草莓花粉脱毒组培苗的移栽驯化方法
专利汇可以提供草莓花粉脱毒组培苗的移栽驯化方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 公开了草莓花药脱毒组培苗的移栽驯化方法，包括以下步骤：1）花粉采集与清洗消毒，2）诱导分 化成 苗，3） 幼苗 快繁与生根，4）出苗与洗苗，5）移栽，6）驯化。本发明的有益效果为：本发明提供的方法，无须练苗，直接洗净培养基即可进行移栽，在 苗床 上搭建塑料拱棚，封闭三天后有效控制拱膜中 温度 、基质湿度、光照时间和强度，花粉脱毒组培苗的成活率可达100%，获得无病毒株的概率大幅提高；同时，草莓花粉脱毒率能达100%，可以不用病毒检测程序，缩短了从脱毒到规模生产种苗的周期，有效降低了生产成本与劳动成本，大幅度提高生产效益，提供了大批量的优质脱毒种苗，为草莓可持续产业化健康发展提供了技术 支撑 。，下面是草莓花粉脱毒组培苗的移栽驯化方法专利的具体信息内容。
1.草莓花粉脱毒组培苗的移栽驯化方法，其特征在于，包括以下步骤：
1）草莓花粉的取材与清洗消毒：
采用田间草莓花粉发育至4mm～6mm大小的单核靠边期的花药，花粉单核靠边期的草莓花蕾形态是：花萼未开放，花蕾略长于花冠或花冠刚露白、花冠白色或者淡绿且不松动、花药微黄而充实；将采取的新鲜花药放在2 ℃～4 ℃中储藏24h后，用自来水将花药表面冲洗干净；冲洗过的花药移入超净工作台上放入无菌烧杯中，先用75%酒精消毒30 s～40 s，无菌水冲洗2遍～3遍，再用0.1%的升汞溶液消毒4 min～5 min，用灭菌过的玻璃棒顺一个方向轻轻搅动，然后用无菌水冲洗4遍～5遍，每次1分钟，迅速用滤纸吸干，得到无菌花药；
2）花药愈伤组织的诱导及茎叶分化：
在无菌条件下，用无菌针将已消毒的花蕾固定在已经灭菌过的大橡皮上；用已灭菌的解剖刀和解剖针剥开花蕾，取出花药，将取出的花药接种到装有愈伤组织诱导培养基上，愈伤组织诱导培养基组成为：MS+ BA 1.5 mg/L～2.5 mg/L+NAA 0.10 mg/L～0.25mg/L+3%蔗糖+6 g/L～8 g/L琼脂，pH值为5.8；当愈伤组织的直径2 mm～3 mm时，转入分化培养基中，分化培养基组成为：MS+ BA 0.08 mg/L～0.12mg／L+IBA 0.8 mg/L～1.2 mg/L+3%蔗糖+6 g／L～8 g／L琼脂，pH值为5.8，当形成明显的丛生芽时将芽切成小块，接种于丛生增殖培养基上进行增殖，丛生增殖培养基组成为：MS+BA 1.2 mg/L～1.8 mg/L+NAA 0.08 mg/L～
0.12 mg/L+3%蔗糖+6 g／L～8 g／L琼脂，pH值为5.8；
3）脱毒组培苗快繁及生根培养：
将步骤2）得到的脱毒苗放入增殖培养基中25d～35d长成丛生瓶苗；增殖培养基为加入
6-苄氨基腺嘌呤0.19 mg/L～0.21 mg/L的MS培养基；将高3cm、生长健壮的无根苗接种于MS培养基上，2周后，苗基部长出辐射状的白色小根，每株生根5条～7条，3周后，根生长1 cm～
1．5cm，用于移栽；
4）移栽前基质准备：
基质的组成为：按照重量比草炭：珍珠岩：蛭石=3：1：1；
在移苗前1天，将混合好、已润湿的基质装入32、50 穴的穴盘或直径9～12cm的营养钵中，轻压；用50%的可湿性多菌灵粉剂1000 倍液浇透，第二天移苗时，基质含水量为70%～80 %，即适合移苗；
5）出瓶洗苗分级：
起苗前用75 %酒精棉将所用操作工具全部消毒，直接从培养室移出生根的组培瓶苗到洗涤室，用直径1cm工具把组培苗从瓶中拣出，置于25℃～28℃的清水中洗净根部的培养基，不要伤到根系、嫩芽及叶片，然后按大小将幼苗分级，并分出无根苗；
6）移栽：
当天把洗净分级的组培苗运到种苗苗圃网室然进行移栽，用准备好的工具在穴盘的基质上插洞，将幼苗根部轻轻放入洞中，轻轻掩上，稍压实；移完后用喷雾器轻喷水，冲洗幼苗叶片上的基质，使得根系与基质接触更紧密，以利于根系生长；对于无根苗，先沾适宜浓度：
NAA 0.05mg/L～0.1mg/L或IBA 0.8 mg/L～1.0 mg/L的生根粉或生根剂，再移植，或移植后用浓度为800 倍液的生根粉进行灌根；
7）驯化：
移栽完当天须在苗床上搭建塑料小拱棚，密封3d后每天早上或傍晚掀膜30min，从侧面揭膜面积的10%，开始驯化组培苗；随后每天揭膜时间增加10min,揭膜面积增加10%；视环境中的温度高低和育苗基质含水量适当增加光照通风透气时间，10d～15 d后可揭去薄膜；移植后需进行遮光管理，移植后的前2d用遮阳网遮光60%～70%，之后的10 d～14d 逐渐见光，直至不遮光；驯化的组培苗成活率达100%，30d后便可移至直径为10cm的营养钵或育苗床进行培育。
2.根据权利要求1所述的草莓花粉脱毒组培苗的移栽驯化方法，其特征在于，所述步骤
3）脱毒组培苗快繁及生根培养之前，采用酶联免疫吸附法，即ELISA法进行病毒检测。
3.根据权利要求1所述的草莓花粉脱毒组培苗的移栽驯化方法，其特征在于，所述步骤
2）中，花药愈伤组织的诱导及茎叶分化生长条件为：温度23℃～25℃，光照强度2500 lx～
3000lx，光照14 h/d～16h/d，培养时间20 d～30d。
4.根据权利要求1所述的草莓花粉脱毒组培苗的移栽驯化方法，其特征在于，所述步骤
3）中，脱毒组培苗快繁及生根培养的生长条件为：温度23℃～25℃，光照强度2000 lx～
3000lx，光照10 h/d～12h/d，快繁及生根两个阶段培养时间50 d～60d。
5.根据权利要求1所述的草莓花粉脱毒组培苗的移栽驯化方法，其特征在于，所述步骤
6）中，移栽条件为：温度15℃～25℃。
6.根据权利要求1所述的草莓花粉脱毒组培苗的移栽驯化方法，其特征在于，所述步骤
7）中，驯化条件为：温度20℃～38℃，培养时间20 d～30d。
草莓花粉脱毒组培苗的移栽驯化方法
技术领域
背景技术
发明内容
采用田间草莓花粉发育至4mm～6mm大小的单核靠边期的花药，花粉单核靠边期的草莓花蕾形态是：花萼未开放，花蕾略长于花冠或花冠刚露白、花冠白色或者淡绿且不松动、花药微黄而充实；将采取的新鲜花药放在2℃～4℃中储藏24h后，用自来水将花药表面冲洗干净；冲洗过的花药移入超净工作台上放入无菌烧杯中，先用75%酒精消毒30 s～40s，无菌水冲洗2遍～3遍，再用0.1%的升汞溶液消毒4 min～5 min，用灭菌过的玻璃棒顺一个方向轻轻搅动，然后用无菌水冲洗4遍～5遍，每次1 min，迅速用滤纸吸干，得到无菌花药；
2）花药愈伤组织的诱导及茎叶分化：
在无菌条件下，用无菌针将已消毒的花蕾固定在已经过灭菌的大橡皮上；用已灭菌的解剖刀和解剖针剥开花蕾，取出花药，将取出的花药接种到装有愈伤组织诱导培养基上，愈伤组织诱导培养基组成为： MS+ BA 1.5 mg／L～2.5mg／L+NAA 0.10 mg／L～0.25mg/L+3%蔗糖+6g／L～8g／L琼脂，pH值为5.8；当愈伤组织的直径2 mm～3 mm时，转入分化培养基中，分化培养基组成为：MS+ BA 0.08 mg/L～0.12mg／L+IBA 0.8 mg/L～1.2mg/L中+3%蔗糖+6g／L～8g／L琼脂，pH值为5.8；当形成明显的丛生芽时将芽切成小块，接种于丛生增殖培养基上进行增殖，丛生增殖培养基组成为：MS+BA 1.2 mg/L～1.8mg/L+NAA 0.08 mg/L～0.12mg/+
3%蔗糖+6g／L～8g／L琼脂L，pH值为5.8；
3）脱毒组培苗快繁及生根培养：
将步骤2）得到的脱毒苗放入增殖培养基中25d～35d长成丛生瓶苗；增殖培养基为加入
6-苄氨基腺嘌呤0.19mg/L～0.21mg/L的MS培养基；将高3cm、生长健壮的无根苗接种于MS培养基上，2周后，苗基部长出辐射状的白色小根，每株生根5条～7条，3周后，根生长1 cm～1．
5cm，用于移栽；
4）移栽前基质准备：
基质的组成为：按照重量比草炭：珍珠岩：蛭石=3：1：1；
在移苗前1d，将混合好、已润湿的基质装入32、50 穴的穴盘或直径9cm～12cm的营养钵中，轻压；用50%的可湿性多菌灵粉剂1000 倍液浇透，第二天移苗时，基质含水量为70%～80 %，即适合移苗；
5）出瓶洗苗分级：
起苗前用75 %酒精棉将所用操作工具全部消毒，直接从培养室移出生根的组培瓶苗到洗涤室，用直径1cm工具把组培苗从瓶中拣出，置于25℃～28℃的清水中洗净根部的培养基，不要伤到根系、嫩芽及叶片，然后按大小将幼苗分级，并分出无根苗；
6）移栽：
当天把洗净分级的组培苗运到种苗苗圃网室然进行移栽，用准备好的工具在穴盘的基质上插洞，将幼苗根部轻轻放入洞中，轻轻掩上，稍压实；移完后用喷雾器轻喷水，冲洗幼苗叶片上的基质，使得根系与基质接触更紧密，以利于根系生长；对于无根苗，先沾适宜浓度：
NAA 0.05mg/L～0.1mg/L或IBA 0. 8mg/L～1.0mg/L的生根粉或生根剂，再移植，或移植后用浓度为800 倍液的生根粉进行灌根；
7）驯化：
移栽完当天须在苗床上搭建塑料小拱棚，密封3d后每天早上或傍晚掀膜30min，从侧面揭膜面积的10%，开始驯化组培苗；随后每天揭膜时间增加10min,揭膜面积增加10%；视环境中的温度高低和育苗基质含水量适当增加光照通风透气时间，10d～15 d后可揭去薄膜；移植后需进行遮光管理，移植后的前2d用遮阳网遮光60%～70%，之后的10d～14d 逐渐见光，直至不遮光；驯化的组培苗成活率达100%，30d后便可移至直径为10cm的营养钵或育苗床进行培育。
具体实施方式
生根剂（粉）：
NAA的厂家：上海蓝季科技发展有限公司 Chembase ，批号：Lot No.B0013K0321017；
IBA的厂家：上海蓝季科技发展有限公司 Chembase 登记号：CAS 133-32-4 批号：
141212。
1）草莓花粉的取材与清洗消毒：
采用田间草莓花粉发育至4mm～6mm大小的单核靠边期的花药，花粉单核靠边期的草莓花蕾形态是：花萼未开放，花蕾略长于花冠或花冠刚露白、花冠白色或者淡绿且不松动、花药微黄而充实；将采取的新鲜花药放在2℃～4℃中储藏24h后，用自来水将花药表面冲洗干净；冲洗过的花药移入超净工作台上放入无菌烧杯中，先用75%酒精消毒30 s～40s，无菌水冲洗2遍～3遍，再用0.1%的升汞溶液消毒4 min～5 min，用灭菌过的玻璃棒顺一个方向轻轻搅动，然后用无菌水冲洗4遍～5遍，每次1 min，迅速用滤纸吸干，得到无菌花药；
2）花药愈伤组织的诱导及茎叶分化：
在无菌条件下，用无菌针将已消毒的花蕾固定在已经过灭菌的大橡皮上；用已灭菌的解剖刀和解剖针剥开花蕾，取出花药，将取出的花药接种到装有愈伤组织诱导培养基上，愈伤组织诱导培养基组成为：MS+ BA 1.5 mg／L～2.5mg／L+NAA 0.10 mg／L～0.25mg/L+3%蔗糖+6g／L～8g／L琼脂，pH值为5.8；当愈伤组织的直径2mm～3mm时，转入分化培养基MS+ BA
0.08 mg／L～0.12mg／L+IBA 0.8 mg／L～1.2mg/L+3%蔗糖+6g／L～8g／L琼脂中，pH值为5.8；
当形成明显的丛生芽时将芽切成小块，接种于丛生增殖培养基上进行增殖，丛生增殖培养基组成为MS+BA 1.2 mg／L～1.8mg/L+NAA 0.08 mg／L～0.12mg/L+3%蔗糖+6g／L～8g／L琼脂，pH值为5.8；
花药愈伤组织的诱导及茎叶分化生长条件为：温度23℃～25℃，光照强度2500 lx～
3000lx，光照14 h/d～16h/d，培养时间20 d～30d；
3）脱毒组培苗快繁及生根培养：
此步骤之前，可采用酶联免疫吸附法，即ELISA法进行病毒检测，也可不检测；
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