技术领域
[0001]本
发明属于物质的分析检测领域，特别是
食品安全快速检测技术领域。
背景技术
[0002]乌洛托品，全名1，3，5，7_四氮杂三环[3.3.I.I]癸烷，
别名六次甲基四胺，可作为缓蚀剂、
固化剂、防缩剂和
杀菌剂等。乌洛托品本身是低毒的，但在弱酸的条件下，乌洛托品能分解出具有毒性的甲
醛，同时甲醛在体内还可还原为甲醇，故也表现出甲醇的毒理作用。对人体的肾、肝、中枢神经、免疫功能、消化系统等均有损害。同时乌洛托品是卫生部公布的151种非食用物质之一，在全国打击违法添加非食用物质和滥用
食品添加剂专项
整治领导小组发布的第五批《食品中可能违法添加的非食用物质和易滥用的食品添加剂名单》中，禁止乌洛托品添加到食品当中或加工食品过程中使用。
[0003]目前国内外有关乌洛托品的检测方法主要集中在色谱法:气相色谱法、液相色谱法、液质联用法;光谱法:紫外分光光度法，分子
荧光法和离子
电极法、极谱法等，上述的方法中或操作复杂或使用大型昂贵仪器，不利于现场实时快速检测。因此，建立快速简单直接的方法测定食品中乌洛托品的含量十分必要。文献报道，刘等建立了一种激光拉曼光谱法快速测定腐竹中的微量乌洛托品，检出限低，实现了便携检测，但在200 mW激光激励下积分时间长达20 S，因此难以避免多余的光化学反应，造成油脂等物质均对检测造成干扰，限制了该方法的实际应用。在激光拉曼光谱检测过程中，设法采用巧妙的方法降低激光功率、缩短积分时间是减少光化学反应、提高检测灵敏度、避免实际样品中油脂等物质干扰的有效途径。
发明内容
[0004]本发明的目的是提供一种快速检测乌洛托品的拉曼增强光谱方法，通过使用负电作用
试剂作为匹配剂调整
银纳米粒子溶胶Zeta电位，并迅速按特定顺序定量添加调整好的纳米溶胶、含有Cl—离子的溶液、待测液，进行快速拉曼测定。在低功率激光作用下有效缩短光照积分时间，避免光化学反应，从而快速、准确、方便地测定实际食品中乌洛托品的含量，并实现避免油脂等组分
信号干扰的目的。
[0005]本发明通过如下步骤实现。
[0006] (I)向银纳米粒子溶胶中加入负电作用试剂，使银纳米粒子溶胶的Zeta电位为-50—10 mV，优选的，为-30—10 mV，特别是-20 mV。
[0007] (2)对可能含乌洛托品的待测物进行浸泡等处理，获得乌洛托品待测液，或配制乌洛托品标准品的溶液。
[0008] (3)配制含Cl-浓度为0.05〜I mol/L的NaCl或KCl溶液。
[0009] (4)在5〜20 s的时间内迅速按顺序在光学玻璃比色皿中加入I体积步骤(I)中处理得到的银纳米粒子溶胶、I体积步骤(3)中的溶液和4体积待测溶液。
[0010] (5)在500〜200 mW
能量激光和0.5~4秒积分时间条件下，以1043 cm—工±3 cm—1峰强度为特征，对不同浓度乌洛托品标准溶液绘制强度-浓度标准曲线，并以同样方法测试待测液特征峰强度。将待测液特征峰强度代入标准曲线得到乌洛托品待测液浓度，从而得出待测食品中乌洛托品的含量。
[0011]其中，步骤(I)中所述的银纳米粒子溶胶可以是南京简智仪器设备有限公司以SN-01或SN-05型号产品对外出售的商品，也可以是南京橄榄枝
生物科技有限公司出售的同类商品。
[0012]步骤(I)所述的负电作用试剂可以是
柠檬酸钠、
抗坏血酸钠、鞣酸中的一种，或者其中二者或三者的组合。
[0013]步骤(2)中所述的待测物，可以是食品、
植物、生物提取物等，特别是食品。
[0014]步骤(2)中所述的对待测物进行浸泡等处理，可以是色谱方法提取、普通萃取、超声萃取、临界萃取等常规方法。
[0015]需要指出，也可利用本发明方法定性判断食品提取液中是否含有乌洛托品，具体的可以将通过匹配剂调节的Zeta电位为-50〜-10 mV的银纳米粒子溶胶、Cl_浓度为0.05〜Imol/L的氯化物溶液、食品提取液按1: 1:4的体积比在5〜20 s的时间内迅速混合，测量拉曼信号，通过观察1043 cm—工±3 cm—1
位置是否出现
信噪比大于3的特征峰，判断提取液中是否含有乌洛托品。出现则含有。
[0016]本发明的有益效果是，通过对银纳米粒子溶胶的处理，以及Cl—离子和待测溶液添加的特殊组合顺序与特殊比例，以极其简便的方法实现了在极短积分时间内测定乌洛托品的目的。检出限可达0.05 mg/kg。简便的处理方法和极短的积分时间有效避免了实际物品特别是食品中的油脂等干扰物在银表面发生光化学反应及由此产生的
干扰信号，也为实际检测工作提供了便利。
[0017]已有文献和
专利(如CN200810225085.8)报道了 Cr在拉曼增强检测的特殊作用，以及金银纳米粒子对拉曼信号的增强作用，但本发明的核心特点在于特定物质的组合添加顺序、添
加速度、添加量，以及对纳米粒子的处理，从而实现快速、准确检测的目的。单独添加Cr离子无法实现本发明的极佳效果。
附图说明
[0018]图1是乌洛托品标准溶液的表面增强拉曼图谱，激光
波长为785 nm，能量为100mW，积分时间2 S0
具体实施方式
[0019]以下结合具体
实施例，对本发明作进一步详细的说明。
[0020]实施例1.测定添加了乌洛托品的食品粉丝中乌洛托品的含量。具体如下。
[0021] (I)向银纳米粒子溶胶中加入含有0.1 mol/L的柠檬酸钠溶液的匹配剂，使溶胶的Zeta电位为-20 mV备用。
[0022] (2)配制乌洛托品标准溶液:准确称取0.010 g乌洛托品标准品，用
水溶解后，定容到100 ml,4 °C避光保存，将标准溶液分别稀释到0.05 mg/kg,0.5 mg/kg, I mg/kg, 5mg/kg，10.0 mg/kg，50.0 mg/kg的系列标准溶液备用。
[0023] (3)待测样品溶液制备:取1.0 g细磨粉丝，加入3.0 mL乙腈振荡20 S，超声萃取10min;取0.5mL萃取液，以3000 r/min离心3 min，取乙腈层为待测液。
[0024] (4)配制含Cl-浓度为0.1 mol/L的KCl溶液。
[0025] (5)绘制标准曲线及测定样品:设定拉曼光谱仪所带的波长为785 nm
激光器的激光功率100 mW，积分时间2 S，平均次数2次，平滑参数5，扫描范围300〜4500 cm—、对于每个标准溶液，在10 s的时间内迅速按顺序在I cm光学玻璃比色皿中加入I体积步骤(I)中处理得到的银纳米粒子溶胶、I体积步骤(4)中的KCl溶液和4体积标准溶液，置于激光拉曼光谱仪检测室内检测。以1043 cm—工±3 cm—1峰强度为特征，如附图1所示。对不同浓度乌洛托品标准溶液分别按此条件进行测量，绘制强度-浓度标准曲线，并测试待测液特征峰强度。将待测液特征峰强度代入标准曲线得到乌洛托品待测液浓度为6 mg/kg，考虑到乙腈
密度为1.42 g/cm3，从而得出待测食品粉丝中乌洛托品的含量为25.5 mg/kg。
[0026]实施例2.测定腐竹样品中乌洛托品的含量，具体如下。
[0027] (I)向SN-05银纳米粒子溶胶中加入含有0.1 mol/L抗坏血酸钠溶液的匹配剂，使溶胶的Zeta电位为-25 mV备用。
[0028] (2)配制乌洛托品标准溶液:准确称取0.010 g乌洛托品标准品，用水溶解后，定容到100 ml,4 °C避光保存，将标准溶液分别稀释到0.05 mg/kg,0.5 mg/kg, I mg/kg, 5mg/kg, 10.0 mg/kg,50.0 mg/kg的系列标准溶液备用。
[0029] (3)待测样品溶液制备:取2.0 g细磨腐竹，加入5.0 mL乙腈振荡20 S，超声萃取10min;取0.5 mL萃取液，以3000 r/min离心5 min，取乙腈层加入2 mL正己烧振荡，以3000r/min离心3 min，向下层溶液中加入500yL
氯化钠溶液(2 mol/L)，振荡30 S，静置分层，上层清液即为待测液。
[0030] (4)配制含Cl-浓度为0.15 mol/L的NaCl溶液。
[0031] (5)绘制标准曲线及测定样品:设定拉曼光谱仪所带的波长为785 nm激光器的激光功率200 mW，积分时间2 S，平均次数2次，平滑参数5，扫描范围300〜4500cm—、对于每个标准溶液，在10 s的时间内迅速按顺序在I cm光学玻璃比色皿中加入I体积步骤(I)中处理得到的银纳米粒子溶胶、I体积步骤(4)中的NaCl溶液和4体积标准溶液，置于激光拉曼光谱仪检测室内检测。以1043 cm—工±3 cm—1峰强度为特征，对不同浓度乌洛托品标准溶液分别按此条件进行测量，绘制强度-浓度标准曲线，并测试待测液特征峰强度。待测液在1044 cm—1处出现特征峰，说明腐竹样品中含有乌洛托品，进而将待测液特征峰强度代入标准曲线得到待测食品粉丝中乌洛托品的含量为12.5 mg/kg。
[0032]实施例3.定性判断面条中是否含有乌洛托品。具体如下。
[0033] (I)向SN-05银纳米粒子溶胶中加入含有0.1 mol/L抗坏血酸钠溶液与0.lmol/L柠檬酸钠溶液的混合匹配剂，使溶胶的Zeta电位为-35.5 mV备用。
[0034] (2)配制含Cf浓度为0.1 mol/L的溶液，同时向该溶液中加入NaNO3,使MV的浓度为0.1 mol/L。
[0035] (3)制备待测样品溶液:取2.00 g细磨面条，加入5.0 mL乙腈振荡20 S，超声萃取10 min;取0.5 mL萃取液，以3000 r/min离心3 min，取乙腈层直接过0.22 μπι滤膜，得待测液。
[0036] (4)设定拉曼光谱仪所带的波长为785 nm激光器的激光功率150 mW，积分时间Is，平均次数I次，平滑参数5，扫描范围300〜4500cm—、在10 s的时间内迅速按顺序在I cm光学玻璃比色皿中加入I体积步骤(I)中处理得到的银纳米粒子溶胶、I体积步骤(4)中的NaCl溶液和4体积标准溶液，置于激光拉曼光谱仪检测室内检测。经检测，在1043 cm—工±3 cm—1位置出现特征峰，说明待测物面条中含有乌洛托品。
[0037]以上实施例均说明了本发明的使用方法，但本发明所保护的内容不仅限于实施例中的用法，专业领域技术人员根据本发明进行的属自然延伸性质的改进也属于本发明的保护范围。
