技术领域
[0001] 本
发明属于医药或食品技术领域，具体涉及一种蓝莓黑根霉菌丝体及其制备方法和应用。
背景技术
[0002] 蓝莓，通常称为越橘果，蓝莓中不仅富含常规营养成分，而且还含有丰富的黄
酮类和多糖类化合物，尤其富含花色苷。具有降血糖、抗疲劳、提高
机体免疫
力作用、抗
氧化防衰老作用、抗癌抗
肿瘤作用，因此被赞誉为“21世纪功能性保健浆果和
水果中的皇后”。
[0003] 目前，大部分蓝莓果实除了鲜食外，大多被用来加工蓝莓制品，如蓝莓饮料，蓝莓果酒等，这些蓝莓制品在生产时会产生大量的蓝莓渣，其中还残留很多的
生物活性成分，因为缺乏先进的处理手段，这些蓝莓渣当做废料处理。不仅造成资源的巨大浪费，同时也严重污染了环境。
[0004] 因此，合理利用蓝莓渣对提高企业经济效益和解决环境污染有积极的意义。
发明内容
[0005] 本发明的目的之一在于提供一种黑根霉菌株，黑根霉菌株于2018年7月30日保藏于广东省
微生物菌种保藏中心，生物保藏编号为：GDMCC 60425。
[0006] 本发明的目的之二在于提供一种蓝莓黑根霉菌丝体的制备方法，利用黑根霉菌株与蓝莓渣粉进行固态
发酵制得蓝莓黑根霉菌丝体，其含有功能性生理活性物质
蛋白质、
氨基酸、不饱和
脂肪酸、
水溶性多糖类等可溶性物质及多种微量元素，可用于
功能性食品固体饮料的配制，具有提高免疫力、助睡眠、抗疲劳的优势。
[0007] 本发明的目的之三在于提供一种蓝莓黑根霉菌丝体。
[0008] 本发明的目的之四在于提供上述蓝莓黑根霉菌丝体在固体饮料中的应用。
[0009] 为实现上述目的，本发明提供了一种黑根霉菌株，该黑根霉菌株于2018年7月30日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，生物保藏编号为：GDMCC 60425。
[0010] 相应地，本发明还提供了一种蓝莓黑根霉菌丝体的制备方法，包括步骤：
[0011] (1)制备发酵培养基：将蓝莓渣粉与米粉按一定比例混合配制成发酵培养基；
[0012] (2)制取菌种，制取黑根霉菌株作为发酵菌种；
[0013] (3)生产种培养基的制备：
[0014] 将步骤(2)所选取的菌株分别用下列培养基培养：斜面培养基和液态摇瓶培养基；
[0015] (4)固态发酵处理：
[0016] 将液态摇瓶培养基按照菌种接入发酵培养基进行固态发酵，混合发酵后，得到蓝莓黑根霉发酵渣粉；
[0017] 将蓝莓黑根霉发酵渣粉进行干燥、
粉碎，得到蓝莓黑根霉菌丝体，干燥
温度为60～85℃。
[0018] 所述斜面培养基的制备方法为：取
麦芽汁10～20Be作为培养基，煮沸，按重量比分别按40～70％的量装入试管或茄子瓶，灭菌，冷却，与步骤(1)选取的菌株接种，放入
培养箱中培养5～7天。
[0019] 所述液态摇瓶培养基的制备方法为：选取大米粉10～20％、
酵母膏0.1～0.5％与水进行混合并搅拌均匀，自然pH值，煮沸，分别按重量40～70％的量装入三
角瓶，灭菌、冷却、接种并进行液态摇瓶培养15～24小时。
[0020] 所述液态摇瓶培养基的制备方法中，灭菌温度为121～125℃，压力为0.1～0.15Mpa，时间30min。
[0021] 所述发酵培养基的制备方法为：利用蓝莓渣
压榨成60～80目的蓝莓渣粉，将蓝莓渣粉与相同目数的米粉按照95～80：5～20％的比例混合，加入30～50％
自来水，自然pH值，灭菌后冷却至常温作为发酵培养基，所述的高温灭菌时间为30～40min，温度为121～125℃，压力为0.1～0.15Mpa。
[0022] 步骤(4)中，固态发酵处理中，接种量为0.5～8％。
[0023] 步骤(4)中，固态发酵处理中，粉碎至100目以上。
[0024] 本
申请还提供由上述蓝莓黑根霉菌丝体的制备方法制得的蓝莓黑根霉菌丝体。
[0025] 本申请还提供该蓝莓黑根霉菌丝体在固体饮料中的应用。
[0026] 与
现有技术相比，本发明的蓝莓黑根霉菌丝体中，利用黑根霉菌株与蓝莓渣粉进行固态发酵制得蓝莓黑根霉菌丝体，充分的利用蓝莓渣的营养功能，减小固体废物的排放，变废为宝，且结合黑根霉与蓝莓渣的有效成分，黑根霉起到协同及辅助作用可提高蓝莓渣固有功效，制备的蓝莓黑根霉菌丝体含有功能性生理活性物质蛋白质、氨基酸、不
饱和脂肪酸、水溶性多糖类等可溶性物质及多种微量元素，可用于功能性食品固体饮料的配制，具有提高免疫力、助睡眠、抗疲劳的优势。而且还利用固态发酵工艺和设备，降低生产成本而提高附加值；在大型固态
发酵罐进行大批量生产，满足原料产品的同批同质要求；以无菌空气和纯种培养技术进行洁净级生产，
预防食品安全隐患。
具体实施方式
[0027] 为更好地说明本发明的目的、技术方案和有益效果，下面将结合具体
实施例对本发明作进一步说明。需说明的是，下述实施所述方法是对本发明做的进一步解释说明，不应当作为对本发明的限制。
[0028] 本发明提供的黑根霉(Rhizopus nigricans RH1001)菌株于2018年7月30日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，该保藏中心的地址为广东省广州市先烈中路100号大院59号楼5楼，生物保藏编号为：GDMCC No：60425，分类学名称为Rhizopus nigricans。
[0029] 本发明的蓝莓黑根霉菌丝体的制备方法，包括步骤：
[0030] (1)制备发酵培养基：将蓝莓渣粉与米粉按一定比例混合配制成发酵培养基；利用蓝莓渣压榨成60～80目的蓝莓渣粉，将蓝莓渣粉与相同目数的米粉按照95～80：5～20％的比例混合后，加入30～50％自来水，自然pH值，灭菌后冷却至常温作为发酵培养基，高温灭菌时间为30～40min，温度为121～125℃，压力为0.1～0.15Mpa。
[0031] (2)制取菌种，制取黑根霉(Rhizopus nigricans RH1001)作为发酵菌种；
[0032] (3)生产种培养基的制备：
[0033] 将步骤(2)所选取的菌株分别用下列培养基培养：斜面培养基和液态摇瓶培养基；
[0034] 所述斜面培养基的制备方法为：取麦芽汁10～20Be作为培养基，煮沸，按重量比分别按40～70％的量装入试管或茄子瓶，灭菌，冷却，与步骤(1)选取的菌株接种，放入培养箱中培养5～7天。
[0035] 所述液态摇瓶培养基的制备方法为：选取大米粉10～20％、酵母膏0.1～0.5％与水进行混合并搅拌均匀，自然pH值，煮沸，分别按重量40～70％的量装入三角瓶，灭菌、冷却、接种并进行液态摇瓶培养15～24小时，灭菌温度为121～125℃，压力为0.1～0.15Mpa，时间30min。
[0036] (4)固态发酵处理：
[0037] 将液态摇瓶培养基按照菌种接入发酵培养基进行固态发酵，接种量为0.5～8％，混合发酵后，温度为25～35℃，时间为3～4天，得到蓝莓黑根霉发酵渣粉；
[0038] 将蓝莓黑根霉发酵渣粉进行干燥、粉碎，得到蓝莓黑根霉菌丝体，干燥温度为60～85℃。
[0039] 本申请还提供一种采用上述方法制得的蓝莓黑根霉菌丝体，含有功能性生理活性物质蛋白质、氨基酸、不饱和脂肪酸、水溶性多糖类等可溶性物质及多种微量元素，可用于功能性食品固体饮料的配制，具有提高免疫力、助睡眠、抗疲劳的优势。
[0040] 本申请还提供该蓝莓黑根霉菌丝体在固体饮料中的应用，制备蓝莓黑根霉菌丝体含片、胶囊等。
[0041] 下面将结合具体实施例对本发明的蓝莓黑根霉菌丝体及其制备方法作进一步详细说明，但其并不构成对本发明保护范围的限制。
[0042] 实施例1
[0043] 本发明的蓝莓黑根霉菌丝体的制备方法，包括步骤：
[0044] (1)制备发酵培养基：将蓝莓渣压榨成60目的蓝莓渣粉，将蓝莓渣粉与60目的米粉按照95％:5％的比例混匀，加入30％的自来水，自然pH值，灭菌后冷却至常温作为发酵培养基，高温灭菌时间为30min，温度为121℃，压力为0.1Mpa；
[0045] (2)制取菌种，制取黑根霉(Rhizopus nigricans RH1001)作为发酵菌种，其于2018年7月30日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，生物保藏编号为：GDMCC 60425；
[0046] (3)生产种培养基的制备：
[0047] 将步骤(2)所选取的菌株分别用下列培养基培养：斜面培养基和液态摇瓶培养基；
[0048] 斜面培养基的制备方法为：取麦芽汁15Be作为培养基，煮沸，按重量比分别按45％的量装入茄子瓶，灭菌，冷却，与步骤(1)选取的菌株接种，放入培养箱进行斜面培养基的培养7天。
[0049] 液态摇瓶培养基的制备方法为：选取大米粉10％、酵母膏0.2％与自来水进行混合并搅拌均匀，自然pH值，煮沸，分别按重量50％的量装入三角瓶，灭菌、冷却、接种并进行液态摇瓶培养15小时，灭菌温度为124℃，压力为0.12Mpa，时间30min。
[0050] (4)固态发酵处理：
[0051] 将液态摇瓶培养基按照菌种接入发酵培养基进行固态发酵，接种量为0.5％，混合发酵后，温度为25℃，时间为3天，得到蓝莓黑根霉发酵渣粉；
[0052] 将蓝莓黑根霉发酵渣粉进行干燥、粉碎，得到蓝莓黑根霉菌丝体，干燥温度为70℃，粉碎控制在160目。
[0053] 实施例2
[0054] 本发明的蓝莓黑根霉菌丝体的制备方法，包括步骤：
[0055] (1)制备发酵培养基：将蓝莓渣压榨成70目的蓝莓渣粉，将蓝莓渣粉与70目的米粉按照85％:15％的比例混匀，加入40％的自来水，自然pH值，灭菌后冷却至常温作为发酵培养基，高温灭菌时间为40min，温度为125℃，压力为0.15Mpa；
[0056] (2)制取菌种，制取黑根霉(Rhizopus nigricans RH1001)作为发酵菌种，其于2018年7月30日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，生物保藏编号为：GDMCC 60425；
[0057] (3)生产种培养基的制备：
[0058] 将步骤(2)所选取的菌株分别用下列培养基培养：斜面培养基和液态摇瓶培养基；
[0059] 其中，斜面培养基的制备方法为：取麦芽汁20Be作为培养基，煮沸，按重量比分别按60％的量装入茄子瓶，灭菌，冷却，与步骤(1)选取的菌株接种，放入培养箱进行斜面培养基的培养6天。
[0060] 液态摇瓶培养基的制备方法为：选取大米粉15％、酵母膏0.4％与自来水进行混合并搅拌均匀，自然pH值，煮沸，分别按重量60％的量装入三角瓶，灭菌、冷却、接种并进行液态摇瓶培养20小时，灭菌温度为122℃，压力为0.10Mpa，时间30min。
[0061] (4)固态发酵处理：
[0062] 将液态摇瓶培养基按照菌种接入发酵培养基进行固态发酵，接种量为3％，混合发酵后，温度为28℃，时间为4天，得到蓝莓黑根霉发酵渣粉；
[0063] 将蓝莓黑根霉发酵渣粉进行干燥、粉碎，得到蓝莓黑根霉菌丝体，干燥温度为80℃，粉碎控制在120目。
[0064] 实施例3
[0065] 本发明的蓝莓黑根霉菌丝体的制备方法，包括步骤：
[0066] (1)制备发酵培养基：将蓝莓渣压榨成80目的蓝莓渣粉，将蓝莓渣粉与80目的米粉按照80％:20％的比例混匀，加入50％的自来水，自然pH值，灭菌后冷却至常温作为发酵培养基，高温灭菌时间为40min，温度为125℃，压力为0.15Mpa；
[0067] (2)制取菌种，制取黑根霉(Rhizopus nigricans RH1001)作为发酵菌种，其于2018年7月30日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，生物保藏编号为：GDMCC 60425；
[0068] (3)生产种培养基的制备：
[0069] 将步骤(2)所选取的菌株分别用下列培养基培养：斜面培养基和液态摇瓶培养基；
[0070] 其中，斜面培养基的制备方法为：取麦芽汁17Be作为培养基，煮沸，按重量比分别按50％的量装入茄子瓶，灭菌，冷却，与步骤(1)选取的菌株接种，放入培养箱进行斜面培养基的培养5天。
[0071] 液态摇瓶培养基的制备方法为：选取大米粉20％、酵母膏0.5％与自来水进行混合并搅拌均匀，自然pH值，煮沸，分别按重量70％的量装入三角瓶，灭菌、冷却、接种并进行液态摇瓶培养24小时，灭菌温度为122℃，压力为0.10Mpa，时间30min。
[0072] (4)固态发酵处理：
[0073] 将液态摇瓶培养基按照菌种接入发酵培养基进行固态发酵，接种量为6％，混合发酵后，温度为30℃，时间为4天，得到蓝莓黑根霉发酵渣粉；
[0074] 将蓝莓黑根霉发酵渣粉进行干燥、粉碎，得到蓝莓黑根霉菌丝体，干燥温度为85℃，粉碎控制在180目。
[0075] 对实施例1～3所得的蓝莓黑根霉菌丝体进行小鼠负重力竭游泳时间测试，测试方法及结果如下：
[0076] 1.材料与方法
[0077] 1.1样品来源：实施例1、2、3得到的蓝莓黑根霉菌丝体，以及市售普通的蓝莓咀嚼片。
[0078] 1.2实验动物：ICR小鼠，体重20-25g，购自湖南斯莱克景达实验动物有限公司。
[0079] 2.实验方法
[0080] 2.1实验分组：ICR小鼠进行随机分组，共分为5组，每组20只动物，分别为实施例1组、实施例2组、实施例3组、对照组1和对照组2，实验周期7天。
[0081] 实施例组分别给予实施例1、实施例2和实施例3得到的蓝莓黑根霉菌丝体作为日常
饲料；对照组1给予蓝莓咀嚼片，对照组2给予普通的小鼠饲料，实验组和对照组的小鼠均自由采食和饮水。
[0082] 2.2小鼠负重力竭游泳时间检测：实验第8天时，选择上午，将尾根部负荷5％体重铅皮的小鼠置于游泳箱中游泳。水深不少于30cm，水温25℃，记录小鼠开始游泳至体力衰竭的时间，体力衰竭的标准为小鼠沉下水面超过10秒钟，60min为实验终点，即游泳时间超过60min记为60min。观察者应在整个实验过程中使每只小鼠四肢保持运动。如果小鼠浮在水面四肢不动，可用木棒在其附近搅动。
[0083] 3.结果
[0084] 3.1小鼠负重力竭游泳时间检测：结果如表1所示，对照组1-2不能显著增加小鼠负重力竭游泳时间，实施例1～3组皆能显著增加小鼠负重力竭游泳时间。
[0085] 表1试验结果
[0086]
[0087] 由表1可知，由蓝莓渣接种黑根霉且经固态发酵制得的蓝莓黑根霉菌丝体可获得高含量的多糖，大大提高免疫力、助睡眠、抗疲劳。原因是，利用黑根霉菌株与蓝莓渣粉进行固态发酵制得蓝莓黑根霉菌丝体，在发酵过程中可通过控制黑根霉代谢分泌多糖成分从而提高避免有效活性物质在发酵过程中不容易被破坏，不仅充分的利用蓝莓渣的营养功能，减小固体废物的排放，变废为宝，且结合黑根霉与蓝莓渣的有效成分，黑根霉起到协同及辅助作用可提高蓝莓渣固有功效，制备的蓝莓黑根霉菌丝体含有功能性生理活性物质蛋白质、氨基酸、不饱和脂肪酸、水溶性多糖类等可溶性物质及多种微量元素，可用于功能性食品固体饮料的配制，具有提高免疫力、助睡眠、抗疲劳的优势。
[0088] 最后应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对本发明保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行
修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。
