专利汇可以提供一种百合脱毒籽球的快速培养方法专利检索,专利查询,专利分析的服务。并且本 发明 公开了百合籽球生产的综合脱毒技术,即通过在35-38℃条件 热处理 栽种百合种球7-15天、剥取热处理后百合种球茎尖生长点为外植体,接种于病毒唑(Ribavirin)含量5-10mg/L的培养基中脱毒培养,用酶联 免疫 吸附 测定实验(ELISA)和RT-PCR检测对脱毒组培苗进行百合无症病毒(LSV)、黄瓜花叶病毒(CMV)和百合斑驳病毒(LMoV)病毒病毒的检测,此发明通过综合脱毒技术确保培养出的百合籽球去除 病毒感染 ,并优化了脱毒百合种球组培培养基成分和培养程序,快速培养得到脱毒组培籽球,属于 植物 组培快繁技术领域和植物细胞工程领域技术。,下面是一种百合脱毒籽球的快速培养方法专利的具体信息内容。
1.利用生物反应器快速培养百合脱毒种球的方法,按如下步骤进行:
(1)外植体灭菌和生长点的剥取:在35-38℃条件下种植百合种球,经过7-15天的培养,待芽长高并绽开成莲座状,开始采集百合茎尖,用中性肥皂水清洗3-5分钟,自来水冲洗过夜,0.1%升汞灭菌5-10分钟,然后在70%酒精浸泡10-15秒。取出茎尖,先用加吐温灭菌水冲洗2-3分钟,再用灭菌水冲洗5-6遍。外植体清洗干净后,开始剥取生长点,先将茎尖的叶片全部剥除,用解剖针挑取百合茎尖生长点,生长点长度为0.4-0.8(mm),将剥取的生长点立即接种。
(2)脱毒培养:,步骤①诱导培养,剥取的百合茎尖生长点接种到诱导培养基
(1/2MS+6-BA 1.0-2.0mg/L+NAA0.2-0.5mg/L+4%蔗糖+琼脂粉6g/L(pH 5.8)),经过40-60天培养,生长点膨大成直径2-3(cm)的叶丛。②将叶丛切成0.5(em)小块,接种于含病毒唑的培养基(MS+NAA0.2-0.5mg/L+4%蔗糖+病毒唑(Ribavirin)5-10mg/L+琼脂粉5g/L+0.5%活性炭(pH5.8)),经过40-60天培养,形成带球的瓶苗。
(3)病毒检测:将步骤②瓶苗送到,农业部花卉产品质量监督检验测试中心(昆明),经检测确认无任何病虫害现象并不带百合无症病毒(LSV)、黄瓜花叶病毒(CMV)和百合斑驳病毒(LMoV)等病毒,才确认是百合脱毒种苗。
(4)脱毒籽球诱导培养:经过病毒检测,将步骤②脱毒瓶苗转移到籽球诱导培养基(MS+KT 2-5mg/L+NAA0.2-0.5mg/L+4%蔗糖+琼脂粉5g/L+0.5%活性炭(pH 5.8)),在温度
22±1℃,光照强度1500Lx,光照12h/d的环境条件下培养40-60d,直接诱导出脱毒籽球。
(5)增殖培养:将步骤(4)组培籽球,切去叶片和部分基部组织后,纵切成3-4块直径
0.3-0.5cm材料,接种于和籽球诱导培养相同的培养基上,在温度22±1℃,光照12h/d,光照强度1000-1500Lx的环境条件下培养2个月,可以扩繁3-4倍。
(6)脱毒籽球在生物反应器内液体培养:将步骤(5)培养的组培籽球分开,形成单个的小籽球,大约直径0.3-0.5cm,然后接种于反应器内。液体培养基(MS+NAA 0.2-0.5mg/L+吡效隆CPPU 1-4mg/L+6%蔗糖(pH 5.8)),在22±1℃、1500Lx和2L/min通气量条件下培养
45天,培养籽球直径可达1.0-1.4cm,根系在3-5条/粒,籽球重0.7-1.2g/粒。
(7)冷藏:取出步骤(6)培养的脱毒籽球,用清水冲洗掉培养液,包裹于消毒草炭中,经
3-4℃冷藏处理30-40天打破休眠。
(8)移栽驯化:将步骤(7)籽球取出,用2000倍阿米西达药液浸泡籽球20分钟,然后定植到80-90穴的穴签中,穴盘基质:草炭1份、蛭石1份加少量促生根的菌肥拌匀装盘。定植后浇透水,并用地膜覆盖穴盘。放到网室内养护,昼温20-25℃,夜温10-15℃,盘土保持湿润,定植成活后,每周喷一次1/2MS营养液。
(9)待籽球直径长到2cm以上,可选择具夏季冷凉气候的800~1000米海拔地区,在避雨和防虫隔离条件下,3月下旬至4月中旬定植到苗床里。
2.根据权利要求1所述的方法,其特点在于采用综合脱毒技术,即将热处理、抗病毒药剂和茎尖培养相结合的方法。
3.根据权利要求1所述的方法,其特点在于培养材料为“西伯利亚”(Siberia)、“索帮”(Sorbonne)、“马可波罗”(Marco polo)、“曼妮莎”(Manissa)、“康伽德奥”(Concad′O)5个品种。
4.根据权利要求1所述的方法,其特点在于在35-38℃条件下种植百合种球,经过7-15天的培养,待芽长高并绽开成莲座状,开始采集百合茎尖,用中性肥皂水清洗3-5分钟,自来水冲洗过夜,0.1%升汞灭菌5-10分钟,然后在70%酒精浸泡10-15秒。取出茎尖,先用加吐温灭菌水冲洗2-3分钟,再用灭菌水冲洗5-6遍。外植体清洗干净后,开始剥取生长点,先将茎尖的叶片全部剥除,用解剖针挑取百合茎尖生长点,生长点长度为0.4-0.8(mm),将剥取的生长点立即接种。
5.根据权利要求1所述的方法,其特点在于优化了脱毒百合种球组培培养基成分和培养程序。
诱导培养基(1/2MS+6-BA 1.0-2.0mg/L+NAA0.2-0.5mg/L+4%蔗糖+琼脂粉6g/L);
脱毒培养基(MS+NAA0.2-0.5mg/L+4%蔗糖+病毒唑(Ribavirin)5-10mg/L+琼脂粉
5g/L+0.5%活性炭);
籽球诱导和增殖培养基(MS+KT 2-5mg/L+NAA0.2-0.5mg/L+4%蔗糖+琼脂粉5g/
L+0.5%活性炭);
液体培养基(MS+NAA 0.2-0.5mg/L+吡效隆CPPU 1-4mg/L+6%蔗糖);
培养程序:脱毒培养---病毒检测---籽球诱导及增殖培养---生物反应器内液体培养。
6.根据权利要求1所述的方法,其特点在于所述籽球膨大液体培养,采用鼓泡式可控光温生物反应器,反应器运行环境为22±1℃、1500Lx和2L/min通气量。
7.根据权利要求1所述的方法,其特点在于移栽驯化,用穴盘定植,草炭1份、蛭石1份加少量促生根的菌肥拌匀装盘。定植后浇透水,并用地膜覆盖穴盘。放到网室内养护,昼温
20-25℃,夜温10-15℃,盘土保持湿润,定植成活后,每周喷一次1/2MS营养液。
标题 | 发布/更新时间 | 阅读量 |
---|---|---|
一种零甲醛环保秸秆板及其制备方法 | 2020-05-08 | 757 |
一种循环型现代高效农业的生产方法 | 2020-05-13 | 852 |
脲甲醛增效复合肥生产工艺 | 2020-05-20 | 640 |
一种基于物联网的智慧农业大田监测与调度平台 | 2020-05-15 | 803 |
一种大棚种植系统 | 2020-05-18 | 579 |
一种富硒菊花代用茶的生产方法 | 2020-05-17 | 776 |
一种应用四维改良术改良盐碱地的计算机系统及方法 | 2020-05-19 | 482 |
一种构建人工光照种植系统的方法及人工光照植物种植箱 | 2020-05-26 | 916 |
肥料包覆缓释膜、包膜缓释肥及其制备方法和应用 | 2020-05-12 | 755 |
一种农业图像采集装置 | 2020-05-15 | 184 |
高效检索全球专利专利汇是专利免费检索,专利查询,专利分析-国家发明专利查询检索分析平台,是提供专利分析,专利查询,专利检索等数据服务功能的知识产权数据服务商。
我们的产品包含105个国家的1.26亿组数据,免费查、免费专利分析。
专利汇分析报告产品可以对行业情报数据进行梳理分析,涉及维度包括行业专利基本状况分析、地域分析、技术分析、发明人分析、申请人分析、专利权人分析、失效分析、核心专利分析、法律分析、研发重点分析、企业专利处境分析、技术处境分析、专利寿命分析、企业定位分析、引证分析等超过60个分析角度,系统通过AI智能系统对图表进行解读,只需1分钟,一键生成行业专利分析报告。