可用于治疗和/或护理皮肤、毛发、指甲和/或粘膜的化合物
阅读：60发布：2020-05-11
专利汇可以提供可用于治疗和/或护理皮肤、毛发、指甲和/或粘膜的化合物专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且一种式(I)R1-Wm-Xn-AA1-AA2-AA3-AA4-AA5-AA6-AA7-AA8-AA9-Yp-Zq-R2化合物，其中AA1是Phe；AA2是Trp；AA3选自由Met、Leu和Ile组成的组；AA4选自由Lys、Arg和Gln组成的组；AA5是Arg；AA6是Lys；AA7选自由Arg、Lys和His组成的组；AA8选自由Val、Ile、Leu和Met组成的组；并且AA9是Pro，所述化合物可用于 治疗 和/或护理 皮肤 、毛发、指甲和/或粘膜，具体地用于改善皮肤屏障功能、用于供给皮肤 能量 和用作抗衰老剂。，下面是可用于治疗和/或护理皮肤、毛发、指甲和/或粘膜的化合物专利的具体信息内容。
1.一种式(I)化合物：
R1-Wm-Xn-AA1-AA2-AA3-AA4-AA5-AA6-AA7-AA8-AA9-Yp-Zq-R2 (I)，
其立体异构体和/或其化妆品上或药学上可接受的盐，其中：
AA1是Phe；
AA2是Trp；
AA3选自由Met、Leu和Ile组成的组；
AA4选自由Lys、Arg和Gln组成的组；
AA5是Arg；
AA6是Lys；
AA7选自由Arg、Lys和His组成的组；
AA8选自由Val、Ile、Leu和Met组成的组；并且
AA9是Pro；
W、X、Y和Z各自独立地为氨基酸；
m、n、p和q各自独立地为0或1；
m+n+p+q小于或等于2；
R1选自由以下组成的组：H、衍生自聚乙二醇的聚合物、非环状脂肪族基团、脂环基、杂环基、杂芳基烷基、芳基、芳烷基和R5-CO-，其中R5选自由以下组成的组：H、非环状脂肪族基团、脂环基、芳基、芳烷基、杂环基和杂芳基烷基；
R2选自由以下组成的组：–NR3R4、-OR3、-SR3，其中R3和R4独立地选自由以下组成的组：H、衍生自聚乙二醇的聚合物、非环状脂肪族基团、脂环基、杂环基、杂芳基烷基、芳基和芳烷基；并且
R1和R2不是氨基酸。
2.根据权利要求1所述的化合物、其立体异构体和/或其化妆品上或药学上可接受的盐，其中AA3是Met，并且任选地，AA4选自由Lys和Arg组成的组，或者AA4是Lys，或者AA4是Arg。
3.根据权利要求2所述的化合物、其立体异构体和/或其化妆品上或药学上可接受的盐，其中AA7选自由Lys和Arg组成的组，并且AA8选自由Val、Ile和Leu组成的组。
4.根据权利要求1所述的化合物、其立体异构体和/或其化妆品上或药学上可接受的盐，其中AA3是Leu，并且任选地，AA4选自由Lys和Arg组成的组，或者AA4是Lys，或者AA4是Arg。
5.根据权利要求4所述的化合物、其立体异构体和/或其化妆品上或药学上可接受的盐，其中AA4选自由Lys和Arg组成的组，AA7选自由Lys和Arg组成的组，并且AA8选自由Val和Ile组成的组。
6.根据权利要求1所述的化合物、其立体异构体和/或其化妆品上或药学上可接受的盐，其中AA3是Ile，并且任选地，AA4是Gln。
7.根据权利要求6所述的化合物、其立体异构体和/或其化妆品上或药学上可接受的盐，其中AA7是His，并且AA8是Met。
8.根据权利要求1所述的化合物、其立体异构体和/或其化妆品上或药学上可接受的盐，其中所述化合物具有选自由以下组成的组的式：
R1-Wm-Xn-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-Yp-Zq-R2 (ii)；
R1-Wm-Xn-Phe-Trp-Leu-Arg-Arg-Lys-Lys-Ile-Pro-Yp-Zq-R2 (iii)；
R1-Wm-Xn-Phe-Trp-Ile-Gln-Arg-Lys-His-Met-Pro-Yp-Zq-R2 (iv)；
R1-Wm-Xn-Phe-Trp-Leu-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-Yp-Zq-R2 (v)；
R1-Wm-Xn-Phe-Trp-Met-Arg-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-Yp-Zq-R2 (vi)；
R1-Wm-Xn-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Lys-Val-Pro-Yp-Zq-R2 (vii)；
R1-Wm-Xn-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Ile-Pro-Yp-Zq-R2 (viii)；以及R1-Wm-Xn-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Leu-Pro-Yp-Zq-R2 (ix)
并且其中R1、R2、W、X、Y、Z以及m、n、p和q如对于权利要求1中的式(I)所定义。
9.根据权利要求8所述的化合物，其中所述化合物具有式(ii)。
10.根据权利要求1到9中任一项所述的化合物，其中R1选自由以下组成的组：H、乙酰基、棕榈酰基、月桂酰基或肉豆蔻酰基；并且R2为-NR3R4或-OR3，其中R3和R4独立地选自由H和C1-C16烷基组成的组。
11.根据权利要求10所述的化合物，其中R1选自由H、乙酰基或棕榈酰基组成的组；并且R2为-NR3R4或-OR3，其中R3和R4独立地选自由H和C1-C16烷基组成的组。
12.根据权利要求10或权利要求11所述的化合物，其中R3是H，并且R4选自由H和C1-C16烷基组成的组。
13.根据权利要求10到12中任一项所述的化合物，其中R2为-NR3R4或-OR3，其中R3是H，并且R4为H或C1-C6烷基。
14.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中m+n+p+q为零。
15.根据权利要求1所述的化合物，其中所述化合物选自：
H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH2 (PEP-1)；
Palm-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH2 (PEP-2)；
Ac-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH2 (PEP-3)；
H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-OH (PEP-4)；
Palm-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-OH (PEP-5)；
H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NHC6H13 (PEP-7)；
H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NHC16H33 (PEP-8)；
H-Phe-Trp-Leu-Arg-Arg-Lys-Lys-Ile-Pro-NH2 (PEP-9)；
H-Phe-Trp-Ile-Gln-Arg-Lys-His-Met-Pro-NH2 (PEP-10)；
H-Phe-Trp-Leu-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH2 (PEP-11)；
H-Phe-Trp-Met-Arg-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH2 (PEP-12)；
H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Lys-Val-Pro-NH2 (PEP-13)；
H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Ile-Pro-NH2 (PEP-14)；
以及
H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Leu-Pro-NH2 (PEP-15)。
16.一种根据权利要求1到15中任一项所述的化合物的用途，其用于对皮肤、毛发、指甲和/或粘膜进行化妆品上、非治疗性治疗和/或护理。
17.根据权利要求16所述的用途，其中所述化妆品上、非治疗性治疗和/或护理是对皮肤衰老症状的治疗和/或预防。
18.根据权利要求17所述的用途，其中所述皮肤衰老症状是由于皮肤中的线粒体复合体I活性引起的活性氧物质产生和/或皮肤中的线粒体复合体II活性降低而造成的。
19.根据权利要求16所述的用途，其中所述化妆品上、非治疗性治疗和/或护理是供给皮肤能量。
20.根据权利要求16所述的用途，其中所述化妆品上、非治疗性治疗和/或护理是对皮肤屏障功能的维持和/或改善。
21.根据权利要求16所述的用途，其中所述化妆品上、非治疗性治疗和/或护理是对皮肤水合作用的维持和/或改善。
22.根据权利要求16所述的用途，其中所述化妆品上、非治疗性治疗和/或护理是对皮肤微循环和/或肤色的维持和/或改善。
23.根据权利要求16所述的用途，其中所述化妆品上、非治疗性治疗和/或护理是对皮肤疲劳症状的治疗和/或预防。
24.根据权利要求16所述的用途，其中所述化妆品上、非治疗性治疗和/或护理是对眼袋的治疗和/或预防。
25.根据权利要求16所述的用途，其中所述化妆品上、非治疗性治疗和/或护理是对皮肤光度的维持和/或改善。
26.根据权利要求16到23或16到25中任一项所述的用途，其中所述皮肤是清晨皮肤，或者所述皮肤是昼夜节律已改变的受试者的皮肤。
27.根据权利要求16到24或16到26中任一项所述的用途，其中所述化妆品上、非治疗性治疗和/或护理针对以下情况的皮肤：
(i)处于其昼夜节律中的以下时刻，其中JARID1A蛋白在皮肤中的表达低于每日最大值；CRY2、PER2和/或PER3时钟基因在皮肤中的表达低于每日最大值；皮肤中存在的神经酰胺的量低于每日最大值；和/或并入到皮肤细胞膜中的DHA的量低于每日最大值；或(ii)皮肤的昼夜节律已发生改变，使得JARID1A蛋白在皮肤中的表达低于每日最大值；
CRY2、PER2和/或PER3时钟基因在皮肤中的表达低于每日最大值；皮肤中存在的神经酰胺的量低于每日最大值；和/或并入到皮肤细胞膜中的DHA的量低于每日最大值。
28.一种化妆品组合物，其包括化妆品上有效量的根据权利要求1到15中任一项所述的式(I)化合物、其立体异构体和/或其化妆品上或药学上可接受的盐以及至少一种化妆品上可接受的赋形剂或佐剂。
29.一种对受试者的皮肤、毛发、指甲和/或粘膜进行化妆品上、非治疗性治疗和/或护理的方法，所述方法包括向所述受试者施用化妆品上有效量的根据权利要求1到15中任一项所述的化合物、其立体异构体和/或其化妆品上可接受的盐或包括化妆品上有效量的所述化合物、其立体异构体和/或其化妆品上可接受的盐的化妆品组合物。
可用于治疗和/或护理皮肤、毛发、指甲和/或粘膜的化合物
技术领域
[0001] 本发明涉及可用于治疗和/或护理皮肤、毛发、指甲和/或粘膜的化合物。所述化合物可用于改善皮肤屏障功能、供给皮肤能量并可以用作抗衰老剂。所述化合物可以用于调节皮肤的昼夜节律，并在清晨向皮肤传递日间皮肤特性。
背景技术
[0003] 昼夜节律控制发生在下丘脑前部视交叉上核(SCN)中，并由协调的昼夜节律机制(也称为“时钟机制”)严格控制[1]。这种时钟机制包含一组时钟基因，由于由Bmal1/时钟蛋白形成的转录激活因子复合体，所述组时钟基因的表达模式全天都在波动。这种复合体与时钟基因(PER，CRY)的启动子区域结合，从而触发其在白天期间的表达。白天期间Cry和Per蛋白的逐步累积在夜间还对其自身转录产生负调节作用，从而为昼夜节律提供反馈回路[2]。
[0004] 据报道，大多数外围器官和组织还可以表达昼夜节律振荡以调节与SCN隔离的特定组织功能，从而在白天期间自主控制组织/器官的动态平衡[3]。皮肤是我们身体最外部的屏障，并且其许多基本特性也遵循昼夜节律。实际上，皮肤也有其自己的内部昼夜节律机制以控制其大部分生理功能[4-5]。
[0005] 皮肤的主要功能是在宿主内部与环境之间形成屏障。皮肤必须保护有机体免受化学品、紫外线、机械伤害和病原微生物的侵害。最重要的是，皮肤必须提供有效的防止水和电解质流失的渗透屏障。皮肤由表皮、真皮和皮下组织构成。表皮由4层组成：发生细胞增殖的未分化的基底层、棘层、颗粒层(SG)和角质层的无细胞层。渗透屏障主要位于角质层，但也位于颗粒层。[6]
[0006] 在角质层(SC)中，三个生理参数有助于屏障功能的质量：角质层的厚度、含量和形成角质化包膜的细胞间脂质的组织。神经酰胺形成角质化包膜内的主脂质组分并且是分子的家族，所述分子各自包含附着到鞘氨醇的脂肪酸残基。皮肤中的神经酰胺的量与皮肤的不透水性质有关，并且因此与避免出现皮肤干燥有关。ω-3脂肪酸家族在皮肤功能中也起着关键作用。除此之外，二十二碳六烯酸(DHA)是一种长链多不饱和脂肪酸，其到双层细胞膜中的并入(也称为PC-DHA(与DHA共轭的磷脂酰胆碱)与总磷脂酰胆碱水平(PC)之间的比率，即PC-DHA/PC)有助于维持适当的细胞膜流动性。并入到细胞膜中的DHA的增加改善了皮肤屏障功能[7]。
[0007] 皮肤皮脂分泌在中午左右达到高峰，并且电容(电容是皮肤水合作用的量度)在一天中的早些时候较低。此外，皮肤血液流动或微循环以及皮肤屏障功能表现出昼夜节律和超昼夜节律，在一天中较早时皮肤血液流动较低，所述皮肤血液流动在下午和深夜达到峰值[8-9]。超昼夜节律是在24小时昼夜节律中反复出现的周期或循环。
[0008] 最近，已经示出，昼夜节律的表观遗传控制是昼夜节律的关键特征[10]。JARID1A蛋白是由KDM5A基因编码的特定组蛋白脱甲基酶赖氨酸4，其在时钟基因的启动子(启动子是控制时钟基因表达的DNA区域)处与Bmal1-Clock形成复合体。JARID1A蛋白以Clock-Bmal1依赖性方式增强PER基因的转录。在这方面，已证明JARID1A蛋白的增加导致PER2基因表达活化[11]。
[0010] 面部疲劳的出现与关于眼睛和皮肤外观的提示强相关。睡眠在皮肤的外观和功能中起作用。观察到在经受长期睡眠剥夺的大鼠中，皮肤损伤是第一且最明显的缺陷之一，这证明了睡眠在维持皮肤完整性中的作用。另外，在患有阻塞性睡眠呼吸暂停的患者中发现了内皮功能障碍。睡眠剥夺会导致皮肤苍白、皱纹和眼睛下方黑眼圈。
[0011] 与经过一夜正常睡眠后相比，睡眠剥夺的个体看起来更加疲劳、眼睑更悬垂、眼睛更红、眼睛更肿胀、眼睛下方眼圈更黑、皮肤更苍白、眼睛周围更多皱纹和细纹、嘴角变得更下垂且更悲伤[12]。
[0012] 衰老是一个复杂的生物过程，受内源性(遗传、细胞代谢、代谢过程)和外源性(光照量、电离辐射、环境污染、化学品)因素组合影响。众所周知，由于电子传输链功能导致活性氧物质(ROS)产生，线粒体在衰老过程期间起着重要的作用[13]。
[0013] 直接暴露于环境因素(如阳光)的人类皮肤细胞高度依赖于大量能量，以对抗细胞失调和/或损伤。但是，随着年龄的增长，细胞能量水平衰退。皮肤能量容量的不足与人体皮肤结构的显著变化密切相关，这是导致皱纹形成的一种主要机制。
[0014] 皮肤对能量的要求很高以支持其代谢需求、持续的组织再生和修复，这是正常组织维护所必需的。皮肤还暴露于UV照射和其它产生ROS并对(线粒体)DNA、细胞膜、催化和结构蛋白(例如，胶原蛋白)造成有害变化的外部因素。如果修复机制无法跟上步伐，则皮肤结构可能发生有害变化，从而导致明显的衰老迹象。尽管年龄相关的变化的确切机制尚不完全清楚。线粒体是细胞中能量产生的电池，并且线粒体功能衰退和能量产生可以被认为是衰老的原因和结果。
[0015] 若干数据证明，能量平衡的人体皮肤细胞可以通过代谢方式重新活化，并且因此可以显著保护其免受年龄相关的人体皮肤结构变化的影响，从而增加真皮乳突的密度，所述真皮乳突似乎是观察到的细纹和皱纹深度和外观减少的一个主要因素[14]。
[0016] 最近，已经示出，人类皮肤成纤维细胞中的线粒体复合体II的活性随年龄的增长而降低，从而导致进行性线粒体功能障碍并且因此减少了由较老皮肤细胞产生的能量[15]。此外，已经证明线粒体复合体I的活性的部分抑制延长了寿命[16]。实际上，用不同的线粒体复合体I活性抑制剂(即二甲双胍、鱼藤酮)进行治疗可以减缓衰老过程[17-18]。
[0017] 老年人经常出现皮肤干燥、鳞屑状皮肤。随着年龄的增长，皮肤屏障功能的破坏或丧失部分归因于这种表现。已证明，受损屏障功能的恢复在衰老的皮肤中较慢，从而导致更容易出现干燥。这是一个多因素过程，部分地由于片状体中的脂质水平较低，而表皮上层结构蛋白丝聚蛋白减少。衰老皮肤也表现出增加的经表皮水分流失(TEWL)，从而使角质层更容易在低湿度环境下变得干燥[19]。
[0018] 这就需要有效用于治疗和/或护理皮肤、毛发、指甲和/或粘膜的新型活性剂。具体地，需要有效用于皮肤、毛发、指甲和/或粘膜的非治疗性、化妆品上治疗和/或护理中的新型活性剂，如用于改善皮肤水合作用和/或缓解、预防和/或延缓皮肤衰老或皮肤衰老症状。此外，需要一种在清晨治疗皮肤或治疗已改变昼夜节律的皮肤的新型方法，以改善其美容特性，如水合作用、微循环和屏障功能。本发明试图满足这些需求中的一个或多个需求。
发明内容
[0019] 在第一方面，本发明提供了由式(I)表示的化合物：
[0020] R1-Wm-Xn-AA1-AA2-AA3-AA4-AA5-AA6-AA7-AA8-AA9-Yp-Zq-R2(I)，
[0021] 其立体异构体和/或其化妆品上或药学上可接受的盐，其中：
[0022] AA1是Phe；
[0023] AA2是Trp；
[0024] AA3选自由Met、Leu和Ile组成的组；
[0025] AA4选自由Lys、Arg和Gln组成的组；
[0026] AA5是Arg；
[0027] AA6是Lys；
[0028] AA7选自由Arg、Lys和His组成的组；
[0029] AA8选自由Val、Ile、Leu和Met组成的组；并且
[0030] AA9是Pro；
[0031] W、X、Y和Z各自独立地为氨基酸；
[0032] m、n、p和q各自独立地为0或1；
[0033] m+n+p+q小于或等于2；
[0034] R1选自由以下组成的组：H、衍生自聚乙二醇的聚合物、非环状脂肪族基团、脂环基、杂环基、杂芳基烷基、芳基、芳烷基和R5-CO-，其中R5选自由以下组成的组：H、非环状脂肪族基团、脂环基、芳基、芳烷基、杂环基和杂芳基烷基；
[0035] R2选自由以下组成的组：–NR3R4、-OR3、-SR3，其中R3和R4独立地选自由以下组成的组：H、衍生自聚乙二醇的聚合物、非环状脂肪族基团、脂环基、杂环基、杂芳基烷基、芳基和芳烷基；并且
[0036] R1和R2不是氨基酸。
[0037] 已经发现，本发明的化合物可有效改善皮肤屏障功能并作为抗衰老剂。进一步地，其可以用于改善皮肤水合作用和皮肤血液流动。因此，本发明的化合物可用于保护、治疗和/或护理皮肤、毛发、指甲和/或粘膜。具体地，本发明的化合物可用于对以下情况的皮肤进行非治疗性治疗和/或护理：处于其昼夜节律中的以下时刻，其中JARID1A蛋白的表达低于每日最大值；CRY2、PER2和/或PER3时钟基因的表达低于每日最大值；和/或皮肤中存在的神经酰胺的量低于每日最大值。本发明的化合物可以用于促进皮肤的昼夜节律，从而在昼夜节律的循环中随后传达与皮肤相关的皮肤特性，如水合作用水平、屏障功能和微循环。
[0038] 另一方面，本发明提供了一种组合物，其包括式(I)化合物、其立体异构体和/或其化妆品上或药学上可接受的盐以及至少一种化妆品上或药学上可接受的赋形剂或佐剂。
[0039] 另一方面，本发明提供了一种式(I)化合物、其立体异构体和/或其化妆品上或药学上可接受的盐、或包括式(I)化合物、其立体异构体和/或其化妆品上或药学上可接受的盐的组合物的用途，其用于治疗和/或护理皮肤、毛发、指甲和/或粘膜。
[0040] 一方面，本发明提供了一种式(I)化合物、其立体异构体和/或其化妆品上可接受的盐或包括其的组合物的用途，其用于对皮肤、毛发、指甲和/或粘膜进行化妆品上、非治疗性治疗和/或护理。
[0041] 另一方面，本发明提供了一种治疗和/或护理受试者的皮肤、毛发、指甲和/或粘膜的方法，所述方法包括向所述受试者施用式(I)化合物、其立体异构体和/或其化妆品上或药学上可接受的化合物盐或包括其的组合物。通常，本发明的化合物将局部施用。
[0042] 一方面，本发明提供了一种对受试者的皮肤、毛发、指甲和/或粘膜进行化妆品上、非治疗性治疗和/护理的方法，所述方法包括向所述受试者施用式(I)化合物、其立体异构体和/或其化妆品上可接受的盐或包括其的化妆品组合物。通常，本发明的化合物将局部施用。
具体实施方式
[0043] 定义
[0044] 在本发明的上下文中，“皮肤”应理解为是包括其、从最上层或角质层到最下层或皮下层(包含最上层或角质层以及最下层或皮下层两者)的层。这些层由不同类型的细胞构成，如角质形成细胞、成纤维细胞、黑素细胞、肥大细胞、神经元和/或脂肪细胞等。术语“皮肤”也包括头皮。术语“皮肤”包含哺乳动物的皮肤并且包含人体皮肤。同样，术语“毛发、指甲和粘膜”包含哺乳动物(例如，人类)的毛发、指甲和粘膜。
[0045] 术语“治疗”涵盖治疗方法，包含涉及施用根据本发明的化合物以减轻或消除疾病或病症或减少或消除与所述疾病或病症相关的一种或多种症状的方法。术语“治疗”还涵盖涉及减轻或消除疾病或病症的生理后果的治疗方法。
[0046] 当术语“治疗”和“护理”带有修饰语“化妆品上”和/或“非治疗性”时，这意味着治疗或护理的目的是例如改善或维持皮肤、毛发、指甲和/或粘膜的美学外观。具体地，治疗的目的是改善皮肤、毛发、指甲和/或粘膜的美容特性，如例如但不限于水合作用、弹性、紧致度、光泽、色调或质地的水平，所述特性会影响皮肤、毛发、指甲和/或粘膜的美学外观。在本说明书的上下文中，术语“护理”是指维持皮肤、毛发、指甲和/或粘膜的特性。通过在健康受试者以及在具有敏感性皮肤的受试者以及表现出皮肤、毛发、指甲和/或粘膜的疾病和/或病症(例如但不限于溃疡和皮肤损伤、牛皮癣、皮炎、痤疮或酒渣鼻等)的受试者中进行化妆品上治疗和/或护理来改善或维持所述特性。
[0047] 如本发明中所使用的，术语“预防”是指本发明的化合物预防、延缓或阻碍疾病或病症的出现或发展、或预防、延缓或阻碍皮肤、粘膜和/或毛发的美容特性变化的能力。如本发明中所使用的，术语“预防”可与术语“抑制”互换，也就是说，其是指本发明的化合物抑制疾病或病症的出现或发展、或抑制皮肤、毛发、指甲和/或粘膜的美容特性变化的能力。
[0048] 在本发明的上下文中，术语“衰老”是指皮肤随着年龄的增长(慢性衰老)或通过暴露于阳光(光衰老)或暴露于如烟草烟雾、严寒或大风极端气候条件、化学污染物或污染物质等环境因素而经历的变化，并且包含所有外部可见和/或通过触摸可感知的变化，如但不限于皮肤不连续性的出现(如皱纹、细纹、表情纹、妊娠纹、沟、不平滑或粗糙、毛孔粗大、水合作用丧失、弹性损失、紧实度损失、光滑度损失、变形恢复能力丧失、回弹性缺失、皮肤下垂(如脸颊下垂、眼睛下方出现眼袋或双下巴出现等)、皮肤颜色变化(如斑纹、泛红、眼袋、或色素沉着区域出现(如老年斑或雀斑等)、异常分化、角化过度、弹性组织变性、角化病、脱发、橘皮样皮肤、胶原蛋白结构损伤以及角质层、真皮、表皮、血管系统(例如，蜘蛛静脉或毛细血管扩张出现)或那些靠近皮肤的组织的其它组织学变化等等。术语“光衰老”与由于皮肤长时间暴露于包含紫外线照射等辐射而产生的所述组过程聚集在一起，这导致皮肤过早衰老，并且其呈现与衰老相同的物理特性，如不限于痿、下垂、色素沉着、肤色变化或色素沉着不均匀、异常和/或过度角化。如暴露于烟草烟雾、暴露于污染以及气候条件(如严寒和/或大风)等各种环境因素的总和也导致皮肤衰老。
[0049] 在本说明书中，用于氨基酸的缩写遵循《欧盟生物化学期刊(Eur.J.Biochem.)》,(1984),138,9-37中规定的IUPAC-IUB生化命名委员会的规则。因此，例如，Gly代表NH2-CH2-COOH，Gly-代表NH2-CH2-CO-，-Gly代表-NH-CH2-COOH，并且-Gly-代表-NH-CH2-CO-。因此，在代表肽键的连字符位于符号右侧时，可以消除氨基酸的1-羧基中的OH(在此以常规的非电离形式表示)，并且当所述连字符位于符号左侧时，消除了氨基酸的2-氨基中的H；两种修改都可以应用于同一符号(请参见表1)。
[0050]
[0051] 表1
[0052] 如本文所用，术语“非环状脂肪族基团”包含直链(即，直链和非支链)或支链、饱和或不饱和烃基，如烷基、烯基和炔基。非环状脂肪族基团可以是被取代的(单或多)或未被取代的。
[0053] 如本文所用，术语“烷基”包含饱和直链和支链烷基，其可以是被取代的(单或多)或未被取代的。烷基通过单键与分子的其余部分结合。烷基具有1到24个，优选地1到16个，更优选地1到14个，甚至更优选地1到12个，又更优选地1、2、3、4、5或6个碳原子。术语“烷基”包含例如甲基、乙基、异丙基、异丁基、叔-丁基、2-甲基丁基、庚基、5-甲基己基、2-乙基己基、辛基、癸基、十二烷基、月桂基、十六烷基、十八烷基和戊基。
[0054] 如本文所用，术语“烯基”是指含有一个或多个碳-碳双键的基团，其可以是直链或支链且被取代(单或多)或未被取代的。优选地，其具有1、2或3个碳-碳双键。如果存在多于一个碳-碳双键，则双键可以共轭或不共轭。烯基优选地具有2到24个，优选地2到16个，更优选地2到14个，甚至更优选地2到12个，又更优选地2、3、4、5或6个碳原子。烯基通过单键与分子的其余部分结合。术语“烯基”包含例如乙烯基(-CH2＝CH2)、烯丙基(-CH2-CH＝CH2)、异戊二烯基、油酰基、亚油酰基等。
[0055] 术语“炔基”是指含有一个或多个碳-碳三键的基团，其可以是直链或支链且被取代(单或多)或未被取代的。优选地，炔基具有1、2或3个碳-碳三键。三键可以共轭或不共轭。炔基具有2到24个、优选地2到16个、更优选地2到14个、甚至更优选地2到12个、又更优选地
2、3、4、5或6个碳原子。炔基通过单键与分子的其余部分结合。术语“炔基”包含例如但不限于乙炔基、1-丙炔基、2-丙炔基、1-丁炔基、2-丁炔基、3-丁炔基、戊炔基，如1-戊炔基等。炔基还可以含有一个或多个碳-碳双键，并且炔基包含例如但不限于丁-1-烯-3-炔基和戊-4-烯-1-炔基等。
2、3、4、5或6个碳原子。炔基通过单键与分子的其余部分结合。术语“炔基”包含例如但不限于乙炔基、1-丙炔基、2-丙炔基、1-丁炔基、2-丁炔基、3-丁炔基、戊炔基，如1-戊炔基等。炔基还可以含有一个或多个碳-碳双键，并且炔基包含例如但不限于丁-1-烯-3-炔基和戊-4-烯-1-炔基等。
[0056] 在本文中使用术语“脂环基”来涵盖例如但不限于脂肪族环状(脂环族)基团，如环烷基或环烯基或环炔基。术语“脂环基”是指含有碳原子中的一个或多个环的单价基团，所述环可以是饱和的(例如，环己基)或不饱和的(例如，环己烯基)，条件是其不是芳香族的。更具体地，脂环基含有三个或更多个(3到24个、3到12个或6到12个)环碳原子。脂环基可以是单环、双环或三环的环系统，并且所述环可以是例如稠合的或通过单键或连接基(如亚甲基或其它亚烷基)连接。脂环基可以是被取代的(单或多)或未被取代的。在一个实施例中，脂环基为6到12元环系统，其由碳原子组成并且任选地含有一个或两个双键。
[0057] 术语“环烷基”是指可以被取代的(单或多)或未被取代的饱和单环或多环烷基。环烷基具有3到24个，优选地3到16个，更优选地3到14个，甚至更优选地3到12个，又甚至更优选地3、4、5或6个碳原子。环烷基通过单键与分子的其余部分结合。环烷基包含例如但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、甲基环己基、二甲基环己基、八氢茚、十氢萘、十二氢萘等。
[0058] 术语“环烯基”是指可以被取代(单或多)或未被取代的非芳香族单环或多环烯基。环烯基具有5到24个，优选地5到16个，更优选地5到14个，甚至更优选地5到12个，又更优选地5或6个碳原子。环烯基通过单键与分子的其余部分结合。优选地，环烯基含有1、2或3个碳-碳双键。如果存在多于一个碳-碳双键，则双键可以共轭或不共轭。环烯基包含例如但不限于环戊-1-烯-1-基等。
[0059] 术语“环炔基”是指可以被取代(单或多)或未被取代的非芳香族单环或多环炔基。环炔基具有8到24个，优选地8到16个，更优选地8到14个，甚至更优选地8到12个，又甚至更优选地8或9个碳原子，并通过单键与分子的其余部分结合。优选地，环炔基含有1、2或3个共轭或不共轭的碳-碳三键。环炔基包含例如但不限于环辛基-2-炔-1-基等。环炔基还可以含有一个或多个碳-碳双键，包含例如但不限于环辛基-4-烯-2-炔基等。
[0060] 如本文所用，术语“杂环基”或“杂环的”是指具有3到10个成员的烃环系统，其中一个或多个环中的原子中的一个或多个是杂原子(即，不是碳原子)。因此，“杂环基”或“杂环的”是指环原子由碳和一个或多个杂原子组成的环状基团。为了满足化合价，杂原子可以与H或取代基键合。优选地，环碳原子中的1、2或3个是杂原子。每个杂原子可以独立地选自由O、N、S、P和B组成的组或由O、N和S组成的组。杂环基可以是被取代的(单或多)或未被取代的。杂环基可以是单环、双环或三环的环系统，并且所述环可以是例如稠合的或通过单键或连接基(如亚甲基或其它亚烷基)连接。存在于杂环基中的氮原子、碳原子或硫原子可以任选被氧化，并且氮原子可以任选地被季铵化。杂环基可以是不饱和的或部分或完全饱和的。杂环基可以是脂肪族或芳香族的。在一个实施例中，杂环基是脂肪族(也称为杂脂环基)，并且是3到10元环系统，其中一个或多个环的原子由碳原子以及1到4个、或1、2或3个杂原子组成。在一个实施例中，杂环基为6到10元环系统，其中一个或多个环的原子由碳原子以及1到
4个杂原子组成，并且其中所述环系统任选地含有一个或两个双键。在一个实施例中，杂环基是芳香族的(也称为杂芳基)并且是6到10元环系统，其中一个或多个环的原子由碳原子以及1到4个、或1、2或3个杂原子组成。最优选的术语杂环基是指5或6个成员的环。饱和杂脂环基的实例是二噁烷、哌啶、哌嗪、吡咯烷、吗啉和硫代吗啉。芳族杂环基的实例是吡啶、吡咯、呋喃、噻吩、苯并呋喃、咪唑啉、喹诺林、喹啉、哒嗪和萘啶。
4个杂原子组成，并且其中所述环系统任选地含有一个或两个双键。在一个实施例中，杂环基是芳香族的(也称为杂芳基)并且是6到10元环系统，其中一个或多个环的原子由碳原子以及1到4个、或1、2或3个杂原子组成。最优选的术语杂环基是指5或6个成员的环。饱和杂脂环基的实例是二噁烷、哌啶、哌嗪、吡咯烷、吗啉和硫代吗啉。芳族杂环基的实例是吡啶、吡咯、呋喃、噻吩、苯并呋喃、咪唑啉、喹诺林、喹啉、哒嗪和萘啶。
[0061] 术语“芳香基”是指具有6到30个、优选地6到18个、更优选地6到10个、又甚至更优选地6或10个碳原子的芳香基。芳香基可以包括1、2、3或4个芳香环，其可以通过碳-碳键连接或稠合在一起，并且包含例如但不限于苯基、萘基、二苯基、茚基、菲基或蒽基等。芳香基可以是被取代的(单或多)或未被取代的。
[0062] 术语“芳烷基”是指被芳香族基团取代的烷基，所述芳香族基团具有7到24个碳原子并且包含但不限于例如-(CH2)1-6-苯基、-(CH2)1-6-(1-萘基)、-(CH2)1-6-(2-萘基)、-(CH2)1-6-CH(苯基)2等。
[0063] 术语“杂芳基烷基”是指被如上定义的杂芳基(也称为芳族杂环)基团取代的烷基，所述烷基具有1到6个碳原子，并且杂芳基具有2到24个碳原子以及1到3个杂原子。杂芳基烷基包含但不限于例如-(CH2)1-6-咪唑基、-(CH2)1-6-三唑基、
[0064] -(CH2)1-6-噻吩基、-(CH2)1-6-呋喃基、-(CH2)1-6-吡咯烷基等。
[0065] 如在本技术领域中所理解的，上述基团可以具有一定程度的取代。具体地，在上面明确指出的任何上述组中都可以存在取代。上文提及的取代基(基团)是在一个或多个可被一个或多个取代基取代的位置上被取代的基团(或基团)。优选地，取代处于1、2或3位，更优选地处于1或2位，又甚至更优选地处于1位。合适的取代基包含但不限于例如：C1-C4烷基；羟基；C1-C4烷氧基；氨基；氨基-C1-C4烷基；C1-C4羰氧基；C1-C4氧羰基；卤素，如氟化物、氯、溴和碘；氰基；硝基；叠氮化物；C1-C4烷基磺酰基；硫醇；C1-C4烷硫基；芳氧基，如苯氧基；-NRb(C＝NRb)NRbRc；其中Rb和Rc独立地选自由以下形成的组：H、C1-C4烷基、C2-C4烯基、炔基、C3-C10环烷基、C6-C18芳基、C7-C17芳烷基、3-10个成员的杂环基或氨基的保护基。
[0066] 如本文中所使用的，包含性的或开放式的并且不排除另外的未叙述的要素或方法步骤的术语“包括”旨在涵盖短语“基本上由……组成”和“由……组成”作为替代性实施例，其中“由……组成”排除未指定的任何要素或步骤，并且“基本上由……组成”允许包含另外的未列举的不会实质上影响所考虑的组合物或方法的本质或基本和新颖特性的要素或步骤。
[0067] 本发明的化合物
[0068] 在第一方面，本发明提供了由式(I)表示的化合物：
[0069] R1-Wm-Xn-AA1-AA2-AA3-AA4-AA5-AA6-AA7-AA8-AA9-Yp-Zq-R2(I)，
[0070] 其立体异构体和/或其化妆品上或药学上可接受的盐，其中：
[0071] AA1是Phe；
[0072] AA2是Trp；
[0073] AA3选自由Met、Leu和Ile组成的组；
[0074] AA4选自由Lys、Arg和Gln组成的组；
[0075] AA5是Arg；
[0076] AA6是Lys；
[0077] AA7选自由Arg、Lys和His组成的组；
[0078] AA8选自由Val、Ile、Leu和Met组成的组；并且
[0079] AA9是Pro；
[0080] W、X、Y和Z各自独立地为氨基酸；
[0081] m、n、p和q各自独立地为0或1；
[0082] m+n+p+q小于或等于2；
[0083] R1选自由以下组成的组：H、衍生自聚乙二醇的聚合物、非环状脂肪族基团、脂环基、杂环基、杂芳基烷基、芳基、芳烷基和R5-CO-，其中R5选自由以下组成的组：H、非环状脂肪族基团、脂环基、芳基、芳烷基、杂环基和杂芳基烷基；
[0084] R2选自由以下组成的组：–NR3R4、-OR3、-SR3，其中R3和R4独立地选自由以下组成的组：H、衍生自聚乙二醇的聚合物、非环状脂肪族基团、脂环基、杂环基、杂芳基烷基、芳基和芳烷基；并且
[0085] R1和R2不是氨基酸。
[0086] 式(I)化合物是包括链中连接的9、10或11个氨基酸的肽。R1与肽的氨基端(N-端)结合，并且R2与肽的羧基端(C-端)结合。
[0087] R1可以选自由以下组成的组：H、衍生自聚乙二醇的分子量介于200道尔顿与35000道尔顿之间的聚合物以及R5-CO-，其中R5选自由以下组成的组：C1-C24烷基、C2-C24烯基、C2-C24炔基、C3-C24环烷基、C5-C24环烯基、C8-C24环炔基、C6-C30芳基、C7-C24芳烷基、3-10元杂环基环以及含有2到24个碳原子和1到3个杂原子的杂芳基烷基，其中烷基具有1到6个碳原子。
[0088] R1可以选自由H和R5-CO-组成的组，其中R5选自由C1-C18烷基、C2-C24烯基、C3-C24环烷基组成的组或由C1-C16烷基、C2-C18烯基、C3-C7环烷基组成的组。R5-CO-基团包含烷酰基，如乙酰基(CH3-CO-，在本文中简称为“Ac-”)、月桂酰基(CH3-(CH2)10-CO-，在本文中简称为“Lau-”)、肉豆蔻酰基(CH3-(CH2)12-CO-，在本文中简称为“Myr-”)和棕榈酰基(CH3-(CH2)14-CO-，在本文中简称为“Palm-”)。
[0089] R1可以选自由以下组成的组：H和乙酰基、叔丁酰基、异戊二烯基、己酰基、2-甲基己酰基、环己烷羧基、辛酰基、癸酰基、月桂酰基、肉豆蔻酰基、棕榈酰基、硬脂酰基、油酰基和亚油酰基。
[0090] R1可以选自由H和R5-CO-组成的组，其中R5选自由C1-C16烷基或C2-C18烯基组成的组。
[0091] R1可以选自由H、乙酰基、月桂酰基、肉豆蔻酰基或棕榈酰基组成的组或由H、乙酰基和棕榈酰基组成的组。
[0092] R2可以选自由-NR3R4、-OR3和-SR3组成的组或由-NR3R4和-OR3组成的组，其中R3和R4独立地选自由H、衍生自聚乙二醇的聚合物、C1-C24烷基、C2-C24烯基、C2-C24炔基、C3-C24环烷基、C5-C24环烯基、C8-C24环炔基、C6-C30芳基、C7-C24芳烷基、3-10元杂环基以及含有2到24个碳原子和1到3个杂原子的杂芳基烷基形成的组，其中烷基具有1到6个碳原子。任选地，R3和R4可以通过饱和或不饱和碳-碳键连接，从而与氮原子形成环。
[0093] R2可以是-NR3R4、-OR3和-SR3，其中R3和R4独立地选自由以下组成的组：H、衍生自聚乙二醇的分子量介于200道尔顿与35000道尔顿之间的聚合物、甲基、乙基、己基、十二烷基和十六烷基。R3和R4可以独立地选自由H和C1-C16烷基组成的组。在一个实施例中，R2是-NR3R4或-OR3，其中R3是H，并且R4选自由H和C1-C16烷基形成的组，包含甲基、乙基、己基、十二烷基和十六烷基。例如，R2可以是-OH或-NHR4，其中R4是H或C1-C16烷基，如C6烷基(-C6H13)或C16烷基(-C16H33)。
[0094] R2可以选自-NR3R4和-OR3，其中R3和R4独立地选自由H和C1-C16烷基组成的组。在一个实施例中，R2选自由-OH、-NH2和-NHR4组成的组，其中R4为C1-C16烷基。R2可以是-NR3R4，其中R3和R4各自独立地选自H和C1-C16烷基。R4可以是C6烷基(即-C6H13)或C16烷基(即-C16H33)。R4可以是C1-6烷基。
[0095] R1可以选自由H和R5-CO-组成的组，其中R5选自由C1-C18烷基、C2-C24烯基、C3-C24环烷基组成的组；并且R2可以是-NR3R4或-OR3，其中R3和R4独立地选自由H和C1-C16烷基组成的组。在一个实施例中，R3为H，并且R4选自由H和C1-C16烷基形成的组；例如，R2选自由-OH、-NH2和–NHR4组成的组，其中R4为C1-C16烷基。R4可以是C6烷基(即-C6H13)或C16烷基(即-C16H33)。R4可以是C1-6烷基。
[0096] R1可以选自由以下组成的组：H和乙酰基、叔丁酰基、异戊二烯基、己酰基、2-甲基己酰基、环己烷羧基、辛酰基、癸酰基、月桂酰基、肉豆蔻酰基、棕榈酰基、硬脂酰基、油酰基和亚油酰基；并且R2可以是-NR3R4或-OR3，其中R3和R4独立地选自由H和C1-C16烷基组成的组。在一个实施例中，R3为H，并且R4选自由H和C1-C16烷基形成的组；例如，R2选自由-OH、-NH2和–NHR4组成的组，其中R4为C1-C16烷基。R4可以是C6烷基(即-C6H13)或C16烷基(即-C16H33)。R4可以是C1-6烷基。
[0097] R1可以选自由H和R5-CO-组成的组，其中R5选自由C1-C16烷基或C2-C18烯基组成的组；并且R2可以是-NR3R4或-OR3，其中R3和R4独立地选自由H和C1-C16烷基组成的组。在一个实施例中，R3为H，并且R4选自由H和C1-C16烷基形成的组；例如，R2选自由-OH、-NH2和–NHR4组成的组，其中R4为C1-C16烷基。R4可以是C6烷基(即-C6H13)或C16烷基(即-C16H33)。R4可以是C1-6烷基。
[0098] R1可以选自由以下组成的组：H、乙酰基、月桂酰基、肉豆蔻酰基或棕榈酰基；并且R2可以是-NR3R4或-OR3，其中R3和R4独立地选自由H和C1-C16烷基组成的组。在一个实施例中，R3为H，并且R4选自由H和C1-C16烷基形成的组；例如，R2选自由-OH、-NH2和–NHR4组成的组，其中R4为C1-C16烷基。R4可以是C6烷基(即-C6H13)或C16烷基(即-C16H33)。R4可以是C1-6烷基。
[0099] R1可以选自由H、乙酰基或棕榈酰基组成的组；R2可以是-NR3R4或-OR3，其中R3和R4独立地选自由H和C1-C16烷基组成的组。在一个实施例中，R3为H，并且R4选自由H和C1-C16烷基形成的组；例如，R2选自由-OH、-NH2和–NHR4组成的组，其中R4为C1-C16烷基。R4可以是C6烷基(即-C6H13)或C16烷基(即-C16H33)。R4可以是C1-6烷基。
[0100] 衍生自聚乙二醇的聚合物的最优选结构为：基团(-CH2-CH2-O)r-H，其中r为介于4与795之间的数字；以及基团
[0101]
[0102] 其中s为介于1与125之间的数字。
[0103] 本发明提供了一种式(I)化合物，其中R1中的至少一个不是H；并且R2不是OH。换句话说，本发明提供了一种式(I)化合物，其中R1不是H和/或R2不是OH。
[0104] 本发明提供了一种式(I)化合物，其中AA3是Met。AA4可以选自由Lys、Arg和Gln组成的组或由Lys和Arg组成的组，AA4可以是Lys，或者AA4可以是Arg。在一个实施例中，AA3是Met；AA4选自由Lys、Arg和Gln组成的组；AA7选自由Lys和Arg组成的组；并且AA8选自由Val、Ile和Leu组成的组。在一个实施例中，AA3是Met；AA4选自由Lys和Arg组成的组；AA7选自由Lys和Arg组成的组；并且AA8选自由Val、Ile和Leu组成的组。在一个实施例中，AA3是Met；AA4是Lys；AA7选自由Lys和Arg组成的组；并且AA8选自由Val、Ile和Leu组成的组。在一个实施例中，AA3是Met；AA4是Arg；AA7选自由Lys和Arg组成的组；并且AA8选自由Val、Ile和Leu组成的组。在一个实施例中，AA3是Met；AA4是Arg；AA7是Arg；并且AA8选自由Val和Ile组成的组。
[0105] 本发明提供了一种式(I)化合物，其中AA3是Leu。AA4可以选自由Lys、Arg和Gln组成的组或由Lys和Arg组成的组，AA4可以是Lys，或者AA4可以是Arg。在一个实施例中，AA3是Leu；AA4选自由Lys和Arg组成的组；AA7选自由Lys和Arg组成的组；并且AA8选自由Val和Ile组成的组。在一个实施例中，AA3是Leu；AA4是Lys；AA7选自由Lys和Arg组成的组；并且AA8选自由Val和Ile组成的组。在一个实施例中，AA3是Leu；AA4是Arg；AA7选自由Lys和Arg组成的组；并且AA8选自由Val和Ile组成的组。在一个实施例中，AA3是Leu；AA4是Arg；AA7是Lys；并且AA8是Ile。
[0106] 本发明提供了一种式(I)化合物，其中AA3是Ile。AA4可以选自由Lys、Arg和Gln组成的组，或者AA4可以是Gln。在一个实施例中，AA3是Ile；AA4是Gln；AA7是His；并且AA8是Met。
[0107] 本发明提供一种式(I)化合物，其中R1为H，R2为OH，并且m、n、p和q各自为0，也就是说，本发明提供了具有下式的化合物：H-AA1-AA2-AA3-AA4-AA5-AA6-AA7-AA8-AA9-OH(也被写作AA1-AA2-AA3-AA4-AA5-AA6-AA7-AA8-AA9)、其立体异构体和/或其化妆品上或药学上可接受的盐，其中：AA1是Phe；AA2是Trp；AA3选自由Met、Leu和Ile组成的组；AA4选自由Lys、Arg和Gln组成的组；AA5是Arg；AA6是Lys；AA7选自由Arg、Lys和His组成的组；AA8选自由Val、Ile、Leu和Met组成的组；并且AA9是Pro[SEQ ID NO.1]。如上文所设想的AA3、AA4、AA7和AA8的变化也适用于此实施例。
[0108] 本发明的化合物包含选自表2中所列的化合物的一种或多种化合物、其立体异构体和/或其化妆品上或药学上可接受的盐，其中每个氨基酸序列的序列标识符被详述。
[0109] Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro SEQ ID NO.2Phe-Trp-Leu-Arg-Arg-Lys-Lys-Ile-Pro SEQ ID NO.3
Phe-Trp-Ile-Gln-Arg-Lys-His-Met-Pro SEQ ID NO.4
Phe-Trp-Leu-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro SEQ ID NO.5
Phe-Trp-Met-Arg-Arg-Lys-Arg-Val-Pro SEQ ID NO.6
Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Lys-Val-Pro SEQ ID NO.7
Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Ile-Pro SEQ ID NO.8
Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Leu-Pro SEQ ID NO.9
Phe-Trp-Ile-Gln-Arg-Lys-His-Met-Pro SEQ ID NO.4
Phe-Trp-Leu-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro SEQ ID NO.5
Phe-Trp-Met-Arg-Arg-Lys-Arg-Val-Pro SEQ ID NO.6
Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Lys-Val-Pro SEQ ID NO.7
Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Ile-Pro SEQ ID NO.8
Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Leu-Pro SEQ ID NO.9
[0110] 表2
[0111] 具体地，本发明的化合物包含选自表3中所列的化合物的一种或多种化合物、其立体异构体和/或其化妆品上或药学上可接受的盐，其中每个氨基酸序列的序列标识符被详述。
[0112]Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro SEQ ID NO.2
Phe-Trp-Met-Arg-Arg-Lys-Arg-Val-Pro SEQ ID NO.6
Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Ile-Pro SEQ ID NO.8
Phe-Trp-Met-Arg-Arg-Lys-Arg-Val-Pro SEQ ID NO.6
Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Ile-Pro SEQ ID NO.8
[0113] 表3
[0114] 在表2和3的氨基酸序列中，根据式(I)所述的每个序列，R1和R2分别为H和OH。本发明的化合物包含表2和3的序列中的每个序列，其N-和C-端分别被另外的R1和R2基团修饰，如本文对式(I)所定义的。例如，本发明的化合物包含表2和3的序列中的每个序列，其中C端氨基酸残基任选地以如上对式(I)所定义的R1终止(被其修饰)，其中R1不是H。此外，本发明的化合物包含表2和3的序列中的每个序列，其中N端氨基酸残基任选地以如上对式(I)所定义的R2终止(被其修饰)，其中R2不是OH。
[0115] 因此，本发明提供了根据式(I)的化合物，其中所述化合物是选自SEQ ID NO.1到9的氨基酸序列以及其立体异构体和/或其化妆品上或药学上可接受的盐，其中任选地，所述序列的N端被R1修饰，其中R1不是H和/或其C端被R2修饰，其中R2不是OH。氨基酸序列可以是SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.6或SEQ ID NO.8。氨基酸序列可以是SEQ ID NO.2。
[0116] 本发明的化合物可以作为立体异构体或立体异构体混合物存在，例如，包括其的氨基酸可以具有配置L-、D-或独立于彼此为外消旋的。因此，可以获得异构体混合物以及外消旋混合物或非对映异构体混合物或纯的非对映异构体或对映异构体，这取决于非对称碳的数目以及存在哪些异构体或异构体混合物。本发明的化合物的优选结构是纯异构体，即对映异构体或非对映异构体。
[0117] 例如，当指出时，式(I)中的氨基酸中的一个氨基酸是Met，应理解的是，其选自外消旋的或非外消旋的L-Met、D-Met或两者的混合物。本文件中描述的制备程序使本领域技术人员能够通过选择具有正确配置的氨基酸来获得本发明的化合物的立体异构体中的每种立体异构体。式(I)中的氨基酸可以是L-氨基酸，也就是说，当存在W、X、Y和Z中的任一个时，氨基酸AA1到AA9和W、X、Y和Z中的每一个是L-氨基酸。
[0118] 在本发明的上下文中，术语“氨基酸”包含由遗传密码编码的氨基酸以及非编码氨基酸，无论其是天然的还是非天然的。非编码氨基酸的实例为但不限于瓜氨酸、鸟氨酸、肌氨酸、锁链素、正缬氨酸、4-氨基丁酸、2-氨基丁酸、2-氨基异丁酸、6-氨基己酸、1-萘基丙氨酸、2-萘基丙氨酸、2-氨基苯甲酸、4-氨基苯甲酸、4-氯苯丙氨酸、2,3-二氨基丙酸、2,4-二氨基丁酸、环丝氨酸、肉碱、胱氨酸、青霉胺、焦谷氨酸、噻吩丙氨酸、羟脯氨酸、别异亮氨酸、别苏氨酸、异哌啶酸、异丝氨酸、苯基甘氨酸、他汀类、β-丙氨酸、正亮氨酸、N-甲基氨基酸、α-氨基酸和β-氨基酸等以及其衍生物。非天然氨基酸的列表可以在文章“肽合成中的异常氨基酸(Unusual amino acids in peptide synthesis)”,D.C.Roberts和F.Vellaccio著，《肽(The Peptides)》,第5卷(1983),第VI章,Gross E.和Meienhofer J.编辑,学术出版社(Academic Press),美国纽约或专注于本领域的公司的商业目录中找到。
[0119] 在本发明的上下文中，当W、X、Y和/或Z中的至少一个存在时，即当n、m、p或q中的至少一个不为0时，应理解的是，W、X、Y和/或Z的性质不妨碍本发明的化合物的活性，而是对其起作用或对其不起作用。在一个实施例中，W、X、Y和Z各自独立地选自由Ala、Val、Ile和Gly组成的组。
[0120] 在本发明的一个实施例中，m、n、p和q中的每一个为0，即式(I)化合物是包括链中连接的9个氨基酸的肽。在一个实施例中，m、n、p和q的总和为1，即式(I)化合物是包括链中连接的10个氨基酸的肽。在一个实施例中，m、n、p和q的总和为2，即式(I)化合物是包括链中连接的11个氨基酸的肽。
[0121] 本发明的化合物包含选自表4中所列的化合物组的一种或多种化合物、其立体异构体和/或其化妆品上或药学上可接受的盐。
[0122] H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH2 PEP-1Palm-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH2 PEP-2
Ac-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH2 PEP-3
H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-OH PEP-4
Palm-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-OH PEP-5
Ac-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-OH PEP-6
H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NHC6H13 PEP-7
H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NHC16H33 PEP-8
H-Phe-Trp-Leu-Arg-Arg-Lys-Lys-Ile-Pro-NH2 PEP-9
H-Phe-Trp-Ile-Gln-Arg-Lys-His-Met-Pro-NH2 PEP-10
H-Phe-Trp-Leu-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH2 PEP-11
H-Phe-Trp-Met-Arg-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH2 PEP-12
H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Lys-Val-Pro-NH2 PEP-13
H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Ile-Pro-NH2 PEP-14
H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Leu-Pro-NH2 PEP-15
Ac-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH2 PEP-3
H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-OH PEP-4
Palm-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-OH PEP-5
Ac-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-OH PEP-6
H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NHC6H13 PEP-7
H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NHC16H33 PEP-8
H-Phe-Trp-Leu-Arg-Arg-Lys-Lys-Ile-Pro-NH2 PEP-9
H-Phe-Trp-Ile-Gln-Arg-Lys-His-Met-Pro-NH2 PEP-10
H-Phe-Trp-Leu-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH2 PEP-11
H-Phe-Trp-Met-Arg-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH2 PEP-12
H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Lys-Val-Pro-NH2 PEP-13
H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Ile-Pro-NH2 PEP-14
H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Leu-Pro-NH2 PEP-15
[0123] 表4
[0124] 本发明提供了根据式(I)的化合物，其中所述化合物是选自表4中所列的那些化合物的化合物，并且具体地可以选自PEP-1、PEP-12和PEP-14。
[0125] 在本发明的领域内也发现了本发明提供的化合物的化妆品上或药学上可接受的盐。术语“化妆品上或药学上可接受的盐”意指被认可用于动物(例如，哺乳动物)以及更具体地用于人类的盐，并且包含用于形成碱加成盐的盐，其是无机的，例如但不限于锂、钠、钾、钙、镁、锰、铜、锌或铝等，或者其是有机的，例如但不限于乙胺、二乙胺、乙二胺、乙醇胺、二乙醇胺、精氨酸、赖氨酸、组氨酸或哌嗪等或酸加成盐，其是有机的，例如但不限于乙酸盐、柠檬酸盐、乳酸盐、丙二酸盐、马来酸盐、酒石酸盐、富马酸盐、苯甲酸盐、天冬氨酸、谷氨酸盐、琥珀酸盐、油酸盐、三氟乙酸盐、草酸盐、双羟萘酸盐或葡糖酸盐等，或者其是无机的，例如但不限于氯化物、硫酸盐、硼酸盐或碳酸盐等。盐的性质并不关键，条件是其是化妆品上或药学上可接受的。本发明的化合物的化妆品上或药学上可接受的盐可以通过现有技术中公知的常规方法获得[Berge S.M.等人,“药用盐(Pharmaceutical Salts)”,(1977)《, 药物科学杂志(J.Pharm.Sci.)》,66,1-19]。
[0126] 本发明的化合物的制备程序
[0127] 本发明的化合物、其立体异构体、其混合物和/或其化妆品上或药学上可接受的盐的合成可以根据现有技术中已知的常规方法，如固相肽合成方法[Stewart J.M.和Young J.D.“,固相肽合成(Solid Phase Peptide Synthesis),第2版”,(1984),伊利诺伊州罗克福德皮尔斯化学公司(Pierce Chemical Company)；Bodanzsky M.和Bodanzsky A.，“肽合成的实践(The practice of Peptide Synthesis)”,(1994),柏林施普林格出版社(Springer Verlag)；Lloyd-Williams P.等人,“肽和蛋白质合成的化学方法(Chemical Approaches to the Synthesis of Peptides and Proteins)”,(1997),CRC,美国佛罗里达州博卡拉顿]、溶液合成、酶促合成[Kullmann W.“, 蛋白酶作为催化剂用于阿片肽的酶合成法(Proteases as catalysts for enzymic syntheses of opioid peptides)”，(1980)《,生物化学杂志(J.Biol.Chem.)》,255(17),8234-8238]或其任何组合。所述化合物可以是合成的，例如通过固相肽合成来合成。化合物还可以通过发酵细菌菌株而获得、通过基因工程进行修饰或未修饰以产生所期望的序列、或通过具有动物或植物起源的蛋白质(例如，微生物或藻类，优选地植物)的受控水解来获得，这产生含有所期望的序列的游离肽片段。
[0128] 例如，获得式(I)化合物、其立体异构体以及其混合物的方法包括以下步骤：
[0129] -将具有受保护的N-端和游离C-端的氨基酸与具有游离N-端和受保护的或与固体支持体相结合的C-端的氨基酸偶联；
[0130] -消除N-端的保护基；
[0131] -重复偶联序列并消除N-端的保护基，直到获得所期望的肽序列为止；
[0132] -消除C-端的保护基或裂解固体支持体。
[0133] 优选地，C-端与固体支持体结合，并且所述方法在固相中进行，并且因此包括：将具有受保护的N-端和游离C-端的氨基酸与具有游离N-端和与聚合物支持体结合的C-端的氨基酸偶联；消除N-端的保护基；以及根据需要重复此序列多次以因此获得所期望长度的化合物，最后从原始聚合物支持体裂解合成的化合物。
[0135] 可替代地，可以使用将肽与聚合物支持体或与预先结合到聚合物支持体的肽或氨基酸偶联的收敛策略进行固相合成。收敛合成策略是本领域技术人员众所周知的，并且在Lloyd-Williams P.等人,“收敛固相肽合成(Convergent Solid-Phase Peptide Synthesis)”,(1993)《, 四面体(Tetrahedron)》,49(48),11065-11133中进行了描述。
[0136] 所述方法可以包括使用现有技术中已知的标准程序和条件以不加区分的顺序使N-端和C-端脱保护和/或从聚合物支持体裂解肽的另外阶段，在此之后可以对这些端的官能团进行修饰。N-端和C-端的任选修饰可以通过将式(I)的肽锚定到聚合物支持体来进行，或一旦将肽与聚合物支持体分离即可。
[0137] 任选地，在存在适当的碱和溶剂的情况下，R1可以通过亲核取代反应使本发明的化合物的N-端与R1-X化合物反应来引入，其中具有不参与N-C键形成的官能团的片段被临时或永久保护基适当保护。R1如上所定义并且X是离去基团，例如但不限于甲苯磺酰基、甲磺酰基和卤素基团等。
[0138] 任选地和/或另外地，R2基团可以通过以下引入：在存在适当的溶剂或碱(如N,N-二异丙基乙胺(DIEA)或三甲胺)或添加剂(如1-羟基苯并三唑(HOBt)或1-羟基氮杂苯并三唑(HOAt))以及脱水剂(如碳二亚胺、铀盐、磷盐或脒盐)等的情况下，使化合物HR2与对应于R2为-OH的式(I)的肽的互补片段反应；或通过用例如亚硫酰氯预先形成酰基卤并且由此获得根据本发明的式(I)的肽，其中具有不参与N-C键形成的官能团的片段被临时或永久保护基适当保护。可替代地，其它R2基团可以通过同时从聚合物载体并入到肽裂解过程中来引入。R2是-OR3、-NR3R4或-SR3，其中R3和R4如上所定义。
[0139] 本领域技术人员将容易理解，根据现有技术已知的方法，C-端和N-端的脱保护/裂解步骤以及其随后的衍生化可以以不同的顺序进行。
[0140] 术语“保护基”涉及封闭有机官能团并且可以在受控条件下被去除的基团。保护基、其相对反应性以及其保持惰性的条件是本领域技术人员已知的。
[0141] 氨基的代表性保护基的实例是酰胺，如乙酸酰胺、苯甲酸酰胺、新戊酸酰胺；氨基甲酸酯，如苄氧基羰基(Cbz或Z)、2-氯苄基(CIZ)、对硝基苄氧基羰基(pNZ)、叔丁氧基羰基(Boc)、2,2,2-三氯乙氧基羰基(Troc)、2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基羰基(Teoc)、9-芴基甲氧基羰基(Fmoc)或烯丙氧基羰基(Alloc)、三苯甲基(Trt)、甲氧基三苯甲基(Mtt)、2,4-二硝基苯基(Dnp)、N-[1-(4,4-二甲基-2,6-二氧代杂环己基-1-亚基)乙基(Dde)、1-(4,4-二甲基-2,6-二氧代-亚环己基)-3-甲基丁基(ivDde)、1-(1-金刚烷基)-1-甲基乙氧基羰基(Adpoc)等，优选地Boc或Fmoc。
[0142] 羧基的代表性保护基的实例是酯，如叔丁酯(tBu)、烯丙基酯(All)、三苯甲基酯(Trt测试仪)、环己基酯(cHx)、苄基酯(Bzl)或邻硝基苄基酯、对硝基苄基酯、对甲氧基苄基酯、三甲基甲硅烷基乙基酯、2-苯基异丙基酯、芴基甲基酯(Fm)、4-(N-[1-(4,4-二甲基-2,6-二氧代亚环己基)-3-甲基丁基]氨基)苄基酯(Dmab)等；本发明的优选保护基是All、tBu、cHex、Bzl和Trt酯。
[0143] 三官能氨基酸的侧链在合成过程中可以使用与N-端和C-端保护基正交的临时或永久保护基来保护。
[0144] 这些和其它保护基的实例、其引入和去除可以在文献[Atherton B.和Sheppard R.C.,“固相肽合成：一种实用方法(Solid Phase Peptide Synthesis:A practical approach)”,(1989),IRL牛津大学出版社(IRL Oxford University Press)]中找到。术语“保护基”还包含在固相合成中使用的聚合物支持体。
[0145] 当合成全部或部分在固相中进行时，用于本发明的方法的可能的固体支持体涉及聚苯乙烯支持体、接枝到聚苯乙烯的聚乙二醇等，例如但不限于对甲基二苯甲胺树脂(MBHA)[Matsueda G.R.等人,“用于改善肽酰胺固相合成的对甲基二苯甲胺树脂(Ap-methylbenzhydrylamine resin for improved solid-phase synthesis of peptide amides)”,(1981)《, 肽(Peptides)》,2,45-50]、2-氯三苯甲基树脂[Barlos K.等人,“Darstellung geschützter Peptid-Fragmente unter Einsatz substituierter Triphenylmethyl-Harze”,(1989)《, 四面体通讯(Tetrahedron Lett.)》,30,3943-3946；Barlos K.等人,“Veresterung von partiell geschützten Peptid-Fragmenten mit Harzen.Einsatz von 2-Chlorotritylchlorid zur Synthese von Leu1-Gastrin I”,(1989)《, 四面体通讯》,30,3947-3951]、TentaGel’树脂(拉普聚合物公司(Rapp Polymere GmbH))、ChemMatrix’树脂(Matrix Innovation，Inc)等，其可以包含或可以不包含不稳定的连接子，如5-(4-氨基甲基-3,5-二甲氧基苯氧基)戊酸(PAL)[Albericio F.等人“,5-(4-(9-芴基甲氧基羰基)氨基甲基-3,5-二甲氧基-苯氧基)戊酸(PAL)在温和条件下固-相合成C-端肽酰胺的制备和应用(Preparation and application of the 5-(4-(9-
fluorenylmethyloxycarbonyl)aminomethyl-3,5-dimethoxy-phenoxy)valeric acid(PAL)handle for the solid-phase synthesis of C-terminal peptide amides under mild conditions)”,(1990)《, 有机化学期刊(J.Org.Chem.)》,55,3730-3743]、2-[4-氨基甲基-(2,4-二甲氧基苯基)]苯氧基乙酸(AM)[Rink H.,“使用三烷氧基-二苯基-甲基酯树脂固相合成保护肽片段(Solid-phase synthesis of protected peptide fragments using a trialkoxy-diphenyl-methylester resin)”,(1987)《,四面体通讯》,28,3787-
3790]、[Wang S.S.,“用于固相合成保护肽片段的对-烷氧基苄基醇树脂和对-烷氧基苄氧基羰基酰肼树脂(p-Alkoxybenzyl Alcohol Resin and p-Alkoxybenzyloxycarbonylhydrazide Resin for Solid Phase Synthesis of Protected Peptide Fragments)”,(1973)《, 美国化学学会杂志(J.Am.Chem.Soc.)》,95,1328-1333]等，其使得能够同时从聚合物支持体脱保护和裂解化合物。
fluorenylmethyloxycarbonyl)aminomethyl-3,5-dimethoxy-phenoxy)valeric acid(PAL)handle for the solid-phase synthesis of C-terminal peptide amides under mild conditions)”,(1990)《, 有机化学期刊(J.Org.Chem.)》,55,3730-3743]、2-[4-氨基甲基-(2,4-二甲氧基苯基)]苯氧基乙酸(AM)[Rink H.,“使用三烷氧基-二苯基-甲基酯树脂固相合成保护肽片段(Solid-phase synthesis of protected peptide fragments using a trialkoxy-diphenyl-methylester resin)”,(1987)《,四面体通讯》,28,3787-
3790]、[Wang S.S.,“用于固相合成保护肽片段的对-烷氧基苄基醇树脂和对-烷氧基苄氧基羰基酰肼树脂(p-Alkoxybenzyl Alcohol Resin and p-Alkoxybenzyloxycarbonylhydrazide Resin for Solid Phase Synthesis of Protected Peptide Fragments)”,(1973)《, 美国化学学会杂志(J.Am.Chem.Soc.)》,95,1328-1333]等，其使得能够同时从聚合物支持体脱保护和裂解化合物。
[0146] 应用
[0147] 本发明部分基于以下发现：式(I)化合物可有效调节皮肤的昼夜节律；以及此能力可以用于改善皮肤的美容特性。具体地，本发明涉及皮肤的昼夜节律，其在以下方面表现出自身的变化：JARID1A蛋白在皮肤中的表达；CRY2、PER2和/或PER3时钟基因在皮肤中的表达；皮肤中存在的神经酰胺的量；和/或DHA并入到皮肤细胞膜中的量。与昼夜节律相关的皮肤的美容特性包含屏障功能和皮肤水合作用。据信，本发明的化合物通过引起以下来调节皮肤的昼夜节律：JARID1A蛋白的表达增加；CRY2、PER2和/或PER3时钟基因的表达增加；神经酰胺的量增加；和/或并入到皮肤细胞膜中的二十二碳六烯酸(DHA)的量增加。因此，本发明的化合物可用于治疗处于其昼夜节律中的以下时刻的皮肤，其中：JARID1A蛋白在皮肤中的表达低于每日最大值；CRY2、PER2和/或PER3时钟基因在皮肤中的表达低于每日最大值；皮肤中存在的神经酰胺的量；和/或并入到皮肤细胞膜中的DHA的量低于每日最大值。
JARID1A蛋白在皮肤中的表达可以通过JARID1A蛋白在角质形成细胞中的表达来表示。
CRY2、PER2和/或PER3时钟基因在皮肤中的表达可以通过CRY2、PER2和/或PER3时钟基因在角质形成细胞中的表达来表示。并入到皮肤细胞膜中的DHA的量可以通过PC-DHA/PC在皮肤中的比率来表示。
JARID1A蛋白在皮肤中的表达可以通过JARID1A蛋白在角质形成细胞中的表达来表示。
CRY2、PER2和/或PER3时钟基因在皮肤中的表达可以通过CRY2、PER2和/或PER3时钟基因在角质形成细胞中的表达来表示。并入到皮肤细胞膜中的DHA的量可以通过PC-DHA/PC在皮肤中的比率来表示。
[0148] JARID1A蛋白在皮肤中的表达、CRY2、PER2和PER3时钟基因在皮肤中的表达、皮肤中神经酰胺的量以及并入到皮肤细胞膜中的DHA的量在清晨的皮肤中比例如在“傍午”的皮肤中要低。清晨皮肤是清晨的皮肤，即在正常的起床时间，例如介于5.00到8.00am之间，例如7.30am。傍午介于11.00am与中午之间，例如11.30am。因此，本发明的化合物可用于治疗和/或护理“清晨”的皮肤。因此，一方面，如果本发明的化合物有效地促进皮肤的昼夜节律，则本发明涉及本发明的化合物在调节或促进皮肤的昼夜节律中的用途。本发明的化合物也可用于治疗皮肤的昼夜节律例如由于时差或轮班工作而改变的受试者的皮肤。皮肤的昼夜节律可能会改变，使得JARID1A蛋白在皮肤中的表达低于每日最大值；CRY2、PER2和/或PER3时钟基因在皮肤中的表达低于每日最大值；皮肤中存在的神经酰胺的量；和/或并入到皮肤细胞膜中的DHA的量低于每日最大值。已经发现，本发明的化合物在增加PER2和PER3时钟基因在老年受试者中的表达水平方面特别有效。因此，本发明的化合物特别适用于治疗年龄大于26岁的受试者的皮肤，例如三十岁或三十岁以上、四十岁或四十岁以上的受试者。受试者可以为五十岁或五十岁以上、或六十岁或六十岁以上。
[0149] 另外，已经发现，本发明的化合物有效地增加皮肤细胞的能量代谢(能量产生)，并且因此可用于供给皮肤能量，例如减轻和/或预防皮肤疲劳症状。另外，已经发现，本发明的化合物作为皮肤抗衰老剂是有效的。因此，本发明的化合物可以例如促进皮肤的昼夜节律，从而在清晨为皮肤提供日间皮肤特性，同时对皮肤具有供能作用和抗衰老作用。日间皮肤特性是白天期间与皮肤相关的特性，并且这些特性包含在一天中的晚些时候(例如，傍午)与皮肤相关的如皮肤屏障功能、皮肤水合作用、皮肤微循环和/或肤色等特性。
[0150] 因此，本发明的化合物在皮肤、毛发、指甲和/或粘膜的保护和/或治疗和/或护理中特别有用。具体地，保护、治疗和/或护理是对皮肤进行的。在本发明的上下文中，皮肤包含整个身体的皮肤，包含脸部皮肤(包含眼睛周围的皮肤)、头皮、领窝、脖子、胸部、手臂、手、腿、脚、大腿、髋部、臀部、胃、躯干和生殖器区域。
[0151] 一方面，本发明提供了一种式(I)化合物、其立体异构体和/或其化妆品上或药学上可接受的盐的用途，其用于治疗和/或护理皮肤、毛发、指甲和/或粘膜。
[0152] 所述用途可以是美容上的，即非治疗性的。本发明提供了一种式(I)化合物、其立体异构体和/或其化妆品上可接受的盐、或包括式(I)化合物、其立体异构体和/或其化妆品上可接受的盐的化妆品组合物的用途，其用于对皮肤、毛发、指甲和/或粘膜进行化妆品上、非治疗性治疗和/或护理。
[0153] 本发明提供了一种式(I)化合物、其立体异构体和/或其化妆品上或药学上可接受的盐的用途，其用于维持和/或改善皮肤的屏障功能。皮肤的皮肤屏障功能在本文中也称为皮肤的物理屏障、皮肤的渗透性屏障或简称为皮肤屏障。此屏障由角质层和表皮中的紧密连接提供。屏障功能受损可能归因于固有或内在的昼夜节律调节剂，例如睡眠剥夺、心理压力或年龄。例如，屏障功能受损可能导致皮肤水分和电解质流失。本发明提供了一种式(I)化合物、其立体异构体和/或其化妆品上可接受的盐的用途，其用于对皮肤、毛发、指甲和/或粘膜进行化妆品上、非治疗性治疗和/或护理，其中所述治疗和/或护理维持或改善皮肤的屏障功能。
[0154] 本发明提供了一种式(I)化合物、其立体异构体和/或其化妆品上或药学上可接受的盐的用途，其用于维持和/或改善皮肤水合作用。皮肤的皮肤水合作用表现出每天时间依赖性模式，其中皮肤水合作用的水平随着一天的推移从清晨的低水平开始改善，即增加。皮肤水合作用在本文中也称为皮肤水合作用水平或皮肤保湿。因此，本发明提供了一种式(I)化合物、其立体异构体和/或其化妆品上可接受的盐的用途，其用于对皮肤、毛发、指甲和/或粘膜进行化妆品上、非治疗性治疗和/或护理，其中所述皮肤治疗和/或护理是对皮肤水合作用的维持和/或改善。
[0155] 本发明提供了一种式(I)化合物、其立体异构体和/或其化妆品上或药学上可接受的盐的用途，其用于维持和/或改善皮肤微循环和/或肤色。皮肤微循环在本文中也被称为皮肤血液流动，并且是皮肤的小血管(如皮肤中的毛细血管和小动脉)中的血液流动。皮肤微循环表现出每日时间依赖性模式，其中皮肤微循环水平随着一天的推移从清晨的低水平开始改善，即增加。肤色与皮肤微循环密切相关，其中改善的肤色与皮肤微循环增加相关。因此，本发明提供了一种式(I)化合物、其立体异构体和/或其化妆品上可接受的盐的用途，其用于对皮肤、毛发、指甲和/或粘膜进行化妆品上、非治疗性治疗和/或护理，其中所述皮肤治疗和/或护理是对皮肤微循环和/或肤色的维持和/或改善。
[0156] 本发明提供了一种式(I)化合物、其立体异构体和/或其化妆品上或药学上可接受的盐的用途，其用于供给皮肤能量。供给皮肤能量意指增加皮肤细胞的能量代谢。这可以具有以下美容益处：维持和/或改善肤色；和/或预防和/或减少皮肤上的皱纹。有利地，这种供能作用避免了活性氧物质(ROS)的产生。因此，本发明提供了一种式(I)化合物、其立体异构体和/或其化妆品上可接受的盐的用途，其用于对皮肤、毛发、指甲和/或粘膜进行化妆品上、非治疗性治疗和/或护理，其中所述皮肤治疗和/或护理正在供给皮肤能量。
[0157] 本发明提供了一种式(I)化合物、其立体异构体和/或其化妆品上或药学上可接受的盐的用途，其用于减轻或预防皮肤疲劳症状。皮肤疲劳的症状包含眼睛下方出现黑眼圈、肤色暗沉、皮肤色调下降和皮肤干燥。因此，本发明提供了一种式(I)化合物、其立体异构体和/或其化妆品上可接受的盐的用途，其用于对皮肤、毛发、指甲和/或粘膜进行化妆品上、非治疗性治疗和/或护理，其中所述皮肤治疗和/或护理是对皮肤疲劳症状的缓解或预防。
[0158] 本发明提供了一种式(I)化合物、其立体异构体和/或其化妆品上或药学上可接受的盐的用途，其用于治疗和/或预防皮肤衰老或皮肤衰老症状。皮肤衰老的症状包含治疗和/或预防皮肤皱纹、皮肤干燥、皮肤粗糙、皮肤色调下降和皮肤屏障改变。皮肤衰老的症状可以为皮肤皱纹、皮肤干燥、皮肤色调下降和皮肤屏障改变。皮肤衰老的症状可以包含由于皮肤中线粒体复合体I的活性产生的ROS的存在和/或由于衰老导致的皮肤中线粒体复合体II活性的降低而引起的衰老症状。有利地，已经发现，本发明的化合物可以降低线粒体复合体I活性的活性、增加线粒体复合体II活性并在人皮肤成纤维细胞中产生可忽略的活性氧物质(ROS)。由于衰老，皮肤中线粒体复合体II的活性降低。此外，线粒体复合体I是细胞中的触发氧化应激和衰老的ROS的重要来源。与此相关，复合体II活性的增加和/或复合体I的部分抑制促成抗衰老作用。因此，本发明提供了一种式(I)化合物、其立体异构体和/或其化妆品上可接受的盐的用途，其用于对皮肤、毛发、指甲和/或粘膜进行化妆品上、非治疗性治疗和/或护理，其中所述皮肤治疗和/或护理是对皮肤衰老症状的缓解或预防。
[0159] 本发明提供了一种式(Ⅰ)化合物、其立体异构体和/或其化妆品上或药学上可接受的盐的用途，其用于治疗和/或预防眼袋。本文所指的眼袋也可以被称为眼眶周围浮肿、“肿眼泡”或眼睛下方下垂，并且通常以眼睛周围的组织，更具体地眼睛下方的肿胀为特征。眼袋会因睡眠方式的改变(如睡眠剥夺)而恶化，并且通常与黑眼圈一起出现。治疗眼袋包含减少眼袋的体积。防止眼袋意指防止眼袋出现。
[0160] 本发明提供了一种式(I)化合物、其立体异构体和/或其化妆品上或药学上可接受的盐的用途，其用于维持和/或改善皮肤光度。术语皮肤光度是技术人员众所周知的，并且以其最广泛的含义使用。文献中也经常使用的替代名称是“皮肤明度”或“皮肤亮度”。皮肤光度通常与皮肤的健康外观相关。
[0161] 本发明提供了一种式(I)化合物、其立体异构体和/或其化妆品上可接受的盐的用途，其用于对皮肤、毛发、指甲和/或粘膜进行化妆品上、非治疗性治疗和/或护理，其中所述治疗和/或护理为：维持或改善皮肤的屏障功能；维持和/或改善皮肤水合作用；维持和/或改善皮肤微循环和/或肤色；缓解或预防皮肤疲劳症状；供给皮肤能量；治疗或预防眼袋；维持或改善皮肤光度；和/或缓解和/或预防皮肤衰老症状。
[0162] 本发明提供了一种式(I)化合物、其立体异构体和/或其化妆品上可接受的盐的用途，其用于对皮肤、毛发、指甲和/或粘膜进行化妆品上、非治疗性治疗和/或护理，其中所述治疗和/或护理为：维持或改善皮肤的屏障功能；维持和/或改善皮肤水合作用；维持和/或改善皮肤微循环和/或肤色；缓解或预防皮肤疲劳症状；供给皮肤能量；和/或缓解和/或预防皮肤衰老症状。
[0163] 本发明提供了一种式(I)化合物、其立体异构体和/或其化妆品上可接受的盐的用途，其用于对皮肤、毛发、指甲和/或粘膜进行化妆品上、非治疗性治疗和/或护理，其中所述治疗和/或护理为：维持或改善皮肤的屏障功能；维持和/或改善皮肤水合作用；维持和/或改善皮肤微循环；供给皮肤能量；和/或缓解和/或预防皮肤衰老症状。
[0164] 本发明提供了一种式(I)化合物、其立体异构体和/或其化妆品上可接受的盐的用途，其用于对皮肤、毛发、指甲和/或粘膜进行化妆品上、非治疗性治疗和/或护理，其中所述治疗和/或护理为：维持或改善皮肤的屏障功能；维持和/或改善皮肤水合作用；供给皮肤能量；和/或缓解和/或预防皮肤衰老症状。
[0165] 本发明提供了一种式(I)化合物、其立体异构体和/或其化妆品上可接受的盐的用途，其用于对皮肤、毛发、指甲和/或粘膜进行化妆品上、非治疗性治疗和/或护理，其中所述治疗和/或护理如上所述，并且其中所述治疗和/或护理为治疗和/或护理清晨皮肤。具体地，皮肤的治疗性治疗和/或护理可以为：维持或改善皮肤的屏障功能；维持和/或改善皮肤水合作用；和/或维持和/或改善皮肤微循环。清晨皮肤可以是处于其昼夜节律中的以下时刻的皮肤，其中JARID1A蛋白在皮肤中的表达低于每日最大值；CRY2、PER2和/或PER3时钟基因在皮肤中的表达低于每日最大值；皮肤中存在的神经酰胺的量低于每日最大值；和/或并入到皮肤细胞膜中的DHA的量低于每日最大值。
[0166] 本发明提供了一种式(I)化合物、其立体异构体和/或其化妆品上可接受的盐的用途，其用于对皮肤、毛发、指甲和/或粘膜进行化妆品上、非治疗性治疗和/或护理，其中所述治疗和/或护理如上所述，并且其中所述治疗和/或护理为治疗和/或护理已改变其昼夜节律的皮肤。具体地，皮肤的治疗性治疗和/或护理可以为：维持或改善皮肤的屏障功能；维持和/或改善皮肤水合作用；和/或维持和/或改善皮肤微循环。皮肤的昼夜节律可能会改变，使得JARID1A蛋白在皮肤中的表达低于每日最大值；CRY2、PER2和/或PER3时钟基因在皮肤中的表达低于每日最大值；皮肤中存在的神经酰胺的量低于每日最大值；和/或并入到皮肤细胞膜中的DHA的量低于每日最大值。皮肤可以是例如由于时差或轮班工作而改变昼夜节律的受试者的皮肤。
[0167] 本发明提供了一种式(I)化合物、其立体异构体和/或其化妆品上可接受的盐的用途，其用于对皮肤、毛发、指甲和/或粘膜进行化妆品上、非治疗性治疗和/或护理，其中所述治疗和/或护理如上所述，并且其中如果是年龄大于26岁的受试者，例如三十岁或三十岁以上、四十岁或四十岁以上的受试者，则所述治疗和/或护理是针对皮肤的。受试者可以为五十岁或五十岁以上、或六十岁或六十岁以上。具体地，皮肤的治疗性治疗和/或护理可以为：维持或改善皮肤的屏障功能；维持和/或改善皮肤水合作用；和/或维持和/或改善皮肤微循环。
[0168] 另一方面，本发明提供了一种治疗和/或护理受试者的皮肤、毛发、指甲和/或粘膜的方法，所述方法包括施用有效量的式(I)化合物、其立体异构体和/或化妆品上或药学上可接受的盐、或包括化妆品上或药学上有效量的本发明化合物、其立体异构体和/或其化妆品上可接受的盐的组合物。所述方法可以用于如上关于本发明化合物的应用(用途)所述的皮肤、毛发、指甲和/或粘膜的治疗和/或护理。具体地，治疗和/或护理的方法是皮肤的治疗和/或护理的方法。本发明的化合物或包括其的组合物的施用可以是局部的或例如透皮的。所述方法可以是化妆品上、非治疗性方法或治疗性方法。
[0169] 在一个实施例中，本发明提供了一种用于治疗和/或护理受试者的皮肤、毛发、指甲和/或粘膜的化妆品上、非治疗性方法，所述方法包括向所述受试者施用化妆品上有效量的本发明化合物、其立体异构体和/或其化妆品上可接受的盐或包括化妆品上有效量的本发明化合物、其立体异构体和/或其化妆品上可接受的盐的化妆品组合物。本发明的化合物可以存在于化妆品组合物中，例如本文所述的化妆品组合物。化妆品上、非治疗性方法可以用于治疗和/或护理如上文关于本发明的化合物的化妆品上、非治疗方法的应用(用途)所述的皮肤、毛发、指甲和/或粘膜。
[0170] 对于本发明的上述方法，局部或透皮应用可以通过离子电渗疗法、超声透入法、电穿孔、机械压力、渗透压梯度、闭塞治疗、显微注射、显微针(或显微针阵列)、通过压力进行无针注射、通过微电贴片、面膜或其任意组合执行。
[0171] 对于本发明的上述方法，根据每个受试者的需求，应用或施用的频率可以有很大的不同，建议应用从每月一次到每天十次，优选地从每周一次到每天四次，更优选地一周三次到一天两次，甚至更优选地一天一次。本发明化合物或包括本发明化合物的组合物的应用或施用可以在清晨进行。
[0172] 一方面，本发明提供了一种用作药物的式(I)化合物、其立体异构体和/或其药学上可接受的盐或包括其的药物组合物。本发明还提供了一种式(I)化合物、其立体异构体和/或其药学上可接受的盐的用途，其用于制备用于治疗或预防疾病或病症的药物。一方面，本发明提供了一种治疗疾病或病症的方法，所述方法包括向受试者施用式(I)化合物、其立体异构体和/或其药学上可接受的盐或包括其的药物组合物。
[0173] 本发明的组合物
[0174] 本发明的化合物可以通过引起化合物与受试者体内，优选地哺乳动物，优选地人体内的作用部位之间的接触的任何方式、并以含有其的组合物的形式施用。
[0175] 另一方面，本发明提供了一种化妆品或药物组合物，其包括根据式(I)的化合物、其立体异构体和/或其化妆品上或药学上可接受的盐。具体地，本发明提供了一种化妆品组合物，其包括根据式(I)的化合物、其立体异构体和/或其化妆品上可接受的盐。
[0176] 本发明的组合物通常包含至少一种化妆品上或药学上可接受的赋形剂或佐剂。具体地，本发明提供了一种化妆品组合物，其包括根据式(I)的化合物、其立体异构体和/或其化妆品上可接受的盐以及至少一种化妆品上可接受的赋形剂或佐剂。这些组合物可以通过本领域技术人员已知的常规方法来制备[“哈利化妆品学(Harry's Cosmeticology)”,第七版,(1982),Wilkinson J.B.,Moore R.J.编辑,英国埃塞克斯朗曼楼]。
[0177] 根据其氨基酸序列的性质或N-端和/或C-端的任何可能修饰，本发明的化合物在水中具有可变的溶解度。因此，本发明的化合物可以通过水溶液并入到组合物中，并且不可溶于水的那些可以溶解在化妆品上或药学上可接受的常规溶剂中，如但不限于乙醇、丙醇、异丙醇、丙二醇、甘油、丁二醇或聚乙二醇或其任何组合。
[0178] 本发明的组合物含有化妆品上或药学上(治疗上)有效量的本发明化合物。应当施用的本发明化合物的化妆品上或药学上(治疗上)有效量以及其剂量将取决于许多因素，包含年龄、患者状态、病状的性质或严重程度、有待治疗和/或护理的病症或疾病、施用途径和频率以及所用化合物的特殊性质。
[0179] 术语“化妆品上有效量”和“药学上有效量”应理解为意指无毒但足以提供所期望效果的本发明的一种或多种化合物的量。术语“药学上有效”和“治疗上有效”在本文可互换使用。本发明的化合物以化妆品上或药学上有效的浓度用于本发明的化妆品或药物组合物中以达到期望的效果；相对于组合物的总重量的量为例如：0.00000001wt％到20wt％；0.000001wt％到15wt％；0.00001wt％到10wt％；0.00005wt％到5wt％；0.00005wt％到
1wt％；0.00005wt％到0.1wt％；0.00005wt％到0.05wt％；0.00005wt％到0.01wt％；
0.00005wt％到0.005wt％；0.0005wt％到0.01wt％；或0.0005wt％到0.005wt％。本发明的化合物可以占组合物总重量的至少0.00000001、0.000001、0.00001、0.00005或
0.0005wt％。
1wt％；0.00005wt％到0.1wt％；0.00005wt％到0.05wt％；0.00005wt％到0.01wt％；
0.00005wt％到0.005wt％；0.0005wt％到0.01wt％；或0.0005wt％到0.005wt％。本发明的化合物可以占组合物总重量的至少0.00000001、0.000001、0.00001、0.00005或
0.0005wt％。
[0180] 式(I)化合物、其立体异构体、其混合物和/或其化妆品上或药学上可接受的盐也可以并入到化妆品或药物递送系统和/或缓释系统中。
[0181] 术语“递送系统”涉及与本发明化合物一起施用的稀释剂、佐剂、赋形剂或载剂。这些化妆品或药物载剂可以是液体，如水、油或表面活性剂，包含石油、动物、植物或合成来源的那些液体，例如但不限于花生油、大豆油、矿物油、芝麻油、蓖麻油、聚山梨醇酯、脱水山梨糖醇酯、醚硫酸酯、硫酸酯、甜菜碱、糖苷、麦芽糖苷、脂肪醇、壬苯醇醚、泊洛沙姆、聚氧乙烯、聚乙二醇、右旋糖、甘油、洋地黄皂苷等。本领域技术人员知道可以在可以施用本发明化合物的不同递送系统中使用的稀释剂、佐剂或赋形剂。
[0182] 术语“缓释”以常规意义关于化合物的递送系统而使用，所述递送系统提供所述化合物在一段时间期间的逐渐释放，并且优选地但非必要地，在一段时间期间具有相对恒定的化合物释放水平。
[0183] 递送或缓释系统的实例包含但不限于脂质体、混合脂质体、油质体、类脂质体、醇质体、毫米颗粒、微颗粒、纳米颗粒和固体脂质纳米颗粒、纳米结构脂质载剂、海绵状物、环糊精、囊泡、胶束、表面活性剂的混合胶束、表面活性剂-磷脂混合胶束、毫米球、微球和纳米球、脂质球、毫米胶囊、微胶囊和纳米胶囊、以及微乳剂和纳米乳剂，可以添加这些递送或缓释系统以实现有效成分的更大渗透性和/或改进其药代动力学和药效动力学特性。优选的递送或缓释系统是脂质体、表面活性剂-磷脂混合胶束、微乳剂，更优选地具有反胶束内部结构的油包水微乳剂和含有微乳剂的纳米胶囊。
[0184] 在一个实施例中，本发明提供了一种化妆品或药物组合物，其包括式(I)化合物和选自由以下组成的组的化妆品上或药学上可接受的载剂：乳膏、乳剂、凝胶、脂质体、纳米颗粒和软膏。
[0185] 所述缓释系统可以通过现有技术中已知的方法来制备，并且含有其的组合物可以例如通过以下来施用：局部或透皮施用，包含粘合剂贴剂、非粘合剂贴剂、闭塞贴剂和微电贴剂；或通过全身施用，例如但不限于口服或肠胃外途径，包含经鼻、直肠或皮下植入或注射、或直接植入或注射到特定的身体部位，并且优选地应释放相对恒定量的本发明化合物。缓释系统中含有的化合物的量将取决于例如组合物的施用部位、本发明化合物释放的动力学和持续时间、以及有待治疗和/或护理的病状、病症和/或疾病的性质。
[0187] 含有式(I)化合物、其立体异构体、其混合物和/或其化妆品上或药学上可接受的盐的组合物也可以并入到与皮肤直接接触的织物、非织造织物和医疗装置中，从而无论是由于身体水分、皮肤的pH值或体温引起的结合系统与织物、非织造织物或医疗装置的生物降解，还是由于其与身体之间的摩擦都会释放本发明的化合物。此外，本发明的化合物可以并入到用于制造与身体直接接触的服装的织物和非织造织物中。
[0188] 织物、非织造织物、服装、医疗装置和用于将化合物固定于其上的装置的实例(其中包括上述的递送系统和/或缓释系统)可以在以下文献中找到并且在现有技术中是已知的：[Schaab C.K.(1986)HAPPI,1986年5月；Nelson G.,“微囊化在纺织品中的应用(Application of microencapsulation in textiles)”,(2002),《国际制药学杂志(Int.J.Pharm.)》,242(1-2),55-62；“生物功能纺织品与皮肤(Biofunctional Textiles and the Skin)”(2006)《当前皮肤病问题(Curr.Probl.Dermatol.)》第33卷,Hipler U.C.和Elsner P.编辑,瑞士巴塞尔S.Karger AG；Malcolm R.K.等人,“从新颖自润滑硅酮生物材料中控制释放模型抗菌药物(Controlled release of a model antibacterial drug from a novel self-lubricating silicone biomaterial)”,(2004)《, 控制释放杂志(J.Cont.Release)》,97(2),313-320]。优选的织物、非织造织物、服装和医疗装置是绷带、纱布、t恤、袜子、紧身衣、内衣、腰带、手套、尿布、卫生巾、敷料、床罩、抹布、粘附贴剂、非粘附贴剂、闭塞贴剂、微电贴剂和/或面膜。
[0189] 含有本发明化合物、其立体异构体、其混合物和/或其化妆品上或药学上可接受的盐的化妆品或药物组合物可以用于局部或透皮应用的不同类型的组合物中，所述组合物任选地包含调配所期望的施用形式所必需的化妆品上或药学上可接受的赋形剂。
[0190] 可以以任何固体、液体或半固体调配物制备用于局部或透皮应用的组合物，如但不限于乳膏、多重乳剂(如但不限于水包油和/或硅酮乳剂、油包水和/或硅酮乳剂、水/油/水或水/硅酮/水型乳剂以及油/水/油或硅酮/水/硅酮型乳剂)、无水组合物、水分散体、油、乳、香膏、泡沫、乳液、凝胶、乳膏凝胶、水醇溶液、水甘醇溶液、水凝胶、搽剂、浆液、肥皂、洗发水、护发素、血清、多糖膜、软膏、摩丝、润发油、粉末、杆剂、笔剂以及喷雾剂或气雾剂(喷雾剂)，包含免洗和冲洗调配物。这些局部或透皮应用调配物可以使用本领域技术人员已知的技术并入到不同类型的固体辅料中，例如但不限于绷带、纱布、t恤、袜子、紧身衣、内衣、腰带、手套、尿布、卫生巾、敷料、床罩、抹布、粘附贴剂、非粘附贴剂、闭塞贴剂、微电贴剂或面膜，或者其可以并入到不同的化妆产品中，如化妆粉底(如液体粉底和粉饼)、卸妆液、卸妆乳、眼部遮瑕膏、眼影、口红、护唇膏、唇彩和唇粉等。
[0191] 本发明的化妆品或药物组合物可以包含增加本发明化合物的经皮吸收的药剂，例如但不限于二甲亚砜、二甲基乙酰胺、二甲基甲酰胺、表面活性剂、氮酮(1-十二烷基氮杂环庚烷-2-酮)、醇、脲、乙氧基二甘醇、丙酮、丙二醇或聚乙二醇等。此外，本发明的化妆品或药物组合物可以适用于通过离子电渗、超声促渗、电穿孔、微电贴剂、机械压力、渗透压梯度、闭塞治愈、显微注射或通过压力进行的无针注射(如通过氧气压力进行的注射)或其任何组合治疗的局部区域，以实现本发明的肽的更大渗透。应用区域将由有待治疗和/或护理的病状、病症和/或疾病的性质决定。
[0192] 在一个实施例中，本发明的化妆品或药物组合物含有通常包含在化妆品(包含化妆和润肤霜)和卫生用品(包含洁面产品)中的化学刺激物。化学刺激物是指引起皮肤刺激的化学物质。因此，本发明的化妆品或药物组合物可以含有一种或多种选自以下的化学物质：表面活性剂；氧化剂；溶剂；防腐剂；脂肪酸或酒精；化学防晒霜；乙氧基化合物和其它甲醛释放剂；香精；和/或化学换肤。在一个实施例中，本发明的化妆品或药物组合物含有一种或多种表面活性剂。
[0193] 此外，含有式(I)化合物、其立体异构体、其混合物和/或其化妆品上或药学上可接受的盐的化妆品组合物可以用于口服施用的不同类型的调配物中，优选地呈口服化妆品或药物的形式，如但不限于胶囊(包含明胶胶囊、软胶囊、硬胶囊)、片剂(包含糖衣片剂、片剂、丸剂、粉剂、颗粒剂、口香糖)、溶液、悬浮液、乳剂、糖浆、酏剂、多糖膜、果冻或明胶以及本领域技术人员已知的任何其它形式。在特定实施例中，可以将本发明的化合物并入到任何形式的功能性食品或强化食品中，如但不限于膳食棒或压缩或非压缩粉末。这些粉末可以溶解在水、苏打水、乳制品、大豆衍生物中，或者可以并入到膳食棒中。本发明的化合物可以与用于口服组合物或食品补充剂的普通赋形剂和佐剂一起调配，例如但不限于食品工业中常见的脂肪组分、水性组分、湿润剂、防腐剂、膨松剂、调味剂、香精、抗氧化剂和着色剂。
[0194] 含有式(I)化合物、其立体异构体、其混合物和/或其化妆品上或药学上可接受的盐的化妆品或药物组合物也可以通过局部或透皮途径、通过任何其它合适的途径(如口服或肠胃外途径)来施用，其中其将包含调配所期望的施用形式所必需的药学上可接受的赋形剂。在本发明的上下文中，术语“肠胃外”包含鼻、耳、眼、直肠、尿道、阴道、皮下、皮内途径、血管内注射(如静脉内、肌肉内、眼内、玻璃体内、角膜内、脊柱内、髓内、颅内、宫颈管内、脑内、脑膜内、关节内、肝内、胸腔内、气管内、鞘内和腹膜内注射)以及任何其它类似的注射或输注技术。本领域技术人员知道可以施用含有本发明化合物的化妆品或药物组合物的不同方式。
[0195] 在本发明所述的化妆品或药物组合物中包含的化妆品上或药学上可接受的佐剂中是化妆品或药物组合物中常用的其它成分，例如但不限于改善或恢复皮肤屏障功能的其它药剂、保护天然皮肤微生物组的药剂、改善细胞能量代谢的药剂、改善或保护线粒体功能的药剂、抗疲劳剂、缺乏夜蛋白(nocturnin)调节剂、促进线粒体代谢的药剂、增强脂联素释放的药剂、促进细胞间通讯的药剂、增加皮肤细胞中的连接蛋白的药剂、促进皮肤自我更新的药剂、防止皮肤增生性瘢痕形成的药剂、DNA保护剂、DNA修复剂、干细胞保护剂、可重新活化表皮干细胞池的药剂、抑制神经元胞外分泌的药剂、抗胆碱能剂、抑制肌肉收缩的药剂、抗衰老剂、抗皱剂、止汗剂、抗炎和/或止痛剂、止痒剂、镇静剂、麻醉剂、乙酰胆碱受体聚集抑制剂、乙酰胆碱酯酶抑制剂、皮肤松弛剂、黑色素合成刺激或抑制剂、美白或脱色剂、色素剂、自晒黑剂、NO合酶抑制剂、5α-还原酶抑制剂、赖氨酰基和/或脯氨酰羟化酶抑制剂、抗氧化剂、自由基清除剂和/或抗大气污染剂、活性羰基物质清除剂、抗糖基化剂、解毒剂、抗组胺剂、抗病毒剂、抗寄生虫剂、乳化剂、润肤剂、有机溶剂、液体推进剂、皮肤调理剂、润湿剂、水分保留物质、α-羟基酸、β-羟基酸、保湿剂、水解表皮酶、维生素、氨基酸、蛋白质、色素或着色剂、染料、生物聚合物、胶凝聚合物、增稠剂、表面活性剂、软化剂、乳化剂、粘合剂、防腐剂、能够减少或治疗眼睛下方眼袋的药剂、去角质剂、角质层分离剂、脱皮剂、抗微生物剂、抗真菌剂、抑真菌剂、杀菌剂、抑菌剂、刺激皮肤或表皮大分子合成和/或能够抑制或防止其降解的药剂、胶原蛋白合成刺激剂、弹性蛋白合成-刺激剂、核心蛋白聚糖合成刺激剂、层粘连蛋白合成刺激剂、防御素合成刺激剂、伴侣合成刺激剂、cAMP合成刺激剂、AQP-3调节剂、水通道蛋白合成刺激剂、水通道蛋白家族蛋白、透明质酸合成刺激剂、糖胺聚糖合成刺激剂、纤连蛋白合成刺激剂、沉默调节蛋白合成刺激剂、沉默调节蛋白活化剂、热休克蛋白、热休克蛋白合成刺激剂、刺激角质层、神经酰胺和脂肪酸的脂质和组分合成的药剂、抑制胶原蛋白降解的药剂、防止或减少氨甲酰化的药剂、赖氨酰羟化酶调节剂、改善胶原蛋白纤维交联的药剂、抑制基质金属蛋白酶的药剂、抑制弹性蛋白降解的要药剂、抑制丝氨酸蛋白酶(如激肽释放酶、弹性蛋白酶或组织蛋白酶)的药剂、刺激成纤维细胞增殖的药剂、刺激角化细胞增殖的药剂、刺激脂肪细胞增殖的药剂、刺激黑素细胞增殖的药剂、刺激角质形成细胞分化的药剂、刺激或延迟脂肪细胞分化的药剂、抗角化过度药剂、粉刺剂、抗牛皮癣药剂、稳定剂、用于治疗和/或护理敏感皮肤的药剂、紧肤剂、抗拉伸标记剂、粘合剂、调节皮脂产生的药剂、脂肪分解剂或刺激脂肪分解的药剂、成脂剂、调节PGC-1α表达的药剂、调节PPARγ活性的药剂、增加或降低脂肪细胞的甘油三酸酯含量的药剂、抗脂肪团药剂、抑制PAR-2活性的药剂、刺激愈合的药剂、协助愈合药剂、刺激上皮再生的药剂、协助上皮再生的药剂、细胞因子生长药剂、作用于毛细血管循环和/或微循环的药剂、刺激血管生成的药剂、抑制血管通透性的药剂、静脉紧张剂(venotonic agent)、作用于细胞代谢的药剂、改善真皮-表皮连接的药剂、诱导毛发生长的药剂、毛发生长抑制或阻滞剂、延缓脱发的药剂、防腐剂、香水、化妆品和/或吸收剂和/或体臭掩蔽除臭剂、螯合剂、植物提取物、精油、海洋提取物、通过生物技术方法获得的药剂、矿物盐、细胞提取物、防晒剂和抗紫外线A和/或B射线和/或红外A射线的有机或矿物光保护剂或其混合物，条件是其与组合物的其余组分以及具体地与本发明的化合物在物理上和化学上相容。此外，这些另外成分的性质不应不可接受地改变本发明化合物的益处。这些另外成分的性质可以是合成的或天然的(如植物提取物)，或来自生物技术过程或来自合成程序和生物技术过程的组合。其它实例可以在《CTFA国际化妆品成分词典和手册(CTFAInternational Cosmetic Ingredient Dictionary&Handbook)》,第12版(2008)中找到。在本发明的上下文中，生物技术过程应理解为是在生物体或其一部分中产生活性成分或其一部分活性成分的任何过程。
[0196] 在一个实施例中，本发明提供了一种化妆品或药物组合物，其包括式(I)化合物和药学上或化妆品上有效量的一种或多种选自由以下组成的组的佐剂：(ⅰ)选自由润湿剂、保持水分的物质、保湿剂和润肤剂形成的化妆品或药物佐剂的组的化合物、油或蜡；(ii)具有抗水肿特性并改善血管渗透性/微循环的化合物；(iii)改善细胞能量代谢、使细胞恢复活力、增强活力、增加细胞的供能水平或增加细胞中的能量水平或ATP产生的化合物；(iv)具有改善皮肤状况的抗疲劳特性的化合物、或改善皮肤外观和活力从而改善黑眼圈、疲劳特征、暗沉肤色、肤色不均和干燥的药剂；(ⅴ)反应性羰基物质的清除剂、自由基清除剂和/或抗糖化药剂、解毒剂、抗氧化剂和/或抗污染剂；(vi)改善皮肤屏障功能的化合物、或通过减少经皮水分流失(TEWL)中和皮肤干燥的药剂、或保护皮肤细胞层的完整性的药剂或改善脂质或防御皮肤屏障的药剂；(vii)可以通过调节线粒体复合体的活性而产生抗衰老作用、随着年龄增长改善线粒体功能、或防止皮肤由于线粒体复合体II活性增强而出现的皮肤衰老或降低线粒体复合体I活性的化合物。
[0197] 本发明的化妆品或药物组合物可以包括化妆品上或药学上有效量的选自由润湿剂、保持水分的物质、保湿剂和润肤剂形成的化妆品或药物佐剂的组的至少一种化合物、油或蜡，如但不限于多元醇和聚醚，如甘油、乙基己基甘油、辛二醇、戊二醇、丁二醇、丙二醇以及其衍生物、三甘醇、聚乙二醇、Glycereth-26、Sorbeth-30；泛醇；焦谷氨酸以及其盐或衍生物；氨基酸，如丝氨酸、脯氨酸、丙氨酸、谷氨酸或精氨酸；依克多因和其衍生物；N-(2-羟基乙基)乙酰胺；吡咯烷酮羧酸(PCA)；N-月桂酰基-吡咯烷酮羧酸；N-月桂酰基-L-赖氨酸；N-α-苯甲酰基-L-精氨酸；脲；肌酸；α-和β-羟基酸，如乳酸、乙醇酸、苹果酸、柠檬酸、酒石酸或水杨酸以及其盐；聚甘油基丙烯酸酯(polyglyceryl acrilate)；糖和多糖，如葡萄糖、异构糖、山梨糖醇、季戊四醇、肌醇、木糖醇、山梨糖醇、海藻糖以及其衍生物、葡糖醛酸钠、角叉菜胶(carrageenans)(角叉菜(Chondrus crispus))或壳聚糖；糖胺聚糖，如透明质酸和其衍生物；呈任何形式的芦荟；蜂蜜；可溶性胶原蛋白；卵磷脂和磷脂酰胆碱；神经酰胺；胆固醇和其酯；生育酚和其酯，如生育酚乙酸酯或生育酚亚油酸酯；长链醇，如鲸蜡硬脂醇、硬脂醇、鲸蜡醇、油醇、异鲸蜡醇或十八烷-2-醇；长链醇酯，如月桂乳酸酯、肉豆蔻醇乙酸酯或C12-C15烷基苯甲酸酯；脂肪酸，如硬脂酸、异硬脂酸或棕榈酸；多不饱和脂肪酸(PUFA)；脱水山梨醇，如脱水山梨醇二硬脂酸酯；甘油酯，如单蓖麻醇酸甘油酯、单硬脂酸甘油酯、甘油硬脂酸柠檬酸酯或辛酸和癸酸甘油三酸酯；蔗糖酯，如蔗糖棕榈酸酯或蔗糖油酸酯；丁二醇酯，如二辛酸酯和二癸酸酯；脂肪酸酯，如异硬脂酸异丙酯、棕榈酸异丁酯、异鲸蜡醇硬脂酸酯、月桂酸异丙酯、月桂酸己酯、油酸癸酯、鲸蜡醇棕榈酸酯、癸二酸二-正丁酯、肉豆蔻酸异丙酯、棕榈酸异丙酯、硬脂酸异丙酯、硬脂酸丁酯、肉豆蔻酸丁酯、亚油酸异丙酯、棕榈酸2-乙基己酯、椰油酸2-乙基己酯、油酸癸酯、肉豆蔻酸肉豆蔻酯；角鲨烯(squalene)；貂油；羊毛脂和其衍生物；乙酰化羊毛脂醇；硅酮衍生物，如环甲硅酮、二甲硅酮或二甲基聚硅氧烷；
由利普泰(Lipotec)/路博润(Lubrizol)销售的 海洋成分[INCI：水(Aqua)、
假交替单胞菌发酵提取物、辛甘醇]、 分子膜[INCI：甘油、假交替单胞菌发酵
提取物、黄原胶、脯氨酸、丙氨酸、丝氨酸、乙基己基甘油、辛甘醇]、 肽[INCI：
二肽乙酰基-3-氨基己酸酯]、 海洋成分[INCI：假交替单胞菌发酵提取物]或
肽[INCI：乙酰基六肽37]；由奥尔本米乐(Alban Muller)销售的
ER[INCI：甘油、石榴果实提取物]、 [INCI：粉团扇藻叶状体提取物]或
Phytoamine Biocomplexe[INCI：聚合草提取物、车前子卵形籽提取物、水解小麦蛋白、谷氨酸、脯氨酸、亮氨酸、丝氨酸]；由Aqua Bio Technology销售的DermaclarineTM[INCI：水解鸡蛋蛋白、蛋白酶]；由阿尔赫(Arch)/龙沙(Lonza)销售的Bio-Plex NMF[INCI：钠PCA、乳酸、乳酸钠、脲、胶原蛋白氨基酸]、 [INCI:脲、酵母氨基酸、海藻糖、肌醇、牛磺酸、甜菜碱]或ReGeniStemTM Red Rice[INCI:臭氧化的水稻(大米)愈伤组织培养物提取物]；由Lucas Meyer Cosmetics/Unipex销售的HydralphatineTM Asia[INCI:氢化淀粉水解物、泛醇、大佛肚竹芽提取物、莲花提取物、睡莲根提取物]， [INCI:糖胺聚糖、菌核
胶]、HydraporineTM[INCI:甜菜碱、氢化卵磷脂、蜂蜜、果胶]或Exo-HTM[INCI:交替单细胞发酵提取物]；由巴斯夫(BASF)销售的PatcH2OTM[INCI:海藻糖、脲、丝氨酸、聚丙烯酸甘油酯、海藻酸钠、透明质酸钠、支链淀粉]；由BioSpectrum销售的Cellike[INCI:辛酸/癸酸甘油三酯、氢化卵磷脂、乳油木(牛油果)黄油、植物甾醇、甘油辛酸酯、神经酰胺NP]；由Chemyunion销售的 [INCI:Piptadenia Colubrina Peel提取物]；由CLR销售的DayMoistTM
CLR[INCI:水解玉米淀粉、甜菜根提取物]；由Codif销售的Hydranov[INCI:角叉菜胶钠、海盐]或Hydalalinol[INCI:水杨提取物、辛酸/癸酸甘油三酯]；由Coletica/Engelhard/巴斯夫销售的Marine Filling SpheresTM[INCI:季戊四醇四异硬脂酸酯、二氧化硅二甲基甲硅酸盐、软骨素硫酸钠、缺端胶原]；由赢创(Evonik)销售的 [INCI:透明质酸钠]或[INCI:鲸蜡硬脂-25、鲸蜡醇、山嵛酸、胆固醇、神经酰胺NP、神经酰胺NS、神
经酰胺EOS、神经酰胺EOP、神经酰胺AP、Caprooyl植物鞘氨醇、Caprooyl鞘氨醇]；由斗山(Doosan)销售的DS-Sphyngomielin M[INCI:鞘脂]；由DSM销售的Syn-UpTM[INCI:苄基磺酰基D-丝氨酰高苯基丙氨酸酰胺基苯甲酰胺乙酸酯]；由Laboratoires Expanscience销售的[INCI:水解合欢籽提取物]或 [INCI:向日葵(Helianthus Annuus)(向
日葵)籽油不皂化物]；由爱西美(Exsymol)销售的 [INCI:爱尔兰海藻提取物]或
[INCI:谷氨酰胺基乙基吲哚]；由Ganeden Biotech销售的BonicelTM[INCI:芽孢杆菌发酵产物]；由嘉法狮(Gattefossé)销售的 Renew[INCI:柳杉芽提取物]；由
Greentech销售的 [INCI:乳杆菌发酵裂解物]；由Infinitec销售的Aqua Shuttle
[INCI:山梨糖醇、掌状海带提取物、硅藻土]；由Vincience/ISP/Ashland销售的
AquarizeTMIS[INCI:水解大米提取物]或Aqua-OsmolineTM[INCI:长角豆(角豆)籽提取物]；
TM
由L.Serobiologiques/科宁(Cognis)/巴斯夫(BASF)销售的Aqu'activ [INCI:山嵛醇、油酸甘油酯、椰油酰胺MIPA]、 HP[INCI:羊角豆籽提取物]、
[INCI:决明子沙枣种子多糖]、 CA[INCI:决明子沙枣种子多糖]、，
[INCI:辛基十二烷醇、野芒果内核脂、氢化椰子甘油酯]、 [INCI:辛基十二烷
醇、二十丙酸酯、生育酚乙酸酯、维生素A棕榈酸酯、亚油酸乙酯、亚油酸]或 SU[INCI:山梨糖醇、海藻提取物、Chrondrus Crispus(角叉菜胶)、墨角藻提取物、褐藻胶]；由Lipochemicals销售的Lipocare HA/EC[INCI:透明质酸钠、紫锥花]；由Lipoid Kosmetik销售的Hydro-GainTM[INCI:低芥酸菜子油、氢化卵磷脂、仙人掌果籽油，桦木桦树皮提取物]；
由市售由默克(Merck)销售的 RenouMer[INCI:海藻提取物]；由Mibelle销售的
AquaCacteen[INCI:梨果仙人掌茎提取物、Snow Algae Powder[INCI:Coenochloris Signiensis提取物]或Trimoist KMF[INCI:硬脂酰乳酸钠、鲸蜡醇、欧鲁斯油/植物油、维生素E醋酸酯、黑大豆(大豆)甾醇、羧甲基贝他葡聚糖钠、乳酸钠、肌肽、乳酸]；由Penta pharm/DSM销售的 Nectapure[INCI:百里香(百里香)花/叶提取物、大叶醉鱼草
提取物]、Hyasol BT[INCI:透明质酸钠]、 [INCI:异构糖]或
[INCI:长角豆(角豆)胶]；由Provital销售的Hydromanil[INCI:水解或苏木属胶、或苏木属胶]；由Rahn销售的 [INCI:糙伏毛燕麦籽提取物]、 -Hydro[INCI:
苹果(苹果)提取物、果胶、小球藻/白羽扇豆蛋白发酵、 -Men[INCI:牛磺酸、小
球藻/白羽扇豆蛋白发酵、刺五加(刺五加)根提取物]、 -LMF[INCI:欧亚多足蕨
根茎提取物、冰岛衣(冰岛穆斯)菌体提取物、中位泥炭藓提取物]、 [INCI:密
罗木提取物、抗坏血酸]或 [INCI:谷氨酰胺、癸基葡糖苷、苯乙醇、灰白岩蔷薇
花/叶/茎提取物、绞股蓝叶/茎提取物]；由Sederma/Croda销售的AqualanceTM[INCI:赤藓糖醇、盐酸苦橙碱]、HydraprotectolTM[INCI:聚甲基丙烯酸甘油酯、无油酸、酵母提取物(酵母TM TM
萃取)、糖蛋白]、Moist 24 [INCI:白茅根提取物]、Optim Hyal [INCI:水解酵母提取物、鲸蜡基羟乙基、聚葡糖醛酸]、 4[INCI:甘油、丙烯酸酯/丙烯酸C10-30烷基酯交
联聚合物]、RenovageTM[INCI:辛酸/癸酸甘油三酯、替普瑞酮]、RevidrateTM[INCI:棕榈酸TM
乙基己、山梨醇油酸酯、山梨糖醇月桂酸酯、苹果酸肉豆蔻酰基酸膦酸酯]、Subliskin[INCI:草木樨中华根瘤菌发酵产物滤液、十六烷基羟乙基纤维素]；AquaxylTM[INCI:木糖葡糖苷羟基木糖醇、木糖醇]或SepicalmTMS[INCI:椰油酰氨基酸钠、肌氨酸、天冬氨酸钾、天冬氨酸镁]；由Silab销售的 [INCI:麦冬根提取物]；由Soliance销售的
[INCI:水解β-葡聚糖]、Hydrintense[INCI:紫菜卟啉提取物]或RenovHyal[INCI:透明质酸钠]；由德之温(Symrise)销售的SymLiftTM[INCI:海藻糖、β-葡聚糖、大麦种子提取物、透明质酸钠]；凡士林矿物油；矿物蜡和合成蜡；蜂蜡(白蜂蜡)；石蜡；或植物来源的蜡和油，如小烛树蜡(小烛树)、巴西棕榈蜡(巴黎棕榈)、乳木果油(Butirospermum parkii)、可可脂(可可)、蓖麻油(蓖麻)、向日葵油(向日葵)、橄榄油(油橄榄)、椰子油(椰子)、棕榈油(Elaeis guineensis)、小麦胚芽油(小麦萃取油)、甜杏仁油(Prunus amygdalus dulces)、麝香玫瑰籽油(麝香玫瑰)、野生大豆油(野大豆)、葡萄籽油(葡萄)、金盏花油(金盏花)、霍霍巴油(Simmonsis chinensis)、芒果油(芒果)、鳄梨油(酪梨油)等和/或其混合物。
由利普泰(Lipotec)/路博润(Lubrizol)销售的 海洋成分[INCI：水(Aqua)、
假交替单胞菌发酵提取物、辛甘醇]、 分子膜[INCI：甘油、假交替单胞菌发酵
提取物、黄原胶、脯氨酸、丙氨酸、丝氨酸、乙基己基甘油、辛甘醇]、 肽[INCI：
二肽乙酰基-3-氨基己酸酯]、 海洋成分[INCI：假交替单胞菌发酵提取物]或
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ER[INCI：甘油、石榴果实提取物]、 [INCI：粉团扇藻叶状体提取物]或
Phytoamine Biocomplexe[INCI：聚合草提取物、车前子卵形籽提取物、水解小麦蛋白、谷氨酸、脯氨酸、亮氨酸、丝氨酸]；由Aqua Bio Technology销售的DermaclarineTM[INCI：水解鸡蛋蛋白、蛋白酶]；由阿尔赫(Arch)/龙沙(Lonza)销售的Bio-Plex NMF[INCI：钠PCA、乳酸、乳酸钠、脲、胶原蛋白氨基酸]、 [INCI:脲、酵母氨基酸、海藻糖、肌醇、牛磺酸、甜菜碱]或ReGeniStemTM Red Rice[INCI:臭氧化的水稻(大米)愈伤组织培养物提取物]；由Lucas Meyer Cosmetics/Unipex销售的HydralphatineTM Asia[INCI:氢化淀粉水解物、泛醇、大佛肚竹芽提取物、莲花提取物、睡莲根提取物]， [INCI:糖胺聚糖、菌核
胶]、HydraporineTM[INCI:甜菜碱、氢化卵磷脂、蜂蜜、果胶]或Exo-HTM[INCI:交替单细胞发酵提取物]；由巴斯夫(BASF)销售的PatcH2OTM[INCI:海藻糖、脲、丝氨酸、聚丙烯酸甘油酯、海藻酸钠、透明质酸钠、支链淀粉]；由BioSpectrum销售的Cellike[INCI:辛酸/癸酸甘油三酯、氢化卵磷脂、乳油木(牛油果)黄油、植物甾醇、甘油辛酸酯、神经酰胺NP]；由Chemyunion销售的 [INCI:Piptadenia Colubrina Peel提取物]；由CLR销售的DayMoistTM
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经酰胺EOS、神经酰胺EOP、神经酰胺AP、Caprooyl植物鞘氨醇、Caprooyl鞘氨醇]；由斗山(Doosan)销售的DS-Sphyngomielin M[INCI:鞘脂]；由DSM销售的Syn-UpTM[INCI:苄基磺酰基D-丝氨酰高苯基丙氨酸酰胺基苯甲酰胺乙酸酯]；由Laboratoires Expanscience销售的[INCI:水解合欢籽提取物]或 [INCI:向日葵(Helianthus Annuus)(向
日葵)籽油不皂化物]；由爱西美(Exsymol)销售的 [INCI:爱尔兰海藻提取物]或
[INCI:谷氨酰胺基乙基吲哚]；由Ganeden Biotech销售的BonicelTM[INCI:芽孢杆菌发酵产物]；由嘉法狮(Gattefossé)销售的 Renew[INCI:柳杉芽提取物]；由
Greentech销售的 [INCI:乳杆菌发酵裂解物]；由Infinitec销售的Aqua Shuttle
[INCI:山梨糖醇、掌状海带提取物、硅藻土]；由Vincience/ISP/Ashland销售的
AquarizeTMIS[INCI:水解大米提取物]或Aqua-OsmolineTM[INCI:长角豆(角豆)籽提取物]；
TM
由L.Serobiologiques/科宁(Cognis)/巴斯夫(BASF)销售的Aqu'activ [INCI:山嵛醇、油酸甘油酯、椰油酰胺MIPA]、 HP[INCI:羊角豆籽提取物]、
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[INCI:辛基十二烷醇、野芒果内核脂、氢化椰子甘油酯]、 [INCI:辛基十二烷
醇、二十丙酸酯、生育酚乙酸酯、维生素A棕榈酸酯、亚油酸乙酯、亚油酸]或 SU[INCI:山梨糖醇、海藻提取物、Chrondrus Crispus(角叉菜胶)、墨角藻提取物、褐藻胶]；由Lipochemicals销售的Lipocare HA/EC[INCI:透明质酸钠、紫锥花]；由Lipoid Kosmetik销售的Hydro-GainTM[INCI:低芥酸菜子油、氢化卵磷脂、仙人掌果籽油，桦木桦树皮提取物]；
由市售由默克(Merck)销售的 RenouMer[INCI:海藻提取物]；由Mibelle销售的
AquaCacteen[INCI:梨果仙人掌茎提取物、Snow Algae Powder[INCI:Coenochloris Signiensis提取物]或Trimoist KMF[INCI:硬脂酰乳酸钠、鲸蜡醇、欧鲁斯油/植物油、维生素E醋酸酯、黑大豆(大豆)甾醇、羧甲基贝他葡聚糖钠、乳酸钠、肌肽、乳酸]；由Penta pharm/DSM销售的 Nectapure[INCI:百里香(百里香)花/叶提取物、大叶醉鱼草
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[INCI:水解β-葡聚糖]、Hydrintense[INCI:紫菜卟啉提取物]或RenovHyal[INCI:透明质酸钠]；由德之温(Symrise)销售的SymLiftTM[INCI:海藻糖、β-葡聚糖、大麦种子提取物、透明质酸钠]；凡士林矿物油；矿物蜡和合成蜡；蜂蜡(白蜂蜡)；石蜡；或植物来源的蜡和油，如小烛树蜡(小烛树)、巴西棕榈蜡(巴黎棕榈)、乳木果油(Butirospermum parkii)、可可脂(可可)、蓖麻油(蓖麻)、向日葵油(向日葵)、橄榄油(油橄榄)、椰子油(椰子)、棕榈油(Elaeis guineensis)、小麦胚芽油(小麦萃取油)、甜杏仁油(Prunus amygdalus dulces)、麝香玫瑰籽油(麝香玫瑰)、野生大豆油(野大豆)、葡萄籽油(葡萄)、金盏花油(金盏花)、霍霍巴油(Simmonsis chinensis)、芒果油(芒果)、鳄梨油(酪梨油)等和/或其混合物。
[0198] 本发明的组合物可以包括至少一种具有抗水肿特性并改善血管渗透性/微循环的另外的化合物，例如但不限于选自由利普泰(Lipotec)/路博润(Lubrizol)销售的EyedelineTM海洋成分[INCI:丁二醇、水(水)、浮游生物提取物]、 肽[INCI:水
(水)、丁二醇、四肽乙酰-5]；由Provital销售的Legactif[INCI:红景天根提取物、柠檬(柠檬)皮提取物、毛果一枝花(一枝黄花)提取物]；由Sederma/Croda销售的LeganceTM[INCI:红球姜提取物]和Eyeliss[INCI：橙皮苷甲基查尔酮、二肽-2、棕榈酰四肽-7]；由Greentech销售的 [INCI：Prophyridium Cruentum渗出物]；由Sérobiologiques/科宁/巴斯夫销售的Biophytex[INCI：七叶树素、刺果红根提取物、甘草酸铵、积雪草提取物、水解酵母蛋白、金盏花提取物]；由Gattefossé销售的Cytobiol Lumin-Eye[INCI：烟酰胺、Franxius Excelsior树皮提取物、硅烷三醇柠檬酸钾]；由DSM销售的 -Age[INCI：水解大米蛋白、氧化还原酶、黑大豆(大豆)蛋白质]；由Active Concepts销售的AC Dermapeptide Warming PF[INCI：乳酸杆菌/辣椒果实发酵液、亮豆蔻/萝卜根发酵液]等和/或其混合物。
(水)、丁二醇、四肽乙酰-5]；由Provital销售的Legactif[INCI:红景天根提取物、柠檬(柠檬)皮提取物、毛果一枝花(一枝黄花)提取物]；由Sederma/Croda销售的LeganceTM[INCI:红球姜提取物]和Eyeliss[INCI：橙皮苷甲基查尔酮、二肽-2、棕榈酰四肽-7]；由Greentech销售的 [INCI：Prophyridium Cruentum渗出物]；由Sérobiologiques/科宁/巴斯夫销售的Biophytex[INCI：七叶树素、刺果红根提取物、甘草酸铵、积雪草提取物、水解酵母蛋白、金盏花提取物]；由Gattefossé销售的Cytobiol Lumin-Eye[INCI：烟酰胺、Franxius Excelsior树皮提取物、硅烷三醇柠檬酸钾]；由DSM销售的 -Age[INCI：水解大米蛋白、氧化还原酶、黑大豆(大豆)蛋白质]；由Active Concepts销售的AC Dermapeptide Warming PF[INCI：乳酸杆菌/辣椒果实发酵液、亮豆蔻/萝卜根发酵液]等和/或其混合物。
[0199] 本发明的化妆品或药物组合物可以包括化妆品上或药学上有效量的至少一种化合物，所述至少一种化合物改善细胞能量代谢、使细胞恢复活力、增加细胞活力、增加细胞的供能水平或增加细胞中的ATP的产生的化合物，例如但不限于选自由亚什兰(Ashland)销售的ChondricareTM为生物功能性的[INCI：水、丙二醇、六肽-42]；由DSM销售的 -ctive[INCI：水、海藻提取物]或 PF[INCI：糖蛋白、谷氨酸、缬氨酸、苏氨酸]；由Sederma销售的ChronodynTM[INCI：眼虫藻提取物、甘油]；由Seppic销售的SepitonicTM M3[INCI：天冬氨酸镁、葡萄糖酸锌、葡萄糖酸铜]；由Naolys销售的OvernightEnhance[MJ+C][INCI：紫茉莉愈伤组织提取物]；由亚什兰销售的SignalineTM S[INCI：欧洲油橄榄(橄榄油)果油、西蒙得尼亚(荷荷巴油)种子提取物]；等和/或其混合物。
[0200] 本发明的组合物可以包括至少一种具有改善皮肤状况的抗疲劳特性的另外的化合物、或改善皮肤外观和活力的试剂从而改善黑眼圈、疲倦特征、暗沉肤色、暗沉和干燥的外观的药剂，例如但不限于选自由利普泰/路博润销售的VilasteneTM功能成分[INCI：水(水)、赖氨酸盐酸、卵磷脂、辛乙二醇、苯氧基乙醇、三肽-10瓜氨酸、卡波姆、氢氧化钠]或功能成分[INCI：水(水)、丙二醇、赖氨酸盐酸盐、卵磷脂、苯氧乙醇、三肽9瓜氨酸]；由Soliance销售的StimulHyal[INCI：酮葡萄糖酸钙]；由Rahn销售的V.I.P.[INCI：水、小球藻/白羽扇豆蛋白发酵、菠萝汁红花、迷迭香提取物]；由Sederma销售的ChronodynTM[INCI：眼虫藻提取物、甘油]；由Silab销售的 [INCI：乌药根提
取物]；由Hallstar销售的Life [INCI：菜心籽油(和)聚甘油-3-二异硬脂酸
酯(和)甜叶菊提取物(和)聚伞岩蔷薇提取物]等和/或其混合物。
取物]；由Hallstar销售的Life [INCI：菜心籽油(和)聚甘油-3-二异硬脂酸
酯(和)甜叶菊提取物(和)聚伞岩蔷薇提取物]等和/或其混合物。
[0201] 所述组合物可以进一步包括反应性羰基物质清除剂、自由基清除剂和/或抗糖化剂、解毒剂、抗氧化剂和/或抗污染剂，例如但不限于选自由肌肽和其衍生物形成的组、由Vincience/ISP/亚什兰销售的GHK[INCI：三肽-1]、Quintescine IS[INCI：Dipeptide-4]或BlumilightTMBiofunctional[INCI：水/水(和)丁二醇(和)可可瘤(可可)种子提取物]；由Atrium Innovations/Lucas Meyer Cosmetics销售的Melitane[INCI：右旋糖酐、乙酰六肽-1]、Homeoxy[INCI：扁浒苔、棕榈叶提取物]或Lanatellis[INCI：蝶形印度菊提取物、山茶叶提取物]或Exo-PTM[INCI：水(和)乙二醇(和)交替单胞菌发酵产物提取物]；由CLR销售的Protectan[INCI：乳酸菌发酵溶胞产物]；由Codif销售的Phycosaccharide[INCI：水解海藻糖、硫酸镁、硫酸锰]或Algowhite[INCI：泡叶藻提取物]；由Pentapharm/DSM销售的Preregen[INCI：野生大豆(大豆)蛋白、氧化还原酶]、Edelweiss GC[INCI：尖顶草提取物]、Lipogard[INCI：角鲨烷、泛醌]、Nectapure[INCI：大叶醉鱼草提取物、胸腺寻常型提取物]、Alpaflor Nectapure[INCI：大叶醉鱼草提取物、胸腺寻常型提取物]或Dismutin-BT[INCI：超氧化物歧化酶]；由Evonik Goldschmidt销售的TEGO Turmerone[INCI：姜黄提取物]；由Expanscience Laboratoires销售的Hierogaline[INCI：普通小麦(小麦)胚芽油不皂化物、芝麻芝麻油不皂化物]；由爱西美销售的Glistin[INCI：谷氨酰胺基乙基吲哚]、
Glutrapeptide[INCI：焦谷氨酰胺基乙基吲哚]、Algisium C[INCI：甲基硅烷醇锰酸酯]、Silysin C[INCI：硅烷三醇赖氨酸酸酯]、Exsy-Arl[INCI：脯氨酰胺乙基咪唑]或OTZ-10[INCI：Oxothiazolidine]；由嘉芙诗(Gattefossé)销售的Gatuline Skin-Repair Bio[INCI：刺槐花/叶/茎提取物]；由利普泰/路博润销售的 肽[INCI：
Diaminopropionoyl三肽-33]、 功能成分[INCI：水解小麦蛋白、水解大豆蛋白、三肽-1]、 合成分子[INCI：二甲基甲氧二氢吡喃]、 肽
[INCI：乙酰基四肽-22]、 肽[INCI：乙酰基二肽-3氨基己酸酯]或
PollushieldTM功能成分[INCI：己二酸二异丙酯、卵磷脂、丙烯酸/丙烯酰胺基甲基丙烷磺酸共聚物、二甲基甲氧基苯并二氢吡喃醇、黄原胶]；由Greentech销售的Setiline[INCI：水解胡芦巴籽提取物]或PhytoBioactive Soliberine[INCI：水、丙二醇、密蒙花花提取物]；由巴斯夫销售的Sunactyl[INCI：甘露醇、豌豆提取物、盐酸组氨酸、精氨酸、环糊精、糊精、酵母提取物、乙酰基酪氨酸、盐酸吡哆醇、塞内加尔树皮提取物、烟酰胺、腺嘌呤二核苷酸、琥珀酸二钠、天冬氨酸]：Imidinyl[INCI：酸豆子多糖类]或Phystrogene[INCI：锦葵(锦葵)提取物、黄原胶]或Purisoft[INCI：辣木蕨类植物种子提取物]；由Mibelle Biochemistry销售的AquaCacteen[INCI：仙人掌茎提取物]、Trimoist(KMF)[INCI：硬脂酰乳酸钠、来醇、植物油、生育酚乙酸酯、甘氨酸大豆固醇、乳酸钠、羧甲基贝他葡聚糖钠、肌肽]、MelanoBronze[INCI：穗花牡荆提取物(蒙克胡椒浆果提取物(植物内啡肽)、乙酰酪氨酸]、CM-Glucan[INCI：羧甲基甜菜碱钠]、SunActin[INCI：向日葵(向日葵)新芽提取物、生育酚、卵磷脂]、GSP-T skin[INCI：PEG-40氢化蓖麻油、葡萄(葡萄)种子提取物]或Detoxophane[INCI：独行菜新芽提取物、卵磷脂]；由Sederma/Croda销售的Bacocalmine[INCI：PEG-8、假马齿苋提取物、羟乙基纤维素]、Kombuchka[INCI：酵母/木糖黑茶发酵液、羟乙基纤维素]、Citystem[INCI：甘油、大黄酮提取物]或Prodizia[INCI：合欢提取物]；由Seppic销售的Extramel C[INCI：羟丙基三甲基氯化铵麦芽糊精交联聚合物、甜瓜(瓜)果实提取物]；由Silab销售的Defensine[INCI：普通小麦胚芽提取物]、Antiglyskin[INCI：向日葵籽提取物]、[INCI：西洋蒲公英(蒲公英)提取物]或 [INCI：水、丁二醇、乳油木
(乳木果)籽饼提取物]；由Sinergia销售的ATP 23[INCI：Azeloyl Tetrapeptide-23]；由Solabia销售的Glycofilm[INCI：生物糖胶-4]；由Active Concepts销售的AC Cinnamon Liposome[INCI：水、肉桂肉桂皮提取物、磷脂、乳酸菌发酵产物]、AC Moisturezyme Protect[INCI：柑橘(橘子)果实提取物、芦荟叶提取物]、ACB蘑菇提取物SM PF[INCI：乳酸菌/灵芝(灵芝)提取物/香菇(香菇)提取物发酵滤液和乳酸菌发酵产物]、ACB橄榄叶提取物PF[INCI：乳酸菌/橄榄叶发酵液]、ACB马齿苋Bioferment PF[INCI：乳酸菌/马齿发酵提取物、明串珠菌/萝卜根滤液]、ACB番茄Bioferment PF[INCI：乳酸菌/西红柿果实发酵提取物、明串珠菌/萝卜根滤液]或AC蜂王浆提取物[INCI：丁二醇、10-羟基癸酸、癸二酸、1,10-癸二醇]；由Biolie销售的Citruskin[INCI：柑桔类果实提取物、丙二醇]或Paradisyl[INCI：葡萄柚果实提取物、丙二醇]；由艾比欧(ID Bio)销售的Sens'flower[INCI：丙二醇、水、番红花花提取物、苯甲酸钠、山梨酸钾]；由Crodarom销售的Crodarom Elfe Flower[INCI：甘油、水、淫羊藿]或Phytessence Peach Flower[INCI：甘油、水、桃花提取物]；由Provital销售的Lingostem[INCI：水、甘油、越桔果果实提取物、黄原胶、苯甲酸钠、柠檬酸、葡糖酸内酯、葡糖酸钙]；由Naturex销售的Peppermint LG[INCI：甘油、水、胡椒薄荷叶提取物]；由RAHN销售的Radicare[INCI：水、梅利莎厚朴叶提取物]；由Naolys销售的Refine Ginger[INCI：姜叶细胞提取物]；由Spech-chem销售的Spechwhite 02[INCI：抗坏血酸葡糖苷]或Spechwhite 04[INCI：苯乙基间苯二酚]等；和/或其混合物。
Glutrapeptide[INCI：焦谷氨酰胺基乙基吲哚]、Algisium C[INCI：甲基硅烷醇锰酸酯]、Silysin C[INCI：硅烷三醇赖氨酸酸酯]、Exsy-Arl[INCI：脯氨酰胺乙基咪唑]或OTZ-10[INCI：Oxothiazolidine]；由嘉芙诗(Gattefossé)销售的Gatuline Skin-Repair Bio[INCI：刺槐花/叶/茎提取物]；由利普泰/路博润销售的 肽[INCI：
Diaminopropionoyl三肽-33]、 功能成分[INCI：水解小麦蛋白、水解大豆蛋白、三肽-1]、 合成分子[INCI：二甲基甲氧二氢吡喃]、 肽
[INCI：乙酰基四肽-22]、 肽[INCI：乙酰基二肽-3氨基己酸酯]或
PollushieldTM功能成分[INCI：己二酸二异丙酯、卵磷脂、丙烯酸/丙烯酰胺基甲基丙烷磺酸共聚物、二甲基甲氧基苯并二氢吡喃醇、黄原胶]；由Greentech销售的Setiline[INCI：水解胡芦巴籽提取物]或PhytoBioactive Soliberine[INCI：水、丙二醇、密蒙花花提取物]；由巴斯夫销售的Sunactyl[INCI：甘露醇、豌豆提取物、盐酸组氨酸、精氨酸、环糊精、糊精、酵母提取物、乙酰基酪氨酸、盐酸吡哆醇、塞内加尔树皮提取物、烟酰胺、腺嘌呤二核苷酸、琥珀酸二钠、天冬氨酸]：Imidinyl[INCI：酸豆子多糖类]或Phystrogene[INCI：锦葵(锦葵)提取物、黄原胶]或Purisoft[INCI：辣木蕨类植物种子提取物]；由Mibelle Biochemistry销售的AquaCacteen[INCI：仙人掌茎提取物]、Trimoist(KMF)[INCI：硬脂酰乳酸钠、来醇、植物油、生育酚乙酸酯、甘氨酸大豆固醇、乳酸钠、羧甲基贝他葡聚糖钠、肌肽]、MelanoBronze[INCI：穗花牡荆提取物(蒙克胡椒浆果提取物(植物内啡肽)、乙酰酪氨酸]、CM-Glucan[INCI：羧甲基甜菜碱钠]、SunActin[INCI：向日葵(向日葵)新芽提取物、生育酚、卵磷脂]、GSP-T skin[INCI：PEG-40氢化蓖麻油、葡萄(葡萄)种子提取物]或Detoxophane[INCI：独行菜新芽提取物、卵磷脂]；由Sederma/Croda销售的Bacocalmine[INCI：PEG-8、假马齿苋提取物、羟乙基纤维素]、Kombuchka[INCI：酵母/木糖黑茶发酵液、羟乙基纤维素]、Citystem[INCI：甘油、大黄酮提取物]或Prodizia[INCI：合欢提取物]；由Seppic销售的Extramel C[INCI：羟丙基三甲基氯化铵麦芽糊精交联聚合物、甜瓜(瓜)果实提取物]；由Silab销售的Defensine[INCI：普通小麦胚芽提取物]、Antiglyskin[INCI：向日葵籽提取物]、[INCI：西洋蒲公英(蒲公英)提取物]或 [INCI：水、丁二醇、乳油木
(乳木果)籽饼提取物]；由Sinergia销售的ATP 23[INCI：Azeloyl Tetrapeptide-23]；由Solabia销售的Glycofilm[INCI：生物糖胶-4]；由Active Concepts销售的AC Cinnamon Liposome[INCI：水、肉桂肉桂皮提取物、磷脂、乳酸菌发酵产物]、AC Moisturezyme Protect[INCI：柑橘(橘子)果实提取物、芦荟叶提取物]、ACB蘑菇提取物SM PF[INCI：乳酸菌/灵芝(灵芝)提取物/香菇(香菇)提取物发酵滤液和乳酸菌发酵产物]、ACB橄榄叶提取物PF[INCI：乳酸菌/橄榄叶发酵液]、ACB马齿苋Bioferment PF[INCI：乳酸菌/马齿发酵提取物、明串珠菌/萝卜根滤液]、ACB番茄Bioferment PF[INCI：乳酸菌/西红柿果实发酵提取物、明串珠菌/萝卜根滤液]或AC蜂王浆提取物[INCI：丁二醇、10-羟基癸酸、癸二酸、1,10-癸二醇]；由Biolie销售的Citruskin[INCI：柑桔类果实提取物、丙二醇]或Paradisyl[INCI：葡萄柚果实提取物、丙二醇]；由艾比欧(ID Bio)销售的Sens'flower[INCI：丙二醇、水、番红花花提取物、苯甲酸钠、山梨酸钾]；由Crodarom销售的Crodarom Elfe Flower[INCI：甘油、水、淫羊藿]或Phytessence Peach Flower[INCI：甘油、水、桃花提取物]；由Provital销售的Lingostem[INCI：水、甘油、越桔果果实提取物、黄原胶、苯甲酸钠、柠檬酸、葡糖酸内酯、葡糖酸钙]；由Naturex销售的Peppermint LG[INCI：甘油、水、胡椒薄荷叶提取物]；由RAHN销售的Radicare[INCI：水、梅利莎厚朴叶提取物]；由Naolys销售的Refine Ginger[INCI：姜叶细胞提取物]；由Spech-chem销售的Spechwhite 02[INCI：抗坏血酸葡糖苷]或Spechwhite 04[INCI：苯乙基间苯二酚]等；和/或其混合物。
[0202] 本发明的组合物还可以包括一种改善皮肤屏障功能的化合物、或通过减少经皮水分流失(TEWL)对抗皮肤干燥的药剂、或保护皮肤细胞层完整性的药剂、或改善脂质或防御皮肤屏障的药剂，例如但不限于选自由利普泰/路博润销售的FensebiomeTM肽[INCI：乙酰基七肽-4]、 海洋成分[INCI：水(水)、假单孢单胞菌发酵提取物、辛基二醇]或DelisensTM肽[INCI：丁二醇、水(水)、柠檬酸、乙酰基六肽-49]；由Silab销售的[INCI：泽泻提取物]、 [INCI：菊苣(菊苣)根提取物]、 [INCI：异常
毕赤酵母提取物]或 [INCI：水解糖]；由CLR销售的ProRenew复合体[INCI：乳酸菌发酵溶胞产物]或PhytoDefense CLRTM[INCI：野生大豆(大豆)油、双辛基醚、厚朴树皮提取物、月桂醇]；由龙沙销售的ProSynergenTM DF[INCI：乳酸菌/Ulkenia amoeboidea发酵提取物滤液]或 Rhodiola提取物[INCI：红景天根提取物]；由赢创销售的
[INCI：鲸蜡硬脂-25、甘油、山嵛酸、胆固醇、神经酰胺NP、神经酰胺NS、神经
酰胺EOS、神经酰胺EOP、神经酰胺AP、Caprooyl植物鞘氨醇、Caprooyl鞘氨醇]；由Mibelle销TM
售的PytoCellTec Alp Rose[INCI：高山玫瑰杜鹃花叶细胞培养物提取物、异麦芽酮糖、卵磷脂、苯甲酸钠、乳酸、水/水]或MAXnolia[INCI：厚朴树皮提取物、葡萄/葡萄/(葡萄)籽提取物、生育酚]；由亚什兰销售的StratixylTM[INCI提议：水/水、甘油、水解玉米蛋白]；由Induchem销售的 [建议的INCI：甘油、水、六肽]；由Infinitec销售的The Skin
[INCI：棕榈酰七肽-27、棕榈肽-78、乳酸/乙醇酸共聚物、聚乙烯醇、棕榈酰八肽-
24]；由Sederma/Croda销售的VenuceaneTM[INCI：嗜热栖热菌发酵物]或CalmosensineTM[INCI：乙酰二肽-1十六烷基酯]或PacifeelTM[INCI：紫茉莉提取物]；由Provital销售的AquaxtremTM[INCI：食用大黄根提取物]或 Epithelizing(Provital)[INCI：金
盏花、贯叶连翘、洋甘菊、迷迭香]；由L.Sérobiologiques/科宁/巴斯夫销售的
LS 9028[INCI：水解酪蛋白、水解酵母蛋白、盐酸赖氨酸]或SkinasensylTM[INCI：乙酰基四肽15]；由巴斯夫销售的SymbiocellTM[INCI：夜香树提取物]或 [INCI：玉米(玉米)粒提取物]；由Pentapharm/DSM销售的 Imperatoria AO[INCI：欧前胡叶提取物]
或OXY 229-BT[INCI：Saccharomyces酵母]；由Lucas Meyer销售的DrielineTM[INCI：氢化淀粉水解物、酵母提取物]；由嘉芙诗(Gattefossé)销售的 Derma-Sensitive
[INCI：辛基十二烷基酯、刺山柑芽果提取物]或NeoskinTM[INCI：细花含羞草树皮提取物]；
TM
由Symrise销售的SymPeptide 222[INCI：肉豆蔻酰基五肽-8]、 1609[INCI：4-
TM TM
叔丁基环己醇]、SymPeptide 225[INCI：肉豆蔻酰基五肽-11]或SymPeptide 230[INCI：
肉豆蔻酰基六肽-4]；由Atrium销售的NeutrazenTM[INCI:葡聚糖、棕榈酰三肽-8]；由Institut Européen de Biologie Cellulaire销售的 [INCI:葡聚糖、乙酰七
肽-1]等，和/或其混合物。
毕赤酵母提取物]或 [INCI：水解糖]；由CLR销售的ProRenew复合体[INCI：乳酸菌发酵溶胞产物]或PhytoDefense CLRTM[INCI：野生大豆(大豆)油、双辛基醚、厚朴树皮提取物、月桂醇]；由龙沙销售的ProSynergenTM DF[INCI：乳酸菌/Ulkenia amoeboidea发酵提取物滤液]或 Rhodiola提取物[INCI：红景天根提取物]；由赢创销售的
[INCI：鲸蜡硬脂-25、甘油、山嵛酸、胆固醇、神经酰胺NP、神经酰胺NS、神经
酰胺EOS、神经酰胺EOP、神经酰胺AP、Caprooyl植物鞘氨醇、Caprooyl鞘氨醇]；由Mibelle销TM
售的PytoCellTec Alp Rose[INCI：高山玫瑰杜鹃花叶细胞培养物提取物、异麦芽酮糖、卵磷脂、苯甲酸钠、乳酸、水/水]或MAXnolia[INCI：厚朴树皮提取物、葡萄/葡萄/(葡萄)籽提取物、生育酚]；由亚什兰销售的StratixylTM[INCI提议：水/水、甘油、水解玉米蛋白]；由Induchem销售的 [建议的INCI：甘油、水、六肽]；由Infinitec销售的The Skin
[INCI：棕榈酰七肽-27、棕榈肽-78、乳酸/乙醇酸共聚物、聚乙烯醇、棕榈酰八肽-
24]；由Sederma/Croda销售的VenuceaneTM[INCI：嗜热栖热菌发酵物]或CalmosensineTM[INCI：乙酰二肽-1十六烷基酯]或PacifeelTM[INCI：紫茉莉提取物]；由Provital销售的AquaxtremTM[INCI：食用大黄根提取物]或 Epithelizing(Provital)[INCI：金
盏花、贯叶连翘、洋甘菊、迷迭香]；由L.Sérobiologiques/科宁/巴斯夫销售的
LS 9028[INCI：水解酪蛋白、水解酵母蛋白、盐酸赖氨酸]或SkinasensylTM[INCI：乙酰基四肽15]；由巴斯夫销售的SymbiocellTM[INCI：夜香树提取物]或 [INCI：玉米(玉米)粒提取物]；由Pentapharm/DSM销售的 Imperatoria AO[INCI：欧前胡叶提取物]
或OXY 229-BT[INCI：Saccharomyces酵母]；由Lucas Meyer销售的DrielineTM[INCI：氢化淀粉水解物、酵母提取物]；由嘉芙诗(Gattefossé)销售的 Derma-Sensitive
[INCI：辛基十二烷基酯、刺山柑芽果提取物]或NeoskinTM[INCI：细花含羞草树皮提取物]；
TM
由Symrise销售的SymPeptide 222[INCI：肉豆蔻酰基五肽-8]、 1609[INCI：4-
TM TM
叔丁基环己醇]、SymPeptide 225[INCI：肉豆蔻酰基五肽-11]或SymPeptide 230[INCI：
肉豆蔻酰基六肽-4]；由Atrium销售的NeutrazenTM[INCI:葡聚糖、棕榈酰三肽-8]；由Institut Européen de Biologie Cellulaire销售的 [INCI:葡聚糖、乙酰七
肽-1]等，和/或其混合物。
[0203] 本发明的组合物可以进一步包括至少一种化合物，所述至少一种化合物通过调节线粒体复合体的活性能够产生抗衰老效果、改善随着年龄的增长而出现的线粒体功能、或防止皮肤由于线粒体复合体II的活性增强而造成的衰老或降低线粒体复合体I的活性，例如但不限于选自由亚什兰销售的Peptide Q10TM生物功能[INCI:五肽-34三氟醋酸盐]或TMDynachondrine ISR[INCI:甘油、水解大豆蛋白、水、苯甲酸钠、山梨酸钾]；由Induchem销售的 [INCI:甘油、水、甲基葡糖苷磷酸盐、铜赖氨酸/脯氨酸]；由Lucas Meyer
销售的RiboxylTM[INCI:核糖]；由Sederma销售的JuvinityTM[INCI:辛酸/癸酸甘油三酯、香叶基香叶基丙醇]；由Gelyma销售的 [INCI:水、齿缘墨角藻提取物]；由CODIF销售的EARLY BOOST PA[INCI:甘油、水、贾尼亚红花提取物、角叉菜胶钠、苯乙醇]；由Lipotrue销售的SIRTALICETM[INCI:芽孢杆菌发酵物]等；和/或其混合物。
销售的RiboxylTM[INCI:核糖]；由Sederma销售的JuvinityTM[INCI:辛酸/癸酸甘油三酯、香叶基香叶基丙醇]；由Gelyma销售的 [INCI:水、齿缘墨角藻提取物]；由CODIF销售的EARLY BOOST PA[INCI:甘油、水、贾尼亚红花提取物、角叉菜胶钠、苯乙醇]；由Lipotrue销售的SIRTALICETM[INCI:芽孢杆菌发酵物]等；和/或其混合物。
[0204] 本发明的组合物可以用于任何应用或上文在标题“应用”下所述的用途。
[0205] 通过以下非限制性实例说明本发明。
[0206] 实例
[0207] 一般方法
[0208] 所有试剂和溶剂均具有合成品质并且在没有另外处理的情况下进行使用。
[0209] 缩写
[0210] 氨基酸的缩写遵循1983年IUPAC-IUB生化命名委员会在《欧盟生物化学期刊(Eur.J.Biochem.)》1984,138:9-37中规定的规则。
[0211] (R)，树脂；2-ClTrt-(R)，2-氯三苯甲基氯树脂；Ac，乙酰基；AcOH，乙酸；Ala，丙氨酸；AM，2-[4-氨甲基-(2,4-二甲氧基苯基)]苯氧基乙酸；Arg，精氨酸；Asn，天冬酰胺；Asp，天冬胺酸；Boc，叔丁氧基羰基；DCM，二氯甲烷；DIEA，N,N'-二异丙基乙胺；DIPCDI，N,N'-二异丙基碳二亚胺；DMF，N,N-二甲基甲酰胺；ESI-MS，电喷雾电离质谱；Fmoc，9-氟烯基甲氧羰基；Gln，谷氨酰胺；Glu，谷氨酸；Gly，甘氨酸；His，组氨酸；HOBt，1-羟基苯并三唑；HPLC，高效液相色谱法；Ile，异亮氨酸；KOH，氢氧化钾；Leu，亮氨酸；Lys，赖氨酸；MBHA，对甲基二苯甲基胺；MeCN，乙腈；MeOH，甲醇；Met，蛋氨酸；Myr，肉豆蔻酰；Palm，棕榈酰；Pbf，2,2,4,6,7-五甲基二氢苯并呋喃-5-磺酰基；Pro，脯氨酸；Ser，丝氨酸；tBu，叔丁基；TFA，三氟乙酸；Thr，苏氨酸；Trt，三苯甲基；Val，缬氨酸。
[0212] 化学合成
[0213] 所有合成过程均在配有多孔聚乙烯圆盘的聚丙烯注射器中进行。所有试剂和溶剂均为合成质量，并且在没有任何另外的处理的情况下进行使用。通过抽吸去除溶剂和可溶性试剂。用哌啶-DMF(2:8，v/v)(1x 1分钟，1x 5分钟，5ml/g树脂)去除Fmoc基团[Lloyd-Williams P.等人,(1997)《肽和蛋白质合成的化学方法(Chemical Approaches to the Synthesis of Peptides and Proteins)》CRC,博卡拉顿(美国佛罗里达州)]。在脱保护、偶联与再次脱保护阶段之间进行的洗涤用DMF(3x 1分钟)进行，每次使用10ml溶剂/克树脂。用3ml溶剂/克树脂进行偶联反应。通过进行茚三酮测试[Kaiser等人《, 生物化学分析(Anal.Biochem)》,(1970),34:595-598]或四氯苯醌测试[Christensen T.《,斯堪的纳维亚化学学报(Acta Chem.Scand.)》,(1979),33B,763-766]来控制偶联。所有合成反应和洗涤均在25℃下进行。
[0214] 在受保护的侧链中使用一些氨基酸与其官能团。使用的保护基为：
[0215] ·Boc，针对氨基酸Lys和Trp的叔丁氧基羰基；
[0216] ·Pbf，针对氨基酸Arg的2,2,4,6,7-五甲基二氢苯并呋喃-5-磺酰基；以及[0217] ·Trt，针对氨基酸Gln和His的三苯甲基。
[0218] 使用恒温于30℃(50 x 4.6mm，Kromasil C18，3.5μm，阿克苏诺贝尔，瑞典)的反相柱，用Shimadzu设备(日本京都)进行HPLC色谱分析。使用含乙腈(+0.07％TFA)的水(+0.1％TFA)的梯度、以1.6毫升/分钟的流速进行洗脱，并在220nm处进行检测。使用MeCN:H2O 4:1(+0.1％TFA)的混合物作为流动相和0.3毫升/分钟的流速，在WATERS Alliance ZQ 2000检测器中进行电喷雾电离质谱法。
[0219] 实例1
[0220] 获得H-AA9-O-2-ClTrt-(R)，其中AA9是L-Pro。
[0221] 重量已归一化。将3.2mmol(1当量)的Fmoc-L-Pro-OH溶于20ml的DCM中，向其中加入0.83当量的DIEA，偶联到具有1.6mmol/g官能化的干2-氯三苯甲基树脂(3.2mmol)。将混合物搅拌5分钟，然后加入1.63当量的DIEA。使混合物反应40分钟。通过用2ml的MeOH处理来封闭剩余的氯基团。
[0222] 实例2
[0223] 获得Fmoc-AA1-AA2-AA3-AA4-AA5-AA6-AA7-AA8-AA9-O-2-ClTrt-(R)，其中AA1是L-Phe；AA2是L-Trp；AA3是L-Met；AA4是L-Lys；AA5是L-Arg；AA6是L-Lys；AA7是Arg；AA8是L-Val；AA9是L-Pro。
[0224] 重量已归一化。如一般方法中所述，洗涤76mg或具有1.19mmol/g官能化的H-L-Pro-O-2-Cl-Trt树脂(0.09mmol)。按照所述方案，在存在5.5当量DIPCDI和5当量HOBt的情况下，使用DMF作为溶剂，将5当量的Fmoc-Val-OH(Fmoc-AA8-OH)偶联到肽基树脂上持续60分钟。
[0225] 然后如一般方法所述，洗涤所述树脂，并重复Fmoc基团的脱保护处理以偶联下一个氨基酸。按照前述方案，在存在5.5当量DIPCDI和5当量HOBt的情况下，使用DMF作为溶剂，将5当量的Fmoc-L-Arg(Pbf)-OH(Fmoc-AA7-OH)偶联到肽基树脂上持续60分钟。然后如一般方法所述，洗涤所述树脂，并重复Fmoc基团的脱保护处理以偶联下一个氨基酸。按照前述方案，重复偶联、洗涤和脱保护的步骤以依次偶联5当量的Fmoc-L-Lys(Boc)-OH(Fmoc-AA6-OH)；5当量的Fmoc-L-Arg(Pbf)-OH(Fmoc-AA5-OH)；5当量的Fmoc-L-Lys(Boc)-OH(Fmoc-AA4-OH)；5当量的Fmoc-L-Met-OH(Fmoc-AA3-OH)；以及5当量的Fmoc-L-Trp(Boc)-OH(Fmoc-AA2-OH)；5当量的Fmoc-L-Phe-OH(Fmoc-AA1-OH)；以上每一项都在偶联步骤期间在存在5当量的HOBt和5.5当量的DIPCDI的情况下进行。
[0226] 合成之后，用DCM洗涤肽基树脂(3 x 1分钟)。
[0227] 表5中所示的所有肽可以按照本实例中描述的方案合成。
[0228] 肽Fmoc-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-O-2-Cl-Trt-(R)
[0229] 表5
[0230] 实例3
[0231] 获得Fmoc-Wm-Xn-AA1-AA2-AA3-AA4-AA5-AA6-AA7-AA8-AA9-Yp-Zq-AM-MBHA-(R)，其中AA1是L-Phe；AA2是L-Trp；AA3是L-Met；AA4是L-Lys；AA5是L-Arg；AA6是L-Lys；AA7是Arg；AA8是L-Val；AA9是L-Pro；以及m、n、p和q分别为0。
[0232] 重量已归一化。根据上述一般方法，用哌啶:DMF处理240mg(0.12mmol)具有0.51mmol/g官能化的Fmoc-AM-pMBHA树脂，以去除Fmoc基团。在存在5.5当量的DIPCDI和5当量的HOBt的情况下，使用DMF作为溶剂，将5当量的Fmoc-L-Pro-OH(Fmoc-AA9-OH)掺入到脱保护的树脂上持续1小时。
[0233] 然后如一般方法所述，洗涤所述树脂，并重复Fmoc基团的脱保护处理以偶联下一个氨基酸。根据前述方案，在每个偶联步骤中，在存在5当量的HOBt和5.5当量的DIPCDI的情况下，依次偶联5当量的Fmoc-Val-OH(Fmoc-AA8-OH)；以及随后5当量的Fmoc-L-Arg(Pbf)-OH(Fmoc-AA7-OH)；5当量的Fmoc-L-Lys(Boc)-OH(Fmoc-AA6-OH)；5当量的Fmoc-L-Arg(Pbf)-OH(Fmoc-AA5-OH)；5当量的Fmoc-L-Lys(Boc)-OH(Fmoc-AA4-OH)；5当量的Fmoc-L-Met-OH(Fmoc-AA3-OH)；5当量的Fmoc-L-Trp(Boc)-OH(Fmoc-AA2-OH)；以及最后5当量的Fmoc-L-Phe-OH(Fmoc-AA1-OH)。
[0234] 合成之后，用DCM洗涤肽基树脂(3x 1分钟)。
[0235] 表6中所示的所有肽可以按照本实例中描述的方案合成。
[0236]
[0237] 表6
[0238] 实例4
[0239] 去除Fmoc N端保护基团的一般过程。
[0240] 如一般方法所述(DMF中20％哌啶，1 x 1分钟+1 x 5分钟)，对实例1、2和3中获得的肽基树脂的N端Fmoc基团进行脱保护。用DMF(5 x 1分钟)、DCM(3 x 1分钟)、乙醚(3 x 1分钟)洗涤肽基树脂，并在真空下干燥。
[0241] 实例5
[0242] 将R1棕榈酰基引入实例4中获得的肽基树脂上的过程。
[0243] 在存在107mg(0.7mmol；5当量)或92mg(0.6mmol，5当量)的HOBt和127μl的DIPCDI(0.77mmol；5.5当量)或102μl(0.66mmol，5.5当量)的DIPCDI的情况下，将预先溶解在DMF(1ml)中的180mg(0.7mmol；5当量)或154mg(0.6mmol，5equiv)的棕榈酸分别加入到0.14mmol或0.12mmol实例4中获得的每种肽基树脂中。使混合物反应3小时，然后用DMF(3 x
1分钟)、DCM(3 x 1分钟)、二乙醚(3 x 1分钟)洗涤树脂，并在真空下干燥。
1分钟)、DCM(3 x 1分钟)、二乙醚(3 x 1分钟)洗涤树脂，并在真空下干燥。
[0244] 实例6
[0245] 将R1乙酰基引入实例4中获得的肽基树脂上的过程。
[0246] 在存在25当量的DIEA的情况下，使用2ml的DMF作为溶剂，用25当量的乙酸酐处理0.12mmol或0.14mmol实例4中获得的肽基树脂。使混合物反应30分钟，然后用DMF(3 x 1分钟)、DCM(3 x 1分钟)、二乙醚(3 x 1分钟)洗涤树脂，并在真空下干燥。
[0247] 实例7
[0248] 从实例4、5和6中获得的肽基树脂的聚合物载体的裂解过程。
[0249] 在室温下，用3ml的TFA:H2O(95:5，v/v)将实例4、5和6中获得的每种干燥的肽基树脂在搅拌下处理2小时。然后通过配备有多孔聚乙烯圆盘的聚丙烯注射器对其进行过滤。将滤液收集到20ml的冷二乙醚上，并用10ml的二乙醚洗涤5次。最终的沉淀物在真空下干燥。
[0250] 一般式R1-Wm-Xn-AA1-AA2-AA3-AA4-AA5-AA6-AA7-AA8-AA9-Yp-Zq-OH或R1-Wm-Xn-AA1-AA2-AA3-AA4-AA5-AA6-AA7-AA8-AA9-Yp-Zq-NH2的肽根据此方法获得，其中R1是H、乙酰基或棕榈酰基，并且m、n、p和q分别为0。
[0251] 在H2O(+0.1％TFA)中MeCN(+0.07％TFA)的梯度下对获得的肽进行的HPLC分析显示在所有情况下纯度均超过80％。通过ESI-MS确认获得的肽的同一性。
[0252] 实例8
[0253] 聚合物载体的裂解过程以及R2取代的氨的官能化：获得H-Wm-Xn-AA1-AA2-AA3-AA4-AA5-AA6-AA7-AA8-AA9-Yp-Zq-NH-(CH2)5-CH3，其中AA1是L-Phe；AA2是L-Trp；AA3是L-Met；AA4是L-Lys；AA5是L-Arg；AA6是L-Lys；AA7是L-Arg；AA8是L-Val；AA9是键或L-Pro；并且m、n、p和q分别为0。
[0254] 具有完全受保护侧链的肽H-Wm-Xn-AA1-AA2-AA3-AA4-AA5-AA6-AA7-AA8-AA9-Yp-Zq-OH是通过对实例4中获得的299mg的肽基树脂H-Wm-Xn-AA1-AA2-AA3-AA4-AA5-AA6-AA7-AA8-AA9-Yp-Zq-O-2-ClTrt-(R)进行处理获得的，所述肽在存在KOH的情况下预先在真空下干燥。用2.03ml的AcOH处理2小时，通过过滤分离液相。收集滤液，然后用1mL的AcOH洗涤所述树脂(1 x 1分钟)。合并和冻干所有液相。
[0255] 在烧瓶中称量0.03mmol的获得的粗肽和3当量的己胺。加入HOBt和2ml的无水DMF。加入4当量的DIPCDI，使其在47℃下在磁力搅拌下反应。通过HPLC监测反应直到初始产物消失，并在2-4小时后完成。蒸发溶剂至干，并用DCM共蒸发两次。将获得的残余物溶解于4ml的TFA:H2O(95:5，v/v)混合物中，并使其在室温下反应2小时。加入30ml冷二乙醚，将沉淀物用二乙醚洗涤2次。将残余物溶解于MeCN在H2O(v/v)中的混合物中，并冻干。
[0256] 在H2O(+0.1％TFA)中MeCN(+0.07％TFA)的梯度下对获得的肽进行的HPLC分析显示在所有情况下纯度均超过80％。通过ESI-MS确认获得的肽的同一性。
[0257] 实例9
[0258] 聚合物载体的裂解过程以及R2取代的氨的官能化：获得H-Wm-Xn-AA1-AA2-AA3-AA4-AA5-AA6-AA7-AA8-AA9-Yp-Zq-NH-(CH2)15-CH3，其中AA1是L-Phe；AA2是L-Trp；AA3是L-Met；AA4是L-Lys；AA5是L-Arg；AA6是L-Lys；AA7是L-Arg；AA8是L-Val；AA9是键或L-Pro；并且m、n、p和q分别为0。
[0259] 具有完全受保护侧链的肽H-Wm-Xn-AA1-AA2-AA3-AA4-AA5-AA6-AA7-AA8-AA9-Yp-Zq-OH是通过对实例4中299mg的每种肽基树脂H-Wm-Xn-AA1-AA2-AA3-AA4-AA5-AA6-AA7-AA8-AA9-Yp-Zq-O-2-ClTrt-(R)进行处理获得的，所述肽在存在KOH的情况下预先在真空下干燥。用2.03ml的AcOH处理2小时，通过过滤分离液相。收集滤液，然后用1mL的AcOH洗涤所述树脂(1 x 1分钟)。合并和冻干所有液相。
[0260] 在烧瓶中称量0.03mmol的获得的粗肽和3当量的己胺。加入HOBt和2ml的无水DMF。加入2当量的DIPCDI，使其在47℃下在磁力搅拌下反应。通过HPLC监测反应直到初始产物消失，并在2-4小时后完成。蒸发溶剂至干，并用DCM共蒸发两次。将获得的残余物溶解于54ml的TFA:H2O(95:5，v/v)混合物中，并使其在室温下反应2小时。加入30ml冷二乙醚，将沉淀物用二乙醚洗涤2次。将残余物溶解于MeCN在H2O(v/v)中的混合物中，并冻干。
[0261] 在H2O(+0.1％TFA)中MeCN(+0.07％TFA)的梯度下对获得的肽进行的HPLC分析显示在所有情况下纯度均超过80％。通过ESI-MS确认获得的肽的同一性。
[0262] 实例10：
[0263] 使用实时PCR阵列，对成人(HEKa)同步人类表皮角质形成细胞中的JARID1A基因表达进行体外研究。
[0264] 昼夜节律钟涉及的蛋白质是组蛋白赖氨酸脱甲基酶蛋白，称为JARID1A。JARID1A蛋白与CLOCK-BMAL1形成复合物，以激活PER基因的转录。减少的Jarid1A的表达导致降低的PER基因的表达和改变的昼夜节律。然后，在清晨激活Jarid1A和时钟基因表达可能会提前昼夜节律周期，从而赋予日间皮肤功能。因此，这项研究的主要目的是评估一些肽在清晨在同步人类角质形成细胞中增加Jarid1A表达的能力。
[0265] 将HEKa细胞(生命技术公司)以3.0 x 105个细胞/孔接种于12孔板(每种条件2个孔)中并在培养基(补充有Mix C39016-CaCl2溶液的角质形成细胞生长培养基(Promocell))中温育。为了同步，对细胞进行12小时的两个交替循环，分别在37℃下在5％CO2的湿润空气中(白天模式)和33℃下在5％CO2的湿润空气中(夜间模式)。开始同步后12小时，根据每种肽的毒性效应(选择无毒条件)，将细胞与肽以0.5mg/ml或(5μg/ml)在培养基中温育。将仅用培养基处理的细胞用作基础条件。
[0266] 同步结束时，在两个不同的时间收集细胞裂解物：7:30(清晨时间点)和11:30(中午时间点)。简言之，根据制造商的方案，依据RNeasy Mini试剂盒(Qiagen)上所描述的方案，将细胞在孔中直接裂解，并纯化RNA。RNA洗脱后，用分光光度计(Thermo)对RNA样品的纯度进行定量和分析。对于每个样品，用iScript Advanced(BioRad)在最终20μl的体积中对3μg高品质的RNA进行反转录。在42℃下，将完整的反应混合物在热循环仪(Eppendorf)中温育30分钟，并且在85℃下停止反应5分钟。在与 Green(BioRad)一起使用的96孔板中，使用SYBR Green Supermix(BioRad)通过在实时PCR热循环仪(BioRad)中进行的qPCR使互补DNA扩增。SYBR Green与双链DNA分子结合并发出定量的荧光，荧光强度与PCR反应中产物的量成正比。BioRad CFX96仪器的循环条件为：95℃下持续3分钟，然后将以下过程执行40个周期：在95℃下进行5秒的变性，在60℃下进行30秒的退火和延伸。将GAPDH(甘油醛3-磷酸脱氢酶)、TBP(TATA盒结合蛋白)和HRPT1(次黄嘌呤磷酸核糖基转移酶1)用作内源性对照物。使用CFX Manager Software(BioRad)，使用归一化表达(ΔΔ(Ct))方法计算相对于样品基因和参考基因表达的成倍变化。
[0267] 针对被测样品，表7中示出了相对于7:30时的基础条件，JARID1A基因在7:30时的成倍诱导。用于成倍诱导的数据表示一个实验的值。
[0268]
[0269] 表7
[0270] 表7中的结果示出本发明中的肽能够增加同步人类角质形成细胞在清晨的JARID1A表达。
[0271] 实例11
[0272] 使用基于比色检测的ELISA测定，通过同步人类角质形成细胞上的肽H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH2(PEP-1)进行JARID1A蛋白增加蛋白质水平的体外研究。
[0273] 许多皮肤功能遵循昼夜节律：皮脂分泌在中午左右达到高峰，并且电容(皮肤水合作用的一种量度)在一天中的早些时候较低。皮肤血液流动和皮肤屏障功能也表现出昼夜节律和超昼夜节律(循环周期短于一天)，一天中早些时候皮肤血液流动低并且在下午和傍晚达到高峰。
[0274] 在哺乳动物中，在所有组织的大多数中都发现了昼夜节律钟，并且这些昼夜节律钟基于调节的反馈回路，其中CLOCK-BMAL1复合体在白天期间驱动昼夜节律钟基因(如PER和CRY)的转录。昼夜节律钟涉及的蛋白质是组蛋白赖氨酸脱甲基酶蛋白，也称为JARID1A蛋白。JARID1A蛋白与CLOCK-BMAL1形成复合体，以激活PER基因的转录。据信，清晨皮肤中的Jarid1A表达的激活可能导致昼夜节律周期提前，从而赋予清晨皮肤日间皮肤功能。因此，本研究的主要目的是在实验模型中评估肽H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH2(PEP-1)在清晨增加Jarid1A蛋白表达的能力，在所述实验模型中，人类角质形成细胞可以根据昼夜周期进行同步(同时进入昼夜节律周期的同一阶段)。
[0275] 在密度为200.000细胞/孔(每种状态2个孔)下，将HaCaT细胞(人角质形成细胞系，德国癌症研究中心(Deutsches Krebsforschungszentrum))接种于12孔板中。将细胞接种于补充有10％(体积/体积)胎牛血清(Cultek)的培养基中，即高Glutamax杜氏改良伊格尔氏培养基(Dulbecco's Modified Eagle Medium，high Glutamax(飞世尔科技(Fisher Scientific))。为了保持细胞温度同步，对细胞进行12小时的两个交替循环，分别在37℃下在5％CO2的湿润空气中(白天模式)和在33℃下在5％CO2的湿润空气中(夜间模式)。开始同步后12小时，用培养基中的肽H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH2(PEP-1)的0.5mg/ml溶液对细胞进行处理。同时，仅将用培养基进行的处理用作基础条件。
[0276] 同步结束时，在两个不同的时间收集细胞裂解物：7:30(清晨时间点)和11:30(中午时间点)。简而言之，对细胞裂解物进行两次冷冻和解冻循环，以破坏核膜并释放Jarid1A蛋白。对核提取物进行测定以定量JARID1A蛋白的水平和总蛋白浓度。
[0277] 用ELISA(酶联免疫吸附测定)测试测量JARID1A蛋白水平(KDM5A)
[0278] 根据制造商的方案，使用酶联免疫吸附测定(人赖氨酸特异性脱甲基酶5A(KDM5A)(CUSABIO))对JARID1A蛋白进行定量。简而言之，用试剂盒中提供的抗体检测JARID1A蛋白，并通过比色反应进行定量。通过设置为450nm和570nm的酶标仪( BMG)进行吸光度定量。对于波长校正，从450nm下的读数中减去570nm下的读数。
[0279] 通过BCA测定(二喹啉甲酸)确定总蛋白质
[0280] 通过使用Pierce BCA蛋白质测定试剂盒(赛默飞世尔科技公司(Thermo Scientific))确定细胞裂解物的总蛋白质浓度。简而言之，分配标准品和样品，并将工作试剂添加到样品中。在60℃下温育30分钟后，在562nm处用吸光度酶标仪( BMG)测
量颜色的变化。使用总蛋白量对样品中通过ELISA测试获得的JARID1A蛋白浓度水平进行归一化。
量颜色的变化。使用总蛋白量对样品中通过ELISA测试获得的JARID1A蛋白浓度水平进行归一化。
[0281] 表8示出了JARID1A蛋白相对于基础条件的百分比。结果表示在至少六种不同的测定中，在用H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH2(PEP-1)进行处理后的7:30时的JARID1A蛋白水平相对于在基础条件下7:30时的JARID1A蛋白质水平的百分比的平均值。
[0282]
[0283] 表8
[0284] 表8中的结果表明，相对于基础条件下的同一时间，在同步人类皮肤角质形成细胞培养基中，肽H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH2(PEP-1)能够在7:30增加JARID1A蛋白水平。
[0285] 实例12
[0286] 使用基于比色检测的测定抑制线粒体复合体I活性。
[0287] 线粒体是负责细胞内能量产生的中央细胞器，从而以ATP(三磷酸腺苷)的形式产生约90％的细胞能量。此过程发生在线粒体的内膜内，线粒体是由于跨此结构的质子通量将电子传递链(ETC)偶联到ATP合成的复杂结构。ETC负责从NADH和FADH2(在糖酵解和柠檬酸循环期间产生)到氧分子的电子传递，从而导致其在此过程结束时还原成H2O。ECT由四种不同的蛋白质复合体构成。在复合体I(NADH脱氢酶)中，电子从NADH传输到电子传递链，在此处其流过剩余的复合体。结果，线粒体复合体I的活性触发NADH氧化为NAD。
[0288] 由于电子传递链功能导致活性氧物质(ROS)产生，因此线粒体在衰老过程期间起重要作用。在过去的几年中，已经证明，部分抑制线粒体复合体I的活性可以延长寿命，从蠕虫到哺乳动物，这一过程都非常保守。实际上，用线粒体复合体I活性的不同抑制剂(即二甲双胍、鱼藤酮)进行处理会减缓衰老过程。因此，部分降低线粒体复合体I活性可以作为化妆品领域中抗衰老成分的新目标。本实验的主要目的是评估肽H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH2(PEP-1)部分降低人类皮肤成纤维细胞中的线粒体复合体I活性的能力。
[0289] 在750.000个细胞/75cm2烧瓶(每种条件一个烧瓶)的密度下，将来自成人的人类皮肤成纤维细胞(HDFa，生命技术公司)接种在含有低血清生长补充剂(生命技术公司)的M106培养基中。使细胞在37℃下在5％CO2的湿润空气中生长8天。然后，去除培养基，并且在48小时期间，在37℃下在5％CO2的湿润空气中，以1、0.5和0.1mg/ml在培养基中用标量稀释度的肽H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH2(PEP-1)处理细胞。将仅在培养基中温育的未经处理的细胞用作基础条件。由于已知这种化合物部分抑制线粒体复合体I的活性，作为阳性对照物，用在培养基中制备的10mM二甲双胍(西格玛(Sigma))处理细胞。48小时处理后，使用胰蛋白酶分离细胞，并将其重悬于60μl磷酸盐缓冲盐水(西格玛)中。根据制造商的方案，通过Pierce BCA蛋白质测定试剂盒(BCA测定，赛默飞世尔科技公司)测量总蛋白质浓度，以将最终蛋白质浓度调节在700-1000μg/ml之间。简而言之，分配标准品和样品，并将工作试剂添加到样品中。在37℃下温育30分钟后，在562nm处用酶标仪(
BMG)测量吸光度。
BMG)测量吸光度。
[0290] 根据制造商的方案，用复合体I酶活性微孔板测定试剂盒(艾博抗(Abcam))测量线粒体复合体I的活性。此测定遵循将NADH到NAD的氧化偶联到特定比色染料的还原，从而导致450nm处的吸光度增加。简而言之，将200μl的每种样品(调整到700-1000μg/ml的总蛋白量)温育3小时。之后，将孔洗涤数次，并与试剂盒(由NADH和特定染料构成)提供的测定溶液一起温育。对于线粒体复合体I活性的确定，用酶标仪( BMG)测量光密度(OD)在动力学反应中在450nm处沿1小时的比色增加。计算结果为线性区域中两点之间450nm处的OD随时间推移的增加率。
[0291] 表9表示了线粒体复合体I活性相对于用H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH2(PEP-1)处理后的基础条件的百分比。这些值代表至少三个独立测定的平均值。
[0292]
[0293] 表9
[0294] 结果表明，肽H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH2(PEP-1)能够在被测浓度下降低人类皮肤成纤维细胞培养基中的线粒体复合体I的活性。线粒体复合体I活性的抑制示出剂量反应效果，并且对延缓皮肤衰老过程赋予有益效果。
[0295] 实例13
[0296] 使用基于比色检测的测定测量线粒体复合体II活性的增加。
[0297] ATP产生发生于线粒体的内膜内，线粒体是一种在细胞中产生约90％的能量的专用细胞器。此过程发生于线粒体内膜内，从而将电子传递链(ETC)偶联到ATP合成。ETC负责从NADH和FADH2(在糖酵解和柠檬酸循环期间产生)到氧分子的电子传递，从而导致其在此过程结束时还原成H2O。ECT由四种不同的蛋白质复合体构成。线粒体复合体II(也称为琥珀酸辅酶Q还原酶(SDH))催化从琥珀酸到泛醌(Q)的电子传递，从而产生泛醇(QH2)。
[0298] 由于电子链传递效率逐渐降低，因此线粒体功能与衰老过程有关。实际上，已经表明，线粒体复合体II的活性随着人类皮肤成纤维细胞的年龄的增长而降低，从而导致进行性线粒体功能障碍。然后，增加线粒体复合体II的活性可以作为研发新型皮肤抗衰老疗法的新策略。本测定的主要目的是评估肽H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH2(PEP-1)增加人类皮肤成纤维细胞中的线粒体复合体II活性的能力。
[0299] 在750.000个细胞/75cm2烧瓶(每种条件一个烧瓶)的密度下，将来自成人的人类皮肤成纤维细胞(HDFa，生命技术公司)接种在含有低血清生长补充剂(生命技术公司)的M106培养基中。使细胞在37℃下在5％CO2的湿润空气中生长7天。然后，去除培养基，并且在24小时期间，在37℃下在5％CO2的湿润空气中，以1、0.5和0.1mg/ml在培养基中用标量稀释度的肽H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH2(PEP-1)处理细胞。将仅在培养基中温育的未经处理的细胞用作基础条件。24小时处理后，使用胰蛋白酶分离细胞，并将其重悬于40μl磷酸盐缓冲盐水(西格玛)中。根据制造商的方案，通过Pierce BCA蛋白质测定试剂盒(BCA测定，赛默飞世尔科技公司)测量总蛋白质浓度，以将最终蛋白质浓度调节在2500-
3000μg/ml之间。简而言之，分配标准品和样品，并将工作试剂添加到样品中。在37℃下温育
30分钟后，在562nm处用酶标仪( BMG)测量吸光度。
3000μg/ml之间。简而言之，分配标准品和样品，并将工作试剂添加到样品中。在37℃下温育
30分钟后，在562nm处用酶标仪( BMG)测量吸光度。
[0300] 根据制造商的方案，用复合体II酶活性微孔板测定试剂盒(艾博抗)测量线粒体复合体II的活性。此测定遵循将泛醇(由线粒体复合体II产生的QH2)的产生偶联到比色染料(DCPIP，2,6-二氯苯酚吲哚酚)的还原。简而言之，将50μl的每种样品(调节到2500-3000μg/ml的总蛋白量)温育2小时。之后，将孔洗涤数次，并与试剂盒(由泛醌、琥珀酸酯和DCPIP构成)提供的活性溶液一起温育。对于线粒体复合体II活性的确定，用酶标仪(BMG)测量DCPIP在动力学反应中在光密度(OD)600nm处沿30分钟的比色还原。计算结果为线性区域中两点之间在OD 600nm处的吸光度随时间推移而下降的速率。
[0301] 表10表示了线粒体复合体II活性相对于用H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH2(PEP-1)处理后的基础条件的百分比。这些值代表至少三个独立测定的平均值。
[0302]
[0303] 表10
[0304] 结果表明，肽H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH2(PEP-1)能够在被测浓度下增加人类皮肤成纤维细胞中的线粒体复合体II的活性，从而对皮肤产生有益的抗衰老效果。
[0305] 实例14
[0306] 通过免疫荧光测定对增加人类皮肤成纤维细胞(HDFa)中的线粒体膜电位的体外研究。
[0307] 线粒体是在细胞代谢中起重要作用的细胞内细胞器。线粒体膜电位(MMP)是对跨由此结构中的电子链传递的正常功能产生的线粒体内膜的电位的量度。MMP与许多线粒体过程高度相关。具体而言，MMP是三磷酸腺苷(ATP)合成(细胞中的主要能量来源)的直接生物标志物。因此，具有增加MMP能力的产品能够供给细胞能量并改善皮肤功能。本实验的主要目的是评估肽H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH2(PEP-1)增加人类皮肤成纤维细胞中的线粒体膜电位的能力。
[0308] 在密度为6,000个细胞/孔(每种条件3个孔)下，将来自成人的人类皮肤成纤维细胞(HDFa，生命技术公司)接种在96孔板中。在24小时期间，在37℃下在5％CO2的湿润空气中，将细胞接种在具有低血清生长补充剂(生命技术公司)的M106培养基中。然后，去除培养基，并且在16小时期间，在37℃下在5％CO2的湿润空气中，用溶解在补充有10％(体积/体积)的胎牛血清(FBS，Cultek)的杜氏改良伊格尔氏培养基(生命技术公司)中的0.5mg/ml的肽H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH2(PEP-1)处理细胞。将仅在培养基中温育的未经处理的细胞用作基础条件。
[0309] 16小时处理之后，根据制造商的方案，通过使用JC-1线粒体膜电位测定试剂盒(艾博抗)将细胞被用于定量线粒体膜电位。简而言之，在存在用0.5mg/ml的肽进行处理的情况下，在37℃下在5％CO2中，将细胞与用补充稀释缓冲液制备的JC-1工作溶液一起温育30分钟。之后，将细胞洗涤数次，并且在37℃下在5％CO2中，将其与溶于补充稀释缓冲液中的对应处理液一起温育2.5小时(测定期间始终存在每种处理)。当JC-1染料以高膜电位(超极化；带电细胞)聚合在健康线粒体或作为单体存在于具有低膜电位的线粒体(去极化；非带电细胞)中时，所述JC-1染料分别发出红色或绿色荧光。
[0310] 对细胞进行成像，并使用 高含量成像系统(珀金埃尔默公司(PerkinElmer,Inc))测量线粒体膜电位。在带电细胞中，当在520-550nm处激发时，会出现红色聚集体并且染料在560-630nm处发射。在去极化细胞中，当在460-490nm处激发时，染料在500-550nm处发射。通过使用Hoechst 33342(赛默飞世尔科技公司)染色来对细胞数进行定量，所述染色是一种细胞渗透性核复染色，当其与dsDNA结合时在460nm处发出蓝色荧光，并在350nm处激发。对于每个图像，对来自带电和去极化细胞的强度荧光进行定量，并相对于核数进行归一化。
[0311] 表1表示了在用H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH2(PEP-1)处理后的线粒体膜电位相对于基础条件的百分比的平均值。这些值代表至少四个独立测定的值。
[0312]
[0313] 表11
[0314] 结果表明，肽H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH2(PEP-1)能够通过在被试浓度下增加线粒体膜电位来供给人类皮肤成纤维细胞能量。
[0315] 实例15
[0316] 通过荧光方法评估人类皮肤成纤维细胞(HDFa)上的活性氧物质(ROS)水平。
[0317] 细胞代谢包括多种化学反应，所述化学反应允许细胞生长和繁殖、维持其结构并对环境变化作出响应。氧代谢的结果是，细胞产生若干种天然副产物，称为活性氧物质(ROS)。ROS是高活性氧分子，其包含羟基、超氧阴离子、过氧化氢和过亚硝酸盐。可以通过不同的外源(包含化学物质曝光、电离辐射以及细菌或病毒感染)来提高细胞的ROS水平。
[0318] 在正常的细胞代谢期间，ROS水平由若干种内源性抗氧化酶(即超氧化物歧化酶、过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶)的子集控制。然而，在氧化应激相关的状态下，ROS累积在细胞内部，并且解毒修复机制不足以维持细胞活力，线粒体由于其自身的功能而成为细胞内部ROS的主要来源。此外，诱导线粒体应激或增强其功能的化学物质可能会增加ROS水平。由于这些原因，ROS水平的测量可以很好地预测不同化学曝光引起的氧化应激状态。本实验的主要目的是确认肽H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH2(PEP-1.)不会增加人类皮肤成纤维细胞中的ROS水平。
[0319] 在密度为10,000细胞/孔(每种状态3个孔)下，将来自成人的人类皮肤成纤维细胞(HDFa，生命技术公司)接种在含有低血清生长补充剂(LSGS，生命技术公司)的M106培养基中的96孔板中。使细胞在37℃下在5％CO2的湿润空气中生长24小时。然后，去除培养基，并且在16小时期间，在37℃下在5％CO2的湿润空气中，用肽H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH2(PEP-1)处理细胞。将仅在处理用培养基中温育的未经处理的细胞用作基础条件。众所周知，由于此化合物会增加ROS水平，作为阳性对照物，用在0.5mM磷酸盐缓冲盐水(PBS，西格玛)中制备的10μl过氧化氢(H2O2；西格玛)处理细胞。在37℃下在5％CO2的湿润空气中30分钟后，使用细胞对ROS水平进行定量。
[0320] 根据制造商的方案，使用细胞活性氧物质检测测定试剂盒(艾博抗)对ROS水平进行定量。简而言之，在60分钟期间，在培养基中用100μl的ROS Orange工作液处理细胞。一段时间后，使用 共聚焦显微镜(珀金埃尔默公司)测定荧光信号。使用Mitotracker Orange通道(激发滤光片：520-550nm/发射滤光片：560-630nm)测量荧光强度，并通过确定每孔的核数进行校正。为了进行此定量，将细胞用10μl的Hoechst 33342(赛默飞世尔科技公司)溶液染色，所述溶液是一种细胞渗透性核复染物，当其与dsDNA结合时在460nm处发出蓝色荧光，并在350nm处激发。
[0321] 表12中表示了人类皮肤成纤维细胞中的ROS水平相对于用H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH2(PEP-1)处理后的基础条件的百分比。这些值代表至少三个独立测定的平均值。
[0322]
[0323] 表12
[0324] 结果表明，尽管用H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH2(PEP-1)进行的处理增强了人类皮肤成纤维细胞的能量，如线粒体膜表面电位增加所示出的，但此处理不会在被测浓度下引起细胞中的ROS水平增加。
[0325] 实例16
[0326] 在同步的人类全层皮肤模型中测量水合作用水平。
[0327] 许多基本的皮肤功能都遵循昼夜节律：皮脂分泌在中午左右达到高峰，清晨皮肤血液流动和皮肤屏障低并且在傍晚达到高峰。温度和水合作用也表现出一天中的皮肤的时间依赖性模式。清晨低水平的皮肤水合作用在中午左右增加。皮肤水合作用是维持皮肤组织动态平衡的重要因素之一。皮肤中适当的水分含量可调节角质形成细胞层内的许多重要功能，如脂质层的完整性、对皮肤屏障功能的增强以及角质层的功能和结构组成。暴露在阳光下，不良的饮食习惯和不良的皮肤护理习惯会导致皮肤脱水、加速衰老、破坏胶原蛋白并形成表情纹和皱纹。结果，干燥的皮肤呈现出失活和阴沉的外观。
[0328] 可以通过测量皮肤的电容(皮肤的电特性)来评估表皮皮肤的水合作用，所述电容取决于相对于其它皮肤组分的水分含量。本实验的主要目的是评估肽H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH2(PEP-1)改善同步的人类皮肤模型中的水合作用水平的能力。
[0329] 根据供应商的ALI培养基(HENKEL)说明，在到达之后，将 全层皮肤模型(HENKEL)立即放置在皮氏培养皿中(每种条件5个皮肤模型)。在37℃下在5％CO2中温育72小时后，使同步协议初始化。为此，对皮肤模型进行12小时的两个交替循环，分别在37℃下在5％CO2的湿润空气中(白天模式)和在33℃下在5％CO2的湿润空气中(夜间模式)。在同步开始时，在皮肤模型中测试7:30时的水合作用的预处理测量。用DPM 9003BTTM( 技术公司)和MoistureMeter SC(Delphin)进行表皮的水合作用测量。为了进行预处理测量，用5ml磷酸盐缓冲盐水(PBS，西格玛)洗涤皮肤模型的表面。然后，将其置于干燥的无菌表面上，在所述无菌表面上，通过将传感器压靠在皮肤模型的上表面上进行测量。在进行预处理测量后，在模型的上表面中(50μl的处理)以及在皮氏培养皿内，用0.5mg/ml的肽H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH2(PEP-1)处理皮肤模型。将仅用培养基处理的皮肤模型用作基础条件。在相同条件下在24小时后替换此处理。处理48小时后，按照所描述的与预处理测量相同的方案，在7:30和11:30时进行水合作用测量。
[0330] 表13中的结果示出在48小时处理后7:30时的水合作用水平相对于基础条件下的水合作用水平的百分比的平均值。对于每种条件，相对于预处理值对水合作用的原始数据水平进行预归一化。这些值是针对一种测定计算的。用DPM9003 BTTM( 技术公司)进行水合作用测量。
[0331]
[0332] 表13
[0333] 表14中的结果表示了在48小时处理后7:30时的水合作用水平相对于基础条件下的水合作用水平的百分比的平均值。对于每种条件，相对于预处理值对水合作用的原始数据水平进行预归一化。这些值是针对一种测定计算的。用MoistureMeter SC(Delphin)进行水合作用测量。
[0334]
[0335] 表14
[0336] 表13和表14中的结果表明，肽H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH2(PEP-1)能够在7:30时增加同步的人类皮肤模型中的水合作用水平。处理后7:30时的水合作用水平示出与基础条件下11:30时的水合作用结果相比具有中间值。
[0337] 实例17
[0338] 使用实时PCR阵列，对成人(HEKa)同步人类表皮角质形成细胞中的时钟基因表达进行体外研究。
[0339] 许多皮肤功能遵循昼夜节律：皮脂分泌在中午左右达到高峰，并且电容(皮肤水合作用的一种量度)在一天中的早些时候较低。皮肤血液流动和皮肤屏障功能也表现出昼夜节律和超昼夜节律，一天中早些时候皮肤血液流动低并且在下午和傍晚达到高峰。
[0340] 在哺乳动物中，在所有组织的大多数中都发现了昼夜节律钟，并且这些昼夜节律钟基于调节的反馈回路，其中CLOCK-BMAL1复合体在白天期间驱动昼夜节律钟基因(如PER和CRY)的转录。昼夜节律钟涉及的蛋白质是组蛋白赖氨酸脱甲基酶蛋白，称为Jarid1A。Jarid1A与CLOCK-BMAL1形成复合体，以激活PER基因的转录。减少的Jarid1A的表达导致降低的PER基因的表达和改变的昼夜节律。然后，在清晨激活Jarid1A和时钟基因表达可能会提前昼夜节律周期，从而赋予日间皮肤功能。因此，本研究的主要目的是评估肽H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH2(PEP-1)在清晨增加同步人类角质形成细胞中的时钟基因表达的能力。
[0341] 将HEKa细胞(生命技术公司)以3.0x 105个细胞/孔接种于12孔板中并在培养基(补充有Mix C39016-CaCl2溶液的角质形成细胞生长培养基(Promocell))中温育。为了同步，对细胞进行12小时的两个交替循环，分别在37℃下在5％CO2的湿润空气中(白天模式)和33℃下在5％CO2的湿润空气中(夜间模式)。开始同步后12小时，将细胞与0.5mg/ml的合成肽H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH2(PEP-1)一起在培养基中温育。将仅用培养基处理的细胞用作基础条件。
[0342] 同步结束时，在两个不同的时间收集细胞裂解物：7:30(清晨时间点)和11:30(中午时间点)。简言之，根据制造商的方案，依据RNeasy Mini试剂盒(Qiagen)上所描述的方案，将细胞在孔中直接裂解，并纯化RNA。RNA洗脱后，用分光光度计(Thermo)对RNA样品的纯度进行定量和分析。对于每个样品，用iScript Advanced(BioRad)在最终20μl的体积中对3μg高品质的RNA进行反转录。在42℃下，将完整的反应混合物在热循环仪(Eppendorf)中温育30分钟，并且在85℃下停止反应5分钟。在与 Green(BioRad)一起使用的定制96孔板中，使用SYBR Green Supermix(BioRad)通过在实时PCR热循环仪(BioRad)中进行的qPCR使互补DNA扩增。SYBR Green与双链DNA分子结合并发出定量的荧光，荧光强度与PCR反应中产物的量成正比。BioRad CFX96仪器的循环条件为：95℃下持续3分钟，然后将以下过程执行40个周期：在95℃下进行5秒的变性，在60℃下进行30秒的退火和延伸。将GAPDH(甘油醛3-磷酸脱氢酶)、TBP(TATA盒结合蛋白)和HRPT1(次黄嘌呤磷酸核糖基转移酶1)用作内源性对照物。使用CFX Manager软件(BioRad)，使用归一化表达(ΔΔ(Ct))方法计算相对于样品基因表达和参考基因表达的成倍变化。
[0343] 表15和表16示出了，昼夜节律钟基因CRY2(隐花色素昼夜节律钟2)和PER3(周期昼夜节律钟3)相对于基础条件的成倍诱导。这些值代表至少3个独立实验的平均值。
[0344]
[0345] 表15
[0346]
[0347] 表16
[0348] 表15和16中的结果表明，相对于基础条件下的同一时间，在同步人类皮肤角质形成细胞培养基中，肽H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH2(PEP-1)能够在7:30时增加CRY2和PER3的表达水平。在用肽H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH2(PEP-1)处理后，CRY2和PER3基因表达量在7:30时达到与基础条件下在11:30时获得的CRY2和PER3基因表达类似的水平。
[0349] 实例18
[0350] 通过实时PCR阵列，对年轻人和老年人的人类表皮角质形成细胞(HEKa)中的PER基因表达进行体外研究。
[0351] 在哺乳动物中，在所有组织的大多数中都发现了昼夜节律钟，并且这些昼夜节律钟基于调节的反馈回路，其中CLOCK-BMAL1复合体在白天期间驱动昼夜节律钟基因(如PER和CRY)的转录。哺乳动物昼夜节律钟的破坏导致衰老加速，并且昼夜节奏随着年龄的增长而受损。PER基因的敲除造成的昼夜节律的基因破坏导致各种年龄相关的病理和可见的早衰迹象。随着年龄的增长，PER基因在人类皮肤细胞中的表达水平大大降低。因此，本研究的主要目的是使用实时PCR阵列评估肽H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH2(PEP-1)增加26岁和54岁供体的人类角质形成细胞上的PER2和PER3基因表达的能力。
[0352] 将26岁和54岁供体的人类角质形成细胞((HEKa)细胞(生命技术公司))以3.0 x 105个细胞/孔接种于12孔板中并在培养基(补充有Mix C39016-CaCl2溶液的角质形成细胞生长培养基(Promocell))中温育。为了同步，对细胞进行12小时的两个交替循环，分别在37℃下在5％CO2的湿润空气中(白天模式)和33℃下在5％CO2的湿润空气中(夜间模式)。开始同步后12小时，将细胞与0.5mg/ml的合成肽H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH2(PEP-1)一起在培养基中温育。将仅用培养基处理的细胞用作基础条件。
[0353] 同步结束时，在7:30(清晨时间点)收集细胞溶解产物。简言之，根据制造商的方案，依据RNeasy Mini试剂盒(Qiagen)上所描述的方案，将细胞在孔中直接裂解，并纯化RNA。RNA洗脱后，用分光光度计(Thermo)对RNA样品的纯度进行定量和分析。对于每个样品，用iScript Advanced(BioRad)在最终20μl的体积中对3μg高品质的RNA进行反转录。在42℃下，将完整的反应混合物在热循环仪(Eppendorf)中温育30分钟，并且在85℃下停止反应5分钟。在与 Green(BioRad)一起使用的96孔板中，使用SYBR Green Supermix(BioRad)通过在实时PCR热循环仪(BioRad)中进行的qPCR使互补DNA扩增。SYBR Green与双链DNA分子结合并发出定量的荧光，荧光强度与PCR反应中产物的量成正比。BioRad CFX96仪器的循环条件为：95℃下持续3分钟，然后将以下过程执行40个周期：在95℃下进行5秒的变性，在60℃下进行30秒的退火和延伸。将GAPDH(甘油醛3-磷酸脱氢酶)、TBP(TATA盒结合蛋白)和HRPT1(次黄嘌呤磷酸核糖基转移酶1)用作内源性对照物。使用CFX Manager Software(BioRad)，使用归一化表达(ΔΔ(Ct))方法计算相对于样品基因和参考基因表达的成倍变化。
[0354] 表17示出了，PER基因、PER2(周期昼夜节律钟2)和PER3(周期昼夜节律钟3)相对于基础条件的成倍诱导。这些值代表至少3个独立实验的平均值。
[0355]
[0356] 表17
[0357] 表17的结果表明，肽H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH2(PEP-1)能够增加不同年龄的PER2和PER3基因的表达水平。老角质形成细胞(来自54岁供体)中的这种增加更高，从而抵消了衰老期间PER基因表达的下降。
[0358] 实例19
[0359] 在同步的人类全层皮肤模型中进行脂质组学特性分析。
[0360] 脂质在皮肤中起重要作用。角质层(皮肤的外层)含有被称为角质化包膜(表皮细胞分化的终点)的特殊结构。此结构由被脂质包膜包围的角蛋白的高交联网构成。角质化包膜用作外来颗粒、病原体和表皮水分流失的物理屏障，从而调节皮肤动态平衡。神经酰胺(角质化包膜内的主脂质组分)是由鞘氨醇和脂肪酸构成的分子家族。皮肤中的神经酰胺的量提供了皮肤的不透水特性，从而避免出现皮肤干燥。ω-3脂肪酸家族在皮肤功能中也起着关键作用。除此之外，二十二碳六烯酸(DHA)是一种长链多不饱和脂肪酸，其到双层细胞膜中的并入(也称为与DHA共轭的磷脂酰胆碱与总磷脂酰胆碱水平之间的比率，即PC-DHA/PC)有助于维持适当的细胞膜流动性。饮食补充DHA增加其皮肤并入，从而改善通过减少表皮水分流失测得的皮肤屏障功能并且因此使皮肤水合作用增加。
[0361] 可以通过使用超高效液相色谱-质谱(UHPLC-MS)进行测量来评估来自人类皮肤模型的脂质组学特性。本实验的主要目的是评估在用肽H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH2(PEP-1)处理后同步人类皮肤模型的脂质组学特性，以确定神经酰胺的皮肤含量和PC-DHA/PC比率。
[0362] 根据供应商的ALI培养基(HENKEL)说明，在到达之后，将 全层皮肤模型(HENKEL)放置在皮氏培养皿中(每种条件5个皮肤模型)。在37℃下在5％CO2中温育72小时后，使同步协议初始化。为此，对皮肤模型进行12小时的两个交替循环，分别在37℃下在5％CO2的湿润空气中(白天模式)和在33℃下在5％CO2的湿润空气中(夜间模式)。在模型的上表面中(50μl的处理)以及在皮氏培养皿内，用0.5mg/ml的肽H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH2(PEP-1)处理皮肤模型。将用培养基处理的皮肤模型用作基础条件。在相同条件下在24小时后替换此处理。处理48小时后，分别在7:30和11:30收集皮肤模型，并冷冻在-80℃下以进行UHPLC-MS分析。简而言之，将样品融化并与氯化钠(50mM)和氯仿/甲醇(2:1)(体积:体积)混合并使其均质化。将样品均质化后，将提取物在-20℃下温育1小时，并且在18,000x g下离心15分钟。然后收集有机相并在真空下干燥。将干燥提取物最后重构于乙腈/异丙醇(1:1)(体积:体积)中，在1,8000x g下离心5分钟，并将其转移到小瓶中以进行-MS分析。所有数据都使用MassLynx 4.1软件(美国米尔福德沃特世公司(Waters
Corp.))的TargetLynx应用程序管理器进行处理。
Corp.))的TargetLynx应用程序管理器进行处理。
[0363] 表14中的结果示出在处理48小时后的7:30时的神经酰胺量(包含皮肤中的大多数神经酰胺基团，占总皮肤神经酰胺的68.9％)在同一时间相对于基础条件的百分比的平均值。这些值是针对一种测定计算的。
[0364]
[0365] 表18
[0366] 表18中的结果表明，肽H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH2(PEP-1)能够在7:30时增加同步人类皮肤模型中的神经酰胺水平。处理后7:30时的神经酰胺量示出与基础条件下11:30时的神经酰胺水平结果相比具有相似值。
[0367] 表19中的结果示出在48小时处理后7:30时的PC-DHA/PC比率相对于基础条件的百分比的平均值。这些值是针对一种测定计算的。
[0368]
[0369] 表19
[0370] 表19中的结果表明，肽H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH2(PEP-1)能够在7:30时增加同步人类皮肤模型中的PC-DHA/PC比率。处理后7:30时的PC-DHA/PC比率示出与基础条件下11:30时的值相比具有相似值。
[0371] 实例20
[0372] 包括肽H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH2(PEP-1)的微乳剂的制备[0373] 在合适的容器中，将肽H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH2(PEP-1)溶于水中[INCI:水(水)](相A1)，并且然后溶于相A2成分的混合物(2-苯氧基乙醇)[INCI：苯氧乙醇]、 XL[INCI：羟丙基淀粉磷酸酯]、ZemeaTM[INCI：丙二醇]、[INCI：小核菌胶]，并且引入透明质酸钠[INCI：透明质酸钠]；见表16)，其已预先混合在单独的受体中。将所得混合物在70℃下加热，同时轻轻搅拌并且然后添加 Fax CPE-K[INCI：鲸蜡基磷酸钾](相A3)。
[0374] 在另一受体中，相B的组分为：SchercemolTM DIS Ester[INCI：癸二酸二异丙酯]，并且引入MontanovTM 68[INCI：鲸蜡硬脂醇；鲸蜡硬脂基葡糖苷]，将其在80℃下加热并搅拌混合物。通过相A缓慢引入相B，同时剧烈搅拌。
[0375] 将温度保持在70-80℃下，用钛探针使样品均质化30秒。
[0376]
[0377] 表20
[0378] 实例21
[0379] 包括实例20的微乳剂的脂质纳米颗粒组合物的制备
[0380] 将实例20中制备的微乳剂引入到合适的受体中(相A)。
[0381] 另外，通过溶解 CG-17 Cationic Guar[INCI：瓜尔羟丙基氯化铵；水中的水(水)[INCI：水(水)]来制备相B(见表17)。在剧烈搅拌下，将相B加到相A。
[0382] 缓慢加入相C( XL[磷酸羟丙基淀粉]和 [INCI：小核菌胶])和相D(HeliogelTM[INCI：丙烯酸钠共聚物；氢化聚异丁烯；卵磷脂；聚甘油-10硬脂酸酯；向日葵(向日葵)籽油；生育酚])的组分，并且在剧烈搅拌下一个一个地加入。
[0383]
[0384] 表21
[0385] 实例22
[0386] 包括肽H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH2(PEP-1)的脂质的制备在合适的容器中，通过将肽H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH2(PEP-1)溶于水[INCI:水(水)]、ZemeaTM[INCI:丙二醇]中来制备相A，并且将2-苯氧乙醇[INCI:苯氧乙醇](相B)加入相A。
[0387] 当所有前述组分溶解时，在剧烈搅拌下一点一点地加入卵磷脂[INCI:卵磷脂]C相)，直至完全分散为止。最终获得的组合物示于表22中。
[0388]
[0389] 表22
[0390] 用钛探针使样品均质化30秒。
[0391] 实例23：
[0392] 与阳离子聚合物结合的实例22的脂质的制备
[0393] 在缓慢搅拌下，将实例22中获得的脂质以95:5(w/w)的脂质与阳离子聚合物之比添加到 CI-50[INCI:水(水)；淀粉羟丙基三甲基氯化铵；脲；乳酸钠；氯化钠；苯甲酸钠]中。
[0394] 实例24
[0395] 含有肽H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH2(PEP-1)的化妆品组合物(液体乳剂)的制备
[0396] 在合适的容器中，将相A1的成分：水[INCI:水(水)]、ZemeaTM[INCI:丙二醇]、甘油[INCI:甘油]、GenencareTM OSMS BA[INCI:甜菜碱]、 NA2[INCI:乙二胺四乙酸二钠]和山梨酸钾[INCI:山梨酸钾]溶解。
[0397] 将相A2： ultrez 10聚合物[INCI:卡波姆]添加到前述混合物中。一旦分散，就添加相A3： Fax CPE-K[INCI:鲸蜡基磷酸钾]。将所得混合物在70-75℃下加热。
[0398] 在另一受体中，将相B的组分： HD[INCI:异十六烷]、Lincol BAS[INCI：C12-15烃基安息香酸盐]、Gandak C[INCI：鲸蜡醇]、Sorbital T 20P[INCI：聚山梨醇酯20]、2-苯氧乙醇[INCI：苯氧乙醇]、蔬菜硬脂酸50/50[INCI：硬脂酸；棕榈酸]混合，并在70-75℃下加热。通过相A缓慢引入相B，同时用涡轮剧烈搅拌。
[0399] 将混合物冷却到40℃，并加入相C：BRB CM 56-S[INCI：环甲硅油]、水中肽H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH2(PEP-1)和辛烷-1,2-二醇[INCI：水(水)；磷酸钠；磷酸二钠；辛甘醇；九肽-1]的预混合物以及香料[INCI：香料(香料)]。用相D的成分：20％w/w的氢氧化钠[INCI：水(水)；氢氧化钠]将pH调节到6.0-6.5。
[0400]
[0401] 表23
[0402] 实例25
[0403] 含有肽H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH2(PEP-1)的化妆品组合物(乳膏)的制备
[0404] 在合适的容器中，将相A1的成分：水[INCI:水(水)]、ZemeaTM[INCI:丙二醇]、5[INCI:戊二醇]以及 NA2[INCI:乙二胺四乙酸二钠]溶解。
[0405] 将相A2的成分： Ultrez 10聚合物[INCI:卡波姆]加入前述混合物中。一旦分散，就引入相A3： Fax CPE-K[INCI:鲸蜡基磷酸钾]。将混合物在70-75℃下加热。
[0406] 在单独的容器中，将相B的成分：SchercemolTM DIA Ester[INCI:己二酸二异丙酯]、 2000[INCI：甘油硬脂酸酯、鲸蜡硬脂醇、棕榈酰水解小麦蛋白钾]、EC[INCI：椰油酸乙基己酯]、Astro-sil 2C 350[INCI：二甲聚硅氧烷]、醋酸
生育酚[INCI：醋酸生育酚]和PhenoxetolTM[INCI：苯氧乙醇]混合，并将所得混合物在70-75℃下加热。
生育酚[INCI：醋酸生育酚]和PhenoxetolTM[INCI：苯氧乙醇]混合，并将所得混合物在70-75℃下加热。
[0407] 通过用涡轮的快速搅拌下将相B缓慢加入到相A来制备所述乳剂。
[0408] 一旦将所述混合物冷却到40℃，将相C：NovemerTM EC-1聚合物[INCI：矿物油(矿脂)；水(水)；丙烯酸酯/丙烯酰胺交联聚合物；聚山梨醇酯85]，香料[INCI：香料(香料)]以及水中肽H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH2(PEP-1)的预混合物和辛烷-1,2-二醇[INCI：水(水)；磷酸钠；磷酸二钠；辛甘醇；九肽-1]的预混合物加入前述混合物中。
[0409] 通过相D的成分：20％w/w的氢氧化钠[INCI：水(水)；氢氧化钠]将pH调节到6.0-6.5。
[0410]
[0411] 表24
[0412] 实例26
[0413] 含有H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH2(PEP-1)的化妆品混合物(乳液)的制备
[0414] 在合适的容器中，将相A1的成分：水[INCI:水(水)]、ZemeaTM[INCI:丙二醇]、甘油[INCI:甘油、山梨酸钾[INCI：山梨酸钾]和 NA2[INCI:乙二胺四乙酸二钠]溶解。
[0415] 将相A2的成分： Ultrez 30聚合物[INCI:卡波姆]加入前述混合物中。一旦分散，引入相A3：黄原胶[INCI:黄原胶]。将混合物在70-75℃下加热。
[0416] 在单独的容器中，将相B的成分： 白芒花籽油[INCI:白池花(白芒花)籽油]、Kodasil 600 IDD Gel[INCI:异十二烷；乙烯基二甲聚硅氧烷/月桂基聚二甲基硅氧烷交联聚合物；二甲聚硅氧烷；月桂基聚二甲基硅氧烷]、Astro-sil 2C 350[INCI:二甲聚硅氧烷]、SchercemolTM CATC ester[INCI：椰油酰己二酸/三羟甲基丙烷共聚物；三羟甲基丙烷]、SchercemolTM DIS ester[INCI：癸二酸二异丙酯]、醋酸生育酚[INCI：醋酸生育酚]和PhenoxetolTM[INCI：苯氧乙醇]混合，并将所得混合物在70-75℃下加热。
[0417] 通过用涡轮的快速搅拌下将相B缓慢加入到相A来制备所述乳剂。
[0418] 一旦将此混合物冷却到40℃，就将相C：NovemerTM EC-2聚合物[INCI：水(水)；丙烯酸类/山嵛醇聚醚-25甲基丙烯酸酯交联聚合物；氢化聚癸烯；月桂基葡糖苷]，SA-SB-300(7％)[INCI：二氧化硅；二甲聚硅氧烷]、香料[INCI：香料(香料)]以及水中肽H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH2(PEP-1)和辛烷-1,2-二醇[INCI：水(水)；磷酸钠；磷酸二钠；辛甘醇；九肽-1]的的预混合物加入前述混合物中。
[0419] 通过相D的成分：20％w/w的氢氧化钠[INCI：水(水)；氢氧化钠])将pH调节到6.0-6.5。
[0420]
[0421] 表25
[0422] 实例27
[0423] 凝胶-乳膏组合物(安慰剂)的制备
[0424] 在合适的容器中，将相A的成分：水[INCI：水(水)]、ZemeaTM[INCI：丙二醇]、[INCI：苯氧乙醇]、 NA2[INCI：乙二胺四乙酸二钠]和山梨酸钾颗粒[山梨酸钾]溶解。
[0425] 将相A1的成分： Ultrez 21聚合物[INCI:丙烯酸酯/C10/30烷基丙烯酸聚合物]加入前述混合物中。一旦分散，将相A2：黄原胶[INCI:黄原胶]加入前述混合物中，搅拌直至完全分散为止。
[0426] 在单独的容器中，将相B的成分：SchercemolTM 1818 Ester[INCI:异硬脂酸异硬脂]称重。
[0427] 通过用涡轮的快速搅拌下将相B缓慢加入到相A来制备所述乳剂。
[0428] 通过相D的成分：20％w/w的氢氧化钠[INCI：水(水)；氢氧化钠])将pH调节到6.0-6.5。
[0429]
[0430] 表26
[0431] 实例28
[0432] 包括5％(w/w)的H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH2(PEP-1)的凝胶-乳膏组合物的制备
[0433] 在合适的容器中，将相A的成分：水[INCI：水(水)]、ZemeaTM[INCI：丙二醇]、[INCI：苯氧乙醇]、 NA2[INCI：乙二胺四乙酸二钠]和山梨酸钾颗粒[山梨酸钾]溶解。
[0434] 将相A1的成分： Ultrez 21聚合物[INCI:丙烯酸酯/C10/30烷基丙烯酸聚合物]加入前述混合物中。一旦分散，将相A2：黄原胶[INCI:黄原胶]加入前述混合物中，搅拌直至完全分散为止。
[0435] 在单独的容器中，将相B的成分：SchercemolTM 1818 Ester[INCI:异硬脂酸异硬脂]称重。
[0436] 通过用涡轮的快速搅拌下将相B缓慢加入到相A来制备所述乳剂。
[0437] 将相C：PEP-1溶液[INCI:水(水)；磷酸钠；磷酸二钠；辛甘醇；九肽-1]加入前述混合物中。
[0438] 通过相D的成分：20％w/w的氢氧化钠[INCI：水(水)；氢氧化钠])将pH调节到6.0-6.5。
[0439]
[0440] 表27
[0441] 实例29
[0442] 用于评估短期应用根据本发明的活性成分的高加索人皮肤类型女性志愿者的供能效应的体内研究。
[0443] 皮肤具有内部时钟。其基本特性遵循昼夜节律调节，并且在中午左右面部外观达到最佳状态。但是，如轮班或睡眠不足之类的状况可能会导致皮肤生物功能失调。描述本文的实例以表明包括本发明的肽的组合物具有供能效果，并且能够使我们皮肤的生物钟提前，如通过对皮肤微循环、眼袋体积和皮肤屏障功能的测量所估计的。
[0444] 此研究进行了7天。将18名年龄在36到46岁之间的高加索人女性志愿者分为两组。所述组中的一组在早晨在整个面部上应用实例28中所述的组合物，并且在晚上应用实例27中所述的安慰剂乳膏。第二组志愿者一天两次(清晨和晚上)在整个面部上应用实例27中所述的安慰剂乳膏。受试者以自己为参考，并且将在7天后获得的结果与在初始时间获得的结果进行比较。剥夺睡眠后7天进行测量：志愿者仅睡4小时，并且在应用产品1小时后的清晨进行测量。将使用实例28的组合物所获得的结果与使用安慰剂乳膏所获得的结果进行比较。
[0445] 皮肤微循环
[0446] 产品应用7天后，在每个脸颊使用组织活力成像器(TiVi)(WheelsBridgeTM)进行皮肤微循环测量。表28中示出了结果。
[0447]
[0448] 表28产品应用7天后，皮肤微循环变化。
[0449] 结果表明，在应用本发明的组合物7天后，与安慰剂以及初始时间相比，微循环增加。
[0450] 眼袋的体积(眼袋体积)
[0451] 产品应用7天后，在随机选择的一只眼睛中，用Primos lite 3D(Canfield)系统测量眼袋的体积。表29中示出了结果。
[0452]
[0453] 表29在随机选择的眼睛上应用7天产品后眼袋体积的变化。
[0454] 结果表明，与安慰剂以及初始时间相比，应用活性成分7天后眼袋的体积有所减小。
[0455] 皮肤屏障功能系数
[0456] 在应用活性成分7天后，测量与皮肤屏障功能相关的三个不同参数。用CM825(Courage+Khazaka)测量水合作用，用Vapometer(Delfin
Technologies)测量表皮水分流失(TEWL)，并且用 SM810(Courage+Khazaka)
测量皮脂含量。通过加上测量水合作用和皮脂获得的值并减去TEWL来计算皮肤屏障功能系数。表30中示出了结果。
Technologies)测量表皮水分流失(TEWL)，并且用 SM810(Courage+Khazaka)
测量皮脂含量。通过加上测量水合作用和皮脂获得的值并减去TEWL来计算皮肤屏障功能系数。表30中示出了结果。
[0457]
[0458] 表30产品应用7天后，皮肤屏障系数增加。
[0459] 结果表明，与安慰剂以及初始时间相比，应用活性成分7天后皮肤屏障功能系数有所增加。
[0460] 因此，包括本发明的肽的组合物能够使生物钟提前，如通过皮肤微循环增加、眼袋体积减小和对清晨皮肤屏障功能的改善、甚至在剥夺睡眠后所证明的。
[0461] 实例30
[0462] 用于评估高加索人皮肤类型女性志愿者长期应用产品后的供能和抗衰老效果的体内研究。
[0463] 衰老和“时差”降低了皮肤建立内部昼夜节律时钟的能力，从而导致一天中生物皮肤功能的去同步化。此研究旨在证明根据本发明的活性成分能够使我们皮肤的生物钟提前，从而产生抗衰老特性。
[0464] 此研究进行了28天。将41名年龄在31到46岁之间的高加索人女性志愿者分为两组。所述组中的一组在早晨在整个面部上应用实例28中所述的组合物，并且在晚上应用实例27中所述的安慰剂乳膏。第二组志愿者一天两次(清晨和晚上)在整个面部上应用实例27中所述的安慰剂乳膏。受试者以自己为参考，并且将在28天后获得的结果与在初始时间获得的结果进行比较。在清晨进行测量。将使用实例28的组合物所获得的结果与使用安慰剂乳膏所获得的结果进行比较。
[0465] 通过测量皮肤光度、皱纹的可见度和眼袋体积来评估根据本发明的活性成分对面部的供能和抗衰老效果。
[0466] 皮肤光度
[0467] 产品应用28天后，使用Camerascan(Orion Concept)拍摄志愿者的脸部图像，并进行光度测量。表31中示出了结果。
[0468]
[0469] 表31产品应用28天后皮肤光度增加。关于安慰剂乳膏的统计学显著性：使用成对学生t检验计算出***p<0.001。
[0470] 结果表明，在应用活性成分28天后，与初始时间相比，皮肤光度显著增加。使用活性成分后，皮肤光度的增加也高于安慰剂乳膏。
[0471] 皱纹的可见度
[0472] 产品应用28天后，使用Camerascan(Orion Concept)拍摄志愿者的脸部图像，并测量皱纹的可见度。表32中示出了结果。
[0473]
[0474] 表32产品应用28天后皱纹可见度的变化。关于安慰剂乳膏的统计学显著性：通过成对学生t检验计算出*p<0.05。
[0475] 结果表明，在应用活性成分28天后，与初始时间相比，皮肤的皱纹可见度显著降低。此外，在应用活性成分后，皱纹可见度的降低高于安慰剂乳霜。
[0476] 眼袋的体积(眼袋体积)
[0477] 产品应用28天后，在随机选择的一只眼睛中，用Primos lite 3D(Canfield)系统测量眼袋的体积。表33中示出了结果。
[0478]
[0479]
[0480] 表33在随机选择的眼睛上应用28天产品后眼袋体积的变化。
[0481] 表33中示出的这些结果表明，在应用活性成分28天后，与安慰剂以及初始时间相比，眼袋体积减小。
[0482] 因此，根据本发明的活性成分能够使我们皮肤的生物钟提前，从而产生抗衰老效果，如通过皱纹可见度降低、眼袋体积减小以及皮肤光度增加所证明的。
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