一种铁皮石斛生根壮苗培养基及其配制方法
阅读：737发布：2022-10-02
专利汇可以提供一种铁皮石斛生根壮苗培养基及其配制方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 属于 铁 皮石斛种植技术领域，具体提供一种铁皮石斛组培苗培养基及其配制方法，所述培养基由母液I、母液II、母液III、母液IV、母液V、母液VI、母液VII混合而成，且各母液的体积比为：7～10：2～3:2～3:8～10:0.05～0.1：0.05～0.1:0.2～0.8。本发明加入多胺、丰硕481、瑞毒酶、代森铵、 肉桂酸 、二硫基丙醇，促进枝叶和根系生长，刺激 幼苗 快速生长，根茎粗壮，增加叶绿素含量，增强光合能 力 ；改善了铁皮石斛在组培过程中出现的褐变、幼苗黄化衰老、 叶片 脱落的问题；改善植株病菌感染的问题；提高植株抗寒、抗旱的能力。，下面是一种铁皮石斛生根壮苗培养基及其配制方法专利的具体信息内容。
1.一种铁皮石斛生根壮苗培养基，其特征在于：所述培养基由母液I、母液II、母液III、母液IV、母液V、母液VI、母液VII混合而成；所述母液VI由以下重量份的物质组成：瑞毒酶15～25mg/L、代森铵15～20mg/L、丰硕481 1～1.5mg/L、多胺2～3mg/L；母液V由以下重量份的物质组成：肉桂酸10～15mg/L、二硫基丙醇10～15mg/L。
2.根据权利要求1所述的一种铁皮石斛生根壮苗培养基，其特征在于：所述母液Ⅰ由下列重量份的物质组成：硝酸铵850～1000mg/L、磷酸二氢钾120～200mg/L、硝酸钾900～
1000mg/L、氯化钙300～450mg/L、硫酸镁200～250mg/L；
所述母液II由下列重量份的物质组成：硫酸铁0.5～1mg/L、硫酸锰2～4mg/L、钼酸钠
1.8～2.5mg/L、氯化钴0.5～1mg/L、硼酸0.5～1mg/L；
所述母液III由下列重量份的物质组成：维生素B10.5～1mg/L、维生素B60.2～0.5mg/L、维生素B50.5～1mg/L、肌醇90～120mg/L；
所述母液Ⅳ由下列重量份的物质组成：抗坏血酸1.5～2.5mg/L、甘氨酸3～4.5mg/L、蔗糖15～30g/L、阿魏酸8～15mg/L、葡萄籽15～10mg/L、香蕉泥200～300g/L、活性炭0.4～1g/L、琼脂5～7g/L。
所述母液VII由下列重量份的物质组成：吲哚丁酸0.8～1.8mg/L、萘乙酸0.5～1mg/L。
3.根据权利要求1所述的一种铁皮石斛生根壮苗培养基，其配制方法为：将母液Ⅰ、母液II、母液III、母液Ⅳ、母液V和母液VI分别按照各自的重量份配置后，按照体积比为7～10：2～3:2～3:8～10:0.05～0.1：0.05～0.1:0.2～0.8混合，再煮沸调节pH，高压蒸汽灭菌20～
30min,待组培瓶降温至手感温度后，加入除菌后的母液VII，冷却凝固后即得培养基。
4.根据权利要求1所述的一种铁皮石斛生根壮苗培养基的配制方法，其特征在于：所述铁皮石斛生根壮苗培养基的pH为5.5～6.5。
5.根据权利要求3所述的一种铁皮石斛生根壮苗培养基的配制方法，其特征在于：所述高压蒸汽灭菌，灭菌压力为180～200KPa。
6.根据权利要求3所述的一种铁皮石斛生根壮苗培养基的配制方法,其特征在于：所述母液VII的除菌方法采用过滤除菌的方法。
一种铁皮石斛生根壮苗培养基及其配制方法
技术领域
[0001] 本发明属于铁皮石斛种植技术领域，具体涉及一种铁皮石斛生根壮苗培养基及其配制方法。
背景技术
[0002] 铁皮石斛为兰科石斛属多年生草本植物，主要分布在热带、亚热带原始森林及相类似的温暖湿润的地区，常附生于苔藓植物的石灰岩石上或树上。铁皮石斛是常用的名贵中药，具有滋阴清热、生津益胃、润肺止咳、润喉明目、延年益寿之功效，又因其富含多糖、生物碱、总酚等生物活性物质而具有免疫调节和抗氧化作用。然而由于铁皮石斛苛刻的生长环境，较低的自然产量以及人们长期的过度采挖，致使野生资源日益减少；由于天然来源的铁皮石斛越来越少，近年来，植物组织培养已经成为药用植物繁殖及大规模生产其有效成分的主要方式，目前市场上关于铁皮石斛组培的培养基有很多种，其中成分含量也不尽相同，但这些培养基在铁皮石斛壮苗生根阶段的效果并不理想，茎不够粗壮，根系不够多,移栽成活率低，生长速度慢等，使得种苗质量大大降低,不利于铁皮石斛的市场销售，例如中国专利CN201510375351.5提高铁皮石斛的产量、质量、生物转化率及环境适宜情况下的移栽成活率，但没能解决植株的黄化衰老、叶片脱落、抗寒抗旱、抵抗等的问题，也没能解决铁皮石斛在组培过程中出现的褐变问题。
发明内容
[0003] 本发明的发明目的是，针对上述问题，提供一种铁皮石斛生根壮苗培养基及其配制方法。
[0004] 为达到上述目的，本发明所采用的技术方案是：
[0005] 一种铁皮石斛生根壮苗培养基，所述培养基由母液I、母液II、母液III、母液IV、母液V、母液VI混合而成；所述母液VI由以下重量份的物质组成：瑞毒酶15～25mg/L、代森铵15～20mg/L、丰硕481 1～1.5mg/L、多胺2～3mg/L；母液V由以下下重量份的物质组成：肉桂酸10～15mg/L、二硫基丙醇10～15mg/L。
[0006] 在本发明中，进一步的说明，所述母液Ⅰ由下列重量份的物质组成：硝酸铵850～1000mg/L、磷酸二氢钾120～200mg/L、硝酸钾900～1000mg/L、氯化钙300～450mg/L、硫酸镁
200～250mg/L；
200～250mg/L；
[0007] 所述母液II由下列重量份的物质组成：硫酸铁0.5～1mg/L、硫酸锰2～4mg/L、钼酸钠1.8～2.5mg/L、氯化钴0.5～1mg/L、硼酸0.5～1mg/L；
[0008] 所述母液III由下列重量份的物质组成：维生素B10.5～1mg/L、维生素B60.2～0.5mg/L、维生素B50.5～1mg/L、肌醇90～120mg/L；
[0009] 所述母液Ⅳ由下列重量份的物质组成：抗坏血酸1.5～2.5mg/L、甘氨酸3～4.5mg/L、蔗糖15～30g/L、阿魏酸8～15mg/L、葡萄籽15～10mg/L、香蕉泥200～300g/L、活性炭0.4～1g/L、琼脂5～7g/L。
[0010] 在本发明中，进一步的说明，所述的铁皮石斛生根壮苗培养基，其配制方法为：将母液Ⅰ、母液II、母液III、母液Ⅳ、母液V和母液VI分别按照各自的重量份配置后，按照体积比为7～10：2～3:2～3:8～10:0.05～0.1：0.05～0.1:0.2～0.8混合，再煮沸调节pH，高压灭菌20～30min,组培瓶降温至手感温度后，加入除菌后的母液VII，冷却凝固后即得培养基。
[0011] 在本发明中，进一步的说明，所述铁皮石斛生根壮苗培养基的pH为5.5～6.5。
[0013] 在本发明中，进一步的说明，所述母液VII的除菌方法采用过滤除菌的方法。
[0014] 本发明与现有技术相比较具有的有益效果：
[0015] 1.多胺通过抑制1-氨基环丙烷羧酸的活性从而抑制植物组织乙烯的产生，达到防止幼苗衰老、落叶等问题；多胺可刺激不定根产生，促进根系对无机离子的吸收，加速幼苗的生长；同时，多胺的加入提高了植株的抗逆性和抗渗透胁迫，提高植株抗不利环境的能力。丰硕481不仅具有生长素、细胞分裂素、赤霉素等植物生长调节剂的多种功能，且生理活性更强、使用量更微，成本低、见效快。丰硕481的加入可促进枝叶和根系生长，达到苗齐苗壮，根系发达，增加叶绿素含量，增强光合能力，提高肥水利用率以促进作物生长；同时，增强苗期抗病及抗寒、抗旱能力。这两者单独使用时有一定的促进生根、加快生长的效果，当两者联合使用效果倍增。
[0016] 2.瑞梅毒和代森铵的混合使用起到很好的杀虫灭菌效果，提高铁皮石斛品质和产量。
[0017] 3.引起褐变的酶有多酚氧化酶、苯丙氨酸解氨酶和过氧化物酶，多酚氧化酶为引起褐变主要的酶，通过抑制酶的活性减少酶促褐变途径，减少褐变的产生，而本发明在培养基中添加二硫基丙醇和肉桂酸，分别对多酚氧化酶、苯丙氨酸解氨酶的活性产生抑制作用，对组培过程中出现的褐变问题起到很好的缓解效果。
具体实施方式
[0018] 本发明提供了一种铁皮石斛生根壮苗培养基及其配制的方法，为使本发明的目的、技术方案及效果更加清楚、明确，以下对本发明进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
[0019] 实施例1
[0020] 本发明提供的铁皮石斛生根壮苗培养基及其配制方法如下：
[0021] 一种铁皮石斛生根壮苗培养基，其配制方法为：将母液Ⅰ、母液II、母液III、母液Ⅳ、母液V和母液VI分别按照各自的重量份配置后，按照体积比为7：2:2:8:0.05：0.05:0.2混合，再煮沸调节pH为5.5，高压灭菌20～30min,待组培瓶降温至手感温度后，加入除菌后的母液VII，冷却凝固后即得培养基。
[0023] 其中，母液II由下列重量份的物质组成：硫酸铁0.5mg/L、硫酸锰2mg/L、钼酸钠1.8mg/L、氯化钴0.5mg/L、硼酸0.5mg/L；
[0024] 其中，母液III由下列重量份的物质组成：维生素B10.5mg/L、维生素B60.2mg/L、维生素B50.5mg/L、肌醇90mg/L；
[0025] 其中，母液Ⅳ由下列重量份的物质组成：抗坏血酸1.5mg/L、甘氨酸3mg/L、蔗糖15mg/L、阿魏酸8mg/L、葡萄籽15mg/L、香蕉泥200mg/L、活性炭0.4mg/L、琼脂5mg/L。
[0026] 其中，母液V由以下重量份的物质组成：肉桂酸10mg/L、二硫基丙醇10mg/L。
[0027] 其中，母液VI由以下重量份的物质组成：瑞毒酶15mg/L、代森铵15mg/L、丰硕481 1mg/L、多胺2mg/L；
[0028] 其中，母液VII由下列重量份的物质组成：吲哚丁酸0.8mg/L、萘乙酸0.5mg/L。
[0029] 将铁皮石斛小苗接入所得的培养基中进行培养，在40～60天的培养周期内试管苗根系数量15～20根，根长5cm以上，试管苗株高5cm以上，茎最粗处约为0.65～0.8cm，无黄化衰老、叶片脱落情况，叶片颜色一致，叶片均为光滑绿色，褐变现象极少，仅为1.2％。
[0030] 铁皮石斛植株经炼苗后，分4组于适宜的条件下移栽培养10天，成活率为100％，无病虫害现象，改变其生长环境，分别为：降低温度5～10℃、升高温度5～10℃、空气湿度降低10％～20％、浇水量减少50％，继续培养观察10天，铁皮石斛植株生长状态受到轻微影响，但整体生长状况良好，成活率为85％～90％，有少部分植株出现萎蔫、死亡情况。
[0031] 实施例2
[0032] 本发明提供的铁皮石斛生根壮苗培养基及其配制方法如下：
[0033] 一种铁皮石斛生根壮苗培养基，其配制方法为：将母液Ⅰ、母液II、母液III、母液Ⅳ、母液V和母液VI分别按照各自的重量份配置后，按照体积比为8：2.5:2.5:9:0.08：0.08:0.6混合，再煮沸调节pH为6，高压灭菌20～30min,组培瓶降温至手感温度后，加入除菌后的母液VII，冷却凝固后即得培养基。
[0034] 其中，母液Ⅰ由下列重量份的物质组成：硝酸铵900mg/L、磷酸二氢钾160mg/L、硝酸钾950mg/L、氯化钙400mg/L、硫酸镁225mg/L；
[0035] 其中，母液II由下列重量份的物质组成：硫酸铁0.8mg/L、硫酸锰3mg/L、钼酸钠2.2mg/L、氯化钴0.8mg/L、硼酸0.8mg/L；
[0036] 其中，母液III由下列重量份的物质组成：维生素B10.8mg/L、维生素B60.3mg/L、维生素B50.8mg/L、肌醇110mg/L；
[0037] 其中，母液Ⅳ由下列重量份的物质组成：抗坏血酸2mg/L、甘氨酸4mg/L、蔗糖25g/L、阿魏酸12mg/L、葡萄籽18mg/L、香蕉泥250g/L、活性炭0.7g/L、琼脂6g/L。
[0038] 其中，母液V由以下重量份的物质组成：肉桂酸12mg/L、二硫基丙醇13mg/L。
[0039] 其中，母液VI由以下重量份的物质组成：瑞毒酶20mg/L、代森铵18mg/L、丰硕4811.2mg/L、多胺2.5mg/L；
[0040] 将铁皮石斛小苗接入所得的培养基中进行培养，在40～60天的培养周期内试管苗根系数量15～22根，根长5.4cm以上，试管苗株高5.8cm以上，茎最粗处约为0.65～0.8cm，无黄化衰老、叶片脱落情况，叶片颜色一致，叶片均为光滑绿色，无褐变现象。
[0041] 铁皮石斛植株经炼苗后，分4组于适宜的条件下移栽培养10天，成活率为100％，无病虫害现象，改变其生长环境，分别为：降低温度5～10℃、升高温度5～10℃、空气湿度降低10％～20％、浇水量减少50％，继续培养观察10天，铁皮石斛植株生长状态受到轻微影响，但整体生长状况良好，成活率为85％～89％，有少部分植株出现萎蔫、死亡情况。
[0042] 实施例3
[0043] 本发明提供的铁皮石斛生根壮苗培养基及其配制方法如下：
[0044] 一种铁皮石斛生根壮苗培养基，其配制方法为：将母液Ⅰ、母液II、母液III、母液Ⅳ、母液V和母液VI分别按照各自的重量份配置后，按照体积比为10：3:3:10:0.1：0.1:0.8混合，再煮沸调节pH为6.5，高压灭菌20～30min,组培瓶降温至手感温度后，加入除菌后的母液VII，冷却凝固后即得培养基。
[0045] 其中，母液Ⅰ由下列重量份的物质组成：硝酸铵1000mg/L、磷酸二氢钾200mg/L、硝酸钾1000mg/L、氯化钙450mg/L、硫酸镁250mg/L；
[0046] 其中，母液II由下列重量份的物质组成：硫酸铁1mg/L、硫酸锰4mg/L、钼酸钠2.5mg/L、氯化钴1mg/L、硼酸1mg/L；
[0047] 其中，母液III由下列重量份的物质组成：维生素B1 1mg/L、维生素B6 0.5mg/L、维生素B5 1mg/L、肌醇120mg/L；
[0048] 其中，母液Ⅳ由下列重量份的物质组成：抗坏血酸2.5mg/L、甘氨酸4.5mg/L、蔗糖30g/L、阿魏酸15mg/L、葡萄籽10mg/L、香蕉泥300g/L、活性炭1g/L、琼脂7g/L。
[0049] 其中，母液V由以下重量份的物质组成：肉桂酸15mg/L、二硫基丙醇15mg/L。
[0050] 其中，母液VI由以下重量份的物质组成：瑞毒酶25mg/L、代森铵20mg/L、丰硕481 1.5mg/L、多胺3mg/L；
[0051] 将铁皮石斛小苗接入所得的培养基中进行培养，在40～60天的培养周期内试管苗根系数量15～18根，根长4.8cm以上，试管苗株高5cm以上，茎最粗处约为0.65～0.8cm，无黄化衰老、叶片脱落情况，叶片颜色一致，叶片均为光滑绿色，无褐变现象。
[0052] 铁皮石斛植株经炼苗后，分4组于适宜的条件下移栽培养10天，成活率为100％，无病虫害现象，改变其生长环境，分别为：降低温度5～10℃、升高温度5～10℃、空气湿度降低10％～20％、浇水量减少50％，继续培养观察10天，铁皮石斛植株生长状态受到轻微影响，但整体生长状况良好，成活率为86％～91％，有少部分植株出现萎蔫、死亡情况。
[0053] 对比例1
[0054] 本发明提供的铁皮石斛生根壮苗培养基及其配制方法如下：
[0055] 一种铁皮石斛生根壮苗培养基，其配制方法为：将母液Ⅰ、母液II、母液III、母液Ⅳ和母液VI分别按照各自的重量份配置后，按照体积比为7：2:2:8:0.05：0.05:0.2混合，再煮沸调节pH为5.5，高压灭菌20～30min,组培瓶降温至手感温度后，加入除菌后的母液VII，冷却凝固后即得培养基。
[0056] 其中，母液Ⅰ由下列重量份的物质组成：硝酸铵850mg/L、磷酸二氢钾120mg/L、硝酸钾900mg/L、氯化钙300mg/L、硫酸镁200mg/L；
[0057] 其中，母液II由下列重量份的物质组成：硫酸铁0.5mg/L、硫酸锰2mg/L、钼酸钠1.8mg/L、氯化钴0.5mg/L、硼酸0.5mg/L；
[0058] 其中，母液III由下列重量份的物质组成：维生素B10.5mg/L、维生素B60.2mg/L、维生素B50.5mg/L、肌醇90mg/L；
[0059] 其中，母液Ⅳ由下列重量份的物质组成：抗坏血酸1.5mg/L、甘氨酸3mg/L、蔗糖15g/L、阿魏酸8mg/L、葡萄籽15mg/L、香蕉泥200g/L、活性炭0.4g/L、琼脂5g/L。
[0060] 其中，母液VI由以下重量份的物质组成：瑞毒酶15mg/L、代森铵15mg/L、丰硕481 1mg/L、多胺2mg/L；
[0061] 其中，母液VII由下列重量份的物质组成：吲哚丁酸0.8mg/L、萘乙酸0.5mg/L。
[0062] 将铁皮石斛小苗接入所得的培养基中进行培养，在40～60天的培养周期内试管苗根系数量15～20根，根长5cm以上，试管苗株高5cm以上，茎最粗处约为0.58～0.66cm，有41％出现褐变，13％因发生褐变死亡，生长状态较实施例1差。
[0063] 选出生长状态良好的植株经炼苗后，分4组于适宜的条件下移栽培养10天，成活率为100％，无病虫害现象，改变其生长环境，分别为：降低温度5～10℃、升高温度5～10℃、空气湿度降低10％～20％、浇水量减少50％，继续培养观察10天，铁皮石斛植株生长状态受到轻微影响，但整体生长状况良好，成活率为83％～89％，有少部分植株出现萎蔫、死亡情况。
[0064] 对比例2
[0065] 本发明提供的铁皮石斛生根壮苗培养基及其配制方法如下：
[0066] 其中，母液VI由以下重量份的物质组成：丰硕481 1.2mg/L、多胺2.5mg/L，其余与实施例2相同。
[0067] 将铁皮石斛小苗接入所得的培养基中进行培养，在40～60天的培养周期内试管苗根系数量15～22根，根长5.4cm以上，试管苗株高5.8cm以上，茎最粗处约为0.65～0.8cm，无黄化衰老、叶片脱落情况，叶片颜色一致，叶片均为光滑绿色，22％出现病菌污染现象，无褐变现象。
[0068] 选出生长状态良好的植株经炼苗后，分4组于适宜的条件下移栽培养10天，成活率为100％，有36％出现虫害现象，选出生长状态良好，改变其生长环境，分别为：降低温度5～10℃、升高温度5～10℃、空气湿度降低10％～20％、浇水量减少50％，继续培养观察10天，铁皮石斛植株生长状态受到轻微影响，但整体生长状况良好，成活率为85％～89％，有少部分植株出现萎蔫、死亡情况。
[0069] 对比例3
[0070] 本发明提供的铁皮石斛生根壮苗培养基及其配制方法如下：
[0071] 其中，母液VI由以下重量份的物质组成：瑞毒酶25mg/L、代森铵20mg/L、多胺3mg/L，其余与实施例3相同。
[0072] 将铁皮石斛小苗接入所得的培养基中进行培养，在40～60天的培养周期内试管苗根系数量11～14根，根长4cm以上，试管苗株高4.6cm以上，茎最粗处约为0.55～0.68cm，无黄化衰老、叶片脱落情况，叶片颜色不一致，有部分叶片为黄绿色，无褐变现象，生长速度、生长状态较实施例3差。
[0073] 选出生长状态良好的植株经炼苗后，分4组于适宜的条件下移栽培养10天，成活率为100％，无病虫害现象，改变其生长环境，分别为：降低温度5～10℃、升高温度5～10℃、空气湿度降低10％～20％、浇水量减少50％，继续培养观察10天，铁皮石斛植株生长状态受到影响，成活率为58％～67％，抗不利环境能力较弱。
[0074] 对比例4
[0075] 本发明提供的铁皮石斛生根壮苗培养基及其配制方法如下：
[0076] 其中，母液VI由以下重量份的物质组成：瑞毒酶25mg/L、代森铵20mg/L、丰硕481 1.5mg/L，其余与实施例3相同。
[0077] 将铁皮石斛小苗接入所得的培养基中进行培养，在40～60天的培养周期内试管苗根系数量14～17根，根长4.5cm以上，试管苗株高4.8cm以上，茎最粗处约为0.6～0.78cm，无黄化衰老、叶片脱落情况，叶片颜色一致，叶片均为光滑绿色，无褐变现象，生长速度较实施例3差。
[0078] 选出生长状态良好的植株经炼苗后，分4组于适宜的条件下移栽培养10天，成活率为100％，无病虫害现象，改变其生长环境，分别为：降低温度5～10℃、升高温度5～10℃、空气湿度降低10％～20％、浇水量减少50％，继续培养观察10天，铁皮石斛植株生长状态受到影响，成活率为50％～60％，抗不利环境能力较弱。
[0079] 对比例5
[0080] 本发明提供的铁皮石斛生根壮苗培养基及其配制方法如下：
[0081] 其中，不加母液VI，其余与实施例3相同。
[0082] 将铁皮石斛小苗接入所得的培养基中进行培养，在40～60天的培养周期内试管苗根系数量6～8根，根长3.2以上，试管苗株高3.2cm以上，茎最粗处约为0.3～0.42cm，出现黄化衰老、叶片脱落情况，叶片颜色不一致，多为黄绿色，无褐变现象，生长速度、生长状态明显比实施例3差。
[0083] 继续培养30天，选出生长状态良好的植株经炼苗后，分4组于适宜的条件下移栽培养10天，成活率为100％，有38％病虫害现象，选出生长状态良好的，改变其生长环境，分别为：降低温度5～10℃、升高温度5～10℃、空气湿度降低10％～20％、浇水量减少50％，3天之后开始出现萎蔫、死亡现象，第五天出现大片死亡，存活率仅为11％，存活下来的植株生长状态差，表现出很弱的抗不利环境能力。
[0084] 上述说明是针对本发明较佳可行实施例的详细说明，但实施例并非用以限定本发明的专利申请范围，凡本发明所提示的技术精神下所完成的同等变化或修饰变更，均应属于本发明所涵盖专利范围。
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