包括 给双极性精神障碍病人施加一有效治疗量的组合物，其含有与包含SEQ ID NO：7 的氨基酸31-189的D-氨基酸氧化酶多肽结合的组合物。较优选的双极性精神障碍 的治疗方法包括给双极性精神障碍病人施加一有效治疗量的组合物，其含有与包含 SEQ ID NO：7的氨基酸31-205的D-氨基酸氧化酶多肽结合的组合物。较优选的双 极性精神障碍的治疗方法包括给双极性精神障碍病人施加一有效治疗量的组合物， 其含有与包含SEQ ID NO：7的氨基酸84-205的D-氨基酸氧化酶多肽结合的组合 物。
本发明另一优选实施例涉及与SEQ ID NO：14的g34872多肽或其片段结合的 组合物。较优选与g34872多肽结合的组合物含有SEQ ID NO：14的氨基酸65-153 或其片段。较优选的是与SEQ ID NO：16的多肽或其片段结合的组合物。
另一优选实施例涉及精神分裂症的治疗方法，所述方法包括给精神分裂症病 人施加一有效治疗量的组合物，其含有与SEQ ID NO：14的g34872多肽或其片段 结合的组合物。较优选的精神分裂症的治疗方法包括给精神分裂症病人施加一有效 治疗量的组合物，其含有与包含SEQ ID NO：14的氨基酸65-153或其片段的g34872 多肽结合的组合物。较优选的精神分裂症的治疗方法包括给精神分裂症病人施加一 有效治疗量的组合物，其含有与SEQ ID NO：16的多肽或其片段结合的组合物。
另一优选实施例涉及双极性精神障碍的治疗方法，所述方法包括给双极性精 神障碍病人施加一有效治疗量的组合物，其含有与SEQ ID NO：14的g34872多肽 或其片段结合的组合物。较优选的双极性精神障碍的治疗方法包括给双极性精神障 碍病人施加一有效治疗量的组合物，其含有与包含SEQ ID NO：14的氨基酸65-153 或其片段的g34872多肽结合的组合物。较优选的双极性精神障碍的治疗方法包括 给双极性精神障碍病人施加一有效治疗量的组合物，其含有与SEQ ID NO：16的多 肽或其片段结合的组合物。
本发明另一优选实施例涉及SEQ ID NO：14的g34872多肽的任何多肽片段， 其拮抗所述g34872多肽或其片段与D-氨基酸氧化酶多肽或其片段之间的相互作 用。较优选的是通过g34872多肽拮抗D-氨基酸氧化酶增加活性的任何g34872多 肽片段。较优选的是含有SEQ ID NO：16的氨基酸的g34872多肽片段。
本发明另一优选实施例涉及拮抗SEQ ID NO：14的g34872多肽或其片段与SEQ ID NO：7-10或18的D-氨基酸氧化酶多肽或其片段之间的相互作用的组合物。
本发明另一优选实施例涉及拮抗SEQ ID NO：14的g34872多肽或其片段与SEQ ID NO：21或22的D-天冬氨酸氧化酶多肽或其片段之间的相互作用的组合物。
本发明又一优选实施例涉及用g34872多肽或其片段增加D-氨基酸氧化酶活性 的方法。此外，本发明还涉及用g34872多肽或其片段增加D-天冬氨酸氧化酶活性 的方法。
本发明另一优选实施例涉及抑制D-氨基酸氧化酶糖基化的方法。
本发明另一优选实施例涉及增强D-氨基酸氧化酶多聚化的方法。
本发明另一优选实施例涉及抑制D-氨基酸氧化酶翻译的方法。
本发明另一优选实施例涉及D-氨基酸氧化酶变异型差别性鉴定的方法。
本发明一优选实施例涉及降低、抑制或拮抗D-氨基酸氧化酶活性的组合物或 化合物。较优选的组合物或化合物是D-氨基酸氧化酶活性的竞争性抑制剂或拮抗 剂。较优选的组合物或化合物是D-氨基酸氧化酶活性的非竞争性抑制剂或拮抗剂。 较优选的组合物或化合物是D-氨基酸氧化酶活性的无竞争性抑制剂或拮抗剂。较 优选的组合物或化合物是D-氨基酸氧化酶活性的变构抑制剂或拮抗剂。较优选的 组合物或化合物是D-氨基酸氧化酶活性的可逆性抑制剂或拮抗剂。较优选的组合 物或化合物是D-氨基酸氧化酶活性的不可逆抑制剂或拮抗剂。
本发明一优选实施例涉及降低、抑制或拮抗D-天冬氨酸氧化酶活性的组合物 或化合物。较优选的组合物或化合物是D-天冬氨酸氧化酶活性的竞争性抑制剂或 拮抗剂。较优选的组合物或化合物是D-天冬氨酸氧化酶活性的非竞争性抑制剂或 拮抗剂。较优选的组合物或化合物是D-天冬氨酸氧化酶活性的无竞争性抑制剂或 拮抗剂。较优选的组合物或化合物是D-天冬氨酸氧化酶活性的变构抑制剂或拮抗 剂。较优选的组合物或化合物是D-天冬氨酸氧化酶活性的可逆性抑制剂或拮抗剂。 较优选的组合物或化合物是D-天冬氨酸氧化酶活性的不可逆抑制剂或拮抗剂。较 优选的组合物或化合物是能够降低、抑制或拮抗D-氨基酸氧化酶和D-天冬氨酸氧 化酶活性。
较优选的是利用能降低、抑制或拮抗D-氨基酸氧化酶活性的组合物或化合物 来治疗中枢神经系统障碍的方法。较优选的是利用能降低、抑制或拮抗D-天冬氨 酸氧化酶活性的组合物或化合物来治疗中枢神经系统障碍的方法。较优选的是利用 能降低、抑制或拮抗D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶活性的组合物或化合物 来治疗中枢神经系统障碍的方法。较优选的是利用能降低、抑制或拮抗D-氨基酸 氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶活性的组合物或化合物来治疗中枢神经系统障碍的方 法。较优选的是利用能降低、抑制或拮抗D-氨基酸氧化酶活性的第一组合物或化 合物与能降低、抑制或拮抗D-天冬氨酸氧化酶活性的第二组合物或化合物结合来 治疗中枢神经系统障碍的方法。较优选的是利用能降低、抑制或拮抗D-氨基酸氧 化酶活性的组合物或化合物与另一种组合物结合来治疗中枢神经系统障碍的方法。 较优选的是利用能降低、抑制或拮抗D-氨基酸氧化酶活性的组合物或化合物与另 一种所述中枢神经系统障碍治疗所用的常规组合物结合来治疗中枢神经系统障碍 的方法。较优选的是利用能降低、抑制或拮抗D-氨基酸氧化酶活性的组合物或化 合物与另一种治疗所述中枢神经系统障碍不相关的组合物结合来治疗中枢神经系 统障碍的方法。较优选的是利用能降低、抑制或拮抗D-天冬氨酸氧化酶活性的组 合物或化合物与另一种组合物结合治疗中枢神经系统障碍的方法。较优选的是利用 能降低、抑制或拮抗D-天冬氨酸氧化酶活性的组合物或化合物与另一种治疗所述 中枢神经系统障碍所用的常规组合物结合治疗中枢神经系统障碍的方法。较优选的 是利用能降低、抑制或拮抗D-天冬氨酸氧化酶活性的组合物或化合物与另一种治 疗所述中枢神经系统障碍不相关的组合物结合治疗中枢神经系统障碍的方法。
本发明能降低、抑制或拮抗D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶活性的优选 组合物或化合物选自但不限于下表：
i.IRI，2-氧代-3-戊炔酸盐；
ii.CMI，氨基胍(脒基肼；氨甲基亚氨基酰肼；匹马吉定(Pimagedine)；GER 11；肼基羧亚氨基酰胺)或盐酸盐(脒基肼盐酸盐)，碳酸氢盐，硝酸盐， 硫酸盐(2∶1)，亚硫酸盐(1∶1)，及其半硫酸盐；
iii.FI，苯甲酸；
iv.FI，苯甲酸钠；
v.FI，2-氨基苯甲酸盐；
vi.FI，3-氨基苯甲酸盐；
vii.FI，4-氨基苯甲酸盐(对氨基苯甲酸盐，PABA，维生素Bx，维生素H1)；
viii.CMI，甲基乙二醛双(脒腙)(也称：甲基GAG；米托胍腙；1，1’-((甲基
联二亚甲基)双次氮基)二胍；肼基羧亚氨基酰胺，2，2’-(1-甲基-1，2-
联二亚甲基)双-；丙酮醛双(脒腙)；Megag；米托胍腙[INN-Spanish]；
胍，1，1’-((甲基联二亚甲基)双次氮基)二-；1，1’-((甲基联二亚甲基)
双次氮基)二胍)；
ix.CMI，甲基乙二醛双(脒基腙)，二盐酸盐；
x.CMI，苯基乙二醛双(脒基腙)(PhGBG)；
xi.CMI，乙二醛双(脒基腙)(GBG；胍，1，1’-(联二亚甲基双次氮基)二-(8CI)；
肼基羧亚氨基酰胺，2，2’-(1，2-联二亚甲基)二-(9CI))；
xii.CMI，吲哚-丙酸(IPA，3-(3-吲哚基)丙酸)；
xiii.CMI，3-吲哚-乙酸(异植物生长素，IAA)；
xiv.CMI，吲哚-3-乙酸钠盐；
xv.CMI，吲哚-3-丙酮；
xvi.CMI，吲哚-3-乙酰胺；
xvii.CMI，吲哚-3-乙酰基-L-天冬氨酸；
xvii.CMI，吲哚-3-乙酰基-L-丙氨酸；
xix.CMI，吲哚-3-乙酰基甘氨酸；
xx.CMI，吲哚-3-乙醛亚硫酸钠加成化合物；
xxi.CMI，吲哚-3-羧酸；
xxii.CMI，吲哚-3-丙酮酸(3-(3-吲哚基)-2-氧代丙酸)；
xxiii.FI，水杨酸(2-羟基苯甲酸)；
xxiv.FI，水杨酸钠盐；
xxv.FI，水杨酸钾盐；
xxvi.IRI，丹磺酰氯(5-(二甲基氨基)萘-1-磺酰氯)；
xxvii.IRI，丹磺酰氟(5-(二甲基氨基)萘-1-磺酰氟)；
xxviii.CMI，丹磺酰甘氨酸；
xxix.CMI，丙氨酸四唑；
xxx.FI，苯甲酸四唑；
xxxi.CMI，四唑；
xxxii.CMI，核黄素5’-焦磷酸盐(RPP，5-磷酸-α-D-核糖二磷酸盐，P-Rib-PP，
P-RPP)；
xxxiii.IRI，DL-炔丙基甘氨酸(DL-PG，2-氨基-4-戊炔酸)；
xxxiv.IRI，L-C-炔丙基甘氨酸；
xxxv.IRI，N-乙酰基-DL-炔丙基甘氨酸；
xxxvi.FII，(±)-3-羟基丁酸钠；
xxxvii.FI，葫芦巴碱盐酸盐(1-甲基吡啶鎓-3-羧酸盐)；
xxxviii.FI，N-烟酸甲酯；
xxxix.FI，6-甲基烟酸甲酯；
xl.FI，2-甲基烟酸乙酯；
xli.CMI，曲酸(2-羧基甲基-5-羧基-γ-吡喃酮，5-羧基-2-羧基甲基-4-吡喃
酮)；
xlii.CMI，曲酸衍生物，例如：6-(吡咯烷基甲基)-曲酸盐酸盐，6-(吗啉代
甲基)-曲酸，6-(二乙基氨基甲基)-曲酸盐酸盐；
xliii.IRI，O-(2，4-二硝基苯基)羟胺；
xliv.CMI，2，4-二硝基苯基甘氨酸；
xlv.CMI，羟胺盐酸盐；
xlvi.IRI，对硝基苯磺酸甲酯(4-硝基苯磺酸甲酯)；
xlvii.FIV，氨基乙基半胱氨酸酮亚胺(AECK，硫赖氨酸酮亚胺，2H-1，4-噻嗪
-5，6-二氢-3-羧酸，S-氨基乙基-L-半胱氨酸酮亚胺，2H-1，4-噻嗪-3-
羧酸，5，6-二氢-)；
xlviii.FIV，1，4-噻嗪衍生物；
xlix.CMI，4-苯基-1，4-sulfonazan(四氢-4-苯基-4H-1，4-噻嗪1-氧化物，
4H-1，4-噻嗪，四氢-4-苯基-，1-氧化物)；
l.CMI，吩噻嗪(硫代二苯胺，10H-吩噻嗪，AFI-Tiazin，Agrazine，Antiverm，
二苯并-1，4-噻嗪)；
li.CMI，3，4-二氢-2H-1，4-噻嗪-3，5-二羧酸(3，4-Dhtca，CAS#86360-
62-5)；
lii.CMI，硝呋莫司(Nifurtimox)(硝呋莫司[BAN：INN]，1-((5-硝基亚糠基)
氨基)-2-甲基四氢-1，4-噻嗪-4，4-二氧化物，3-甲基-4-(5’-硝基亚呋
喃基-氨基)-四氢-4H-1，4-噻嗪-1，1-二氧化物，BAY 2502，4-((5-硝
基亚糠基)氨基)-3-甲基硫代码啉1，1-二氧化物，等等)；
liii.FIV，3-(1-吡咯烷基甲基)-4-(5，6-二氯-1-二氢化茚羰基)-四氢-1，4-
噻嗪盐酸盐(R84760；R84761；硫代吗啉，4-((5，6-二氯-2，3-二氢
-1H-二氢化茚-1-基)羰基)-3-(1-吡咯烷基甲基)-，单盐酸盐，(R-(R*，
S*))-)；
liv.FIV，酮亚胺还原形式；
lv.CMI，胱硫醚；
lvi.FIII，胱硫醚酮亚胺；
lvii.FIV，羊毛硫氨酸酮亚胺；
lviii.FIV，硫代吗啉-2-羧酸；
lix.CMI，硫代吗啉-2，6-二羧酸；
lx.FIV，TMDA(1，4-硫代吗啉-3，5-二羧酸)；
lxi.IRI，1-氯-1-硝基乙烷；
lxii.FI，氨基苯甲酸盐；
lxiii.FI，2-氨基苯甲酸乙酯(氨基苯甲酸乙酯)；
lxiv.FI，2-氨基苯甲酸甲酯(氨基苯甲酸甲酯)；
lxv.FI，吡啶甲酸盐；
lxvi.FI，吡啶甲酸乙酯(2-(乙氧基羰基)吡啶，2-吡啶羧酸乙酯，；
lxvii.CMI，L-亮氨酸甲酯，盐酸盐；
lxviii.CMI，L-亮氨酸([(S)-(+)-亮氨酸])；
lxix.IRI，氟二硝基苯(1-氟-2，4-二硝基苯，2，4-DNFB，苯，1-氟-2，4-二
硝基-，VAN，等等)；
lxx.IRI，二硝基氯苯(1-氯-2，4-二硝基苯，1，3-二硝基-4-氯苯，等等)；
lxxi.IRI，1，2-环己二酮；
lxxii.IRI，烯丙基甘氨酸(D-烯丙基甘氨酸，4-戊烯酸，2-氨基-)；
lxxiii.CMI，2-氨基-2，4-戊二烯酸盐；
lxxiv.CMI，2-羧基-2，4-戊二烯酸盐；
lxxv.CMI，2-氨基-4-酮-2-戊烯酸盐；
lxxvi.FII，2-羧基丁酸盐；
lxxvii.FII，2-羧基丁酸钠；
lxxviii.IRI，N-氯-D-亮氨酸；
lxxix.CMI，N-乙酰基-D-亮氨酸；
lxxx.CMI，D-亮氨酸(D-2-氨基-4-甲基戊酸)；
lxxxi.IRI，D-炔丙基甘氨酸；2-氨基-4-戊炔酸；D，L-炔丙基甘氨酸；L-2-氨
基-4-戊炔酸；
lxxxii.CMI，孕酮(4-孕烯-3，20-二酮)；
lxxxiii.CMI，FAD(黄素腺嘌呤二核苷酸，1H-嘌呤-6-胺，黄素二核苷酸，腺苷
5’-(三氢焦磷酸盐)，带有核黄素的5’-5’-酯，等等)；
lxxxiv.CMI，6-OH-FAD；
lxxxv.IRI，苯基乙二醛(2，2-二羧基苯乙酮)；
lxxxvi.IRI，苯基乙二醛一水合物(2，2-二羧基苯乙酮一水合物)；
lxxxvii.FIII，环硫堇(全氢-1，4-硫氮杂-3，5-二羧酸，1，4-六氢硫氮杂-3， 5-二羧酸，1，4-硫氮杂-3，5-二羧酸，六氢-)；
lxxxviii.CMI，α-α’-亚氨基二丙酸(Alanopine；2，2’-亚氨基二丙酸基；L-丙氨
酸，N-(1-羧乙基)-)；
lxxxix.CMI，内消旋二氨基琥珀酸(3-氨基天冬氨酸；二氨基琥珀酸；CAS RN：
921-52-8)；内消旋2，3-二氨基琥珀酸(CAS RN：23220-52-2)；
xc.CMI，氨基硫脲(氨基硫碳基酰肼)；
xci.CMI，硫脲(硫代尿素；硫脲)；
xcii.CMI，甲基硫尿嘧啶(4(6)-甲基-2-硫尿嘧啶，4-羧基-2-巯基6-甲基嘧
啶)；
xciii.CMI，磺胺噻唑(N1-(2-噻唑基)磺胺，4-氨基-N-2-噻唑基苯磺酰胺)；
xciv.CMI，磺胺噻唑钠盐(4-氨基-N-2-噻唑基苯磺酰胺钠盐)；
xcv.CMI，硫氰酸盐；
xcvi.FI，3-甲基苯甲基硫氰酸盐；
xcvii.CMI，甲巯咪唑(2-巯基-1-甲基咪唑，1-甲基咪唑-2-硫醇)；
xcviii.FII，二羧基羟酸；
xcix.FII，1，3-丙酮二羧酸(3-氧代戊二酸)；
c.CMI，D-酒石酸([(2S，3S)-(-)-酒石酸，非天然酒石酸])；
ci.CMI，L-酒石酸([(2R，3R)-(+)-酒石酸，天然酒石酸])；
cii.CMI，DL-酒石酸；
ciii.酒石酸钾；
civ.FII，D-苹果酸；[(R)-(+)-苹果酸，(R)-(+)-羟基琥珀酸]；
cv.FII，L-苹果酸；[(S)-(-)-苹果酸，(S)-(-)-羟基琥珀酸]；
cvi.FII，DL-苹果酸(DL-羟基琥珀酸)；
cvii.FII，α-酮酸，其为氨基酸丙氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、苯甘氨酸，酪氨
酸、丝氨酸、天冬氨酸盐等及其盐和衍生物的类似物；
cviii.FII，丙酮酸(2-氧代丙酸，α-酮丙酸)；
cix.FII，丙酮酸钠；
cx.FII，丙酮酸甲酯(丙酮酸甲酯)；
cxi.FI，苯基丙酮酸；
cxii.FII，苯基丙酮酸钙(丙酮酸钙)；
cxiii.FI，苯基丙酮酸钠盐(苯基丙酮酸钠)；
cxiv.FII，4-羟基苯基丙酮酸；
cxv.FII，α-酮异戊酸钠(3-甲基-2-氧代丁酸钠盐，3-甲基-2-氧代丁酸钠盐，
a-酮异戊酸钠盐；酮戊酸钠盐)；
cxvi.FI，苯酰甲酸(a-氧代苯乙酸，苯基乙醛酸)；
cxvii.FII，4-甲基硫代-2-氧代戊酸；
cxviii.FII，4-甲基-2-氧代戊酸(4-甲基-2-氧代戊酸；α-酮异己酸；
cxix.FII，4-甲基硫代-2-氧丁酸；
cxx.FII，2-氧丁酸(羟基丁酸盐；2-羟基丁酸；α-羟基-正丁酸；
cxxi.FII，DL-α-羟基丁酸钠盐((±)-2-羟基丁酸钠)；
cxxii.FII，吲哚-3-丙酮酸(色氨酸的α-酮类似物)；
cxxiii.半胱胺与溴丙酮酸盐的反应产物；
cxxiv.CMI，半胱胺(2-氨基乙硫醇；2-巯基乙胺)；
cxxv.CMI，泛酰巯基乙胺；
cxxvi.CMI，S-腺苷甲硫氨酸；
cxxvii.IRI，溴丙酮酸乙酯；
cxxviii.IRI，溴丙酮酸甲酯；
cxxix.IRI，溴丙酮酸盐；以及
cxxx.CMI，5-S-半胱氨酰基多巴胺，
其中IRI表示不可逆抑制剂组合物；CMI表示竞争性抑制剂组合物但不包在以 一般式I-IV表示的组合物中；FI表示本文以一般式I表示的组合物；FII表示本 文以一般式II表示的组合物；FIII表示本文以一般式III表示的组合物；以及FIV 表示本文以一般式IV表示的组合物。需要指出的是，以一般式I-IV表示的组合物 是D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶的竞争性、非竞争性、无竞争性或变构抑 制剂。
用于本发明方法能够在体内或体外降低、抑制或拮抗D-氨基酸氧化酶催化活 性的优选组合物选自以上列出的所有组合物“i”，直到并包括“cxxx”；较优选的组 合物选自不可逆抑制剂组合物、一般式I表示的组合物、一般式II表示的组合物、 一般式III表示的组合物和一般式IV表示的组合物；更优选的组合物选自一般式 I表示的组合物、一般式II表示的组合物、一般式III表示的组合物和一般式IV 表示的组合物；最优选的组合物选自一般式I表示的组合物和一般式IV表示的组 合物。用于本发明方法能够在体内或体外降低、抑制或拮抗D-氨基酸氧化酶或D- 天冬氨酸氧化酶催化活性的较优选组合物选自包括苯甲酸盐、氨基乙基半胱氨酸酮 亚胺(AECK)及其衍生物的组。
在另一优选实施例中，用于本发明治疗中枢神经系统障碍的方法中优选组合 物或化合物选自以上列出的所有组合物“i”，直到并包括“cxxx”；较优选的组合物 选自不可逆抑制剂组合物、一般式I表示的组合物、一般式II表示的组合物、一 般式III表示的组合物和一般式IV表示的组合物；更优选的组合物选自一般式I 表示的组合物、一般式II表示的组合物、一般式III表示的组合物和一般式IV 表示的组合物；最优选的组合物选自一般式I表示的组合物和一般式IV表示的组 合物。用于本发明治疗中枢神经系统障碍的方法中较优选组合物选自包括苯甲酸 盐、氨基乙基半胱氨酸酮亚胺(AECK)及其衍生物的组。
本发明能降低、抑制或拮抗D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶活性的高度 优选化合物或组合物选自包括但不限于以下所列的：氨基乙基半胱氨酸-酮亚胺 (AECK，硫赖氨酸酮亚胺，2H-1，4-噻嗪-5，6-二氢-3-羧酸，S-氨基乙基-L-半胱 氨酸酮亚胺，2H-1，4-噻嗪-3-羧酸，5，6-二氢-)；氨基乙基半胱氨酸(硫赖氨酸)； 半胱胺；泛酰巯基乙胺；胱硫醚和S-腺苷甲硫氨酸。
本发明另一优选实施例涉及能降低、抑制或拮抗氨基酸或其衍生物氧化或降 解的化合物或组合物。本发明的另一优选实施例涉及能降低、抑制或拮抗L-氨基 酸或其衍生物氧化或降解的化合物或组合物。本发明的另一优选实施例涉及能降 低、抑制或拮抗D-氨基酸或其衍生物氧化或降解的化合物或组合物。本发明的另 一优选实施例涉及能降低、抑制或拮抗甘氨酸或其衍生物氧化或降解的化合物或组 合物。本发明的又一优选实施例涉及能降低、抑制或拮抗至少一种D-氨基酸氧化 或降解的化合物或组合物，所述D-氨基酸选自：D-Met、D-Pro、D-Phe、D-Tyr、 D-Ile、D-Leu、D-Ala、D-Val、D-Ser、D-Arg、D-His、D-正亮氨酸、D-Trp、D- 鸟氨酸、顺-4-羟基-D-脯氨酸、D-Thr、D-Trp-甲酯、N-乙酰基-D-Ala、D-Lys、D-Asp、 D-Glu、D-Asn、D-Gln、D-Asp-二甲酯和N-甲基-D-Asp。较优选的是能降低、抑制 或拮抗D-丝氨酸氧化或降解的组合物。较优选的是能降低、抑制或拮抗D-Ser、N- 甲基-D-Asp、D-Asp或Gly氧化或降解的组合物或化合物。本发明能降低、抑制或 拮抗一种氨基酸或其衍生物氧化或降解的优选化合物或组合物选自包括但不限于 以下所列的：氨基乙基半胱氨酸-酮亚胺(AECK，硫赖氨酸酮亚胺，2H-1，4-噻嗪- 5，6-二氢-3-羧酸，S-氨基乙基-L-半胱氨酸酮亚胺，2H-1，4-噻嗪-3-羧酸，5， 6-二氢-)；氨基乙基半胱氨酸(硫赖氨酸)；半胱胺；泛酰巯基乙胺；胱硫醚和S- 腺苷甲硫氨酸。本发明能降低、抑制或拮抗D-Met、D-Pro、D-Phe、D-Tyr、D-Ile、 D-Leu、D-Ala、D-Val、D-Ser、D-Arg、D-His、D-正亮氨酸、D-Trp、D-鸟氨酸、 顺-4-羟基-D-脯氨酸、D-Thr、D-Trp-甲酯、N-乙酰基-D-Ala、D-Lys、D-Asp、D- Glu、D-Asn、D-Gln、D-Asp-二甲酯、N-甲基-D-Asp或Gly氧化或降解的优选化合 物或组合物选自包括但不限于以下所列的：氨基乙基半胱氨酸-酮亚胺(AECK，硫赖 氨酸酮亚胺，2H-1，4-噻嗪-5，6-二氢-3-羧酸，S-氨基乙基-L-半胱氨酸酮亚胺， 2H-1，4-噻嗪-3-羧酸，5，6-二氢-)；氨基乙基半胱氨酸(硫赖氨酸)；半胱胺；泛 酰巯基乙胺；胱硫醚和S-腺苷甲硫氨酸。本发明能降低、抑制或拮抗D-丝氨酸氧 化或降解的优选化合物或组合物选自包括但不限于以下所列的：氨基乙基半胱氨酸 -酮亚胺(AECK，硫赖氨酸酮亚胺，2H-1，4-噻嗪-5，6-二氢-3-羧酸，S-氨基乙基 -L-半胱氨酸酮亚胺，2H-1，4-噻嗪-3-羧酸，5，6-二氢-)；氨基乙基半胱氨酸(硫 赖氨酸)；半胱胺；泛酰巯基乙胺；胱硫醚和S-腺苷甲硫氨酸。
本发明另一优选实施例涉及能降低、抑制或拮抗还原的黄素腺嘌呤二核苷酸 (Re-FAD)氧化的组合物。本发明另一优选实施例涉及能降低、抑制或拮抗氧化的黄 素腺嘌呤二核苷酸(Ox-FAD)还原的组合物。本发明又一优选实施例涉及能降低、抑 制或拮抗黄素激酶活性的组合物。本发明又一优选实施例涉及能降低、抑制或拮抗 黄素腺嘌呤二核苷酸焦磷酸化酶活性的组合物。本发明又一优选实施例涉及能与还 原的黄素腺嘌呤二核苷酸或氧化的黄素腺嘌呤二核苷酸结合或相互作用的组合物。 本发明又一优选实施例涉及能与黄素激酶或黄素腺嘌呤二核苷酸焦磷酸化酶结合 或相互作用的组合物。
本发明另一优选实施例涉及能增加、激动或促进胱硫醚β-合成酶活性的组合 物或化合物。能增加、促进或激动胱硫醚β-合成酶活性的优选组合物包括S-腺苷 甲硫氨酸或高半胱氨酸。能增加、激动或促进胱硫醚β-合成酶活性的另一优选组 合物是维生素B6或其衍生物。
本发明另一优选实施例涉及一种能与D-氨基酸氧化酶、D-天冬氨酸氧化酶、 还原的黄素腺嘌呤二核苷酸、氧化的黄素腺嘌呤二核苷酸、黄素激酶、黄素腺嘌呤 二核苷酸焦磷酸化酶、胱硫醚β-合成酶、L-氨基酸氧化酶、或者谷氨酰胺转氨酶 结合或相互作用的组合物的筛选方法。本发明另一优选实施例涉及一种能降低、抑 制或拮抗D-氨基酸氧化酶、D-天冬氨酸氧化酶、黄素激酶、黄素腺嘌呤二核苷酸 焦磷酸化酶、L-氨基酸氧化酶、或者谷氨酰胺转氨酶活性的组合物的筛选方法。本 发明另一优选实施例涉及一种能激动、增加或促进胱硫醚β-合成酶、L-氨基酸氧 化酶或者谷氨酰胺转氨酶活性的组合物的筛选方法。
所以，本发明的一方面内容提供一种用于治疗疾病或用于提高氨基酸水平或 减少氨基酸降解的候选分子的鉴定方法，所述方法包括：a)使D-氨基酸氧化酶、 D-天冬氨酸氧化酶、黄素激酶、黄素腺嘌呤二核苷酸焦磷酸化酶、L-氨基酸氧化酶、 或者谷氨酰胺转氨酶多肽或其具有生物活性的片段与测试化合物接触；及b)确定 所述化合物是否与所述多肽选择性结合；其中所述化合物与所述多肽选择性结合的 确定表示所述化合物是治疗疾病或者提高氨基酸水平或减少氨基酸降解的候选分 子。
本发明也提供一种用于治疗疾病或用于提高氨基酸水平或减少氨基酸降解的 候选分子的鉴定方法，所述方法包括：a)使D-氨基酸氧化酶、D-天冬氨酸氧化酶、 黄素激酶、黄素腺嘌呤二核苷酸焦磷酸化酶、L-氨基酸氧化酶、或者谷氨酰胺转氨 酶多肽或其具有生物活性的片段与测试化合物接触；及b)确定所述化合物是否选 择性抑制所述多肽的活性；其中所述化合物选择性抑制所述多肽的活性的确定表示 所述化合物是治疗疾病或者提高氨基酸水平或减少氨基酸降解的候选分子。
本发明还提供一种用于治疗疾病或用于提高氨基酸水平或减少氨基酸降解的 候选分子的鉴定方法，所述方法包括：a)提供含有D-氨基酸氧化酶、D-天冬氨酸 氧化酶、黄素激酶、黄素腺嘌呤二核苷酸焦磷酸化酶、L-氨基酸氧化酶、或者谷氨 酰胺转氨酶多肽或其具有生物活性的片段的细胞；及b)使所述细胞与测试化合物 接触；及c)确定所述化合物是否选择性抑制D-氨基酸氧化酶、D-天冬氨酸氧化酶、 黄素激酶、黄素腺嘌呤二核苷酸焦磷酸化酶、L-氨基酸氧化酶、或者谷氨酰胺转氨 酶的活性；其中所述化合物选择性抑制所述多肽的活性的确定表示所述化合物是治 疗疾病或者提高氨基酸水平或减少氨基酸降解的候选分子。
本发明还提供一种用于治疗疾病或用于提高氨基酸水平或减少氨基酸降解的 候选分子的鉴定方法，所述方法包括：a)使胱硫醚β-合成酶、L-氨基酸氧化酶或 者谷氨酰胺转氨酶多肽或其具有生物活性的片段与测试化合物接触；及b)确定所 述化合物是否选择性增加所述多肽的活性；其中所述化合物选择性增加所述多肽的 活性的确定表示所述化合物是治疗疾病或者提高氨基酸水平或减少氨基酸降解的 候选分子。
本发明另一实施例提供一种用于治疗疾病或用于提高氨基酸水平或减少氨基 酸降解的候选分子的鉴定方法，所述方法包括：a)提供含有胱硫醚β-合成酶、L- 氨基酸氧化酶或者谷氨酰胺转氨酶多肽或其具有生物活性的片段的细胞；b)使所述 细胞与测试化合物接触；及c)确定所述化合物是否选择性增加胱硫醚β-合成酶、 L-氨基酸氧化酶或者谷氨酰胺转氨酶的活性；其中所述化合物选择性增加所述多肽 的活性的确定表示所述化合物是治疗疾病或者提高氨基酸水平或减少氨基酸降解 的候选分子。
本发明另一优选实施例涉及一种拮抗、降低或抑制D-氨基酸氧化酶体外活性 的方法。较优选的是一种拮抗、降低或抑制D-氨基酸氧化酶体内活性的方法。较 优选的是一种拮抗、降低或抑制D-氨基酸氧化酶体外或体内活性的方法，所述方 法包括使D-氨基酸氧化酶与能降低、抑制或拮抗D-氨基酸氧化酶活性的组合物接 触的步骤。待抑制的D-氨基酸氧化酶优选活性是底物的氧化，该底物最好是D-氨 基酸，而该D-氨基酸最好是D-Ser、D-Asp、或N-甲基-D-Asp。
本发明另一优选实施例涉及一种拮抗、降低或抑制D-天冬氨酸氧化酶体外活 性的方法。较优选的是一种拮抗、降低或抑制D-天冬氨酸氧化酶体内活性的方法。 较优选的是一种拮抗、降低或抑制D-天冬氨酸氧化酶体外或体内活性的方法，所 述方法包括使D-天冬氨酸氧化酶与能降低、抑制或拮抗D-氨基酸氧化酶活性的组 合物接触的步骤。待抑制的D-天冬氨酸氧化酶优选活性是底物的氧化，该底物最 好是D-氨基酸，而该D-氨基酸最好是D-Asp、D-Glu、D-Asn、D-Gln、D-Asp-二甲 酯或N-甲基-D-Asp。
本发明另一优选实施例涉及能提高至少一种D-氨基酸在体外的水平的组合 物。较优选的是能提高至少一种D-氨基酸在体内的水平的组合物，优选在哺乳动 物组织内，更优选在小鼠、大鼠、狗、牛、猪、猿、猴或人的组织内。较优选的是 能提高至少一种D-氨基酸在中枢神经系统最好在脑或脊髓的组织内的水平的组合 物。较优选的是能提高至少一种D-氨基酸在脑最好在海马、扁桃体、黑质、小脑、 胼胝体、尾状核、大脑皮层、丘脑或垂体的组织内的水平的组合物。本发明的组合 物能提高至少一种D-氨基酸在其它优选组织的水平，所述的其它优选组织包括但 不限于肾、肝脏、脂肪、肌肉和睾丸。
本发明一优选实施例涉及SEQ ID NO：15的多肽或其片段在一种增加D-氨基 酸氧化酶活性的方法中的应用。较优选的是SEQ ID NO：15的多肽或其片段在一种 增加D-天冬氨酸氧化酶活性的方法中的应用。较优选的是SEQ ID NO：15的多肽 或其片段在一种降低丝氨酸消旋酶活性的方法中的应用。
本发明一优选实施例涉及SEQ ID NO：15的多肽或其片段在一种提高化合物 或组合物产量的方法中的应用，所述化合物或组合物是以D-氨基酸氧化酶为催化 剂的反应产物。
本发明一优选实施例涉及一种与g34872多肽(SEQ ID NO：15)或g34872多核 苷酸(SEQ ID NO：14)或其片段结合的组合物或化合物的筛选方法。较优选的是这 样一种方法：使g34872多肽或其片段与D-氨基酸氧化酶接触，从而使D-氨基酸氧 化酶活性增加到基本水平以上。较优选的是一种能降低、抑制、拮抗或阻断D-氨 基酸氧化酶与g34872相互作用的方法。较优选的是一种通过阻断g34872与D-氨 基酸氧化酶相互作用来治疗中枢神经系统障碍的方法。较优选的是一种用能降低、 阻断、抑制或拮抗g34872与D-氨基酸氧化酶相互作用的化合物或组合物来治疗中 枢神经系统障碍的方法。
本发明优选的D-氨基酸氧化酶多肽包括SEQ ID NO：7-10和19的多肽及其片 段以及编码它们的多核苷酸。本发明优选的D-天冬氨酸氧化酶多肽包括SEQ ID NO： 22和23的多肽及其片段以及编码它们的多核苷酸。本发明优选的D-氨基酸氧化酶 多核苷酸包括SEQ ID NO：2-6和18及其片段以及由它们编码的多肽。本发明优选 的D-天冬氨酸氧化酶多核苷酸包括SEQ ID NO：20和21及其片段以及由它们编码 的多肽。
SEQ ID NO：1所述以及以标记24-1443-126(SEQ ID NO：24)、标记24-1457-52 (SEQ ID NO：26)和标记24-1461-256(SEQ ID NO：29)的47-mers表示优选的D- 氨基酸酸氧化酶双等位标记。
本发明另一优选实施例涉及与SEQ ID NO：7的多肽差异结合的组合物。本发 明另一优选实施例涉及与SEQ ID NO：8的多肽差异结合的组合物。本发明另一优 选实施例涉及与SEQ ID NO：9的多肽差异结合的组合物。本发明另一优选实施例 涉及与SEQ ID NO：10的多肽差异结合的组合物。较优选的是与SEQ ID NO：10 的多肽结合但不与SEQ ID NO：7、8或9的多肽结合的组合物。较优选的是与SEQ ID NO：9的多肽结合但不与SEQ ID NO：7、8或10的多肽结合的组合物。较优选 的是与SEQ ID NO：8的多肽结合但不与SEQ ID NO：7、9或10的多肽结合的组合 物。较优选的是与SEQ ID NO：7的多肽结合但不与SEQ ID NO：8、9或10的多肽 结合的组合物。较优选的是与SEQ ID NO：8、9或10的多肽结合但不与SEQ ID NO： 7的多肽结合的组合物。
本发明另一优选实施例涉及与含有SEQ ID NO：7、8、9、10或15的单体多 肽或其多肽片段差异结合的组合物。较优选的是与SEQ ID NO：7的单体多肽或其 片段结合但不与含有至少一种SEQ ID NO：7的单体多肽或其片段的同或异多聚体 形式结合的组合物。较优选的是与SEQ ID NO：8的单体多肽或其片段结合但不与 含有至少一种SEQ ID NO：8的单体多肽或其片段的同或异多聚体形式结合的组合 物。较优选的是与SEQ ID NO：9的单体多肽或其片段结合但不与含有至少一种SEQ ID NO：9的单体多肽或其片段的同或异多聚体形式结合的组合物。较优选的是与 SEQ ID NO：10的单体多肽或其片段结合但不与含有至少一种SEQ ID NO：10的单 体多肽或其片段的同或异多聚体形式结合的组合物。较优选的是与SEQ ID NO：15 的单体多肽或其片段结合但不与含有至少一种SEQ ID NO：15的单体多肽或其片段 的同或异多聚体形式结合的组合物。
本发明另一优选实施例涉及与含有SEQ ID NO：7、8、9、10或15的至少一 种多肽或其片段的多聚体多肽结合的组合物。较优选的是与含有SEQ ID NO：7的 至少一种单体多肽或其片段的同或异多聚体形式结合但不与SEQ ID NO：7的单体 多肽或其片段结合的组合物。较优选的是与含有SEQ ID NO：8的至少一种单体多 肽或其片段的同或异多聚体形式结合但不与SEQ ID NO：8的单体多肽或其片段结 合的组合物。较优选的是与含有SEQ ID NO：9的至少一种单体多肽或其片段的同 或异多聚体形式结合但不与SEQ ID NO：9的单体多肽或其片段结合的组合物。较 优选的是与含有SEQ ID NO：10的至少一种单体多肽或其片段的同或异多聚体形式 结合但不与SEQ ID NO：10的单体多肽或其片段结合的组合物。较优选的是与含有 SEQ ID NO：15的至少一种单体多肽或其片段的同或异多聚体形式结合但不与SEQ ID NO：15的单体多肽或其片段结合的组合物。
本发明另一实施例涉及与含有SEQ ID NO：2的多核苷酸差异结合的组合物。 本发明另一实施例涉及与含有SEQ ID NO：3的多核苷酸差异结合的组合物。本发 明另一实施例涉及与含有SEQ ID NO：4的多核苷酸差异结合的组合物。本发明另 一实施例涉及与含有SEQ ID NO：5的多核苷酸差异结合的组合物。本发明另一实 施例涉及与含有SEQ ID NO：6的多核苷酸差异结合的组合物。较优选的是与SEQ ID NO：6的多核苷酸结合但不与SEQ ID NO：2、3、4或5的多核苷酸结合的组合物。 较优选的是与SEQ ID NO：5的多核苷酸结合但不与SEQ ID NO：2、3、4或6的多 核苷酸结合的组合物。较优选的是与SEQ ID NO：4的多核苷酸结合但不与SEQ ID NO：2、3、5或6的多核苷酸结合的组合物。较优选的是与SEQ ID NO：3的多核 苷酸结合但不与SEQ ID NO：2、4、5或6的多核苷酸结合的组合物。较优选的是 与SEQ ID NO：2的多核苷酸结合但不与SEQ ID NO：3、4、5或6的多核苷酸结合 的组合物。较优选的是与SEQ ID NO：3、4、5或6的多核苷酸结合但不与SEQ ID NO：2的多核苷酸结合的组合物。
本发明的另一优选实施例涉及含有SEQ ID NO：1的多核苷酸的基因组序列。 较优选的是使SEQ ID NO：1的多核苷酸区基因分型的方法。
本发明一实施例涉及含有SEQ ID NO：1的序列或其互补序列的纯化的或分离 的核酸。较优选的是一种纯化的或分离的核酸，其含有至少10个SEQ ID NO：1 的序列或其互补序列的连续核苷酸。较优选的是一种核酸，其含有至少15个SEQ ID NO：1的序列或其互补序列的连续核苷酸。
本发明一优选实施例涉及一种纯化的或分离的核酸，其含有至少10个SEQ ID NO：1的序列或其互补序列或一个或多个外显子的连续核苷酸。较优选的是一种SEQ ID NO：1的序列或其互补序列所示的纯化的或分离的核酸，其含有SEQ ID NO：1 的序列或其互补序列所示的核苷酸40389至40670中至少10个连续核苷酸。一种 优选的SEQ ID NO：1的序列或其互补序列所示的纯化的或分离的核酸含有SEQ ID NO：1的序列或其互补序列所示的核苷酸42666至42778中至少10个连续核苷酸。 另一种优选的SEQ ID NO：1的序列或其互补序列所示的纯化的或分离的核酸含有 SEQ ID NO：1的序列或其互补序列所示的核苷酸43416至43519中至少10个连续 核苷酸。另一种优选的SEQ ID NO：1的序列或其互补序列所示的纯化的或分离的 核酸含有SEQ ID NO：1的序列或其互补序列所示的核苷酸61159至61402中至少 10个连续核苷酸。另一种优选的SEQ ID NO：1的序列或其互补序列所示的纯化的 或分离的核酸含有SEQ ID NO：1的序列或其互补序列所示的核苷酸64050至64711 中至少10个连续核苷酸。另一种优选的SEQ ID NO：1的序列或其互补序列所示的 纯化的或分离的核酸含有SEQ ID NO：1的序列或其互补序列所示的核苷酸68126 至68261中至少10个连续核苷酸。另一种优选的SEQ ID NO：1的序列或其互补序 列所示的纯化的或分离的核酸含有SEQ ID NO：1的序列或其互补序列所示的核苷 酸84906至85541中至少10个连续核苷酸。
本发明另一优选实施例涉及一种含有SEQ ID NO：2的序列或其互补序列的纯 化的或分离的核酸。本发明又一优选实施例涉及一种含有SEQ ID NO：3的序列或 其互补序列的纯化的或分离的核酸。本发明另一优选实施例涉及一种含有SEQ ID NO：4的序列或其互补序列的纯化的或分离的核酸。本发明另一优选实施例涉及一 种含有SEQ ID NO：5的序列或其互补序列的纯化的或分离的核酸。本发明另一优 选实施例涉及一种含有SEQ ID NO：6的序列或其互补序列的纯化的或分离的核酸。 本发明另一优选实施例涉及一种含有SEQ ID NO：14的序列或其互补序列的纯化的 或分离的核酸。本发明另一优选实施例涉及一种含有SEQ ID NO：16的序列或其互 补序列的纯化的或分离的核酸。本发明另一优选实施例涉及一种含有SEQ ID NO： 18、20或21的序列中任何一段序列或其互补序列的纯化的或分离的核酸。
本发明另一实施例涉及一种纯化的或分离的核酸，其含有SEQ ID NO：2-6的 序列中至少之一或其互补序列所示的至少10个连续核苷酸。较优选的是一种纯化 的或分离的核酸，其含有SEQ ID NO：2-6的序列中至少之一或其互补序列所示的 至少15个连续核苷酸。
本发明另一实施例涉及一种纯化的或分离的核酸，其含有SEQ ID NO：14的 序列或其互补序列所示的至少10个连续核苷酸。较优选的是一种纯化的或分离的 核酸，其含有SEQ ID NO：14的序列或其互补序列所示的至少15个连续核苷酸。
本发明另一实施例涉及一种编码SEQ ID NO：7的多肽的纯化的或分离的核酸。 较优选的是一种编码SEQ ID NO：7的多肽的至少10个连续氨基酸的纯化的或分离 的核酸。较优选的是一种纯化的或分离的核酸，所述核酸编码SEQ ID NO：7的多 肽的至少15个连续氨基酸。
本发明另一实施例涉及一种编码SEQ ID NO：8的多肽的纯化的或分离的核酸。 较优选的是一种编码SEQ ID NO：8的多肽的至少10个连续氨基酸的纯化的或分离 的核酸。较优选的是一种纯化的或分离的核酸，所述核酸编码SEQ ID NO：8的多 肽的至少15个连续氨基酸。
本发明另一实施例涉及一种编码SEQ ID NO：9的多肽的纯化的或分离的核酸。 较优选的是一种编码SEQ ID NO：9的多肽的至少10个连续氨基酸的纯化的或分离 的核酸。较优选的是一种纯化的或分离的核酸，所述核酸编码SEQ ID NO：9的多 肽的至少15个连续氨基酸。
本发明另一实施例涉及一种编码SEQ ID NO：10的多肽的纯化的或分离的核 酸。较优选的是一种编码SEQ ID NO：10的多肽的至少10个连续氨基酸的纯化的 或分离的核酸。较优选的是一种纯化的或分离的核酸，所述核酸编码SEQ ID NO： 10的多肽的至少15个连续氨基酸。
本发明另一实施例涉及一种编码SEQ ID NO：15的多肽的纯化的或分离的核 酸。较优选的是一种编码SEQ ID NO：15的多肽的至少10个连续氨基酸的纯化的 或分离的核酸。较优选的是一种纯化的或分离的核酸，所述核酸编码SEQ ID NO： 15的多肽的至少15个连续氨基酸。
本发明另一实施例涉及一种编码SEQ ID NO：17的多肽的纯化的或分离的核 酸。较优选的是一种编码SEQ ID NO：17的多肽的至少10个连续氨基酸的纯化的 或分离的核酸。较优选的是一种纯化的或分离的核酸，所述核酸编码SEQ ID NO： 17的多肽的至少15个连续氨基酸。
本发明另一实施例涉及一种编码SEQ ID NO：19的多肽的纯化的或分离的核 酸。较优选的是一种编码SEQ ID NO：19的多肽的至少10个连续氨基酸的纯化的 或分离的核酸。较优选的是一种纯化的或分离的核酸，所述核酸编码SEQ ID NO： 19的多肽的至少15个连续氨基酸。
本发明另一实施例涉及一种编码SEQ ID NO：22的多肽的纯化的或分离的核 酸。较优选的是一种编码SEQ ID NO：22的多肽的至少10个连续氨基酸的纯化的 或分离的核酸。较优选的是一种纯化的或分离的核酸，所述核酸编码SEQ ID NO： 22的多肽的至少15个连续氨基酸。
本发明另一实施例涉及一种编码SEQ ID NO：23的多肽的纯化的或分离的核 酸。较优选的是一种编码SEQ ID NO：23的多肽的至少10个连续氨基酸的纯化的 或分离的核酸。较优选的是一种纯化的或分离的核酸，所述核酸编码SEQ ID NO： 23的多肽的至少15个连续氨基酸。
本发明另一优选实施例涉及双等位标记。
附图说明
图1所示为表达酵母菌的重组g34782多肽和D-氨基酸氧化酶多肽的活性。
图2所示为表达细菌的重组g34782多肽和D-氨基酸氧化酶多肽的活性。
图3所示为用D-丝氨酸作为底物通过g34782在体外活化纯化的D-氨基酸氧 化酶。
图4所示为g34782的剂量与D-氨基酸氧化酶活性的依赖性关系。
图5所示为g34782多肽和D-氨基酸氧化酶之间相互作用的动力学。
图6所示为法裔加拿大人精神分裂症病例与对照组之间的D-氨基酸氧化酶双 等位标记的关联性分析结果。
序列表所提供的序列的概述
SEQ ID NO：1D-氨基酸氧化酶的基因组序列；
SEQ ID NO：2D-氨基酸氧化酶的cDNA；
SEQ ID NO：3具有外显子U 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11Long的新cDNA；
SEQ ID NO：4具有外显子B C Ulong V 2 3 4 5 6 7 9 10 11Long的新cDNA；
SEQ ID NO：5具有外显子U 2 4 5 6 7 8 9 10 11Long的新cDNA；
SEQ ID NO：6具有外显子B 2 3 7 8 9 10 11的新cDNA；
SEQ ID NO：7来自SEQ ID NO：2和3的cDNA的D-氨基酸氧化酶多肽；
SEQ ID NO：8来自SEQ ID NO：4的cDNA的D-氨基酸氧化酶多肽；
SEQ ID NO：9来自SEQ ID NO：5的cDNA的D-氨基酸氧化酶多肽5；
SEQ ID NO：10来自SEQ ID NO：6的cDNA的D-氨基酸氧化酶多肽；
SEQ ID NO：11-12含有g34872双等位标记99/16105-152和99/5919-215的 多核苷酸；
SEQ ID NO：13包括多态性的g34872多核苷酸；
SEQ ID NO：14g34872多肽，其中位置10上的氨基酸是酪氨酸或丝氨酸，位
置30上的氨基酸是赖氨酸或精氨酸，位置50上的氨基酸是谷氨
酸或早熟终止子，位置60上的氨基酸是精氨酸或甘氨酸，以及
位置115上的氨基酸是天冬氨酸或丙氨酸；
SEQ ID NO：15编码双杂交实验所用的SEQ ID NO：16的多肽的g34872多核
苷酸；
SEQ ID NO：17编码SEQ ID NO：18的多肽的D-氨基酸氧化酶多核苷酸；
SEQ ID NO：19和20分别是编码SEQ ID NO：21和22的多肽的D-天冬氨酸
氧化酶多核苷酸；以及
SEQ ID NO：23-26分别是含有D-氨基酸氧化酶双等位标记24-1443/126、
24-1457/52、27-93/181和24-1461/256的多核苷酸，在位
置24显示多态性碱基。
美国专利申请号09/539，333与国际专利申请号PCT/IB00/00435都对g34872 基因组序列和双等位标记进行了叙述，以上两件申请均纳入其整体内容作为参考。
根据有关序列表的规定，在本序列表中采用以下代号表示双等位标记在序列 内的位置，并确定多态性碱基含有的每个等位基因。序列中的代号“r”表示多态 性碱基的其中一个等位基因是鸟嘌呤，而另一个等位基因是腺嘌呤。序列中的代号 “y”表示多态性碱基的其中一个等位基因是胸腺嘧啶，而另一个等位基因是胞嘧 啶。序列中的代号“m”表示多态性碱基的其中一个等位基因是腺嘌呤，而另一个 等位基因是胞嘧啶。序列中的代号“k”表示多态性碱基的其中一个等位基因是鸟 嘌呤，而另一个等位基因是胸腺嘧啶。序列中的代号“s”表示多态性碱基的其中 一个等位基因是鸟嘌呤，而另一个等位基因是胞嘧啶。序列中的代号“w”表示多 态性碱基的其中一个等位基因是腺嘌呤，而另一个等位基因是胸腺嘧啶。
具体实施方式
本发明涉及给容易患上中枢神经系统障碍的受试者提供这样一种精神障碍的 预防方法以及给患有中枢神经系统障碍受试者提供治疗方法。具体地说，该方法包 括给患者施加一定量的D-氨基酸氧化酶和D-天冬氨酸氧化酶拮抗剂化合物，一定 程度上有效预防或改善中枢神经系统障碍的进展(即提供保护作用)、改善中枢神经 系统障碍的症状，以及改善中枢神经系统障碍的复发。
按照本发明的方法可治疗的中枢神经系统障碍包括早衰性痴呆(早期发作的 阿耳茨海默氏病)、老年性痴呆(阿耳茨海默氏型痴呆)、帕金森氏症包括帕金森氏 病、杭廷顿舞蹈病、迟发性运动障碍、运动过度、躁狂症、注意力缺陷活动过度障 碍(ADHD)、注意力缺陷障碍(ADD)、焦虑症、诵读困难、精神病、精神分裂症、双 相性精神障碍、重度抑郁症、躁狂症、轻度躁狂症、抑郁症、孤独症、滥用药物、 过度攻击、抽搐症和图雷特氏综合征。本发明优选的中枢神经系统障碍包括精神分 裂症和双相性精神障碍。精神分裂症和精神分裂症样精神障碍的较优选例子包括： 精神分裂症(紧张型)、精神分裂症(无组织型)、精神分裂症(妄想型)、精神分裂症 (混合型)、精神分裂症(残余型)、精神分裂症样精神障碍、短期反应性精神病、情 感分裂性精神障碍、诱发性精神病、精神分裂型人格障碍、精神分裂样人格障碍、 妄想型人格障碍和妄想(类偏执狂)性精神障碍。
以目前用于基因图谱的两种策略连锁分析和关联性研究，可进行鉴定与一具 体性状有关的基因，例如，特定中枢神经系统障碍，象精神分裂症。连锁分析需要 研究其成员有多人患病的家族，这种分析现在用于检测单个或寡基因固有性状。与 之相反，关联性研究检查与阴性性状(T-)对照组相比无亲戚关系的性状(T+)的个体 的标记等位基因频率，这种研究通常用于检测多基因遗传。
本申请揭示了位于与精神分裂症相关的D-氨基酸氧化酶基因上的另外一些双 等位标记。鉴定这些与精神分裂症相关的双等位标记可以进一步限定怀疑含有与发 展精神分裂症易感因素有关的遗传决定子的染色体区，而且可导致鉴定本文所公开 的与发展精神分裂症易感因素相关的新基因序列。此外，如前所述的g34872基因 和现在所述的D-氨基酸氧化酶基因上的双等位标记也可单独使用或联合使用以确 定个体发展中枢神经系统障碍的风险。而且，如前所述的g34872基因和现在所述 的D-氨基酸氧化酶基因上的双等位标记都可单独使用或联合使用以确定个体通过 本发明所述的治疗方法所获得的成效。另外，序列信息提供一种资源可以进一步鉴 定那些区域内的新基因和标记。另外，含有精神分裂症相关基因的序列例如可用于 分离推定基因族中的其它基因，从其它物种鉴定同系物，治疗疾病及用作本文所述 的诊断和筛选分析中的探针和引物。而且，所鉴定的多态性也可用来设计精神分裂 症和双相性精神障碍遗传罹病倾向的可靠性检测分析。它们还可用来设计药物的筛 选方案，准确和有效地评估新旧药物或治疗方案的治疗效果和潜在的副作用。
定义
术语“治疗”指的是改善、减轻症状，暂时或永久性消除症状的病因，或者 预防或减慢指定障碍或疾病出现症状。
化合物的剂量是能防止所述疾病症状复发或者治疗病人所患疾病的某些症状 的有效量。“有效量”、“有效治疗量”、“治疗量”或“有效剂量”指获得所希望的 药理或治疗效果，从而有效预防或治疗该疾病的足够量。预防疾病在医学上表现为 大大延迟疾病症状的发作时间。治疗疾病表现为减少与疾病相关的症状或者改善疾 病症状的复发情况。本领域技术人员给予个体一定量的化合物并观察结果，可轻易 确定本发明化合物的有效治疗量。另外，本领域技术人员也熟知鉴定个体患有中枢 神经系统障碍的方法，并且能够轻易个体患有中枢神经系统障碍。
术语“拮抗剂”和“抑制剂”看成是同义的，本文可通用。本发明的“拮抗 剂”化合物可与典型或非典型抗中枢神经系统障碍的药物如抗精神病药物一起给 药。典型抗精神病药物包括：氟派啶醇(haloperidol)、氟奋乃静(fluphenazine)、 奋乃静(perphenazine)、氯丙嗪、吗茚酮(molindone)、匹莫齐特(pimozide)、三 氟拉嗪和硫利哒嗪、噻嗪化物、噻二唑、恶二唑等等。非典型抗精神病药物包括： 氯扎平、利培酮、奥扎平、舍吲哚、M100907、齐拉西酮、思瑞康(seroquel)、佐 替平(zotepine)、氨磺必利(amisulpride)、伊潘立酮(iloperidone)、苯乙肼等等。 典型抗抑郁和抗焦虑症药物包括：杂环抗抑郁药(三环抗抑郁药、四环抗抑郁药等)、 5-羟色胺再吸收抑制剂、混合型5-羟色胺和去甲肾上腺素再吸收抑制剂、多巴胺 再吸收抑制剂和单胺氧化酶抑制剂。拮抗剂也可用来治疗不能采用上述药物进行治 疗的个体。本发明也提供一种精神分裂症、双相性精神障碍或其它中枢神经系统障 碍的预防和治疗方法，该方法无需用其它抗精神病药物、抗抑郁药、抗焦虑症药或 其它病人无反应的药物来治疗。抗精神病药物、抗抑郁药、抗焦虑症药或其它药物 可以亚治疗剂量，即较单独用上述药进行治疗时通常所采用的剂量低的剂量给药。 被认为是D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶抑制剂，或者固有地用作D-氨基酸 氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶抑制剂的治疗精神分裂症、双相性精神障碍、抑郁症 及其它中枢神经系统障碍所用的药物明确排除于在D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸 氧化酶“拮抗剂”的定义之内，也明确排除于本发明的范围之内。此外，本文所公 开的任何一种分子、化合物或药物可明确排除于本发明的范围之内。
除非另有说明，“烷基”指含有1到8个碳原子的支链或无支链饱和烃链，例 如甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、正戊基、正己基等等。
“烷氧基”指-OR基团，其中R如本文所定义。R优选是含有1到3个碳原子 的支链或无支链饱和烃链。
除非另有说明，“卤素”指氟、氯、溴或碘。
“苯基”包括以选自烷基、烷氧基、羟基、卤素和卤代烷基的取代基任意单 取代或多取代的全部可能的异构体苯基。
优选的杂芳基环包括吡咯、呋喃、噻吩、吡啶、嘧啶、哒嗪、吡嗪、三唑、 四唑、吡唑、咪唑、异噻唑、噻唑、异恶唑和恶唑。优选的“与苯基稠合的杂芳基” 环包括吲哚、异吲哚、苯并呋喃、苯并噻吩、喹啉、异喹啉、喹喔啉、喹唑啉、苯 并三唑、吲唑、苯并咪唑、苯并噻唑、苯并异恶唑和苯并恶唑。当用术语杂芳基环 时假定包括“与苯基稠合的杂芳基”环在内。术语“饱和或部分不饱和杂环烷基环” 指带有5-7个环原子并含有1-3个选自N、O或S的杂原子的饱和或部分不饱和(但 不是芳香族或完全饱和)杂环。优选的饱和或部分不饱和杂环烷基环包括哌啶、哌 嗪、吗啉、四氢吡喃、硫代吗啉或吡咯烷。
术语“药学上可接受的盐类”指该化合物的盐类具有所希望的药理活性并且 其在生物上或者其他方面都不是不希望的。用无机酸可形成这些盐类，如乙酸盐、 己二酸盐、藻酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、硫酸氢盐、丁酸盐、柠檬 酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡萄糖酸盐、十二烷基硫酸盐、 乙烷磺酸盐、富马酸盐、葡萄糖庚酸盐、甘油磷酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、 盐酸盐、溴酸盐、碘酸盐、2-羟基乙烷磺酸盐、乳酸盐、马来酸盐、甲烷磺酸盐、 2-萘磺酸盐、烟酸盐、草酸盐、硫氰酸盐、甲苯磺酸盐和十一烷酸盐。碱性盐包括 铵盐、碱金属盐如钠盐和钾盐、碱土金属盐如钙盐和镁盐、带有有机碱的盐如二环 己胺盐、N-甲基-D-葡糖胺、以及带有氨基酸的盐如精氨酸、赖氨酸等等。也可以 用诸如短链卤代烷基如甲基、乙基、丙基和丁基氯化物、溴化物和碘化物，二烷基 硫酸盐如二甲基、二乙基、二丁基和二戊基硫酸盐，长链卤化物如癸基、十二烷基、 十四烷基和十八烷基氯化物、溴化物和碘化物，卤代芳烷基如苯甲基和苯乙基溴化 物等试剂使含有碱性氮的基团季铵化。由此得到水溶性或油溶性或分散性产物。另 外，以下叙述药学及药学上可接受的组合物。
本发明的化合物有非对称中心，因而可生成立体异构混合体或单个立体异构 体。采用光学活性原料，在合成的某一适当阶段溶解外消旋或非外消旋中间混合物， 或者溶解以一般式(I)表示的化合物可得到单个立体异构体。需要明白的是，本发 明的范围包括单个立体异构体以及立体异构混合体(外消旋和非外消旋)。本发明的 化合物具有至少一个非对称中心，因而可生成立体异构混合体或单个R-和S-立体 异构体。在合成的某一适当阶段溶解外消旋或非外消旋中间混合物可得到单个对映 体。不用说，本发明的范围包括单个R-和S-立体异构体以及立体异构混合体。
“异构体”是具有同一个分子式的不同化合物。
“立体异构体”是原子在空间的排列方式不同的异构体。
“对映体”是一对相互间镜像不重叠的立体异构体。
“非对映异构体”是相互间非镜像的立体异构体。
“外消旋混合体”指含有相等部分的单个非对映异构体的混合体。“非外消旋 混合体”是含有不相等部分的单个非对映异构体或立体异构体的混合体。
“取代的烷基”指羧基烷基如乙酰基、氨基烷基、二烷基氨基烷基、羟烷和 巯基烷基、烷基甲硅烷基。
本发明涉及以一般式I-VI表示的化合物，包括但不限于本文所提供的具体实 施例。此外，这些化合物中任何一种都可以制成药学上可接受的盐。
需要注意的是，有机化学领域技术人员可合成本文所述的本发明化合物。
本文所用的术语“精神状态”指病理学上的心理状态，这种状态是精神病或 者可能与精神病特征相关。这些状态包括但不限于精神病的诊断和统计手册第四修 订版(DSM-IV-R)(1994)所表述的精神障碍，包括精神分裂症和急性躁狂症。DSM- IV-R由美国命名与统计学会专责小组制作，给出了诊断类别的清晰说明。本领域 技术人员知道病理学上的心理状态有不同的命名、疾病分类及分类系统，而这些系 统随医学的科学发展逐步形成。
术语“精神分裂症”包括或者可具体限于精神分裂症、精神分裂症样精神障 碍、情感分裂性精神障碍、妄想精神障碍、短期精神障碍、由一般医学状况而引起 的精神障碍、其它未注明或本文别处所述之精神障碍。这些疾病的症状大部分在 DSM-IV-R有所定义。这本书涉及这些疾病的章节纳入其整体内容作为参考。
本文所用的术语“双相性精神障碍”指以DSM-IV-R及第三修订版(1994)中的 类别296.xx所述的双相性精神障碍为特征的状态。为了更加清楚起见，申请人考 虑了DSM-IV-R所述的双相性精神障碍I型和双相性精神障碍II型的治疗。该术语 还包括循环性精神障碍。循环性精神障碍指交替出现抑郁症状和轻度躁狂症症状。 本领域技术人员知道病理学上的心理状态有不同的命名、疾病分类及分类系统，而 这些系统随医学的科学发展逐步形成。
本文所用与重度抑郁有关的术语“无反应性”指无合理的临床反应的病人(例 如，经过一个或多个常规抗抑郁药的临床疗程后，病人的汉密尔顿抑郁量表(HAM- D)较基线评分减少50％)。
“重度抑郁症发作”定义为至少两星期有抑郁情绪或者失去兴趣，可能伴随 其它抑郁症状。这些症状必须在至少连续两个星期内的几乎每天(即14天中至少有 10天)白天大部分时间(即病人至少三分之二清醒时间)出现。“抑郁情绪”通常表 现为病人感到悲伤、绝望、无助或无价值。旁人通过例如面部表情、姿势、声音及 眼泪观察到病人看起来是悲伤的。儿童和青少年的情绪可以暴躁。“失去兴趣”通 常表现为病人对业余爱好没有兴趣或者对以前认为很快乐的活动不再感到任何乐 趣。
重度抑郁症发作可伴随其它抑郁症状，包括不节食时体重急剧下降或体重增 加(例如，一个月内体重变化超过5％)，或者食欲不振或大增；失眠或嗜睡；精神 性运动激动或阻抑；疲倦或精神不振；无价值感或者过份或不适当自疚；思考或集 中力减退；或难以作决定；以及想死亡，有或无特定计划的自杀念头，或者试图自 杀。
“躁狂症发作”定义为情绪异常及持续高涨、亢奋或易激动发怒的一段明显 的时期。情绪异常的这段时期必须持续至少一个星期(或者如果需要接受住院治疗 时间可短些)。这种情绪波动必须还要伴随以下列出的至少三种症状：自我评价过 高或变得夸大、对睡眠的需要减少、说话急速、思想活跃、注意力分散、增加投入 有目标导向的活动或精神性运动激动、过度投入开心的活动，但往往会有不愉快的 结果。如果情绪容易动怒(而不是高涨或亢奋)，则必须要有以上至少四种症状。情 绪波动的严重程度必须足以引起社交或工作能力显著下降或者需要住院治疗，或者 表现为有精神病特征。
“轻度躁狂症发作”比躁狂症发作的程度轻。轻度躁狂症发作的症状通常与 躁狂症发作所限定的症状相同，除了不存在错觉和幻觉外，而且发作的严重程度不 足以引起社交或工作能力显著下降或者个体不需要住院治疗。
本文所用的术语“孤独症”指以DSM-IV-R中的类别296.xx，包括299.00、 299.80和299.10，优选299.00所述的状态。
术语“焦虑症”包括但不限于强迫症(obsessive-compulsive disorder)、精 神活性物质焦虑症、创伤后压力症、广泛性焦虑症、其它未注明之焦虑症、以及器 质性焦虑症(organic anxiety disorder)。
本文所用的术语“药物滥用”指不希望有的在身体和/或心理上对药物的依赖。 该术语指对可卡因、迷幻药、大麻、安他非明、致幻剂、苯环利定苯并二氧类、 酒精和烟碱等药物的依赖。
本文所用的术语“注意力缺陷活动过度障碍(ADHD)”指以持续出现疏忽大意、 活动过度、冲动或其任意组合为特征的状态或障碍。
本文所用的术语“过度攻击”指以攻击过度以致影响个人的日常生活、人际 关系，而且可能例如在企图进行暴力自杀的情况下威胁到个人安全为特征的情况。 用本发明要求保护的方法可被治疗的过度攻击不依赖于精神状态，而且与采用的药 物或其它物质没有直接关系。
痉挛是一种突然、快速复发、无规律、刻板的运动或发声，发作是不可抗拒 的但可以抑制，持续时间不同。常见的简单运动痉挛包括眨眼、颈部抽搐、耸肩、 扮鬼脸和咳嗽。常见的简单发声痉挛包括清喉咙、打呼噜、鼻吸气、喷鼻息和咆哮。 常见的复杂运动痉挛包括面部表情、修饰行为、跳跃、触摸、跺脚及对一种事物微 笑。常见的复杂发声痉挛包括重复上下文的字或词语、污言秽语(使用社会上不接 受的词语，往往是很猥亵的)、重复语句(重复自己的发声或词语)，以及模仿语言(重 复最后听到的声音、字或词语)。本文所用的术语“痉挛”指包括以一种或多种运 动痉挛和一种或多种痉挛以及多种发声痉挛为特征的痉挛障碍。痉挛的例子包括短 暂性痉挛障碍、图雷特氏障碍、慢性发声痉挛障碍、如DSM-IV-R所述其它未注明 之痉挛障碍。
术语“包含”、“由…组成”、“基本上由…组成”有不同的含义，每个术语在 本文可被另一个术语代替，改变本发明的范围。
术语“寡核苷酸”及“多核苷酸”在本文是互通的，包括RNA、DNA或RNA/DNA 杂交序列，其具有一个以上单链或双螺旋型核苷酸。本文所用的术语“ 核苷酸”是 形容词，描述含有任何长度单链或双螺旋型的RNA、DNA或RNA/DNA杂交序列的分 子。术语“核苷酸”在本文也用作名词，指个体核苷酸或核苷酸簇，意味着分子、 或大核酸分子中的个体单元，对于寡核苷酸或多核苷酸内的核酸，其包括嘌呤或嘧 啶、核糖或脱氧核糖分子、以及磷酸盐基因、或磷酸二酯键。虽然术语“核苷酸” 在本文也用于包括“修饰后的核苷酸”，其包括至少以下一种修饰：(a)变换连接基， (b)嘌呤的类似型，(c)嘧啶的类似型，或(d)糖的类似型，例如，类似连接基、嘌 呤、嘧啶及糖的例子可参看本文引用的参考文献PCT公开号WO95/04064。不过， 本发明的多核苷酸优选包括大于50％常规脱氧核糖核苷酸，最好包括大于90％常规 脱氧核糖核苷酸。本发明的多核苷酸序列可用任何一种已知的方法制备，包括合成、 重组、体内产生、或其组合、以及用本技术领域已知的任何一种纯化方法。
本文的术语“纯化的”用于描述与其它化合物分离的本发明的多核苷酸或多 核苷酸载体，包括但不限于：其它核酸、碳水化合物、脂质和蛋白质(例如合成多 核苷酸所用的酶)、或者用于指共价密闭多核苷酸与线性多核苷酸分离的。当样本 至少大约50％，最好60-75％具有单个多核苷酸序列和构象(线性对共价密闭)时，一 种多核苷酸基本上是纯的。基本纯的多核苷酸通常占核酸样本的约50％，最好为 60-90％(重量/重量)，更常见的是纯度约为95％，最好是99％以上。众所周知，多核 苷酸纯度或均一性有许多方式表示，如先对样本进行琼脂糖或聚丙烯酰胺凝胶电 泳，再观察凝胶染色后的单一条带。对于某些用途，用高效液相层析法或本技术领 域公知的其它方法可获得高分辨率。当样本至少大约50％，最好60-75％具有单个多 肽序列时，一种多肽基本上是纯的。基本纯的多肽通常占核酸样本的约50％，最好 为60-90％(重量/重量)，更常见的是纯度约为95％，最好是99％以上。众所周知， 多肽纯度或均一性有许多方式表示，如先对样本进行琼脂糖或聚丙烯酰胺凝胶电 泳，再观察凝胶染色后的单一条带。对于某些用途，用高效液相层析法或本技术领 域公知的其它方法可获得高分辨率。术语“纯化的”在本文用于描述与其它化合物 分离的本发明的化学组合物。
术语“ 分离的”要求物质离开它原来的环境(例如，若物质是天然存在的，就 离开天然环境)。例如，天然存在于有生命的动物的多核苷酸或多肽就不是分离的， 但自天然系统中部分或全部共存物质分离出来的同一些多核苷酸或DNA或多肽就 是分离的。这些多核苷酸可以是部分载体和/或这些多核苷酸或多肽可以是部分组 合物，由于载体或组合物不属于天然环境的一部分，故这些多核苷酸仍然是分离的。
术语“ 引物”表示与靶核苷酸序列互补并用于与靶核苷酸序列杂交的特异性 寡核苷酸序列。引物用作以DNA聚合酶、RNA聚合酶或逆转录酶为催化剂的核苷酸 聚合反应的引发点。
术语“ 探针”表示可用于鉴定样本所含的特异性多核苷酸序列的有限核酸节 段(或者核苷酸类似物节段，例如本文所限定的多核苷酸)，所述核酸节段包括与待 鉴定的特异性多核苷酸序列互补的核苷酸序列。
术语“ 性状”和“ 表型”在本文是互通的，指有机体在临床上任何看得见的、 检测得到的或其它可测量的性质，如疾病症状或疾病易感性。本文所用的术语“性 状”或“表型”通常指精神分裂症或双相性精神障碍的症状或易感性；或者指个体 对作用于精神分裂症或双相性精神障碍的药剂有反应；或者指作用于精神分裂症或 双相性精神障碍的药剂副作用的症状或易感性。
本文所用的术语“ 等位基因”指核苷酸序列的变异型。双等位基因多态性有 两种型式。通常将第一种鉴定的等位基因命名为原始型等位基因，而其它等位基因 命名为变换型等位基因。二倍体有机体的等位基因型可以是纯合或杂合的。
本文所用的术语“ 杂合率”指个体在一以特定等位基因杂合的群体中的发生 率。在双等位基因系统中，杂合率是平均来说等于2Pa(1-Pa)，式中Pa是最小出 現的等位基因的頻率。為了用在遺傳研究中，遺傳標記應該有足夠程度的雜合性， 以便使随機選擇一個人是雜合的概率比較高。
本文所用的术语“ 基因型”指个体或样本中所含的等位基因同一性。在本发 明的上下文中，基因型最好用于描述个体或样本所含的双等位标记等位基因。术语 使样本或个体的双等位标记“ 基因型分型”包括确定个体在双等位标记上携带的特 异性等位基因或特异性核苷酸。
本文所用的术语“ 突变”指频率低于1％的不同基因组或个体之间的DNA序列 差异。
本文所用的术语“ 单倍型”指个体或样本在单个染色体上所含有的等位基因 组合。在本发明的上下文中，单倍型最好指在一给定个体中发现的并且与表型相关 的双等位标记等位基因的组合。
本文所用的术语“ 多态性”指不同基因组或个体之间出现两种或多种变换基 因组序列或等位基因。“多态的”指在一群序列中可找到两种或多种特异性基因组 序列变异型的状况。“ 多态位点”是变异发生的基因座。多态性可包括一个或多个 核苷酸的取代、缺失和插入。单核苷酸多态性是单一碱基对变化。单核苷酸多态性 通常是在多态位点上用另一个核苷酸取代一个核苷酸。单核苷酸的缺失或单核苷酸 的插入也会产生单核苷酸多态性。在本发明的上下文中，“单核苷酸多态性”最好 指单核苷酸的取代。通常，不同基因组或不同个体之间的多态位点可以被两个不同 核苷酸所置换。
术语“ 双等位基因多态性”和“ 双等位标记”在本文是互通的，指在一群体 中具有两个频率相对较高的等位基因的多态性，优选指单核苷酸多态性。“ 双等位 标记等位基因”指双等位标记位点所含有的核苷酸变异型。本发明双等位标记中最 少出现的等位基因的频率被证实大于1％，该频率宜大于10％，较好的频率是至少 20％(即杂合率至少0.32)，更好的频率是30％(即杂合率至少0.42)。最少出现的等 位基因的频率为30％或以上的双等位标记称为“高质量 双等位标记”。本发明所有 的基因分型、单倍分型、关联性和相互作用的研究方法可任选地仅用高质量双等位 标记进行。
本文以下列方式叙述多核苷酸中的核苷酸相对多核苷酸中心的位置。当多核 苷酸有奇数核苷酸时，把与多核苷酸3’和5’端距离相等的核苷酸看成是多核苷酸 的“中心”，紧邻在中心位置的核苷酸的任何一个多核苷酸，或者在中心位置的核 苷酸本身认为“在中心的1个核苷酸以内”。在有奇数核苷酸的多核苷酸中，把在 多核苷酸中心的5个核苷酸位置上的任何一个核苷酸认为在中心的2个核苷酸以 内，如此类推。当多核苷酸有偶数核苷酸时，多核苷酸的中心是一个键而不是核苷 酸。所以，把2个中心核苷酸中任何一个认为“在中心的1个核苷酸以内”，把在 多核苷酸中心的4个核苷酸位置上的任何一个核苷酸认为“在中心的2个核苷酸以 内”，如此类推。对于涉及一个或多个核苷酸的取代、插入或缺失，如果多态性的 取代、插入或缺失的多核苷酸与多核苷酸的3’端之间的距离与多态性的取代、插 入或缺失的多核苷酸与多核苷酸的5’端之间的距离之差等于零或1个核苷酸，则 多态性、等位基因或双等位标记就在多核苷酸的“中心”上。如果这个差距等于零 到3个核苷酸，就认为多态性“在中心的1个核苷酸以内”。如果这个差距等于零 到5个核苷酸，就认为多态性“在中心的2个核苷酸以内”。如果这个差距等于零 到7个核苷酸，就认为多态性“在中心的3个核苷酸以内”，如此类推。对于涉及 一个或多个核苷酸的取代、插入或缺失，如果多态性的取代、插入或缺失的多核苷 酸与多核苷酸的3’端之间的距离与多态性的取代、插入或缺失的多核苷酸与多核 苷酸的5’端之间的距离之差等于零或1个核苷酸，则多态性、等位基因或双等位 标记就在多核苷酸的“中心”上。如果这个差距等零于到3个核苷酸，就认为多态 性“在中心的1个核苷酸以内”。如果这个差距等零于到5个核苷酸，就认为多态 性“在中心的2个核苷酸以内”。如果这个差距等于零到7个核苷酸，就认为多态 性“在中心的3个核苷酸以内”，如此类推。
本文所用的术语“ 上游”指从特定参考点面向多核苷酸5’端的位置。
本文所用的术语“ 碱基配对”和“Watson & Crick碱基配对”在本文是互通 的，指由于序列同一性可通过氢键相互结合的核苷酸，例如在双螺旋DNA中可以发 现胸腺嘌呤或尿嘧啶残基通过两个氢键与腺嘌呤残基连接，而胞嘧啶残基通过三个 氢键与鸟嘌呤残基连接(参看Stryer，L.，Biochemistry，第4版，1995年)。
本文所用的术语“ 互补的”或“其补体”指能够在整个互补区与另一个特异 性多核苷酸形成Watson & Crick碱基配对的多核苷酸序列。该术语适用于多核苷 酸对，它们仅基于其序列而非基于两个多核苷酸实际结合的任何一组特定条件。
术语“ D-氨基酸氧化酶基因”，使用时包括编码本发明任何D-氨基酸氧化酶蛋 白质的基因组、mRNA和cDNA序列，包括基因组DNA的非翻译调节区。
术语“ g34872基因”，使用时包括编码任何g34872蛋白质的基因组、mRNA和 cDNA序列，包括基因组DNA的非翻译调节区。
术语“ D-天冬氨酸氧化酶基因”，使用时包括编码任何D-天冬氨酸氧化酶蛋白 质的基因组、mRNA和cDNA序列，包括基因组DNA的非翻译调节区。
本文所用的术语“ 13q31-q33相关双等位标记”涉及一组位于人染色体 13q31-q33区内的双等位标记。术语13q31-q33相关双等位标记包括美国专利申请 号09/539,333与国际专利申请号PCT/IB00/00435中表6b所公开的全部双等位标 记，及与其连锁不平衡的任何双等位标记，以及表6c(同一个美国专利申请号 09/539,333与国际专利申请号PCT/IB00/00435)所公开的任何双等位标记，及与 其连锁不平衡的任何双等位标记，两件申请资料纳入其整体内容作为参考。本发明 优选的染色体13q31-q33相关双等位标记等位基因包括(同一个美国专利申请号 09/539,333与国际专利申请号PCT/IB00/00435)表6b各自公开的每一个等位基因 或由所列等位基因全部可能的组合组成的组。
本文所用的术语“ D区相关双等位标记”涉及一组与染色体13q31-q33区的亚 区(本文称为D区)连锁不平衡的双等位标记。术语D区相关双等位标记包括美国专 利申请号09/539,333与国际专利申请号PCT/IB00/00435中表6b所公开的双等位 标记A1到A242、A249到A251、A257到A263、A269到A270、A278、A285到A299、 A303到A307、A324、A330、A334到A335、A346到A357和A361到A489，以及与 标记A1到A242、A249到A251、A257到A263、A269到A270、A278、A285到A299、 A303到A307、A324、A330、A334到A335、A346到A357和A361到A489连锁不平 衡的任何双等位标记，两件申请公开的资料纳入其整体内容作为参考。
本文所用的术语“ sbg1相关双等位标记”涉及一组与sbg1基因或sbg1核苷 酸序列连锁不平衡的双等位标记。术语sbg1相关双等位标记包括美国专利申请号 09/539,333与国际专利申请号PCT/IB00/00435中表6b所公开的双等位标记A85 到A219，以及与其连锁不平衡的任何双等位标记，两件申请公开的资料纳入其整 体内容作为参考。
本文所用的术语“ g34665相关双等位标记”涉及一组与g34665基因或sbg1 核苷酸序列连锁不平衡的的双等位标记。术语g34665相关双等位标记包括表6b 所公开的双等位标记A230到A236，以及与其连锁不平衡的任何双等位标记。
术语“ 多肽”指氨基酸的聚合物，与聚合物的长度无关；所以，肽、寡肽和 蛋白质都包括在多肽的定义内。该术语也不指定或排除多肽的表达后修饰，例如， 与糖基、乙酰基、磷酸基团、脂类基团等共价连接的多肽明确包括在术语多肽中。 该定义还包括含有一个或多个氨基酸类似物(例如，包括非天然存在的氨基酸、只 在不相关生物系统中天然存在的氨基酸、来自哺乳动物系统经过修饰的氨基酸等) 的多肽、带有取代键以及本领域技术公知的其它修饰的多肽，无论是天然存在或非 天然存在。
本文所用的术语“ 非人动物”指任何不是人的脊椎动物、鸟类，通常指哺乳 动物，最好是灵长目动物、家畜，如猪、山羊、绵羊、驴和马、兔或者啮齿目动物， 最好是大鼠或小鼠。本文所用的术语“动物”用于指任何一种脊椎动物，最好是哺 乳动物。术语“动物”和“哺乳动物”明确包括人受试者，除非前面带有术语“非 人动物”。
本文所用的术语“ 抗体”指包括至少一个结合结构域的多肽或多肽群，其中 抗体结合结构域通过折迭抗体分子的可变区而形成，与内表面形状及电荷分布形成 三维结合空间，该空间与抗原的抗原决定子的特征互补，可以与抗原进行免疫反应。 抗体包括重组蛋白质，所述蛋白质包括结合结构域，以及片段，而片段包括Fab、 Fab’、F(ab)2和F(ab’)2片段。
本文所用的“ 抗原决定子”是决定抗原—抗体反应特异性的部分抗原分子， 在本发明指sbg1多肽。“表位”指多肽的抗原决定子。一个表位在空间构象中可包 括至少3个氨基酸，而一个表位就有唯一一个空间构象。通常，一个表位包括至少 6个这样的氨基酸，较常见包括至少8-10个氨基酸。确定组成表位的氨基酸的方 法包括X射线结晶学、二维核磁共振及表位作图法，例如Geysen等人(1984年)、 PCT公开号WO84/03564及PCT公开号WO84/03506所述的肽扫描法。
在2000年3月30日提交、题为“与精神分裂症有关的基因、蛋白质及双等 位标记”的共同待批美国专利申请号09/539,333与共同待批国际专利申请号 PCT/IB00/00435对“变异型和片段”、“核酸或多肽之间的同一性”、“严谨杂交条 件”、“能够在重组的细胞宿主和转基因动物中使sbg1核酸序列的时空表达定向的 DNA构造体”作了详细和完整的叙述，以上两件申请公开的资料均纳入其整体内容 作为参考。
g34872和D-氨基酸氧化酶多核苷酸的基因组序列
本发明特别优选的g34872核酸包括分离的、纯化的或重组的多核苷酸，其包 含，或者基本上由或由一段连续跨距组成，该跨距至少为12、15、18、20、25、 30、35、40、50、60、70、80、90、100、150、200、500或1000个核苷酸或其补 体，它们在美国专利申请号09/539,333的SEQ ID No：1的核苷酸位点213818 到243685上(美国专利申请号09/539,333与国际专利申请号PCT/IB00/00435公 开的资料纳入其整体内容作为参考)。
本发明的D-氨基酸氧化酶多核苷酸如本发明的SEQ ID No：1所叙述。本发明 特别优选的核酸包括分离的、纯化的或重组的多核苷酸，其包含，或者基本上由或 由一段连续跨距组成，该跨距至少为12、15、18、20、25、30、35、40、50、60、 70、80、90、100、150、200、500或1000个核苷酸，它们在SEQ ID No：1在核 苷酸位点6000到86600上。本发明核酸包括任何一种来源的D-氨基酸氧化酶核酸， 包括灵长类动物、非人灵长类动物、哺乳动物和人D-氨基酸氧化酶核酸。
本发明的较优选核酸包括分离的、纯化的或重组的多核苷酸，其包含一段连 续跨距，该跨距至少为12、15、18、20、25、30、35、40、50、60、70、80、90、 100、150、200、500或1000个SEQ ID No：1的核苷酸或其补体，其中所述连续 跨距包含与D-氨基酸氧化酶相关的双等位标记。所述双等位标记任选地选自包含 24-1443/126、24-1457/52或24-1461/256的组。所述双等位标记优选是24- 1461/256。
需要注意的是，本章节所述的多核苷酸包括任何尺寸和序列的核酸片段。
所以，本发以分离的、纯化的或重组的多核苷酸进行实施例，所述多核苷酸 含有一段核苷酸序列，其选自由D-氨基酸氧化酶基因(SEQ ID No：1)的外显子或 其互补序列组成的组。优选纯化的、分离的或重组的多核苷酸含有至少一个D-氨 基酸氧化酶基因的外显子，或其互补序列或其片段或变异型。本发明还包括纯化的、 分离的或重组的核酸，其含有至少2个D-氨基酸氧化酶基因的外显子的组合，所 述外显子选自由外显子Z、A、B、C、Ulong、U、V、Z、2、3、4、5、6、7、8、9、 10、11和11long组成的组，其中多核苷酸按照SEQ ID No：1的同一对应次序排 列在核酸内。
本发明特别优选的核酸包括分离的、纯化的或重组的多核苷酸，其包含一段 连续跨距，该跨距至少为12、15、18、20、25、30、35、40、45、50、55、60、 65、70、75、80、90、100或200个SEQ ID No：1的核苷酸或其补体。
本发明的另一个目的在于一种纯化的、分离的或重组的多核苷酸，在以上所 述的严谨杂交条件下与SEQ ID No：1的D-氨基酸氧化酶核苷酸序列、或其互补序 列或其变异型杂交。
本发还包括纯化的、分离的或重组的多核苷酸，所述多核苷酸含有一核苷酸 序列，其选自由D-氨基酸氧化酶基因(SEQ ID No：1)的内含子或其互补序列组成 的组。
在另一实施例中，本发明包括D-氨基酸氧化酶基因及D-氨基酸氧化酶基因组 序列，其由或基本上由SEQ ID No：1的核苷酸位点的序列，其互补序列以及其片 段和变异型组成，或者包含SEQ ID No：1的核苷酸位点的序列，其互补序列以及 其片段和变异型。
本发明还包括一种纯化的、分离的或重组的多核苷酸，其包含一段D-氨基酸 氧化酶核苷酸序列，所述序列与SEQ ID No：1的核苷酸、或其互补序列或其片段 具有至少70、75、80、85、90或95％同一性。
这些核酸及其片段和变异型可用作寡核苷酸引物或探针，以检测测试样本中 所含的g34782、D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶核酸序列的拷贝，或用以扩 增g34782、D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶核酸序列或相邻区内的靶核苷酸 序列。
本发明的其它优选核酸包括分离的、纯化的或重组的D-氨基酸氧化酶多核苷 酸，其包含一段连续跨距，该跨距至少为12、15、18、20、25、30、35、40、45、 50、55、60、65、70、75、80、90、100或200个SEQ ID No：1的核苷酸或其补 体，其中所述的连续跨距含有至少一个双等位标记。所述的连续跨距任选地含有一 个与D-氨基酸氧化酶相关的双等位标记。需要注意的是，本章节所述的多核苷酸 包括任何尺寸和序列的核酸片段。所述双等位标记可含有原始型或变换型等位基 因。
本发明的其它核酸包括分离的、纯化的或重组的多核苷酸，其包含一段连续 跨距，该跨距至少为12、15、18、20、25、30、35、40、50、60、70、80、90、 100、150、200或500个核苷酸，达到这样的程度以致所述的跨距与SEQ ID No：1 的核苷酸位点范围一致，其中所述的连续跨距包含至少1、2、3、5或10个SEQ ID No：1的下列核苷酸位点：215820到215941、216661到217009、230409到290721、 231272到231411、234202到234321、240528到240567、240528到240827和240528 到240996，或其补体，以及与所述的跨距有至少70、75、80、85、90或95％核苷 酸同一性的多核苷酸和能够与所述的跨距杂交的多核苷酸。
本发明还包括一种纯化的、分离的或重组的多核苷酸，其编码具有SEQ ID No： 7-10任何之一的氨基酸序列的D-氨基酸氧化酶蛋白质，或其多肽片段或变异型。
虽然本节题为“sbg1基因组序列”，但要注意本节所述的多核苷酸也包括任何 尺寸和序列的核酸片段，使基因组序列sbg1位于其中一侧或者两段或多段这样的 基因组序列之间。
D-氨基酸氧化酶cDNA序列
业已表明，D-氨基酸氧化酶基因的表达可产生几种mRNA。SEQ ID No：2-6所 示为对应这些mRNA的几段cDNA序列。本发明包括一种纯化的、分离的或重组的核 酸，其包含一选自SEQ ID No：2-6的核苷酸序列、其互补序列、其剪接变异型以 及其等位基因变异型和片段。此外，本发明优选的多核苷酸包括纯化的、分离的或 重组的D-氨基酸氧化酶cDNA，其由或基本上由一选自SEQ ID No：2-6的核苷酸序 列组成，或者包含一选自SEQ ID No：2-6的核苷酸序列。本发明特别优选的多核 苷酸包括分离的、纯化的或重组的多核苷酸，其包含一段连续跨距，该跨距至少为 8、12、15、18、20、25、30、35、40、50、60、70、75、80、100、200或500个 核苷酸，达到这样的程度以致所述的连续跨距与SEQ ID No：2-6或其补体的长度 一致。
需要注意的是，本节所述的多核苷酸也包括任何尺寸和序列的核酸片段。
本发明还涉及纯化的或分离的核酸，该核酸含有的多核苷酸与选自由SEQ ID No：2-6组成的组的多核苷酸，或其互补序列，或其生物活性片段，具有至少70、 80、85、90或95％核苷酸同一性，有利的为99％核苷酸同一性，优选的为99.5％核 苷酸同一性，最好的为99.8％核苷酸同一性。
本发明的另一个目的涉及纯化的、分离的或重组的核酸，该核酸含有一在本 文所限定的严谨杂交条件下与选自由SEQ ID No：2-6组成的组的多核苷酸、或其 互补序列或其变异型或生物活性片段进行杂交的多核苷酸。SEQ ID No：2-6的D- 氨基酸氧化酶cDNA型式在序列表中有进一步的叙述。
用来分离特定D-氨基酸氧化酶cDNAs或进行基因分型的引物列在SEQ ID No： 1中。D-氨基酸氧化酶的双等位标记及其基因分型的引物列在SEQ ID No：1、24、 26和29中。g34872多核苷酸列在SEQ ID No：14和16中。g34872双等位标记 99-16105-152列在SEQ ID No：12，g34872双等位标记99-5919-215列在SEQ ID No： 13中，其中还叙述制备的引物。g34872的cDNA列在SEQ ID No：14中，而用在双 杂交实验中的多核苷酸列在SEQ ID No：16。
本发明还鉴定了取自各种组织的cDNA序列中的新外显子和变异，它们列为SEQ ID No：1的外显子11long、Z、A、B、C和UL，并列在SEQ ID No：2-6的多核苷 酸中。D-氨基酸氧化酶多肽的新型式列在SEQ ID No：8-10中。
这些变异型表示D-氨基酸氧化酶较罕见的新型式，它们最好用来筛选中枢神 经系统障碍的治疗方法所用的组合物。
需要注意的是，本节所述的多核苷酸也包括任何尺寸和序列的核酸片段，使 g34872、D-氨基酸氧化酶和D-天冬氨酸氧化酶基因组序列位于其中一侧或者两段 或多段这些基因组序列之间。
D-氨基酸氧化酶和D-天冬氨酸氧化酶拮抗剂
本文所用的术语“拮抗剂”指抑制D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶将D- 氨基酸底物转化为相应的.α.-酮酸的酶反应。拮抗剂可分为竞争性、非竞争性、 无竞争性、变构性或不可逆性D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶的酶活性抑制 剂。术语D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶的“活性”或“酶活性”指上述的 酶反应。拮抗剂可按D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶的活性抑制程度进行分 类。优选的拮抗剂使D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶的活性下降至少10％、 20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或95％。抑制的效果也可以抑制常数或 Ki(M)值表示。优选的拮抗剂的Ki(M)值少于5×10-2、1×10-2、5×10-3、1×10-3、 5×10-4、1×10-4、5×10-5、1×10-6、5×10-7、1×10-7。需要注意的是，Ki(M) 值与抑制效果成反比，即Ki(M)值下降，抑制效果增大。所以，拮抗剂也可按它 们对D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶的特异性来分类。本发明包括抑制D-氨 基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶的活性但不抑制其它人黄素蛋白(对羟基苯甲酸 盐羟化酶、胆固醇氧化酶和葡萄糖氧化酶)或者其它人黄素蛋白的Ki(M)数值大于 1×10-2、5×10-2的拮抗剂。由定义可知，通用术语“拮抗剂”和“抑制剂”可 互通使用，表示以上所限定的抑制D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶活性的任 何一种组合物。另外，可按本说明书所述独立地列出拮抗剂或抑制剂的具体类别， 例如竞争性抑制剂。
迄今为止，已研究了超过200种D-氨基酸氧化酶和D-天冬氨酸氧化酶抑制剂。 D-氨基酸氧化酶和D-天冬氨酸氧化酶拮抗剂可选自以上所提供的组合物，或者本 领域已知的，或用本文所述或本领域已知的方法制备的其它拮抗剂。另外，D-氨基 酸氧化酶和D-天冬氨酸氧化酶拮抗剂可向市场上的供应商购买。没有任何限制作 用的用于本发明的化合物的例子见表I。D-氨基酸氧化酶和D-天冬氨酸氧化酶拮抗 剂还包括选自由包括以下组合物组的组合物家族：本文所提供的竞争性抑制剂组合 物、不可逆抑制剂组合物、以一般式I、一般式II、一般式III、一般式IV、一般 式V和一般式VI表示的组合物及其亚组。较优选的以一般式I-VI表示的典型组合 物及其亚组包括但不限于下文详细说明。
以一般式I表示的组合物或其药学上可接受的盐类以包括下列结构式的结构 表示：
式中，
a)A是烷基，例如甲基、乙基、丙基或丁基；支链烷基，例如异丁基、异丙 基、异戊基或者环烷基，例如环丙基、环戊基或环己基。这些基团本身可 由C1-C6烷基、卤素、羟基或氨基取代；
b)X是氧或氮；
c)Ar是芳香族单环、双环或三环稠合杂环，其中环或者未取代或者1至5位 上由氢、卤素、羟基、-CN、COR2、--CONR2R3、--S(O)nR2、--OPO(OR2)OR3、 --PO(OR3)R3、--OC(O)NR2R3、--COOR2、--CONR2R3、--SO3H、--NR2R3、--NR2COR3、 --NR3COOR3、--SO2NR2R3、--N(R2)SO2R3、--NR2 CONR2R2、--SO2NHCOR2、 --CONHSO2R2、--SO2NHCN、--OR1、C1-C6直链或支链烷基或链烯基、或者由一 个或多个卤素、羟基、氨基、羧基、羧酰胺、腈、硝基、烷氧基、三氟甲 基、硫、磺酸盐、膦酸盐、磷酸盐、Ar1、N3或其组合取代的C1-C6支链或 直链烷基或链烯基，其中杂环含有1-6个选自由氧、氮、硫及其组合组成 的组的杂原子；
d)R4是H、烷基、Ar1、O、取代的烷基；
e)R1是(C1-C6)烷基、Ar1、(C1-C4)烷氧基羰基甲基、取代的烷基；
f)R2和R3各自独立地是氢、C1-C6直链或支链烷基或链烯基、或者由一个或多 个卤素、羟基、氨基、羧基、羧酰胺、腈、硝基、烷氧基、三氟甲基、硫、 磺酸盐、膦酸盐、磷酸盐、Ar1、N3取代的C1-C6支链或直链烷基或链烯基； 以及
g)Ar1是单环、双环或三环、碳环或杂环，其中环或者未取代或者1至3位上 由卤素、羟基、硝基、三氟甲基、C1-C6直链或支链烷基或链烯基、C1-C4 烷氧基、C1-C4链烯氧基、苯氧基、苄氧基、氨基、或其组合取代；其中单 个环的大小是3-7个原子；而且杂环含有1-6个选自由氧、氮、硫及其组 合组成的组的杂原子。
优选的以一般式I表示的组合物或其药学上可接受的盐类是一般式Ia的组合 物或其药学上可接受的盐类，其包括下列结构式：
式中，
a)A和B由碳或氮组成，D可含有0-2个由碳或氮组成的原子；
b)W是C1-C4烷基，如(CH2)n、支链烷基；
c)n是0-4。此外，当n＝0时假定-NHR2与B共价键合；
d)X是氧或氮；
e)R2是氢、烷基、Ar1、或氧取代的烷基；
f)R1是(C1-C6)烷基、Ar1、(C1-C4)烷氧羰基甲基或取代的烷基；
g)Ar是芳香族单环、双环或三环稠合杂环，其中环或者未取代或者1至6位 上由卤素、羟基、硝基、三氟甲基、C1-C6直链或支链烷基或链烯基、C1-C4 烷氧基、C1-C4链烯氧基、苯氧基、苄氧基、氨基、C3-C6环烷基或其组合取 代；其中单个环的大小是5-6个原子；而且杂环含有1-6个选自由氧、氮、 硫及其组合组成的组的杂原子；以及
h)Ar1是单环、双环或三环、碳环或杂环，其中环或者未取代或者1至3位上 由卤素、羟基、硝基、三氟甲基、C1-C6直链或支链烷基或链烯基、C1-C4 烷氧基、C1-C4链烯氧基、苯氧基、苄氧基、氨基、或其组合取代；其中单 个环的大小是3-7个原子；而且杂环含有1-6个选自由氧、氮、硫及其组 合组成的组的杂原子。
优选的以一般式Ia表示的组合物或其药学上可接受的盐类是一般式Ib的组 合物或其药学上可接受的盐类，其包括下列结构式：
式中，
a)A、G、K、J、E是六元碳环或杂环芳族环的原子，其中杂环含有1-6个选 自由碳、氮及其组合组成的组的杂原子；
b)A、G、K、J、E可各自独立地是未取代或由氢、卤素、羟基、-CN、COR2、 --CONR2R3、--S(O)nR2、--OPO(OR2)OR3、--PO(OR3)R3、--OC(O)NR2R3、--COOR2、 --CONR2R3、--SO3H、--NR2R3、--NR2COR3、--NR3COOR3、--SO2NR2R3、 --N(R2)SO2R3、--NR2CONR2R2、--SO2NHCOR2、--CONHSO2R2、--SO2NHCN、--OR1、 C1-C6直链或支链烷基或链烯基取代，或者由一个或多个卤素、羟基、氨基、 羧基、羧酰胺、腈、硝基、烷氧基、三氟甲基、硫、磺酸盐、膦酸盐、磷 酸盐、Ar1、N3取代的C1-C6支链或直链烷基或链烯基；
c)R1是CN、COR2、--CONR2R3、--S(O)nR2、--OPO(OR2)OR3、--PO(OR3)R3、 --OC(O)NR2R3、--COOR2、--CONR2R3、--SO3H、--NR2R3、--NR2COR3、--NR3COOR3、 --SO2NR2R3、--N(R2)SO2R3、--NR2CONR2R2、--SO2NHCOR2、--CONHSO2R2、 --SO2NHCN、SCN、COCO2H、C1-C6直链或支链烷基或链烯基、或者由一个或多 个卤素、羟基、氨基、羧基、羧酰胺、腈、硝基、烷氧基、三氟甲基、硫、 磺酸盐、膦酸盐、磷酸盐、Ar1、N3取代的C1-C6支链或直链烷基或链烯基；
d)W是N、(CH2)x、或-NCH2；
e)x＝0-4；
f)n＝0-2；
g)R2和R3各自独立地是氢、C1-C6直链或支链烷基或链烯基、或者由一个或多 个卤素、羟基、氨基、羧基、羧酰胺、腈、硝基、烷氧基、三氟甲基、硫、 磺酸盐、膦酸盐、磷酸盐、Ar1、N3取代的C1-C6支链或直链烷基或链烯基； 以及
h)Ar1是单环、双环或三环、碳环或杂环，其中环或者未取代或者1至3位上 由卤素、羟基、硝基、三氟甲基、C1-C6直链或支链烷基或链烯基、C1-C4 烷氧基、C1-C4链烯氧基、苯氧基、苄氧基、氨基、或其组合取代；其中单 个环的大小是5-6个原子；而且杂环含有1-6个选自由氧、氮、硫及其组 合组成的组的杂原子。
以一般式I、Ia和Ib表示的组合物或其药学上可接受的盐类的具体例子包括 但不限于以下化合物：
a)苯甲酸；
b)2-氨基苯甲酸盐；
c)3-氨基苯甲酸盐；
d)4-氨基苯甲酸盐；
e)水杨酸；
f)N-甲基烟酸盐；
g)6-甲基烟酸甲酯；
h)2-甲基烟酸乙酯；
i)氨基苯甲酸盐；
j)2-氨基苯甲酸乙酯；
k)2-氨基苯甲酸甲酯；
l)吡啶甲酸盐；
m)2-吡啶羧酸乙酯；
n)3-甲基苯甲基硫氰酸盐；
o)苯基丙酮酸；
p)苯基乙醛酸；
q)1-甲基吡啶鎓-3-羧酸盐；
r)贝氟沙酮(Befloxatone)；(5R)-5-(甲氧基甲基)-3-[4-[(3R)-4，4，4-三 氟-3-羟基丁氧基]苯基]-2-恶唑烷酮；
s)丁氨苯丙酮；1-(3-氯苯基)-2-[(1，1-二甲基乙基)氨基]-1-丙酮；
t)可铁宁(Cotinine)；1-甲基-5-(3-吡啶基)-2-吡咯烷酮；
u)度洛西汀(Duloxetine)；(γS)-N-甲基-γ-(1-萘氧基)-2-噻吩丙胺；
v)芬戊二醇；2-(4-氯苯基)-4-甲基-2，4-戊二醇；
w)氟伏沙明(Fluvoxamine)；(E)-5-甲氧基-1-[4-(三氟甲基)苯基]-1-戊酮 O-(2-氨基乙基)肟；
x)Iproclozide；4-(氯苯氧基)乙酸2-(1-甲基乙基)酰肼；
y)异丙烟肼；4-吡啶羧酸2-(1-甲基乙基)酰肼；
z)左法哌酯(levophacetoperane)；α-苯基-2-哌啶甲醇乙酸盐；
aa)咯利普兰(Rolipram)；4-[3-(环戊氧基)-4-甲氧基苯基]-2-吡咯烷酮；
bb)反苯环丙胺(Tranylcypromine)；(1R，2S)-rel-2-苯基环丙胺；及
cc)米那普仑(Milnacipran)；(1R，2S)-rel-2-(氨基甲基)-N，N-二乙基- 1-苯基环丙烷羧酰胺。
以一般式II表示的组合物或其药学上可接受的盐类以包括下列结构式的结构 表示：
式中，
a)W＝(CH2)n；
b)n＝0-5；
c)Z是氧或羟基；
d)Y＝H、Ar1、R4(CH2)x、R1S(CH2)x--、R1SO(CH2)x--、R1SO2(CH2)x--、R1SO3(CH2)x--、 HNR1SO2(CH2)x--、R1R2N(CH2)x、R1O(CH2)--、CF3或OH；
e)x＝0-6；
f)R1、R2和R3各自独立地是氢、C1-C6直链或支链烷基、或者由一个或多个卤 素、羟基、氨基、羧基、羧酰胺、腈、硝基、烷氧基、三氟甲基、硫、磺 酸盐、膦酸盐、磷酸盐、Ar1取代的C1-C6支链或直链烷基；
g)R4是卤素、CN、N3、C1-C6直链或支链烷基、或者由一个或多个卤素、羟基、 硝基、烷氧基、三氟甲基、磺酸盐、膦酸盐、磷酸盐、Ar1、--COR1、--COOR1、 --CONR1R2、CN、--NR1、--NR1R2、--SR1、--SO2NHCN或者N3取代的C1-C6支 链或直链烷基；以及
h)Ar1是单环、双环或三环、碳环或杂环，其中环或者未取代或者1至3位上 由卤素、羟基、硝基、三氟甲基、C1-C6直链或支链烷基或链烯基、C1-C4 烷氧基、C1-C4链烯氧基、苯氧基、苄氧基、氨基、或其组合取代；其中单 个环的大小是5-6个原子；而且杂环含有1-6个选自由氧、氮、硫及其组 合组成的组的杂原子。
较优选的以一般式II表示的组合物或其药学上可接受的盐类是一般式IIa的 组合物或其药学上可接受的盐类，其包括下列结构式：
式中，
a)Y是Ar1；
b)Z是羰基或羟基；
c)W是(CH2)n，其中(n＝0、1或2)，R3＝H；以及
d)Ar1是单环、双环或三环、碳环或杂环，其中环或者未取代或者1至3位上 由卤素、羟基、硝基、三氟甲基、C1-C6直链或支链烷基或链烯基、C1-C4 烷氧基、C1-C4链烯氧基、苯氧基、苄氧基、氨基、或其组合取代；其中单 个环的大小是5-6个原子；而且杂环含有1-6个选自由氧、氮、硫及其组 合组成的组的杂原子。
以一般式II和IIa表示的组合物或其药学上可接受的盐类的具体例子包括但 不限于以下化合物：
a)2-氧代-丙酸；
b)5-胍基-2-氧代-戊酸；
c)2-氧代-琥珀酰胺酸；
d)2-氧代-琥珀酸；
e)3-巯基-2-氧代-丙酸；
f)3-(1H-咪唑-4-基)-2-氧代-丙酸；
g)3-甲基-2-氧代-戊酸；
h)氧代-乙酸；
i)4-氨基甲酰-2-氧代丁酸；
j)2-氧代-戊二酸；
k)4-甲基-2-氧代-戊酸；
l)6-氨基-2-氧代-己酸；
m)4-甲基硫烷基-2-氧代-丁酸；
n)2-氧代-3-苯基丙酸；
o)3-羟基-2-氧代-丙酸；
p)3-羟基-2-氧代-丁酸；
q)3-(1H-吲哚-3-基)-2-氧代-丙酸；
r)3-(4-羟基-苯基)-2-氧代-丙酸；
s)3-甲基-2-氧代-丁酸；
t)2-羟基丁酸；
u)3-羟基丁酸；以及
v)3-氧代戊二酸。
以一般式III表示的组合物或其药学上可接受的盐类以包括下列结构式的结 构表示：
式中，
a)A和B一起形成一个5-8元饱和或部分不饱和杂环，其含有至少一个处于 化学稳定氧化状态的附加杂原子O、S、SO、SO2、NH、或NR1；
b)V是O、OR1、NR2、NR1R2、CHR1R2、CH2R3、CHR3R4或CH2N3；
c)R1和R2各自独立地是氢、C1-C6直链或支链烷基、或者由一个或多个卤素、 羟基、氨基、羧基、羧酰胺、硝基、烷氧基、三氟甲基、硫、磺酸盐、膦 酸盐、或Ar1取代的C1-C6支链或直链烷基；
d)R3和R4或者是卤素、C1-C6直链或支链烷基、或者由一个或多个羟基、氨基、 羧基、羧酰胺、硝基、烷氧基、三氟甲基、硫、磺酸盐、膦酸盐、Ar1、 --OC(O)R1、--COOR1、--CONR1R2、CN，NR1、NR1R2、SR1、SO2NHCN或N3取代 的C1-C6支链或直链烷基；以及
e)Ar1是单环、双环或三环、碳环或杂环，其中环或者未取代或者1至3位上 由卤素、羟基、硝基、三氟甲基、C1-C6直链或支链烷基或链烯基、C1-C4 烷氧基、C1-C4链烯氧基、苯氧基、苄氧基、氨基、或其组合取代；其中单 个环的大小是5-6个原子；而且杂环含有1-6个选自由氧、氮、硫及其组 合组成的组的杂原子。
以一般式III表示的组合物的具体例子包括但不限于胱硫醚酮亚胺和环硫堇。
较优选的以一般式III表示的组合物或其药学上可接受的盐类是一般式IV的 组合物或其药学上可接受的盐类，其以包括下列结构式的结构表示：
式中，
a)W-Y-Z-A-B包括六元饱和或部分饱和碳环或杂环，其中杂环含有选自由氧、 氮、硫及其任意组合组成的组的杂原子；
b)B是C、CH或N；
c)A、W、Y、Z各自独立地是CH2、CHR3、CR3R4、O、S、SO、SO2、NH、NR1、NR1R2或C＝O；
d)V是O、OR1、NR2、NR1R2、CHR1R2、CH2R3、CHR3R3或CH2N3；
e)R1和R2各自独立地是氢、C1-C6直链或支链烷基、或者由一个或多个卤素、 羟基、氨基、羧基、羧酰胺、腈、硝基、烷氧基、三氟甲基、硫、磺酸盐、 膦酸盐、磷酸盐或Ar1取代的C1-C6支链或直链烷基；
f)R3和R4各自独立地是卤素、--OC(O)R1、--COOR1、--CONR1R2、CN、--NR1、 --NR1R2、--SR1、--SO2NHCN、N3、C1-C6直链或支链烷基、或者由一个或多 个卤素、羟基、硝基、烷氧基、三氟甲基、磺酸盐、膦酸盐、Ar1、--OC(O)R1、 --COOR1、--CONR1R2、CN，--NR1、--NR1R2、--SR1、--SO2NHCN或N3取代的 C1-C6支链或直链烷基；以及
g)Ar1是单环、双环或三环、碳环或杂环，其中环或者未取代或者1至3位上 由卤素、羟基、硝基、三氟甲基、C1-C6直链或支链烷基或链烯基、C1-C4 烷氧基、C1-C4链烯氧基、苯氧基、苄氧基、氨基、或其组合取代；其中单 个环的大小是5-6个原子；而且杂环含有1-6个选自由氧、氮、硫及其任 意组合组成的组的杂原子。
以一般式IV表示的组合物或其药学上可接受的盐类的具体例子包括但不限 于：氨基乙基半胱氨酸酮亚胺(2H-1，4-噻嗪-5，6-二氢-3-羧酸)、硫代吗啉-2- 羧酸、羊毛硫氨酸酮亚胺和1，4-硫代吗啉-3，5-二羧酸。
以一般式V表示的组合物或其药学上可接受的盐类以包括下列结构式的结构 表示：
式中，
a)Z是O或NH；
b)R1是(C1-C6)烷基、Ar1、或者(C1-C4)烷氧基羰基甲基；
c)X、Y各自独立地是氢、Ar1、(C1-C6)烷基(可由杂原子断开或取代，如氮、 磷、氧、硫或硅，杂原子本身可由(C1-C3)烷基取代一次或多次)、(C2-C6) 链烯基、(C1-C6)卤代烷基、或卤素。当X和Y各自都是碳时，它们可共价 结合形成一种饱和或部分不饱和独立地由碳、氮、氧和硫组成的3-8元碳 环化合物，此外，环的原子本身可以是未取代或由卤素、羟基、羧基、硝 基、三氟甲基、C1-C6直链或支链烷基或链烯基、C1-C4烷氧基、C1-C4链烯 氧基、苯氧基、苄氧基、氨基、取代的烷基、Ar1或其组合取代；
d)R2是氢、烷基、Ar1或氧取代的烷基；以及
e)Ar1是单环、双环或三环、碳环或杂环，其中环或者未取代或者1至3位上 由卤素、羟基、硝基、三氟甲基、C1-C6直链或支链烷基或链烯基、C1-C4 烷氧基、C1-C4链烯氧基、苯氧基、苄氧基、氨基、或其组合取代；其中单 个环的大小是3-7个原子；而且杂环含有1-6个选自由氧、氮、硫及其任 意组合组成的组的杂原子。
优选的以一般式V表示的组合物或其药学上可接受的盐类是以一般式Va表示 的组合物或其药学上可接受的盐类，其包括下列结构式：
式中，
a)*＝不对称中心，及
b)R1＝(C1-C6)烷基、Ar1、(C1-C4)烷氧羰基甲基及
c)X是氢、(C1-C6)烷基(可由杂原子断开或取代，如氮、磷、氧、硫或硅， 杂原子本身可由(C1-C3)烷基取代一次或多次)、(C2-C6)链烯基、(C1-C6)卤 代烷基、卤素或Ar1；
d)R2是氢、烷基、Ar1或氧取代的烷基；
e)Ar1是单环、双环或三环、碳环或杂环，其中环或者未取代或者1至3位上 由卤素、羟基、硝基、三氟甲基、C1-C6直链或支链烷基或链烯基、C1-C4 烷氧基、C1-C4链烯氧基、苯氧基、苄氧基、氨基、或其组合取代；其中单 个环的大小是3-7个原子；而且杂环含有1-6个选自由氧、氮、硫及其任 意组合组成的组的杂原子。
较优选的以一般式V表示的组合物或其药学上可接受的盐类包括以一般式Vb 表示的组合物或其药学上可接受的盐类，其包括下列结构式：
式中，
a)X和Y各自是碳；
b)X和Y以3-8个碳原子的饱和或部分饱和环连接，这样一个环本身的1至5 位上可由卤素、羟基、羧基、氨基、硝基、氰基、三氟甲基、C1-C6直链或 支链烷基或链烯基、C1-C4烷氧基、C1-C4链烯氧基、或取代的烷基取代；
c)R1是(C1-C6)烷基、Ar1或(C1-C4)烷氧羰基甲基；
d)R2是氢、烷基、Ar1或氧取代的烷基；以及
e)Ar1是单环、双环或三环、碳环或杂环，其中环或者未取代或者1至3位上 由卤素、羟基、硝基、三氟甲基、C1-C6直链或支链烷基或链烯基、C1-C4 烷氧基、C1-C4链烯氧基、苯氧基、苄氧基、氨基、或其组合取代；其中单 个环的大小是3-7个原子；而且杂环含有1-6个选自由氧、氮、硫及其任 意组合组成的组的杂原子。
较优选的以一般式Vb表示的组合物包括连接X和Y的3-6元环。
较优选的以一般式V表示的组合物或其药学上可接受的盐类是以一般式Vc表 示的组合物或其药学上可接受的盐类，其包括下列结构式：
式中，
a)X、Y各自独立地是氢、Ar1、(C1-C6)烷基(可由杂原子断开或取代，如氮、 磷、氧、硫或硅，杂原子本身可由(C1-C3)烷基取代一次或多次)、(C2-C6) 链烯基、(C1-C6)卤代烷基、或卤素如萘基或苯基；
b)R2是氢、烷基、Ar1或氧取代的烷基；以及
c)Ar1是单环、双环或三环、碳环或杂环，其中环或者未取代或者1至3位上 由卤素、羟基、硝基、三氟甲基、C1-C6直链或支链烷基或链烯基、C1-C4 烷氧基、C1-C4链烯氧基、苯氧基、苄氧基、氨基、或其组合取代；其中单 个环的大小是3-7个原子；而且杂环含有1-6个选自由氧、氮、硫及其任 意组合组成的组的杂原子。
较优选的以一般式VI表示的组合物或其药学上可接受的盐类以包括下列结构 式的结构表示：
式中，
a)R1是(C1-C6)烷基、Ar1或(C1-C4)烷氧羰基甲基；
b)R2是氢、烷基、Ar1或氧取代的烷基；
c)Y是氢、Ar1、(C1-C6)烷基(可由杂原子断开或取代，如氮、磷、氧、硫或 硅，杂原子本身可由(C1-C3)烷基取代一次或多次)、(C2-C6)链烯基、(C1-C6) 卤代烷基、或卤素；以及
d)X是烷基或苯基。
在较优选的以一般式VI表示的组合物中，Y是Ar1。在另一较优选的以一般式 VI表示的组合物中，Y是苯基、萘基、3-甲酰吲哚、咪唑或吡唑。
本发明的其它化合物包括但不限于：(不可逆或自杀型抑制剂)：2-氧代-戊炔 酸盐、丹酰氯、丹酰氟、炔丙基甘氨酸、N-乙酰基-炔丙基甘氨酸、O-(2，4-二硝 基苯基)羟胺、1-氯-2-硝基乙烷、1，2-环己二酮、烯丙基甘氨酸、N-氯-D-亮氨酸、 苯基乙二醛、溴丙酮酸乙酯、溴丙酮酸甲酯和溴丙酮酸盐。较优选的化合物包括但 不限于：甲基乙二醛双(脒基腙)、肼基羧亚氨基酰胺、丙酮醛双(脒腙)、3-(3-吲 哚基)丙酸、3-吲哚-乙酸、吲哚-3-丙酮、吲哚-3-乙酰胺、吲哚-3-乙酰基-L-天冬 氨酸、吲哚-3-乙酰基-L-丙氨酸、吲哚-3-乙酰基甘氨酸、吲哚-3-羧酸、吲哚-3- 丙酮酸、丹酰基甘氨酸、丙氨酸四唑、四唑、核黄素5’-焦磷酸盐、5-羟基-2-羟 甲基-4-吡喃酮、羟胺盐酸盐、四氢-4-苯基-4H-1，4-噻嗪1-氧化物、吩噻嗪、3， 4-二氢-2H-1，4-噻嗪-3，5-二羧酸、硝呋莫司(1-((5-硝基亚糠基)氨基)-2-甲基 四氢-1，4-噻嗪-4，4-二氧化物)、2-氨基-2，4-戊二烯酸盐、2-氨基-4-酮-2-戊 烯酸盐、N-乙酰基-D-亮氨酸、D-Leu(D-2-氨基-4-甲基戊酸)、孕酮(4-孕烯-3， 20-二酮)、FAD(黄素腺嘌呤二核苷酸)、6-OH-FAD(黄素腺嘌呤二核苷酸)、N-(1- 羧乙基)-L-丙氨酸、3-氨基天冬氨酸、硫代氨甲酰酰肼、5-S-半胱氨酰多巴胺、磷 脂酰丝氨酸、4-羟基-2-巯基6-甲基嘧啶、4-氨基-N-2-噻唑基苯磺酰胺、硫氰酸 盐、2-巯基-1-甲基咪唑、酒石酸、2-氨基乙硫醇、S-腺苷甲硫氨酸和硫脲。
可用本领域已知的方法对本文或表I所列的没有限制作用的化合物作出变换 或衍生，生成下列一种或多种化合物：a)前药；b)具有高酶活性的化合物；c)对 D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶具有特异性的化合物；d)毒性低的化合物； 或者e)没有不希望的副作用的化合物。测定D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶 活性的方法已为本领域所公知，可用本文所公开或本文引用的参考文献所公开的方 法进行。以下所有引用作举例说明D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶拮抗剂的 参考文献均纳入其整体内容作为参考。
用作举例说明的D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶拮抗剂
a)2-氧代-3-戊炔酸盐；(Biochemistry 1999年5月4日；38(18)：5822- 8)。
b)氨基胍；(J Neurochem 1998年3月；70(3)：1323-6)。
c)苯甲酸盐(苯甲酸)及其盐(例如，苯甲酸钠)；(Neurosci Lett 1996年11 月8日；218(3)：145-8)。
d)邻、间和对氨基苯甲酸盐类(J.Biochem.(东京)1976年11月，80(5)： 1101-1108)。
e)甲基乙二醛双(脒基腙)(MGBG)；苯基乙二醛双(脒基腙)(PhGBG)；乙二醛 双(脒基腙)(GBG)；(Anticancer Drug Des 1996年10月；11(7)：493-508)。
f)α-酮酸，所述α-酮酸是氨基酸丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、苯甘 氨酸，酪氨酸、色氨酸、丝氨酸、天冬氨酸盐等的类似物(例如，丙酮酸、 α-酮异戊酸、4-甲基硫代-2-氧代戊酸、4-甲基硫代-2-氧代丁酸、苯基丙 酮酸、吲哚-3-丙酮酸、苯甲酰基甲酸、4-羟基苯基丙酮酸及其盐类和衍生 物)，吲哚-丙酸、3-吲哚-乙酸、水杨酸及其盐类和衍生物(Enzyme Microb Technol 1996年4月；18(5)：379-82)。
g)丹酰氯；(FEBS Lett 1995年4月25日；363(3)：307-10)。
h)丙氨酸四唑和苯甲酸四唑；(Res Commum Chem Pathol Pharmacol 1994年 2月；83(2)：209-22)。
i)核黄素5’-焦磷酸盐(RPP)；(Anal Biochem 1992年5月1日；202(2)： 348-55)。
j)D-炔丙基甘氨酸(D-PG)；(J Biochem(Tokyo)1991年1月；109(1)：171-7)。
k)D，L-β-羟基丁酸盐；(J Histochem Cytochem 1991年1月；39(1)：81- 6)。
l)葫芦巴碱，即N-烟酸甲酯；(J Biochem(东京)1990年5月；107(5)： 726-31)。
m)曲酸及其盐类；(J Biol Chem 1989年2月15日；264(5)：2509-17)。
n)O-(2，4-二硝基苯基)羟胺；(Biochemistry 1987年3月24日；26(6)： 1717-22)。
o)苯甲酸盐；(D’Silva，C.，Willams，C.H.，Jr.，&Massey，V.(1986) Biochemistry 25，5602-5608)。
p)对硝基苯磺酸甲酯；(J Biol Chem 1984年5月10日；259(9)：5585-90)。
q)氨基乙基半胱氨酸-酮亚胺(2H-1，4-噻嗪-5，6-二氢-3-羧酸)；1，4-噻嗪 衍生物，酮亚胺还原形式(硫代吗啉-2-羧酸和硫代吗啉-2，6-二羧酸)；
(Biochim Biophys Acta 1983年10月17日；748(1)：40-7)。
r)半胱胺和溴丙酮酸盐的反应产物；(J Appl Biochem 1983年8-10月；
5(4-5)：320-9)。
s)1-氯-1-硝基乙烷；(J Biol Chem 1983年1月25日；258(2)：1136-41)。
t)苯甲酸盐；氨基苯甲酸酸；吡啶甲酸盐；L-亮氨酸；(J Biol Chem 1982 年9月10日；257(17)：9958-62)。
u)氟二硝基苯；(Nishino，T.，Massey，V.，和Williams，C.H.，Jr.(1980) J Biol Chem 255，3610-3616)。
v)1，2-环己烷二酮；(Eur J Biochem 1981年10月；119(3)：553-7)。
w)烯丙基甘氨酸；2-氨基-2，4-戊二烯酸盐；2-羟基-2，4-戊二烯酸盐；
(Biochemistry 1978年12月26日；17(26)：5620-6)。
x)2-氨基-4-酮-2-戊烯酸盐；(Biochemistry 1978年12月26日；17(26)： 5613-9)。
y)D，L-2-羟基丁酸盐；(J Cell Biol 1978年4月；77(1)：59-71)。
z)对氨基苯甲酸盐；(J Bichem(Tokyo)1976年11月；80(5)：1073-83)。 aa)N-氯-D-亮氨酸；(J Biol Chem 1976年10月10日；251(19)：6150- 3)。
bb)D-炔丙基甘氨酸；(Biochemistry 1976年7月13日；15(14)：3070- 6)。
cc)D-2-氨基-4-戊炔酸(D-炔丙基甘氨酸)；(J Biochem(Tokyo)1975年 7月；78(1)：57-63)。
dd)孕酮(Biochim Biophys Acta 1978年1月12日；522(1)：43-8)。
ee)长链、中链和短链游离脂肪酸(Biochem Int 1990年12月；22(5)： 837-42)。
ff)6-OH-FAD(Biochim Biophys Acta 1999年4月12日；1431(1)：212-22)。
gg)苯基乙二醛，L-酒石酸盐(Eur J Biochem 1992年4月1日；205(1)： 127-32)。
hh)环硫堇，TMDA，α-α’-亚氨基二丙酸(Physiol Chem Phys Med NMR 1986； 18(1)：71-4)。
ii)J Histochem Cytochem 1990年9月；38(9)：1377-81所公开的抑制剂。
jj)内消旋二氨基琥珀酸(Eur J Biochem 1981年7月；117(3)：635-8)。
kk)氨基硫脲、硫脲、甲基硫脲嘧啶、磺胺噻唑、硫氰酸盐和甲硫咪唑 (Endocrinol Exp 1976；10(4)：243-51)。
ll)二羧基羟酸(Enzymologia 1967年12月31日；33(6)：325-30)。
mm)苹果酸和酒石酸(Boll Soc Ital Biol Sper 1966年1031日；42(20)： 1455-7)。
需要指出的是，本发明的D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶拮抗剂包括以 上列出及整份说明书所列出的化合物，以及这些化合物的盐类和衍生物。
调节D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶的表达和/或活性的化合物的筛选方法 可用来测试拮抗化合物在抑制或降低D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶多 肽或者抑制或减少D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶基因产物(mRNA或多肽)的 表达的能力的方法已为本领域所公知。用于筛选方法的合适的D-氨基酸氧化酶和 D-天冬氨酸氧化酶多肽包括重组的D-氨基酸氧化酶和D-天冬氨酸氧化酶或从组织 (狗肾)纯化而来的D-氨基酸氧化酶和D-天冬氨酸氧化酶。优选的D-氨基酸氧化酶 和D-天冬氨酸氧化酶多肽及用来制备所述多肽的多核苷酸是图1和2所示的人D- 氨基酸氧化酶和D-天冬氨酸氧化酶序列。本发明优选的拮抗剂是图1和2所示的 多肽拮抗剂。本发明较优选的拮抗剂能抑制D-氨基酸的氧化脱氨基作用。本发明 较优选的拮抗剂能抑制D-丝氨酸或D-天冬氨酸盐的氧化脱氨基作用。本文所述和 本领域已知的测定D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶酶活性的分析可在体外或 体内进行。
本发明的拮抗剂包括天然存在和合成化合物以及小分子。本发明的拮抗剂可 阻断D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶与其辅助因子、FAD或底物结合或者阻 断酶活性例如D-氨基酸的氧化脱氨基作用。采用本领域公知的D-氨基酸氧化酶或 D-天冬氨酸氧化酶活性的测定方法可确定本发明任何一种候选拮抗剂是否能增强 或抑制D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶的活性。一种筛选方法包括使含有D- 氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶多肽的样本与测试化合物接触，在底物存在下 分析D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶的活性。将D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨 酸氧化酶的活性水平与不含测试化合物的样本比较，D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨 酸氧化酶的活性水平较标准低，显示候选化合物是D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸 氧化酶的拮抗剂。D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶的活性可在一种分离的或 纯化的酶或在含有表达D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶的细胞或组织的生物 样本中测定。
此外，本领域技术人员能够鉴定抑制D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶基 因产物(mRNA或多肽)的表达的化合物。使表达D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化 酶的细胞(例如，肝脏、肾或脑细胞)在有或没有测试化合物的情况下培育。通过测 定有或没有测试化合物时D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶基因产物的表达水 平或者在有或没有测试化合物时D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶的活性水 平，可鉴定抑制D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶基因产物的表达的化合物。 另外，可将含有可操作地连接于报导基因的D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶 调节序列的构造体(例如，萤光素、氯霉素乙酰转移酶、LacZ、绿萤光多肽、β牛 乳糖等)引入宿主细胞，并检测测试化合物对报导基因表达的影响。适用于上述分 析的细胞包括但不限于：与组织同一来源的细胞或多肽已知得到表达的细胞系(例 如，肾、肝脏和脑)。在mRNA水平上(例如采用RNA印迹、RT-PCR，优选用对感兴 趣的D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶mRNA具有特异性的引物和探针进行定量 RT-PCR)或者在多肽水平上(通过测定D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶的酶活 性或在免疫分析如ELISA或放射性免疫分析、蛋白质印迹、免疫化学法中用多克隆 或单克隆抗体)，可实现定量分析D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶多肽的表 达。
另一方面，有一种分析基于细胞的分析，其中使表达D-氨基酸氧化酶或D-天 冬氨酸氧化酶蛋白质或其生物活性部分与测试化合物接触，确定测试化合物抑制、 活化或增加D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶活性的能力。通过监测D-氨基酸 氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶蛋白质或其生物活性部分的生物活性可以确定测试化 合物抑制、活化或增加D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶活性的能力。最好监 测氨基酸氧化。细胞可以源自例如哺乳动物、细菌或酵母菌细胞。例如，一些实施 例的细胞可以是哺乳动物、细菌或酵母菌细胞。
采用本领域已知的组合库方法中众多方法的其中一种可得到本发明的测试化 合物，这些方法包括：生物库、空间可寻址平行固相或液相文库、需要重叠合法 (deconvolution)的合成化学库方法、“一珠粒一化合物(one-bead one- compound)”文库方法；以及应用亲和力层析选择的合成文库方法。生物库方法与肽 库一起使用，而其它四种方法适用于肽、非肽低聚物或小分子化合物库(Lam，K.S. (1997)Anticancer Drug Des.12：145，它所公开的资料纳入其整体内容作为参 考)。
在本领域可找到分子库的合成方法的例子，例如，DeWitt等人，(1993)Proc. Natl.Acad.Sci.U.S.A.90：6909；Erb等人，(1994)Proc.Natl.Acad.Sci. USA91：11422；Zuckermann等人，(1994)J.Med.Chem.37：2678；Cho等人， (1993)Science261：1303；Carrell等人，(1994)Angew.Chem.Int.Ed.Engl. 33：2059；Carell等人，(1994)Angew.Chem.Int.Ed.Engl.33：2061；以及 Gallop等人，(1994)J.Med.Chem.37：1233，这些文献所公开的资料纳入其整 体内容作为参考)。
溶液(例如，Houghten(1992)Biotechniques13：412-421)、或珠粒(Lam(1991) Nature 354：82-84)、芯片(Fodor(1993)Nature364：555-556)、细菌(Ladner U.S. Pat.No.5，223，409)、孢子(Ladner的美国专利号’409)、质粒(Cull等人，(1992) Proc Natl Acad Sci USA 89：1865-1869)或噬菌体(Scott和Smith(1990)Science 249：386-390)；(Devin(1990)Science 249：404-406)；(Cwirla等人(1990)Proc. Natl.Acad.Sci.87：6378-6382)；(Felici(1991)J.Mol.Biol.222：301- 310)；(上述提到的Ladner)可含有化合物库，这些文献所公开的资料纳入其整体 内容作为参考。
例如，将D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶蛋白质或其生物活性部分与放 射性同位素或酶标记偶联，这样，检测复合物中标记的D-氨基酸氧化酶或D-天冬 氨酸氧化酶蛋白质或其生物活性部分可测定D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶 蛋白质或其生物活性部分与其同族靶分子的结合，从而可确定测试化合物抑制D- 氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶活性的能力。D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧 化酶靶分子优选是一种与D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶蛋白质天然结合或 相互作用的分子，以致可实现D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶介导的功能。 在一实施例中，D-氨基酸氧化酶靶分子是g34872多肽。例如，化合物(如D-氨基 酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶蛋白质或其生物活性部分)可用125I、35S、14C或 3H直接或间接标记，通过直接计算放射性放射或计算闪烁来检测放射性同位素。 另一方面，化合物也可用例如辣根过氧化酶、碱磷酸酶或萤光素作酶标记，通过测 定适当底物向产物的转化来检测酶标记。使标记的分子与其同族分子接触，并测定 复合物形成的程度。例如，免疫沉淀复合物或进行凝胶电泳可测定复合物形成的程 度。
无需标记任何一种相互作用的物质而确定化合物(例如D-氨基酸氧化酶或D- 天冬氨酸氧化酶蛋白质或其生物活性部分)与其同族靶分子相互作用的能力也在本 发明的范围内。例如，可用微生理仪检测一种化合物与其同族靶分子的相互作用， 而无需标记该化合物或靶分子(McConnell，H.M.等人(1992)Science 257： 1906-1912，其公开的资料纳入整体内容作为参考)。如细胞传感器等微生理仪是一 种用光可寻址的电位器式传感器(LAPS)测量细胞酸化其环境速度的分析仪器。酸化 速度的变化可作为化合物与受体之间相互作用的指标。
在一优选实施例中，该分析包括使表达或应答D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸 氧化酶蛋白质或其生物活性部分的细胞与靶分子接触，形成分析混合物，使该分析 混合物与测试化合物接触，确定测试化合物抑制或增加D-氨基酸氧化酶或D-天冬 氨酸氧化酶蛋白质或其生物活性部分的活性的能力，其中确定测试化合物抑制或增 加D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶蛋白质或其生物活性部分的活性的能力包 括确定测试化合物抑制或增加表达细胞的D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶的 生物活性的能力(例如，确定测试化合物抑制或增加转导、蛋白质与蛋白质相互作 用、底物结合的能力)。
在另一实施例中，有一种分析基于细胞的分析，其包括使表达D-氨基酸氧化 酶或D-天冬氨酸氧化酶靶分子(即与D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶相互作 用的分子)的细胞与测试化合物接触，确定测试化合物调节(例如分别刺激或抑 制)D-氨基酸化酶或D-天冬氨酸氧化酶靶分子的活性的能力。例如，通过确定D- 氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶蛋白质与D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶 靶分子结合或相互作用的能力可确定测试化合物调节D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨 酸氧化酶靶分子的活性的能力。
确定D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶蛋白质与D-氨基酸氧化酶或D-天 冬氨酸氧化酶靶分子结合或相互作用的能力可用上述测定直接结合的其中一种方 法来实现。在一优选实施例中，测定靶分子活性可确定D-氨基酸氧化酶或D-天冬 氨酸氧化酶蛋白质与D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶靶分子结合或相互作用 的能力。例如，使靶分子与D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶蛋白质或其片段 接触，测定靶分子第二细胞信使(即细胞外Ca2+、甘油二酯、IP3等)的诱导，检测 靶分子在一适当底物的催化/酶活性，检测报导基因(含有靶-反应调节元件，所述 元件可操作地连接于编码可检测标记如萤光素的核酸)的诱导，或者检测靶-调节的 细胞应答，例如信号转导或蛋白质与蛋白质相互作用，可以测定靶分子的活性。
在另一优选实施例中，本发明的一种分析是与细胞无关的分析，该分析使D- 氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶蛋白质或其生物活性部分与测试化合物接触， 确定该测试化合物与D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶蛋白质或其生物活性部 分结合的能力。按照上述方法可直接或间接测定测试化合物与蛋白质的结合。在一 优选实际例中，该分析包括使D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶蛋白质或其生 物活性部分与已知的化合物接触，该已知的化合物与D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨 酸氧化酶(例如D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶靶分子)结合形成分析混合 物，使该分析混合物与测试化合物接触，并确定该测试化合物与D-氨基酸氧化酶 或D-天冬氨酸氧化酶蛋白质相互作用的能力，其中确定测试化合物与D-氨基酸氧 化酶或D-天冬氨酸氧化酶蛋白质相互作用的能力包括测定该测试化合物与已知的 化合物相比，与D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶或其生物活性部分优先结合 的能力。
在另一实施例中，该分析是与细胞无关的分析，其中使D-氨基酸氧化酶或D- 天冬氨酸氧化酶蛋白质或其生物活性部分与测试化合物接触，确定该测试化合物调 节(例如抑制D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶的活性或者激活D-氨基酸氧化 酶或D-天冬氨酸氧化酶的活性)该蛋白质或其生物活性片段的活性。例如，通过上 述测定直接结合的其中一种方法确定蛋白质与靶分子结合的能力可确定测试化合 物调节蛋白质的活性的能力。例如，这可用一种实时生物分子相互作用分析(BIA) 等技术来实现(Sjolander，S.和Urbaniczky，C.(1991)Anal.Chem.63：2338-2345 以及Szabo等人，(1995)Curr.Opin.Struct.Biol.5：699-705，这些文献所 公开的资料纳入其整体内容作为参考)。本文所用的“BIA”是一种实时研究生物特 异性相互作用的技术，无需标记任何一种相互作用的物质(例如BIAcore)。表面等 离子共振仪光学现象的变化可作为生物分子之间实时作用的指标。
在一变换实施例中，通过确定D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶蛋白质进 一步调节D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶靶分子下游效应子的活性的能力可 确定测试化合物调节D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶蛋白质的活性的能力。 例如，利用如前所述方法可测定效应子分子对合适的靶分子的活性或者可测定效应 子与合适的靶分子的结合。
在另一实施例中，该与细胞无关的分析包括使D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸 氧化酶蛋白质或其生物活性部分与已知的化合物接触，该已知的化合物与D-氨基 酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶结合形成分析混合物，使该分析混合物与测试化合 物接触，并确定该测试化合物与D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶蛋白质相互 作用的能力，其中确定该测试化合物与D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶蛋白 质相互作用的能力包括确定D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶蛋白质优先结合 或调节D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶靶分子的活性的能力。
本发明与细胞无关的分析可改为采用可溶性和/或膜结合形式的分离蛋白质 (例如D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶蛋白质或其生物活性部分或者与D-氨 基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶靶分子结合的分子)。在与细胞无关的分析中，若 采用膜结合形式的分离蛋白质，就需要用增溶剂以使膜结合形式的分离蛋白质保持 在溶液中。这些增溶剂的例子包括非离子去污剂，如正辛基葡糖苷、正十二烷基葡 糖苷、正十二烷基麦芽糖苷、辛酰基-N-甲基葡糖酰胺、癸酰基-N-甲基葡糖酰胺、 TritonTM X-100、TritonTM X-114、ThesitTM、异三癸基聚(亚乙基乙二醇醚)正 3-(3-胆酰氨基丙基)二甲基铵基-1-丙烷磺酸盐(CHAPS)、3-(3-胆酰氨基丙基)二甲 基铵基-2-羟基-1-丙烷磺酸盐(CHAPSO)或者N-十二烷基＝N，N-二甲基-3-铵基-1- 丙烷磺酸盐。
在一个以上本发明的上述分析方法实施例中，需要将D-氨基酸氧化酶或D-天 冬氨酸氧化酶蛋白质或靶分子固定，以利于一个或多个蛋白质复合型式与非复合型 式分离，以及适应分析的自动化操作。在任何适合容纳反应物的容器中，在候选化 合物存在或不存在的情况下可完成测试化合物与D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧 化酶蛋白质的结合，或者D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶蛋白质与靶分子的 相互作用。这些容器的例子包括微滴定板、试管和微离心管。一实施例提供了一种 融合蛋白，所述融合蛋白加入了一结构域，可以使一种或两种蛋白质与基质结合。 例如，谷胱甘肽-S-转移酶/D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶融合蛋白或谷胱 甘肽-S-转移酶/靶分子融合蛋白可被吸入谷胱甘肽琼脂糖珠粒(Sigma Chemical， 密苏里州圣路易市)，或者谷胱甘肽衍生化微滴定板，它们在有利复合物形成的条 件(例如，盐和pH值的生理条件)下再与测试化合物或者没有被吸入的靶蛋白质 或者D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶蛋白质结合。培育后，洗涤珠粒或微滴 定板，例如，如上所述，除去任何非结合组分、固定在珠粒的基质、直接或间接测 定的复合物。此外，也可使复合物与基质解离，用标准技术测定D-氨基酸氧化酶 或D-天冬氨酸氧化酶的结合或活性水平。
将蛋白质固定在基质的其它技术也可用在本发明的筛选分析方法中。例如， 用生物素和链霉生物素结合可将D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶蛋白质或者 D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶靶分子固定。生物素化的D-氨基酸氧化酶或 D-天冬氨酸氧化酶蛋白质或靶分子可用本领域公知的技术(例如，生物素化试剂盒， Pierce Chemicals，Rockford，Ill.)由生物素-NHS(N-羟基-琥珀酰亚胺)制备，并 固定在涂有链霉生物素的96孔板(Pierce Chemical)的孔中。另外，与D-氨基酸 氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶蛋白质或靶分子反应但不会干扰D-氨基酸氧化酶或D- 天冬氨酸氧化酶蛋白质与其靶分子结合的抗体可衍生到孔板的孔中，而未结合的靶 分子或D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶蛋白质通过与抗体结合而被收集在孔 中。这些复合物的检测方法除了以上所述关于GST固定化复合物的方法外，还包括 复合物的免疫检测方法，其采用与D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶蛋白质或 靶分子反应的抗体，以及依靠检测与D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶蛋白质 或靶分子相关的酶活性的酶联分析法。
在本发明的另一方面，可用蛋白质作为双杂交或三杂交分析中的“诱饵蛋白 质”(参见美国专利申请号5,283,317；Zervos等人，(1993)Cell 72：223-232； Madura等人，(1993)J.Biol.Chem.268：12046-12054；Bartel等人，(1993) Biotechniques 14：920-924；Iwabuchi等人，(1993)Oncogene 8：1693-1696； 以及Brent的WO94/10300，这些文献所公开的资料纳入其整体内容作为参考)，以 便鉴定与D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶蛋白质结合或相互作用，和/或涉及 D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶蛋白质的活性的其它蛋白质。
双杂交系统基于大部分由分离的DNA结合和活化结构域组成的转录因子的模 块性质。简单地说，这种分析利用两个不同的DNA构造体。在一个构造体中，编码 D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶蛋白质或其片段的基因与编码已知的转录因 子(如GAL-4)的DNA结合结构域的基因融合。在另一个构造体中，来自DNA序列库 并编码未得到鉴定的蛋白质(“捕获物”或“样本”)的DNA序列与编码已知的转录 因子的活化结构域的基因融合。如果“诱饵”和“捕获物”蛋白质能够在体内相互 作用，形成依赖于D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶的复合物，就使转录因子 的DNA结合和活化结构域紧密接近。这种接近使得可操作地连接于应答转录因子的 转录调节位点的报导基因(如LacZ)转录。可检测到报导基因的表达，并且可以使 含有功能性转录因子的细胞克隆分离，用来获得克隆基因，后者编码与D-氨基酸 氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶蛋白质相互作用的蛋白质。
本发明还涉及由上述筛选分析法所鉴定的新型试剂，以及用这些分析法生产 所述试剂的方法。所以，本发明的一实施例包括由这样一种方法得到的化合物或试 剂，该方法包括上述筛选分析(例如基于细胞的分析或与细胞无关的分析)中任何一 种方法的步骤。例如，本发明一实施例包括一种化合物或试剂，它是通过一种方法， 即将表达D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶靶分子的细胞与测试化合物接触， 并确定该测试化合物结合D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶靶分子或者调节D- 氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶靶分子的活性的能力来而得到的。本发明的另 一个实施例包括一种化合物或试剂，它是通过另一种方法，即将表达D-氨基酸氧 化酶或D-天冬氨酸氧化酶靶分子的细胞与D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶蛋 白质或其生物活性部分接触，形成一种分析混合物，再将该分析混合物与测试化合 物接触，并确定该测试化合物与D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶靶分子相互 作用或者调节D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶靶分子的活性的能力而得到 的。本发明的另一个实施例包括一种化合物或试剂，它是通过另一种方法，即将 D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶蛋白质或其生物活性部分与测试化合物接 触，并确定该测试化合物与D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶靶分子结合或者 抑制D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶蛋白质或其生物活性部分的活性的能力 而得到的。本发明的又一个实施例包括一种化合物或试剂，它是通过另一种方法， 即将D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶蛋白质或其生物活性部分与已知的化合 物接触，而所述已知的化合物与D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶蛋白质接触 形成一种分析混合物，再将该分析混合物与测试化合物接触，并确定该测试化合物 与D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶蛋白质相互作用或者调节D-氨基酸氧化酶 或D-天冬氨酸氧化酶蛋白质的活性的能力而得到的。
采用体内筛选也可鉴定抑制D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶的活性或者 抑制D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶基因产物的表达的拮抗剂化合物。在这 些分析中，给动物施加(如静脉、腹膜内、肌内、口服或其它途径)例如各种剂量水 平的测试化合物。分别比较测试动物和表达D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶 的对照动物组织中D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶的活性或基因产物的表达 水平，以确定测试化合物对D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶的活性或基因产 物的表达的影响。合适的动物包括但不限于：啮齿动物(如小鼠和大鼠)和灵长类动 物。人源化的非人动物如人源化的小鼠也可用作测试动物，这就是说，这些动物中 内源性多肽被切除(剔除)并利用标准转基因方法加回同源性人多肽。这些动物只表 达人型式的多肽。
体内分析还包括中枢神经系统障碍的动物模型。这些模型包括但不限于：如 本文所述和本领域所公知的，大鼠模型中的条件性回避行为、沙鼠足踢踏模型、雪 貂呕吐模型、分离诱导的发声模型、在omnitech digiscan动物活动监测器中小鼠 和大鼠的行为活动评估、大鼠模型中安他非明刺激的运动的阻断、大鼠模型中声音 惊吓的前冲动抑制、脱水吗啡诱导的攀爬行为模型的抑制、以及DOI诱导的头部颤 搐和搔抓模型。
本发明的其它拮抗剂包括抑制D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶基因产物 的表达的反义和三螺旋工具。在反义方法中，使与D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸 氧化酶mRNA或基因组序列互补的核酸序列与D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶 mRNA或基因组DNA在细胞外杂交，从而阻断由mRNA编码的D-氨基酸氧化酶或D- 天冬氨酸氧化酶多肽的表达。用于D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶治疗的反 义核酸分子可以是DNA或RNA序列。采用本发明的反义多核苷酸的优选方法是 Sczakiel等人(1995)所述的步骤，它公开的资料纳入其整体内容作为参考。本发 明其它优选的反义多核苷酸是或者与含有启动密码子ATG的D-氨基酸氧化酶或D- 天冬氨酸氧化酶mRNA序列或者与D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶序列互补的 序列。
反义多核苷酸最好含有一些序列，其与含剪接供体或受体位点的D-氨基酸氧 化酶或D-天冬氨酸氧化酶启动密码子(ATG)或基因组DNA互补。本发明的反义多核 苷酸也最好具有被自切割核酶序列所置换的3’聚腺苷酸化信号，以致在其3’端无 需聚腺苷酸化信号就可以产生RNA聚合酶II转录物，这些反义多核苷酸不能由胞 核输出，如Liu等人(1994)所述，它公开的资料纳入其整体内容作为参考。D-氨基 酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶的反义多核苷酸还可在核酶盒中含有一种组蛋白茎 —环结构，以稳定切割转录物抗3’-5’外切核酸酶降解，这样一种结构如Eckner等 人(1991)所述，它公开的资料纳入其整体内容作为参考。
反义核酸的长度和解链温度要足以形成胞内双链体，其稳定性足以抑制双链 体中D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶mRNA的表达。Green等人(1986年)以及 Izant和Weintraub(1984年)揭示了设计适用于D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧 化酶治疗的反义核酸的策略，这些文献所公开的资料纳入其整体内容作为参考。
在一些策略中，反义分子可通过使D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶编码 区的方向与启动子的方向相反来获得，以便转录在细胞中正常转录的反向链。另一 种方法包括通过使含有反义序列的DNA与在适当表达载体的启动子可操作地连接， 在体内转录D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶反义核酸。
另外，与在细胞中正常转录的链互补的寡核苷酸可在体外合成。所以，这些 反义核酸与相应的mRNA互补，能够与mRNA杂交生成双链体。反义序列也可含有修 饰的磷酸糖骨架以增加稳定性，并且使它们对RNA酶活性的灵敏度减少。适用于反 义策略的修饰包括2’O-甲基RNA寡核苷酸和多肽—核酸(PNA)寡核苷酸。其它例子 参见Rossi等人(1991年)所述，它公开的资料纳入其整体内容作为参考。
也可采用与D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶cDNA或基因组DNA互补的 各种形式反义寡核苷酸。例如，可采用本文引用的国际申请WO 94/23026所述的稳 定和半稳定反义寡核苷酸。这些分子的3’端或3’和5’端在互补碱基对之间的分子 内氢键结合。这些分子能够更好地抵抗外切核酸酶攻击，并且具有较常规的反义寡 核苷酸更高的稳定性。
在另一种使用反义技术抑制D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶多肽的表达 的方法中，采用了本文引用的国际申请WO 96/31523所述的共价交联反义寡核苷酸。 这些双链或单链寡核苷酸分别含有一个或多个寡核苷酸间或寡核苷酸内的共价交 联，其中这些交联由一条链的伯胺基团分别与另一条链或同一条链的羧基之间的酰 胺键组成，伯胺基团在链核苷酸单糖环的位置2’上直接取代，而羧基则分别由另 一条链或同一条链的核苷酸或核苷酸类似物上取代的脂肪族分隔基团携带。
还可采用本文引用的国际申请WO 92/18522所公开的反义寡脱氧核苷酸和寡 核苷酸。这些分子不易降解，含有至少一段与调控多肽结合的转录调控识别序列， 作为它们的诱饵(decoy)十分有效。这些分子可含有“发夹”结构、“哑呤形”结构、 “修饰的哑呤形”结构、“交联”诱饵结构及“环形”结构。
另外，还可采用本文引用的欧洲专利申请号0 572 287 A2所述的环形双链寡 核苷酸。这些连接寡核苷酸“哑呤形”含有转录因子的结合位点，并通过遮蔽转录 因子受到该因子的调控来抑制D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶的表达。
本文引用的国际申请WO 92/19732所公开的封闭型反义寡核苷酸也是一种变 换。因为这些分子没有游离端，所以它们比常规寡核苷酸更能够抵抗外切核酸酶降 解。这些寡核苷酸可以具有多种功能，与不与靶mRNA邻接的几个区相互作用。
应用体外表达分析可确定抑制D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶表达所需 的反义核酸的适当水平。用本领域已知的方法通过扩散、注射、感染或转染可将这 些反义分子引入细胞中。例如，反义核酸可以裸露寡核苷酸、质粒中封装的寡核苷 酸、用病毒多肽封装的寡核苷酸序列、或以可操作地连接于表达载体所含的启动子 的寡核苷酸引入到身体中。表达载体可以是本领域已知的各种表达载体中任何一 种，包括逆转录病毒或病毒性载体、能够进行染色体外复制的载体、或整合载体。 这些载体可以是DNA或RNA。
细胞样本可引入许多不同的浓度反义分子，优选为1×10-10M与1×10-4M之间。 一旦确定了能足以调控D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶表达的最小浓度，就 可以将最佳剂量转为适合体内服用的剂量。例如，培养基的抑制浓度为1×10-7M， 转化为剂量约等于0.6毫克/公斤体重。经过测试实验室动物的寡核苷酸毒性后， 发现寡核苷酸水平接近100毫克/公斤体重或以上是可以的。此外，还要考虑除去 脊椎动物的细胞，用反义寡核苷酸治疗，并重新引入到脊椎动物中。
在本发明的一优选实施例中，首先鉴定由D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化 酶编码的多肽，或者测定酶活性，以便可以用某些技术监测反义抑制对翻译的效果， 这些技术包括但不限于：抗体介导的测试，如放射性免疫分析、ELISA、功能性分 析、放射性标记以及测定D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶活性的分析。
本发明所用抑制D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶基因产物的表达的反义 技术的一种变换包括使用核酶，所述核酶通过其互补多核苷酸尾部与D-氨基酸氧 化酶或D-天冬氨酸氧化酶靶序列结合，而且通过水解其靶位点(即“锤头核酶” (hammerhead ribozymes))切割相应的D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶RNA。 简单地说，锤头核酶的简化循环包括(1)通过互补反义序列使序列特异性结合靶D- 氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶RNA；(2)使靶D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧 化酶链的可切割基序进行特异性位点水解；以及(3)释放切割产物，产生另一个催 化循环。锤头核酶的构造和产生已为本领域所公知，Haseloff和Gerlach(Nature 20334：585-591(1988))作了较完整的叙述。事实上，适宜使用长链反义多核苷酸 (长至少30个碱基)或带有长反义臂的核酶。将这些反义核酶与亲脂基团通过共价 键结合或用脂质体作为适当载体，得到反义核酶的优选输送系统。按Rossi等人 (1991)和Sczakiel等人(1995)所述的方法制备本发明的优选反义核酶，具体制备 步骤可参照本文引用的所述文章。
也可用D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶基因组DNA抑制基于胞内三螺旋 形成的D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶基因表达。用三螺旋寡核苷酸抑制基 因组的转录。它们特别适用于研究细胞中D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶活 性的变化。D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶cDNA或基因组DNA或那些序列的 片段可用来抑制患有与特定D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶的表达相关的中 枢神经系统障碍的个体的D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶表达。类似地，部 分D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶基因组DNA可用来研究细胞内D-氨基酸氧 化酶或D-天冬氨酸氧化酶转录的抑制效应。一般认为，同源嘌呤序列在三螺旋策 略中是最有用的。然而，同源嘧啶序列也可用来抑制D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨 酸氧化酶表达。这些同源嘧啶寡核苷酸与同源嘌呤的主沟(major groove)即同源嘧 啶序列结合。
为了用三螺旋方法进行D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶治疗策略，首先 扫描D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶基因组DNA序列，以鉴定一段从10-mer 到20-mer的同源嘧啶或同源嘌呤延伸序列，该序列可用在抑制D-氨基酸氧化酶或 D-天冬氨酸氧化酶表达并基于三螺旋的策略中。鉴定候选同源嘧啶或同源嘌呤延伸 序列后，将含有候选序列的各种含量的寡核苷酸引入表达D-氨基酸氧化酶或D-天 冬氨酸氧化酶的组织培养细胞中，以评估它们抑制D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸 氧化酶表达的效率。按照上述方法监测经过处理的细胞中D-氨基酸氧化酶或D-天 冬氨酸氧化酶酶活性的改变或D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶表达的减少。
如关于反义多核苷酸中所述，利用所述的技术以基于体外结果计算出的剂量 将能有效抑制组织培养细胞中D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶表达的寡核苷 酸导入体内。
在一些实施例中，用α端基异构体取代寡核苷酸单位的天然(β)端基异构体， 产生对核酶具有更大抗性的寡核苷酸。此外，可使溴乙啶等嵌入剂附在α寡核苷酸 3’端上，以稳定三螺旋体。要了解适合形成三螺旋的寡核苷酸的制备方法，可参看 本文的引用文献Griffin等人(Science 245：967-71，1989)。
药学和生理学上可接受的组合物及其给药
利用容易获得的原料，以本领域技术人员公知的常规合成方法可制备本发明 所用的化合物和组合物。另外，本发明实验所用的化合物可购自市场供应商，如 Sigma Chemical Company(密苏里州圣路易市)。
根据本文所述或本领域已知的Nyberg等人的方法(Psychopharmacology 119， 345-348，1995)，对动物进行药理研究可确定D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化 酶拮抗剂的相对活性、功效和特异性。这种测试能估计相对活性、功效，并通过测 量特异性可估计治疗指数。可采用的其它动物研究包括但不限于：本文所述和本领 域已知的涉及条件性回避、脱水吗啡诱导的攀爬、阻断5-羟基-色氨酸诱导的头部 颤搐和搔抓或其它动物模型的研究。虽然对人的临床研究可确定不同病人群体之间 相差的新陈代谢，但Kerr等人(Biochem.Pharmacol.47，1969-1979(1994))) 和Karam等人(Drug Metab.Dispos.24，1081-1087，1996)提供了一些更低廉 和省时的替代方法。类似地，按照Leach等人(Epilepsia 37，1100-1106，1996) 的方法或按照Kerr等人(同上)以及Turner和Renton(Can.J.Physiol. Pharmacol.67，582-586，1989)的体外方法可在临床上评估药物与药物可能的相 互作用。另外，采用各种体外分析方法也可测试D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧 化酶拮抗剂的相对活性、功效和特异性。
有效剂量取决于各种因素而改变，如病人的情况、疾病症状的严重程度、药 物组合物的给药方式。对人患者而言，典型化合物的有效剂量一般要求给每个病人 施加的化合物至少约1毫克/24小时，通常至少约10毫克/24小时，往往至少约 25毫克/24小时。对人患者而言，典型化合物的有效剂量要求给每个病人施加的化 合物一般不超过约500毫克/24小时，通常不超过约400毫克/24小时，往往不超 过约300毫克/24小时。另外，所施加的有效剂量使得化合物在病人血浆中的浓度 在正常情况下不超过500纳克/毫升，往往不超过100纳克/毫升。
本发明的化合物和组合物每日可以约0.1到约1,000毫克的剂量水平施加给 病人。对体重约70公斤的正常成年人而言，估计每日每公斤体重约0.01到约100 毫克是足够的。不过，采用的具体剂量是可以改变的。例如，剂量可取决于多种因 素，包括病人的要求、待治疗的病况严重性、所用化合物的药理活性。一个特定病 人的最佳剂量的确定已为本领域技术人员所公知。有效成分可与载体材料结合配成 单剂量形式，而有效成分的含量取决于待治疗的宿主和给药的具体方式。然而，需 要明白的是，任何一个特定病人的具体剂量水平取决于各种因素，包括所用具体化 合物的活性、年龄、体重、身体状况、性别、饮食、给药时间、给药途径、排泄速 度、药物组合及待治疗的特定疾病的严重性。
在一些实施例中，本发明的实验采用各种组合的D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨 酸氧化酶拮抗剂。所以，含有一种以上D-氨基酸氧化酶拮抗剂的组合物可用在本 发明的治疗方法中。此外，含有一种以上D-天冬氨酸氧化酶拮抗剂的组合物也可 用在本发明所公开的方法中。在另一实施例中，本文公开的治疗方法采用至少一种 D-氨基酸氧化酶拮抗剂和至少一种D-天冬氨酸氧化酶拮抗剂的组合。
本发明方法所用的优选化合物能够通过病人的血脑屏障。故这些化合物能够 进入病人的中枢神经系统。进行本发明所用的典型化合物的logP值一般大于0， 通常约大于1，往往约大于1.5。这些典型化合物的logP值一般约小于4，通常 约小于3.5，往往约小于3。logP值是衡量化合物通过扩散屏障如生物膜的能力。 参见Hansch等人(J.Med.Chem.，Vol.11，p.1，1968)。此外，利用本领域已 知的由旁路通过血脑屏障的组合物和方法(例如美国专利申请号5,686,416； 5,994,392，纳入其整体内容作为参考)可使本发明的组合物由旁路通过血脑屏障， 或者可直接注射入脑内。适当的注射部位包括大脑皮层、小脑、中脑、脑干、下丘 脑、脊髓和心室组织、以及包括颈动脉体和肾上腺髓质在内的外周神经系统区域。 组合物可以大丸剂或通过利用渗透泵等其它方法给药。
本发明的化合物可单独或作为组合物的一部分施加给病人，所述的组合物含 有其它成分，例如本领域公知的赋形剂、稀释剂和载体。组合物可通过口服、直肠、 肠胃外(静脉、肌肉内或皮下)、脑池内、阴道内、腹膜内、膀胱内、局部(粉末、 药膏或液滴)，或者以口腔或鼻喷剂或吸入而给予人和动物。
适合肠胃外注射用的组合物可包括生理学上可接受的无菌或非水溶液、分散 液、悬浮液、乳液、重构为无菌注射液或分散液的无菌粉末。合适的水溶性和非水 溶性载体、稀释剂、溶剂或载色剂包括水、乙醇、多元醇(丙二醇、聚乙二醇、甘 油等)及其合适的混合物，菜油(如橄榄油)和可注射的有机酯如油酸乙酯。例如， 利用膜层如蛋黄素，保持分散液所需的颗粒大小以及利用表面活性剂都可保持适当 的流质。
这些组合物还可含有辅助剂，如防腐剂、湿润剂、乳化剂和分散剂。通过各 种抗菌剂和抗真菌剂，例如对羟苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、山梨酸等，可确保防止 发生微生物作用。也希望组合物包括等渗剂，例如糖类、氯化钠等。采用延迟吸收 的试剂，如单硬脂酸铝和明胶，可导致注射药物形式延长吸收。
口服的固体剂量形式包括胶囊、片剂、丸剂、粉末、和粒剂。这些固体剂量 形式的活性化合物与至少一种常用惰性赋形剂(或载体)，如柠檬酸钠或磷酸氢钙， 或(a)填充剂或添加剂，如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇、硅酸；(b)结合剂， 如羧甲基纤维素、藻酸盐、明胶、聚乙烯基吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯树胶；(c)保 湿剂，如甘油；(d)崩解剂，如琼脂-琼脂、碳酸钙、马铃薯或木薯淀粉、褐藻酸、 某些复合硅酸盐和碳酸钠；(e)阻溶剂，例如石蜡；(f)吸收加速剂，如季铵化合 物；(g)湿润剂，如十六烷基醇和单硬脂酸甘油；(h)吸附剂，如高岭土和斑脱土； 以及(i)润滑剂，如滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、聚乙二醇固体、十二烷基硫酸钠、 或其混合物一起掺合。胶囊、片剂和丸剂的剂量形式还可含有缓冲剂。
利用乳糖或奶糖以及高分子量聚乙二醇等赋形剂，也可用类似形式的固体组 合物作为软填充和硬填充明胶胶囊的填充剂。以膜层和外壳，如肠溶包膜和本领域 公知的其它膜层和外壳，可制备有壳剂量形式，如片剂、糖衣片、胶囊、丸剂和粒 剂。它们可含有遮光剂，而且可以是这样一种组合物，即它们以延迟方式在肠道的 某一部分释放出活性化合物。可采用的包埋组合物的例子是聚合物和蜡。如适用， 活性化合物可与上述一种或多种赋形剂制成微被囊形式。
口服的液体剂量形式包括药学上可接受的乳液、溶液、悬浮液、糖剂和酏剂。 除了活性化合物外，液体剂量形式可含有本领域常用的惰性稀释剂，如水或其它溶 剂、增溶剂和乳化剂，例如乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苯甲醇、苯甲基 苯甲酸盐、丙二醇、1，3-丁二醇、二甲基甲酰胺、油类特别是棉花籽油、花生油、 玉米胚芽油、橄榄树、调和油和芝麻油，甘油、四氢糠醇、聚乙二醇和山梨聚糖的 脂肪酸酯或这些物质的混合物等等。除了这些惰性稀释剂外，组合物还可包括辅助 剂，如湿润剂、乳化剂、悬浮剂、甜味剂、香味剂和芳香料。
悬浮液除了有活性化合物外，还可含有悬浮剂，例如乙氧基化异十八醇、聚 氧乙烯山梨醇和山梨聚糖酯、微晶纤维素、偏氢氧化铝、斑脱土、琼脂-琼脂和西 黄耆胶或这些物质的混合物等等。
直肠给药的组合物最好是栓剂，栓剂可通过将本发明的化合物与适当无刺激 性赋形剂或载体如可可脂、聚乙二醇或栓剂蜡混合而制备，栓剂在常温下是固体， 但在体温时是液体，因而会在直肠或阴道内融化并释放出活性组分。
本发明的化合物局部给药的剂量形式包括药膏、粉末、喷剂和吸入剂。在灭 菌条件下将活性组分与生理学上可接受的载体和可能需要的任何一种防腐剂、缓冲 液或推进剂混合。眼用的制剂、眼膏、粉末和眼药水也包括在本发明的范围之内。
另外，本发明的化合物可以与药学上可接受的溶剂如水、乙醇等配制成非溶 剂化及溶剂化形式。一般认为，用于本发明用途的溶剂化形式相当于非溶剂化形式。
动物模型
大鼠模型中的条件性回避行为
条件性回避模型是预测抗精神病活性的标准行为测试。目前动物临床使用的 抗精神病药物的一个重要药理性质是它们阻断条件性回避反应的能力。例如参见 Cook，L.和Davidson，A.B.：Behavioral pharmacology：Animal models involving aversive control of behavior；M.A.Lipton、A.Dimascio和K.Killam 编辑的In Psychopharmacology，A Generation of Progress，563-567，Raven 出版社，纽约，1978；Davidson，A.B.和Weidley，E.Differential Effects of Neuroleptic and other Psychotropic Agents on Acquisition of Avoidance in Rats，18Life Sci.1279-1284(1976)，这些文献公开的资料纳入其整体内容作 为参考。抗精神病药物条件性回避测试的活性和效力与它们的临床疗效和效力密切 相关。例如参见纳入其整体内容作为参考的文献Creese，I.，Burt，D.R.和Snyder， S.H.：Dopamine receptor binding predicts clinical and pharmacological properties of antischizophrenic drugs.Science(Washington D.C.)192： 481-483，1976。
在条件性回避测试中，动物学习对条件刺激的反应，以回避轻度电震。对条 件刺激的反应称为回避反应，对电震的反应称为逃避反应；反应失败是当动物对条 件性刺激或电震没有反应，这表示运动受损。在绝大多数场合下动物很快学会回避。 抗精神病药物使回避反应的百分比下降，但由于动物确实发出逃避反应，故没有干 扰动物作出反应的能力。将反应失败的百分比看成是衡量运动受损的一个指标。
要求大鼠按住实验箱的一反应杆，以回避或逃避足电震。每一个实验阶段由 50次试验组成。每次试验实验箱都设有灯光和一个最长时间为10秒的调音器 (tone)。对音频有反应立即停止音频和灯光，结束试验。对单独的音频无反应，给 予最长10秒的音频+足电震(2.0毫安)。对电震有反应立即终止电击、音频和灯光， 结束试验。
要筛选药物，在实验开始前以适当的方式在适当的时间30分钟内，如腹膜内 或皮下施加适当的剂量，如3.0毫克/公斤。待处理的一组可以只接受单剂量的D- 氨基酸氧化酶和D-天冬氨酸氧化酶拮抗剂，或者可以在实验前每日处理(例如1日 1次、1日2次或1日3次)至少1日、3日、1星期、2星期、1个月或2个月。如 果药物使回避反应的百分比下降到至少50％而反应失败又不会大于50％，就认为该 药物是有活性的。然后再测定活性药物的剂量—反应曲线。
沙鼠足踢踏(Foot-tapping)
使雄性或雌性蒙古种沙鼠(35-70克)吸入异氟烷/氧气混合物麻醉，露出颈静 脉血管，以便静脉注射5毫升/公斤的测试或对照化合物或介质(vehicle)。测试化 合物还可经口服或皮下或腹膜内途径给予。待处理的一组可以只接受单剂量测试化 合物，或者可以在分析前每日处理(例如1日1次、1日2次或1日3次)至少1日、 3日、1星期、2星期、1个月或2个月。然后在头皮中线切一个小口，露出头骨。 垂直插入有套的27号针至前囱下深4.5毫米，将抗焦虑药(如五肽胃泌素)和/或对 照试剂(盐水、D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶拮抗剂、D-Ser、D-Asp等)直 接注入脑室(例如脑室注射5μl中的3pmol，取决于测试用的物质)。缝合头皮切 口，让动物在透明的有机玻璃箱(25厘米×20厘米×20厘米)中从麻醉状态恢复过 来。然后在大约5分钟内连续记录后足踢踏持续的时间及强度。此外，用类似的定 量分析方法可研究测试化合物抑制由厌恶刺激，如足电震或独处，所引起的足踢踏 的能力。本发明优选的拮抗剂能够抑制沙鼠的诱导性足踢踏。
雪貂呕吐模型
给单独关住的雄性雪貂喂食，口服测试化合物或对照化合物或介质。10分钟 后，给它们喂食约100克罐头猫食物。待处理的一组可以只接受单剂量测试化合物， 或者可以在实验前每日处理(例如1日1次、1日2次或1日3次)至少1日、3日、 1星期、2星期、1个月或2个月。口服药剂后60分钟，以氟烷短暂麻醉，经插入 的颈静脉导管静脉注射顺铂(10毫克/公斤)。移去导管，结扎颈静脉，缝合皮肤切 口。雪貂很快从麻醉状态恢复过来，10-20分钟内就可以活动。注射顺铂后连续4 小时观察动物的麻醉恢复情况。然后人工处死动物。由经过训练的观察人员记录给 予顺铂后4小时期间出现的作呕和呕吐次数。
分离诱导的发声模型
整个研究期间以家庭为组别将雄性和雌性小天竺鼠与它们的母鼠及同窝出生 的仔畜关在一起。当小天竺鼠2周大时断奶后开始实验。进行实验前筛选小天竺鼠， 确保与母亲分隔后能重复发出强烈的声音反应。将小天竺鼠单独放在一个观察笼 (55厘米×39厘米×19厘米)中15分钟，观察笼置于实际上与家庭笼隔离的一间房 内，记录此基线期间发声持续的时间。只选用发声超过5分钟的动物作药物攻击研 究(所有小天竺鼠中约50％未能达到这个标准)。待处理的一组可以只接受单剂量测 试化合物，或者可以在实验前每日处理(例如1日1次、1日2次或1日3次)至少 1日、3日、1星期、2星期、1个月或2个月。如上所述，在测试日社交隔离15 分钟前每只小天竺鼠接受口服剂量或者皮下或腹膜内注射测试化合物或介质，再立 即送回家庭笼与母鼠和兄弟姐妹一起30到60分钟(或者长达口服剂量后4小时， 取决于测试化合物的口服药物动力学)。每只动物在药物治疗日发声持续的时间以 治疗前基线的百分比表示。每只受试动物每周再测试一次，最长达6周。有6至8 只动物一次测试剂量接受一种测试化合物。本发明优选的拮抗剂能有效减弱下文所 限定的小天竺鼠的分离诱导的发声。
在omnitech digiscan动物活动监测器中小鼠和大鼠的行为活动评估
本测试的目的在于评估用于抗精神样中枢神经系统效应和各种一般与中枢神 经系统活动相关的其它行为效应的化合物。这种测试能够确定药物对啮齿动物活动 能力许多方面的影响，包括水平活动(断开光束)、行进的总距离(以厘米计)、移动 的次数、移动的时间(以秒计)、静止时间(以秒计)、垂直活动(断开光束)、垂直移 动的次数、垂直时间(以秒计)、刻板性动作计数(Stereotypy counts)、刻板性动 作发作的次数、刻板性动作的时间(以秒计)、边缘和中心时间(以秒计)、顺时针和 逆时针方向转数以及在活动监测器各个角落所停留的时间(以秒计)不过，一般来 说，以行进的总距离(以厘米计)作为活动能力最准确的衡量指标来评估药物对行为 的影响。。
这些研究用重20到40克的雄性CD-1白化病小鼠(Charles River实验室)或 重150到300克的雄性Sprague-Dawley大鼠(Harlan实验室)。待处理的一组可以 在实验前只接受单剂量测试化合物，或者可以在实验前每日处理(例如1日1次、1 日2次或1日3次)至少1日、3日、1星期、2星期、1个月或2个月。
Omnitech Digiscan动物活动监测器由16英寸×16英寸×12英寸的有机玻璃 室组成，内设两组16个红外线光束传感器，玻璃室底板的四侧每隔1英寸设1个 传感器。另一组光束传感器直接置于较低光束传感器的上面，测量垂直活动。任何 光束的截断应该会使位于监测器主框架中心的发光二极管指示灯发光。在实验开始 前通常对24个监测器中每一个进行诊断性测试，测试时检查所有光束是否有任何 截断。每个活动监测器可用适合在该有机玻璃室内的有机玻璃插板分成4个8英寸 的四分部，其中2个四分部(前左和后右)可用来测试活动。一般来说，这种分割安 排用于小鼠的活动研究(每个分割监测器有2只小鼠)与大鼠的研究(每个未分割监 测器有1只大鼠)作对比。在长达999分钟的时间内可取得多达999个数据样本。 通常，每持续10分钟收集6个小鼠数据样本(1小时的测试)，或者每5分钟收集6 个大鼠数据样本(30分钟的测试)。
一旦将动物放在活动室，就可以使这些活动室各自启动，开始收集数据。由 于黑暗刺激得到的数据较为稳定，所以通常关掉高处的灯光监测活动水平。每次实 验收集以下各种数据(附简单定义)：
变量1：水平活动—在水平传感器出现光束断开的总次数。
变量2：行进的总距离(以厘米计)—由于考虑到任何一次对角线运动，所以它 是一个更为准确的移动性活动指标。
变量3：移动的次数—间隔至少1秒内不连续移动的次数。
变量4：移动的时间(以秒计)—移动的时间段
变量5：静止时间(以秒计)—取样时间与移动所用的时间之差。
变量6：垂直活动—动物直立时在垂直传感器出现光束断开的总次数。
变量7：垂直移动的次数—动物每次直立并断开垂直传感器的次数(间隔至少1 秒)。
变量8、9、10和11：在角落处所停留的时间(左和右前、左和右后)—动物在 很接近笼两面邻接墙所停留的时间。
变量12：垂直时间(以秒计)—直立时断开垂直光束所用的时间。
变量13：刻板性动作计数—重复(刻板性动作)断开同一束光束(或同一组光束) 期间出现光束断开的次数。
变量14：刻板性动作的次数—监测器在间隔至少1秒内观察刻板性动作行为 的次数。
变量15：刻板性动作时间(以秒计)—显示刻板性动作行为的总时间段。
变量16：顺时针方向转数—动物绕至少2英寸直径旋转的次数(不计算较急转 的旋转运动)
变量17：逆时针方向转数—动物绕至少2英寸直径旋转的次数
变量18：边缘时间(以秒计)—动物在很接近有机玻璃笼墙壁处所停留的时间。
变量19：中心时间(以秒计)—动物远离有机玻璃笼墙壁处所停留的时间。
数据可以实际计数、时间(以秒计)、行进的厘米、或者活动能力抑制百分比 相对同时测试的介质处理的对照动物来表示。通过t检验或方差分析和纽曼-库尔 变域测试法(Newman-Keul’s multiple-range test)确定活性相对对照动物的(即 行进的厘米)差异显著。活性水平的刺激以负数表示。用落在剂量—效应曲线直线 部分的至少三个数据点以回归分析法估计预期可能使活性水平下降 50％(ED.sub.50)的剂量以及在该数值左右的95％置信区间。
大鼠模型中安他非明刺激的运动的阻断
阻断安他非明刺激的运动步骤是上述在omnitech digiscan活动监测器中活 动能力方案的一种变化。阻断安他非明刺激的运动步骤使用中枢神经系统刺激剂 d-安他非明来评估多巴胺能试剂的抗精神病活性。
这些研究采用雄性Sprague-Dawley大鼠(Harlan实验室)。待处理的一组可以 在实验前只接受单剂量测试化合物，或者可以在实验前每日处理(例如1日1次、1 日2次或1日3次)至少1日、3日、1星期、2星期、1个月或2个月。对于腹膜 内注射研究，在给药前20分钟给予安他非明，然后进行30分钟活动能力测试。对 于口服研究，在测试前30分钟给药，而在测试前15分钟给予安他非明，这样可以 有充足的时间口服吸收。在16英寸×16英寸的敞开式小室内测量活动能力(每30 分钟测试所行进的厘米)。安他非明产生的运动一般比盐水对照组高2到3倍。药 物的影响以安他非明刺激的运动的反向百分比来表示。用t检验确定与安他非明刺 激的运动相对用安他非明处理的对照动物的差异显著。以回归分析法估计使安他非 明刺激的运动下降50％(ED.sub.50)的剂量及95％置信区间。
大鼠模型中声音惊吓的前脉冲抑制方案
声音惊吓的前脉冲抑制是感觉运动选通(sensorimotor gating)的一种形式， 当一个弱刺激先于惊吓刺激就会发生声音惊吓的前脉冲抑制，导致惊吓反应幅度减 少。精神分裂症患者显示声音惊吓的前脉冲抑制比对照受试者低，与感觉运动选通 的损失一致。所以利用这种现象的动物模型在已知的和潜在的抗精神病药物研究中 十分有用。例如，用诸如脱水吗啡等直接多巴胺激动剂，或者间接多巴胺激动剂安 他非明都可以阻断大鼠的前脉冲抑制，这种效应可用多巴胺拮抗剂如氟哌啶醇拮 抗。
来自Harlan实验室的雄性Sprague-Dawley大鼠(180-280克)以5只为一组关 在一个笼中，使它们处于一个12小时的光/暗循环，能够自由进食和饮水。待处理 的一组可以在实验前只接受单剂量测试化合物，或者可以在实验前每日处理(例如 1日1次、1日2次或1日3次)至少1日、3日、1星期、2星期、1个月或2个月。
本研究使用的惊吓室(SR-LAB，San Diego Instruments)由有机玻璃圆柱筒组 成，它放在有通风设备、声音衰减的密封环境内一个有机玻璃框架上。由设在大鼠 上面的扬声器发出声刺激。有机玻璃框架下面装上一个压电装置，检测和转换开始 声刺激后100毫秒期间圆柱筒内发生的运动。由微电脑和界面组合(San Diego Instruments)记录100毫秒记录窗口(100×1毫秒读数)期间的平均反应。每个惊吓 室之间要相互校准，确保扬声器的性能水平在较大范围的分贝水平(67至125dB) 内一致。用分贝计(例如Radio Shack)评估声水平。调节每个稳定计(它装有压电 装置)，使恒定振动校准器的反应灵敏度相等。
用测试化合物处理的动物可以在实验前只接受单剂量测试化合物，或者可以 在实验前每日处理(例如1日1次、1日2次或1日3次)至少1日、3日、1星期、 2星期、1个月或2个月。每只动物实验前用盐水、测试化合物或对照化合物(例如 脱水吗啡、氟哌啶醇、氯扎平等)预处理。
每个测试阶段开始是5分钟70dB白色噪音的测试适应期。测试阶段总共持 续30分钟；连续进行数个测试，使每一处理组有足够数量的大鼠。第一个和最后 一个试验是只发出120dB脉冲的试验，相隔7到23秒，这期间大鼠很快就适应发 出的噪音。前脉冲抑制的计算不包括这些数据。中间试验由120dB脉冲的单一试 验和以下5种试验组成，其中5种之中的每一种试验以伪随机次序：(1)没有刺激， (2)120dB惊吓前72dB预脉冲100毫秒，(3)120dB惊吓前74dB预脉冲100毫 秒，(4)120dB惊吓前78dB预脉冲100毫秒，以及(5)120dB惊吓前86dB预 脉冲100毫秒。预脉冲(2、4、8和16dB，背景噪音为70dB)持续20毫秒，而惊 吓刺激持续40毫秒。当预脉冲与120dB脉冲配对时，人耳检测不到与只有120dB 脉冲时有明显的声差异。声音惊吓的前脉冲抑制的反射以当2至16dB(相对背景) 预脉冲先于惊吓刺激时所产生的120dB惊吓幅度的抑制百分比来表示。
脱水吗啡诱导的攀爬行为的抑制
在动物药理研究中，通过脱水吗啡诱导的攀爬行为可测试测试化合物的抗精 神病活性(P.Protais等人，″Psychopharmacology″，50，1-6，1976)。研究使用 重22-24克的雄性瑞士小鼠。用测试化合物处理过的动物可以在实验前只接受单剂 量测试化合物，或者可以在实验前每日处理(例如1日1次、1日2次或1日3次) 至少1日、3日、1星期、2星期、1个月或2个月。在时间0点给动物口服测试药 物或25％琼脂。60分钟后，皮下注射1毫克/公斤剂量的脱水吗啡，再过70分钟， 评估动物的行为。每隔10分钟进行2次附加评估。评估时将动物放在垂直小箱 (11×7.5×4.5厘米)底上。除了一个侧表面(宽7.5厘米)是3毫米金属丝网外，箱 的其它墙壁由半透明的甲基丙烯酸酯制成。按照下列标准在2分钟内给动物的位置 计分：0＝4只爪在地上；1＝3只爪在地上；2＝2只爪在地上；3＝1只爪在地上；以及 4＝四只爪握住金属丝网。如果一只动物在2分钟观察期内保持几个位置，就记录每 个位置所保持的秒数。最后，计算平均分数。在这些实验条件下，计算有效剂量 50％(ED.sub.50)的数值。
DOI诱导的头部颤搐和搔抓的抑制
也可以通过1-(2，5-二甲氧基-4-碘苯基)-2-氨基丙烷(DOI)诱导的头部颤搐 和搔抓的抑制试验来测试测试化合物的抗精神病活性(M.Oka等人，″J.Pharm. Exp.Ther.″，264(1)，158-165，1993)。研究使用重22-26克的雄性N.M.R.I.小 鼠。动物称重后，实验前2小时将它们单独放在透明的笼中。用测试化合物处理过 的动物可以在实验前只接受单剂量测试化合物，或者可以在实验前每日处理(例如 1日1次、1日2次或1日3次)至少1日、3日、1星期、2星期、1个月或2个月。
在时间0点给动物口服测试化合物。60分钟时，腹膜内注射3毫克/公斤剂量溶于 盐水的DOI。评估动物头部颤搐和搔抓的次数以及试图逃跑和不逃跑的次数。计算 上述实验条件下所获得的有效剂量50％(ED.sub.50)的数值。
人的临床试验
人的临床试验证实，本发明的D-氨基酸氧化酶和D-天冬氨酸氧化酶拮抗剂对 治疗或减缓精神分裂症、双相性精神障碍或其它中枢神经系统障碍具有活性。例如， 可将一项研究设计为双盲、平行、安慰剂为对照的多中心试验。受试者随机分为4 组，安慰剂和3组测试化合物，3组测试化合物1日3次给药，剂量逐渐增加，例 如25、50和75毫克。给药的方式按本文所述或本领域技术人员常用的方法，如与 食物一起口服。在4次访问中观察受试者，得到基线测量值。其它访问，如第5- 33次访问，作为研究的治疗阶段。
在访问期间，观察受试者精神病行为或双相性行为的迹象，如兴奋、情绪波 动、震颤、精神错乱、不去社交以及精神力集中的能力。以受试者的数目和百分比 对治疗组进行比较，而受试者在双盲部分研究(访问5到33次)中曾经有过症状， 而严重性则差过在基线访问(访问1到4次)期间。
遗传诊断学方法中的D-氨基酸氧化酶、D-天冬氨酸氧化酶及其双等位标记
本发明的D-氨基酸氧化酶和D-天冬氨酸氧化酶基因组和cDNA序列以及双等 位标记也可用来开发一些诊断试验，所述试验能够鉴定表达由特异性基因型导致的 可检测性状的个体，或者其基因型使他们以后有可能发展一种检测性状的个体。采 用本发明诊断学方法来分析的性状可用来诊断任何一种可检测的性状，包括精神分 裂症或双相性精神障碍易感性、可检测性状病发的年龄、对精神分裂症或双相性精 神障碍的治疗有益的反应或与所述治疗相关的副作用。这样一种诊断可用于精神分 裂症或双相性精神障碍的监测、预后和/或预防性或治愈性治疗。
本发明的诊断技术可采用各种方法判断测试受试者是否有与可能逐渐发展一 种可检测性状相关的基因型，或者个体是否由于一种特定的突变而带有一种可检测 的性状，所述方法包括能够分析个体染色体的单倍分型的方法，如家族研究、单个 精子DNA分析或体细胞杂交。
诊断技术涉及人D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶基因内，优选为D-氨基 酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶外显子或编码序列内，所含的特异性等位基因的检 测。更具体地说，本发明涉及一种核酸的检测，所述核酸含有至少一段SEQ ID No： 1至6的核苷酸序列或其片段或其包括多态性碱基的互补序列。
这些方法包括从个体采集核酸样本，确定该核酸样本是否含有至少一个等位 基因或至少一个双等位标记单倍型，这表示有发展性状的风险或者表示该个体表达 由于具有特定的人D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶相关多态性或突变(引起 性状的等位基因)而产生的性状。
在这些诊断方法中，核酸样本最好取自个体，而该样本用本领域已知的或本 文引用文献PCT/IB00/00435的实施例所述的方法进行基因分型。诊断方法也可基 于单个双等位标记或一组双等位标记。
在这些方法中，核酸样本均取自测试受试者，确定一个或以上本发明的双等 位标记的双等位标记模式。
在一实施例中，对核酸样本进行PCR扩增，以便扩增那些与可检测的表型相 关的多态性已被识别的区域。对扩增产物作序列分析，以确定该个体是否具有一种 或多种与可检测的表型相关的人D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶相关多态 性。另外，使核酸样本进行微序列分析反应，以确定个体是否具有一种或多种与可 检测的表型相关的D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶相关多态性，所述的表型 是由于D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶基因组序列的突变或多态性而产生 的。在另一实施例中，使核酸样本与一个或多个等位基因特异性寡核苷酸探针接触， 所述探针和一个或多个与可检测的表型相关的人染色体D-氨基酸氧化酶或D-天冬 氨酸氧化酶相关等位基因特异性杂交。在另一实施例中，使核酸样本与第二个寡核 苷酸接触，所述寡核苷酸与等位基因特异性寡核苷酸一起用在扩增反应时能够产生 扩增产物。扩增反应有扩增产物表示该个体具有一个或多个与可检测的表型相关的 D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶相关等位基因。在一优选实施例中，可检测 的性状是精神分裂症或双相性精神障碍。诊断试剂盒包括本发明的任何一种多核苷 酸。
这些诊断方法非常有用，这是因为它们在某些情况中可用于启动预防性治疗， 或者可使携带显著单倍型的个体预知症兆，如不严重的症状等。
能够分析或预测药物反应或药物副作用的诊断方法可用来确定个体是否应该 用特定药物进行治疗。例如，如果诊断显示个体可能会对用特定药物进行的治疗呈 阳性反应，就可以给个体施加该药物。相反，如果诊断显示个体可能会对用特定药 物进行的治疗呈阴性反应，就要换另一种疗法。阴性反应定义为缺乏有效应答或存 在有毒副作用。
本发明的标记的另一种应用是临床药物试验。用上述方法可鉴定一个或多个 标记，所述标记显示对精神分裂症起作用的药剂或对精神分裂症起作用的药剂副作 用的反应。然后，在这样一种药剂的临床试验中筛选潜在的参与物，以鉴定那些对 药物的反应最有可能呈阳性的个体，排除那些可能有副作用的个体。以这种方式测 量对药物反应呈阳性的个体中药物治疗的效果，由于研究包括不可能呈阳性反应的 个体，所以测量的结果是不会下降的，也没有不希望看到的安全问题的风险。
在防治疾病中的D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶
由于大部分人有自杀倾向，所以对精神分裂症、双相性精神障碍及其它精神 病易感性的检测变得非常重要。故本发明涉及一种精神分裂症或双相性精神障碍或 相关精神障碍的治疗方法，所述方法包括以下步骤：
·选择个体，该个体的DNA含有与精神分裂症或双相性精神障碍相关的一个D- 氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶相关双等位标记或一组D-氨基酸氧化酶或D-天 冬氨酸氧化酶相关标记等位基因；
·跟踪所述个体表现出来与精神分裂症或双相性精神障碍相关的症状；以及
·在疾病的适当阶段给所述个体施加对精神分裂症或双相性精神障碍或其症 状起作用的治疗。
本发明的另一个实施例包括一种精神分裂症或双相性精神障碍的治疗方法， 所述方法包括以下步骤：
·选择个体，该个体的DNA含有与精神分裂症或双相性精神障碍相关的一个D- 氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶相关双等位标记或一组D-氨基酸氧化酶或D-天 冬氨酸氧化酶相关标记等位基因；
·给所述个体施加精神分裂症或双相性精神障碍的预防性治疗。
在又一个实施例中，本发明涉及一种精神分裂症或双相性精神障碍的治疗方 法，所述方法包括以下步骤：
·选择个体，该个体的DNA含有与精神分裂症或双相性精神障碍相关的一个D- 氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶相关双等位标记或一组D-氨基酸氧化酶或D-天 冬氨酸氧化酶相关标记等位基因；
·给所述个体施加精神分裂症或双相性精神障碍的预防性治疗；
·跟踪所述个体的精神分裂症或双相性精神障碍症状的表现和发展；以及可选 择地
·在疾病的适当阶段给所述个体施加对精神分裂症或双相性精神障碍或其症 状起作用的治疗。
要用来确定患病个体的疗程，本发明还涉及一种精神分裂症或双相性精神障 碍的治疗方法，所述方法包括以下步骤：
·选择有精神分裂症或双相性精神障碍的个体，该个体的DNA含有与精神分裂 症或双相性精神障碍或其症状的严重性相关的一个D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸 氧化酶相关双等位标记或一组D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶相关标记等位 基因；以及
·给所述个体施加对精神分裂症或双相性精神障碍或其症状起作用的治疗。
本发明还涉及一群所选的个体的精神分裂症或双相性精神障碍的治疗方法， 所述方法包括以下步骤：
·选择有精神分裂症或双相性精神障碍的个体，该个体的DNA含有一个D-氨基 酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶相关双等位标记或一组D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨 酸氧化酶相关标记等位基因，所述双等位标记与用对精神分裂症或双相性精神障碍 或其症状起作用的有效治疗量的药物进行的治疗呈阳性反应相关；
·和/或该个体的DNA不包含一个D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶相关双 等位标记或一组D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶相关标记等位基因，所述双 等位标记与与用所述药物进行的治疗呈阴性反应相关；
·每隔一段适当时间给所选择的个体施加有效量的所述药物。
在本发明的上下文中，对药物呈“阳性反应”定义为包括疾病相关症状有所 减缓。在本发明的上下文中，对药物呈“阴性反应”定义为包括对药物缺乏阳性反 应，导致症状没有减缓或在施加药物后出现副作用。
本发明也涉及一种受试者是否可能对药物治疗呈阳性反应的判断方法。该方 法包括鉴定对所述药物呈阳性反应的第一组个体以及鉴定对所述药物呈阴性反应 的第二组个体。在对所述药物呈阳性反应的第一组个体中鉴定一个或多个双等位标 记，或者在对所述药物呈阴性反应的第二组个体中鉴定一个或多个双等位标记。这 些双等位标记可用本文所述的技术进行鉴定。
然后，从待测受试者采集DNA样本。对该DNA样本进行分析，确定它是否含 有一个或多个与对药物治疗呈阳性反应相关的双等位标记等位基因，和/或含有一 个或多个与对药物治疗呈阴性反应相关的双等位标记等位基因。
在一些实施例中，如果DNA样本含有一个或多个与对药物治疗呈阳性反应相 关的双等位标记等位基因和/或如果DNA样本缺乏一个或多个与对药物治疗呈阴性 反应相关的双等位标记等位基因，就可以在临床试验中给受试者施加该药物。在优 选实施例中，该药物是对精神分裂症或双相性精神障碍起作用的一种药物。
利用本发明的方法，在可能对药物呈阳性反应的一群个体中评估药物的功效。
本发明的另一方面内容是一种药物的使用方法，该方法包括从受试者采集DNA 样本，判断DNA样本是否含有一个或多个与对药物呈阳性反应相关的双等位标记等 位基因和/或判断DNA样本是否含有一个或多个与对药物呈阴性反应相关的双等位 标记等位基因，如果DNA样本含有一个或多个与对药物呈阳性反应相关的双等位标 记等位基因和/或如果DNA样本缺乏一个或多个与对药物呈阴性反应相关的双等位 标记等位基因，就给受试者施加该药物。
本发明也涉及一种药物最好是对精神分裂症或双相性精神障碍或其症状起作 用的药物的临床试验方法。该方法包括以下步骤：
·给一组异源个体施加一种药物，最好是一种容易对精神分裂症或双相性精神 障碍或其症状起作用的药物；
·鉴定对所述药物呈阳性反应的第一组个体以及鉴定对所述药物呈阴性反应 的第二组个体；
·鉴定对所述药物呈阳性反应的所述第一组个体的双等位标记；
·选择一些个体，其DNA含有与对所述药物呈阳性反应相关的双等位标记；以 及
·给所述个体施加所述药物。
精神分裂症或双相性精神障碍的任何一种预防、诊断和治疗方法包括药物的 使用方法、药物的临床试验方法、判断受试者是否可能对药物治疗呈阳性反应的方 法。
一般认为这样一些方法对提高某些药物给予的效益/风险比值有显著效果，而 这些药物的给予可能会引起不希望看到的副作用和/或即使正常给予对部分病人也 不起作用。
一旦个体被诊断为有精神分裂症或双相性精神障碍，就进行选择测试以确定 该个体的DNA是否含有一个双等位标记或一组双等位标记等位基因，而所述双等位 标记与对治疗呈阳性反应或包括副作用或无反应在内的对治疗呈阴性反应相关。
通过以上所述的检测方法选择用本发明方法进行治疗的病人。选择的病人最 好是那些DNA不含有与对治疗呈阴性反应相关的一个双等位标记或一组双等位标 记等位基因。弄清个体对特定药物无反应或有副作用的基因倾向，医生就可以给予 适当药物直接治疗精神分裂症或双相性精神障碍或其症状。
一旦确定了病人的基因倾向，医生就可以为病人选择不会出现或者只在边上 出现的阴性反应特别是副作用的适当治疗。
本发明的双等位标记已被证实与精神分裂症或双相性精神障碍相关。不过， 本发明的相关精神障碍，特别是相关的中枢神经系统障碍的预防、诊断、管理和治 疗方法还包括本文所述任何一种利用本发明的双等位标记的预防、诊断、预后和治 疗方法。
实施例
用于细菌和酵母菌中蛋白质表达的质粒的构建
用pET11a载体(Stratagen)进行没有标志(tag)的重组蛋白质的表达。以对应 ORF极限的引物利用PCR技术(TaqPlusPrecision System，Stratagen)得到具有适 当位点(5’是Nde1，3’是HindIII)的编码序列。
使所产生的PCR产物(Qiaquick PCR，Qiagen)纯化，用Nde1和HindIII消化， 凝胶纯化(Microspin，PolyLabo)，并接合到以相同的酶开始的载体中。将这些构 造体转染到DH10B细菌宿主(Gibco BRL)，提取质粒DNAs，并作序列分析以选择合 适的编码序列。
以pESC-LEU穿梭载体(Stratagen)构建用于酵母菌中人D-氨基酸氧化酶和 g34872表达的质粒。
没有标志的重组g34872的表达和纯化
然后，使质粒转染到BL21(DE3)CodonPlus RIL细菌宿主(Stratagen)，让细 菌在0.8升LB培养基中生长，直至A600吸光度达到0.7。加入1mM异丙基-1- 硫代-β-D-吡喃葡萄苷诱导融合蛋白的表达，再培养多3小时。制备细菌沉淀，立 即急冻(-80℃)，再在30℃水浴解冻；加入2mM AEBSF。将细菌细胞悬浮于25毫 升BugBuster提取剂(Novagen)中，补充蛋白酶抑制剂混合物(SetIII，Calbiochem) 和10mM EGTA。悬浮液室温培养30分钟，再加入苯甲酸酶(Novagen)，并连续培 养15分钟。溶胞产物在4℃以10,000×g离心30分钟。通过盐沉淀使细菌蛋白 质与上清液分离。将对应35-55％硫酸铵饱和溶液的蛋白质沉淀溶解在2毫升50mM pH8 TrisHCl缓冲液/含有10mM DTT的50mM氯化钠中，离心澄清溶液，并装在 Ultragel AcA44(Pharmacia)层析柱(1.6×65厘米)中，用20mM pH8 TrisCl缓 冲液/50mM氯化钠缓冲液平衡。以电泳分析洗脱的蛋白质，合并含有MN2R蛋白质 的馏分，超滤浓缩(截留分子量为10K，Biomax-15，Sigma)。再将蛋白质装在 DEAE-Macroprep(Bio-Rad)层析柱(1×2厘米)中，用20mM pH8 TrisCl平衡，用线 性盐梯度洗脱(0到1M氯化钠，20柱体积)。合并含有MN2R蛋白质的馏分，超滤浓 缩(截留分子量为10K)，并装在Superdex 75(Pharmacia)层析柱(1×27厘米)中， 用20mM pH8 TrisCl缓冲液平衡。合并单一个主峰的馏分，浓缩至5毫克/毫升， 4℃储存。电泳纯化的同源蛋白质的产率通常是每升细菌培养基5毫克。根据制造 商(NuPage by Novagen)的建议，使蛋白质在10％NuPage订制凝胶中进行变性电泳， 使用MES/SDS电泳凝胶缓冲液。分子量标记See-Blue来自Invitrogen。用考马斯 亮蓝G胶体溶液(Sigma)染色后观察蛋白质。
猪肾的天然D-氨基酸氧化酶的纯化
从Sigma购买猪肾D-氨基酸氧化酶的粗制剂。蛋白质溶于50mM pH8 TrisCl(10 毫升配1克)；离心澄清溶液并装在Sephadex G-50培养层析柱(2.6×40厘米)中， 用10mM pH8 TrisCl/100mM氯化钠平衡。再将脱盐后的蛋白质超滤(截留分子量 为30K，Biomax-15，Sigma)浓缩3倍，用10mM pH8 TrisCl/100mM氯化钠/1mM DTT/10mM ATP平衡，并装在不含ATP的同一种缓冲液中的DEAE-琼脂糖层析柱 (1.6×7厘米)中。所述层析柱先以2柱体积10mM pH8 TrisCl/100mM氯化钠洗涤， 再用1柱体积10mM pH8 TrisCl/125mM氯化钠洗涤，然后用10mM pH8 TrisCl/150 mM氯化钠缓冲液洗脱。分析馏分的D-氨基酸氧化酶的酶活性，合并馏分，超滤浓 缩。接着，将蛋白质装在Ultragel AcA44层析柱(1.6×65厘米)，用10mM pH8 TrisCl/100mM氯化钠/1mM DTT平衡，并用同一种缓冲液洗脱。超滤浓缩含有电 泳纯化的D-氨基酸氧化酶的馏分，4℃储存。
重组的人D-氨基酸氧化酶的表达和纯化
使质粒转染到BL21(DE3)CodonPlus RIL细菌宿主(Stratagen)，让细菌在3 升LB培养基中生长，直至A600吸光度达到0.7。加入1mM异丙基-1-硫代-β-D- 吡喃葡萄苷诱导融合蛋白的表达，再培养多5小时。用BugBuster提取剂(Novagen) 在2mM AEBSF存在下提取细菌沉淀，通常使用苯甲酸酶。溶胞产物用50mM TrisCl调至pH8，并在4℃以10,000×g离心20分钟。用硫酸铵(30到50％饱和溶液)使 蛋白质从提取液沉淀下来，在4℃以10,000×g离心60分钟收集沉淀物，将沉淀 物溶于50mM pH8 TrisHCl(10毫升)中；离心澄清溶液，并装在Sephadex G-75 层析柱(2.6×40厘米)中，用10mM pH8 TrisCl/100mM氯化钠平衡。接下来的纯 化步骤与上述关于猪肾D-氨基酸氧化酶的纯化步骤几乎一样。唯一差别在于蛋白 质从DEAE树脂洗脱出来：它是用10mM pH8 TrisCl/300mM氯化钠缓冲液进行的。 电泳纯化的同源D-氨基酸氧化酶蛋白质的产率通常是每升细菌培养基0.7毫克。 酵母菌酿酒酵母中g34872和人D-氨基酸氧化酶蛋白质的表达和提取
使酵母菌酿酒酵母YPH499和FY1679-18B菌株在YPD丰富培养基中生长。用 标准乙酸锂方法使质粒转染在酵母菌细胞中；在YNG合成培养基中选择转染株， 30℃以2％蜜三糖为碳源在1升不含亮氨酸的合成培养基中生长，直至培养基密度 高达1u A600/毫升。在20℃离心收集细胞，用YNGal(含2％D-半乳糖)置换培养 基，并连续培养20小时。沉淀细胞，用冰水洗涤，重悬于20mM pH8 TrisCl缓冲 液/2mM AEBSF中，用玻璃珠(Sigma)每分钟搅动8次，提取蛋白质。溶胞产物在 4℃以10,000×g离心30分钟，收集上清液(S1)，储存于4℃。沉淀物重悬于20 mM pH8 TrisCl缓冲液/2毫克/毫升皂苷/0.3％肌氨酰中，每分钟搅动3次。离心澄 清沉淀提取液(S2)，于-20℃立即急冻。用Bradford试剂(Bio-Rad)检测蛋白质浓 度，用兔抗g34872-his6血清(稀释浓度为1/5000)通过蛋白质印迹步骤以及以D- 丝氨酸为底物通过检测D-氨基酸氧化酶酶活性确认表达。
D-氨基酸氧化酶酶活性的检测
分析混合物通常由200mM D-丝氨酸(Aldrich)、0.1mM FAD、75mM pH8磷 酸钠缓冲液、1U/毫升HR-过氧化酶(Sigma)组成。混合物使用之前才充入空气饱和。 向混合物加入邻苯二茴香胺(Sigma)。在常规分析中25微升分析混合物加入5微升 酶(D-氨基酸氧化酶和混合物)，加入50微升20％硫酸终止培养。以540纳米处的 过氧化酶氧化的邻苯二茴香胺的吸收率来观察活性。测量吸收率之前以14000 rpm 的转速离心含高浓度蛋白质的反应物15分钟。
进行对照实验以确定g34872蛋白质不会影响过氧化酶的酶活性。对过氧化酶 作分析，条件与对D-氨基酸氧化酶的分析完全一样；用过氧化氢为底物，确认 g34872对HRP没有影响。
实施例1
用在pESC-Leu表达载体中所构建的质粒转染酵母菌细胞。一个质粒可以表达 人D-氨基酸氧化酶，第二个质粒C末端标记g34872，第三个质粒是没有插入的载 体(对照)。这些细胞诱导表达后(在培养基有2％半乳糖)再培养24小时，然后按下 述方法混合和组合提取液：不同体积的D-氨基酸氧化酶提取液或者与g34872- cHis6或者载体提取液混合。相同体积的D-氨基酸氧化酶提取液也可与BSA混合(外 部对照)。预培养30分钟后，用该混合提取液测量D-氨基酸氧化酶活性。所有酵 母菌提取液和BSA溶液的总蛋白质浓度相同。在37℃用D-丝氨酸测定D-氨基酸氧 化酶活性。图1显示g34872活化DAO。
实施例2
在含有表达g34872的大肠杆菌提取液和BSA溶液中加入纯化的重组人D-氨基 酸氧化酶。D-氨基酸氧化酶的浓度是0.5和0.3毫克/毫升。细胞提取液和BSA的 总蛋白质浓度是12毫克/毫升。预培养30分钟后，在37℃用该混合提取液测量D- 氨基酸氧化酶活性，底物为D-丝氨酸(图2)。
实施例3
在g34872蛋白质存在下体外活化纯化的D-氨基酸氧化酶：活化效果取决于g34872 浓度
将纯化的D-氨基酸氧化酶和g34872混合，在活性分析之前在环境温度下培养 50分钟。所有混合物的总蛋白质浓度相等。D-氨基酸氧化酶的底物采用D-丝氨酸， 反应的pH值为8.0。所用的蛋白质：纯化的猪D-氨基酸氧化酶在混合物的浓度始 终保持在50纳克/微升，纯化的重组g34872在混合物的浓度是0到450纳克/微升， 牛血清白蛋白(BSA)在混合物的浓度是0到450纳克/微升。可以认为，g34872蛋 白质的浓度范围在生理学上对应蛋白域腔的高尔基蛋白(lumenal Golgi proteins) 的相关数据。见图3。
实施例4
D-氨基酸氧化酶体外活化所需的g34872浓度极限的估计
将猪肾D-氨基酸氧化酶与g34872在PBS中混合，并在20℃培养50分钟。所 有混合物的D-氨基酸氧化酶浓度是50纳克/微升。用200mM D-丝氨酸在20℃测 定D-氨基酸氧化酶的酶活性，pH等于8.0。将猪肾D-氨基酸氧化酶与g34872在 PBS中混合，并在20℃培养1小时。所有混合物的D-氨基酸氧化酶浓度是50纳克 /微升。用200mM D-丝氨酸在20℃测定D-氨基酸氧化酶的酶活性，pH等于8.0。 见图4。
实施例5
D-氨基酸氧化酶在g34872蛋白质存在下的动力学：g34872是D-氨基酸氧化酶的变 构活化剂
将猪肾D-氨基酸氧化酶与g34872在PBS中混合，并在20℃培养30分钟。在 蛋白质混合物中D-氨基酸氧化酶浓度是200纳克/微升，g34872浓度是2微克/微 升。对照混合物(不含g34872)由200纳克/微升D-氨基酸氧化酶和2微克/微升BSA 组成。用D-丝氨酸在20℃测定D-氨基酸氧化酶的酶活性，所用的底物浓度是0到 100mM，混合物的其它圣爱尔莫光(corposant)和pH值为标准值。
观察到g34872和D-氨基酸氧化酶混合物的Vmax对应Km＝4mM，观察到D- 氨基酸氧化酶和BSA混合物的Vmax对应Km＝4mM。这个结果显示，D-氨基酸氧化 酶对其底物(D-丝氨酸)的亲和力没有改变，并且提示g34872与D-氨基酸氧化酶相 互作用的位点不是酶的活化位点。见图5。
实施例6
本发明的双等位标记
在D-氨基酸氧化酶基因(SEQID NO：1)内发现了有效多态性(一般群体出现的 频率大于5％)。这些多态性也称为双等位标记，以SEQ ID NO：23-26表示，分别 编号为24/1443-126、24/1457-52、27/93-181和24/1461-256，其中多态性碱基 位于位置24。SEQ ID NO：1所示为检测本发明各个D-氨基酸氧化酶双等位标记并 含有扩增子和微量测序引物的多核苷酸。如图6所示，已经确定标记27-93/181(SEQ ID NO：25)和24-1461/256(SEQ ID NO：26)分别与精神分裂症p＝0.0066和0.0111 密切相关。本发明的标记还可用来判断个体是否有精神分裂症的风险，如图6所示， 以及是否有其它相关的中枢神经系统障碍的风险，优选是抑郁症和双相性精神障 碍。
实施例7
本发明化合物或组合物的制备
本发明的D-氨基酸氧化酶和D-天冬氨酸氧化酶拮抗剂组合物和化合物可以通 过本领域技术人员公知的各种方法来制备。通用方案包括但不限于以下所述的那些 方案。
以一般式I、Ia、Ib表示的化合物的制备
以一般式I、Ia、Ib表示的大量化合物可在市场上购买，或用本领域技术人 员所知的常规方法由市售化合物合成。具体地说，利用亲电子取代反应，如Friedel Crafts烷基化反应、芳基化反应或在浓硝酸中的硝基化反应，可将取代基引入芳 族环中，如苯基、萘基或者取代的萘基或苯基。修饰芳族环的其它常用方法是将芳 族基团转化为有机金属盐类，如格林亚试剂(Grignard reagents)，或者通过重氮 芳基化合物引入取代基。这些操作方法和其它有关转化方法的例子在标准教科书中 已有讨论，如March， Advanced Organic Chemistry(Wiley)，Carey和Sundberg， Advanced Organic Chemistry(Vol2.)以及Keeting， Heterocyclic Chemistry(全 部17卷)。
以一般式II表示的化合物的制备
以一般式II表示的化合物可在市场上购买，或由本领域技术人员用已知的合 成技术轻易地合成。
在位置Z上被取代以一般式IV表示的化合物的制备
为了控制R1，本领域技术人员要明白可以选择在制备杂环之前、之后或同时 来制备R1。对于式中A是氮的化合物，制备这些化合物的优选方法是：
方案4a
式中，
Rd是衍生基团或者可被控制或取代，这些化合物是已知的或可用已知方法制 备。(P)是保护基，例如芳基，而(B)是合适的阻断基团。为了清楚起见，未示出一 般式IV的位置(Y)上的基团。
要制备和加工杂环，本领域技术人员要明白可以选择在制备杂环之前、之后 或同时来制备R1。为了清楚起见，未示出位置Z和Y上的取代基。对于式中X是 氮的化合物，下面示出R2的一种优选控制方法。在以下方案中，L是任何一个可接 受的离去基团，B是如上所述的阻断基团。Boc是一个得到本领域公认的优选阻断 基团(blocking group)。本领域技术人员知道有机化学领域的技术人员能够选择阻 断基团。
方案4b
对于杂环含有硫的化合物，下面示出这种杂环形成的优选方法。要制备和加 工杂环，本领域技术人员要明白可以选择在制备杂环之前、之后或同时来制备R1。
为了清楚起见，未示出位置Z和Y上的基团。
方案4c
当X是硫时，形成杂环后还可进一步对杂环进行加工。例如，用已知的方法 氧化环的硫原子，可以得到相应的亚砜和砜，如下图所示。
方案4d
对于杂环含有氧的化合物，下面示出这种杂环形成的优选方法。使具有双功 能的部分，例如卤代羟基物质与下面的氮丙啶反应。卤素部分作为离去基团，用于 环的闭合反应。杂环形成后，按上述方法进行本发明的加工。
方案4e
另一个可接受的制备本发明杂环，其中E是硫、氮或氧，的策略包括以下方 案。这是一条优选的路径，由此也可制备式中A是氮且A-B是不饱和的化合物。
方案4f
以一般式IV和一般式III表示的其它优选化合物的制备
当然，本领域技术人员知道，对于全部所述的基团方案I可适用于位置(Y)上 的取代基。当Z是酮缩醇或硫代酮缩醇时，本发明的化合物可由环上带有羰基的化 合物来制备。这些化合物由已知的方法制备，其中很多化合物是已知的或可在市场 上购买。所以，本领域技术人员知道可以将羟基、氨基、亚氨基、烷氧基或其它基 团转化为羰基化合物。
本领域技术人员也知道以一般式IV表示的化合物的上述合成路径可适用于以 一般式III表示的化合物，其中环的大小是7和8个原子。符号B、L、P和V如上 所定义。以下例子只起举例说明作用，但不具有任何限制性。
方案4g
以一般式Va表示的化合物的合成
以一般式Va表示的化合物可用各种方法合成。可用于不同α氨基酸的公知最 佳途径是Strecker合成路径。该方法用氨水和氢氰酸处理适当的乙醛，以便形成 α氨基腈，然后再使α氨基腈进行水解反应。
以一般式Va表示的化合物的另一种可接受的合成策略是以下方案：
方案5a
式中，
P是保护基团，如叔丁基，可以与R1相同。X是如上所述的基团。受保护的化 合物用卤化剂如PBr3、NBS或CBr4进行溴化处理，然后用氨或保护胺衍生物如苯邻 二甲酰亚胺钾置换卤素。本领域技术人员可轻易引入R1和R2。
以一般式Vb表示其中X和Y含有环丙烷环的化合物的合成
在构建α氨基酸的各种途径中，普遍采用以α，β-脱氢氨基酸衍生物来1，3-双 极性环加成重氮烷烃。所以，以下方案证实脱氢氨基酸的R3取代基，优选是烷基 或Ar1，可以作为亚氨基酯得到保护，其中Ar1如上所定义。本领域技术人员知道 这些化合物可以与重氮取代的化合物，优选是烷基或Ar1，起反应生成希望得到的 保护环丙烷衍生物。这些化合物与碱性醇类溶液如甲醇钠反应，再进行酸性水解， 可生成相应的R3、R4取代的环丙烷氨基酸。利用已知的方还可以轻易得到R1和R2 的其它衍生物。
方案5b
以一般式Vb表示其中X和Y含有5-8元环的化合物的合成
可将含有优选5、6、7、8个原子的取代碳环或杂原子转化为与以一般式Vb 表示的化合物一致的氨基酸衍生物。有一些已公认的途径，其中一条途径是将含有 化合物的环酮转化为相应的氨基酸衍生物。这些环酮化合物有很多已在文献中有所 叙述，本领域技术人员也可轻易合成。原料化合物可以是得到保护的或无保护的。 向原料酮的亚胺衍生物加入三甲基硅氰化物可生成氰加成产物。水解和还原裂解保 护胺产生氨基酸。利用已知的方还可以轻易得到R1和R2的其它衍生物。
方案5c
以一般式Vc表示的化合物的合成
以一般式Vc表示的化合物可由R3取代的化合物的亚磺酰亚胺衍生物合成，其 中R3优选是烷基或芳基。有多种路径制备取代的亚磺酰亚胺的，本领域技术人员 可轻易合成这些化合物。
加入以有机金属试剂如烷基溴化镁形式存在的R4，再以三氟乙酸处理，生成 相应的二取代氨基酸，它们用已知的方法可在R1和R2上作进一步衍生。
方案5d
以一般式VI表示的化合物的合成
方案6
由取代的氨基醇可合成单取代或双取代的脱氢氨基衍生物。本领域技术人员 采用与前述步骤相似的方法可轻易合成这些氨基醇。以(Boc)2O/DMAP使单取代的 氨基醇脱氢生成脱氢氨基衍生物。在碱存在下加入亲核试剂(Nu)生成双取代的脱氢 氨基衍生物。
可以改变这些步骤以提高所希望的产物的产率。本领域技术人员也知道合理 选择反应物、溶剂和温度是合成获得成功的一个重要组成部分。当确定最佳条件等 是常规条件时，要明白的是，参照以上方案的指导可以类似的方式制备各种化合物。
业已公认，有机化学领域的技术人员无需进一步指导就可轻易进行有机化合 物的标准操作，也就是说，技术人员清楚知道这些操作步骤的实施。这些操作包括 但不限于：羰基化合物还原为它们相应的醇、羟基等的氧化、酰化反应、芳族取代、 亲电子和亲核反应、醚化反应、酯化反应和皂化反应等等。这些操作方法的例子在 标准教科书中已有讨论，如March， Advanced Organic Chemistry(Wiley)，Carey 和Sundberg， Advanced Organic Chemistry(Vol2.)以及Keeting， Heterocyclic Chemistry(全部17卷)。
本领域技术人员容易地知道，某些反应最好在分子的其它官能团被遮蔽或被 保护的时候进行，以避免任何不希望看到的副反应和/或提高反应的产率。这些反 应可在文献中找到，而且已为本领域技术人员所知。这些操作方法的许多例子可以 在T.Greene的 Protecting Groups in Organic Synthesis中找到。当然，最好 阻断用作原料的氨基酸与侧链反应，以防止不希望的副反应。
表I
序列表
<110>根瑟特公司(GENSET)
<120>用D-氨基酸氧化酶和D-天冬氨酸氧化酶拮抗剂治疗中枢神经系统障碍
<130>101.WO1
<150>60/261,883
<151>2001-01-16
<150>60/305,445
<151>2001-07-13
<150>60/
<151>2001-10-22
<150>60/333,881
<151>2001-11-19
<160>26
<170>Patent.pm
<210>1
<211>86592
<212>DNA
<213>智人(Homo sapiens)
<220>
<221>misc feature
<222>38388..40388
<223>5’调控区
<220>
<221>exon
<222>40389..40670
<223>外显子Z
<220>
<221>exon
<222>42666..42778
<223>外显子A
<220>
<221>exon
<222>43416..43519
<223>外显子B
<220>
<221>exon
<222>61159..61402
<223>外显子C
<220>
<221>exon
<222>64050..64711
<223>外显子Ulong
<220>
<221>exon
<222>64578..64711
<223>外显子U
<220>
<221>exon
<222>68126..68261
<223>外显子V
<220>
<221>exon
<222>69488..69690
<223>外显子2
<220>
<221>exon
<222>71942..72056
<223>外显子3
<220>
<221>exon
<222>73962..74038
<223>外显子4
<220>
<221>exon
<222>74701..74766
<223>外显子5
<220>
<221>exon
<222>77478..77532
<223>外显子6
<220>
<221>exon
<222>78762..78866
<223>外显子7
<220>
<221>exon
<222>81507..81589
<223>外显子8
<220>
<221>exon
<222>83181..83298
<223>外显子9
<220>
<221>exon
<222>83879..83977
<223>外显子10
<220>
<221>exon
<222>84906..85423
<223>外显子11
<220>
<221>exon
<222>84906..85541
<223>外显子11长序列
<220>
<221>misc feature
<222>85542..86592
<223>3’调控区
<220>
<221>allele
<222>6199
<223>24-1443-126：多态性碱基C或T
<220>
<221>allele
<222>44814
<223>24-1457-52：多态性碱基A或C
<220>
<221>allele
<222>72600
<223>27-93-181：多态性碱基A或G
<220>
<221>allele
<222>84046
<223>24-1461-256：多态性碱基A或G
<220>
<221>primer bind
<222>6074..6094
<223>24-1443.pu
<220>
<221>primer_bind
<222>6559..6579
<223>24-1443.rp补体
<220>
<221>primer bind
<222>44763..44782
<223>24-1457.pu
<220>
<221>primer_bind
<222>45257..45277
<223>24-1457.rp补体
<220>
<221>primer_bind
<222>72359..72378
<223>27-93.rp
<220>
<221>primer_bind
<222>72763..72780
<223>27-93.pu补体
<220>
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<222>83791..83811
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attattggaa caggccacac ttgcgaggga agtccctgcc tcagaaagat tcagaaaagc 60
tagacagtca ctggaagaac aattacaacc gcaagacggt caaacactaa acaccgctat 120
gcctcagaac cgtacagata atggccaaat agatggggct ctgggcattt ctgagagcac 180
ctgcctggtg gcaccccatc ctaatggacc atgccctcca gtctccaagt ggctcttcag 240
agctcacatc cgaacacctc ctatgctaca ggttcttcta gccccaggtt cccaaccacc 300
ccaaggccac agaggccagc cccaactcca tcttctacat gtgtcacagg aaactttctc 360
atagtgctat ttattatgta ctgcgggggt gggggccatg tcataaaaga aatgtcctcc 420
cttttttatt catctccttc taacaagcat caaagtctca gtcgctagca tgtgacttac 480
agaagctctc atgggaacaa gacaagacca tactgttacc gtgacactca cggcctccct 540
gactggtttc tgctgttgat tctgcctcaa atgctcctca aatgcacctt gctgctccgc 600
ctccacccta gagctcgcct gactgcccac ttgcccgtta agagtcggct taggcttcac 660
tcctgccaga aaggtcctgc caggtgctct caacagtcac cccctcctgt ggtctcacaa 720
aaccccagca cctctcggtc actctctccc tcctatctgg ttgtgactgt cttccatgct 780
cacttagaag ctctctgagg ccaagaactg tgtgtactgt tgcttctttg tttacctggg 840
cctagcccat tgcctcatac acaggagaat gcaaataaat catatgctta atgaatgagt 900
cgatgaatga atgatgaata aagggaatct aatctagttt taacaaatcc aggttttgca 960
atgatctcac aggcattcat ttatcttgtg atgtcagggg agtgactcca ccctcatttc 1020
acacgcatct tggggtcaat gctctaactt acttggcctc cagttagtgg gaaattacaa 1080
gctacacttc aagcctctga ctaggacctg ccatgaagta cttgggaatc agtggagtat 1140
cactgtgggg tgaggtgtct gaggcgaggc ccaccaatct ccatacttct ccccgggccc 1200
ctctgcctga gagggtctcc ctgcttccct tggcagactc tggtttggcc ttctgggttc 1260
ggcgttgttg tcacctcctt caggaagcat ttctggctaa ggtgccccac tctatagcag 1320
ctggtgtaaa acctctctaa gcaaacagca taactttctg tcctctcaat tgactctgag 1380
ttctgagagc acagcctgga gctggcacgg tgcctggcac agagagctga aatggcacac 1440
cctagtgttc ccagtggctc gactccccag gctctccatc aggacgcagc cctctcccac 1500
ctctgatgga tatgggacca tggaatgctt tgtccagcag caactcttgc ctccctcaca 1560
gaagggaaca cctagcccat cagactcacc tttccttact ggaaaagtcc actcccagca 1620
agatattctc ctcggtgtcc tggcgcccgc tgctgtacac caccaccatg taccggaccc 1680
ggtccgccca ggcgctctcc aggcgcactg cctggaacag ggcagacatg ctctcactaa 1740
cctgcctttg gaggtggtgc ctccctccca tctccaatgc aagatcaaca ctttcagtgt 1800
tctacctttc cctctgggag ttaaaaatga agagaaaatt cttggctggg catggtggtt 1860
caggcctgta atcccagcac tttgggaggc caaggtaggc agatcacttg aggtcaggag 1920
ttcgagacca gcctggccaa catggcaaaa ccccatctct tactaaaaat acaaaaatta 1980
gctgggcatg gtggcgtgcg cctgtaatcc cagctactca ggggactgag gcacgagaat 2040
ctcttgaacc cgggaagcgg aggttgcagt gagctgagat catgccacca catgccagcc 2100
agagcgacag agtgagattc tgtctcaaac aacaacaaca caacaaaaca caaagcggaa 2160
gttcttgaca gcaggaacca ggcctcgttt ctctctgtag caccagggac gccgcctggc 2220
tcagaggaat cacccaaaat gcaagaaatc agtgaacaca tgaaatccaa agaaagttcg 2280
tatttagctt atttaactgc cgtggagacc tgtttcatcc ctcctcccgc ccctctgggg 2340
aactgaggag tcaacctggc tttggcttta gtgcacaatt tgagaatttg ttgtaaccta 2400
aaagcttttc cccttatcat tcacgaatgg ttccccacca ggtttcacaa ttaaaaatta 2460
aaacttgctg gctgggcacg gtggcttaca cctataactc caggactttg ggaggcagag 2520
gcaggagaat catttgaggc caggagttca agaccagcct gggcaaaata gcaagacccc 2580
atatccacaa aattttttta aaaataaggc agggtggtac acacttgtag tcccagctat 2640
ccaggaggct gaggtgggaa gattgcttga acccaggagt ttgaggctgt agtgagctaa 2700
gatcatgcca ctgcactcca gcctgggcaa cagagcaaga ccctcatctc acaaaaatta 2760
aaaaaaaatt ttttaacttg acattctcac tgcttcttac cagcttgatt ctgtcttcgc 2820
aacgcagaag gttgatcatc acctgaagat gttgaggcag atcacctgtt ggaccaataa 2880
agaaagcttt aaaaggtctc ttacctactc tctaggaaaa aaaacctctg aaaggctgac 2940
tttgagggct tggaaaaaga ttgagaagtt aaaatttgtc tacctacacc acaggagaat 3000
caccacaaaa acttcaagtc tgaatttctc ttacaccact ctgaatactg tgcgacgtgg 3060
atgggtgaca tggagcttac tgtcatgttg ttaaaagttg ctcttatttc ctgaaataca 3120
tacagtatag gtttccaaat acaaaatgtg aaaaatacag gcaagcctag agaaaaatgt 3180
tatttcattc aagccaatgt tactcggcag gttggggtgc ctagaaacga cagctgtggc 3240
tggaagtaag gcatttgcta agagttaatc attagagaaa aaggacagag catcacgttt 3300
cctcttcaaa caacttcttc ttctatacag agtctcgcac tgtcacccag gctggagtgc 3360
agtggtacga tctcagctca ctgcaacctc cgcctcctgg attcaacaga ttcttctgct 3420
tcagcctcct aagtagctgg gattacaggt gcccatcacc agacccggct aatttttgta 3480
tttatagtag agatggagtt tcaccatgtt ggccaggctg gtctcgaact cctgacctca 3540
agtgatctgc acgcctcagc ctcccaaagt gctgggatta caggcataag ctaccccacc 3600
caggccccac ttcaaacttc tgcattttcc actggaggca gacattattt ccataaccgg 3660
gggggcgggg ggaaatgttt aagtgactct acagatagca gctgtatgct ggttgcccag 3720
agaaataatt tgaatagaaa ccaatctgtc attttctctt ttcttgctaa aaattatgta 3780
ctcttttttc ttcactatgt aaaacaggca gtaaccaggg acggcttctg aacttctctg 3840
agctgcccca gggttcagga ggtgttcctg gagtgcagtg aggaaagtct cttactggcc 3900
atgagtctcg cgcgaagcag agaccctgtc agaagaagcg cacactttca cggaggggaa 3960
agttgtaagg gaggtgcata attagtaagt agcaggtgtg actccaaggt tgcttttttt 4020
ctctagctta cacatttttc tttatatctg caaggatttc tttctgaaga aagggtcatc 4080
tgtagagatg ctaatatcag cctggtgtgg tggctcacac ctgtaatccc agtgctttgg 4140
gaggccgagg caggagactc acttgaggcc aggcattcaa gaccagtctg ggcaacatgg 4200
caagacccca tctctacaga aaagtaaaaa attagctggg ctttctggtt cacatctgta 4260
gtcccagcta cttgggaggc caaggcagga ggatcgctgg agcccaggag tttgagatca 4320
ccctgggcaa cacgataaga ccctgtctct acaaaggaaa aaaaattact ctatacatca 4380
caattacaac cccaaaagga tcaataatgc ttacacactc aaatgctcca aaaggaaaca 4440
ttgtgtttgt tccttttgca aaagcatctt tttcatttta agggagaagg acagatgatg 4500
tccaaattgc acttcctgtc tcagagagga attgggtcat tagaaatttg tgcctctagc 4560
caggagggta gatctcatgt taagcgttct ttctttttct ttttttttca atagagacag 4620
ggttttgcca tgttgcccag gctggtctcg aactcctgga ctcaaatgat cctctcacct 4680
cagcctccca aagtgctggg attataggca tgagccacca aacccaggcc aattaagcat 4740
tctttccaca ataagtaaaa tttaaaaaag aaaagaacca tgcccctctt atctgtcctc 4800
tccagttata caattccaca gtgtataaca ccctgtgttg accctgcttc ctatgatgag 4860
cgatttggag ataagggttc acattaaaga aagccataga cctccccagc cccttcctcc 4920
acccgtcatg tcaccaatgc aacacaacga caacgaccat gagctggttc ttcacctgcc 4980
tgggccctcc caccatctac ccgagtcaca gaactgcatt ggggaaagca aaaacaaacc 5040
cctgtctgat aaatgcctaa atgaaaggga cattttccac acagataaac ttctttcagt 5100
gggattgttt gctgagatat ggaactgctg acagacagaa atccaaaccc cagtctgaca 5160
tccacacaca aaaaaatcag agaatataag ccctagaaag ggtctcaaat tgactggact 5220
ggctgaaaca aactgaacta cttttccaag gacagaatta accctcaatt gtactcagct 5280
ctgcacagtg gttactgggg ggcctctggt acattcagga gacttgatgg taattctagg 5340
gaaaaaaagg aactaacgta agtctagtct gcgtctgtcc caaggtcatt tacagaccaa 5400
ctgtggacag ctggcggccc ctctgccttc cgacctcatc gtccactcca gacctcaggg 5460
cacaagagtc agccagctgg tggcttgcat cctacccttc tagtctttgg attagaggaa 5520
ggaggtatct gacacttagt gagcagagct tgagcatttg ctttgtcata tgtgttacaa 5580
ttaaaacatg aacaacagct acatttctaa gagggcagaa taattagcaa attcaagaac 5640
gaagaatctg gctgagtatg gcacctcaaa cctataatcc caatgctttg agaggctgag 5700
gtggggagat ggcttgaggc caggagttgg agaccagcct gagcaacata gtgagtgaga 5760
cctcatctac acacacacac acacacacac acacaactag ctgggtgtgg tgacacgcat 5820
ctatggtccc agctactcag gaagctaagg ctggacaatc acttgagccc aggaggtcga 5880
ggctgcagtg agctatgatc aggccactgc acgccagcct gggcaagaga atgagatccg 5940
tctctaaaaa aacttttcat ataattaaaa aaaaaaaaag aatgaagggt ctgtttatag 6000
ctgtattgta ctagaagtca tcgtaataac aatgatagtt acccatatat atatacagca 6060
cctactacag gtaggtatgt tacacgcata actctaaatt tccatattgt ctgaggcacc 6120
agtatttgat gcccattgta aagactagga aactgaggct tagaagtcga cctgttacgg 6180
cttagtaagt tggagaacya ggatcagaag acaggtctgc ctggcttcaa aacaaatact 6240
atttccacaa accacactgc ctccttgtac aggacagtta ttttctttgc ttaaaacaga 6300
cctaaatatt atcaacatca gtatgtgaaa atactgactg agccttggtg tttgctataa 6360
attgcatggt gtagaattct aacctgagca ctcagatcta aaatgaagct gaatgacttg 6420
aggttaaaca aacaaaatgt tcacaagaaa actggccaca atagctggtt ggtttcacct 6480
gctgctgttc tgaaaggtaa aggccttctc agctcacaga cattcaatta tgcactgcct 6540
ctccaagaaa tgccctgaga tgctgtccac ctacgacaaa gatccactta catgcaagca 6600
ctttttcctc tttctttctt tttgagatag ggtccttttc ttttgtcacc caggctggag 6660
tgcagtggcg caatcgtggc tcactgagca acacagtgag caacatagtg agacctcatt 6720
tacatacaca cccacaaaaa actagctggc tgtggtgaca catcagcctc gacctcctgg 6780
gctcaagcaa tcctcccacc tcagccccca accttgctgg gattacaggc atgcgccacc 6840
acgcccagct aatttttgta ttttttgcag agatagggtt tcactgtgtt gttcgggtta 6900
gtctggaact cctgggttca agcgagatct gcccaccttg gcctcccaaa tcctggaatt 6960
acaggcaaga gccaccgtgc ctggccataa gtgtgttttg ttgttattgt ttttaagaaa 7020
cagagtctct ctctgtcacc caggctggag tgcagtggcg tgatcctagc ttgctgcagc 7080
ctcaaactcc tgggctcaag cgatcctccc aactcagcct cccaaagcac tgggattaca 7140
ggtgtgagat accatgcagg gccacgcaag catttcttga attcctcttt ctaactgcct 7200
tcagctctga gtcaagtctc ctaagaaaac cagtcttact acttagtagg cacttcttat 7260
ttaaactcag tttgatcctc accctattac ttctgtctac ttcctaaaaa caaactatta 7320
cagaatcaag acttcctact acagtgtcta tctcagagtt ggagccaaag gcccttcaag 7380
aaattctcca aatgagtgtt tttcaaatgc ttggagaaat ccatcccaag attaggtata 7440
cagcactcca gatggttatt ttcaagtgga cgacatctgg ctataattca ttttggtgca 7500
tttgttaaaa agtcaggctg taacttacag cctgcaatta actgataaac tacagagagg 7560
aaatctttgc atcccagcag gatgctgctg accttactcc tgacgcagac agacatgaca 7620
taaaaggttg gaaaatgtgc gtggtctgct caagagagag catctgagcc tctgcctgca 7680
ctggtcactg caaacctgcg tccactatgt ctaaggcctt caaactcagc aacatcacca 7740
acaatggaag tttcctctgc tgtccagaaa agaagctcca atgtaagagt atcaacttag 7800
agccctcacc tgcatgcttg tgggggtgct gaagactccg ctggccttga gggctgcttc 7860
cctgttgtaa gaagagggct gcgcctttca ccatgaaaaa gctctcactt aagctgggaa 7920
ggataagacc agagcacagt tagaccggaa ttcagacagg aaaatggaca aagaattact 7980
gcaggggaaa aagctttagc gtggacaaat ggcatgtaaa atgcaaatag gatgaaactg 8040
cttttataat aattccacgt agtacttttc tcaaaccttg cttttgctaa aagcttgctg 8100
ctggagaatt ttcgtgacaa aataatgctt ctgtgacaac acccaaagtt ctacataggc 8160
tctccagggc ccctttctgc agaatactgg acagggatct cactgtcata taacattttc 8220
ttctttcttt tttttttgag acgcagtttc actctgtcat ccaggctgga gtacagtggt 8280
gtgatctcaa ctcactgcaa cctctgcctc ctgggttcaa gcgattctca tgtctcagcc 8340
tccccagaag ctgagattac aggcatgtgc caccatggcc agctaattat tgtattatta 8400
gtagagacat ggttttacca tgttggccag gctggtctca aactcctgac ctccagcaat 8460
ctgcctgctt aggcctcctg gagtgctgtg attacaggcg tgaccacgcc cagccataac 8520
attttctaag aaaagagaac aactccctga ttaggagagg gcagtctact ttgtgaattc 8580
tcatgctctt gctgttgatc tctgcttcta actctctggc ttttaacaac tccattgttt 8640
cttggtgact tcccttgatg gaatacaagg atgaaattac actttcacta gttgtttgca 8700
ttttaagaaa agtggggagg ggccgggtgg ctcaagcctg taatcccagc attttgggag 8760
gccaaggcag tggatcactt gaggtcagga gttcgagacc agtctggcca acatggtgaa 8820
accctgtctc tactaaaaat gcaaaaatta gccaggcgtg gtggcacatg cctgtaatcc 8880
cagctactca gaaggctgag gcacaagaat cgcttacttg agccccaggg acggaggttg 8940
gagtgagcca agatcgcacc acgcaccact gcactccagc ctgggcgaca gagcaagact 9000
gtgtctcaaa aaaaaaaaaa gaaagaaaga aagaaagaaa aaagtgggtg gatactgact 9060
tgtgatttaa cttagtcaag gttgtcctgt ccactattct tgaggaaaac ctcaagttgg 9120
cccaatgaat ttctcagcag aatgaatctt tggcctttgt tattttagct agcaataaca 9180
tttataacta cctataactt taaaaattac aattaaaaaa tgtttatttg ggaggctggg 9240
gtggaaggat catttgagcc caggagttcg agaccagcct gggcaacgtt gtgagacccc 9300
gtcgtacatc aaaagttttt atttttaatt tcactttcat gacttggcta tcaagtctgg 9360
cttttgcaaa aattaagaca taagaaaaga atgcttcagc tatgaattac tatcaattgt 9420
tcaaaaatac catcaactct caaaattatg cataaaatac accaaaatta ttaacaacgg 9480
ctttgcggga ggtgggggag gaggaggaat agattatctt ctagtatttt ccaaatgttc 9540
tatattaaac atatattaac ctttaaaaca tctacttttg tttgattctc aaaataatat 9600
aaaacactac tatataattt aaaaagaaca ttctaatctt aataatttca taaaaggagg 9660
tcacagttca aattgtaggc aactataaaa atttcgctct tgaacaacca atgaacatat 9720
acatgatttg aaggaaaaat ccctaagaaa aagcagtctt ctaattaaag agaaccttga 9780
aattaagtaa atcaattcct gacagaaaga cgaagatgtt ttctgtaata caagaaagca 9840
agatcacctt tgccccagac atctaatgtt agtagttaaa cgttcgaatt ctggaataaa 9900
aaactcagca aagtctaaag tatgactctg ggtgccaaga aaatgccaca ggaactagca 9960
tttccaatca gcagctcctg agatcaggaa gactgttatg ttctatgata taaagtccac 10020
aataaaatct gttagttttt ctggttaaat gctcatgcta aaaatagtga ctgctcaaat 10080
attaagtaag aagacttagt tttgccttct tgttcagtcc tctgaattcc aggcaattgg 10140
ttttcgatat cttgtgacac caatacttga catctaacag cattttgtcc actactgcag 10200
atgcactgcc gagtcatcct ttccaccctc tcacaggcat atatttgtgc tgcaaggttc 10260
aagtgttgag gagctcagga ttataaataa cgaaagaaac gagaagcagc ctttctttgc 10320
tgtctcaccc tcactcatag gaagtaaaaa gctctttagc atccatctgg ccgatctcat 10380
ttcacaggct gcagaatcac ctaacccttt ccacctgcaa agcttgtcac tctctccttc 10440
cttagaatct cacagctgag tatgttttca gaactgttct tagacacaga tcatttacta 10500
tttattctca tcaaaatctg aaacagctat gcgagaggtt ccaaactcat gaaacctaaa 10560
acaaccatca gttcatcgaa gcagctggga aaatcttttc gagacaacat caactgcttt 10620
tgttcatgag attaaaaaaa aaaaattcat actgaccaga aacccaagca cgctggaaac 10680
agccaaccat taacgatgac ctttgccttg gaaaccatga gcaaaaattc cccttggttt 10740
cccttatatt tcctttggaa aaaaaaagga acaatgcaac agactaggct ggtttcactc 10800
tgtgatcact tacaaggcca gctgttcctc ctccatgttc ctacactgat aagaatcagg 10860
gactcctgct ctacgcatga agtcaggatg gcattgattg gggccctgga acactctgcc 10920
tctgttcccc cacgacaatc aagtaacagg catttactgt aaaaagcaag actggaagct 10980
gcagggaagc ccaagtagca gcgcattatc ccgaagctgt gagatcaccc tgcgtcctgc 11040
aaatacagtc aggagataca gccagaggaa accgcacgac atgactctcc gggtgggggg 11100
tggggtggga ggccgcagag catggtcagt cacaggattt atgaaaacaa gatgcagaaa 11160
gtctctgtga cccggcttcc tggcttctct tctgagctca ctctgggccc agagcctcat 11220
gcgccctctg cgtggctgac ctgaatactg tatctgacga ctgcagcttc tgatgcccag 11280
aggcacaggc tcccgattca tcagaccctc aaagtgtccc actggggaag tccatgaaga 11340
aatccacatt ggtgatggca cgctcacttt accaggtgtc tggggccagg aagcccaaac 11400
ccacaagcca tccatcccag ccacccagaa gtcactcttc tcacaaaaga tctgagtgtc 11460
ctaaaaggag tgactaaagt tacaaaaggt cagacgcaga cagacaaaac ggaaatgtct 11520
tcctccaccg ctgtaagaaa aatcttgatg agggataaaa aaaaaaaaag ccgctgccct 11580
ctctacccgc caactggaat gtttttatct ccaccacaca gatctgttct cggacactga 11640
ttactgccat tcgggaagct tcataagatt aaagtttctc caaagcattg aagacagaca 11700
aaaaacctca atcaatgctc ctcaaaaaac cccaggcccc caaaatataa acagccagtg 11760
tcatccagaa accaagccat ggcaggaaac cagtaatcag ggtggtcata cgtactaatt 11820
tgagctggaa acctctggac agcagaagca gtgggttggc tgaaggaaga tgcagaagtc 11880
ggtaaaataa aagaggttcg tggctgcagt gctcacatct ctaacgctcc ctacaactgc 11940
cctccgagct ctggccatct gctccctatg gagatcagga aaagccagga ggctgccgag 12000
tgcttccacg agggctgggg agccaactcc tcctcagagt cctacccgaa aagcaaatgg 12060
ctcttgtgga actcttgtct tcctctgata ttttggctga aaaaggccct tgtcccagca 12120
catcctgatg aaagagggcc attcagcaaa acagctgagg ttcctctaat cactgcactc 12180
ctacgggctt ttctgtaggc cggagaaaca agcaccgggg tgtgcattcg acattgtgag 12240
ggcaaacaac tggccccaag gaaccaaccc caagcaacaa gacccccttc cgattcaaat 12300
caacattctg aaggatgact ctttctttca aatcagcatc catttaccca acggtgacgg 12360
tgacgtgggc agctgccgca gttagttatt ctgcgtactc aaagcacggt tacatcctga 12420
aaattcttca gtcatgctaa cagctatctg aggggacacg ccaggtagag gggaccacat 12480
gcacacctat gaggagctct gggatacgca cggtgcccaa ggcaggtcag gctgcaaagg 12540
tcctaaaggt tggaggtgtg atcccaaacc ctccaggcac aagccagcca agagctgtgt 12600
ttttagcgtt tctttcagtg agagaaataa gttcaggatg tgaataacca tgacgcagga 12660
gagaatggaa taagtaccct aagaaagggg ctcggctagg gtttacaaga gggaggaggg 12720
agcatttaac tggtgacttc tggaacaatt cctgaaggaa gcagcactga gtaggggctt 12780
ctcttccctc ggctcacaag tgaccaagcg atcctcccta cggattaagt gaaacacaca 12840
ttaccatgat tctggttttg caggtgagga aaccccagct tgcctaggag cacatatctc 12900
tacaagatgg ggctggactc acatctatct gccccacgcc cacctgctta acccctgtta 12960
agcagctgtt ctactcatcc agaatgaaaa tcagagccat tatgctgcgg tcacatccgc 13020
tcatgcctgc ccaggtgcct aatggcaaag ccactaaggc actgagaagt cagaatgtgg 13080
atcacatctt ccgtccttct tcccagtgtg tgaatgcatc atgcgtggga aagagagaga 13140
aggaaccatt caagcaaaca gaactccagg aagacgagac tgtgccgggg ttcttccatc 13200
tgcccaagta gaaatcagaa gggcagggga cccacagcct tatcctaccc accactgccg 13260
tcatagttgg gggacaggac acatcctttg gcccttctgc actgcataga ggctaaggag 13320
ttctgtaaac cacacagcca cgctgaccaa gaagtcgctt tcaaggtaag tttctcatca 13380
acaggactat tatttactga ggatctccca tgtggccaag gctgtaggag gtacttagct 13440
acgccacgtc attgaactct ggcagttctg cagggtaagg tattttctcc atatgacaaa 13500
cgaaggaagc ccgtcaacaa ttccaaaata gaatcaccag ggatagcatg gacaacgccc 13560
atggtgactg ccgcgcttta aggtttaaga aaagtaaaaa ctgggggtga tgactcattc 13620
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gactagcatg gtcaacatgg caaaaccctg tctctactaa aaatacaaaa attagccagg 13740
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tgcccaagtt catgagacca aggagccggg aagcaggaag gggaaggcag gagtgtaact 20100
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cacaggcaag gaatgaaata ttaaacatta atgttaatat taatatttat aattaatata 20400
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taattataac tatattaata taatcaatta taactatatt aatataatcg attataacta 20520
tattaatata atcgattata actatattaa tataatcgat tataactata ttaatataat 20580
cgattatatt aatattaata taatcgatta tattaatatt aatataatcg attatattaa 20640
tattaatata atcaatatta acaaatatat actatataat ataaataata cctaagttta 20700
tataatatgc ataatgttaa tatttattaa tatttcaggg acaatgggag tcatgaatat 20760
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tcattaccac ccggatgttc tccgggctgc agcacatgaa ggggatacgt gacaatccct 27180
gctttaagta cagctcaggg agttgacggg acctgcccaa gcacatagtg atgccgctaa 27240
tggctcacca ggaagaatgg actgcaaagc ctggttcttc tgataaactc cattctgtct 27300
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tacggcaggt cagcaacagt cacatctcac atcgcacagc caggcataca ggcaaagggc 41280
ctagaactac cccggccaca ggtctcagaa ccagcggctc acgcagtcac ccaatcaagg 41340
gtcccagttg cacatccagt cacccctgga ccctggtcac actgcagagt cactcacaaa 41400
tgggagtccc gacagacgca cagtcctccc cagacagagg tcaacccaag atgggggtca 41460
cacctgaaat cacagtcccc acacaatcac gaggtcacat ctgcacacac agtctctgca 41520
cagtcaccct taggggtcac aacgcacaca gtctccgcct aacaggggtc accccaagat 41580
gggggtaacc ccctgatgtg ggtcacagcg cacacacagt atcctgcaga cactcccaga 41640
ggggtcgcac tgcatacaca gtccctgcaa agtcgccccc cgataggggt cacaccgcac 41700
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accccggtcc ggctgcccgg ctctgttcct acggcggggc cccgaggagc ccgcgcagcc 41820
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ccaggccggg cgcggcgagc ccggggctca cctcgctgtt gctggccgag gaggaggcgg 41940
cgctgggcgt gggcgagcgc tgcagggtca ccagggccat ggctgcggcg cggtgcgagg 42000
gcgccacaga cgtctcgagc tagagccgcc accgccaccg ccgcccgggc cgggcccggg 42060
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agtgcgcgga gtgggcgggg aagcgggcag ggcgggacga ggaggcgcgc gtgcgcgggg 42240
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cttccttcct tccttccttc ctgccttcct tccttccttc ctctctttct ctcacttttt 43860
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ctggagccca cactgaaggt aaggtaggga ggagtagcag tgccctaaac caaggtcgtg 83340
ggagcttggt aatgaggaca cttcaggacg ggaagatgcc accgctggga taactgggca 83400
aattaattcc agcaagggat gtggaacata acagaatttg ataatgtaca gggaagttct 83460
tgctatgggc taatgaatcc tgtctggcca tggctgagag cccttggttt tcacatttgt 83520
ctgcgagtga tgatgacagt agtgatggtg atgaggatga gttggtactg atggtgagga 83580
aaatgctgag aatggtaata gtgatggtga taaggtggtg acagttgtta aaattatggt 83640
ggtggctgat ggtgagggta gtggttgatg atggaattgg tggaaaggtg gaagcagtaa 83700
tggtaatgat gttggtagct gataaagatg gtgttggtgg tagtggtgat tgataaagat 83760
gactgtgatt atattagtgg tggtggtgat gagattctaa aagctaactc cctactacct 83820
aaaaatggca gcaggaaaaa aaaatccaga aatgagtgat cagcactttt ctttccagaa 83880
tgcaagaatt attggtgaac gaactggctt ccggccagta cgcccccaga ttcggctaga 83940
aagagaacag cttcgcactg gaccttcaaa cacagaggta tgctcccatg gcaaggaaag 84000
taatgccctc ttccactcct cagatggctc tggcattttc agggarcagt catgtctgat 84060
ctcaagttcc acacaggctc catagcaggc aggggcagtg gtggctaata tcccctcctc 84120
tataaatggg gaaactgagg ctcaatgatg gttaaggacc tgctcaaggt tacatagagg 84180
ggcagtggtg atgttaatgg aggtggtgct gatgagatca atgttgataa tggtgtgact 84240
gggagtgggg atggtagctg gtgctgatgg aaatgacact atcaagtatg ttagtaccac 84300
agcagaggtg acgatctcaa aggcagtgtt aacatggctg cactaactgt ctcattggca 84360
atattaatcg tgtggcagag atgacagtat caatggcagt gttaatgatg gtggtgaaat 84420
ggtgaatggg gttggttttc taaagtctgt ggtcaaataa caggaaaatg tgtacttact 84480
ggatgtgtac ttcgtgtcag acacagcagc aagtccatta catgaatgac cttattaaat 84540
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cctaggtcat ccacaactat ggccatggag gctacgggct caccatccac tggggatgtg 84960
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cccctcagcc aatgaatcaa tgtgctcctt cataagccat tgcttctccc tcacttcttt 85140
cctcaaagaa gcatgaggtg agagaaagcc acaaagtcag tgcctggaga agggttcagc 85200
ccaacatggg gcccctctca tcactgaaat ccctctacct tctctgggtc tggcattata 85260
aagaacagct gaggctgtca ttccatgagt cttcagaaga aaggacagct cagaaaatca 85320
aagaggccaa ctgcccagag ccacagaaaa tggaggataa ttgaggctaa gtaacctgat 85380
tacaagttgt actaacatat taaaggttct gaaaagtcct gcagcaaaga caactatctg 85440
atgttgttta acccagtgct tgctaaacct atctggctat ggaactcttt tgcccagagc 85500
acccatgaat gccatgacac aaatctgaga aaatgctgga acagattttg ttgtatctgt 85560
tgtgtttgtt gtaggaggtt atacatacaa ctggggtgtg gagggggcag agaggtgagg 85620
cactgaacta gtaacacatg gtgtttgttc cacatctaga attccaaatg gcatcagcta 85680
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aatatctgaa actggagatt tttttttttt ttttttgaga caggatctca ctctgtcacc 85860
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aattaataga gaaaaggaat ttatttatta ccgttataga gtctgagaag tccaaggttg 86220
aggggccaca tctggtgaga gccttctctc tggctggtgc agaggtgggg actctctgca 86280
gagtcccagg gaggcttagg gcatcacgtg gtgagggggc tgattgtgct aatgtgctag 86340
ctcagctctg tcccttgtct tagaaagcca ccattttcct tcccaagatg acccattaat 86400
ccattaacct aataacccat taattgataa atggattaat ccatttatga gagcagcgct 86460
cttaggatcc aatcacctct taaaggcgcc acctctccag accaccacta aggtggtgga 86520
ctaaggacta agtctcaacg tgagttttgg cagggacgtt taagcaatag caagaactaa 86580
actcaccaag ca 86592
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cttcccctca ggaaatagca tcctgtgtcc ccgcactgca gttgtctggt ctctccagca 120
gtttggtact tccggctgct gca atg cgt gtg gtg gtg att gga gca gga gtc 173
Met Arg Val Val Val Ile Gly Ala Gly Val
1 5 10
atc ggg ctg tcc acc gcc ctc tgc atc cat gag cgc tac cac tca gtc 221
Ile Gly Leu Ser Thr Ala Leu Cys Ile His Glu Arg Tyr His Ser Val
15 20 25
ctg cag cca ctg gac ata aag gtc tac gcg gac cgc ttc acc cca ctc 269
Leu Gln Pro Leu Asp Ile Lys Val Tyr Ala Asp Arg Phe Thr Pro Leu
30 35 40
acc acc acc gac gtg gct gcc ggc ctc tgg cag ccc tac ctt tct gac 317
Thr Thr Thr Asp Val Ala Ala Gly Leu Trp Gln Pro Tyr Leu Ser Asp
45 50 55
ccc aac aac cca cag gag gcg gac tgg agc caa cag acc ttt gac tat 365
Pro Asn Asn Pro Gln Glu Ala Asp Trp Ser Gln Gln Thr Phe Asp Tyr
60 65 70
ctc ctg agc cat gtc cat tct ccc aac gct gaa aac ctg ggc ctg ttc 413
Leu Leu Ser His Val His Ser Pro Asn Ala Glu Asn Leu Gly Leu Phe
75 80 85 90
cta atc tcg ggc tac aac ctc ttc cat gaa gcc att ccg gac cct tcc 461
Leu Ile Ser Gly Tyr Asn Leu Phe His Glu Ala Ile Pro Asp Pro Ser
95 100 105
tgg aag gac aca gtt ctg gga ttt cgg aag ctg acc ccc aga gag ctg 509
Trp Lys Asp Thr Val Leu Gly Phe Arg Lys Leu Thr Pro Arg Glu Leu
110 115 120
gat atg ttc cca gat tac ggc tat ggc tgg ttc cac aca agc cta att 557
Asp Met Phe Pro Asp Tyr Gly Tyr Gly Trp Phe His Thr Ser Leu Ile
125 130 135
ctg gag gga aag aac tat cta cag tgg ctg act gaa agg tta act gag 605
Leu Glu Gly Lys Asn Tyr Leu Gln Trp Leu Thr Glu Arg Leu Thr Glu
140 145 150
agg gga gtg aag ttc ttc cag cgg aaa gtg gag tct ttt gag gag gtg 653
Arg Gly Val Lys Phe Phe Gln Arg Lys Val Glu Ser Phe Glu Glu Val
155 160 165 170
gca aga gaa ggc gca gac gtg att gtc aac tgc act ggg gta tgg gct 701
Ala Arg Glu Gly Ala Asp Val Ile Val Asn Cys Thr Gly Val Trp Ala
175 180 185
ggg gcg cta caa cga gac ccc ctg ctg cag cca ggc cgg ggg cag atc 749
Gly Ala Leu Gln Arg Asp Pro Leu Leu Gln Pro Gly Arg Gly Gln Ile
190 195 200
atg aag gtg gac gcc cct tgg atg aag cac ttc att ctc acc cat gac 797
Met Lys Val Asp Ala Pro Trp Met Lys His Phe Ile Leu Thr His Asp
205 210 215
cca gag aga ggc atc tac aat tcc ccg tac atc atc cca ggg acc cag 845
Pro Glu Arg Gly Ile Tyr Asn Ser Pro Tyr Ile Ile Pro Gly Thr Gln
220 225 230
aca gtt act ctt gga ggc atc ttc cag ttg gga aac tgg agt gaa cta 893
Thr Val Thr Leu Gly Gly Ile Phe Gln Leu Gly Asn Trp Ser Glu Leu
235 240 245 250
aac aat atc cag gac cac aac acc att tgg gaa ggc tgc tgc aga ctg 941
Asn Asn Ile Gln Asp His Asn Thr Ile Trp Glu Gly Cys Cys Arg Leu
255 260 265
gag ccc aca ctg aag aat gca aga att att ggt gaa cga act ggc ttc 989
Glu Pro Thr Leu Lys Asn Ala Arg Ile Ile Gly Glu Arg Thr Gly Phe
270 275 280
cgg cca gta cgc ccc cag att cgg cta gaa aga gaa cag ctt cgc act 1037
Arg Pro Val Arg Pro Gln Ile Arg Leu Glu Arg Glu Gln Leu Arg Thr
285 290 295
gga cct tca aac aca gag gtc atc cac aac tat ggc cat gga ggc tac 1085
Gly Pro Ser Asn Thr Glu Val Ile His Asn Tyr Gly His Gly Gly Tyr
300 305 310
ggg ctc acc atc cac tgg gga tgt gcc ctg gag gca gcc aag ctc ttt 1133
Gly Leu Thr Ile His Trp Gly Cys Ala Leu Glu Ala Ala Lys Leu Phe
315 320 325 330
ggg aga atc ctg gaa gaa aag aaa ttg tcc aga atg cca cca tcc cac 1181
Gly Arg Ile Leu Glu Glu Lys Lys Leu Ser Arg Met Pro Pro Ser His
335 340 345
ctc tga agactccagt gactgctgcc tccccccaca agaactccct tctcccctca 1237
Leu *
gccaatgaat caatgtgctc cttcataagc cattgcttct ccctcacttc tttcctcaaa 1297
gaagcatgag gtgagagaaa gccacaaagt cagtgcctgg agaagggttc agcccaacat 1357
ggggcccctc tcatcactga aatccctcta ccttctctgg gtctggcatt ataaagaaca 1417
gctgaggctg tcattccatg agtcttcaga agaaaggaca gctcagaaaa tcaaagaggc 1477
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Met Arg Val Val Val Ile Gly Ala Gly Val
1 5 10
atc ggg ctg tcc acc gcc ctc tgc atc cat gag cgc tac cac tca gtc 221
Ile Gly Leu Ser Thr Ala Leu Cys Ile His Glu Arg Tyr His Ser Val
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ctg cag cca ctg gac ata aag gtc tac gcg gac cgc ttc acc cca ctc 269
Leu Gln Pro Leu Asp Ile Lys Val Tyr Ala Asp Arg Phe Thr Pro Leu
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acc acc acc gac gtg gct gcc ggc ctc tgg cag ccc tac ctt tct gac 317
Thr Thr Thr Asp Val Ala Ala Gly Leu Trp Gln Pro Tyr Leu Ser Asp
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Leu Leu Ser His Val His Ser Pro Asn Ala Glu Asn Leu Gly Leu Phe
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Leu Ile Ser Gly Tyr Asn Leu Phe His Glu Ala Ile Pro Asp Pro Ser
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Trp Lys Asp Thr Val Leu Gly Phe Arg Lys Leu Thr Pro Arg Glu Leu
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gat atg ttc cca gat tac ggc tat ggc tgg ttc cac aca agc cta att 557
Asp Met Phe Pro Asp Tyr Gly Tyr Gly Trp Phe His Thr Ser Leu Ile
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ctg gag gga aag aac tat cta cag tgg ctg act gaa agg tta act gag 605
Leu Glu Gly Lys Asn Tyr Leu Gln Trp Leu Thr Glu Arg Leu Thr Glu
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Pro Glu Arg Gly Ile Tyr Asn Ser Pro Tyr Ile Ile Pro Gly Thr Gln
220 225 230
aca gtt act ctt gga ggc atc ttc cag ttg gga aac tgg agt gaa cta 893
Thr Val Thr Leu Gly Gly Ile Phe Gln Leu Gly Asn Trp Ser Glu Leu
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Glu Pro Thr Leu Lys Asn Ala Arg Ile Ile Gly Glu Arg Thr Gly Phe
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cgg cca gta cgc ccc cag att cgg cta gaa aga gaa cag ctt cgc act 1037
Arg Pro Val Arg Pro Gln Ile Arg Leu Glu Arg Glu Gln Leu Arg Thr
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ctc tga agactccagt gactgctgcc tccccccaca agaactccct tctcccctca 1237
Leu *
gccaatgaat caatgtgctc cttcataagc cattgcttct ccctcacttc tttcctcaaa 1297
gaagcatgag gtgagagaaa gccacaaagt cagtgcctgg agaagggttc agcccaacat 1357
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Val Lys Phe Phe Gln Arg Lys Val Glu Ser Phe Glu Glu Val Ala Arg
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Glu Gly Ala Asp Val Ile Val Asn Cys Thr Gly Val Trp Ala Gly Ala
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Leu Gln Arg Asp Pro Leu Leu Gln Pro Gly Arg Gly Gln Ile Met Lys
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gac cca gac agt tac tct tgg agg cat ctt cca gtt ggg aaa ctg gag 1815
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*
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Met Arg Val Val Val Ile Gly Ala Gly Val
1 5 10
atc ggg ctg tcc acc gcc ctc tgc atc cat gag cgc tac cac tca gtc 221
Ile Gly Leu Ser Thr Ala Leu Cys Ile His Glu Arg Tyr His Ser Val
15 20 25
ctg cag cca ctg gac ata aag gtc tac gcg gac cgc ttc acc cca ctc 269
Leu Gln Pro Leu Asp Ile Lys Val Tyr Ala Asp Arg Phe Thr Pro Leu
30 35 40
acc acc acc gac gtg gct gcc ggc ctc tgg cag ccc tac ctt tct gac 317
Thr Thr Thr Asp Val Ala Ala Gly Leu Trp Gln Pro Tyr Leu Ser Asp
45 50 55
ccc aac aac cca cag gag gcg acc ctt cct gga agg aca cag ttc tgg 365
Pro Asn Asn Pro Gln Glu Ala Thr Leu Pro Gly Arg Thr Gln Phe Trp
60 65 70
gat ttc gga agc tga cccccagaga gctggatatg ttcccagatt acggctatgg 420
Asp Phe Gly Ser *
75
ctggttccac acaagcctaa ttctggaggg aaagaactat ctacagtggc tgactgaaag 480
gttaactgag aggggagtga agttcttcca gcggaaagtg gagtcttttg aggaggtggc 540
aagagaaggc gcagacgtga ttgtcaactg cactggggta tgggctgggg cgctacaacg 600
agaccccctg ctgcagccag gccgggggca gatcatgaag gtggacgccc cttggatgaa 660
gcacttcatt ctcacccatg acccagagag aggcatctac aattccccgt acatcatccc 720
agggacccag acagttactc ttggaggcat cttccagttg ggaaactgga gtgaactaaa 780
caatatccag gaccacaaca ccatttggga aggctgctgc agactggagc ccacactgaa 840
gaatgcaaga attattggtg aacgaactgg cttccggcca gtacgccccc agattcggct 900
agaaagagaa cagcttcgca ctggaccttc aaacacagag gtcatccaca actatggcca 960
tggaggctac gggctcacca tccactgggg atgtgccctg gaggcagcca agctctttgg 1020
gagaatcctg gaagaaaaga aattgtccag aatgccacca tcccacctct gaagactcca 1080
gtgactgctg cctcccccca caagaactcc cttctcccct cagccaatga atcaatgtgc 1140
tccttcataa gccattgctt ctccctcact tctttcctca aagaagcatg aggtgagaga 1200
aagccacaaa gtcagtgcct ggagaagggt tcagcccaac atggggcccc tctcatcact 1260
gaaatccctc taccttctct gggtctggca ttataaagaa cagctgaggc tgtcattcca 1320
tgagtcttca gaagaaagga cagctcagaa aatcaaagag gccaactgcc cagagccaca 1380
gaaaatggag gataattgag gctaagtaac ctgattacaa gttgtactaa catattaaag 1440
gttctgaaaa gtcctgcagc aaagacaact atctgatgtt gtttaaccca gtgcttgcta 1500
aacctatctg gctatggaac tcttttgccc agagcaccca tgaatgccat gacacaaatc 1560
tgagaaaatg ctggaa 1576
<210>6
<211>1345
<212>DNA
<213>智人(Homo sapiens)
<220>
<221>5’UTR
<222>1..113
<220>
<221>CDS
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<220>
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<222>960..1345
<220>
<221>polyA_signal
<222>1321..1326
<400>6
gaaacccacg cagcctcctg gattcttccc cgtccctccc tctgtcctgg ggctgtgacc 60
tcctccatgt tattcacagg gtctcagcac gattcatctc aaaggctgct gca atg 116
Met
1
cgt gtg gtg gtg att gga gca gga gtc atc ggg ctg tcc acc gcc ctc 164
Arg Val Val Val Ile Gly Ala Gly Val Ile Gly Leu Ser Thr Ala Leu
5 10 15
tgc atc cat gag cgc tac cac tca gtc ctg cag cca ctg gac ata aag 212
Cys Ile His Glu Arg Tyr His Ser Val Leu Gln Pro Leu Asp Ile Lys
20 25 30
gtc tac gcg gac cgc ttc acc cca ctc acc acc acc gac gtg gct gcc 260
Val Tyr Ala Asp Arg Phe Thr Pro Leu Thr Thr Thr Asp Val Ala Ala
35 40 45
ggc ctc tgg cag ccc tac ctt tct gac ccc aac aac cca cag gag gcg 308
Gly Leu Trp Gln Pro Tyr Leu Ser Asp Pro Asn Asn Pro Gln Glu Ala
50 55 60 65
gac tgg agc caa cag acc ttt gac tat ctc ctg agc cat gtc cat tct 356
Asp Trp Ser Gln Gln Thr Phe Asp Tyr Leu Leu Ser His Val His Ser
70 75 80
ccc aac gct gaa aac ctg ggc ctg ttc cta atc tcg ggc tac aac ctc 404
Pro Asn Ala Glu Asn Leu Gly Leu Phe Leu Ile Ser Gly Tyr Asn Leu
85 90 95
ttc cat gaa gcc att ccg gtg gca aga gaa ggc gca gac gtg att gtc 452
Phe His Glu Ala Ile Pro Val Ala Arg Glu Gly Ala Asp Val Ile Val
100 105 110
aac tgc act ggg gta tgg gct ggg gcg cta caa cga gac ccc ctg ctg 500
Asn Cys Thr Gly Val Trp Ala Gly Ala Leu Gln Arg Asp Pro Leu Leu
115 120 125
cag cca ggc cgg ggg cag atc atg aag gtg gac gcc cct tgg atg aag 548
Gln Pro Gly Arg Gly Gln Ile Met Lys Val Asp Ala Pro Trp Met Lys
130 135 140 145
cacttc att ctc acc cat gac cca gag aga ggc atc tac aat tcc ccg 596
His Phe Ile Leu Thr His Asp Pro Glu Arg Gly Ile Tyr Asn Ser Pro
150 155 160
tac atc atc cca ggg acc cag aca gtt act ctt gga ggc atc ttc cag 644
Tyr Ile Ile Pro Gly Thr Gln Thr Val Thr Leu Gly Gly Ile Phe Gln
165 170 175
ttg gga aac tgg agt gaa cta aac aat atc cag gac cac aac acc att 692
Leu Gly Asn Trp Ser Glu Leu Asn Asn Ile Gln Asp His Asn Thr Ile
180 185 190
tgg gaa ggc tgc tgc aga ctg gag ccc aca ctg aag aat gca aga att 740
Trp Glu Gly Cys Cys Arg Leu Glu Pro Thr Leu Lys Asn Ala Arg Ile
195 200 205
att ggt gaa cga act ggc ttc cgg cca gta cgc ccc cag att cgg cta 788
Ile Gly Glu Arg Thr Gly Phe Arg Pro Val Arg Pro Gln Ile Arg Leu
210 215 220 225
gaa aga gaa cag ctt cgc act gga cct tca aac aca gag gtc atc cac 836
Glu Arg Glu Gln Leu Arg Thr Gly Pro Ser Asn Thr Glu Val Ile His
230 235 240
aac tat ggc cat gga ggc tac ggg ctc acc atc cac tgg gga tgt gcc 884
Asn Tyr Gly His Gly Gly Tyr Gly Leu Thr Ile His Trp Gly Cys Ala
245 250 255
ctg gag gca gcc aag ctc ttt ggg aga atc ctg gaa gaa aag aaa ttg 932
Leu Glu Ala Ala Lys Leu Phe Gly Arg Ile Leu Glu Glu Lys Lys Leu
260 265 270
tcc aga atg cca cca tcc cac ctc tga agactccagt gactgctgcc 979
Ser Arg Met Pro Pro Ser His Leu *
275 280
tccccccaca agaactccct tctcccctca gccaatgaat caatgtgctc cttcataagc 1039
cattgcttct ccctcacttc tttcctcaaa gaagcatgag gtgagagaaa gccacaaagt 1099
cagtgcctgg agaagggttc agcccaacat ggggcccctc tcatcactga aatccctcta 1159
ccttctctgg gtctggcatt ataaagaaca gctgaggctg tcattccatg agtcttcaga 1219
agaaaggaca gctcagaaaa tcaaagaggc caactgccca gagccacaga aaatggagga 1279
taattgaggc taagtaacct gattacaagt tgtactaaca tattaaaggt tctgaaaagt 1339
cctgca 1345
<210>7
<211>347
<212>PRT
<213>智人(Homo sapiens)
<400>7
Met Arg Val Val Val Ile Gly Ala Gly Val Ile Gly Leu Ser Thr Ala
1 5 10 15
Leu Cys Ile His Glu Arg Tyr His Ser Val Leu Gln Pro Leu Asp Ile
20 25 30
Lys Val Tyr Ala Asp Arg Phe Thr Pro Leu Thr Thr Thr Asp Val Ala
35 40 45
Ala Gly Leu Trp Gln Pro Tyr Leu Ser Asp Pro Asn Asn Pro Gln Glu
50 55 60
Ala Asp Trp Ser Gln Gln Thr Phe Asp Tyr Leu Leu Ser His Val His
65 70 75 80
Ser Pro Asn Ala Glu Asn Leu Gly Leu Phe Leu Ile Ser Gly Tyr Asn
85 90 95
Leu Phe His Glu Ala Ile Pro Asp Pro Ser Trp Lys Asp Thr Val Leu
100 105 110
Gly Phe Arg Lys Leu Thr Pro Arg Glu Leu Asp Met Phe Pro Asp Tyr
115 120 125
Gly Tyr Gly Trp Phe His Thr Ser Leu Ile Leu Glu Gly Lys Asn Tyr
130 135 140
Leu Gln Trp Leu Thr Glu Arg Leu Thr Glu Arg Gly Val Lys Phe Phe
145 150 155 160
Gln Arg Lys Val Glu Ser Phe Glu Glu Val Ala Arg Glu Gly Ala Asp
165 170 175
Val Ile Val Asn Cys Thr Gly Val Trp Ala Gly Ala Leu Gln Arg Asp
180 185 190
Pro Leu Leu Gln Pro Gly Arg Gly Gln Ile Met Lys Val Asp Ala Pro
195 200 205
Trp Met Lys His Phe Ile Leu Thr His Asp Pro Glu Arg Gly Ile Tyr
210 215 220
Asn Ser Pro Tyr Ile Ile Pro Gly Thr Gln Thr Val Thr Leu Gly Gly
225 230 235 240
Ile Phe Gln Leu Gly Asn Trp Ser Glu Leu Asn Asn Ile Gln Asp His
245 250 255
Asn Thr Ile Trp Glu Gly Cys Cys Arg Leu Glu Pro Thr Leu Lys Asn
260 265 270
Ala Arg Ile Ile Gly Glu Arg Thr Gly Phe Arg Pro Val Arg Pro Gln
275 280 285
Ile Arg Leu Glu Arg Glu Gln Leu Arg Thr Gly Pro Ser Asn Thr Glu
290 295 300
Val Ile His Asn Tyr Gly His Gly Gly Tyr Gly Leu Thr Ile His Trp
305 310 315 320
Gly Cys Ala Leu Glu Ala Ala Lys Leu Phe Gly Arg Ile Leu Glu Glu
325 330 335
Lys Lys Leu Ser Arg Met Pro Pro Ser His Leu
340 345
<210>8
<211>220
<212>PRT
<213>智人(Homo sapiens)
<400>8
Met Arg Val Val Val Ile Gly Ala Gly Val Ile Gly Leu Ser Thr Ala
1 5 10 15
Leu Cys Ile His Glu Arg Tyr His Ser Val Leu Gln Pro Leu Asp Ile
20 25 30
Lys Val Tyr Ala Asp Arg Phe Thr Pro Leu Thr Thr Thr Asp Val Ala
35 40 45
Ala Gly Leu Trp Gln Pro Tyr Leu Ser Asp Pro Asn Asn Pro Gln Glu
50 55 60
Ala Asp Trp Ser Gln Gln Thr Phe Asp Tyr Leu Leu Ser His Val His
65 70 75 80
Ser Pro Asn Ala Glu Asn Leu Gly Leu Phe Leu Ile Ser Gly Tyr Asn
85 90 95
Leu Phe His Glu Ala Ile Pro Asp Pro Ser Trp Lys Asp Thr Val Leu
100 105 110
Gly Phe Arg Lys Leu Thr Pro Arg Glu Leu Asp Met Phe Pro Asp Tyr
115 120 125
Gly Tyr Gly Trp Phe His Thr Ser Leu Ile Leu Glu Gly Lys Asn Tyr
130 135 140
Leu Gln Trp Leu Thr Glu Arg Leu Thr Glu Arg Gly Val Lys Phe Phe
145 150 155 160
Gln Arg Lys Val Glu Ser Phe Glu Glu Val Ala Arg Glu Gly Ala Asp
165 170 175
Val Ile Val Asn Cys Thr Gly Val Trp Ala Gly Ala Leu Gln Arg Asp
180 185 190
Pro Leu Leu Gln Pro Gly Arg Gly Gln Ile Met Lys Asp Pro Asp Ser
195 200 205
Tyr Ser Trp Arg His Leu Pro Val Gly Lys Leu Glu
210 215 220
<210>9
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<212>PRT
<213>智人(Homo sapiens)
<400>9
Met Arg Val Val Val Ile Gly Ala Gly Val Ile Gly Leu Ser Thr Ala
1 5 10 15
Leu Cys Ile His Glu Arg Tyr His Ser Val Leu Gln Pro Leu Asp Ile
20 25 30
Lys Val Tyr Ala Asp Arg Phe Thr Pro Leu Thr Thr Thr Asp Val Ala
35 40 45
Ala Gly Leu Trp Gln Pro Tyr Leu Ser Asp Pro Asn Asn Pro Gln Glu
50 55 60
Ala Thr Leu Pro Gly Arg Thr Gln Phe Trp Asp Phe Gly Ser
65 70 75
<210>10
<211>281
<212>PRT
<213>智人(Homo sapiens)
<400>10
Met Arg Val Val Val Ile Gly Ala Gly Val Ile Gly Leu Ser Thr Ala
1 5 10 15
Leu Cys Ile His Glu Arg Tyr His Ser Val Leu Gln Pro Leu Asp Ile
20 25 30
Lys Val Tyr Ala Asp Arg Phe Thr Pro Leu Thr Thr Thr Asp Val Ala
35 40 45
Ala Gly Leu Trp Gln Pro Tyr Leu Ser Asp Pro Asn Asn Pro Gln Glu
50 55 60
Ala Asp Trp Ser Gln Gln Thr Phe Asp Tyr Leu Leu Ser His Val His
65 70 75 80
Ser Pro Asn Ala Glu Asn Leu Gly Leu Phe Leu Ile Ser Gly Tyr Asn
85 90 95
Leu Phe His Glu Ala Ile Pro Val Ala Arg Glu Gly Ala Asp Val Ile
100 105 110
Val Asn Cys Thr Gly Val Trp Ala Gly Ala Leu Gln Arg Asp Pro Leu
115 120 125
Leu Gln Pro Gly Arg Gly Gln Ile Met Lys Val Asp Ala Pro Trp Met
130 135 140
Lys His Phe Ile Leu Thr His Asp Pro Glu Arg Gly Ile Tyr Asn Ser
145 150 155 160
Pro Tyr Ile Ile Pro Gly Thr Gln Thr Val Thr Leu Gly Gly Ile Phe
165 170 175
Gln Leu Gly Asn Trp Ser Glu Leu Asn Asn Ile Gln Asp His Asn Thr
180 185 190
Ile Trp Glu Gly Cys Cys Arg Leu Glu Pro Thr Leu Lys Asn Ala Arg
195 200 205
Ile Ile Gly Glu Arg Thr Gly Phe Arg Pro Val Arg Pro Gln Ile Arg
210 215 220
Leu Glu Arg Glu Gln Leu Arg Thr Gly Pro Ser Asn Thr Glu Val Ile
225 230 235 240
His Asn Tyr Gly His Gly Gly Tyr Gly Leu Thr Ile His Trp Gly Cys
245 250 255
Ala Leu Glu Ala Ala Lys Leu Phe Gly Arg Ile Leu Glu Glu Lys Lys
260 265 270
Leu Ser Arg Met Pro Pro Ser His Leu
275 280
<210>11
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<212>DNA
<213>智人(Homo sapiens)
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cgctttgttg tattctttgt tatttatcca ttttgccaaa ttatctgcaa gtagaaatat 60
cgaaataaga agctctttag caatttactt tggatattgg ttttcttttg aaggacagtt 120
attaaaatag cttgtaggat tactcatttt crtttttctt ctttttaaat ataaagcaat 180
gtcatcactt ttttccctgt attatatttc tcctcaataa ttgatatgct acattaaagg 240
aacacaaaat ggtcttaatt atgcaataat gatcaaggca aagagtgttt cctgggaact 300
aatggttgcc tgagaggagg tgatggcttg aggtccagct ggttattaag ccgcaggaaa 360
tgctgcaggc caagatttgt attatttctc tgagatgaaa atgaacccaa aaaaaggcaa 420
aatgggtttt tctccactaa tgggtaaaat gaactc 456
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<213>智人(Homo sapiens)
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<400>12
tttctcttga ctacagcaat gcagatttca attctgccat tgaattccca gacatattcg 60
tcatccccat tttcatcccc caccaccctg ccattttctt cgtgttaact tgttttcctg 120
actcacagaa atcacctttt cctgtataca tttttaggat gtcagacttt attctaatga 180
tttctcctag ttgcccccca aaattgtatt ctacrgtgtg attttaaagc tgaattttca 240
agatgatatt tcatatctat attttcacaa gcttttcttc tatgaatgtt attgtcagct 300
gtcagggtgt gagatggtac ttgatactac attctttcca agctgttgcc tgaatcggtt 360
taagacaaag tcattactag gctgtaaact gttgctctgc aaaattgagc agcacgtatt 420
taaccactca tacttcttag ctctccaaca ctttgagtcr ata 463
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<212>DNA
<213>智人(Homo sapiens)
<220>
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<220>
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<220>
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<220>
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<220>
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<220>
<221>allele
<222>723
<223>8-132-179：多态性碱基A或T
<400>13
tcatctctgc ttcacaatgc ygatgattta gctgggagga cccaaa atg ctg gaa 55
Met Leu Glu
1
aag ctg atg ggt gct gat tmt ctc cag ctt ttc aga tcc aga tat aca 103
Lys Leu Met Gly Ala Asp Xaa Leu Gln Leu Phe Arg Ser Arg Tyr Thr
5 10 15
ttg ggt aaa atc tacttc ata ggt ttt caa arg agc att ctt ctg agc 151
Leu Gly Lys Ile Tyr Phe Ile Gly Phe Gln Xaa Ser Ile Leu Leu Ser
20 25 30 35
aaa tct gaa aac tct cta aac tct att gca aag gag aca gaa kaa gga 199
Lys Ser Glu Asn Ser Leu Asn Ser Ile Ala Lys Glu Thr Glu Xaa Gly
40 45 50
aga gag acg gta aca agg aaa gaa rga tgg aag aga agg cat gag gac 247
Arg Glu Thr Val Thr Arg Lys Glu Xaa Trp Lys Arg Arg His Glu Asp
55 60 65
ggc tat ttg gaa atg gca cag agg cat tta cag aga tca tta tgt cct 295
Gly Tyr Leu Glu Met Ala Gln Arg His Leu Gln Arg Ser Leu Cys Pro
70 75 80
tgg gtc tct tac ctt cct cag ccc tat gca gag ctt gaa gaa gta agc 343
Trp Val Ser Tyr Leu Pro Gln Pro Tyr Ala Glu Leu Glu Glu Val Ser
85 90 95
agc cat gtt gga aaa gtc ttc atg gca aga aac tat gag ttc ctt gmc 391
Ser His Val Gly Lys Val Phe Met Ala Arg Asn Tyr Glu Phe Leu Xaa
100 105 110 115
tat gag gcc tct aar gac cgc agg cag cct cta gaa cga atg tgg acc 439
Tyr Glu Ala Ser Lys Asp Arg Arg Gln Pro Leu Glu Arg Met Trp Thr
120 125 130
tgc aac tac aac cag caa aaa gac cag tca tgc aac cac aag gaa ata 487
Cys Asn Tyr Asn Gln Gln Lys Asp Gln Ser Cys Asn His Lys Glu Ile
135 140 145
act tct acc aaa gct gaa tga gtttggaagc agattcttcc cagccaatcc 538
Thr Ser Thr Lys Ala Glu *
150
ttctgatgac aatgtagtct ggccaacatc ttcactggam tctgacggac tctgtgtctg 598
ggacccagct gataacacgt ggtgatggga ttgtatttgc aaytctctgg tcagtaagtg 658
ataaaatgcc atttctatgc acccacctgg cctgtgtgac tgggagaaty tctcttttta 718
ttaawtgtgc ttcaagtttt aaca 742
<210>14
<211>153
<212>PRT
<213>智人(Homo sapiens)
<400>14
Met Leu Glu Lys Leu Met Gly Ala Asp Xaa Leu Gln Leu Phe Arg Ser
1 5 10 15
Arg Tyr Thr Leu Gly Lys Ile Tyr Phe Ile Gly Phe Gln Xaa Ser Ile
20 25 30
Leu Leu Ser Lys Ser Glu Asn Ser Leu Asn Ser Ile Ala Lys Glu Thr
35 40 45
Glu Xaa Gly Arg Glu Thr Val Thr Arg Lys Glu Xaa Trp Lys Arg Arg
50 55 60
His Glu Asp Gly Tyr Leu Glu Met Ala Gln Arg His Leu Gln Arg Ser
65 70 75 80
Leu Cys Pro Trp Val Ser Tyr Leu Pro Gln Pro Tyr Ala Glu Leu Glu
85 90 95
Glu Val Ser Ser His Val Gly Lys Val Phe Met Ala Arg Asn Tyr Glu
100 105 110
Phe Leu Xaa Tyr Glu Ala Ser Lys Asp Arg Arg Gln Pro Leu Glu Arg
115 120 125
Met Trp Thr Cys Asn Tyr Asn Gln Gln Lys Asp Gln Ser Cys Asn His
130 135 140
Lys Glu Ile Thr Ser Thr Lys Ala Glu
145 150
<210>15
<211>476
<212>DNA
<213>智人(Homo sapiens)
<400>15
cat gag gac ggc tat ttg gaa atg gca cag agg cat tta cag aga tca 48
His Glu Asp Gly Tyr Leu Glu Met Ala Gln Arg His Leu Gln Arg Ser
1 5 10 15
tta tgt cct tgg gtc tct tac ctt cct cag ccc tat gca gag ctt gaa 96
Leu Cys Pro Trp Val Ser Tyr Leu Pro Gln Pro Tyr Ala Glu Leu Glu
20 25 30
gaa gta agc agc cat gtt gga aaa gtc ttc atg gca aga aac tat gag 144
Glu Val Ser Ser His Val Gly Lys Val Phe Met Ala Arg Asn Tyr Glu
35 40 45
ttc ctt gcc tat gag gcc tct aag gac cgc agg cag cct cta gaa cga 192
Phe Leu Ala Tyr Glu Ala Ser Lys Asp Arg Arg Gln Pro Leu Glu Arg
50 55 60
atg tgg acc tgc aac tac aac cag caa aaa gac cag tca tgc aac cac 240
Met Trp Thr Cys Asn Tyr Asn Gln Gln Lys Asp Gln Ser Cys Asn His
65 70 75 80
aag gaa ata act tct acc aaa gct gaa tga gtttggaagc agattcttcc 290
Lys Glu Ile Thr Ser Thr Lys Ala Glu *
85 90
cagccaatcc ttctgatgac aatgtagtct ggccaacatc ttcactggac tctgacggac 350
tctgtgtctg ggacccagct gataacacgt ggtgatggga ttgtatttgc aactctctgg 410
tcagtaagtg ataaaatgcc atttctatgc acccacctgg cctgtgtgac tgggagaatc 470
tctctt 476
<210>16
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<212>PRT
<213>智人(Homo sapiens)
<400>16
His Glu Asp Gly Tyr Leu Glu Met Ala Gln Arg His Leu Gln Arg Ser
1 5 10 15
Leu Cys Pro Trp Val Ser Tyr Leu Pro Gln Pro Tyr Ala Glu Leu Glu
20 25 30
Glu Val Ser Ser His Val Gly Lys Val Phe Met Ala Arg Asn Tyr Glu
35 40 45
Phe Leu Ala Tyr Glu Ala Ser Lys Asp Arg Arg Gln Pro Leu Glu Arg
50 55 60
Met Trp Thr Cys Asn Tyr Asn Gln Gln Lys Asp Gln Ser Cys Asn His
65 70 75 80
Lys Glu Ile Thr Ser Thr Lys Ala Glu
85
<210>17
<211>1633
<212>DNA
<213>智人(Homo sapiens)
<400>17
ttggggtcca ttgcaacccg aggcgagact agagttccca agcgagaagg gaagaggcag 60
tgggtgcacg tggaaggcgg acagagggct ggaaacaaga cgctccagaa tcaggagctt 120
cccctcagga aatagcatcc tgtgtccccg cactgcagtt gtctggtctc tccagcagtt 180
tggtacttcc ggctgctgca atg cgt gtg gtg gtg att gga gca gga gtc atc 233
Met Arg Val Val Val Ile Gly Ala Gly Val Ile
1 5 10
ggg ctg tcc acc gcc ctc tgc atc cat gag cgc tac cac tca gtc ctg 281
Gly Leu Ser Thr Ala Leu Cys Ile His Glu Arg Tyr His Ser Val Leu
15 20 25
cag cca ctg cac ata aag gtc tac gcg gac cgc ttc acc cca ctc acc 329
Gln Pro Leu His Ile Lys Val Tyr Ala Asp Arg Phe Thr Pro Leu Thr
30 35 40
acc acc gac gtg gct gcc ggc ctc tgg cag ccc tac ctt tct gac ccc 377
Thr Thr Asp Val Ala Ala Gly Leu Trp Gln Pro Tyr Leu Ser Asp Pro
45 50 55
aac aac cca cag gag gcg gac tgg agc caa cag acc ttt gac tat ctc 425
Asn Asn Pro Gln Glu Ala Asp Trp Ser Gln Gln Thr Phe Asp Tyr Leu
60 65 70 75
ctg agc cat gtc cat tct ccc aac gct gaa aac ctg ggc ctg ttc cta 473
Leu Ser His Val His Ser Pro Asn Ala Glu Asn Leu Gly Leu Phe Leu
80 85 90
atc tcg ggc tac aac ctc ttc cat gaa gcc att ccg gac cct tcc tgg 521
Ile Ser Gly Tyr Asn Leu Phe His Glu Ala Ile Pro Asp Pro Ser Trp
95 100 105
aag gac aca gtt ctg gga ttt cgg aag ctg acc ccc aga gag ctg gat 569
Lys Asp Thr Val Leu Gly Phe Arg Lys Leu Thr Pro Arg Glu Leu Asp
110 115 120
atg ttc cca gat tac ggc tat ggc tgg ttc cac aca agc cta att ctg 617
Met Phe Pro Asp Tyr Gly Tyr Gly Trp Phe His Thr Ser Leu Ile Leu
125 130 135
gag gga aag aac tat cta cag tgg ctg act gaa agg tta act gag agg 665
Glu Gly Lys Asn Tyr Leu Gln Trp Leu Thr Glu Arg Leu Thr Glu Arg
140 145 150 155
gga gtg aag ttc ttc cag cgg aaa gtg gag tct ttt gag gag gtg gca 713
Gly Val Lys Phe Phe Gln Arg Lys Val Glu Ser Phe Glu Glu Val Ala
160 165 170
aga gaa ggc gca gac gtg att gtc aac tgc act ggg gta tgg gct ggg 761
Arg Glu Gly Ala Asp Val Ile Val Asn Cys Thr Gly Val Trp Ala Gly
175 180 185
gcg cta caa cga gac ccc ctg ctg cag cca ggc cgg ggg cag atc atg 809
Ala Leu Gln Arg Asp Pro Leu Leu Gln Pro Gly Arg Gly Gln Ile Met
190 195 200
aag gtg gac gcc cct tgg atg aag cac ttc att ctc acc cat gac cca 857
Lys Val Asp Ala Pro Trp Met Lys His Phe Ile Leu Thr His Asp Pro
205 210 215
gag aga ggc atc tac aat tcc ccg tac atc atc cca ggg acc cag aca 905
Glu Arg Gly Ile Tyr Asn Ser Pro Tyr Ile Ile Pro Gly Thr Gln Thr
220 225 230 235
gtt act ctt gga ggc atc ttc cag ttg gga aac tgg agt gaa cta aac 953
Val Thr Leu Gly Gly Ile Phe Gln Leu Gly Asn Trp Ser Glu Leu Asn
240 245 250
aat atc cag gac cac aac acc att tgg gaa ggc tgc tgc aga ctg gag 1001
Asn Ile Gln Asp His Asn Thr Ile Trp Glu Gly Cys Cys Arg Leu Glu
255 260 265
ccc aca ctg aag aat gca aga att att ggt gaa gca act ggc ttc cgg 1049
Pro Thr Leu Lys Asn Ala Arg Ile Ile Gly Glu Ala Thr Gly Phe Arg
270 275 280
cca gta cgc ccc cag att cgg cta gaa aga gaa cag ctt cgc act gga 1097
Pro Val Arg Pro Gln Ile Arg Leu Glu Arg Glu Gln Leu Arg Thr Gly
285 290 295
cct tca aac aca gag gtc atc cac aac tat ggc cat gga ggc tac ggg 1145
Pro Ser Asn Thr Glu Val Ile His Asn Tyr Gly His Gly Gly Tyr Gly
300 305 310 315
ctc acc atc cac tgg gga tgt gcc ctg gag gca gcc aag ctc ttt ggg 1193
Leu Thr Ile His Trp Gly Cys Ala Leu Glu Ala Ala Lys Leu Phe Gly
320 325 330
aga atc ctg gaa gaa aag aaa ttg tcc aga atg cca cca tcc cac ctc 1241
Arg Ile Leu Glu Glu Lys Lys Leu Ser Arg Met Pro Pro Ser His Leu
335 340 345
tga agactccagt gactgctgcc tccccccaca agaactccct tctcccctca 1294
*
gccaatgaat caatgtgctc cttcataagc cattgcttct ccctcacttc tttcctcaaa 1354
gaagcatgag gtgagagaaa gccacraagt cagtgcctgg agaagggttc agcccaacat 1414
ggggcccctc tcatcactga aatccctcta ccttctctgg gtctggcatt ataaagaaca 1474
gctgaggctg tcattccatg agtcttcaga agaaaggaca gctcagaaag tcaaagaggc 1534
caactgccca gagccacaga aaatggagga taattgaggc taagtaacct gattacaagt 1594
tgtactaaca tattaaaggt tctgaaaagt cctgcaaaa 1633
<210>18
<21>347
<212>PRT
<213>智人(Homo sapiens)
<400>18
Met Arg Val Val Val Ile Gly Ala Gly Val Ile Gly Leu Ser Thr Ala
1 5 10 15
Leu Cys Ile His Glu Arg Tyr His Ser Val Leu Gln Pro Leu Asp Ile
20 25 30
Lys Val Tyr Ala Asp Arg Phe Thr Pro Leu Thr Thr Thr Asp Val Ala
35 40 45
Ala Gly Leu Trp Gln Pro Tyr Leu Ser Asp Pro Asn Asn Pro Gln Glu
50 55 60
Ala Asp Trp Ser Gln Gln Thr Phe Asp Tyr Leu Leu Ser His Val His
65 70 75 80
Ser Pro Asn Ala Glu Asn Leu Gly Leu Phe Leu Ile Ser Gly Tyr Asn
85 90 95
Leu Phe His Glu Ala Ile Pro Asp Pro Ser Trp Lys Asp Thr Val Leu
100 105 110
Gly Phe Arg Lys Leu Thr Pro Arg Glu Leu Asp Met Phe Pro Asp Tyr
115 120 125
Gly Tyr Gly Trp Phe His Thr Ser Leu Ile Leu Glu Gly Lys Asn Tyr
130 135 140
Leu Gln Trp Leu Thr Glu Arg Leu Thr Glu Arg Gly Val Lys Phe Phe
145 150 155 160
Gln Arg Lys Val Glu Ser Phe Glu Glu Val Ala Arg Glu Gly Ala Asp
165 170 175
Val Ile Val Asn Cys Thr Gly Val Trp Ala Gly Ala Leu Gln Arg Asp
180 185 190
Pro Leu Leu Gln Pro Gly Arg Gly Gln Ile Met Lys Val Asp Ala Pro
195 200 205
Trp Met Lys His Phe Ile Leu Thr His Asp Pro Glu Arg Gly Ile Tyr
210 215 220
Asn Ser Pro Tyr Ile Ile Pro Gly Thr Gln Thr Val Thr Leu Gly Gly
225 230 235 240
Ile Phe Gln Leu Gly Asn Trp Ser Glu Leu Asn Asn Ile Gln Asp His
245 250 255
Asn Thr Ile Trp Glu Gly Cys Cys Arg Leu Glu Pro Thr Leu Lys Asn
260 265 270
Ala Arg Ile Ile Gly Glu Ala Thr Gly Phe Arg Pro Val Arg Pro Gln
275 280 285
Ile Arg Leu Glu Arg Glu Gln Leu Arg Thr Gly Pro Ser Asn Thr Glu
290 295 300
Val Ile His Asn Tyr Gly His Gly Gly Tyr Gly Leu Thr Ile His Trp
305 310 315 320
Gly Cys Ala Leu Glu Ala Ala Lys Leu Phe Gly Arg Ile Leu Glu Glu
325 330 335
Lys Lys Leu Ser Arg Met Pro Pro Ser His Leu
340 345
<210>19
<211>1200
<212>DNA
<213>智人(Homo sapiens)
<400>19
atg gac aca gca cgg att gca gtt gtc ggg gca ggt gtg gtg ggg ctc 48
Met Asp Thr Ala Arg Ile Ala Val Val Gly Ala Gly Val Val Gly Leu
1 5 10 15
tcc acg gct gtg tgc atc tcc aaa ctg gtg ccc cga tgc tcc gtt acc 96
Ser Thr Ala Val Cys Ile Ser Lys Leu Val Pro Arg Cys Ser Val Thr
20 25 30
atc att tca gac aag ttt act cca gat acc acc agt gat gtg gca gcc 144
Ile Ile Ser Asp Lys Phe Thr Pro Asp Thr Thr Ser Asp Val Ala Ala
35 40 45
gga atg ctt att cct cac act tat cca gat aca ccc att cac acg cag 192
Gly Met Leu Ile Pro His Thr Tyr Pro Asp Thr Pro Ile His Thr Gln
50 55 60
aag cag tgg ttc aga gaa acc ttt aat cac ctc ttt gca att gcc aat 240
Lys Gln Trp Phe Arg Glu Thr Phe Asn His Leu Phe Ala Ile Ala Asn
65 70 75 80
tct gca gaa gct gga gat gct ggt gtt cat ttg gta tca ggt tgg cag 288
Ser Ala Glu Ala Gly Asp Ala Gly Val His Leu Val Ser Gly Trp Gln
85 90 95
ata ttt cag agc act ccg act gaa gaa gtg cca ttc tgg gct gac gtg 336
Ile Phe Gln Ser Thr Pro Thr Glu Glu Val Pro Phe Trp Ala Asp Val
100 105 110
gtt ctg gga ttt cga aag atg act gag gct gag ctg aag aaa ttc ccc 384
Val Leu Gly Phe Arg Lys Met Thr Glu Ala Glu Leu Lys Lys Phe Pro
115 120 125
cag tat gtg ttt ggt cag gct ttt aca acc ctg aaa tgt gaa tgc cct 432
Gln Tyr Val Phe Gly Gln Ala Phe Thr Thr Leu Lys Cys Glu Cys Pro
130 135 140
gcc tac ctc ccg tgg ttg gag aaa agg ata aag gga agt gga ggc tgg 480
Ala Tyr Leu Pro Trp Leu Glu Lys Arg Ile Lys Gly Ser Gly Gly Trp
145 150 155 160
aca ctc act cgg cga ata gaa gac ctg tgg gaa ctt cat ccg tcc ttt 528
Thr Leu Thr Arg Arg Ile Glu Asp Leu Trp Glu Leu His Pro Ser Phe
165 170 175
gac atc gtg gtc aac tgt tca ggc ctt gga agc aga cag ctt gca gga 576
Asp Ile Val Val Asn Cys Ser Gly Leu Gly Ser Arg Gln Leu Ala Gly
180 185 190
gac tca aag att ttc cct gta agg ggc caa gtc ctc caa gtt cag gct 624
Asp Ser Lys Ile Phe Pro Val Arg Gly Gln Val Leu Gln Val Gln Ala
195 200 205
ccc tgg gtg gag cat ttt atc cga gat ggc agt ggg ctg aca tat att 672
Pro Trp Val Glu His Phe Ile Arg Asp Gly Ser Gly Leu Thr Tyr Ile
210 215 220
tat cct ggt aca tcc cat gta acc cta ggt gga act agg caa aaa ggg 720
Tyr Pro Gly Thr Ser His Val Thr Leu Gly Gly Thr Arg Gln Lys Gly
225 230 235 240
gac tgg aat ctg tcc ccg gat gca gaa aat agc aga gag att ctt tcc 768
Asp Trp Asn Leu Ser Pro Asp Ala Glu Asn Ser Arg Glu Ile Leu Ser
245 250 255
cga tgc tgt gct ctg gag ccc tcc ctc cac gga gcc tgc aac atc agg 816
Arg Cys Cys Ala Leu Glu Pro Ser Leu His Gly Ala Cys Asn Ile Arg
260 265 270
gag aag gtg ggc ttg agg ccc tac agg cca ggc gtg cga ctg cag aca 864
Glu Lys Val Gly Leu Arg Pro Tyr Arg Pro Gly Val Arg Leu Gln Thr
275 280 285
gag ctc ctt gcg cga gat gga cag agg ctg cct gta gtc cac cac tat 912
Glu Leu Leu Ala Arg Asp Gly Gln Arg Leu Pro Val Val His His Tyr
290 295 300
ggc cat ggg agt ggg ggc atc tca gtg cac tgg ggc act gct ctg gag 960
Gly His Gly Ser Gly Gly Ile Ser Val His Trp Gly Thr Ala Leu Glu
305 310 315 320
gcc gcc agg ctg gtg agc gag tgt gtc cat gcc ctc agg acc ccc att 1008
Ala Ala Arg Leu Val Ser Glu Cys Val His Ala Leu Arg Thr Pro Ile
325 330 335
ccc aag tca aac ctg tag atgacataaa atgacagcaa agagactgag 1056
Pro Lys Ser Asn Leu *
340
agactgttga tcaaagcaca gaacaggttc aaataacttt tccactgcat gaaagtttaa 1116
ttagacattt ctttgttttc aacattagaa gtggtgtaac atgtaagctg agcacggtag 1176
catgcctata gtcccagcta cttg 1200
<210>20
<211>2056
<212>DNA
<213>智人(Homo sapiens)
<220>
<221>misc feature
<222>1025
<223>n＝a，g，c或t
<400>20
atg gac aca gca cgg att gca gtt gtc ggg gca ggt gtg gtg ggg ctc 48
Met Asp Thr Ala Arg Ile Ala Val Val Gly Ala Gly Val Val Gly Leu
1 5 10 15
tcc acg gct gtg tgc atc tcc aaa ctg gtg ccc cga tgc tcc gtt acc 96
Ser Thr Ala Val Cys Ile Ser Lys Leu Val Pro Arg Cys Ser Val Thr
20 25 30
atc att tca gac aag ttt act cca gat acc acc agt gat gtg gca gcc 144
Ile Ile Ser Asp Lys Phe Thr Pro Asp Thr Thr Ser Asp Val Ala Ala
35 40 45
gga atg ctt att cct cac act tat cca gat aca ccc att cac acg cag 192
Gly Met Leu Ile Pro His Thr Tyr Pro Asp Thr Pro Ile His Thr Gln
50 55 60
aag cag tgg ttc aga gaa acc ttt aat cac ctc ttt gca att gcc aat 240
Lys Gln Trp Phe Arg Glu Thr Phe Asn His Leu Phe Ala Ile Ala Asn
65 70 75 80
tct gca gaa gct gga gat gct ggt gtt cat ttg gta tca ggg ata aag 288
Ser Ala Glu Ala Gly Asp Ala Gly Val His Leu Val Ser Gly Ile Lys
85 90 95
gga agt gga ggc tgg aca ctc act cgg cga ata gaa gac ctg tgg gaa 336
Gly Ser Gly Gly Trp Thr Leu Thr Arg Arg Ile Glu Asp Leu Trp Glu
100 105 110
ctt cat ccg tcc ttt gac atc gtg gtc aac tgt tca ggc ctt gga agc 384
Leu His Pro Ser Phe Asp Ile Val Val Asn Cys Ser Gly Leu Gly Ser
115 120 125
aga cag ctt gca gga gac tca aag att ttc cct gta agg ggc caa gtc 432
Arg Gln Leu Ala Gly Asp Ser Lys Ile Phe Pro Val Arg Gly Gln Val
130 135 140
ctc caa gtt cag gct ccc tgg gtg gag cat ttt atc cga gat ggc agt 480
Leu Gln Val Gln Ala Pro Trp Val Glu His Phe Ile Arg Asp Gly Ser
145 150 155 160
ggg ctg aca tat att tat cct ggt aca tcc cat gta acc cta ggt gga 528
Gly Leu Thr Tyr Ile Tyr Pro Gly Thr Ser His Val Thr Leu Gly Gly
165 170 175
act agg caa aaa ggg gac tgg aat ctg tcc ccg gat gca gaa aat agc 576
Thr Arg Gln Lys Gly Asp Trp Asn Leu Ser Pro Asp Ala Glu Asn Ser
180 185 190
aga gag att ctt tcc cga tgc tgt gct ctg gag ccc tcc ctc cac gga 624
Arg Glu Ile Leu Ser Arg Cys Cys Ala Leu Glu Pro Ser Leu His Gly
195 200 205
gcc tgc aac atc agg gag aag gtg ggc ttg agg ccc tac agg cca ggc 672
Ala Cys Asn Ile Arg Glu Lys Val Gly Leu Arg Pro Tyr Arg Pro Gly
210 215 220
gtg cga ctg cag aca gag ctc ctt gcg cga gat gga cag agg ctg cct 720
Val Arg Leu Gln Thr Glu Leu Leu Ala Arg Asp Gly Gln Arg Leu Pro
225 230 235 240
gta gtc cac cac tat ggc cat ggg agt ggg ggc atc tca gtg cac tgg 768
Val Val His His Tyr Gly His Gly Ser Gly Gly Ile Ser Val His Trp
245 250 255
ggc act gct ctg gag gcc gcc agg ctg gtg agc gag tgt gtc cat gcc 816
Gly Thr Ala Leu Glu Ala Ala Arg Leu Val Ser Glu Cys Val His Ala
260 265 270
ctc agg acc ccc att ccc aag tca aac ctg tag atgacataaa atgacagcaa 869
Leu Arg Thr Pro Ile Pro Lys Ser Asn Leu *
275 280
agagactgag agactgttga tcaaagcaca gaacaggttc aaataacttt tccactgcat 929
gaaagtttaa ttagacattt ctttgttttc aacattagaa gtggtgtaac atgtaagctg 989
agcacggtag catgcctata gtcccagcta cttgatggac acagcacgga 1041
ttgcagttgt cggggcaggt gtggtggggc tctccacggc tgtgtgcatc tccaaactgg 1101
tgccccgatg ctccgttacc atcatttcag acaagtttac tccagatacc accagtgatg 1161
tggcagccgg aatgcttatt cctcacactt atccagatac acccattcac acgcagaagc 1221
agtggttcag agaaaccttt aatcacctct ttgcaattgc caattctgca gaagctggag 1281
atgctggtgt tcatttggta tcagggataa agggaagtgg aggctggaca ctcactcggc 1341
gaatagaaga cctgtgggaa cttcatccgt cctttgacat cgtggtcaac tgttcaggcc 1401
ttggaagcag acagcttgca ggagactcaa agattttccc tgtaaggggc caagtcctcc 1461
aagttcaggc tccctgggtg gagcatttta tccgagatgg cagtgggctg acatatattt 1521
atcctggtac atcccatgta accctaggtg gaactaggca aaaaggggac tggaatctgt 1581
ccccggatgc agaaaatagc agagagattc tttcccgatg ctgtgctctg gagccctccc 1641
tccacggagc ctgcaacatc agggagaagg tgggcttgag gccctacagg ccaggcgtgc 1701
gactgcagac agagctcctt gcgcgagatg gacagaggct gcctgtagtc caccactatg 1761
gccatgggag tgggggcatc tcagtgcact ggggcactgc tctggaggcc gccaggctgg 1821
tgagcgagtg tgtccatgcc ctcaggaccc ccattcccaa gtcaaacctg tagatgacat 1881
aaaatgacag caaagagact gagagactgt tgatcaaagc acagaacagg ttcaaataac 1941
ttttccactg catgaaagtt taattagaca tttctttgtt ttcaacatta gaagtggtgt 2001
aacatgtaag ctgagcacgg tagcatgcct atagtcccag ctacttg 2048
<210>21
<211>341
<212>PRT
<213>智人(Homo sapiens)
<400>21
Met Asp Thr Ala Arg Ile Ala Val Val Gly Ala Gly Val Val Gly Leu
1 5 10 15
Ser Thr Ala Val Cys Ile Ser Lys Leu Val Pro Arg Cys Ser Val Thr
20 25 30
Ile Ile Ser Asp Lys Phe Thr Pro Asp Thr Thr Ser Asp Val Ala Ala
35 40 45
Gly Met Leu Ile Pro His Thr Tyr Pro Asp Thr Pro Ile His Thr Gln
50 55 60
Lys Gln Trp Phe Arg Glu Thr Phe Asn His Leu Phe Ala Ile Ala Asn
65 70 75 80
Ser Ala Glu Ala Gly Asp Ala Gly Val His Leu Val Ser Gly Trp Gln
85 90 95
Ile Phe Gln Ser Thr Pro Thr Glu Glu Val Pro Phe Trp Ala Asp Val
100 105 110
Val Leu Gly Phe Arg Lys Met Thr Glu Ala Glu Leu Lys Lys Phe Pro
115 120 125
Gln Tyr Val Phe Gly Gln Ala Phe Thr Thr Leu Lys Cys Glu Cys Pro
130 135 140
Ala Tyr Leu Pro Trp Leu Glu Lys Arg Ile Lys Gly Ser Gly Gly Trp
145 150 155 160
Thr Leu Thr Arg Arg Ile Glu Asp Leu Trp Glu Leu His Pro Ser Phe
165 170 175
Asp Ile Val Val Asn Cys Ser Gly Leu Gly Ser Arg Gln Leu Ala Gly
180 185 190
Asp Ser Lys Ile Phe Pro Val Arg Gly Gln Val Leu Gln Val Gln Ala
195 200 205
Pro Trp Val Glu His Phe Ile Arg Asp Gly Ser Gly Leu Thr Tyr Ile
210 215 220
Tyr Pro Gly Thr Ser His Val Thr Leu Gly Gly Thr Arg Gln Lys Gly
225 230 235 240
Asp Trp Asn Leu Ser Pro Asp Ala Glu Asn Ser Arg Glu Ile Leu Ser
245 250 255
Arg Cys Cys Ala Leu Glu Pro Ser Leu His Gly Ala Cys Asn Ile Arg
260 265 270
Glu Lys Val Gly Leu Arg Pro Tyr Arg Pro Gly Val Arg Leu Gln Thr
275 280 285
Glu Leu Leu Ala Arg Asp Gly Gln Arg Leu Pro Val Val His His Tyr
290 295 300
Gly His Gly Ser Gly Gly Ile Ser Val His Trp Gly Thr Ala Leu Glu
305 310 315 320
Ala Ala Arg Leu Val Ser Glu Cys Val His Ala Leu Arg Thr Pro Ile
325 330 335
Pro Lys Ser Asn Leu
340
<210>22
<211>282
<212>PRT
<213>智人(Homo sapiens)
<400>22
Met Asp Thr Ala Arg Ile Ala Val Val Gly Ala Gly Val Val Gly Leu
1 5 10 15
Ser Thr Ala Val Cys Ile Ser Lys Leu Val Pro Arg Cys Ser Val Thr
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Ile Ile Ser Asp Lys Phe Thr Pro Asp Thr Thr Ser Asp Val Ala Ala
35 40 45
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50 55 60
Lys Gln Trp Phe Arg Glu Thr Phe Asn His Leu Phe Ala Ile Ala Asn
65 70 75 80
Ser Ala Glu Ala Gly Asp Ala Gly Val His Leu Val Ser Gly Ile Lys
85 90 95
Gly Ser Gly Gly Trp Thr Leu Thr Arg Arg Ile Glu Asp Leu Trp Glu
100 105 110
Leu His Pro Ser Phe Asp Ile Val Val Asn Cys Ser Gly Leu Gly Ser
115 120 125
Arg Gln Leu Ala Gly Asp Ser Lys Ile Phe Pro Val Arg Gly Gln Val
130 135 140
Leu Gln Val Gln Ala Pro Trp Val Glu His Phe Ile Arg Asp Gly Ser
145 150 155 160
Gly Leu Thr Tyr Ile Tyr Pro Gly Thr Ser His Val Thr Leu Gly Gly
165 170 175
Thr Arg Gln Lys Gly Asp Trp Asn Leu Ser Pro Asp Ala Glu Asn Ser
180 185 190
Arg Glu Ile Leu Ser Arg Cys Cys Ala Leu Glu Pro Ser Leu His Gly
195 200 205
Ala Cys Asn Ile Arg Glu Lys Val Gly Leu Arg Pro Tyr Arg Pro Gly
210 215 220
Val Arg Leu Gln Thr Glu Leu Leu Ala Arg Asp Gly Gln Arg Leu Pro
225 230 235 240
Val Val His His Tyr Gly His Gly Ser Gly Gly Ile Ser Val His Trp
245 250 255
Gly Thr Ala Leu Glu Ala Ala Arg Leu Val Ser Glu Cys Val His Ala
260 265 270
Leu Arg Thr Pro Ile Pro Lys Ser Asn Leu
275 280
<210>23
<211>47
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡核苷酸24-1443-126
<400>23
tacggcttag taagttggag aacyaggatc agaagacagg tctgcct 47
<220>
<221>allele
<222>24
<223>多态性碱基C或T
<210>24
<211>47
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡核苷酸24-1457-52
<220>
<221>allele
<222>24
<223>多态性碱基C或A
<400>24
tctgagatgc ccctgtgtcc tctmagggag tagtggctga gcatttc 47
<210>25
<211>47
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡核苷酸27-93-181
<220>
<221>allele
<222>24
<223>多态性碱基C或T
<400>25
cccagctctg ccactggcga gctytgtggc cttgggcaag ttactcc 47
<210>26
<211>47
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡核苷酸24-1461-256
<220>
<221>allele
<222>24
<223>多态性碱基A或G
<400>26
gatggctctg gcattttcag ggarcagtca tgtctgatct caagttc 47
按照本发明的方法可治疗的中枢神经系统障碍包括早衰性痴呆(早期发作的 阿耳茨海默氏病)、老年性痴呆(阿耳茨海默氏型痴呆)、帕金森氏症包括帕金森氏 病、杭廷顿舞蹈病、迟发性运动障碍、运动过度、躁狂症、注意力缺陷活动过度障 碍(ADHD)、注意力缺陷障碍(ADD)、焦虑症、诵读困难、精神病、精神分裂症、双 相性精神障碍、重度抑郁症、躁狂症、轻度躁狂症、抑郁症、孤独症、滥用药物、 过度攻击、抽搐症和图雷特氏综合征。本发明优选的中枢神经系统障碍包括精神分 裂症和双相性精神障碍。精神分裂症和精神分裂症样精神障碍的较优选例子包括： 精神分裂症(紧张型)、精神分裂症(无组织型)、精神分裂症(妄想型)、精神分裂症 (混合型)、精神分裂症(残余型)、精神分裂症样精神障碍、短期反应性精神病、情 感分裂性精神障碍、诱发性精神病、精神分裂型人格障碍、精神分裂样人格障碍、 妄想型人格障碍和妄想(类偏执狂)性精神障碍。
以目前用于基因图谱的两种策略连锁分析和关联性研究，可进行鉴定与一具 体性状有关的基因，例如，特定中枢神经系统障碍，象精神分裂症。连锁分析需要 研究其成员有多人患病的家族，这种分析现在用于检测单个或寡基因固有性状。与 之相反，关联性研究检查与阴性性状(T-)对照组相比无亲戚关系的性状(T+)的个体 的标记等位基因频率，这种研究通常用于检测多基因遗传。
本申请揭示了位于与精神分裂症相关的D-氨基酸氧化酶基因上的另外一些双 等位标记。鉴定这些与精神分裂症相关的双等位标记可以进一步限定怀疑含有与发 展精神分裂症易感因素有关的遗传决定子的染色体区，而且可导致鉴定本文所公开 的与发展精神分裂症易感因素相关的新基因序列。此外，如前所述的g34872基因 和现在所述的D-氨基酸氧化酶基因上的双等位标记也可单独使用或联合使用以确 定个体发展中枢神经系统障碍的风险。而且，如前所述的g34872基因和现在所述 的D-氨基酸氧化酶基因上的双等位标记都可单独使用或联合使用以确定个体通过 本发明所述的治疗方法所获得的成效。另外，序列信息提供一种资源可以进一步鉴 定那些区域内的新基因和标记。另外，含有精神分裂症相关基因的序列例如可用于 分离推定基因族中的其它基因，从其它物种鉴定同系物，治疗疾病及用作本文所述 的诊断和筛选分析中的探针和引物。而且，所鉴定的多态性也可用来设计精神分裂 症和双相性精神障碍遗传罹病倾向的可靠性检测分析。它们还可用来设计药物的筛 选方案，准确和有效地评估新旧药物或治疗方案的治疗效果和潜在的副作用。
定义
术语“治疗”指的是改善、减轻症状，暂时或永久性消除症状的病因，或者 预防或减慢指定障碍或疾病出现症状。
化合物的剂量是能防止所述疾病症状复发或者治疗病人所患疾病的某些症状 的有效量。“有效量”、“有效治疗量”、“治疗量”或“有效剂量”指获得所希望的 药理或治疗效果，从而有效预防或治疗该疾病的足够量。预防疾病在医学上表现为 大大延迟疾病症状的发作时间。治疗疾病表现为减少与疾病相关的症状或者改善疾 病症状的复发情况。本领域技术人员给予个体一定量的化合物并观察结果，可轻易 确定本发明化合物的有效治疗量。另外，本领域技术人员也熟知鉴定个体患有中枢 神经系统障碍的方法，并且能够轻易个体患有中枢神经系统障碍。
术语“拮抗剂”和“抑制剂”看成是同义的，本文可通用。本发明的“拮抗 剂”化合物可与典型或非典型抗中枢神经系统障碍的药物如抗精神病药物一起给 药。典型抗精神病药物包括：氟派啶醇(haloperidol)、氟奋乃静(fluphenazine)、 奋乃静(perphenazine)、氯丙嗪、吗茚酮(molindone)、匹莫齐特(pimozide)、三 氟拉嗪和硫利哒嗪、噻嗪化物、噻二唑、恶二唑等等。非典型抗精神病药物包括： 氯扎平、利培酮、奥扎平、舍吲哚、M100907、齐拉西酮、思瑞康(seroquel)、佐 替平(zotepine)、氨磺必利(amisulpride)、伊潘立酮(iloperidone)、苯乙肼等等。 典型抗抑郁和抗焦虑症药物包括：杂环抗抑郁药(三环抗抑郁药、四环抗抑郁药等)、 5-羟色胺再吸收抑制剂、混合型5-羟色胺和去甲肾上腺素再吸收抑制剂、多巴胺 再吸收抑制剂和单胺氧化酶抑制剂。拮抗剂也可用来治疗不能采用上述药物进行治 疗的个体。本发明也提供一种精神分裂症、双相性精神障碍或其它中枢神经系统障 碍的预防和治疗方法，该方法无需用其它抗精神病药物、抗抑郁药、抗焦虑症药或 其它病人无反应的药物来治疗。抗精神病药物、抗抑郁药、抗焦虑症药或其它药物 可以亚治疗剂量，即较单独用上述药进行治疗时通常所采用的剂量低的剂量给药。 被认为是D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶抑制剂，或者固有地用作D-氨基酸 氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶抑制剂的治疗精神分裂症、双相性精神障碍、抑郁症 及其它中枢神经系统障碍所用的药物明确排除于在D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸 氧化酶“拮抗剂”的定义之内，也明确排除于本发明的范围之内。此外，本文所公 开的任何一种分子、化合物或药物可明确排除于本发明的范围之内。
除非另有说明，“烷基”指含有1到8个碳原子的支链或无支链饱和烃链，例 如甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、正戊基、正己基等等。
“烷氧基”指-OR基团，其中R如本文所定义。R优选是含有1到3个碳原子 的支链或无支链饱和烃链。
除非另有说明，“卤素”指氟、氯、溴或碘。
“苯基”包括以选自烷基、烷氧基、羟基、卤素和卤代烷基的取代基任意单 取代或多取代的全部可能的异构体苯基。
优选的杂芳基环包括吡咯、呋喃、噻吩、吡啶、嘧啶、哒嗪、吡嗪、三唑、 四唑、吡唑、咪唑、异噻唑、噻唑、异恶唑和恶唑。优选的“与苯基稠合的杂芳基” 环包括吲哚、异吲哚、苯并呋喃、苯并噻吩、喹啉、异喹啉、喹喔啉、喹唑啉、苯 并三唑、吲唑、苯并咪唑、苯并噻唑、苯并异恶唑和苯并恶唑。当用术语杂芳基环 时假定包括“与苯基稠合的杂芳基”环在内。术语“饱和或部分不饱和杂环烷基环” 指带有5-7个环原子并含有1-3个选自N、O或S的杂原子的饱和或部分不饱和(但 不是芳香族或完全饱和)杂环。优选的饱和或部分不饱和杂环烷基环包括哌啶、哌 嗪、吗啉、四氢吡喃、硫代吗啉或吡咯烷。
术语“药学上可接受的盐类”指该化合物的盐类具有所希望的药理活性并且 其在生物上或者其他方面都不是不希望的。用无机酸可形成这些盐类，如乙酸盐、 己二酸盐、藻酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、硫酸氢盐、丁酸盐、柠檬 酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡萄糖酸盐、十二烷基硫酸盐、 乙烷磺酸盐、富马酸盐、葡萄糖庚酸盐、甘油磷酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、 盐酸盐、溴酸盐、碘酸盐、2-羟基乙烷磺酸盐、乳酸盐、马来酸盐、甲烷磺酸盐、 2-萘磺酸盐、烟酸盐、草酸盐、硫氰酸盐、甲苯磺酸盐和十一烷酸盐。碱性盐包括 铵盐、碱金属盐如钠盐和钾盐、碱土金属盐如钙盐和镁盐、带有有机碱的盐如二环 己胺盐、N-甲基-D-葡糖胺、以及带有氨基酸的盐如精氨酸、赖氨酸等等。也可以 用诸如短链卤代烷基如甲基、乙基、丙基和丁基氯化物、溴化物和碘化物，二烷基 硫酸盐如二甲基、二乙基、二丁基和二戊基硫酸盐，长链卤化物如癸基、十二烷基、 十四烷基和十八烷基氯化物、溴化物和碘化物，卤代芳烷基如苯甲基和苯乙基溴化 物等试剂使含有碱性氮的基团季铵化。由此得到水溶性或油溶性或分散性产物。另 外，以下叙述药学及药学上可接受的组合物。
本发明的化合物有非对称中心，因而可生成立体异构混合体或单个立体异构 体。采用光学活性原料，在合成的某一适当阶段溶解外消旋或非外消旋中间混合物， 或者溶解以一般式(I)表示的化合物可得到单个立体异构体。需要明白的是，本发 明的范围包括单个立体异构体以及立体异构混合体(外消旋和非外消旋)。本发明的 化合物具有至少一个非对称中心，因而可生成立体异构混合体或单个R-和S-立体 异构体。在合成的某一适当阶段溶解外消旋或非外消旋中间混合物可得到单个对映 体。不用说，本发明的范围包括单个R-和S-立体异构体以及立体异构混合体。
“异构体”是具有同一个分子式的不同化合物。
“立体异构体”是原子在空间的排列方式不同的异构体。
“对映体”是一对相互间镜像不重叠的立体异构体。
“非对映异构体”是相互间非镜像的立体异构体。
“外消旋混合体”指含有相等部分的单个非对映异构体的混合体。“非外消旋 混合体”是含有不相等部分的单个非对映异构体或立体异构体的混合体。
“取代的烷基”指羧基烷基如乙酰基、氨基烷基、二烷基氨基烷基、羟烷和 巯基烷基、烷基甲硅烷基。
本发明涉及以一般式I-VI表示的化合物，包括但不限于本文所提供的具体实 施例。此外，这些化合物中任何一种都可以制成药学上可接受的盐。
需要注意的是，有机化学领域技术人员可合成本文所述的本发明化合物。
本文所用的术语“精神状态”指病理学上的心理状态，这种状态是精神病或 者可能与精神病特征相关。这些状态包括但不限于精神病的诊断和统计手册第四修 订版(DSM-IV-R)(1994)所表述的精神障碍，包括精神分裂症和急性躁狂症。DSM- IV-R由美国命名与统计学会专责小组制作，给出了诊断类别的清晰说明。本领域 技术人员知道病理学上的心理状态有不同的命名、疾病分类及分类系统，而这些系 统随医学的科学发展逐步形成。
术语“精神分裂症”包括或者可具体限于精神分裂症、精神分裂症样精神障 碍、情感分裂性精神障碍、妄想精神障碍、短期精神障碍、由一般医学状况而引起 的精神障碍、其它未注明或本文别处所述之精神障碍。这些疾病的症状大部分在 DSM-IV-R有所定义。这本书涉及这些疾病的章节纳入其整体内容作为参考。
本文所用的术语“双相性精神障碍”指以DSM-IV-R及第三修订版(1994)中的 类别296.xx所述的双相性精神障碍为特征的状态。为了更加清楚起见，申请人考 虑了DSM-IV-R所述的双相性精神障碍I型和双相性精神障碍II型的治疗。该术语 还包括循环性精神障碍。循环性精神障碍指交替出现抑郁症状和轻度躁狂症症状。 本领域技术人员知道病理学上的心理状态有不同的命名、疾病分类及分类系统，而 这些系统随医学的科学发展逐步形成。
本文所用与重度抑郁有关的术语“无反应性”指无合理的临床反应的病人(例 如，经过一个或多个常规抗抑郁药的临床疗程后，病人的汉密尔顿抑郁量表(HAM- D)较基线评分减少50％)。
“重度抑郁症发作”定义为至少两星期有抑郁情绪或者失去兴趣，可能伴随 其它抑郁症状。这些症状必须在至少连续两个星期内的几乎每天(即14天中至少有 10天)白天大部分时间(即病人至少三分之二清醒时间)出现。“抑郁情绪”通常表 现为病人感到悲伤、绝望、无助或无价值。旁人通过例如面部表情、姿势、声音及 眼泪观察到病人看起来是悲伤的。儿童和青少年的情绪可以暴躁。“失去兴趣”通 常表现为病人对业余爱好没有兴趣或者对以前认为很快乐的活动不再感到任何乐 趣。
重度抑郁症发作可伴随其它抑郁症状，包括不节食时体重急剧下降或体重增 加(例如，一个月内体重变化超过5％)，或者食欲不振或大增；失眠或嗜睡；精神 性运动激动或阻抑；疲倦或精神不振；无价值感或者过份或不适当自疚；思考或集 中力减退；或难以作决定；以及想死亡，有或无特定计划的自杀念头，或者试图自 杀。
“躁狂症发作”定义为情绪异常及持续高涨、亢奋或易激动发怒的一段明显 的时期。情绪异常的这段时期必须持续至少一个星期(或者如果需要接受住院治疗 时间可短些)。这种情绪波动必须还要伴随以下列出的至少三种症状：自我评价过 高或变得夸大、对睡眠的需要减少、说话急速、思想活跃、注意力分散、增加投入 有目标导向的活动或精神性运动激动、过度投入开心的活动，但往往会有不愉快的 结果。如果情绪容易动怒(而不是高涨或亢奋)，则必须要有以上至少四种症状。情 绪波动的严重程度必须足以引起社交或工作能力显著下降或者需要住院治疗，或者 表现为有精神病特征。
“轻度躁狂症发作”比躁狂症发作的程度轻。轻度躁狂症发作的症状通常与 躁狂症发作所限定的症状相同，除了不存在错觉和幻觉外，而且发作的严重程度不 足以引起社交或工作能力显著下降或者个体不需要住院治疗。
本文所用的术语“孤独症”指以DSM-IV-R中的类别296.xx，包括299.00、 299.80和299.10，优选299.00所述的状态。
术语“焦虑症”包括但不限于强迫症(obsessive-compulsive disorder)、精 神活性物质焦虑症、创伤后压力症、广泛性焦虑症、其它未注明之焦虑症、以及器 质性焦虑症(organic anxiety disorder)。
本文所用的术语“药物滥用”指不希望有的在身体和/或心理上对药物的依赖。 该术语指对可卡因、迷幻药、大麻、安他非明、致幻剂、苯环利定苯并二氧类、 酒精和烟碱等药物的依赖。
本文所用的术语“注意力缺陷活动过度障碍(ADHD)”指以持续出现疏忽大意、 活动过度、冲动或其任意组合为特征的状态或障碍。
本文所用的术语“过度攻击”指以攻击过度以致影响个人的日常生活、人际 关系，而且可能例如在企图进行暴力自杀的情况下威胁到个人安全为特征的情况。 用本发明要求保护的方法可被治疗的过度攻击不依赖于精神状态，而且与采用的药 物或其它物质没有直接关系。
痉挛是一种突然、快速复发、无规律、刻板的运动或发声，发作是不可抗拒 的但可以抑制，持续时间不同。常见的简单运动痉挛包括眨眼、颈部抽搐、耸肩、 扮鬼脸和咳嗽。常见的简单发声痉挛包括清喉咙、打呼噜、鼻吸气、喷鼻息和咆哮。 常见的复杂运动痉挛包括面部表情、修饰行为、跳跃、触摸、跺脚及对一种事物微 笑。常见的复杂发声痉挛包括重复上下文的字或词语、污言秽语(使用社会上不接 受的词语，往往是很猥亵的)、重复语句(重复自己的发声或词语)，以及模仿语言(重 复最后听到的声音、字或词语)。本文所用的术语“痉挛”指包括以一种或多种运 动痉挛和一种或多种痉挛以及多种发声痉挛为特征的痉挛障碍。痉挛的例子包括短 暂性痉挛障碍、图雷特氏障碍、慢性发声痉挛障碍、如DSM-IV-R所述其它未注明 之痉挛障碍。
术语“包含”、“由…组成”、“基本上由…组成”有不同的含义，每个术语在 本文可被另一个术语代替，改变本发明的范围。
术语“寡核苷酸”及“多核苷酸”在本文是互通的，包括RNA、DNA或RNA/DNA 杂交序列，其具有一个以上单链或双螺旋型核苷酸。本文所用的术语“ 核苷酸”是 形容词，描述含有任何长度单链或双螺旋型的RNA、DNA或RNA/DNA杂交序列的分 子。术语“核苷酸”在本文也用作名词，指个体核苷酸或核苷酸簇，意味着分子、 或大核酸分子中的个体单元，对于寡核苷酸或多核苷酸内的核酸，其包括嘌呤或嘧 啶、核糖或脱氧核糖分子、以及磷酸盐基因、或磷酸二酯键。虽然术语“核苷酸” 在本文也用于包括“修饰后的核苷酸”，其包括至少以下一种修饰：(a)变换连接基， (b)嘌呤的类似型，(c)嘧啶的类似型，或(d)糖的类似型，例如，类似连接基、嘌 呤、嘧啶及糖的例子可参看本文引用的参考文献PCT公开号WO95/04064。不过， 本发明的多核苷酸优选包括大于50％常规脱氧核糖核苷酸，最好包括大于90％常规 脱氧核糖核苷酸。本发明的多核苷酸序列可用任何一种已知的方法制备，包括合成、 重组、体内产生、或其组合、以及用本技术领域已知的任何一种纯化方法。
本文的术语“纯化的”用于描述与其它化合物分离的本发明的多核苷酸或多 核苷酸载体，包括但不限于：其它核酸、碳水化合物、脂质和蛋白质(例如合成多 核苷酸所用的酶)、或者用于指共价密闭多核苷酸与线性多核苷酸分离的。当样本 至少大约50％，最好60-75％具有单个多核苷酸序列和构象(线性对共价密闭)时，一 种多核苷酸基本上是纯的。基本纯的多核苷酸通常占核酸样本的约50％，最好为 60-90％(重量/重量)，更常见的是纯度约为95％，最好是99％以上。众所周知，多核 苷酸纯度或均一性有许多方式表示，如先对样本进行琼脂糖或聚丙烯酰胺凝胶电 泳，再观察凝胶染色后的单一条带。对于某些用途，用高效液相层析法或本技术领 域公知的其它方法可获得高分辨率。当样本至少大约50％，最好60-75％具有单个多 肽序列时，一种多肽基本上是纯的。基本纯的多肽通常占核酸样本的约50％，最好 为60-90％(重量/重量)，更常见的是纯度约为95％，最好是99％以上。众所周知， 多肽纯度或均一性有许多方式表示，如先对样本进行琼脂糖或聚丙烯酰胺凝胶电 泳，再观察凝胶染色后的单一条带。对于某些用途，用高效液相层析法或本技术领 域公知的其它方法可获得高分辨率。术语“纯化的”在本文用于描述与其它化合物 分离的本发明的化学组合物。
术语“ 分离的”要求物质离开它原来的环境(例如，若物质是天然存在的，就 离开天然环境)。例如，天然存在于有生命的动物的多核苷酸或多肽就不是分离的， 但自天然系统中部分或全部共存物质分离出来的同一些多核苷酸或DNA或多肽就 是分离的。这些多核苷酸可以是部分载体和/或这些多核苷酸或多肽可以是部分组 合物，由于载体或组合物不属于天然环境的一部分，故这些多核苷酸仍然是分离的。
术语“ 引物”表示与靶核苷酸序列互补并用于与靶核苷酸序列杂交的特异性 寡核苷酸序列。引物用作以DNA聚合酶、RNA聚合酶或逆转录酶为催化剂的核苷酸 聚合反应的引发点。
术语“ 探针”表示可用于鉴定样本所含的特异性多核苷酸序列的有限核酸节 段(或者核苷酸类似物节段，例如本文所限定的多核苷酸)，所述核酸节段包括与待 鉴定的特异性多核苷酸序列互补的核苷酸序列。
术语“ 性状”和“ 表型”在本文是互通的，指有机体在临床上任何看得见的、 检测得到的或其它可测量的性质，如疾病症状或疾病易感性。本文所用的术语“性 状”或“表型”通常指精神分裂症或双相性精神障碍的症状或易感性；或者指个体 对作用于精神分裂症或双相性精神障碍的药剂有反应；或者指作用于精神分裂症或 双相性精神障碍的药剂副作用的症状或易感性。
本文所用的术语“ 等位基因”指核苷酸序列的变异型。双等位基因多态性有 两种型式。通常将第一种鉴定的等位基因命名为原始型等位基因，而其它等位基因 命名为变换型等位基因。二倍体有机体的等位基因型可以是纯合或杂合的。
本文所用的术语“ 杂合率”指个体在一以特定等位基因杂合的群体中的发生 率。在双等位基因系统中，杂合率是平均来说等于2Pa(1-Pa)，式中Pa是最小出 現的等位基因的頻率。為了用在遺傳研究中，遺傳標記應該有足夠程度的雜合性， 以便使随機選擇一個人是雜合的概率比較高。
本文所用的术语“ 基因型”指个体或样本中所含的等位基因同一性。在本发 明的上下文中，基因型最好用于描述个体或样本所含的双等位标记等位基因。术语 使样本或个体的双等位标记“ 基因型分型”包括确定个体在双等位标记上携带的特 异性等位基因或特异性核苷酸。
本文所用的术语“ 突变”指频率低于1％的不同基因组或个体之间的DNA序列 差异。
本文所用的术语“ 单倍型”指个体或样本在单个染色体上所含有的等位基因 组合。在本发明的上下文中，单倍型最好指在一给定个体中发现的并且与表型相关 的双等位标记等位基因的组合。
本文所用的术语“ 多态性”指不同基因组或个体之间出现两种或多种变换基 因组序列或等位基因。“多态的”指在一群序列中可找到两种或多种特异性基因组 序列变异型的状况。“ 多态位点”是变异发生的基因座。多态性可包括一个或多个 核苷酸的取代、缺失和插入。单核苷酸多态性是单一碱基对变化。单核苷酸多态性 通常是在多态位点上用另一个核苷酸取代一个核苷酸。单核苷酸的缺失或单核苷酸 的插入也会产生单核苷酸多态性。在本发明的上下文中，“单核苷酸多态性”最好 指单核苷酸的取代。通常，不同基因组或不同个体之间的多态位点可以被两个不同 核苷酸所置换。
术语“ 双等位基因多态性”和“ 双等位标记”在本文是互通的，指在一群体 中具有两个频率相对较高的等位基因的多态性，优选指单核苷酸多态性。“ 双等位 标记等位基因”指双等位标记位点所含有的核苷酸变异型。本发明双等位标记中最 少出现的等位基因的频率被证实大于1％，该频率宜大于10％，较好的频率是至少 20％(即杂合率至少0.32)，更好的频率是30％(即杂合率至少0.42)。最少出现的等 位基因的频率为30％或以上的双等位标记称为“高质量 双等位标记”。本发明所有 的基因分型、单倍分型、关联性和相互作用的研究方法可任选地仅用高质量双等位 标记进行。
本文以下列方式叙述多核苷酸中的核苷酸相对多核苷酸中心的位置。当多核 苷酸有奇数核苷酸时，把与多核苷酸3’和5’端距离相等的核苷酸看成是多核苷酸 的“中心”，紧邻在中心位置的核苷酸的任何一个多核苷酸，或者在中心位置的核 苷酸本身认为“在中心的1个核苷酸以内”。在有奇数核苷酸的多核苷酸中，把在 多核苷酸中心的5个核苷酸位置上的任何一个核苷酸认为在中心的2个核苷酸以 内，如此类推。当多核苷酸有偶数核苷酸时，多核苷酸的中心是一个键而不是核苷 酸。所以，把2个中心核苷酸中任何一个认为“在中心的1个核苷酸以内”，把在 多核苷酸中心的4个核苷酸位置上的任何一个核苷酸认为“在中心的2个核苷酸以 内”，如此类推。对于涉及一个或多个核苷酸的取代、插入或缺失，如果多态性的 取代、插入或缺失的多核苷酸与多核苷酸的3’端之间的距离与多态性的取代、插 入或缺失的多核苷酸与多核苷酸的5’端之间的距离之差等于零或1个核苷酸，则 多态性、等位基因或双等位标记就在多核苷酸的“中心”上。如果这个差距等于零 到3个核苷酸，就认为多态性“在中心的1个核苷酸以内”。如果这个差距等于零 到5个核苷酸，就认为多态性“在中心的2个核苷酸以内”。如果这个差距等于零 到7个核苷酸，就认为多态性“在中心的3个核苷酸以内”，如此类推。对于涉及 一个或多个核苷酸的取代、插入或缺失，如果多态性的取代、插入或缺失的多核苷 酸与多核苷酸的3’端之间的距离与多态性的取代、插入或缺失的多核苷酸与多核 苷酸的5’端之间的距离之差等于零或1个核苷酸，则多态性、等位基因或双等位 标记就在多核苷酸的“中心”上。如果这个差距等零于到3个核苷酸，就认为多态 性“在中心的1个核苷酸以内”。如果这个差距等零于到5个核苷酸，就认为多态 性“在中心的2个核苷酸以内”。如果这个差距等于零到7个核苷酸，就认为多态 性“在中心的3个核苷酸以内”，如此类推。
本文所用的术语“ 上游”指从特定参考点面向多核苷酸5’端的位置。
本文所用的术语“ 碱基配对”和“Watson & Crick碱基配对”在本文是互通 的，指由于序列同一性可通过氢键相互结合的核苷酸，例如在双螺旋DNA中可以发 现胸腺嘌呤或尿嘧啶残基通过两个氢键与腺嘌呤残基连接，而胞嘧啶残基通过三个 氢键与鸟嘌呤残基连接(参看Stryer，L.，Biochemistry，第4版，1995年)。
本文所用的术语“ 互补的”或“其补体”指能够在整个互补区与另一个特异 性多核苷酸形成Watson & Crick碱基配对的多核苷酸序列。该术语适用于多核苷 酸对，它们仅基于其序列而非基于两个多核苷酸实际结合的任何一组特定条件。
术语“ D-氨基酸氧化酶基因”，使用时包括编码本发明任何D-氨基酸氧化酶蛋 白质的基因组、mRNA和cDNA序列，包括基因组DNA的非翻译调节区。
术语“ g34872基因”，使用时包括编码任何g34872蛋白质的基因组、mRNA和 cDNA序列，包括基因组DNA的非翻译调节区。
术语“ D-天冬氨酸氧化酶基因”，使用时包括编码任何D-天冬氨酸氧化酶蛋白 质的基因组、mRNA和cDNA序列，包括基因组DNA的非翻译调节区。
本文所用的术语“ 13q31-q33相关双等位标记”涉及一组位于人染色体 13q31-q33区内的双等位标记。术语13q31-q33相关双等位标记包括美国专利申请 号09/539,333与国际专利申请号PCT/IB00/00435中表6b所公开的全部双等位标 记，及与其连锁不平衡的任何双等位标记，以及表6c(同一个美国专利申请号 09/539,333与国际专利申请号PCT/IB00/00435)所公开的任何双等位标记，及与 其连锁不平衡的任何双等位标记，两件申请资料纳入其整体内容作为参考。本发明 优选的染色体13q31-q33相关双等位标记等位基因包括(同一个美国专利申请号 09/539,333与国际专利申请号PCT/IB00/00435)表6b各自公开的每一个等位基因 或由所列等位基因全部可能的组合组成的组。
本文所用的术语“ D区相关双等位标记”涉及一组与染色体13q31-q33区的亚 区(本文称为D区)连锁不平衡的双等位标记。术语D区相关双等位标记包括美国专 利申请号09/539,333与国际专利申请号PCT/IB00/00435中表6b所公开的双等位 标记A1到A242、A249到A251、A257到A263、A269到A270、A278、A285到A299、 A303到A307、A324、A330、A334到A335、A346到A357和A361到A489，以及与 标记A1到A242、A249到A251、A257到A263、A269到A270、A278、A285到A299、 A303到A307、A324、A330、A334到A335、A346到A357和A361到A489连锁不平 衡的任何双等位标记，两件申请公开的资料纳入其整体内容作为参考。
本文所用的术语“ sbg1相关双等位标记”涉及一组与sbg1基因或sbg1核苷 酸序列连锁不平衡的双等位标记。术语sbg1相关双等位标记包括美国专利申请号 09/539,333与国际专利申请号PCT/IB00/00435中表6b所公开的双等位标记A85 到A219，以及与其连锁不平衡的任何双等位标记，两件申请公开的资料纳入其整 体内容作为参考。
本文所用的术语“ g34665相关双等位标记”涉及一组与g34665基因或sbg1 核苷酸序列连锁不平衡的的双等位标记。术语g34665相关双等位标记包括表6b 所公开的双等位标记A230到A236，以及与其连锁不平衡的任何双等位标记。
术语“ 多肽”指氨基酸的聚合物，与聚合物的长度无关；所以，肽、寡肽和 蛋白质都包括在多肽的定义内。该术语也不指定或排除多肽的表达后修饰，例如， 与糖基、乙酰基、磷酸基团、脂类基团等共价连接的多肽明确包括在术语多肽中。 该定义还包括含有一个或多个氨基酸类似物(例如，包括非天然存在的氨基酸、只 在不相关生物系统中天然存在的氨基酸、来自哺乳动物系统经过修饰的氨基酸等) 的多肽、带有取代键以及本领域技术公知的其它修饰的多肽，无论是天然存在或非 天然存在。
本文所用的术语“ 非人动物”指任何不是人的脊椎动物、鸟类，通常指哺乳 动物，最好是灵长目动物、家畜，如猪、山羊、绵羊、驴和马、兔或者啮齿目动物， 最好是大鼠或小鼠。本文所用的术语“动物”用于指任何一种脊椎动物，最好是哺 乳动物。术语“动物”和“哺乳动物”明确包括人受试者，除非前面带有术语“非 人动物”。
本文所用的术语“ 抗体”指包括至少一个结合结构域的多肽或多肽群，其中 抗体结合结构域通过折迭抗体分子的可变区而形成，与内表面形状及电荷分布形成 三维结合空间，该空间与抗原的抗原决定子的特征互补，可以与抗原进行免疫反应。 抗体包括重组蛋白质，所述蛋白质包括结合结构域，以及片段，而片段包括Fab、 Fab’、F(ab)2和F(ab’)2片段。
本文所用的“ 抗原决定子”是决定抗原—抗体反应特异性的部分抗原分子， 在本发明指sbg1多肽。“表位”指多肽的抗原决定子。一个表位在空间构象中可包 括至少3个氨基酸，而一个表位就有唯一一个空间构象。通常，一个表位包括至少 6个这样的氨基酸，较常见包括至少8-10个氨基酸。确定组成表位的氨基酸的方 法包括X射线结晶学、二维核磁共振及表位作图法，例如Geysen等人(1984年)、 PCT公开号WO84/03564及PCT公开号WO84/03506所述的肽扫描法。
在2000年3月30日提交、题为“与精神分裂症有关的基因、蛋白质及双等 位标记”的共同待批美国专利申请号09/539,333与共同待批国际专利申请号 PCT/IB00/00435对“变异型和片段”、“核酸或多肽之间的同一性”、“严谨杂交条 件”、“能够在重组的细胞宿主和转基因动物中使sbg1核酸序列的时空表达定向的 DNA构造体”作了详细和完整的叙述，以上两件申请公开的资料均纳入其整体内容 作为参考。
g34872和D-氨基酸氧化酶多核苷酸的基因组序列
本发明特别优选的g34872核酸包括分离的、纯化的或重组的多核苷酸，其包 含，或者基本上由或由一段连续跨距组成，该跨距至少为12、15、18、20、25、 30、35、40、50、60、70、80、90、100、150、200、500或1000个核苷酸或其补 体，它们在美国专利申请号09/539,333的SEQ ID No：1的核苷酸位点213818 到243685上(美国专利申请号09/539,333与国际专利申请号PCT/IB00/00435公 开的资料纳入其整体内容作为参考)。
本发明的D-氨基酸氧化酶多核苷酸如本发明的SEQ ID No：1所叙述。本发明 特别优选的核酸包括分离的、纯化的或重组的多核苷酸，其包含，或者基本上由或 由一段连续跨距组成，该跨距至少为12、15、18、20、25、30、35、40、50、60、 70、80、90、100、150、200、500或1000个核苷酸，它们在SEQ ID No：1在核 苷酸位点6000到86600上。本发明核酸包括任何一种来源的D-氨基酸氧化酶核酸， 包括灵长类动物、非人灵长类动物、哺乳动物和人D-氨基酸氧化酶核酸。
本发明的较优选核酸包括分离的、纯化的或重组的多核苷酸，其包含一段连 续跨距，该跨距至少为12、15、18、20、25、30、35、40、50、60、70、80、90、 100、150、200、500或1000个SEQ ID No：1的核苷酸或其补体，其中所述连续 跨距包含与D-氨基酸氧化酶相关的双等位标记。所述双等位标记任选地选自包含 24-1443/126、24-1457/52或24-1461/256的组。所述双等位标记优选是24- 1461/256。
需要注意的是，本章节所述的多核苷酸包括任何尺寸和序列的核酸片段。
所以，本发以分离的、纯化的或重组的多核苷酸进行实施例，所述多核苷酸 含有一段核苷酸序列，其选自由D-氨基酸氧化酶基因(SEQ ID No：1)的外显子或 其互补序列组成的组。优选纯化的、分离的或重组的多核苷酸含有至少一个D-氨 基酸氧化酶基因的外显子，或其互补序列或其片段或变异型。本发明还包括纯化的、 分离的或重组的核酸，其含有至少2个D-氨基酸氧化酶基因的外显子的组合，所 述外显子选自由外显子Z、A、B、C、Ulong、U、V、Z、2、3、4、5、6、7、8、9、 10、11和11long组成的组，其中多核苷酸按照SEQ ID No：1的同一对应次序排 列在核酸内。
本发明特别优选的核酸包括分离的、纯化的或重组的多核苷酸，其包含一段 连续跨距，该跨距至少为12、15、18、20、25、30、35、40、45、50、55、60、 65、70、75、80、90、100或200个SEQ ID No：1的核苷酸或其补体。
本发明的另一个目的在于一种纯化的、分离的或重组的多核苷酸，在以上所 述的严谨杂交条件下与SEQ ID No：1的D-氨基酸氧化酶核苷酸序列、或其互补序 列或其变异型杂交。
本发还包括纯化的、分离的或重组的多核苷酸，所述多核苷酸含有一核苷酸 序列，其选自由D-氨基酸氧化酶基因(SEQ ID No：1)的内含子或其互补序列组成 的组。
在另一实施例中，本发明包括D-氨基酸氧化酶基因及D-氨基酸氧化酶基因组 序列，其由或基本上由SEQ ID No：1的核苷酸位点的序列，其互补序列以及其片 段和变异型组成，或者包含SEQ ID No：1的核苷酸位点的序列，其互补序列以及 其片段和变异型。
本发明还包括一种纯化的、分离的或重组的多核苷酸，其包含一段D-氨基酸 氧化酶核苷酸序列，所述序列与SEQ ID No：1的核苷酸、或其互补序列或其片段 具有至少70、75、80、85、90或95％同一性。
这些核酸及其片段和变异型可用作寡核苷酸引物或探针，以检测测试样本中 所含的g34782、D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶核酸序列的拷贝，或用以扩 增g34782、D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶核酸序列或相邻区内的靶核苷酸 序列。
本发明的其它优选核酸包括分离的、纯化的或重组的D-氨基酸氧化酶多核苷 酸，其包含一段连续跨距，该跨距至少为12、15、18、20、25、30、35、40、45、 50、55、60、65、70、75、80、90、100或200个SEQ ID No：1的核苷酸或其补 体，其中所述的连续跨距含有至少一个双等位标记。所述的连续跨距任选地含有一 个与D-氨基酸氧化酶相关的双等位标记。需要注意的是，本章节所述的多核苷酸 包括任何尺寸和序列的核酸片段。所述双等位标记可含有原始型或变换型等位基 因。
本发明的其它核酸包括分离的、纯化的或重组的多核苷酸，其包含一段连续 跨距，该跨距至少为12、15、18、20、25、30、35、40、50、60、70、80、90、 100、150、200或500个核苷酸，达到这样的程度以致所述的跨距与SEQ ID No：1 的核苷酸位点范围一致，其中所述的连续跨距包含至少1、2、3、5或10个SEQ ID No：1的下列核苷酸位点：215820到215941、216661到217009、230409到290721、 231272到231411、234202到234321、240528到240567、240528到240827和240528 到240996，或其补体，以及与所述的跨距有至少70、75、80、85、90或95％核苷 酸同一性的多核苷酸和能够与所述的跨距杂交的多核苷酸。
本发明还包括一种纯化的、分离的或重组的多核苷酸，其编码具有SEQ ID No： 7-10任何之一的氨基酸序列的D-氨基酸氧化酶蛋白质，或其多肽片段或变异型。
虽然本节题为“sbg1基因组序列”，但要注意本节所述的多核苷酸也包括任何 尺寸和序列的核酸片段，使基因组序列sbg1位于其中一侧或者两段或多段这样的 基因组序列之间。
D-氨基酸氧化酶cDNA序列
业已表明，D-氨基酸氧化酶基因的表达可产生几种mRNA。SEQ ID No：2-6所 示为对应这些mRNA的几段cDNA序列。本发明包括一种纯化的、分离的或重组的核 酸，其包含一选自SEQ ID No：2-6的核苷酸序列、其互补序列、其剪接变异型以 及其等位基因变异型和片段。此外，本发明优选的多核苷酸包括纯化的、分离的或 重组的D-氨基酸氧化酶cDNA，其由或基本上由一选自SEQ ID No：2-6的核苷酸序 列组成，或者包含一选自SEQ ID No：2-6的核苷酸序列。本发明特别优选的多核 苷酸包括分离的、纯化的或重组的多核苷酸，其包含一段连续跨距，该跨距至少为 8、12、15、18、20、25、30、35、40、50、60、70、75、80、100、200或500个 核苷酸，达到这样的程度以致所述的连续跨距与SEQ ID No：2-6或其补体的长度 一致。
需要注意的是，本节所述的多核苷酸也包括任何尺寸和序列的核酸片段。
本发明还涉及纯化的或分离的核酸，该核酸含有的多核苷酸与选自由SEQ ID No：2-6组成的组的多核苷酸，或其互补序列，或其生物活性片段，具有至少70、 80、85、90或95％核苷酸同一性，有利的为99％核苷酸同一性，优选的为99.5％核 苷酸同一性，最好的为99.8％核苷酸同一性。
本发明的另一个目的涉及纯化的、分离的或重组的核酸，该核酸含有一在本 文所限定的严谨杂交条件下与选自由SEQ ID No：2-6组成的组的多核苷酸、或其 互补序列或其变异型或生物活性片段进行杂交的多核苷酸。SEQ ID No：2-6的D- 氨基酸氧化酶cDNA型式在序列表中有进一步的叙述。
用来分离特定D-氨基酸氧化酶cDNAs或进行基因分型的引物列在SEQ ID No： 1中。D-氨基酸氧化酶的双等位标记及其基因分型的引物列在SEQ ID No：1、24、 26和29中。g34872多核苷酸列在SEQ ID No：14和16中。g34872双等位标记 99-16105-152列在SEQ ID No：12，g34872双等位标记99-5919-215列在SEQ ID No： 13中，其中还叙述制备的引物。g34872的cDNA列在SEQ ID No：14中，而用在双 杂交实验中的多核苷酸列在SEQ ID No：16。
本发明还鉴定了取自各种组织的cDNA序列中的新外显子和变异，它们列为SEQ ID No：1的外显子11long、Z、A、B、C和UL，并列在SEQ ID No：2-6的多核苷 酸中。D-氨基酸氧化酶多肽的新型式列在SEQ ID No：8-10中。
这些变异型表示D-氨基酸氧化酶较罕见的新型式，它们最好用来筛选中枢神 经系统障碍的治疗方法所用的组合物。
需要注意的是，本节所述的多核苷酸也包括任何尺寸和序列的核酸片段，使 g34872、D-氨基酸氧化酶和D-天冬氨酸氧化酶基因组序列位于其中一侧或者两段 或多段这些基因组序列之间。
D-氨基酸氧化酶和D-天冬氨酸氧化酶拮抗剂
本文所用的术语“拮抗剂”指抑制D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶将D- 氨基酸底物转化为相应的.α.-酮酸的酶反应。拮抗剂可分为竞争性、非竞争性、 无竞争性、变构性或不可逆性D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶的酶活性抑制 剂。术语D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶的“活性”或“酶活性”指上述的 酶反应。拮抗剂可按D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶的活性抑制程度进行分 类。优选的拮抗剂使D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶的活性下降至少10％、 20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或95％。抑制的效果也可以抑制常数或 Ki(M)值表示。优选的拮抗剂的Ki(M)值少于5×10-2、1×10-2、5×10-3、1×10-3、 5×10-4、1×10-4、5×10-5、1×10-6、5×10-7、1×10-7。需要注意的是，Ki(M) 值与抑制效果成反比，即Ki(M)值下降，抑制效果增大。所以，拮抗剂也可按它 们对D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶的特异性来分类。本发明包括抑制D-氨 基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶的活性但不抑制其它人黄素蛋白(对羟基苯甲酸 盐羟化酶、胆固醇氧化酶和葡萄糖氧化酶)或者其它人黄素蛋白的Ki(M)数值大于 1×10-2、5×10-2的拮抗剂。由定义可知，通用术语“拮抗剂”和“抑制剂”可 互通使用，表示以上所限定的抑制D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶活性的任 何一种组合物。另外，可按本说明书所述独立地列出拮抗剂或抑制剂的具体类别， 例如竞争性抑制剂。
迄今为止，已研究了超过200种D-氨基酸氧化酶和D-天冬氨酸氧化酶抑制剂。 D-氨基酸氧化酶和D-天冬氨酸氧化酶拮抗剂可选自以上所提供的组合物，或者本 领域已知的，或用本文所述或本领域已知的方法制备的其它拮抗剂。另外，D-氨基 酸氧化酶和D-天冬氨酸氧化酶拮抗剂可向市场上的供应商购买。没有任何限制作 用的用于本发明的化合物的例子见表I。D-氨基酸氧化酶和D-天冬氨酸氧化酶拮抗 剂还包括选自由包括以下组合物组的组合物家族：本文所提供的竞争性抑制剂组合 物、不可逆抑制剂组合物、以一般式I、一般式II、一般式III、一般式IV、一般 式V和一般式VI表示的组合物及其亚组。较优选的以一般式I-VI表示的典型组合 物及其亚组包括但不限于下文详细说明。
以一般式I表示的组合物或其药学上可接受的盐类以包括下列结构式的结构 表示：
式中，
a)A是烷基，例如甲基、乙基、丙基或丁基；支链烷基，例如异丁基、异丙 基、异戊基或者环烷基，例如环丙基、环戊基或环己基。这些基团本身可 由C1-C6烷基、卤素、羟基或氨基取代；
b)X是氧或氮；
c)Ar是芳香族单环、双环或三环稠合杂环，其中环或者未取代或者1至5位 上由氢、卤素、羟基、-CN、COR2、--CONR2R3、--S(O)nR2、--OPO(OR2)OR3、 --PO(OR3)R3、--OC(O)NR2R3、--COOR2、--CONR2R3、--SO3H、--NR2R3、--NR2COR3、 --NR3COOR3、--SO2NR2R3、--N(R2)SO2R3、--NR2 CONR2R2、--SO2NHCOR2、 --CONHSO2R2、--SO2NHCN、--OR1、C1-C6直链或支链烷基或链烯基、或者由一 个或多个卤素、羟基、氨基、羧基、羧酰胺、腈、硝基、烷氧基、三氟甲 基、硫、磺酸盐、膦酸盐、磷酸盐、Ar1、N3或其组合取代的C1-C6支链或 直链烷基或链烯基，其中杂环含有1-6个选自由氧、氮、硫及其组合组成 的组的杂原子；
d)R4是H、烷基、Ar1、O、取代的烷基；
e)R1是(C1-C6)烷基、Ar1、(C1-C4)烷氧基羰基甲基、取代的烷基；
f)R2和R3各自独立地是氢、C1-C6直链或支链烷基或链烯基、或者由一个或多 个卤素、羟基、氨基、羧基、羧酰胺、腈、硝基、烷氧基、三氟甲基、硫、 磺酸盐、膦酸盐、磷酸盐、Ar1、N3取代的C1-C6支链或直链烷基或链烯基； 以及
g)Ar1是单环、双环或三环、碳环或杂环，其中环或者未取代或者1至3位上 由卤素、羟基、硝基、三氟甲基、C1-C6直链或支链烷基或链烯基、C1-C4 烷氧基、C1-C4链烯氧基、苯氧基、苄氧基、氨基、或其组合取代；其中单 个环的大小是3-7个原子；而且杂环含有1-6个选自由氧、氮、硫及其组 合组成的组的杂原子。
优选的以一般式I表示的组合物或其药学上可接受的盐类是一般式Ia的组合 物或其药学上可接受的盐类，其包括下列结构式：
式中，
a)A和B由碳或氮组成，D可含有0-2个由碳或氮组成的原子；
b)W是C1-C4烷基，如(CH2)n、支链烷基；
c)n是0-4。此外，当n＝0时假定-NHR2与B共价键合；
d)X是氧或氮；
e)R2是氢、烷基、Ar1、或氧取代的烷基；
f)R1是(C1-C6)烷基、Ar1、(C1-C4)烷氧羰基甲基或取代的烷基；
g)Ar是芳香族单环、双环或三环稠合杂环，其中环或者未取代或者1至6位 上由卤素、羟基、硝基、三氟甲基、C1-C6直链或支链烷基或链烯基、C1-C4 烷氧基、C1-C4链烯氧基、苯氧基、苄氧基、氨基、C3-C6环烷基或其组合取 代；其中单个环的大小是5-6个原子；而且杂环含有1-6个选自由氧、氮、 硫及其组合组成的组的杂原子；以及
h)Ar1是单环、双环或三环、碳环或杂环，其中环或者未取代或者1至3位上 由卤素、羟基、硝基、三氟甲基、C1-C6直链或支链烷基或链烯基、C1-C4 烷氧基、C1-C4链烯氧基、苯氧基、苄氧基、氨基、或其组合取代；其中单 个环的大小是3-7个原子；而且杂环含有1-6个选自由氧、氮、硫及其组 合组成的组的杂原子。
优选的以一般式Ia表示的组合物或其药学上可接受的盐类是一般式Ib的组 合物或其药学上可接受的盐类，其包括下列结构式：
式中，
a)A、G、K、J、E是六元碳环或杂环芳族环的原子，其中杂环含有1-6个选 自由碳、氮及其组合组成的组的杂原子；
b)A、G、K、J、E可各自独立地是未取代或由氢、卤素、羟基、-CN、COR2、 --CONR2R3、--S(O)nR2、--OPO(OR2)OR3、--PO(OR3)R3、--OC(O)NR2R3、--COOR2、 --CONR2R3、--SO3H、--NR2R3、--NR2COR3、--NR3COOR3、--SO2NR2R3、 --N(R2)SO2R3、--NR2CONR2R2、--SO2NHCOR2、--CONHSO2R2、--SO2NHCN、--OR1、 C1-C6直链或支链烷基或链烯基取代，或者由一个或多个卤素、羟基、氨基、 羧基、羧酰胺、腈、硝基、烷氧基、三氟甲基、硫、磺酸盐、膦酸盐、磷 酸盐、Ar1、N3取代的C1-C6支链或直链烷基或链烯基；
c)R1是CN、COR2、--CONR2R3、--S(O)nR2、--OPO(OR2)OR3、--PO(OR3)R3、 --OC(O)NR2R3、--COOR2、--CONR2R3、--SO3H、--NR2R3、--NR2COR3、--NR3COOR3、 --SO2NR2R3、--N(R2)SO2R3、--NR2CONR2R2、--SO2NHCOR2、--CONHSO2R2、 --SO2NHCN、SCN、COCO2H、C1-C6直链或支链烷基或链烯基、或者由一个或多 个卤素、羟基、氨基、羧基、羧酰胺、腈、硝基、烷氧基、三氟甲基、硫、 磺酸盐、膦酸盐、磷酸盐、Ar1、N3取代的C1-C6支链或直链烷基或链烯基；
d)W是N、(CH2)x、或-NCH2；
e)x＝0-4；
f)n＝0-2；
g)R2和R3各自独立地是氢、C1-C6直链或支链烷基或链烯基、或者由一个或多 个卤素、羟基、氨基、羧基、羧酰胺、腈、硝基、烷氧基、三氟甲基、硫、 磺酸盐、膦酸盐、磷酸盐、Ar1、N3取代的C1-C6支链或直链烷基或链烯基； 以及
h)Ar1是单环、双环或三环、碳环或杂环，其中环或者未取代或者1至3位上 由卤素、羟基、硝基、三氟甲基、C1-C6直链或支链烷基或链烯基、C1-C4 烷氧基、C1-C4链烯氧基、苯氧基、苄氧基、氨基、或其组合取代；其中单 个环的大小是5-6个原子；而且杂环含有1-6个选自由氧、氮、硫及其组 合组成的组的杂原子。
以一般式I、Ia和Ib表示的组合物或其药学上可接受的盐类的具体例子包括 但不限于以下化合物：
a)苯甲酸；
b)2-氨基苯甲酸盐；
c)3-氨基苯甲酸盐；
d)4-氨基苯甲酸盐；
e)水杨酸；
f)N-甲基烟酸盐；
g)6-甲基烟酸甲酯；
h)2-甲基烟酸乙酯；
i)氨基苯甲酸盐；
j)2-氨基苯甲酸乙酯；
k)2-氨基苯甲酸甲酯；
l)吡啶甲酸盐；
m)2-吡啶羧酸乙酯；
n)3-甲基苯甲基硫氰酸盐；
o)苯基丙酮酸；
p)苯基乙醛酸；
q)1-甲基吡啶鎓-3-羧酸盐；
r)贝氟沙酮(Befloxatone)；(5R)-5-(甲氧基甲基)-3-[4-[(3R)-4，4，4-三 氟-3-羟基丁氧基]苯基]-2-恶唑烷酮；
s)丁氨苯丙酮；1-(3-氯苯基)-2-[(1，1-二甲基乙基)氨基]-1-丙酮；
t)可铁宁(Cotinine)；1-甲基-5-(3-吡啶基)-2-吡咯烷酮；
u)度洛西汀(Duloxetine)；(γS)-N-甲基-γ-(1-萘氧基)-2-噻吩丙胺；
v)芬戊二醇；2-(4-氯苯基)-4-甲基-2，4-戊二醇；
w)氟伏沙明(Fluvoxamine)；(E)-5-甲氧基-1-[4-(三氟甲基)苯基]-1-戊酮 O-(2-氨基乙基)肟；
x)Iproclozide；4-(氯苯氧基)乙酸2-(1-甲基乙基)酰肼；
y)异丙烟肼；4-吡啶羧酸2-(1-甲基乙基)酰肼；
z)左法哌酯(levophacetoperane)；α-苯基-2-哌啶甲醇乙酸盐；
aa)咯利普兰(Rolipram)；4-[3-(环戊氧基)-4-甲氧基苯基]-2-吡咯烷酮；
bb)反苯环丙胺(Tranylcypromine)；(1R，2S)-rel-2-苯基环丙胺；及
cc)米那普仑(Milnacipran)；(1R，2S)-rel-2-(氨基甲基)-N，N-二乙基- 1-苯基环丙烷羧酰胺。
以一般式II表示的组合物或其药学上可接受的盐类以包括下列结构式的结构 表示：
式中，
a)W＝(CH2)n；
b)n＝0-5；
c)Z是氧或羟基；
d)Y＝H、Ar1、R4(CH2)x、R1S(CH2)x--、R1SO(CH2)x--、R1SO2(CH2)x--、R1SO3(CH2)x--、 HNR1SO2(CH2)x--、R1R2N(CH2)x、R1O(CH2)--、CF3或OH；
e)x＝0-6；
f)R1、R2和R3各自独立地是氢、C1-C6直链或支链烷基、或者由一个或多个卤 素、羟基、氨基、羧基、羧酰胺、腈、硝基、烷氧基、三氟甲基、硫、磺 酸盐、膦酸盐、磷酸盐、Ar1取代的C1-C6支链或直链烷基；
g)R4是卤素、CN、N3、C1-C6直链或支链烷基、或者由一个或多个卤素、羟基、 硝基、烷氧基、三氟甲基、磺酸盐、膦酸盐、磷酸盐、Ar1、--COR1、--COOR1、 --CONR1R2、CN、--NR1、--NR1R2、--SR1、--SO2NHCN或者N3取代的C1-C6支 链或直链烷基；以及
h)Ar1是单环、双环或三环、碳环或杂环，其中环或者未取代或者1至3位上 由卤素、羟基、硝基、三氟甲基、C1-C6直链或支链烷基或链烯基、C1-C4 烷氧基、C1-C4链烯氧基、苯氧基、苄氧基、氨基、或其组合取代；其中单 个环的大小是5-6个原子；而且杂环含有1-6个选自由氧、氮、硫及其组 合组成的组的杂原子。
较优选的以一般式II表示的组合物或其药学上可接受的盐类是一般式IIa的 组合物或其药学上可接受的盐类，其包括下列结构式：
式中，
a)Y是Ar1；
b)Z是羰基或羟基；
c)W是(CH2)n，其中(n＝0、1或2)，R3＝H；以及
d)Ar1是单环、双环或三环、碳环或杂环，其中环或者未取代或者1至3位上 由卤素、羟基、硝基、三氟甲基、C1-C6直链或支链烷基或链烯基、C1-C4 烷氧基、C1-C4链烯氧基、苯氧基、苄氧基、氨基、或其组合取代；其中单 个环的大小是5-6个原子；而且杂环含有1-6个选自由氧、氮、硫及其组 合组成的组的杂原子。
以一般式II和IIa表示的组合物或其药学上可接受的盐类的具体例子包括但 不限于以下化合物：
a)2-氧代-丙酸；
b)5-胍基-2-氧代-戊酸；
c)2-氧代-琥珀酰胺酸；
d)2-氧代-琥珀酸；
e)3-巯基-2-氧代-丙酸；
f)3-(1H-咪唑-4-基)-2-氧代-丙酸；
g)3-甲基-2-氧代-戊酸；
h)氧代-乙酸；
i)4-氨基甲酰-2-氧代丁酸；
j)2-氧代-戊二酸；
k)4-甲基-2-氧代-戊酸；
l)6-氨基-2-氧代-己酸；
m)4-甲基硫烷基-2-氧代-丁酸；
n)2-氧代-3-苯基丙酸；
o)3-羟基-2-氧代-丙酸；
p)3-羟基-2-氧代-丁酸；
q)3-(1H-吲哚-3-基)-2-氧代-丙酸；
r)3-(4-羟基-苯基)-2-氧代-丙酸；
s)3-甲基-2-氧代-丁酸；
t)2-羟基丁酸；
u)3-羟基丁酸；以及
v)3-氧代戊二酸。
以一般式III表示的组合物或其药学上可接受的盐类以包括下列结构式的结 构表示：
式中，
a)A和B一起形成一个5-8元饱和或部分不饱和杂环，其含有至少一个处于 化学稳定氧化状态的附加杂原子O、S、SO、SO2、NH、或NR1；
b)V是O、OR1、NR2、NR1R2、CHR1R2、CH2R3、CHR3R4或CH2N3；
c)R1和R2各自独立地是氢、C1-C6直链或支链烷基、或者由一个或多个卤素、 羟基、氨基、羧基、羧酰胺、硝基、烷氧基、三氟甲基、硫、磺酸盐、膦 酸盐、或Ar1取代的C1-C6支链或直链烷基；
d)R3和R4或者是卤素、C1-C6直链或支链烷基、或者由一个或多个羟基、氨基、 羧基、羧酰胺、硝基、烷氧基、三氟甲基、硫、磺酸盐、膦酸盐、Ar1、 --OC(O)R1、--COOR1、--CONR1R2、CN，NR1、NR1R2、SR1、SO2NHCN或N3取代 的C1-C6支链或直链烷基；以及
e)Ar1是单环、双环或三环、碳环或杂环，其中环或者未取代或者1至3位上 由卤素、羟基、硝基、三氟甲基、C1-C6直链或支链烷基或链烯基、C1-C4 烷氧基、C1-C4链烯氧基、苯氧基、苄氧基、氨基、或其组合取代；其中单 个环的大小是5-6个原子；而且杂环含有1-6个选自由氧、氮、硫及其组 合组成的组的杂原子。
以一般式III表示的组合物的具体例子包括但不限于胱硫醚酮亚胺和环硫堇。
较优选的以一般式III表示的组合物或其药学上可接受的盐类是一般式IV的 组合物或其药学上可接受的盐类，其以包括下列结构式的结构表示：
式中，
a)W-Y-Z-A-B包括六元饱和或部分饱和碳环或杂环，其中杂环含有选自由氧、 氮、硫及其任意组合组成的组的杂原子；
b)B是C、CH或N；
c)A、W、Y、Z各自独立地是CH2、CHR3、CR3R4、O、S、SO、SO2、NH、NR1、NR1R2或C＝O；
d)V是O、OR1、NR2、NR1R2、CHR1R2、CH2R3、CHR3R3或CH2N3；
e)R1和R2各自独立地是氢、C1-C6直链或支链烷基、或者由一个或多个卤素、 羟基、氨基、羧基、羧酰胺、腈、硝基、烷氧基、三氟甲基、硫、磺酸盐、 膦酸盐、磷酸盐或Ar1取代的C1-C6支链或直链烷基；
f)R3和R4各自独立地是卤素、--OC(O)R1、--COOR1、--CONR1R2、CN、--NR1、 --NR1R2、--SR1、--SO2NHCN、N3、C1-C6直链或支链烷基、或者由一个或多 个卤素、羟基、硝基、烷氧基、三氟甲基、磺酸盐、膦酸盐、Ar1、--OC(O)R1、 --COOR1、--CONR1R2、CN，--NR1、--NR1R2、--SR1、--SO2NHCN或N3取代的 C1-C6支链或直链烷基；以及
g)Ar1是单环、双环或三环、碳环或杂环，其中环或者未取代或者1至3位上 由卤素、羟基、硝基、三氟甲基、C1-C6直链或支链烷基或链烯基、C1-C4 烷氧基、C1-C4链烯氧基、苯氧基、苄氧基、氨基、或其组合取代；其中单 个环的大小是5-6个原子；而且杂环含有1-6个选自由氧、氮、硫及其任 意组合组成的组的杂原子。
以一般式IV表示的组合物或其药学上可接受的盐类的具体例子包括但不限 于：氨基乙基半胱氨酸酮亚胺(2H-1，4-噻嗪-5，6-二氢-3-羧酸)、硫代吗啉-2- 羧酸、羊毛硫氨酸酮亚胺和1，4-硫代吗啉-3，5-二羧酸。
以一般式V表示的组合物或其药学上可接受的盐类以包括下列结构式的结构 表示：
式中，
a)Z是O或NH；
b)R1是(C1-C6)烷基、Ar1、或者(C1-C4)烷氧基羰基甲基；
c)X、Y各自独立地是氢、Ar1、(C1-C6)烷基(可由杂原子断开或取代，如氮、 磷、氧、硫或硅，杂原子本身可由(C1-C3)烷基取代一次或多次)、(C2-C6) 链烯基、(C1-C6)卤代烷基、或卤素。当X和Y各自都是碳时，它们可共价 结合形成一种饱和或部分不饱和独立地由碳、氮、氧和硫组成的3-8元碳 环化合物，此外，环的原子本身可以是未取代或由卤素、羟基、羧基、硝 基、三氟甲基、C1-C6直链或支链烷基或链烯基、C1-C4烷氧基、C1-C4链烯 氧基、苯氧基、苄氧基、氨基、取代的烷基、Ar1或其组合取代；
d)R2是氢、烷基、Ar1或氧取代的烷基；以及
e)Ar1是单环、双环或三环、碳环或杂环，其中环或者未取代或者1至3位上 由卤素、羟基、硝基、三氟甲基、C1-C6直链或支链烷基或链烯基、C1-C4 烷氧基、C1-C4链烯氧基、苯氧基、苄氧基、氨基、或其组合取代；其中单 个环的大小是3-7个原子；而且杂环含有1-6个选自由氧、氮、硫及其任 意组合组成的组的杂原子。
优选的以一般式V表示的组合物或其药学上可接受的盐类是以一般式Va表示 的组合物或其药学上可接受的盐类，其包括下列结构式：
式中，
a)*＝不对称中心，及
b)R1＝(C1-C6)烷基、Ar1、(C1-C4)烷氧羰基甲基及
c)X是氢、(C1-C6)烷基(可由杂原子断开或取代，如氮、磷、氧、硫或硅， 杂原子本身可由(C1-C3)烷基取代一次或多次)、(C2-C6)链烯基、(C1-C6)卤 代烷基、卤素或Ar1；
d)R2是氢、烷基、Ar1或氧取代的烷基；
e)Ar1是单环、双环或三环、碳环或杂环，其中环或者未取代或者1至3位上 由卤素、羟基、硝基、三氟甲基、C1-C6直链或支链烷基或链烯基、C1-C4 烷氧基、C1-C4链烯氧基、苯氧基、苄氧基、氨基、或其组合取代；其中单 个环的大小是3-7个原子；而且杂环含有1-6个选自由氧、氮、硫及其任 意组合组成的组的杂原子。
较优选的以一般式V表示的组合物或其药学上可接受的盐类包括以一般式Vb 表示的组合物或其药学上可接受的盐类，其包括下列结构式：
式中，
a)X和Y各自是碳；
b)X和Y以3-8个碳原子的饱和或部分饱和环连接，这样一个环本身的1至5 位上可由卤素、羟基、羧基、氨基、硝基、氰基、三氟甲基、C1-C6直链或 支链烷基或链烯基、C1-C4烷氧基、C1-C4链烯氧基、或取代的烷基取代；
c)R1是(C1-C6)烷基、Ar1或(C1-C4)烷氧羰基甲基；
d)R2是氢、烷基、Ar1或氧取代的烷基；以及
e)Ar1是单环、双环或三环、碳环或杂环，其中环或者未取代或者1至3位上 由卤素、羟基、硝基、三氟甲基、C1-C6直链或支链烷基或链烯基、C1-C4 烷氧基、C1-C4链烯氧基、苯氧基、苄氧基、氨基、或其组合取代；其中单 个环的大小是3-7个原子；而且杂环含有1-6个选自由氧、氮、硫及其任 意组合组成的组的杂原子。
较优选的以一般式Vb表示的组合物包括连接X和Y的3-6元环。
较优选的以一般式V表示的组合物或其药学上可接受的盐类是以一般式Vc表 示的组合物或其药学上可接受的盐类，其包括下列结构式：
式中，
a)X、Y各自独立地是氢、Ar1、(C1-C6)烷基(可由杂原子断开或取代，如氮、 磷、氧、硫或硅，杂原子本身可由(C1-C3)烷基取代一次或多次)、(C2-C6) 链烯基、(C1-C6)卤代烷基、或卤素如萘基或苯基；
b)R2是氢、烷基、Ar1或氧取代的烷基；以及
c)Ar1是单环、双环或三环、碳环或杂环，其中环或者未取代或者1至3位上 由卤素、羟基、硝基、三氟甲基、C1-C6直链或支链烷基或链烯基、C1-C4 烷氧基、C1-C4链烯氧基、苯氧基、苄氧基、氨基、或其组合取代；其中单 个环的大小是3-7个原子；而且杂环含有1-6个选自由氧、氮、硫及其任 意组合组成的组的杂原子。
较优选的以一般式VI表示的组合物或其药学上可接受的盐类以包括下列结构 式的结构表示：
式中，
a)R1是(C1-C6)烷基、Ar1或(C1-C4)烷氧羰基甲基；
b)R2是氢、烷基、Ar1或氧取代的烷基；
c)Y是氢、Ar1、(C1-C6)烷基(可由杂原子断开或取代，如氮、磷、氧、硫或 硅，杂原子本身可由(C1-C3)烷基取代一次或多次)、(C2-C6)链烯基、(C1-C6) 卤代烷基、或卤素；以及
d)X是烷基或苯基。
在较优选的以一般式VI表示的组合物中，Y是Ar1。在另一较优选的以一般式 VI表示的组合物中，Y是苯基、萘基、3-甲酰吲哚、咪唑或吡唑。
本发明的其它化合物包括但不限于：(不可逆或自杀型抑制剂)：2-氧代-戊炔 酸盐、丹酰氯、丹酰氟、炔丙基甘氨酸、N-乙酰基-炔丙基甘氨酸、O-(2，4-二硝 基苯基)羟胺、1-氯-2-硝基乙烷、1，2-环己二酮、烯丙基甘氨酸、N-氯-D-亮氨酸、 苯基乙二醛、溴丙酮酸乙酯、溴丙酮酸甲酯和溴丙酮酸盐。较优选的化合物包括但 不限于：甲基乙二醛双(脒基腙)、肼基羧亚氨基酰胺、丙酮醛双(脒腙)、3-(3-吲 哚基)丙酸、3-吲哚-乙酸、吲哚-3-丙酮、吲哚-3-乙酰胺、吲哚-3-乙酰基-L-天冬 氨酸、吲哚-3-乙酰基-L-丙氨酸、吲哚-3-乙酰基甘氨酸、吲哚-3-羧酸、吲哚-3- 丙酮酸、丹酰基甘氨酸、丙氨酸四唑、四唑、核黄素5’-焦磷酸盐、5-羟基-2-羟 甲基-4-吡喃酮、羟胺盐酸盐、四氢-4-苯基-4H-1，4-噻嗪1-氧化物、吩噻嗪、3， 4-二氢-2H-1，4-噻嗪-3，5-二羧酸、硝呋莫司(1-((5-硝基亚糠基)氨基)-2-甲基 四氢-1，4-噻嗪-4，4-二氧化物)、2-氨基-2，4-戊二烯酸盐、2-氨基-4-酮-2-戊 烯酸盐、N-乙酰基-D-亮氨酸、D-Leu(D-2-氨基-4-甲基戊酸)、孕酮(4-孕烯-3， 20-二酮)、FAD(黄素腺嘌呤二核苷酸)、6-OH-FAD(黄素腺嘌呤二核苷酸)、N-(1- 羧乙基)-L-丙氨酸、3-氨基天冬氨酸、硫代氨甲酰酰肼、5-S-半胱氨酰多巴胺、磷 脂酰丝氨酸、4-羟基-2-巯基6-甲基嘧啶、4-氨基-N-2-噻唑基苯磺酰胺、硫氰酸 盐、2-巯基-1-甲基咪唑、酒石酸、2-氨基乙硫醇、S-腺苷甲硫氨酸和硫脲。
可用本领域已知的方法对本文或表I所列的没有限制作用的化合物作出变换 或衍生，生成下列一种或多种化合物：a)前药；b)具有高酶活性的化合物；c)对 D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶具有特异性的化合物；d)毒性低的化合物； 或者e)没有不希望的副作用的化合物。测定D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶 活性的方法已为本领域所公知，可用本文所公开或本文引用的参考文献所公开的方 法进行。以下所有引用作举例说明D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶拮抗剂的 参考文献均纳入其整体内容作为参考。
用作举例说明的D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶拮抗剂
a)2-氧代-3-戊炔酸盐；(Biochemistry 1999年5月4日；38(18)：5822- 8)。
b)氨基胍；(J Neurochem 1998年3月；70(3)：1323-6)。
c)苯甲酸盐(苯甲酸)及其盐(例如，苯甲酸钠)；(Neurosci Lett 1996年11 月8日；218(3)：145-8)。
d)邻、间和对氨基苯甲酸盐类(J.Biochem.(东京)1976年11月，80(5)： 1101-1108)。
e)甲基乙二醛双(脒基腙)(MGBG)；苯基乙二醛双(脒基腙)(PhGBG)；乙二醛 双(脒基腙)(GBG)；(Anticancer Drug Des 1996年10月；11(7)：493-508)。
f)α-酮酸，所述α-酮酸是氨基酸丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、苯甘 氨酸，酪氨酸、色氨酸、丝氨酸、天冬氨酸盐等的类似物(例如，丙酮酸、 α-酮异戊酸、4-甲基硫代-2-氧代戊酸、4-甲基硫代-2-氧代丁酸、苯基丙 酮酸、吲哚-3-丙酮酸、苯甲酰基甲酸、4-羟基苯基丙酮酸及其盐类和衍生 物)，吲哚-丙酸、3-吲哚-乙酸、水杨酸及其盐类和衍生物(Enzyme Microb Technol 1996年4月；18(5)：379-82)。
g)丹酰氯；(FEBS Lett 1995年4月25日；363(3)：307-10)。
h)丙氨酸四唑和苯甲酸四唑；(Res Commum Chem Pathol Pharmacol 1994年 2月；83(2)：209-22)。
i)核黄素5’-焦磷酸盐(RPP)；(Anal Biochem 1992年5月1日；202(2)： 348-55)。
j)D-炔丙基甘氨酸(D-PG)；(J Biochem(Tokyo)1991年1月；109(1)：171-7)。
k)D，L-β-羟基丁酸盐；(J Histochem Cytochem 1991年1月；39(1)：81- 6)。
l)葫芦巴碱，即N-烟酸甲酯；(J Biochem(东京)1990年5月；107(5)： 726-31)。
m)曲酸及其盐类；(J Biol Chem 1989年2月15日；264(5)：2509-17)。
n)O-(2，4-二硝基苯基)羟胺；(Biochemistry 1987年3月24日；26(6)： 1717-22)。
o)苯甲酸盐；(D’Silva，C.，Willams，C.H.，Jr.，&Massey，V.(1986) Biochemistry 25，5602-5608)。
p)对硝基苯磺酸甲酯；(J Biol Chem 1984年5月10日；259(9)：5585-90)。
q)氨基乙基半胱氨酸-酮亚胺(2H-1，4-噻嗪-5，6-二氢-3-羧酸)；1，4-噻嗪 衍生物，酮亚胺还原形式(硫代吗啉-2-羧酸和硫代吗啉-2，6-二羧酸)；
(Biochim Biophys Acta 1983年10月17日；748(1)：40-7)。
r)半胱胺和溴丙酮酸盐的反应产物；(J Appl Biochem 1983年8-10月；
5(4-5)：320-9)。
s)1-氯-1-硝基乙烷；(J Biol Chem 1983年1月25日；258(2)：1136-41)。
t)苯甲酸盐；氨基苯甲酸酸；吡啶甲酸盐；L-亮氨酸；(J Biol Chem 1982 年9月10日；257(17)：9958-62)。
u)氟二硝基苯；(Nishino，T.，Massey，V.，和Williams，C.H.，Jr.(1980) J Biol Chem 255，3610-3616)。
v)1，2-环己烷二酮；(Eur J Biochem 1981年10月；119(3)：553-7)。
w)烯丙基甘氨酸；2-氨基-2，4-戊二烯酸盐；2-羟基-2，4-戊二烯酸盐；
(Biochemistry 1978年12月26日；17(26)：5620-6)。
x)2-氨基-4-酮-2-戊烯酸盐；(Biochemistry 1978年12月26日；17(26)： 5613-9)。
y)D，L-2-羟基丁酸盐；(J Cell Biol 1978年4月；77(1)：59-71)。
z)对氨基苯甲酸盐；(J Bichem(Tokyo)1976年11月；80(5)：1073-83)。 aa)N-氯-D-亮氨酸；(J Biol Chem 1976年10月10日；251(19)：6150- 3)。
bb)D-炔丙基甘氨酸；(Biochemistry 1976年7月13日；15(14)：3070- 6)。
cc)D-2-氨基-4-戊炔酸(D-炔丙基甘氨酸)；(J Biochem(Tokyo)1975年 7月；78(1)：57-63)。
dd)孕酮(Biochim Biophys Acta 1978年1月12日；522(1)：43-8)。
ee)长链、中链和短链游离脂肪酸(Biochem Int 1990年12月；22(5)： 837-42)。
ff)6-OH-FAD(Biochim Biophys Acta 1999年4月12日；1431(1)：212-22)。
gg)苯基乙二醛，L-酒石酸盐(Eur J Biochem 1992年4月1日；205(1)： 127-32)。
hh)环硫堇，TMDA，α-α’-亚氨基二丙酸(Physiol Chem Phys Med NMR 1986； 18(1)：71-4)。
ii)J Histochem Cytochem 1990年9月；38(9)：1377-81所公开的抑制剂。
jj)内消旋二氨基琥珀酸(Eur J Biochem 1981年7月；117(3)：635-8)。
kk)氨基硫脲、硫脲、甲基硫脲嘧啶、磺胺噻唑、硫氰酸盐和甲硫咪唑 (Endocrinol Exp 1976；10(4)：243-51)。
ll)二羧基羟酸(Enzymologia 1967年12月31日；33(6)：325-30)。
mm)苹果酸和酒石酸(Boll Soc Ital Biol Sper 1966年1031日；42(20)： 1455-7)。
需要指出的是，本发明的D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶拮抗剂包括以 上列出及整份说明书所列出的化合物，以及这些化合物的盐类和衍生物。
调节D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶的表达和/或活性的化合物的筛选方法 可用来测试拮抗化合物在抑制或降低D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶多 肽或者抑制或减少D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶基因产物(mRNA或多肽)的 表达的能力的方法已为本领域所公知。用于筛选方法的合适的D-氨基酸氧化酶和 D-天冬氨酸氧化酶多肽包括重组的D-氨基酸氧化酶和D-天冬氨酸氧化酶或从组织 (狗肾)纯化而来的D-氨基酸氧化酶和D-天冬氨酸氧化酶。优选的D-氨基酸氧化酶 和D-天冬氨酸氧化酶多肽及用来制备所述多肽的多核苷酸是图1和2所示的人D- 氨基酸氧化酶和D-天冬氨酸氧化酶序列。本发明优选的拮抗剂是图1和2所示的 多肽拮抗剂。本发明较优选的拮抗剂能抑制D-氨基酸的氧化脱氨基作用。本发明 较优选的拮抗剂能抑制D-丝氨酸或D-天冬氨酸盐的氧化脱氨基作用。本文所述和 本领域已知的测定D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶酶活性的分析可在体外或 体内进行。
本发明的拮抗剂包括天然存在和合成化合物以及小分子。本发明的拮抗剂可 阻断D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶与其辅助因子、FAD或底物结合或者阻 断酶活性例如D-氨基酸的氧化脱氨基作用。采用本领域公知的D-氨基酸氧化酶或 D-天冬氨酸氧化酶活性的测定方法可确定本发明任何一种候选拮抗剂是否能增强 或抑制D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶的活性。一种筛选方法包括使含有D- 氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶多肽的样本与测试化合物接触，在底物存在下 分析D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶的活性。将D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨 酸氧化酶的活性水平与不含测试化合物的样本比较，D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨 酸氧化酶的活性水平较标准低，显示候选化合物是D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸 氧化酶的拮抗剂。D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶的活性可在一种分离的或 纯化的酶或在含有表达D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶的细胞或组织的生物 样本中测定。
此外，本领域技术人员能够鉴定抑制D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶基 因产物(mRNA或多肽)的表达的化合物。使表达D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化 酶的细胞(例如，肝脏、肾或脑细胞)在有或没有测试化合物的情况下培育。通过测 定有或没有测试化合物时D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶基因产物的表达水 平或者在有或没有测试化合物时D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶的活性水 平，可鉴定抑制D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶基因产物的表达的化合物。 另外，可将含有可操作地连接于报导基因的D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶 调节序列的构造体(例如，萤光素、氯霉素乙酰转移酶、LacZ、绿萤光多肽、β牛 乳糖等)引入宿主细胞，并检测测试化合物对报导基因表达的影响。适用于上述分 析的细胞包括但不限于：与组织同一来源的细胞或多肽已知得到表达的细胞系(例 如，肾、肝脏和脑)。在mRNA水平上(例如采用RNA印迹、RT-PCR，优选用对感兴 趣的D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶mRNA具有特异性的引物和探针进行定量 RT-PCR)或者在多肽水平上(通过测定D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶的酶活 性或在免疫分析如ELISA或放射性免疫分析、蛋白质印迹、免疫化学法中用多克隆 或单克隆抗体)，可实现定量分析D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶多肽的表 达。
另一方面，有一种分析基于细胞的分析，其中使表达D-氨基酸氧化酶或D-天 冬氨酸氧化酶蛋白质或其生物活性部分与测试化合物接触，确定测试化合物抑制、 活化或增加D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶活性的能力。通过监测D-氨基酸 氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶蛋白质或其生物活性部分的生物活性可以确定测试化 合物抑制、活化或增加D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶活性的能力。最好监 测氨基酸氧化。细胞可以源自例如哺乳动物、细菌或酵母菌细胞。例如，一些实施 例的细胞可以是哺乳动物、细菌或酵母菌细胞。
采用本领域已知的组合库方法中众多方法的其中一种可得到本发明的测试化 合物，这些方法包括：生物库、空间可寻址平行固相或液相文库、需要重叠合法 (deconvolution)的合成化学库方法、“一珠粒一化合物(one-bead one- compound)”文库方法；以及应用亲和力层析选择的合成文库方法。生物库方法与肽 库一起使用，而其它四种方法适用于肽、非肽低聚物或小分子化合物库(Lam，K.S. (1997)Anticancer Drug Des.12：145，它所公开的资料纳入其整体内容作为参 考)。
在本领域可找到分子库的合成方法的例子，例如，DeWitt等人，(1993)Proc. Natl.Acad.Sci.U.S.A.90：6909；Erb等人，(1994)Proc.Natl.Acad.Sci. USA91：11422；Zuckermann等人，(1994)J.Med.Chem.37：2678；Cho等人， (1993)Science261：1303；Carrell等人，(1994)Angew.Chem.Int.Ed.Engl. 33：2059；Carell等人，(1994)Angew.Chem.Int.Ed.Engl.33：2061；以及 Gallop等人，(1994)J.Med.Chem.37：1233，这些文献所公开的资料纳入其整 体内容作为参考)。
溶液(例如，Houghten(1992)Biotechniques13：412-421)、或珠粒(Lam(1991) Nature 354：82-84)、芯片(Fodor(1993)Nature364：555-556)、细菌(Ladner U.S. Pat.No.5，223，409)、孢子(Ladner的美国专利号’409)、质粒(Cull等人，(1992) Proc Natl Acad Sci USA 89：1865-1869)或噬菌体(Scott和Smith(1990)Science 249：386-390)；(Devin(1990)Science 249：404-406)；(Cwirla等人(1990)Proc. Natl.Acad.Sci.87：6378-6382)；(Felici(1991)J.Mol.Biol.222：301- 310)；(上述提到的Ladner)可含有化合物库，这些文献所公开的资料纳入其整体 内容作为参考。
例如，将D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶蛋白质或其生物活性部分与放 射性同位素或酶标记偶联，这样，检测复合物中标记的D-氨基酸氧化酶或D-天冬 氨酸氧化酶蛋白质或其生物活性部分可测定D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶 蛋白质或其生物活性部分与其同族靶分子的结合，从而可确定测试化合物抑制D- 氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶活性的能力。D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧 化酶靶分子优选是一种与D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶蛋白质天然结合或 相互作用的分子，以致可实现D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶介导的功能。 在一实施例中，D-氨基酸氧化酶靶分子是g34872多肽。例如，化合物(如D-氨基 酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶蛋白质或其生物活性部分)可用125I、35S、14C或 3H直接或间接标记，通过直接计算放射性放射或计算闪烁来检测放射性同位素。 另一方面，化合物也可用例如辣根过氧化酶、碱磷酸酶或萤光素作酶标记，通过测 定适当底物向产物的转化来检测酶标记。使标记的分子与其同族分子接触，并测定 复合物形成的程度。例如，免疫沉淀复合物或进行凝胶电泳可测定复合物形成的程 度。
无需标记任何一种相互作用的物质而确定化合物(例如D-氨基酸氧化酶或D- 天冬氨酸氧化酶蛋白质或其生物活性部分)与其同族靶分子相互作用的能力也在本 发明的范围内。例如，可用微生理仪检测一种化合物与其同族靶分子的相互作用， 而无需标记该化合物或靶分子(McConnell，H.M.等人(1992)Science 257： 1906-1912，其公开的资料纳入整体内容作为参考)。如细胞传感器等微生理仪是一 种用光可寻址的电位器式传感器(LAPS)测量细胞酸化其环境速度的分析仪器。酸化 速度的变化可作为化合物与受体之间相互作用的指标。
在一优选实施例中，该分析包括使表达或应答D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸 氧化酶蛋白质或其生物活性部分的细胞与靶分子接触，形成分析混合物，使该分析 混合物与测试化合物接触，确定测试化合物抑制或增加D-氨基酸氧化酶或D-天冬 氨酸氧化酶蛋白质或其生物活性部分的活性的能力，其中确定测试化合物抑制或增 加D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶蛋白质或其生物活性部分的活性的能力包 括确定测试化合物抑制或增加表达细胞的D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶的 生物活性的能力(例如，确定测试化合物抑制或增加转导、蛋白质与蛋白质相互作 用、底物结合的能力)。
在另一实施例中，有一种分析基于细胞的分析，其包括使表达D-氨基酸氧化 酶或D-天冬氨酸氧化酶靶分子(即与D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶相互作 用的分子)的细胞与测试化合物接触，确定测试化合物调节(例如分别刺激或抑 制)D-氨基酸化酶或D-天冬氨酸氧化酶靶分子的活性的能力。例如，通过确定D- 氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶蛋白质与D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶 靶分子结合或相互作用的能力可确定测试化合物调节D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨 酸氧化酶靶分子的活性的能力。
确定D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶蛋白质与D-氨基酸氧化酶或D-天 冬氨酸氧化酶靶分子结合或相互作用的能力可用上述测定直接结合的其中一种方 法来实现。在一优选实施例中，测定靶分子活性可确定D-氨基酸氧化酶或D-天冬 氨酸氧化酶蛋白质与D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶靶分子结合或相互作用 的能力。例如，使靶分子与D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶蛋白质或其片段 接触，测定靶分子第二细胞信使(即细胞外Ca2+、甘油二酯、IP3等)的诱导，检测 靶分子在一适当底物的催化/酶活性，检测报导基因(含有靶-反应调节元件，所述 元件可操作地连接于编码可检测标记如萤光素的核酸)的诱导，或者检测靶-调节的 细胞应答，例如信号转导或蛋白质与蛋白质相互作用，可以测定靶分子的活性。
在另一优选实施例中，本发明的一种分析是与细胞无关的分析，该分析使D- 氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶蛋白质或其生物活性部分与测试化合物接触， 确定该测试化合物与D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶蛋白质或其生物活性部 分结合的能力。按照上述方法可直接或间接测定测试化合物与蛋白质的结合。在一 优选实际例中，该分析包括使D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶蛋白质或其生 物活性部分与已知的化合物接触，该已知的化合物与D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨 酸氧化酶(例如D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶靶分子)结合形成分析混合 物，使该分析混合物与测试化合物接触，并确定该测试化合物与D-氨基酸氧化酶 或D-天冬氨酸氧化酶蛋白质相互作用的能力，其中确定测试化合物与D-氨基酸氧 化酶或D-天冬氨酸氧化酶蛋白质相互作用的能力包括测定该测试化合物与已知的 化合物相比，与D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶或其生物活性部分优先结合 的能力。
在另一实施例中，该分析是与细胞无关的分析，其中使D-氨基酸氧化酶或D- 天冬氨酸氧化酶蛋白质或其生物活性部分与测试化合物接触，确定该测试化合物调 节(例如抑制D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶的活性或者激活D-氨基酸氧化 酶或D-天冬氨酸氧化酶的活性)该蛋白质或其生物活性片段的活性。例如，通过上 述测定直接结合的其中一种方法确定蛋白质与靶分子结合的能力可确定测试化合 物调节蛋白质的活性的能力。例如，这可用一种实时生物分子相互作用分析(BIA) 等技术来实现(Sjolander，S.和Urbaniczky，C.(1991)Anal.Chem.63：2338-2345 以及Szabo等人，(1995)Curr.Opin.Struct.Biol.5：699-705，这些文献所 公开的资料纳入其整体内容作为参考)。本文所用的“BIA”是一种实时研究生物特 异性相互作用的技术，无需标记任何一种相互作用的物质(例如BIAcore)。表面等 离子共振仪光学现象的变化可作为生物分子之间实时作用的指标。
在一变换实施例中，通过确定D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶蛋白质进 一步调节D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶靶分子下游效应子的活性的能力可 确定测试化合物调节D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶蛋白质的活性的能力。 例如，利用如前所述方法可测定效应子分子对合适的靶分子的活性或者可测定效应 子与合适的靶分子的结合。
在另一实施例中，该与细胞无关的分析包括使D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸 氧化酶蛋白质或其生物活性部分与已知的化合物接触，该已知的化合物与D-氨基 酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶结合形成分析混合物，使该分析混合物与测试化合 物接触，并确定该测试化合物与D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶蛋白质相互 作用的能力，其中确定该测试化合物与D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶蛋白 质相互作用的能力包括确定D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶蛋白质优先结合 或调节D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶靶分子的活性的能力。
本发明与细胞无关的分析可改为采用可溶性和/或膜结合形式的分离蛋白质 (例如D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶蛋白质或其生物活性部分或者与D-氨 基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶靶分子结合的分子)。在与细胞无关的分析中，若 采用膜结合形式的分离蛋白质，就需要用增溶剂以使膜结合形式的分离蛋白质保持 在溶液中。这些增溶剂的例子包括非离子去污剂，如正辛基葡糖苷、正十二烷基葡 糖苷、正十二烷基麦芽糖苷、辛酰基-N-甲基葡糖酰胺、癸酰基-N-甲基葡糖酰胺、 TritonTM X-100、TritonTM X-114、ThesitTM、异三癸基聚(亚乙基乙二醇醚)正 3-(3-胆酰氨基丙基)二甲基铵基-1-丙烷磺酸盐(CHAPS)、3-(3-胆酰氨基丙基)二甲 基铵基-2-羟基-1-丙烷磺酸盐(CHAPSO)或者N-十二烷基＝N，N-二甲基-3-铵基-1- 丙烷磺酸盐。
在一个以上本发明的上述分析方法实施例中，需要将D-氨基酸氧化酶或D-天 冬氨酸氧化酶蛋白质或靶分子固定，以利于一个或多个蛋白质复合型式与非复合型 式分离，以及适应分析的自动化操作。在任何适合容纳反应物的容器中，在候选化 合物存在或不存在的情况下可完成测试化合物与D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧 化酶蛋白质的结合，或者D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶蛋白质与靶分子的 相互作用。这些容器的例子包括微滴定板、试管和微离心管。一实施例提供了一种 融合蛋白，所述融合蛋白加入了一结构域，可以使一种或两种蛋白质与基质结合。 例如，谷胱甘肽-S-转移酶/D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶融合蛋白或谷胱 甘肽-S-转移酶/靶分子融合蛋白可被吸入谷胱甘肽琼脂糖珠粒(Sigma Chemical， 密苏里州圣路易市)，或者谷胱甘肽衍生化微滴定板，它们在有利复合物形成的条 件(例如，盐和pH值的生理条件)下再与测试化合物或者没有被吸入的靶蛋白质 或者D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶蛋白质结合。培育后，洗涤珠粒或微滴 定板，例如，如上所述，除去任何非结合组分、固定在珠粒的基质、直接或间接测 定的复合物。此外，也可使复合物与基质解离，用标准技术测定D-氨基酸氧化酶 或D-天冬氨酸氧化酶的结合或活性水平。
将蛋白质固定在基质的其它技术也可用在本发明的筛选分析方法中。例如， 用生物素和链霉生物素结合可将D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶蛋白质或者 D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶靶分子固定。生物素化的D-氨基酸氧化酶或 D-天冬氨酸氧化酶蛋白质或靶分子可用本领域公知的技术(例如，生物素化试剂盒， Pierce Chemicals，Rockford，Ill.)由生物素-NHS(N-羟基-琥珀酰亚胺)制备，并 固定在涂有链霉生物素的96孔板(Pierce Chemical)的孔中。另外，与D-氨基酸 氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶蛋白质或靶分子反应但不会干扰D-氨基酸氧化酶或D- 天冬氨酸氧化酶蛋白质与其靶分子结合的抗体可衍生到孔板的孔中，而未结合的靶 分子或D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶蛋白质通过与抗体结合而被收集在孔 中。这些复合物的检测方法除了以上所述关于GST固定化复合物的方法外，还包括 复合物的免疫检测方法，其采用与D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶蛋白质或 靶分子反应的抗体，以及依靠检测与D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶蛋白质 或靶分子相关的酶活性的酶联分析法。
在本发明的另一方面，可用蛋白质作为双杂交或三杂交分析中的“诱饵蛋白 质”(参见美国专利申请号5,283,317；Zervos等人，(1993)Cell 72：223-232； Madura等人，(1993)J.Biol.Chem.268：12046-12054；Bartel等人，(1993) Biotechniques 14：920-924；Iwabuchi等人，(1993)Oncogene 8：1693-1696； 以及Brent的WO94/10300，这些文献所公开的资料纳入其整体内容作为参考)，以 便鉴定与D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶蛋白质结合或相互作用，和/或涉及 D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶蛋白质的活性的其它蛋白质。
双杂交系统基于大部分由分离的DNA结合和活化结构域组成的转录因子的模 块性质。简单地说，这种分析利用两个不同的DNA构造体。在一个构造体中，编码 D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶蛋白质或其片段的基因与编码已知的转录因 子(如GAL-4)的DNA结合结构域的基因融合。在另一个构造体中，来自DNA序列库 并编码未得到鉴定的蛋白质(“捕获物”或“样本”)的DNA序列与编码已知的转录 因子的活化结构域的基因融合。如果“诱饵”和“捕获物”蛋白质能够在体内相互 作用，形成依赖于D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶的复合物，就使转录因子 的DNA结合和活化结构域紧密接近。这种接近使得可操作地连接于应答转录因子的 转录调节位点的报导基因(如LacZ)转录。可检测到报导基因的表达，并且可以使 含有功能性转录因子的细胞克隆分离，用来获得克隆基因，后者编码与D-氨基酸 氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶蛋白质相互作用的蛋白质。
本发明还涉及由上述筛选分析法所鉴定的新型试剂，以及用这些分析法生产 所述试剂的方法。所以，本发明的一实施例包括由这样一种方法得到的化合物或试 剂，该方法包括上述筛选分析(例如基于细胞的分析或与细胞无关的分析)中任何一 种方法的步骤。例如，本发明一实施例包括一种化合物或试剂，它是通过一种方法， 即将表达D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶靶分子的细胞与测试化合物接触， 并确定该测试化合物结合D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶靶分子或者调节D- 氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶靶分子的活性的能力来而得到的。本发明的另 一个实施例包括一种化合物或试剂，它是通过另一种方法，即将表达D-氨基酸氧 化酶或D-天冬氨酸氧化酶靶分子的细胞与D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶蛋 白质或其生物活性部分接触，形成一种分析混合物，再将该分析混合物与测试化合 物接触，并确定该测试化合物与D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶靶分子相互 作用或者调节D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶靶分子的活性的能力而得到 的。本发明的另一个实施例包括一种化合物或试剂，它是通过另一种方法，即将 D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶蛋白质或其生物活性部分与测试化合物接 触，并确定该测试化合物与D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶靶分子结合或者 抑制D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶蛋白质或其生物活性部分的活性的能力 而得到的。本发明的又一个实施例包括一种化合物或试剂，它是通过另一种方法， 即将D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶蛋白质或其生物活性部分与已知的化合 物接触，而所述已知的化合物与D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶蛋白质接触 形成一种分析混合物，再将该分析混合物与测试化合物接触，并确定该测试化合物 与D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶蛋白质相互作用或者调节D-氨基酸氧化酶 或D-天冬氨酸氧化酶蛋白质的活性的能力而得到的。
采用体内筛选也可鉴定抑制D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶的活性或者 抑制D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶基因产物的表达的拮抗剂化合物。在这 些分析中，给动物施加(如静脉、腹膜内、肌内、口服或其它途径)例如各种剂量水 平的测试化合物。分别比较测试动物和表达D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶 的对照动物组织中D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶的活性或基因产物的表达 水平，以确定测试化合物对D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶的活性或基因产 物的表达的影响。合适的动物包括但不限于：啮齿动物(如小鼠和大鼠)和灵长类动 物。人源化的非人动物如人源化的小鼠也可用作测试动物，这就是说，这些动物中 内源性多肽被切除(剔除)并利用标准转基因方法加回同源性人多肽。这些动物只表 达人型式的多肽。
体内分析还包括中枢神经系统障碍的动物模型。这些模型包括但不限于：如 本文所述和本领域所公知的，大鼠模型中的条件性回避行为、沙鼠足踢踏模型、雪 貂呕吐模型、分离诱导的发声模型、在omnitech digiscan动物活动监测器中小鼠 和大鼠的行为活动评估、大鼠模型中安他非明刺激的运动的阻断、大鼠模型中声音 惊吓的前冲动抑制、脱水吗啡诱导的攀爬行为模型的抑制、以及DOI诱导的头部颤 搐和搔抓模型。
本发明的其它拮抗剂包括抑制D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶基因产物 的表达的反义和三螺旋工具。在反义方法中，使与D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸 氧化酶mRNA或基因组序列互补的核酸序列与D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶 mRNA或基因组DNA在细胞外杂交，从而阻断由mRNA编码的D-氨基酸氧化酶或D- 天冬氨酸氧化酶多肽的表达。用于D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶治疗的反 义核酸分子可以是DNA或RNA序列。采用本发明的反义多核苷酸的优选方法是 Sczakiel等人(1995)所述的步骤，它公开的资料纳入其整体内容作为参考。本发 明其它优选的反义多核苷酸是或者与含有启动密码子ATG的D-氨基酸氧化酶或D- 天冬氨酸氧化酶mRNA序列或者与D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶序列互补的 序列。
反义多核苷酸最好含有一些序列，其与含剪接供体或受体位点的D-氨基酸氧 化酶或D-天冬氨酸氧化酶启动密码子(ATG)或基因组DNA互补。本发明的反义多核 苷酸也最好具有被自切割核酶序列所置换的3’聚腺苷酸化信号，以致在其3’端无 需聚腺苷酸化信号就可以产生RNA聚合酶II转录物，这些反义多核苷酸不能由胞 核输出，如Liu等人(1994)所述，它公开的资料纳入其整体内容作为参考。D-氨基 酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶的反义多核苷酸还可在核酶盒中含有一种组蛋白茎 —环结构，以稳定切割转录物抗3’-5’外切核酸酶降解，这样一种结构如Eckner等 人(1991)所述，它公开的资料纳入其整体内容作为参考。
反义核酸的长度和解链温度要足以形成胞内双链体，其稳定性足以抑制双链 体中D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶mRNA的表达。Green等人(1986年)以及 Izant和Weintraub(1984年)揭示了设计适用于D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧 化酶治疗的反义核酸的策略，这些文献所公开的资料纳入其整体内容作为参考。
在一些策略中，反义分子可通过使D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶编码 区的方向与启动子的方向相反来获得，以便转录在细胞中正常转录的反向链。另一 种方法包括通过使含有反义序列的DNA与在适当表达载体的启动子可操作地连接， 在体内转录D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶反义核酸。
另外，与在细胞中正常转录的链互补的寡核苷酸可在体外合成。所以，这些 反义核酸与相应的mRNA互补，能够与mRNA杂交生成双链体。反义序列也可含有修 饰的磷酸糖骨架以增加稳定性，并且使它们对RNA酶活性的灵敏度减少。适用于反 义策略的修饰包括2’O-甲基RNA寡核苷酸和多肽—核酸(PNA)寡核苷酸。其它例子 参见Rossi等人(1991年)所述，它公开的资料纳入其整体内容作为参考。
也可采用与D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶cDNA或基因组DNA互补的 各种形式反义寡核苷酸。例如，可采用本文引用的国际申请WO 94/23026所述的稳 定和半稳定反义寡核苷酸。这些分子的3’端或3’和5’端在互补碱基对之间的分子 内氢键结合。这些分子能够更好地抵抗外切核酸酶攻击，并且具有较常规的反义寡 核苷酸更高的稳定性。
在另一种使用反义技术抑制D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶多肽的表达 的方法中，采用了本文引用的国际申请WO 96/31523所述的共价交联反义寡核苷酸。 这些双链或单链寡核苷酸分别含有一个或多个寡核苷酸间或寡核苷酸内的共价交 联，其中这些交联由一条链的伯胺基团分别与另一条链或同一条链的羧基之间的酰 胺键组成，伯胺基团在链核苷酸单糖环的位置2’上直接取代，而羧基则分别由另 一条链或同一条链的核苷酸或核苷酸类似物上取代的脂肪族分隔基团携带。
还可采用本文引用的国际申请WO 92/18522所公开的反义寡脱氧核苷酸和寡 核苷酸。这些分子不易降解，含有至少一段与调控多肽结合的转录调控识别序列， 作为它们的诱饵(decoy)十分有效。这些分子可含有“发夹”结构、“哑呤形”结构、 “修饰的哑呤形”结构、“交联”诱饵结构及“环形”结构。
另外，还可采用本文引用的欧洲专利申请号0 572 287 A2所述的环形双链寡 核苷酸。这些连接寡核苷酸“哑呤形”含有转录因子的结合位点，并通过遮蔽转录 因子受到该因子的调控来抑制D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶的表达。
本文引用的国际申请WO 92/19732所公开的封闭型反义寡核苷酸也是一种变 换。因为这些分子没有游离端，所以它们比常规寡核苷酸更能够抵抗外切核酸酶降 解。这些寡核苷酸可以具有多种功能，与不与靶mRNA邻接的几个区相互作用。
应用体外表达分析可确定抑制D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶表达所需 的反义核酸的适当水平。用本领域已知的方法通过扩散、注射、感染或转染可将这 些反义分子引入细胞中。例如，反义核酸可以裸露寡核苷酸、质粒中封装的寡核苷 酸、用病毒多肽封装的寡核苷酸序列、或以可操作地连接于表达载体所含的启动子 的寡核苷酸引入到身体中。表达载体可以是本领域已知的各种表达载体中任何一 种，包括逆转录病毒或病毒性载体、能够进行染色体外复制的载体、或整合载体。 这些载体可以是DNA或RNA。
细胞样本可引入许多不同的浓度反义分子，优选为1×10-10M与1×10-4M之间。 一旦确定了能足以调控D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶表达的最小浓度，就 可以将最佳剂量转为适合体内服用的剂量。例如，培养基的抑制浓度为1×10-7M， 转化为剂量约等于0.6毫克/公斤体重。经过测试实验室动物的寡核苷酸毒性后， 发现寡核苷酸水平接近100毫克/公斤体重或以上是可以的。此外，还要考虑除去 脊椎动物的细胞，用反义寡核苷酸治疗，并重新引入到脊椎动物中。
在本发明的一优选实施例中，首先鉴定由D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化 酶编码的多肽，或者测定酶活性，以便可以用某些技术监测反义抑制对翻译的效果， 这些技术包括但不限于：抗体介导的测试，如放射性免疫分析、ELISA、功能性分 析、放射性标记以及测定D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶活性的分析。
本发明所用抑制D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶基因产物的表达的反义 技术的一种变换包括使用核酶，所述核酶通过其互补多核苷酸尾部与D-氨基酸氧 化酶或D-天冬氨酸氧化酶靶序列结合，而且通过水解其靶位点(即“锤头核酶” (hammerhead ribozymes))切割相应的D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶RNA。 简单地说，锤头核酶的简化循环包括(1)通过互补反义序列使序列特异性结合靶D- 氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶RNA；(2)使靶D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧 化酶链的可切割基序进行特异性位点水解；以及(3)释放切割产物，产生另一个催 化循环。锤头核酶的构造和产生已为本领域所公知，Haseloff和Gerlach(Nature 20334：585-591(1988))作了较完整的叙述。事实上，适宜使用长链反义多核苷酸 (长至少30个碱基)或带有长反义臂的核酶。将这些反义核酶与亲脂基团通过共价 键结合或用脂质体作为适当载体，得到反义核酶的优选输送系统。按Rossi等人 (1991)和Sczakiel等人(1995)所述的方法制备本发明的优选反义核酶，具体制备 步骤可参照本文引用的所述文章。
也可用D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶基因组DNA抑制基于胞内三螺旋 形成的D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶基因表达。用三螺旋寡核苷酸抑制基 因组的转录。它们特别适用于研究细胞中D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶活 性的变化。D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶cDNA或基因组DNA或那些序列的 片段可用来抑制患有与特定D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶的表达相关的中 枢神经系统障碍的个体的D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶表达。类似地，部 分D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶基因组DNA可用来研究细胞内D-氨基酸氧 化酶或D-天冬氨酸氧化酶转录的抑制效应。一般认为，同源嘌呤序列在三螺旋策 略中是最有用的。然而，同源嘧啶序列也可用来抑制D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨 酸氧化酶表达。这些同源嘧啶寡核苷酸与同源嘌呤的主沟(major groove)即同源嘧 啶序列结合。
为了用三螺旋方法进行D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶治疗策略，首先 扫描D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶基因组DNA序列，以鉴定一段从10-mer 到20-mer的同源嘧啶或同源嘌呤延伸序列，该序列可用在抑制D-氨基酸氧化酶或 D-天冬氨酸氧化酶表达并基于三螺旋的策略中。鉴定候选同源嘧啶或同源嘌呤延伸 序列后，将含有候选序列的各种含量的寡核苷酸引入表达D-氨基酸氧化酶或D-天 冬氨酸氧化酶的组织培养细胞中，以评估它们抑制D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸 氧化酶表达的效率。按照上述方法监测经过处理的细胞中D-氨基酸氧化酶或D-天 冬氨酸氧化酶酶活性的改变或D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶表达的减少。
如关于反义多核苷酸中所述，利用所述的技术以基于体外结果计算出的剂量 将能有效抑制组织培养细胞中D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶表达的寡核苷 酸导入体内。
在一些实施例中，用α端基异构体取代寡核苷酸单位的天然(β)端基异构体， 产生对核酶具有更大抗性的寡核苷酸。此外，可使溴乙啶等嵌入剂附在α寡核苷酸 3’端上，以稳定三螺旋体。要了解适合形成三螺旋的寡核苷酸的制备方法，可参看 本文的引用文献Griffin等人(Science 245：967-71，1989)。
药学和生理学上可接受的组合物及其给药
利用容易获得的原料，以本领域技术人员公知的常规合成方法可制备本发明 所用的化合物和组合物。另外，本发明实验所用的化合物可购自市场供应商，如 Sigma Chemical Company(密苏里州圣路易市)。
根据本文所述或本领域已知的Nyberg等人的方法(Psychopharmacology 119， 345-348，1995)，对动物进行药理研究可确定D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化 酶拮抗剂的相对活性、功效和特异性。这种测试能估计相对活性、功效，并通过测 量特异性可估计治疗指数。可采用的其它动物研究包括但不限于：本文所述和本领 域已知的涉及条件性回避、脱水吗啡诱导的攀爬、阻断5-羟基-色氨酸诱导的头部 颤搐和搔抓或其它动物模型的研究。虽然对人的临床研究可确定不同病人群体之间 相差的新陈代谢，但Kerr等人(Biochem.Pharmacol.47，1969-1979(1994))) 和Karam等人(Drug Metab.Dispos.24，1081-1087，1996)提供了一些更低廉 和省时的替代方法。类似地，按照Leach等人(Epilepsia 37，1100-1106，1996) 的方法或按照Kerr等人(同上)以及Turner和Renton(Can.J.Physiol. Pharmacol.67，582-586，1989)的体外方法可在临床上评估药物与药物可能的相 互作用。另外，采用各种体外分析方法也可测试D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧 化酶拮抗剂的相对活性、功效和特异性。
有效剂量取决于各种因素而改变，如病人的情况、疾病症状的严重程度、药 物组合物的给药方式。对人患者而言，典型化合物的有效剂量一般要求给每个病人 施加的化合物至少约1毫克/24小时，通常至少约10毫克/24小时，往往至少约 25毫克/24小时。对人患者而言，典型化合物的有效剂量要求给每个病人施加的化 合物一般不超过约500毫克/24小时，通常不超过约400毫克/24小时，往往不超 过约300毫克/24小时。另外，所施加的有效剂量使得化合物在病人血浆中的浓度 在正常情况下不超过500纳克/毫升，往往不超过100纳克/毫升。
本发明的化合物和组合物每日可以约0.1到约1,000毫克的剂量水平施加给 病人。对体重约70公斤的正常成年人而言，估计每日每公斤体重约0.01到约100 毫克是足够的。不过，采用的具体剂量是可以改变的。例如，剂量可取决于多种因 素，包括病人的要求、待治疗的病况严重性、所用化合物的药理活性。一个特定病 人的最佳剂量的确定已为本领域技术人员所公知。有效成分可与载体材料结合配成 单剂量形式，而有效成分的含量取决于待治疗的宿主和给药的具体方式。然而，需 要明白的是，任何一个特定病人的具体剂量水平取决于各种因素，包括所用具体化 合物的活性、年龄、体重、身体状况、性别、饮食、给药时间、给药途径、排泄速 度、药物组合及待治疗的特定疾病的严重性。
在一些实施例中，本发明的实验采用各种组合的D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨 酸氧化酶拮抗剂。所以，含有一种以上D-氨基酸氧化酶拮抗剂的组合物可用在本 发明的治疗方法中。此外，含有一种以上D-天冬氨酸氧化酶拮抗剂的组合物也可 用在本发明所公开的方法中。在另一实施例中，本文公开的治疗方法采用至少一种 D-氨基酸氧化酶拮抗剂和至少一种D-天冬氨酸氧化酶拮抗剂的组合。
本发明方法所用的优选化合物能够通过病人的血脑屏障。故这些化合物能够 进入病人的中枢神经系统。进行本发明所用的典型化合物的logP值一般大于0， 通常约大于1，往往约大于1.5。这些典型化合物的logP值一般约小于4，通常 约小于3.5，往往约小于3。logP值是衡量化合物通过扩散屏障如生物膜的能力。 参见Hansch等人(J.Med.Chem.，Vol.11，p.1，1968)。此外，利用本领域已 知的由旁路通过血脑屏障的组合物和方法(例如美国专利申请号5,686,416； 5,994,392，纳入其整体内容作为参考)可使本发明的组合物由旁路通过血脑屏障， 或者可直接注射入脑内。适当的注射部位包括大脑皮层、小脑、中脑、脑干、下丘 脑、脊髓和心室组织、以及包括颈动脉体和肾上腺髓质在内的外周神经系统区域。 组合物可以大丸剂或通过利用渗透泵等其它方法给药。
本发明的化合物可单独或作为组合物的一部分施加给病人，所述的组合物含 有其它成分，例如本领域公知的赋形剂、稀释剂和载体。组合物可通过口服、直肠、 肠胃外(静脉、肌肉内或皮下)、脑池内、阴道内、腹膜内、膀胱内、局部(粉末、 药膏或液滴)，或者以口腔或鼻喷剂或吸入而给予人和动物。
适合肠胃外注射用的组合物可包括生理学上可接受的无菌或非水溶液、分散 液、悬浮液、乳液、重构为无菌注射液或分散液的无菌粉末。合适的水溶性和非水 溶性载体、稀释剂、溶剂或载色剂包括水、乙醇、多元醇(丙二醇、聚乙二醇、甘 油等)及其合适的混合物，菜油(如橄榄油)和可注射的有机酯如油酸乙酯。例如， 利用膜层如蛋黄素，保持分散液所需的颗粒大小以及利用表面活性剂都可保持适当 的流质。
这些组合物还可含有辅助剂，如防腐剂、湿润剂、乳化剂和分散剂。通过各 种抗菌剂和抗真菌剂，例如对羟苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、山梨酸等，可确保防止 发生微生物作用。也希望组合物包括等渗剂，例如糖类、氯化钠等。采用延迟吸收 的试剂，如单硬脂酸铝和明胶，可导致注射药物形式延长吸收。
口服的固体剂量形式包括胶囊、片剂、丸剂、粉末、和粒剂。这些固体剂量 形式的活性化合物与至少一种常用惰性赋形剂(或载体)，如柠檬酸钠或磷酸氢钙， 或(a)填充剂或添加剂，如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇、硅酸；(b)结合剂， 如羧甲基纤维素、藻酸盐、明胶、聚乙烯基吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯树胶；(c)保 湿剂，如甘油；(d)崩解剂，如琼脂-琼脂、碳酸钙、马铃薯或木薯淀粉、褐藻酸、 某些复合硅酸盐和碳酸钠；(e)阻溶剂，例如石蜡；(f)吸收加速剂，如季铵化合 物；(g)湿润剂，如十六烷基醇和单硬脂酸甘油；(h)吸附剂，如高岭土和斑脱土； 以及(i)润滑剂，如滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、聚乙二醇固体、十二烷基硫酸钠、 或其混合物一起掺合。胶囊、片剂和丸剂的剂量形式还可含有缓冲剂。
利用乳糖或奶糖以及高分子量聚乙二醇等赋形剂，也可用类似形式的固体组 合物作为软填充和硬填充明胶胶囊的填充剂。以膜层和外壳，如肠溶包膜和本领域 公知的其它膜层和外壳，可制备有壳剂量形式，如片剂、糖衣片、胶囊、丸剂和粒 剂。它们可含有遮光剂，而且可以是这样一种组合物，即它们以延迟方式在肠道的 某一部分释放出活性化合物。可采用的包埋组合物的例子是聚合物和蜡。如适用， 活性化合物可与上述一种或多种赋形剂制成微被囊形式。
口服的液体剂量形式包括药学上可接受的乳液、溶液、悬浮液、糖剂和酏剂。 除了活性化合物外，液体剂量形式可含有本领域常用的惰性稀释剂，如水或其它溶 剂、增溶剂和乳化剂，例如乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苯甲醇、苯甲基 苯甲酸盐、丙二醇、1，3-丁二醇、二甲基甲酰胺、油类特别是棉花籽油、花生油、 玉米胚芽油、橄榄树、调和油和芝麻油，甘油、四氢糠醇、聚乙二醇和山梨聚糖的 脂肪酸酯或这些物质的混合物等等。除了这些惰性稀释剂外，组合物还可包括辅助 剂，如湿润剂、乳化剂、悬浮剂、甜味剂、香味剂和芳香料。
悬浮液除了有活性化合物外，还可含有悬浮剂，例如乙氧基化异十八醇、聚 氧乙烯山梨醇和山梨聚糖酯、微晶纤维素、偏氢氧化铝、斑脱土、琼脂-琼脂和西 黄耆胶或这些物质的混合物等等。
直肠给药的组合物最好是栓剂，栓剂可通过将本发明的化合物与适当无刺激 性赋形剂或载体如可可脂、聚乙二醇或栓剂蜡混合而制备，栓剂在常温下是固体， 但在体温时是液体，因而会在直肠或阴道内融化并释放出活性组分。
本发明的化合物局部给药的剂量形式包括药膏、粉末、喷剂和吸入剂。在灭 菌条件下将活性组分与生理学上可接受的载体和可能需要的任何一种防腐剂、缓冲 液或推进剂混合。眼用的制剂、眼膏、粉末和眼药水也包括在本发明的范围之内。
另外，本发明的化合物可以与药学上可接受的溶剂如水、乙醇等配制成非溶 剂化及溶剂化形式。一般认为，用于本发明用途的溶剂化形式相当于非溶剂化形式。
动物模型
大鼠模型中的条件性回避行为
条件性回避模型是预测抗精神病活性的标准行为测试。目前动物临床使用的 抗精神病药物的一个重要药理性质是它们阻断条件性回避反应的能力。例如参见 Cook，L.和Davidson，A.B.：Behavioral pharmacology：Animal models involving aversive control of behavior；M.A.Lipton、A.Dimascio和K.Killam 编辑的In Psychopharmacology，A Generation of Progress，563-567，Raven 出版社，纽约，1978；Davidson，A.B.和Weidley，E.Differential Effects of Neuroleptic and other Psychotropic Agents on Acquisition of Avoidance in Rats，18Life Sci.1279-1284(1976)，这些文献公开的资料纳入其整体内容作 为参考。抗精神病药物条件性回避测试的活性和效力与它们的临床疗效和效力密切 相关。例如参见纳入其整体内容作为参考的文献Creese，I.，Burt，D.R.和Snyder， S.H.：Dopamine receptor binding predicts clinical and pharmacological properties of antischizophrenic drugs.Science(Washington D.C.)192： 481-483，1976。
在条件性回避测试中，动物学习对条件刺激的反应，以回避轻度电震。对条 件刺激的反应称为回避反应，对电震的反应称为逃避反应；反应失败是当动物对条 件性刺激或电震没有反应，这表示运动受损。在绝大多数场合下动物很快学会回避。 抗精神病药物使回避反应的百分比下降，但由于动物确实发出逃避反应，故没有干 扰动物作出反应的能力。将反应失败的百分比看成是衡量运动受损的一个指标。
要求大鼠按住实验箱的一反应杆，以回避或逃避足电震。每一个实验阶段由 50次试验组成。每次试验实验箱都设有灯光和一个最长时间为10秒的调音器 (tone)。对音频有反应立即停止音频和灯光，结束试验。对单独的音频无反应，给 予最长10秒的音频+足电震(2.0毫安)。对电震有反应立即终止电击、音频和灯光， 结束试验。
要筛选药物，在实验开始前以适当的方式在适当的时间30分钟内，如腹膜内 或皮下施加适当的剂量，如3.0毫克/公斤。待处理的一组可以只接受单剂量的D- 氨基酸氧化酶和D-天冬氨酸氧化酶拮抗剂，或者可以在实验前每日处理(例如1日 1次、1日2次或1日3次)至少1日、3日、1星期、2星期、1个月或2个月。如 果药物使回避反应的百分比下降到至少50％而反应失败又不会大于50％，就认为该 药物是有活性的。然后再测定活性药物的剂量—反应曲线。
沙鼠足踢踏(Foot-tapping)
使雄性或雌性蒙古种沙鼠(35-70克)吸入异氟烷/氧气混合物麻醉，露出颈静 脉血管，以便静脉注射5毫升/公斤的测试或对照化合物或介质(vehicle)。测试化 合物还可经口服或皮下或腹膜内途径给予。待处理的一组可以只接受单剂量测试化 合物，或者可以在分析前每日处理(例如1日1次、1日2次或1日3次)至少1日、 3日、1星期、2星期、1个月或2个月。然后在头皮中线切一个小口，露出头骨。 垂直插入有套的27号针至前囱下深4.5毫米，将抗焦虑药(如五肽胃泌素)和/或对 照试剂(盐水、D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶拮抗剂、D-Ser、D-Asp等)直 接注入脑室(例如脑室注射5μl中的3pmol，取决于测试用的物质)。缝合头皮切 口，让动物在透明的有机玻璃箱(25厘米×20厘米×20厘米)中从麻醉状态恢复过 来。然后在大约5分钟内连续记录后足踢踏持续的时间及强度。此外，用类似的定 量分析方法可研究测试化合物抑制由厌恶刺激，如足电震或独处，所引起的足踢踏 的能力。本发明优选的拮抗剂能够抑制沙鼠的诱导性足踢踏。
雪貂呕吐模型
给单独关住的雄性雪貂喂食，口服测试化合物或对照化合物或介质。10分钟 后，给它们喂食约100克罐头猫食物。待处理的一组可以只接受单剂量测试化合物， 或者可以在实验前每日处理(例如1日1次、1日2次或1日3次)至少1日、3日、 1星期、2星期、1个月或2个月。口服药剂后60分钟，以氟烷短暂麻醉，经插入 的颈静脉导管静脉注射顺铂(10毫克/公斤)。移去导管，结扎颈静脉，缝合皮肤切 口。雪貂很快从麻醉状态恢复过来，10-20分钟内就可以活动。注射顺铂后连续4 小时观察动物的麻醉恢复情况。然后人工处死动物。由经过训练的观察人员记录给 予顺铂后4小时期间出现的作呕和呕吐次数。
分离诱导的发声模型
整个研究期间以家庭为组别将雄性和雌性小天竺鼠与它们的母鼠及同窝出生 的仔畜关在一起。当小天竺鼠2周大时断奶后开始实验。进行实验前筛选小天竺鼠， 确保与母亲分隔后能重复发出强烈的声音反应。将小天竺鼠单独放在一个观察笼 (55厘米×39厘米×19厘米)中15分钟，观察笼置于实际上与家庭笼隔离的一间房 内，记录此基线期间发声持续的时间。只选用发声超过5分钟的动物作药物攻击研 究(所有小天竺鼠中约50％未能达到这个标准)。待处理的一组可以只接受单剂量测 试化合物，或者可以在实验前每日处理(例如1日1次、1日2次或1日3次)至少 1日、3日、1星期、2星期、1个月或2个月。如上所述，在测试日社交隔离15 分钟前每只小天竺鼠接受口服剂量或者皮下或腹膜内注射测试化合物或介质，再立 即送回家庭笼与母鼠和兄弟姐妹一起30到60分钟(或者长达口服剂量后4小时， 取决于测试化合物的口服药物动力学)。每只动物在药物治疗日发声持续的时间以 治疗前基线的百分比表示。每只受试动物每周再测试一次，最长达6周。有6至8 只动物一次测试剂量接受一种测试化合物。本发明优选的拮抗剂能有效减弱下文所 限定的小天竺鼠的分离诱导的发声。
在omnitech digiscan动物活动监测器中小鼠和大鼠的行为活动评估
本测试的目的在于评估用于抗精神样中枢神经系统效应和各种一般与中枢神 经系统活动相关的其它行为效应的化合物。这种测试能够确定药物对啮齿动物活动 能力许多方面的影响，包括水平活动(断开光束)、行进的总距离(以厘米计)、移动 的次数、移动的时间(以秒计)、静止时间(以秒计)、垂直活动(断开光束)、垂直移 动的次数、垂直时间(以秒计)、刻板性动作计数(Stereotypy counts)、刻板性动 作发作的次数、刻板性动作的时间(以秒计)、边缘和中心时间(以秒计)、顺时针和 逆时针方向转数以及在活动监测器各个角落所停留的时间(以秒计)不过，一般来 说，以行进的总距离(以厘米计)作为活动能力最准确的衡量指标来评估药物对行为 的影响。。
这些研究用重20到40克的雄性CD-1白化病小鼠(Charles River实验室)或 重150到300克的雄性Sprague-Dawley大鼠(Harlan实验室)。待处理的一组可以 在实验前只接受单剂量测试化合物，或者可以在实验前每日处理(例如1日1次、1 日2次或1日3次)至少1日、3日、1星期、2星期、1个月或2个月。
Omnitech Digiscan动物活动监测器由16英寸×16英寸×12英寸的有机玻璃 室组成，内设两组16个红外线光束传感器，玻璃室底板的四侧每隔1英寸设1个 传感器。另一组光束传感器直接置于较低光束传感器的上面，测量垂直活动。任何 光束的截断应该会使位于监测器主框架中心的发光二极管指示灯发光。在实验开始 前通常对24个监测器中每一个进行诊断性测试，测试时检查所有光束是否有任何 截断。每个活动监测器可用适合在该有机玻璃室内的有机玻璃插板分成4个8英寸 的四分部，其中2个四分部(前左和后右)可用来测试活动。一般来说，这种分割安 排用于小鼠的活动研究(每个分割监测器有2只小鼠)与大鼠的研究(每个未分割监 测器有1只大鼠)作对比。在长达999分钟的时间内可取得多达999个数据样本。 通常，每持续10分钟收集6个小鼠数据样本(1小时的测试)，或者每5分钟收集6 个大鼠数据样本(30分钟的测试)。
一旦将动物放在活动室，就可以使这些活动室各自启动，开始收集数据。由 于黑暗刺激得到的数据较为稳定，所以通常关掉高处的灯光监测活动水平。每次实 验收集以下各种数据(附简单定义)：
变量1：水平活动—在水平传感器出现光束断开的总次数。
变量2：行进的总距离(以厘米计)—由于考虑到任何一次对角线运动，所以它 是一个更为准确的移动性活动指标。
变量3：移动的次数—间隔至少1秒内不连续移动的次数。
变量4：移动的时间(以秒计)—移动的时间段
变量5：静止时间(以秒计)—取样时间与移动所用的时间之差。
变量6：垂直活动—动物直立时在垂直传感器出现光束断开的总次数。
变量7：垂直移动的次数—动物每次直立并断开垂直传感器的次数(间隔至少1 秒)。
变量8、9、10和11：在角落处所停留的时间(左和右前、左和右后)—动物在 很接近笼两面邻接墙所停留的时间。
变量12：垂直时间(以秒计)—直立时断开垂直光束所用的时间。
变量13：刻板性动作计数—重复(刻板性动作)断开同一束光束(或同一组光束) 期间出现光束断开的次数。
变量14：刻板性动作的次数—监测器在间隔至少1秒内观察刻板性动作行为 的次数。
变量15：刻板性动作时间(以秒计)—显示刻板性动作行为的总时间段。
变量16：顺时针方向转数—动物绕至少2英寸直径旋转的次数(不计算较急转 的旋转运动)
变量17：逆时针方向转数—动物绕至少2英寸直径旋转的次数
变量18：边缘时间(以秒计)—动物在很接近有机玻璃笼墙壁处所停留的时间。
变量19：中心时间(以秒计)—动物远离有机玻璃笼墙壁处所停留的时间。
数据可以实际计数、时间(以秒计)、行进的厘米、或者活动能力抑制百分比 相对同时测试的介质处理的对照动物来表示。通过t检验或方差分析和纽曼-库尔 变域测试法(Newman-Keul’s multiple-range test)确定活性相对对照动物的(即 行进的厘米)差异显著。活性水平的刺激以负数表示。用落在剂量—效应曲线直线 部分的至少三个数据点以回归分析法估计预期可能使活性水平下降 50％(ED.sub.50)的剂量以及在该数值左右的95％置信区间。
大鼠模型中安他非明刺激的运动的阻断
阻断安他非明刺激的运动步骤是上述在omnitech digiscan活动监测器中活 动能力方案的一种变化。阻断安他非明刺激的运动步骤使用中枢神经系统刺激剂 d-安他非明来评估多巴胺能试剂的抗精神病活性。
这些研究采用雄性Sprague-Dawley大鼠(Harlan实验室)。待处理的一组可以 在实验前只接受单剂量测试化合物，或者可以在实验前每日处理(例如1日1次、1 日2次或1日3次)至少1日、3日、1星期、2星期、1个月或2个月。对于腹膜 内注射研究，在给药前20分钟给予安他非明，然后进行30分钟活动能力测试。对 于口服研究，在测试前30分钟给药，而在测试前15分钟给予安他非明，这样可以 有充足的时间口服吸收。在16英寸×16英寸的敞开式小室内测量活动能力(每30 分钟测试所行进的厘米)。安他非明产生的运动一般比盐水对照组高2到3倍。药 物的影响以安他非明刺激的运动的反向百分比来表示。用t检验确定与安他非明刺 激的运动相对用安他非明处理的对照动物的差异显著。以回归分析法估计使安他非 明刺激的运动下降50％(ED.sub.50)的剂量及95％置信区间。
大鼠模型中声音惊吓的前脉冲抑制方案
声音惊吓的前脉冲抑制是感觉运动选通(sensorimotor gating)的一种形式， 当一个弱刺激先于惊吓刺激就会发生声音惊吓的前脉冲抑制，导致惊吓反应幅度减 少。精神分裂症患者显示声音惊吓的前脉冲抑制比对照受试者低，与感觉运动选通 的损失一致。所以利用这种现象的动物模型在已知的和潜在的抗精神病药物研究中 十分有用。例如，用诸如脱水吗啡等直接多巴胺激动剂，或者间接多巴胺激动剂安 他非明都可以阻断大鼠的前脉冲抑制，这种效应可用多巴胺拮抗剂如氟哌啶醇拮 抗。
来自Harlan实验室的雄性Sprague-Dawley大鼠(180-280克)以5只为一组关 在一个笼中，使它们处于一个12小时的光/暗循环，能够自由进食和饮水。待处理 的一组可以在实验前只接受单剂量测试化合物，或者可以在实验前每日处理(例如 1日1次、1日2次或1日3次)至少1日、3日、1星期、2星期、1个月或2个月。
本研究使用的惊吓室(SR-LAB，San Diego Instruments)由有机玻璃圆柱筒组 成，它放在有通风设备、声音衰减的密封环境内一个有机玻璃框架上。由设在大鼠 上面的扬声器发出声刺激。有机玻璃框架下面装上一个压电装置，检测和转换开始 声刺激后100毫秒期间圆柱筒内发生的运动。由微电脑和界面组合(San Diego Instruments)记录100毫秒记录窗口(100×1毫秒读数)期间的平均反应。每个惊吓 室之间要相互校准，确保扬声器的性能水平在较大范围的分贝水平(67至125dB) 内一致。用分贝计(例如Radio Shack)评估声水平。调节每个稳定计(它装有压电 装置)，使恒定振动校准器的反应灵敏度相等。
用测试化合物处理的动物可以在实验前只接受单剂量测试化合物，或者可以 在实验前每日处理(例如1日1次、1日2次或1日3次)至少1日、3日、1星期、 2星期、1个月或2个月。每只动物实验前用盐水、测试化合物或对照化合物(例如 脱水吗啡、氟哌啶醇、氯扎平等)预处理。
每个测试阶段开始是5分钟70dB白色噪音的测试适应期。测试阶段总共持 续30分钟；连续进行数个测试，使每一处理组有足够数量的大鼠。第一个和最后 一个试验是只发出120dB脉冲的试验，相隔7到23秒，这期间大鼠很快就适应发 出的噪音。前脉冲抑制的计算不包括这些数据。中间试验由120dB脉冲的单一试 验和以下5种试验组成，其中5种之中的每一种试验以伪随机次序：(1)没有刺激， (2)120dB惊吓前72dB预脉冲100毫秒，(3)120dB惊吓前74dB预脉冲100毫 秒，(4)120dB惊吓前78dB预脉冲100毫秒，以及(5)120dB惊吓前86dB预 脉冲100毫秒。预脉冲(2、4、8和16dB，背景噪音为70dB)持续20毫秒，而惊 吓刺激持续40毫秒。当预脉冲与120dB脉冲配对时，人耳检测不到与只有120dB 脉冲时有明显的声差异。声音惊吓的前脉冲抑制的反射以当2至16dB(相对背景) 预脉冲先于惊吓刺激时所产生的120dB惊吓幅度的抑制百分比来表示。
脱水吗啡诱导的攀爬行为的抑制
在动物药理研究中，通过脱水吗啡诱导的攀爬行为可测试测试化合物的抗精 神病活性(P.Protais等人，″Psychopharmacology″，50，1-6，1976)。研究使用 重22-24克的雄性瑞士小鼠。用测试化合物处理过的动物可以在实验前只接受单剂 量测试化合物，或者可以在实验前每日处理(例如1日1次、1日2次或1日3次) 至少1日、3日、1星期、2星期、1个月或2个月。在时间0点给动物口服测试药 物或25％琼脂。60分钟后，皮下注射1毫克/公斤剂量的脱水吗啡，再过70分钟， 评估动物的行为。每隔10分钟进行2次附加评估。评估时将动物放在垂直小箱 (11×7.5×4.5厘米)底上。除了一个侧表面(宽7.5厘米)是3毫米金属丝网外，箱 的其它墙壁由半透明的甲基丙烯酸酯制成。按照下列标准在2分钟内给动物的位置 计分：0＝4只爪在地上；1＝3只爪在地上；2＝2只爪在地上；3＝1只爪在地上；以及 4＝四只爪握住金属丝网。如果一只动物在2分钟观察期内保持几个位置，就记录每 个位置所保持的秒数。最后，计算平均分数。在这些实验条件下，计算有效剂量 50％(ED.sub.50)的数值。
DOI诱导的头部颤搐和搔抓的抑制
也可以通过1-(2，5-二甲氧基-4-碘苯基)-2-氨基丙烷(DOI)诱导的头部颤搐 和搔抓的抑制试验来测试测试化合物的抗精神病活性(M.Oka等人，″J.Pharm. Exp.Ther.″，264(1)，158-165，1993)。研究使用重22-26克的雄性N.M.R.I.小 鼠。动物称重后，实验前2小时将它们单独放在透明的笼中。用测试化合物处理过 的动物可以在实验前只接受单剂量测试化合物，或者可以在实验前每日处理(例如 1日1次、1日2次或1日3次)至少1日、3日、1星期、2星期、1个月或2个月。
在时间0点给动物口服测试化合物。60分钟时，腹膜内注射3毫克/公斤剂量溶于 盐水的DOI。评估动物头部颤搐和搔抓的次数以及试图逃跑和不逃跑的次数。计算 上述实验条件下所获得的有效剂量50％(ED.sub.50)的数值。
人的临床试验
人的临床试验证实，本发明的D-氨基酸氧化酶和D-天冬氨酸氧化酶拮抗剂对 治疗或减缓精神分裂症、双相性精神障碍或其它中枢神经系统障碍具有活性。例如， 可将一项研究设计为双盲、平行、安慰剂为对照的多中心试验。受试者随机分为4 组，安慰剂和3组测试化合物，3组测试化合物1日3次给药，剂量逐渐增加，例 如25、50和75毫克。给药的方式按本文所述或本领域技术人员常用的方法，如与 食物一起口服。在4次访问中观察受试者，得到基线测量值。其它访问，如第5- 33次访问，作为研究的治疗阶段。
在访问期间，观察受试者精神病行为或双相性行为的迹象，如兴奋、情绪波 动、震颤、精神错乱、不去社交以及精神力集中的能力。以受试者的数目和百分比 对治疗组进行比较，而受试者在双盲部分研究(访问5到33次)中曾经有过症状， 而严重性则差过在基线访问(访问1到4次)期间。
遗传诊断学方法中的D-氨基酸氧化酶、D-天冬氨酸氧化酶及其双等位标记
本发明的D-氨基酸氧化酶和D-天冬氨酸氧化酶基因组和cDNA序列以及双等 位标记也可用来开发一些诊断试验，所述试验能够鉴定表达由特异性基因型导致的 可检测性状的个体，或者其基因型使他们以后有可能发展一种检测性状的个体。采 用本发明诊断学方法来分析的性状可用来诊断任何一种可检测的性状，包括精神分 裂症或双相性精神障碍易感性、可检测性状病发的年龄、对精神分裂症或双相性精 神障碍的治疗有益的反应或与所述治疗相关的副作用。这样一种诊断可用于精神分 裂症或双相性精神障碍的监测、预后和/或预防性或治愈性治疗。
本发明的诊断技术可采用各种方法判断测试受试者是否有与可能逐渐发展一 种可检测性状相关的基因型，或者个体是否由于一种特定的突变而带有一种可检测 的性状，所述方法包括能够分析个体染色体的单倍分型的方法，如家族研究、单个 精子DNA分析或体细胞杂交。
诊断技术涉及人D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶基因内，优选为D-氨基 酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶外显子或编码序列内，所含的特异性等位基因的检 测。更具体地说，本发明涉及一种核酸的检测，所述核酸含有至少一段SEQ ID No： 1至6的核苷酸序列或其片段或其包括多态性碱基的互补序列。
这些方法包括从个体采集核酸样本，确定该核酸样本是否含有至少一个等位 基因或至少一个双等位标记单倍型，这表示有发展性状的风险或者表示该个体表达 由于具有特定的人D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶相关多态性或突变(引起 性状的等位基因)而产生的性状。
在这些诊断方法中，核酸样本最好取自个体，而该样本用本领域已知的或本 文引用文献PCT/IB00/00435的实施例所述的方法进行基因分型。诊断方法也可基 于单个双等位标记或一组双等位标记。
在这些方法中，核酸样本均取自测试受试者，确定一个或以上本发明的双等 位标记的双等位标记模式。
在一实施例中，对核酸样本进行PCR扩增，以便扩增那些与可检测的表型相 关的多态性已被识别的区域。对扩增产物作序列分析，以确定该个体是否具有一种 或多种与可检测的表型相关的人D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶相关多态 性。另外，使核酸样本进行微序列分析反应，以确定个体是否具有一种或多种与可 检测的表型相关的D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶相关多态性，所述的表型 是由于D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶基因组序列的突变或多态性而产生 的。在另一实施例中，使核酸样本与一个或多个等位基因特异性寡核苷酸探针接触， 所述探针和一个或多个与可检测的表型相关的人染色体D-氨基酸氧化酶或D-天冬 氨酸氧化酶相关等位基因特异性杂交。在另一实施例中，使核酸样本与第二个寡核 苷酸接触，所述寡核苷酸与等位基因特异性寡核苷酸一起用在扩增反应时能够产生 扩增产物。扩增反应有扩增产物表示该个体具有一个或多个与可检测的表型相关的 D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶相关等位基因。在一优选实施例中，可检测 的性状是精神分裂症或双相性精神障碍。诊断试剂盒包括本发明的任何一种多核苷 酸。
这些诊断方法非常有用，这是因为它们在某些情况中可用于启动预防性治疗， 或者可使携带显著单倍型的个体预知症兆，如不严重的症状等。
能够分析或预测药物反应或药物副作用的诊断方法可用来确定个体是否应该 用特定药物进行治疗。例如，如果诊断显示个体可能会对用特定药物进行的治疗呈 阳性反应，就可以给个体施加该药物。相反，如果诊断显示个体可能会对用特定药 物进行的治疗呈阴性反应，就要换另一种疗法。阴性反应定义为缺乏有效应答或存 在有毒副作用。
本发明的标记的另一种应用是临床药物试验。用上述方法可鉴定一个或多个 标记，所述标记显示对精神分裂症起作用的药剂或对精神分裂症起作用的药剂副作 用的反应。然后，在这样一种药剂的临床试验中筛选潜在的参与物，以鉴定那些对 药物的反应最有可能呈阳性的个体，排除那些可能有副作用的个体。以这种方式测 量对药物反应呈阳性的个体中药物治疗的效果，由于研究包括不可能呈阳性反应的 个体，所以测量的结果是不会下降的，也没有不希望看到的安全问题的风险。
在防治疾病中的D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶
由于大部分人有自杀倾向，所以对精神分裂症、双相性精神障碍及其它精神 病易感性的检测变得非常重要。故本发明涉及一种精神分裂症或双相性精神障碍或 相关精神障碍的治疗方法，所述方法包括以下步骤：
·选择个体，该个体的DNA含有与精神分裂症或双相性精神障碍相关的一个D- 氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶相关双等位标记或一组D-氨基酸氧化酶或D-天 冬氨酸氧化酶相关标记等位基因；
·跟踪所述个体表现出来与精神分裂症或双相性精神障碍相关的症状；以及
·在疾病的适当阶段给所述个体施加对精神分裂症或双相性精神障碍或其症 状起作用的治疗。
本发明的另一个实施例包括一种精神分裂症或双相性精神障碍的治疗方法， 所述方法包括以下步骤：
·选择个体，该个体的DNA含有与精神分裂症或双相性精神障碍相关的一个D- 氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶相关双等位标记或一组D-氨基酸氧化酶或D-天 冬氨酸氧化酶相关标记等位基因；
·给所述个体施加精神分裂症或双相性精神障碍的预防性治疗。
在又一个实施例中，本发明涉及一种精神分裂症或双相性精神障碍的治疗方 法，所述方法包括以下步骤：
·选择个体，该个体的DNA含有与精神分裂症或双相性精神障碍相关的一个D- 氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶相关双等位标记或一组D-氨基酸氧化酶或D-天 冬氨酸氧化酶相关标记等位基因；
·给所述个体施加精神分裂症或双相性精神障碍的预防性治疗；
·跟踪所述个体的精神分裂症或双相性精神障碍症状的表现和发展；以及可选 择地
·在疾病的适当阶段给所述个体施加对精神分裂症或双相性精神障碍或其症 状起作用的治疗。
要用来确定患病个体的疗程，本发明还涉及一种精神分裂症或双相性精神障 碍的治疗方法，所述方法包括以下步骤：
·选择有精神分裂症或双相性精神障碍的个体，该个体的DNA含有与精神分裂 症或双相性精神障碍或其症状的严重性相关的一个D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸 氧化酶相关双等位标记或一组D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶相关标记等位 基因；以及
·给所述个体施加对精神分裂症或双相性精神障碍或其症状起作用的治疗。
本发明还涉及一群所选的个体的精神分裂症或双相性精神障碍的治疗方法， 所述方法包括以下步骤：
·选择有精神分裂症或双相性精神障碍的个体，该个体的DNA含有一个D-氨基 酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶相关双等位标记或一组D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨 酸氧化酶相关标记等位基因，所述双等位标记与用对精神分裂症或双相性精神障碍 或其症状起作用的有效治疗量的药物进行的治疗呈阳性反应相关；
·和/或该个体的DNA不包含一个D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶相关双 等位标记或一组D-氨基酸氧化酶或D-天冬氨酸氧化酶相关标记等位基因，所述双 等位标记与与用所述药物进行的治疗呈阴性反应相关；
·每隔一段适当时间给所选择的个体施加有效量的所述药物。
在本发明的上下文中，对药物呈“阳性反应”定义为包括疾病相关症状有所 减缓。在本发明的上下文中，对药物呈“阴性反应”定义为包括对药物缺乏阳性反 应，导致症状没有减缓或在施加药物后出现副作用。
本发明也涉及一种受试者是否可能对药物治疗呈阳性反应的判断方法。该方 法包括鉴定对所述药物呈阳性反应的第一组个体以及鉴定对所述药物呈阴性反应 的第二组个体。在对所述药物呈阳性反应的第一组个体中鉴定一个或多个双等位标 记，或者在对所述药物呈阴性反应的第二组个体中鉴定一个或多个双等位标记。这 些双等位标记可用本文所述的技术进行鉴定。
然后，从待测受试者采集DNA样本。对该DNA样本进行分析，确定它是否含 有一个或多个与对药物治疗呈阳性反应相关的双等位标记等位基因，和/或含有一 个或多个与对药物治疗呈阴性反应相关的双等位标记等位基因。
在一些实施例中，如果DNA样本含有一个或多个与对药物治疗呈阳性反应相 关的双等位标记等位基因和/或如果DNA样本缺乏一个或多个与对药物治疗呈阴性 反应相关的双等位标记等位基因，就可以在临床试验中给受试者施加该药物。在优 选实施例中，该药物是对精神分裂症或双相性精神障碍起作用的一种药物。
利用本发明的方法，在可能对药物呈阳性反应的一群个体中评估药物的功效。
本发明的另一方面内容是一种药物的使用方法，该方法包括从受试者采集DNA 样本，判断DNA样本是否含有一个或多个与对药物呈阳性反应相关的双等位标记等 位基因和/或判断DNA样本是否含有一个或多个与对药物呈阴性反应相关的双等位 标记等位基因，如果DNA样本含有一个或多个与对药物呈阳性反应相关的双等位标 记等位基因和/或如果DNA样本缺乏一个或多个与对药物呈阴性反应相关的双等位 标记等位基因，就给受试者施加该药物。
本发明也涉及一种药物最好是对精神分裂症或双相性精神障碍或其症状起作 用的药物的临床试验方法。该方法包括以下步骤：
·给一组异源个体施加一种药物，最好是一种容易对精神分裂症或双相性精神 障碍或其症状起作用的药物；
·鉴定对所述药物呈阳性反应的第一组个体以及鉴定对所述药物呈阴性反应 的第二组个体；
·鉴定对所述药物呈阳性反应的所述第一组个体的双等位标记；
·选择一些个体，其DNA含有与对所述药物呈阳性反应相关的双等位标记；以 及
·给所述个体施加所述药物。
精神分裂症或双相性精神障碍的任何一种预防、诊断和治疗方法包括药物的 使用方法、药物的临床试验方法、判断受试者是否可能对药物治疗呈阳性反应的方 法。
一般认为这样一些方法对提高某些药物给予的效益/风险比值有显著效果，而 这些药物的给予可能会引起不希望看到的副作用和/或即使正常给予对部分病人也 不起作用。
一旦个体被诊断为有精神分裂症或双相性精神障碍，就进行选择测试以确定 该个体的DNA是否含有一个双等位标记或一组双等位标记等位基因，而所述双等位 标记与对治疗呈阳性反应或包括副作用或无反应在内的对治疗呈阴性反应相关。
通过以上所述的检测方法选择用本发明方法进行治疗的病人。选择的病人最 好是那些DNA不含有与对治疗呈阴性反应相关的一个双等位标记或一组双等位标 记等位基因。弄清个体对特定药物无反应或有副作用的基因倾向，医生就可以给予 适当药物直接治疗精神分裂症或双相性精神障碍或其症状。
一旦确定了病人的基因倾向，医生就可以为病人选择不会出现或者只在边上 出现的阴性反应特别是副作用的适当治疗。
本发明的双等位标记已被证实与精神分裂症或双相性精神障碍相关。不过， 本发明的相关精神障碍，特别是相关的中枢神经系统障碍的预防、诊断、管理和治 疗方法还包括本文所述任何一种利用本发明的双等位标记的预防、诊断、预后和治 疗方法。
实施例
用于细菌和酵母菌中蛋白质表达的质粒的构建
用pET11a载体(Stratagen)进行没有标志(tag)的重组蛋白质的表达。以对应 ORF极限的引物利用PCR技术(TaqPlusPrecision System，Stratagen)得到具有适 当位点(5’是Nde1，3’是HindIII)的编码序列。
使所产生的PCR产物(Qiaquick PCR，Qiagen)纯化，用Nde1和HindIII消化， 凝胶纯化(Microspin，PolyLabo)，并接合到以相同的酶开始的载体中。将这些构 造体转染到DH10B细菌宿主(Gibco BRL)，提取质粒DNAs，并作序列分析以选择合 适的编码序列。
以pESC-LEU穿梭载体(Stratagen)构建用于酵母菌中人D-氨基酸氧化酶和 g34872表达的质粒。
没有标志的重组g34872的表达和纯化
然后，使质粒转染到BL21(DE3)CodonPlus RIL细菌宿主(Stratagen)，让细 菌在0.8升LB培养基中生长，直至A600吸光度达到0.7。加入1mM异丙基-1- 硫代-β-D-吡喃葡萄苷诱导融合蛋白的表达，再培养多3小时。制备细菌沉淀，立 即急冻(-80℃)，再在30℃水浴解冻；加入2mM AEBSF。将细菌细胞悬浮于25毫 升BugBuster提取剂(Novagen)中，补充蛋白酶抑制剂混合物(SetIII，Calbiochem) 和10mM EGTA。悬浮液室温培养30分钟，再加入苯甲酸酶(Novagen)，并连续培 养15分钟。溶胞产物在4℃以10,000×g离心30分钟。通过盐沉淀使细菌蛋白 质与上清液分离。将对应35-55％硫酸铵饱和溶液的蛋白质沉淀溶解在2毫升50mM pH8 TrisHCl缓冲液/含有10mM DTT的50mM氯化钠中，离心澄清溶液，并装在 Ultragel AcA44(Pharmacia)层析柱(1.6×65厘米)中，用20mM pH8 TrisCl缓 冲液/50mM氯化钠缓冲液平衡。以电泳分析洗脱的蛋白质，合并含有MN2R蛋白质 的馏分，超滤浓缩(截留分子量为10K，Biomax-15，Sigma)。再将蛋白质装在 DEAE-Macroprep(Bio-Rad)层析柱(1×2厘米)中，用20mM pH8 TrisCl平衡，用线 性盐梯度洗脱(0到1M氯化钠，20柱体积)。合并含有MN2R蛋白质的馏分，超滤浓 缩(截留分子量为10K)，并装在Superdex 75(Pharmacia)层析柱(1×27厘米)中， 用20mM pH8 TrisCl缓冲液平衡。合并单一个主峰的馏分，浓缩至5毫克/毫升， 4℃储存。电泳纯化的同源蛋白质的产率通常是每升细菌培养基5毫克。根据制造 商(NuPage by Novagen)的建议，使蛋白质在10％NuPage订制凝胶中进行变性电泳， 使用MES/SDS电泳凝胶缓冲液。分子量标记See-Blue来自Invitrogen。用考马斯 亮蓝G胶体溶液(Sigma)染色后观察蛋白质。
猪肾的天然D-氨基酸氧化酶的纯化
从Sigma购买猪肾D-氨基酸氧化酶的粗制剂。蛋白质溶于50mM pH8 TrisCl(10 毫升配1克)；离心澄清溶液并装在Sephadex G-50培养层析柱(2.6×40厘米)中， 用10mM pH8 TrisCl/100mM氯化钠平衡。再将脱盐后的蛋白质超滤(截留分子量 为30K，Biomax-15，Sigma)浓缩3倍，用10mM pH8 TrisCl/100mM氯化钠/1mM DTT/10mM ATP平衡，并装在不含ATP的同一种缓冲液中的DEAE-琼脂糖层析柱 (1.6×7厘米)中。所述层析柱先以2柱体积10mM pH8 TrisCl/100mM氯化钠洗涤， 再用1柱体积10mM pH8 TrisCl/125mM氯化钠洗涤，然后用10mM pH8 TrisCl/150 mM氯化钠缓冲液洗脱。分析馏分的D-氨基酸氧化酶的酶活性，合并馏分，超滤浓 缩。接着，将蛋白质装在Ultragel AcA44层析柱(1.6×65厘米)，用10mM pH8 TrisCl/100mM氯化钠/1mM DTT平衡，并用同一种缓冲液洗脱。超滤浓缩含有电 泳纯化的D-氨基酸氧化酶的馏分，4℃储存。
重组的人D-氨基酸氧化酶的表达和纯化
使质粒转染到BL21(DE3)CodonPlus RIL细菌宿主(Stratagen)，让细菌在3 升LB培养基中生长，直至A600吸光度达到0.7。加入1mM异丙基-1-硫代-β-D- 吡喃葡萄苷诱导融合蛋白的表达，再培养多5小时。用BugBuster提取剂(Novagen) 在2mM AEBSF存在下提取细菌沉淀，通常使用苯甲酸酶。溶胞产物用50mM TrisCl调至pH8，并在4℃以10,000×g离心20分钟。用硫酸铵(30到50％饱和溶液)使 蛋白质从提取液沉淀下来，在4℃以10,000×g离心60分钟收集沉淀物，将沉淀 物溶于50mM pH8 TrisHCl(10毫升)中；离心澄清溶液，并装在Sephadex G-75 层析柱(2.6×40厘米)中，用10mM pH8 TrisCl/100mM氯化钠平衡。接下来的纯 化步骤与上述关于猪肾D-氨基酸氧化酶的纯化步骤几乎一样。唯一差别在于蛋白 质从DEAE树脂洗脱出来：它是用10mM pH8 TrisCl/300mM氯化钠缓冲液进行的。 电泳纯化的同源D-氨基酸氧化酶蛋白质的产率通常是每升细菌培养基0.7毫克。 酵母菌酿酒酵母中g34872和人D-氨基酸氧化酶蛋白质的表达和提取
使酵母菌酿酒酵母YPH499和FY1679-18B菌株在YPD丰富培养基中生长。用 标准乙酸锂方法使质粒转染在酵母菌细胞中；在YNG合成培养基中选择转染株， 30℃以2％蜜三糖为碳源在1升不含亮氨酸的合成培养基中生长，直至培养基密度 高达1u A600/毫升。在20℃离心收集细胞，用YNGal(含2％D-半乳糖)置换培养 基，并连续培养20小时。沉淀细胞，用冰水洗涤，重悬于20mM pH8 TrisCl缓冲 液/2mM AEBSF中，用玻璃珠(Sigma)每分钟搅动8次，提取蛋白质。溶胞产物在 4℃以10,000×g离心30分钟，收集上清液(S1)，储存于4℃。沉淀物重悬于20 mM pH8 TrisCl缓冲液/2毫克/毫升皂苷/0.3％肌氨酰中，每分钟搅动3次。离心澄 清沉淀提取液(S2)，于-20℃立即急冻。用Bradford试剂(Bio-Rad)检测蛋白质浓 度，用兔抗g34872-his6血清(稀释浓度为1/5000)通过蛋白质印迹步骤以及以D- 丝氨酸为底物通过检测D-氨基酸氧化酶酶活性确认表达。
D-氨基酸氧化酶酶活性的检测
分析混合物通常由200mM D-丝氨酸(Aldrich)、0.1mM FAD、75mM pH8磷 酸钠缓冲液、1U/毫升HR-过氧化酶(Sigma)组成。混合物使用之前才充入空气饱和。 向混合物加入邻苯二茴香胺(Sigma)。在常规分析中25微升分析混合物加入5微升 酶(D-氨基酸氧化酶和混合物)，加入50微升20％硫酸终止培养。以540纳米处的 过氧化酶氧化的邻苯二茴香胺的吸收率来观察活性。测量吸收率之前以14000 rpm 的转速离心含高浓度蛋白质的反应物15分钟。
进行对照实验以确定g34872蛋白质不会影响过氧化酶的酶活性。对过氧化酶 作分析，条件与对D-氨基酸氧化酶的分析完全一样；用过氧化氢为底物，确认 g34872对HRP没有影响。
实施例1
用在pESC-Leu表达载体中所构建的质粒转染酵母菌细胞。一个质粒可以表达 人D-氨基酸氧化酶，第二个质粒C末端标记g34872，第三个质粒是没有插入的载 体(对照)。这些细胞诱导表达后(在培养基有2％半乳糖)再培养24小时，然后按下 述方法混合和组合提取液：不同体积的D-氨基酸氧化酶提取液或者与g34872- cHis6或者载体提取液混合。相同体积的D-氨基酸氧化酶提取液也可与BSA混合(外 部对照)。预培养30分钟后，用该混合提取液测量D-氨基酸氧化酶活性。所有酵 母菌提取液和BSA溶液的总蛋白质浓度相同。在37℃用D-丝氨酸测定D-氨基酸氧 化酶活性。图1显示g34872活化DAO。
实施例2
在含有表达g34872的大肠杆菌提取液和BSA溶液中加入纯化的重组人D-氨基 酸氧化酶。D-氨基酸氧化酶的浓度是0.5和0.3毫克/毫升。细胞提取液和BSA的 总蛋白质浓度是12毫克/毫升。预培养30分钟后，在37℃用该混合提取液测量D- 氨基酸氧化酶活性，底物为D-丝氨酸(图2)。
实施例3
在g34872蛋白质存在下体外活化纯化的D-氨基酸氧化酶：活化效果取决于g34872 浓度
将纯化的D-氨基酸氧化酶和g34872混合，在活性分析之前在环境温度下培养 50分钟。所有混合物的总蛋白质浓度相等。D-氨基酸氧化酶的底物采用D-丝氨酸， 反应的pH值为8.0。所用的蛋白质：纯化的猪D-氨基酸氧化酶在混合物的浓度始 终保持在50纳克/微升，纯化的重组g34872在混合物的浓度是0到450纳克/微升， 牛血清白蛋白(BSA)在混合物的浓度是0到450纳克/微升。可以认为，g34872蛋 白质的浓度范围在生理学上对应蛋白域腔的高尔基蛋白(lumenal Golgi proteins) 的相关数据。见图3。
实施例4
D-氨基酸氧化酶体外活化所需的g34872浓度极限的估计
将猪肾D-氨基酸氧化酶与g34872在PBS中混合，并在20℃培养50分钟。所 有混合物的D-氨基酸氧化酶浓度是50纳克/微升。用200mM D-丝氨酸在20℃测 定D-氨基酸氧化酶的酶活性，pH等于8.0。将猪肾D-氨基酸氧化酶与g34872在 PBS中混合，并在20℃培养1小时。所有混合物的D-氨基酸氧化酶浓度是50纳克 /微升。用200mM D-丝氨酸在20℃测定D-氨基酸氧化酶的酶活性，pH等于8.0。 见图4。
实施例5
D-氨基酸氧化酶在g34872蛋白质存在下的动力学：g34872是D-氨基酸氧化酶的变 构活化剂
将猪肾D-氨基酸氧化酶与g34872在PBS中混合，并在20℃培养30分钟。在 蛋白质混合物中D-氨基酸氧化酶浓度是200纳克/微升，g34872浓度是2微克/微 升。对照混合物(不含g34872)由200纳克/微升D-氨基酸氧化酶和2微克/微升BSA 组成。用D-丝氨酸在20℃测定D-氨基酸氧化酶的酶活性，所用的底物浓度是0到 100mM，混合物的其它圣爱尔莫光(corposant)和pH值为标准值。
观察到g34872和D-氨基酸氧化酶混合物的Vmax对应Km＝4mM，观察到D- 氨基酸氧化酶和BSA混合物的Vmax对应Km＝4mM。这个结果显示，D-氨基酸氧化 酶对其底物(D-丝氨酸)的亲和力没有改变，并且提示g34872与D-氨基酸氧化酶相 互作用的位点不是酶的活化位点。见图5。
实施例6
本发明的双等位标记
在D-氨基酸氧化酶基因(SEQID NO：1)内发现了有效多态性(一般群体出现的 频率大于5％)。这些多态性也称为双等位标记，以SEQ ID NO：23-26表示，分别 编号为24/1443-126、24/1457-52、27/93-181和24/1461-256，其中多态性碱基 位于位置24。SEQ ID NO：1所示为检测本发明各个D-氨基酸氧化酶双等位标记并 含有扩增子和微量测序引物的多核苷酸。如图6所示，已经确定标记27-93/181(SEQ ID NO：25)和24-1461/256(SEQ ID NO：26)分别与精神分裂症p＝0.0066和0.0111 密切相关。本发明的标记还可用来判断个体是否有精神分裂症的风险，如图6所示， 以及是否有其它相关的中枢神经系统障碍的风险，优选是抑郁症和双相性精神障 碍。
实施例7
本发明化合物或组合物的制备
本发明的D-氨基酸氧化酶和D-天冬氨酸氧化酶拮抗剂组合物和化合物可以通 过本领域技术人员公知的各种方法来制备。通用方案包括但不限于以下所述的那些 方案。
以一般式I、Ia、Ib表示的化合物的制备
以一般式I、Ia、Ib表示的大量化合物可在市场上购买，或用本领域技术人 员所知的常规方法由市售化合物合成。具体地说，利用亲电子取代反应，如Friedel Crafts烷基化反应、芳基化反应或在浓硝酸中的硝基化反应，可将取代基引入芳 族环中，如苯基、萘基或者取代的萘基或苯基。修饰芳族环的其它常用方法是将芳 族基团转化为有机金属盐类，如格林亚试剂(Grignard reagents)，或者通过重氮 芳基化合物引入取代基。这些操作方法和其它有关转化方法的例子在标准教科书中 已有讨论，如March， Advanced Organic Chemistry(Wiley)，Carey和Sundberg， Advanced Organic Chemistry(Vol2.)以及Keeting， Heterocyclic Chemistry(全 部17卷)。
以一般式II表示的化合物的制备
以一般式II表示的化合物可在市场上购买，或由本领域技术人员用已知的合 成技术轻易地合成。
在位置Z上被取代以一般式IV表示的化合物的制备
为了控制R1，本领域技术人员要明白可以选择在制备杂环之前、之后或同时 来制备R1。对于式中A是氮的化合物，制备这些化合物的优选方法是：
方案4a
式中，
Rd是衍生基团或者可被控制或取代，这些化合物是已知的或可用已知方法制 备。(P)是保护基，例如芳基，而(B)是合适的阻断基团。为了清楚起见，未示出一 般式IV的位置(Y)上的基团。
要制备和加工杂环，本领域技术人员要明白可以选择在制备杂环之前、之后 或同时来制备R1。为了清楚起见，未示出位置Z和Y上的取代基。对于式中X是 氮的化合物，下面示出R2的一种优选控制方法。在以下方案中，L是任何一个可接 受的离去基团，B是如上所述的阻断基团。Boc是一个得到本领域公认的优选阻断 基团(blocking group)。本领域技术人员知道有机化学领域的技术人员能够选择阻 断基团。
方案4b
对于杂环含有硫的化合物，下面示出这种杂环形成的优选方法。要制备和加 工杂环，本领域技术人员要明白可以选择在制备杂环之前、之后或同时来制备R1。
为了清楚起见，未示出位置Z和Y上的基团。
方案4c
当X是硫时，形成杂环后还可进一步对杂环进行加工。例如，用已知的方法 氧化环的硫原子，可以得到相应的亚砜和砜，如下图所示。
方案4d
对于杂环含有氧的化合物，下面示出这种杂环形成的优选方法。使具有双功 能的部分，例如卤代羟基物质与下面的氮丙啶反应。卤素部分作为离去基团，用于 环的闭合反应。杂环形成后，按上述方法进行本发明的加工。
方案4e
另一个可接受的制备本发明杂环，其中E是硫、氮或氧，的策略包括以下方 案。这是一条优选的路径，由此也可制备式中A是氮且A-B是不饱和的化合物。
方案4f
以一般式IV和一般式III表示的其它优选化合物的制备
当然，本领域技术人员知道，对于全部所述的基团方案I可适用于位置(Y)上 的取代基。当Z是酮缩醇或硫代酮缩醇时，本发明的化合物可由环上带有羰基的化 合物来制备。这些化合物由已知的方法制备，其中很多化合物是已知的或可在市场 上购买。所以，本领域技术人员知道可以将羟基、氨基、亚氨基、烷氧基或其它基 团转化为羰基化合物。
本领域技术人员也知道以一般式IV表示的化合物的上述合成路径可适用于以 一般式III表示的化合物，其中环的大小是7和8个原子。符号B、L、P和V如上 所定义。以下例子只起举例说明作用，但不具有任何限制性。
方案4g
以一般式Va表示的化合物的合成
以一般式Va表示的化合物可用各种方法合成。可用于不同α氨基酸的公知最 佳途径是Strecker合成路径。该方法用氨水和氢氰酸处理适当的乙醛，以便形成 α氨基腈，然后再使α氨基腈进行水解反应。
以一般式Va表示的化合物的另一种可接受的合成策略是以下方案：
方案5a
式中，
P是保护基团，如叔丁基，可以与R1相同。X是如上所述的基团。受保护的化 合物用卤化剂如PBr3、NBS或CBr4进行溴化处理，然后用氨或保护胺衍生物如苯邻 二甲酰亚胺钾置换卤素。本领域技术人员可轻易引入R1和R2。
以一般式Vb表示其中X和Y含有环丙烷环的化合物的合成
在构建α氨基酸的各种途径中，普遍采用以α，β-脱氢氨基酸衍生物来1，3-双 极性环加成重氮烷烃。所以，以下方案证实脱氢氨基酸的R3取代基，优选是烷基 或Ar1，可以作为亚氨基酯得到保护，其中Ar1如上所定义。本领域技术人员知道 这些化合物可以与重氮取代的化合物，优选是烷基或Ar1，起反应生成希望得到的 保护环丙烷衍生物。这些化合物与碱性醇类溶液如甲醇钠反应，再进行酸性水解， 可生成相应的R3、R4取代的环丙烷氨基酸。利用已知的方还可以轻易得到R1和R2 的其它衍生物。
方案5b
以一般式Vb表示其中X和Y含有5-8元环的化合物的合成
可将含有优选5、6、7、8个原子的取代碳环或杂原子转化为与以一般式Vb 表示的化合物一致的氨基酸衍生物。有一些已公认的途径，其中一条途径是将含有 化合物的环酮转化为相应的氨基酸衍生物。这些环酮化合物有很多已在文献中有所 叙述，本领域技术人员也可轻易合成。原料化合物可以是得到保护的或无保护的。 向原料酮的亚胺衍生物加入三甲基硅氰化物可生成氰加成产物。水解和还原裂解保 护胺产生氨基酸。利用已知的方还可以轻易得到R1和R2的其它衍生物。
方案5c
以一般式Vc表示的化合物的合成
以一般式Vc表示的化合物可由R3取代的化合物的亚磺酰亚胺衍生物合成，其 中R3优选是烷基或芳基。有多种路径制备取代的亚磺酰亚胺的，本领域技术人员 可轻易合成这些化合物。
加入以有机金属试剂如烷基溴化镁形式存在的R4，再以三氟乙酸处理，生成 相应的二取代氨基酸，它们用已知的方法可在R1和R2上作进一步衍生。
方案5d
以一般式VI表示的化合物的合成
方案6
由取代的氨基醇可合成单取代或双取代的脱氢氨基衍生物。本领域技术人员 采用与前述步骤相似的方法可轻易合成这些氨基醇。以(Boc)2O/DMAP使单取代的 氨基醇脱氢生成脱氢氨基衍生物。在碱存在下加入亲核试剂(Nu)生成双取代的脱氢 氨基衍生物。
可以改变这些步骤以提高所希望的产物的产率。本领域技术人员也知道合理 选择反应物、溶剂和温度是合成获得成功的一个重要组成部分。当确定最佳条件等 是常规条件时，要明白的是，参照以上方案的指导可以类似的方式制备各种化合物。
业已公认，有机化学领域的技术人员无需进一步指导就可轻易进行有机化合 物的标准操作，也就是说，技术人员清楚知道这些操作步骤的实施。这些操作包括 但不限于：羰基化合物还原为它们相应的醇、羟基等的氧化、酰化反应、芳族取代、 亲电子和亲核反应、醚化反应、酯化反应和皂化反应等等。这些操作方法的例子在 标准教科书中已有讨论，如March， Advanced Organic Chemistry(Wiley)，Carey 和Sundberg， Advanced Organic Chemistry(Vol2.)以及Keeting， Heterocyclic Chemistry(全部17卷)。
本领域技术人员容易地知道，某些反应最好在分子的其它官能团被遮蔽或被 保护的时候进行，以避免任何不希望看到的副反应和/或提高反应的产率。这些反 应可在文献中找到，而且已为本领域技术人员所知。这些操作方法的许多例子可以 在T.Greene的 Protecting Groups in Organic Synthesis中找到。当然，最好 阻断用作原料的氨基酸与侧链反应，以防止不希望的副反应。
表I
序列表
<110>根瑟特公司(GENSET)
<120>用D-氨基酸氧化酶和D-天冬氨酸氧化酶拮抗剂治疗中枢神经系统障碍
<130>101.WO1
<150>60/261,883
<151>2001-01-16
<150>60/305,445
<151>2001-07-13
<150>60/
<151>2001-10-22
<150>60/333,881
<151>2001-11-19
<160>26
<170>Patent.pm
<210>1
<211>86592
<212>DNA
<213>智人(Homo sapiens)
<220>
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<222>38388..40388
<223>5’调控区
<220>
<221>exon
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<223>外显子Z
<220>
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<223>外显子11长序列
<220>
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<223>3’调控区
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<220>
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<223>24-1461-256：多态性碱基A或G
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<223>24-1461-256.探针
<400> 1
attattggaa caggccacac ttgcgaggga agtccctgcc tcagaaagat tcagaaaagc 60
tagacagtca ctggaagaac aattacaacc gcaagacggt caaacactaa acaccgctat 120
gcctcagaac cgtacagata atggccaaat agatggggct ctgggcattt ctgagagcac 180
ctgcctggtg gcaccccatc ctaatggacc atgccctcca gtctccaagt ggctcttcag 240
agctcacatc cgaacacctc ctatgctaca ggttcttcta gccccaggtt cccaaccacc 300
ccaaggccac agaggccagc cccaactcca tcttctacat gtgtcacagg aaactttctc 360
atagtgctat ttattatgta ctgcgggggt gggggccatg tcataaaaga aatgtcctcc 420
cttttttatt catctccttc taacaagcat caaagtctca gtcgctagca tgtgacttac 480
agaagctctc atgggaacaa gacaagacca tactgttacc gtgacactca cggcctccct 540
gactggtttc tgctgttgat tctgcctcaa atgctcctca aatgcacctt gctgctccgc 600
ctccacccta gagctcgcct gactgcccac ttgcccgtta agagtcggct taggcttcac 660
tcctgccaga aaggtcctgc caggtgctct caacagtcac cccctcctgt ggtctcacaa 720
aaccccagca cctctcggtc actctctccc tcctatctgg ttgtgactgt cttccatgct 780
cacttagaag ctctctgagg ccaagaactg tgtgtactgt tgcttctttg tttacctggg 840
cctagcccat tgcctcatac acaggagaat gcaaataaat catatgctta atgaatgagt 900
cgatgaatga atgatgaata aagggaatct aatctagttt taacaaatcc aggttttgca 960
atgatctcac aggcattcat ttatcttgtg atgtcagggg agtgactcca ccctcatttc 1020
acacgcatct tggggtcaat gctctaactt acttggcctc cagttagtgg gaaattacaa 1080
gctacacttc aagcctctga ctaggacctg ccatgaagta cttgggaatc agtggagtat 1140
cactgtgggg tgaggtgtct gaggcgaggc ccaccaatct ccatacttct ccccgggccc 1200
ctctgcctga gagggtctcc ctgcttccct tggcagactc tggtttggcc ttctgggttc 1260
ggcgttgttg tcacctcctt caggaagcat ttctggctaa ggtgccccac tctatagcag 1320
ctggtgtaaa acctctctaa gcaaacagca taactttctg tcctctcaat tgactctgag 1380
ttctgagagc acagcctgga gctggcacgg tgcctggcac agagagctga aatggcacac 1440
cctagtgttc ccagtggctc gactccccag gctctccatc aggacgcagc cctctcccac 1500
ctctgatgga tatgggacca tggaatgctt tgtccagcag caactcttgc ctccctcaca 1560
gaagggaaca cctagcccat cagactcacc tttccttact ggaaaagtcc actcccagca 1620
agatattctc ctcggtgtcc tggcgcccgc tgctgtacac caccaccatg taccggaccc 1680
ggtccgccca ggcgctctcc aggcgcactg cctggaacag ggcagacatg ctctcactaa 1740
cctgcctttg gaggtggtgc ctccctccca tctccaatgc aagatcaaca ctttcagtgt 1800
tctacctttc cctctgggag ttaaaaatga agagaaaatt cttggctggg catggtggtt 1860
caggcctgta atcccagcac tttgggaggc caaggtaggc agatcacttg aggtcaggag 1920
ttcgagacca gcctggccaa catggcaaaa ccccatctct tactaaaaat acaaaaatta 1980
gctgggcatg gtggcgtgcg cctgtaatcc cagctactca ggggactgag gcacgagaat 2040
ctcttgaacc cgggaagcgg aggttgcagt gagctgagat catgccacca catgccagcc 2100
agagcgacag agtgagattc tgtctcaaac aacaacaaca caacaaaaca caaagcggaa 2160
gttcttgaca gcaggaacca ggcctcgttt ctctctgtag caccagggac gccgcctggc 2220
tcagaggaat cacccaaaat gcaagaaatc agtgaacaca tgaaatccaa agaaagttcg 2280
tatttagctt atttaactgc cgtggagacc tgtttcatcc ctcctcccgc ccctctgggg 2340
aactgaggag tcaacctggc tttggcttta gtgcacaatt tgagaatttg ttgtaaccta 2400
aaagcttttc cccttatcat tcacgaatgg ttccccacca ggtttcacaa ttaaaaatta 2460
aaacttgctg gctgggcacg gtggcttaca cctataactc caggactttg ggaggcagag 2520
gcaggagaat catttgaggc caggagttca agaccagcct gggcaaaata gcaagacccc 2580
atatccacaa aattttttta aaaataaggc agggtggtac acacttgtag tcccagctat 2640
ccaggaggct gaggtgggaa gattgcttga acccaggagt ttgaggctgt agtgagctaa 2700
gatcatgcca ctgcactcca gcctgggcaa cagagcaaga ccctcatctc acaaaaatta 2760
aaaaaaaatt ttttaacttg acattctcac tgcttcttac cagcttgatt ctgtcttcgc 2820
aacgcagaag gttgatcatc acctgaagat gttgaggcag atcacctgtt ggaccaataa 2880
agaaagcttt aaaaggtctc ttacctactc tctaggaaaa aaaacctctg aaaggctgac 2940
tttgagggct tggaaaaaga ttgagaagtt aaaatttgtc tacctacacc acaggagaat 3000
caccacaaaa acttcaagtc tgaatttctc ttacaccact ctgaatactg tgcgacgtgg 3060
atgggtgaca tggagcttac tgtcatgttg ttaaaagttg ctcttatttc ctgaaataca 3120
tacagtatag gtttccaaat acaaaatgtg aaaaatacag gcaagcctag agaaaaatgt 3180
tatttcattc aagccaatgt tactcggcag gttggggtgc ctagaaacga cagctgtggc 3240
tggaagtaag gcatttgcta agagttaatc attagagaaa aaggacagag catcacgttt 3300
cctcttcaaa caacttcttc ttctatacag agtctcgcac tgtcacccag gctggagtgc 3360
agtggtacga tctcagctca ctgcaacctc cgcctcctgg attcaacaga ttcttctgct 3420
tcagcctcct aagtagctgg gattacaggt gcccatcacc agacccggct aatttttgta 3480
tttatagtag agatggagtt tcaccatgtt ggccaggctg gtctcgaact cctgacctca 3540
agtgatctgc acgcctcagc ctcccaaagt gctgggatta caggcataag ctaccccacc 3600
caggccccac ttcaaacttc tgcattttcc actggaggca gacattattt ccataaccgg 3660
gggggcgggg ggaaatgttt aagtgactct acagatagca gctgtatgct ggttgcccag 3720
agaaataatt tgaatagaaa ccaatctgtc attttctctt ttcttgctaa aaattatgta 3780
ctcttttttc ttcactatgt aaaacaggca gtaaccaggg acggcttctg aacttctctg 3840
agctgcccca gggttcagga ggtgttcctg gagtgcagtg aggaaagtct cttactggcc 3900
atgagtctcg cgcgaagcag agaccctgtc agaagaagcg cacactttca cggaggggaa 3960
agttgtaagg gaggtgcata attagtaagt agcaggtgtg actccaaggt tgcttttttt 4020
ctctagctta cacatttttc tttatatctg caaggatttc tttctgaaga aagggtcatc 4080
tgtagagatg ctaatatcag cctggtgtgg tggctcacac ctgtaatccc agtgctttgg 4140
gaggccgagg caggagactc acttgaggcc aggcattcaa gaccagtctg ggcaacatgg 4200
caagacccca tctctacaga aaagtaaaaa attagctggg ctttctggtt cacatctgta 4260
gtcccagcta cttgggaggc caaggcagga ggatcgctgg agcccaggag tttgagatca 4320
ccctgggcaa cacgataaga ccctgtctct acaaaggaaa aaaaattact ctatacatca 4380
caattacaac cccaaaagga tcaataatgc ttacacactc aaatgctcca aaaggaaaca 4440
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tccaaattgc acttcctgtc tcagagagga attgggtcat tagaaatttg tgcctctagc 4560
caggagggta gatctcatgt taagcgttct ttctttttct ttttttttca atagagacag 4620
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tccagttata caattccaca gtgtataaca ccctgtgttg accctgcttc ctatgatgag 4860
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cctgtctgat aaatgcctaa atgaaaggga cattttccac acagataaac ttctttcagt 5100
gggattgttt gctgagatat ggaactgctg acagacagaa atccaaaccc cagtctgaca 5160
tccacacaca aaaaaatcag agaatataag ccctagaaag ggtctcaaat tgactggact 5220
ggctgaaaca aactgaacta cttttccaag gacagaatta accctcaatt gtactcagct 5280
ctgcacagtg gttactgggg ggcctctggt acattcagga gacttgatgg taattctagg 5340
gaaaaaaagg aactaacgta agtctagtct gcgtctgtcc caaggtcatt tacagaccaa 5400
ctgtggacag ctggcggccc ctctgccttc cgacctcatc gtccactcca gacctcaggg 5460
cacaagagtc agccagctgg tggcttgcat cctacccttc tagtctttgg attagaggaa 5520
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ttaaaacatg aacaacagct acatttctaa gagggcagaa taattagcaa attcaagaac 5640
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cctcatctac acacacacac acacacacac acacaactag ctgggtgtgg tgacacgcat 5820
ctatggtccc agctactcag gaagctaagg ctggacaatc acttgagccc aggaggtcga 5880
ggctgcagtg agctatgatc aggccactgc acgccagcct gggcaagaga atgagatccg 5940
tctctaaaaa aacttttcat ataattaaaa aaaaaaaaag aatgaagggt ctgtttatag 6000
ctgtattgta ctagaagtca tcgtaataac aatgatagtt acccatatat atatacagca 6060
cctactacag gtaggtatgt tacacgcata actctaaatt tccatattgt ctgaggcacc 6120
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cttagtaagt tggagaacya ggatcagaag acaggtctgc ctggcttcaa aacaaatact 6240
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tttgttaaaa agtcaggctg taacttacag cctgcaatta actgataaac tacagagagg 7560
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cctgttgtaa gaagagggct gcgcctttca ccatgaaaaa gctctcactt aagctgggaa 7920
ggataagacc agagcacagt tagaccggaa ttcagacagg aaaatggaca aagaattact 7980
gcaggggaaa aagctttagc gtggacaaat ggcatgtaaa atgcaaatag gatgaaactg 8040
cttttataat aattccacgt agtacttttc tcaaaccttg cttttgctaa aagcttgctg 8100
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attttctaag aaaagagaac aactccctga ttaggagagg gcagtctact ttgtgaattc 8580
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gtgtctcaaa aaaaaaaaaa gaaagaaaga aagaaagaaa aaagtgggtg gatactgact 9060
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tttataacta cctataactt taaaaattac aattaaaaaa tgtttatttg ggaggctggg 9240
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aataaaatct gttagttttt ctggttaaat gctcatgcta aaaatagtga ctgctcaaat 10080
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aggtgagtgt gacgtcaagg tggctgaaga ggggtttaaa agggcaccta gggggacaag 33360
cccagagccc agcatcccac cctaaatgag aacacaggtc tccaactcca gcccagggtc 33420
tccctgtggt cacaatggtg ttggggacct gctgacagtg gcacggaagg actctcggtg 33480
gtggtcagaa tgacccaaca tcccaggagg cacctgccac cagttggcat gagtccttgg 33540
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caaaagtaat tgcggttttg tcattaatga ccaactatta taagtaatag ttcccttttt 47340
tttttttttt gagatggaat cttgctctgt tgcccaggct ggagtgcagt ggcttgatct 47400
tggctctctg caaactccgc ttcctgggtt caagtgattc tcctgcctca gcctcccaag 47460
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gagtgcagtg gtgcgatctt ggctcactgc aagctctgcc tcctgggttc atgtcattct 75420
cctgcctcag cctcctgagt agctgcgact acaggtgcct gccaccacca cacctggcta 75480
attttttgta tttttagtag agatgggttt tcaccatgtt agccaggatg gtctcaatct 75540
cctgacctcg taatctgccc gcctcggcct cccaaaatgc tgggattaca ggtgtcagcc 75600
accacgccca gcctgattcc atacattttt tatatattac tgttttttaa agatttttag 75660
gccaggcatg gtggttcata cctgtaatcc tagcactttg agaggccgag gtgggcagat 75720
cacttgagcc caggagttca agaccagcct gggcaacatg gcaaaaccct gtctctacag 75780
aaaaattcaa aaatcagcca ggtataatgg tgcatgcctg tagtcacagc tacttaggag 75840
gctgaggtgg gaggatggct ttatcccggg aaggagaggc tgcagtgagc tgtgatcatg 75900
ccactgcact ccagcctggg gggacagggc gagaccctgt ctcaaaaaaa aaaaaaaaga 75960
ttaaaaaaat atggaatata tagtggcttt tatcagatga cctcagaaga ttttttttaa 76020
atgtagattt taggacccca ctctatacct gctgaattag aacttctggg ataaggttca 76080
taaatttgct ttttttcatt tttttgagac aaaatcttac tttgtcaccc aggctggagt 76140
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tcccacctca gcctccaaag tagctgggac cacatgcatg tgccacaatg cctatctaat 76260
ttttaaatat ttttgtagag atagggtctc actatgttgc ccaggctggt ctcaaacccc 76320
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atttatatct gagactcaat gagttttggg tctagagagc tggccgcatt ttctcagtgt 77820
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ctttctgcaa agtccaggcc ctcagctgac tcacctctaa agaagcacca ccaccaataa 77940
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cattcaatcc cagcatctaa aaccctgctt ggcacaagga aggcgctccg tacatgtagc 78060
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actcaccaag ca 86592
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Met Arg Val Val Val Ile Gly Ala Gly Val
1 5 10
atc ggg ctg tcc acc gcc ctc tgc atc cat gag cgc tac cac tca gtc 221
Ile Gly Leu Ser Thr Ala Leu Cys Ile His Glu Arg Tyr His Ser Val
15 20 25
ctg cag cca ctg gac ata aag gtc tac gcg gac cgc ttc acc cca ctc 269
Leu Gln Pro Leu Asp Ile Lys Val Tyr Ala Asp Arg Phe Thr Pro Leu
30 35 40
acc acc acc gac gtg gct gcc ggc ctc tgg cag ccc tac ctt tct gac 317
Thr Thr Thr Asp Val Ala Ala Gly Leu Trp Gln Pro Tyr Leu Ser Asp
45 50 55
ccc aac aac cca cag gag gcg gac tgg agc caa cag acc ttt gac tat 365
Pro Asn Asn Pro Gln Glu Ala Asp Trp Ser Gln Gln Thr Phe Asp Tyr
60 65 70
ctc ctg agc cat gtc cat tct ccc aac gct gaa aac ctg ggc ctg ttc 413
Leu Leu Ser His Val His Ser Pro Asn Ala Glu Asn Leu Gly Leu Phe
75 80 85 90
cta atc tcg ggc tac aac ctc ttc cat gaa gcc att ccg gac cct tcc 461
Leu Ile Ser Gly Tyr Asn Leu Phe His Glu Ala Ile Pro Asp Pro Ser
95 100 105
tgg aag gac aca gtt ctg gga ttt cgg aag ctg acc ccc aga gag ctg 509
Trp Lys Asp Thr Val Leu Gly Phe Arg Lys Leu Thr Pro Arg Glu Leu
110 115 120
gat atg ttc cca gat tac ggc tat ggc tgg ttc cac aca agc cta att 557
Asp Met Phe Pro Asp Tyr Gly Tyr Gly Trp Phe His Thr Ser Leu Ile
125 130 135
ctg gag gga aag aac tat cta cag tgg ctg act gaa agg tta act gag 605
Leu Glu Gly Lys Asn Tyr Leu Gln Trp Leu Thr Glu Arg Leu Thr Glu
140 145 150
agg gga gtg aag ttc ttc cag cgg aaa gtg gag tct ttt gag gag gtg 653
Arg Gly Val Lys Phe Phe Gln Arg Lys Val Glu Ser Phe Glu Glu Val
155 160 165 170
gca aga gaa ggc gca gac gtg att gtc aac tgc act ggg gta tgg gct 701
Ala Arg Glu Gly Ala Asp Val Ile Val Asn Cys Thr Gly Val Trp Ala
175 180 185
ggg gcg cta caa cga gac ccc ctg ctg cag cca ggc cgg ggg cag atc 749
Gly Ala Leu Gln Arg Asp Pro Leu Leu Gln Pro Gly Arg Gly Gln Ile
190 195 200
atg aag gtg gac gcc cct tgg atg aag cac ttc att ctc acc cat gac 797
Met Lys Val Asp Ala Pro Trp Met Lys His Phe Ile Leu Thr His Asp
205 210 215
cca gag aga ggc atc tac aat tcc ccg tac atc atc cca ggg acc cag 845
Pro Glu Arg Gly Ile Tyr Asn Ser Pro Tyr Ile Ile Pro Gly Thr Gln
220 225 230
aca gtt act ctt gga ggc atc ttc cag ttg gga aac tgg agt gaa cta 893
Thr Val Thr Leu Gly Gly Ile Phe Gln Leu Gly Asn Trp Ser Glu Leu
235 240 245 250
aac aat atc cag gac cac aac acc att tgg gaa ggc tgc tgc aga ctg 941
Asn Asn Ile Gln Asp His Asn Thr Ile Trp Glu Gly Cys Cys Arg Leu
255 260 265
gag ccc aca ctg aag aat gca aga att att ggt gaa cga act ggc ttc 989
Glu Pro Thr Leu Lys Asn Ala Arg Ile Ile Gly Glu Arg Thr Gly Phe
270 275 280
cgg cca gta cgc ccc cag att cgg cta gaa aga gaa cag ctt cgc act 1037
Arg Pro Val Arg Pro Gln Ile Arg Leu Glu Arg Glu Gln Leu Arg Thr
285 290 295
gga cct tca aac aca gag gtc atc cac aac tat ggc cat gga ggc tac 1085
Gly Pro Ser Asn Thr Glu Val Ile His Asn Tyr Gly His Gly Gly Tyr
300 305 310
ggg ctc acc atc cac tgg gga tgt gcc ctg gag gca gcc aag ctc ttt 1133
Gly Leu Thr Ile His Trp Gly Cys Ala Leu Glu Ala Ala Lys Leu Phe
315 320 325 330
ggg aga atc ctg gaa gaa aag aaa ttg tcc aga atg cca cca tcc cac 1181
Gly Arg Ile Leu Glu Glu Lys Lys Leu Ser Arg Met Pro Pro Ser His
335 340 345
ctc tga agactccagt gactgctgcc tccccccaca agaactccct tctcccctca 1237
Leu *
gccaatgaat caatgtgctc cttcataagc cattgcttct ccctcacttc tttcctcaaa 1297
gaagcatgag gtgagagaaa gccacaaagt cagtgcctgg agaagggttc agcccaacat 1357
ggggcccctc tcatcactga aatccctcta ccttctctgg gtctggcatt ataaagaaca 1417
gctgaggctg tcattccatg agtcttcaga agaaaggaca gctcagaaaa tcaaagaggc 1477
caactgccca gagccacaga aaatggagga taattgaggc taagtaacct gattacaagt 1537
tgtactaaca tattaaaggt tctgaaaagt cctgca 1573
<210>3
<211>1691
<212>DNA
<213>智人(Homo sapiens)
<220>
<221>5’UTR
<222>1..143
<220>
<221>CDS
<222>144..1187
<220>
<221>3’UTR
<222>1188..1691
<400>3
tgcactccag tccgggctgg cggacagagg gctggaaaca agacgctcca gaatcaggag 60
cttcccctca ggaaatagca tcctgtgtcc ccgcactgca gttgtctggt ctctccagca 120
gtttggtact tccggctgct gca atg cgt gtg gtg gtg att gga gca gga gtc 173
Met Arg Val Val Val Ile Gly Ala Gly Val
1 5 10
atc ggg ctg tcc acc gcc ctc tgc atc cat gag cgc tac cac tca gtc 221
Ile Gly Leu Ser Thr Ala Leu Cys Ile His Glu Arg Tyr His Ser Val
15 20 25
ctg cag cca ctg gac ata aag gtc tac gcg gac cgc ttc acc cca ctc 269
Leu Gln Pro Leu Asp Ile Lys Val Tyr Ala Asp Arg Phe Thr Pro Leu
30 35 40
acc acc acc gac gtg gct gcc ggc ctc tgg cag ccc tac ctt tct gac 317
Thr Thr Thr Asp Val Ala Ala Gly Leu Trp Gln Pro Tyr Leu Ser Asp
45 50 55
ccc aac aac cca cag gag gcg gac tgg agc caa cag acc ttt gac tat 365
Pro Asn Asn Pro Gln Glu Ala Asp Trp Ser Gln Gln Thr Phe Asp Tyr
60 65 70
ctc ctg agc cat gtc cat tct ccc aac gct gaa aac ctg ggc ctg ttc 413
Leu Leu Ser His Val His Ser Pro Asn Ala Glu Asn Leu Gly Leu Phe
75 80 85 90
cta atc tcg ggc tac aac ctc ttc cat gaa gcc att ccg gac cct tcc 461
Leu Ile Ser Gly Tyr Asn Leu Phe His Glu Ala Ile Pro Asp Pro Ser
95 100 105
tgg aag gac aca gtt ctg gga ttt cgg aag ctg acc ccc aga gag ctg 509
Trp Lys Asp Thr Val Leu Gly Phe Arg Lys Leu Thr Pro Arg Glu Leu
110 115 120
gat atg ttc cca gat tac ggc tat ggc tgg ttc cac aca agc cta att 557
Asp Met Phe Pro Asp Tyr Gly Tyr Gly Trp Phe His Thr Ser Leu Ile
125 130 135
ctg gag gga aag aac tat cta cag tgg ctg act gaa agg tta act gag 605
Leu Glu Gly Lys Asn Tyr Leu Gln Trp Leu Thr Glu Arg Leu Thr Glu
140 145 150
agg gga gtg aag ttc ttc cag cgg aaa gtg gag tct ttt gag gag gtg 653
Arg Gly Val Lys Phe Phe Gln Arg Lys Val Glu Ser Phe Glu Glu Val
155 160 165 170
gca aga gaa ggc gca gac gtg att gtc aac tgc act ggg gta tgg gct 701
Ala Arg Glu Gly Ala Asp Val Ile Val Asn Cys Thr Gly Val Trp Ala
175 180 185
ggg gcg cta caa cga gac ccc ctg ctg cag cca ggc cgg ggg cag atc 749
Gly Ala Leu Gln Arg Asp Pro Leu Leu Gln Pro Gly Arg Gly Gln Ile
190 195 200
atg aag gtg gac gcc cct tgg atg aag cac ttc att ctc acc cat gac 797
Met Lys Val Asp Ala Pro Trp Met Lys His Phe Ile Leu Thr His Asp
205 210 215
cca gag aga ggc atc tac aat tcc ccg tac atc atc cca ggg acc cag 845
Pro Glu Arg Gly Ile Tyr Asn Ser Pro Tyr Ile Ile Pro Gly Thr Gln
220 225 230
aca gtt act ctt gga ggc atc ttc cag ttg gga aac tgg agt gaa cta 893
Thr Val Thr Leu Gly Gly Ile Phe Gln Leu Gly Asn Trp Ser Glu Leu
235 240 245 250
aac aat atc cag gac cac aac acc att tgg gaa ggc tgc tgc aga ctg 941
Asn Asn Ile Gln Asp His Asn Thr Ile Trp Glu Gly Cys Cys Arg Leu
255 260 265
gag ccc aca ctg aag aat gca aga att att ggt gaa cga act ggc ttc 989
Glu Pro Thr Leu Lys Asn Ala Arg Ile Ile Gly Glu Arg Thr Gly Phe
270 275 280
cgg cca gta cgc ccc cag att cgg cta gaa aga gaa cag ctt cgc act 1037
Arg Pro Val Arg Pro Gln Ile Arg Leu Glu Arg Glu Gln Leu Arg Thr
285 290 295
gga cct tca aac aca gag gtc atc cac aac tat ggc cat gga ggc tac 1085
Gly Pro Ser Asn Thr Glu Val Ile His Asn Tyr Gly His Gly Gly Tyr
300 305 310
ggg ctc acc atc cac tgg gga tgt gcc ctg gag gca gcc aag ctc ttt 1133
Gly Leu Thr Ile His Trp Gly Cys Ala Leu Glu Ala Ala Lys Leu Phe
315 320 325 330
ggg aga atc ctg gaa gaa aag aaa ttg tcc aga atg cca cca tcc cac 1181
Gly Arg Ile Leu Glu Glu Lys Lys Leu Ser Arg Met Pro Pro Ser His
335 340 345
ctc tga agactccagt gactgctgcc tccccccaca agaactccct tctcccctca 1237
Leu *
gccaatgaat caatgtgctc cttcataagc cattgcttct ccctcacttc tttcctcaaa 1297
gaagcatgag gtgagagaaa gccacaaagt cagtgcctgg agaagggttc agcccaacat 1357
ggggcccctc tcatcactga aatccctcta ccttctctgg gtctggcatt ataaagaaca 1417
gctgaggctg tcattccatg agtcttcaga agaaaggaca gctcagaaaa tcaaagaggc 1477
caactgccca gagccacaga aaatggagga taattgaggc taagtaacct gattacaagt 1537
tgtactaaca tattaaaggt tctgaaaagt cctgcagcaa agacaactat ctgatgttgt 1597
ttaacccagt gcttgctaaa cctatctggc tatggaactc ttttgcccag agcacccatg 1657
aatgccatga cacaaatctg agaaaatgct ggaa 1691
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<212>DNA
<213>智人(Homo sapiens)
<220>
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<220>
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<220>
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gaaacccacg cagcctcctg gattcttccc cgtccctccc tctgtcctgg ggctgtgacc 60
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ggcctcagaa gaagcaatat taaaacagtt acaactcatc tagcgcacag acacccaact 180
gacaccctgt tcctccagtc ataacaacaa ctacagcttt gattgaacaa gagactgagt 240
ttggtaactt tctcctaata aaaagatcac tgactatgga ctgcttctgg tggggttacg 300
aaaccgcaac ctcatgtgcc tgcatttcct gaaaagacat tttgatgtag gaagggcctg 360
gagtcctgct gcttgcgtct ctgggatacg ggagcaaaga gccacgcatc ctcatggccc 420
acacaggcgt cacctccagt ctctccttgg cctcatctcc ccagcgtcct ggaatggcat 480
cgggctggcc cagggagccc ctgtcctgtg cctctccttt cccctcaggg gctgccaggc 540
tgaccacccc caccgcaggc caggcctaca gtgccccatg gaacgtcctg accctccccc 600
agggtggcag caggaagaag gaagaaaggg gatcctctcc agctggccag agagacagac 660
cttcttgtgc tcatcaaccc tccaagaatg cctgccctcc ctccttcccc caaggcctgt 720
ccacaggggc ttgagatcag ccagaaaagt caggcaactt ttcagggact gggagcgagg 780
tctcccggcc gggcctgggt ccagtctctg tgggcagtgc agtgccgagc cccacccctc 840
aagccgtgcc ctgtccatag ctccagactt tgaccctgca ctccagtccg ggctggcgga 900
cagagggctg gaaacaagac gctccagaat caggagcttc ccctcaggaa atagcatcct 960
gtgtccccgc actgcagttg tctggtctct ccagcagttt ggtacttccg atgaagagct 1020
tgtgtctcca gaggcaaagt atgggggaag agggaagaga gaagaccaag ggtccctgag 1080
aggggctgtc ccctaagccc cagtatccaa gctcgggctc gaagctggaa ggagaattgc 1140
ctagaggctg ctgca atg cgt gtg gtg gtg att gga gca gga gtc atc ggg 1191
Met Arg Val Val Val Ile Gly Ala Gly Val Ile Gly
1 5 10
ctg tcc acc gcc ctc tgc atc cat gag cgc tac cac tca gtc ctg cag 1239
Leu Ser Thr Ala Leu Cys Ile His Glu Arg Tyr His Ser Val Leu Gln
15 20 25
cca ctg gac ata aag gtc tac gcg gac cgc ttc acc cca ctc acc acc 1287
Pro Leu Asp Ile Lys Val Tyr Ala Asp Arg Phe Thr Pro Leu Thr Thr
30 35 40
acc gac gtg gct gcc ggc ctc tgg cag ccc tac ctt tct gac ccc aac 1335
Thr Asp Val Ala Ala Gly Leu Trp Gln Pro Tyr Leu Ser Asp Pro Asn
45 50 55 60
aac cca cag gag gcg gac tgg agc caa cag acc ttt gac tat ctc ctg 1383
Asn Pro Gln Glu Ala Asp Trp Ser Gln Gln Thr Phe Asp Tyr Leu Leu
65 70 75
agc cat gtc cat tct ccc aac gct gaa aac ctg ggc ctg ttc cta atc 1431
Ser His Val His Ser Pro Asn Ala Glu Asn Leu Gly Leu Phe Leu Ile
80 85 90
tcg ggc tac aac ctc ttc cat gaa gcc att ccg gac cct tcc tgg aag 1479
Ser Gly Tyr Asn Leu Phe His Glu Ala Ile Pro Asp Pro Ser Trp Lys
95 100 105
gac aca gtt ctg gga ttt cgg aag ctg acc ccc aga gag ctg gat atg 1527
Asp Thr Val Leu Gly Phe Arg Lys Leu Thr Pro Arg Glu Leu Asp Met
110 115 120
ttc cca gat tac ggc tat ggc tgg ttc cac aca agc cta att ctg gag 1575
Phe Pro Asp Tyr Gly Tyr Gly Trp Phe His Thr Set Leu Ile Leu Glu
125 130 135 140
gga aag aac tat cta cag tgg ctg act gaa agg tta act gag agg gga 1623
Gly Lys Asn Tyr Leu Gln Trp Leu Thr Glu Arg Leu Thr Glu Arg Gly
145 150 155
gtg aag ttc ttc cag cgg aaa gtg gag tct ttt gag gag gtg gca aga 1671
Val Lys Phe Phe Gln Arg Lys Val Glu Ser Phe Glu Glu Val Ala Arg
160 165 170
gaa ggc gca gac gtg att gtc aac tgc act ggg gta tgg gct ggg gcg 1719
Glu Gly Ala Asp Val Ile Val Asn Cys Thr Gly Val Trp Ala Gly Ala
175 180 185
cta caa cga gac ccc ctg ctg cag cca ggc cgg ggg cag atc atg aag 1767
Leu Gln Arg Asp Pro Leu Leu Gln Pro Gly Arg Gly Gln Ile Met Lys
190 195 200
gac cca gac agt tac tct tgg agg cat ctt cca gtt ggg aaa ctg gag 1815
Asp Pro Asp Ser Tyr Ser Trp Arg His Leu Pro Val Gly Lys Leu Glu
205 210 215 220
tga actaaacaat atccaggacc acaacaccat ttgggaaggc tgctgcagac 1868
*
tggagcccac actgaagaat gcaagaatta ttggtgaacg aactggcttc cggccagtac 1928
gcccccagat tcggctagaa agagaacagc ttcgcactgg accttcaaac acagaggtca 1988
tccacaacta tggccatgga ggctacgggc tcaccatcca ctggggatgt gccctggagg 2048
cagccaagct ctttgggaga atcctggaag aaaagaaatt gtccagaatg ccaccatccc 2108
acctctgaag actccagtga ctgctgcctc cccccacaag aactcccttc tcccctcagc 2168
caatgaatca atgtgctcct tcataagcca ttgcttctcc ctcacttctt tcctcaaaga 2228
agcatgaggt gagagaaagc cacaaagtca gtgcctggag aagggttcag cccaacatgg 2288
ggcccctctc atcactgaaa tccctctacc ttctctgggt ctggcattat aaagaacagc 2348
tgaggctgtc attccatgag tcttcagaag aaaggacagc tcagaaaatc aaagaggcca 2408
actgcccaga gccacagaaa atggaggata attgaggcta agtaacctga ttacaagttg 2468
tactaacata ttaaaggttc tgaaaagtcc tgcagcaaag acaactatct gatgttgttt 2528
aacccagtgc ttgctaaacc tatctggcta tggaactctt ttgcccagag cacccatgaa 2588
tgccatgaca caaatctgag aaaatgctgg aa 2620
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<212>DNA
<213>智人(Homo sapiens)
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<220>
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<220>
<221>3’UTR
<222>381..1576
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tgcactccag tccgggctgg cggacagagg gctggaaaca agacgctcca gaatcaggag 60
cttcccctca ggaaatagca tcctgtgtcc ccgcactgca gttgtctggt ctctccagca 120
gtttggtact tccggctgct gca atg cgt gtg gtg gtg att gga gca gga gtc 173
Met Arg Val Val Val Ile Gly Ala Gly Val
1 5 10
atc ggg ctg tcc acc gcc ctc tgc atc cat gag cgc tac cac tca gtc 221
Ile Gly Leu Ser Thr Ala Leu Cys Ile His Glu Arg Tyr His Ser Val
15 20 25
ctg cag cca ctg gac ata aag gtc tac gcg gac cgc ttc acc cca ctc 269
Leu Gln Pro Leu Asp Ile Lys Val Tyr Ala Asp Arg Phe Thr Pro Leu
30 35 40
acc acc acc gac gtg gct gcc ggc ctc tgg cag ccc tac ctt tct gac 317
Thr Thr Thr Asp Val Ala Ala Gly Leu Trp Gln Pro Tyr Leu Ser Asp
45 50 55
ccc aac aac cca cag gag gcg acc ctt cct gga agg aca cag ttc tgg 365
Pro Asn Asn Pro Gln Glu Ala Thr Leu Pro Gly Arg Thr Gln Phe Trp
60 65 70
gat ttc gga agc tga cccccagaga gctggatatg ttcccagatt acggctatgg 420
Asp Phe Gly Ser *
75
ctggttccac acaagcctaa ttctggaggg aaagaactat ctacagtggc tgactgaaag 480
gttaactgag aggggagtga agttcttcca gcggaaagtg gagtcttttg aggaggtggc 540
aagagaaggc gcagacgtga ttgtcaactg cactggggta tgggctgggg cgctacaacg 600
agaccccctg ctgcagccag gccgggggca gatcatgaag gtggacgccc cttggatgaa 660
gcacttcatt ctcacccatg acccagagag aggcatctac aattccccgt acatcatccc 720
agggacccag acagttactc ttggaggcat cttccagttg ggaaactgga gtgaactaaa 780
caatatccag gaccacaaca ccatttggga aggctgctgc agactggagc ccacactgaa 840
gaatgcaaga attattggtg aacgaactgg cttccggcca gtacgccccc agattcggct 900
agaaagagaa cagcttcgca ctggaccttc aaacacagag gtcatccaca actatggcca 960
tggaggctac gggctcacca tccactgggg atgtgccctg gaggcagcca agctctttgg 1020
gagaatcctg gaagaaaaga aattgtccag aatgccacca tcccacctct gaagactcca 1080
gtgactgctg cctcccccca caagaactcc cttctcccct cagccaatga atcaatgtgc 1140
tccttcataa gccattgctt ctccctcact tctttcctca aagaagcatg aggtgagaga 1200
aagccacaaa gtcagtgcct ggagaagggt tcagcccaac atggggcccc tctcatcact 1260
gaaatccctc taccttctct gggtctggca ttataaagaa cagctgaggc tgtcattcca 1320
tgagtcttca gaagaaagga cagctcagaa aatcaaagag gccaactgcc cagagccaca 1380
gaaaatggag gataattgag gctaagtaac ctgattacaa gttgtactaa catattaaag 1440
gttctgaaaa gtcctgcagc aaagacaact atctgatgtt gtttaaccca gtgcttgcta 1500
aacctatctg gctatggaac tcttttgccc agagcaccca tgaatgccat gacacaaatc 1560
tgagaaaatg ctggaa 1576
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<212>DNA
<213>智人(Homo sapiens)
<220>
<221>5’UTR
<222>1..113
<220>
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<220>
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<222>1321..1326
<400>6
gaaacccacg cagcctcctg gattcttccc cgtccctccc tctgtcctgg ggctgtgacc 60
tcctccatgt tattcacagg gtctcagcac gattcatctc aaaggctgct gca atg 116
Met
1
cgt gtg gtg gtg att gga gca gga gtc atc ggg ctg tcc acc gcc ctc 164
Arg Val Val Val Ile Gly Ala Gly Val Ile Gly Leu Ser Thr Ala Leu
5 10 15
tgc atc cat gag cgc tac cac tca gtc ctg cag cca ctg gac ata aag 212
Cys Ile His Glu Arg Tyr His Ser Val Leu Gln Pro Leu Asp Ile Lys
20 25 30
gtc tac gcg gac cgc ttc acc cca ctc acc acc acc gac gtg gct gcc 260
Val Tyr Ala Asp Arg Phe Thr Pro Leu Thr Thr Thr Asp Val Ala Ala
35 40 45
ggc ctc tgg cag ccc tac ctt tct gac ccc aac aac cca cag gag gcg 308
Gly Leu Trp Gln Pro Tyr Leu Ser Asp Pro Asn Asn Pro Gln Glu Ala
50 55 60 65
gac tgg agc caa cag acc ttt gac tat ctc ctg agc cat gtc cat tct 356
Asp Trp Ser Gln Gln Thr Phe Asp Tyr Leu Leu Ser His Val His Ser
70 75 80
ccc aac gct gaa aac ctg ggc ctg ttc cta atc tcg ggc tac aac ctc 404
Pro Asn Ala Glu Asn Leu Gly Leu Phe Leu Ile Ser Gly Tyr Asn Leu
85 90 95
ttc cat gaa gcc att ccg gtg gca aga gaa ggc gca gac gtg att gtc 452
Phe His Glu Ala Ile Pro Val Ala Arg Glu Gly Ala Asp Val Ile Val
100 105 110
aac tgc act ggg gta tgg gct ggg gcg cta caa cga gac ccc ctg ctg 500
Asn Cys Thr Gly Val Trp Ala Gly Ala Leu Gln Arg Asp Pro Leu Leu
115 120 125
cag cca ggc cgg ggg cag atc atg aag gtg gac gcc cct tgg atg aag 548
Gln Pro Gly Arg Gly Gln Ile Met Lys Val Asp Ala Pro Trp Met Lys
130 135 140 145
cacttc att ctc acc cat gac cca gag aga ggc atc tac aat tcc ccg 596
His Phe Ile Leu Thr His Asp Pro Glu Arg Gly Ile Tyr Asn Ser Pro
150 155 160
tac atc atc cca ggg acc cag aca gtt act ctt gga ggc atc ttc cag 644
Tyr Ile Ile Pro Gly Thr Gln Thr Val Thr Leu Gly Gly Ile Phe Gln
165 170 175
ttg gga aac tgg agt gaa cta aac aat atc cag gac cac aac acc att 692
Leu Gly Asn Trp Ser Glu Leu Asn Asn Ile Gln Asp His Asn Thr Ile
180 185 190
tgg gaa ggc tgc tgc aga ctg gag ccc aca ctg aag aat gca aga att 740
Trp Glu Gly Cys Cys Arg Leu Glu Pro Thr Leu Lys Asn Ala Arg Ile
195 200 205
att ggt gaa cga act ggc ttc cgg cca gta cgc ccc cag att cgg cta 788
Ile Gly Glu Arg Thr Gly Phe Arg Pro Val Arg Pro Gln Ile Arg Leu
210 215 220 225
gaa aga gaa cag ctt cgc act gga cct tca aac aca gag gtc atc cac 836
Glu Arg Glu Gln Leu Arg Thr Gly Pro Ser Asn Thr Glu Val Ile His
230 235 240
aac tat ggc cat gga ggc tac ggg ctc acc atc cac tgg gga tgt gcc 884
Asn Tyr Gly His Gly Gly Tyr Gly Leu Thr Ile His Trp Gly Cys Ala
245 250 255
ctg gag gca gcc aag ctc ttt ggg aga atc ctg gaa gaa aag aaa ttg 932
Leu Glu Ala Ala Lys Leu Phe Gly Arg Ile Leu Glu Glu Lys Lys Leu
260 265 270
tcc aga atg cca cca tcc cac ctc tga agactccagt gactgctgcc 979
Ser Arg Met Pro Pro Ser His Leu *
275 280
tccccccaca agaactccct tctcccctca gccaatgaat caatgtgctc cttcataagc 1039
cattgcttct ccctcacttc tttcctcaaa gaagcatgag gtgagagaaa gccacaaagt 1099
cagtgcctgg agaagggttc agcccaacat ggggcccctc tcatcactga aatccctcta 1159
ccttctctgg gtctggcatt ataaagaaca gctgaggctg tcattccatg agtcttcaga 1219
agaaaggaca gctcagaaaa tcaaagaggc caactgccca gagccacaga aaatggagga 1279
taattgaggc taagtaacct gattacaagt tgtactaaca tattaaaggt tctgaaaagt 1339
cctgca 1345
<210>7
<211>347
<212>PRT
<213>智人(Homo sapiens)
<400>7
Met Arg Val Val Val Ile Gly Ala Gly Val Ile Gly Leu Ser Thr Ala
1 5 10 15
Leu Cys Ile His Glu Arg Tyr His Ser Val Leu Gln Pro Leu Asp Ile
20 25 30
Lys Val Tyr Ala Asp Arg Phe Thr Pro Leu Thr Thr Thr Asp Val Ala
35 40 45
Ala Gly Leu Trp Gln Pro Tyr Leu Ser Asp Pro Asn Asn Pro Gln Glu
50 55 60
Ala Asp Trp Ser Gln Gln Thr Phe Asp Tyr Leu Leu Ser His Val His
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Ser Pro Asn Ala Glu Asn Leu Gly Leu Phe Leu Ile Ser Gly Tyr Asn
85 90 95
Leu Phe His Glu Ala Ile Pro Asp Pro Ser Trp Lys Asp Thr Val Leu
100 105 110
Gly Phe Arg Lys Leu Thr Pro Arg Glu Leu Asp Met Phe Pro Asp Tyr
115 120 125
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130 135 140
Leu Gln Trp Leu Thr Glu Arg Leu Thr Glu Arg Gly Val Lys Phe Phe
145 150 155 160
Gln Arg Lys Val Glu Ser Phe Glu Glu Val Ala Arg Glu Gly Ala Asp
165 170 175
Val Ile Val Asn Cys Thr Gly Val Trp Ala Gly Ala Leu Gln Arg Asp
180 185 190
Pro Leu Leu Gln Pro Gly Arg Gly Gln Ile Met Lys Val Asp Ala Pro
195 200 205
Trp Met Lys His Phe Ile Leu Thr His Asp Pro Glu Arg Gly Ile Tyr
210 215 220
Asn Ser Pro Tyr Ile Ile Pro Gly Thr Gln Thr Val Thr Leu Gly Gly
225 230 235 240
Ile Phe Gln Leu Gly Asn Trp Ser Glu Leu Asn Asn Ile Gln Asp His
245 250 255
Asn Thr Ile Trp Glu Gly Cys Cys Arg Leu Glu Pro Thr Leu Lys Asn
260 265 270
Ala Arg Ile Ile Gly Glu Arg Thr Gly Phe Arg Pro Val Arg Pro Gln
275 280 285
Ile Arg Leu Glu Arg Glu Gln Leu Arg Thr Gly Pro Ser Asn Thr Glu
290 295 300
Val Ile His Asn Tyr Gly His Gly Gly Tyr Gly Leu Thr Ile His Trp
305 310 315 320
Gly Cys Ala Leu Glu Ala Ala Lys Leu Phe Gly Arg Ile Leu Glu Glu
325 330 335
Lys Lys Leu Ser Arg Met Pro Pro Ser His Leu
340 345
<210>8
<211>220
<212>PRT
<213>智人(Homo sapiens)
<400>8
Met Arg Val Val Val Ile Gly Ala Gly Val Ile Gly Leu Ser Thr Ala
1 5 10 15
Leu Cys Ile His Glu Arg Tyr His Ser Val Leu Gln Pro Leu Asp Ile
20 25 30
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35 40 45
Ala Gly Leu Trp Gln Pro Tyr Leu Ser Asp Pro Asn Asn Pro Gln Glu
50 55 60
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100 105 110
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115 120 125
Gly Tyr Gly Trp Phe His Thr Ser Leu Ile Leu Glu Gly Lys Asn Tyr
130 135 140
Leu Gln Trp Leu Thr Glu Arg Leu Thr Glu Arg Gly Val Lys Phe Phe
145 150 155 160
Gln Arg Lys Val Glu Ser Phe Glu Glu Val Ala Arg Glu Gly Ala Asp
165 170 175
Val Ile Val Asn Cys Thr Gly Val Trp Ala Gly Ala Leu Gln Arg Asp
180 185 190
Pro Leu Leu Gln Pro Gly Arg Gly Gln Ile Met Lys Asp Pro Asp Ser
195 200 205
Tyr Ser Trp Arg His Leu Pro Val Gly Lys Leu Glu
210 215 220
<210>9
<211>78
<212>PRT
<213>智人(Homo sapiens)
<400>9
Met Arg Val Val Val Ile Gly Ala Gly Val Ile Gly Leu Ser Thr Ala
1 5 10 15
Leu Cys Ile His Glu Arg Tyr His Ser Val Leu Gln Pro Leu Asp Ile
20 25 30
Lys Val Tyr Ala Asp Arg Phe Thr Pro Leu Thr Thr Thr Asp Val Ala
35 40 45
Ala Gly Leu Trp Gln Pro Tyr Leu Ser Asp Pro Asn Asn Pro Gln Glu
50 55 60
Ala Thr Leu Pro Gly Arg Thr Gln Phe Trp Asp Phe Gly Ser
65 70 75
<210>10
<211>281
<212>PRT
<213>智人(Homo sapiens)
<400>10
Met Arg Val Val Val Ile Gly Ala Gly Val Ile Gly Leu Ser Thr Ala
1 5 10 15
Leu Cys Ile His Glu Arg Tyr His Ser Val Leu Gln Pro Leu Asp Ile
20 25 30
Lys Val Tyr Ala Asp Arg Phe Thr Pro Leu Thr Thr Thr Asp Val Ala
35 40 45
Ala Gly Leu Trp Gln Pro Tyr Leu Ser Asp Pro Asn Asn Pro Gln Glu
50 55 60
Ala Asp Trp Ser Gln Gln Thr Phe Asp Tyr Leu Leu Ser His Val His
65 70 75 80
Ser Pro Asn Ala Glu Asn Leu Gly Leu Phe Leu Ile Ser Gly Tyr Asn
85 90 95
Leu Phe His Glu Ala Ile Pro Val Ala Arg Glu Gly Ala Asp Val Ile
100 105 110
Val Asn Cys Thr Gly Val Trp Ala Gly Ala Leu Gln Arg Asp Pro Leu
115 120 125
Leu Gln Pro Gly Arg Gly Gln Ile Met Lys Val Asp Ala Pro Trp Met
130 135 140
Lys His Phe Ile Leu Thr His Asp Pro Glu Arg Gly Ile Tyr Asn Ser
145 150 155 160
Pro Tyr Ile Ile Pro Gly Thr Gln Thr Val Thr Leu Gly Gly Ile Phe
165 170 175
Gln Leu Gly Asn Trp Ser Glu Leu Asn Asn Ile Gln Asp His Asn Thr
180 185 190
Ile Trp Glu Gly Cys Cys Arg Leu Glu Pro Thr Leu Lys Asn Ala Arg
195 200 205
Ile Ile Gly Glu Arg Thr Gly Phe Arg Pro Val Arg Pro Gln Ile Arg
210 215 220
Leu Glu Arg Glu Gln Leu Arg Thr Gly Pro Ser Asn Thr Glu Val Ile
225 230 235 240
His Asn Tyr Gly His Gly Gly Tyr Gly Leu Thr Ile His Trp Gly Cys
245 250 255
Ala Leu Glu Ala Ala Lys Leu Phe Gly Arg Ile Leu Glu Glu Lys Lys
260 265 270
Leu Ser Arg Met Pro Pro Ser His Leu
275 280
<210>11
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<212>DNA
<213>智人(Homo sapiens)
<220>
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cgctttgttg tattctttgt tatttatcca ttttgccaaa ttatctgcaa gtagaaatat 60
cgaaataaga agctctttag caatttactt tggatattgg ttttcttttg aaggacagtt 120
attaaaatag cttgtaggat tactcatttt crtttttctt ctttttaaat ataaagcaat 180
gtcatcactt ttttccctgt attatatttc tcctcaataa ttgatatgct acattaaagg 240
aacacaaaat ggtcttaatt atgcaataat gatcaaggca aagagtgttt cctgggaact 300
aatggttgcc tgagaggagg tgatggcttg aggtccagct ggttattaag ccgcaggaaa 360
tgctgcaggc caagatttgt attatttctc tgagatgaaa atgaacccaa aaaaaggcaa 420
aatgggtttt tctccactaa tgggtaaaat gaactc 456
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<212>DNA
<213>智人(Homo sapiens)
<220>
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tttctcttga ctacagcaat gcagatttca attctgccat tgaattccca gacatattcg 60
tcatccccat tttcatcccc caccaccctg ccattttctt cgtgttaact tgttttcctg 120
actcacagaa atcacctttt cctgtataca tttttaggat gtcagacttt attctaatga 180
tttctcctag ttgcccccca aaattgtatt ctacrgtgtg attttaaagc tgaattttca 240
agatgatatt tcatatctat attttcacaa gcttttcttc tatgaatgtt attgtcagct 300
gtcagggtgt gagatggtac ttgatactac attctttcca agctgttgcc tgaatcggtt 360
taagacaaag tcattactag gctgtaaact gttgctctgc aaaattgagc agcacgtatt 420
taaccactca tacttcttag ctctccaaca ctttgagtcr ata 463
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<213>智人(Homo sapiens)
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<220>
<221>allele
<222>723
<223>8-132-179：多态性碱基A或T
<400>13
tcatctctgc ttcacaatgc ygatgattta gctgggagga cccaaa atg ctg gaa 55
Met Leu Glu
1
aag ctg atg ggt gct gat tmt ctc cag ctt ttc aga tcc aga tat aca 103
Lys Leu Met Gly Ala Asp Xaa Leu Gln Leu Phe Arg Ser Arg Tyr Thr
5 10 15
ttg ggt aaa atc tacttc ata ggt ttt caa arg agc att ctt ctg agc 151
Leu Gly Lys Ile Tyr Phe Ile Gly Phe Gln Xaa Ser Ile Leu Leu Ser
20 25 30 35
aaa tct gaa aac tct cta aac tct att gca aag gag aca gaa kaa gga 199
Lys Ser Glu Asn Ser Leu Asn Ser Ile Ala Lys Glu Thr Glu Xaa Gly
40 45 50
aga gag acg gta aca agg aaa gaa rga tgg aag aga agg cat gag gac 247
Arg Glu Thr Val Thr Arg Lys Glu Xaa Trp Lys Arg Arg His Glu Asp
55 60 65
ggc tat ttg gaa atg gca cag agg cat tta cag aga tca tta tgt cct 295
Gly Tyr Leu Glu Met Ala Gln Arg His Leu Gln Arg Ser Leu Cys Pro
70 75 80
tgg gtc tct tac ctt cct cag ccc tat gca gag ctt gaa gaa gta agc 343
Trp Val Ser Tyr Leu Pro Gln Pro Tyr Ala Glu Leu Glu Glu Val Ser
85 90 95
agc cat gtt gga aaa gtc ttc atg gca aga aac tat gag ttc ctt gmc 391
Ser His Val Gly Lys Val Phe Met Ala Arg Asn Tyr Glu Phe Leu Xaa
100 105 110 115
tat gag gcc tct aar gac cgc agg cag cct cta gaa cga atg tgg acc 439
Tyr Glu Ala Ser Lys Asp Arg Arg Gln Pro Leu Glu Arg Met Trp Thr
120 125 130
tgc aac tac aac cag caa aaa gac cag tca tgc aac cac aag gaa ata 487
Cys Asn Tyr Asn Gln Gln Lys Asp Gln Ser Cys Asn His Lys Glu Ile
135 140 145
act tct acc aaa gct gaa tga gtttggaagc agattcttcc cagccaatcc 538
Thr Ser Thr Lys Ala Glu *
150
ttctgatgac aatgtagtct ggccaacatc ttcactggam tctgacggac tctgtgtctg 598
ggacccagct gataacacgt ggtgatggga ttgtatttgc aaytctctgg tcagtaagtg 658
ataaaatgcc atttctatgc acccacctgg cctgtgtgac tgggagaaty tctcttttta 718
ttaawtgtgc ttcaagtttt aaca 742
<210>14
<211>153
<212>PRT
<213>智人(Homo sapiens)
<400>14
Met Leu Glu Lys Leu Met Gly Ala Asp Xaa Leu Gln Leu Phe Arg Ser
1 5 10 15
Arg Tyr Thr Leu Gly Lys Ile Tyr Phe Ile Gly Phe Gln Xaa Ser Ile
20 25 30
Leu Leu Ser Lys Ser Glu Asn Ser Leu Asn Ser Ile Ala Lys Glu Thr
35 40 45
Glu Xaa Gly Arg Glu Thr Val Thr Arg Lys Glu Xaa Trp Lys Arg Arg
50 55 60
His Glu Asp Gly Tyr Leu Glu Met Ala Gln Arg His Leu Gln Arg Ser
65 70 75 80
Leu Cys Pro Trp Val Ser Tyr Leu Pro Gln Pro Tyr Ala Glu Leu Glu
85 90 95
Glu Val Ser Ser His Val Gly Lys Val Phe Met Ala Arg Asn Tyr Glu
100 105 110
Phe Leu Xaa Tyr Glu Ala Ser Lys Asp Arg Arg Gln Pro Leu Glu Arg
115 120 125
Met Trp Thr Cys Asn Tyr Asn Gln Gln Lys Asp Gln Ser Cys Asn His
130 135 140
Lys Glu Ile Thr Ser Thr Lys Ala Glu
145 150
<210>15
<211>476
<212>DNA
<213>智人(Homo sapiens)
<400>15
cat gag gac ggc tat ttg gaa atg gca cag agg cat tta cag aga tca 48
His Glu Asp Gly Tyr Leu Glu Met Ala Gln Arg His Leu Gln Arg Ser
1 5 10 15
tta tgt cct tgg gtc tct tac ctt cct cag ccc tat gca gag ctt gaa 96
Leu Cys Pro Trp Val Ser Tyr Leu Pro Gln Pro Tyr Ala Glu Leu Glu
20 25 30
gaa gta agc agc cat gtt gga aaa gtc ttc atg gca aga aac tat gag 144
Glu Val Ser Ser His Val Gly Lys Val Phe Met Ala Arg Asn Tyr Glu
35 40 45
ttc ctt gcc tat gag gcc tct aag gac cgc agg cag cct cta gaa cga 192
Phe Leu Ala Tyr Glu Ala Ser Lys Asp Arg Arg Gln Pro Leu Glu Arg
50 55 60
atg tgg acc tgc aac tac aac cag caa aaa gac cag tca tgc aac cac 240
Met Trp Thr Cys Asn Tyr Asn Gln Gln Lys Asp Gln Ser Cys Asn His
65 70 75 80
aag gaa ata act tct acc aaa gct gaa tga gtttggaagc agattcttcc 290
Lys Glu Ile Thr Ser Thr Lys Ala Glu *
85 90
cagccaatcc ttctgatgac aatgtagtct ggccaacatc ttcactggac tctgacggac 350
tctgtgtctg ggacccagct gataacacgt ggtgatggga ttgtatttgc aactctctgg 410
tcagtaagtg ataaaatgcc atttctatgc acccacctgg cctgtgtgac tgggagaatc 470
tctctt 476
<210>16
<211>89
<212>PRT
<213>智人(Homo sapiens)
<400>16
His Glu Asp Gly Tyr Leu Glu Met Ala Gln Arg His Leu Gln Arg Ser
1 5 10 15
Leu Cys Pro Trp Val Ser Tyr Leu Pro Gln Pro Tyr Ala Glu Leu Glu
20 25 30
Glu Val Ser Ser His Val Gly Lys Val Phe Met Ala Arg Asn Tyr Glu
35 40 45
Phe Leu Ala Tyr Glu Ala Ser Lys Asp Arg Arg Gln Pro Leu Glu Arg
50 55 60
Met Trp Thr Cys Asn Tyr Asn Gln Gln Lys Asp Gln Ser Cys Asn His
65 70 75 80
Lys Glu Ile Thr Ser Thr Lys Ala Glu
85
<210>17
<211>1633
<212>DNA
<213>智人(Homo sapiens)
<400>17
ttggggtcca ttgcaacccg aggcgagact agagttccca agcgagaagg gaagaggcag 60
tgggtgcacg tggaaggcgg acagagggct ggaaacaaga cgctccagaa tcaggagctt 120
cccctcagga aatagcatcc tgtgtccccg cactgcagtt gtctggtctc tccagcagtt 180
tggtacttcc ggctgctgca atg cgt gtg gtg gtg att gga gca gga gtc atc 233
Met Arg Val Val Val Ile Gly Ala Gly Val Ile
1 5 10
ggg ctg tcc acc gcc ctc tgc atc cat gag cgc tac cac tca gtc ctg 281
Gly Leu Ser Thr Ala Leu Cys Ile His Glu Arg Tyr His Ser Val Leu
15 20 25
cag cca ctg cac ata aag gtc tac gcg gac cgc ttc acc cca ctc acc 329
Gln Pro Leu His Ile Lys Val Tyr Ala Asp Arg Phe Thr Pro Leu Thr
30 35 40
acc acc gac gtg gct gcc ggc ctc tgg cag ccc tac ctt tct gac ccc 377
Thr Thr Asp Val Ala Ala Gly Leu Trp Gln Pro Tyr Leu Ser Asp Pro
45 50 55
aac aac cca cag gag gcg gac tgg agc caa cag acc ttt gac tat ctc 425
Asn Asn Pro Gln Glu Ala Asp Trp Ser Gln Gln Thr Phe Asp Tyr Leu
60 65 70 75
ctg agc cat gtc cat tct ccc aac gct gaa aac ctg ggc ctg ttc cta 473
Leu Ser His Val His Ser Pro Asn Ala Glu Asn Leu Gly Leu Phe Leu
80 85 90
atc tcg ggc tac aac ctc ttc cat gaa gcc att ccg gac cct tcc tgg 521
Ile Ser Gly Tyr Asn Leu Phe His Glu Ala Ile Pro Asp Pro Ser Trp
95 100 105
aag gac aca gtt ctg gga ttt cgg aag ctg acc ccc aga gag ctg gat 569
Lys Asp Thr Val Leu Gly Phe Arg Lys Leu Thr Pro Arg Glu Leu Asp
110 115 120
atg ttc cca gat tac ggc tat ggc tgg ttc cac aca agc cta att ctg 617
Met Phe Pro Asp Tyr Gly Tyr Gly Trp Phe His Thr Ser Leu Ile Leu
125 130 135
gag gga aag aac tat cta cag tgg ctg act gaa agg tta act gag agg 665
Glu Gly Lys Asn Tyr Leu Gln Trp Leu Thr Glu Arg Leu Thr Glu Arg
140 145 150 155
gga gtg aag ttc ttc cag cgg aaa gtg gag tct ttt gag gag gtg gca 713
Gly Val Lys Phe Phe Gln Arg Lys Val Glu Ser Phe Glu Glu Val Ala
160 165 170
aga gaa ggc gca gac gtg att gtc aac tgc act ggg gta tgg gct ggg 761
Arg Glu Gly Ala Asp Val Ile Val Asn Cys Thr Gly Val Trp Ala Gly
175 180 185
gcg cta caa cga gac ccc ctg ctg cag cca ggc cgg ggg cag atc atg 809
Ala Leu Gln Arg Asp Pro Leu Leu Gln Pro Gly Arg Gly Gln Ile Met
190 195 200
aag gtg gac gcc cct tgg atg aag cac ttc att ctc acc cat gac cca 857
Lys Val Asp Ala Pro Trp Met Lys His Phe Ile Leu Thr His Asp Pro
205 210 215
gag aga ggc atc tac aat tcc ccg tac atc atc cca ggg acc cag aca 905
Glu Arg Gly Ile Tyr Asn Ser Pro Tyr Ile Ile Pro Gly Thr Gln Thr
220 225 230 235
gtt act ctt gga ggc atc ttc cag ttg gga aac tgg agt gaa cta aac 953
Val Thr Leu Gly Gly Ile Phe Gln Leu Gly Asn Trp Ser Glu Leu Asn
240 245 250
aat atc cag gac cac aac acc att tgg gaa ggc tgc tgc aga ctg gag 1001
Asn Ile Gln Asp His Asn Thr Ile Trp Glu Gly Cys Cys Arg Leu Glu
255 260 265
ccc aca ctg aag aat gca aga att att ggt gaa gca act ggc ttc cgg 1049
Pro Thr Leu Lys Asn Ala Arg Ile Ile Gly Glu Ala Thr Gly Phe Arg
270 275 280
cca gta cgc ccc cag att cgg cta gaa aga gaa cag ctt cgc act gga 1097
Pro Val Arg Pro Gln Ile Arg Leu Glu Arg Glu Gln Leu Arg Thr Gly
285 290 295
cct tca aac aca gag gtc atc cac aac tat ggc cat gga ggc tac ggg 1145
Pro Ser Asn Thr Glu Val Ile His Asn Tyr Gly His Gly Gly Tyr Gly
300 305 310 315
ctc acc atc cac tgg gga tgt gcc ctg gag gca gcc aag ctc ttt ggg 1193
Leu Thr Ile His Trp Gly Cys Ala Leu Glu Ala Ala Lys Leu Phe Gly
320 325 330
aga atc ctg gaa gaa aag aaa ttg tcc aga atg cca cca tcc cac ctc 1241
Arg Ile Leu Glu Glu Lys Lys Leu Ser Arg Met Pro Pro Ser His Leu
335 340 345
tga agactccagt gactgctgcc tccccccaca agaactccct tctcccctca 1294
*
gccaatgaat caatgtgctc cttcataagc cattgcttct ccctcacttc tttcctcaaa 1354
gaagcatgag gtgagagaaa gccacraagt cagtgcctgg agaagggttc agcccaacat 1414
ggggcccctc tcatcactga aatccctcta ccttctctgg gtctggcatt ataaagaaca 1474
gctgaggctg tcattccatg agtcttcaga agaaaggaca gctcagaaag tcaaagaggc 1534
caactgccca gagccacaga aaatggagga taattgaggc taagtaacct gattacaagt 1594
tgtactaaca tattaaaggt tctgaaaagt cctgcaaaa 1633
<210>18
<21>347
<212>PRT
<213>智人(Homo sapiens)
<400>18
Met Arg Val Val Val Ile Gly Ala Gly Val Ile Gly Leu Ser Thr Ala
1 5 10 15
Leu Cys Ile His Glu Arg Tyr His Ser Val Leu Gln Pro Leu Asp Ile
20 25 30
Lys Val Tyr Ala Asp Arg Phe Thr Pro Leu Thr Thr Thr Asp Val Ala
35 40 45
Ala Gly Leu Trp Gln Pro Tyr Leu Ser Asp Pro Asn Asn Pro Gln Glu
50 55 60
Ala Asp Trp Ser Gln Gln Thr Phe Asp Tyr Leu Leu Ser His Val His
65 70 75 80
Ser Pro Asn Ala Glu Asn Leu Gly Leu Phe Leu Ile Ser Gly Tyr Asn
85 90 95
Leu Phe His Glu Ala Ile Pro Asp Pro Ser Trp Lys Asp Thr Val Leu
100 105 110
Gly Phe Arg Lys Leu Thr Pro Arg Glu Leu Asp Met Phe Pro Asp Tyr
115 120 125
Gly Tyr Gly Trp Phe His Thr Ser Leu Ile Leu Glu Gly Lys Asn Tyr
130 135 140
Leu Gln Trp Leu Thr Glu Arg Leu Thr Glu Arg Gly Val Lys Phe Phe
145 150 155 160
Gln Arg Lys Val Glu Ser Phe Glu Glu Val Ala Arg Glu Gly Ala Asp
165 170 175
Val Ile Val Asn Cys Thr Gly Val Trp Ala Gly Ala Leu Gln Arg Asp
180 185 190
Pro Leu Leu Gln Pro Gly Arg Gly Gln Ile Met Lys Val Asp Ala Pro
195 200 205
Trp Met Lys His Phe Ile Leu Thr His Asp Pro Glu Arg Gly Ile Tyr
210 215 220
Asn Ser Pro Tyr Ile Ile Pro Gly Thr Gln Thr Val Thr Leu Gly Gly
225 230 235 240
Ile Phe Gln Leu Gly Asn Trp Ser Glu Leu Asn Asn Ile Gln Asp His
245 250 255
Asn Thr Ile Trp Glu Gly Cys Cys Arg Leu Glu Pro Thr Leu Lys Asn
260 265 270
Ala Arg Ile Ile Gly Glu Ala Thr Gly Phe Arg Pro Val Arg Pro Gln
275 280 285
Ile Arg Leu Glu Arg Glu Gln Leu Arg Thr Gly Pro Ser Asn Thr Glu
290 295 300
Val Ile His Asn Tyr Gly His Gly Gly Tyr Gly Leu Thr Ile His Trp
305 310 315 320
Gly Cys Ala Leu Glu Ala Ala Lys Leu Phe Gly Arg Ile Leu Glu Glu
325 330 335
Lys Lys Leu Ser Arg Met Pro Pro Ser His Leu
340 345
<210>19
<211>1200
<212>DNA
<213>智人(Homo sapiens)
<400>19
atg gac aca gca cgg att gca gtt gtc ggg gca ggt gtg gtg ggg ctc 48
Met Asp Thr Ala Arg Ile Ala Val Val Gly Ala Gly Val Val Gly Leu
1 5 10 15
tcc acg gct gtg tgc atc tcc aaa ctg gtg ccc cga tgc tcc gtt acc 96
Ser Thr Ala Val Cys Ile Ser Lys Leu Val Pro Arg Cys Ser Val Thr
20 25 30
atc att tca gac aag ttt act cca gat acc acc agt gat gtg gca gcc 144
Ile Ile Ser Asp Lys Phe Thr Pro Asp Thr Thr Ser Asp Val Ala Ala
35 40 45
gga atg ctt att cct cac act tat cca gat aca ccc att cac acg cag 192
Gly Met Leu Ile Pro His Thr Tyr Pro Asp Thr Pro Ile His Thr Gln
50 55 60
aag cag tgg ttc aga gaa acc ttt aat cac ctc ttt gca att gcc aat 240
Lys Gln Trp Phe Arg Glu Thr Phe Asn His Leu Phe Ala Ile Ala Asn
65 70 75 80
tct gca gaa gct gga gat gct ggt gtt cat ttg gta tca ggt tgg cag 288
Ser Ala Glu Ala Gly Asp Ala Gly Val His Leu Val Ser Gly Trp Gln
85 90 95
ata ttt cag agc act ccg act gaa gaa gtg cca ttc tgg gct gac gtg 336
Ile Phe Gln Ser Thr Pro Thr Glu Glu Val Pro Phe Trp Ala Asp Val
100 105 110
gtt ctg gga ttt cga aag atg act gag gct gag ctg aag aaa ttc ccc 384
Val Leu Gly Phe Arg Lys Met Thr Glu Ala Glu Leu Lys Lys Phe Pro
115 120 125
cag tat gtg ttt ggt cag gct ttt aca acc ctg aaa tgt gaa tgc cct 432
Gln Tyr Val Phe Gly Gln Ala Phe Thr Thr Leu Lys Cys Glu Cys Pro
130 135 140
gcc tac ctc ccg tgg ttg gag aaa agg ata aag gga agt gga ggc tgg 480
Ala Tyr Leu Pro Trp Leu Glu Lys Arg Ile Lys Gly Ser Gly Gly Trp
145 150 155 160
aca ctc act cgg cga ata gaa gac ctg tgg gaa ctt cat ccg tcc ttt 528
Thr Leu Thr Arg Arg Ile Glu Asp Leu Trp Glu Leu His Pro Ser Phe
165 170 175
gac atc gtg gtc aac tgt tca ggc ctt gga agc aga cag ctt gca gga 576
Asp Ile Val Val Asn Cys Ser Gly Leu Gly Ser Arg Gln Leu Ala Gly
180 185 190
gac tca aag att ttc cct gta agg ggc caa gtc ctc caa gtt cag gct 624
Asp Ser Lys Ile Phe Pro Val Arg Gly Gln Val Leu Gln Val Gln Ala
195 200 205
ccc tgg gtg gag cat ttt atc cga gat ggc agt ggg ctg aca tat att 672
Pro Trp Val Glu His Phe Ile Arg Asp Gly Ser Gly Leu Thr Tyr Ile
210 215 220
tat cct ggt aca tcc cat gta acc cta ggt gga act agg caa aaa ggg 720
Tyr Pro Gly Thr Ser His Val Thr Leu Gly Gly Thr Arg Gln Lys Gly
225 230 235 240
gac tgg aat ctg tcc ccg gat gca gaa aat agc aga gag att ctt tcc 768
Asp Trp Asn Leu Ser Pro Asp Ala Glu Asn Ser Arg Glu Ile Leu Ser
245 250 255
cga tgc tgt gct ctg gag ccc tcc ctc cac gga gcc tgc aac atc agg 816
Arg Cys Cys Ala Leu Glu Pro Ser Leu His Gly Ala Cys Asn Ile Arg
260 265 270
gag aag gtg ggc ttg agg ccc tac agg cca ggc gtg cga ctg cag aca 864
Glu Lys Val Gly Leu Arg Pro Tyr Arg Pro Gly Val Arg Leu Gln Thr
275 280 285
gag ctc ctt gcg cga gat gga cag agg ctg cct gta gtc cac cac tat 912
Glu Leu Leu Ala Arg Asp Gly Gln Arg Leu Pro Val Val His His Tyr
290 295 300
ggc cat ggg agt ggg ggc atc tca gtg cac tgg ggc act gct ctg gag 960
Gly His Gly Ser Gly Gly Ile Ser Val His Trp Gly Thr Ala Leu Glu
305 310 315 320
gcc gcc agg ctg gtg agc gag tgt gtc cat gcc ctc agg acc ccc att 1008
Ala Ala Arg Leu Val Ser Glu Cys Val His Ala Leu Arg Thr Pro Ile
325 330 335
ccc aag tca aac ctg tag atgacataaa atgacagcaa agagactgag 1056
Pro Lys Ser Asn Leu *
340
agactgttga tcaaagcaca gaacaggttc aaataacttt tccactgcat gaaagtttaa 1116
ttagacattt ctttgttttc aacattagaa gtggtgtaac atgtaagctg agcacggtag 1176
catgcctata gtcccagcta cttg 1200
<210>20
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<221>misc feature
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Met Asp Thr Ala Arg Ile Ala Val Val Gly Ala Gly Val Val Gly Leu
1 5 10 15
tcc acg gct gtg tgc atc tcc aaa ctg gtg ccc cga tgc tcc gtt acc 96
Ser Thr Ala Val Cys Ile Ser Lys Leu Val Pro Arg Cys Ser Val Thr
20 25 30
atc att tca gac aag ttt act cca gat acc acc agt gat gtg gca gcc 144
Ile Ile Ser Asp Lys Phe Thr Pro Asp Thr Thr Ser Asp Val Ala Ala
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gga atg ctt att cct cac act tat cca gat aca ccc att cac acg cag 192
Gly Met Leu Ile Pro His Thr Tyr Pro Asp Thr Pro Ile His Thr Gln
50 55 60
aag cag tgg ttc aga gaa acc ttt aat cac ctc ttt gca att gcc aat 240
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65 70 75 80
tct gca gaa gct gga gat gct ggt gtt cat ttg gta tca ggg ata aag 288
Ser Ala Glu Ala Gly Asp Ala Gly Val His Leu Val Ser Gly Ile Lys
85 90 95
gga agt gga ggc tgg aca ctc act cgg cga ata gaa gac ctg tgg gaa 336
Gly Ser Gly Gly Trp Thr Leu Thr Arg Arg Ile Glu Asp Leu Trp Glu
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aga cag ctt gca gga gac tca aag att ttc cct gta agg ggc caa gtc 432
Arg Gln Leu Ala Gly Asp Ser Lys Ile Phe Pro Val Arg Gly Gln Val
130 135 140
ctc caa gtt cag gct ccc tgg gtg gag cat ttt atc cga gat ggc agt 480
Leu Gln Val Gln Ala Pro Trp Val Glu His Phe Ile Arg Asp Gly Ser
145 150 155 160
ggg ctg aca tat att tat cct ggt aca tcc cat gta acc cta ggt gga 528
Gly Leu Thr Tyr Ile Tyr Pro Gly Thr Ser His Val Thr Leu Gly Gly
165 170 175
act agg caa aaa ggg gac tgg aat ctg tcc ccg gat gca gaa aat agc 576
Thr Arg Gln Lys Gly Asp Trp Asn Leu Ser Pro Asp Ala Glu Asn Ser
180 185 190
aga gag att ctt tcc cga tgc tgt gct ctg gag ccc tcc ctc cac gga 624
Arg Glu Ile Leu Ser Arg Cys Cys Ala Leu Glu Pro Ser Leu His Gly
195 200 205
gcc tgc aac atc agg gag aag gtg ggc ttg agg ccc tac agg cca ggc 672
Ala Cys Asn Ile Arg Glu Lys Val Gly Leu Arg Pro Tyr Arg Pro Gly
210 215 220
gtg cga ctg cag aca gag ctc ctt gcg cga gat gga cag agg ctg cct 720
Val Arg Leu Gln Thr Glu Leu Leu Ala Arg Asp Gly Gln Arg Leu Pro
225 230 235 240
gta gtc cac cac tat ggc cat ggg agt ggg ggc atc tca gtg cac tgg 768
Val Val His His Tyr Gly His Gly Ser Gly Gly Ile Ser Val His Trp
245 250 255
ggc act gct ctg gag gcc gcc agg ctg gtg agc gag tgt gtc cat gcc 816
Gly Thr Ala Leu Glu Ala Ala Arg Leu Val Ser Glu Cys Val His Ala
260 265 270
ctc agg acc ccc att ccc aag tca aac ctg tag atgacataaa atgacagcaa 869
Leu Arg Thr Pro Ile Pro Lys Ser Asn Leu *
275 280
agagactgag agactgttga tcaaagcaca gaacaggttc aaataacttt tccactgcat 929
gaaagtttaa ttagacattt ctttgttttc aacattagaa gtggtgtaac atgtaagctg 989
agcacggtag catgcctata gtcccagcta cttgatggac acagcacgga 1041
ttgcagttgt cggggcaggt gtggtggggc tctccacggc tgtgtgcatc tccaaactgg 1101
tgccccgatg ctccgttacc atcatttcag acaagtttac tccagatacc accagtgatg 1161
tggcagccgg aatgcttatt cctcacactt atccagatac acccattcac acgcagaagc 1221
agtggttcag agaaaccttt aatcacctct ttgcaattgc caattctgca gaagctggag 1281
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ttggaagcag acagcttgca ggagactcaa agattttccc tgtaaggggc caagtcctcc 1461
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275 280 285
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130 135 140
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180 185 190
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<213>人工序列
<220>
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<220>
<221>allele
<222>24
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<400>24
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<213>人工序列
<220>
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<220>
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<222>24
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<220>
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<222>24
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gatggctctg gcattttcag ggarcagtca tgtctgatct caagttc 47
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