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一种建兰组培快速繁殖方法

阅读:1发布:2021-12-21

专利汇可以提供一种建兰组培快速繁殖方法专利检索,专利查询,专利分析的服务。并且本 发明 涉及 植物 组织培养技术领域,具体涉及一种建兰组培快速繁殖方法,包括以下步骤:植株预处理、材料选取、材料消毒、诱导培养、丛生芽继代增殖培养、生根壮苗培养及移栽,通过本发明采用的外植体和消毒方法,能大大提高外植体的诱导率,同时培养后的苗株成苗率高,长势良好,通过 生物 技术手段在短时间内,满足了商业化生产的需求,为企业规模化、产业化培养建兰提供了技术支持。,下面是一种建兰组培快速繁殖方法专利的具体信息内容。

1.一种建兰组培快速繁殖方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)植株预处理:将叶长为10~12cm的成熟株母本,放置在培养室中进行培养,培养温度20~22℃,光照时间为15h/d,光照强度为4000~5000lx,培养时间50~60天;
(2)材料选取:建兰预处理后,选取生长健壮及无病虫害长势良好的建兰,剪取植株中未开花或正在开花的花梗,剔除花梗上已开放的花朵及未开放的花蕾,切取花梗中部节位上的花梗芽作为外植体;
(3)材料消毒:将外植体用清冲洗表面的泥沙,冲洗时间为5~10min,冲洗后将外植体放置在洗洁精水中浸泡10min并用软刷毛刷去表面污垢,用清水冲洗30min,然后用体积分数为75%的酒精球擦拭外植体表面,用灭菌水清洗2~3遍,再将花梗芽上的苞叶去除,用手术刀把花梗节与芽相处的苞叶剔除干净,在用体积分数为75%的酒精棉球擦拭外植体,用灭菌水清洗2~3遍,再将花梗节段用质量分数为2%的过化氢溶液消毒两次,每次消毒时间为5~10min,且每次消毒后用灭菌水清洗4~5遍;
(4)诱导培养:切除消毒后外植体的两端切口,将外植体接种在诱导培养基中进行预培养,培养时间为22~25d,前10天为暗培养,剩余时间为光培养,培养温度均为23~25℃,光培养时,光照时间为12h/d,光照强度为2000~2500lx;所述诱导培养基为:1/3MS+3~5mg/L 
6-BA+0.5~1.5g/L活性炭+0.3~0.5mg/L NAA+15%椰汁+30~40mg/L柠檬酸+22~27g/L食糖+5~9g/L琼脂,pH为5.4~5.5;
(5)丛生芽继代增殖培养:将诱导培养后萌发的小芽,自基部剥离切割后,接种到继代培养基上,所述继代培养基为:B5+8~12mg/L KT+0.1~0.3mg/L 2,4-二氯苯氧乙酸+140~
160g/L香蕉泥+90~110mg/L柠檬酸+28~32g/L食糖+5~9g/L琼脂,pH为5.1~5.4,培养温度23~25℃,光照时间为14h/d,光照强度为2000~2500lx;
(6)生根壮苗培养:继代增殖培养后,选择高2cm以上、外植体上有明显突起的小苗转入壮苗培养基中培养,所述壮苗培养基为:MS+3~6mg/L KT+0.5~0.8mg/L NAA+140~160g/L香蕉泥+90~110mg/L柠檬酸+28~32g/L食糖+5~9g/L琼脂,pH为5.5~5.7,培养时间为15~20d,培养温度23~25℃,光照时间为12h/d,光照强度为2000~2500lx;
(7)移栽:当试管苗生长至4~5cm高,根2~4条,叶1~2片时,将试管苗放在自然光下炼苗5~7天,打开瓶盖炼苗1~2天;然后取出培养苗,用清水洗净附着在根部的培养基,清洗时注意不要损害根部,然后移栽至水苔和腐殖土质量比为1:2的混合基质中,保持湿度和通,空气湿度为75~85%,温度为20~25℃。
2.根据权利要求1所述的一种建兰组培快速繁殖方法,其特征在于:所述诱导培养基为:1/3MS+4mg/L 6-BA+1g/L活性炭+0.4mg/L NAA+15%椰汁+35mg/L柠檬酸+25g/L食糖+
8g/L琼脂。
3.根据权利要求1所述的一种建兰组培快速繁殖方法,其特征在于:所述继代培养基为:B5+10mg/L KT+0.2mg/L 2,4-二氯苯氧乙酸+150g/L香蕉泥+100mg/L柠檬酸+30g/L食糖+8g/L琼脂。
4.根据权利要求1所述的一种建兰组培快速繁殖方法,其特征在于:所述壮苗培养基为:MS+5mg/L KT+0.6mg/L NAA+150g/L香蕉泥+100mg/L柠檬酸+30g/L食糖+8g/L琼脂。

说明书全文

一种建兰组培快速繁殖方法

技术领域

[0001] 本发明涉及植物组织培养技术领域,具体涉及一种建兰组培快速繁殖方法。

背景技术

[0002] 建兰是地生植物,生于疏林下、灌丛中、山谷旁或草丛中,海拔600-1800米。产中国安徽、浙江、江西、福建、台湾、湖南、广东、海南、广西、四川西南部、贵州和南。广泛分布于东南亚和南亚各国,北至日本。目前大多采用的繁殖方式是分株繁殖,而且很少形成种子,种子发育也比较困难,基本上在自然条件下萌发的难度比较大,因此建兰高效繁殖的主要手段就是组织培养。国外一些发达国家采用工厂化育苗技术以及组织培养快繁技术,不仅可以创造巨大的经济效益,同时也培育了很多优良品种,然而我国关于建兰组织培养的快繁技术研究仍然处于初级阶段,在很大程度上阻碍了建兰的规模化生产。

发明内容

[0003] 本发明的目的在于提供一种消毒效果好、成苗率高的建兰组培快速繁殖方法。
[0004] 为了达到上述目的,本发明采用的技术方案为:一种建兰组培快速繁殖方法,包括以下步骤:
[0005] (1)植株预处理:将叶长为10~12cm的成熟株母本,放置在培养室中进行培养,培养温度20~22℃,光照时间为15h/d,光照强度为4000~5000lx,培养时间50~60天;
[0006] (2)材料选取:建兰预处理后,选取生长健壮及无病虫害长势良好的建兰,剪取植株中未开花或正在开花的花梗,剔除花梗上已开放的花朵及未开放的花蕾,切取花梗中部节位上的花梗芽作为外植体;
[0007] (3)材料消毒:将外植体用清冲洗表面的泥沙,冲洗时间为5~10min,冲洗后将外植体放置在洗洁精水中浸泡10min并用软刷毛刷去表面污垢,用清水冲洗30min,然后用体积分数为75%的酒精球擦拭外植体表面,用灭菌水清洗2~3遍,再将花梗芽上的苞叶去除,用手术刀把花梗节与芽相处的苞叶剔除干净,在用体积分数为75%的酒精棉球擦拭外植体,用灭菌水清洗2~3遍,再将花梗节段用质量分数为2%的过化氢溶液消毒两次,每次消毒时间为5~10min,且每次消毒后用灭菌水清洗4~5遍;
[0008] (4)诱导培养:切除消毒后外植体的两端切口,将外植体接种在诱导培养基中进行预培养,培养时间为22~25d,前10天为暗培养,剩余时间为光培养,培养温度均为23~25℃,光培养时,光照时间为12h/d,光照强度为2000~2500lx;所述诱导培养基为:1/3MS+3~5mg/L 6-BA+0.5~1.5g/L活性炭+0.3~0.5mg/LNAA+15%椰汁+30~40mg/L柠檬酸+22~
27g/L食糖+5~9g/L琼脂,pH为5.4~5.5;
[0009] (5)丛生芽继代增殖培养:将诱导培养后萌发的小芽,自基部剥离切割后,接种到继代培养基上,所述继代培养基为:B5+8~12mg/L KT+0.1~0.3mg/L 2,4-二氯苯氧乙酸+140~160g/L香蕉泥+90~110mg/L柠檬酸+28~32g/L食糖+5~9g/L琼脂,pH为5.1~5.4,培养温度23~25℃,光照时间为14h/d,光照强度为2000~2500lx;
[0010] (6)生根壮苗培养:继代增殖培养后,选择高2cm以上、外植体上有明显突起的小苗转入壮苗培养基中培养,所述壮苗培养基为:MS+3~6mg/LKT+0.5~0.8mg/L NAA+140~160g/L香蕉泥+90~110mg/L柠檬酸+28~32g/L食糖+5~9g/L琼脂,pH为5.5~5.7,培养时间为15~20d,培养温度23~25℃,光照时间为12h/d,光照强度为2000~2500lx;
[0011] (7)移栽:当试管苗生长至4~5cm高,根2~4条,叶1~2片时,将试管苗放在自然光下炼苗5~7天,打开瓶盖炼苗1~2天;然后取出培养苗,用清水洗净附着在根部的培养基,清洗时注意不要损害根部,然后移栽至水苔和腐殖土质量比为1:2的混合基质中,保持湿度和通,空气湿度为75~85%,温度为20~25℃。
[0012] 如上所述的一种建兰组培快速繁殖方法,进一步说明为,所述诱导培养基为:1/3MS+4mg/L 6-BA+1g/L活性炭+0.4mg/L NAA+15%椰汁+35mg/L柠檬酸+25g/L食糖+8g/L琼脂。
[0013] 如上所述的一种建兰组培快速繁殖方法,进一步说明为,所述继代培养基为:B5+10mg/L KT+0.2mg/L 2,4-二氯苯氧乙酸+150g/L香蕉泥+100mg/L柠檬酸+30g/L食糖+8g/L琼脂。
[0014] 如上所述的一种建兰组培快速繁殖方法,进一步说明为,所述壮苗培养基为:MS+5mg/L KT+0.6mg/L NAA+150g/L香蕉泥+100mg/L柠檬酸+30g/L食糖+8g/L琼脂。
[0015] 本发明的有益效果是:通过本发明采用的外植体和消毒方法,能大大提高外植体的诱导率,同时培养后的苗株成苗率高,长势良好,通过生物技术手段在短时间内,满足了商业化生产的需求,为企业规模化、产业化培养建兰提供了技术支持。

具体实施方式

[0016] 下面对本发明具体实施方式做进一步的阐述。
[0017] 本发明提供的一种建兰组培快速繁殖方法,包括以下步骤:
[0018] (1)植株预处理:将叶长为10~12cm的成熟株母本,放置在培养室中进行培养,培养温度20~22℃,光照时间为15h/d,光照强度为4000~5000lx,培养时间50~60天;通过一段时间的预处理,能够得到更好品质的花梗,使接下来的组织培养效果更好。
[0019] (2)材料选取:建兰预处理后,选取生长健壮及无病虫害长势良好的建兰,剪取植株中未开花或正在开花的花梗,剔除花梗上已开放的花朵及未开放的花蕾,切取花梗中部节位上的花梗芽作为外植体;分别切取花梗上不同部位的花梗芽做样本,放置在普通诱导培养基上进行诱导培养;
[0020] 表1为花梗上不同部位对花梗芽萌芽的影响
[0021]
[0022] 由表1可以看出,上部花梗芽和中部花梗芽的萌芽率都较高,但是上部花梗芽的芽健壮情况一般,所以采用花梗中部的花梗芽最好,切取花梗中部节位上的花梗芽作为外植体,能有效提高生产率和质量。
[0023] (3)材料消毒:将外植体用清水冲洗表面的泥沙,冲洗时间为5~10min,冲洗后将外植体放置在洗洁精水中浸泡10min并用软刷毛刷去表面污垢,用清水冲洗30min,然后用体积分数为75%的酒精棉球擦拭外植体表面,用灭菌水清洗2~3遍,再将花梗芽上的苞叶去除,用手术刀把花梗节与芽相处的苞叶剔除干净,在用体积分数为75%的酒精棉球擦拭外植体,用灭菌水清洗2~3遍,再将花梗节段用质量分数为2%的过氧化氢溶液消毒两次,每次消毒时间为5~10min,且每次消毒后用灭菌水清洗4~5遍;采用过氧化氢溶液分两次消毒,这样可以能较好起到灭菌作用的同时而又对其活性影响较小;
[0024] 表2为不同消毒剂及消毒次数对花梗芽污染率和萌芽率的影响
[0025]
[0026] 上述经过消毒剂的花梗芽均接种到相同普通诱导基上进行培养,然后得出污染率和萌芽率,由表2可以看出,采用质量分数为2%的过氧化氢溶液消毒效果要好于质量分数为2%的NaClO溶液,同时可以看出分两次进行消毒,虽然污染率要高于一次消毒,但是分两次进行消毒后的萌芽率大大提高,故采用质量分数为2%的过氧化氢溶液消毒两次,能更好的对建兰花梗芽进行消毒时,提高花梗芽的萌芽率。
[0027] (4)诱导培养:切除消毒后外植体的两端切口,将外植体接种在诱导培养基中进行预培养,培养时间为22~25d,前10天为暗培养,剩余时间为光培养,通过一段时间的暗培养,能一定程度上有效抑制褐化现象,培养温度均为23~25℃,光培养时,光照时间为12h/d,光照强度为2000~2500lx;所述诱导培养基为:1/3MS+3~5mg/L 6-BA+0.5~1.5g/L活性炭+0.3~0.5mg/L NAA+15%椰汁+30~40mg/L柠檬酸+22~27g/L食糖+5~9g/L琼脂,pH为5.4~5.5;通过加入抗氧化剂柠檬酸和吸附剂活性炭,更能进一步抑制褐化现象的产生;
[0028] 表3为诱导培养基成分及用量
[0029]
[0030] 作为优选,所述诱导培养基为:1/3MS+4mg/L 6-BA+1g/L活性炭+0.4mg/LNAA+15%椰汁+35mg/L柠檬酸+25g/L食糖+8g/L琼脂,即为表3中诱导培养基1的成分及用量;
[0031] 表4为基础培养基的用量不同对花梗芽萌芽率的影响
[0032]
[0033] 由表4可以看出,适当降低MS基础培养基的大量元素浓度,可以提高建兰花梗芽的萌芽率,当MS基础培养基浓度过低时,又不满足花梗芽的吸收需要,所以本诱导培养基采用1/3MS作为基础培养基,所述MS培养基的成分为公知技术,这里不做详细阐述。
[0034] (5)丛生芽继代增殖培养:将诱导培养后萌发的小芽,自基部剥离切割后,接种到继代培养基上,所述继代培养基为:B5+8~12mg/L KT+0.1~0.3mg/L 2,4-二氯苯氧乙酸+140~160g/L香蕉泥+90~110mg/L柠檬酸+28~32g/L食糖+5~9g/L琼脂,pH为5.1~5.4,培养温度23~25℃,光照时间为14h/d,光照强度为2000~2500lx;
[0035] 表5为继代培养基成分及用量
[0036]
[0037] 作为优选,所述继代培养基为:B5+10mg/L KT+0.2mg/L 2,4-二氯苯氧乙酸+150g/L香蕉泥+100mg/L柠檬酸+30g/L食糖+8g/L琼脂,即为表5中继代培养基1的成分及用量。
[0038] (6)生根壮苗培养:继代增殖培养后,选择高2cm以上、外植体上有明显突起的小苗转入壮苗培养基中培养,所述壮苗培养基为:MS+3~6mg/L KT+0.5~0.8mg/L NAA+140~160g/L香蕉泥+90~110mg/L柠檬酸+28~32g/L食糖+5~9g/L琼脂,pH为5.5~5.7,培养时间为15~20d,培养温度23~25℃,光照时间为12h/d,光照强度为2000~2500lx;
[0039] 表6为壮苗培养基成分及用量
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