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一种强化烟叶 发酵过程的方法

阅读：373发布：2020-05-22

专利汇可以提供一种强化烟叶发酵过程的方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本发明公开一种强化烟叶发酵过程的方法，使用解淀粉芽孢杆菌GUHP-86制剂对用于发酵过程的烟叶进行处理，所述解淀粉芽孢杆菌GUHP-86制剂包括解淀粉芽孢杆菌GUHP-86，所述解淀粉芽孢杆菌GUHP-86已于2016年1月4日在中国典型培养物保藏中心保藏，保藏编号为CCTCC M 2016003。本发明解淀粉芽孢杆菌GUHP-86制剂，可以强化烟草梗丝的发酵过程，具有增加烟香、柔和烟气，增加细腻性，降低刺激性，明显改善烟气质和提高口含烟的实用安全性的作用。同时，本发明还公开了一种用于在烟叶发酵过程中提高蛋白酶和淀粉酶活性的方法。，下面是一种强化烟叶发酵过程的方法专利的具体信息内容。

权利要求

1.一种强化烟叶发酵过程的方法，其特征在于，使用解淀粉芽孢杆菌GUHP-86制剂对用于发酵过程的烟叶进行处理，所述解淀粉芽孢杆菌GUHP-86制剂的制备方法包括以下步骤：
(1)称取胰蛋白胨0.5-2g、酵母提取物0.5-1.5g、NaCl 6-8g、葡萄糖0.5-2g，补充蒸馏水至1000mL，并在110-130℃高压蒸汽灭菌10-30min，待冷却后接入所述解淀粉芽孢杆菌GUHP-86于30-40℃、170-190r/min进行培养18h±2h，得到种子液；
(2)将1000mL所述种子液于2-5℃、7000-9000r下离心10-20min，收集沉淀，并用6-9g/L的灭菌生理盐水洗涤所述沉淀，然后向所述沉淀中加入1000mL的灭菌生理盐水，摇匀，得到所述解淀粉芽孢杆菌GUHP-86制剂；
所述解淀粉芽孢杆菌GUHP-86已于2016年1月4日在中国典型培养物保藏中心保藏，保藏编号为CCTCC M 2016003。
2.一种用于在烟叶发酵过程中提高蛋白酶和淀粉酶活性的方法，其特征在于，使用所述解淀粉芽孢杆菌GUHP-86制剂对用于发酵过程的烟叶进行处理。

说明书全文

一种强化烟叶发酵过程的方法

技术领域

[0001] 本发明属于微生物与烟草加工技术领域，具体地说涉及一种一种强化烟叶发酵过程的方法。

背景技术

[0002] 无烟气烟草制品(Smokeless tobacco products，STPs)不发生烟草燃烧过程，不会产生有害裂解产物，无烟气产生，可以在公共场所使用，是低害环保型新型烟草制品的一种重要形式。

[0003] 口含烟是STPs的重要组成，是目前市场份额增长最快的产品类别，受到世界各主要烟草企业的关注，并在该领域投入大量的资金和精力进行相关的研发工作。

[0004] 口含烟制品一般是以烟草粉末的形式在口腔中使用，烟草中的成分溶出后通过口腔黏膜吸收。因此，烟草原料是口含烟的核心材料，其品质直接决定着口含烟产品的风味特色和使用安全性，从而影响消费市场对产品的接收程度。

[0005] 微生物发酵是改善口含烟烟草原料品质的一个有效途径。国内外的研究表明，通过微生物发酵能够大大缩短烟叶醇化的时间，明显消除烟叶的青杂气，使烟叶的刺激性和异味减少，香气质和香气量变佳。发酵过程中，微生物进行代谢活动消耗掉烟叶中蛋白质，纤维素、淀粉及一些不良成分等，同时微生物通过代谢产生的一些物质又会给烟叶增添一些芳香气味，使烟叶各种成分比例趋于协调，从而提高烟叶的香气量、愉悦性等品质，使杂气、刺激性下降，具有更好的食用舒适性。

[0006] 此外，口含烟是以烟草为原料的无烟气烟草制品，其中含有烟草的所有化学成分，因此烟草中一些固有的有害成分将严重影响口含烟的食用安全性。TSNA(烟草中特有的亚硝胺)是烟叶中重要的有害成分。在烟草中TSNA的形成普遍认为是由烟草中的生物碱和亚硝盐反应形成的，因此亚硝酸盐是生成亚硝胺的前提物之一，那么降低烟叶中亚硝酸盐含量将有助于降低亚硝胺含量，提高口含烟的食用安全性。研究发现，微生物的存在对亚硝酸盐的含量会产生很大的影响，微生物中有很多种可降亚硝酸盐，通过筛选降硝酸盐微生物然后接种到烟叶进行发酵就可降低烟叶中亚硝胺含量。

[0007] 同时，微生物代谢过程中往往会产生功效性成分，如产生多种酶，有些酶本身对提高烟叶的香气有帮助，如蛋白酶可以水解烟叶中的蛋白质；有些酶是对人体健康有益的酶，如纳豆激酶(nattokinase简称NK)，可以溶解血栓，降低血粘度，改善血液循环，软化和增加血管弹性，淀粉酶对消化系统起着很重要的作用，缺乏这种酶将给身体带来一系列问题，如皮肤红疹、心情抑郁和过敏等心理有关问题。这些具有生物活性的功能性酶的产生可以更好地提高口含烟的食用品质。

[0008] 人们希望找到其他新种类的微生物，以用于烟叶的发酵过程，并实现减害、增香和提高生物活性功能酶活性的效果。

发明内容

[0009] 本发明第一方面涉及一种强化烟叶发酵过程的方法，使用解淀粉芽孢杆菌GUHP-86制剂对用于发酵过程的烟叶进行处理，所述解淀粉芽孢杆菌GUHP-86制剂的制备方法包括以下步骤：

[0010] (1)称取胰蛋白胨0.5-2g、酵母提取物0.5-1.5g、NaCl 6-8g、葡萄糖0.5-2g，补充蒸馏水至1000mL，并在110-130℃高压蒸汽灭菌10-30min，待冷却后接入所述解淀粉芽孢杆菌GUHP-86于30-40℃、170-190r/min进行培养18h±2h，得到种子液；

[0011] (2)将1000mL所述种子液于2-5℃、7000-9000r下离心10-20min，收集沉淀，并用6-9g/L的灭菌生理盐水洗涤所述沉淀，然后向所述沉淀中加入1000mL的灭菌生理盐水，摇匀，得到所述解淀粉芽孢杆菌GUHP-86制剂；

[0012] 所述解淀粉芽孢杆菌GUHP-86已于2016年1月4日在中国典型培养物保藏中心保藏，保藏编号为CCTCC M 2016003。

[0013] 优选地，所述灭菌生理盐水需在121℃高压蒸汽灭菌20min。

[0014] 优选地，烟叶发酵步骤如下：称取20g烟叶于14cm×20cm规格的密封袋内，吸取2-6mL离心管内的菌液(即10％-30％接种量)于烟叶，4mL有糖盐溶液于烟叶中，充分混匀，于
37℃培养箱内进行培养，每天定时进行换气，且当湿度降低时补加一定有糖盐溶液。

[0015] 优选地，所述有糖盐溶液制备步骤如下：称取MgCl2 5g、KCl 0.5g、CaCl2 0.5g、NaCl 0.5g、葡萄糖2g，补水至1000mL，溶解，得到有糖盐溶液。

[0016] 本发明第二方面提供一种用于在烟叶发酵过程中提高蛋白酶和淀粉酶活性的方法，使用所述解淀粉芽孢杆菌GUHP-86制剂对用于发酵过程的烟叶进行处理。

[0017] 相对于现有技术，本发明具有以下有益效果：

[0018] (1)本发明的解淀粉芽孢杆菌GUHP-86制剂可以强化烟草的发酵过程。经本发明解淀粉芽孢杆菌GUHP-86制剂(20％接种量)处理后的烟叶发酵15天后，对烟叶的感官评价较不经解淀粉芽孢杆菌GUHP-86制剂处理的烟叶增加了17.02％，即本发明的解淀粉芽孢杆菌GUHP-86制剂具有增加烟香、柔和烟气，增加细腻性，降低刺激性，明显改善烟气质的作用，提升了烟叶品质。同时，经本发明解淀粉芽孢杆菌GUHP-86制剂(20％接种量)处理后的烟叶发酵21天后，亚硝酸盐含量较普通烟叶下降了66.67％，因此，采用解淀粉芽孢杆菌GUHP-86制剂处理烟叶还可以提高口含烟的实用安全性。

[0019] (2)本发明的解淀粉芽孢杆菌GUHP-86制剂可以提高烟叶发酵过程中纳豆激酶、蛋白酶和淀粉酶的活性。经本发明解淀粉芽孢杆菌GUHP-86制剂(20％接种量)处理后的烟叶发酵15天后，烟叶中纳豆激酶酶活和蛋白酶酶活分别为10.53FU/g和1425.78IU/g。同时，经本发明解淀粉芽孢杆菌GUHP-86制剂(20％接种量)处理后的烟叶发酵15天后，烟叶中明显检测出淀粉酶的存在，但不经本发明解淀粉芽孢杆菌GUHP-86制剂处理的烟叶经发酵后并不存在淀粉酶。而纳豆激酶、蛋白酶和淀粉酶不仅本身对提高烟叶的香气有帮助，还是对人体健康有益的酶，这些具有生物活性的功能性酶的产生可以更好地提高口含烟的食用品质。附图说明

[0020] 图1为胰蛋白酶活力标准曲线

具体实施方式

[0021] 下面结合实施例对本发明作进一步的详细说明，但不是对本发明的限制，基于本发明教导所做的任何变换或改进，均落入本发明的保护范围。实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过购买获得的常规产品。其中，以下实施例中的烟叶均以烤烟烟叶为例。

[0022] 实施例1

[0023] 本实施例为解淀粉芽孢杆菌GUHP-86制剂的制备，具体包括以下步骤：

[0024] (1)称取胰蛋白胨1.25g、酵母提取物0.625g、NaCl 6.25g、葡萄糖0.625g，补充蒸馏水至1000mL，并在121℃高压蒸汽灭菌20min，待冷却后接入所述解淀粉芽孢杆菌GUHP-86于37℃、180r/min进行培养18h±2h，得到种子液；

[0025] (2)将1000mL所述种子液于4℃、8000r下离心10min，收集沉淀，并用8.5g/L的灭菌生理盐水洗涤所述沉淀，然后向所述沉淀中加入1000mL的灭菌生理盐水，摇匀，得到所述解淀粉芽孢杆菌GUHP-86制剂。

[0026] 所述解淀粉芽孢杆菌GUHP-86已于2016年1月4日在中国典型培养物保藏中心保藏，保藏编号为CCTCC M 2016003。

[0027] 所述灭菌生理盐水需在121℃高压蒸汽灭菌20min。

[0028] 实施例2

[0029] 本实施例中称取20g烟叶于14cm×20cm规格的密封袋内，吸取2mL所述解淀粉芽孢杆菌GUHP-86制剂(即10％接种量)于烟叶，4mL有糖盐溶液于烟叶中，充分混匀，得到样品1。

[0030] 所述有糖盐溶液制备步骤如下：称取MgCl2 5g、KCl 0.5g、CaCl2 0.5g、NaCl 0.5g、葡萄糖2g，补水至1000mL，溶解，得到有糖盐溶液。

[0031] 称取20g烟叶于14cm×20cm规格的密封袋内，吸取2mL无菌生理盐水、4mL有糖盐溶液于烟叶中，充分混匀，得到对比样1。

[0032] 将样品1和对比样1同时在37℃培养箱内进行培养，每天定时进行换气，且当湿度降低时补加一定有糖盐溶液。

[0033] 感官评定步骤如下：请10余位本领域感官测评人员对发酵烟叶样品进行感官评定。评吸方法为将口含烟直接置于上唇与上排牙齿之间，每次放入唇内的烟丝颗粒质量为0.2g，标准使用时间定为10min。对烟叶发酵样品的入口口感、香味、劲头、释放均匀性各15分，刺激性、顺应性(口含烟食用时间未达标准使用时间被吐出视为顺应性差)、滋味、余味各10分，总分100分，进行评价。

[0034] 待发酵结束后进行121℃、5min巴氏杀菌，进行感官评定。

[0035] 实施例3

[0036] 本实施例中称取20g烟叶于14cm×20cm规格的密封袋内，吸取4mL所述解淀粉芽孢杆菌GUHP-86制剂(即20％接种量)于烟叶，4mL有糖盐溶液于烟叶中，充分混匀，得到样品2。

[0037] 所述有糖盐溶液制备步骤如下：称取MgCl2 5g、KCl 0.5g、CaCl2 0.5g、NaCl 0.5g、葡萄糖2g，补水至1000mL，溶解，得到有糖盐溶液。

[0038] 称取20g烟叶于14cm×20cm规格的密封袋内，吸取4mL无菌生理盐水、4mL有糖盐溶液于烟叶中，充分混匀，得到对比样2。

[0039] 将样品2和对比样2同时在37℃培养箱内进行培养，每天定时进行换气，且当湿度降低时补加一定有糖盐溶液。

[0040] 请10余位本领域感官测评人员对发酵烟叶样品进行感官评定。评吸方法为将口含烟直接置于上唇与上排牙齿之间，每次放入唇内的烟丝颗粒质量为0.2g，标准使用时间定为10min。对烟叶发酵样品的入口口感、香味、劲头、释放均匀性各15分，刺激性、顺应性(口含烟食用时间未达标准使用时间被吐出视为顺应性差)、滋味、余味各10分，总分100分，进行评价。

[0041] 待发酵结束后进行121℃、5min巴氏杀菌，进行感官评定。

[0042] 实施例4

[0043] 本实施例中称取20g烟叶于14cm×20cm规格的密封袋内，吸取6mL所述解淀粉芽孢杆菌GUHP-86制剂(即30％接种量)于烟叶，4mL有糖盐溶液于烟叶中，充分混匀，得到样品3。

[0044] 所述有糖盐溶液制备步骤如下：称取MgCl2 5g、KCl 0.5g、CaCl2 0.5g、NaCl 0.5g、葡萄糖2g，补水至1000mL，溶解，得到有糖盐溶液。

[0045] 称取20g烟叶于14cm×20cm规格的密封袋内，吸取6mL无菌生理盐水、4mL有糖盐溶液于烟叶中，充分混匀，得到对比样3。

[0046] 将样品3和对比样3同时在37℃培养箱内进行培养，每天定时进行换气，且当湿度降低时补加一定有糖盐溶液。

[0047] 感官评定步骤如下：请10余位本领域感官测评人员对发酵烟叶样品进行感官评定。评吸方法为将口含烟直接置于上唇与上排牙齿之间，每次放入唇内的烟丝颗粒质量为0.2g，标准使用时间定为10min。对烟叶发酵样品的入口口感、香味、劲头、释放均匀性各15分，刺激性、顺应性(口含烟食用时间未达标准使用时间被吐出视为顺应性差)、滋味、余味各10分，总分100分，进行评价。

[0048] 待发酵结束后进行121℃、5min巴氏杀菌，进行感官评定。

[0049] 实施例3、实施例4、实施例5中不同样品在发酵过程中的感官评价分值见表1。

[0050] 由表1中结果可知，本发明的解淀粉芽孢杆菌GUHP-86制剂可以强化烟草的发酵过程。经本发明解淀粉芽孢杆菌GUHP-86制剂(20％接种量)处理后的烟叶发酵15天后，对烟叶的感官评价较不经解淀粉芽孢杆菌GUHP-86制剂处理的烟叶增加了17.02％，即本发明的解淀粉芽孢杆菌GUHP-86制剂具有增加烟香、柔和烟气，增加细腻性，降低刺激性，明显改善烟气质的作用，提升了烟叶品质。同时，接种量为20％时，感官评价评分最高，发酵效果最好，对烟叶的改善更大，得到的发酵烟品质更好。

[0051] 表1不同样品在发酵过程中的感官评价分值见表1

[0052]

[0053] 实施例5

[0054] 将实施例3中的样品2、对比样2经发酵15天后的发酵烟叶命名为发酵样品2、发酵对比样2，分别测定发酵样品2、发酵对比样2中纳豆激酶活性。

[0055] 粗酶液提取：称取发酵样品1g，精确至0.0002g。用25mL磷酸缓冲溶液浸提24h，然后用慢速定性滤纸过滤，滤液待用。

[0056] 向试管中加入1.4mLTris-HCl(50mmol/L，pH7.8)缓冲液和0.4mL纤维蛋白原溶液(7.2mg/mL)，37℃温育5min后加入0.1mL凝血酶(20U/mL)，再37℃温育10min形成人工血栓，加入0.1mL样品粗酶液，37℃温育60min，加入2mL三氯乙酸(0.2moL/L)溶液静置20min终止反应，13000r/min离心10min，取上清液于275nm 波长处测定吸光度。酶活定义：每分钟275nm处吸光度增加0.01所需要的酶量定义为1个单位的纤维蛋白降解酶活力(FU)。

[0057] 不同发酵样品纳豆激酶活力测定结果见表2。

[0058] 从表2中可以看出，发酵对比样2纳豆激酶酶活为0.35FU/g，发酵样品2纳豆激酶酶活为10.53FU/g，表明解淀粉芽孢杆菌GUHP-86制剂可以提高烟叶发酵过程中纳豆激酶活性。

[0059] 表2不同发酵样品纳豆激酶活力测定结果

[0060]

[0061] 实施例6

[0062] 将实施例4中的样品2、对比样2经发酵15天后的发酵烟叶命名为发酵样品2、发酵对比样2，分别测定发酵样品2和发酵对比样2中蛋白酶活性。

[0063] 粗酶液提取：称取发酵样品1g，精确至0.0002g。然后用25mL磷酸缓冲溶液浸提24h，然后用慢速定性滤纸过滤，滤液待用。

[0064] 采用酪蛋白平板法测定酶活性。首先制备胰蛋白酶活力标准曲线(图1)。将胰蛋白酶商业酶分别配制成10IU/mL、25IU/mL、50IU/mL、75IU/mL、100IU/mL、125IU/mL浓度，各取10uL点样于新配制的酪蛋白平板孔中，自然放置10min后倒置放入37℃培养箱内16h后取出，测量溶解圈直径，计算各溶解圈面积。以溶解圈面积(x，mm2)为横坐标，以胰蛋白酶活力(y，IU/mL)为纵坐标，绘制胰蛋白酶标准曲线。

[0065] 测量样品酶活力。取发酵烟叶粗酶液10uL点样于酪蛋白平板上，然放置10min后倒置放入37℃培养箱内16h后取出，测量溶解圈直径，计算各溶解圈面积。根据胰蛋白酶标准曲线回归方程计算样品蛋白酶酶活。测得发酵对比样2酶活为148.13IU/g，发酵样品2蛋白酶酶活为1425.78IU/g，表明解淀粉芽孢杆菌GUHP-86制剂在烟叶发酵过程中能产生较高酶活的蛋白酶。

[0066] 实施例7

[0067] 将实施例4中的样品2、对比样2经发酵15天后的发酵烟叶命名为发酵样品2、发酵对比样2，分别测定发酵样品2和发酵对比样2中是否产淀粉酶。

[0068] 对加有可溶性淀粉的LB平板进行打孔，然后接入水提取发酵样品2所得的提取液，碘染后发现有透明圈，表明其产淀粉酶。

[0069] 对加有可溶性淀粉的LB平板进行打孔，然后接入水提取发酵对比样2得的提取液，碘染后未发现明显的变化，表明其基本不产淀粉酶。

[0070] 实施例8

[0071] 对实施例4中的样品2和对比样2发酵过程中亚硝酸盐含量进行测定。

[0072] 亚硝酸盐含量采用萘乙二胺盐酸法测定。称量3.0g磨成粉末状的烟叶，放于250mL锥形瓶里，然后加入10mL饱和硼砂溶液，搅拌均匀，加入蒸馏水150mL，在70度水浴中加热30min并取出。进行过滤。然后将滤液倒入250mL容量瓶中，在旋转的同时加入5mL亚铁氰化钾溶液，摇匀并加入5mL醋酸锌溶液，以沉淀蛋白质。将水加至刻度，摇匀，用滤纸过滤。

[0073] 取经上述处理过的滤液50mL于100mL的容量瓶中，加入2mL饱和碱式乙酸铅溶液，加水到刻度，摇匀，然后过滤。取滤出液50mL于100mL容积瓶中，加入0.1mL硫酸溶液，加水到刻度，摇匀，然后再过滤，滤液备用。

[0074] 量取20mL处理后的滤液，在50mL比色管中加入2mL对氨基苯磺酸(4g/L),搅拌，放置3分钟～5分钟，然后加入1mL盐酸萘乙二胺溶液，加水至刻度，搅拌后静置15分钟，用2厘米比色管，于波长545nm处测吸光度，根据吸光度计算亚硝酸盐含量。

[0075] 不同样品发酵过程中亚硝酸盐含量测定结果见表3。

[0076] 表3不同样品发酵过程中亚硝酸盐含量测定结果

[0077]

[0078] 由表3可以看出，经本发明解淀粉芽孢杆菌GUHP-86制剂(20％接种量)处理后的烟叶发酵21天后，亚硝酸盐含量较不经解淀粉芽孢杆菌GUHP-86制剂处理的烟叶下降了66.67％，因此，采用解淀粉芽孢杆菌GUHP-86制剂处理烟叶不仅使烟叶增香、产生多种有益的功能酶，而且大大降低了烟叶中亚硝酸盐含量，这将提高口含烟的食用安全性。

[0079] 实施例9

[0080] 发酵烟叶风味物质的变化。

[0081] 将2g烟叶放入10mL顶空固相微萃取瓶中，将顶空瓶放入CTC自动进样器品盘，设置萃取条件为：70℃保持5分钟，70℃吸附30分钟，萃取盘转速为250r/min，萃取得到的物质在气相色谱进样口进行解吸附，解吸温度250℃，时间5min。色谱柱:DB-wax(60m×0.25mm×0.25μm)毛细管柱；进样口温度：240℃；载气：He，1.5mL/min；分流比2﹕1；升温程序：初始温度40℃，保持1min，以10℃/min升至120℃，保持1min；以3℃/min升至230℃，保持5min。传输线温度：240℃；电离方式：EI；离子源温度：230℃；四极杆温度：150℃；扫描范围：33～
350amu；数据采集模式：全扫描。采用谱库检索定性。挥发性风味成分检测结果见表4。

[0082] 表4发酵烟叶挥发性风味物质成分表

[0083]

[0084]

[0085]

[0086]

[0087]

[0088] 注：“0”表示未检测出。

[0089] 表5发酵烟叶挥发性风味物质成分相对含量(％)对照表

[0090]

[0091] 表6挥发性风味物质成分种类对照表

[0092]

[0093] 由表4-6可知，共检测出原烟叶挥发性风味物质43种、发酵对比样2风味物质37种、样品2风味物质38种。其中，原烟叶包括醇类5种、醛类4种、酮类15种、烷烃类8种、酸类2种、酯类3种、烯烃类1种、嘧啶类1种、其他类4种；发酵对比样2包括醇类6种、醛类4种、酮类7种、烷烃类8种、酸类4种、酯类3种、烯烃类1种、其他类3种；样品2包括醇类3种、醛类4种、酮类12种、烷烃类10种、酯类2种、喹啉类1种、哌啶类1种、烯烃类1种、酸类1种、其他类5种。

[0094] 经发酵的烟叶酮类、醇类、吡啶类及醚类较未发酵原烟叶都有增加，表明发酵有利于烟叶风味物质的产生。发酵样品2的醇类物质较原烟叶来说增加，原烟叶醇类相对含量为1.84％，而发酵对比样2及样品2的醇类相对含量为16.44％和17.55％，较原烟叶增加较多，主要增加的为植醇；原烟叶、发酵对比样2及样品2的醛类都是4种，而发酵对比样2的相对含量较原烟叶多了10倍，这主要是因为原烟叶未检测到苯乙醛，发酵样品检测到苯乙醛生成，发酵对比样2和样品2的苯甲醛相对含量较原烟叶增加了近5倍，原烟叶苯甲醛相对含量为
0.23％，发酵对比样2和样品2苯甲醛相对含量分别为1.10％和0.83％，苯甲醛具有特殊的杏仁气味，对烟叶的风味会产生一定的影响；原烟叶及样品2的酮类物质比发酵对比样2多了近一倍，分别为15种、12种和7种。就相对含量来说，原烟叶和发酵对比样2的酮类相对含量为5.86％和5.92％，而样品的相对含量5.93％，主要是3-羟基-β-大马酮相对含量的增加及一些经发酵后就挥发了的酮类物质的影响，如2(5H)-呋喃酮、法尼基丙酮等。烷烃类挥发性风味物质经发酵后相对含量增加，种类也增加；原烟叶酸类物质相对含量为40.2％，而发酵样品中仅为5.09％和1.04％，表明在发酵过程中消耗了大部分的酸从而使风味更协调；
酯类物质变化不是很明显，种类及相对含量都相差不大，说明发酵对酯类物质的影响不大；
对其他类来说，主要是因为烟碱相对含量的不同，导致了其他类物质相对含量的差别。

[0095] 综合分析风味成分和感官评定结果可以发现挥发性风味物质成分种类和含量并不是越多越好，这涉及比列协调和刺激性、邪杂味问题，添加解淀粉芽孢杆菌GUHP-86制剂的烟叶发酵后感官品质比原烟叶及自然发酵烟叶都显著提升，自然发酵烟叶感官品质也比原烟叶有提升，风味成分检测发现原烟叶有一些物质在发酵后消失，而发酵后能新产生一些风味成分，这说明发酵确实可以改善烟叶品质如去除刺激性、邪杂味等和增加香味等，而且添加解淀粉芽孢杆菌GUHP-86制剂的烟叶发酵后烟叶品质在自然发酵的基础上得到进一步的提升。同时，我们还以白肋烟烟叶和晾晒烟烟叶进行了实验，也得到了上述的效果。

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一种强化烟叶发酵过程的方法

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