技术领域
[0001] 本
发明涉及农业技术领域，尤其涉及一种离体条件下促进非花期猕猴桃成花的方法。
背景技术
[0002]
植物单倍体(双单倍体)技术是一种快速而有效的种质创新方法，可通过花药(小孢子)培养的方法实现，多用于十字花科、禾本科和
烟草等经济作物，但在木本植物诸如各类果树中应用较少。果树作为一种木本植物，其幼年期(童期)较长，成年后一年开花一次；不能像小麦和
水稻等草本植物那样实现一年多季种植并成花。这严重阻碍基于单倍体(双单倍体)技术的果树种质创新
进程。
[0003] 目前，单倍体(双单倍体)技术在猕猴桃种质创新中基本未开展。猕猴桃属植物现有54个种和21个变种，其中毛花猕猴桃可一年间不断地现蕾、开花、结果，其余猕猴桃种如中华猕猴桃和美味猕猴桃作为市场应用价值极高的栽培种，也是育种学家种质创新的主要对象，花期一年仅一次，即使是毛花猕猴桃也只能在其生长期内获得花蕾，使得基于单倍体(双单倍体)技术的种质创新周期较长，与传统的杂交育种相比，不能最大限度体现单倍体(双单倍体)种质创新的优越性。
[0004] 猕猴桃花芽的生理分化在越冬前完成。完成花芽生理分化的枝条已具备形成花芽的先天条件,即相关基因已进行选择性表达。对离体的枝条给予适宜条件，可使其按照其既定发育模式提前萌发，便可获得花蕾，从而解决单倍体(双单倍体)技术在果树中应用的
瓶颈问题。
发明内容
[0005] 发明目的：为了克服
现有技术中存在的问题，本发明提出了一种使得猕猴桃提前现蕾开花，方法简单易操作，推广性强的一种离体条件下促进非花期猕猴桃成花的方法。
[0006] 技术方案：为了解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案为：一种离体条件下促进非花期猕猴桃成花的方法，包括以下步骤：
[0007] (1)枝条选择及处理：11月份进行收集用做插穗的枝条；从树势良好的雄株上采集一年生木质化的枝条，用湿报纸包裹置于0-4℃
冰箱冷藏处理；
[0008] (2)扦插床的准备：扦插床建于向阳处的
温室大棚内，扦插床底部
土壤深翻暴晒并做成宽80-100cm的畦，其上铺设15-20cm高的扦插基质，经暴晒并喷洒并喷洒广普性
杀菌剂25％嘧菌酯1500倍稀释液和10％世高1000-1500倍稀释液达到灭菌杀虫的作用；
[0009] (3)插穗准备：将步骤(1)冷藏处理的枝条取出，剪切成10-15cm的插穗
捆扎，下切口对齐，并将下切口浸没于生根粉溶液10-12h，上切口涂上伤口涂布剂，防止病虫害的入侵和水分是散失；
[0010] (4)扦插：扦插深度为插穗长度的1/2-2/3；扦插后用喷壶浇透水，使插穗与扦插床扦插基质充分
接触；
[0011] (5)扦插后的管理：
温度控制在20-25℃；插穗未萌动前一周浇透水一次，抽梢展叶后2-3天浇透水一次；总体上对水分的要求是，
苗床表层沙土不发白，手握成团但不出水为宜；晴天需遮荫，中午温度高时需掀棚换气；
[0012] (6)插穗萌发现蕾及疏蕾，采集小孢子处于单核期至双核早期的花蕾用于单倍体(双单倍体)种质创新实验。
[0013] 所述步骤(1)中冷藏处理时间不低于1周，一方面进行需冷量的积累，一方面对离体枝条进行保存。
[0014] 更为优选的，所述步骤(2)中的扦插基质为细
河沙、蛭石和
泥炭土按2:1:2的
质量比例混合而成。
[0015] 为得到更优的生根效果，用含有效成分为20％
萘乙酸粉剂稀释1000-2000倍配置而成的生根粉溶液浸泡插穗下切口。
[0016] 更为优选的，所述步骤(4)中扦插的时间选择当年11月份至次年大田猕猴桃芽体萌动前均可。
[0017] 为保证花蕾发育所需营养供给充足，所述步骤(6)中的花蕾采集具体为新梢2-3cm摘心，每个插穗保留2-4个花蕾。
[0018] 更进一步的，所述花蕾的采集选择摘除副蕾。
[0019] 本发明的原理为：猕猴桃花芽的生理分化后，即完成相关基因的选择性表达，离体枝条完成一定需冷量积累后，给予适宜的外界环境条件，使其按照既定的模式生长发育，达到提前现蕾开花的目的。
[0020] 有益效果：本发明提供的一种离体条件下促进非花期猕猴桃成花的方法，将离体枝条进行一定需冷量的积累后，给予适宜的外界环境条件，使其按照既定的模式生长发育，达到提前现蕾开花的目的。与现有技术相比具有以下优点：a)使得非花期猕猴桃获得花蕾，实现一年可多次进行猕猴桃单倍体(双单倍体)种质创新；b)应用范围广，可推广到其它木本果树，为基于单倍体(双单倍体)技术的种质创新提供原始实验材料。
附图说明
[0021] 图1为本发明
实施例1中华猕猴桃离体条件下促进非花期成花方法示意图。
[0022] 图2为本发明实施例2美味猕猴桃离体条件下促进非花期成花方法示意图。
[0023] 图3为本发明实施例2美味猕猴桃离体条件下促进非花期成花方法示意图。
[0024] 图4为本发明实施例3毛花猕猴桃离体条件下促进非花期成花方法示意图。
[0025] 图5为本发明实施例3毛花猕猴桃离体条件下促进非花期成花方法示意图。
具体实施方式
[0026] 下面结合实施例对本发明作进一步的详细说明：
[0027] 实施例1：
[0028] 1)试验步骤：
[0029] 在江苏丘陵地区镇江农业科学研究所实验基地，选取中华猕猴桃枝条进行离体试验，具体一种离体条件下促进非花期猕猴桃成花的方法，包括以下步骤：
[0030] (1)枝条选择及处理：11月份进行收集用做插穗的枝条；从树势良好的中华猕猴桃雄株上采集一年生木质化的枝条，用湿报纸包裹置于0-4℃冰箱冷藏处理；冷藏处理时间不低于1周，一方面进行需冷量的积累，一方面对离体枝条进行保存；
[0031] (2)扦插床的准备：扦插床建于向阳处的
温室大棚内，扦插床底部土壤深翻暴晒并做成宽80cm的畦，其上铺设15cm高的扦插基质，扦插基质具体为细河沙、蛭石和泥炭土按2:1:2的质量比例混合而成，经暴晒并喷洒广普性杀菌剂25％嘧菌酯1500倍稀释液和10％世高1000-1500倍稀释液达到灭菌杀虫的作用；
[0032] (3)插穗准备：将步骤(1)冷藏处理的枝条取出，剪切成10cm的插穗捆扎，下切口对齐，并将下切口浸没于生根粉溶液10h，上切口涂上伤口涂布剂，防止病虫害的入侵和水分是散失；
[0033] (4)扦插：扦插的时间选择当年11月份，扦插深度为插穗长度的1/2；扦插后用喷壶浇透水，使插穗与扦插床扦插基质充分接触；
[0034] (5)扦插后的管理：
温度控制在20-25℃；插穗未萌动前一周浇透水一次，抽梢展叶后2-3天浇透水一次；总体上对水分的要求是，苗床表层沙土不发白，手握成团但不出水为宜；晴天需遮荫，中午温度高时需掀棚换气；
[0035] (6)插穗萌发现蕾及疏蕾，采集小孢子处于单核期至双核早期的花蕾用于单倍体(双单倍体)种质创新实验；为保证花蕾发育所需营养供给充足，花蕾采集具体为新梢2-3cm摘心，每个插穗保留2-4个花蕾；摘除副蕾。
[0036] 2)试验结果：
[0037] 扦插后6-10天芽体萌动，90％以上插穗可抽新梢；提前现蕾开花，成功用于单倍体(双单倍体)种质创新；其中含花蕾新梢的百分比与先前插穗枝条选择有关。
[0038] 实施例2：
[0039] 1)试验步骤：
[0040] 在江苏丘陵地区镇江农业科学研究所实验基地，选取美味猕猴桃枝条进行离体试验，具体一种离体条件下促进非花期猕猴桃成花的方法，包括以下步骤：
[0041] (1)枝条选择及处理：11月份进行收集用做插穗的枝条；从树势良好的美味猕猴桃雄株上采集一年生木质化的枝条，用湿报纸包裹置于0-4℃冰箱冷藏处理；冷藏处理时间不低于1周，一方面进行需冷量的积累，一方面对离体枝条进行保存；
[0042] (2)扦插床的准备：扦插床建于向阳处的温室大棚内，扦插床底部土壤深翻暴晒并做成宽100cm的畦，其上铺设20cm高的扦插基质，扦插基质具体为细河沙、蛭石和泥炭土按2:1:2的质量比例混合而成，经暴晒并喷洒广普性杀菌剂25％嘧菌酯1500倍稀释液和10％世高1000-1500倍稀释液达到灭菌杀虫的作用；
[0043] (3)插穗准备：将步骤(1)冷藏处理的枝条取出，剪切成15cm的插穗捆扎，下切口对齐，浸没于生根粉溶液12h，上切口涂上伤口涂布剂，防止病虫害的入侵和水分是散失；
[0044] (4)扦插：扦插的时间选择当年11月份，扦插深度为插穗长度的2/3；扦插后用喷壶浇透水，使插穗与扦插床扦插基质充分接触；
[0045] (5)扦插后的管理：温度控制在20-25℃；插穗未萌动前一周浇透水一次，抽梢展叶后2-3天浇透水一次；总体上对水分的要求是，苗床表层沙土不发白，手握成团但不出水为宜；晴天需遮荫，中午温度高时需掀棚换气；
[0046] (6)插穗萌发现蕾及疏蕾，采集小孢子处于单核期至双核早期的花蕾用于单倍体(双单倍体)种质创新实验；为保证花蕾发育所需营养供给充足，花蕾采集具体为新梢2-3cm摘心，每个插穗保留2-4个花蕾；摘除副蕾。
[0047] 2)试验结果：
[0048] 扦插后6-10天芽体萌动，90％以上插穗可抽新梢；提前现蕾开花，成功用于单倍体(双单倍体)种质创新；其中含花蕾新梢的百分比与先前插穗枝条选择有关。
[0049] 实施例3：
[0050] 1)试验步骤：
[0051] 在江苏丘陵地区镇江农业科学研究所实验基地，选取毛花猕猴桃枝条进行离体试验，具体一种离体条件下促进非花期猕猴桃成花的方法，包括以下步骤：
[0052] (1)枝条选择及处理：11月份进行收集用做插穗的枝条；从树势良好的毛花猕猴桃雄株上采集一年生木质化的枝条，用湿报纸包裹置于0-4℃冰箱冷藏处理；冷藏处理时间不低于1周，一方面进行需冷量的积累，一方面对离体枝条进行保存；
[0053] (2)扦插床的准备：扦插床建于向阳处的温室大棚内，扦插床底部土壤深翻暴晒并做成宽90cm的畦，其上铺设18cm高的扦插基质，扦插基质具体为细河沙、蛭石和泥炭土按2:1:2的质量比例混合而成，经暴晒并喷洒广普性杀菌剂25％嘧菌酯1500倍稀释液和10％世高1000-1500倍稀释液达到灭菌杀虫的作用；
[0054] (3)插穗准备：将步骤(1)冷藏处理的枝条取出，剪切成13cm的插穗捆扎，下切口对齐，浸没于生根粉溶液11h，上切口涂上伤口涂布剂，防止病虫害的入侵和水分是散失；
[0055] (4)扦插：扦插的时间选择当年11月份，扦插深度为插穗长度的1/2；扦插后用喷壶浇透水，使插穗与扦插床扦插基质充分接触；
[0056] (5)扦插后的管理：温度控制在20-25℃；插穗未萌动前一周浇透水一次，抽梢展叶后2-3天浇透水一次；总体上对水分的要求是，苗床表层沙土不发白，手握成团但不出水为宜；晴天需遮荫，中午温度高时需掀棚换气；
[0057] (6)插穗萌发现蕾及疏蕾，采集小孢子处于单核期至双核早期的花蕾用于单倍体(双单倍体)种质创新实验；为保证花蕾发育所需营养供给充足，花蕾采集具体为新梢2-3cm摘心，每个插穗保留2-4个花蕾；摘除副蕾。
[0058] 2)试验结果：
[0059] 扦插后6-10天芽体萌动，90％以上插穗可抽新梢；提前现蕾开花，成功用于单倍体(双单倍体)种质创新；其中含花蕾新梢的百分比与先前插穗枝条选择有关。
[0060] 本发明一种离体条件下促进非花期猕猴桃成花的方法，将离体枝条进行一定需冷量的积累后，给予适宜的外界环境条件，使其按照既定的模式生长发育，达到提前现蕾开花的目的，与现有技术相比具有以下优点：a)使得非花期猕猴桃获得花蕾，实现一年可多次进行猕猴桃单倍体(双单倍体)种质创新；b)应用范围广，可推广到其它木本果树，为基于单倍体(双单倍体)技术的种质创新提供原始实验材料。
[0061] 本发明通过人为控制温度、湿度等条件使得当年11月份至次年大田芽体萌动前均可进行离体促进非花期猕猴桃现蕾开花，在植物非花期内实现一年多次现蕾开花，为猕猴桃单倍体(双单倍体)种质创新提供充足的实验原始材料。方法简单，对设施要求不高，还可以推广解决其他植物在单倍体(双单倍体)种质创新中遇到的花期限制问题。
[0062] 应当指出，以上具体实施方式仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围，在阅读了本发明之后，本领域技术人员对本发明的各种等价形式的
修改均落于本
申请所附
权利要求所限定的范围。
