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一种强力枇杷露指纹图谱的构建方法及品质评价方法

阅读：328发布：2020-05-11

专利汇可以提供一种强力枇杷露指纹图谱的构建方法及品质评价方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本发明涉及医药领域，具体公开了一种强力枇杷露指纹图谱的构建方法及品质评价方法。所述强力枇杷露指纹图谱的构建方法包括：利用30％甲醇制备参照物溶液和供试品溶液，色谱条件采用HaloR 5 C18色谱柱(柱长为250mm，内径为4.6mm，粒径为5μm)，流动相为以乙腈-0.4％磷酸溶液为3～40：97～60的混合溶液；流速为0.5～1.5mL/min；检测波长为254～325nm；柱温30～40℃，理论板数按绿原酸峰计算应不低于50000；分别精密吸取参照物溶液和供试品溶液各5～20μL，注入液相色谱仪，记录4～30min的色谱峰，得到强力枇杷露指纹图谱。利用本发明提供的指纹图谱及其构建方法，可避免以次充好、减量投料、改变炮制、生产工艺等不严谨状况，从而截断生产出劣质药品的可能。，下面是一种强力枇杷露指纹图谱的构建方法及品质评价方法专利的具体信息内容。

权利要求

1.一种强力枇杷露指纹图谱的构建方法，其特征在于，包括下述步骤：
(1)参照物溶液的制备：精密称取绿原酸对照品适量，加30％甲醇制成每1mL含绿原酸
0.025mg的溶液，即得；
(2)供试品溶液的制备：取3mL强力枇杷露样品，置于C18(6cc)小柱上，加水12mL洗脱，继用30％甲醇溶液12mL洗脱，收集水洗脱液和30％甲醇洗脱液，合并，蒸干，残渣加适量
30％甲醇使其溶解，定量转移至2mL容量瓶中，加30％甲醇定容，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
R
(3)色谱条件：采用Halo5 C18色谱柱，十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；
流动相为以乙腈-0.4％磷酸溶液为3～40：97～60的混合溶液；流速为0.5～1.5mL/min；检测波长为254～325nm；柱温30～40℃，理论板数按绿原酸峰计算应不低于50000；
(4)测定：分别精密吸取参照物溶液和供试品溶液各5～20μL，注入液相色谱仪，记录4～30min的色谱峰，得到强力枇杷露指纹图谱。
2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，以乙腈为流动相A、0.4％磷酸溶液为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；平衡时间10分钟；流速每分钟为1.0mL；检测波长为梯度波长；柱温35℃；
3.根据权利要求1或2所述的构建方法，其特征在于，用滤纸滤过，取续滤液。
4.一种强力枇杷露标准指纹图谱，其特征在于，选取不同批次质量合格且品质优异的强力枇杷露样品作为供试品，根据权利要求1～3任一项所述的构建方法制作指纹图谱，通过软件生成代表平均状态的图谱，即为强力枇杷露标准指纹图谱。
5.根据权利要求4所述的强力枇杷露标准指纹图谱，其特征在于，所述强力枇杷露标准指纹图谱由15个特征峰构成，所述特征峰中，峰1为共有峰，峰2为百部峰，峰3为共有峰，峰4为枇杷叶峰，峰5为共有峰，峰6为共有峰，峰7为百部峰，峰8为共有峰，峰9为共有峰，峰10为绿原酸峰，峰11为桑白皮峰，峰12为共有峰，峰13为共有峰，峰14为共有峰，峰15为共有峰。
6.一种强力枇杷露的品质评价方法，其特征在于，以待测样品为供试品，采用权利要求
1～3任一项所述构建方法的步骤(1)～步骤(4)得到待测样品的指纹图谱，利用中药色谱指纹图谱相似度评价软件将所述待测样品的指纹图谱与权利要求4或5所述的强力枇杷露标准指纹图谱进行分析，相似度大于0.90为合格产品。

说明书全文

一种强力枇杷露指纹图谱的构建方法及品质评价方法

技术领域

[0001] 本发明涉及医药领域，具体地说，涉及一种强力枇杷露指纹图谱的构建方法及品质评价方法。

背景技术

[0002] 现有技术中，常单独对强力枇杷露的某一种成分进行定性或定量研究，比如薄荷脑的鉴别或含量、罂粟壳的鉴别或含量、枇杷叶的鉴别、百部鉴别。通常都是选择1-2种药材制定标准，不法厂商可能会针对标准采用一定手段，例如非法添加等，可以出现检验合格但是实际是劣药的情况。

[0003] 而当增加为针对多种成分进行定性或定量研究时，又存在相互干扰，谱图易重叠、不清晰等问题。

[0004] 因此，亟待研发一种可对强力枇杷露产品进行整体品质监控和评价的方法，并构建一种清晰、无干扰的、可对强力枇杷露中多种重要活性成分定性和/或定量的指纹图谱，作为对该产品进行品质监控和评价的客观依据与基础。

发明内容

[0005] 为了解决现有技术中存在的问题，本发明的目的是提供一种强力枇杷露指纹图谱的构建方法及品质评价方法。

[0006] 为了实现本发明目的，本发明的技术方案如下：

[0007] 第一方面，本发明提供了一种强力枇杷露指纹图谱的构建方法，包括下述步骤：

[0008] (1)参照物溶液的制备：精密称取绿原酸对照品适量，加30％甲醇制成每1mL含绿原酸0.025mg的溶液，即得；

[0009] (2)供试品溶液的制备：取3mL强力枇杷露样品，置于C18(6cc)小柱上，加水12mL洗脱，继用30％甲醇溶液12mL洗脱，收集水洗脱液和30％甲醇洗脱液，合并，蒸干，残渣加适量30％甲醇使其溶解，定量转移至2mL容量瓶中，加30％甲醇定容，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

[0010] (3)色谱条件：采用HaloR5 C18色谱柱(柱长为250mm，内径为4.6mm，粒径为5μm)，十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；

[0011] 流动相为以乙腈-0.4％磷酸溶液为3～40：97～60的混合溶液；流速为0.5～1.5mL/min；检测波长为254～325nm；柱温30～40℃，理论板数按绿原酸峰计算应不低于
50000；

[0012] (4)测定：分别精密吸取参照物溶液和供试品溶液各5～20μL，注入液相色谱仪，记录4～30min的色谱峰，得到强力枇杷露指纹图谱。

[0013] 进一步地，以乙腈为流动相A、0.4％磷酸溶液为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；平衡时间10分钟；流速每分钟为1.0mL；检测波长为梯度波长；柱温35℃；

[0014]

[0015] 进一步地，用滤纸滤过，取续滤液。

[0016] 第二方面，一种强力枇杷露标准指纹图谱，选取不同批次质量合格且品质优异的强力枇杷露样品作为供试品，根据前述构建方法制作指纹图谱，通过软件生成代表平均状态的图谱，即为强力枇杷露标准指纹图谱。

[0017] 将不同批次质量合格且品质优异的强力枇杷露样品作为标准供试品，在本发明中，该标准供试品选自过去两年中生产的6000多批产品中品质上乘的100批代表性批次。

[0018] 进一步地，所述强力枇杷露标准指纹图谱由15个特征峰构成，所述特征峰中，峰1为共有峰，峰2为百部峰，峰3为共有峰，峰4为枇杷叶峰，峰5为共有峰，峰6为共有峰，峰7为百部峰，峰8为共有峰，峰9为共有峰，峰10为绿原酸峰，峰11为桑白皮峰，峰12为共有峰，峰13为共有峰，峰14为共有峰，峰15为共有峰。

[0019] 第三方面，本发明提供了一种强力枇杷露的品质评价方法，以待测样品为供试品，采用前述所述构建方法得到待测样品的指纹图谱，利用中药色谱指纹图谱相似度评价软件将所述待测样品的指纹图谱与所述强力枇杷露标准指纹图谱进行分析，相似度大于0.90为合格产品。

[0020] 本发明涉及到的原料或试剂均为普通市售产品，涉及到的操作如无特殊说明均为本领域常规操作。

[0021] 在符合本领域常识的基础上，上述各优选条件，可以相互组合，得到具体实施方式。

[0022] 本发明的有益效果在于：

[0023] 本发明对参照物溶液、供试品溶液、色谱条件等均进行了优化，使得本发明所提供的强力枇杷露指纹图谱的构建方法能够构建出特征峰清晰、无干扰的强力枇杷露指纹图谱。利用该构建方法制作的标准指纹图谱可同时显示出15个相互不重叠且无干扰的清晰特征峰，所述特征峰分别来自枇杷叶、百部和桑白皮等，各个特征峰的有无以及相对位置可用于定性，特征峰的大小可用于定量。

[0024] 如果药材的种属、产地、炮制工艺、提取方法发生偏移，都会引起特征峰数量、位置和大小发生变化，变化量通过专用软件与标准图谱相比较，超出标准时可以判定为不合格。这样就通过指纹图谱的方式同时控制药材基原、产地、炮制工艺、生产工艺等多个维度，避免以次充好、减量投料、改变炮制、生产工艺等不严谨状况，从而截断生产出劣质药品的可能。
附图说明

[0025] 图1为本发明所述构建方法构建得到的强力枇杷露标准指纹图谱。

[0026] 图2为本发明实施例3中对15批次产品进行测试的试验结果。

[0027] 图3为采用对比例1所述构建方法构建得到的强力枇杷露标准指纹图谱。

[0028] 图4为采用对比例2所述构建方法构建得到的强力枇杷露标准指纹图谱。

[0029] 图5为采用对比例3所述构建方法构建得到的强力枇杷露标准指纹图谱。

[0030] 图6为采用对比例4所述构建方法构建得到的强力枇杷露标准指纹图谱。

[0031] 图7为采用对比例5所述构建方法构建得到的强力枇杷露标准指纹图谱。

具体实施方式

[0032] 下面将结合实施例对本发明的优选实施方式进行详细说明。需要理解的是以下实施例的给出仅是为了起到说明的目的，并不是用于对本发明的范围进行限制。本领域的技术人员在不背离本发明的宗旨和精神的情况下，可以对本发明进行各种修改和替换。

[0033] 下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。

[0034] 下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

[0035] 实施例1指纹图谱的构建

[0036] 1、参照物溶液的制备：精密称取绿原酸对照品适量，加30％甲醇制成每1mL含绿原酸0.025mg的溶液，即得；

[0037] 2、供试品溶液的制备：取3mL强力枇杷露样品，置于C18(6cc)小柱上，加水12mL洗脱，继用30％甲醇溶液12mL洗脱，收集水洗脱液和30％甲醇洗脱液，合并，蒸干，残渣加适量30％甲醇使其溶解，定量转移至2mL容量瓶中，加30％甲醇定容，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

[0038] 3、色谱条件：采用Halo R 5C18色谱柱(柱长为250mm，内径为4.6mm，粒径为5μm)，十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；

[0039] 以乙腈为流动相A、0.4％磷酸溶液为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；平衡时间10分钟；流速每分钟为1.0mL；检测波长为梯度波长；柱温35℃；理论板数按绿原酸峰计算应不低于50000；

[0040]

[0041] 4、测定：分别精密吸取参照物溶液和供试品溶液各5～20μL，注入液相色谱仪，记录4～30min的色谱峰，得到强力枇杷露指纹图谱。

[0042] 实施例2标准指纹图谱的构建

[0043] 选取过去两年中生产的6000多批强力枇杷露产品中品质上乘的100批代表性批次产品作为标准供试品，根据实施例1所述方法制作指纹图谱，通过软件生成代表平均状态的图谱，即为强力枇杷露标准指纹图谱(如图1所述)。

[0044] 所述强力枇杷露标准指纹图谱由15个特征峰构成，所述特征峰中，峰1为共有峰，峰2为百部峰，峰3为共有峰，峰4为枇杷叶峰，峰5为共有峰，峰6为共有峰，峰7为百部峰，峰8为共有峰，峰9为共有峰，峰10为绿原酸峰，峰11为桑白皮峰，峰12为共有峰，峰13为共有峰，峰14为共有峰，峰15为共有峰。

[0045] 实施例3标准指纹图谱的验证

[0046] 选取15批代表性品质合格产品，按实施例1所述方法构建指纹图谱，并利用中药色谱指纹图谱相似度评价软件将所得样品的指纹图谱与实施例2所得的标准指纹图谱进行分析。

[0047] 软件截图如图2所示，表中数据表明15批次样本之间相似度在0.864～0.997，与生成的标准图谱相似度在0.962～0.997之间。

[0048] 对比例1

[0049] 本对比例与实施例1的区别在于，将色谱柱由(Halo R 5C18250mm×4.6mm，5μm)变为(150mm×4.6mm，4μm)，采用实施例2的供试品所构建的指纹图谱如图3所示，可以看出，图谱显示12个样品峰，并且色谱峰的峰面积、保留时间均与标准图谱不一致。

[0050] 对比例2

[0051] 本对比例与实施例1的区别在于，将实施例1梯度变化流动相改为恒比例(乙腈：0.4％磷酸溶液为5:95)运行，其余步骤和操作参数与实施例1相同。采用实施例2的供试品所构建的指纹图谱如图4所示，可以看出，只显示出9个色谱峰，并且色谱峰的峰面积、保留时间均与标准图谱不一致。

[0052] 对比例3

[0053] 本对比例与实施例1的区别在于，将实施例1中供试品处理中改变洗脱溶剂：由30％甲醇改为10％甲醇，其余步骤和操作参数与实施例1相同。采用实施例2的供试品所构建的指纹图谱如图5所示，可以看出，缺少4个色谱峰，并且色谱峰的峰面积、保留时间均与标准图谱不一致。

[0054] 对比例4

[0055] 本对比例与实施例1的区别在于，将实施例1中的检测波长改变：

[0056] 0～5.5分钟：由310nm改为254nm，

[0057] 5.5～9.5分钟：由258nm改为310nm，

[0058] 9.5～11.5分钟：由325nm改为254nm,

[0059] 11.5～14.0分钟：由254nm改为310nm，

[0060] 其余步骤和操作参数与实施例1相同。采用实施例2的供试品所构建的指纹图谱如图6所示，可以看出，缺少9个色谱峰，并且色谱峰的峰面积、保留时间均与标准图谱不一致。

[0061] 对比例5

[0062] 本对比例与实施例1的区别在于，将实施例1中供试品处理中改变洗脱溶剂：由30％甲醇改为100％甲醇，其余步骤和操作参数与实施例1相同。采用实施例2的供试品所构建的指纹图谱如图7所示，可以看出，缺少3个色谱峰，并且色谱峰的峰面积、保留时间均与标准图谱不一致。

[0063] 虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

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