技术领域
[0001] 本
申请涉及一种泰拉霉素中间体盐的制备方法及应用，属于含有直接连载
糖化物基团的八元或更多元的杂环基的糖类及其衍生化合物技术领域。
背景技术
[0002] 泰拉霉素(Tulathromycin)，又称泰拉菌素、土拉霉素、托拉霉素，是由美国辉瑞公司(Pfizer)开发的动物专用半合成的大环内酯类抗生素，商品名为瑞可新(Draxxin)，2004年该药在美国和欧盟上市，2008年我国农业部批准泰拉霉素在动物生产中使用。泰拉霉素的分子式为C41H79N3O12，相对分子
质量为806.08，13元氮杂内酯环和15元氮杂内酯环两种同分异构体以1:9的比例组成的混合物，结构式如式(1)所示，且两者之间可以相互转化；其结构特点为具有3个
碱性
氨基基团，在溶液中呈强负电性，pKa值分别为8.6、9.6和9.9，这有利于穿透革兰氏阴性菌的外膜，当氨基未
离子化时，呈亲脂性，代谢稳定。
[0003]
[0004] 泰拉霉素主要用于防治由胸膜
肺炎放线杆菌、支原体、巴氏杆菌、副嗜血杆菌、支气管败血性博德特菌等引起的猪、
牛呼吸系统疾病。泰拉霉素具有药物吸收速度快、药效持久、
生物利用度高等优点。有关泰拉霉素的研究进展及其应用可以参考以下两篇文献：(1)张刚，郭丽清，徐金雷，梁景乐，吴家鑫，《泰拉霉素的研究进展》，北京联合大学学报，2017，31(2)，108，48-53；(2)龚标，卢春光，陈冈，王迪，《大环内酯类新兽药泰拉霉素在畜牧生产上的应用》，上海畜牧兽医通讯，2015，3，62-63。
[0005] 泰拉霉素是红霉素衍生物，经
发酵、半合成而得到，产品结构复杂，含有多个
手性中心，目前市场价格昂贵，有关泰拉霉素的合成方法
专利报导非常多，工业生产仍旧以辉瑞产品公司的原研技术(CN1167708C，一种制备4"-取代的9-脱
氧-9A-氮杂-9A-高红霉素A衍生物的方法，2004-09-22)为主，合成工艺见式(2)。
[0006]
[0007] 红霉素类发酵产品结构复杂，发酵带来的副产物多，合成泰拉霉素时经常利用其合成中间体所形成的盐来实现分离纯化目的。如：辉瑞产品公司就利用Cbz-二氢高红霉素
酮三氟乙酸盐来分离纯化中间体，利用泰拉霉素
磷酸盐来分离纯化泰拉霉素；浙江海正药业利用Cbz-二氢高红霉素环氧化物三氟乙酸盐来纯化中间体(WO 2017124222 A1，2017-07-27)；博瑞生物医药(苏州)股份有限公司利用Cbz-二氢高红霉素酮
草酸盐分离纯化中间体，以及泰拉霉素草酸盐来分离纯化泰拉霉素(CN107556351A，2018-01-09)。
发明内容
[0008] 有鉴于此，本申请提供一种泰拉霉素中间体盐的制备方法，该方法以二氢高红霉素环氧化物为原料，与含有L-
酒石酸的
有机溶剂合成二氢高红霉素环氧化物L-酒石酸盐，具有纯度高、后处理简单、适于工业化等优点。
[0009] 具体地，本申请是通过以下方案实现的：
[0010] 将二氢高红霉素环氧化物溶于
有机溶剂中，搅拌条件下滴加混有L-酒石酸的有机溶剂，保温反应后，冷却生成白色固体悬浊物，过滤，即得二氢高红霉素环氧化物L-酒石酸盐，即为泰拉霉素中间体盐，过程如式(3)所示。
[0011]
[0012] 上述二氢高红霉素环氧化物采用辉瑞产品公司、CN 1167708C的方案制备，经HPLC检测，二氢高红霉素环氧化物含量为(70～85)％，较佳结果含量为(80±2)％。
[0013] 所述有机溶剂为醇类溶剂(如：甲醇、
乙醇、异丙醇等)、酮类溶剂(如：丙酮、丁酮、环己酮等)、醚类溶剂(如：乙醚、甲基叔丁基醚、四氢呋喃、甲基四氢呋喃等)、酯类溶剂(如：乙酯、乙酸异丙酯等)以及它们的混合溶剂(如：与
水的混合溶剂)，优选丙酮。
[0014] 所述保温反应的
温度为(40～60)℃，优选为(50±2)℃；冷却至(-10～10)℃，优选为(0±2)℃。
[0015] 所述二氢高红霉素环氧化物与L-酒石酸的投料摩尔比为1:(1.0～1.5)，优选1:1.1。
[0016] 同时，
申请人还提供了上述泰拉霉素中间体盐的应用，将二氢高红霉素环氧化物L-酒石酸盐直接与丙胺进行合成反应，二氢高红霉素环氧化物L-酒石酸盐与丙胺的摩尔比为1:(0.5～25)，反应温度为(40～60)℃，即得泰拉霉素，反应方程式如式(4)所示：
[0017]
[0018] 具体来讲，上述过程还包括有粗制过程：二氢高红霉素环氧化物酒石酸盐、无水乙醇、正丙胺于(50～55)℃保温反应(18～24)h；反应结束后减压蒸馏回收乙醇、正丙胺至干；加入二氯甲烷、
碳酸
钾、水溶液，搅拌分液，水层用二氯甲烷萃取得二氯甲烷层，干燥，旋干后加入丙酮，搅拌下升温至40±2℃，溶清后滴加水至溶液开始出现浑浊，搅拌养晶，继续滴加水；滴毕保温后降温至(-10～0)℃冷浴搅拌析晶，抽滤，得泰拉霉素粗品。更优选的，二氢高红霉素环氧化物酒石酸盐、无水乙醇、正丙胺于50℃保温反应24h；反应结束后减压蒸馏回收乙醇、正丙胺至干；加入二氯甲烷、碳酸钾、水溶液，搅拌15min后分液，水层用二氯甲烷萃取两次，合并二氯甲烷层，无水
硫酸钠干燥，旋干后加入丙酮，搅拌下升温至40±2℃，溶清后滴加水至溶液开始出现浑浊，搅拌养晶10min，继续滴加水；滴毕保温1h后降温至0℃冷浴搅拌析晶1h，抽滤，得泰拉霉素粗品。
[0019] 具体来讲，上述过程还包括有粗制和精制过程：(1)粗制过程：二氢高红霉素环氧化物酒石酸盐、无水乙醇、正丙胺于(50～55)℃保温反应(18～24)h；反应结束后减压蒸馏回收乙醇、正丙胺至干；加入二氯甲烷、碳酸钾、水溶液，搅拌分液，水层用二氯甲烷萃取得二氯甲烷层，干燥，旋干后加入丙酮，搅拌下升温至40±2℃，溶清后滴加水至溶液开始出现浑浊，搅拌养晶，继续滴加水；滴毕保温后降温至(-10～0)℃冷浴搅拌析晶，抽滤，得泰拉霉素粗品。更优选的，二氢高红霉素环氧化物酒石酸盐、无水乙醇、正丙胺于50℃保温反应24h；反应结束后减压蒸馏回收乙醇、正丙胺至干；加入二氯甲烷、碳酸钾、水溶液，搅拌
15min后分液，水层用二氯甲烷萃取两次，合并二氯甲烷层，无水硫酸钠干燥，旋干后加入丙酮，搅拌下升温至40±2℃，溶清后滴加水至溶液开始出现浑浊，搅拌养晶10min，继续滴加水；滴毕保温1h后降温至0℃冷浴搅拌析晶1h，抽滤，得泰拉霉素粗品；(2)精制过程为：泰拉霉素粗品加丙酮，搅拌下升温至40±2℃，溶清后滴加水至溶液开始出现浑浊，搅拌养晶
10min，继续滴加水，搅拌下保温1h后0℃冷浴搅拌析晶1h，抽滤，得精制泰拉霉素。
[0020] 本申请利用二氢高红霉素环氧化物与L-酒石酸成盐形成泰拉霉素中间体盐，可将该中间体盐应用于制备泰拉霉素。通过二氢高红霉素环氧化物成盐的精制过程，二氢高红霉素环氧化物的质量大幅提升，HPLC检测含量由80％提高到90％以上，降低了合成泰拉霉素后处理分离纯化的难度，通过普通的重结晶便可以得到纯度高于90％的泰拉霉素粗品。与常规直接用二氢高红霉素环氧化物与丙胺反应合成泰拉霉素相比，本申请后处理操作简单，质量大幅提升，HPLC检测其含量大于90％；该中间体盐与丙胺反应所得泰拉霉素通过重结晶即可得到泰拉霉素粗品，适合工业化生产。
附图说明
[0021] 图1为本申请泰拉霉素中间体盐的衍射图谱。
具体实施方式
[0022]
实施例1：合成Cbz-二氢高红霉素酮三氟乙酸盐
[0023] 二氢高红霉素(2.5kg，3.4mol)投入二氯甲烷(17kg)中，共沸蒸馏除水至水含量≤0.05％，冷却至(0～5)℃，滴加氯
甲酸苄酯(0.64kg，3.74mol)的二氯甲烷(2kg)溶液，滴
加速度使反应体系温度不超过5℃，滴毕，在此温度下搅拌3小时，然后浓缩至15L，得到含Cbz-二氢高红霉素醇的料液。
[0024] 将含Cbz-二氢高红霉素醇的二氯甲烷料液转移至50L玻璃釜中，补加二氯甲烷(5kg)，DMSO(5.86kg，75mol)，然后降温至-70℃，在(-60～-70)℃间滴加三氟乙酸酐(1.57kg，7.48mol)，搅拌30分钟，再投入三乙胺(1.72kg，17mol)，再搅拌30分钟，加入10kg水，逐渐升温至室温后，分层，有机层用水(10kg)洗涤两次，干燥并浓缩有机相至14L，加入三氟乙酸(0.77kg，6.8mol)，然后再加入异丙醇(18.6kg)，然后料液浓缩至浑浊，自然冷却室温析晶，搅拌过夜后抽滤，
滤饼用异丙醇漂洗，50℃烘干，制得到Cbz-二氢高红霉素酮三氟乙酸盐(2.47kg)。
[0025] 实施例2：合成二氢高红霉素环氧化物
[0026] 1000mL四口瓶中加入三甲基溴化锍(17.6g，0.117mol)，氮气保护下加入四氢呋喃(150mL)，搅拌降温至-15℃，加入叔丁醇钾(12.5g，0.111mol)。保持温度(-5～-15)℃下反应3h。
[0027] 取实施例1制备的Cbz-二氢高红霉素酮三氟乙酸盐(36.3g)，加入二氯甲烷(120mL)，滴加碳酸钾(9g，0.065mol)水(120mL)溶液，搅拌15min后分液，水层二氯甲烷(100ml)萃取两次，合并二氯甲烷层，无水硫酸钠干燥，旋干，补加二氯甲烷(250mL)。
[0028] 叶立德
试剂反应毕后降温至-75℃，将Cbz-二氢高红霉素酮的二氯甲烷溶液逐滴加入至叶立德试剂中，控制温度低于-70℃，滴加约1h，滴完保持温度低于-70℃下反应2h，之后加入10％
氯化铵溶液(130mL)淬灭反应，升温至室温，分液，水层加入二氯甲烷(100mL)萃取两次，合并有机层，用饱和食盐水(250mL)洗涤有机层，分液，有机层用无水硫酸钠干燥。过滤，将有机层旋蒸至干。加入丙酮(200mL)，10％钯炭(8g)，甲酸铵(8.32g，0.132mol)搅拌反应4h，过滤，丙酮(50mL)洗涤滤饼。有机层旋干至粉末状固体，加入二氯甲烷(150mL)以及水(150mL)，滴加10％NaOH水溶液调节PH至9～10，水层用二氯甲烷(100mL)萃取两次，合并有机层，有机层用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液旋干，加入丙酮(50mL)，磁
力搅拌下升温至40±2℃，逐滴加入水(150mL)，搅拌1小时后冷却室温下再搅拌1h，析出固体，抽滤，固体烘干，得到二氢高红霉素环氧化物(16.56g)，HPLC检测纯度80.08％。
[0029] 实施例3：二氢高红霉素环氧化物与正丙胺的反应一
[0030] 50ml圆底烧瓶中加入实施例2制备的二氢高红霉素环氧化物(5.6g，HPLC检测纯度80.08％)以及异丙醇(28ml)、正丙胺(10.8g)磁力搅拌下升温至50±2℃，保温30小时，反应液HPLC检测泰拉霉素含量64.37％。
[0031] 实施例4：二氢高红霉素环氧化物与正丙胺的反应二
[0032] 50ml圆底烧瓶中加入实施例2制备的二氢高红霉素环氧化物(5.8g，HPLC检测纯度80.08％)以及1,2-丙二醇(3.0ml)、正丙胺(6.0ml)磁力搅拌下升温至50±2℃，保温20小时，反应液HPLC检测泰拉霉素含量61.94％。
[0033] 实施例5：合成二氢高红霉素环氧化物L-(+)-酒石酸盐
[0034] 在500ml四口烧瓶中加入二氢高红霉素环氧化物(25.06g，HPLC检测纯度84.33％)，加入丙酮(200ml)搅拌下升温至50±2℃，缓慢滴加溶有L-(+)-酒石酸(5.60g，
0.037mol，1.1eq)的丙酮(200ml)溶液。滴加至溶液稍有浑浊时暂停滴加，搅拌养晶10min，滴完后，50±2℃保温反应(2～3)h，转移至0℃冷浴中保温析晶1h。过滤，50℃烘干，制得二氢高红霉素环氧化物酒石酸盐(26.26g，HPLC检测纯度90.34％)。
[0035] 理化性质表征：熔点179.9～186.1℃。
[0036] 粉末衍射显示产品为无定型晶体(见图1所示)。
[0037] 实施例6：二氢高红霉素环氧化物L-(+)-酒石酸盐与正丙胺的反应
[0038] 100ml圆底烧瓶中加入实施例5制备的二氢高红霉素环氧化物酒石酸盐(9.03g，HPLC检测纯度90.34％)、乙醇(37.5ml)、正丙胺(12.96g)，磁力搅拌下升温至(50±2)℃，保温24小时，反应液HPLC检测泰拉霉素含量84.88％。
[0039] 实施例7：合成泰拉霉素粗品
[0040] 在1000ml四口烧瓶中加入二氢高红霉素环氧化物酒石酸盐(90.05g，0.091mol，HPLC检测纯度90.16％)、无水乙醇(375ml)、正丙胺(128.4g，2.24mol)，50℃保温反应24h。反应结束后减压蒸馏回收乙醇、正丙胺至干。加入二氯甲烷(400ml)，滴加碳酸钾(30g，
0.217mol)水(400ml)溶液中，搅拌15min后分液，水层用二氯甲烷(100ml*2)萃取两次，合并二氯甲烷层，无水硫酸钠干燥，旋干后加入丙酮(400ml)，机械搅拌下升温至40±2℃，溶清后滴加600g水至溶液刚出现浑浊，搅拌养晶10min，滴加完剩余水。滴毕保温1小时后0℃冷浴搅拌析晶1h，析出大量固体，抽滤，得泰拉霉素粗品(67.57g，0.078mol，HPLC检测含量
96.51％)，摩尔收率89.39％。
[0041] 实施例8：泰拉霉素精制
[0042] 250ml圆底烧瓶中加入泰拉霉素粗品(10.14g，0.0121mol，HPLC检测纯度96.51％)，丙酮(50ml)，磁力搅拌下升温至(40±2)℃，溶清后滴加水(80ml)至溶液刚出现浑浊，搅拌养晶10min，滴加完剩余水。滴毕搅拌下保温1小时后0℃冷浴搅拌析晶1h，析出大量固体，抽滤，得泰拉霉素(8.68g，0.0105mol，HPLC检测含量98.76％)，收率87.6％。
[0043] 上述各案例中，实施例3和实施例4为常规克拉霉素合成方法，与我们的合成方案相比，本案例的泰拉霉素的纯度(HPLC检测结果，泰拉霉素粗品96.51％，精制98.76％)远远高于实施例3(64.37％)和实施例4(61.94％)，产品纯度高，收率大，后处理简单，更适于工业化。
